JP3560160B2 - 皮膚外用剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、及び老化防止効果と美白効果に優れた皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、皮膚の美観を保つことに対する女性の関心は非常に高く、シワ、シミ、タルミなどは女性の肌に対する悩みの上位に常に位置する。これらの悩みのうち、シワやタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、もう一方の大きな悩みである、皮膚の色黒は一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミやソバカスはメラニン色素が異常沈着することが、その要因である。これまでの皮膚外用剤の分野では、上述の皮膚の美観を損なうような諸症状を防止、或いは改善するために、さまざまな細胞賦活剤や抗酸化剤及びメラニン産生抑制剤の検索及び配合検討が成されてきた。
【０００３】
例えば、細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特開２００１−１３１０４５）、ツリガネニンジン属、クサギ及びそれらの抽出物（特開２０００−１７８１９８）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特開平１１−３３５２９３）等、抗酸化剤としては、キク科ヘテロテカ属植物抽出物（特開平１１−１８０８８６）やカユンアンギンの抽出物（特開平１０−１８２４１３）等、さらにメラニン産生抑制剤としては、ホンダワラの抽出物（特開平１０−３３０２２０）、ショウガ属植物の抽出物（特開２０００−１５９６２６）等が知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、既に報告されている上記の有効成分を含有する皮膚外用剤はいずれにおいてもその老化防止効果、美白効果は必ずしも十分ではなく、より優れた有効成分の開発が求められていた。本発明は、上記事情に鑑みてなされたものである。すなわち、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤を見出し、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、老化防止効果および美白効果に優れた有効成分を見出すために、様々な物質について細胞賦活効果、抗酸化効果、メラニン産生抑制効果に関する検討を鋭意加えた結果、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分が、優れた細胞賦活効果、抗酸化効果及びメラニン産生抑制効果に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を含有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、及び老化防止用皮膚外用剤さらには美白用皮膚外用剤を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施の形態を説明する。
【０００８】
ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物は、パイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）に属する植物でティランジア アエラントス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｅｒａｎｔｈｏｓ）、ティランジア アトロヴィリディペタラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｔｏｒｏｖｉｒｉｄｉｐｅｔａｌａ）、ティランジア アトロヴィオラセア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｔｒｏｖｉｏｌａｃｅａ）、ティランジア アンセプス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｃｅｐｓ）、ティランジア アンドレアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｄｒｅａｎａ）、ティランジアアルビダ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｌｂｉｄａ）、ティランジア アラウジェイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒａｕｊｅｉ）、ティランジア アルゲンチナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｇｅｎｔｉｎａ）、ティランジア アイゾイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｉｚｏｉｄｅｓ）、ティランジア アンディコラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｄｉｃｏｌａ）、ティランジア アレキタエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｅｑｕｉｔａｅ）、ティランジア アルベルチアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｌｂｅｒｔｉａｎａ）、ティランジア アルヒツァ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｈｉｚａ）、ティランジア バルビシアナ（Ｔｉｌｌａ ｎｄｓｉａ ｂａｌｂｉｓｉａｎａ）、ティランジア ブルボサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｕｌｂｏｓａ）、ティランジア ブッツィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａｂｕｔｚｉｉ）、ティランジア ブラキカウロス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｒａｃｈｙｃａｕｌｏｓ）、ティランジア ブルレ−マルキシ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｕｒｌｅ−ｍａｒｘｉｉ）、ティランジア ボンガラナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｏｎｇａｒａｎａ）、ティランジア ビフロラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｉｆｌｏｒａ）、ティランジア ベルゲリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｅｒｇｅｒｉ）、ティランジア バイレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂａｉｌｅｙｉ）、ティランジア バグア−グランデンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂａｇｕａ−ｇｒａｎｄｅｎｓｉｓ）、ティランジア ブリオイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｒｙｏｉｄｅｓ）、ティランジア カクティコーラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｃｔｉｃｏｌａ）、ティランジア カプト−メドゥサエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｕｔ−ｍｅｄｕｓａｅ）、ティランジア カウレセンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｕｌｅｓｃｅｎｓ）、ティランジア キアペンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｈｉａｐｅｎｓｉｓ）、ティランジア カピラリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）、ティランジア カピタタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｉｔａｔａ）、ティランジア クロロフィラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａ）、ハナアナナス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｙａｎｅａ）、ティランジア シルシナトイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｉｒｃｉｎｎａｔｏｉｄｅｓ）、ティランジア クロカタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｒｏｃａｔａ）、ティランジア コンフェルティフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｎｆｅｒｔｉｆｌｏｒａ）、ティランジア コンプラナタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｍｐｌａｎａｔａ）、ティランジア カエルレア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｅｒｕｌｅａ）、ティランジア コンカラー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｎｃｏｌｏｒ）、ティランジア デッペアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｅｐｐｅａｎａ）、ティランジア ディディスティッチャ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｄｉｓｔｉｃｈａ）、ティランジア ディスティッチャ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｓｔｉｃｈａ）、ティランジア デュラティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｕｒａｔｉｉ）、ティランジア ディグエティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｇｕｅｔｉｉ）、ティランジア ディアグイテンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉａｇｕｉｔｅｎｓｉｓ）、ティランジア ドドソニィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｏｄｏｓｏｎｉｉ）、ティランジア ドロテアエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｏｒｏｔｈｅａｅ）、ティランジア ディエリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｙｅｒｉａｎａ）、ティランジア エディティアエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｄｉｔｈｉａｅ）、ティランジア エレルシアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｈｌｅｒｓｉａｎａ）、ティランジア エルベセンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｒｕｂｅｓｃｅｎｓ）、ティランジア ファシキュラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｔａ）、ティランジア ファンキアーナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｕｎｃｋｉａｎａ）、ティランジア フネブリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｕｎｅｂｒｉｓ）、ティランジアフィリフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ 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ポルツィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｏｌｚｉｉ）、ティランジア プロディギオサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｒｏｄｉｇｉｏｓａ）、ティランジア プルイノサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｒｕｉｎｏｓａ）、ティランジア プルモサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｌｕｍｏｓａ）、ティランジア ピラミダタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｙｒａｍｉｄａｔａ）、ティランジア ロドセファラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｄｃｅｐｈａｌａ）、ティランジア ローランド−ゴッセリニ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｌａｎｄ−ｇｏｓｓｅｌｉｎｉ）、ティランジア ロティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｔｈｉｉ）、ティランジア ロゼイフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｓｅｉｆｌｏｒａ）、ティランジア スカリゲラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃａｌｉｇｅｒａ）、ティランジア シュステリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃｈｓｔｅｒｉ）、ティランジア セレリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｅｌｅｒｉａｎａ）、ティランジア ソムニアンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｏｍｎｉａｎｓ）、ティランジア ストレプトカルパ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｅｐｔｃａｒｐａ）、ティランジア ストラミネア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒａｍｉｎｅａ）、ティランジア ストレプトファイラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｅｐｔｐｈｙｌｌａ）、ティランジア ストリクタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｉｃｔａ）、ティランジア シャツリー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃｈａｚｌｉｉ）、ティランジア スクレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｕｃｒｅｉ）、ティランジア シエデアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｈｉｅｄｅａｎａ）、ティランジア セクンダ（Ｔｉｌｌａｎｄ ｓｉａ ｓｅｃｕｎｄａ）、ティランジア スプレンゲリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｐｒｅｎｇｅｌｌｉａｎａ）、ティランジア テクトラム（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）、ティランジア テヌイフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）、ティランジア トリカラー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｃｏｌｏｒ）、ティランジア トリグロキノイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｇｌｏｃｈｉｎｏｉｄｅｓ）、ティランジア トリコレピス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｃｈｏｌｅｐｉｓ）、ティランジア トマセリー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｏｍａｓｅｌｌｉ）、ティランジア アンベラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｍｂｅｌｌａｔａ）、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）、ティランジア ウトリキュラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｔｒｉｃｕｌａｔａ）、ティランジア ヴェリキアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｌｉｃｋｉａｎａ）、ティランジア ヴェヌスタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｎｕｓｔａ）、ティランジア ヴェルニコサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｒｎｉｃｏｓａ）、ティランジア ヴィリディフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｉｒｉｄｉｆｌｏｒａ）、ティランジア キシフィオイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｘｉｐｈｉｏｉｄｅｓ）、ティランジア キセログラフィカ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｘｅｒｏｇｒａｐｈｉｃａ）、ティランジア ユンケリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｙｕｎｃｋｅｒｉ）など５００種以上からなる。主に、アメリカ大陸の熱帯から亜熱帯にかけて広く分布する。地生あるいは着生し、葉に密についた灰色の鱗片毛が光を反射すると共に空気中から水分を吸収している種が多い。また、薄く幅広い葉が巻き重なった壺状の貯水器官で雨水をためる種もあり、乾燥した環境に適応した植物といえる。
【０００９】
中でも、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）は下垂する着生植物で、アメリカ大陸の熱帯から亜熱帯にかけて広く分布している。茎は直径１ｍｍに満たないが、長さは５ｍに達することもあり、短い花柄に淡緑色の花を１個だけつける。葉は長さ２．５〜５ｃｍで２〜３枚ずつ出て、灰色で糸状の鱗片毛で密に覆われる。成熟した個体には根が無く、コケや地衣類のようにも見えるため、和名は地衣類のサルオガセ属に由来し、英名はスパニッシュ・モスと呼ばれる。
【００１０】
また、エクアドルの標高６００〜１０００ｍ地域に生育しているハナアナナス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｙａｎｅａ）は、高さ３０ｃｍ弱で、長さ３５ｃｍほどの葉が多数ロゼット状につく。花穂は長さ１０〜１５ｃｍの扁平長楕円形で、苞は淡い紅紫色で、長さ３ｃｍほどの濃い紫色の花を羽状につける。
【００１１】
エクアドルとペルーのアンデス山脈に分布するティランジア・テクトラム（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）は、厚い銀色の絨毯のような群落をつくり、紫色の苞のあるスミレ色の花をつける。
【００１２】
また、メキシコ原産で、やや耐寒性があり、小型で花の美しいティランジア・イオナンタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｏｎａｎｔｈａ）や、南米熱帯に広く分布し、小型で花序の苞はピンク、花は美しい淡紫色として知られるティランジア・ストリクタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｉｃｔａ）などは、花の美しい種として知られる。
【００１３】
これらのハナアナナス属に属する植物のうち、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）が、植物そのものの入手の容易性から、本願発明に適している。
【００１４】
次に、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から成分を得る方法について説明する。上記の植物は、各種の全草又はその葉、幹、茎、枝、枝葉、果皮、果実、樹皮、樹液、種子、根茎、根皮、根、花穂、頭花、花などの１又は２以上の箇所を生のまま若しくは乾燥させて使用する。ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から成分を得る方法としては、植物体をこのまま用いてもよく、また、圧搾などの処理物を得てもよいし、抽出溶媒を用いて抽出してもよい。抽出溶媒としては特に限定されず、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｎ−ヘキサノール、メチルアミルアルコール、２−エチルブタノール、ｎ−オクチルアルコール等の１価アルコール類、グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、トリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、へキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、メチル−ｎ−プロピルケトン等のケトン類、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル類、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ｎ−ブチルエーテル等のエーテル類、スクワラン、ワセリン、パラフィンワックス、パラフィン油などの炭化水素類、オリーブ油、小麦胚芽油、米油、ゴマ油、マカダミアンナッツ油、アルモンド油、ヤシ油等の植物油脂、牛脂、豚脂、鯨油等の動物油脂などが例示される。また、リン酸緩衝生理食塩水等の無機塩類を添加した極性溶媒や界面活性剤を添加した溶媒を用いることもでき、更に、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタン、プロパン、一酸化二窒素、クロロジフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、キセノン、アンモニア、メタノール、エタノールなどの１種又は２種以上の超臨界流体、若しくは亜臨界流体を用いてもよく、特に限定されない。
【００１５】
抽出の際の植物と溶媒との比率は特に限定されないが、植物１に対して溶媒０．１〜１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で、０．５〜１００重量倍が好ましい。また抽出温度は０℃から溶媒の沸点以下の範囲とするのが便利であり、抽出時間は抽出温度などにより異なるが１時間〜２週間の範囲とするのが好ましい。
【００１６】
このようにして得られたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分は、各成分をそのまま用いることもできるが、その効果を失わない範囲で、脱臭、脱色、濃縮などの精製操作を加えたり、さらにはカラムクロマトグラフィーなどを用いて分画物として用いてもよい。これらの抽出物や精製物、分画物は、これらから溶媒を除去することによって乾固物とすることもでき、さらに、アルコールなどの溶媒に可溶化した形態、或いは乳剤の形態で用いることができる。
【００１７】
本発明においては、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を配合することにより、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することができる。
【００１８】
ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分の配合量としては、一般に、０．０００００１重量％〜１０．０重量％であり、好ましくは、０．００００１重量％〜５．０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜１．０重量％である。
【００１９】
本発明のハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を有効成分として使用する場合、洗浄剤、クリーム、軟膏、ローション、乳液、固形状、散剤など任意の剤型とすることができる。
【００２０】
その際、本発明の効果を損なわない範囲内で、油性成分、界面活性剤、保湿剤、顔料、紫外線吸収剤、本発明以外の抗酸化剤、香料、防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用原料や、本発明以外の細胞賦活剤、抗炎症剤、本発明以外の美白剤等の生理活性成分をも含有させることができる。
【００２１】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、これら実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００２２】
はじめに、本発明で用いたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分の調製方法を例示する。また、表１に、本発明で用いたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物の具体的な名称と使用部位、更に、それぞれの調製方法で抽出した成分である実施例１から実施例１２を記載する。
【００２３】
＜調製方法１＞
乾燥した植物を、１０重量倍量の５０重量％エタノール水溶液中にて７日間室温で浸漬した。抽出液をろ過し、抽出液を得た。
【００２４】
＜調製方法２＞
乾燥した植物を、１０重量倍量の水中にて粉砕し、これを７日間５℃で浸漬した。抽出液をろ過し、抽出液を得た。
【００２５】
＜調製方法３＞
乾燥した植物を、超臨界流体抽出装置の抽出槽に投入する。エントレーナとして０．００３％のエタノールを加えた後、４０℃において１５ＭＰａの二酸化炭素を分離槽出口での大気圧下での二酸化炭素の流量が７００リットル／時間となるように調節しながら超臨界状態の二酸化炭素を供給した。その後、抽出槽の圧力を減圧し抽出物を取り出した。
【００２６】
【表１】
【００２７】
＜細胞賦活効果の評価＞
正常ヒト真皮線維芽細胞を１穴あたり２．０×１０４個となるように９６穴プレートに播種した。播種培地は５％牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加した市販培地であるダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）（日研生物医学研究所製）を用いた。２４時間培養後、任意の濃度のハナアナナス属植物から得られる成分を添加した１重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養を行った。その後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ添加したＤ−ＭＥＭ培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、５５０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し，両測定値の差により真皮線維芽細胞賦活作用を評価した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして、１重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を用いた。評価はコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値を求めて行った。その結果を表２に示す。なお、実施例１及び実施例２の抽出液の溶媒は減圧下留去して、試験に供した。
【００２８】
【表２】
【００２９】
表２より明らかなように、コントロールに対して真皮線維芽細胞に対する賦活効果が有意に向上することが明らかとなった。特に水にて抽出を行った実施例２に於いては試験を行った全ての濃度で、実施例１（５０重量％エタノールによる抽出）に於いては、添加濃度が３１．２５、２５０、１０００μｇ／ｍＬの時、また、実施例３（超臨界二酸化炭素による抽出）の場合は、添加濃度が２５０から１０００μｇ／ｍＬの間の濃度で、それぞれコントロールに対して危険率１％以下で有意に真皮線維芽細胞の賦活効果が認められた。
【００３０】
＜抗酸化効果の評価＞
１．００重量％の濃度に希釈したハナアナナス属植物より得られた成分（溶媒を減圧下留去した実施例１、溶媒を減圧下留去した実施例２、及び実施例３）の５０重量％エタノール溶液を９６穴プレートに１００μＬずつ添加した。次に０．２ｍＭの安定ラジカルである１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を、９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。室温，暗所にて２４時間放置後、ＤＰＰＨラジカルに由来する波長５１６ｎｍの光の吸光度を測定した。サンプルが無添加の場合の吸光度を（Ａ）、サンプルを添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、ラジカル消去率は次の式（１）で表すことができる。その結果は、表３に示す。
ラジカル消去率＝［１−（Ｂ）／（Ａ）］×１００ 式（１）
【００３１】
【表３】
【００３２】
正常ヒト真皮線維芽細胞を１穴当り２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地にはＤ−ＭＥＭ培地に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、任意の濃度の実施例１を添加した５％重量ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。次に任意濃度の過酸化水素を添加したＨａｎｋｓ（＋）に交換し、１時間培養した。最後に２０μｇ／ｍＬニュートラルレッド含有５％重量ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し３７℃にて２時間培養後、これを０．１Ｎ塩酸含有３０重量％エタノール液にて抽出した。抽出液は５５０ｎｍの吸光度を測定し評価は過酸化水素未接触の細胞生存率を１００とした時の相対生存率を求めて行った。その結果を表４に示す。
【表４】
【００３３】
表３より明らかなように、各抽出方法を用いて得られたハナアナナス属植物の成分を１．００重量％の濃度で添加した何れの場合に於いても、ＤＰＰＨラジカルの消去率は７０％を上回った。また、表４より明らかなように、ヒト真皮線維芽細胞に過酸化水素を接触させた場合、実施例１を６３、１２５、２５０μｇ／ｍＬ添加することで、実施例１を未添加の場合と比較して有意（６３μｇ／ｍＬ添加の場合は危険率５％、１２５及び２５０μｇ／ｍＬ添加の場合は危険率１％）に生存率が高まることが明らかとなった。このことから、ハナアナナス属植物の成分の優れた抗酸化効果が明らかとなった。
【００３４】
＜メラニン産生抑制効果の評価＞
Ｂ１６マウスＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を９０ｍｍディッシュに１ディッシュあたり１５０００個にて播種した。２４時間後、ハナアナナス属植物の成分（実施例１及び実施例２においては溶媒を減圧下留去したもの）を任意の濃度となるように添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）に交換した。７日間培養静置後、０．２５％トリプシンにて細胞を収獲し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。最後に沈殿物の色を表５に示す判定表を基に肉眼判定した。
【００３５】
さらに、試験サンプルの変わりに、５重量％ＦＣＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を用いたものをコントロールとし、試験の妥当性を確認するために５０ｍＭの乳酸ナトリウムと５重量％のＦＣＳを添加したＤ−ＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとし、それぞれについても判定を行った。肉眼判定は表５に示す通り、５段階評価を実施した。評価結果を表６および表７に示す。
【００３６】
【表５】
【００３７】
【表６】
【００３８】
【表７】
【００３９】
表６および表７より明らかなように、各抽出方法を用いて得られたハナアナナス属植物の成分を０．０２重量％（実施例１及び実施例２）、０．０２５重量％（実施例３）を添加した培地を用いた場合、顕著なメラニン産生抑制効果が認められた。このことから、ハナアナナス属植物の成分の優れたメラニン産生抑制効果が明らかとなった。
【００４０】
以下、処方例を示すが、製法は常法により製造したものでよく、各処方におけるハナアナナス属植物抽出物とは上述の実施例１から実施例１２に該当する成分であり、５０重量％エタノールおよび水にて抽出される成分に関しては溶媒は留去せずに用いた。
【００４１】
＜シワ、タルミ、ハリの改善効果＞
次に示す乳液の処方例１に、下表８に示すハナアナナス属植物より得られる成分を配合し、それぞれ実施例１３から実施例１８および比較例１として行なった試験について以下に説明する。試験は、シワ、タルミの形成、ハリの低下が顕著に認められる４０歳代から６０歳代の女性パネラー２０名を一群とし、各群に実施例及び比較例のそれぞれを１日２回、２ヶ月間連続で使用させて評価した。シワの程度については、肉眼観察及び写真撮影により評価し、タルミ及びハリについては肉眼観察及び手で触れることにより評価し、それぞれ使用試験開始前及び終了後の状態を比較し、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の３段階で評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表９に示した。
【００４２】
＜処方例１＞ 乳液
（１）ジステアリン酸ポリグリセリル ２．５０（重量％）
（２）トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル ８．００
（３）水素添加大豆リン脂質 ０．５０
（４）親油型モノステアリン酸グリセリン ０．５０
（５）ベヘニルアルコール ０．５０
（６）ハナアナナス属植物抽出物 表８に示した量
（７）グリセリン ７．５０
（８）精製水 残量
（９）キサンタンガム（１重量％水溶液） ４０．００
（１０）エタノール ８．００
製法：（１）〜（５）及び（６）〜（９）の成分をそれぞれ７０℃に加熱し混合、溶解した後、両成分を混合してホモミキサーで乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で（１０）の成分を添加し、混合、均一化する。
【００４３】
【表８】
【００４４】
【表９】
【００４５】
表９より明らかなように、本発明の実施例使用群では、シワ、タルミ及びハリについてほとんどのパネラーで「やや改善」以上の改善効果が見られた。その割合は、シワについては８０％以上、タルミとハリに関しては８５％以上であり、比較例使用群のそれ（シワ／３０％、タルミ／４０％、ハリ／２０％）よりも顕著であった。なお、上記の使用期間において、いずれの実施例を使用した群においても、痛み，痒み等の皮膚刺激感やアレルギー反応などの皮膚症状を訴えたパネラーはいなかった。また乳化状態の悪化や配合成分の沈降、変質なども認められなかった。
【００４６】
＜美白効果＞
次に示すクリームの処方例２に、表１０に示したハナアナナス属植物より得られる成分を配合し、それぞれ実施例１９から実施例２４および比較例２として、色素沈着症状の改善効果を評価した。色素沈着症状の改善効果は、顕著なシミ、ソバカス等の色素沈着症状を有する成人女性パネラー２０名を一群とし、各群に実施例１９から実施例２４及び比較例２をそれぞれブラインドにて１日２回、３ヶ月間連続で使用させ、３ヶ月後の皮膚の色素沈着の状態を観察して使用前と比較して評価した。色素沈着の状態は、表１１に示す判定基準に従って評価した。２０名の平均値を算出した結果を表１２に示した。
【００４７】
＜処方例２＞ クリーム
（１）スクワラン １０．００（重量％）
（２）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．００
（３）水素添加大豆リン脂質 ０．２０
（４）バチルアルコール ３．００
（５）硬化油 ２．００
（６）ステアリン酸 １．５０
（７）親油型モノステアリン酸グリセリン １．５０
（８）モノステアリン酸ポリグリセリル １．５０
（９）ベヘニルアルコール ０．８０
（１０）モノミリスチン酸ポリグリセリル ０．７０
（１１）サラシミツロウ ０．３０
（１２）混合脂肪酸トリグリセリド ０．１０
（１３）ｄ−δ−トコフェロール ０．０５
（１４）ハナアナナス属植物抽出物 表１０に示した量
（１５）精製水 残量
（１６）キサンタンガム（１重量％水溶液） ２０．００
（１７）１，３−ブチレングリコール １５．００
（１８）パラオキシ安息香酸エステル ０．１０
（１９）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液） ２．００
（２０）エタノール ２．００
製法：（１）〜（１４）の油相成分及び（１５）〜（１８）の水相成分をそれぞれ８０℃に加熱し、混合均一化した後、水相に油相を添加する。（１９）を加えてホモミキサーにて乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で（２０）を添加し、撹拌、均一化する。
