JP3553164B2 - 細胞数測定装置 - Google Patents
細胞数測定装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3553164B2 JP3553164B2 JP29553894A JP29553894A JP3553164B2 JP 3553164 B2 JP3553164 B2 JP 3553164B2 JP 29553894 A JP29553894 A JP 29553894A JP 29553894 A JP29553894 A JP 29553894A JP 3553164 B2 JP3553164 B2 JP 3553164B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- blood
- plasma
- storage space
- flow path
- tube
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、被検液中の細胞数を測定する細胞数測定装置、特に、血液成分中の血球または血小板の数を測定する細胞数測定装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
採血を行う場合、現在では、血液の有効利用および供血者の負担軽減などの理由から、採血血液を遠心分離などにより各血液成分に分離し、輸血者に必要な成分だけを採取し、その他の成分は供血者に返還する成分採血が行われている。
【０００３】
このような成分採血において、血小板製剤を得る場合、供血者から採血した血液を血液成分分離回路に導入し、該血液成分分離回路に設置された遠心ボウルと呼ばれる遠心分離器により、血漿、白血球、血小板および赤血球の４成分に分離し、その内の血小板をバッグ等の容器に回収して血小板製剤とし、残りの血漿、白血球および赤血球は、供血者に返血することが行われる。そして、より多くの血小板数を確保するために、前記採血、採血血液の遠心分離、血小板の回収および返血の工程を複数回繰り返し行う。
【０００４】
この場合、得られた血小板製剤中の血小板数を知る必要があり、そのため、全ての処理が終了した後、バッグ内に回収された濃厚血小板血漿をサンプリングして血小板数を測定し、バッグ内全体の血小板数を計算により求めていた。
【０００５】
しかしながら、このような方法では、採血や血液処理工程中に、どの程度の量の血小板が採取されたのかを知ることができないという欠点がある。そのため、血小板数の目標値（例えば５、１０、１５または２０単位の血小板）に到達しているか否かが判断できず、血小板を目標値より過剰に採取することがあり、供血者の負担が増大する等の問題が生じる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、血小板等の細胞の数をリアルタイムに測定することができる細胞数測定装置を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
このような目的は、下記（１）〜（５）の本発明により達成される。
（１） 内部に貯血空間が形成された回転可能なローターと、前記貯血空間に連通する流入口および流出口とを有し、前記ローターの回転により前記流入口より導入された血液を前記貯血空間内で複数の血液成分に遠心分離する遠心分離器に対し、前記ローターの回転下で、複数に分離された血液成分を有する前記貯血空間に下方より血漿を供給して血小板を浮上させ、前記流出口より血漿とともに流出した血小板の数を測定する細胞数測定装置であって、
前記流出口に接続された流路と、前記流路の途中に設置され、前記流路を流れる血漿中の血小板濃度を測定する測定部と、前記貯血空間への血漿の供給量および前記測定部で得られた血小板濃度に関する情報を入力し、処理する情報処理手段とを有し、
前記情報処理手段により、前記貯血空間への血漿の供給量と、前記血小板濃度とに基づいて、前記測定部を通過した血小板の数を求めることを特徴とする細胞数測定装置。
【０００８】
(２) 前記細胞数測定装置は、前記貯血空間に血漿を供給するポンプを有し、
前記貯血空間への血漿の供給量に関する情報は、前記ポンプの回転数に関する情報である上記（１）に記載の細胞数測定装置。
【０００９】
（３） 前記測定部は、前記流路を介して対向配置された投光部と受光部とを有し、前記投光部から発せられ、前記流路を透過した光を前記受光部で受光し、その受光光量に応じた電気信号を出力する光学センサーで構成されている上記（１）または（２）に記載の細胞数測定装置。
【００１０】
（４） 前記投光部と前記受光部との間の流路が扁平形状をなしている上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の細胞数測定装置。
【００１１】
（５） 測定された細胞数を表示する表示手段を有する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の細胞数測定装置。
【００１５】
【実施例】
以下、本発明の細胞数測定装置を添付図面に示す好適実施例に基づいて詳細に説明する。
図１は、本発明の細胞数測定装置を搭載する血液成分分離装置の構成例を示す平面図、図２は、図１に示す血液成分分離装置の制御系を示すブロック図である。まず、これらの図に基づき、血液成分分離装置の全体構成について説明する。
【００１６】
血液成分分離装置１は、遠心ボウル（遠心分離器）４と、その回転駆動装置５と、遠心ボウル４に血液および血漿を選択的に導入する第１のライン２（血液または血漿導入ライン）と、遠心ボウル４にて分離された血液成分を回収する第２のライン３（血液成分回収ライン）と、血液成分の界面を検出する光学センサー６１と、血小板の濃度を検出する光学センサー６２と、制御手段７と、血液貯留部１０６を有する第３のライン（供血者を想定した脱・返血ライン）１０と、第１のライン２に設置されたポンプ９と、表示手段７５とを有する。
【００１７】
図１に示すように、第３のライン１０は、主に、チューブ１０１と、チューブ１０１の途中にト字状の分岐コネクタ１０２を介して接続されたチューブ１０３と、チューブ１０１、１０３の先端にそれぞれ接続された血液バッグ１０４、１０５とで構成されている。両血液バッグ１０４、１０５により、血液貯留部１０６が構成されている。
【００１８】
チューブ１０１の基端は、Ｔ字状の分岐コネクタ１２を介してチューブ１３および２０の一端と接続されている。チューブ１０１の途中には、チューブ１０１の内部流路を遮断・解放し得る流路開閉手段であるバルブ８３が設置されている。
【００１９】
第１のライン２は、チューブ１３およびその一端に接続された分岐コネクタ１２により構成されている。チューブ１３の他端は、遠心ボウル４の流入口４３に接続され、チューブ１３の途中には、例えばローラポンプよりなる送液用のポンプ９が設置されている。
【００２０】
図３に示すように、遠心ボウル４は、上端に流入口４３が形成された鉛直方向に伸びる管体４１と、該管体４１の回りで回転し、上部４５に対し液密にシールされたローター４２とで構成されている。ローター４２の内部には、ローター周壁内面に沿って環状の貯血空間４６が形成されている。この貯血空間４６は、図３中下部から上部に向けてその内外径が漸減するような形状（テーパ状）をなしている。貯血空間４６の下部は、ローター４２の底部に沿って形成されたほぼ円盤状の流路４７を介して管体４１の下端開口と連通し、貯血空間４６の上部は、流路４８を介して流出口４４に連通している。また、このローター４２において、貯血空間４６の容積は、例えば、１００〜３５０ｍｌ程度とされる。
【００２１】
このようなローター４２は、回転駆動装置５によりあらかじめ設定された所定の遠心条件（回転速度および回転時間）で回転される。この遠心条件により、ローター４２内の血液の分離パターン（例えば、分離する血液成分数）を設定することができる。本実施例では、図３に示すように、血液がローター４２の流路内で内層より血漿層３１、バフィーコート層３２および赤血球層３３に分離されるように遠心条件が設定される。
【００２２】
回転駆動装置５は、図３に示すように、遠心ボウル４を収納するハウジング５１と、脚部５２と、駆動源であるモータ５３と、遠心ボウル４を保持する円盤状の固定台５５とで構成されている。
【００２３】
ハウジング５１は、脚部５２の上部に載置、固定されている。また、ハウジング５１の下面には、ボルト５６によりスペーサー５７を介してモータ５３が固定されている。モータ５３の回転軸５４の先端部には、固定台５５が回転軸５４と同軸でかつ一体的に回転するように嵌入されており、固定台５５の上部には、ローター４２の底部が嵌合する凹部５５１が形成されている。また、遠心ボウル４の上部４５は、図示しない固定部材によりハウジング５１に固定されている。
【００２４】
このような回転駆動装置５では、モータ５３を駆動すると、固定台５５およびそれに固定されたローター４２が、例えば、回転数３０００〜６０００ｒｐｍ で回転する。
【００２５】
ハウジング５１の内壁には、ローター４２内の分離された血液成分の界面、すなわち、バフィーコート層３２と赤血球（濃厚赤血球）層３３との界面Ｂの位置を光学的に検出する光学センサー６１が、取付部材５８により設置、固定されている。この光学センサー６１としては、ローター４２の外周面に沿って上下方向に走査し得るラインセンサーが用いられる。すなわち、ＬＥＤのような発光素子とフォトダイオードのような受光素子とが列状に配置され、発光素子から発っせられた光の血液成分での反射光を受光素子により受光し、その受光光量を光電変換するように構成されている。分離されたバフィーコート層３２と赤血球層３３とで反射光の強度が異なるため、受光光量すなわち出力電圧が変化した受光素子に対応する位置が、界面Ｂの位置として検出される。
