JP3810083B2

JP3810083B2 - 成長因子の放出を促進し得る２−アルキルトリプトファン含有ペプチド化合物

Info

Publication number: JP3810083B2
Application number: JP51131596A
Authority: JP
Inventors: ロマノデゲンギ，
Original assignee: アーダナ・バイオサイエンス・リミテツド
Priority date: 1994-09-27
Filing date: 1995-09-13
Publication date: 2006-08-16
Anticipated expiration: 2015-09-13
Also published as: DE69528531D1; DE69528531T2; JPH10506114A; PL319382A1; IL115381A0; HK1001207A1; US5795957A; CA2201122A1; ATE225806T1; EP0783521B8; RU2157378C2; KR100369105B1; EP0783521B1; AU700066B2; CZ291798B6; EP0783521A1; PT783521E; ES2186730T3; IL115381A; CZ91497A3

Description

本発明は、Ｄ−２−アルキルトリプトファンアミノ酸を含有し、成長ホルモン産生細胞から成長ホルモン（ＧＨ）を放出させることができ、経口投与によって活性であるオリゴペプチド化合物に関する。
発明の背景
成長ホルモン（ＧＨ）の放出を誘発する化合物の投与後に哺乳類中のＧＨ水準が増加して、投与後に十分に高いＧＨ水準が得られる場合、成長が加速し、筋肉塊が増加しそして乳汁の産生を向上することができる。さらに、哺乳類中の成長ホルモン水準の増加は、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）のような既知の成長ホルモン放出剤を投与することによって達成することができる。
哺乳類中の成長ホルモン水準の増加はまた、成長ホルモン放出ペプチドの投与によっても得ることができ、それらの幾つかは既に、例えば、米国特許第４，２２３，０１９号明細書、米国特許第４，２３３，０２０号明細書、米国特許第４，２２３，０２１号明細書、米国特許第４，２２４，３１６号明細書、米国特許第４，２２６，８５７号明細書、米国特許第４，２２８，１５５号明細書、米国特許第４，２２８，１５６号明細書、米国特許第４，２２８，１５７号明細書、米国特許第４，２２８，１５８号明細書、米国特許第４，４１０，５１２号明細書、米国特許第４，４１０，５１３号明細書、米国特許第４，４１１，８９０号明細書および米国特許第４，８３９，３４４号明細書に記載された。
それ故、それらが容易にかつ便宜的に産生される条件下で成長ホルモン放出を促進することができ、並びに容易に精製および製剤ができ、そして経口経路によって投与された場合活性である、むしろ簡単で短鎖のポリペプチドが現在望まれている。
さらに研究された成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）の一つは、ＧＨＲＰ−６（Ｃ．Ｙ．Ｂｏｗｅｒｓｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１１４：１５３７（１９８４））として長年知られて、そして式Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂を有するものである。ＧＨＲＰ−６は生体外および生体内で成長ホルモンを放出し、そして動物およびヒト中で経口的で活性である。その分子機構、並びにその類似体ヘプタペプチドの一つであるＧＨＲＰ−１（Ｃｈｅｎｇｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２４：２７９１（１９８９）；Ｍ．Ｓ．Ａｋｍａｎｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３２：１２８６（１９９３））が研究された。天然のＧＨＲＨとは反対に、これらのペプチドは、ＧＨの放出のための種々の受容体を通して、そしてｃＡＭＰから独立し、カルシウム供給の可動化およびプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）依存性経路のような他の細胞内経路を通して作動する種々の機構によって働くことが見出だされた（Ｌ．Ｂｒｅｓｓｏｎ−ＢｅｐｏｌｉｄｉｎａｎｄＬ．Ｄｕｆｙ−Ｂａｒｂｅ，Ｃｅｌｌ．Ｃａｌｃｉｕｍ１５，２４７（１９９４））。
発明の要旨
全く驚くべき方式で、ＧＨＲＰ系統群のオリゴペプチド中にＤ−２−アルキルトリプトファン（２−Ｍｒｐ）を導入することによって、ＧＨ放出の既知の細胞内機構が改良されることが今回見出された。幾つかの場合には、マウス起源およびヒト起源の下垂体前葉腺中のアデニルシクラーゼ活性が実質的に増加することが証明されたが、この具体的な機構はまだ完全に解明されるべきものが残されている。
従って、トリプロファンの２−位置（そのＤ−配置で）の単独のアルキル基による改造は、好適にはＴｒｐ残基の安定性を向上させることの外に（Ｒ．Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉ、国際公開第９１／１８０１６号明細書、１９９１年１１月２８日公開、およびＲ．Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉｅｔａｌ．，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，５４，１３２１（１９９４））、カルシウムから独立していて、時にはアデニルシクラーゼに依存性であり、ＧＨＲＨ並びに他のペプチドホルモンにさらに類似している細胞内機構の全く予想されない変化をもたらす。（ＪａｍｅｓＤ．Ｗａｔｓｏｎｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＧｅｎｅ，第４版，ＴｈｅＢｅｎｊａｍｉｎ／ＣｕｍｍｉｎｇＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，１９８７，第６０頁）。
本発明のもう一つの予想しない特徴的な性質は、幾つかのペンタ−、ヘキサ−およびヘプタペプチドの効力が極めて高いこと、および系統群のより小さいテトラペプチドの経口活性／効力比率が好適であることである。
本発明のオリゴペプチドは、以下の式：
Ａ−Ｄ−Ｍｒｐ−（Ａｌａ）_n−Ｂ−Ｃ
（式中、Ａはいずれかの天然Ｌ−アミノ酸またはそのＤ−異性体であるが、但しＢがＴｒｐでありそしてＣがＤ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂である場合ＡはＨｉｓでないことを条件とするか；あるいはＡはイミダゾールアセチル、イソニペコチル、４−アミノブチリル、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボニル、Ｇｌｕ−Ｔｒｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ、Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｈｉｓ、Ｔｙｒ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓであり；Ｄは右旋性異性体を表し、Ｍｒｐは２−アルキルトリプトファンであり；ｎは０または１であり；ＢはＬ−またはＤ−Ｔｒｐ、ＰｈｅまたはＤ−β−Ｎａｌであり；ＣはＮＨ₂、Ｄ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＴｈｒＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｄ−ＴｈｒＮＨ₂であるか、或いは、式中、ＲはＣ₁−Ｃ₃アルキル基であり、さらに好適には、ＢがＴｒｐである場合、ＣはＰｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂またはＤ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂であり、そしてＢがＰｈｅである場合、ＣはＤ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂である）
を有する。
発明の詳細な説明
本発明は、動物の血液中の成長ホルモン水準の放出および増加を促進する種々の短鎖のポリペプチドは、それらのすべてがペプチド鎖中に２−アルキルトリプトファン（Ｓ−２−Ｍｅ−ＴｒｐまたはＭｒｐ）のＤ−異性体を含んでなることを特徴とするという発見にある。
本発明の範囲内に包含されるポリペプチドは、以下の式
Ａ−Ｄ−Ｍｒｐ−（Ａｌａ）_n−Ｂ−Ｃ
（式中、Ａはいずれかの天然Ｌ−アミノ酸またはそのＤ−異性体であるが、但しＢがＴｒｐでありそしてＣがＤ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂である場合ＡはＨｉｓでないことを条件とするか；あるいはＡはイミダゾールアセチル、イソニペコチル、４−アミノブチリル、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボニル、Ｇｌｕ−Ｔｒｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ、Ｔｒｙ−Ａｌａ−Ｈｉｓ、Ｔｙｒ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓでありそしてより好ましくは、ＡはＤ−Ａｌａ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｔｙｒであり；Ｄは右旋性異性体を表し、Ｍｒｐは２−アルキルトリプトファン、好ましくは２−メチルトリプロファンであり；ｎは０または１であり；ＢはＬ−もしくはＤ−ＴｒｐまたはＤ−β−Ｎａｌであり；ＣはＮＨ₂、−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｄ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＴｈｒＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＴｈｒＮＨ₂、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｄ−ＴｈｒＮＨ₂であるか、或いはＯＲ（ここで、ＲはＣ₁−Ｃ₃アルキル基である）であり、より好ましくは、ＢがＴｒｙであるとき、ＣはＰｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂またはＤ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂であり、そしてＢがＰｈｅであるとき、ＣはＤ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂である、で示されるポリペプチド、並びに前記ポリペプチドのいずれか一つと製薬学的に許容される有機または無機酸との付加塩によって特定される。
