JP3570674B2 - リウマチ関節炎好発モデル動物 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物や、これを用いたリウマチ関節炎に対する発症促進物質若しくは発症抑制物質又は症像促進物質若しくは症像抑制物質のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
免疫グロブリン（Ｉｇ）は、魚類から哺乳類に至る全ての脊椎動物の体液中に存在し、リンパ系細胞によって産生され、物理化学的性質や免疫学的性質によって５つのクラス、すなわちＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEに分類され、分子の基本構造は各クラス共通で、分子量５〜７万のＨ鎖と分子量２．３万のＬ鎖とから構成され、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇEに対応してγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれる構造のＨ鎖を有することが知られている。このＩｇ分子をパパインで分解して得られるヒンジ部からＣ末端までのＨ鎖２本がＳ−Ｓ結合で結ばれているものはＦｃフラグメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細胞表面上の受容体はＦｃレセプター（以下「ＦｃＲ」という）と呼ばれている。また、Ｉｇと同様の構造を持つ分子（免疫グロブリンスーパーファミリー）には、Ｆｃレセプター、Ｔリンパ球上の抗原に対する受容体分子、主要組織適合性抗原、β2ミクログロブリン、癌胎児性抗原及びリンパ球の細胞膜蛋白質等が知られている。
【０００３】
上記ＦｃＲは、免疫系などの細胞の表面上に存在し、その中でも体液中のＩｇＧのγ鎖に特異的に結合する受容体蛋白質であるＦｃγレセプター（以下「ＦｃγＲ」という）は遺伝子構造の類似性に基づいてタイプＩ（ＣＤ６４抗原）、II型（ＣＤ３２抗原）、II型I（ＣＤ１６抗原）の３種に大きく分類されている。これらのうち、ＦｃγＲIIは、他のＦｃＲとは異なりモノマーのＩｇＧに対して低親和性であり、免疫複合体となった多価ＩｇＧと結合し、単球、マクロファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リンパ球を含む造血幹細胞に広く発現する。また、ＦｃγＲIIには遺伝子配列が異なるＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ及びＦｃγＲIIＣの３種類の受容体が存在しており、いずれも染色体の１ｑ２３に位置していることが知られている。
【０００４】
上記ＦｃγＲIIＢは、他のＦｃＲとは異なり、γ鎖と会合することなく、しかも細胞内領域に抑制性シグナルを伝達するアミノ酸配列（ＩＴＩＭ：Immunoreceptor Tyrosine-based Inhibition Motif）を有している（Immunol. Rev. 125, 49-76, 1992、Science 256, 1808-1812, 1992）。このようなＦｃγＲIIＢの生理的機能を解明するために、本発明者らはＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを既に作出し（Nature 379, 346-349, 1996）、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウスをII型コラーゲンで免疫することによって関節炎モデルマウス（J. Exp. Med. 189,187-194, 1999）を作製しているが、関節炎症像はＤＢＡ／１Ｊマウスのものと同様であり、それほど有用なものではなかった。
【０００５】
他方、ヒトの慢性関節リウマチや炎症の動物モデルとして、コラーゲン関節炎（collagen-induced arthritis：ＣＩＡ）や、アジュバント関節炎が知られている。ＣＩＡは、慢性関節リウマチ患者の血清や関節滑液中にII型コラーゲンに対する抗体がかなりの頻度で存在するとの知見に基づいてラットをII型コラーゲンで感作することにより誘導された関節炎であり、アジュバント関節炎と比較して、皮膚粘膜症状がないこと、マウスやラットの他サルでも誘導可能なこと、寛容憎悪傾向を示すことがあることなど、より慢性関節リウマチに近い動物モデルとして知られている。また、ＣＩＡの発症には、用いる動物の系統の有するＭＨＣハプロタイプと相関性があり、マウスではＨ−２ｑ（ＤＢＡ／１Ｊマウス）、Ｈ−２ｒ（ＲIIIＳ／Ｊマウス）及びＨ−２ｄ（ＢＡＬＢ／ｃマウス）ハプロタイプを有するマウスに発症率が高く、Ｈ−２ｑのＤＢＡ／１Ｊマウスがよく使われ、ラットでもＬｅｗｉｓ，Ｗｉｓｔｅｒ，ＢＢ／ＤＲなどがよく使用されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
ＣＩＡは遺伝的背景が明らかなマウスにおいてその解析が進み、前記のように、ハプロタイプをもつＨ−２ｑ（ＤＢＡ／１Ｊマウス）、Ｈ−２ｒ（ＲIIIＳ／Ｊマウス）及びＨ−２ｄ（ＢＡＬＢ／ｃマウス）のマウスは疾患モデルマウスとして関節炎を誘導することができるが、発症率は１００％ではなく、また関節炎の程度も最高値に達しないという問題点があった。本発明の課題は、従来のＣＩＡモデル動物に比べて、よりよいリウマチ関節炎モデル動物、すなわちリウマチ関節炎の程度が最高値に達し、かつ発症率が１００％であるリウマチ関節炎好発モデル動物や、これを用いたリウマチ関節炎症の治療薬等のスクリーニング方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、一般的にコラーゲン関節炎（ＣＩＡ）が発症しないとされているハプロタイプＨ−２ｂのＦｃγＲIIＢ欠損マウスにおいてウシ関節由来II型コラーゲン（Ｃ−II）を免疫することでＣＩＡを誘導できることを報告している（J. Exp. Med. 189, 187-194, 1999）。このＦｃγＲIIＢ欠損マウスでは抗II型コラーゲン抗体価が高く、その関節炎症像は野生型のＤＢＡ／１Ｊマウスのものと同様であった。自己免疫疾患であるＣＩＡの発症はＭＨＣハプロタイプに拘束されていることから、ＦｃγＲIIＢの欠損によりかかる拘束の解除が起こるとの知見が得られた。そこで、ＤＢＡ／１Ｊマウスに８世代、２年半をかけて戻し交配し、得られたＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウスが発症するＣＩＡは、ＤＢＡ／１Ｊマウスよりも早期に関節炎を発症し、かつ症状が増悪することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物と該齧歯類動物と同種の野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物とを戻し交配することにより得られ、II型コラーゲンで免疫するとコラーゲン関節炎を発症することを特徴とするリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項１）に関する。