【００２６】
図１に示すように、遠心ボウル４の流出口４４には、チューブ１４の一端が接続され、チューブ１４の他端は、Ｔ字状の分岐コネクタ１５を介してチューブ１６および１８の一端と接続されている。
【００２７】
チューブ１６の他端は、血小板バッグ１７に接続され、チューブ１６の途中には、チューブ１６内の流路を開閉するバルブ８５が設置されている。
また、チューブ１８の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続され、チューブ１８の途中には、チューブ１８内の流路を開閉するバルブ８６が設置されている。
【００２８】
一端が分岐コネクタ１２に接続されているチューブ２０の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続され、チューブ２０の途中には、チューブ２０内の流路を開閉するバルブ８４が設置されている。
【００２９】
空気貯留バッグ２２は、一連の処理後に血漿バッグ２１内からエアーを排出し、これを貯留するためのバッグであり、そのため、血漿バッグ２１および空気貯留バッグ２２は、チューブ２３により接続されてその内部同士が連通している。また、血漿バッグ２１には、チューブ２４の一端が接続され、チューブ２４の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続されている。
【００３０】
このような構成において、チューブ１４、１６、１８、２０、２３、２４、分岐コネクタ１５、チャンバー１９およびバッグ１７、２１、２２により、第２のライン３が構成されている。このうち、チューブ１８、チャンバー１９、チューブ２３、２４およびバッグ２１、２２は、血漿を回収するための血漿回収用分岐ラインを構成し、チューブ１４、１６および血小板バッグ１７は、血小板を回収するための血小板回収用分岐ラインを構成する。
なお、図示されていないが、血漿バッグ２１は、チューブ２４の接続側端部を上方または下方へ選択的に向けることができる装置にセットされていてもよい。
【００３１】
チューブ１４の途中には、チューブ１４内に形成された流路１４０を流れる血液成分（被検液）中の血小板の濃度を測定する測定部として、光学センサー６２が設置されている。図４は、光学センサー６２の構成を示す縦断面図である。同図に示すように、光学センサー６２は、チューブ１４を介して対向配置された投光部６３および受光部６４で構成されている。
【００３２】
投光部６３は、ケーシング６３０を有し、その内部に例えば半導体レーザのような光源６３１と、コリメータレンズ６３２とが設置されている。一方、受光部６４は、ケーシング６４０を有し、その内部にコンデンサレンズ６４２と、フォトダイオードのような受光素子６４１とが設置されている。また、投光部６３および受光部６４の対向する面側には、それぞれ、チューブ１４を挟持する透明板６３３および６４３が固定されており、それらの上部には、チューブ１４を透明板６３３、６４３間に装填する際にチューブ１４を導くテーパ状のガイド部６５が形成されている。投光部６３および受光部６４は、透明板６３３、６４３間の距離が一定に保持されるように、基台６６上に固定されている。
【００３３】
なお、透明板６３３および６４３の間隙距離Ｓは、チューブ１４の外径より小さく設定されている。これにより、チューブ１４は、透明板６３３、６４３に挟持されて、その流路１４０が扁平形状となるので、チューブ１４の図中上下方向の多少の位置ずれに対し、流路１４０におけるレーザ光Ｌの光路長を一定とすることができ、より高精度の濃度測定が可能となる。
【００３４】
なお、間隙距離Ｓは、チューブ１４の円形横断面の外径に対し、５０〜９９％程度、特に８０〜９０％程度に設定されているのが好ましい。９９％を超えると、前記扁平形状による効果が得られず、また、５０％未満であると血液成分の流れの抵抗が増大するからである。
【００３５】
また、間隙距離Ｓを可変調節可能としてもよい。例えば、赤血球数を測定する場合には、光学センサー６２の感度に対応するように、間隙距離Ｓをより小さく設定するのがよい。
【００３６】
投光部６３の光源６３１から発せられたレーザ光Ｌは、コリメートレンズ６３２により平行光束とされ、透明板６３３およびチューブ壁を透過した後、流路１４０を透過し、さらにチューブ壁および透明板６４３を透過し、コンデンサレンズ６４２により受光素子６４１の受光面上に集光される。この場合、受光素子６４１は、その受光光量に応じた電圧の電気信号を出力するが、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度に対応して流路１４０におけるレーザ光Ｌの透過率が変化するため、前記血小板濃度の変化を受光素子６４１からの出力電圧の変化として検出することができる。
なお、流路１４０の通過時のレーザ光Ｌのビーム径は、０．５〜２ｍｍ程度とするのが好ましい。
【００３７】
図５は、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度と受光素子６４１での受光光量（出力電圧）との関係を示すグラフである。このグラフに示すデータは、半導体レーザの波長：６７０ｎｍ、レーザ出力：０．８ｍＷ、レーザビーム径：１ｍｍ、チューブ１４の外径：４．４ｍｍ、チューブ壁の厚さ：０．７ｍｍ、間隙距離Ｓ：３．７ｍｍの条件下でのデータである。
【００３８】
前記各バルブ８３〜８６は、例えば、ソレノイド、電動モーター、またはシリンダ（油圧または空気圧）等の駆動源で作動し、該駆動源は、後述する制御手段７からの信号に基づいて作動する。なお、本発明において、流路開閉手段は、前記バルブ（コック）に限らず、例えば可撓性チューブを挟持してその内腔を閉塞し得るクレンメであってもよい。
【００３９】
前記各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５は、それぞれ、樹脂製の可撓性を有するシート材を重ね、その周縁部を融着（熱融着、高周波融着等）または接着して袋状にしたものである。
【００４０】
各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５を構成するシート材の構成材料としては、例えば、軟質ポリ塩化ビニルが好適に使用される。この軟質ポリ塩化ビニルにおける可塑剤としては、例えば、ジ（エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）、ジ−（ｎ−デシル）フタレート（ＤｎＤＰ）等が使用される。なお、このような可塑剤の含有量は、ポリ塩化ビニル１００重量部に対し、３０〜７０重量部程度とするのが好ましい。
【００４１】
また、各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５のシート材の他の構成材料としては、ポリオレフィン、すなわちエチレン、プロピレン、ブタジエン、イソプレン等のオレフィンあるいはジオレフィンを重合または共重合した重合体を用いることができ、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）、ＥＶＡと各種熱可塑性エラストマーとのポリマーブレンド等、あるいは、これらを任意に組み合せたものが挙げられる。さらには、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリ−１，４−シクロヘキサンジメチルテレフタレート（ＰＣＨＴ）のようなポリエステルや、ポリ塩化ビニリデンを用いることもできる。
【００４２】
なお、血小板バッグ１７を構成するシート材は、血小板保存性を向上するために、ガス透過性に優れるものが好ましく、そのために、例えば、シート材として、前記ポリオレフィンやＤｎＤＰ可塑化ポリ塩化ビニル等を用いたり、また、シート材の厚さを比較的薄く（例えば、０．１〜０．５ｍｍ程度、特に、０．１〜０．３ｍｍ程度）するのが好ましい。
【００４３】
血液バッグ１０４、１０５の少なくとも一方の内部には、予め血液が貯留されている。この血液中には、例えば、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤ液、ＣＰＤ１液、ヘパリンナトリウム液等の抗凝固剤が添加されているのが好ましい。なお、血液貯留部１０６に設置される血液バッグの数は、１または３以上であってもよく、その接続方法、接続パターンも任意可能である。例えば、実開平６−２６８７７号公報等に記載されているチューブ接続装置により、１または２以上の血液バッグを無菌的に接続、交換して使用することもできる。
また、血小板バッグ１７は、空の状態でもよいが、例えば、生理食塩水、ＧＡＣ、ＰＡＳ、ＰＳＭ−１のような血小板保存液が予め入れられていてもよい。
【００４４】
チューブ１０１、１０３、１３、１４、１６、１８、２０、２３および２４の構成材料としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ＰＥＴやＰＢＴのようなポリエステル、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリウレタン、ポリエステルエラストマー、スチレン−ブタジエン−スチレン共重合体等の熱可塑性エラストマー等が挙げられるが、その中でも特に、ポリ塩化ビニルが好ましい。各チューブがポリ塩化ビニル製であれば、十分な可撓性、柔軟性が得られるので取り扱いがし易く、また、クレンメ等による閉塞にも適するからである。
また、分岐コネクタ１０２、１２、１５の構成材料についても、前記チューブの構成材料と同様のものを用いることができる。
【００４５】