本明細書中で使用されるアミノ酸の残基の略語はペプチドの標準命名法と一致する：
Ｇｌｙ＝グリシン
Ｔｙｒ＝Ｌ−チロシン
Ｉｌｅ＝Ｌ−イソロイシン
Ｇｌｕ＝Ｌ−グルタミン酸
Ｔｈｒ＝Ｌ−スレオニン
Ｐｈｅ＝Ｌ−フェニルアラニン
Ａｌａ＝Ｌ−アラニン
Ｌｙｓ＝Ｌ−リジン
Ａｓｐ＝Ｌ−アスパラギン酸
Ｃｙｓ＝Ｌ−システイン
Ａｒｇ＝Ｌ−アルギニン
Ｇｌｎ＝Ｌ−グルタミン
Ｐｒｏ＝Ｌ−プロリン
Ｌｅｕ＝Ｌ−ロイシン
Ｍｅｔ＝Ｌ−メチオニン
Ｓｅｒ＝Ｌ−セリン
Ａｓｎ＝Ｌ−アスパラギン
Ｈｉｓ＝Ｌ−ヒスチジン
Ｔｒｐ＝Ｌ−トリプトファン
Ｖａｌ＝Ｌ−バリン
さらに、
Ｄ−β−Ｎａｌ＝Ｄ−β−ナフチルアラニン；
ＩＮＩＰ＝イソニペコチル；
ＩＭＡ＝イミダゾールアセチル；
ＧＡＢ＝４−アミノブチリル；
Ｍｒｐ＝２−アルキルトリプトファン。
本発明によれば、アルキルについては、１〜３個の炭素原子を含んでなる低級アルキルが意図されている。低級アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルである。これら中、メチル基が最も好適である。
前に「Ｄ」が付いられた３文字略語のアミノ酸のすべては、Ｄ−配置のアミノ酸残基を示す。
本発明の態様において好適な成長ホルモン放出化合物は：
ＩＮＩＰ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＩＮＩＰ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＩＭＡ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＩＭＡ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−ＮＨ₂；
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−ＯＣ₂Ｈ₅；
４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボニル−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボニル−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂
Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−ＴｒｐＮＨ₂；
Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−ＴｒｐＮＨ₂；
（式中、Ｍｒｐは２−メチルトリプトファンであり、ＩＮＩＰ、ＩＭＡおよびＧＡＢは上記の通りである）
並びに前記ポリペプチドのいずれか一つと製薬学的に許容される有機または無機酸との付加塩である。
これらの化合物は、非経口的に投与され得るが、さらに都合よくは鼻腔内におよび経口的に投与されるか、または生物分解性マイクロカプセル、マイクロスフェアー、皮下移植片などのような制御された放出系に調剤することができる。
本発明によるポリペプチド化合物は、固相法および溶相法の両方のペプチド化学に常法に従ってか、または当該技術分野で知られている典型的な方法によって合成することができる。固相合成法はペプチドのＣ−末端から開始される。適切な出発材料は、例えば、所要の保護α−アミノ酸を、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル化樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）、またはｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ−ＢＨＡ）に結合させて製造することができる。例として、クロロメチル化樹脂は、商標ＢＩＯＢＥＡＤＳ（商標）ＳＸ−１の名称で、ＢｉＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから販売されている。ヒドロキシメチル樹脂の製造は、Ｂｏｄａｎｓｋｙｅｔａｌ．，Ｃｈｅｍ，Ｉｎｄ．（Ｌｏｎｄｏｎ）３８，１５９９７（１９６６）に記載されている。ＢＨＡ樹脂は、ＰｉｅｔｔａａｎｄＭａｒｓｈａｌｌ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，６５０（１９７０）に記載され、ＰｅｎｉｎｓｕｌａＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＩｎｃ．，Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから市販されている。
出発の結合の後、α−アミノ酸の保護基は、有機溶媒中に溶解させたトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）または塩酸（ＨＣｌ）を含む種々の酸試薬によって、室温で除去することができる。α−アミノ酸の保護基の除去の後、残余の保護アミノ酸を所望の順序で逐次結合させることができる。各保護アミノ酸は一般的に、例えば、塩化メチレン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびそれらの混合物中に溶解させたジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のような適切なカルボキシル活性化基を使用して、約３回以上反応させることができる。所望のアミノ酸配列が完結した後、所望のペプチドを支持樹脂から、フッ化水素（ＨＦ）のような試薬により処理によって開裂させることができ、フッ化水素は樹脂からペプチドを開裂させるだけではなく、側鎖のさらに一般的な保護基も開裂させる。クロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル化樹脂を使用する場合、ＨＦによる処理によって、遊離の形態の酸ペプチドが生成する。ＢＨＡまたはｐ−Ｍｅ−ＢＨＡ樹脂を使用する場合、ＨＦの処理によって直接に、遊離の形態のアミドペプチドが生成する。
上記の固相法は当該技術分野で既知であり、ＡｔｈｅｒｔｏｎａｎｄＳｈｅｐｐａｒｄ、固相ペプチド合成法（ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）（ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９）に記載されている。
本発明のペプチド部分を合成するのに使用することができる溶液中での幾つかの方法は、Ｂｏｄａｎｓｋｙｅｔａｌ．、ペプチド合成（ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）、第２版、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９７６並びにＪｏｎｅｓ、ペプチドの化学合成（ＴｈｅＣｈｅｍｉｃａｌＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅｓ）（ＣｌａｒｅｎｄｏｎＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９９４）に詳細に記載されている。
これらの化合物は、動物またはヒトに、当該分野の熟練者によって容易に決定されそして処理を受ける被験体の種、年令、性別および体重によって変化することができる有効用量で投与することができる。例えば、ヒトについて、静脈投与される場合、好適な用量は、体重のｋｇ当たり約０．１μｇ〜１０μｇの全ペプチドの範囲内にある。経口投与される場合、通常さらに高い量が必要である。例えば、ヒトについて、経口投与の場合、用量水準は通常は体重のｋｇ当たり約３０μｇ〜約１０００μｇのポリペプチドである。正確な水準は、上記の開示に基いて経験的に容易に決定することができる。
活性成分として、上記のポリペプチドの有機および無機付加塩並びにそれらの組合せを、場合により賦形剤、希釈剤、マトリックスまたは遅放性コーティングと混合して含んでなる組成物もまた本発明の範囲内に包含される。皮下移植片に適する、生物分解性マトリックスを含んでなる遅放性剤形は特に興味を起こさせる。これらのマトリックスの例は国際公開第９２２２６００号明細書および国際公開第９５１２６２９号明細書に記載されている。
生物学的活性
これらの化合物の生体内活性は、Ｒ．Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉｅｔａｌ．，ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，５４，１３２１（１９９４）に詳細に記載されたことに従って、用量−応答研究で３００μｇ／ｋｇの用量または種々の用量を皮下注射（ｓ．ｃ．）された１０日−ラットで、決定された。結果を以下の表に要約する。放出されたＧＨは処理から１５分後に測定した。
ＧＨＲＰ−２（標準試料）は構造Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂を有する（ＣｈｅｎａｎｄＣｌａｒｋｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄ．，７，１７９（１９９５））。

体重１５０ｇのラットからの下垂体前葉腺細胞中のアデニルシクラーゼについて生体外活性が測定され、そしてペプチドＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂の場合のＥＣ₅₀＝０．２３ｎｍの基線と比較して、３０％の増加を示し、一方ＧＨＲＰ−６（Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂）は不活性であった。
以下の実施例によってさらに本発明について説明する。
実施例１
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ ₂ （Ｍｒｐ＝２−メチルトリプトファン）の合成
合成は、Ｅ．ＡｔｈｅｒｔｏｎａｎｄＲ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，「固相ペプチド合成法」（“Ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”），ＩＲＬｐｒｅｓｓａｔＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｐｒｅｓｓ，１９８９年に例示されているように、当業者が利用できる数種の方法の一つに従って、樹脂の製造、反応カラム中への集成を含む、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）−アミノ酸を用いる固相法によって行った。保護されたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−Ｏｐｆｐ（Ｏｐｆｐ＝ペンタフルオロフェニルエステル）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｏｐｆｐ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｏｐｆｐ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−２−ＭｅＴｒｐ−ＯｐｆｐおよびＦｍｏｃ−ＧＡＢ−Ｏｐｆｐ（ＧＡＢ＝γ−アミノブチリック）である。別法として、Ｃａｓｔｒｏ試薬、ＢＯＰおよびＰｙＢＯＰ（ＬｅＮｇｕｙｅｎａｎｄＣａｔｒｏ（１９８８）、ペプチド化学（ＰｅｐｔｉｄｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第２３１−２３８頁、１９８７年、ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｓａｋａ；およびＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，３１，２０５（１９９０）参照）も、直接結合試薬として有利に使用することができる。
開裂と単離の後、表題のペプチドを酢酸塩として精製した。純度（ＨＰＬＣ）：９８％、ＭＷ（Ｍ＋Ｈ⁺）＝７６４．３（理論値＝７６３．９）。
実施例２
実施例１に記載の操作法に従って、以下のペプチドを製造し、酢酸塩として収得した。
ＩＮＩＰ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；純度（ＨＰＬＣ）＝９９．０％、ＭＷ（Ｍ＋Ｈ⁺＝７９０．４；理論値＝７９０．０）
ＩＮＩＰ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；純度（ＨＰＬＣ）＝９６．５％、ＭＷ（Ｍ＋Ｈ⁺＝８０１．４；理論値＝８０１．０）
ＩＭＡ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；純度（ＨＰＬＣ）＝９９．２％、ＭＷ（Ｍ＋Ｈ⁺＝７８６．５；理論値＝７８６．８）
ＩＭＡ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；純度（ＨＰＬＣ）＝９７．３％、ＭＷ（Ｍ＋Ｈ⁺＝７９８．３；理論値＝７９７．９）
ＧＡＢ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
４−（アミノメチル）シクロヘキシルカルボニル−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−Ｔ−ｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボニル−Ｄ−Ｍｒｐ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂；
Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｄ−Ｔｈｅ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｔｙｒ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＮＨ₂；
Ｈｉｓ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−ＴｒｐＮＨ₂；
Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−ＴｒｐＮＨ₂；
式中、Ｍｒｐは２−メチルトリプトファンであり、ＩＮＩＰ、ＩＭＡおよびＧＡＢは上記の通りである。

Claims

式
Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ｍｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ ₂
（上式中、Ｄは右旋性異性体を表し、Ｍｒｐは２−メチルトリプトファン、２−エチルトリプトファン、２−プロピルトリプトファンおよび２−イソプロピルトリプトファンからなる群より選ばれるアミノ酸誘導体の残基を表す。）
で示されるペプチドまたはその薬学的に許容される有機酸もしくは無機酸の付加塩。
Ｍｒｐが２−メチルトリプトファンの残基である請求項１記載のペプチド。
動物中の成長ホルモンの放出を促進するのに有用な薬剤の製造のための請求項１または２に記載のペプチドの使用。
アデニルシクラーゼの細胞内活性の増強を促進するのに有用な薬剤の製造のための請求項１または２に記載のペプチドの使用。
請求項１または２に記載のペプチドを有効成分とする成長ホルモンの放出を促進するための医薬製剤。
請求項１または２に記載のペプチドを有効成分とするアデニルシクラーゼの細胞内活性の増強を促進するための医薬製剤。
非経口的、鼻腔内的、経口的、除法性投与、皮下移植のための組成物の形態の請求項５または６に記載の医薬製剤。