JP3536039B2 - Ｈｔｌｖ−ｉ腫瘍に対する抗腫瘍抗原又はその抗原エピトープ - Google Patents
Ｈｔｌｖ−ｉ腫瘍に対する抗腫瘍抗原又はその抗原エピトープInfo
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、成人Ｔ細胞白血病
（ＡＴＬ）等のヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ）腫瘍に対して抗腫瘍効果を有する細胞傷害活性
Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導することができる抗原エピトー
プや、該抗原エピトープペプチドによるＨＴＬＶ−Ｉ腫
瘍に対する抗腫瘍効果を有するＣＴＬの誘導活性を増強
するアジュバントのスクリーニング方法や、前記ＣＴＬ
認識抗原エピトープ又はそれらのＤＮＡを有効成分とす
る免疫応答誘導用ワクチン等に関する。
（ＡＴＬ）等のヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ）腫瘍に対して抗腫瘍効果を有する細胞傷害活性
Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導することができる抗原エピトー
プや、該抗原エピトープペプチドによるＨＴＬＶ−Ｉ腫
瘍に対する抗腫瘍効果を有するＣＴＬの誘導活性を増強
するアジュバントのスクリーニング方法や、前記ＣＴＬ
認識抗原エピトープ又はそれらのＤＮＡを有効成分とす
る免疫応答誘導用ワクチン等に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＨＴＬＶ−Ｉは、ＡＴＬ、ＨＴＬＶ−Ｉ
ウイルス脊髄症／熱帯性痙性対麻痺（ＨＡＭ／ＴＳ
Ｐ）、その他の炎症性疾患などの発症に関与している
（Blood 50, 481-492, 1977、Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 77, 7415-7419, 1980、Proc. Natl. Acad. Sci. US
A 78, 6476-6480, 1981、Lancet. 2, 407-410, 1985、L
ancet. 1, 1031-1032, 1986）。ＨＴＬＶ−Ｉは、その
ｅｎｖと３′ＬＴＲの間にｐＸという特殊な配列を持
ち、このｐＸ領域は他の動物の発癌性レトロウイルスに
はみられず、その産物のＴａｘ蛋白はＨＴＬＶ−Ｉの多
彩な病原性に重要な役割を演じていると考えられてい
る。また、上記ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘはウイルス調節タ
ンパク質であり、インビトロでラット及びヒトの細胞を
不死化させることができることが知られている（Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 87, 1071-1075, 1990、Blood 8
6, 4243-4249, 1995、J. Virol. 66, 4570-4575, 199
2）。これらのことは、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘがＨＴＬ
Ｖ−Ｉ誘導による白血病発症のメカニズムに関与してい
ることを強く示唆しているが、インビボでのＡＴＬ発症
のメカニズムは未だ明らかになっていない。
ウイルス脊髄症／熱帯性痙性対麻痺（ＨＡＭ／ＴＳ
Ｐ）、その他の炎症性疾患などの発症に関与している
（Blood 50, 481-492, 1977、Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 77, 7415-7419, 1980、Proc. Natl. Acad. Sci. US
A 78, 6476-6480, 1981、Lancet. 2, 407-410, 1985、L
ancet. 1, 1031-1032, 1986）。ＨＴＬＶ−Ｉは、その
ｅｎｖと３′ＬＴＲの間にｐＸという特殊な配列を持
ち、このｐＸ領域は他の動物の発癌性レトロウイルスに
はみられず、その産物のＴａｘ蛋白はＨＴＬＶ−Ｉの多
彩な病原性に重要な役割を演じていると考えられてい
る。また、上記ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘはウイルス調節タ
ンパク質であり、インビトロでラット及びヒトの細胞を
不死化させることができることが知られている（Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 87, 1071-1075, 1990、Blood 8
6, 4243-4249, 1995、J. Virol. 66, 4570-4575, 199
2）。これらのことは、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘがＨＴＬ
Ｖ−Ｉ誘導による白血病発症のメカニズムに関与してい
ることを強く示唆しているが、インビボでのＡＴＬ発症
のメカニズムは未だ明らかになっていない。
【０００３】多くの研究からＡＴＬ患者のＨＴＬＶ−Ｉ
に対する宿主細胞性免疫のレベルは、ＨＡＭ／ＴＳＰ患
者のものとは異なることが明らかになっており、ＨＡＭ
／ＴＳＰ患者及び無症候性ＨＴＬＶ−Ｉキャリアから
は、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬは見い出されるが、ＡＴ
Ｌ患者からはＣＴＬが見出されることはほとんどないこ
とが報告されている（J. Immunol. 130, 2942-2946, 19
83、J. Exp. Med. 158, 994-999, 1983、J. Immunol. 1
33, 1037-1041, 1984、Nature 348, 245-248, 1990、Vi
rology 188, 628-636, 1992、Int. J. Cancer 54, 582-
588, 1993）。これらの報告から、宿主細胞の免疫がＨ
ＴＬＶ−Ｉ関連疾患の発症に影響を及ぼすと考えられて
いる。
に対する宿主細胞性免疫のレベルは、ＨＡＭ／ＴＳＰ患
者のものとは異なることが明らかになっており、ＨＡＭ
／ＴＳＰ患者及び無症候性ＨＴＬＶ−Ｉキャリアから
は、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬは見い出されるが、ＡＴ
Ｌ患者からはＣＴＬが見出されることはほとんどないこ
とが報告されている（J. Immunol. 130, 2942-2946, 19
83、J. Exp. Med. 158, 994-999, 1983、J. Immunol. 1
33, 1037-1041, 1984、Nature 348, 245-248, 1990、Vi
rology 188, 628-636, 1992、Int. J. Cancer 54, 582-
588, 1993）。これらの報告から、宿主細胞の免疫がＨ
ＴＬＶ−Ｉ関連疾患の発症に影響を及ぼすと考えられて
いる。
【０００４】上記ＣＴＬは、一般的に、ウイルスを一掃
するという重要な役割を果たすだけでなく、腫瘍根治の
役割も担っている。ＨＴＬＶ−ＩキャリアにおけるＨＴ
ＬＶ−Ｉ特異的ＣＤ８+ＣＴＬにおいては、ＨＴＬＶ−
ＩのＴａｘを認識し（Nature 348, 245-248, 1990、In
t.Immunol. 3, 761-767, 1991）、インビトロでＡＴＬ
細胞を溶解することが、本発明者らや他のグループによ
って報告されている（J. Immunol. 133, 1037-1041, 19
84、Int. J. Cancer 54, 582-588, 1993）。これらのこ
とから、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬｓは、ＨＴＬＶ−Ｉ
の誘導による腫瘍細胞の増殖に対する宿主細胞の免疫監
視機構における重要なエフェクターであることが示唆さ
れる。しかしながら、上記のＣＴＬの役割は、インビボ
でＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対するものか、単に感染の結果に
よるものなのかは、未だ明らかにされていない。
するという重要な役割を果たすだけでなく、腫瘍根治の
役割も担っている。ＨＴＬＶ−ＩキャリアにおけるＨＴ
ＬＶ−Ｉ特異的ＣＤ８+ＣＴＬにおいては、ＨＴＬＶ−
ＩのＴａｘを認識し（Nature 348, 245-248, 1990、In
t.Immunol. 3, 761-767, 1991）、インビトロでＡＴＬ
細胞を溶解することが、本発明者らや他のグループによ
って報告されている（J. Immunol. 133, 1037-1041, 19
84、Int. J. Cancer 54, 582-588, 1993）。これらのこ
とから、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬｓは、ＨＴＬＶ−Ｉ
の誘導による腫瘍細胞の増殖に対する宿主細胞の免疫監
視機構における重要なエフェクターであることが示唆さ
れる。しかしながら、上記のＣＴＬの役割は、インビボ
でＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対するものか、単に感染の結果に
よるものなのかは、未だ明らかにされていない。
【０００５】インビボでのＨＴＬＶ−Ｉ白血病発症にお
けるＣＴＬの効果を明確にするため、本発明者らはＡＴ
Ｌ様疾患の２種類の実験ラットモデル系を開発した（J.
Virol. 73, 6031-6040, 1999、J. Virol. 74, 428-43
5, 2000、特願平１０−３１５１７４）。一つは、ＨＴ
ＬＶ−Ｉ不死化ラット細胞株を接種した無胸腺ラットの
Ｔ細胞リンパ腫のモデルである（J.Virol. 73, 6031-60
40, 1999）。このモデルでは、免疫Ｔ細胞を養子移入す
ることによって、致死性のリンパ腫からラットを守っ
た。もう一方のモデルにおいては、Ｔ細胞活性化に対す
る共刺激シグナルを阻害するために抗ＣＤ８０及びＣＤ
８６モノクローナル抗体を用いて、免疫正常ラットを処
理することにより、Ｔ細胞リンパ腫の発達を誘導した
（J.Virol. 74, 428-435, 2000）。これらの結果から、
インビボでのＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍の増殖を防ぐという宿主
Ｔ細胞免疫応答の役割が強く示唆される。
けるＣＴＬの効果を明確にするため、本発明者らはＡＴ
Ｌ様疾患の２種類の実験ラットモデル系を開発した（J.
Virol. 73, 6031-6040, 1999、J. Virol. 74, 428-43
5, 2000、特願平１０−３１５１７４）。一つは、ＨＴ
ＬＶ−Ｉ不死化ラット細胞株を接種した無胸腺ラットの
Ｔ細胞リンパ腫のモデルである（J.Virol. 73, 6031-60
40, 1999）。このモデルでは、免疫Ｔ細胞を養子移入す
ることによって、致死性のリンパ腫からラットを守っ
た。もう一方のモデルにおいては、Ｔ細胞活性化に対す
る共刺激シグナルを阻害するために抗ＣＤ８０及びＣＤ
８６モノクローナル抗体を用いて、免疫正常ラットを処
理することにより、Ｔ細胞リンパ腫の発達を誘導した
（J.Virol. 74, 428-435, 2000）。これらの結果から、
インビボでのＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍の増殖を防ぐという宿主
Ｔ細胞免疫応答の役割が強く示唆される。
【０００６】ＨＴＬＶ−Ｉ感染患者や上記ラットモデル
におけるＣＴＬの研究結果は、プレＡＴＬ患者における
ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬが増強することにより、ＡＴ
Ｌ発症から患者を守る可能性が示唆されている。ＡＴＬ
の治癒率は、化学療法に対して抵抗性を有することから
リンパ球増殖性疾患の中でも極端に低く、このことから
疾患の早い段階においての免疫学的アプローチによる治
療法の開発が期待されている。効果的な抗腫瘍免疫応答
を誘導するためには、腫瘍抗原を正確に特定し、細胞性
免疫が認識する強力な免疫原を宿主に投与しなければな
らない。特に、腫瘍を認識する主な細胞群の一つである
ＣＤ８+ＣＴＬの応答を誘導させるためには、抗原提示
細胞のクラスII抗原と同じようにＭＨＣクラスＩにより
プロセシングされた適切なペプチドの提示が必要である
（Nature 343, 692-696, 1989）。ＭＨＣクラスＩによ
る抗原提示の経路が優先されることから、標的抗原をコ
ードする外来性遺伝子の分泌や発現に用いることができ
る種々のウイルスベクターが提案されている（J. Natl.
Cancer Inst. 90, 1894-1900, 1998）。無処理のＤＮ
Ａを直接投与しても、同様の効果が得られることが考え
られている（Annu. Rev. Immunol. 18, 927-974, 200
0）。また、ＤＮＡをベースとしたワクチンより安全な
ＭＨＣ分子に直接結合するＣＴＬエピトープに相当する
ペプチドをベースとしたワクチンも考えられている（In
t. J. Cancer63, 883-885, 1995）。
におけるＣＴＬの研究結果は、プレＡＴＬ患者における
ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬが増強することにより、ＡＴ
Ｌ発症から患者を守る可能性が示唆されている。ＡＴＬ
の治癒率は、化学療法に対して抵抗性を有することから
リンパ球増殖性疾患の中でも極端に低く、このことから
疾患の早い段階においての免疫学的アプローチによる治
療法の開発が期待されている。効果的な抗腫瘍免疫応答
を誘導するためには、腫瘍抗原を正確に特定し、細胞性
免疫が認識する強力な免疫原を宿主に投与しなければな
らない。特に、腫瘍を認識する主な細胞群の一つである
ＣＤ８+ＣＴＬの応答を誘導させるためには、抗原提示
細胞のクラスII抗原と同じようにＭＨＣクラスＩにより
プロセシングされた適切なペプチドの提示が必要である
（Nature 343, 692-696, 1989）。ＭＨＣクラスＩによ
る抗原提示の経路が優先されることから、標的抗原をコ
ードする外来性遺伝子の分泌や発現に用いることができ
る種々のウイルスベクターが提案されている（J. Natl.