図２に示すように、血液成分分離装置１は、例えばマイクロコンピュータで構成される制御手段（ＣＰＵ）７を有し、この制御手段７は、演算部（情報処理手段）７１およびメモリー７２を有している。この制御手段７には、前記ポンプ９、バルブ８３〜８６、回転駆動装置５および表示手段７５がそれぞれ電気的に接続されており、また、光学センサー６１、６２が、それぞれ、信号処理回路６７、６８を介して電気的に接続されている。本発明の細胞数測定装置６は、流路１４０を構成するチューブ１４、光学センサー（測定部）６２、信号処理回路６８、演算部（情報処理手段）７１および表示手段７５で構成されている。
【００４６】
信号処理回路６７、６８は、それぞれ、光学センサー６１、６２からのアナログ信号をデジタル信号に変換した後、クロックパルスに従った信号のサンプリング等の所望の信号処理を施す回路である。信号処理回路６７、６８から一定の周期で出力された信号は、演算部７１に入力される。また、メモリー７２から読み出されたポンプ９の吐出量等に関する所定の信号も、演算部７１に入力される。
【００４７】
表示手段７５としては、例えば、発光素子アレイ、液晶表示素子（ＬＣＤ）、ＣＲＴ等を用いることができる。なお、表示手段７５に加え、またはこれに代わり、音声による報知やプリンターによる表示内容の印字を行うような構成としてもよい。
【００４８】
光学センサー６１からの信号（界面位置検出情報）および光学センサー６２からの信号（血小板濃度情報）は、それぞれ、信号処理回路６７、６８で所望に信号処理された後、制御手段７へ随時入力される。制御手段７は、光学センサー６１、６２からの各信号に基づき、メモリー７２に予め記憶されているプログラムに従って、ポンプ９の回転／停止、回転方向（正転／逆転）および回転数を制御するとともに、必要に応じ、各バルブ８３〜８６の開閉および回転駆動装置５の作動を制御する。また、演算部７１は、光学センサー６２からの血小板濃度に関する情報とポンプ９の吐出量（後述するサージ工程における流路１４０を流れる血液成分の流量に対応する情報）とから、後述するようにして血小板数を求め、この血小板数を表示手段７５に表示する。
【００４９】
次に、図１に示す血液成分分離装置１を用いた血液成分分離移送方法および本発明の血小板数測定装置の作動について説明する。
【００５０】
［１］ 血液バッグ１０４、１０５内には、それぞれ、例えば４００ｍｌの採血血液が充填されており、チューブ１０３をクレンメで閉塞し、バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉とした状態で、ポンプ９を作動（正転）する。これにより、血液バッグ１０４内の血液は、チューブ１０１および１３を介して移送され、遠心ボウル４の流入口４３より管体４１を経てローター４２内に導入される。なお、ポンプ９の回転速度は、血液吐出量（血液供給速度）が例えば３０〜８０ｍｌ／ｍｉｎ 程度となるように設定される。
【００５１】
［２］ また、前記工程［１］の血液移送と同時に、回転駆動装置５を作動して、ローター４２を好ましくは３０００〜６０００ｒｐｍ （例えば、４８００ｒｐｍ ）で回転する。管体４１の下端開口より流出した血液は、ローター４２の回転による遠心力により、流路４７を外周方向へ向けて放射状に流れ、貯血空間４６に集められ、該貯血空間４６において内層より血漿層３１、バフィーコート層３２および赤血球層３３に分離される。
【００５２】
［３］ 前記工程［１］、［２］を継続しつつ、血漿層３１が貯血空間４６の上部に到達したら、バルブ８５を閉じ、バルブ８６を開く。これにより、ローター４２内の血漿が流出口４４よりオーバーフローし、チューブ１４、１８、チャンバー１９、チューブ２４を介して血漿バッグ２１内に回収される。
【００５３】
［４］ ローター４２内からの血漿の排出に伴い、バフィーコート層３２と赤血球層３３との界面Ｂも徐々に上昇する。この界面Ｂは、光学センサー６１により随時検出されており、界面Ｂが所定レベル（サージ開始レベル）に到達したことが検出されると、制御手段７は、その検出信号（界面位置検出情報）に基づき、ポンプ９の回転を停止するよう制御する。これにより、血液の移送および血漿の回収が終了する。
【００５４】
［５］ 続いて、制御手段７の制御により、バルブ８４、８５を開、その他のバルブを閉とし、かつ再度ポンプ９を作動（正転）するとともに、血漿バッグ２１のチューブ２４の接続側端部を下方に向け、血漿バッグ２１内の血漿を、チューブ２４、チャンバー１９、チューブ２０、１３および管体４１を介してローター４２内に供給する。管体４１の下端開口より流出した血漿は、ローター４２の回転による遠心力により、流路４７を外周方向へ向けて放射状に流れ、貯血空間４６の下部を経て貯血空間４６内を上昇する。これにより、バフィーコート層３２中の血小板が遠心力に抗して浮上し（舞い上がり）、この血小板が血漿とともに流路４８を経て流出口４４より流出し、チューブ１４および１６を介して血小板バッグ１７内に回収される（サージ工程）。
【００５５】
このサージ工程において、制御手段７は、ポンプ９の回転速度（血漿吐出量）を制御し、ローター４２内への血漿の供給速度を設定する。この場合、血漿供給速度は、例えば１００ｍｌ／ｍｉｎ 以下の所定値に設定される。なお、図６に示すように、血小板の回収中において、血漿供給速度、すなわちローター４２から流出する血液成分の流量を適宜変更してもよく、以下この例で説明する。また、このサージ工程において、ローター４２の回転数は、前記工程［１］と同一でも異なっていてもよい。
【００５６】
このようなサージ工程においては、ローター４２より流出しチューブ１４内の流路１４０を流れる血液成分（血小板血漿）中の血小板濃度を光学センサー６２により随時測定し、制御手段７の演算部７１へ入力するとともに、ポンプ９の吐出量に関する情報も演算部７１へ入力される。演算部７１においては、以下のようにして血小板総数を求める。
【００５７】
単位体積当りの血小板数Ｍは、次式１で示される。式１中、Ａは、血小板数が０のときのセンサー６２の出力電圧（図５では約４Ｖ）、ａは、測定中のセンサー６２の実際の出力電圧、ｋは、実験的に求められる定数である。
【００５８】
Ｍ＝ｋ×（Ａ−ａ） ・・・（式１）
【００５９】
また、流路１４０を流れる血液成分の流量は、貯血空間４６へ血漿を供給するポンプ９の回転数（吐出量）に対応しており、その変化は、例えば図６に示すようなパターンとなる。この場合、微小時間においては、血液成分の流量は、一定と考えられる。
【００６０】
一方、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度の変化に対応する光学センサー６２での受光光量の変化は、図７に示すように、経時的に変化する所定の関数となっている。この関数の曲線の方程式をＦ（ｔ）とすると、血小板バッグ１７に回収される血小板総数Ｐｌｔ（ｔ）は、次式２で示される。
【００６１】
Ｐｌｔ（ｔ）＝血小板数Ｍ×血液成分通過量 ・・・（式２）
【００６２】
なお、光学センサー６２での受光光量の変化の割合は、比較的小さいので、血液成分通過量は、１秒間当りの血液成分量とすることができる。また、図６に示すように、流路１４０を流れる血液成分の流量（ポンプ９の吐出量で換算）は、予めＱ１ 〜Ｑ５ の５段階に設定されており、流量Ｑ（ｎ）（ｎ＝１〜５）で表すと、血液成分通過量は、｛Ｑ（ｎ）／６０｝×１０３ μｌ となることから、上記式２は、次式３となる。
【００６３】
【数１】
【００６４】
ここで、ｋ、Ａ、Ｑ（ｎ）は、既知の値であることから、１回の処理で得られる血小板総数Ｎ１ は、光学センサー６２での受光光量を示すＦ（ｔ）値を少なくとも１秒毎にモニターし、その値を上記式３に代入して演算することにより、求めることができる。求められた血小板総数Ｎ１ は、表示手段７５に表示される。
【００６５】
［６］ 血漿の供給開始から所定時間（例えば１２０秒）経過したら、血小板バッグ１７への血小板の回収が終了したものとみなし、制御手段７の制御により、ポンプ９を停止してローター４２内への血漿の供給を停止し、さらに回転駆動装置５を停止する。これにより、サージ工程による血小板の回収が終了する。
【００６６】
［７］ バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉とし、ポンプ９を逆回転する。これにより、遠心ボウル４内に残った赤血球、白血球および少量の血漿が、管体４１、チューブ１３、１０１を介して、血液バッグ１０４内に返血される。
【００６７】
また、本工程の後またはその途中で、バルブ８４、８６を開、その他のバルブを閉としてポンプ９を作動（正転）し、血漿バッグ２１内の血漿をチューブ２４、チャンバー１９、チューブ２０、１３を介してローター４２内に入れ、続いて、バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉としてポンプ９を逆回転し、血漿バッグ２１から移した遠心ボウル４内の血漿を、管体４１、チューブ１３、１０１を介して、血液バッグ１０４内に返血してもよい。
【００６８】
［８］ 分岐コネクタ１０２と血液バッグ１０４との間のチューブ１０１の途中を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離する。これにより、返血用乏血小板血液入りの血液バッグ１０４が得られる。血液バッグ１０４内の乏血小板血液は、必要に応じ、供血者に返血される。
【００６９】
［９］ チューブ１０３のクレンメによる閉塞を解除し、ポンプ９を作動（正転）して、前記工程［１］を行い、さらに前記工程［２］〜［７］を行う。これにより、血液バッグ１０５内の採血血液に対し、血小板バッグ１７への２回目の血小板の回収およびその他の血液成分の血液バッグ１０５への返血がなされる。
【００７０】
