JP3909008B2 - 角化酵素阻害剤及びそれを含有してなる皮膚外用剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚外用剤に関し、更に詳細には、角質形成抑制用として好適な皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚乃至はその周辺組織の機能を考えるにあたって、角質形成は大きなテーマの一つである。角質は生体の外界からの防御機能を担うと同時に、経皮的処置等に対しては、局所投与された薬物が患部に到達するのを妨げる働きをする。又、毛髪に於いても、角化を促進することは、毛質のしっかりした抜けにくい毛を形成させる為、育毛或いは養毛の観点からも重要であるが、除毛を考えた場合、角化を抑制して行った方が生体に対するダメージが軽減するため好適であると考えられる。即ち、皮膚乃至はその周辺組織の処置に於いて、角質形成、言い換えれば角化をコントロールすることは重要な技術であるといえる。
【０００３】
角化に於いては、角化酵素が重要な役割を担っていることは既に知られたことであり、角化酵素に対する作用としては、この働きを促進する物質として、エストラジオール誘導体類（特開平８−２０５２３）、アロエ、ローズマリー、ニンジン、ショウキョウ、トウキ等の生薬エキス（特開平８−２０５２２）、ピロクトオラミン（特開平８−２０５２１）等が知られているが、その抑制剤については全く知られていない。即ち、角化酵素を抑制する手段の開発が望まれている。
【０００４】
除毛という観点では、エラスターゼ阻害による発毛抑制剤として、N-（カルボキシメチル）フェニルアラニル−β−アラニン（特開２００１−１７２１９７）、マロン酸アミド（特開２０００−３４４６１４）、カルボキシアルキルアミン類（特開２０００−１７８１６３）、ヒドロキサム酸類（特開２０００−１６９３２４）、イチハツ、オノニス、ダイズ、クズ、ニオイイリス、ヒオウギ、ヒトツバエニシダ、ホップなどのエキス類（特開平１１−３２２５４８）、サンジコ、ウコン、シテイ、ビャクシン、トウキシ、オオバクなどの生薬エキス（特開平１０−１３９６３９）、ホコツシ、ゴバイシ、チョジュツシ、ホウフシ、ジオウ、バンコウカ、カッコウ、ソウハクヒ、ニュウコウ、ショウマ、ビャクダン、キッカ、ダイオウ等の生薬エキス（特開平８−８１３３６）等が知られているが、これらの何れも角化酵素との関係は知られていない。
【０００５】
角質軟化或いは溶解という観点では、角質軟化剤又は溶解剤として、発酵乳エキス（特開２００２−２４１２８９）、ベタイン、二硫化炭素などの含硫黄化合物（特開２００２−１３８０３３）、パパイン或いはトリプシン等の変性タンパク類（特開２０００−２７３１８２）等が知られているが、これらの何れも角化酵素との関係は知られていない。
【０００６】
イネ科タケ亜科の植物の皮膚に対する作用としては、チロシナーゼ阻害作用（特開２０００−２４７８６４）、津液促進作用（特開２０００−１０３７１８）、サブスタンスP拮抗作用（特開平１０−１５８１７９）等が知られているが、角化酵素との関係は全く知られていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、皮膚乃至はその周辺組織の処置に於いて、角質形成、言い換えれば角化をコントロールするべく、角化酵素を阻害する手段を提供することを課題とする。
【０００８】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、角化酵素を阻害する手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、イネ科タケ亜科の植物のエキスにその様な作用を見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示す技術に関するものである。
（１）イネ科タケ亜科の植物のエキスからなる角化酵素阻害剤。
（２）イネ科タケ亜科の植物が、モウソウダケ、マダケ、ネマガリダケ、コクチク又はコササクサであることを特徴とする、（１）に記載の角化酵素阻害剤。
（３）エキスが極性溶媒抽出物乃至はその溶媒除去物であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の角化酵素阻害剤。