Cancer Inst. 90, 1894-1900, 1998）。無処理のＤＮ
Ａを直接投与しても、同様の効果が得られることが考え
られている（Annu. Rev. Immunol. 18, 927-974, 200
0）。また、ＤＮＡをベースとしたワクチンより安全な
ＭＨＣ分子に直接結合するＣＴＬエピトープに相当する
ペプチドをベースとしたワクチンも考えられている（In
t. J. Cancer63, 883-885, 1995）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ＡＴＬは、日本に多く
の保有率を持つＨＴＬＶ−Ｉの感染によって引き起こさ
れる腫瘍性疾患であるが、化学療法剤に抵抗性であるた
め、極めて予後の悪い悪性腫瘍とされてきた。一方で種
々の臨床的観察から、宿主細胞性免疫、特にＣＴＬの抗
腫瘍効果が示唆されている。本発明の課題は、ＡＴＬ等
のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬ
を誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピ
トープのスクリーニング方法や、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対
して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導することができる
ＣＴＬ認識抗原若しくは該抗原エピトープや、該抗原エ
ピトープペプチド等による、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する
抗腫瘍効果を有するＣＴＬの誘導活性を増強するアジュ
バントのスクリーニング方法や、前記ＣＴＬ認識抗原若
しくは該抗原エピトープ又はそれらのＤＮＡを有効成分
とする免疫応答誘導用ワクチン等を提供することにあ
る。
の保有率を持つＨＴＬＶ−Ｉの感染によって引き起こさ
れる腫瘍性疾患であるが、化学療法剤に抵抗性であるた
め、極めて予後の悪い悪性腫瘍とされてきた。一方で種
々の臨床的観察から、宿主細胞性免疫、特にＣＴＬの抗
腫瘍効果が示唆されている。本発明の課題は、ＡＴＬ等
のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬ
を誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピ
トープのスクリーニング方法や、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対
して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導することができる
ＣＴＬ認識抗原若しくは該抗原エピトープや、該抗原エ
ピトープペプチド等による、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する
抗腫瘍効果を有するＣＴＬの誘導活性を増強するアジュ
バントのスクリーニング方法や、前記ＣＴＬ認識抗原若
しくは該抗原エピトープ又はそれらのＤＮＡを有効成分
とする免疫応答誘導用ワクチン等を提供することにあ
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究し、ｎｕ／＋ラット由来Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで免疫した同
系免疫正常ラット由来の脾臓Ｔ細胞を、ホルマリン固定
ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで２週間おきに刺激を繰り返し行う
ことによりＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株を樹立し、
ＨＴＬＶ−１特異的ＣＴＬの主要な認識エピトープを含
むと考えられる各種合成ペプチドで感作した標的細胞Ｇ
１４に対する上記ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株の細
胞傷害活性を検討したところ、標的細胞が特に強いＣＴ
Ｌ感受性を示すペプチド、すなわちＨＴＬＶ−１腫瘍に
対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導することができ
るＣＴＬ認識抗原の主要エピトープを同定した。かかる
エピトープの合成ペプチドを免疫原とし、アジュバント
を用いることにより免疫正常ラットに腫瘍抗原エピトー
プ特異的なＣＴＬが誘導可能であることや、この誘導さ
れたＣＴＬが生体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞
の増殖を強く抑制しうることを確認し、本発明を完成す
るに至った。
題を解決するために鋭意研究し、ｎｕ／＋ラット由来Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで免疫した同
系免疫正常ラット由来の脾臓Ｔ細胞を、ホルマリン固定
ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで２週間おきに刺激を繰り返し行う
ことによりＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株を樹立し、
ＨＴＬＶ−１特異的ＣＴＬの主要な認識エピトープを含
むと考えられる各種合成ペプチドで感作した標的細胞Ｇ
１４に対する上記ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株の細
胞傷害活性を検討したところ、標的細胞が特に強いＣＴ
Ｌ感受性を示すペプチド、すなわちＨＴＬＶ−１腫瘍に
対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導することができ
るＣＴＬ認識抗原の主要エピトープを同定した。かかる
エピトープの合成ペプチドを免疫原とし、アジュバント
を用いることにより免疫正常ラットに腫瘍抗原エピトー
プ特異的なＣＴＬが誘導可能であることや、この誘導さ
れたＣＴＬが生体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞
の増殖を強く抑制しうることを確認し、本発明を完成す
るに至った。
【０００９】すなわち本発明は、配列番号２に示される
アミノ酸配列からなるペプチド、又は、このアミノ酸配
列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若
しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ
腫瘍に対して抗腫瘍作用を有するＣＴＬを誘導すること
ができるペプチドからなることを特徴とするＨＴＬＶ−
Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導するこ
とができるＣＴＬ認識抗原エピトープ（請求項１）に関
する。
アミノ酸配列からなるペプチド、又は、このアミノ酸配
列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若
しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ
腫瘍に対して抗腫瘍作用を有するＣＴＬを誘導すること
ができるペプチドからなることを特徴とするＨＴＬＶ−
Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導するこ
とができるＣＴＬ認識抗原エピトープ（請求項１）に関
する。
【００１０】また本発明は、請求項１記載のＣＴＬ認識
抗原エピトープと被検アジュバントとを用いて誘導した
ＣＴＬをＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物に投与
し、該非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する
ことを特徴とするＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果
を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請求項
２）や、ＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物が、成
人Ｔ細胞白血病モデル非ヒト動物であることを特徴とす
る請求項２記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果
を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請求項
３）や、非ヒト動物が、ラットであることを特徴とする
請求項２又は３記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍
効果を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請
求項４）や、請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトープ
と被検アジュバントとを用いて誘導したＣＴＬと、ＨＴ
ＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株とを接触させ、該ＣＴＬの細胞
傷害活性を測定・評価することを特徴とするＨＴＬＶ−
Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果を増強するアジュバントのス
クリーニング方法（請求項５）に関する。
抗原エピトープと被検アジュバントとを用いて誘導した
ＣＴＬをＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物に投与
し、該非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する
ことを特徴とするＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果
を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請求項
２）や、ＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物が、成
人Ｔ細胞白血病モデル非ヒト動物であることを特徴とす
る請求項２記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果
を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請求項
３）や、非ヒト動物が、ラットであることを特徴とする
請求項２又は３記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍
効果を増強するアジュバントのスクリーニング方法（請
求項４）や、請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトープ
と被検アジュバントとを用いて誘導したＣＴＬと、ＨＴ
ＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株とを接触させ、該ＣＴＬの細胞
傷害活性を測定・評価することを特徴とするＨＴＬＶ−
Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果を増強するアジュバントのス
クリーニング方法（請求項５）に関する。
【００１１】さらに本発明は、請求項１記載のＣＴＬ認
識抗原エピトープを有効成分として含有することを特徴
とする免疫応答誘導用ワクチン（請求項６）や、請求項
１記載のＣＴＬ認識抗原エピトープをコードするＤＮＡ
を有効成分として含有することを特徴とする免疫応答誘
導用ワクチン（請求項７）や、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対す
る抗腫瘍効果を増強するアジュバントをさらに含むこと
を特徴とする請求項６又は７記載の免疫応答誘導用ワク
チン（請求項８）に関する。
識抗原エピトープを有効成分として含有することを特徴
とする免疫応答誘導用ワクチン（請求項６）や、請求項
１記載のＣＴＬ認識抗原エピトープをコードするＤＮＡ
を有効成分として含有することを特徴とする免疫応答誘
導用ワクチン（請求項７）や、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対す
る抗腫瘍効果を増強するアジュバントをさらに含むこと
を特徴とする請求項６又は７記載の免疫応答誘導用ワク
チン（請求項８）に関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍
効果を有するＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識
抗原又は該抗原エピトープのスクリーニング方法として
は、ＡＴＬ等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物
に、被検物質によって誘導されたＣＴＬを投与し、かか
る非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する方法
や、被検物質によって誘導されたＣＴＬと、ＨＴＬＶ−
Ｉ感染腫瘍細胞株とを接触させ、該ＣＴＬの細胞傷害活
性を測定・評価する方法や、被検物質で感作した標的細
胞又は被検物質を発現する標的細胞と、ＨＴＬＶ−Ｉ特
異的ＣＴＬ細胞株とを接触させ、該ＨＴＬＶ−Ｉ特異的
ＣＴＬ細胞株の細胞傷害活性を測定・評価する方法を具
体的に挙げることができる。ここで、ＣＴＬを誘導する
ことができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープと
は、インビボやインビトロにおいてＣＴＬを誘導するこ
とができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープを意味
する。
効果を有するＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識
抗原又は該抗原エピトープのスクリーニング方法として
は、ＡＴＬ等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物
に、被検物質によって誘導されたＣＴＬを投与し、かか
る非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する方法
や、被検物質によって誘導されたＣＴＬと、ＨＴＬＶ−
Ｉ感染腫瘍細胞株とを接触させ、該ＣＴＬの細胞傷害活
性を測定・評価する方法や、被検物質で感作した標的細
胞又は被検物質を発現する標的細胞と、ＨＴＬＶ−Ｉ特
異的ＣＴＬ細胞株とを接触させ、該ＨＴＬＶ−Ｉ特異的
ＣＴＬ細胞株の細胞傷害活性を測定・評価する方法を具
体的に挙げることができる。ここで、ＣＴＬを誘導する
ことができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープと
は、インビボやインビトロにおいてＣＴＬを誘導するこ
とができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープを意味
する。
【００１３】上記ＨＴＬＶＩ関連疾患モデル非ヒト動物
としては、ＨＴＬＶ−Ｉを感染させることにより、ＡＴ
Ｌ、ＨＡＭ／ＴＳＰ、ＨＡＡＰ、ブドウ膜炎、気管支肺
胞炎、シェーグレン症候群類似の唾液腺炎等のＨＴＬＶ
−Ｉ関連疾患を起こす非ヒト動物であれば特に制限され
るものではないが、再現性よく長期間にわたってＨＴＬ
Ｖ−Ｉ感染腫瘍細胞を増殖させることができるものが好
ましい。また本発明における非ヒト動物としては、マウ
ス、ラット、モルモット、サル、ネコ、ウサギ等の非ヒ
ト哺乳類動物を具体的に挙げることができるが、これら
に限定されるものではない。以下、ＡＴＬモデル非ヒト
動物の作製方法を、ＡＴＬモデルラットを例にとって説
明する。
としては、ＨＴＬＶ−Ｉを感染させることにより、ＡＴ
Ｌ、ＨＡＭ／ＴＳＰ、ＨＡＡＰ、ブドウ膜炎、気管支肺
胞炎、シェーグレン症候群類似の唾液腺炎等のＨＴＬＶ
−Ｉ関連疾患を起こす非ヒト動物であれば特に制限され
るものではないが、再現性よく長期間にわたってＨＴＬ
Ｖ−Ｉ感染腫瘍細胞を増殖させることができるものが好
ましい。また本発明における非ヒト動物としては、マウ
ス、ラット、モルモット、サル、ネコ、ウサギ等の非ヒ
ト哺乳類動物を具体的に挙げることができるが、これら
に限定されるものではない。以下、ＡＴＬモデル非ヒト
動物の作製方法を、ＡＴＬモデルラットを例にとって説
明する。
【００１４】ＡＴＬモデルラットは、例えば、免疫正常
ラットにＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株を投与することに
より得ることができるが、Ｔ細胞機能を欠損した非ヒト
動物の皮下、腹腔内、静脈内等にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍
細胞株を投与することによって得られるＡＴＬモデルラ
ットの方が、再現性の点及び体内でＨＴＬＶ−Ｉ感染腫