【００４８】
【表１０】
【００４９】
【表１１】
【００５０】
【表１２】
【００５１】
表１２において明らかなように、ハナアナナス属植物より得られる成分を配合した実施例１９から実施例２４を使用した群では、使用試験終了後の色素沈着症状は軽度と評価される程度にまで改善され、明確な色素沈着症状の改善が認められていた。これに対し、各種ハナアナナス属植物より得られる成分を精製水に代替した比較例２使用群では色素沈着症状の改善は認められなかった。なお、上記の使用期間において、いずれの実施例を使用した群においても、痛み，痒み等の皮膚刺激感やアレルギー反応などの皮膚症状を訴えたパネラーはいなかった。また乳化状態の悪化や配合成分の変質なども認められなかった。
【００５２】
以下、その他の実施例を示す。
【００５３】
製法：（１）の成分に予め混合しておいた成分（２）〜（６）を加え、（７）〜（１２）の成分を順次添加して、混合、溶解、均一化する。
【００５４】
製法：（１）〜（８）の油相成分を混合，加熱溶解して７０℃とする。一方（９）〜（１１）の水相成分を混合、溶解して７０℃に加熱する。この水相成分に前記油相成分を徐々に添加した後、（１２）を添加しホモミキサーにて均一に乳化する。乳化後、４０℃まで冷却した後、（１３）〜（１５）を添加し混合する。
【００５５】
＜実施例２７＞ Ｗ／Ｏ乳化型クリーム
（１）スクワラン １５．００（重量％）
（２）デカメチルシクロペンタシロキサン １５．００
（３）架橋型メチルポリシロキサン １．００
（４）ジメチコンコポリオール ３．００
（５）クオタニウム−１８ヘクトライト １．００
（６）１，３−ブチレングリコール ８．００
（７）メチルパラベン ０．２０
（８）精製水 残量
（９）ハナアナナス属植物抽出物（実施例５） ５．００
（１０）ハナアナナス属植物抽出物（実施例３） ０．３０
（１１）香料 ０．１０
製法：（１）〜（５）を混合した油相に、（６）〜（９）の水相を攪拌しながら徐々に添加しホモミキサーにて乳化する。乳化後、（１０）および（１１）を添加し混合する。
【００５６】
製法：（３）、（７）を（１１）に添加し均質とした後、（１）及び（２）に（４）〜（６）を溶解させて加え、７０℃に加熱して均一に溶解させる。次いで冷却して４０℃にて（９）、（１０）を添加し、最後に（８）を加えて中和する。
【００５７】
＜実施例２９＞ 洗顔料
（１）ステアリン酸 １０．００（重量％）
（２）パルミチン酸 １０．００
（３）ミリスチン酸 １２．００
（４）ラウリン酸 ４．００
（５）オレイルアルコール １．５０
（６）ラノリンアルコール １．００
（７）ハナアナナス属植物抽出物（実施例４） ２．００
（８）水酸化カリウム ６．００
（９）精製水 残量
（１０）１，３−ブチレングリコール １０．００
（１１）香料 ０．１０
製法：（１）〜（６）の油相及び（７）〜（１０）の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で（１１）を添加して混合する。
【００５８】
＜実施例３０＞ ボディシャンプー
（１）ラウリン酸 ５．００（重量％）
（２）ミリスチン酸 ７．５０
（３）ラウロイルジエタノールアミド ５．００
（４）ハナアナナス属植物抽出物（実施例８） １．００
（５）グリセリン ２０．００
（６）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） ３．００
（７）精製水 残量
（８）香料 ０．３０
製法：（１）〜（３）の油相及び（４）〜（７）の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で（８）を添加して混合する。
【００５９】
＜実施例３１＞ メイクアップベース
（１）ステアリン酸 １．００（重量％）
（２）ベヘニルアルコール ０．５０
（３）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル １．５０
（４）ハナアナナス属植物抽出物（実施例６） ０．１５
（５）スクワラン １０．００
（６）１，３−ブチレングリコール １０．００
（７）グリセリン ３．００
（８）精製水 残量
（９）キサンタンガム（１重量％水溶液） １０．００
（１０）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） １．００
（１１）香料 ０．１０
（１２）二酸化チタン １．００
（１３）ベンガラ ０．０１
（１４）黄酸化鉄 ０．０４
製法：（１２）〜（１４）を（６）で混練し、これを（７）〜（９）の水相に添加、混合し、７０℃に加熱する。一方、（１）〜（５）の油相成分を混合、加熱して７０℃とする。（１０）を加えた水相に油相を攪拌しながら添加して乳化する。４０℃まで冷却した後、（１１）を添加する。
【００６０】
＜実施例３２＞ Ｏ／Ｗ乳化型ファンデーション
（１）ステアリン酸 １．００（重量％）
（２）スクワラン ５．００
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．００
（４）セタノール １．００
（５）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル １．５０
（６）ハナアナナス属植物抽出物（実施例１２） ０．３０
（７）１，３−ブチレングリコール ８．００
（８）キサンタンガム（１重量％水溶液） １０．００
（９）精製水 残量
（１０）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） １．００
（１１）酸化チタン ９．００
（１２）タルク ７．４０
（１３）ベンガラ ０．５０
（１４）黄酸化鉄 １．５０
（１５）黒酸化鉄 ０．２０
（１６）香料 ０．１０
製法：（１１）〜（１５）を（７）で混練し、これを（８）及び（９）の水相に添加、混合し、７０℃に加熱する。一方、（１）〜（６）の油相成分を混合、加熱して７０℃とする。（１０）を加えた水相に油相を攪拌しながら添加して乳化する。４０℃まで冷却した後、（１６）を添加する。
【００６１】
＜実施例３３＞ Ｗ／Ｏ乳化型ファンデーション
（１）タルク １０．００（重量％）
（２）微粒子二酸化チタン ５．００
（３）二酸化チタン ８．００
（４）ポリアクリル酸アルキル ５．００
（５）ベンガラ ０．４０
（６）黄酸化鉄 １．５０
（７）黒酸化鉄 ０．２０
（８）スクワラン ７．００
（９）デカメチルシクロペンタシロキサン １０．００
（１０）ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン ４．００
（１１）パラメトキシ桂皮酸オクチル ３．００
（１２）精製水 残量
（１３）１，３−ブチレングリコール ５．００
（１４）パラオキシ安息香酸メチル ０．２０
（１５）ハナアナナス属植物抽出物（実施例３） ０．５０
製法：（８）〜（１１）の油相成分を均一に混合し、（１）〜（７）を添加してホモミキサーで分散させ油相分散液を調製する。加熱溶解した（１２）〜（１４）を油相分散液に添加し乳化する。最後に（１５）を添加して均一に混合する。
【００６２】
＜実施例３４＞ ツーウェイファンデーション
（１）シリコーン処理タルク 残量（重量％）
（２）シリコーン処理マイカ ２０．００
（３）シリコーン処理二酸化チタン １０．００
（４）シリコーン処理微粒子二酸化チタン ２．００
（５）フッ素処理ベンガラ ０．４５
（６）フッ素処理黄酸化鉄 ２．２０
（７）フッ素処理黒酸化鉄 ０．２２
（８）ステアリン酸亜鉛 １．００
（９）ナイロンパウダー ５．００
（１０）スクワラン ５．００
（１１）固形パラフィン ０．５０
（１２）ジメチルポリシロキサン ４．００
（１３）リンゴ酸ジイソステアリル １．００
（１４）パラメトキシケイ皮酸オクチル ２．００
（１５）酢酸トコフェロール ０．０５
（１６）ハナアナナス属植物抽出物（実施例９） ０．２０
製法：（１）〜（９）の粉体相をハンマーミルで粉砕した後、ブレンダーで混合し均一化する。（１０）〜（１５）の油相を８０℃で溶解し均一化した後、粉体相に添加して混練する。その後、ハンマーミルで粉砕し、篩過したバルクを金皿に圧縮成型する。
【００６３】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤を見出し、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することができた。
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、及び老化防止効果と美白効果に優れた皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、皮膚の美観を保つことに対する女性の関心は非常に高く、シワ、シミ、タルミなどは女性の肌に対する悩みの上位に常に位置する。これらの悩みのうち、シワやタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、もう一方の大きな悩みである、皮膚の色黒は一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミやソバカスはメラニン色素が異常沈着することが、その要因である。これまでの皮膚外用剤の分野では、上述の皮膚の美観を損なうような諸症状を防止、或いは改善するために、さまざまな細胞賦活剤や抗酸化剤及びメラニン産生抑制剤の検索及び配合検討が成されてきた。
【０００３】
例えば、細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特開２００１−１３１０４５）、ツリガネニンジン属、クサギ及びそれらの抽出物（特開２０００−１７８１９８）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特開平１１−３３５２９３）等、抗酸化剤としては、キク科ヘテロテカ属植物抽出物（特開平１１−１８０８８６）やカユンアンギンの抽出物（特開平１０−１８２４１３）等、さらにメラニン産生抑制剤としては、ホンダワラの抽出物（特開平１０−３３０２２０）、ショウガ属植物の抽出物（特開２０００−１５９６２６）等が知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、既に報告されている上記の有効成分を含有する皮膚外用剤はいずれにおいてもその老化防止効果、美白効果は必ずしも十分ではなく、より優れた有効成分の開発が求められていた。本発明は、上記事情に鑑みてなされたものである。すなわち、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤を見出し、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、老化防止効果および美白効果に優れた有効成分を見出すために、様々な物質について細胞賦活効果、抗酸化効果、メラニン産生抑制効果に関する検討を鋭意加えた結果、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分が、優れた細胞賦活効果、抗酸化効果及びメラニン産生抑制効果に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を含有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、及び老化防止用皮膚外用剤さらには美白用皮膚外用剤を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施の形態を説明する。
【０００８】
ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物は、パイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）に属する植物でティランジア アエラントス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｅｒａｎｔｈｏｓ）、ティランジア アトロヴィリディペタラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｔｏｒｏｖｉｒｉｄｉｐｅｔａｌａ）、ティランジア アトロヴィオラセア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｔｒｏｖｉｏｌａｃｅａ）、ティランジア アンセプス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｃｅｐｓ）、ティランジア アンドレアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｄｒｅａｎａ）、ティランジアアルビダ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｌｂｉｄａ）、ティランジア アラウジェイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒａｕｊｅｉ）、ティランジア アルゲンチナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｇｅｎｔｉｎａ）、ティランジア アイゾイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｉｚｏｉｄｅｓ）、ティランジア アンディコラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｎｄｉｃｏｌａ）、ティランジア アレキタエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｅｑｕｉｔａｅ）、ティランジア アルベルチアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｌｂｅｒｔｉａｎａ）、ティランジア アルヒツァ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ａｒｈｉｚａ）、ティランジア バルビシアナ（Ｔｉｌｌａ ｎｄｓｉａ ｂａｌｂｉｓｉａｎａ）、ティランジア ブルボサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｕｌｂｏｓａ）、ティランジア ブッツィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａｂｕｔｚｉｉ）、ティランジア ブラキカウロス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｒａｃｈｙｃａｕｌｏｓ）、ティランジア ブルレ−マルキシ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｕｒｌｅ−ｍａｒｘｉｉ）、ティランジア ボンガラナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｏｎｇａｒａｎａ）、ティランジア ビフロラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｉｆｌｏｒａ）、ティランジア ベルゲリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｅｒｇｅｒｉ）、ティランジア バイレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂａｉｌｅｙｉ）、ティランジア バグア−グランデンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂａｇｕａ−ｇｒａｎｄｅｎｓｉｓ）、ティランジア ブリオイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｂｒｙｏｉｄｅｓ）、ティランジア カクティコーラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｃｔｉｃｏｌａ）、ティランジア カプト−メドゥサエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｕｔ−ｍｅｄｕｓａｅ）、ティランジア カウレセンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｕｌｅｓｃｅｎｓ）、ティランジア キアペンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｈｉａｐｅｎｓｉｓ）、ティランジア カピラリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）、ティランジア カピタタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｐｉｔａｔａ）、ティランジア クロロフィラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａ）、ハナアナナス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｙａｎｅａ）、ティランジア シルシナトイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｉｒｃｉｎｎａｔｏｉｄｅｓ）、ティランジア クロカタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｒｏｃａｔａ）、ティランジア コンフェルティフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｎｆｅｒｔｉｆｌｏｒａ）、ティランジア コンプラナタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｍｐｌａｎａｔａ）、ティランジア カエルレア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃａｅｒｕｌｅａ）、ティランジア コンカラー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｏｎｃｏｌｏｒ）、ティランジア デッペアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｅｐｐｅａｎａ）、ティランジア ディディスティッチャ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｄｉｓｔｉｃｈａ）、ティランジア ディスティッチャ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｓｔｉｃｈａ）、ティランジア デュラティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｕｒａｔｉｉ）、ティランジア ディグエティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉｇｕｅｔｉｉ）、ティランジア ディアグイテンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｉａｇｕｉｔｅｎｓｉｓ）、ティランジア ドドソニィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｏｄｏｓｏｎｉｉ）、ティランジア ドロテアエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｏｒｏｔｈｅａｅ）、ティランジア ディエリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｄｙｅｒｉａｎａ）、ティランジア エディティアエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｄｉｔｈｉａｅ）、ティランジア エレルシアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｈｌｅｒｓｉａｎａ）、ティランジア エルベセンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｅｒｕｂｅｓｃｅｎｓ）、ティランジア ファシキュラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｔａ）、ティランジア ファンキアーナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｕｎｃｋｉａｎａ）、ティランジア フネブリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｕｎｅｂｒｉｓ）、ティランジアフィリフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｉｌｉｆｏｌｉａ）、ティランジア フラベラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｌａｂｅｌｌａｔａ）、ティランジア フォリオサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｏｌｉｏｓａ）、ティランジア フクシィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｆｕｃｈｓｉｉ）、ティランジア ジェミニフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｅｍｉｎｉｆｌｏｒａ）、ティランジア グアテマレンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｕａｔｅｍａｌｅｎｓｉｓ）、ティランジア ギムノボトリャ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｙｍｎｏｂｏｔｒｙａ）、ティランジア ガルドネリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇａｒｄｎｅｒｉ）、ティランジア ゲルダエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｅｒｄａｅ）、ティランジアギリエシィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｉｌｌｉｅｓｉｉ）、ティランジア グロボサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｇｌｏｂｏｓａ）、ティランジア ハリシィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｈａｒｒｉｓｉｉ）、ティランジア ヒルダエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｈｉｌｄａｅ）、ティランジア ヒントニアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｈｉｎｔｏｎｉａｎａ）、ティランジア フラツェンシス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｈｕｒａｚｅｎｓｉｓ）、ティランジア ヒュウミリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｈｕｍｉｌｌｉｓ）、ティランジア インペリアリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｍｐｅｒｉａｌｌｉｓ）、ティランジア インターミディア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、ティランジア イオナンタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｏｎａｎｔｈａ）、ティランジア イクシオイデス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｘｉｏｉｄｅｓ）、ティランジア ジュンセア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｊｕｎｃｅａ）、ティランジア ジュンシフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｊｕｎｃｉｆｏｌｉａ）、ティランジア ジュクンダ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｊｕｃｕｎｄａ）、ティランジア コルビィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋｏｌｂｉｉ）、ティランジア クルト−ホルスティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋｕｒｔ−ｈｏｒｓｔｉｉ）、ティランジア カルウィンスキャナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋａｒｗｉｎｓｋｙａｎａ）、ティランジア カウツキィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋａｕｔｚｋｙｉ）、ティランジア ケゲリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋｅｇｅｌｉａｎａ）、ティランジア カミィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｋａｍｍｉｉ）、ティランジア レイボルディアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｅｉｂｏｌｄｉａｎａ）、ティランジア レウコレピス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｅｕｃｏｌｅｐｉｓ）、ティランジア