【０００９】
また本発明は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物がリウマチ関節炎好発モデルマウス又はリウマチ関節炎好発モデルラットであることを特徴とする請求項１記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項２）や、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したマウスと野生型ＤＢＡ／１Ｊマウスとを戻し交配することを特徴とする請求項２記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項３）や、戻し交配を６回以上行うことを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項４）や、II型コラーゲンが、ウシ関節由来II型コラーゲンであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項５）に関する。
【００１０】
さらに本発明は、請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫の前後若しくは免疫と同時に、又は免疫後リウマチ関節炎の未発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法（請求項６）や、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項６記載のリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法（請求項７）や、請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫後リウマチ関節炎の発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法（請求項８）や、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項８記載のリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法（請求項９）に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明において、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ（ＦｃγIIＢ）遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物とは、ＦｃγＲIIＢをコードする齧歯類動物の内在性遺伝子が破壊・欠損・置換等の遺伝子変異により不活性化され、ＦｃγＲIIＢを発現する機能を失なったマウス、ラット等の齧歯類動物をいう。また、本発明において、かかる齧歯類動物と同種の野生型コラーゲン関節炎（ＣＩＡ）発症性齧歯類動物とは、ＣＩＡを発症するＭＨＣハプロタイプを有するマウス、ラット等の齧歯類動物であり、マウスではＤＢＡ／１ＪマウスやＲIIIＳ／ＪマウスやＢＡＬＢ／ｃマウス等を、ラットではＬｅｗｉｓラットやＷｉｓｔｅｒラットやＢＢ／ＤＲラット等を具体的に例示することができ、特にＤＢＡ／１Ｊマウス系統を用いることはかかるマウスがコラーゲン関節炎を高率で発症するマウスであり、このマウス系統に戻し交配することで更に発症率を高めることができる点で好ましい。そしまた、本発明において、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物とは、II型コラーゲンを用いて免疫した場合に、上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物と比較して、少なくともＣＩＡの発症率が高く、また発症憎悪の程度が大きいマウス、ラット等の齧歯類動物をいう。以下、ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物の作製方法を以下にＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを例に挙げて説明する。
【００１２】
ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したマウス、すなわちＦｃγＲIIＢノックアウトマウスは、本発明者らの前掲の文献（Nature 379, 346-349, 1996）に記載する方法等によって作製することができる。具体的には、マウス遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた遺伝子断片を用いて、ＦｃγＲIIＢ遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされたＦｃγＲIIＢ遺伝子を、ウイルスベクター等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングにより特定する。このクローンのＳ2エキソン及びＥＣ1エキソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット等に置換することによって、ターゲットベクターを調製する。この線状化されたベクターをエレクトロポレーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中から、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェクションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウスとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせることによって、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを得ることができる。
【００１３】