瘍細胞を増殖／継代させることができる点で好ましい。
そして、評価の際に用いる野生型ラットとしては、ＡＴ
Ｌモデルラットと同系の野生型ラットを用いることが好
ましい。上記Ｔ細胞機能を欠損した非ヒト動物として
は、ヌード非ヒト動物等を具体的に挙げることができる
がこれらに限定されるものではない。また、上記ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ感染腫瘍細胞株としては、公知の方法によりＨＴ
ＬＶ−Ｉを感染させた細胞株で、且つ野生型非ヒト動物
とＭＨＣが一致しているものであればどのようなもので
もよく、例えば、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ等の細胞株を具体
的に挙げることができる。
ラットにＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株を投与することに
より得ることができるが、Ｔ細胞機能を欠損した非ヒト
動物の皮下、腹腔内、静脈内等にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍
細胞株を投与することによって得られるＡＴＬモデルラ
ットの方が、再現性の点及び体内でＨＴＬＶ−Ｉ感染腫
瘍細胞を増殖／継代させることができる点で好ましい。
そして、評価の際に用いる野生型ラットとしては、ＡＴ
Ｌモデルラットと同系の野生型ラットを用いることが好
ましい。上記Ｔ細胞機能を欠損した非ヒト動物として
は、ヌード非ヒト動物等を具体的に挙げることができる
がこれらに限定されるものではない。また、上記ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ感染腫瘍細胞株としては、公知の方法によりＨＴ
ＬＶ−Ｉを感染させた細胞株で、且つ野生型非ヒト動物
とＭＨＣが一致しているものであればどのようなもので
もよく、例えば、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ等の細胞株を具体
的に挙げることができる。
【００１５】上記スクリーニング方法において用いる被
検物質としては、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａ、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ等を具体
的に挙げることができる。上記被検物質で感作した標的
細胞、又は被検物質を発現する標的細胞としては、ＭＨ
Ｃが一致している細胞であればどのような細胞でもよい
が、ＣＤ８+Ｔ細胞株であるＧ１４細胞（J. Virol. 74,
9610-9616, 2000）を好ましく例示することができる。
検物質としては、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａ、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ等を具体
的に挙げることができる。上記被検物質で感作した標的
細胞、又は被検物質を発現する標的細胞としては、ＭＨ
Ｃが一致している細胞であればどのような細胞でもよい
が、ＣＤ８+Ｔ細胞株であるＧ１４細胞（J. Virol. 74,
9610-9616, 2000）を好ましく例示することができる。
【００１６】また、被検物質を発現する細胞を調製する
際の発現系としては、上記被検物質を細胞内で発現させ
ることができる発現系であればどのようなものでもよ
く、染色体、エピソーム及びウイルスに由来する発現
系、例えば、細菌プラスミド由来、酵母プラスミド由
来、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイ
ルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイ
ルス、レトロウイルス由来のベクター、バクテリオファ
ージ由来、トランスポゾン由来及びこれらの組合せに由
来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのよ
うなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由
来するものを挙げることができる。この発現系は発現を
起こさせるだけでなく発現を調節する制御配列を含んで
いてもよい。また、読み枠を変えて翻訳することができ
る発現ベクターシリーズも有利に用いることができる。
際の発現系としては、上記被検物質を細胞内で発現させ
ることができる発現系であればどのようなものでもよ
く、染色体、エピソーム及びウイルスに由来する発現
系、例えば、細菌プラスミド由来、酵母プラスミド由
来、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイ
ルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイ
ルス、レトロウイルス由来のベクター、バクテリオファ
ージ由来、トランスポゾン由来及びこれらの組合せに由
来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのよ
うなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由
来するものを挙げることができる。この発現系は発現を
起こさせるだけでなく発現を調節する制御配列を含んで
いてもよい。また、読み枠を変えて翻訳することができ
る発現ベクターシリーズも有利に用いることができる。
【００１７】また、かかる被検物質が組み込まれた発現
系の宿主細胞への導入は、Davisら（BASIC METHODS IN
MOLECULAR BIOLOGY, 1986）及びSambrookら（MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y., 1989）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング (scrape loading)、弾丸導入(ballisti
c introduction)、感染等により行うことができる。
系の宿主細胞への導入は、Davisら（BASIC METHODS IN
MOLECULAR BIOLOGY, 1986）及びSambrookら（MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y., 1989）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング (scrape loading)、弾丸導入(ballisti
c introduction)、感染等により行うことができる。
【００１８】上記ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株とし
ては、ＨＴＬＶ−Ｉを特異的に認識するＣＴＬ細胞株で
あれば特に制限されるものではないが、ＭＨＣクラスＩ
に拘束されるものが好ましく、かかるＭＨＣクラスＩに
拘束されたＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は公知の方
法、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子を発現する非ヒト動物
由来のＴ細胞にＨＴＬＶ−Ｉを感染させた細胞を、Ｔ細
胞機能が欠損した非ヒト動物（ヌード非ヒト動物）の体
内で増殖させることによりＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株
を樹立し、この樹立した細胞株で免疫した免疫正常非ヒ
ト動物の脾臓Ｔ細胞を、ホルマリン固定ＨＴＬＶ−Ｉ感
染腫瘍細胞株で刺激を繰り返すことにより得ることがで
きる。
ては、ＨＴＬＶ−Ｉを特異的に認識するＣＴＬ細胞株で
あれば特に制限されるものではないが、ＭＨＣクラスＩ
に拘束されるものが好ましく、かかるＭＨＣクラスＩに
拘束されたＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は公知の方
法、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子を発現する非ヒト動物
由来のＴ細胞にＨＴＬＶ−Ｉを感染させた細胞を、Ｔ細
胞機能が欠損した非ヒト動物（ヌード非ヒト動物）の体
内で増殖させることによりＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株
を樹立し、この樹立した細胞株で免疫した免疫正常非ヒ
ト動物の脾臓Ｔ細胞を、ホルマリン固定ＨＴＬＶ−Ｉ感
染腫瘍細胞株で刺激を繰り返すことにより得ることがで
きる。
【００１９】上記スクリーニング方法により得られる、
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができるＣＴＬ認識抗原としては、配列番
号１に示されるＨＴＬＶ−ＩのＴａｘタンパク質や、配
列番号１に示されるアミノ酸配列において１若しくは数
個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸
配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍作用を
有するＣＴＬを誘導することができるタンパク質等を挙
げることができ、上記スクリーニング方法により得られ
る、抗原エピトープとしては、配列番号２、配列番号３
又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるペプチ
ド、特に好ましくは本発明の配列番号２に示されるアミ
ノ酸配列からなるペプチドや、これらアミノ酸配列にお
いて、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは
付加されたアミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に
対して抗腫瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができ
るペプチド等を具体的に挙げることができるが、これら
に限定されるものでない。
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができるＣＴＬ認識抗原としては、配列番
号１に示されるＨＴＬＶ−ＩのＴａｘタンパク質や、配
列番号１に示されるアミノ酸配列において１若しくは数
個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸
配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍作用を
有するＣＴＬを誘導することができるタンパク質等を挙
げることができ、上記スクリーニング方法により得られ
る、抗原エピトープとしては、配列番号２、配列番号３
又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなるペプチ
ド、特に好ましくは本発明の配列番号２に示されるアミ
ノ酸配列からなるペプチドや、これらアミノ酸配列にお
いて、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは
付加されたアミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に
対して抗腫瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができ
るペプチド等を具体的に挙げることができるが、これら
に限定されるものでない。
【００２０】本発明における、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対す
る抗腫瘍効果を増強するアジュバント、すなわち、より
効率よくＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有する
ＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープ特異的なＣＴＬを
誘導することができるアジュバンドのスクリーニング方
法としては、上記のＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトー
プ、好ましくは配列番号２に示されるアミノ酸配列から
なる抗原エピトープペプチドと被検アジュバントとを用
いて誘導したＣＴＬを、成人Ｔ細胞白血病モデル非ヒト
動物等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物に投与
し、該非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する
方法や、上記のＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープ、
好ましくは配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる
抗原エピトープペプチドと被検アジュバントとを用いて
誘導したＣＴＬと、ＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株とを接
触させ、該ＣＴＬの細胞傷害活性を測定・評価する方法
であれば、特に制限されるものではなく、かかるスクリ
ーニング方法により得られるアジュバントとして、例え
ば、効率よくペプチド特異的なＣＴＬを誘導することが
できるＣｐＧモチーフを含むＩＳＳ−ＯＤＮ（Immunost
imulatory DNA sequences-oligodeoxynucleotide；Nat.
Med. 3, 849-854, 1997）、細胞傷害性Ｔ細胞を刺激す
るＱＳ２１（Quil1aia saponaria、Cambridge Biotec
h，Worcester，MAより商業的に入手可能）、水酸化アル
ミニウム、リン酸アルミニウム、酸化アルミニウム、油
性エマルジョン、サポニン、ビタミンＥ溶解物等を具体
的に挙げることができる。
る抗腫瘍効果を増強するアジュバント、すなわち、より
効率よくＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有する
ＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープ特異的なＣＴＬを
誘導することができるアジュバンドのスクリーニング方
法としては、上記のＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトー
プ、好ましくは配列番号２に示されるアミノ酸配列から
なる抗原エピトープペプチドと被検アジュバントとを用
いて誘導したＣＴＬを、成人Ｔ細胞白血病モデル非ヒト
動物等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物に投与
し、該非ヒト動物における腫瘍の変化を測定・評価する
方法や、上記のＣＴＬ認識抗原又は該抗原エピトープ、
好ましくは配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる
抗原エピトープペプチドと被検アジュバントとを用いて
誘導したＣＴＬと、ＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株とを接
触させ、該ＣＴＬの細胞傷害活性を測定・評価する方法
であれば、特に制限されるものではなく、かかるスクリ
ーニング方法により得られるアジュバントとして、例え
ば、効率よくペプチド特異的なＣＴＬを誘導することが
できるＣｐＧモチーフを含むＩＳＳ−ＯＤＮ（Immunost
imulatory DNA sequences-oligodeoxynucleotide；Nat.
Med. 3, 849-854, 1997）、細胞傷害性Ｔ細胞を刺激す
るＱＳ２１（Quil1aia saponaria、Cambridge Biotec
h，Worcester，MAより商業的に入手可能）、水酸化アル
ミニウム、リン酸アルミニウム、酸化アルミニウム、油
性エマルジョン、サポニン、ビタミンＥ溶解物等を具体
的に挙げることができる。
【００２１】前記スクリーニング方法により得られる、
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができるＣＴＬ認識抗原若しくは該抗原エ
ピトープ又はそれらをコードするＤＮＡは、細胞性免疫
や体液性免疫等の免疫応答誘導用ワクチンとして用いる
ことができる。本発明の免疫応答誘導用ワクチンとして
は、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴ
Ｌを誘導することができるＣＴＬ認識抗原、例えば、配
列番号１に示されるＨＴＬＶ−ＩのＴａｘタンパク質
や、配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
アミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫
瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができるタンパク
質、又は、ＣＴＬ認識抗原エピトープ、例えば、本発明
の配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド
や、配列番号２に示されるアミノ酸配列において、１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
アミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫
瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができるペプチド
を有効成分として含有する免疫応答誘導用ワクチンや、
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができる上記ＣＴＬ認識抗原又は該抗原エ
ピトープをコードするＤＮＡを有効成分として含有する
免疫応答誘導用ワクチンなどを挙げることができる。ま
た、本発明の免疫応答誘導用ワクチンとしては、さらに
細胞性の又は局所的な免疫を増強する種々のアジュバン
トを含むものがより好ましく、かかるアジュバントとし
ては、ＩＳＳ−ＯＤＮ等の前記ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対す
る抗腫瘍効果を増強するアジュバントのスクリーニング
方法により得られるアジュバントを例示することができ
る。アジュバントを用いる場合、アジュバントとなる種
々の菌体成分や毒素等と、前記ＣＴＬ認識抗原又は該抗
原エピトープ、好ましくは配列番号２に示されるアミノ
酸配列からなる抗原エピトープペプチドとを連続してコ
ードするＤＮＡから作製した組換え融合タンパクあるい
は組換え融合ペプチドとして用いることもできる。
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができるＣＴＬ認識抗原若しくは該抗原エ
ピトープ又はそれらをコードするＤＮＡは、細胞性免疫
や体液性免疫等の免疫応答誘導用ワクチンとして用いる
ことができる。本発明の免疫応答誘導用ワクチンとして
は、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴ
Ｌを誘導することができるＣＴＬ認識抗原、例えば、配
列番号１に示されるＨＴＬＶ−ＩのＴａｘタンパク質
や、配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
アミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫
瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができるタンパク
質、又は、ＣＴＬ認識抗原エピトープ、例えば、本発明
の配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるペプチド
や、配列番号２に示されるアミノ酸配列において、１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
アミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫
瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができるペプチド
を有効成分として含有する免疫応答誘導用ワクチンや、
ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴＬを
誘導することができる上記ＣＴＬ認識抗原又は該抗原エ
ピトープをコードするＤＮＡを有効成分として含有する
免疫応答誘導用ワクチンなどを挙げることができる。ま
た、本発明の免疫応答誘導用ワクチンとしては、さらに
細胞性の又は局所的な免疫を増強する種々のアジュバン
トを含むものがより好ましく、かかるアジュバントとし
ては、ＩＳＳ−ＯＤＮ等の前記ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対す
る抗腫瘍効果を増強するアジュバントのスクリーニング
方法により得られるアジュバントを例示することができ
る。アジュバントを用いる場合、アジュバントとなる種
々の菌体成分や毒素等と、前記ＣＴＬ認識抗原又は該抗
原エピトープ、好ましくは配列番号２に示されるアミノ
酸配列からなる抗原エピトープペプチドとを連続してコ
ードするＤＮＡから作製した組換え融合タンパクあるい
は組換え融合ペプチドとして用いることもできる。
【００２２】また、本発明の免疫応答誘導用ワクチン
は、医薬的に容認可能な担体または希釈剤、免疫賦活
剤、添加剤等を含んでいてもよい。担体または希釈剤と
しては、例えば、ＳＰＧＡなどの安定化剤や、ソルビト
ール、マンニトール、澱粉、スクロース、グルコース、
デキストラン等の炭水化物や、アルブミン、カゼイン等
のタンパク質や、ウシ血清、スキムミルク等のタンパク
質含有物質や、リン酸緩衝液、生理食塩水、水等の緩衝
液などを具体的に挙げることができる。免疫賦活財とし
ては、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロ
イキン−１２（ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子α（ＴＨＦ
−α）等のサイトカインを具体的に例示することがで
き、添加剤としては、低分子量のポリペプチド（約１０
残基未満）、タンパク質、アミノ酸、グルコース又はデ
キストランを含む炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート
剤、蛋白質安定化剤、微生物増殖阻止若しくは抑制剤等
を例示することができるがこれらに限定されるものでは
ない。
は、医薬的に容認可能な担体または希釈剤、免疫賦活
剤、添加剤等を含んでいてもよい。担体または希釈剤と
しては、例えば、ＳＰＧＡなどの安定化剤や、ソルビト
ール、マンニトール、澱粉、スクロース、グルコース、
デキストラン等の炭水化物や、アルブミン、カゼイン等
のタンパク質や、ウシ血清、スキムミルク等のタンパク
質含有物質や、リン酸緩衝液、生理食塩水、水等の緩衝
液などを具体的に挙げることができる。免疫賦活財とし
ては、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロ
イキン−１２（ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子α（ＴＨＦ
−α）等のサイトカインを具体的に例示することがで
き、添加剤としては、低分子量のポリペプチド（約１０
残基未満）、タンパク質、アミノ酸、グルコース又はデ
キストランを含む炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート
剤、蛋白質安定化剤、微生物増殖阻止若しくは抑制剤等
を例示することができるがこれらに限定されるものでは
ない。
【００２３】本発明により提供される医薬品や医薬組成
物としては、前記免疫応答誘導用ワクチンの他に、免疫
応答誘導用ワクチンを非ヒト動物等に投与することによ
り誘導されるＨＴＬＶ−Ｉ認識ＣＴＬを有効成分として
含有するものを挙げることができ、これら医薬品や医薬
組成物は、経口、静脈内、腹腔内、鼻腔内、皮内、皮
下、筋肉内等により投与することができる形状のものが
好ましい。投与すべき有効量は、医薬品や医薬組成物の
種類・組成、投与方法、患者の年齢や体重等を考慮して
適宜決定することができ、これらを１日あたり１〜数回
投与することが好ましい。また、経口投与する場合、通
常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与され
る。この際、製剤に用いることができる担体としては、
製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反
応しない物質が用いられる。
物としては、前記免疫応答誘導用ワクチンの他に、免疫
応答誘導用ワクチンを非ヒト動物等に投与することによ
り誘導されるＨＴＬＶ−Ｉ認識ＣＴＬを有効成分として
含有するものを挙げることができ、これら医薬品や医薬
組成物は、経口、静脈内、腹腔内、鼻腔内、皮内、皮
下、筋肉内等により投与することができる形状のものが
好ましい。投与すべき有効量は、医薬品や医薬組成物の
種類・組成、投与方法、患者の年齢や体重等を考慮して
適宜決定することができ、これらを１日あたり１〜数回
投与することが好ましい。また、経口投与する場合、通
常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与され
る。この際、製剤に用いることができる担体としては、
製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反
応しない物質が用いられる。
【００２４】また、剤型としては、錠剤、カプセル剤、
顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリ
ーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等を具体的に
例示することができ、これらの製剤は常法に従って調製
され、特に液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当
な媒体に溶解又は懸濁する形態とすることもできる。ま
た錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよ
い。注射剤の場合には、本発明のペプチドを水に溶解さ
せて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブ
ドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を
添加してもよい。またこれらの製剤は、治療上価値のあ
る他の成分を含有していてもよい。
顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリ
ーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等を具体的に
例示することができ、これらの製剤は常法に従って調製
され、特に液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当
な媒体に溶解又は懸濁する形態とすることもできる。ま
た錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよ
い。注射剤の場合には、本発明のペプチドを水に溶解さ
せて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブ
ドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を
添加してもよい。またこれらの製剤は、治療上価値のあ
る他の成分を含有していてもよい。
【００２５】ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有
するＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は
該抗原エピトープは、ＨＴＬＶ−Ｉの感染予防及び／又
はＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患の症状改善用食品素材として、
プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの
焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等
のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼ
こ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ヨーグ
ルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒
類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料
等の各種飲料や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨ
ネーズ、甘味料等の調味類や、豆腐、こんにゃく、その
他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜へ配合
し、機能性食品として摂取することもできる。
するＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は
該抗原エピトープは、ＨＴＬＶ−Ｉの感染予防及び／又
はＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患の症状改善用食品素材として、
プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの
焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等
のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼ
こ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、ヨーグ
ルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒
類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料
等の各種飲料や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨ
ネーズ、甘味料等の調味類や、豆腐、こんにゃく、その
他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜へ配合
し、機能性食品として摂取することもできる。
【００２６】
【実施例】以下に、実施例を揚げてこの発明を更に具体
的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定
されるものではない。 実施例１（細胞株） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ（J. Virol. 73, 6031-6040, 199
9）は、免疫正常ラットF344/N Jcl-rnu/+（ｎｕ／＋）
（４週齢雌ラット；Clea Japan, Inc.社製）のＴ細胞に
ＨＴＬＶ−Ｉを感染させて樹立した不死化ラットＴ細胞
株ＦＰＭ１を、ヌードラットF344/N Jcl-rnu/ rnu（ｎ
ｕ／ｎｕ）の体内で増殖させて樹立した（J. Virol. 7
3, 6436-6443, 1999）。ＦＰＭ−ＳＶは、ｎｕ／＋ラッ
ト由来の腎臓細胞株にＨＴＬＶ−Ｉ陰性ＳＶ４０を形質
転換することによって樹立した（J. Virol. 73, 6031-6
040, 1999）。ＷＫＡＨラットの脾臓細胞から樹立した
ＨＴＬＶ−Ｉ感染Ｔ細胞株（ＴＡＲＳ−１；J. Exp. Me
d. 159, 1105-1116, 1984）は、北海道大学のDr. T. Yo
shikiから提供されたものを用いた。ＲＴ１．Ａ1／ＴＡ
ＲＳ−１は、ＲＴ１．Ａ1発現プラスミドであるｐＲｅ
ｐ１０をＴＡＲＳ−１細胞にトランスフェクションし、
インビトロで４００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンで選
択することによって樹立した。なお、ｐＲｅｐ１０（Im
munogenetics 39, 447, 1994）は、Dr. S. Salgar（Mia
mi Univ., FL）から提供されたものを用い、上記ＲＴ
１．Ａ1／ＴＡＲＳ−１細胞におけるＲＴ１．Ａ1の発現
は免疫蛍光分析により確認した。ｎｕ／＋ラットから樹
立したＩＬ−２依存ＨＴＬＶ−Ｉ陰性ＣＤ８+Ｔ細胞株
であるＧ１４及びＴａｘ遺伝子を安定発現する細胞であ
るＧ１４−Ｔａｘ細胞株は、文献（J. Virol. 74, 9610
-9616, 2000）記載の方法により調製した。また、使用
した全細胞株は、１０％の熱不活性ＦＣＳ（Whittaker,
Walkersville, MD）、ペニシリン、及びストレプトマ
イシンを含むＲＰＭＩ１６４０で保存し、上記Ｇ１４及
びＧ１４−Ｔａｘにおいては、１０Ｕ／ｍｌの組換えヒ
トＩＬ−２（rhIL-2）（塩野義製薬社製）を添加したＲ
ＰＭＩ１６４０培地で保存した。
的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定
されるものではない。 実施例１（細胞株） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ（J. Virol. 73, 6031-6040, 199
9）は、免疫正常ラットF344/N Jcl-rnu/+（ｎｕ／＋）
（４週齢雌ラット；Clea Japan, Inc.社製）のＴ細胞に
ＨＴＬＶ−Ｉを感染させて樹立した不死化ラットＴ細胞
株ＦＰＭ１を、ヌードラットF344/N Jcl-rnu/ rnu（ｎ
ｕ／ｎｕ）の体内で増殖させて樹立した（J. Virol. 7
3, 6436-6443, 1999）。ＦＰＭ−ＳＶは、ｎｕ／＋ラッ
ト由来の腎臓細胞株にＨＴＬＶ−Ｉ陰性ＳＶ４０を形質
転換することによって樹立した（J. Virol. 73, 6031-6
040, 1999）。ＷＫＡＨラットの脾臓細胞から樹立した
ＨＴＬＶ−Ｉ感染Ｔ細胞株（ＴＡＲＳ−１；J. Exp. Me
d. 159, 1105-1116, 1984）は、北海道大学のDr. T. Yo
shikiから提供されたものを用いた。ＲＴ１．Ａ1／ＴＡ
ＲＳ−１は、ＲＴ１．Ａ1発現プラスミドであるｐＲｅ
ｐ１０をＴＡＲＳ−１細胞にトランスフェクションし、
インビトロで４００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンで選
択することによって樹立した。なお、ｐＲｅｐ１０（Im
munogenetics 39, 447, 1994）は、Dr. S. Salgar（Mia
mi Univ., FL）から提供されたものを用い、上記ＲＴ
１．Ａ1／ＴＡＲＳ−１細胞におけるＲＴ１．Ａ1の発現
は免疫蛍光分析により確認した。ｎｕ／＋ラットから樹
立したＩＬ−２依存ＨＴＬＶ−Ｉ陰性ＣＤ８+Ｔ細胞株
であるＧ１４及びＴａｘ遺伝子を安定発現する細胞であ
るＧ１４−Ｔａｘ細胞株は、文献（J. Virol. 74, 9610
-9616, 2000）記載の方法により調製した。また、使用
した全細胞株は、１０％の熱不活性ＦＣＳ（Whittaker,
Walkersville, MD）、ペニシリン、及びストレプトマ
イシンを含むＲＰＭＩ１６４０で保存し、上記Ｇ１４及
びＧ１４−Ｔａｘにおいては、１０Ｕ／ｍｌの組換えヒ
トＩＬ−２（rhIL-2）（塩野義製薬社製）を添加したＲ
ＰＭＩ１６４０培地で保存した。
【００２７】実施例２（免疫Ｔ細胞サブセットの調製）
４週齢のｎｕ／＋ラットの腹腔内に、２×１０7のＦＰ
Ｍ１−Ｖ１ＡＸ細胞を２週間の間隔をあけて２回投与し
て免疫した。最終免疫の１週間後、脾臓Ｔ細胞を単離
し、ナイロンウールカラムで精製した後、さらに補体溶
解法（complement lysis method）によりリンパ球サブ
セットを精製した。簡潔に説明すると、脾臓Ｔ細胞の浮
遊物を、抗ラットＣＤ８モノクローナル抗体（Ｒ１−１
０Ｂ５）又は抗ラットＣＤ４モノクローナル抗体（ＲＴ
Ｈ−７）と混合し、氷上で３０分間インキュベーション
した。１％ＦＣＳ−ＰＢＳで洗浄した後、上記細胞を２
％のウサギ血清（Cedarlane Laboratories Limited, On
tario, Canada）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中におい
て３７℃で４５分間インキュベーションし、１０％ＦＣ
Ｓ−ＲＰＭＩ１６４０で２回洗浄した。その後、フロー
サイトメトリー分析によりＣＤ８+又はＣＤ４+Ｔ細胞が
９８％以上に濃縮されているかどうかを確認した。
Ｍ１−Ｖ１ＡＸ細胞を２週間の間隔をあけて２回投与し
て免疫した。最終免疫の１週間後、脾臓Ｔ細胞を単離
し、ナイロンウールカラムで精製した後、さらに補体溶
解法（complement lysis method）によりリンパ球サブ
セットを精製した。簡潔に説明すると、脾臓Ｔ細胞の浮
遊物を、抗ラットＣＤ８モノクローナル抗体（Ｒ１−１
０Ｂ５）又は抗ラットＣＤ４モノクローナル抗体（ＲＴ
Ｈ−７）と混合し、氷上で３０分間インキュベーション
した。１％ＦＣＳ−ＰＢＳで洗浄した後、上記細胞を２
％のウサギ血清（Cedarlane Laboratories Limited, On
tario, Canada）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中におい
て３７℃で４５分間インキュベーションし、１０％ＦＣ
Ｓ−ＲＰＭＩ１６４０で２回洗浄した。その後、フロー
サイトメトリー分析によりＣＤ８+又はＣＤ４+Ｔ細胞が
９８％以上に濃縮されているかどうかを確認した。
【００２８】実施例３（ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の
抗腫瘍効果） 本発明者らは、以前にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株ＦＰ
Ｍ１−Ｖ１ＡＸを投与したF344/N Jcl-rnu/rnu（ｎｕ／
ｎｕ）ラットに、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞で免疫したラッ
トの脾臓Ｔ細胞を養子移入することにより悪性リンパ腫
の増殖を効果的に阻害できることを報告している（J. V
irol. 73, 6031-6040, 1999）。そこで、インビボでの
腫瘍の退行に直接必要とされる免疫Ｔ細胞のサブセット
を明らかにするために、実施例２記載の方法により単離
したＣＤ４+又はＣＤ８+細胞群を用いて、F344/N Jcl-r
nu/rnu（ｎｕ／ｎｕ）ラットの各サブセットに対する抗
腫瘍効果を調べてみた。４週齢のｎｕ／ｎｕ雌ラット
（Clea Japan, Inc.社製）に２×１０7のＦＰＭ１−Ｖ
１ＡＸ細胞株を皮下接種すると同時に、実施例２により
単離した１０7のＣＤ４+Ｔ細胞（▲）、ＣＤ８+Ｔ細胞
（■）又は全Ｔ細胞（●）を腹腔内投与し、それぞれの
皮下腫瘍の大きさをカリパスで１日おきに測定し、腫瘍
増殖の抑制効果を調べてみた。なお、腫瘍の大きさ
（Ｖ；ｍｍ3）は、上記測定により最長表面長（ｍｍ；
ａ）と幅（ｍｍ；ｂ）を決定し、文献（J. Virol. 73,
6031-6040, 1999）記載の公式（Ｖ＝ａｂ2／２）を用い
て求めた。なお、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞株を単独で皮
下接種した４週齢のｎｕ／ｎｕラットをコントロール
（○）として用いた。
抗腫瘍効果） 本発明者らは、以前にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株ＦＰ
Ｍ１−Ｖ１ＡＸを投与したF344/N Jcl-rnu/rnu（ｎｕ／
ｎｕ）ラットに、ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞で免疫したラッ
トの脾臓Ｔ細胞を養子移入することにより悪性リンパ腫
の増殖を効果的に阻害できることを報告している（J. V
irol. 73, 6031-6040, 1999）。そこで、インビボでの
腫瘍の退行に直接必要とされる免疫Ｔ細胞のサブセット
を明らかにするために、実施例２記載の方法により単離
したＣＤ４+又はＣＤ８+細胞群を用いて、F344/N Jcl-r
nu/rnu（ｎｕ／ｎｕ）ラットの各サブセットに対する抗
腫瘍効果を調べてみた。４週齢のｎｕ／ｎｕ雌ラット
（Clea Japan, Inc.社製）に２×１０7のＦＰＭ１−Ｖ
１ＡＸ細胞株を皮下接種すると同時に、実施例２により
単離した１０7のＣＤ４+Ｔ細胞（▲）、ＣＤ８+Ｔ細胞
（■）又は全Ｔ細胞（●）を腹腔内投与し、それぞれの
皮下腫瘍の大きさをカリパスで１日おきに測定し、腫瘍
増殖の抑制効果を調べてみた。なお、腫瘍の大きさ
（Ｖ；ｍｍ3）は、上記測定により最長表面長（ｍｍ；
ａ）と幅（ｍｍ；ｂ）を決定し、文献（J. Virol. 73,
6031-6040, 1999）記載の公式（Ｖ＝ａｂ2／２）を用い
て求めた。なお、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞株を単独で皮
下接種した４週齢のｎｕ／ｎｕラットをコントロール
（○）として用いた。
【００２９】上記の結果を図１に示す。ＣＤ４+及びＣ
Ｄ８+Ｔ細胞は共に、全Ｔ細胞と同様に、ＨＴＬＶ−Ｉ
感染腫瘍細胞株の成長を阻害する効果を有しているのが
確認できた。腫瘍ラットの肺及び縦隔洞リンパ節におい
ては結節が明らかに確認できるのに対して、免疫Ｔ細胞
のサブセットをトランスファーしたラットにおいては、
転移性結節はみられなかった。
Ｄ８+Ｔ細胞は共に、全Ｔ細胞と同様に、ＨＴＬＶ−Ｉ
感染腫瘍細胞株の成長を阻害する効果を有しているのが
確認できた。腫瘍ラットの肺及び縦隔洞リンパ節におい
ては結節が明らかに確認できるのに対して、免疫Ｔ細胞
のサブセットをトランスファーしたラットにおいては、
転移性結節はみられなかった。
【００３０】更に分析を実施するために、免疫Ｔ細胞
（ＣＤ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、又は全Ｔ細胞）をト
ランスファーすることにより、腫瘍が完全に退行した２
８日目における各ｎｕ／ｎｕラットから脾臓Ｔ細胞（Ｃ
Ｄ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、全Ｔ細胞）をそれぞれ単
離し、それぞれの標的細胞に対する細胞傷害活性を調べ
てみた。各ウエルにつき２ｍｌの１０％ＦＣＳ−ＲＰＭ
Ｉ１６４０が入った２４ウエルプレート中で、上記各種
脾臓Ｔ細胞（５×１０6細胞／ウエル）とホルマリンで
固定したＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞（２×１０6細胞／ウ
エル）とをそれぞれ６日間共培養し、かかる細胞（Ｅ；
エフェクター細胞）と標的細胞（Ｔ；ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘ、同系のＴ細胞株Ｇ１４、又はＧ１４−Ｔａｘ）の割
合（Ｅ／Ｔ）を１０として、文献（Immunology 14, 181
-196, 1968）記載のように51Ｃｒ放出分析を６時間行
い、標的細胞に対する細胞傷害活性を測定し、次式によ
り計算した。なお、値（平均値±ＳＤ）は３回の実験か
ら求めた。
（ＣＤ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、又は全Ｔ細胞）をト
ランスファーすることにより、腫瘍が完全に退行した２
８日目における各ｎｕ／ｎｕラットから脾臓Ｔ細胞（Ｃ
Ｄ４+Ｔ細胞、ＣＤ８+Ｔ細胞、全Ｔ細胞）をそれぞれ単
離し、それぞれの標的細胞に対する細胞傷害活性を調べ
てみた。各ウエルにつき２ｍｌの１０％ＦＣＳ−ＲＰＭ
Ｉ１６４０が入った２４ウエルプレート中で、上記各種
脾臓Ｔ細胞（５×１０6細胞／ウエル）とホルマリンで
固定したＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞（２×１０6細胞／ウ
エル）とをそれぞれ６日間共培養し、かかる細胞（Ｅ；
エフェクター細胞）と標的細胞（Ｔ；ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘ、同系のＴ細胞株Ｇ１４、又はＧ１４−Ｔａｘ）の割
合（Ｅ／Ｔ）を１０として、文献（Immunology 14, 181
-196, 1968）記載のように51Ｃｒ放出分析を６時間行
い、標的細胞に対する細胞傷害活性を測定し、次式によ
り計算した。なお、値（平均値±ＳＤ）は３回の実験か
ら求めた。
【００３１】
【数１】
【００３２】上記の結果を図２に示す。この結果から、
各種Ｔ細胞はＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ及びＧ１４−Ｔａｘに
対して高い細胞傷害活性を示したが、ＨＴＬＶ−Ｉ陰性
Ｇ１４細胞に対する細胞傷害活性はみられなかった。な
お、上記各種免疫Ｔ細胞（ＣＤ４+又はＣＤ８+免疫Ｔ細
胞）をトランスファーしたｎｕ／ｎｕラットから単離さ
れた脾臓Ｔ細胞においては、フローサイトメトリーによ
りそれぞれＣＤ４又はＣＤ８に対して陽性であることが
顕著に確認できた。これらの結果は、ＣＤ４+又はＣＤ
８+Ｔ細胞のＨＴＬＶ−Ｉ特異的細胞傷害活性がインビ
ボにおけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の直接の排除に強
く関与していることを示唆している。
各種Ｔ細胞はＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ及びＧ１４−Ｔａｘに
対して高い細胞傷害活性を示したが、ＨＴＬＶ−Ｉ陰性
Ｇ１４細胞に対する細胞傷害活性はみられなかった。な
お、上記各種免疫Ｔ細胞（ＣＤ４+又はＣＤ８+免疫Ｔ細
胞）をトランスファーしたｎｕ／ｎｕラットから単離さ
れた脾臓Ｔ細胞においては、フローサイトメトリーによ
りそれぞれＣＤ４又はＣＤ８に対して陽性であることが
顕著に確認できた。これらの結果は、ＣＤ４+又はＣＤ
８+Ｔ細胞のＨＴＬＶ−Ｉ特異的細胞傷害活性がインビ
ボにおけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の直接の排除に強
く関与していることを示唆している。
【００３３】実施例４（組換えワクシニアウイルス）
次に、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬｓが認識するウイルス
性抗原を調べてみるために、北海道大学のDr. H. Shida
から提供された４種類のＨＴＬＶ−Ｉ遺伝子を含む組換
えワクシニアウイルス（ｒｖｖ；Embo J. 6, 3379-338
4, 1987、J. Virol. 62, 3718-3728, 1988、Cell 55, 1
97-209, 1988）、すなわち、ＨＴＬＶ−Ｉのｅｎｖ遺伝
子を含むｒｖｖ（ＷＲ−ｅｎｖ）、ＨＴＬＶ−Ｉのｇａ
ｇ遺伝子を含むｒｖｖ（ＷＲ−ｇａｇ）、及びＨＴＬＶ
−ＩのｐＸ遺伝子を含むｒｖｖ（ＷＲ−４０Ｘ及びＷＲ
−２７Ｘ）を用いた。ＷＲ−２７Ｘはｐ２１Ｘ、ｐ２７
ｒｅｘ及びｐ４０ｔａｘを、ＷＲ−４０Ｘはｐ２１Ｘ及
びｐ４０ｔａｘを、発現する組換えワクシニアウイルス
である。１０m.o.i（multiplicity of infection）で上
記各ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ（ＷＲ−４０Ｘ、ＷＲ−２７
Ｘ、ＷＲ−ｅｎｖ、ＷＲ−ｇａｇ）をＦＰＭ−ＳＶ細胞
に３７℃で１時間感染させた。インキュベーション後、
１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０で細胞を１回洗浄し、
１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０で３７℃で１２時間培
養した。かかる感染細胞を以下の実施例に用いるために
放射性同位元素により標識した。
性抗原を調べてみるために、北海道大学のDr. H. Shida
から提供された４種類のＨＴＬＶ−Ｉ遺伝子を含む組換
えワクシニアウイルス（ｒｖｖ；Embo J. 6, 3379-338
4, 1987、J. Virol. 62, 3718-3728, 1988、Cell 55, 1
97-209, 1988）、すなわち、ＨＴＬＶ−Ｉのｅｎｖ遺伝
子を含むｒｖｖ（ＷＲ−ｅｎｖ）、ＨＴＬＶ−Ｉのｇａ
ｇ遺伝子を含むｒｖｖ（ＷＲ−ｇａｇ）、及びＨＴＬＶ
−ＩのｐＸ遺伝子を含むｒｖｖ（ＷＲ−４０Ｘ及びＷＲ
−２７Ｘ）を用いた。ＷＲ−２７Ｘはｐ２１Ｘ、ｐ２７
ｒｅｘ及びｐ４０ｔａｘを、ＷＲ−４０Ｘはｐ２１Ｘ及
びｐ４０ｔａｘを、発現する組換えワクシニアウイルス
である。１０m.o.i（multiplicity of infection）で上
記各ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ（ＷＲ−４０Ｘ、ＷＲ−２７
Ｘ、ＷＲ−ｅｎｖ、ＷＲ−ｇａｇ）をＦＰＭ−ＳＶ細胞
に３７℃で１時間感染させた。インキュベーション後、
１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０で細胞を１回洗浄し、
１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０で３７℃で１２時間培
養した。かかる感染細胞を以下の実施例に用いるために
放射性同位元素により標識した。
【００３４】実施例５（ラットＣＴＬｓが認識するＨＴ
ＬＶ−Ｉ抗原） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸを腹腔内投与したｎｕ／＋ラットか
ら単離した脾臓Ｔ細胞を、ホルマリンで固定したＦＰＭ
１−Ｖ１ＡＸで６日間刺激したものをエフェクター細胞
として以下の実施例に用いた。標的細胞としては、ＦＰ
Ｍ１−Ｖ１ＡＸ、ＦＰＭ−ＳＶ、及び、実施例４により
調製した各種ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ感染ＦＰＭ−ＳＶ細
胞（ＷＲ−４０Ｘ、ＷＲ−２７、ＷＲ−ｅｎｖ、ＷＲ−
ｇａｇ）を用いた。なお、ＨＴＬＶ−Ｉ遺伝子を含まな
いｒｖｖをＦＰＭ−ＳＶ細胞に感染させたもの（ＷＲ−
ＨＡ）をコントロールとして用いた。上記ＨＴＬＶ−Ｉ
−ｒｖｖ感染ＦＰＭ−ＳＶ細胞に対して免疫蛍光分析を
行ったところ、これらの細胞はＭＨＣクラスＩに対して
陽性を示すが、ＭＨＣクラスII抗原に対しては陰性であ
ったことから、これらの細胞はＭＨＣクラスＩに限定さ
れた抗原を選択的に発現していると考えられる。
ＬＶ−Ｉ抗原） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸを腹腔内投与したｎｕ／＋ラットか
ら単離した脾臓Ｔ細胞を、ホルマリンで固定したＦＰＭ
１−Ｖ１ＡＸで６日間刺激したものをエフェクター細胞
として以下の実施例に用いた。標的細胞としては、ＦＰ
Ｍ１−Ｖ１ＡＸ、ＦＰＭ−ＳＶ、及び、実施例４により