この２回目の血小板回収においても、前記と同様にして回収される血小板総数Ｎ２ を求め、これを表示手段７５に表示する。また、前記血小板総数Ｎ１ と血小板総数Ｎ２ との合計Ｎ＝Ｎ１ ＋Ｎ２ を表示することもできる。
【００７１】
［１０］ チューブ１０３の途中を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離する。これにより、返血用乏血小板血液入りの血液バッグ１０５が得られる。血液バッグ１０５内の乏血小板血液は、必要に応じ、供血者に返血される。
【００７２】
［１１］ 血小板バッグ１７付近のチューブ１６を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離することにより、血小板製剤入りの血小板バッグ１７が得られる。
【００７３】
以上のように、本発明では、血小板バッグ１７に回収された血小板数を、血液処理工程中にリアルタイムに測定することができる。従って、最小処理回数で血小板の採取目標数（単位数）に到達させることができ、供血者の負担軽減、処理血液の節減、処理時間の短縮化を図ることができる。しかも、回収された血小板をサンプリング等をすることなく、閉鎖系で血小板数の測定を行うことができるので、塵や細菌の侵入等による汚染の問題も生じず、安全性が高い。
なお、血小板数の演算方法は、前述した方法に限らないことは言うまでもない。
【００７４】
また、光学センサー（測定部）６２は、他の位置、例えばチューブ１６の途中に設けられていてもよい。
また、前記実施例では、流路１４０を流れる血液成分の流量を、サージ工程におけるポンプ９の吐出量として把握しているが、これに限らず、例えば、チューブ１３、１４または１６の途中等に流量計を設け、該流量計で得た情報を用いてもよい。
【００７５】
本発明の細胞数測定装置は、前述したような血液成分分離装置に搭載されているものに限られず、その他の装置に搭載されているものまたはそれ自体単独で使用されるものであってもよい。
【００７６】
また、本発明は、血小板数の測定に限らず、例えば、白血球、赤血球等の血球数の測定やその他の細胞数の測定に適用することもできる。
また、測定部における細胞濃度測定は、前述したような光学センサーによらず、例えば、被検液が電解質の場合、その導電性を測定することにより細胞濃度を測定するような構成であってもよい。
【００７７】
また、流路に沿って測定部を複数設け、各測定部で得られた測定値のそれぞれまたはそれらの例えば平均値を血小板数の演算に利用するような構成としてもよい。
【００７８】
また、本発明では、求められた血小板数に基づいて、血液成分分離装置の作動を制御することもできる。例えば、血小板バッグ１７に回収される血小板数が目標値に到達したら、血小板回収動作を停止し、返血動作へ移行するような自動制御を行うこともできる。
【００７９】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明の細胞数測定装置によれば、細胞数をリアルタイムに測定することができる。従って、例えば、血小板製剤を製造する際に、採取された血小板数を血液処理中に知ることができ、これにより最小血液処理回数で血小板の採取目標数に到達させることができるので、供血者の負担軽減、処理血液の節減、処理時間の短縮化を図ることができる。
【００８０】
また、血小板等の細胞をサンプリングすることなく、閉鎖系で測定を行うことができるので、空気との接触による変質、劣化や、塵、細菌の侵入等による汚染の問題も生じない。
【００８１】
また、測定部を、投光部と受光部とを有する光学センサーで構成し、特に投光部と受光部との間の流路を扁平形状とすることにより、より正確な細胞濃度の測定が可能となり、高精度の細胞数測定が実現する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞数測定装置を搭載した血液成分分離装置の構成例を模式的に示す平面図である。
【図２】図１に示す血液成分分離装置の制御系を示すブロック図である。
【図３】図１に示す血液成分分離装置における遠心ボウルおよび回転駆動装置の構成例を示す部分断面正面図である。
【図４】測定部（光学センサー）の構成例を示す断面正面図である。
【図５】測定部における血液成分中の血小板濃度と光学センサーの受光光量との関係を示すグラフである。
【図６】サージ工程（血小板回収工程）における、流路を流れる血液成分の流量の経時変化を示すグラフである。
【図７】サージ工程（血小板回収工程）における、光学センサーの受光光量（血液成分中の血小板濃度）の経時変化を示すグラフである。
【符号の説明】
１ 血液成分分離移送装置
２ 第１のライン
３ 第２のライン
４ 遠心ボウル
４１ 管体
４２ ローター
４３ 流入口
４４ 流出口
４５ 上部
４６ 貯血空間
４７、４８ 流路
５ 回転駆動装置
５１ ハウジング
５２ 脚部
５３ モータ
５４ 回転軸
５５ 固定台
５５１ 凹部
５６ ボルト
５７ スペーサー
５８ 取付部材
６ 細胞数測定装置
６１、６２ 光学センサー
６３ 投光部
６３０ ケーシング
６３１ 光源
６３２ コリメータレンズ
６３３ 透明板
６４ 受光部
６４０ ケーシング
６４１ 受光素子
６４２ コンデンサレンズ
６４３ 透明板
６５ ガイド部
６６ 基台
６７、６８ 信号処理回路
７ 制御手段
７１ 演算部
７２ メモリー
７５ 表示手段
８３〜８６ バルブ
９ ポンプ
１０ 第３のライン
１０１ チューブ
１０２ 分岐コネクタ
１０３ チューブ
１０４、１０５ 血液バッグ
１０６ 血液貯留部
１２ 分岐コネクタ
１３、１４ チューブ
１４０ 流路
１５ 分岐コネクタ
１６ チューブ
１７ 血小板バッグ
１８ チューブ
１９ チャンバー
２０ チューブ
２１ 血漿バッグ
２２ 空気貯留バッグ
２３、２４ チューブ
３１ 血漿層
３２ バフィーコート層
３３ 赤血球層
Ｂ 界面
Ｌ レーザ光
【産業上の利用分野】
本発明は、被検液中の細胞数を測定する細胞数測定装置、特に、血液成分中の血球または血小板の数を測定する細胞数測定装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
採血を行う場合、現在では、血液の有効利用および供血者の負担軽減などの理由から、採血血液を遠心分離などにより各血液成分に分離し、輸血者に必要な成分だけを採取し、その他の成分は供血者に返還する成分採血が行われている。
【０００３】
このような成分採血において、血小板製剤を得る場合、供血者から採血した血液を血液成分分離回路に導入し、該血液成分分離回路に設置された遠心ボウルと呼ばれる遠心分離器により、血漿、白血球、血小板および赤血球の４成分に分離し、その内の血小板をバッグ等の容器に回収して血小板製剤とし、残りの血漿、白血球および赤血球は、供血者に返血することが行われる。そして、より多くの血小板数を確保するために、前記採血、採血血液の遠心分離、血小板の回収および返血の工程を複数回繰り返し行う。
【０００４】
この場合、得られた血小板製剤中の血小板数を知る必要があり、そのため、全ての処理が終了した後、バッグ内に回収された濃厚血小板血漿をサンプリングして血小板数を測定し、バッグ内全体の血小板数を計算により求めていた。
【０００５】
しかしながら、このような方法では、採血や血液処理工程中に、どの程度の量の血小板が採取されたのかを知ることができないという欠点がある。そのため、血小板数の目標値（例えば５、１０、１５または２０単位の血小板）に到達しているか否かが判断できず、血小板を目標値より過剰に採取することがあり、供血者の負担が増大する等の問題が生じる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、血小板等の細胞の数をリアルタイムに測定することができる細胞数測定装置を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
このような目的は、下記（１）〜（５）の本発明により達成される。
（１） 内部に貯血空間が形成された回転可能なローターと、前記貯血空間に連通する流入口および流出口とを有し、前記ローターの回転により前記流入口より導入された血液を前記貯血空間内で複数の血液成分に遠心分離する遠心分離器に対し、前記ローターの回転下で、複数に分離された血液成分を有する前記貯血空間に下方より血漿を供給して血小板を浮上させ、前記流出口より血漿とともに流出した血小板の数を測定する細胞数測定装置であって、
前記流出口に接続された流路と、前記流路の途中に設置され、前記流路を流れる血漿中の血小板濃度を測定する測定部と、前記貯血空間への血漿の供給量および前記測定部で得られた血小板濃度に関する情報を入力し、処理する情報処理手段とを有し、
前記情報処理手段により、前記貯血空間への血漿の供給量と、前記血小板濃度とに基づいて、前記測定部を通過した血小板の数を求めることを特徴とする細胞数測定装置。
【０００８】
(２) 前記細胞数測定装置は、前記貯血空間に血漿を供給するポンプを有し、
前記貯血空間への血漿の供給量に関する情報は、前記ポンプの回転数に関する情報である上記（１）に記載の細胞数測定装置。
【０００９】
（３） 前記測定部は、前記流路を介して対向配置された投光部と受光部とを有し、前記投光部から発せられ、前記流路を透過した光を前記受光部で受光し、その受光光量に応じた電気信号を出力する光学センサーで構成されている上記（１）または（２）に記載の細胞数測定装置。
【００１０】
（４） 前記投光部と前記受光部との間の流路が扁平形状をなしている上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の細胞数測定装置。
【００１１】
（５） 測定された細胞数を表示する表示手段を有する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の細胞数測定装置。