ロリアセア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｏｌｉａｃｅａ）、ティランジア ロレンツィアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎａ）、ティランジア ルシダ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｕｃｉｄａ）、ティランジア リマニィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｙｍａｎｉｉ）、ティランジア レオナミアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｅｏｎａｍｉａｎａ）、ティランジア レピドセパラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｅｐｉｄｏｓｅｐａｌａ）、ティランジア リンデニィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｌｉｎｄｅｎｉｉ）、ティランジア ミオスラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍｙｏｓｕｒａ）、ティランジア ミラビリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、ティランジア マクドウガリィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍａｃｄｏｕｇａｌｌｉｉ）、ティランジア マルニエ−ラポストレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍａｒｎｉｅｒ−ｌａｐｏｓｔｏｌｅｉｉ）、ティランジア ムルティカウリス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍｕｌｔｉｃａｕｌｉｓ）、ティランジア ミマ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍｉｍａ）、ティランジア マレモンティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍａｌｌｅｍｏｎｔｉｉ）、ティランジア マウリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍａｕｒｙａｎａ）、ティランジア ミカンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｍｉｃａｎｓ）、ティランジア ネグレクタ（Ｔｉｌｌ ａｎｄｓｉａ ｎｅｇｌｅｃｔａ）、ティランジア ナナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｎａｎａ）、ティランジア ナルテシオイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｎａｒｔｈｅｃｉｏｉｄｅｓ）、ティランジア パメラエ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐａｍｅｌａｅ）、ティランジア プンクチュラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｕｎｃｔｕｌａｔａ）、ティランジア プソイドバイレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｓｅｕｄｏｂａｉｌｅｙｉ）、ティランジア パウキフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐａｕｃｉｆｏｌｉａ）、ティランジア プラギオトロピカ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｌａｇｉｏｔｒｏｐｉｃａ）、ティランジア ペイラノイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｅｉｒａｎｏｉ）、ティランジア ポルツィ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｏｌｚｉｉ）、ティランジア プロディギオサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｒｏｄｉｇｉｏｓａ）、ティランジア プルイノサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｒｕｉｎｏｓａ）、ティランジア プルモサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｌｕｍｏｓａ）、ティランジア ピラミダタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｐｙｒａｍｉｄａｔａ）、ティランジア ロドセファラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｄｃｅｐｈａｌａ）、ティランジア ローランド−ゴッセリニ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｌａｎｄ−ｇｏｓｓｅｌｉｎｉ）、ティランジア ロティ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｔｈｉｉ）、ティランジア ロゼイフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｒｏｓｅｉｆｌｏｒａ）、ティランジア スカリゲラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃａｌｉｇｅｒａ）、ティランジア シュステリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃｈｓｔｅｒｉ）、ティランジア セレリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｅｌｅｒｉａｎａ）、ティランジア ソムニアンス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｏｍｎｉａｎｓ）、ティランジア ストレプトカルパ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｅｐｔｃａｒｐａ）、ティランジア ストラミネア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒａｍｉｎｅａ）、ティランジア ストレプトファイラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｅｐｔｐｈｙｌｌａ）、ティランジア ストリクタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｉｃｔａ）、ティランジア シャツリー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｃｈａｚｌｉｉ）、ティランジア スクレイ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｕｃｒｅｉ）、ティランジア シエデアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｈｉｅｄｅａｎａ）、ティランジア セクンダ（Ｔｉｌｌａｎｄ ｓｉａ ｓｅｃｕｎｄａ）、ティランジア スプレンゲリアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｐｒｅｎｇｅｌｌｉａｎａ）、ティランジア テクトラム（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）、ティランジア テヌイフォリア（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）、ティランジア トリカラー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｃｏｌｏｒ）、ティランジア トリグロキノイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｇｌｏｃｈｉｎｏｉｄｅｓ）、ティランジア トリコレピス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｒｉｃｈｏｌｅｐｉｓ）、ティランジア トマセリー（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｏｍａｓｅｌｌｉ）、ティランジア アンベラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｍｂｅｌｌａｔａ）、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）、ティランジア ウトリキュラタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｔｒｉｃｕｌａｔａ）、ティランジア ヴェリキアナ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｌｉｃｋｉａｎａ）、ティランジア ヴェヌスタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｎｕｓｔａ）、ティランジア ヴェルニコサ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｅｒｎｉｃｏｓａ）、ティランジア ヴィリディフローラ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｖｉｒｉｄｉｆｌｏｒａ）、ティランジア キシフィオイド（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｘｉｐｈｉｏｉｄｅｓ）、ティランジア キセログラフィカ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｘｅｒｏｇｒａｐｈｉｃａ）、ティランジア ユンケリ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｙｕｎｃｋｅｒｉ）など５００種以上からなる。主に、アメリカ大陸の熱帯から亜熱帯にかけて広く分布する。地生あるいは着生し、葉に密についた灰色の鱗片毛が光を反射すると共に空気中から水分を吸収している種が多い。また、薄く幅広い葉が巻き重なった壺状の貯水器官で雨水をためる種もあり、乾燥した環境に適応した植物といえる。
【０００９】
中でも、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）は下垂する着生植物で、アメリカ大陸の熱帯から亜熱帯にかけて広く分布している。茎は直径１ｍｍに満たないが、長さは５ｍに達することもあり、短い花柄に淡緑色の花を１個だけつける。葉は長さ２．５〜５ｃｍで２〜３枚ずつ出て、灰色で糸状の鱗片毛で密に覆われる。成熟した個体には根が無く、コケや地衣類のようにも見えるため、和名は地衣類のサルオガセ属に由来し、英名はスパニッシュ・モスと呼ばれる。
【００１０】
また、エクアドルの標高６００〜１０００ｍ地域に生育しているハナアナナス（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｃｙａｎｅａ）は、高さ３０ｃｍ弱で、長さ３５ｃｍほどの葉が多数ロゼット状につく。花穂は長さ１０〜１５ｃｍの扁平長楕円形で、苞は淡い紅紫色で、長さ３ｃｍほどの濃い紫色の花を羽状につける。
【００１１】
エクアドルとペルーのアンデス山脈に分布するティランジア・テクトラム（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）は、厚い銀色の絨毯のような群落をつくり、紫色の苞のあるスミレ色の花をつける。
【００１２】
また、メキシコ原産で、やや耐寒性があり、小型で花の美しいティランジア・イオナンタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｉｏｎａｎｔｈａ）や、南米熱帯に広く分布し、小型で花序の苞はピンク、花は美しい淡紫色として知られるティランジア・ストリクタ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｓｔｒｉｃｔａ）などは、花の美しい種として知られる。
【００１３】
これらのハナアナナス属に属する植物のうち、サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）が、植物そのものの入手の容易性から、本願発明に適している。
【００１４】