調製した各種ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ感染ＦＰＭ−ＳＶ細
胞（ＷＲ−４０Ｘ、ＷＲ−２７、ＷＲ−ｅｎｖ、ＷＲ−
ｇａｇ）を用いた。なお、ＨＴＬＶ−Ｉ遺伝子を含まな
いｒｖｖをＦＰＭ−ＳＶ細胞に感染させたもの（ＷＲ−
ＨＡ）をコントロールとして用いた。上記ＨＴＬＶ−Ｉ
−ｒｖｖ感染ＦＰＭ−ＳＶ細胞に対して免疫蛍光分析を
行ったところ、これらの細胞はＭＨＣクラスＩに対して
陽性を示すが、ＭＨＣクラスII抗原に対しては陰性であ
ったことから、これらの細胞はＭＨＣクラスＩに限定さ
れた抗原を選択的に発現していると考えられる。
【００３５】実施例３記載の方法と同様に、上記エフェ
クター細胞（Ｅ）と標的細胞（Ｔ）とを図３に示す各Ｅ
／Ｔの割合で用いることにより51Ｃｒ放出分析を行っ
た。なお、測定値（平均値±ＳＤ）は３回の実験から求
めた。その結果を図３に示す。これらの結果から、エフ
ェクター細胞は、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸに対しては高い傷
害性を有するが、ＦＰＭ−ＳＶ細胞に対しては傷害性を
示さなかった。また、ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ感染ＦＰＭ
−ＳＶ細胞のうち、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘを発現するＷ
Ｒ−４０Ｘ感染細胞とＷＲ−２７Ｘ感染細胞はエフェク
ター細胞に対して最も高い感受性を示した。ＨＴＬＶ−
Ｉのｅｎｖ（エンベロープ）を発現する標的細胞もまた
感受性を示していたが、その度合いはＨＴＬＶ−ＩのＴ
ａｘ発現細胞より低かった。しかし、ＨＴＬＶ−Ｉのｇ
ａｇを発現するＦＰＭ−ＳＶ細胞に対する細胞傷害活性
は、コントロールとしての標的細胞（ＷＲ−ＨＡ）に対
する細胞傷害活性と同様に低かった。
クター細胞（Ｅ）と標的細胞（Ｔ）とを図３に示す各Ｅ
／Ｔの割合で用いることにより51Ｃｒ放出分析を行っ
た。なお、測定値（平均値±ＳＤ）は３回の実験から求
めた。その結果を図３に示す。これらの結果から、エフ
ェクター細胞は、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸに対しては高い傷
害性を有するが、ＦＰＭ−ＳＶ細胞に対しては傷害性を
示さなかった。また、ＨＴＬＶ−Ｉ−ｒｖｖ感染ＦＰＭ
−ＳＶ細胞のうち、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘを発現するＷ
Ｒ−４０Ｘ感染細胞とＷＲ−２７Ｘ感染細胞はエフェク
ター細胞に対して最も高い感受性を示した。ＨＴＬＶ−
Ｉのｅｎｖ（エンベロープ）を発現する標的細胞もまた
感受性を示していたが、その度合いはＨＴＬＶ−ＩのＴ
ａｘ発現細胞より低かった。しかし、ＨＴＬＶ−Ｉのｇ
ａｇを発現するＦＰＭ−ＳＶ細胞に対する細胞傷害活性
は、コントロールとしての標的細胞（ＷＲ−ＨＡ）に対
する細胞傷害活性と同様に低かった。
【００３６】次に、非標識細胞による、標的細胞に対す
るＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株の細胞傷害性の阻害
を調べた。長期間培養することによって得られたＨＴＬ
Ｖ−ＩのＴａｘに対してより特異的なＣＤ８+ＣＴＬ細
胞株と、標的細胞（［3Ｈ］−ＴｄＲ標識ＦＰＭ１−Ｖ
１ＡＸ：５×１０3細胞／ウエル）とを、Ｅ／Ｔの割合
が１０となるように９６ウエルのＵ底プレートに移し、
さらに競合物と標的細胞との割合が図４に示される値に
なるように競合物［非標識化ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ
（●）、Ｇ１４−Ｔａｘ（■）、又はＧ１４（▲）］を
加え、３７℃で６時間インキュベーションした。その
後、Ｍｉｃｒｏ９６Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Skatron社
製）を用いて細胞を回収した後、残存した標的細胞量を
マイクロプレートβ−カウンター（microplate β-coun
ter；Micro Beta Plus社製）により測定し、特異的な細
胞傷害活性（％）を次式により計算した。値（平均値±
ＳＤ）は３回の実験から求めた。なお、上記標的細胞
は、あらかじめ１０6細胞あたり３．７ＭＢｑの［3Ｈ］
−ＴｄＲと共に３７℃で１２時間インキュベーションし
た後、３回洗浄したものを用いた。
るＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株の細胞傷害性の阻害
を調べた。長期間培養することによって得られたＨＴＬ
Ｖ−ＩのＴａｘに対してより特異的なＣＤ８+ＣＴＬ細
胞株と、標的細胞（［3Ｈ］−ＴｄＲ標識ＦＰＭ１−Ｖ
１ＡＸ：５×１０3細胞／ウエル）とを、Ｅ／Ｔの割合
が１０となるように９６ウエルのＵ底プレートに移し、
さらに競合物と標的細胞との割合が図４に示される値に
なるように競合物［非標識化ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸ
（●）、Ｇ１４−Ｔａｘ（■）、又はＧ１４（▲）］を
加え、３７℃で６時間インキュベーションした。その
後、Ｍｉｃｒｏ９６Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（Skatron社
製）を用いて細胞を回収した後、残存した標的細胞量を
マイクロプレートβ−カウンター（microplate β-coun
ter；Micro Beta Plus社製）により測定し、特異的な細
胞傷害活性（％）を次式により計算した。値（平均値±
ＳＤ）は３回の実験から求めた。なお、上記標的細胞
は、あらかじめ１０6細胞あたり３．７ＭＢｑの［3Ｈ］
−ＴｄＲと共に３７℃で１２時間インキュベーションし
た後、３回洗浄したものを用いた。
【００３７】
【数２】
【００３８】上記の結果を図４に示す。このことから、
ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸに対するＣＴＬ細胞株の細胞傷害活
性は、非標識化Ｇ１４−Ｔａｘを増加させることにより
顕著に阻害されたが、Ｇ１４細胞では阻害されなかっ
た。以上のことから、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘが、インビ
ボで同系のＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞を投与したｎｕ／＋ラ
ット由来のＣＴＬが特異的に認識する主な抗原であるこ
とがわかった。
ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸに対するＣＴＬ細胞株の細胞傷害活
性は、非標識化Ｇ１４−Ｔａｘを増加させることにより
顕著に阻害されたが、Ｇ１４細胞では阻害されなかっ
た。以上のことから、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘが、インビ
ボで同系のＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞を投与したｎｕ／＋ラ
ット由来のＣＴＬが特異的に認識する主な抗原であるこ
とがわかった。
【００３９】実施例６（ｎｕ／＋ラットにおけるＨＴＬ
Ｖ−Ｉ特異的細胞傷害活性のＭＨＣクラスＩ拘束） 長期培養でＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株（２種類の
ＣＤ８+ＣＴＬ細胞株及びＣＤ４+ＣＴＬ細胞株）を誘導
するために、２．５×１０6細胞／ウエルの脾臓Ｔ細胞
を、２０Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ−２が添加された１０％Ｆ
ＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０中で同数のホルマリン固定化Ｆ
ＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞といっしょに共培養し、２週間毎
にホルマリン固定化ＦＰＭ１細胞で定期的に刺激するこ
とにより２種類のＣＤ８+ＣＴＬ細胞株（ＣＤ８+ＣＴＬ
−１及びＣＤ８+ＣＴＬ−２）及びＣＤ４+ＣＴＬ細胞株
を樹立し、これらの誘導されたＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴ
Ｌ細胞株を用いて細胞傷害活性に対するＭＨＣクラスＩ
拘束性を実施例５の方法と同様に調べてみた。なお、標
的細胞としては、実施例５の方法と同様に［3Ｈ］−Ｔ
ｄＲで標識化された４つの細胞株、ラットＭＨＣクラス
Ｉ分子であるＲＴ１．Ａ1を発現するｎｕ／＋ラット由
来のＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸと、ＲＴ１．Ａ1を発現しない
ＷＫＡＨラット由来のＷ７ＫＳＶと、ＲＴ１．Ａ1を発
現しないＷＫＡＨラット由来のＴＡＲＳ−１と、ＴＡＲ
Ｓ−１細胞にＲＴ１．Ａ1ｃＤＮＡを安定的にトランス
フェクションすることにより樹立した細胞株ＲＴ１．Ａ
1／ＴＡＲＳ−１とを用いた。
Ｖ−Ｉ特異的細胞傷害活性のＭＨＣクラスＩ拘束） 長期培養でＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株（２種類の
ＣＤ８+ＣＴＬ細胞株及びＣＤ４+ＣＴＬ細胞株）を誘導
するために、２．５×１０6細胞／ウエルの脾臓Ｔ細胞
を、２０Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ−２が添加された１０％Ｆ
ＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０中で同数のホルマリン固定化Ｆ
ＰＭ１−Ｖ１ＡＸ細胞といっしょに共培養し、２週間毎
にホルマリン固定化ＦＰＭ１細胞で定期的に刺激するこ
とにより２種類のＣＤ８+ＣＴＬ細胞株（ＣＤ８+ＣＴＬ
−１及びＣＤ８+ＣＴＬ−２）及びＣＤ４+ＣＴＬ細胞株
を樹立し、これらの誘導されたＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴ
Ｌ細胞株を用いて細胞傷害活性に対するＭＨＣクラスＩ
拘束性を実施例５の方法と同様に調べてみた。なお、標
的細胞としては、実施例５の方法と同様に［3Ｈ］−Ｔ
ｄＲで標識化された４つの細胞株、ラットＭＨＣクラス
Ｉ分子であるＲＴ１．Ａ1を発現するｎｕ／＋ラット由
来のＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸと、ＲＴ１．Ａ1を発現しない
ＷＫＡＨラット由来のＷ７ＫＳＶと、ＲＴ１．Ａ1を発
現しないＷＫＡＨラット由来のＴＡＲＳ−１と、ＴＡＲ
Ｓ−１細胞にＲＴ１．Ａ1ｃＤＮＡを安定的にトランス
フェクションすることにより樹立した細胞株ＲＴ１．Ａ
1／ＴＡＲＳ−１とを用いた。
【００４０】上記の結果を図５に示す。２種類のＣＤ８
+ＣＴＬ細胞株（ＣＤ８+ＣＴＬ−１及びＣＤ８+ＣＴＬ
−２）は、ＴＡＲＳ−１細胞ではなくＲＴ１．Ａ1／Ｔ
ＡＲＳ−１細胞を著しく溶解したが、ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘ細胞で免疫したｎｕ／＋ラット由来のＣＤ４+ＣＴＬ
細胞株では溶解が確認できなかった。これらのことか
ら、ｎｕ／＋ラット由来のＨＴＬＶ−ＩのＴａｘに対し
て特異的なＣＤ８+ＣＴＬ細胞株の細胞傷害活性は、ラ
ットＭＨＣクラスＩのＲＴ１．Ａ1によって拘束される
ことがわかった。
+ＣＴＬ細胞株（ＣＤ８+ＣＴＬ−１及びＣＤ８+ＣＴＬ
−２）は、ＴＡＲＳ−１細胞ではなくＲＴ１．Ａ1／Ｔ
ＡＲＳ−１細胞を著しく溶解したが、ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘ細胞で免疫したｎｕ／＋ラット由来のＣＤ４+ＣＴＬ
細胞株では溶解が確認できなかった。これらのことか
ら、ｎｕ／＋ラット由来のＨＴＬＶ−ＩのＴａｘに対し
て特異的なＣＤ８+ＣＴＬ細胞株の細胞傷害活性は、ラ
ットＭＨＣクラスＩのＲＴ１．Ａ1によって拘束される
ことがわかった。
【００４１】実施例７（ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬの認
識エピトープの同定） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで免疫したｎｕ／＋ラットから得た
ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＤ８+ＣＴＬが認識する
標的エピトープを同定するため、ペプチドマッピング分
析を行った。ラットＭＨＣクラスＩ（ＲＴ１．Ａ1）に
拘束されるＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は、ｎｕ／
＋ラット由来ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘで免疫した同系免疫正常ラット由来の脾臓Ｔ細胞を、
ホルマリン固定ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで２週間おきに繰り
返し刺激を行うことにより樹立した。また、図６、７及
び８に示される、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘのアミノ酸配列
に相当する一連の合成ペプチドのいくつかは、製造者が
指定する化学物質やプログラムサイクルを用いて、自動
ペプチド合成機（model PSSM-8; Shimazu Corporation,
Kyoto, Japan）による固相ペプチド合成法により合成
し、フッ化水素で樹脂から分離させた後、ＨＰＬＣシス
テム（Model SPRINT; PE Biosystems Japan, Tokyo, Ja
pan）の逆相クロマトグラフィーにより９５％以上の純
度で精製した。なお、９ｍｅｒオリゴペプチド（Ｔａｘ
１７９−１８７，１８０−１８８，１８１−１８９，１
８２−１９０，１８３−１９１，１８４−１９２，１８
５−１９３，１８６−１９４，１８７−１９５及びイン
フルエンザＭａｔｒｉｘ５８−６６）は、Ｈｏｋｕｄｏ
Ｃｏ．（北海道、日本）に委託合成したものを用い
た。
識エピトープの同定） ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで免疫したｎｕ／＋ラットから得た
ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＤ８+ＣＴＬが認識する
標的エピトープを同定するため、ペプチドマッピング分
析を行った。ラットＭＨＣクラスＩ（ＲＴ１．Ａ1）に
拘束されるＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は、ｎｕ／
＋ラット由来ＨＴＬＶ−Ｉ感染細胞株ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘで免疫した同系免疫正常ラット由来の脾臓Ｔ細胞を、
ホルマリン固定ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸで２週間おきに繰り
返し刺激を行うことにより樹立した。また、図６、７及
び８に示される、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘのアミノ酸配列
に相当する一連の合成ペプチドのいくつかは、製造者が
指定する化学物質やプログラムサイクルを用いて、自動
ペプチド合成機（model PSSM-8; Shimazu Corporation,
Kyoto, Japan）による固相ペプチド合成法により合成
し、フッ化水素で樹脂から分離させた後、ＨＰＬＣシス
テム（Model SPRINT; PE Biosystems Japan, Tokyo, Ja
pan）の逆相クロマトグラフィーにより９５％以上の純
度で精製した。なお、９ｍｅｒオリゴペプチド（Ｔａｘ
１７９−１８７，１８０−１８８，１８１−１８９，１
８２−１９０，１８３−１９１，１８４−１９２，１８
５−１９３，１８６−１９４，１８７−１９５及びイン
フルエンザＭａｔｒｉｘ５８−６６）は、Ｈｏｋｕｄｏ
Ｃｏ．（北海道、日本）に委託合成したものを用い
た。
【００４２】細胞傷害活性分析に用いる標的細胞を感作
するために、放射性同位元素［3Ｈ］−ＴｄＲでラベル
した同系ラット由来の標的細胞（Ｇ１４細胞；５×１０
3細胞／ウエル）に、２９個の部分的に重なる合成ペプ
チド（１５〜２４ｍｅｒｓ；図６及び７に示されるＴａ
ｘタンパク質における部分ペプチド）をそれぞれ１０μ
Ｍの濃度となるように加えて３７℃で１時間培養した
後、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株に対する感受性を
６時間の［3Ｈ］−ＴｄＲ遊離法で測定し、値（平均値
±ＳＤ）を３回の実験から求めた。なお、Ｅ／Ｔは１０
にて行った。その結果を図６及び７に示す。これらの結
果から、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は、ペプチド
Ｔａｘ１７７−２００又はＴａｘ１８１−１９５で感作
した標的細胞を効果的に溶解し、また、ペプチドＴａｘ