（４）エキスが葉の抽出物乃至はその溶媒除去物であることを特徴とする、（１）〜（３）何れか１項に記載の角化酵素阻害剤。
（５）（１）〜（４）何れか１項に記載の角化酵素阻害剤を含有する皮膚外用剤。
（６）角質形成抑制用であることを特徴とする、（５）に記載の皮膚外用剤。
（７）用途が除毛の前処置及び／又は後処置用、抗真菌剤の前処置及び／又は後処置用乃至は角化亢進部の処置の前処置及び／又は後処置用であることを特徴とする、（５）又は（６）に記載の皮膚外用剤。
（８）化粧料であることを特徴とする、（５）〜（７）何れか１項に記載の皮膚外用剤。
【０００９】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の角化酵素抑制剤
本発明の角化酵素抑制剤は、イネ科タケ亜科の植物のエキスからなる。かかるイネ科タケ亜科の植物としては、例えば、モウソウダケ、マダケ、ネマガリダケ、コクチク又はコササクサ等の植物が好適に例示でき、これらの中ではコササクサが特に好適に例示できる。ここで、エキスとしては、植物体そのもの、植物体の加工物、植物体乃至は植物体の加工物に溶媒を加えて抽出した抽出物、抽出物より溶媒を除去した抽出物の溶媒除去物、抽出物乃至はその溶媒除去物を分画、精製した精製物等の何れもが使用可能である。かかるエキスの内、抽出物乃至はその溶媒除去物が好ましい。抽出物としては、極性の高い溶剤によって抽出された抽出物の溶剤除去物が特に好ましく例示できる。極性の高い溶剤としては、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類、アセトニトリルなどのニトリル類、１，３−ブタンジオール、エタノール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類、水などが好ましく例示できる。これらの内では、アルコール及び／又は水が特に好ましい。抽出は、植物体に対して１〜１０重量倍の溶剤を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。抽出後は、必要に応じて、減圧濃縮などして溶剤を除去することが好ましい。この様なエキスを作成するのに好適な植物体の部位としては、特段の限定はされないが、葉を用いることが特に好ましい。かくして得られた、エキスは、生体触媒として生体内で様々な化学反応に関与する酵素の一つであり、主として毛髪や皮膚の表皮に広く分布し、ケラチン等の合成に関与して毛髪のキューティクルやコルテックスの生合成、あるいは、皮膚の角層の生合成を促進する働きを有する酵素である角化酵素の活性を抑制する作用を有する。前記角化酵素としては、スルフヒドリルオキシダーゼ（ＳＨオキシダーゼ）、トランスグルタミナーゼ（Ｔグルタミナーゼ）等が存在するが、本発明の角化酵素抑制剤はＳＨオキシダーゼの活性を好適に抑制する。本発明の皮膚外用剤に於いては、本発明の角化抑制剤は唯一種を含有させることも出来るし、二種以上を組み合わせて含有させることも出来る。本発明の皮膚外用剤に於ける、本発明の角化酵素抑制剤の好ましい含有量は、総量で、皮膚外用剤全量に対して、０．０１〜１０重量％であり、更に好ましくは０．１〜５重量％である。これは少なすぎると各酵素の活性抑制作用が発現しない場合があり、多すぎると抑制作用が頭打ちになり、処方の安定性を損なう場合があるからである。
【００１０】
＜製造例１＞
コササクサの葉１Kgに５０％エタノール水溶液５ｌを加え、３時間加熱還流した。冷却した後、濾過により不溶物を除去し、減圧濃縮し、しかる後、凍結乾燥してエキス１（角化酵素抑制剤１）を得た。
【００１１】
＜製造例２＞
製造例１のコササクサをモウソウチクに代えて同様に処理し、エキス２（角化酵素抑制剤２）を得た。
【００１２】
＜製造例３＞
製造例１のコササクサをマダケに代えて同様に処理し、エキス３（角化酵素抑制剤３）を得た。
【００１３】
＜製造例４＞
製造例１のコササクサをネマガリダケに代えて同様に処理して、エキス４（角化酵素抑制剤４）を得た。
【００１４】
＜製造例５＞
製造例１のコササクサをコクチクに代えて同様に処理して、エキス５（角化酵素抑制剤５）を得た。
【００１５】
＜製造例６＞
コササクサの葉１Kgに５００ｍｌの１，３−ブタンジオールを加え、９０℃で３時間加熱し、放冷後濾過により不溶物を除去し、エキス６（角化酵素抑制剤６）を得た。