次に、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から成分を得る方法について説明する。上記の植物は、各種の全草又はその葉、幹、茎、枝、枝葉、果皮、果実、樹皮、樹液、種子、根茎、根皮、根、花穂、頭花、花などの１又は２以上の箇所を生のまま若しくは乾燥させて使用する。ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から成分を得る方法としては、植物体をこのまま用いてもよく、また、圧搾などの処理物を得てもよいし、抽出溶媒を用いて抽出してもよい。抽出溶媒としては特に限定されず、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ｎ−ヘキサノール、メチルアミルアルコール、２−エチルブタノール、ｎ−オクチルアルコール等の１価アルコール類、グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、トリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、へキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、メチル−ｎ−プロピルケトン等のケトン類、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等のエステル類、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ｎ−ブチルエーテル等のエーテル類、スクワラン、ワセリン、パラフィンワックス、パラフィン油などの炭化水素類、オリーブ油、小麦胚芽油、米油、ゴマ油、マカダミアンナッツ油、アルモンド油、ヤシ油等の植物油脂、牛脂、豚脂、鯨油等の動物油脂などが例示される。また、リン酸緩衝生理食塩水等の無機塩類を添加した極性溶媒や界面活性剤を添加した溶媒を用いることもでき、更に、水、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタン、プロパン、一酸化二窒素、クロロジフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、キセノン、アンモニア、メタノール、エタノールなどの１種又は２種以上の超臨界流体、若しくは亜臨界流体を用いてもよく、特に限定されない。
【００１５】
抽出の際の植物と溶媒との比率は特に限定されないが、植物１に対して溶媒０．１〜１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で、０．５〜１００重量倍が好ましい。また抽出温度は０℃から溶媒の沸点以下の範囲とするのが便利であり、抽出時間は抽出温度などにより異なるが１時間〜２週間の範囲とするのが好ましい。
【００１６】
このようにして得られたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分は、各成分をそのまま用いることもできるが、その効果を失わない範囲で、脱臭、脱色、濃縮などの精製操作を加えたり、さらにはカラムクロマトグラフィーなどを用いて分画物として用いてもよい。これらの抽出物や精製物、分画物は、これらから溶媒を除去することによって乾固物とすることもでき、さらに、アルコールなどの溶媒に可溶化した形態、或いは乳剤の形態で用いることができる。
【００１７】
本発明においては、ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を配合することにより、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することができる。
【００１８】
ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分の配合量としては、一般に、０．０００００１重量％〜１０．０重量％であり、好ましくは、０．００００１重量％〜５．０重量％、さらに好ましくは０．０００１重量％〜１．０重量％である。
【００１９】
本発明のハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分を有効成分として使用する場合、洗浄剤、クリーム、軟膏、ローション、乳液、固形状、散剤など任意の剤型とすることができる。
【００２０】
その際、本発明の効果を損なわない範囲内で、油性成分、界面活性剤、保湿剤、顔料、紫外線吸収剤、本発明以外の抗酸化剤、香料、防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用原料や、本発明以外の細胞賦活剤、抗炎症剤、本発明以外の美白剤等の生理活性成分をも含有させることができる。
【００２１】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、これら実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００２２】
はじめに、本発明で用いたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物から得られる成分の調製方法を例示する。また、表１に、本発明で用いたハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物の具体的な名称と使用部位、更に、それぞれの調製方法で抽出した成分である実施例１から実施例１２を記載する。
【００２３】
＜調製方法１＞
乾燥した植物を、１０重量倍量の５０重量％エタノール水溶液中にて７日間室温で浸漬した。抽出液をろ過し、抽出液を得た。
【００２４】
＜調製方法２＞
乾燥した植物を、１０重量倍量の水中にて粉砕し、これを７日間５℃で浸漬した。抽出液をろ過し、抽出液を得た。
【００２５】
＜調製方法３＞
乾燥した植物を、超臨界流体抽出装置の抽出槽に投入する。エントレーナとして０．００３％のエタノールを加えた後、４０℃において１５ＭＰａの二酸化炭素を分離槽出口での大気圧下での二酸化炭素の流量が７００リットル／時間となるように調節しながら超臨界状態の二酸化炭素を供給した。その後、抽出槽の圧力を減圧し抽出物を取り出した。
【００２６】
【表１】
＜細胞賦活効果の評価＞
正常ヒト真皮線維芽細胞を１穴あたり２．０×１０４個となるように９６穴プレートに播種した。播種培地は５％牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加した市販培地であるダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）（日研生物医学研究所製）を用いた。２４時間培養後、任意の濃度のハナアナナス属植物から得られる成分を添加した１重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養を行った。その後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ添加したＤ−ＭＥＭ培地に交換して２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、５５０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し，両測定値の差により真皮線維芽細胞賦活作用を評価した。評価ではサンプル培養液の他にネガティブコントロールとして、１重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を、ポジティブコントロールとして５重量％ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を用いた。評価はコントロールにおける細胞賦活作用を１００としたときの相対値を求めて行った。その結果を表２に示す。なお、実施例１及び実施例２の抽出液の溶媒は減圧下留去して、試験に供した。
【００２８】
【表２】
表２より明らかなように、コントロールに対して真皮線維芽細胞に対する賦活効果が有意に向上することが明らかとなった。特に水にて抽出を行った実施例２に於いては試験を行った全ての濃度で、実施例１（５０重量％エタノールによる抽出）に於いては、添加濃度が３１．２５、２５０、１０００μｇ／ｍＬの時、また、実施例３（超臨界二酸化炭素による抽出）の場合は、添加濃度が２５０から１０００μｇ／ｍＬの間の濃度で、それぞれコントロールに対して危険率１％以下で有意に真皮線維芽細胞の賦活効果が認められた。
【００３０】
＜抗酸化効果の評価＞
１．００重量％の濃度に希釈したハナアナナス属植物より得られた成分（溶媒を減圧下留去した実施例１、溶媒を減圧下留去した実施例２、及び実施例３）の５０重量％エタノール溶液を９６穴プレートに１００μＬずつ添加した。次に０．２ｍＭの安定ラジカルである１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を、９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。室温，暗所にて２４時間放置後、ＤＰＰＨラジカルに由来する波長５１６ｎｍの光の吸光度を測定した。サンプルが無添加の場合の吸光度を（Ａ）、サンプルを添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、ラジカル消去率は次の式（１）で表すことができる。その結果は、表３に示す。
ラジカル消去率＝［１−（Ｂ）／（Ａ）］×１００ 式（１）
【００３１】
【表３】
正常ヒト真皮線維芽細胞を１穴当り２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレートに播種した。播種培地にはＤ−ＭＥＭ培地に５重量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間後、任意の濃度の実施例１を添加した５％重量ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。次に任意濃度の過酸化水素を添加したＨａｎｋｓ（＋）に交換し、１時間培養した。最後に２０μｇ／ｍＬニュートラルレッド含有５％重量ＦＢＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地に交換し３７℃にて２時間培養後、これを０．１Ｎ塩酸含有３０重量％エタノール液にて抽出した。抽出液は５５０ｎｍの吸光度を測定し評価は過酸化水素未接触の細胞生存率を１００とした時の相対生存率を求めて行った。その結果を表４に示す。
【表４】
表３より明らかなように、各抽出方法を用いて得られたハナアナナス属植物の成分を１．００重量％の濃度で添加した何れの場合に於いても、ＤＰＰＨラジカルの消去率は７０％を上回った。また、表４より明らかなように、ヒト真皮線維芽細胞に過酸化水素を接触させた場合、実施例１を６３、１２５、２５０μｇ／ｍＬ添加することで、実施例１を未添加の場合と比較して有意（６３μｇ／ｍＬ添加の場合は危険率５％、１２５及び２５０μｇ／ｍＬ添加の場合は危険率１％）に生存率が高まることが明らかとなった。このことから、ハナアナナス属植物の成分の優れた抗酸化効果が明らかとなった。
【００３４】
＜メラニン産生抑制効果の評価＞
Ｂ１６マウスＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を９０ｍｍディッシュに１ディッシュあたり１５０００個にて播種した。２４時間後、ハナアナナス属植物の成分（実施例１及び実施例２においては溶媒を減圧下留去したもの）を任意の濃度となるように添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）に交換した。７日間培養静置後、０．２５％トリプシンにて細胞を収獲し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。最後に沈殿物の色を表５に示す判定表を基に肉眼判定した。
【００３５】
さらに、試験サンプルの変わりに、５重量％ＦＣＳ添加Ｄ−ＭＥＭ培地を用いたものをコントロールとし、試験の妥当性を確認するために５０ｍＭの乳酸ナトリウムと５重量％のＦＣＳを添加したＤ−ＭＥＭ培地を用いたものをポジティブコントロールとし、それぞれについても判定を行った。肉眼判定は表５に示す通り、５段階評価を実施した。評価結果を表６および表７に示す。
【００３６】
【表５】
【表６】
【表７】
表６および表７より明らかなように、各抽出方法を用いて得られたハナアナナス属植物の成分を０．０２重量％（実施例１及び実施例２）、０．０２５重量％（実施例３）を添加した培地を用いた場合、顕著なメラニン産生抑制効果が認められた。このことから、ハナアナナス属植物の成分の優れたメラニン産生抑制効果が明らかとなった。
【００４０】
以下、処方例を示すが、製法は常法により製造したものでよく、各処方におけるハナアナナス属植物抽出物とは上述の実施例１から実施例１２に該当する成分であり、５０重量％エタノールおよび水にて抽出される成分に関しては溶媒は留去せずに用いた。
【００４１】
＜シワ、タルミ、ハリの改善効果＞
次に示す乳液の処方例１に、下表８に示すハナアナナス属植物より得られる成分を配合し、それぞれ実施例１３から実施例１８および比較例１として行なった試験について以下に説明する。試験は、シワ、タルミの形成、ハリの低下が顕著に認められる４０歳代から６０歳代の女性パネラー２０名を一群とし、各群に実施例及び比較例のそれぞれを１日２回、２ヶ月間連続で使用させて評価した。シワの程度については、肉眼観察及び写真撮影により評価し、タルミ及びハリについては肉眼観察及び手で触れることにより評価し、それぞれ使用試験開始前及び終了後の状態を比較し、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の３段階で評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表９に示した。
【００４２】
＜処方例１＞ 乳液
（１）ジステアリン酸ポリグリセリル ２．５０（重量％）
（２）トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル ８．００
（３）水素添加大豆リン脂質 ０．５０
（４）親油型モノステアリン酸グリセリン ０．５０
（５）ベヘニルアルコール ０．５０
（６）ハナアナナス属植物抽出物 表８に示した量
（７）グリセリン ７．５０
（８）精製水 残量
（９）キサンタンガム（１重量％水溶液） ４０．００
（１０）エタノール ８．００
製法：（１）〜（５）及び（６）〜（９）の成分をそれぞれ７０℃に加熱し混合、溶解した後、両成分を混合してホモミキサーで乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で（１０）の成分を添加し、混合、均一化する。
【００４３】
【表８】
【表９】
表９より明らかなように、本発明の実施例使用群では、シワ、タルミ及びハリについてほとんどのパネラーで「やや改善」以上の改善効果が見られた。その割合は、シワについては８０％以上、タルミとハリに関しては８５％以上であり、比較例使用群のそれ（シワ／３０％、タルミ／４０％、ハリ／２０％）よりも顕著であった。なお、上記の使用期間において、いずれの実施例を使用した群においても、痛み，痒み等の皮膚刺激感やアレルギー反応などの皮膚症状を訴えたパネラーはいなかった。また乳化状態の悪化や配合成分の沈降、変質なども認められなかった。
【００４６】
＜美白効果＞
次に示すクリームの処方例２に、表１０に示したハナアナナス属植物より得られる成分を配合し、それぞれ実施例１９から実施例２４および比較例２として、色素沈着症状の改善効果を評価した。色素沈着症状の改善効果は、顕著なシミ、ソバカス等の色素沈着症状を有する成人女性パネラー２０名を一群とし、各群に実施例１９から実施例２４及び比較例２をそれぞれブラインドにて１日２回、３ヶ月間連続で使用させ、３ヶ月後の皮膚の色素沈着の状態を観察して使用前と比較して評価した。色素沈着の状態は、表１１に示す判定基準に従って評価した。２０名の平均値を算出した結果を表１２に示した。
【００４７】
＜処方例２＞ クリーム
（１）スクワラン １０．００（重量％）
（２）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．００
（３）水素添加大豆リン脂質 ０．２０
（４）バチルアルコール ３．００
（５）硬化油 ２．００
（６）ステアリン酸 １．５０
（７）親油型モノステアリン酸グリセリン １．５０
（８）モノステアリン酸ポリグリセリル １．５０
（９）ベヘニルアルコール ０．８０
（１０）モノミリスチン酸ポリグリセリル ０．７０
（１１）サラシミツロウ ０．３０
（１２）混合脂肪酸トリグリセリド ０．１０
（１３）ｄ−δ−トコフェロール ０．０５
（１４）ハナアナナス属植物抽出物 表１０に示した量
（１５）精製水 残量
（１６）キサンタンガム（１重量％水溶液） ２０．００
（１７）１，３−ブチレングリコール １５．００
（１８）パラオキシ安息香酸エステル ０．１０
（１９）水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液） ２．００
（２０）エタノール ２．００
製法：（１）〜（１４）の油相成分及び（１５）〜（１８）の水相成分をそれぞれ８０℃に加熱し、混合均一化した後、水相に油相を添加する。（１９）を加えてホモミキサーにて乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で（２０）を添加し、撹拌、均一化する。
【００４８】
【表１０】
【表１１】
【表１２】
表１２において明らかなように、ハナアナナス属植物より得られる成分を配合した実施例１９から実施例２４を使用した群では、使用試験終了後の色素沈着症状は軽度と評価される程度にまで改善され、明確な色素沈着症状の改善が認められていた。これに対し、各種ハナアナナス属植物より得られる成分を精製水に代替した比較例２使用群では色素沈着症状の改善は認められなかった。なお、上記の使用期間において、いずれの実施例を使用した群においても、痛み，痒み等の皮膚刺激感やアレルギー反応などの皮膚症状を訴えたパネラーはいなかった。また乳化状態の悪化や配合成分の変質なども認められなかった。
【００５２】
以下、その他の実施例を示す。
【００５３】
【００５４】
【００５５】
＜実施例２７＞ Ｗ／Ｏ乳化型クリーム
（１）スクワラン １５．００（重量％）
（２）デカメチルシクロペンタシロキサン １５．００
（３）架橋型メチルポリシロキサン １．００
（４）ジメチコンコポリオール ３．００
（５）クオタニウム−１８ヘクトライト １．００
（６）１，３−ブチレングリコール ８．００
（７）メチルパラベン ０．２０
（８）精製水 残量
（９）ハナアナナス属植物抽出物（実施例５） ５．００
（１０）ハナアナナス属植物抽出物（実施例３） ０．３０
（１１）香料 ０．１０
製法：（１）〜（５）を混合した油相に、（６）〜（９）の水相を攪拌しながら徐々に添加しホモミキサーにて乳化する。乳化後、（１０）および（１１）を添加し混合する。
【００５６】
【００５７】
＜実施例２９＞ 洗顔料
（１）ステアリン酸 １０．００（重量％）
（２）パルミチン酸 １０．００
（３）ミリスチン酸 １２．００
（４）ラウリン酸 ４．００
（５）オレイルアルコール １．５０
（６）ラノリンアルコール １．００
（７）ハナアナナス属植物抽出物（実施例４） ２．００
（８）水酸化カリウム ６．００
（９）精製水 残量
（１０）１，３−ブチレングリコール １０．００
（１１）香料 ０．１０
製法：（１）〜（６）の油相及び（７）〜（１０）の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で（１１）を添加して混合する。
【００５８】
＜実施例３０＞ ボディシャンプー
（１）ラウリン酸 ５．００（重量％）
（２）ミリスチン酸 ７．５０
（３）ラウロイルジエタノールアミド ５．００
（４）ハナアナナス属植物抽出物（実施例８） １．００
（５）グリセリン ２０．００
（６）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） ３．００
（７）精製水 残量
（８）香料 ０．３０
製法：（１）〜（３）の油相及び（４）〜（７）の水相をそれぞれ７５℃に混合加熱溶解した後、油相に水相を加えてケン化する。冷却後４０℃で（８）を添加して混合する。
【００５９】
＜実施例３１＞ メイクアップベース
（１）ステアリン酸 １．００（重量％）
（２）ベヘニルアルコール ０．５０
（３）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル １．５０
（４）ハナアナナス属植物抽出物（実施例６） ０．１５
（５）スクワラン １０．００
（６）１，３−ブチレングリコール １０．００
（７）グリセリン ３．００
（８）精製水 残量
（９）キサンタンガム（１重量％水溶液） １０．００
（１０）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） １．００
（１１）香料 ０．１０
（１２）二酸化チタン １．００
（１３）ベンガラ ０．０１
（１４）黄酸化鉄 ０．０４
製法：（１２）〜（１４）を（６）で混練し、これを（７）〜（９）の水相に添加、混合し、７０℃に加熱する。一方、（１）〜（５）の油相成分を混合、加熱して７０℃とする。（１０）を加えた水相に油相を攪拌しながら添加して乳化する。４０℃まで冷却した後、（１１）を添加する。
【００６０】
＜実施例３２＞ Ｏ／Ｗ乳化型ファンデーション
（１）ステアリン酸 １．００（重量％）
（２）スクワラン ５．００
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．００
（４）セタノール １．００
（５）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル １．５０
（６）ハナアナナス属植物抽出物（実施例１２） ０．３０
（７）１，３−ブチレングリコール ８．００
（８）キサンタンガム（１重量％水溶液） １０．００
（９）精製水 残量
（１０）水酸化カリウム（１０重量％水溶液） １．００
（１１）酸化チタン ９．００
（１２）タルク ７．４０
（１３）ベンガラ ０．５０
（１４）黄酸化鉄 １．５０
（１５）黒酸化鉄 ０．２０
（１６）香料 ０．１０
製法：（１１）〜（１５）を（７）で混練し、これを（８）及び（９）の水相に添加、混合し、７０℃に加熱する。一方、（１）〜（６）の油相成分を混合、加熱して７０℃とする。（１０）を加えた水相に油相を攪拌しながら添加して乳化する。４０℃まで冷却した後、（１６）を添加する。
【００６１】
＜実施例３３＞ Ｗ／Ｏ乳化型ファンデーション
（１）タルク １０．００（重量％）
（２）微粒子二酸化チタン ５．００
（３）二酸化チタン ８．００
（４）ポリアクリル酸アルキル ５．００
（５）ベンガラ ０．４０
（６）黄酸化鉄 １．５０
（７）黒酸化鉄 ０．２０
（８）スクワラン ７．００
（９）デカメチルシクロペンタシロキサン １０．００
（１０）ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン ４．００
（１１）パラメトキシ桂皮酸オクチル ３．００
（１２）精製水 残量
（１３）１，３−ブチレングリコール ５．００
（１４）パラオキシ安息香酸メチル ０．２０
（１５）ハナアナナス属植物抽出物（実施例３） ０．５０
製法：（８）〜（１１）の油相成分を均一に混合し、（１）〜（７）を添加してホモミキサーで分散させ油相分散液を調製する。加熱溶解した（１２）〜（１４）を油相分散液に添加し乳化する。最後に（１５）を添加して均一に混合する。
【００６２】
＜実施例３４＞ ツーウェイファンデーション
（１）シリコーン処理タルク 残量（重量％）
（２）シリコーン処理マイカ ２０．００
（３）シリコーン処理二酸化チタン １０．００
（４）シリコーン処理微粒子二酸化チタン ２．００
（５）フッ素処理ベンガラ ０．４５
（６）フッ素処理黄酸化鉄 ２．２０
（７）フッ素処理黒酸化鉄 ０．２２
（８）ステアリン酸亜鉛 １．００
（９）ナイロンパウダー ５．００
（１０）スクワラン ５．００
（１１）固形パラフィン ０．５０
（１２）ジメチルポリシロキサン ４．００
（１３）リンゴ酸ジイソステアリル １．００
（１４）パラメトキシケイ皮酸オクチル ２．００
（１５）酢酸トコフェロール ０．０５
（１６）ハナアナナス属植物抽出物（実施例９） ０．２０
製法：（１）〜（９）の粉体相をハンマーミルで粉砕した後、ブレンダーで混合し均一化する。（１０）〜（１５）の油相を８０℃で溶解し均一化した後、粉体相に添加して混練する。その後、ハンマーミルで粉砕し、篩過したバルクを金皿に圧縮成型する。
【００６３】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明により、優れた効果を有する細胞賦活剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤を見出し、老化防止効果および美白効果に優れた皮膚外用剤を提供することができた。
Claims (4)
- ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物抽出物を細胞賦活成分とする細胞賦活剤。
- サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）抽出物を細胞賦活成分とする請求項１記載の細胞賦活剤。
- ハナアナナス属（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ）植物抽出物をメラニン産生抑制成分とするメラニン産生抑制剤。
- サルオガセモドキ（Ｔｉｌｌａｎｄｓｉａ ｕｓｎｅｏｉｄｅｓ）抽出物をメラニン産生抑制成分とする請求項３記載のメラニン産生抑制剤。
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