１７−４０、Ｔａｘ３３〜５６、Ｔａｘ８１−１０４、
又はＴａｘ９７−１２０で感作した標的細胞に対して低
い細胞傷害活性を示した（図６）。長期培養したＣＴＬ
株を用いた場合においても、Ｔａｘ１７７−２００又は
Ｔａｘ１８１−１９５で感作した標的細胞を顕著に溶解
するのが確認できた（図７）。Ｔａｘ１７７−２００又
はＴａｘ１８１−１９５以外の合成ペプチドで感作した
標的細胞では、有意の傷害性は確認できなかった。
するために、放射性同位元素［3Ｈ］−ＴｄＲでラベル
した同系ラット由来の標的細胞（Ｇ１４細胞；５×１０
3細胞／ウエル）に、２９個の部分的に重なる合成ペプ
チド（１５〜２４ｍｅｒｓ；図６及び７に示されるＴａ
ｘタンパク質における部分ペプチド）をそれぞれ１０μ
Ｍの濃度となるように加えて３７℃で１時間培養した
後、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株に対する感受性を
６時間の［3Ｈ］−ＴｄＲ遊離法で測定し、値（平均値
±ＳＤ）を３回の実験から求めた。なお、Ｅ／Ｔは１０
にて行った。その結果を図６及び７に示す。これらの結
果から、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株は、ペプチド
Ｔａｘ１７７−２００又はＴａｘ１８１−１９５で感作
した標的細胞を効果的に溶解し、また、ペプチドＴａｘ
１７−４０、Ｔａｘ３３〜５６、Ｔａｘ８１−１０４、
又はＴａｘ９７−１２０で感作した標的細胞に対して低
い細胞傷害活性を示した（図６）。長期培養したＣＴＬ
株を用いた場合においても、Ｔａｘ１７７−２００又は
Ｔａｘ１８１−１９５で感作した標的細胞を顕著に溶解
するのが確認できた（図７）。Ｔａｘ１７７−２００又
はＴａｘ１８１−１９５以外の合成ペプチドで感作した
標的細胞では、有意の傷害性は確認できなかった。
【００４３】以上のことから、Ｔａｘ１７７−２００の
領域に含まれる１０種の異なる９アミノ酸合成ペプチド
（９ｍペプチド）を合成し、上記と同様の方法によりＨ
ＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬエピトープの詳細なマ
ッピングを行った。使用した合成ペプチドのアミノ酸配
列を表１に、これら９アミノ酸合成ペプチドを用いた細
胞傷害活性分析の結果を図８に示す。その結果、ペプチ
ドＴａｘ１８０−１８８、Ｔａｘ１８１−１８９で感作
した標的細胞が特に強いＣＴＬ感受性を示し、次いでＴ
ａｘ１７９−１８７、Ｔａｘ１８２−１９０で感作した
標的細胞がＣＴＬに対して感受性を示していたが、Ｔａ
ｘ１７９〜１８７においては、複数の実験で異なる結果
が得られた。以上の結果からＴａｘ１８０−１８８〜Ｔ
ａｘ１８２−１９０に、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬの認
識する主要エピトープが存在する可能性が示唆された。
領域に含まれる１０種の異なる９アミノ酸合成ペプチド
（９ｍペプチド）を合成し、上記と同様の方法によりＨ
ＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬエピトープの詳細なマ
ッピングを行った。使用した合成ペプチドのアミノ酸配
列を表１に、これら９アミノ酸合成ペプチドを用いた細
胞傷害活性分析の結果を図８に示す。その結果、ペプチ
ドＴａｘ１８０−１８８、Ｔａｘ１８１−１８９で感作
した標的細胞が特に強いＣＴＬ感受性を示し、次いでＴ
ａｘ１７９−１８７、Ｔａｘ１８２−１９０で感作した
標的細胞がＣＴＬに対して感受性を示していたが、Ｔａ
ｘ１７９〜１８７においては、複数の実験で異なる結果
が得られた。以上の結果からＴａｘ１８０−１８８〜Ｔ
ａｘ１８２−１９０に、ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬの認
識する主要エピトープが存在する可能性が示唆された。
【００４４】
【表１】
【００４５】次に、主要な認識エピトープを明らかにす
るためＣＴＬの傷害活性誘導に必要なＴａｘ１８０−１
８８、Ｔａｘ１８１−１８９、Ｔａｘ１８２−１９０の
ペプチド濃度を検討した。段階希釈した各ペプチドであ
らかじめ１時間処理した標的細胞Ｇ１４をＨＴＬＶ−Ｉ
特異的ＣＴＬ細胞株と共培養し、標的細胞のＣＴＬ感受
性を検討した。なお、Ｅ／Ｔの割合は１０で行い、値
（平均値±ＳＤ）は３回の実験から求めた。その結果を
図９に示す。これらの結果から、Ｔａｘ１８０−１８８
（●）で感作した標的細胞で強いＣＴＬ感受性が認めら
れ、１０-3ｐＭという極めて低いペプチド濃度において
もＣＴＬに対して感受性を示すことが明らかとなった。
一方、Ｔａｘ１８０−１８８と同程度の細胞傷害活性を
誘導するために、Ｔａｘ１８１−１８９（■）は１μ
Ｍ、Ｔａｘ１８２−１９０（▲）は１０μＭの濃度が必
要であることがわかった。また、コントロールとして用
いたＴａｘ１１−１９（○）ではいかなる濃度において
もＣＴＬ感受性は認められなかった。以上の結果から、
ＲＴ１．Ａ1に拘束されるＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬの
主要な認識エピトープは９アミノ酸からなるペプチド、
Ｔａｘ１８０−１８８（ＧＡＦＬＴＮＶＰＹ：配列番号
２）であることが明らかとなった。
るためＣＴＬの傷害活性誘導に必要なＴａｘ１８０−１
８８、Ｔａｘ１８１−１８９、Ｔａｘ１８２−１９０の
ペプチド濃度を検討した。段階希釈した各ペプチドであ
らかじめ１時間処理した標的細胞Ｇ１４をＨＴＬＶ−Ｉ
特異的ＣＴＬ細胞株と共培養し、標的細胞のＣＴＬ感受
性を検討した。なお、Ｅ／Ｔの割合は１０で行い、値
（平均値±ＳＤ）は３回の実験から求めた。その結果を
図９に示す。これらの結果から、Ｔａｘ１８０−１８８
（●）で感作した標的細胞で強いＣＴＬ感受性が認めら
れ、１０-3ｐＭという極めて低いペプチド濃度において
もＣＴＬに対して感受性を示すことが明らかとなった。
一方、Ｔａｘ１８０−１８８と同程度の細胞傷害活性を
誘導するために、Ｔａｘ１８１−１８９（■）は１μ
Ｍ、Ｔａｘ１８２−１９０（▲）は１０μＭの濃度が必
要であることがわかった。また、コントロールとして用
いたＴａｘ１１−１９（○）ではいかなる濃度において
もＣＴＬ感受性は認められなかった。以上の結果から、
ＲＴ１．Ａ1に拘束されるＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬの
主要な認識エピトープは９アミノ酸からなるペプチド、
Ｔａｘ１８０−１８８（ＧＡＦＬＴＮＶＰＹ：配列番号
２）であることが明らかとなった。
【００４６】実施例８（ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的Ｃ
ＴＬによるＴａｘ１８０−１８８の認識） ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株が認識するＨＴＬＶ−
ＩのＴａｘの標的エピトープ中で、ペプチドＴａｘ１８
０−１８８が主要なものであるかどうかについて調べる
ために、非標識化競合物である、無処理のＧ１４細胞
（○）、１０μＭのＴａｘ１８０−１８８（■）又はＴ
ａｘ１１−１９（▲）であらかじめ感作したＧ１４細
胞、非標識化Ｇ１４−Ｔａｘ細胞（●）の存在下で、Ｈ
ＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株の［3Ｈ］−Ｔ
ｄＲ標識Ｇ１４−Ｔａｘ細胞に対する細胞傷害活性を測
定した。なお、Ｅ／Ｔの割合は１０で行い、値（平均値
±ＳＤ）は３回の実験から求めた。その結果を図１０に
示す。このことから、１０μＭのＴａｘ１８０−１８８
（■）で処理したＧ１４細胞を用いた場合、放射標識し
たＧ１４−Ｔａｘに対する細胞傷害活性は競合物／標的
細胞（competitor/Target）の割合が４０のときに完全
に阻害されることがわかった。また、Ｔａｘ１８０−１
８８で処理されたＧ１４細胞による競合効果は、非標識
化Ｇ１４−Ｔａｘ（●）による競合効果と同程度であっ
た。無処理のＧ１４細胞（○）又は１０μＭの各種ペプ
チド［Ｔａｘ１８１−１８９、Ｔａｘ１８２−１９０、
及びＴａｘ１１−１９（▲）］で処理したＧ１４細胞
は、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株の細胞傷
害活性に対してほとんど影響がなかった。これらの結果
は、エピトープＴａｘ１８０−１８８が、ＨＴＬＶ−Ｉ
のＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株が認識する主要エピトープ
であることを示唆している。
ＴＬによるＴａｘ１８０−１８８の認識） ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株が認識するＨＴＬＶ−
ＩのＴａｘの標的エピトープ中で、ペプチドＴａｘ１８
０−１８８が主要なものであるかどうかについて調べる
ために、非標識化競合物である、無処理のＧ１４細胞
（○）、１０μＭのＴａｘ１８０−１８８（■）又はＴ
ａｘ１１−１９（▲）であらかじめ感作したＧ１４細
胞、非標識化Ｇ１４−Ｔａｘ細胞（●）の存在下で、Ｈ
ＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株の［3Ｈ］−Ｔ
ｄＲ標識Ｇ１４−Ｔａｘ細胞に対する細胞傷害活性を測
定した。なお、Ｅ／Ｔの割合は１０で行い、値（平均値
±ＳＤ）は３回の実験から求めた。その結果を図１０に
示す。このことから、１０μＭのＴａｘ１８０−１８８
（■）で処理したＧ１４細胞を用いた場合、放射標識し
たＧ１４−Ｔａｘに対する細胞傷害活性は競合物／標的
細胞（competitor/Target）の割合が４０のときに完全
に阻害されることがわかった。また、Ｔａｘ１８０−１
８８で処理されたＧ１４細胞による競合効果は、非標識
化Ｇ１４−Ｔａｘ（●）による競合効果と同程度であっ
た。無処理のＧ１４細胞（○）又は１０μＭの各種ペプ
チド［Ｔａｘ１８１−１８９、Ｔａｘ１８２−１９０、
及びＴａｘ１１−１９（▲）］で処理したＧ１４細胞
は、ＨＴＬＶ−ＩのＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株の細胞傷
害活性に対してほとんど影響がなかった。これらの結果
は、エピトープＴａｘ１８０−１８８が、ＨＴＬＶ−Ｉ
のＴａｘ特異的ＣＴＬ細胞株が認識する主要エピトープ
であることを示唆している。
【００４７】実施例９（生体内におけるＴａｘ１８０−
１８８認識ＣＴＬ細胞株のＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞増
殖抑制効果） Ｔａｘ１８０−１８８認識ＣＴＬ細胞株が、ラット生体
内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘの増殖を抑制しうるかどうかを調べてみた。ｎｕ／ｎ
ｕ雌ラットにＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１−Ｖ１
ＡＸ（２×１０7）のみを皮下接種したもの（●）をポ
ジティブコントロールとし、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸを皮下
接種すると同時にＴａｘ１８０−１８８を認識するＣＴ
Ｌ細胞株（１０7）を腹腔内投与したラット（▲）にお
ける腫瘍増殖の抑制効果を観察した。なお、腫瘍増殖の
変化は実施例３と同様にそれぞれの皮下腫瘍の大きさを
カリパスで１日おきに測定し、腫瘍の大きさ（Ｖ；ｍｍ
3）を計測した。これら皮下腫瘍増殖の時間経過を図１
１に示す。この結果、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸのみを接種し
たラット（●）では皮下腫瘍は増殖を続けたのに対し、
ＣＴＬを同時に移入したラット（▲）では速やかに拒絶
されることが確認できた。以上のことから、Ｔａｘ１８
０−１８８認識ＣＴＬ細胞株がＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細
胞の生体内増殖を抑制しうること、つまりＴａｘ１８０
−１８８ペプチドが腫瘍拒絶抗原として重要なエピトー
プである可能性が示唆された。
１８８認識ＣＴＬ細胞株のＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞増
殖抑制効果） Ｔａｘ１８０−１８８認識ＣＴＬ細胞株が、ラット生体
内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘの増殖を抑制しうるかどうかを調べてみた。ｎｕ／ｎ
ｕ雌ラットにＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１−Ｖ１
ＡＸ（２×１０7）のみを皮下接種したもの（●）をポ
ジティブコントロールとし、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸを皮下
接種すると同時にＴａｘ１８０−１８８を認識するＣＴ
Ｌ細胞株（１０7）を腹腔内投与したラット（▲）にお
ける腫瘍増殖の抑制効果を観察した。なお、腫瘍増殖の
変化は実施例３と同様にそれぞれの皮下腫瘍の大きさを
カリパスで１日おきに測定し、腫瘍の大きさ（Ｖ；ｍｍ
3）を計測した。これら皮下腫瘍増殖の時間経過を図１
１に示す。この結果、ＦＰＭ１−Ｖ１ＡＸのみを接種し
たラット（●）では皮下腫瘍は増殖を続けたのに対し、
ＣＴＬを同時に移入したラット（▲）では速やかに拒絶
されることが確認できた。以上のことから、Ｔａｘ１８
０−１８８認識ＣＴＬ細胞株がＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細
胞の生体内増殖を抑制しうること、つまりＴａｘ１８０
−１８８ペプチドが腫瘍拒絶抗原として重要なエピトー
プである可能性が示唆された。
【００４８】実施例１０（Ｔａｘ１８０−１８８及びＩ
ＳＳ−ＯＤＮによるワクチン効果） 上記決定された抗原ペプチドが実際に生体内において単
独で腫瘍拒絶抗原になっているかは、この抗原ペプチド
が腫瘍ワクチンモデルとしてどの程度応用しうるかを考
える上で極めて重要である。そこで、次にペプチドワク
チンによってＴａｘ１８０−１８８特異的ＣＴＬが生体
内で誘導可能であるか、また、誘導されたＣＴＬが生体
内において抗腫瘍効果を示しうるかを検討した。より効
率良くＴａｘ１８０−１８８特異的ＣＴＬを誘導するた
めにアジュバンドとしてＣｐＧモチーフを含むＩＳＳ−
ＯＤＮ（Immunostimulatory ＤＮＡ sequences-oligod
eoxynucleotide）を用いた（Nat. Med. 3, 849-854, 19
97）。なお、ＩＳＳ−ＯＤＮ［ESPEC OLIGO SERVICE社
製；５′−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ
ＧＡ−３′（配列番号５）］としては、モノチオリン酸
塩（Phosphorothioate）の一本鎖オリゴヌクレオチドと
して合成したものを用いた。１００μｇのＴａｘ１８０
−１８８合成ペプチド（■）、１０ｎｍｏｌのＩＳＳ−
ＯＤＮ（▲）、１００μｇのＴａｘ１８０−１８８及び
１０ｎｍｏｌのＩＳＳ−ＯＤＮ（＊）、あるいは１００
μｇのインフルエンザＡ型マトリックス（Influenza Ａ
matrix）の５８〜６６番目のアミノ酸配列からなるペ
プチド（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ；配列番号６）及び１０ｎ
ｍｏｌのＩＳＳ−ＯＤＮ（◆）をそれぞれ２００μｌの
生理食塩水に混合したものを４週齢の雌ｎｕ／＋ラット
に皮下投与し、２週間後再び同条件で免疫を行った。な
お、生理食塩水のみ（naive T cells）を皮下投与した
ものをコントロール（●）とした。最終免疫から２週間
後、各ラットより脾臓Ｔ細胞（１０7個）を分離し、４
週齢のｎｕ／ｎｕ雌ラットの腹腔内に投与した。また、
腹腔内投与と同時にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１
−Ｖ１ＡＸ（２×１０7個）を皮下投与し、接種部位に
おける腫瘍増殖抑制効果を実施例３と同様にそれぞれの
皮下腫瘍の大きさをカリパスで１日おきに測定し、腫瘍
の大きさ（Ｖ；ｍｍ3）を計測した。
ＳＳ−ＯＤＮによるワクチン効果） 上記決定された抗原ペプチドが実際に生体内において単
独で腫瘍拒絶抗原になっているかは、この抗原ペプチド
が腫瘍ワクチンモデルとしてどの程度応用しうるかを考
える上で極めて重要である。そこで、次にペプチドワク
チンによってＴａｘ１８０−１８８特異的ＣＴＬが生体
内で誘導可能であるか、また、誘導されたＣＴＬが生体
内において抗腫瘍効果を示しうるかを検討した。より効
率良くＴａｘ１８０−１８８特異的ＣＴＬを誘導するた
めにアジュバンドとしてＣｐＧモチーフを含むＩＳＳ−
ＯＤＮ（Immunostimulatory ＤＮＡ sequences-oligod
eoxynucleotide）を用いた（Nat. Med. 3, 849-854, 19
97）。なお、ＩＳＳ−ＯＤＮ［ESPEC OLIGO SERVICE社
製；５′−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ
ＧＡ−３′（配列番号５）］としては、モノチオリン酸