本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物は、上記ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物を、該齧歯類動物と同種の前記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを常法により戻し交配することによって得ることができる。コンジェニック系統（ＤＢＡ／１Ｊ系統）とする場合には、通常１２世代以上の戻し交配を必要とするが、本発明における戻し交配においては、複数回、特に６回以上行うことがＣＩＡの発症率や発症憎悪の程度の点で好ましく、さらに均一な実験結果を得られる点で８回以上の戻し交配をすることがより好ましい。複数回の戻し交配は、ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物と該齧歯類動物（例えば、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウス）と同種の前記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物（例えば、ＤＢＡ／１Ｊマウス）との雑種第１代（Ｆ1）と、上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを交配し、次いで得られた雑種第２代（Ｆ2）と上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを再び交配し、以下かかる交配を繰り返していくことにより行うことができ、本発明において例えば６回の戻し交配を行うとは、雑種第６代（Ｆ6）同士を交配して得られるＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物をいう。
【００１４】
本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物は、II型コラーゲンを用いて公知の方法で免疫することによりＣＩＡを発症するが、野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物と比較した場合、ＣＩＡの発症率が高く、また発症憎悪の程度が大きいものが好ましい。また、本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物にＣＩＡを発症させるために用いられるII型コラーゲンとしては特に限定されるものでなく、ウシ関節由来II型コラーゲン、ニワトリ関節由来II型コラーゲン、ヒト血清由来II型コラーゲン、ヒト関節滑液由来II型コラーゲン等の市販のII型コラーゲンを用いることができるが、リウマチ関節炎好発モデルマウスの場合、ウシ関節由来II型コラーゲンを用いることが好ましい。また、本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物にＣＩＡを誘導することができるものであれば、II型コラーゲンのアミノ酸配列の一部を含むペプチドやアミノ酸配列の一部が変異したものなども免疫源として使用することができる。
【００１５】
本発明のリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫の前後若しくは免疫と同時に、又は免疫後リウマチ関節炎の未発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価することを特徴とし、また、本発明のリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫後リウマチ関節炎の発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価することを特徴とする。
【００１６】
上記スクリーニング方法における被検物質を投与する方法としては、経口投与、静脈注射、筋肉注射等の公知の投与方法であれば特に制限されるものではない。また、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価する方法としては、指関節の腫脹等の発生日、発生率、発生の程度等、公知のリウマチ関節炎の評価方法を用いることができ、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価する方法としては、発症した指関節の腫脹等の症状改善の程度を観察することにより行うことができる。そして、これらの評価に際しては、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物や野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことが好ましい。
【００１７】
そして、これらスクリーニング方法により得られるリウマチ関節炎発症促進物質やリウマチ関節炎症像促進物質は、ＣＩＡ発症の機構を解明する上で有用であり、また、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質は、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質を必要としている患者を治療するのに用いられる治療薬、すなわち慢性リウマチ関節炎の予防及び又は症状改善剤として有用である。さらに、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質は、リウマチ関節炎の外科的治療に用いることができる可能性がある。
【００１８】
【実施例】
以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれら実施例により限定されるものではない。
参考例（ＦｃγＲIIＢ欠損マウスの作製）
１２９／Ｓｖ／Ｊ（Ｈ−２ｂ）マウスのゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、ＦｃγＲIIＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクローンを単離した。このクローンのＳ2及びＥＣ1の２つの独立したエキソンを含む２．６５ＫｂのフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換することによってターゲットベクターを作製した。この線状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥＳ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
【００１９】
上記の相同的組換えを起こしたＥＳ細胞からＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ（ガンシクロビア）に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンをスクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組換え体を同定した。その同定された相同的組換え体からゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄIIIでダイジェストし、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティングされた対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェクションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウスを野生型のＣ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）マウスとインタークロスさせることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホモ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせて、ＦｃγＲIIＢ遺伝子が染色体上で欠損した欠損マウスを作製した。