【００１５】
【実施例】
以下、本発明の細胞数測定装置を添付図面に示す好適実施例に基づいて詳細に説明する。
図１は、本発明の細胞数測定装置を搭載する血液成分分離装置の構成例を示す平面図、図２は、図１に示す血液成分分離装置の制御系を示すブロック図である。まず、これらの図に基づき、血液成分分離装置の全体構成について説明する。
【００１６】
血液成分分離装置１は、遠心ボウル（遠心分離器）４と、その回転駆動装置５と、遠心ボウル４に血液および血漿を選択的に導入する第１のライン２（血液または血漿導入ライン）と、遠心ボウル４にて分離された血液成分を回収する第２のライン３（血液成分回収ライン）と、血液成分の界面を検出する光学センサー６１と、血小板の濃度を検出する光学センサー６２と、制御手段７と、血液貯留部１０６を有する第３のライン（供血者を想定した脱・返血ライン）１０と、第１のライン２に設置されたポンプ９と、表示手段７５とを有する。
【００１７】
図１に示すように、第３のライン１０は、主に、チューブ１０１と、チューブ１０１の途中にト字状の分岐コネクタ１０２を介して接続されたチューブ１０３と、チューブ１０１、１０３の先端にそれぞれ接続された血液バッグ１０４、１０５とで構成されている。両血液バッグ１０４、１０５により、血液貯留部１０６が構成されている。
【００１８】
チューブ１０１の基端は、Ｔ字状の分岐コネクタ１２を介してチューブ１３および２０の一端と接続されている。チューブ１０１の途中には、チューブ１０１の内部流路を遮断・解放し得る流路開閉手段であるバルブ８３が設置されている。
【００１９】
第１のライン２は、チューブ１３およびその一端に接続された分岐コネクタ１２により構成されている。チューブ１３の他端は、遠心ボウル４の流入口４３に接続され、チューブ１３の途中には、例えばローラポンプよりなる送液用のポンプ９が設置されている。
【００２０】
図３に示すように、遠心ボウル４は、上端に流入口４３が形成された鉛直方向に伸びる管体４１と、該管体４１の回りで回転し、上部４５に対し液密にシールされたローター４２とで構成されている。ローター４２の内部には、ローター周壁内面に沿って環状の貯血空間４６が形成されている。この貯血空間４６は、図３中下部から上部に向けてその内外径が漸減するような形状（テーパ状）をなしている。貯血空間４６の下部は、ローター４２の底部に沿って形成されたほぼ円盤状の流路４７を介して管体４１の下端開口と連通し、貯血空間４６の上部は、流路４８を介して流出口４４に連通している。また、このローター４２において、貯血空間４６の容積は、例えば、１００〜３５０ｍｌ程度とされる。
【００２１】
このようなローター４２は、回転駆動装置５によりあらかじめ設定された所定の遠心条件（回転速度および回転時間）で回転される。この遠心条件により、ローター４２内の血液の分離パターン（例えば、分離する血液成分数）を設定することができる。本実施例では、図３に示すように、血液がローター４２の流路内で内層より血漿層３１、バフィーコート層３２および赤血球層３３に分離されるように遠心条件が設定される。
【００２２】
回転駆動装置５は、図３に示すように、遠心ボウル４を収納するハウジング５１と、脚部５２と、駆動源であるモータ５３と、遠心ボウル４を保持する円盤状の固定台５５とで構成されている。
【００２３】
ハウジング５１は、脚部５２の上部に載置、固定されている。また、ハウジング５１の下面には、ボルト５６によりスペーサー５７を介してモータ５３が固定されている。モータ５３の回転軸５４の先端部には、固定台５５が回転軸５４と同軸でかつ一体的に回転するように嵌入されており、固定台５５の上部には、ローター４２の底部が嵌合する凹部５５１が形成されている。また、遠心ボウル４の上部４５は、図示しない固定部材によりハウジング５１に固定されている。
【００２４】
このような回転駆動装置５では、モータ５３を駆動すると、固定台５５およびそれに固定されたローター４２が、例えば、回転数３０００〜６０００ｒｐｍ で回転する。
【００２５】
ハウジング５１の内壁には、ローター４２内の分離された血液成分の界面、すなわち、バフィーコート層３２と赤血球（濃厚赤血球）層３３との界面Ｂの位置を光学的に検出する光学センサー６１が、取付部材５８により設置、固定されている。この光学センサー６１としては、ローター４２の外周面に沿って上下方向に走査し得るラインセンサーが用いられる。すなわち、ＬＥＤのような発光素子とフォトダイオードのような受光素子とが列状に配置され、発光素子から発っせられた光の血液成分での反射光を受光素子により受光し、その受光光量を光電変換するように構成されている。分離されたバフィーコート層３２と赤血球層３３とで反射光の強度が異なるため、受光光量すなわち出力電圧が変化した受光素子に対応する位置が、界面Ｂの位置として検出される。
【００２６】
図１に示すように、遠心ボウル４の流出口４４には、チューブ１４の一端が接続され、チューブ１４の他端は、Ｔ字状の分岐コネクタ１５を介してチューブ１６および１８の一端と接続されている。
【００２７】
チューブ１６の他端は、血小板バッグ１７に接続され、チューブ１６の途中には、チューブ１６内の流路を開閉するバルブ８５が設置されている。
また、チューブ１８の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続され、チューブ１８の途中には、チューブ１８内の流路を開閉するバルブ８６が設置されている。
【００２８】
一端が分岐コネクタ１２に接続されているチューブ２０の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続され、チューブ２０の途中には、チューブ２０内の流路を開閉するバルブ８４が設置されている。
【００２９】
空気貯留バッグ２２は、一連の処理後に血漿バッグ２１内からエアーを排出し、これを貯留するためのバッグであり、そのため、血漿バッグ２１および空気貯留バッグ２２は、チューブ２３により接続されてその内部同士が連通している。また、血漿バッグ２１には、チューブ２４の一端が接続され、チューブ２４の他端は、気泡除去用のチャンバー１９に接続されている。
【００３０】
このような構成において、チューブ１４、１６、１８、２０、２３、２４、分岐コネクタ１５、チャンバー１９およびバッグ１７、２１、２２により、第２のライン３が構成されている。このうち、チューブ１８、チャンバー１９、チューブ２３、２４およびバッグ２１、２２は、血漿を回収するための血漿回収用分岐ラインを構成し、チューブ１４、１６および血小板バッグ１７は、血小板を回収するための血小板回収用分岐ラインを構成する。
なお、図示されていないが、血漿バッグ２１は、チューブ２４の接続側端部を上方または下方へ選択的に向けることができる装置にセットされていてもよい。
【００３１】
チューブ１４の途中には、チューブ１４内に形成された流路１４０を流れる血液成分（被検液）中の血小板の濃度を測定する測定部として、光学センサー６２が設置されている。図４は、光学センサー６２の構成を示す縦断面図である。同図に示すように、光学センサー６２は、チューブ１４を介して対向配置された投光部６３および受光部６４で構成されている。
【００３２】
投光部６３は、ケーシング６３０を有し、その内部に例えば半導体レーザのような光源６３１と、コリメータレンズ６３２とが設置されている。一方、受光部６４は、ケーシング６４０を有し、その内部にコンデンサレンズ６４２と、フォトダイオードのような受光素子６４１とが設置されている。また、投光部６３および受光部６４の対向する面側には、それぞれ、チューブ１４を挟持する透明板６３３および６４３が固定されており、それらの上部には、チューブ１４を透明板６３３、６４３間に装填する際にチューブ１４を導くテーパ状のガイド部６５が形成されている。投光部６３および受光部６４は、透明板６３３、６４３間の距離が一定に保持されるように、基台６６上に固定されている。
【００３３】
なお、透明板６３３および６４３の間隙距離Ｓは、チューブ１４の外径より小さく設定されている。これにより、チューブ１４は、透明板６３３、６４３に挟持されて、その流路１４０が扁平形状となるので、チューブ１４の図中上下方向の多少の位置ずれに対し、流路１４０におけるレーザ光Ｌの光路長を一定とすることができ、より高精度の濃度測定が可能となる。
【００３４】
なお、間隙距離Ｓは、チューブ１４の円形横断面の外径に対し、５０〜９９％程度、特に８０〜９０％程度に設定されているのが好ましい。９９％を超えると、前記扁平形状による効果が得られず、また、５０％未満であると血液成分の流れの抵抗が増大するからである。
【００３５】
また、間隙距離Ｓを可変調節可能としてもよい。例えば、赤血球数を測定する場合には、光学センサー６２の感度に対応するように、間隙距離Ｓをより小さく設定するのがよい。
【００３６】
投光部６３の光源６３１から発せられたレーザ光Ｌは、コリメートレンズ６３２により平行光束とされ、透明板６３３およびチューブ壁を透過した後、流路１４０を透過し、さらにチューブ壁および透明板６４３を透過し、コンデンサレンズ６４２により受光素子６４１の受光面上に集光される。この場合、受光素子６４１は、その受光光量に応じた電圧の電気信号を出力するが、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度に対応して流路１４０におけるレーザ光Ｌの透過率が変化するため、前記血小板濃度の変化を受光素子６４１からの出力電圧の変化として検出することができる。
なお、流路１４０の通過時のレーザ光Ｌのビーム径は、０．５〜２ｍｍ程度とするのが好ましい。
【００３７】