【００１６】
（２）本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、前記本発明の角化酵素抑制剤を含有することを特徴とする。本発明に於いて、皮膚外用剤とは、皮膚に外用で投与される組成物の総称を意味し、化粧料、皮膚外用医薬、外用消毒剤等を包括した言葉である。本発明の皮膚外用剤として特に好ましい形態は、化粧料である。これは本発明の角化抑制剤の作用が極めて緩和であり、連続投与に好適であるからである。本発明の皮膚外用剤は角化を抑制する目的で使用される。角化を抑制することにより、角化亢進した部位を正常に近い形に戻し、薬物透過性などを改善させることが出来るし、又、除毛処置前に投与し、毛髪のキューティクルやコルテックスの生合成を抑え、毛質を軟らかいものとし、除毛処置を速やかに行わせ、除毛時の生体への負荷を軽減することが出来る。又、除毛処置後投与することにより、続いて生えてくる毛の毛質を軟らかいものにし、次の除毛をより容易に行うことが出来る。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤に於いては、前記必須成分である各酵素抑制剤以外に、通常化粧料などの皮膚外用剤で使用される任意成分を含有することが出来る。かかる任意成分としては、例えば、スクワラン、流動パラフィン、軽質流動イソパラフィン、重質流動イソパラフィン、マイクロクリスタリンワックス、固形パラフィンなどの炭化水素類、ジメチコン、フェメチコン、シクロメチコン、アモジメチコン、ポリエーテル変性シリコーンなどのシリコーン類、ホホバ油、カルナウバワックス、モクロウ、ミツロウ、ゲイロウ、オレイン酸オクチルドデシル、イソプロピルミリステート、ネオペンチルグリコールジイソステアレート、リンゴ酸ジイソステアレートなどのエステル類、ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、イソステアリン酸、イソパルミチン酸、ベヘン酸、オレイン酸などの脂肪酸類、ベヘニルアルコール、セタノール、オレイルアルコール、オクタデシルアルコールなどの高級アルコール類、ヒマシ油、椰子油、水添椰子油、椿油、小麦胚芽油、イソステアリン酸トリグリセライド、イソオクタン酸トリグリセライド、オリーブオイル等のトリグリセライド類、１，３−ブタンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキシレングリコール、イソプレングリコールなどの多価アルコール、ソルビタンセスキオレート、ソルビタンモノオレート、ソルビタントリオレート、ソルビタンセスキステアレート、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシエチレンオレート、ポリオキシエチレングリセリル脂肪酸エステル、ポリエキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤、ソジウムラウリルステアレート、ポリオキシエチレンアルキル硫酸塩、スルホコハク酸エステル塩などのアニオン界面活性剤、４級アルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、アルキルベタイン等の両性界面活性剤類、結晶セルロースや架橋型メチルポリシロキサン、ポリエチレン粉末、アクリル樹脂粉体等の有機粉体類、タルク、マイカ、セリサイト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、二酸化チタン、酸化鉄、紺青、群青、チタンマイカ、チタンセリサイト、シリカ等の表面処理されていても良い粉体類、アクリル酸・メタクリル酸アルキルコポリマー及び／又はその塩、カルボキシビニルポリマー及び／又はその塩、キサンタンガムやヒドロキシプロピルセルロースなどの増粘剤、レチノール、レチノイン酸、トコフェロール、リボフラビン、ピリドキシン、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステル塩などのビタミンやグリチルリチン酸塩、グリチルレチン、ウルソール酸、オレアノール酸などのテルペン類、エストラジオール、エチニルエストラジオール、エストリオールなどのステロイド類などの有効成分、フェノキシエタノール、パラベン類、ヒビテングルコネート、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤、ジメチルアミノ安息香酸エステル類、桂皮酸エステル類、ベンゾフェノン類などの紫外線吸収剤などが好ましく例示できる。本発明の皮膚外用剤はかかる必須成分、任意成分を常法に従って処理することにより製造することが出来る。
【００１８】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限定されないのは言うまでもない。
【００１９】
＜実施例１＞
角化酵素に対する角酵素抑制剤の作用の検討
製造例１〜６のエキス１〜６を用いて、角化酵素抑制作用を調べた。即ち、５匹づつ７群のＣ３Ｈマウス（雄性、体重２５〜３５ｇ）の背部を除毛後、そのうち６群のマウスの除毛皮膚には、上記各製造例で得られた角化酵素抑制促進剤を５重量％含有する７０％エタノール水溶液をそれぞれ、残りの１群のマウスの除毛皮膚には、コントロールとして７０％エタノール水溶液のみを、１匹当たり４０μＬ、１日１回、週５日の割合で２週間投与した。最終投与の６時間後、各群のマウスから上記処理が施された部位の皮膚を採取し、これをそれぞれ９倍量の１ミリモルのＥＤＴＡ含有５０ｍＭリン酸２水素ナトリウム水溶液に加えて、ホモゲナイズした。このホモジネートをそれぞれ２７０００Ｇで遠心分離し、得られた上清を用いて以下の方法で、角化酵素抑制剤投与群及びコントロール群の角化酵素活性値をそれぞれ測定した。
【００２０】
上記で得られた上清０．４ｍＬに２ミリモルのＤＴＴ（ジチオスレイトール）水溶液０．１ｍＬと１ミリモルのＥＤＴＡを含有する５０ミリモルリン酸バッファー（ｐＨ７．６、以下単にバッファーと言う。）０．７ｍＬとを加え検体１とした。また、２ミリモルのＤＴＴ水溶液０．１ｍＬにバッファー１．１ｍＬを加え検体２とした。
【００２１】
検体１を調製後、直ちに０．３ｍＬをサンプリングし、予め０．１７ミリモルのＤＴＮＢ（５，５’−ジチオビス−２−ニトロ安息香酸）を含有するバッファー３ｍＬを加えてあるチューブに移し、４１２ｎｍでの吸光度Ａ１を測定した。また、検体２を同様に処理し、吸光度Ａ２を測定した。
【００２２】
検体１の残りを、３７℃で３０分間インキュベートした後、その０．３ｍＬをサンプリングし、予め０．１７ミリモルのＤＴＮＢを含有するバッファー３ｍＬを加えてあるチューブに移し、４１２ｎｍでの吸光度Ａ３を測定した。また、検体２の残りを、３７℃で３０分間インキュベートした後、同様に処理して吸光度Ａ４を測定した。
【００２３】
この様にして測定された吸光度Ａ１〜Ａ４の値より、以下の式を用いてＡ５を求め、更に、Ａ５とＤＴＮＢのモル吸光計数（１３０００／モル・ｃｍ）を用いて酸化されたＤＴＴ量を求め、これを角化酵素活性値（Ａｃ）とした。
【００２４】
（式）
Ａ５＝Ａ１−Ａ３−（Ａ２−Ａ４）
【００２５】
また、上記で得られた上清について、ヘキスト社製のＤＮＡ量測定試薬ヘキスト３３２５８を用いて、子牛胸線ＤＮＡをスタンダードとして、常法に従って、各上清のＤＮＡ量を測定した。
【００２６】
評価は、上記各実施例の角化酵素抑制剤投与群のそれぞれについて、上記方法で得られた角化酵素活性値（Ａｃ）を上記ＤＮＡ量で除して単位ＤＮＡ量当たりの角化酵素活性値（ＡｃＤ、５匹の平均値）を求め、これを同様にして求めたコントロール群の単位ＤＮＡ量当たりの角化酵素活性値（５匹の平均値）で除しこれに１００を乗じた値（ＡeＤ）を用いて行った。なお、ＡｃＤは、細胞の数当たりの角化酵素活性を表す値である。
【００２８】
更に、上記で得られた上清について、ＰＩＥＲＣＥ社の蛋白アッセイ試薬キットを用いて、ウシ血清アルブミンをスタンダードとして、常法に従って、各上清の蛋白含有量を測定し、上記各角化酵素活性値（Ａｃ）をこれで除して蛋白当たりの角化酵素活性値（ＡｃＰ５匹の平均値）とし、これを同様にして求めたコントロール群の蛋白当たりの角化酵素活性値（５匹の平均値）で除しこれに１００を乗じた値（ＡｅＰ）を求め、ＡｅＤと共に評価に用いた。結果を表１に示す。これより、本発明の角化酵素抑制剤は、角化酵素の一つであるＳＨオキシダーゼの活性抑制作用を有することがわかる。
【００２９】
【表１】

【００３０】
＜実施例２＞
下記に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である化粧料（ローション）を作成した。即ち、処方成分を室温で可溶化し、濾過してローションを得た。同時に角化酵素抑制剤を水に置換した比較例１のローションも同様に作成した。これらを用いて、ピーリングタイプの脱毛剤の前処置を行った。即ち、専門パネラーを用いて、これらのローションで１日１回脱毛予定部位（脛部）を７日間処置し、ピーリングタイプの脱毛剤で脱毛し、その容易さを官能検査により評価した。評価は、スコア５：極めて容易、スコア４：容易、スコア３：容易、スコア２：やや困難、スコア１：困難の基準で、スコア付けを行った。表にスコア値を示す。これより、本発明の皮膚外用剤の前処置を行った群は何れも比較例１投与群よりも色差が小さく、脱毛が容易であったことがわかる。
表２に記載の成分 ０．１重量部
１，２−ヘキシレングリコール ２ 重量部
イソプレングリコール ２ 重量部
グリセリン ２ 重量部
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
フェノキシエタノール ０．５重量部
エタノール ５ 重量部
ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油 ０．１重量部
水 ８６．３重量部
【００３１】
【表２】

【００３２】
＜実施例８＞
以下に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である抗真菌剤の前処置剤を作成した。このものを用いて、モルモットフットパッドモデルでの感染実験を行った。即ち、ハートレー系白色種モルモット１群５匹のフットパッドに、マイクロスポリジウム・メンタグロファイデスの分生子を１０^６個／ｍｌ含有するリン酸緩衝生理食塩水液０．１ｍｌを２４時間クローズドパッチし感染させ、１週間後に治療実験を開始した。治療は１群は本発明の前処置剤で処置した後に後記の抗真菌ローションを塗布した。もう１群は前処置剤の角化酵素抑制剤１を水に置換した比較例２のローションで同様の前処置を行い、抗真菌ローションで治療した。治療は３週間行い、治療終了後フットパッドから皮膚片を採取し、サブロー改変培地に１０個置き、１週間培養し、真菌の生えてきたものを陽性とし、陽性率を求め、群の平均陽性率を算出した。結果を表３に示す。これより、本発明の皮膚外用剤で前処置した群の方が陽性率が低く、薬剤の浸透性が良好であったことがわかる。
（前処置用の皮膚外用剤）
角化酵素抑制剤１ １ 重量部
エタノール ４９ 重量部
ＰＯＰ・ＰＯＥコポリマー ３ 重量部
水 ４７ 重量部
（抗真菌ローション）
テルビナフィン ２ 重量部
エタノール ５０ 重量部
エチルセルロース ２ 重量部
１，３−ブタンジオール ６ 重量部
水 ４０ 重量部
【００３３】
【表３】

【００３４】
【発明の効果】
本発明によれば、皮膚乃至はその周辺組織の処置に於いて、角化酵素を阻害する手段を提供することができる。

Claims (6)

1. イネ科タケ亜科の植物の、スルフヒドリルオキシダーゼ抑制活性を有する抽出物または溶媒除去物を含有することを特徴とする、毛髪柔軟化用の化粧料である皮膚外用剤。
2. イネ科タケ亜科の植物の、スルフヒドリルオキシダーゼ抑制活性を有する抽出物または溶媒除去物を得る植物体の部位が葉であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚外用剤。
3. イネ科タケ亜科の植物が、モウソウダケ、マダケ、ネマガリタケ、コクチク又はコササクサであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の皮膚外用剤。
4. イネ科タケ亜科の植物の、スルフヒドリルオキシダーゼ抑制活性を有する抽出物または溶媒除去物を含有させることを特徴とする、毛髪柔軟化用の化粧料である皮膚外用剤の製造方法。
5. イネ科タケ亜科の植物の、スルフヒドリルオキシダーゼ抑制活性を有する抽出物または溶媒除去物を得る植物体の部位が葉であることを特徴とする、請求項４に記載の製造方法。
6. イネ科タケ亜科の植物が、モウソウダケ、マダケ、ネマガリタケ、コクチク又はコササクサであることを特徴とする、請求項４又は５に記載の製造方法。