塩（Phosphorothioate）の一本鎖オリゴヌクレオチドと
して合成したものを用いた。１００μｇのＴａｘ１８０
−１８８合成ペプチド（■）、１０ｎｍｏｌのＩＳＳ−
ＯＤＮ（▲）、１００μｇのＴａｘ１８０−１８８及び
１０ｎｍｏｌのＩＳＳ−ＯＤＮ（＊）、あるいは１００
μｇのインフルエンザＡ型マトリックス（Influenza Ａ
matrix）の５８〜６６番目のアミノ酸配列からなるペ
プチド（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ；配列番号６）及び１０ｎ
ｍｏｌのＩＳＳ−ＯＤＮ（◆）をそれぞれ２００μｌの
生理食塩水に混合したものを４週齢の雌ｎｕ／＋ラット
に皮下投与し、２週間後再び同条件で免疫を行った。な
お、生理食塩水のみ（naive T cells）を皮下投与した
ものをコントロール（●）とした。最終免疫から２週間
後、各ラットより脾臓Ｔ細胞（１０7個）を分離し、４
週齢のｎｕ／ｎｕ雌ラットの腹腔内に投与した。また、
腹腔内投与と同時にＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞ＦＰＭ１
−Ｖ１ＡＸ（２×１０7個）を皮下投与し、接種部位に
おける腫瘍増殖抑制効果を実施例３と同様にそれぞれの
皮下腫瘍の大きさをカリパスで１日おきに測定し、腫瘍
の大きさ（Ｖ；ｍｍ3）を計測した。
【００４９】上記の結果を図１２に示す。その結果、Ｔ
ａｘ１８０−１８８及びＩＳＳ−ＯＤＮ（＊）で免疫し
たラット由来の脾臓Ｔ細胞を移入した群でのみ強い腫瘍
増殖抑制が認められたが、Ｔａｘ１８０−１８８ペプチ
ドのみ（■）、ＩＳＳ−ＯＤＮのみ（▲）、あるいはIn
fluenza Ａ matrix ５８−６６及びＩＳＳ−ＯＤＮ
（◆）で免疫したラット由来の脾臓Ｔ細胞を移入した群
では、そのような腫瘍増殖抑制効果は認められなかっ
た。以上の結果から適当なアンジュバンドを用いること
によって免疫正常ラットにＴａｘ１８０−１８８特異的
なＣＴＬが誘導可能であること、また、誘導されたＣＴ
Ｌは生体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の増殖を
強く抑制しうることが明らかとなった。これらの結果
は、Ｔａｘ１８０−１８８が単独で腫瘍拒絶抗原として
働きうること、また、Ｔａｘ１８０−１８８ペプチドと
ＩＳＳ−ＯＤＮを共に使用したワクチンにより、Ｔ細胞
免疫が効果的に誘導され、生体内でのＨＴＬＶ−Ｉ感染
腫瘍から防御したこと、さらに、本実験系がワクチンの
開発モデルとして、極めて有用であることを示してい
る。
ａｘ１８０−１８８及びＩＳＳ−ＯＤＮ（＊）で免疫し
たラット由来の脾臓Ｔ細胞を移入した群でのみ強い腫瘍
増殖抑制が認められたが、Ｔａｘ１８０−１８８ペプチ
ドのみ（■）、ＩＳＳ−ＯＤＮのみ（▲）、あるいはIn
fluenza Ａ matrix ５８−６６及びＩＳＳ−ＯＤＮ
（◆）で免疫したラット由来の脾臓Ｔ細胞を移入した群
では、そのような腫瘍増殖抑制効果は認められなかっ
た。以上の結果から適当なアンジュバンドを用いること
によって免疫正常ラットにＴａｘ１８０−１８８特異的
なＣＴＬが誘導可能であること、また、誘導されたＣＴ
Ｌは生体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の増殖を
強く抑制しうることが明らかとなった。これらの結果
は、Ｔａｘ１８０−１８８が単独で腫瘍拒絶抗原として
働きうること、また、Ｔａｘ１８０−１８８ペプチドと
ＩＳＳ−ＯＤＮを共に使用したワクチンにより、Ｔ細胞
免疫が効果的に誘導され、生体内でのＨＴＬＶ−Ｉ感染
腫瘍から防御したこと、さらに、本実験系がワクチンの
開発モデルとして、極めて有用であることを示してい
る。
【００５０】
【発明の効果】本発明のスクリーニング方法により得ら
れたＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴ
Ｌを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エ
ピトープのタンパク質、ペプチド、核酸等を免疫原と
し、アジュバンドを用いて誘導したＣＴＬは生体内にお
けるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の増殖を強く抑制しうる
ことから、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有す
るＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該
抗原エピトープのタンパク質、ペプチド、核酸等は、成
人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患に
対するワクチンとして有用であり、またかかるタンパク
質、ペプチド、核酸等によって誘導されたＣＴＬは、上
記ＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患の予防・治療薬として有用であ
る。
れたＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有するＣＴ
Ｌを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該抗原エ
ピトープのタンパク質、ペプチド、核酸等を免疫原と
し、アジュバンドを用いて誘導したＣＴＬは生体内にお
けるＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞の増殖を強く抑制しうる
ことから、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫瘍効果を有す
るＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ認識抗原又は該
抗原エピトープのタンパク質、ペプチド、核酸等は、成
人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）等のＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患に
対するワクチンとして有用であり、またかかるタンパク
質、ペプチド、核酸等によって誘導されたＣＴＬは、上
記ＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患の予防・治療薬として有用であ
る。
【００５１】
【配列表】
【図１】インビボでの腫瘍の退行に直接必要とされる免
疫Ｔ細胞のサブセットを調べた結果を示す図である。
疫Ｔ細胞のサブセットを調べた結果を示す図である。
【図２】腫瘍が完全に退行したラット由来の各種脾臓Ｔ
細胞の標的細胞に対する細胞傷害活性についての結果を
示す図である。
細胞の標的細胞に対する細胞傷害活性についての結果を
示す図である。
【図３】ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬｓが認識するウイル
ス性抗原を調べた結果を示す図である。
ス性抗原を調べた結果を示す図である。
【図４】競合物存在下におけるＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴ
Ｌ細胞株の標的細胞に対する細胞傷害性の阻害について
の結果を示す図である。
Ｌ細胞株の標的細胞に対する細胞傷害性の阻害について
の結果を示す図である。
【図５】ＨＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株ＦＰＭ１−Ｖ１Ａ
Ｘにより誘導された各種ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を
示す図である。
Ｘにより誘導された各種ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を
示す図である。
【図６】ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株認識ペプチド
のスクリーニングによる結果を示す図である。
のスクリーニングによる結果を示す図である。
【図７】長期培養したＣＴＬ株を用いた場合のＨＴＬＶ
−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株認識ペプチドのスクリーニング
による結果を示す図である。
−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株認識ペプチドのスクリーニング
による結果を示す図である。
【図８】ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株が認識する９
アミノ酸合成ペプチドのスクリーニングによる結果を示
す図である。
アミノ酸合成ペプチドのスクリーニングによる結果を示
す図である。
【図９】各種ペプチド濃度で感作した標的細胞に対する
ＣＴＬの細胞傷害活性を調べた結果を示す図である。
ＣＴＬの細胞傷害活性を調べた結果を示す図である。
【図１０】ＨＴＬＶ−Ｉ特異的ＣＴＬ細胞株の合成ペプ
チドＴａｘ１８０−１８８に対する特異性を示す図であ
る。
チドＴａｘ１８０−１８８に対する特異性を示す図であ
る。
【図１１】Ｔａｘ１８０−１８８認識ＣＴＬ細胞株の生
体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍増殖抑制効果の結果を示
す図である。
体内におけるＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍増殖抑制効果の結果を示
す図である。
【図１２】Ｔａｘ１８０−１８８及びＩＳＳ−ＯＤＮの
ワクチンとしての有効性を示す図である。
ワクチンとしての有効性を示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｐ 37/04 Ａ６１Ｐ 37/04
Ｃ０７Ｋ 7/06 Ｃ０７Ｋ 7/06
Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｑ 1/02 ＺＮＡ
Ｃ１２Ｑ 1/02 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ
33/53 Ｍ
33/566
33/566 33/574 Ｃ
33/574 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ
(56)参考文献 国際公開00／027186（ＷＯ，Ａ１)
神奈木真理，エイズ等感染・発症制御
のための基板技術の開発に関する研究
（第２期）成果報告書平成８−10年度,
1999年，215−228
神奈木真理，エイズ等感染・発症制御
のための基板技術の開発に関する研究
（第１期）成果報告書平成５−７年度,
1997年，233−246
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/50
A61K 39/00
A61K 39/21
A61P 35/00
A61P 35/02
A61P 37/04
C07K 7/06
C12N 7/06
C12Q 1/02
G01N 33/15
G01N 33/53
G01N 33/566
G01N 33/574
Claims (8)
- 【請求項１】 配列番号２に示されるアミノ酸配列から
なるペプチド、又は、このアミノ酸配列において、１若
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加された
アミノ酸配列からなり、ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗腫
瘍作用を有するＣＴＬを誘導することができるペプチド
からなることを特徴とするＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対して抗
腫瘍効果を有するＣＴＬを誘導することができるＣＴＬ
認識抗原エピトープ。 - 【請求項２】 請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトー
プと被検アジュバントとを用いて誘導したＣＴＬをＨＴ
ＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物に投与し、該非ヒト
動物における腫瘍の変化を測定・評価することを特徴と
するＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果を増強するア
ジュバントのスクリーニング方法。 - 【請求項３】 ＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患モデル非ヒト動物
が、成人Ｔ細胞白血病モデル非ヒト動物であることを特
徴とする請求項２記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫
瘍効果を増強するアジュバントのスクリーニング方法。 - 【請求項４】 非ヒト動物が、ラットであることを特徴
とする請求項２又は３記載のＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する
抗腫瘍効果を増強するアジュバントのスクリーニング方
法。 - 【請求項５】 請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトー
プと被検アジュバントとを用いて誘導したＣＴＬと、Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ感染腫瘍細胞株とを接触させ、該ＣＴＬの細
胞傷害活性を測定・評価することを特徴とするＨＴＬＶ
−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果を増強するアジュバントの
スクリーニング方法。 - 【請求項６】 請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトー
プを有効成分として含有することを特徴とする免疫応答
誘導用ワクチン。 - 【請求項７】 請求項１記載のＣＴＬ認識抗原エピトー
プをコードするＤＮＡを有効成分として含有することを
特徴とする免疫応答誘導用ワクチン。 - 【請求項８】 ＨＴＬＶ−Ｉ腫瘍に対する抗腫瘍効果を
増強するアジュバントをさらに含むことを特徴とする請
求項６又は７記載の免疫応答誘導用ワクチン。
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|---|---|---|---|
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| PCT/JP2002/004406 WO2002090981A1 (fr) | 2001-05-08 | 2002-05-02 | Antigene antitumoral contre la contre la tumeur htlv-1 ou son epitope |
| EP02724687A EP1391729A4 (en) | 2001-05-08 | 2002-05-02 | ANTITUMOR ANTIGEN AGAINST TUMOR HTLV-1 OR ITS EPITOPE |
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| JP2001137526A JP3536039B2 (ja) | 2001-05-08 | 2001-05-08 | Ｈｔｌｖ−ｉ腫瘍に対する抗腫瘍抗原又はその抗原エピトープ |
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|---|---|
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| ES2438735T3 (es) * | 1997-07-10 | 2014-01-20 | Mannkind Corporation | Inmunización intralinfática para inducir respuestas de CTL efectores prolongadas |
| DE69933576T2 (de) * | 1998-11-05 | 2007-06-21 | Japan Science And Technology Agency, Kawaguchi | Adultes modelltier für t-zell-leukämie |
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2003
- 2003-11-07 US US10/704,229 patent/US20040171090A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 神奈木真理，エイズ等感染・発症制御のための基板技術の開発に関する研究（第１期）成果報告書平成５−７年度，１９９７年，２３３−２４６ |
| 神奈木真理，エイズ等感染・発症制御のための基板技術の開発に関する研究（第２期）成果報告書平成８−１０年度，１９９９年，２１５−２２８ |
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