図５は、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度と受光素子６４１での受光光量（出力電圧）との関係を示すグラフである。このグラフに示すデータは、半導体レーザの波長：６７０ｎｍ、レーザ出力：０．８ｍＷ、レーザビーム径：１ｍｍ、チューブ１４の外径：４．４ｍｍ、チューブ壁の厚さ：０．７ｍｍ、間隙距離Ｓ：３．７ｍｍの条件下でのデータである。
【００３８】
前記各バルブ８３〜８６は、例えば、ソレノイド、電動モーター、またはシリンダ（油圧または空気圧）等の駆動源で作動し、該駆動源は、後述する制御手段７からの信号に基づいて作動する。なお、本発明において、流路開閉手段は、前記バルブ（コック）に限らず、例えば可撓性チューブを挟持してその内腔を閉塞し得るクレンメであってもよい。
【００３９】
前記各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５は、それぞれ、樹脂製の可撓性を有するシート材を重ね、その周縁部を融着（熱融着、高周波融着等）または接着して袋状にしたものである。
【００４０】
各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５を構成するシート材の構成材料としては、例えば、軟質ポリ塩化ビニルが好適に使用される。この軟質ポリ塩化ビニルにおける可塑剤としては、例えば、ジ（エチルヘキシル）フタレート（ＤＥＨＰ）、ジ−（ｎ−デシル）フタレート（ＤｎＤＰ）等が使用される。なお、このような可塑剤の含有量は、ポリ塩化ビニル１００重量部に対し、３０〜７０重量部程度とするのが好ましい。
【００４１】
また、各バッグ１７、２１、２２、１０４、１０５のシート材の他の構成材料としては、ポリオレフィン、すなわちエチレン、プロピレン、ブタジエン、イソプレン等のオレフィンあるいはジオレフィンを重合または共重合した重合体を用いることができ、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）、ＥＶＡと各種熱可塑性エラストマーとのポリマーブレンド等、あるいは、これらを任意に組み合せたものが挙げられる。さらには、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリ−１，４−シクロヘキサンジメチルテレフタレート（ＰＣＨＴ）のようなポリエステルや、ポリ塩化ビニリデンを用いることもできる。
【００４２】
なお、血小板バッグ１７を構成するシート材は、血小板保存性を向上するために、ガス透過性に優れるものが好ましく、そのために、例えば、シート材として、前記ポリオレフィンやＤｎＤＰ可塑化ポリ塩化ビニル等を用いたり、また、シート材の厚さを比較的薄く（例えば、０．１〜０．５ｍｍ程度、特に、０．１〜０．３ｍｍ程度）するのが好ましい。
【００４３】
血液バッグ１０４、１０５の少なくとも一方の内部には、予め血液が貯留されている。この血液中には、例えば、ＡＣＤ−Ａ液、ＣＰＤ液、ＣＰＤ１液、ヘパリンナトリウム液等の抗凝固剤が添加されているのが好ましい。なお、血液貯留部１０６に設置される血液バッグの数は、１または３以上であってもよく、その接続方法、接続パターンも任意可能である。例えば、実開平６−２６８７７号公報等に記載されているチューブ接続装置により、１または２以上の血液バッグを無菌的に接続、交換して使用することもできる。
また、血小板バッグ１７は、空の状態でもよいが、例えば、生理食塩水、ＧＡＣ、ＰＡＳ、ＰＳＭ−１のような血小板保存液が予め入れられていてもよい。
【００４４】
チューブ１０１、１０３、１３、１４、１６、１８、２０、２３および２４の構成材料としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ＰＥＴやＰＢＴのようなポリエステル、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリウレタン、ポリエステルエラストマー、スチレン−ブタジエン−スチレン共重合体等の熱可塑性エラストマー等が挙げられるが、その中でも特に、ポリ塩化ビニルが好ましい。各チューブがポリ塩化ビニル製であれば、十分な可撓性、柔軟性が得られるので取り扱いがし易く、また、クレンメ等による閉塞にも適するからである。
また、分岐コネクタ１０２、１２、１５の構成材料についても、前記チューブの構成材料と同様のものを用いることができる。
【００４５】
図２に示すように、血液成分分離装置１は、例えばマイクロコンピュータで構成される制御手段（ＣＰＵ）７を有し、この制御手段７は、演算部（情報処理手段）７１およびメモリー７２を有している。この制御手段７には、前記ポンプ９、バルブ８３〜８６、回転駆動装置５および表示手段７５がそれぞれ電気的に接続されており、また、光学センサー６１、６２が、それぞれ、信号処理回路６７、６８を介して電気的に接続されている。本発明の細胞数測定装置６は、流路１４０を構成するチューブ１４、光学センサー（測定部）６２、信号処理回路６８、演算部（情報処理手段）７１および表示手段７５で構成されている。
【００４６】
信号処理回路６７、６８は、それぞれ、光学センサー６１、６２からのアナログ信号をデジタル信号に変換した後、クロックパルスに従った信号のサンプリング等の所望の信号処理を施す回路である。信号処理回路６７、６８から一定の周期で出力された信号は、演算部７１に入力される。また、メモリー７２から読み出されたポンプ９の吐出量等に関する所定の信号も、演算部７１に入力される。
【００４７】
表示手段７５としては、例えば、発光素子アレイ、液晶表示素子（ＬＣＤ）、ＣＲＴ等を用いることができる。なお、表示手段７５に加え、またはこれに代わり、音声による報知やプリンターによる表示内容の印字を行うような構成としてもよい。
【００４８】
光学センサー６１からの信号（界面位置検出情報）および光学センサー６２からの信号（血小板濃度情報）は、それぞれ、信号処理回路６７、６８で所望に信号処理された後、制御手段７へ随時入力される。制御手段７は、光学センサー６１、６２からの各信号に基づき、メモリー７２に予め記憶されているプログラムに従って、ポンプ９の回転／停止、回転方向（正転／逆転）および回転数を制御するとともに、必要に応じ、各バルブ８３〜８６の開閉および回転駆動装置５の作動を制御する。また、演算部７１は、光学センサー６２からの血小板濃度に関する情報とポンプ９の吐出量（後述するサージ工程における流路１４０を流れる血液成分の流量に対応する情報）とから、後述するようにして血小板数を求め、この血小板数を表示手段７５に表示する。
【００４９】
次に、図１に示す血液成分分離装置１を用いた血液成分分離移送方法および本発明の血小板数測定装置の作動について説明する。
【００５０】
［１］ 血液バッグ１０４、１０５内には、それぞれ、例えば４００ｍｌの採血血液が充填されており、チューブ１０３をクレンメで閉塞し、バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉とした状態で、ポンプ９を作動（正転）する。これにより、血液バッグ１０４内の血液は、チューブ１０１および１３を介して移送され、遠心ボウル４の流入口４３より管体４１を経てローター４２内に導入される。なお、ポンプ９の回転速度は、血液吐出量（血液供給速度）が例えば３０〜８０ｍｌ／ｍｉｎ 程度となるように設定される。
【００５１】
［２］ また、前記工程［１］の血液移送と同時に、回転駆動装置５を作動して、ローター４２を好ましくは３０００〜６０００ｒｐｍ （例えば、４８００ｒｐｍ ）で回転する。管体４１の下端開口より流出した血液は、ローター４２の回転による遠心力により、流路４７を外周方向へ向けて放射状に流れ、貯血空間４６に集められ、該貯血空間４６において内層より血漿層３１、バフィーコート層３２および赤血球層３３に分離される。
【００５２】
［３］ 前記工程［１］、［２］を継続しつつ、血漿層３１が貯血空間４６の上部に到達したら、バルブ８５を閉じ、バルブ８６を開く。これにより、ローター４２内の血漿が流出口４４よりオーバーフローし、チューブ１４、１８、チャンバー１９、チューブ２４を介して血漿バッグ２１内に回収される。
【００５３】
［４］ ローター４２内からの血漿の排出に伴い、バフィーコート層３２と赤血球層３３との界面Ｂも徐々に上昇する。この界面Ｂは、光学センサー６１により随時検出されており、界面Ｂが所定レベル（サージ開始レベル）に到達したことが検出されると、制御手段７は、その検出信号（界面位置検出情報）に基づき、ポンプ９の回転を停止するよう制御する。これにより、血液の移送および血漿の回収が終了する。
【００５４】
［５］ 続いて、制御手段７の制御により、バルブ８４、８５を開、その他のバルブを閉とし、かつ再度ポンプ９を作動（正転）するとともに、血漿バッグ２１のチューブ２４の接続側端部を下方に向け、血漿バッグ２１内の血漿を、チューブ２４、チャンバー１９、チューブ２０、１３および管体４１を介してローター４２内に供給する。管体４１の下端開口より流出した血漿は、ローター４２の回転による遠心力により、流路４７を外周方向へ向けて放射状に流れ、貯血空間４６の下部を経て貯血空間４６内を上昇する。これにより、バフィーコート層３２中の血小板が遠心力に抗して浮上し（舞い上がり）、この血小板が血漿とともに流路４８を経て流出口４４より流出し、チューブ１４および１６を介して血小板バッグ１７内に回収される（サージ工程）。
【００５５】
このサージ工程において、制御手段７は、ポンプ９の回転速度（血漿吐出量）を制御し、ローター４２内への血漿の供給速度を設定する。この場合、血漿供給速度は、例えば１００ｍｌ／ｍｉｎ 以下の所定値に設定される。なお、図６に示すように、血小板の回収中において、血漿供給速度、すなわちローター４２から流出する血液成分の流量を適宜変更してもよく、以下この例で説明する。また、このサージ工程において、ローター４２の回転数は、前記工程［１］と同一でも異なっていてもよい。
