KR101968190B1 - 징코라이드 B(Ginkgolide B)와 Ⅹa 인자 억제제를 포함한 약물 조성물 및 그 제조방법과 용도 - Google Patents

징코라이드 B(Ginkgolide B)와 Ⅹa 인자 억제제를 포함한 약물 조성물 및 그 제조방법과 용도 Download PDF

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Abstract

징코라이드 B와 Ⅹa 인자 억제제 사반류 약물을 포함하는 약물 조성물, 및 해당 약물 조성물의 제조방법과 용도이다. 여기서, 상기 사반류 약물은 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반과 오타믹사반에서 선택된다.

Description

징코라이드 B(Ginkgolide B)와 Ⅹa 인자 억제제를 포함한 약물 조성물 및 그 제조방법과 용도{PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING GINKGOLIDE B AND XA FACTOR INHIBITOR, PREPARATION METHOD THEREOF AND USE THEREOF}
본 발명은 징코라이드 B와 Ⅹa 인자 억제제를 포함하는 약물 조성물에 관한 것이다.
최근에 신형 항응고 약물 Ⅹa 인자 억제제의 발현은 항응혈 치료의 새 방향을 개척하였다. Ⅹa 인자 억제제는 항응혈 효과를 높여주는 동시에 대출혈 위험성을 낮추고 혈액 모니터링이 불필요하여 장기 치료에 유리하다. 연구에 따르면 Ⅹa 인자는 트롬빈의 형성과 응혈 캐스케이드 활성화에서 중요한 지위를 차지하며, 응혈 캐스케이드 상류에서 응혈 인자 Ⅹa를 억제하여 더 강한 항응혈 작용을 산생한다. Ⅹa 인자는 혈소판을 활성화할 수 없고, 응혈 캐스케이드에 양의 피드백 작용도 없다. Ⅹa 인자 직접억제제는 혈전과 결합하는 인자를 억제할 뿐만 아니라 프로트롬빈과 결합하는 인자도 억제할수 있다.
리바록사반(Rivaroxaban)은 첫 Ⅹa 인자 억제제로 정식으로 시장에 투입되였다. 대량의 임상연구 결과, 리바록사반은 정맥혈전의 색전증 예방과 치료 등 분야에서의 치료효과가 현재의 표준 치료 약물인 에녹사파린나트륨(Enoxaparin Sodium)보다 우월한것으로 나타났다. 이는 임상에서 고관절과 무릎관절 치환술 후의 환자의 심정맥혈전(DVT)과 폐혈전(PE)의 형성의 예방에 쓰이고, 비판막성 심방세동 환자의 뇌졸중 및 비중추신경계통색전증 예방에도 쓰이며, 관상동맥증후군의 재발 리스크 등도 낮추어준다. 하지만 리바록사반의 약력학 성질에 의하면 약물을 과다복용시 출혈 합병증을 초래할 수 있고 일부 계군 환자의 출혈 리스크가 비교적 높으며, 잠시는 리바록사반의 약효에 대항할 수 있는 특이성 해독제가 없다.
아픽사반(Apixaban)은 선택적 활성화 Ⅹa 인자를 억제하는 내복약으로써，라작사반(Razaxaban)의 변이체이며, 파이저와 브리스톨마이어스스큅에서 연합 개발하였고, 유럽과 미국시장에 이미 투입된 본 개발품은 혈전을 예방할 수 있고, 고관절 혹은 무릎 치환술을 받은 환자의 혈전 예방에 사용된다. 하지만 임상시험 연구중, 급성관상동맥증후군 환자의 항혈소판 치료의 기초상 아픽사반이 추가 사용되면 제량에 따른 출혈 사건의 증가 및 허혈 사건이 감소하는 추세를 연구자는 관찰하였다. 아픽사반의 안전성과 유효성은 가능하게 기초 항혈소판 치료에 의존한다.
에독사반(Edoxaban)은 일본 일삼공주식회사(Daiichi Sankyo Company Limited)에서 연구 제조한 소분자 경구 항응고약이고, 응혈 인자 Ⅹ (FⅩa) 지연제이다. 주요하게는 무릎관절 전치환술(TKA), 고관절 전치환술(THA), 고관절골절수술(HFS)을 받은 환자의 합병 정맥 혈전색전(VTE)에 사용된다. 혈액 응고과정에서 응혈 인자 Ⅹa(FⅩa)는 프로트롬빈(FII)을 트롬빈(FIIa)으로 활성화 하여 섬유단백질 형성에 도움을 주어 혈전이 생성된다. 그러므로 FⅩa 는 새로운 세대 항응고 약물 개발의 주요한 타깃 스팟으로 되였다. 에독사반은 선택성과 가역성을 통하고, 또 FⅩa 를 직접 억제함으로써 혈전 형성을 억제하는 경구 항응고 약물이다. 그의 FⅩa 에 대한 선택성은 FIIA보다 104배 높다. 일본 국내외 임상시험에서 증명한 바, 본 제품은 하지성형 외과수술환자의 VTE증상을 효과적으로 억제하고 그 안전성도 신뢰할 수 있다. 하지만 해당 약물은 비용이 비교적 높은 국한성이 존재하여 대다수 환자 치료의 걸림돌이 될수 있다.
라작사반(Razaxaban)의 상대분자질량은 528이고， 경구 유효 펩타이드 유사물로써, 인자 Ⅹa 와 고도의 친화력을 가지고 있으며 한 II기 임상연구에서 이가 정형외과 수술후 정맥 혈전색전(VTE) 예방에 효과적인것으로 나타났다. 해당 랜덤의 이중 은폐 연구에는 656예의 무릎관절 전치환술 환자가 참가하였으며 438예의 효과적인 환자중에서 라작사반(Razaxaban)과 VTE발생률은 확연한 제량 효응 관계가 있음을 나타냈다. 유의할 점은 라작사반(Razaxaban) 25mg조의 VTE발생률은 에녹사파린나트륨 조보다 낮고, 대출혈 발생률은 에녹사파린나트륨 조와 유사했다. 하지만 라작사반(Razaxaban) 50mg~100mg조에서는 대출혈 확률이 에녹사파린나트륨 조보다 높았다.
오타믹사반(Otamixaban)은 주사용의 선택성이 높고 가역적인 트롬빈 인자 Ⅹa 억제제로써, 이는 제량(dosage) 의존방식으로 혈전형성을 막아주며 효과의 일으킴과 실효가 신속하며, 약물 동력학은 선형 규률에 따르고 신장배설이 어렵다. 앞서 연구에 따르면, Ⅹa 인자 억제제를 활성화하여 ACS를 치료하는 경우 혈전 형성의 리스크가 따르므로 PCI수술 중에는 이러한 항응고 약물 및 기타 부가 사용 항혈전 인자의 제량 조절에 주의해야 하지만 중등 제량의 오타믹사반의 응용은 이런 요소를 근심할 필요가 없는 것으로 보였다. 또한, 오타믹사반의 효과의 일으킴과 실효가 신속하고, 정맥으로 투약하며, 예측 가능한 항응고반응(검측이 필요하지 않음) 등 우세를 고려한다면, 오타믹사반은 NSTE-ACS환자의 급진부터 본격적인 치료까지의 단일 항응고 약물이 될 수 있고, 큰 우세를 가지고 있을 수 있다. 기타 보도에 따르면, 오타믹사반이 신장을 통하여 배설한 약물량이 25%미만이므로 신장기능이 손상된 환자한테 사용될 때 제량을 조절할 필요가 없다. 또 다른 보도에 따르면, 오타믹사반이 허혈성 사건의 발생 리스크를 낮출 수 없고 출혈 리스크를 증가할 수 있으므로 일찍 기상하여 PCI수술을 받는 NSTE-ACS환자한테 오타믹사반을 사용하는 것을 찬성하지 않고 있다.
이로써, 치료효과를 보증하는 전제하에 사반류 약물의 대량 사용을 감소하여 그 부작용을 줄이고 치료성본을 줄이는 것이 해결과제이다.
본 발명의 목적은 기존 Ⅹa 인자 억제제의 고출혈 리스크와 기타 결함을 극복하여 환자들에게 더 많은 선택의 여지를 주기 위하여 완전히 새로운 약물 조성물을 연구 제조하는 것이다.
본 발명은 징코라이드 B(Ginkgolide B)를 포함하는 약물 조성물을 제공하였고, 이는 징코라이드 B와 Ⅹa 인자 억제제가 포함되고 있다.
여기서, 상기 Ⅹa 인자 억제제는 사반류 약물이다.
여기서, 상기 사반류 약물은 리바록사반(Rivaroxaban), 아픽사반(Apixaban), 에독사반(Edoxaban), 라작사반(Razaxaban) 또는 오타믹사반(Otamixaban)중 적어도 어느 하나이다.
상기 리바록사반의 구조식은:
Figure 112017050908071-pct00001
상기 아픽사반의 구조식은:
Figure 112017050908071-pct00002
상기 에독사반의 구조식은:
Figure 112017050908071-pct00003
상기 라작사반의 구조식은:
Figure 112017050908071-pct00004
상기 오타믹사반의 구조식은:
Figure 112017050908071-pct00005
이다.
여기서, 징코라이드 B와 리바록사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 리바록사반 5-40몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 리바록사반 10-20몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 리바록사반 15몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 아픽사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 아픽사반 0.5-20몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 아픽사반 1-10몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 아픽사반 5몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 에독사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 에독사반 8-50몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 에독사반 10-30몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 에독사반 15몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 라작사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 라작사반 1-20몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 라작사반 5-15몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 라작사반 10몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 오타믹사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 오타믹사반 15-150몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 오타믹사반 30-125몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 8-12몫대 오타믹사반 50-90몫이다. 가장 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 오타믹사반 60몫이다.
본 발명은 상기 약물 조성물의 제조 방법도 제공하였으며, 이는 하기와 같은 단계를 포함한다:
S1: 조성분 및 중량비에 따라 원료 징코라이드 B와 사반류 약물을 저울질하여 취한다;
S2: 원료가 혼합된 후, 약학에서 사용가능한 보조제를 첨가하여 약학에서 자주 사용되는 약물제제를 제조한다.
여기서, 상기 약학에서 사용가능한 보조제는 전분, 예비겔화전분(pregelatinized starch), 유당, 자당, 탤컴파우더(talcum powder), 덱스트린(dextrin), 사이클로덱스트린(cyclodextrin), MCC, CCNa, CMS-Na, L-HPC, PVPP, 포도당, 메글루민(meglumine), 스테아린산마그네슘(magnesium stearate), 덱스트란(dextran), 글리세린(glycerin), 알콜, 프로필렌 글리콜(propylene glycol), PEG, 만니톨(mannitol), 소르비톨(sorbitol), 자일리톨(xylitol), 섬유식물유, 벤조산나트륨(sodium benzoate), 살리실산나트륨(sodium salicylate), 염산, 구연산, 구연산나트륨, 인산이수소나트륨(sodium dihydrogen phosphate), 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate), 젤라틴(gelatin), 레시틴(lecithin), 비타민C중의 한가지 혹은 몇가지를 포함한다.
여기서, 상기 약물제제는 타블렛, 캡슐, 소프트캡슐, 구복액, 과립제, 환약, 정제, 산제, 연고, 적환제, 주사제, 좌제, 파스, 적제, 분무제, 크림, 서스펜션(suspension), 팅크제, 유제, 주사용 수용액, 주사용 분말, 타게팅(targeting) 제제, 지효성 제제, 방출 조절 제제를 포함한다.
본 발명은 징코라이드 B와 Ⅹa 인자 억제제의 조합용 약물이 항혈소판 응집약물 제조에서의 응용도 제공한다.
여기서, 상기 Ⅹa 인자 억제제는 사반류 약물이다.
여기서, 상기 사반류 약물은 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반 또는 오타믹사반중 적어도 어느 하나이다.
여기서, 상기 징코라이드 B와 리바록사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 리바록사반 5-40몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 리바록사반10-20몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 리바록사반 15몫이다.
혹은, 여기서 상기 징코라이드 B와 아픽사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 아픽사반 0.5-20몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 아픽사반 1-10몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 아픽사반 5몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 에독사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 에독사반 8-50몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 에독사반10-30몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 에독사반 15몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 라작사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 라작사반 1-20몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 라작사반 5-15몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 라작사반 10몫이다.
혹은, 상기 징코라이드 B와 오타믹사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B 1-20몫대 오타믹사반 15-150몫이다.
바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 오타믹사반 30-125몫이다. 더 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 8-12몫대 오타믹사반 50-90몫이다. 가장 바람직하게는, 양자의 중량 배합비는: 징코라이드 B 10몫대 오타믹사반 60몫이다.
본 발명에서 제공한 약물 조성물은, 그중 징코라이드 B와 사반류 활성성분이 포함되고 있으므로 부동한 작용 매커니즘을 통하여 혈소판 응집을 막을수 있다. 이는 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반, 오타믹사반 등 사반류 약물의 항혈소판 응집 기능과 징코라이드 B의 항혈소판 응집 기능을 모두 높여주고, 양자의 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비한다. 이로써, 임상에서 사반류 약물의 약물사용량을 줄이고 약물 효과를 높이는 동시에 원가와 부작용을 줄일 수 있어 임상 연구에 더 좋은 선택을 제공하였다. 본 발명의 약물 조성물은 배합방법이 새롭고 조성분이 간단하며 작용 매커니즘이 명확하고 치료 효과가 현저하여 산업화 대생산을 구현할 수 있다.
본 발명은 징코라이드 B와 사반류 약물을 연합 사용하여, 양자는 협동하여 효과를 증가하는 작용을 발휘하며, 혈소판 응집을 억제하는 효과가 우월하다.
본 발명은 징코라이드 B와 사반류 약물을 연합 사용하여, 양자는 협동하여 효과를 증가하는 작용을 발휘하며, 혈소판 응집을 억제하는 효과가 우월하다. 또한, 임상 응용시 사반류 약물의 용량을 줄일 수 있어 그 대량 사용에 따른 부작용을 감소하고 원가도 줄여주므로 임상 응용에서의 전망이 좋다.
아래 실시예 형식의 구체적인 실시방식을 통하여 본 발명의 이상 내용을 상세히 설명할 것이다. 다만 본 발명의 상기 주제의 범위가 아래 실시예에 국한되지 않음을 이해하여야 할 것이다. 본 발명의 상기 내용을 기초로 하여 구현되는 기술은 모두 본 발명의 범위에 속한다.
본 발명의 상기 징코라이드 B 단량체 화합물은 시중 판매하는 제품을 구입하는 것으로 얻을 수 있고, 혹은 종래의 방법으로 징코라이드에 대해 분리 정제를 통하여 제조할 수 있다; 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반, 오타믹사반 등은 시중에서 판매하는 제품을 구매하는 것을 통하여 얻을 수 있고, 또는 종래의 방법을 통하여 합성하여 얻을 수도 있다. 점검에 의하면 모든 단량체 화합물은 모두 상응한 대조품 구조와 부합되었고 HPLC검측에 따르면 그 순도가 모두 95%이상이였다.
실시예1
징코라이드 B 10몫
리바록사반 15몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 타블렛을 제조.
실시예2
징코라이드 B 5몫
리바록사반 20몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 캡슐 혹은 소프트 캡슐을 제조.
실시예3
징코라이드 B 15몫
리바록사반 10몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 환약을 제조.
실시예4
징코라이드 B 1몫
리바록사반 5몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 구복액을 제조.
실시예5
징코라이드 B 20몫
리바록사반 40몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 적환제를 제조.
실시예6
징코라이드 B 10몫
아픽사반 5몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 분무제를 제조.
실시예7
징코라이드 B 5몫
아픽사반 1몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 주사용 수용액 혹은 주사용 분말을 제조.
실시예8
징코라이드 B 15몫
아픽사반 10몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 지효성제제 혹은 방출 조절 제제로 제조.
실시예9
징코라이드 B 20몫
아픽사반 20몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 타게팅 제제를 제조.
실시예10
징코라이드 B 10몫
에독사반 15몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 과립제 혹은 서스펜션을 제조.
실시예11
징코라이드 B 5몫
에독사반 30몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 타블렛을 제조.
실시예12
징코라이드 B 15몫
에독사반 10몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 캡슐 혹은 소프트 캡슐을 제조.
실시예13
징코라이드 B 1몫
에독사반 8몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 환약을 제조.
실시예14
징코라이드 B 20몫
에독사반 50몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 구복액을 제조.
실시예15
징코라이드 B 10몫
라작사반 10몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 적환제를 제조.
실시예16
징코라이드 B 5몫
라작사반 15몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 분무제를 제조.
실시예17
징코라이드 B 15몫
라작사반 5몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 주사용 수용액 혹은 주사용 분말을 제조.
실시예18
징코라이드 B 1몫
라작사반 20몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 지효성 제제 혹은 방출 조절 제제를 제조.
실시예19
징코라이드 B 20몫
라작사반 1몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 타게팅 제제를 제조.
실시예20
징코라이드 B 10몫
오타믹사반 60몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 과립제 혹은 서스펜션을 제조.
실시예21
징코라이드 B 8몫
오타믹사반 50몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 구복액을 제조.
실시예22
징코라이드 B 12몫
오타믹사반 90몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 적환제를 제조.
실시예23
징코라이드 B 15몫
오타믹사반 125몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 분무제를 제조.
실시예24
징코라이드 B 1몫
오타믹사반 15몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 주사용 수용액 혹은 주사용 분말을 제조.
실시예25
징코라이드 B 20몫
오타믹사반 125몫
약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료
상기 원료를 혼합한 후 약학에서 사용 가능한 통상적인 보조재료를 추가하여 통상적인 공정에 따라 지효성 제제 혹은 방출 조절 제제를 제조.
이하 시험예의 방식으로 본 발명의 유리한 효과에 대해 설명한다:
시험예1 : 징코라이드 B와 사반류 조합이 체외에서 PAF유도 혈소판 응집을 저항하는 작용과 Ⅹa 활성에 대한 영향
1. 실험목적:
미량 반응판 마이크로 플레이트 리더(microplate reader) 탁도측정법을 사용하여 청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디(成都百裕科技制藥有限公司)에서 생산한 징코라이드 B와 사반류 조합이 체외 PAF 유도 혈소판 응집 저항작용과 Ⅹa 활성에 대한 영향을 평가한다.
2. 재료와 방법:
2.1 실험동물
일본백색 집토끼(Japanese white rabbit), SPF등급, 암수 각반, 체중 2.2~2.5kg.
2.2 실험약물
징코라이드 B(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 리바록사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 아픽사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 에독사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 라작사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 오타믹사반 (청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 조성물1（징코라이드 B：리바록사반=10:15）, 조성물2（징코라이드 B：리바록사반=1:5）,조합물3（징코라이드 B：리바록사반=1:40）, 조성물4（징코라이드 B：리바록사반=20:5）, 조성물5（징코라이드 B：리바록사반=20:40）, 조성물6（징코라이드 B：리바록사반=5:20）, 조성물7（징코라이드 B：리바록사반=15:10）, 조성물8（징코라이드 B：리바록사반=15:20）, 조성물9（징코라이드 B：아픽사반=10:5）, 조성물10（징코라이드 B：아픽사반=1:20）, 조성물11（징코라이드 B：아픽사반=20:0.5）, 조성물12（징코라이드 B： 아픽사반=20:20）, 조성물13（징코라이드 B：아픽사반=5:1）, 조성물14（징코라이드 B：아픽사반=5:10）, 조성물15（징코라이드 B：아픽사반=15:1）, 조성물16（징코라이드 B：아픽사반=15:10）, 조성물17（징코라이드 B：에독사반=10:15）, 조성물18（징코라이드 B：에독사반=1:8）, 조성물19（징코라이드 B：에독사반=1:50）, 조성물20（징코라이드 B：에독사반=20:8）, 조성물21（징코라이드 B：에독사반=20:50）, 조성물22（징코라이드 B：에독사반=5:10）, 조성물23（징코라이드 B：에독사반=15:10）, 조성물24（징코라이드 B：에독사반=5:30）, 조성물25（징코라이드 B：라작사반=10:10）, 조성물26（징코라이드 B：라작사반=1:20）, 조성물27（징코라이드 B：라작사반=20:1）, 조성물28（징코라이드 B：라작사반=5:15）, 조성물29（징코라이드 B：라작사반=15:5）, 조성물30（징코라이드 B：오타믹사반 =10:60）, 조성물31（징코라이드 B：오타믹사반 =1:15）, 조성물32（징코라이드 B：오타믹사반 =1:150）, 조성물33（징코라이드 B：오타믹사반 =20:15）, 조성물34（징코라이드 B：오타믹사반 =20:150）, 조성물35（징코라이드 B：오타믹사반 =15:30）, 조성물36（징코라이드 B：오타믹사반 =5:125）, 조성물36（징코라이드 B：오타믹사반 =5:125）, 조성물37（징코라이드 B：오타믹사반 =15:125）, 조성물38（징코라이드 B：오타믹사반 =8:50）, 조성물39（징코라이드 B：오타믹사반 =8:90）, 조성물40（징코라이드 B：오타믹사반 =12:50）, 조성물41（징코라이드 B：오타믹사반 =12:90）.
2.3 시제와 계기
계기:
독일 Sartorius BS124S형 전자 저울(눈금치: 0.0001g), 계기번호: BKY-YB-001; ACS-15LED전자 앉은뱅이 저울, 상해독수리표형기 유한회사(上海鷹牌衡器有限公司) 출품, 계기번호 BKY-YB-002; 장사 상지 DL-5M소 입식 저속 대용량 냉동 원심분리기, 계기번호: BKY-ZX-040, 장사상지 원심계기유한회사; 하이얼DW-40L188저온 보존함, 계기번호: BKY-ZX-012, 혈장등보존; LSC-316C형 별 입식 진렬장, 계기번호: BKY-ZX-041, 시제 보존; Multiskan MK3형 마이크로 플레이트 리더, 계기번호: BKY-ZX-014; Wellwash 4 MK2 형 마이크로 플레이트 와셔 (Microplate Washer), 계기번호: BKY-ZX-022; 독일 브랜드 Transferpette® S, D-1000 마이크로피펫, 계기번호: BKY-ZX-036; 독일 브랜드 Transferpette® S, D-100마이크로피펫, 계기번호: BKY-ZX-038; MB-1830형 전자동 혈액 분석 계기, 사천미생과학기술유한회사(四川美生科技有限公司), 계기번호: BKY-ZX-023.
시제:
3.8% 구연산나트륨(500g/병, 성도 커룽 화공시제공장, 배치번호: 20130601); 혈소판 활성화인자(PAF)(1mg/피스，Sigma, 배치번호: P7568); 항응혈인자(Ⅹa) 측정시제(발색 기질법)(10×71nkat, 이탈리아 Chromogenix, 배치번호: N1243555); 폴리에틸렌 글리콜(PEG)6000(50g, 북경바이링웨이과학기술유한회사(北京百靈威科技有限公司), 배치번호: LB50P76); 헤파린나트륨(1g/병, Bomei, 배치번호: 9041-08-1).
2.4 제량 설계와 약물 배합제조 방법
(1) 각 조는 체내 시험 건의 투약 농도를 기초로 하여, 부동한 약물 비례에 따라 혈소판 응집 시험을 진행하였고, 구체적으로 표1과 같다.
약물 제량 설계
조별 약물 투여 제량 매일 약물 투여 차수
생리식염수 2ml 1
징코라이드 B 5.0mg/kg 1
리바록사반 군 5.0mg/kg 1
아픽사반 군 5.0mg/kg 1
에독사반 군 5.0mg/kg 1
라작사반 군 5.0mg/kg 1
오타믹사반 군 5.0mg/kg 1
조성물1군 5.0mg/kg 1
조성물2군 5.0mg/kg 1
조성물3군 5.0mg/kg 1
조성물4군 5.0mg/kg 1
조성물5군 5.0mg/kg 1
조성물6군 5.0mg/kg 1
조성물7군 5.0mg/kg 1
조성물8군 5.0mg/kg 1
조성물9군 5.0mg/kg 1
조성물10군 5.0mg/kg 1
조성물11군 5.0mg/kg 1
조성물12군 5.0mg/kg 1
조성물13군 5.0mg/kg 1
조성물14군 5.0mg/kg 1
조성물15군 5.0mg/kg 1
조성물16군 5.0mg/kg 1
조성물17군 5.0mg/kg 1
조성물18군 5.0mg/kg 1
조성물19군 5.0mg/kg 1
조성물20군 5.0mg/kg 1
조성물21군 5.0mg/kg 1
조성물22군 5.0mg/kg 1
조성물23군 5.0mg/kg 1
조성물24군 5.0mg/kg 1
조성물25군 5.0mg/kg 1
조성물26군 5.0mg/kg 1
조성물27군 5.0mg/kg 1
조성물28군 5.0mg/kg 1
조성물29군 5.0mg/kg 1
조성물30군 5.0mg/kg 1
조성물31군 5.0mg/kg 1
조성물32군 5.0mg/kg 1
조성물33군 5.0mg/kg 1
조성물34군 5.0mg/kg 1
조성물35군 5.0mg/kg 1
조성물36군 5.0mg/kg 1
조성물37군 5.0mg/kg 1
조성물38군 5.0mg/kg 1
조성물39군 5.0mg/kg 1
조성물40군 5.0mg/kg 1
조성물41군 5.0mg/kg 1
2.5 혈소판응집률 검측
동물심장을 천자(puncture)하여 채혈하고, 구연산나트륨(3.8%)과 1:9로 조합하여 항 응고하며, 4℃×1000r/min 원심분리 10min하여 혈소판 풍부 혈장(PRP)를 수집하고, 나머지 부분은 3000r/min 원심분리 15min하여 혈소판이 거의 없는 혈장(PPP)을 수집한다. PPP를 사용하여 PRP를 200±50×109/L로 조절한다.
미량 반응판 소공에 250μl의 PRP를 첨가하고, 각각 10μl 대응농도의 약물을 첨가하며, 각 농도는 평행으로 두 공을 만들고, 마지막으로 PAF응집유도제(농도는 0.38 μg/ml)를 10μl첨가한다; 공백대조공에 250μl의 PPP와 10μl의 생리식염수를 첨가하여 기준점을 맞춘다; 용매대조공에 250μl의 PPP와 10μl의 다이메틸술폭시드(DMSO)를 주입하여 기준점을 맞춘다. 부동한 시간의 흡광도를 흡광도가 더이상 하강하지 않을때까지 기록한다. 이때의 시간은 혈소판 최대응집에 수요되는 시간이며, 그 후 아래와 같은 공식으로 혈소판의 억제률을 계산한다.
응집억제률=(투약군 최대 응집 소요시간- 공백대조군 최대 응집 소요시간)/공백대조군 최대 응집 소요시간*100%
2.6 항응혈인자 Ⅹa 의 활성에 대한 테스트
발색 기질법을 사용하여, 시제 키트 설명서와 참고문헌에 따라서 마이크로 플레이트 리더에서 혈장의 항 Ⅹa 활성을 측정한다.
2.7 통계학처리
시험 데이터는 계량 자료이고, 대응되는 계산공식으로 응집 억제률과 항 Ⅹa 활성을 계산하며, Excel 소프트웨어를 통하여 평균수를 계산한다.
3.실험결과
3.1 혈소판 응집 실험결과
징코라이드 B와 사반류의 조합이 체외 PAF유도 혈소판 응집에서의 저항 작용(n=2)
조별 혈소판 최대 응집시간(min) 혈소판 응집 억제률(%)
생리식염수 20 -
징코라이드 B 30 50
리바록사반 군 25 25
아픽사반 군 40 100
에독사반 군 30 80
라작사반 군 35 75
오타믹사반 군 40 100
조성물1군 60 200
조성물2군 30 50
조성물3군 35 75
조성물4군 33 65
조성물5군 55 175
조성물6군 50 150
조성물7군 56 180
조성물8군 59 195
조성물9군 88 340
조성물10군 44 120
조성물11군 48 140
조성물12군 45 125
조성물13군 60 200
조성물14군 65 225
조성물15군 68 240
조성물16군 75 275
조성물17군 80 300
조성물18군 50 150
조성물19군 60 200
조성물20군 65 225
조성물21군 66 230
조성물22군 76 280
조성물23군 79 295
조성물24군 73 265
조성물25군 60 200
조성물26군 36 80
조성물27군 40 100
조성물28군 55 175
조성물29군 58 190
조성물30군 90 350
조성물31군 50 150
조성물32군 55 175
조성물33군 52 160
조성물34군 65 225
조성물35군 62 210
조성물36군 60 200
조성물37군 58 190
조성물38군 79 295
조성물39군 85 325
조성물40군 80 300
조성물41군 83 315
표 2에서 알 수 있다시피, PAF의 유도하에 각 조합물 군의 혈소판 응집률이 생리 식염수와 비교하였을때 모두 현저한 차이(p＜0.01, p＜0.05)을 나타냈고, 본 발명의 각 약물 조성물이 모두 효과적으로 혈소판 응집을 막아줄 수 있다는 것을 설명한다; 징코라이드 B와 사반류 약물의 단독 사용과 비교시, 본 발명에서 징코라이드 B와 사반류 약물을 조합 사용하였을때 항혈소판 응집 기능이 현저히 제고된 것은 징코라이드 B와 사반류 약물을 조합 사용하는 것이 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비함을 설명한다.
3.2 응혈인자 Ⅹa 활성 저항의 실험결과
징코라이드 B와 사반류의 조합이 체외에서 응혈인자Ⅹa 활성에 대한 저항
조별 항 Ⅹa 활성(Iu/ml) 조별 항 Ⅹa 활성(Iu/ml)
생리식염수 0 조성물18군 1.01
징코라이드 B 0.57 조성물19군 0.98
리바록사반 군 0.54 조성물20군 1.1
아픽사반 군 1.07 조성물21군 0.85
에독사반 군 0.79 조성물22군 1.39
라작사반 군 0.86 조성물23군 1.4
오타믹사반 군 1.03 조성물24군 1.35
조성물1군 1.53 조성물25군 1.52
조성물2군 0.95 조성물26군 0.96
조성물3군 1.06 조성물27군 0.91
조성물4군 0.96 조성물28군 1.46
조성물5군 1.47 조성물29군 1.39
조성물6군 1.04 조성물30군 1.56
조성물7군 1.39 조성물31군 1.11
조성물8군 1.45 조성물32군 0.96
조성물9군 1.55 조성물33군 1.89
조성물10군 0.87 조성물34군 0.98
조성물11군 0.92 조성물35군 1.15
조성물12군 1.11 조성물36군 1.06
조성물13군 1.5 조성물37군 1.17
조성물14군 1.38 조성물38군 1.49
조성물15군 1.45 조성물39군 1.52
조성물16군 1.52 조성물40군 1.38
조성물17군 1.45 조성물41군 1.50
비고: 효과적인 응고 저항은 혈장 항 Ⅹa 활성≥ 0.5IU/ML로 정의한다(<<심혈관 질병인이 저분자 헤파린을 응용시 규범화되어야 함>>보도: LMWH 체내의 약물 동력학 특점에 의거하여 제정한 것이다).
표 3에서 알 수 있다시피, 각 조성물 군의 항응혈인자 Ⅹa 활성은 생리식염수군에 비교하였을 때 모두 현저한 차이를 나타냈고, 이는 본 발명의 각 약물 조성물은 모두 Ⅹa 인자의 활성과 혈소판 응집을 효과적으로 억제할 수 있다는 것을 설명한다. 징코라이드 B 혹은 사반류 약물의 단독 사용과 비교시 본 발명에서 징코라이드 B와 사반류 약물을 연합 사용하였을 때 체외 항 응혈인자Ⅹa 활성이 현저히 제고되는 것은 징코라이드 B와 사반류 약물 조합 사용이 협동 효과 증가작용을 구비함을 설명한다.
표 2와 표 3에서 알 수 있다시피, 징코라이드 B + 리바록사반의 조성물 군(조성물1-8)에서 조성물1, 5-8군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 비교적 높고, 조성물1군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 가장 높다. 그러므로 징코라이드 B + 리바록사반의 조성물에서 바람직한 징코라이드 B와 리바록사반의 배합비는: 징코라이드 B 5-15몫대 리바록사반 10-20몫이고, 가장 바람직하게는 징코라이드 B 10몫대 리바록사반 15몫이다.
징코라이드 B + 아픽사반의 조성물 군(조성물 9-16)에서 조성물 9, 13-16군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 비교적 높고, 조성물9의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높다. 그러므로 징코라이드 B + 아픽사반의 조성물에서 징코라이드 B와 아픽사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 5-15몫대 아픽사반 1-10몫이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 아픽사반 5몫이다.
징코라이드 B + 에독사반의 조성물 군(조성물 17-24)에서 조성물 17, 22-24군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 비교적 높고, 조성물 17군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높다. 그러므로 징코라이드 B + 에독사반의 조성물에서 징코라이드 B와 에독사반의 배합비가 바람직하게는: 징코라이드 B 5-15 몫대 에독사반 10-30몫 이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 에독사반 15몫이다.
징코라이드 B + 라작사반의 조성물 군(조성물 25-29)에서 조성물 25, 28-29군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 비교적 높고, 조성물 25군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높다. 그러므로 징코라이드 B + 라작사반의 조성물에서, 징코라이드 B와 라작사반의 배합 비가 바람직하게는: 징코라이드 B 5-15몫대 라작사반 5-15 몫이고, 가장 바람직하게는 징코라이드 B 10몫대 라작사반 10몫이다.
징코라이드 B + 오타믹사반의 조성물 군(조성물 30-41)에서 조성물 30, 38-41군의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 상대적으로 비교적 높고, 조성물30의 혈소판 응집 억제률과 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높다. 그러므로 징코라이드 B + 오타믹사반의 조성물에서, 징코라이드 B와 오타믹사반의 배합비가 바람직하게는: 징코라이드 B 8-12몫대 오타믹사반 50-90몫이고, 가장 바람직하게는 징코라이드 B 10몫대 오타믹사반 10몫이다.
실험결과를 보면, 본 발명은 징코라이드 B와 사반류 활성성분, 예를 들면 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반, 오타믹사반 등 사반류 약물을 조합 사용하여 항혈소판 응집 기능이 현저히 증강되고, 항 Ⅹa 인자 활성도 현저히 증가하며 양자의 단독 사용시보다 우월하여 양자의 연합 사용이 협동하여 효과를 증가하는 작용을 일으켰음을 설명하였다. 또한, 징코라이드 B와 사반류 활성성분으로 조성된 조성물은 항혈소판 응집 기능이 강하고, 항 Ⅹa 인자의 활성이 높으며, 부동한 작용 매커니즘을 통하여 혈소판 응집을 막을수 있음도 설명하였다.
시험예 2 토끼의 외상성 다리 심정맥 혈전 형성 모델에서 징코라이드 B와 사반류의 항응고 작용 및 항응혈인자 활성 작용의 비교연구
1 실험목적:
토끼의 외상성 다리 심정맥 혈전 형성 모델중 징코라이드 B와 사반류 조합의 항응고 작용 및 항응혈인자 활성작용의 차이점을 비교한다.
2 재료와 방법
2.1 실험동물
시험시 체중이 2.0~3.0kg인 I급 일본 큰귀 백색 집토끼를 조별 8마리씩 총 384마리 수컷을 선택한다.
2.2 실험약물
징코라이드 B(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 리바록사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 아픽사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 에독사반(청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 라작사반 (청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 오타믹사반 (청두 바이위 테크놀로지 파머시 씨오., 엘 티디), 조성물1（징코라이드 B：리바록사반=10:15）, 조성물2（징코라이드 B：리바록사반=1:5）, 조성물3（징코라이드 B：리바록사반=1:40）, 조성물4（징코라이드 B：리바록사반=20:5）, 조성물5（징코라이드 B：리바록사반=20:40）, 조성물6（징코라이드 B：리바록사반=5:20）, 조성물7（징코라이드 B：리바록사반=15:10）, 조성물8（징코라이드 B：리바록사반=15:20）, 조성물9（징코라이드 B：아픽사반=10:5）, 조성물10（징코라이드 B：아픽사반=1:20）, 조성물11（징코라이드 B：아픽사반=20:0.5）, 조성물12（징코라이드 B：아픽사반=20:20）, 조성물13（징코라이드 B：아픽사반=5:1）, 조성물14（징코라이드 B：아픽사반=5:10）, 조성물15（징코라이드 B：아픽사반=15:1）, 조성물16（징코라이드 B：아픽사반=15:10）, 조성물17（징코라이드 B：에독사반=10:15）, 조성물18（징코라이드 B：에독사반=1:8）, 조성물19（징코라이드 B：에독사반=1:50）, 조성물20（징코라이드 B：에독사반=20:8）, 조성물21（징코라이드 B：에독사반=20:50）, 조성물22（징코라이드 B：에독사반=5:10）, 조성물23（징코라이드 B：에독사반=15:10）, 조성물24（징코라이드 B：에독사반=5:30）, 조성물25（징코라이드 B：라작사반 =10:10）, 조성물26（징코라이드 B：라작사반 =1:20）, 조성물27（징코라이드 B：라작사반 =20:1）, 조성물28（징코라이드 B：라작사반 =5:15）, 조성물29（징코라이드 B：라작사반 =15:5）, 조성물30（징코라이드 B：오타믹사반 =10:60）, 조성물31（징코라이드 B：오타믹사반 =1:15）, 조성물32（징코라이드 B：오타믹사반 =1:150）, 조성물33（징코라이드 B：오타믹사반 =20:15）, 조성물34（징코라이드 B：오타믹사반 =20:150）, 조성물35（징코라이드 B：오타믹사반 =15:30）,조성물36（징코라이드 B：오타믹사반 =5:125）, 조성물37（징코라이드 B：오타믹사반 =15:125）, 조성물38（징코라이드 B：오타믹사반 =8:50）, 조성물39（징코라이드 B：오타믹사반 =8:90）, 조성물40（징코라이드 B：오타믹사반 =12:50）, 조성물41（징코라이드 B：오타믹사반 =12:90）.
2.3 시제와 계기
계기:
(1) 집토끼 중량 검사계기
ACS-15LED전자 앉은뱅이 저울, 분별값 1g, 최대 계량 6kg, 계기번호 BKY-YB-002, 상해독수리표형기유한회사（上海團牌衡器有限公司） 출품, 집토끼 체중을 재는데 사용된다.
(2)응혈기능 및 응혈인자 활성 측정계기
일본 SYSMEX CA-660형 전자동 혈액 응고 분석 계기, 계기번호: BKY-ZX-044, SYSMEX생물과학(무석)유한회사(希森美康生物科技(無錫)有限公司).
DL-5M저속 냉동 원심분리기, 계기번호: BKY-ZX-040, 장사상지 원심분리기계기유한회사(長沙湘智離心儀器有限公司) 생산.
BC-117F형 냉장박스, 계기번호: BKY-ZX-015, 청도하이얼 주식유한회사(長沙湘智離心儀器有限公司)생산.
(3) PAF 함량 측정계기
Multiskan MK3형 마이크로 플레이트 리더, 계기번호: BKY-ZX-014, 미국 Thermo electron corporation.
(4) 병리 검사계기
독일Sartorius BS124S형 전자 저울(눈금치: 0.0001g), 계기번호: BKY-TJ-002, 독일Sartorius주식유한회사 생산.
ZT-14V2 생물조직 자동 탈수기, 계기번호: BKY-BL-016, 효감시 아광의용전자기술유한회사(亞光醫用電子技術有限公司) 출품.
상주 중위 BMJ-III 형 Histocentre, 계기번호: BKY-BL-002, 강소성 상주시 중위전자계기공장(中威電子儀器廠) 출품.
상주 중위 PHY-III형 water bath-slide drier, 계기번호: BKY-BL-003, 강소성 상주시 중위전자계기공장 출품.
Leica RM2126 회전식 Microtome, 계기번호: BKY-BL-004, 상해 Leica 계기유한회사 출품.
일본 올림푸스 BX41-32P01현미경, 계기번호: BKY-BL-013, 일본 올림푸스주식회사 출품.
YR-21 생물 조직 자동 염색기, 계기번호: BKY-BL-015, 효감시 아광 의용 전자기술 유한회사 출품.
북경 영광명 202-0형 데스크형 건조박스, 계기번호: BKY-BL-005, 북경시 영광명의료계기공장(永光明醫療儀器廠) 출품.
시제:
(1) 테스트 샘플 배합액 소요 시제
하이프로멜로스(HPMC, Hydroxy propyl methyl cellulose)(의뢰측에서 제공)
유당, 규격:100g/병, 배치번호:2015041701, 제한 사용시간: 2018.06, 성도시 커룽 화공 시제 공장. 만니톨, 규격:500g/병, 배치번호:201402201, 제한 사용시간: 2017.06, 성도시 커룽 화공 시제 공장.
(2) 응혈기능 및 응혈인자 활성 측정시제
응혈 품질 관리 제품, 규격:1ml×10병/키트, 배치번호: 528267B, 제한 사용시간:2017.4.27, SIEMENS.
PT시제, 규격:2ml×10병/키트, 배치번호: R5003, R5005, 제한 사용시간: 2017.1.1 ,2017.3.1, SYSMEX 생물기술유한회사 생산.
aPTT시제, 규격:2ml×10병/키트, 배치번호R5001, R5006, 제한 사용시간: 2016.9.1, 2016.12.1, SYSMEX 생물기술유한회사 생산.
항응고 인자(Ⅹa)측정 시제키트(발색 기질 분석법), 규격:10×71nkat, 배치번호:N1243555, 생산기업: 이탈리아 Chromogenix.
발색 기질 S，규격:25mg, 배치번호: N1143454, 생산기업: 이탈리아 Chromogenix.
폴리에틸렌 글리콜(PEG)6000, 규격: 50g, 배치번호: LB50P76, 생산기업: 북경바이링웨이과학기술유한회사.
헤파린나트륨, 규격: 1g/병, 배치번호: 9041-08-1, 생산기업: Bomei.
(3)PAF 함량 측정시제
과학연구용 토끼 혈소판 활성화 인자(PAF)시제 키트, 규격: 96T/키트×5키트, 48T/키트×1키트, 배치번호: 201509, 201508, 제한 사용시간: 2016.02, 상해메이랜생물과학기술유한회사 생산.
(4) 마취제
넴뷰탈, 집토끼 마취에 사용됨. 사용시 정제수로 넴뷰탈을 3%농도로 배합제조한다. 3% 넴뷰탈 용액(g/v)으로 조제한다. 모델 제조시 집토끼의 마취에 사용된다.
(5) 병리 검사제
조직 표본 고정액(FAA액): 95%알콜(AR급), 배치번호: 2015052301, 유효기간: 2020.4까지, 규격:20kg/통, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 빙초산(AR급), 배치번호: 2015040201, 유효기간: 2020.3까지, 규격:500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 메탄올(AR급), 배치번호: 2014120801, 유효기간: 2016.11까지, 규격: 500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장 생산. 조제방법: 95%알콜 4200ml, 메탄올 500ml, 빙초산 300ml와 정제수 900ml 각각 계량하여 플라스틱 통에 부은 후 충분히 혼합하면 된다.
탈수시제: 무수알콜(AR급), 배치번호: 2015052501, 유효기간: 2020.04까지, 규격:20kg/통, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산. 조제방법: 무수알콜을 취하여 정제수로 희석하여 70%, 80%, 90% 알콜용액으로 배제한다.
투명시제: 디메틸 벤젠(Dimethylbenzene, AR급), 배치번호: 2014071001, 유효기간: 2019.06까지, 규격: 500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산.
헤마톡실린 염색액: 헤마톡실린(AR급), 배치번호: 2014010701, 유효기간: 2017.04까지, 규격:5g/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 황산알루미늄칼륨(AR급), 배치번호: 2014091601, 유효기간: 2017.1까지, 규격:500g/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 요오드산나트륨(AR급), 배치번호: 20140711, 유효기간: 2017.1까지, 규격:100g/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 글리세린(propanetriol, AR급), 배치번호: 2014122401, 유효기간: 2017.12까지, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 빙초산(AR급), 배치번호: 2015040201, 유효기간: 2020.3까지, 규격:500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산. 조제방법: 헤마톡실린 1.5002g을 계량하여 취하고 250ml정제수를 첨가하고 교반하여 이가 완전히 용해되게 하고 312.5ml 정제수를 더 첨가하며, 요오드산나트륨 0.3003g을 계량하여 취해 비커에 담아 5분 교반하고 황산알루미늄칼륨 37.5004g을 더 첨가하며, 이가 완전히 용해된 후 글리세린 187.5ml를 첨가하고 균일하게 혼합하며, 나중에 빙초산 7.5ml 넣고 충분히 교반하여 균일하게 혼합해 얻는다.
에오신염색액: 에오신(수용액), 배치번호:2013110501, 유효기간: 2016.05까지, 규격: 25g/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장; 무수알콜(AR급), 배치번호: 2015052501, 유효기간: 2020.4까지, 규격:20kg/통, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산. 조제방법: 무수알콜 600ml와 정제수 150ml를 계량하고 취하여 비커에 붓고 균일하게 혼합하며, 에오신 3.7505g을 첨가하고 균일하게 교반하여 용해시킴으로써 얻는다.
염산-알콜 분화액: 염산(AR급), 배치번호: 2014072301, 유효기간: 2019.7.22까지, 규격: 500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장; 무수알콜(AR급), 배치번호: 2015052501, 유효기간: 2020.04까지, 규격:20kg/통, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산. 조제방법: 무수알콜520ml와 정제수 222.5ml를 취하여 비커에 부은 후 균일하게 혼합하며, 거기에 7.5ml 농염산을 천천히 첨가하고 교반하여 균일하게 혼합함으로써 얻는다.
마운팅시제: 중성고무진, 규격:100g/병, 배치번호: 20140106, 유효기간: 2018.12까지, 중국 상해이양계기유한회사(上海懿洋儀器有限公司).
커버글라스 세척액: 중크롬산칼륨(AR급), 배치번호: 20120822, 유효기간: 2016.07까지, 규격:500g/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산; 진한 황산(AR급), 배치번호: 2014072301, 20130607, 유효기간: 2019.7.22, 2018.06.06까지, 규격: 500ml/병, 성도시 커룽 화공 시제 공장에서 생산. 조제방법: 정제수 500ml를 취하고 중크롬산칼륨 50.0003g 을 첨가하고, 교반, 용해, 균일 혼합한 후 여기에 진한 황산 50ml를 천천히 첨가하며 교반하여 균일하게 혼합함으로써 얻는다.
2.4 모델 만들기
검역 및 적응성 관찰에서 합격한 체중이 2.070~2.560kg인 일본 큰귀 백색 집토끼를 총 392마리 모두 수컷을 선택하고 그중 8마리를 정상군으로 하고 나머지는 모두 타격장치를 사용하며 타격 접촉 원면 직경은 1.5cm이며, 외상에네지를 Ep=mgh로 계산한다. 그중 철봉 한번의 격타 에너지는 7.5J이다. 구체적인 방법으로는: 토끼 귀 변두리 정맥에 3% 넴뷰탈 1ml/kg량으로 주사하여 마취한다. 우측 복와위, 왼쪽 넓적다리 근부에 타격장치를 설치하여 토끼 좌 대퇴골 대전자를 만져서 확인하고, 타격 헤드 평면을 대퇴골 대전자로부터 대전자 하부 1.5cm 범위내에 긴밀히 접촉시키며, 자기통제 타격장치를 사용하여 토끼 대퇴 근단 외측을 타격한다. 왼쪽하지를 석고로 힙 무릎 만곡부위에 고정하되, 석고 붕대를 할때 오른쪽 힙은 자유롭게 활동함을 검사한 후 복와위에서 석고로 정형을 기다리고, 모델 제조후 음수를 자유롭게 하며, 과립사료로 사양하고 항응고제나 항생제는 사용하지 않는다.
2.5 그루핑과 약물투여방식
2.5.1 약물 조제방법
약물(mg): HPMC(mg): 유당(mg): 만니톨(mg)= 1:2:10:20을 균일하게 연마한 후 정제수 1ml를 더 첨가하고 균일하게 교반하여 얻는다. 예를 들면, 50mg약물+100mg HPMC+500mg유당+1000mg만니톨을 균일하게 연마하고, 정제수 50ml를 첨가하며 균일하게 교반하면 1mg/ml의 약물액을 얻을수 있다.
2.5.2 약물 투여방안
각 조의 동물은 모델 제조 후 그루핑하고, 아래 표4와 같은 약물 투여방안으로 위 내 약물 투여하며, 7일 연속 하루 한번씩 약물 투여를 진행한다.
약물 투여 방안
동물 조별 약물 투여 경로 테스트 받는 물질 약물 투여 제량(mg/kg) 약물 투여 차수
정상군 i.g 보조제 - -
모델군 i.g 보조제 - -
징코라이드 B군 i.g 징코라이드 B 5 1
리바록사반 군 i.g 리바록사반 5 1
아픽사반 군 i.g 아픽사반 5 1
에독사반 군 i.g 에독사반 5 1
라작사반 군 i.g 라작사반 5 1
오타믹사반 군 i.g 오타믹사반 5 1
조성물1군 i.g 조성물1 5 1
조성물2군 i.g 조성물2 5 1
조성물3군 i.g 조성물3 5 1
조성물4군 i.g 조성물4 5 1
조성물5군 i.g 조성물5 5 1
조성물6군 i.g 조성물6 5 1
조성물7군 i.g 조성물7 5 1
조성물8군 i.g 조성물8 5 1
조성물9군 i.g 조성물9 5 1
조성물10군 i.g 조성물10 5 1
조성물11군 i.g 조성물11 5 1
조성물12군 i.g 조성물12 5 1
조성물13군 i.g 조성물13 5 1
조성물14군 i.g 조성물14 5 1
조성물15군 i.g 조성물15 5 1
조성물16군 i.g 조성물16 5 1
조성물17군 i.g 조성물17 5 1
조성물18군 i.g 조성물18 5 1
조성물19군 i.g 조성물19 5 1
조성물20군 i.g 조성물20 5 1
조성물21군 i.g 조성물21 5 1
조성물22군 i.g 조성물22 5 1
조성물23군 i.g 조성물23 5 1
조성물24군 i.g 조성물24 5 1
조성물25군 i.g 조성물25 5 1
조성물26군 i.g 조성물26 5 1
조성물27군 i.g 조성물27 5 1
조성물28군 i.g 조성물28 5 1
조성물29군 i.g 조성물29 5 1
조성물30군 i.g 조성물30 5 1
조성물31군 i.g 조성물31 5 1
조성물32군 i.g 조성물32 5 1
조성물33군 i.g 조성물33 5 1
조성물34군 i.g 조성물34 5 1
조성물35군 i.g 조성물35 5 1
조성물36군 i.g 조성물36 5 1
조성물37군 i.g 조성물37 5 1
조성물38군 i.g 조성물38 5 1
조성물39군 i.g 조성물39 5 1
조성물40군 i.g 조성물40 5 1
조성물41군 i.g 조성물41 5 1
2.6 지표검측
2.6.1 응혈기능 및 응혈인자 활성측정
첫 약물투여 후 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0h후 귀 중심 동맥에서 채혈한다. 혈장을 분리시켜 전자동 응혈 계기에서 aPPT, PT 및 Ⅹa의 활성을 측정한다.
2.6.2 PAF함량 변화
첫 약물투여 후 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0h후 귀 중심 동맥으로부터 채혈한다. 혈청을 분리시켜 ELISA방법으로 PAF함량 변화를 측정한다.
2.6.3 심정맥 혈전 형성 측정
마지막 약물투여 30분 후 방혈하여 동물을 죽이고, 동물의 고동맥, 고정맥을 떼어내고 HE염색, 광학 현미경을 통하여 혈관내피 손상이나 혈전 형성과 혈관 파열 등 상황을 검사함과 동시에 상기 병변정도에 대해 등급별 평점을 진행한다. 구체적인 평점 표준은 아래 표 5와 같다.
심정맥 혈전 형성 병리 조직학 검사 병변 정도 평점 표준
검사지표 및 판단기준 병변정도 등급 평점






혈관






 내피손상


 내피완정, 이상없음 （-） 0
내피세포 혼탁 종창변성 （+） 1
내피세포 괴사，수량감소 （++） 2
내피세포 선명한괴사，내피결실 （+++） 3
혈전형성


 혈전없음 （-） 0
혈전체적＜1/ 3관경 （+） 1
혈전체적＞1/ 3관경，＜2/ 3관경 （++） 2
혈전체적＞2/ 3관경, 심지어 전체관강이 막힘 （+++） 3
혈관파열
 혈관벽완정，이상없음 （-） 0
혈관파열，혈액세포 오버플로 （+++） 3
2.7 통계학처리
응혈기능 및 응혈인자와 PAF함량 데이터를 계량 자료로 하고, Excel 소프트웨어를 응용하여 그 평균수, 표준차를 계산하고, 데이터의 정규 분포 여부를 판단한다. 정규분포는 excel에서 F점검을 사용하여 등분산 검정을 거친후 t점검을 선택하여 통계를 진행하고, 비정규분포를 나타낼 시에는 비모수적검정(non-parametric test)을 진행한다.
병리 검측 데이터는 등급 자료 데이터로써, 소프트웨어 SPSS13.0 ”비모수적검정”의 “복수 독립 샘플”을 이용하여 통계분석을 진행한다.
3 실험결과
3.1 응혈기능 및 항응혈인자 활성 측정
응혈기능 aPPT 검사결과(`x±SD, 초)
조별 약물 투여후 0.5h 약물 투여후 1h 약물 투여후 2h 약물 투여후 3h 약물 투여후 4h
정상군 29.53±8.77 26.31±9.53 30.27±7.29 24.06±8.92 24.82±9.29
모델군 24.70±5.90 22.91±5.57 32.69±7.27 26.79±10.06 29.79±7.51
징코라이드 B 군 25.89±8.15 30.65±6.79* 25.83±5.96 34.30±6.56 31.92±7.77
리바록사반 군 27.89±7.97 32.01±9.31* 34.63±5.57 35.92±10.85 29.20±6.32
아픽사반 군 19.05±6.17 24.26±7.89 23.94±5.49 31.71±8.53 29.21±11.35
에독사반 군 26.77±7.65 25.01±9.52 33.63±5.45 36.47±9.12 27.20±6.31
라작사반 군 20.13±6.74 26.23±8.43 22.33±4.46 35.75±8.68 29.65±9.72
오타믹사반 군 21.67±9.42 25.71±7.68 25.61±6.75 34.62±7.59 30.16±9.37
조성물1군 29.21±9.08 36.44±7.66** 24.48±8.23* 30.53±6.77 32.92±4.64
조성물2군 28.64±6.54 32.66±8.59* 35.24±4.34 36.99±7.65 30.90±8.15
조성물3군 25.64±3.41 33.75±8.16** 31.29±4.96 30.89±6.40 33.90±8.02
조성물4군 25.77±6.85 30.69±8.36* 36.63±5.64 36.46±9.31 31.20±6.52
조성물5군 19.13±6.56 34.23±9.46** 35.33±4.45 30.74±7.68 30.65±7.65
조성물6군 20.36±9.14 32.71±7.66* 35.61±6.78 36.62±7.57 32.16±8.67
조성물7군 21.36±7.69 34.63±7.91** 35.45±6.75 31.52±6.84 32.61±8.27
조성물8군 20.94±5.84 35.64±8.75** 36.14±8.17 31.67±9.17 21.67±8.19
조성물9군 29.71±8.42 35.54±12.24** 25.93±5.93* 30.25±6.04 33.23±4.18
조성물10군 32.77±7.24 29.06±7.22* 36.65±15.54 29.52±7.39 28.76±5.68
조성물11군 27.70±9.07 31.37±9.86* 29.62±9.51 28.88±5.37 29.54±5.92
조성물12군 28.67±8.14 33.71±7.48* 35.47±6.75 34.62±7.54 33.14±8.98
조성물13군 25.16±6.75 35.25±9.95** 35.74±5.67 31.64±7.75 31.64±7.57
조성물14군 20.78±9.48 34.71±7.74** 35.49±6.95 36.76±7.84 32.96±8.74
조성물15군 21.55±7.89 34.59±7.76** 35.44±6.79 31.39±6.69 32.88±8.97
조성물16군 20.64±5.77 35.89±8.55* 36.75±8.66 31.84±9.48 31.84±8.96
조성물17군 29.30±8.54 35.80±12.36** 25.45±7.69* 30.28±6.64 33.75±4.95
조성물18군 32.82±7.69 29.57±7.99* 36.56±15.78 29.94±7.56 28.84±5.59
조성물19군 27.91±9.26 31.76±9.94* 29.58±9.74 28.67±5.95 29.57±5.64
조성물20군 33.65±7.85 33.46±7.87* 36.48±15.95 29.75±7.48 28.75±5.83
조성물21군 34.81±7.75 33.68±7.82* 36.94±15.59 29.65±7.44 28.76±5.89
조성물22군 27.55±7.16 36.47±7.56** 35.26±6.49 31.69±6.72 32.73±8.18
조성물23군 26.64±5.29 35.99±8.48** 36.64±8.72 31.43±9.55 31.95±8.64
조성물24군 23.46±7.85 36.75±7.82** 35.48±6.80 31.19±6.48 32.15±8.73
조성물25군 29.25±8.78 35.65±12.85** 25.56±5.64* 30.85±6.96 33.49±8.62
조성물26군 30.67±7.00 33.52±7.96* 36.56±15.26 29.35±7.84 28.62±5.85
조성물27군 29.81±7.17 33.64±7.45* 36.44±10.64 29.46±7.52 28.43±5.42
조성물28군 27.48±5.96 36.72±7.63** 35.58±6.64 31.28±6.65 32.45±8.55
조성물29군 26.77±5.55 35.58±8.23** 36.66±8.75 31.44±9.28 31.63±8.45
조성물30군 28.30±8.46 35.75±10.64** 24.26±6.37* 30.58±6.57 33.56±5.00
조성물31군 32.42±7.22 31.69±7.41* 36.23±9.47 29.56±7.47 28.95±5.36
조성물32군 27.68±9.48 31.28±9.36* 29.59±9.82 28.63±5.41 29.45±5.69
조성물33군 33.55±7.96 34.36±7.85** 36.96±15.23 29.71±7.23 28.69±5.64
조성물34군 34.96±7.12 33.23±7.55* 36.64±15.38 29.45±7.26 28.82±5.38
조성물35군 30.65±9.22 32.65±9.64* 30.69±9.47 28.96±5.57 30.64±8.39
조성물36군 30.68±8.65 32.68±8.25* 35.68±8.64 29.58±7.84 28.58±5.28
조성물37군 31.47±5.94 33.75±7.11* 36.14±15.16 29.29±7.96 28.85±5.55
조성물38군 27.85±7.96 36.44±7.77** 35.95±6.05 31.39±6.41 32.65±8.45
조성물39군 26.72±5.58 35.83±8.64** 36.74±8.49 31.57±9.68 31.82±8.63
조성물40군 23.82±7.34 36.91±7.50** 35.53±6.67 31.58±6.65 23.42±8.95
조성물41군 29.74±8.45 36.65±12.27** 30.58±8.27 30.52±5.86 34.16±8.51
주: (1)모델군과 정상 대조군 비교 p>0.05, (2)모델군과 각 약물 투여군 비교 *p<0.05**p<0.01
표 6이 보여주듯이: (1)약물 투여 후 0.5h~4h, 모델군과 정상 대조군의 aPTT(활성화 부분 트롬보키나아제 시간)를 비교하면 현저한 연장(p＞0.05)이 보이지 않았다. 이는 모델 만들기 성공을 의미한다. (2) 모델군과 비교시, 약물투여군 약물 투여후 0.5h~4h aPTT 대부분은 현저한 연장(p＞0.05)이 보이지 않았다. 이는 징코라이드 B와 사반류 및 각 조성물 군에 출혈 불량반응이 없었음을 설명한다. (3) 약물 투여후 1h에 모델군과 비교, 징코라이드 B와 리바록사반 군의 aPTT는 현저한 연장(p<0.05)을 나타냈고 아픽사반 군, 에독사반 군, 라작사반 군, 오타믹사반조 군의 aPPT는 현저한 연장(P＞0.05)을 나타내지 않았다. 징코라이드 B + 사반류 군 aPPT는 현저한 연장(p<0.01)과 명확한 연장(p<0.05)을 나타냄은 본 발명의 약물 조성물이 효과적으로 aPPT를 연장하는 동시에 해당 비례하에 징코라이드 B와 사반은 aPPT의 연장에 협동 효과 증진작용을 구비한다는 것을 설명한다.
응혈기능 PT 검사결과(x±SD, 초)
조별 약물 투여후 0.5h 약물 투여후 1h 약물 투여후 2h 약물 투여후 3h 약물 투여후 4h
정상군 6.83±0.31 6.89±0.39 6.83±0.17 6.83±0.30 6.78±0.23
모델군 6.59±0.23 6.69±0.26 7.07±1.47 6.66±0.22 6.73±0.16
징코라이드 B 군 6.76±0.32 6.79±0.27 6.75±0.36 6.72±0.24 6.68±0.23
리바록사반 군 6.76±0.30 7.20±0.96 6.90±0.34 6.81±0.22 6.70±0.33
아픽사반 군 6.78±0.21 6.76±0.21 6.70±0.19 6.70±0.24 7.14±0.87
에독사반 군 6.73±0.15 6.14±0.26 6.28±0.42 6.45±0.65 6.42±0.34
라작사반 군 6.71±0.25 7.41±0.51 6.47±0.25 6.47±0.41 6.70±0.25
오타믹사반 군 6.58±0.45 6.74±0.26 6.52±0.43 6.62±0.42 7.82±0.31
조성물1군 7.03±0.13** 6.56±0.34 6.47±0.34 6.58±0.18 6.57±0.16
조성물2군 6.86±0.21* 6.73±0.25 6.85±0.30 6.70±0.28 6.71±0.28
조성물3군 6.82±0.22* 6.83±0.24 6.76±0.20 6.84±0.34 6.94±0.24
조성물4군 6.85±0.34* 6.56±0.77 6.48±0.56 6.75±0.35 6.75±0.26
조성물5군 6.99±0.32** 6.46±0.26 6.58±0.25 6.74±0.58 6.69±0.28
조성물6군 6.86±0.24* 6.74±0.58 6.74±0.34 6.81±0.29 6.83±0.50
조성물7군 6.95±0.26** 6.79±0.25 6.78±0.38 6.79±0.34 6.85±0.19
조성물8군 6.91±0.41** 6.78±0.34 6.95±0.18 6.84±0.24 6.67±0.26
조성물9군 7.10±0.23** 6.86±0.26 6.83±0.28 6.97±0.56 6.85±0.19
조성물10군 6.84±0.29* 6.88±0.33 6.72±0.15 6.75±0.20 6.75±0.30
조성물11군 6.88±0.12* 6.97±0.24 7.07±1.18 7.06±0.88 7.07±0.54
조성물12군 6.81±0.19* 6.83±0.31 6.83±0.13 6.89±0.62 6.74±0.13
조성물13군 7.02±0.33** 6.80±0.30 6.87±0.15 6.68±0.25 6.79±0.28
조성물14군 6.92±0.24** 6.64±0.21 6.82±0.34 6.79±0.19 6.95±0.30
조성물15군 7.00±0.18** 6.92±0.26 6.79±0.17 6.83±0.48 6.91±0.24
조성물16군 6.95±0.23** 6.95±0.29 6.85±0.36 6.58±0.24 6.86±0.28
조성물17군 7.07±0.52** 6.58±0.35 6.96±0.41 6.85±0.36 6.95±0.26
조성물18군 6.88±0.22* 6.93±0.24 6.85±0.25 6.92±0.21 6.84±0.28
조성물19군 6.86±0.31* 6.68±0.35 6.99±0.95 7.00±0.65 7.14±0.35
조성물20군 6.81±0.25* 6.79±0.29 6.85±0.26 6.79±0.53 6.88±0.26
조성물21군 6.89±0.27* 6.95±0.19 6.86±0.28 6.93±0.36 7.00±0.31
조성물22군 7.05±0.25** 6.85±0.36 6.84±0.28 6.86±0.26 6.89±0.19
조성물23군 6.98±0.26** 6.87±0.51 6.95±0.15 6.79±0.19 6.95±0.29
조성물24군 7.03±0.29** 6.98±0.24 6.79±0.17 6.86±0.27 6.88±0.35
조성물25군 7.05±0.45** 6.74±0.15 6.87±0.35 6.92±0.42 6.86±0.46
조성물26군 6.89±0.19* 6,82±0.46 6.94±0.47 6.98±0.29 6.79±0.18
조성물27군 6.83±0.24* 6.75±0.36 6.85±0.74 6.85±0.63 7.01±0.15
조성물28군 7.01±0.18** 6.69±0.42 6.77±0.52 6.95±0.25 6.85±0.26
조성물29군 7.00±0.31** 6.78±0.35 6.96±0.24 6.97±0.28 6.96±0.27
조성물30군 7.15±0.27** 6.86±0.14 6.88±0.29 6.95±0.24 6.88±0.17
조성물31군 6.89±0.16* 6.88±0.20 6.74±0.23 6.99±0.18 6.79±0.35
조성물32군 6.85±0.24* 6.95±0.24 6.78±0.56 6.97±0.36 7.01±0.26
조성물33군 6.86±0.19* 7.01±0.23 6.96±0.42 6.76±0.46 6.96±0.18
조성물34군 6.88±0.34* 6.76±0.26 6.79±0.34 6.85±0.28 6.98±0.24
조성물35군 6.85±0.22* 6.65±0.64 6.48±0.96 7.03±0.16 6.85±0.42
조성물36군 6.86±0.60* 6.98±0.26 6.67±0.51 6.95±0.62 6.80±0.23
조성물37군 6.84±0.63* 6.85±0.46 6.89±0.41 6.95±0.28 6.74±0.52
조성물38군 7.12±0.26** 6.96±0.55 6.89±0.45 6.78±0.27 6.95±0.35
조성물39군 7.05±0.65** 6.99±0.65 6.47±0.74 6.86±0.51 6.85±0.37
조성물40군 7.06±0.29** 6.75±0.29 6.76±0.42 6.83±0.36 6.96±0.28
조성물41군 6.98±0.52** 6.86±0.25 6.68±0.36 6.86±0.85 6.96±0.26
주: (1)모델군과 정상 대조군 비교 p>0.05, (2)모델군과 각 약물 투여군 비교 *p<0.05
표 7이 나타내듯이: (1) 약물 투여후 0.5h~4h, 모델군과 정상대조군 비교시 PT(트롬빈 원시간)는 모두 현저한 연장(p＞0.05)이 나타나지 않았다. 이는 모델 만들기 성공을 의미한다. (2) 모델군과 비교시, 각 약물 투여군 약물 투여후 0.5h~4h PT는 모두 현저한 연장(p＞0.05)이 나타나지 않았다. 이는 징코라이드 B와 사반류 군 및 각 조성물 군에 출혈 불량반응이 없었음을 설명한다. (3) 약물 투여후 0.5h에 모델군과 비교하면, 각 조성물 군 PT(프로트롬빈 시간)는 현저한 연장(p<0.05)과 명확한 연장(p<0.01)이 나타났다. 이는 본 발명의 약물 조성물이 효과적으로 PT를 연장하며, 징코라이드 B와 사반류는 PT의 연장에 협동 효과 증진 작용을 구비한다는 것을 설명한다.
항응혈인자 Ⅹa 활성 검사결과(x±SD, IU/ml)
조별 약물 투여후 0.5h 약물 투여후 1h 약물 투여후 2h 약물 투여후 3h 약물 투여후 4h
정상군 0.10±0.05 0.10±0.05 0.10±0.06 0.09±0.08 0.09±0.06
모델군 0.09±0.07 0.08±0.05 0.13±0.06 0.09±0.09 0.13±0.07
징코라이드 B 군 0.08±0.07 0.10±0.10 0.35±0.22* 0.74±0.15*** 0.65±0.12***
리바록사반 군 0.37±0.09*** 0.31±0.13*** 0.18±0.05* 1.32±0.16*** 1.38±0.18***
아픽사반 군 0.16±0.10*** 0.26±0.04*** 0.25±0.10* 1.22±0.22*** 1.12±0.15***
에독사반 군 0.25±0.06*** 0.21±0.08*** 0.20±0.10* 1.26±0.09*** 1.26±0.07***
라작사반 군 0.20±0.14*** 0.18±0.05*** 0.23±0.08* 1.31±0.30*** 1.32±0.09***
오타믹사반 군 0.19±0.04*** 0.25±0.10*** 0.26±0.14* 1.25±0.12*** 1.24±0.06***
조성물1군 0.41±0.18*** 0.17±0.03*** 0.94±0.13*** 1.37±0.32*** 1.15±0.16***
조성물2군 0.32±0.05*** 0.31±0.13*** 1.10±0.19*** 1.27±0.22*** 1.06±0.21***
조성물3군 0.30±0.07*** 0.25±0.07*** 1.20±0.10*** 1.28±0.10*** 1.30±0.09***
조성물4군 0.24±0.12*** 0.30±0.05*** 1.23±0.08*** 1.23±0.52*** 1.42±0.05***
조성물5군 0.20±0.06*** 0.36±0.13*** 1.26±0.14*** 1.30±0.12*** 1.26±0.08***
조성물6군 0.35±0.25*** 0.34±0.05*** 1.34±0.13*** 1.34±0.42*** 1.20±0.30***
조성물7군 0.34±0.09*** 0.29±0.08*** 1.22±0.23*** 1.35±0.32*** 1.28±0.40***
조성물8군 0.40±0.08*** 0.32±0.12*** 1.41±0.04*** 1.28±0.29*** 1.34±0.36***
조성물9군 0.46±0.04*** 0.24±0.21*** 1.03±0.21*** 1.30±0.18*** 1.26±0.31***
조성물10군 0.32±0.08*** 0.25±0.12*** 0.74±0.17*** 1.16±0.17*** 0.70±0.16***
조성물11군 0.25±0.05*** 0.29±0.17*** 1.21±0.06*** 1.31±0.15*** 1.12±0.07***
조성물12군 0.26±0.04*** 0.32±0.21*** 0.95±0.23*** 0.96±0.20*** 1.05±0.15***
조성물13군 0.45±0.09*** 0.35±0.20*** 1.05±0.22*** 1.21±0.11*** 1.09±0.15***
조성물14군 0.35±0.08*** 0.32±0.17*** 1.14±0.08*** 1.20±0.09*** 1.06±0.08***
조성물15군 0.43±0.03*** 0.30±0.14*** 1.35±0.25*** 1.34±0.19*** 1.12±0.24***
조성물16군 0.40±0.10*** 0.32±0.15*** 1.54±0.20*** 1.26±0.31*** 1.34±0.20***
조성물17군 0.50±0.04*** 0.32±0.06*** 1.35±0.09*** 1.29±0.09*** 1.26±0.08***
조성물18군 0.30±0.06*** 0.35±0.24*** 1.24±0.16*** 1.28±0.06*** 1.21±0.23***
조성물19군 0.33±0.08*** 0.31±0.20*** 1.15±0.36*** 1.41±0.25*** 1.19±0.35***
조성물20군 0.31±0.03*** 0.29±0.16*** 1.09±0.06*** 1.24±0.04*** 1.14±0.05***
조성물21군 0.36±0.07*** 0.36±0.12*** 1.29±0.08*** 1.29±0.05*** 1.06±0.06***
조성물22군 0.46±0.06*** 0.39±0.06*** 1.46±0.19*** 1.42±0.26*** 1.46±0.18***
조성물23군 0.37±0.09*** 0.35±0.32*** 1.31±0.09*** 1.32±0.07*** 1.41±0.09***
조성물24군 0.42±0.07*** 0.40±0.07*** 1.25±0.07*** 1.26±0.08*** 1.28±0.06***
조성물25군 0.45±0.08*** 0.30±0.08*** 1.12±0.15*** 1.35±0.06*** 1.32±0.27***
조성물26군 0.34±0.06*** 0.34±0.05*** 1.21±0.08*** 1.29±0.08*** 1.41±0.09***
조성물27군 0.35±0.09*** 0.40±0.08*** 1.35±0.09*** 1.32±0.06*** 1.32±0.27***
조성물28군 0.43±0.07*** 0.31±0.30*** 1.36±0.02*** 1.28±0.01*** 1.38±0.05***
조성물29군 0.42±0.07*** 0.40±0.07*** 1.25±0.07*** 1.26±0.08*** 1.28±0.06***
조성물30군 0.47±0.08*** 0.28±0.26*** 1.29±0.05*** 1.24±0.06*** 1.39±0.05***
조성물31군 0.36±0.04*** 0.38±0.06*** 1.35±0.06*** 1.39±0.02*** 1.35±0.07***
조성물32군 0.34±0.03*** 0.28±0.04*** 1.25±0.09*** 1.41±0.08*** 1.28±0.04***
조성물33군 0.31±0.05*** 0.36±0.09*** 1.29±0.06*** 1.30±0.06*** 1.31±0.07***
조성물34군 0.34±0.01*** 0.29±0.06*** 1.32±0.10*** 1.36±0.08*** 1.29±0.05***
조성물35군 0.36±0.09*** 0.27±0.26*** 1.42±0.01*** 1.32±0.05*** 1.28±0.06***
조성물36군 0.37±0.05*** 0.35±0.06*** 1.38±0.13*** 1.29±0.04*** 1.34±0.07***
조성물37군 0.30±0.06*** 0.36±0.08*** 1.35±0.07*** 1.32±0.07*** 1.32±0.09***
조성물38군 0.45±0.06*** 0.31±0.05*** 1.32±0.04*** 1.36±0.09*** 1.28±0.08***
조성물39군 0.44±0.08*** 0.34±0.06*** 1.37±0.09*** 1.39±0.06*** 1.35±0.08***
조성물40군 0.44±0.10*** 0.35±0.25*** 1.38±0.06*** 1.41±0.04*** 1.37±0.02***
조성물41군 0.40±0.07*** 0.29±0.08*** 1.41±0.07*** 1.38±0.09*** 1.28±0.08***
주: (1)모델군과 정상 대조군 비교 p>0.05, (2)모델군과 각 약물 투여군 비교 *p<0.05**p<0.01***p<0.001
비고: 효과적인 항응고는 혈장 항 Ⅹa 활성≥ 0.5IU/ML로 정의(<<심혈관 질병인이 저분자 헤파린을 응용시 규범화되어야 함>>보도: LMWH 체내의 약물 동력학 특점에 기반하여 제정한 것이다).
표 8이 나타내듯이: (1) 약물 투여후 0.5h~4h에 모델군과 정상대조군을 비교시 항응혈인자 Ⅹa 활성이 모두 현저한 이상(p＞0.05)이 나타나지 않았다. 이는 모델 만들기 성공을 의미한다. (2) 모델군과 비교시, 약물 투여후 0.5h~4h에 징코라이드 B군 항응혈인자 Ⅹa 활성은 시간의 흐름에 따라 높아지고(p<0.001), 리바록사반과 아픽사반군은 극히 현저한 차이(p<0.001)를 구비한다. 이는 사반류 약물의 항응혈인자 Ⅹa 활성이 징코라이드 B보다 강하다는 것을 설명한다. (3) 약물 투여후 2h에 모델군과 비교시, 각 단독 약군의 항 Ⅹa 활성은 현저히 증가(p<0.05)하였지만 각 조성물 군의 항Ⅹa 활성은 극히 현저한 증가(p<0.001)를 구비한다. 이는 본 발명의 약물 조성물이 항 Ⅹa 인자 활성을 제고할 뿐만 아니라, 징코라이드 B와 사반 항 Ⅹa 활성에 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비하고 있음을 설명한다.