【００２０】
実施例１（リウマチ関節炎好発モデルマウスの作製）
参考例１により得られたＦｃγIIＢ欠損雄マウスをＨ−２ｑのＤＢＡ／１Ｊ雌マウスとを交配させて、産まれてきたハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｆ1）とＤＢＡ／１Ｊマウスとを再び交配させて、産まれてきたハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｆ2）とＤＢＡ／１Ｊマウスとを再び交配させ、以下同様に交配を８回繰り返し、得られた８回戻し交配マウス（ハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス）同士を交配して、ハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ-/-（欠損）ＤＢＡ／１Ｊマウスを作製した。
【００２１】
実施例２（アジュバンドの作製）
０．０２ＭのＨＣｌ溶液に０．１５ＭのＮａＯＨ溶液を加えた溶液（ｐＨ８．０）に、牛関節から調製したII型コラーゲン（コラーゲン技術株式会社）を最終濃度で４．０ｍｇ／ｍｌになるように溶解し、II型コラーゲン溶液を作製した。このII型コラーゲン４．０ｍｇ／ｍｌと、流動パラフィン、界面活性剤及び結核死菌からなる完全フロイントアジュバンド（ＣＦＡ）４．０ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、またII型コラーゲン（ｐＨ８．０）４．０ｍｇ／ｍｌと、流動パラフィンと界面活性剤とからなる不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）４．０ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、２種類のオイルエマルジョンを作製した。
【００２２】
実施例３（リウマチ関節炎好発モデルマウスを用いたＣＩＡの発症）
上記実施例１記載の方法により作製したＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウス（８週齢：雌雄差なし）をエーテルで麻酔し尾根部を剃毛し、II型コラーゲンとＣＦＡとをそれぞれ２００μｇ含むエマルジョン１００μｌをマウスの皮内に注射して一次免疫を行い、その一次免疫後、２１日目と４２日目にII型コラーゲンとＩＦＡとをそれぞれ２００μｇ含むエマルジョン１００μｌを皮内に注射し免疫し、リウマチ関節炎好発モデルマウスにＣＩＡを発症させ、リウマチ関節炎の評価を以下のように行った。
【００２３】
実施例４（関節炎の発症率と関節炎スコア）
ＣＩＡ発症マウスの関節炎の評価を１肢につき、症状なし：０点、指関節が１本のみ腫脹：１点、２本以上の指関節：２点、関節全体の腫脹：３点と点数化し、計１２点満点で採点した。また、コントロールとしてＤＢＡ／１Ｊマウスを用いた。図１に示すように、コントロールのＤＢＡ／１Ｊマウス（●：ｎ＝５）では、初回免疫で関節炎の発症率は４０％で、発症日２３．３±４．６日であった。また、関節炎スコアは３回免疫後でも平均８．５点で最高値に達しなかった。一方、ＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウス（□：ｎ＝１２）では初回免疫のみで全例関節炎を発症し、発症日も１７．１±１．９日と早く、２回目の免疫後には関節炎スコアは全例満点の１２点となった。以上のことから、ＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウスは、これまでＣＩＡ（collagen-induced arthritis）において一般的に用いられてきたＤＢＡ／１Ｊマウスと比較して、発症率及び関節炎スコアの高い、効率の良い関節炎モデルマウスであることがわかった。
【００２４】
【発明の効果】
本発明によると、II型コラーゲンで免疫すると、リウマチ関節炎の程度が最高値に達しかつ発症率が１００％であるリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物を得ることができる。したがって、かかる本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物を用いることによって、従来のリウマチ関節炎好発モデルマウスやラットにおける場合よりも、一層効率的にリウマチ特効薬の開発や治療法の開発を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のリウマチ関節炎好発モデルマウスとＤＢＡ／１Ｊマウスにおける関節炎の発症率の結果を示す図である。
【図２】本発明のリウマチ関節炎好発モデルマウスと従来のＤＢＡ／１Ｊマウスにおける関節炎スコアの結果を示す図である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物や、これを用いたリウマチ関節炎に対する発症促進物質若しくは発症抑制物質又は症像促進物質若しくは症像抑制物質のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
免疫グロブリン（Ｉｇ）は、魚類から哺乳類に至る全ての脊椎動物の体液中に存在し、リンパ系細胞によって産生され、物理化学的性質や免疫学的性質によって５つのクラス、すなわちＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇEに分類され、分子の基本構造は各クラス共通で、分子量５〜７万のＨ鎖と分子量２．３万のＬ鎖とから構成され、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ，ＩｇEに対応してγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれる構造のＨ鎖を有することが知られている。このＩｇ分子をパパインで分解して得られるヒンジ部からＣ末端までのＨ鎖２本がＳ−Ｓ結合で結ばれているものはＦｃフラグメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細胞表面上の受容体はＦｃレセプター（以下「ＦｃＲ」という）と呼ばれている。また、Ｉｇと同様の構造を持つ分子（免疫グロブリンスーパーファミリー）には、Ｆｃレセプター、Ｔリンパ球上の抗原に対する受容体分子、主要組織適合性抗原、β2ミクログロブリン、癌胎児性抗原及びリンパ球の細胞膜蛋白質等が知られている。
【０００３】
上記ＦｃＲは、免疫系などの細胞の表面上に存在し、その中でも体液中のＩｇＧのγ鎖に特異的に結合する受容体蛋白質であるＦｃγレセプター（以下「ＦｃγＲ」という）は遺伝子構造の類似性に基づいてタイプＩ（ＣＤ６４抗原）、II型（ＣＤ３２抗原）、II型I（ＣＤ１６抗原）の３種に大きく分類されている。これらのうち、ＦｃγＲIIは、他のＦｃＲとは異なりモノマーのＩｇＧに対して低親和性であり、免疫複合体となった多価ＩｇＧと結合し、単球、マクロファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リンパ球を含む造血幹細胞に広く発現する。また、ＦｃγＲIIには遺伝子配列が異なるＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ及びＦｃγＲIIＣの３種類の受容体が存在しており、いずれも染色体の１ｑ２３に位置していることが知られている。
【０００４】
上記ＦｃγＲIIＢは、他のＦｃＲとは異なり、γ鎖と会合することなく、しかも細胞内領域に抑制性シグナルを伝達するアミノ酸配列（ＩＴＩＭ：Immunoreceptor Tyrosine-based Inhibition Motif）を有している（Immunol. Rev. 125, 49-76, 1992、Science 256, 1808-1812, 1992）。このようなＦｃγＲIIＢの生理的機能を解明するために、本発明者らはＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを既に作出し（Nature 379, 346-349, 1996）、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウスをII型コラーゲンで免疫することによって関節炎モデルマウス（J. Exp. Med. 189,187-194, 1999）を作製しているが、関節炎症像はＤＢＡ／１Ｊマウスのものと同様であり、それほど有用なものではなかった。
【０００５】
他方、ヒトの慢性関節リウマチや炎症の動物モデルとして、コラーゲン関節炎（collagen-induced arthritis：ＣＩＡ）や、アジュバント関節炎が知られている。ＣＩＡは、慢性関節リウマチ患者の血清や関節滑液中にII型コラーゲンに対する抗体がかなりの頻度で存在するとの知見に基づいてラットをII型コラーゲンで感作することにより誘導された関節炎であり、アジュバント関節炎と比較して、皮膚粘膜症状がないこと、マウスやラットの他サルでも誘導可能なこと、寛容憎悪傾向を示すことがあることなど、より慢性関節リウマチに近い動物モデルとして知られている。また、ＣＩＡの発症には、用いる動物の系統の有するＭＨＣハプロタイプと相関性があり、マウスではＨ−２ｑ（ＤＢＡ／１Ｊマウス）、Ｈ−２ｒ（ＲIIIＳ／Ｊマウス）及びＨ−２ｄ（ＢＡＬＢ／ｃマウス）ハプロタイプを有するマウスに発症率が高く、Ｈ−２ｑのＤＢＡ／１Ｊマウスがよく使われ、ラットでもＬｅｗｉｓ，Ｗｉｓｔｅｒ，ＢＢ／ＤＲなどがよく使用されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
ＣＩＡは遺伝的背景が明らかなマウスにおいてその解析が進み、前記のように、ハプロタイプをもつＨ−２ｑ（ＤＢＡ／１Ｊマウス）、Ｈ−２ｒ（ＲIIIＳ／Ｊマウス）及びＨ−２ｄ（ＢＡＬＢ／ｃマウス）のマウスは疾患モデルマウスとして関節炎を誘導することができるが、発症率は１００％ではなく、また関節炎の程度も最高値に達しないという問題点があった。本発明の課題は、従来のＣＩＡモデル動物に比べて、よりよいリウマチ関節炎モデル動物、すなわちリウマチ関節炎の程度が最高値に達し、かつ発症率が１００％であるリウマチ関節炎好発モデル動物や、これを用いたリウマチ関節炎症の治療薬等のスクリーニング方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、一般的にコラーゲン関節炎（ＣＩＡ）が発症しないとされているハプロタイプＨ−２ｂのＦｃγＲIIＢ欠損マウスにおいてウシ関節由来II型コラーゲン（Ｃ−II）を免疫することでＣＩＡを誘導できることを報告している（J. Exp. Med. 189, 187-194, 1999）。このＦｃγＲIIＢ欠損マウスでは抗II型コラーゲン抗体価が高く、その関節炎症像は野生型のＤＢＡ／１Ｊマウスのものと同様であった。自己免疫疾患であるＣＩＡの発症はＭＨＣハプロタイプに拘束されていることから、ＦｃγＲIIＢの欠損によりかかる拘束の解除が起こるとの知見が得られた。そこで、ＤＢＡ／１Ｊマウスに８世代、２年半をかけて戻し交配し、得られたＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウスが発症するＣＩＡは、ＤＢＡ／１Ｊマウスよりも早期に関節炎を発症し、かつ症状が増悪することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物と該齧歯類動物と同種の野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物とを戻し交配することにより得られ、II型コラーゲンで免疫するとコラーゲン関節炎を発症することを特徴とするリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項１）に関する。
【０００９】
また本発明は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物がリウマチ関節炎好発モデルマウス又はリウマチ関節炎好発モデルラットであることを特徴とする請求項１記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項２）や、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したマウスと野生型ＤＢＡ／１Ｊマウスとを戻し交配することを特徴とする請求項２記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項３）や、戻し交配を６回以上行うことを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項４）や、II型コラーゲンが、ウシ関節由来II型コラーゲンであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物（請求項５）に関する。
【００１０】
さらに本発明は、請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫の前後若しくは免疫と同時に、又は免疫後リウマチ関節炎の未発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法（請求項６）や、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項６記載のリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法（請求項７）や、請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫後リウマチ関節炎の発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法（請求項８）や、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項８記載のリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法（請求項９）に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明において、免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ（ＦｃγIIＢ）遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物とは、ＦｃγＲIIＢをコードする齧歯類動物の内在性遺伝子が破壊・欠損・置換等の遺伝子変異により不活性化され、ＦｃγＲIIＢを発現する機能を失なったマウス、ラット等の齧歯類動物をいう。また、本発明において、かかる齧歯類動物と同種の野生型コラーゲン関節炎（ＣＩＡ）発症性齧歯類動物とは、ＣＩＡを発症するＭＨＣハプロタイプを有するマウス、ラット等の齧歯類動物であり、マウスではＤＢＡ／１ＪマウスやＲIIIＳ／ＪマウスやＢＡＬＢ／ｃマウス等を、ラットではＬｅｗｉｓラットやＷｉｓｔｅｒラットやＢＢ／ＤＲラット等を具体的に例示することができ、特にＤＢＡ／１Ｊマウス系統を用いることはかかるマウスがコラーゲン関節炎を高率で発症するマウスであり、このマウス系統に戻し交配することで更に発症率を高めることができる点で好ましい。そしまた、本発明において、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物とは、II型コラーゲンを用いて免疫した場合に、上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物と比較して、少なくともＣＩＡの発症率が高く、また発症憎悪の程度が大きいマウス、ラット等の齧歯類動物をいう。以下、ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物の作製方法を以下にＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを例に挙げて説明する。
【００１２】
ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したマウス、すなわちＦｃγＲIIＢノックアウトマウスは、本発明者らの前掲の文献（Nature 379, 346-349, 1996）に記載する方法等によって作製することができる。具体的には、マウス遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた遺伝子断片を用いて、ＦｃγＲIIＢ遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされたＦｃγＲIIＢ遺伝子を、ウイルスベクター等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングにより特定する。このクローンのＳ2エキソン及びＥＣ1エキソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット等に置換することによって、ターゲットベクターを調製する。この線状化されたベクターをエレクトロポレーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中から、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェクションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウスとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせることによって、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウスを得ることができる。
【００１３】
本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物は、上記ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物を、該齧歯類動物と同種の前記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを常法により戻し交配することによって得ることができる。コンジェニック系統（ＤＢＡ／１Ｊ系統）とする場合には、通常１２世代以上の戻し交配を必要とするが、本発明における戻し交配においては、複数回、特に６回以上行うことがＣＩＡの発症率や発症憎悪の程度の点で好ましく、さらに均一な実験結果を得られる点で８回以上の戻し交配をすることがより好ましい。複数回の戻し交配は、ＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物と該齧歯類動物（例えば、ＦｃγＲIIＢノックアウトマウス）と同種の前記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物（例えば、ＤＢＡ／１Ｊマウス）との雑種第１代（Ｆ1）と、上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを交配し、次いで得られた雑種第２代（Ｆ2）と上記野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物とを再び交配し、以下かかる交配を繰り返していくことにより行うことができ、本発明において例えば６回の戻し交配を行うとは、雑種第６代（Ｆ6）同士を交配して得られるＦｃγＲIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物をいう。
【００１４】
本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物は、II型コラーゲンを用いて公知の方法で免疫することによりＣＩＡを発症するが、野生型ＣＩＡ発症性齧歯類動物と比較した場合、ＣＩＡの発症率が高く、また発症憎悪の程度が大きいものが好ましい。また、本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物にＣＩＡを発症させるために用いられるII型コラーゲンとしては特に限定されるものでなく、ウシ関節由来II型コラーゲン、ニワトリ関節由来II型コラーゲン、ヒト血清由来II型コラーゲン、ヒト関節滑液由来II型コラーゲン等の市販のII型コラーゲンを用いることができるが、リウマチ関節炎好発モデルマウスの場合、ウシ関節由来II型コラーゲンを用いることが好ましい。また、本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物にＣＩＡを誘導することができるものであれば、II型コラーゲンのアミノ酸配列の一部を含むペプチドやアミノ酸配列の一部が変異したものなども免疫源として使用することができる。
【００１５】
本発明のリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫の前後若しくは免疫と同時に、又は免疫後リウマチ関節炎の未発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価することを特徴とし、また、本発明のリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法は、リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫後リウマチ関節炎の発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価することを特徴とする。
【００１６】
上記スクリーニング方法における被検物質を投与する方法としては、経口投与、静脈注射、筋肉注射等の公知の投与方法であれば特に制限されるものではない。また、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価する方法としては、指関節の腫脹等の発生日、発生率、発生の程度等、公知のリウマチ関節炎の評価方法を用いることができ、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価する方法としては、発症した指関節の腫脹等の症状改善の程度を観察することにより行うことができる。そして、これらの評価に際しては、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物や野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことが好ましい。
【００１７】
そして、これらスクリーニング方法により得られるリウマチ関節炎発症促進物質やリウマチ関節炎症像促進物質は、ＣＩＡ発症の機構を解明する上で有用であり、また、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質は、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質を必要としている患者を治療するのに用いられる治療薬、すなわち慢性リウマチ関節炎の予防及び又は症状改善剤として有用である。さらに、リウマチ関節炎発症抑制物質やリウマチ関節炎症像抑制物質は、リウマチ関節炎の外科的治療に用いることができる可能性がある。
【００１８】
【実施例】
以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれら実施例により限定されるものではない。
参考例（ＦｃγＲIIＢ欠損マウスの作製）
１２９／Ｓｖ／Ｊ（Ｈ−２ｂ）マウスのゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、ＦｃγＲIIＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクローンを単離した。このクローンのＳ2及びＥＣ1の２つの独立したエキソンを含む２．６５ＫｂのフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換することによってターゲットベクターを作製した。この線状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥＳ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
【００１９】
上記の相同的組換えを起こしたＥＳ細胞からＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ（ガンシクロビア）に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンをスクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組換え体を同定した。その同定された相同的組換え体からゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄIIIでダイジェストし、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティングされた対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェクションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウスを野生型のＣ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）マウスとインタークロスさせることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホモ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせて、ＦｃγＲIIＢ遺伝子が染色体上で欠損した欠損マウスを作製した。
【００２０】
実施例１（リウマチ関節炎好発モデルマウスの作製）
参考例１により得られたＦｃγIIＢ欠損雄マウスをＨ−２ｑのＤＢＡ／１Ｊ雌マウスとを交配させて、産まれてきたハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｆ1）とＤＢＡ／１Ｊマウスとを再び交配させて、産まれてきたハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｆ2）とＤＢＡ／１Ｊマウスとを再び交配させ、以下同様に交配を８回繰り返し、得られた８回戻し交配マウス（ハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ+/-ＤＢＡ／１Ｊマウス）同士を交配して、ハプロタイプＨ−２ｑのＦｃγIIＢ-/-（欠損）ＤＢＡ／１Ｊマウスを作製した。
【００２１】
実施例２（アジュバンドの作製）
０．０２ＭのＨＣｌ溶液に０．１５ＭのＮａＯＨ溶液を加えた溶液（ｐＨ８．０）に、牛関節から調製したII型コラーゲン（コラーゲン技術株式会社）を最終濃度で４．０ｍｇ／ｍｌになるように溶解し、II型コラーゲン溶液を作製した。このII型コラーゲン４．０ｍｇ／ｍｌと、流動パラフィン、界面活性剤及び結核死菌からなる完全フロイントアジュバンド（ＣＦＡ）４．０ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、またII型コラーゲン（ｐＨ８．０）４．０ｍｇ／ｍｌと、流動パラフィンと界面活性剤とからなる不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）４．０ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、２種類のオイルエマルジョンを作製した。
【００２２】
実施例３（リウマチ関節炎好発モデルマウスを用いたＣＩＡの発症）
上記実施例１記載の方法により作製したＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウス（８週齢：雌雄差なし）をエーテルで麻酔し尾根部を剃毛し、II型コラーゲンとＣＦＡとをそれぞれ２００μｇ含むエマルジョン１００μｌをマウスの皮内に注射して一次免疫を行い、その一次免疫後、２１日目と４２日目にII型コラーゲンとＩＦＡとをそれぞれ２００μｇ含むエマルジョン１００μｌを皮内に注射し免疫し、リウマチ関節炎好発モデルマウスにＣＩＡを発症させ、リウマチ関節炎の評価を以下のように行った。
【００２３】
実施例４（関節炎の発症率と関節炎スコア）
ＣＩＡ発症マウスの関節炎の評価を１肢につき、症状なし：０点、指関節が１本のみ腫脹：１点、２本以上の指関節：２点、関節全体の腫脹：３点と点数化し、計１２点満点で採点した。また、コントロールとしてＤＢＡ／１Ｊマウスを用いた。図１に示すように、コントロールのＤＢＡ／１Ｊマウス（●：ｎ＝５）では、初回免疫で関節炎の発症率は４０％で、発症日２３．３±４．６日であった。また、関節炎スコアは３回免疫後でも平均８．５点で最高値に達しなかった。一方、ＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウス（□：ｎ＝１２）では初回免疫のみで全例関節炎を発症し、発症日も１７．１±１．９日と早く、２回目の免疫後には関節炎スコアは全例満点の１２点となった。以上のことから、ＦｃγIIＢ欠損ＤＢＡ／１Ｊマウスは、これまでＣＩＡ（collagen-induced arthritis）において一般的に用いられてきたＤＢＡ／１Ｊマウスと比較して、発症率及び関節炎スコアの高い、効率の良い関節炎モデルマウスであることがわかった。
【００２４】
【発明の効果】
本発明によると、II型コラーゲンで免疫すると、リウマチ関節炎の程度が最高値に達しかつ発症率が１００％であるリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物を得ることができる。したがって、かかる本発明のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物を用いることによって、従来のリウマチ関節炎好発モデルマウスやラットにおける場合よりも、一層効率的にリウマチ特効薬の開発や治療法の開発を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のリウマチ関節炎好発モデルマウスとＤＢＡ／１Ｊマウスにおける関節炎の発症率の結果を示す図である。
【図２】本発明のリウマチ関節炎好発モデルマウスと従来のＤＢＡ／１Ｊマウスにおける関節炎スコアの結果を示す図である。
Claims (9)
- 免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損した齧歯類動物と該齧歯類動物と同種の野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物とを戻し交配することにより得られ、II型コラーゲンで免疫するとコラーゲン関節炎を発症することを特徴とするリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物。
- リウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物がリウマチ関節炎好発モデルマウス又はリウマチ関節炎好発モデルラットであることを特徴とする請求項１記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物。
- 免疫グロブリンＦｃγレセプターIIＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したマウスと野生型ＤＢＡ／１Ｊマウスとを戻し交配することを特徴とする請求項２記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物。
- 戻し交配を６回以上行うことを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物。
- II型コラーゲンが、ウシ関節由来II型コラーゲンであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物。
- 請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫の前後若しくは免疫と同時に、又は免疫後リウマチ関節炎の未発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法。
- コラーゲン関節炎の発症の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項６記載のリウマチ関節炎の発症促進物質又は発症抑制物質のスクリーニング方法。
- 請求項１〜５のいずれか記載のリウマチ関節炎好発モデル齧歯類動物をII型コラーゲンで免疫し、免疫後リウマチ関節炎の発症時に、該齧歯類動物に被検物質を投与し、コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価することを特徴とするリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法。
- コラーゲン関節炎の症像の程度を指標として評価するに際し、対照としての野生型コラーゲン関節炎非発症性齧歯類動物及び／又は野生型コラーゲン関節炎発症性齧歯類動物との比較評価を行うことを特徴とする請求項８記載のリウマチ関節炎の症像促進物質又は症像抑制物質のスクリーニング方法。
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