【００５６】
このようなサージ工程においては、ローター４２より流出しチューブ１４内の流路１４０を流れる血液成分（血小板血漿）中の血小板濃度を光学センサー６２により随時測定し、制御手段７の演算部７１へ入力するとともに、ポンプ９の吐出量に関する情報も演算部７１へ入力される。演算部７１においては、以下のようにして血小板総数を求める。
【００５７】
単位体積当りの血小板数Ｍは、次式１で示される。式１中、Ａは、血小板数が０のときのセンサー６２の出力電圧（図５では約４Ｖ）、ａは、測定中のセンサー６２の実際の出力電圧、ｋは、実験的に求められる定数である。
【００５８】
Ｍ＝ｋ×（Ａ−ａ） ・・・（式１）
【００５９】
また、流路１４０を流れる血液成分の流量は、貯血空間４６へ血漿を供給するポンプ９の回転数（吐出量）に対応しており、その変化は、例えば図６に示すようなパターンとなる。この場合、微小時間においては、血液成分の流量は、一定と考えられる。
【００６０】
一方、流路１４０を流れる血液成分中の血小板濃度の変化に対応する光学センサー６２での受光光量の変化は、図７に示すように、経時的に変化する所定の関数となっている。この関数の曲線の方程式をＦ（ｔ）とすると、血小板バッグ１７に回収される血小板総数Ｐｌｔ（ｔ）は、次式２で示される。
【００６１】
Ｐｌｔ（ｔ）＝血小板数Ｍ×血液成分通過量 ・・・（式２）
【００６２】
なお、光学センサー６２での受光光量の変化の割合は、比較的小さいので、血液成分通過量は、１秒間当りの血液成分量とすることができる。また、図６に示すように、流路１４０を流れる血液成分の流量（ポンプ９の吐出量で換算）は、予めＱ１ 〜Ｑ５ の５段階に設定されており、流量Ｑ（ｎ）（ｎ＝１〜５）で表すと、血液成分通過量は、｛Ｑ（ｎ）／６０｝×１０３ μｌ となることから、上記式２は、次式３となる。
【００６３】
【数１】
ここで、ｋ、Ａ、Ｑ（ｎ）は、既知の値であることから、１回の処理で得られる血小板総数Ｎ１ は、光学センサー６２での受光光量を示すＦ（ｔ）値を少なくとも１秒毎にモニターし、その値を上記式３に代入して演算することにより、求めることができる。求められた血小板総数Ｎ１ は、表示手段７５に表示される。
【００６５】
［６］ 血漿の供給開始から所定時間（例えば１２０秒）経過したら、血小板バッグ１７への血小板の回収が終了したものとみなし、制御手段７の制御により、ポンプ９を停止してローター４２内への血漿の供給を停止し、さらに回転駆動装置５を停止する。これにより、サージ工程による血小板の回収が終了する。
【００６６】
［７］ バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉とし、ポンプ９を逆回転する。これにより、遠心ボウル４内に残った赤血球、白血球および少量の血漿が、管体４１、チューブ１３、１０１を介して、血液バッグ１０４内に返血される。
【００６７】
また、本工程の後またはその途中で、バルブ８４、８６を開、その他のバルブを閉としてポンプ９を作動（正転）し、血漿バッグ２１内の血漿をチューブ２４、チャンバー１９、チューブ２０、１３を介してローター４２内に入れ、続いて、バルブ８３、８５を開、その他のバルブを閉としてポンプ９を逆回転し、血漿バッグ２１から移した遠心ボウル４内の血漿を、管体４１、チューブ１３、１０１を介して、血液バッグ１０４内に返血してもよい。
【００６８】
［８］ 分岐コネクタ１０２と血液バッグ１０４との間のチューブ１０１の途中を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離する。これにより、返血用乏血小板血液入りの血液バッグ１０４が得られる。血液バッグ１０４内の乏血小板血液は、必要に応じ、供血者に返血される。
【００６９】
［９］ チューブ１０３のクレンメによる閉塞を解除し、ポンプ９を作動（正転）して、前記工程［１］を行い、さらに前記工程［２］〜［７］を行う。これにより、血液バッグ１０５内の採血血液に対し、血小板バッグ１７への２回目の血小板の回収およびその他の血液成分の血液バッグ１０５への返血がなされる。
【００７０】
この２回目の血小板回収においても、前記と同様にして回収される血小板総数Ｎ２ を求め、これを表示手段７５に表示する。また、前記血小板総数Ｎ１ と血小板総数Ｎ２ との合計Ｎ＝Ｎ１ ＋Ｎ２ を表示することもできる。
【００７１】
［１０］ チューブ１０３の途中を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離する。これにより、返血用乏血小板血液入りの血液バッグ１０５が得られる。血液バッグ１０５内の乏血小板血液は、必要に応じ、供血者に返血される。
【００７２】
［１１］ 血小板バッグ１７付近のチューブ１６を例えば融着により封止し、さらにこの封止部を切断、分離することにより、血小板製剤入りの血小板バッグ１７が得られる。
【００７３】
以上のように、本発明では、血小板バッグ１７に回収された血小板数を、血液処理工程中にリアルタイムに測定することができる。従って、最小処理回数で血小板の採取目標数（単位数）に到達させることができ、供血者の負担軽減、処理血液の節減、処理時間の短縮化を図ることができる。しかも、回収された血小板をサンプリング等をすることなく、閉鎖系で血小板数の測定を行うことができるので、塵や細菌の侵入等による汚染の問題も生じず、安全性が高い。
なお、血小板数の演算方法は、前述した方法に限らないことは言うまでもない。
【００７４】
また、光学センサー（測定部）６２は、他の位置、例えばチューブ１６の途中に設けられていてもよい。
また、前記実施例では、流路１４０を流れる血液成分の流量を、サージ工程におけるポンプ９の吐出量として把握しているが、これに限らず、例えば、チューブ１３、１４または１６の途中等に流量計を設け、該流量計で得た情報を用いてもよい。
【００７５】
本発明の細胞数測定装置は、前述したような血液成分分離装置に搭載されているものに限られず、その他の装置に搭載されているものまたはそれ自体単独で使用されるものであってもよい。
【００７６】
また、本発明は、血小板数の測定に限らず、例えば、白血球、赤血球等の血球数の測定やその他の細胞数の測定に適用することもできる。
また、測定部における細胞濃度測定は、前述したような光学センサーによらず、例えば、被検液が電解質の場合、その導電性を測定することにより細胞濃度を測定するような構成であってもよい。
【００７７】
また、流路に沿って測定部を複数設け、各測定部で得られた測定値のそれぞれまたはそれらの例えば平均値を血小板数の演算に利用するような構成としてもよい。
【００７８】
また、本発明では、求められた血小板数に基づいて、血液成分分離装置の作動を制御することもできる。例えば、血小板バッグ１７に回収される血小板数が目標値に到達したら、血小板回収動作を停止し、返血動作へ移行するような自動制御を行うこともできる。
【００７９】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明の細胞数測定装置によれば、細胞数をリアルタイムに測定することができる。従って、例えば、血小板製剤を製造する際に、採取された血小板数を血液処理中に知ることができ、これにより最小血液処理回数で血小板の採取目標数に到達させることができるので、供血者の負担軽減、処理血液の節減、処理時間の短縮化を図ることができる。
【００８０】
また、血小板等の細胞をサンプリングすることなく、閉鎖系で測定を行うことができるので、空気との接触による変質、劣化や、塵、細菌の侵入等による汚染の問題も生じない。
【００８１】
また、測定部を、投光部と受光部とを有する光学センサーで構成し、特に投光部と受光部との間の流路を扁平形状とすることにより、より正確な細胞濃度の測定が可能となり、高精度の細胞数測定が実現する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞数測定装置を搭載した血液成分分離装置の構成例を模式的に示す平面図である。
【図２】図１に示す血液成分分離装置の制御系を示すブロック図である。
【図３】図１に示す血液成分分離装置における遠心ボウルおよび回転駆動装置の構成例を示す部分断面正面図である。
【図４】測定部（光学センサー）の構成例を示す断面正面図である。
【図５】測定部における血液成分中の血小板濃度と光学センサーの受光光量との関係を示すグラフである。
【図６】サージ工程（血小板回収工程）における、流路を流れる血液成分の流量の経時変化を示すグラフである。
【図７】サージ工程（血小板回収工程）における、光学センサーの受光光量（血液成分中の血小板濃度）の経時変化を示すグラフである。
【符号の説明】
１ 血液成分分離移送装置
２ 第１のライン
３ 第２のライン
４ 遠心ボウル
４１ 管体
４２ ローター
４３ 流入口
４４ 流出口
４５ 上部
４６ 貯血空間
４７、４８ 流路
５ 回転駆動装置
５１ ハウジング
５２ 脚部
５３ モータ
５４ 回転軸
５５ 固定台
５５１ 凹部
５６ ボルト
５７ スペーサー
５８ 取付部材
６ 細胞数測定装置
６１、６２ 光学センサー
６３ 投光部
６３０ ケーシング
６３１ 光源
６３２ コリメータレンズ
６３３ 透明板
６４ 受光部
６４０ ケーシング
６４１ 受光素子
６４２ コンデンサレンズ
６４３ 透明板
６５ ガイド部
６６ 基台
６７、６８ 信号処理回路
７ 制御手段
７１ 演算部
７２ メモリー
７５ 表示手段
８３〜８６ バルブ
９ ポンプ
１０ 第３のライン
１０１ チューブ
１０２ 分岐コネクタ
１０３ チューブ
１０４、１０５ 血液バッグ
１０６ 血液貯留部
１２ 分岐コネクタ
１３、１４ チューブ