3.2PAF 함량 변화
PAF함량 검사결과(x±SD, ng/L)
조별 약물 투여후 0.5h 약물 투여후 1h 약물 투여후 2h 약물 투여후 3h 약물 투여후 4h
정상군 965.71±245.32 1275.71±120.47 1291.43±73.60 1749.29±172.16 1391.43±209.09
모델군 1116.43±125.99 1403.57±307.82 1340.71±274.51 1985.00±1007.73 1702.86±448.96
징코라이드 B 군 850.71*±284.79 1255.71±300.73 975.71**±146.46 1656.43±259.36 1155.00*±414.16
리바록사반 군 886.43±314.24 1484.29±129.00 1061.43*±276.83 1671.43±236.95 862.86***±261.14
아픽사반 군 876.64*±226.44 1543.57±239.95 1117.86±231.52 1865.71±371.23 879.29***±316.20
에독사반 군 823.73*±277.74 1236.72±301.62 1000.71*±125.46 1623.43±256.35 1174.26*±423.11
라작사반 군 889.42±326.32 1501.29±131.10 1032.26*±312.11 1641.26±242.32 932.86**±252.24
오타믹사반 군 845.54*±236.14 1526.56±212.31 1123.45±224.51 1745.52±356.26 993.21**±235.25
조성물1군 772.86**±373.24 1553.57**±222.81 1895.71***±188.25 2385.71±429.70 682.14***±172.50
조성물2군 784.45**±326.35 1525.65**±241.21 1865.25***±174.32 2377.71±421.24 625.15***±136.23
조성물3군 764.29**±197.51 1545.00**±184.64 1029.29**±295.43 1312.86±205.78 787.14***±276.09
조성물4군 795.52**±352.16 1536.35**±245.26 1885.39***±152.32 2345.36±452.36 680.36***±152.36
조성물5군 774.46**±315.32 1556.32**±225.36 1847.37***±152.35 2365.26±442.35 632.65***±142.52
조성물6군 799.56**±125.36 1577.50**±152.52 105.63**±275.26 1354.68±256.62 756.32***±275.54
조성물7군 756.35**±341.25 1545.29**±241.28 1826.24***±141.62 2345.95±446.35 684.36***±151.62
조성물8군 778.32**±151.62 1568.25**±141.62 1814.63**±275.26 1341.62±248.69 742.95***±274.68
조성물9군 754.65**±248.69 1566.32**±354.36 952.36**±225.37 1558.52±234.58 735.25***±252.36
조성물10군 777.29**±305.26 2221.02***±451.23 784.36***±291.52 1345.62±248.95 797.25***±262.35
조성물11군 746.43**±356.32 3056.24***±612.31 625.36***±202.64 1152.62±325.36 729.31***±245.69
조성물12군 785.62**±355.26 3092.62***±615.62 652.36***±202.64 1152.62±325.36 729.31***±245.69
조성물13군 762.34**±253.36 1545.62**±355.67 958.95**±224.68 1578.96±235.25 738.68±253.64
조성물14군 785.64**±315.64 2258.65***±415.63 749.64***±299.74 1349.95±274.67 785.95***±254.63
조성물15군 795.62**±347.96 3026.92***±641.65 656.38***±215.64 1185.69±347.67 748.91***±246.74
조성물16군 747.29**±362.35 3085.64***±616.42 665.42***±262.34 1195.68±348.75 785.62***±252.75
조성물17군 716.24**±385.46 1516.64**±236.62 1885.95***±156.24 2374.82±452.64 639.75***±152.61
조성물18군 789.52**±162.54 1574.61**±155.26 1065.39**±285.62 1395.64±274.68 774.69***±211.56
조성물19군 767.58**±395.62 1463.27**±249.46 186.95***±145.61 2375.65±445.82 695.61***±174.26
조성물20군 799.52**±152.42 1595.64**±152.61 1814.31**±276.42 1375.26±295.61 767.28***±279.64
조성물21군 766.45**±256.24 1574.52**±336.14 965.29**±252.36 1596.34±248.25 764.25***±265.24
조성물22군 722.25**±325.14 2144.62***±455.45 786.34***±274.52 1364.25±248.36 788.47***±225.25
조성물23군 733.33**±355.66 3052.10***±652.41 644.54**±214.62 1265.84±345.61 796.31***±265.34
조성물24군 735.35**±347.84 3045.85***±645.26 675.64***±216.42 1164.52±326.15 729.57***±256.24
조성물25군 726.35**±246.34 1565.28**±365.28 948.34**±256.24 1568.17±252.36 764.25***±296.31
조성물26군 756.47**±352.34 2262.34***±485.95 757.25***±256.24 1395.45±257.26 764.25***±256.24
조성물27군 764.62**±346.95 3045.28***±665.47 685.25***±254.95 1147.59±346.75 757.29***±229.42
조성물28군 742.34**±332.65 3088.95***±641.25 695.64***±234.26 1167.18±357.96 786.28***±279.64
조성물29군 736.34**±352.95 3074.25***±652.64 684.76***±262.34 1174.95±346.28 775.36***±264.39
조성물30군 716.37**±362.34 2156.72***±464.24 775.62***±248.29 1358.29±229.28 774.29***±252.41
조성물31군 799.58**±356.24 3047.75***±664.62 662.24***±294.78 1246.29±342.54 794.19***±245.28
조성물32군 785.61**±327.26 3056.31***±656.31 648.95***±256.23 1157.98±326.34 775.29***±248.27
조성물33군 765.26**±245.68 1575.94**±346.29 956.28**±246.27 1574.18±265.24 746.29**±274.82
조성물34군 777.18**±342.15 2275.29***±426.34 726.34***±247.29 1374.29±248.96 774.82***±252.34
조성물35군 767.29**±352.61 3074.16***±626.85 664.15***±226.59 1176.29±356.34 769.25***±266.92
조성물36군 783.36**±329.37 3071.25***±662.35 649.62***±236.31 1178.96±348.72 764.25***±216.26
조성물37군 795.62**±334.26 3045.62***±674.29 634.59***±249.25 1148.95±326.72 764.25***±253.92
조성물38군 720.35**±351.75 2264.28***±462.35 741.26***±262.53 1348.96±226.24 756.29***±248.26
조성물39군 732.62**±315.64 3085.64***±615.52 686.42***±274.46 1186.29±341.72 749.75***±246.29
조성물40군 740.29**±352.67 3029.54***±675.29 646.28***±245.28 1148.57±385.25 795.25***±246.28
조성물41군 746.36**±346.52 3075.69***±664.28 686.27***±256.29 1175.26±347.64 787.16***±248.28
주: (1)모델군과 정상 대조군 비교 p>0.05, (2)모델군과 각 약물 투여군 비교 *p<0.05**p<0.01***p<0.001
표 9가 나타내듯이: (1) 약물 투여후 0.5h~4h에 모델군과 정상대조군을 비교시 PAF(혈소판 활성화 인자)함량은 모두 현저한 차이(p＞0.05)를 나타내지 않았다. 이는 모델 만들기 성공을 의미한다. (2) 모델군과 비교하면 약물 투여후 2h, 징코라이드 B군의 PAF함량은 현저하게 낮아지고(P<0.01), 약물 투여후 4h, 리바록사반과 아픽사반 군의 PAF함량이 현저하게 낮아지고(P<0.001), 라작사반과 오타믹사반 군의 PAF함량이 현저히 낮아졌다(P<0.01). (3) 모델군과 비교하면, 약물 투여후 0.5h, 각 조성물 군의 PAF함량은 현저하게 낮아지며(P<0.01), 이는 본 발명의 약물 조성물이 PAF함량을 효과적으로 낮출 수 있고, 또한 징코라이드 B와 사반류가 PAF수용체 저항에 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비함을 설명한다; 약물 투여후 1h, 각 조성물 군의 PAF함량은 극히 현저하게 낮아지며(P<0.001), 현저히 낮아지는 것은(P<0.01) 징코라이드 B와 사반류가 PAF수용체 저항에 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비하고 있음을 설명한다; 약물 투여후 2h, 각 조성물 군의 PAF함량은 극히 현저하게 낮아지며(P<0.001), 현저하게 낮아지는 것(P<0.01)은 징코라이드 B와 아픽사반이 PAF수용체를 저항함에 있어서 협동하여 효과를 증가하는 작용을 구비하고 있음을 설명한다.
표 6~9가 나타내듯이,
징코라이드 B+리바록사반의 조성물 군(조성물 1-8)중, 조성물 1, 5~8군의 aPPT가 비교적 길고 PT가 더 길며, 항 Ⅹa 인자 활성이 더 높으며, PAF함량이 더 낮다. 그중 조성물 1군의 aPPT와 PT가 가장 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높으며, PAF함량이 가장 낮다. 그러므로 징코라이드 B+리바록사반의 조성물중, 징코라이드 B와 리바록사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 5-15몫대 리바록사반 10-20몫이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 리바록사반 15몫이다.
징코라이드 B+아픽사반의 조성물 군(조성물9-16)중, 조성물9, 13~16군의 혈소판 aPPT가 비교적 길고, PT가 더 길며, 항 Ⅹa 인자 활성이 더 높고, PAF함량이 더 낮다. 그중 조성물 9군의 aPPT와 PT가 가장 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높으며, PAF함량이 가장 낮다. 그러므로 징코라이드 B+아픽사반의 조성물에서 징코라이드 B와 아픽사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 5-15몫대 아픽사반 1-10몫이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 아픽사반 5몫이다.
징코라이드 B+에독사반의 조성물 군(조성물 17-24)중, 조성물 17, 22~24군의 aPPT가 비교적 길고, PT가 더 길며, 항 Ⅹa 인자 활성이 더 높으며, PAF 함량이 더 낮다. 그중 조성물 17군의 aPPT와 PT가 가장 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높으며, PAF함량이 가장 낮다. 그러므로 징코라이드 B+에독사반의 조성물에서, 징코라이드 B와 에독사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 5-15몫대 에독사반 10-30몫이고, 가장 바람직하게는 징코라이드 B 10몫대 에독사반 15몫이다.
징코라이드 B+라작사반의 조성물 군(조성물 25-29)중, 조성물 25, 28~29군의 aPPT가 비교적 길고, PT가 더 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 더 높으며, PAF 함량이 더 낮다. 그중 조성물 25군의 aPPT와 PT가 가장 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높으며, PAF함량이 가장 낮다. 그러므로 징코라이드 B+라작사반의 조성물에서 징코라이드 B와 라작사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 5-15몫대 라작사반 5-15 몫이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 라작사반 10몫이다.
징코라이드 B+오타믹사반의 조성물 군(조성물 30-41)중, 조성물 30, 38~41군의 aPPT가 비교적 길고, PT가 더 길며, 항 Ⅹa 인자 활성이 더 높으며, PAF 함량이 더 낮다. 그중 조성물 30군의 aPPT와 PT가 가장 길고, 항 Ⅹa 인자 활성이 가장 높으며, PAF함량이 가장 낮다. 그러므로 징코라이드 B+오타믹사반의 조성물에서, 징코라이드 B와 오타믹사반의 배합비는 바람직하게: 징코라이드 B 8-12몫대 오타믹사반 50-90 몫이고, 가장 바람직하게는: 징코라이드 B 10몫대 오타믹사반 10몫이다.
실험결과가 설명하는 것은: 본 발명은 징코라이드 B와 사반류 활성성분, 예를 들면 리바록사반, 아픽사반, 에독사반, 라작사반, 오타믹사반 등 사반류 약물을 연합 사용하여 aPPT와PT를 현저히 연장하고, 항 Ⅹa 인자 활성을 현저히 증가하며, PAF함량을 현저히 줄인다. 또한 양자의 단독 사용시보다 효과가 우월하여 양자의 조합 사용은 협동하여 효과를 증진하는 작용을 발휘하였다. 징코라이드 B와 사반류 활성성분으로 조성된 조성물은 aPPT가 길고, PT가 길며, 항 Ⅹa 인자 활성이 높고, PAF함량이 낮으며, 부동한 작용 매커니즘을 통하여 혈소판 응집을 막을수 있다.
이상, 본 발명은 징코라이드 B와 사반류 약물을 조합 사용함으로써, 양자는 협동하여 효과를 증진하는 작용을 발휘하였고, 본 발명의 징코라이드 B와 사반류 약물로 조성된 조성물은 혈소판 응집을 효과적으로 억제하고 효과가 우월하며 임상에서의 응용전망이 양호하다.

Claims (10)

  1. 징코라이드 B와 리바록사반을 포함하는 것을 특징으로 하는 항혈소판 응집을 위한 약학적 조성물로서,
    상기 징코라이드 B와 리바록사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B는 1-20 중량부이고, 리바록사반는 5-40 중량부인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 징코라이드 B와 리바록사반의 중량 배합비는: 징코라이드는 B 5-15 중량부이고, 리바록사반는 10-20 중량부인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 징코라이드 B와 리바록사반의 중량 배합비는: 징코라이드 B는 10 중량부이고, 리바록사반는 15 중량 부인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 정맥혈전의 색전증, 고관절 및 무릎관절 치환술 후의 심정맥혈전(DVT) 및 폐혈전(PE), 비판막성 심방세동 환자의 뇌졸중 및 비중추신경계통색전증, 또는 관상동맥증후군을 치료 또는 예방하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  5. 제1항에 의한 상기 약학적 조성물을 제조하는 방법에 있어서,
    S1: 조성분 및 중량비에 따라 원료 징코라이드 B와 리바록사반을 계량하여 취하는 단계; 및
    S2: 원료가 혼합된 후, 약학에서 사용 가능한 보조제를 첨가하여 약학에서 통상적인 약물제제를 제조하는 단계
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물을 제조하는 방법.


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