１４０ 流路
１５ 分岐コネクタ
１６ チューブ
１７ 血小板バッグ
１８ チューブ
１９ チャンバー
２０ チューブ
２１ 血漿バッグ
２２ 空気貯留バッグ
２３、２４ チューブ
３１ 血漿層
３２ バフィーコート層
３３ 赤血球層
Ｂ 界面
Ｌ レーザ光
Claims (5)
- 内部に貯血空間が形成された回転可能なローターと、前記貯血空間に連通する流入口および流出口とを有し、前記ローターの回転により前記流入口より導入された血液を前記貯血空間内で複数の血液成分に遠心分離する遠心分離器に対し、前記ローターの回転下で、複数に分離された血液成分を有する前記貯血空間に下方より血漿を供給して血小板を浮上させ、前記流出口より血漿とともに流出した血小板の数を測定する細胞数測定装置であって、
前記流出口に接続された流路と、前記流路の途中に設置され、前記流路を流れる血漿中の血小板濃度を測定する測定部と、前記貯血空間への血漿の供給量および前記測定部で得られた血小板濃度に関する情報を入力し、処理する情報処理手段とを有し、
前記情報処理手段により、前記貯血空間への血漿の供給量と、前記血小板濃度とに基づいて、前記測定部を通過した血小板の数を求めることを特徴とする細胞数測定装置。 - 前記細胞数測定装置は、前記貯血空間に血漿を供給するポンプを有し、
前記貯血空間への血漿の供給量に関する情報は、前記ポンプの回転数に関する情報である請求項１に記載の細胞数測定装置。 - 前記測定部は、前記流路を介して対向配置された投光部と受光部とを有し、前記投光部から発せられ、前記流路を透過した光を前記受光部で受光し、その受光光量に応じた電気信号を出力する光学センサーで構成されている請求項１または２に記載の細胞数測定装置。
- 前記投光部と前記受光部との間の流路が扁平形状をなしている請求項１ないし３のいずれかに記載の細胞数測定装置。
- 測定された細胞数を表示する表示手段を有する請求項１ないし４のいずれかに記載の細胞数測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29553894A JP3553164B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 細胞数測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29553894A JP3553164B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 細胞数測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08136537A JPH08136537A (ja) | 1996-05-31 |
| JP3553164B2 true JP3553164B2 (ja) | 2004-08-11 |
Family
ID=17821941
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29553894A Expired - Fee Related JP3553164B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 細胞数測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3553164B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101515698B1 (ko) * | 2013-04-11 | 2015-05-04 | 노정자 | Prp 원심분리기 및 prp 원심분리 방법 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6752777B1 (en) | 1997-06-16 | 2004-06-22 | Terumo Kabushiki Kaisha | Blood component collecting apparatus |
| JP2011045398A (ja) * | 2009-08-25 | 2011-03-10 | Kawasumi Lab Inc | 濾過状況検知装置及び濾過台 |
| EP2954310B1 (en) * | 2013-02-06 | 2024-01-03 | Alentic Microscience Inc. | Detecting and using light representative of a sample |
-
1994
- 1994-11-04 JP JP29553894A patent/JP3553164B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101515698B1 (ko) * | 2013-04-11 | 2015-05-04 | 노정자 | Prp 원심분리기 및 prp 원심분리 방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08136537A (ja) | 1996-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7566315B2 (en) | Blood component collection apparatus and method | |
| US20030066807A1 (en) | Platelet collection apparatus | |
| JP3715338B2 (ja) | 血液成分分離装置 | |
| EP0992256B1 (en) | Blood component collection apparatus | |
| JP3817091B2 (ja) | 細胞数測定装置 | |
| JP3850429B2 (ja) | 血液成分分離装置 | |
| JP3553164B2 (ja) | 細胞数測定装置 | |
| JPH07313588A (ja) | 血液成分分離装置および血液成分分離方法 | |
| US20230226562A1 (en) | Systems and methods for fluid separation interface control using color-based optical measurements | |
| JP3936132B2 (ja) | 血小板採取装置 | |
| JP4786812B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP2002282352A (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP2001009023A (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP4956528B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP4255166B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP4558401B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP4060504B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP2001000538A (ja) | 血液成分採取用回路 | |
| JPH0947505A (ja) | 血液成分分離装置および血小板採取方法 | |
| JP5883436B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP4500618B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| US20230330686A1 (en) | Interface Detection And Control Using A Photodetector Array | |
| JPH08117331A (ja) | 血液成分分離装置および血液成分分離移送方法 | |
| JP4948712B2 (ja) | 血液成分採取装置 | |
| JP3936130B2 (ja) | 血小板採取装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20031209 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20040419 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20040428 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090514 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100514 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110514 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110514 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120514 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120514 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |