JP3527202B2 - Ｐｅｃａｍ−１のアンチセンス・モジュレーション - Google Patents

Ｐｅｃａｍ−１のアンチセンス・モジュレーション

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】（発明の分野） 本発明は、ヒトＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１抗原又はｅｎ
ｄｏＣＡＭとしても知られる）を含めた、血小板内皮細
胞接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１）タンパク質のレベル
を検出し、モジュレートする(modulate)ための組成物及
び方法を提供する。特に、本発明はＰＥＣＡＭ−１タン
パク質をコードする核酸と特異的にハイブリダイズ可能
なアンチセンス化合物に関する。このようなアンチセン
ス化合物がＰＥＣＡＭ−１タンパク質の発現をモジュレ
ートしうることが発見されている。ＰＥＣＡＭ−１タン
パク質は多様な種類の細胞の表面に発現される糖タンパ
ク質である（ＰＥＣＡＭ−１タンパク質のレビューに関
しては、Ｎｅｗｍａｎ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓ
ｔ．，１９９７，９９，３及びＤｅＬｉｓｓｅｒ等，Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１９９４，１５，４９０を
参照のこと）。ＰＥＣＡＭ−１は細胞−細胞相互作用を
仲介するので、ＰＥＣＡＮ−１の発現のモジュレーショ
ン(modulation)はこのような細胞−細胞相互作用とその
結果の例えば炎症のような効果との制御を可能にする。
したがって、本発明はＰＥＣＡＭ−１仲介プロセスを検
出するための診断方法と、ＰＥＣＡＭ−１仲介プロセス
をそれぞれ予防又は阻害するための予防及び治療方法と
に関する。さらに、本発明はＰＥＣＡＭ−１タンパク質
の異常な発現に関連した状態の治療に関する。本発明は
また、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質の発現のモジュレーシ
ョンに反応する疾患状態又は障害の治療方法、診断法及
び研究試薬にも関する。細胞の過度増殖の阻害、対応す
る予防、緩和及び治療効果は本発明のアンチセンス化合
物による治療から生ずる。
【０００２】（発明の背景） 細胞−細胞相互作用は多様な生物学的プロセスの特徴で
ある。例えば、免疫応答の活性化では、標準的な炎症反
応における最も早期の検出可能なイベントの１つは脈管
内皮への白血球の付着と、それに続く脈管構造から感染
部位又は損傷部位への白血球のマイグレーション(migra
tion)である。脈管内皮への白血球の付着は脈管構造か
らの白血球のマイグレーションにおける絶対的な段階で
ある（Ｈａｒｌａｎ，Ｂｌｏｏｄ，１９８５，６５，５
１５）。当該技術分野において周知であるように、細胞
−細胞相互作用は、それぞれ、体液性及び細胞性免疫応
答の強化を生じるＢリンパ球及びＴリンパ球の両方の増
殖に関しても重要である。
【０００３】幾つかの場合に、１種類の細胞の他の種類
の細胞への付着は、細胞の細胞膜上に存在する“接着分
子”と呼ばれる、特定のタンパク質間の相互作用によっ
て仲介される。接着分子間の相互作用は、リガンドが可
溶性である代わりに細胞の表面に固定されること以外
は、基本的な受容体リガンド相互作用と同様である。細
胞−細胞相互作用を仲介する、１群の関連した（ペプチ
ド配列によって）、生物学的に重要な分子はＣＡＭｓ
（細胞接着分子）として当該技術分野に知られている。
ＣＡＭｓは、例えば、幾つかの細胞間接着分子（即ち、
ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２及びＩＣＡＭ−３）、内皮
白血球接着分子１（ＥＬＡＭ−１）、脈管細胞接着分子
１（ＶＣＡＭ−１）を包含する。ＰＥＣＡＭ−１（血小
板内皮細胞接着分子１）のヌクレオチド配列及びペプチ
ド配列は、ＰＥＣＡＭ−１が遺伝子のＣＡＭファミリー
のメンバーでもあることを示す。ＣＡＭファミリーは遺
伝子の免疫グロブリン・スーパーファミリーの一部であ
る（Ｎｅｗｍａｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４
７，１２１９）。
【０００４】ＰＥＣＡＭ−１はタンパク質のＣＡＭファ
ミリーのメンバーであり、幾つかの種類の細胞の表面に
発現される。ＰＥＣＡＭ−１を発現させると知られる細
胞は、例えば、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、ウ
シ大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ）、糸球体内皮（ＧＥＮ）
細胞及び培養ヒト肺微小血管内皮細胞（ＨＰＭＥＣ）を
含めた内皮細胞；種々な哺乳動物種からの血小板、単
球、顆粒球、マクロファージ、一部のリンパ球、一部の
造血系統細胞及び腫瘍細胞系を包含する（ＤｅＬｉｓｓ
ｅｒ等，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１９９４，１
５，４９０参照）。
【０００５】ＰＥＣＡＭ−１が細胞−細胞認識イベント
に関与することを、多様な証拠が示している（ＤｅＬｉ
ｓｓｅｒ等，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１９９４，
１５，４９０参照）。例えば、ＰＥＣＡＭ−１はＰＥＣ
ＡＭ−１ ｃＤＮＡによってトランスフェクトされたＬ
細胞の凝集を仲介し（ＤｅＬｉｓｓｅｒ等，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，２６８，１６３０７）；あ
る一定のＴ細胞サブセットの場合には、β−１インテグ
リン仲介接着を増幅する（Ｔａｎａｋａ等，Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．，１９９２，１７６，２４５）。ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ研究は、ＰＥＣＡＭ−１を内皮細胞接触の開始
（Ａｌｂｅｌｄａ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９
９０，１１０，１２２７）及び毛管の形成（Ｖａｐｏｒ
ｃｉｙａｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２６２，１
５８０に引用された、Ｍｅｒｗｉｎ等の未発表結果）に
関連付けている。ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究とｉｎ ｖｉｖ
ｏ研究の両方において、ＰＥＣＡＭ−１は内皮細胞単層
を通して白血球（例えば、好中球、単球及び他の有核血
球(nucleated blood cell)）のトランスマイグレーショ
ンに関与することが判明している（Ｍｕｌｌｅｒ等，
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９３，１７８，４４９）。
ＰＥＣＡＭ−１は、細胞−細胞相互作用に直接参加する
ことの他に、細胞相互作用に関与する他の分子の活性及
び／又は発現をも明らかに調節する（Ｌｉｔｗｉｎ等，
Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９９７，１３９，２１
９）。
【０００６】心血管系の発達において、２種類の異なる
プロセスが生ずる。脈管新生(vasculogenesis)は中胚葉
からの内皮細胞の初期分化及び、明確な血管へのこれら
の細胞の構成(organization)である。一方で、脈管形成
は既存の脈管からの脈管の出芽(budding)及び分枝であ
る。ＰＥＣＡＭ−１は初期分化中に推定内皮細胞上に及
び発達中の脈管構造の全ての内皮細胞上に発現される。
Ｄｅ Ｌｉｓｓｅｒ等，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖ
ａｓｃ．Ｍｅｄ．，１９９７，７，２０３。脈管形成(a
ngiogenesis)へのＰＥＣＡＭ−１の関与は初期には、抗
ＰＥＣＡＭ−１抗体の存在下で培養された内皮細胞にお
いて実証された。これらの細胞は培養内皮細胞に典型的
なきっちりした単層を形成することができなかった。こ
の阻害は、抗体の除去後に、可逆的であった。Ａｌｂｅ
ｌｄａ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，１１
０，１２２７。その後、ヒトＶＥ−カドヘリンとＰＥＣ
ＡＭ−１とに対するモノクローナル抗体が共に、ＳＣＩ
Ｄマウスにおける毛管形成と創傷治癒とのｉｎ ｖｉｔ
ｒｏモデルにおける脈管形成を阻害したことが示されて
いる。Ｍａｔｓｕｍｕｒａ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
１９９７，１５８，３４０８。他の研究は、ＰＥＣＡＭ
−１のみの抗体阻害(antibody inhibition)がｉｎ ｖ
ｉｔｒｏの毛管形成とサイトカイン誘導角膜新血管形成
(cytokine-induced corneal neovascularization)とを
阻止することを発見している。ＰＥＣＡＭ−１に対する
モノクローナル抗体はさらにマウス・モデルにおける血
管成長をも阻止した。Ｄｅｌｉｓｓｅｒ等，Ａｍ．Ｊ．
Ｐａｔｈｏｌ．，１９９７，１５１，６７１。したがっ
て、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方におい
て、ＰＥＣＡＭ−１が脈管形成に重要な役割を果たして
いることが実証されている。脈管新生におけるＰＥＣＡ
Ｍ−１の役割はネズミ卵黄嚢モデルを用いても実証され
ている。ＰＥＣＡＭ−１が内皮細胞マイグレーション及
び脈管新生中に動的リン酸化(dynamic phosphorylatio
n)を受けることも発見されており、これは細胞外マトリ
ックスとのインテグリン結合によってモジュレートされ
ると考えられる。Ｐｉｎｔｅｒ等，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ
ｏｌ．，１９９７，１５０，１５２３。
【０００７】炎症及び腫瘍発生に先立って起こる細胞プ
ロセスにＰＥＣＡＭ−１が関与するために、ＰＥＣＡＭ
−１発現の阻害剤が（１）例えば多発性硬化症のような
自己免疫障害、特に、例えばグレーヴス病のような、甲
状腺の自己免疫障害及び例えば、対宿主移植片病（ＧＶ
ＨＤ）において生ずるような、望ましくない免疫反応、
（２）例えば、種々な形態の関節炎；同種移植片拒絶；
クローン病を含めた腸の炎症性疾患；例えば乾癬のよう
な、種々な皮膚病学的状態；角膜炎症等のような、炎症
性成分を有する、多様な炎症性疾患又は障害、（３）非
限定的に、癌、腫瘍及びこれらの増殖と伝播（転移）を
含めた、多様な過度増殖性疾患又は障害、並びに（４）
異常な脈管形成又は脈管新生に関連した状態、に対して
活性を有する、新規な治療クラスの免疫抑制及び／又は
抗炎症及び抗増殖剤を提供することができると考えられ
る。
【０００８】現在までに、ＰＥＣＡＭ−１の発現を効果
的に阻止する治療剤は知られていない。細胞間接着分子
に影響を与える現在の作用剤には、合成ペプチド、モノ
クローナル抗体、及び溶解性形の接着分子が含まれる。
ＰＥＣＡＭ−１のリガンドを模倣することによってＰＥ
ＣＡＭ−１との細胞相互作用を阻止する合成ペプチドは
同定されていないが、ＰＥＣＡＭ−１のペプチド模倣体
(peptidic mimic)は述べられている（Ｌｉａｏ等，Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８５，１３４９）。Ｐ
ＥＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体は開発されて
おり（Ｌａｓｔｒｅｓ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９
９４，１５３，４２０６）、これはＰＥＣＡＭ−１の発
現に起因する急性炎症反応又は他の状態の治療に有用で
あると分かる可能性がある（Ｂｏｇｅｎ等，Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．，１９９４，１７９，１０５９；Ｍｕｒｏ
ｈａｒａ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５
６，３５５０）。しかし、慢性的な治療によっては、宿
主動物がモノクローナル抗体自体に対する抗体を発生さ
せて、それらの有用性を制限する可能性がある。さら
に、モノクローナル抗体は炎症部位にアクセスするのに
困難を有しうる大きなタンパク質である。溶解性形の細
胞接着分子は、それらの作製の費用とそれらの低い結合
アフィニティとの他に、モノクローナル抗体と同じ制限
を多く有する。３種類の上記作用剤の全てがポリペプチ
ドであり、ｉｎ ｖｉｖｏでタンパク質分解による劣化
(proteolytic degradation)を受ける、これは生物学的
半減期及び薬理学的有効性を制限しうる特徴である。さ
らに、ＰＥＣＡＭ−１とＣＡＭファミリーの他のメンバ
ーとの間のポリペプチド・レベルにおける高度な相同性
のために、ＰＥＣＡＭ−１活性に影響を与える作用剤は
他のＣＡＭタンパク質にも影響を与えうる。したがっ
て、ＰＥＣＡＭ−１分子を効果的にかつ特異的にモジュ
レートする分子の長い間切望された必要性が存在する。
多くの脈管形成抑制剤が、腫瘍の成長と転移との抑制(c
ombatting)に関して評価されている；しかし、これらの
いずれもＰＥＣＡＭ−１をターゲットにしていない。
【０００９】アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、Ｐ
ＥＣＡＭ−１の効果を阻止するために用いられる現在の
作用剤の陥りやすい過ち(pitfalls)の多くを回避する。
例えば、アンチセンス・オリゴヌクレオチドはモノクロ
ーナル抗体及び大抵の合成ペプチドよりも小さいので、
炎症部位により良好にアクセスすると期待される。アン
チセンス・オリゴヌクレオチドのターゲット核酸に対す
るアフィニティを強化するために役立つ、多様な化学的
修飾が知られている。合成オリゴヌクレオチドをｉｎ
ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ分解に対してより大きく
耐性にする、他の化学的修飾も述べられている。さら
に、遺伝暗号に固有な縮重のために、ＰＥＣＡＭ−１タ
ンパク質をコードする核酸のヌクレオチド配列と、他の
ＣＡＭタンパク質をコードするヌクレオチド配列との間
の相同性は、対応ポリペプチド配列間の相同性よりも低
い；その結果、アンチセンス・オリゴヌクレオチドは多
くのモノクローナル抗体よりも高度な特異性を得る可能
性を有する。つまり、本発明の化合物はＰＥＣＡＭ−１
分子を特異的に調節するために特に有効である。
【００１０】（関連技術分野） Ｎｅｗｍａｎへの米国特許第５，２６４，５５４号はＰ
ＥＣＡＭ−１タンパク質とその変異体を述べている。Ｐ
ＣＴ出願ＷＯ９１／１０６８３（１９９１年７月２５日
発行）をも参照のこと。Ｎｅｗｍａｎ等への米国特許第
５，６６８，０１２号はＰＥＣＡＭ−１プロモーター配
列とＰＥＣＡＭ−１アイソフォームをコードする配列を
述べている。ＰＣＴ出願ＷＯ９６／０１２７１（１９９
６年１月１８日発行）をも参照のこと。
【００１１】ＰＣＴ出願ＷＯ９７／１０８３９（１９９
７年３月２７日発行）は、ＰＥＣＡＭ−１モノマー相互
の結合を阻害するといわれる合成ペプチドを述べてい
る。Ｌｉａｎｏ等（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，
１８５，１３４９）は、ＰＥＣＡＭ−１の溶解性ドメイ
ン１を含む融合タンパク質を述べて、これらの融合タン
パク質がｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏでの血管
外遊出を調節するために充分であることを実証してい
る。
【００１２】Ｂｅｒｍａｎ等（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，
１９９６，１５６，１５１５）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで
の細胞トランスマイグレーション・イベントを調節する
といわれる、ＰＥＣＡＭ−１に対する抗体を述べてい
る。Ｍｕｒｏｈａｒａ等（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９
９６，１５６，３５５０）は、ネコでのｉｎ ｖｉｖｏ
グリコーゲン誘導腹膜炎における白血球マイグレーショ
ンを抑制するといわれる、ヒト及びネコのＰＥＣＡＭ−
１に対するモノクローナル抗体を述べている。
【００１３】Ｌａｓｔｒｅｓ等（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１９９４，１５３，４２０６）は、ｉｎ ｖｉｔ
ｒｏアッセイにおける細胞凝集を抑制する、ＰＥＣＡＭ
−１の出発（ＡＴＧ）コドンをターゲットとする、抗体
及びホスホロチオエート・アンチセンス・オリゴヌクレ
オチドを述べている。処置後のＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡ
又はタンパク質レベルは測定されなかった。
【００１４】Ｂｏｇｅｎ等（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１
９９４，１７９，１０５９）は、ネズミＰＥＣＡＭ−１
に対するモノクローナル抗体を述べ、これがマウスにお
けるチオグリコレート誘導腹膜炎における急性炎症をモ
ジュレートすることを示している。Ｖａｐｏｒｃｉｙａ
ｎ等（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２６２，１５８０）
は、ラットＰＥＣＡＭ−１と交差反応し、ラットにおけ
る好中球トランスマイグレーションをモジュレートする
といわれる、ヒトＰＥＣＡＭ−１に対するモノクローナ
ル抗体を述べている。Ｔａｎｇ等（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．，１９９３，２６８，２２８８３）は、微小血管
内皮細胞への腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ接着を減ずる
能力を有するといわれる、ＰＥＣＡＭ−１に対する抗体
を述べている。
【００１５】（発明の概要） 本発明によると、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をコードす
る核酸と特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合
物を提供する。本発明のある一定のアンチセンス化合物
は、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をコードする遺伝子から
転写されたｍＲＮＡに、又はＰＥＣＡＭ−１タンパク質
をコードする遺伝子の選択されたＤＮＡ部分に直接結合
し、それによってその発現をモジュレートするように設
計される。本発明の特定の実施態様では、ＰＥＣＡＭ−
１タンパク質とそれをコードする遺伝子はヒトを含めた
哺乳動物のものである。本発明のアンチセンス化合物を
含む薬剤組成物と、本発明のアンチセンス化合物を用い
る種々な方法も本明細書において提供する。
【００１６】（発明の詳細な説明） オリゴヌクレオチドは、特定の核酸との特異的ハイブリ
ダイゼーションを生じるためにアイデンティティ及び数
において充分なヌクレオチド配列を含むことができる。
このようなオリゴヌクレオチドは一般に“アンチセン
ス”として記載される。アンチセンス・オリゴヌクレオ
チドは一般に研究試薬、診断助剤及び治療剤として用い
られる。ヒトＰＥＣＡＭ−１を含めた、血小板内皮細胞
接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１；ＣＤ３１抗原又はｅｎ
ｄｏＣＡＭとしても知られる）タンパク質をコードする
遺伝子はこのアプローチに特に敏感に反応することが発
見されている。さらに詳しくは、本発明は、ＰＥＣＡＭ
−１の発現をモジュレートする、オリゴヌクレオチドを
含めた、アンチセンス化合物に関する。
【００１７】アンチセンス化合物によるＰＥＣＡＭ−１
タンパク質の発現をモジュレートする方法を本明細書に
おいて提供するが、これらの方法はＰＥＣＡＭ−１発現
とある一定の過度増殖性及び炎症性障害との間の関連の
結果として治療的及び診断的の両方で有用であると考え
られる。これらの方法は、例えば、種々な細胞機能と生
理学的プロセス及び状態におけるＰＥＣＡＭ−１の役割
りの検出及び測定のため並びにこのような発現及び活性
化に関連した状態の診断のためのツールとしても有用で
ある。
【００１８】ＰＥＣＡＭ−１と正常及び異常な細胞−細
胞相互作用との間の関連の結果として、ＰＥＣＡＭ−１
タンパク質の発現の阻害は例えば多様な炎症性イベント
及び腫瘍形成性及び／又は転移性イベントの阻害をもた
らし、それによって、このようなイベントの望ましくな
い結果のモジュレーションを生じると期待される。この
ようなモジュレーションは種々な炎症性及び過度増殖性
障害又は疾患を治療するため（即ち、予防的、待機的(p
alliative)及び／又は治療的効果のため）に望ましい。
ＰＥＣＡＭ−１及び他のＣＡＭのこのような阻害は、こ
のような疾患又は障害に罹患しやすいと疑われる又は知
られる動物におけるこのような疾患又は障害の発生を予
防する又はモジュレートするためにさらに望ましい。
【００１９】本発明はまた、本発明のアンチセンス化合
物を用いて、多様なＰＥＣＡＭ−１仲介炎症性及び腫瘍
形成性及び／又は転移性イベントを阻害する方法をも含
む。異常な又は過剰なＰＥＣＡＭ−１発現及び／又はＰ
ＥＣＡＭ−１仲介炎症が生じる状態を治療する方法も提
供される。これらの方法は本発明のアンチセンス化合物
を用いるものであり、治療的にと、臨床研究及び診断ツ
ールとしての両方で有用であると考えられる。本発明の
オリゴヌクレオチドは研究目的にも使用可能である。し
たがって、本発明のオリゴヌクレオチドによって示され
る特異的ハイブリダイゼーションはアッセイ、精製、細
胞産物製造、及び当業者によって理解されうる他の方法
に使用可能である。
【００２０】本発明は、モジュレートすることが望まし
いタンパク質（ＰＥＣＡＭ−１）をコードするＤＮＡ又
はメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の機能をモジュレ
ートするアンチセンス化合物を用いて、最終的には該タ
ンパク質の発現を調節する。アンチセンス・オリゴヌク
レオチドのそのｍＲＮＡターゲットとのハイブリダイゼ
ーションは、ｍＲＮＡの正常な役割りに干渉して、細胞
におけるその機能のモジュレーションを生じる。干渉さ
れるべきｍＲＮＡの機能は、例えば、タンパク質翻訳部
位へのＲＮＡのトランスロケーション、ＲＮＡからのタ
ンパク質の実際の翻訳、１つ以上のｍＲＮＡ種を得るた
めのＲＮＡのスプライシング及び恐らくは、ＲＮＡによ
って行われうる(engaged in)独立的な触媒活性さえのよ
うな、あらゆる重要な機能を包含する。ｍＲＮＡ機能に
対するこのような干渉の総合効果はタンパク質の発現の
モジュレーションであり、この場合“モジュレーショ
ン”はタンパク質の発現の増加（刺激）又は減少（阻
害）のいずれかを意味する。本発明に関係して、阻害は
遺伝子発現のモジュレーションの好ましい形式である。
【００２１】アンチセンス・アタックのために特異的遺
伝子をターゲットにすることが好ましい。本発明に関係
して、結合核酸へのオリゴヌクレオチドの“ターゲッテ
ィング(targeting)”は多段階プロセスである。このプ
ロセスは通常、その機能をモジュレートされるべきであ
る核酸配列の同定から開始する。これは例えば、その発
現が特定の障害若しくは疾患状態に関係する細胞遺伝子
（若しくは該遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）、又は感
染作因からの異種核酸(foreign nucleic acid)でありう
る。本発明では、ターゲットは、過度増殖性障害に関係
した細胞遺伝子である。ターゲッティング・プロセス
は、所望の効果、タンパク質の発現の検出又はモジュレ
ーションのいずれかが生ずるように、オリゴヌクレオチ
ド相互作用が起こる、この遺伝子内の部位（単数又は複
数）を決定することを包含する。ターゲット部位（単数
又は複数）が同定されたならば、該ターゲットに充分に
相補的である、即ち充分に良好にかつ充分に特異的にハ
イブリダイズして所望の効果を与えるオリゴヌクレオチ
ドを選択する。一般に、アンチセンス・モジュレーショ
ンのためにターゲットにされうる、遺伝子の幾つかの領
域：トリホスフェート結合を介してｍＲＮＡの最大５’
残基に結合したＮ７−メチル化グアノシン残基を含む
５’“キャップ”（Ｂａｋｅｒ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，
Ｃｒｏｏｋｅ等編集，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９９３，３７〜５３頁における第
３章）；５’非翻訳領域（以下では、“５’−ＵＴ
Ｒ”）、翻訳出発コドン領域（以下では、“ＡＵＧ”領
域）、オープン・リーディング・フレーム（以下では、
“ＯＲＦ”）又は“コーディング領域”、翻訳終止コド
ン領域（以下では、“終止コドン”領域又は略して簡単
に“終止”）及び３’非翻訳領域（以下では、“３’−
ＵＴＲ”）が存在する。当該技術分野で知られているよ
うに、これらの領域は典型的なメッセンジャーＲＮＡ分
子内に次の順序（左から右へ、５’から３’へ）：キャ
ップ、５’−ＵＴＲ、ＡＵＧ、ＯＲＦ、終止コドン、
３’−ＵＴＲで配置される。当該技術分野で知られてい
るように、幾つかの真核転写産物(eukaryotic transcri
pts)は直接翻訳されるが、多くのＯＲＦｓは、転写産物
から切断されてから翻訳される、“イントロン”として
知られる１つ以上の配列を含有し；ＯＲＦの発現（非切
断）部分は“エキソン”と呼ばれる（Ａｌｂｅｒｔｓ
等，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｃｅｌｌ，１９８３，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４１１〜４
１５頁）。さらに、多くの真核ＯＲＦｓは１０００ヌク
レオチド以上の長さであるので、ＯＲＦ領域を例えば
５’ＯＲＦ領域、中央ＯＲＦ領域、及び３’ＯＲＦ領域
に再分割することがしばしば便利である。場合によって
は、ＯＲＦは、ｉｎｖｉｖｏでのある程度の機能的重要
性のためにターゲットにされうる１つ以上の部位を含有
する。後者のタイプの部位の例は、遺伝子内ステム−ル
ープ構造（例えば、米国特許第５，５１２，４３８号参
照）及び、非プロセス(unprocessed)ｍＲＮＡ分子で
は、イントロン／エキソン・スプライス部位を包含す
る。
【００２２】本発明に関連して、１つの好ましい遺伝子
内部位は、遺伝子のオープン・リーディング・フレーム
（ＯＲＦ）の翻訳出発コドンを含む領域である。当該技
術分野で知られているように、翻訳出発コドンは典型的
に５’−ＡＵＧ（転写ｍＲＡ分子内；対応するＤＮＡ分
子では５’−ＡＴＧ）であるので、翻訳出発コドンは
“ＡＵＧコドン”、“出発コドン”又は“ＡＵＧ出発コ
ドン”とも呼ばれる。少数の遺伝子はＲＮＡ配列５’−
ＧＵＧ、５’−ＵＵＧ又は５’−ＣＵＧを有する翻訳出
発コドンを有し、５’−ＡＵＡ、５’−ＡＣＧ及び５’
−ＣＵＧはｉｎｖｉｖｏで機能することが判明してい
る。さらに、５’−ＵＵＵはｉｎ ｖｉｔｒｏで翻訳出
発コドンとして機能する（Ｂｒｉｇｓｔｏｃｋ等，Ｇｒ
ｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｓ，１９９０，４，４５；Ｇｅｌ
ｂｅｒｔ等，Ｓｏｍａｔ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅ
ｔ．，１９９０，１６，１７３；ＧｏｌｄとＳｔｏｒｍ
ｏ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｎｄ Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ：Ｃｅｌｌ
ｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，２巻，１９８７，Ｎｅｉｄｈａｒｄｔ等編集，Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１３
０３頁）。したがって、“翻訳出発コドン”及び“出発
コドン”なる用語は、各場合のイニシエーター・アミノ
酸が典型的にメチオニン（真核生物において）又はホル
ミルメチオニン（原核生物において）であるとしても、
多くのコドン配列を含むことができる。真核遺伝子及び
原核遺伝子が２つ以上の代替え出発コドン(alternative
start codon)を有し、それらのいずれか１つが、優先
的に、異なるアミノ末端配列を有する関連ポリペプチド
を作製するために、特定の種類の細胞若しくは組織中で
又は特定のセットの条件下で翻訳開始のために用いられ
うる。本発明に関連して、“出発コドン”及び“翻訳出
発コドン”は、このようなコドンのヌクレオチド配列
(単数又は複数)に関係なく、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質
をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ分子の翻訳
を開始するためにｉｎ ｖｉｖｏで用いられるコドン
(単数又は複数)を意味する。遺伝子の翻訳終止コドン
(又は“終止コドン”）が３配列、即ち、５’−ＵＡ
Ａ、５’−ＵＡＧ及び５’−ＵＧＡ（対応ＤＮＡ配列
は、それぞれ、５’−ＴＡＡ、５’−ＴＡＧ及び５’−
ＴＧＡである）の１つを有しうることも、当該技術分野
において知られている。“出発コドン領域”及び“翻訳
出発領域”なる用語は、翻訳出発コドンから約５０連続
（隣接）ヌクレオチドをいずれかの方向（即ち、５’又
は３’）に含むようなｍＲＮＡ又は遺伝子の一部を意味
する。同様に、“終止コドン領域”及び“翻訳終止領
域”なる用語は、翻訳終止コドンから約５０連続（隣
接）ヌクレオチドをいずれかの方向（即ち、５’又は
３’）に含むようなｍＲＮＡ又は遺伝子の一部を意味す
る。
【００２３】詳細な説明の残部は（１）本発明のアンチ
センス化合物、（２）生物学的等価物及び（３）それら
の例示的有用性、並びに（４）本発明のアンチセンス化
合物を含む薬剤組成物及び（５）その投与方法にさらに
詳細に関する。
【００２４】１．本発明のアンチセンス化合物： 本発
明は、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をモジュレートするア
ンチセンス化合物を用いる。“アンチセンス化合物”な
る用語は（ａ）ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をコードする
核酸と特異的にハイブリダイズする核酸塩基配列を有す
る合成オリゴヌクレオチド並びにペプチド核酸（ＰＮＡ
ｓ）を特に包含する；並びに（ｂ）生物学的起源のリボ
ザイム及び核酸を特に除外する。本発明に関連して、
“オリゴヌクレオチド”なる用語は、リボ核酸（ＲＮ
Ａ）又はデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はこれらの模倣
体(mimetics)のオリゴマー又はポリマーを意味する。こ
の用語は、天然生成核酸塩基と、糖と、共有糖間（バッ
クボーン）結合とから成るオリゴヌクレオチド並びに同
様に機能する非天然生成部分を有するオリゴヌクレオチ
ドを包含する。このような修飾又は置換オリゴヌクレオ
チドは、例えば強化された細胞取り込み、核酸ターゲッ
トに対する強化されたアフィニティ及びヌクレアーゼの
存在下での増強された安定性のような、望ましい性質の
ために、しばしばネイティブ形よりも好ましい。本発明
のアンチセンス化合物はｉｎ ｖｉｔｒｏで合成される
ものであり、生物学的起源のアンチセンス組成物も、ア
ンチセンス分子のｉｎ ｖｉｖｏ合成を操作するように
設計された遺伝的ベクター構築体も包含しない。
【００２５】本発明によるアンチセンス化合物は好まし
くは約８〜約３０の核酸塩基、より好ましくは約１２〜
約２８の核酸塩基、最も好ましくは約２０〜約２６の核
酸塩基を含む。特に好ましいアンチセンス化合物はアン
チセンス・オリゴヌクレオチドである。アンチセンス・
オリゴヌクレオチド及び幾つかの望ましい修飾について
の考察は、Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ等，Ａｃｃ．Ｃｈ
ｅｍ．Ｒｅｓ．，１９９５，２８，３６６に見出すこと
ができる。
【００２６】オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドとし
て一般に知られた反復単位のポリマーである。未修飾
（天然生成）ヌクレオチドは３種類の構成要素：（２）
５−ペントフラノシル糖に（１）その窒素原子の１つに
よって結合した窒素含有複素環塩基及び（３）糖の５’
又は３’炭素原子の１つにエステル化したリン酸(phosp
hate)を有する。オリゴヌクレオチド鎖中に組み入れた
ときに、第１ヌクレオチドのリン酸(phosphate)は第２
隣接ヌクレオチドの隣接糖にも、３’−５’リン酸結合
(phosphate linkage)を介してエステル化する。
【００２７】当該技術分野において知られているよう
に、ヌクレオシドは塩基−糖組み合わせである。ヌクレ
オシドの塩基部分は通常複素環塩基である。このような
複素環塩基の２つの最も一般的なクラスはプリン及びピ
リミジンである。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部
分に共有結合したリン酸基(phosphate group)をさらに
包含するヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を包
含するようなヌクレオシドに関しては、リン酸基を該糖
の２’、３’又は５’ヒドロキシル部分に結合させるこ
とができる。オリゴヌクレオチドの形成においては、リ
ン酸基が隣接ヌクレオシドと相互に共有結合して、線状
ポリマー化合物を形成する。この線状ポリマー構造の各
々の末端はさらに結合して、環状構造を形成することが
できるが、本発明に関連しては、オープンリニア構造が
一般に好ましい。
【００２８】オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は
一般にオリゴヌクレオチドの糖間“バックボーン”を形
成すると見なされる。ＲＮＡ及びＤＮＡの正常な結合又
はバックボーンは３’−５’ホスホジエステル結合であ
る。オリゴヌクレオチド（又は他のアンチセンス化合
物）のバックボーンは一連の塩基を特定の順序に配置
し；この整然とした塩基系列の書かれた図は、他に指示
しない限り、通常は５’−３’順序で書かれ、ヌクレオ
チド又は核酸塩基の配列として知られる。
【００２９】オリゴヌクレオチドは特定の核酸と特異的
ハイブリダイゼーションを行うためにアイデンティティ
及び数において充分なヌクレオチド配列を含むことがで
きる。遺伝子のセンス鎖の一部と特異的にハイブリダイ
ズする、このようなオリゴヌクレオチドは一般に“アン
チセンス”として表される。本発明に関連して、“ハイ
ブリダイゼーション”は水素結合を意味し、これは相補
的ヌクレオチド間のＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ、Ｈｏｏ
ｇｓｔｅｅｎ又は逆Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ水素結合であり
うる。例えば、アデニンとチミンとは、水素結合の形成
によって組み合わされる相補的核酸塩基である。本明細
書で用いる限り、“相補的”とは２つのヌクレオチド間
の正確な対合のための能力(capacity)を意味する。例え
ば、オリゴヌクレオチドのある一定に位置におけるヌク
レオチドがＤＮＡ又はＲＮＡ分子の同じ位置のヌクレオ
チドと水素結合することができるならば、該オリゴヌク
レオチドと該ＤＮＡ又はＲＮＡとはその位置において相
互に相補的であると見なされる。各分子における充分な
数の対応位置が相互に水素結合することができるヌクレ
オチドによって占められる場合に、該オリゴヌクレオチ
ドと該ＤＮＡ又はＲＮＡとは相互に相補的である。
【００３０】したがって、“特異的にハイブリダイズ可
能な”と“相補的”とは、オリゴヌクレオチドとＤＮＡ
又はＲＮＡターゲットとの間に安定で特異的な結合が生
じるような、充分な度合いの相補性又は正確な対合を意
味するために用いられる用語である。オリゴヌクレオチ
ドは、核酸二本鎖の内部での特異的なパートナー核酸塩
基間の塩基対の形成のために、そのターゲット配列に対
して特異的にハイブリダイズ可能である。天然生成核酸
塩基のなかでは、グアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と結
合し、アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）又はウラシル
（Ｕ）と結合する。Ａに対するパートナーとしてのＵ
（ＲＮＡ）及びＴ（ＤＮＡ）の等価性の他に、他の天然
生成核酸塩基等価物も、５−メチルシトシンと５−ヒド
ロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）（Ｃ等価物）及び５−
ヒドロキシメチルウラシル（Ｕ等価物）を含めて、知ら
れている。さらに、パートナー特異性を保有する合成核
酸塩基が当該技術分野において知られており、これは例
えば、Ｃに対するパートナー特異性を保有する７−デア
ザ−グアニンである。したがって、そのターゲット配列
と特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの能
力は、ターゲット核酸におけるパートナー核酸塩基に対
するその特異性に影響を与えない、オリゴヌクレオチド
のヌクレオチド配列中の核酸塩基の化学的修飾によって
変化しない。
【００３１】オリゴヌクレオチド又は他のアンチセンス
化合物の核酸塩基配列が、特異的にハイブリダイズ可能
であるそのターゲット核酸配列に対して１００％相補的
である必要はないことが、当該技術分野において理解さ
れる。特異的結合が望ましい条件下で、即ちｉｎ ｖｉ
ｖｏアッセイ若しくは治療的処置の場合の生理的条件下
で又はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの場合にはアッセイ条
件下で、非ターゲット配列に対するオリゴヌクレオチド
の非特異的結合を避けるために充分な度合いの相補性が
存在するときに、アンチセンス化合物はそのターゲット
核酸に特異的にハイブリダイズ可能である。
【００３２】アンチセンス・オリゴヌクレオチドは一般
に研究試薬、診断助剤及び治療剤として用いられる。例
えば、鋭敏な特異性で遺伝子発現を阻害することができ
るアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、特定の遺伝子
の機能を解明するために、例えば、生物学的経路の種々
なメンバーの機能を識別するために通常に熟練した人々
(those of ordinary skill)によってしばしば用いられ
る。それ故、この特異的阻害効果は当業者によって研究
用途に利用されている。オリゴヌクレオチドの特異性と
感受性とは当業者によって治療用途にも利用される。本
発明に有用な、好ましいアンチセンス化合物の特定の例
は、修飾バックボーン又は非天然糖間結合を含有するオ
リゴヌクレオチドを包含する。本明細書で定義する限
り、修飾バックボーンを有するオリゴヌクレオチドは、
バックボーン中にリン原子を保持するオリゴヌクレオチ
ドと、バックボーン中にリン原子を保持しないオリゴヌ
クレオチドとを包含する。本明細書のために及び当該技
術分野において時には参照される限りでは、それらの糖
間バックボーンにリン原子を有さない修飾オリゴヌクレ
オチドもオリゴヌクレオチドであると見なすことができ
る。
【００３３】特定のオリゴヌクレオチド化学的修飾を次
のサブセクションにおいて説明する。特定の化合物の全
ての位置が均一に修飾される必要はなく、実際に、下記
修飾の１つより多くを単一アンチセンス化合物中に又は
その単一残基中にさえも、例えばオリゴヌクレオチド内
の単一ヌクレオシドにおいて組み入れることができる。
【００３４】Ａ．修飾結合： 好ましい修飾オリゴヌク
レオチド・バックボーンは例えば、正常な３’−５’結
合を有する、ホスホロチオエート、キラル・ホスホロチ
オエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステ
ル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルホスホ
ネートと、３’−アルキレンホスホネート及びキラル・
ホスホネートを含めた他のホスホネート、ホスフィネー
ト、３’−アミノホスホルアミデート及びアミノアルキ
ルホスホルアミデートを含めたホスホルアミデート、チ
オノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネー
ト、チオノアルキルホスホトリエステル及びボラノホス
フェート、これらの２’−５’結合した類似体、並びに
ヌクレオシド単位の隣接対が３’−５’対５’−３’又
は２’−５’対５’−２’結合した逆の極性を有するも
のを包含する。種々な塩、混合塩及び遊離酸形も包含さ
れる。
【００３５】上記リン原子含有結合の製造を教示する、
代表的な米国特許は、非限定的に、米国特許第３，６８
７，８０８号；第４，４６９，８６３号；第４，４７
６，３０１号；第５，０２３，２４３号；第５，１７
７，１９６号；第５,１８８,８９７号；第５，２６４，
４２３号；第５，２７６，０１９号；第５，２７８，３
０２号；第５，２８６，７１７号；第５，３２１，１３
１号；第５，３９９，６７６号；第５，４０５，９３９
号；第５，４５３，４９６号；第５，４５５，２３３
号；第５，４６６，６７７号；第５，４７６，９２５
号；第５，５１９，１２６号；第５，５３６，８２１
号；第５，５４１，３０６号；第５，５５０，１１１
号；第５，５６３，２５３号；第５，５７１，７９９
号；第５，５８７，３６１号；第５，６２５，０５０
号；及び第５，６９７，２４８号を包含し、これらのう
ちのあるものは本出願と共通に所有されており、またこ
れらの各々は本明細書に援用される。
【００３６】それらのなかにリン原子を包含しない、好
ましい修飾オリゴヌクレオチド・バックボーン（即ち、
オリゴヌクレオシド）は、短鎖アルキル若しくはシクロ
アルキル糖間結合、混合ヘテロ原子とアルキル若しくは
シクロアルキル糖間結合、又は１つ以上の短鎖ヘテロ原
子若しくは複素環糖間結合によって形成されるバックボ
ーンを有する。これらは、モルホリノ結合を有するもの
（一部は、ヌクレオシドの糖部分から形成）；シロキサ
ン・バックボーン；スルフィド、スルホキシド及びスル
ホン・バックボーン；ホルムアセチル及びチオホルムア
セチル・バックボーン；メチレンホルムアセチル及びチ
オホルムアセチル・バックボーン；アルケン含有バック
ボーン；スルファメート・バックボーン；メチレンイミ
ノ及びメチレンヒドラジノ・バックボーン；スルホネー
ト及びスルホンアミド・バックボーン；アミド・バック
ボーン；混合Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ2構成成分部分を有す
る他のバックボーンを包含する。
【００３７】上記オリゴヌクレオシドの製造を教示す
る、代表的な米国特許は、非限定的に、米国特許第５，
０３４，５０６号；第５，１６６，３１５号；第５，１
８５，４４４号；第５，２１４，１３４号；第５，２１
６，１４１号；第５,２３５，０３３号；第５，２６
４，５６２号；第５，２６４，５６４号；第５，４０
５，９３８号；第５，４３４，２５７号；第５，４６
６，６７７号；第５，４７０，９６７号；第５，４８
９，６７７号；第５，５４１，３０７号；第５，５６
１，２２５号；第５，５９６，０８６号；第５，６０
２，２４０号；第５，６１０，２８９号；第５，６０
２，２４０号；第５，６０８，０４６号；第５，６１
０，２８９号；第５，６１８，７０４号；第５，６２
３，０７０号；第５，６６３，３１２号；第５，６３
３，３６０号；第５，６７７，４３７号；及び第５，６
７７，４３９号を包含し、これらのうちのあるものは本
出願と共通に所有されており、またこれらの各々は本明
細書に援用される。
【００３８】他の好ましいオリゴヌクレオチド模倣体で
は、ヌクレオチド単位の糖及び糖間結合、即ちバックボ
ーンが新規な基によって置換される。塩基単位は適当な
核酸ターゲット化合物とのハイブリダイゼーションのた
めに維持される。このようなオリゴマー化合物の１つ、
優れたハイブリダイゼーション性質を有することが判明
しているオリゴヌクレオチド模倣体はペプチド核酸（Ｐ
ＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、オリゴヌクレオ
チドの糖バックボーンがアミド含有バックボーン、特に
アミノエチルグリシン・バックボーンによって置換され
る。核酸塩基は保持されて、バックボーンのアミド部分
のアザ窒素原子に直接的に又は間接的に結合する。ＰＮ
Ａ化合物の製造を教示する代表的な米国特許は、非限定
的に、米国特許第５，５３９，０８２号；第５，７１
４，３３１号及び第５，７１９，２６２号を包含し、こ
れらの各々は本明細書に援用される。ＰＮＡ化合物のさ
らなる教示はＮｉｅｌｓｅｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９
９１，２５４，１４９７に見出すことができる。
【００３９】本発明の最も好ましい実施態様は、ホスホ
ロチオエート・バックボーンを有するオリゴヌクレオチ
ド及びヘテロ原子バックボーンを有するオリゴヌクレオ
シド、特に、−ＣＨ2−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ2−、−ＣＨ2−
Ｎ（ＣＨ3）−Ｏ−ＣＨ2−［メチレン（メチルイミノ）
若しくはＭＭＩバックボーンとして知られる］、上記で
参照した米国特許第５，４８９，６７７号の−ＣＨ2−
Ｏ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2−、−ＣＨ2−Ｎ（ＣＨ3）−Ｎ
（ＣＨ3）−ＣＨ2−及び−Ｏ−Ｎ（ＣＨ3）−ＣＨ2−Ｃ
Ｈ2−［ネイティブ・ホスホジエステル・バックボーン
は−Ｏ−Ｐ−Ｏ−ＣＨ2−として表される］並びに上記
で参照した米国特許第５，６０２，２４０号のアミド・
バックボーンを有するものである。さらに、上記で参照
した米国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ・バ
ックボーン構造を有するオリゴヌクレオチドも好まし
い。
【００４０】Ｂ．修飾核酸塩基： 本発明の化合物は付
加的に又は代替的に核酸塩基（当該技術分野では簡単に
“塩基”としばしば呼ばれる）修飾又は置換を含むこと
ができる。本明細書で用いる限り、“未修飾(unmodifie
d)”又は“天然”核酸塩基はプリン塩基アデニン（Ａ）
及びグアニン（Ｇ）と、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、
シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を包含する。修飾核
酸塩基は他の合成及び天然核酸塩基、例えば５−メチル
シトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシト
シン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニ
ン、アデニン及びグアニンの６−メチル及び他のアルキ
ル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及び他
のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン
及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシ
ン、５−プロピニルウラシル及びシトシン、６−アゾウ
ラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（プソイド
ウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミ
ノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシ
ル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、
特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及び他の５−
置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７
−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデ
ニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン、並
びに３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンを包含
する。他の核酸塩基は米国特許第３，６８７，８０８号
に開示されているもの、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌ
ｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，８５８〜８５９
頁，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．編集，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０に開示されている
もの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ等，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃ
ｈｅｍｉｅ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ版，１９９
１，３０，６１３によって開示されているもの、Ｓａｎ
ｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，第１５章，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ，２８９〜３０２頁，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．及びＬ
ｅｂｌｅｕ，Ｂ．編集，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３
によって開示されているものを包含する。これらの核酸
塩基のある一定のものは本発明のオリゴマー化合物の結
合アフィニティを高めるために特に有用である。これら
は５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン並びにＮ−
２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリンを包含し、２−アミノ
プロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プ
ロピニルシトシンを包含する。５−メチルシトシン置換
は核酸二本鎖安定性を０．６〜１．２℃だけ高めること
が判明しており（同上、２７６〜２７８頁）、さらに特
に２’−メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合には
いっそう、現在好まれている塩基置換である。
【００４１】上記修飾核酸塩基のある一定のもの並びに
他の修飾核酸塩基の製造を教示する代表的な米国特許
は、非限定的に、上記米国特許第３，６８７，８０８
号、並びに米国特許第４，８４５，２０５号、第５，１
３０，３０２号、第５，１３４，０６６号；第５，１７
５，２７３号；第５，３６７，０６６号；第５，４３
２，２７２号；第５，４５７，１８７号；第５，４５
９，２５５号；第５，４８４，９０８号；第５，５０
２，１７７号；第５，５２５，７１１号；第５，５５
２，５４０号；第５，５８７，４６９号；第５，５９
４，１２１号；第５，５９６，０９１号；第５，６１
４，６１７号；及び第５，６８１，９４１号を包含し、
これらのうちのあるものは本出願と共通に所有されてお
り、またこれらの各々は本明細書に援用される、共通に
所有される米国特許出願第０８／７６２，４８８号（１
９９６年１２月１０日出願）も本明細書に援用される。
【００４２】Ｃ．糖修飾： 本発明のアンチセンス化合
物は付加的に又は代替的に１つ以上の置換糖部分を含む
ことができる。好ましいオリゴヌクレオチドは２’位置
に下記：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−若しくはＮ−アルキル；
又はＯ−、Ｓ−若しくはＮ−アルケニル；又はＯ−、Ｓ−
若しくはＮ−アルキニルの１つを含み、これらにおいて
アルキル、アルケニル及びアルキニルは置換又は非置換
のＣ1−Ｃ10アルキル又はＣ2−Ｃ10アルケニル及びアル
キニルであることができる。Ｏ［（ＣＨ2）nＯ］mＣ
Ｈ3、Ｏ（ＣＨ2）nＯＣＨ3、Ｏ（ＣＨ2）nＮＨ2、Ｏ
（ＣＨ2）nＣＨ3、Ｏ（ＣＨ2）nＯＮＨ2及びＯ（Ｃ
Ｈ2）nＯＮ［（ＣＨ2）nＣＨ3）］2が特に好ましく、こ
れらにおいてｎ及びｍは１から約１０までである。他の
好ましいオリゴヌクレオチドは２’位置において下記：
Ｃ1−Ｃ10低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリ
ール、アラルキル、Ｏ−アルカリール又はＯ−アラルキ
ル、ＳＨ、ＳＣＨ3、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｃ
Ｆ3、ＯＣＦ3、ＳＯＣＨ3、ＳＯ2ＣＨ3、ＯＮＯ2、ＮＯ
2、Ｎ3、ＮＨ2、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロ
アルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルア
ミノ、置換シリル、ＲＮＡ脱離基(cleaving group)、レ
ポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチド
の薬物動態的性質を改良するための基、又はオリゴヌク
レオチドの薬力学的性質を改良するための基、並びに同
様な性質を有する他の置換基の１つを含む。好ましい修
飾は２’−メトキシエトキシ［２’−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2Ｏ
ＣＨ3、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）又は２’−
ＭＯＥとしても知られる］（Ｍａｒｔｉｎ等，Ｈｅｌ
ｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６）、
即ち、アルコキシアルコキシ基を包含する。他の好まし
い修飾は、共通に所有される米国特許出願第０９／０１
６，５２０号（１９９８年１月３０日に出願、この出願
の内容は本明細書に援用される）に記載されるような、
２’−ＤＭＡＯＥとしても知られる、２’−ジメチルア
ミノオキシエトキシ、即ち、Ｏ（ＣＨ2）2ＯＮ（Ｃ
Ｈ3）2基を包含する。
【００４３】他の好ましい修飾は、２’−メトキシ
（２’−Ｏ−ＣＨ3）、２’−アミノプロポキシ（２’
−ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2）及び２’−フルオロ（２’
−Ｆ）を包含する。同様な修飾をオリゴヌクレオチドの
他の位置においても、特に３’末端ヌクレオチドの糖の
３’−位置又は２’−５’結合オリゴヌクレオチドの場
合には、５’末端ヌクレオチドの５’位置においても行
うことができる。オリゴヌクレオチドはペントフラノシ
ル糖の代わりに例えばシクロブチル部分のような糖模倣
体を有することもできる。このような修飾糖構造の製造
を教示する代表的な米国特許は、非限定的に、米国特許
第４，９８１，９５７号、第５，１１８，８００号、第
５，３１９，０８０号；第５，３５９，０４４号；第
５，３９３，８７８号；第５，４４６，１３７号；第
５，４６６，７８６号；第５，５１４，７８５号；第
５，５１９，１３４号；第５，５６７，８１１号；第
５，５７６，４２７号；第５，５９１，７２２号；第
５，５９７，９０９号；第５，６１０，３００号；第
５，６２７，０５３１号；第５，６３９，８７３号；第
５，６４６，２６５号；第５，６５８，８７３号；第
５，６７０，６３３号；及び第５，７００，９２０号を
包含し、これらのうちのあるものは共通に所有されてお
り、またこれらの各々は本明細書に援用される、共通に
所有される米国特許第０８／４６８，０３７号（１９９
５年６月５日に出願）も本明細書に援用される。
【００４４】Ｄ．他の修飾： オリゴヌクレオチドの他
の位置において、特に３’末端ヌクレオチドの糖の３’
位置において又は５’末端ヌクレオチドの５’位置にお
いて他の修飾を行うこともできる。例えば、本発明のオ
リゴヌクレオチドの他の修飾の１つは、オリゴヌクレオ
チドの活性、細胞分配又は細胞取り込みを強化する１つ
以上の部分又はコンジュゲートをオリゴヌクレオチドに
化学的に結合させることを含む。このような部分は、非
限定的に、例えばコレステロール部分のような脂質部分
（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）、コ
ール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ等，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅ
ｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４，１０５
３）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチル
チオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ等，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６；Ｍａｎ
ｏｈａｒａｎ等，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌ
ｅｔｔ．，１９９３，３，２７６５）、チオコレステロ
ール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３），脂肪族鎖、例え
ば、ドデカンジオール又はウンデシル残基（Ｓａｉｓｏ
ｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ等，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９
１，１０，１１１；Ｋａｂａｎｏｖ等，ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔ．，１９９０，２５９，３２７；Ｓｖｉｎａｒｃｈ
ｕｋ等，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４
９）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−
グリセロール又はトリエチルアンモニウム １，２−ジ
−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホス
ホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ等，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１；Ｓｈｅ
ａ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１
８，３７７７）、ポリアミン又はポリエチレングリコー
ル鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ等，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ
＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６
９）、又はアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ等，
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３
６，３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ等，Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，
１２６４，２２９）、又はオクタデシルアミン若しくは
ヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部
分（Ｃｒｏｏｋｅ等，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘ
ｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３）を包含す
る。
【００４５】このようなオリゴヌクレオチド・コンジュ
ゲートの製造を教示する代表的な米国特許は、非限定的
に、米国特許第４，８２８，９７９号、第４，９４８，
８８２号、第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４
６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３
０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７
号；第５，５８０，７３１号；第５，５８０，７３１
号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４
号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５
号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３
号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８
号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４
号；第４，６０５，７３５号、第４，６６７，０２５
号、第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７
号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３
号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２
号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０
号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６
号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３
号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２
号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６
号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０
号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８
号；第５，３７１，２４１号；第５，３９１，７２３
号；第５，４１６，２０３号；第５，４５１，４６３
号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７
号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２
号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２
号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１
号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６
号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８
号；及び第５，６８８，９４１号を包含し、これらのあ
るものは共通に所有されており、これらの各々は本明細
書に援用される。
【００４６】Ｅ．キメラ・オリゴヌクレオチド： 本発
明は、キメラ化合物であるアンチセンス化合物も包含す
る。本発明に関連して、“キメラ”アンチセンス化合物
又は“キメラ”は、各々が少なくとも１つのモノマー単
位、即ち、オリゴヌクレオチド化合物の場合にはヌクレ
オチドから構成された、２つ以上の化学的に全く異なる
(distinct)領域を含有するアンチセンス化合物、特にオ
リゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチド
は典型的に、ヌクレアーゼ分解に対する増強された耐
性、増強された細胞取り込み及び／又はターゲット核酸
への増強された結合アフィニティをオリゴヌクレオチド
に与えるようにオリゴヌクレオチドが修飾されている、
少なくとも１つの領域を含有する。オリゴヌクレオチド
の他の領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ又はＲＮＡ：ＲＮＡハイ
ブリッドを開裂することができる酵素の基質として役立
ちうる。例として、ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二
本鎖のＲＮＡ鎖を開裂する細胞エンドヌクレアーゼであ
る。それ故、ＲＮアーゼの活性化はＲＮＡターゲットの
開裂を生じて、それによって遺伝子発現のオリゴヌクレ
オチド阻害の効率を非常に高める。その結果、キメラ・
オリゴヌクレオチドを用いる場合には、同じターゲット
領域にハイブリダイズするホスホロチオエート・デオキ
シオリゴヌクレオチドに比べて、より短いオリゴヌクレ
オチドによって匹敵しうる結果をしばしば得ることがで
きる。ＲＮＡターゲットの開裂は、ゲル電気泳動と、必
要な場合には、当該技術分野において知られた会合核酸
ハイブリダイゼーション方法とによってルーチンに検出
することができる。ＲＮアーゼＨ仲介ターゲット開裂
は、核酸を開裂するためのリボザイムの使用とは全く異
なり、リボザイムは本発明によって包含されない。
【００４７】例として、このような“キメラ”は“ギャ
ップマー(gapmer)”、即ち、オリゴヌクレオチドの中央
部分（“ギャップ”）は例えばＲＮアーゼＨの基質とし
て役立ち、５’部分及び３’部分（“ウィング”）は、
ターゲットＲＮＡ分子に対する大きな結合アフィニティ
又は、ターゲットＲＮＡ分子と二本鎖を形成したときに
安定性を有するような形式で修飾されるが、ヌクレアー
ゼ活性を支持することはできない（例えば、２’−フル
オロ−又は２’−メトキシエトキシ置換される）オリゴ
ヌクレオチドであることができる。他のキメラは“ヘミ
マー(hemimer)”、即ち、オリゴヌクレオチドの５’部
分は例えばＲＮアーゼＨの基質として役立つが、３’部
分はターゲットＲＮＡ分子に対する大きな結合アフィニ
ティ又は、ターゲットＲＮＡ分子と二本鎖を形成したと
きに安定性を有するような形式で修飾されるが、ヌクレ
アーゼ活性を支持することはできない（例えば、２’−
フルオロ−又は２’−メトキシエトキシ置換される）
（又はこの逆も同じ）オリゴヌクレオチドを包含する。
【００４８】大きなオリゴヌクレオチド：ＲＮＡ二本鎖
安定性を与える、オリゴヌクレオチドの多くの化学的修
飾がＦｒｅｉｅｒ等（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，１９９７，２５，４４２９）によって述べられて
いる。このような修飾はキメラ・オリゴヌクレオチドの
ＲＨアーゼＨ−不反応性部分のために好ましく、一般
に、ターゲットＲＮＡに対するアンチセンス化合物のア
フィニティを強化するために用いることができる。
【００４９】本発明のキメラ・アンチセンス化合物は２
つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチ
ド、オリゴヌクレオシド及び／又は上述したようなオリ
ゴヌクレオチド模倣体の複合構造として形成することが
できる。このような化合物は当該技術分野においてハイ
ブリッド又はギャップマーとしても呼ばれている。この
ようなハイブリッド構造の製造を教示する代表的な米国
特許は、非限定的に、米国特許第５，０１３，８３０
号、第５，１４９，７９７号、第５，２２０，００７
号；第５，２５６，７７５号；第５，３６６，８７８
号；第５，４０３，７１１号；第５，４９１，１３３
号；第５，５６５，３５０号；第５，６２３，０６５
号；第５，６５２，３５５号；第５，６５２，３５６
号；及び第５，７００，９２２号を包含し、これらのあ
るものは共通に所有されており、またこれらの各々は本
明細書に援用される、共通に所有され、認可された米国
特許出願第０８／４６５，８８０号（１９９５年６月６
日出願）も本明細書に援用される。
【００５０】Ｆ．合成： 本発明によって用いるオリゴ
ヌクレオチドは固相合成の周知の方法によって便利にか
つルーチンに作製することができる。このような合成の
ための装置は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を含めた、
幾つかの販売会社によって販売されている。当該技術分
野において知られた、このような合成のための任意の他
の手段も付加的に又は代替的に用いることができる。例
えばホスホロチオエート及びアルキル化誘導体のよう
な、他のオリゴヌクレオチドの製造に同様な方法を用い
ることも知られている。
【００５１】１．特定の修飾オリゴヌクレオチドの合成
に関する教示は、下記米国特許又は同時係属特許出願に
見出すことができ、これらの各々は本出願と共通に譲渡
される：米国特許第５，１３８，０４５号と第５，２１
８，１０５号、ポリアミンコンジュゲーテッド(polyami
ne conjugated)オリゴヌクレオチドに関する；米国特許
第５，２１２，２９５号、キラルリン結合を有するオリ
ゴヌクレオチドの製造のためのモノマーに関する；米国
特許第５，３７８，８２５号と第５，５４１，３０７
号、修飾バックボーンを有するオリゴヌクレオチドに関
する；米国特許第５，３８６，０２３号、バックボーン
の修飾オリゴヌクレオチドと、還元性カップリングによ
るその製造とに関する；米国特許第５，４５７，１９１
号、３−デアザプリン環系に基づく修飾核酸塩基と、そ
の合成方法とに関する；米国特許第５，４５９，２５５
号、Ｎ−２置換プリンに基づく修飾核酸塩基に関する；
米国特許第５，５２１，３０２号、キラルリン結合を有
するオリゴヌクレオチドの製造方法に関する；米国特許
第５，５３９，０８２号、ペプチド核酸に関する；米国
特許第５，５５４，７４６号、β−ラクタム・バックボ
ーンを有するオリゴヌクレオチドに関する；米国特許第
５，５７１，９０２号、オリゴヌクレオチドの合成方法
と合成材料とに関する；米国特許第５，５７８，７１８
号、アルキルチオ基を有するヌクレオシドに関する、こ
のような基はヌクレオシドの多様な位置のいずれかに付
着した他の部分に対するリンカーとして使用可能であ
る；米国特許第５，５８７，３６１号と第５，５９９，
７９７号、高度のキラル純度のホスホロチオエート結合
を有するオリゴヌクレオチドに関する；米国特許第５，
５０６，３５１号、２’−Ｏ−アルキルグアノシンと、
２，６−ジアミノプリン化合物を含めた関連化合物の製
造方法に関する；米国特許第５，５８７，４６９号、Ｎ
−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに関する；
米国特許第５，５８７，４７０号、３−デアザプリンを
有するオリゴヌクレオチドに関する；米国特許第５，２
２３，１６８号（１９９３年６月２９日発行）と第５，
６０８，０４６号、両方ともコンジュゲーテッド４’−
デスメチルヌクレオシド類似体に関する；米国特許第
５，６０２，２４０号と第５，６１０，２８９号、バッ
クボーンの修飾オリゴヌクレオチド類似体に関する；及
び米国特許出願第０８／３８３，６６６号（１９９５年
２月３日出願）と米国特許第５，４５９，２５５号、特
に２’−フルオロ−オリゴヌクレオチドの合成方法に関
する。
【００５２】２．生物学的等価物： 本発明の化合物
は、任意の製薬的に受容される塩、エステル、このよう
なエステルの塩、又はヒトを含めた動物に投与するとき
に生物学的に活性な代謝産物又はその残渣を（直接的又
は間接的に）与えることができる、任意の他の化合物を
包含する。したがって、例えば、この開示は本発明のア
ンチセンス化合物の“プロドラッグ”及び“製薬的に受
容される塩”と、このようなプロドラッグの製薬的に受
容される塩と、他の生物学的等価物にも関する。
【００５３】本発明のアンチセンス化合物を、“プロド
ラッグ”形で投与するように、付加的に又は代替的に製
造することができる。“プロドラッグ”なる用語は、不
活性形で製造され、身体内又はその細胞内で内因性酵素
又は他の化学物質及び／又は条件の作用によって活性形
（即ち、薬物）に転化される治療剤を意味する。特に、
本発明のアンチセンス化合物のプロドラッグ・バージョ
ンは、Ｇｏｓｓｅｌｉｎ等へのＷＯ９３／２４５１０
（１９９３年１２月９日公開）に開示された方法に従っ
て、ＳＡＴＥ［（Ｓ−アセチル−２−チオエチル）ホス
フェート］誘導体として製造される。
【００５４】Ｂ．製薬的に受容される塩： “製薬的に
受容される塩”なる用語は、本発明のアンチセンス化合
物の生理的及び製薬的に受容される塩：即ち、親化合物
の望ましい生物学的活性を保持し、それに望ましくない
毒物学的効果を与えない塩を意味する。
【００５５】製薬的に受容される塩基付加塩は金属又は
アミン、例えばアルカリ金属、アルカリ土類金属又は有
機アミンによって形成される。カチオンとして用いられ
る金属の例はナトリウム、カリウム、マグネシウム、カ
ルシウム等である。適当なアミンの例はクロロプロカイ
ン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、
ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレ
ンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン及びプロカインであ
る（例えば、Ｂｅｒｇｅ等，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃ
ｉ．，１９７７，６６：１参照）。前記酸化合物の塩基
付加塩は、遊離酸形を充分な量の所望の塩基と接触させ
て、慣用的な方法で塩を得ることによって製造される。
塩形を酸と接触させ、遊離酸を慣用的な方法で単離する
ことによって、遊離酸形を再生することができる。遊離
酸形はそれらのそれぞれの塩形とは、例えば極性溶媒中
の溶解性のような、ある一定の物理的性質において幾ら
か異なるが、他の点では、本発明のために塩はそれらの
それぞれの遊離酸に等しい。本明細書で用いる限り、
“製薬的な付加塩”は本発明の組成物の構成成分の１つ
の酸形の製薬的に受容される塩を包含する。これらはア
ミンの有機酸塩又は無機酸塩を包含する。好ましい酸塩
は塩酸塩、酢酸塩、サリチル酸塩、硝酸塩及びリン酸塩
である。他の適当な製薬的に受容される塩は当業者に周
知であり、多様な有機酸及び無機酸の塩基性塩、例え
ば、塩酸、臭化水素酸、硫酸又はリン酸のような無機酸
による；有機カルボン酸、スルホン酸、スルホ若しくは
ホスホ酸、又はＮ−置換スルファミン酸、例えば酢酸、
プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、
ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、
リンゴ酸、酒石酸、乳酸、シュウ酸、グルコン酸、グル
カル酸、グルクロン酸、クエン酸、安息香酸、シンナミ
ン酸、マンデル酸、サリチル酸、エンボン酸(embonic a
cid)、４−アミノサリチル酸、２−フェノキシ安息香
酸、ニコチン酸、イソニコチン酸又は２−アセトキシ安
息香酸による；例えば、本質的にタンパク質の合成に関
与する２０α−アミノ酸、例えばグルタミン酸若しくは
アスパラギン酸のようなアミノ酸による、並びにナフタ
レン−１，５−ジスルホン酸、フェニル酢酸、エタン−
１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、メタンスル
ホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンス
ルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン
−２−スルホン酸、２−若しくは３−ホスホグリセレー
ト、グルコース−６−ホスフェート、Ｎ−シクロヘキシ
ルスルファミン酸（シクラメートの形成を付随）、又は
例えばアスコルビン酸のような、他の酸有機化合物によ
る塩基性塩を包含する。化合物の製薬的に受容される塩
は製薬的に受容されるカチオンによっても製造すること
ができる。適当な製薬的に受容されるカチオンは当業者
によって周知であり、アルカリ金属カチオン、アルカリ
土類金属カチオン、アンモニウムカチオン及び第４級ア
ンモニウムカチオンを包含する。炭酸塩又は水素炭酸塩
(hydrogen carbonate)も可能である。
【００５６】オリゴヌクレオチドに関して、製薬的に受
容される塩の好ましい例は、非限定的に、（ａ）例え
ば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、マグネシウ
ム、カルシウム、ポリアミン（例えば、スペルミン及び
スペルミジン）等のようなカチオンによって形成される
塩；（ｂ）例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、
硝酸等のような無機酸によって形成される酸付加塩；
（ｃ）例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マ
レイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ
酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチ
ン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンス
ルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン
酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸等の
ような有機酸によって形成される塩；及び（ｄ）例えば
塩素、臭素及びヨウ素のような元素アニオンから形成さ
れる塩を包含する。
【００５７】３．本発明の具体的な有用性： 本発明の
オリゴヌクレオチドは、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をコ
ードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）に特異的にハイブリ
ダイズする。本発明のアンチセンス化合物は治療用化合
物として、診断ツールとして又はキットに組み入れるこ
とができる研究試薬として、並びに当業者に明らかであ
る他の方法として用いることができる。
【００５８】Ａ．アッセイと診断用途： 本発明のオリ
ゴヌクレオチドは、細胞又は組織サンプル中のＰＥＣＡ
Ｍ−１タンパク質特異的核酸の存在を検出するために用
いることができる。例えば、５’末端をポリヌクレオチ
ドキナーゼによって32Ｐ標識することによって、放射能
標識オリゴヌクレオチドを製造することができる（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋ等，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９，２巻，１０．５９頁）。放
射能標識オリゴヌクレオチドを次に、ＰＥＣＡＭ−１タ
ンパク質メッセンジャーＲＮＡ（したがって、ＰＥＣＡ
Ｍ−１タンパク質）を含有すると疑われる細胞又は組織
サンプルと接触させ、サンプルを洗浄して、非結合オリ
ゴヌクレオチドを除去する。サンプル中に残留する放射
能は、結合オリゴヌクレオチドの存在を示し、これは次
にこのオリゴヌクレオチドに相補的な核酸の存在を示
し、この放射能はシンチレーション・カウンター又は他
のルーチン手段を用いて定量することができる。これに
よって、これらのタンパク質をコードする核酸の発現が
検出される。
【００５９】本発明の放射能標識オリゴヌクレオチド
は、研究、診断又は治療目的のＰＥＣＡＭ−１タンパク
質の局在化(localization)、分布及び定量を測定するた
めの組織のオートラジオグラフィを行うためにも用いる
ことができる。このような研究では、組織切片を上述し
たように放射能標識オリゴヌクレオチドによって処理
し、洗浄してから、ルーチンのオートラジオグラフィ方
法によって写真乳剤に暴露させる。この乳剤は、現像し
たときに、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質遺伝子を発現する
領域上に銀粒子の画像を生じる。銀粒子の定量はこれら
のタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子の発現の検出を
可能にし、これらの領域へのオリゴヌクレオチドのター
ゲッティングを可能にする。
【００６０】放射能標識の代わりにフルオレセイン又は
他の蛍光タグとコンジュゲートする本発明のオリゴヌク
レオチドを用いて、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質核酸の発
現を蛍光検出するための同様なアッセイを開発すること
ができる。このようなコンジュゲーションは固相合成中
に蛍光標識アミダイト(amidite)又は制御多孔質ガラス
ビーズ（ＣＰＧ）カラムを用いてルーチンに達成するこ
とができる。蛍光標識アミダイトとＣＰＧとは例えばＧ
ｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｉｎｇ，ＶＡ）か
ら入手可能である。オリゴヌクレオチドを標識するため
の他の手段も当該技術分野において知られている（例え
ば、Ｒｕｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２６巻：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆ
ｏｒＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｏｎｊｕｇａ
ｔｅｓ，Ａｇｒａｗａｌ編集，Ｈｕｍａｎｓ Ｐｒｅｓ
ｓ Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ ＮＪ，１９９４，６章，
１６７〜１８５頁参照）。
【００６１】ＰＥＣＡＭ−１タンパク質の発現の有無を
検出するためのキットも製造することができる。このよ
うなキットは適当な遺伝子、即ち、ＰＥＣＡＭ−１タン
パク質をコードする遺伝子をターゲットとするオリゴヌ
クレオチドを包含する。適当なキット及びアッセイ・フ
ォーマット、例えば、“サンドイッチ”アッセイは当該
技術分野において知られており、本発明のアンチセンス
化合物との使用に容易に適応することができる。ＰＥＣ
ＡＭ−１タンパク質をコードする核酸との、本発明のア
ンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、当該技
術分野において知られた手段によって検出することがで
きる。このような手段は、オリゴヌクレオチドへの酵素
のコンジュゲーション、オリゴヌクレオチドの放射能標
識又は任意の他の適当な検出系を包含する。
【００６２】Ｂ．生物学的に活性なオリゴヌクレオチ
ド： 本発明は、培養細胞、単離組織及び器官並びに動
物に生物学的活性を有するオリゴヌクレオチドを投与す
ることにも関する。“生物学的活性を有する”とは、オ
リゴヌクレオチドが培養細胞、単離組織若しくは器官及
び／又は動物中の１つ以上の遺伝子の発現をモジュレー
トするように機能することを意味する。このようなモジ
ュレーションは、非限定的に転写阻止(transcriptional
arrest)；ＲＮＡプロセッシング（キャッピング、ポリ
アデニル化及びスプライシング）及び輸送に対する効
果；ターゲット核酸の細胞分解の強化；並びに翻訳阻止
を含めた、当該技術分野において知られた多様な機構を
用いて、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって達成
されることができる（Ｃｒｏｏｋｅ等，Ｅｘｐ．Ｏｐｉ
ｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１９９６，６：８５
５）。
【００６３】ヒト以外の動物に、本発明の組成物及び方
法を用いて、動物における１つ以上の遺伝子の機能を研
究することができる。例えば、ニューロン死におけるＮ
−メチル−Ｄ−アスパルテート受容体の役割りを研究す
るためにラットに；プロテインキナーゼＣ−αの生物学
的役割りを研究するためにマウスに；及び不安における
神経ペプチドＹ１受容体の役割りを試験するためにラッ
トに、アンチセンス・オリゴヌクレオチドは全身的に投
与されている（それぞれ、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ等，Ｎ
ａｔｕｒｅ，１９９３，３６３：２６０；Ｄｅａｎ等，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．，１９９４，９１：１１７６２；及びＷａｈｌｅｓ
ｔｅｄｔ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２５９：５２
８）。関連タンパク質の複合ファミリーを研究すべき場
合には、“アンチセンス・ノックアウト(antisense kno
ckouts)”（即ち、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの
全身投与による遺伝子の阻害）がファミリーの特定のメ
ンバーを試験するための最も的確な手段を意味すること
ができる（一般的に、Ａｌｂｅｒｔ等，ＴｒｅｎｄｓＰ
ｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９４，１５：２５０
参照）。
【００６４】本発明の組成物と方法は、１つ以上の核酸
によって全体的に又は部分的に治療可能である疾患又は
障害を有する（即ち、罹患した）、又は有しやすいと分
かっている若しくは有しやすいと疑われるヒトを含めた
動物における治療用途をも有する。“治療用途”なる用
語は、本発明のアンチセンス化合物をｉｎ ｖｉｖｏ又
はｅｘ ｖｉｖｏのいずれかで動物細胞と接触させる予
防用途、緩和用途及び治癒用途(curative use)を包含す
るように意図される。ｅｘ ｖｉｖｏで動物細胞と接触
させる場合に、本発明の１種類以上のアンチセンス化合
物による処置後に、治療用途はこのような細胞を動物中
に組み入れることを包含する。
【００６５】治療用途に関しては、ＰＥＣＡＭ−１タン
パク質の発現又は活性をモジュレートすることによって
治療又は予防することができる疾患又は障害を有すると
疑われる動物は、例えば、本発明によるオリゴヌクレオ
チドを投与することによって治療される。例えば希釈剤
のような、適当な製薬的に受容されるキャリヤーに有効
量のオリゴヌクレオチドを加えることによって、本発明
のアンチセンス化合物を薬剤組成物に用いることができ
る。現場の研究者は、ウイルス性、真菌性及び代謝性疾
患に関与する遺伝子の発現をモジュレートすることがで
きる、アンチセンス、トリプレックス(triplex)及び他
のオリゴヌクレオチド組成物を同定している。アンチセ
ンス・オリゴヌクレオチドはヒトに安全に投与されてお
り、幾つかの臨床トライアルが現在進行中である。した
がって、オリゴヌクレオチドが、細胞、組織及び動物、特
にヒトを治療するための治療計画に有用であるように形
成されうる有用な治療手段でありうることは、確認され
ている。下記米国特許は、アンチセンス・オリゴヌクレオ
チドを用いる緩和方法、治療方法及び他の方法を実証す
る。米国特許第５，１３５，９１７号は、ヒト・インタ
ーロイキン−１受容体発現を阻害するアンチセンス・オ
リゴヌクレオチドを提供する。米国特許第５，０９８，
８９０号は、ｃ−ｍｙｂ腫瘍遺伝子に相補的なアンチセ
ンス・オリゴヌクレオチドと、ある一定の癌状態のアン
チセンス・オリゴヌクレオチド療法とに関する。米国特
許第５，０８７，６１７号は、アンチセンス・オリゴヌ
クレオチドによって癌患者を治療する方法を提供する。
米国特許第５，１６６，１９５号は、ヒト免疫不全ウイ
ルス（ＨＩＶ）のオリゴヌクレオチド阻害剤を提供す
る。米国特許第５，００４，８１０号は、ヘルペス単純
ウイルスＶｍｗ６５ ｍＲＮＡにハイブリダイズして、
複製を阻害することができるオリゴマーを提供する。米
国特許第５，１９４，４２８号は、インフルエンザウイ
ルスに対して抗ウイルス活性を有するアンチセンス・オ
リゴヌクレオチドを提供する。米国特許第４，８０６，
４６３号は、アンチセンス・オリゴヌクレオチドと、そ
れらを用いてＨＴＬＶ−ＩＩＩ複製を阻害する方法とを
提供する。米国特許第５，２８６，７１７号は、腫瘍遺
伝子の一部に対して相補的な塩基配列を有するオリゴヌ
クレオチドを提供する。米国特許第５，２７６，０１９
号と米国特許第５，２６４，４２３号とは、細胞中の異
種核酸(foreign nucleic acid)の複製を防止するために
用いられるホスホロチオエート・オリゴヌクレオチド類
似体に関する。米国特許第４，６８９，３２０号は、サ
イトメガロウイルス（ＣＭＶ）に特異的な抗ウイルス剤
としてのアンチセンス・オリゴヌクレオチドに関する。
米国特許第５，０９８，８９０号は、ヒトｃ−ｍｙｂ遺
伝子のｍＲＮＡ転写体(transcript)の少なくとも一部に
相補的なオリゴヌクレオチドを提供する。米国特許第
５，２４２，９０６号は、潜伏性Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａ
ｒｒウイルス（ＥＢＶ）感染症の治療に有用なアンチセ
ンス・オリゴヌクレオチドを提供する。
【００６６】本明細書で用いる限り、“疾患又は障害”
なる用語は（１）特に、正常な生理的機能を損なう感
染、生来の虚弱若しくは環境ストレスの結果としての生
物又は部分の任意の異常な状態を包含し；（２）妊娠自
体を除外するが、妊娠に関連した自己免疫及び他の疾患
は除外しない；並びに（３）癌及び腫瘍を包含する。
“疾患又は障害を有しやすいと知られた又は疑われる”
なる用語は、対象動物がこのような動物の一般人口に比
べて、本明細書で定義したような特定の疾患又は障害を
発生する、増大した危険性にあることが判明している又
は疑われることを意味する。例えば、“疾患又は障害を
有しやすいと知られた又は疑われる”対象動物は、特定
の疾患又は障害の頻繁な発生を包含する個人及び／又は
家族病歴を有する可能性がある。他の例として、“疾患
又は障害を有しやすいと知られた又は疑われる”対象動
物は、当該技術分野において知られた方法による遺伝子
スクリーニング(genetic screening)によって判定され
た、このような罹患性(susceptibility)を有している可
能性がある（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ｏｆ
ｆｉｃｅｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｅｓｓｍ
ｅｎｔ，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ａｎ
ｄ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｏｒｋｐｌ
ａｃｅ，ＯＴＡ−ＢＡ−４５５，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｎｍ
ｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉ
ｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９９０，第５章，７５〜９９
頁参照）。“１種類以上のアンチセンス化合物によって
全体的に又は部分的に治療可能である疾患又は障害”と
は、本明細書で定義する限りでは、その（１）管理(man
agement)、モジュレーション又は治療、及び／又は
（２）それからの治療的、治癒的、緩和的及び／又は予
防的解放(relief)が本発明の１種類以上のアンチセンス
化合物を含む組成物の投与によって与えられうる疾患又
は障害を意味する。
【００６７】４．本発明の化合物を含む薬剤組成物：
本発明は、１種類以上のＰＥＣＡＭ−１モジュレーティ
ング・アンチセンス化合物を含む治療用薬剤組成物を提
供する。本発明のアンチセンス化合物を投与するための
組成物は、緩衝剤，希釈剤及び他の適当な添加剤をも含
有しうる無菌水溶液を包含することができる。
【００６８】Ａ.消化管投与用組成物 本発明の好ましい実施態様では、１種類以上のＰＥＣＡ
Ｍ−１モジュレーティング・アンチセンス化合物を消化
管投与(alimentary delivery)を介して、特に経口投与
によって投与する。経口投与用薬剤組成物は、粉末若し
くは顆粒、水中若しくは非水性媒質中の懸濁液若しくは
溶液、カプセル、サシェ、トローチ、錠剤又はＳＥＣｓ
（軟質弾性カプセル又は“カプレット(caplets)”）を
包含する。増粘剤、フレーバー剤、希釈剤、乳化剤、分
散助剤、キャリヤー物質又は結合剤をこのような組成物
に加えることができる。このような薬剤組成物は消化管
の粘膜に暴露させるためにアンチセンス化合物（単数又
は複数種類）を消化管に投与する効果を有する。したが
って、薬剤組成物は，特定の粘膜部位に対するオリゴヌ
クレオチドの投与を最適化するために、胃のｐＨ極値(p
H extremes)からオリゴヌクレオチドを保護すること
に、又はオリゴヌクレオチドを一定時間にわたって放出
することに有効な物質を含むことができる。耐酸性の錠
剤、カプセル及びカプレットのための腸溶性被膜(enter
ic coating)は当該技術分野において知られており、典
型的に、アセテート フタレート、プロピレングリコー
ル及びソルビタンモノオレエートを包含する。消化管投
与用の薬剤組成物の種々な製造方法が当該技術分野にお
いて周知である。一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１
８版，Ｇｅｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０におけ
るＮａｉｒｎ，第８３章；Ｂｌｏｃｋ，第８７章；Ｒｕ
ｄｎｉｃ等，第８９章；Ｐｏｒｔｅｒ，第９０章；及び
Ｌｏｎｇｅｒ等，第９１章を参照のこと。
【００６９】本発明のアンチセンス化合物は知られた方
法で、不活性な、無毒の、製薬的に受容されるキャリヤ
ー（賦形剤）を用いて、例えば錠剤，被覆錠剤、ピル，
顆粒、エーロゾル、シロップ、エマルジョン、懸濁液及
び溶液のような、慣例的な薬剤組成物中に混入すること
ができる。このときに、各場合に、治療的に活性な化合
物が混合物全体の約０．５〜約９５重量％の濃度で、即
ち、規定された投与量範囲に達するために充分な量で存
在すべきである。薬剤組成物は、例えば、活性化合物を
製薬的に受容されるキャリヤーによって、必要な場合に
は乳化剤及び／又は分散剤を用いて希釈することによっ
て調製され、例えば、希釈剤として水を用いる場合に
は、有機溶媒を必要に応じて補助溶媒として用いること
ができる。薬剤組成物を慣用的な方法で、付加的な製薬
的に受容されるキャリヤーを必要に応じて用いて製剤化
することができる。このように、組成物を慣用的な手段
によって、例えば結合剤（例えば、予めゼラチン化され
たトウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドン又はヒドロ
キシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラ
クトース、微細結晶セルロース又はリン酸水素カルシウ
ム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タ
ルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、澱粉又は澱粉グリ
コール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル
硫酸ナトリウム）のような付加的な賦形剤を用いて調製
することができる。錠剤は当該技術分野において周知の
方法によって被覆され、フレーバー剤、着色剤及び／又
は甘味剤をも含有することができる。
【００７０】１種類以上のＰＥＣＡＭ−１−モジュレー
ティング・アンチセンス化合物を含む組成物を直腸式に
よって投与することができる。特に、直腸投与用の治療
的又は薬剤的組成物はフォーム（foam)、溶液（浣腸
剤）及び座薬を包含する。成人用の直腸座薬は通常、１
端部又は両端部においてテーパー状(tapered)であり、
典型的に各約２ｇの重量であり、乳児用直腸座薬は、通
常の基剤、カカオ脂を用いる場合に典型的に約１／２程
度の重量である（Ｂｌｏｃｋ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，第
１８版，Ｇｅｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓ
ｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０にお
ける，第８７章）。
【００７１】単位投与量形で便利に提示されうる薬剤組
成物を、製薬業界で周知の慣用的方法に従って、調製す
ることができる。このような方法は有効成分（単数又は
複数種類）を製薬的に受容されるキャリヤー（単数又は
複数種類）と結合させる工程を包含する。一般に、有効
成分（単数又は複数種類）を液体賦形剤又は微粉状固体
賦形剤又は両方と均一にかつ密接に結合させ、次に必要
に応じて、生成物を造形することによって、薬剤組成物
は調製される。
【００７２】経口投与に適した，本発明の薬剤組成物は
それぞれ有効成分の予め定められた量を含有する、カプ
セル、カシェ剤若しくは錠剤のような個別単位として；
粉末若しくは顆粒として；水性液体若しくは非水性液体
中の溶液若しくは懸濁液として；又は水中油滴エマルジ
ョン若しくは油中水滴(water in oil liquid)エマルジ
ョンとして提示されうる。任意に１種類以上の補助成分
と共に圧縮又は成形することによって、錠剤を製造する
ことができる。圧縮錠剤は任意に結合剤、滑沢剤、不活
性な希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合し
た、例えば粉末又は顆粒のような、自由流動形の有効成
分を、適当な装置中で圧縮することによって製造するこ
とができる。すりこみ錠剤(molded tablet)は、不活性
な液体希釈剤によって湿った粉状化合物の混合物を適当
な装置中で成形することによって製造することができ
る。錠剤を任意に被覆するか又は錠剤に溝を付けること
ができ、錠剤をその中の有効成分を持続放出又は制御放
出するように製剤化することができる。経口投与される
投与形のための持続放出経口投与系及び／又は腸溶性被
膜は米国特許第４，７０４，２９５号；第４，５５６，
５５２号；第４，３０９，４０６号；及び第４，３０
９，４０４号に記載されている。
【００７３】Ｂ.添加剤： 本発明の１種類以上のアンチセンス化合物を含む製薬的
及び治療的組成物は、緩衝剤、希釈剤及び他の適当な添
加剤をも含有しうる無菌水溶液をさらに包含することが
できる。アンチセンス化合物と不利に反応しない、非経
口的でない(non-parenteral)投与に適した、製薬的に受
容される有機又は無機キャリヤー物質も使用可能であ
る。薬剤組成物は滅菌することができ、必要に応じて、
薬剤組成物に薬剤組成物のオリゴヌクレオチド（単数又
は複数種類）と不利に反応しない補助剤、例えば、滑沢
剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を
与えるための塩、緩衝剤、着色剤、フレーバー剤及び／
又は芳香性物質等を混合することができる。水性懸濁液
としての薬剤組成物は例えばナトリウムカルボキシメチ
ルセルロース、ソルビトール及び／又はデキストランを
含めた、懸濁液の粘度を高める物質を含有することがで
きる。任意に、このような組成物は１種類以上の安定
剤、透過促進剤、キャリヤー化合物(carrier compound)
又は製薬的に受容されるキャリヤーをも含有することが
できる。
【００７４】（１）透過促進剤： 本発明のオリゴヌク
レオチドを含む薬剤組成物は、オリゴヌクレオチドの消
化管投与を強化するために、透過促進剤を包含すること
もできる。透過促進剤は５つの広範囲な促進剤：即ち、
脂肪酸、胆汁塩(bile acid)、キレート化剤、界面活性
剤及び非界面活性剤のいずれかに属するとして分類する
ことができる（Ｌｅｅ等，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉ
ｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃ
ａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，８，９１〜
１９２；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅ
ｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ
Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０，７：
１）。
【００７５】脂肪酸： 透過促進剤として作用する種々
な脂肪酸及びそれらの誘導体は、例えば、オレイン酸、
ラウリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン
酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレ
ート、トリカプレート、レシンレエート(recinleate)、
モノオレイン（１−モノオレオイル−ｒａｃ−グリセロ
ールとしても知られる）、ジラウリン、カプリル酸、ア
ラキドン酸(arichidonicacid)、グリセリル １−モノ
カプレート、アシルカルニチン、アシルコリン、１−ド
デシルアザシクロヘプタン−２−オン、モノ−及びジ−
グリセリド、及びこれらの生理的に受容される塩（即
ち、オレエート、ラウレート、カプレート、ミリステー
ト、パルミテート、ステアレート、リノレエート等）を
包含する（Ｌｅｅ等，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ ｉｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇ Ｃａｒｒ
ｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９２頁；Ｍｕｒａ
ｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ
ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０，７：１；Ｅｌ−Ｈａｒｉｒ
ｉ等，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９
２，４４：６５１）。
【００７６】胆汁塩(bile salts)： 胆汁の生理的役割
りは脂質及び脂溶性ビタミンの分散及び吸収の促進を包
含する（Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌ
ｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９
版，Ｈａｒｄｍａｎ等編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９６，第３８章，９３４
〜９３５頁）。種々な天然胆汁塩及びそれらの合成誘導
体は透過促進剤として作用する。したがって、“胆汁
塩”は胆汁の天然生成構成成分のいずれか及びそれらの
合成誘導体のいずれかを包含する。
【００７７】キレート化剤： キレート化剤はＤＮアー
ゼ阻害剤としても役立つという付加的利益を有し、キレ
ート化剤は非限定的にクエン酸、エチレンジアミン四酢
酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、サリチレート（例えば、
サリチル酸ナトリウム、５−メトキシサリチレート及び
ホモバニレート(homovanilate)）、コラーゲンのＮ−ア
シル誘導体、ラウレス−９(laureth-9)、及びβ−ジケ
トン（エナミン）のＮ−アミノアシル誘導体（エナミ
ン）を包含する（Ｌｅｅ等，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ
Ｔｈｅｒａｐ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅ
ｍｓ，１９９１，９２頁；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉ
ｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ Ｔｈｅｒａｐ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒ
ｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０，７，１；Ｂｕｕｒ
等，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．，１９９０，１４，
４３）。
【００７８】界面活性剤： 界面活性剤は例えばラウリ
ル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン−９−ラウリル
エーテル及びポリオキシエチレン−２０−セチルエーテ
ル（Ｌｅｅ等，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．ｉｎ Ｔｈｅｒａ
ｐ．Ｄｒｕｇ ＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔｅｍｓ，１９９
１，９２頁）；及び例えばＦＣ−４３のようなペルフル
オロケミカル・エマルジョン(perfluorochemical emuls
ion)を包含する（Ｔａｋａｈａｓｈｉ等，Ｊ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９８８，４０：２５
２）。
【００７９】非界面活性剤： 非界面活性剤は例えば不
飽和環状尿素、１−アルキル−及び１−アルケニルアザ
シクロ−アルカノン誘導体（Ｌｅｅ等，Ｃｒｉｔｉｃａ
ｌＲｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄ
ｒｕｇ ＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９
２頁）と；例えばジクロフェナクナトリウム、インドメ
タシン及びフェニルブタゾンのような非ステロイド系抗
炎症剤（Ｙａｍａｓｈｉｔａ等，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．，１９８７，３９：６２１）とを包含
する。
【００８０】（２）キャリヤー化合物： 本明細書で用
いる限り、“キャリヤー化合物”は核酸、又は不活性で
ある（即ち、生物学的活性自体を有さない）が、例えば
生物学的に活性な核酸を分解することによって又は循環
からのその除去を促進することによって、生物学的活性
を有する核酸のバイオアベイラビリティを減ずるｉｎｖ
ｉｖｏプロセスによって核酸として認識される、核酸の
類似体を意味する。核酸とキャリヤー化合物とを、典型
的に後者の物質を過剰にして、同時投与すると、恐らく
共通の受容体に対する核酸とキャリヤー化合物との競合
のために、肝臓、腎臓又は他の循環外溜め(extracircul
atory reservoir)中に回収される核酸量の実質的な減少
が生じうる。例えば、肝臓組織における部分的ホスホロ
チオエート化オリゴヌクレオチドの回収は、これがポリ
イノシン酸、硫酸デキストラン、ポリシチジン酸(polyc
ytidic acid)又は４−アセトアミド−４’−イソチオシ
アノ−スチルベン−２，２’−ジスルホン酸と同時投与
されるときには、減少する（Ｍｉｙａｏ等，Ａｎｔｉｓ
ｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，１９９５，５：１１５；
Ｔａｋａｋｕｒａ等，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＆ Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄ ＤｒｕｇＤｅｖ．，１９９６，６：１７
７）。
【００８１】（３）製薬的に受容されるキャリヤー：
キャリヤー化合物とは対照的に、“製薬的に受容される
キャリヤー”（賦形剤）は１種類以上の核酸を動物に投
与するための製薬的に受容される溶媒、懸濁化剤又は任
意の他の薬理学的に不活性なビヒクルである。製薬的に
受容されるキャリヤーは液体でも固体でもよく、特定の
薬剤組成物の核酸及び他の構成成分と組み合わされたと
きに、所望の嵩(bulk)、コンシステンシー等を生じるこ
とを念頭において計画された投与方法によって選択され
る。典型的な、製薬的に受容されるキャリヤーは非限定
的に結合剤（例えば、予めゼラチン化されたトウモロコ
シ澱粉、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピル
メチルセルロース等）；充填剤（例えば、ラクトースと
他の糖、微細結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫
酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート又
はリン酸水素カルシウム等）；滑沢剤（例えば、ステア
リン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸
化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、水素化
植物油、コーンスターチ、ポリエチレングリコール、安
息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等）；崩壊剤（例え
ば、澱粉、澱粉グリコール酸ナトリウム等）；又は湿潤
剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム等）を包含する。
適当な、製薬的に受容されるキャリヤーは非限定的に
水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼ
ラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネ
シウム、タルク、ケイ酸、ヒドロキシメチルセルロー
ス、ポリビニルピロリドン、粘性パラフィン等を包含す
る。
【００８２】（４）種々な付加的構成成分： 本発明の
組成物は、薬剤組成物中に慣用的に見出される他の補助
構成成分をそれらの技術上確立された使用レベル(art-e
stablished usage levels)で付加的に含有することがで
きる。したがって、例えば、この組成物は例えば抗掻痒
症薬、収斂薬、局部麻酔薬又は抗炎症薬のような、付加
的な相容性の、製薬的に活性な物質を含有することがで
きる、又は例えば染料、フレーバー剤、防腐剤、酸化防
止剤、不透明剤(opacifier)、増粘剤及び安定剤のよう
な、本発明の組成物の種々な投与形を物理的に製剤化す
るために有用な付加的物質を含有することができる。し
かし、このような物質は、加えたときに、本発明の組成
物の構成成分の生物学的活性を不当に妨げるべきではな
い。
【００８３】Ｃ．コロイド状分散系： 本発明のアンチ
センス化合物を患者に導入する方法に関係なく、コロイ
ド状分散系を投与ビヒクル(delivery vehicle)として用
いて、化合物のｉｎ ｖｉｖｏ安定性を強化する、及び
／又は化合物に特定の器官、組織若しくは細胞種類をタ
ーゲットとさせることができる。コロイド状分散系は非
限定的に高分子錯体、ナノカプセル、微小球(microsphe
re)、ビーズ、並びに水中油滴エマルジョン、ミセル、
混合ミセル、脂質：特徴付けられていない構造のオリゴ
ヌクレオチド錯体及びリポソームを含めた、脂質に基づ
く系を包含する。
【００８４】好ましいコロイド状分散系は大多数のリポ
ソームである。リポソームは二重層形態で配置された脂
質から構成された１つ以上の外層（単数又は複数）によ
って囲まれた水性コアを有する微視的球体である（一般
的に、Ｃｈｏｎｎ等，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐ．Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ．，１９９５，６，６９８参照）。薬物投与剤(d
rug delivery agent)としてのリポソームの治療的可能
性はほぼ３０年前に認められた（Ｓｅｓｓａ等，Ｊ．Ｌ
ｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，１９６８，９，３１０）。リポソ
ームは場合によっては、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖ
ｉｖｏにおいてバイオアクティブ作用剤(bioactive age
nt)の細胞投与ビヒクル(cellular delivery vehicle)と
して使用可能である（Ｍａｎｎｉｎｏ等，Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，１９８８、６，６８２；Ｂｌｕｍｅ
等，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ
ａ，１９９０，１０２９，９１；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅ
ｎ等，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．，１９９４，２
３，１１９）。例えば、０．２〜０．４ミクロンのサイ
ズ範囲である、大きい単層小胞（ＬＵＶ）が大きい高分
子を含有する水性緩衝剤の実質的な割合を封入すること
ができることが判明している。ＲＮＡ、ＤＮＡ及び完全
なビリオンが水性内部に封入されて、生物学的に活性な
形態で脳細胞に放出されることができる（Ｆｒａｌｅｙ
等，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１９８
１，６，７７）。
【００８５】リポソームを含めたコロイド状分散系のタ
ーゲッティングは受動的又は能動的のいずれも可能であ
る。受動的ターゲッティングは、洞様毛細血管を含有す
る器官の細網内皮系の細胞に分配されるリポソームの自
然の傾向を利用する。これとは対照的に、能動的ターゲ
ッティングはリポソームに特異的リガント、例えばウイ
ルスタンパク質被膜(viral protein coat)（Ｍｏｒｉｓ
ｈｉｔａ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
（Ｕ．Ｓ．Ａ．），１９９３，９０，８４７４）、モノ
クローナル抗体（若しくはその適当な結合部分）、糖、
糖脂質又はタンパク質（若しくはその適当なオリゴペプ
チド・フラグメント）をカップリングさせることによ
る、又は天然生成局在化部位(naturally occuring site
s of localization)以外の器官及び細胞種類への分配を
達成するためにリポソームの組成及び／又はサイズを変
えることによるリポソームの修飾を包含する。ターゲッ
ト化コロイド状分散系の表面を多様な方法で修飾するこ
とができる。リポソーム・ターゲット投与系(liposomal
targeted delivery system)の場合には、ターゲッティ
ング・リガンドを脂質二重層に密接に結合させて維持す
るために脂質基(lipidgroups)をリポソームの脂質二重
層中に組み入れることができる。脂質鎖をターゲッティ
ング・リガンドに結合させるために種々な結合基を用い
ることができる。本発明の化合物の投与が望まれる細胞
上に主として見出される特異的細胞表面分子を結合する
ターゲッティング・リガンドは、例えば、（１）投与が
望まれる細胞によって主として発現される特異的細胞受
容体によって結合される、ホルモン、成長因子若しくは
その適当なオリゴペプチド・フラグメント、又は（２）
ターゲット細胞上に主として見出される抗原エピトープ
を特異的に結合するポリクローナル若しくはモノクロー
ナル若しくはその適当なフラグメント（例えば、Ｆａ
ｂ；Ｆ（ａｂ’）2）でありうる。２つ以上のバイオア
クティブ作用剤（例えば、アンチセンス・オリゴヌクレ
オチドと慣用的薬物；２つのオリゴヌクレオチド）を単
一リポソーム内で結合させて、単一リポソームによって
投与することができる。コロイド状分散系に細胞間安定
性及び／又はその中身(contents)のターゲッティングを
強化する作用剤を加えることも可能である。
【００８６】本発明のリポソームは、一般に１種類以上
の中性若しくは負に荷電したリン脂質、好ましくは１種
類以上の中性リン脂質を通常は１種類以上のステロー
ル、特にコレステロールと組み合わせて包含する小胞形
成脂質から形成される。リポソーム形成に有用な脂質の
例はホスファチジル化合物、例えばホスファチジルグリ
セロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリ
ン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルエタノールアミ
ン、セレブロシド及びガングリオシドを包含する。典型
的に、リポソームの主要な脂質構成成分はホスファチジ
ルコリン（ＰＣ）又はＰＣ誘導体である。鎖長及び飽和
度の異なる多様なアシル鎖基を有するＰＣ誘導体は商業
的に入手可能であるか、又は既知方法によって合成する
ことができる。フィルター殺菌のために、低飽和(less-
saturated)ＰＣｓは、特にリポソームが約０．３ミクロ
ン未満の大きさでなければならないときに、一般により
容易にサイズが定められる。Ｃ14〜Ｃ22、特にＣ16〜Ｃ
18の範囲内の炭素鎖長を有する飽和脂肪酸を含有するＰ
Ｃｓ、特にジアシルホスファチジルグリセロールが好ま
しい。具体的なリン脂質は例えばジパルミトイルホスフ
ァチジルコリン、ホスファチジルコリン及びジステアロ
イルホスファチジルコリンを包含する。一不飽和脂肪酸
と二不飽和脂肪酸とを有するホスファチジルコリン及び
飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸との混合物を有するホスファ
チジルコリンも使用可能である。他の適当なリン脂質
は、例えばエタノールアミン、セリン、グリセロール及
びイノシトールのような、コリン以外のヘッド基(head
group)を有するものを包含する。他の適当な脂質は、脂
肪酸がエステル結合ではなくエーテル結合によってグリ
セロールに結合しているホスホノ脂質を包含する。好ま
しいリポソームは約０．１から１．０までのモル比率
（ステロール：リン脂質）でステロール、例えばコレス
テロールを包含する。
【００８７】典型的に、本発明のリポソームはそれらの
水性内部に約０．００５ｎｇ／ｍｌ〜約４００ｍｇ／ｍ
ｌ、好ましくは約０．０１ｎｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／
ｍｌ、最も好ましくは約０．１ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｍ
ｇ／ｍｌの量で１種類以上のアンチセンス・オリゴヌク
レオチドを含有する、この場合“約”は所望の濃度の±
５％を意味する。
【００８８】本発明の組成物は、立体的に安定化した(s
terically stabilized)リポソーム内に閉じ込められ
た、１つ以上のアンチセンス化合物及び／又は他の治療
剤を包含することができる。本明細書で用いる限り、
“立体的に安定化したリポソーム”なる用語は、１つ以
上の特殊化脂質(specialized lipid)を含むリポソーム
を意味し、このような脂質はリポソーム中に組み入れら
れたときに、このような特殊化脂質を有さないリポソー
ムに比べて、循環寿命の増強を生じる。立体的安定化リ
ポソームの例は、リポソームの小胞形成脂質部分の一部
が（Ａ）例えばモノシアロガングリオシド ＧM1のよう
な１つ以上の糖脂質を含む、又は（Ｂ）例えばポリエチ
レングリコール（ＰＥＧ）部分のような１種類以上の親
水性ポリマーによって誘導体化されるようなリポソーム
である。如何なる特定の理論によっても縛られることを
望む訳ではないが、少なくとも、ガングリオシド、スフ
ィンゴミエリン又はＰＥＧ誘導体化脂質を含有する立体
的安定化リポソームに関して、これらの立体的安定化リ
ポソームの増強された循環半減期は細網内皮系の細胞中
への吸収減少に由来すると、当該技術分野では考えられ
る（Ａｌｌｅｎ等，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｓ．，１９８
７，２２３，４２；Ｗｕ等，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，
１９９３，５３，３７６５）。
【００８９】１つ以上の糖脂質を含む種々なリポソーム
が当該技術分野において知られている。Ｐａｐａｈａｄ
ｊｏｐｏｕｌｏｓ等（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．，１９８７，５０７，６４）は、モノシアロガング
リオシド ＧMl、ガラクトセレブロシド硫酸及びホスフ
ァチジルイノシトールがリポソームの血液半減期を改良
する能力を報告した。これらの研究結果はＧａｂｉｚｏ
ｎ等によって詳細に説明されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８８，８
５，６９４９）。両方ともＡｌｌｅｎ等への米国特許第
４，８３７，０２８号とＷＯ８８／０４９２４は（１）
スフィンゴミエリンと（２）ガングリオシド ＧM1又は
ガラクトセレブロシド硫酸エステルとを含むリポソーム
を開示している。米国特許第５，５４３，１５２号（Ｗ
ｅｂｂ等）はスフィンゴミエリンを含むリポソームを開
示している。１，２−ｓｎ−ジミリストイルホスファチ
ジルコリンを含むリポソームは、ＷＯ９７／１３４９９
（Ｌｉｍ等）に開示されている。
【００９０】１つ以上の親水性ポリマーによって誘導体
化された脂質を含む多くのリポソームとその製造方法と
は、当該技術分野において知られている。Ｓｕｎａｍｏ
ｔｏ等（Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９
８０，５３，２７７８）は、ＰＥＧ部分を含有する非イ
オン界面活性剤(detergent)、２Ｃ12１５Ｇを含むリポ
ソームを開示している。Ｉｌｌｕｍ等（ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ，１９８４，１６７，７９）は、ポリマーグ
リコールによるポリスチレン粒子の親水性被覆が血液半
減期の有意な増強を生じることに注目した。ポリアルキ
レングリコール（例えば、ＰＥＧ）のカルボキシル基の
付着によって修飾された合成リン脂質はＳｅａｒｓ（米
国特許第４，４２６，３３０号と第４，５３４，８９９
号）によって述べられている。Ｋｌｉｂａｎｏｖ等（Ｆ
ＥＢＳ Ｌｅｔｔｓ．，１９９０，２６８，２３５）
は、ＰＥＧ又はＰＥＧステアレートによって誘導体化さ
れた(derivatized)ホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥ）を含むリポソームが血液循環中で半減期を高め
ることを実証する実験を述べた。Ｂｌｕｍｅ等（Ｂｉｏ
ｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔ
ａ，１９９０，１０２９，９１）はこのような観察を他
のＰＥＧ誘導体化リン脂質、即ち、ジステアロイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）とＰＥＧとの
組み合わせから形成されたＤＳＰＥ−ＰＥＧにまで拡大
した。それらの外部表面に共有結合したＰＥＧ部分を有
するリポソームはヨーロッパ特許第０，４４５，１３１
Ｂ１号とＷＯ９０／０４３８４（Ｆｉｓｈｅｒ）とに記
載されている。ＰＥＧ誘導体化ＰＥ１〜２０モル％を含
有するリポソーム組成物と、それらの使用方法とはＷｏ
ｏｄｌｅ等（米国特許第５，０１３，５５６号と第５，
３５６，６３３号）とＭａｒｔｉｎ等（米国特許第５，
２１３，８０４号とヨーロッパ特許第０，４９６，８１
３Ｂ１号）とによって述べられている。多くの他の脂質
−ポリマー・コンジュゲートを含むリポソームはＷＯ９
１／０５５４５及び米国特許第５，２２５，２１２号
（両方ともＭａｒｔｉｎ等）と、ＷＯ９４／２００７３
（Ｚａｌｉｐｓｋｙ等）とに開示されている。ＰＥＧ修
飾セラミド脂質を含むリポソームはＷＯ９６／１０３９
１（Ｃｈｏｉ等）に記載されている。米国特許第５，５
４０，９３５号（Ｍｉｙａｚａｋｉ等）と第５，５５
６，９４８号（Ｔａｇａｗａ等）とは、官能表面部分(f
unctional surface moieties)によってさらに誘導体化
されうるＰＥＧ含有リポソームを記載している。
【００９１】核酸を含む、限定された数のリポソームが
当該技術分野において知られている。Ｔｈｉｅｒｒｙ等
への公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ９６／４００６２号
は、リポソーム中に高分子量核酸を封入する方法を開示
している。Ｔａｇａｗａ等への米国特許第５，２６４，
２２１号はタンパク質結合リポソームを開示し、このよ
うなリポソームの中身がアンチセンスＲＮＡを包含する
ことを主張している。Ｒａｈｍａｎ等への米国特許第
５，６６５，７１０号は、リポソーム中にオリゴデオキ
シヌクレオチドを封入するある一定の方法を記載してい
る。Ｌｏｖｅ等へのＷＯ９７／０４７８７は、ｒａｆ遺
伝子をターゲットとするアンチセンス・オリゴヌクレオ
チドを含むリポソームを開示している。Ｋｌｉｍｕｋ等
へのＷＯ９７／４６６７１は、ＩＣＡＭ−１をコードす
る遺伝子をターゲットとするアンチセンス・オリゴヌク
レオチドを含むリポソームを開示している。本発明の１
種類以上のアンチセンス化合物を、Ｂａｌｌｙ等への米
国特許第５，７０５，３８５号及びＷｈｅｅｌｅｒ等へ
のＷＯ９６／４０９６４に開示されているように１種類
以上のカチオン脂質を含む［脂質：（アンチセンス化合
物）］錯体に、又はＫｉｍ等へのＷＯ９８／００５５６
に記載されているようなリポタンパク質含有錯体にホー
ミュレートすることができる。
【００９２】本発明のリポソームは多様な既知方法のい
ずれかによって製造することができる。例えば、多層(m
ultilamellar)脂質小胞（ＭＬＶｓ）を製造するための
任意の慣用的方法によって、即ち、脂質をクロロホルム
中に溶解することによって適当な容器(vessel)の内壁に
１つ以上の選択された脂質を付着させ、クロロホルムを
蒸発させ、次に、この容器に、封入されるべき作用剤
（単数又は複数種類）を含む水溶液を加え、該水溶液に
脂質を水和させ、得られた脂質懸濁液を旋回させ、渦流
発生させることによってリポソームを形成することがで
きる。このプロセスは所望のリポソームを包含する混合
物を生じる。
【００９３】他の例として、大きい単層(unilamellar)
小胞（ＬＵＶｓ）の製造に用いられる方法、例えば、逆
相蒸発、注入方法及び界面活性剤希釈を用いて、リポソ
ームを製造することができる。脂質小胞を製造するため
のこれらの及び他の方法はＬｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，Ｉ巻（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ編集，Ｃ
ＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９
８４）に記載されている。リポソームは米国特許第４，
５８８，５７８号及び第４，６１０，８６８号（両方と
もＦｏｕｎｔａｉｎ等）、第４，５２２，８０３号（Ｌ
ｅｎｋ等）及び第５，００８，０５０号（Ｃｕｌｌｉｓ
等）に開示されている種類の、ステロイダル脂質小胞、
安定な多層小胞(plurilamellar vesicles)（ＳＰＬＶ
ｓ）、単相小胞（ＭＰＶｓ）又は脂質マトリックス・キ
ャリヤー（ＬＭＣｓ）の形態であることができる。ＭＬ
Ｖｓの場合には、リポソームに多数回（５回以上）の凍
結−解凍サイクルを行って、それらの閉じ込め容量(tra
pped volume)と閉じ込め効率(trapping efficiency)と
を強化して、必要に応じて溶質のより均一な層間分布を
生じることができる（Ｍａｙｅｒ等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．，１９８５，２６０，８０２）。特定のオリゴ
デオキシヌクレオチド：リポソーム組成物の特異的な製
造方法はＲａｈｍａｎ等への米国特許第５，６６５，７
１０号に記載されている。
【００９４】リポソームの製造後に、リポソームのサイ
ズを定めて、所望のサイズ範囲と、サイズを定めた粒子
の比較的狭い分布とを達することができる。好ましい実
施態様では、リポソームは約５０〜約７５ｎＭ、最も好
ましくは約６０ｎＭの直径の下限範囲(lower range)
と、約７５〜約１５０ｎＭ、最も好ましくは約１２５ｎ
Ｍの直径の上限範囲(upper range)とを有し、この場合
“約”は±１０ｎＭを意味する。
【００９５】リポソームを所望のサイズ範囲にサイズを
定めるためには幾つかの方法が利用可能である。浴(bat
h)又はプローブのいずれかの音波処理によってリポソー
ム懸濁液を音波処理すると、サイズが約０．０５ミクロ
ン未満の小さい単層小胞（ＳＵＶｓ）への漸進的なサイ
ズ縮小が生じる。剪断エネルギーに基づいて、大きいリ
ポソームを小さいリポソームに細分化するホモジナイゼ
ーションは、典型的に約０．１〜約０．５ミクロンの選
択されたリポソーム・サイズ範囲が得られるまで、ＭＬ
Ｖｓを標準エマルジョン・ホモジナイザーに通して再循
環させる、別の既知サイジング方法(sizing technique)
である。フィルター又は膜に通してリポソームを押し出
すことは、所望のサイズ範囲を有するリポソームを得る
ための別の方法である（例えば、Ｍａｒｔｉｎ等への米
国特許第４，７３７，３２３号と、Ｃｕｌｌｉｓ等への
第５，００８，０５０号参照）。他の有用なサイジング
方法も当業者に知られている。大抵のこのような方法で
は、慣用的なレーザー−ビーム・サイズ測定によって又
は当該技術分野に知られた他の手段によって、粒度分布
をモニターすることができる。
【００９６】長期にわたる貯蔵のために、標準凍結乾燥
装置を用いて、リポソームを好ましくは減圧下で脱水す
ることができる。脱水されていようとなかろうと、リポ
ソームとそれらの周囲媒質とを最初に液体窒素中で凍結
させて、減圧下に置くことができる。後者の凍結工程を
加えることは総合的な脱水プロセスをより長時間にする
が、脱水前にリポソームを凍結すると、脂質小胞への損
傷が少なく、小胞の内部中身の損失が少ない。
【００９７】リポソームのかなりの部分が脱水プロセス
に無傷で耐えることを保証するために、１種類以上の保
護糖を利用して、脂質小胞膜と相互作用させて、水を除
去するときにこれらの膜を無傷に維持することができ
る。適当な糖は非限定的にトレハロース、マルトース、
スクロース、ラクトース、グルコース、デキストラン等
を包含する。一般に、二糖(disaccharide sugar)は単糖
(monosaccharide sugar)よりも良好に作用することがで
き、トレハロースとスクロースとが大抵の場合に特に有
効であるが、他のより複雑な糖も代替的に用いることが
できる。糖の使用量は糖の種類と、脂質小胞の特性とに
依存する。当業者は種々な糖と濃度とを容易に試験し
て、どのような条件が特定の脂質小胞の製造に最も良く
機能するかを決定することができる（一般的に、Ｈａｒ
ｒｉｇａｎ等，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１
９９０，５２，１３９と、Ｊａｎｏｆｆ等への米国特許
第４，８８０，６３５号参照）。一般に、約１００ｍＭ
以上の糖濃度が所望の保護度を生じることが発見されて
いる。リポソームが脱水されたならば、これらのリポソ
ームを使用すべきときまで、これらのリポソームを長期
間保存することができる。貯蔵のための適当な条件は脂
質小胞の化学組成と、それらの封入活性剤（単数又は複
数種類）とに依存する。例えば、熱に不安定な作用剤を
含むリポソームは、活性剤の効力が失われないような冷
凍条件下で、保存すべきである。
【００９８】２種類以上のバイオアクティブ作用剤（例
えば、オリゴヌクレオチドと慣用的な薬物、又は２種類
以上のオリゴヌクレオチド；後記参照）を単一リポソー
ム内で組み合わせて、単一リポソームによって投与する
ことができる。コロイド状分散系に、細胞間安定性及び
／又はそれらの中身のターゲッティングとを強化する作
用剤を加えることも可能である。
【００９９】５．本発明の化合物の投与方法： 本発明
のアンチセンス化合物を含む治療的又は薬剤的組成物の
投与は当業者の熟練の範囲内であると考えられる。一般
に、治療又は予防を必要とする患者に、通常製薬的に受
容されるキャリヤー中に本発明による１種類以上のアン
チセンス化合物を含む組成物を、患者の年齢及び治療す
べき障害又は疾患状態の重症度に依存して、０．０１μ
ｇ〜１００ｇ／体重ｋｇの範囲の投与量で投与する。投
薬は治療すべき疾患状態の重症度と反応とに依存し、治
療過程は数日間から数か月間まで、又は治癒が生じるま
で若しくは疾患状態の軽減若しくは予防が達成されるま
で持続する。最適の投薬スケジュールは患者の体内の薬
物蓄積の測定から算出されうる。通常の熟練した人々は
最適投与量、投与方法及び反復率を容易に決定すること
ができる。最適投与量は個々のアンチセンス化合物の相
対的効力に依存して、変化することができ、ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルにおいて有効であ
ると判明したＥＣ50に基づいて一般に算出されうる。
【０１００】Ａ．治療計画： 本発明に関連して、“治
療計画”なる用語は、本発明の１種類以上のアンチセン
ス化合物を含む１種類以上の組成物の投与の治療、緩和
及び予防形式を包含する意味である。特定の治療計画は
特定の疾患又は障害の性質、その重症度及び患者の総合
的状態に依存して変化する時間継続することができ、１
日１回から２０年間毎に１回まで及ぶことができる。治
療後に、患者を患者の状態の変化に関して及び障害若し
くは疾患状態の症状の軽減に関してモニターする。オリ
ゴヌクレオチドの投与量は、患者が現在の投与量に有意
に反応しない場合には、高めることができ、障害若しく
は疾患状態の症状の軽減が観察される場合には、又は障
害若しくは疾患状態が除去されている場合には、投与量
を減ずることができる。
【０１０１】最適投与スケジュールを用いて、特定の投
与形式によって投与される治療有効量のオリゴヌクレオ
チドを与える。本発明のために“治療有効量”なる用語
は、望ましくない副作用（例えば、中毒、過敏反応又は
アレルギー反応）なしに予定の目的を達成するために有
効であるオリゴヌクレオチド含有薬剤組成物の量を意味
する。個人的な必要性は変化しうるが、薬剤組成物の有
効量の最適範囲の決定は当該技術分野の熟練の範囲内で
ある。ヒト投与量は動物試験から推定することができる
（Ｋａｔｏｃｓ等，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，
Ｇｅｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，第２７
章）。一般に、当業者によって調節されうる、薬剤組成
物の有効量を与えるために必要な投与量は、レシピエン
トの年齢、健康、身体的状態、体重、疾患又は障害の種
類及び程度、治療頻度、同時療法（在るならば）の性
質、並びに所望の効果（単数又は複数種類）の性質及び
範囲に依存して変化する（Ｎｉｅｓ等，Ｇｏｏｄｍａｎ
＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｓ，第９版，Ｈａｒｄｍａｎ等編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈ
ｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９６，第３
章）。
【０１０２】成功した治療後に、疾患状態の再発を防止
するために、核酸を１日１回以上から２０年間毎に１回
までの０．０１μｇ〜１００ｇ／体重ｋｇの範囲の維持
投与量で投与する維持療法を患者に受けさせることが望
ましいと考えられる。例えば、自己免疫又は炎症状態に
罹患しやすいと分かっている又は疑われる個人の場合に
は、１日１回以上から２０年間毎に１回までの０．０１
μｇ〜１００ｇ／体重ｋｇの範囲の予防的投与量の投与
によって、予防効果が達成されうる。同様なやり方で、
何らかの医学的処置の結果として生じると予想される炎
症性状態、例えば個人への細胞、組織又は器官の移植に
起因する対宿主移植片病に、個人を罹患し難くすること
ができる。
【０１０３】本発明の他の方法では、いずれかのオリゴ
ヌクレオチドを個別に用いた場合に達成されうるよりも
徹底した程度にＰＥＣＡＭ−１タンパク質をモジュレー
トするために、第１ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をターゲ
ットとする第１アンチセンス・オリゴヌクレオチドを、
第２ＰＥＣＡＭ−１タンパク質をターゲットとする第２
アンチセンス・オリゴヌクレオチドと組み合わせて用い
る。本発明の種々な実施態様では、このようなオリゴヌ
クレオチドによってターゲットとされる第１及び第２Ｐ
ＥＣＡＭ−１タンパク質は同じＰＥＣＡＭ−１タンパク
質であるか、又は異なるＰＥＣＡＭ−１タンパク質であ
るか、又は同じＰＥＣＡＭ−１タンパク質の異なるアイ
ソフォームである。
【０１０４】場合によっては、治療計画の効力を高める
ために、他の伝統的な治療形式と組み合わせて、本発明
の１種類以上のアンチセンス化合物を含む組成物によっ
て患者を治療することがより効果的でありうる。本発明
に関連して、“治療計画”なる用語は、治療、緩和及び
予防形式を包含する意味である。治療後に、患者の状態
の変化に関して、及び障害又は疾患状態の症状の軽減に
関して患者をモニターする。治療的又は薬剤的組成物の
投与量を、患者が現在の投与量レベルに有意に反応しな
い場合には高めることができる、又は障害若しくは疾患
状態の症状の軽減が観察される場合、若しくは障害若し
くは疾患状態が除去されている場合には投与量を減ずる
ことができる。
【０１０５】危険性の高い個人の予防形式も本発明によ
って包含される。本明細書で用いる限り、“危険性の高
い個人”とは、疾患又は障害の兆候又は再発を起こしや
すい標準よりも有意に高い確率が存在することが、例え
ば個人歴又は家族歴又は遺伝的試験から判明している個
人を表す意味である。危険性の高い個人のための治療計
画の一部として、疾患又は障害の兆候又は再発を予防す
るためにこの個人を予防的に治療することができる。
“予防的有効量”なる用語は、疾患又は障害の兆候又は
再発の予防として観察される効果を生じる薬剤組成物の
量を表す意味である。薬剤組成物の予防的有効量とは、
それらが有する効果を、活性剤を有さない第２薬剤組成
物を同様な状態の個人に投与する場合に観察される効果
に比較することによって典型的に判定される。
【０１０６】本発明の治療的及び薬剤的組成物は局部治
療又は全身治療のどちらが望ましいかに依存して、及び
治療すべき範囲（area)に依存して多くの方法で投与さ
れることができる。典型的に、経口投与又は非経口投与
のいずれも用いられる。
【０１０７】Ｂ．非経口投与： “非経口投与”なる用
語は本発明の１種類以上のアンチセンス化合物を消化管
に通して以外の方法で動物に投与することを意味する。
非経口投与は、静脈内（ｉ．ｖ．）点滴、皮下、腹腔内
（ｉ．ｐ．）若しくは筋肉内注入、又は鞘内(intrathec
al)若しくは脳室内(intraventricular)投与を包含す
る。非経口、鞘内又は脳室内投与のための組成物は、緩
衝剤、希釈剤及び他の適当な添加剤をも含有しうる無菌
水溶液を包含しうる。非経口薬剤組成物を製造し、投与
する手段は当該技術分野において知られている（例え
ば、Ａｖｉｓ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｇｅ
ｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃ
ｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，第８４章，１５
４５〜１５６９頁参照）。非経口的投与手段は、非限定
的に、下記具体例を包含する。
【０１０８】哺乳動物の眼の硝子体液に薬物を直接投与
するための硝子体内注射は米国特許第５，５９１，７２
０号に記載されており、この特許の内容は本明細書に援
用される。眼科製剤の製造手段及び投与手段は当該技術
分野において知られている（例えば、Ｍｕｌｌｉｎｓ
等，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｇｅｎｎａｒｏ
編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａ
ｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，第８６章，１５８１〜１５
９５頁参照）。
【０１０９】種々な非ヒト哺乳動物へのアンチセンス・
オリゴヌクレオチドの静脈内投与はＩｖｅｒｓｅｎによ
って記載されている（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏ
ｋｅ等編集，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏ
ｎ，ＦＬ，１９９３，第２６章，４６１〜４６９頁）。
非ヒト哺乳動物へのオリゴヌクレオチドの腹腔内手段に
よる全身投与も記載されている（Ｄｅａｎ等，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９
９４，９１，１１７６６）。
【０１１０】管状器官又は組織（例えば、動脈、静脈、
尿管又は尿道）の単離部分に薬物を直接投与するための
管内薬物投与も、このような器官又は組織の管腔を苦し
める疾患又は状態を有する患者の治療のために望ましい
と考えられる。この形式のオリゴヌクレオチド投与を行
うために、カテーテル又はカニューレが適当な手段によ
って手術的に導入される。例えば、左総頚動脈の治療の
ためには、外頚動脈から左総頚動脈中に、カニューレが
挿入される。治療が要求される管状器官又は組織の一部
を単離した後に、本発明のアンチセンス化合物を含む組
成物をカニューレ又はカテーテルを介して単離セグメン
ト中に注入する。約１〜約１２０分間インキュベート
し、この間にオリゴヌクレオチドが該器官(vessel)の内
腔の細胞によって吸収された後に、注入カニューレ又は
カテーテルを除去し、管状器官のセグメントの単離を生
じていたリガチャー(ligature)の除去によって、管状器
官又は組織内の流動を回復させる（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ
等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．，１９９３，９０，８４７４）。アンチセンス・オ
リゴヌクレオチドを例えばヒドロゲル物質のような生体
適合性マトリックスと組み合わせて、ｉｎ ｖｉｖｏの
脈管組織に直接施用することもできる（Ｒｏｓｅｎｂｅ
ｒｇ等，米国特許第５，５９３，９７４号，１９９７年
１月１４日発行）。
【０１１１】患者の脳に薬物を直接投与するための脳室
内薬物投与は、脳を苦しめる疾患又は状態を有する患者
の治療のために望ましいと考えられる。この形式のオリ
ゴヌクレオチド投与を行うために、シリコン・カテーテ
ルを手術によってヒト患者の脳室中に導入し、腹部領域
に手術によって予め移植されている皮下注入ポンプ（Ｍ
ｅｄｔｒｏｎｉｃ Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｅａｐｏｌｉｓ，
ＭＮ）に結合させる（Ｚｉｍｍ等，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，１９８４，４４，１６９８；Ｓｈａｗ，
Ｃａｎｃｅｒ，１９９３，７２（１１付録，３４１
６）。このポンプを用いて、オリゴヌクレオチドを注入
し、正確な投与量調節と投与スケジュールの変更とを外
部プログラミング・デバイスの助けによって可能にす
る。ポンプの溜め容量(reservoir capacity)は１８〜２
０ｍｌであり、注入速度は０．１ｍｌ／ｈ〜１ｍｌ／ｈ
の範囲でありうる。１日１回から１か月１回までの範囲
の投与の頻度と、０．０１μｇ／体重ｋｇ〜１００ｇ／
体重ｋｇの範囲の薬物投与量とに依存して、ポンプ溜め
に３〜１０週間間隔で再充填することができる。ポンプ
の再充填はポンプのセルフシール・セプタム(self-seal
ing septum)の経皮的穿刺によって達成される。
【０１１２】患者の脊柱中への薬物導入のための鞘内薬
物投与は、中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患を有する患者の
治療のために望ましいと考えられる。この経路のオリゴ
ヌクレオチド投与を行うために、シリコン・カテーテル
をヒト患者のＬ３−４腰椎棘間空(lumbar spinal inter
space)中に手術によって移植し、予め上腹部領域に手術
によって移植されている皮下注入ポンプに接続させる
（ＬｕｅｒとＨａｔｔｏｎ，Ｔｈｅ Ａｎｎａｌｓ ｏ
ｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，１９９３，２
７，９１２，１９９３；Ｅｔｔｉｎｇｅｒ等，Ｃａｎｃ
ｅｒ，１９７８，４１，１２７０；Ｙａｉｄａ等，Ｒｅ
ｇｕｌ．Ｐｅｐｔ．，１９８５、５９，１９３）。この
ポンプを用いて、オリゴヌクレオチドを注入し、正確な
投与量調節と投与スケジュールの変更とを外部プログラ
ミング・デバイスの助けによって可能にする。ポンプの
溜め容量は１８〜２０ｍｌであり、注入速度は０．１ｍ
ｌ／ｈから１ｍｌ／ｈまで変化しうる。１日１回から１
か月１回までの範囲の投与の頻度と、０．０１μｇ／体
重ｋｇ〜１００ｇ／体重ｋｇの範囲の薬物投与量とに依
存して、ポンプ溜めに３〜１０週間間隔で再充填するこ
とができる。ポンプの再充填はポンプのセルフシール・
セプタムの単回経皮的穿刺によって達成される。ＣＮＳ
内のオリゴヌクレオチドの分布、安定性及び薬物動態を
既知方法によって追跡する（Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌ等，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，
１９９３，９０，４６６５）。
【０１１３】この方法によって脳及び脊柱以外の領域に
オリゴヌクレオチドを投与するために、シリコン・カテ
ーテルを、例えば、肝臓に投与するためには皮下注入ポ
ンプを肝動脈に接続するように設定する（Ｋｅｍｅｎｙ
等，Ｃａｎｃｅｒ，１９９３，７１，１９６４）。注入
ポンプはオリゴヌクレオチドの全身投与を行うためにも
使用可能である（Ｅｗｅｌ等，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，１９９２，５２，３００５；Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉ
ｎ等，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．，１９９６，６２，
１９４）。
【０１１４】薬物を含有する薬剤組成物を局所的に供給
する表皮的及び経皮的投与を利用して、薬物をそれぞれ
局所真皮によって吸収される又は下部組織(underlying
tissues)によってさらに浸透及び吸収されるように投与
することができる。薬物を製造し、局所投与するための
手段は当該技術分野において知られている（例えば、Ｂ
ｌｏｃｋ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｇｅｎｎ
ａｒｏ編集，Ｍａｃｋ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，
Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，第８７章，１５９６〜
１６０９頁参照）。
【０１１５】膣投与は局所治療を可能にし、一次通過代
謝(first pass metabolism)、消化酵素による分解、及
び可能な全身副作用を回避する。この投与形式は、膣が
通常の生息地である病原生物（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｍ
ｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）をターゲットとするア
ンチセンス・オリゴヌクレオチドには好ましいと考えら
れる。他の実施態様では、受胎とその後の妊娠との確率
を高めるために、精子特異的抗体をコードする遺伝子に
対するアンチセンス・オリゴヌクレオチドをこの投与形
式によって投与することができる。この投与形式を行う
ために、膣座薬（Ｂｌｏｃｋ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
第１８版，Ｇｅｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，
第８７章，１６０９〜１６１４頁参照）又は局所軟膏を
用いることができる。
【０１１６】膀胱内投与は局所治療を可能にし、一次通
過代謝、消化酵素による分解、及び可能な全身副作用を
回避する。しかし、この方法は患者の尿道カテーテル挿
入と熟練したスタッフとを必要とする。それにも拘わら
ず、この投与形式は、尿生殖管に侵入しうる病原生物
（例えば、Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）をターゲットとす
るアンチセンス・オリゴヌクレオチドには好ましいと考
えられる。
【０１１７】Ｃ．消化管投与： “消化管投与”なる用
語は、本発明の１種類以上のアンチセンス化合物を含む
組成物を動物の消化管の一部に直接又は他のやり方で投
与することを意味する。“消化管”なる用語は、食物の
消化及び吸収と、食物残渣の排泄とにおいて機能する、
口から肛門にまで及ぶ、動物における管状通路、その部
分又はセグメントのいずれか又は全て、例えば、口腔、
食道、胃、小腸、大腸及び結腸並びにそれらの複合部
分、例えば胃腸管を意味する。したがって、“消化管投
与”なる用語は、非限定的に、経口投与、直腸投与、内
視鏡投与、舌下／頬側投与を含めた、幾つかの投与経路
を包含する。消化管投与用組成物は、緩衝剤、希釈剤及
び他の適当な添加剤をも含有することができる無菌水溶
液を包含することができる。経口薬剤組成物を製造し、
投与する手段は当該技術分野において知られている（例
えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｇｅｎｎａｒ
ｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅ
ａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０における、それぞれ、１５
９６〜１６１４頁、１６３３〜１６６５頁、１６６６〜
１６７５頁及び１６７６〜１６９３頁のＢｌｏｃｋ，第
８７章；Ｒｕｄｎｉｃ，第８９章；Ｐｏｒｔｅｒ，第９
０章；及びＬｏｎｇｅｒ，第９１章）。本発明のアンチ
センス化合物の消化管投与のための好ましい組成物は、
１９９７年７月１日出願のＴｅｎｇ等への同時係属米国
特許出願第０８／８８６，８２９号に記載されており、
この出願の全開示は本明細書に援用される。
【０１１８】頬側／舌下投与： 口腔粘膜を介しての薬
物の投与は、多くの場合に、経口投与によるよりも迅速
な、薬物の血漿濃度上昇を含む、幾つかの望ましい特徴
を有する（Ｈａｒｖｅｙ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，第１８
版，Ｇｅｎｎａｒｏ編集，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，第３５
章，７１１頁）。さらに、口腔からの静脈性排出(venou
s drainage)は上大静脈に至るので、この経路も肝臓に
よる迅速な一次通過代謝を回避する。両方の特徴は、ニ
トログリセリンのために選択すべき投与形式である舌下
経路に寄与する（Ｂｅｎｅｔ等、Ｇｏｏｄｍａｎ ＆
Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ
ｃａｌＢａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，
第９版，Ｈａｒｄｍａｎ等編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌ
ｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９６，第１章，７
頁）。
【０１１９】内視鏡投与： 消化管の内部(interior po
rtion)への直接薬物投与のために、内視鏡投与を用いる
ことができる。例えば、内視鏡逆行膀胱膵臓撮影法(end
oscopic retrograde cystopancreatography)（ＥＲＣ
Ｐ）は拡大胃鏡検査法を利用して、胆管及び膵管への選
択的アクセスを可能にする（Ｈｉｒａｈａｔａ等，Ｇａ
ｎ Ｔｏ Ｋａｇａｋｕ Ｒｙｏｈｏ，１９９２，１９
（１０付録），１５９１）。リポソーム製剤を含めた薬
剤組成物を例えば十二指腸のような消化管の一部（Ｓｏ
ｍｏｇｙｉ等，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１９９５，１
２，１４９）又は胃の粘膜下組織（Ａｋａｍｏ等，Ｊａ
ｐａｎｅｓｅ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９９
４，８５，６５２）中へ直接、内視鏡手段によって投与
することができる。胃洗浄デバイス（Ｉｎｏｕｅ等，Ａ
ｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ，１９９７，２１，２８）及び
経皮内視鏡フィーディング・デバイス(percutaneous en
doscopicfeeding devices)（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ等，
Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１
９９５，９，４７１）も、薬剤組成物の直接消化管投与
のために使用可能である。
【０１２０】直腸投与：経口経路によって投与される薬
物はしばしば、代替的に下部腸内経路、即ち、肛門から
直腸又は下部腸中へ投与されることができる。直腸座
薬、停留浣腸又は直腸カテーテルをこの目的に用いるこ
とができ、これらは他の方法では患者のコンプライアン
スを得ることが困難である場合に（例えば、小児科及び
老人医学の用途において、又は患者がおう吐する若しく
は無意識であるとき）好ましいと考えられる。直腸投与
は経口投与よりも迅速な、高い血液レベルを生じうる
が、この逆も起こりうる（Ｈａｒｖｅｙ，Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，第１８版，Ｇｅｎｎａｒｏ編集，ＭａｃｋＰ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１
９９０，第３５章，７１１頁）。直腸から吸収される薬
物の約５０％は肝臓を迂回するので、この経路による投
与は一次通過代謝の可能性を有意に低下させる（Ｂｅｎ
ｅｔ等、Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈ
ｅ ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓ ｏｆ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版，Ｈａｒｄｍａｎ
等編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
ＮＹ，１９９６，第１章）。
【０１２１】経口投与： 好ましい投与方法は、全身循
環にアクセスするために通常、最も便利な経路である経
口投与である。消化管からの吸収は、一般的に適用され
る要因、例えば吸収表面積、吸収部位への血流、薬物の
物理的状態、及び吸収部位における薬物濃度によって支
配される（Ｂｅｎｅｔ等、Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌ
ｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｂａｓｉｓ ｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９
版，Ｈａｒｄｍａｎ等編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９６，第１章，５〜７
頁）。ある一定のオリゴヌクレオチドを含む、経口投与
される組成物は当該技術分野において知られている（例
えば、Ａｇｒａｗａｌ等への米国特許第５，５９１，７
２１号参照）。本発明のアンチセンス化合物を経口投与
するための好ましい組成物は、１９９７年７月１日に出
願された、Ｔｅｎｇ等への同時係属米国特許出願第０８
／８８６，８２９号に記載されており、この出願は本明
細書に援用される。
【０１２２】実施例 下記実施例は本発明を例証するが、本発明を限定するこ
とを意図しない。当業者は本明細書に記載した特定の物
質及び方法の非常に多くの等価物を認識し、ルーチンの
実験によって確認することができる。このような等価物
は本発明の範囲内であると考えられる。
【０１２３】実施例１：オリゴヌクレオチドの合成 Ａ．一般的合成方法： オリゴヌクレオチドは自動ＤＮ
Ａ合成機においてヨウ素を用いる酸化と共にホスホルア
ミダイト化学を用いて合成した。β−シアノエチルジイ
ソプロピルホスホルアミダイトはＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）か
ら購入した。ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチド
に関しては、ホスフィット結合の段階的チオ化(thiatio
n)のために、標準酸化ボトルをアセトニトリル中の３Ｈ
−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１−ジオ
キシドの０．２Ｍ溶液によって交換した。
【０１２４】２’−Ｏ−メチル−（２’−メトキシ−と
しても知られる）ホスホロチオエート・オリゴヌクレオ
チドの合成は、標準ホスホルアミダイトの代わりに２’
−Ｏ−メチル β−シアノエチルジイソプロピルホスホ
ルアミダイト（Ｃｈｅｍｇｅｎｅｓ，Ｎｅｅｄｈａｍ，
ＭＡ）を用いて、テトラゾール及び塩基のパルス投与後
の待機サイクルを３６０秒間にまで延期する上記方法に
よる。
【０１２５】同様に、２’−Ｏ−プロピル−（２’−プ
ロポキシ−としても知られる）ホスホロチオエート・オ
リゴヌクレオチドは、この方法をやや修飾することによ
って、本質的に、本出願と同じ譲受人に譲渡される米国
特許出願第０８／３８３，６６６号（１９９５年２月３
日出願）に開示された方法によって製造される。
【０１２６】本発明の２’−フルオロ−ホスホロチオエ
ート・アンチセンス化合物は５’−ジメトキシトリチル
−３’−ホスホルアミダイトを用いて合成され、米国特
許出願第０８／３８３，６６６号（１９９５年２月３日
出願）及び米国特許第５，４５９，２５５号（１９９６
年１０月８日発行）（両方とも、本出願と同じ譲受人に
譲渡される）に開示されるように製造される。２’−フ
ルオロ−オリゴヌクレオチドは、ホスホルアミダイト化
学と、標準ＤＮＡ合成プロトコールの軽度な修飾（即
ち、室温においてメタノール性アンモニアを用いて、脱
保護を行った）とを用いて、製造された。
【０１２７】２’−メトキシエチル・オリゴヌクレオチ
ドは、本質的にＭａｒｔｉｎ等（Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．
Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６）の方法に従って合
成した。合成の容易さのために、２’−メトキシエチル
・オリゴヌクレオチドの３’−ヌクレオチドはデオキシ
ヌクレオチドであり、２’−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3−
シトシンは５−メチルシトシンであり、これは以下に述
べる方法に従って合成した。
【０１２８】ＰＮＡアンチセンス類似体は本質的に米国
特許第５，５３９，０８２号と第５，５３９，０８３号
に述べられているように製造され、これらの両方は
（１）１９９６年７月２３日に発行され、（２）本出願
と同じ同じ譲受人に譲渡される。
【０１２９】Ｂ．５−メチル−２’−メトキシエトキシ
−シトシン： ５−メチル−２’−メトキシエトキシ−
シトシン残基を有するオリゴヌクレオチドは次のように
製造する。
【０１３０】（ｉ）２，２’−アンヒドロ［１−（β−
Ｄ−アラビノフラノシル）−５−メチルウリジン］：
５−メチルウリジン（リボシルチミン、Ｙａｍａｓａ、
Ｃｈｏｓｈｉ、日本から商業的に入手可能）（７２．０
ｇ，０．２７９Ｍ）、ジフェニルカーボネート（９０．
０ｇ，０．４２０Ｍ）及び炭酸水素ナトリウム（２．０
ｇ，０．０２４Ｍ）をＤＭＦ（３００ｍｌ）に加えた。
混合物を攪拌しながら還流加熱し、発生した二酸化炭素
ガスを制御された形式で放出させた。１時間後に、やや
黒ずんだ溶液を減圧下で濃縮した。得られたシロップを
攪拌しながらジエチルエーテル（２．５リットル）中に
注入した。生成物はガムを形成した。エーテルをデカン
トし、残渣を最少量（約４００ｍｌ）のメタノール中に
溶解した。この溶液を新鮮なエーテル（２．５リット
ル）中に注入して、堅いガムを得た。エーテルをデカン
トし、ガムを真空オーブン（１ｍｍＨｇにおいて６０
℃、２４時間）中で乾燥させて、固体を得て、これを淡
黄褐色粉末に破砕した（５７ｇ，８５％粗収率）。この
物質をそのままでさらなる反応に用いた。
【０１３１】（ｉｉ）２’−Ｏ−メトキシエチル−５−
メチルウリジン： ２，２’−アンヒドロ−５−メチル
ウリジン（１９５ｇ，０．８１Ｍ）、トリス（２−メト
キシエチル）ボレート（２３１ｇ，０．９８Ｍ）及び２
−メトキシエタノール（１．２リットル）を２リットル
・ステンレス鋼圧力容器に入れ、１６０℃の予熱した油
浴に入れた。１５５〜１６０℃において４８時間加熱し
た後に、容器を開き、溶液を蒸発乾固させ、ＭｅＯＨ
（２００ｍｌ）と共に磨砕した。残渣を熱アセトン（１
リットル）中に懸濁させた。不溶な塩を濾過し、アセト
ン（１５０ｍｌ）によって洗浄し、濾液を蒸発させた。
残渣（２８０ｇ）をＣＨ3ＣＮ（６００ｍｌ）中に溶解
し、蒸発させた。シリカゲル・カラム（３ｋｇ）を、
０．５％Ｅｔ3ＮＨ含有ＣＨ2Ｃｌ2／アセトン／ＭｅＯ
Ｈ（２０：５：３）中に充填した。残渣をＣＨ2Ｃｌ
2（２５０ｍｌ）中に溶解して、シリカ（１５０ｇ）上
に吸着させてから、カラム上に負荷した。生成物を充填
溶媒(packing solvent)によって溶出して、１６０ｇ
（６３％）の生成物を得た。
【０１３２】（ｉｉｉ）２’−Ｏ−メトキシエチル−
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン：
２’−Ｏ−メトキシエチル−５−メチルウリジン（１
６０ｇ，０．５０６Ｍ）をピリジン（２５０ｍｌ）と同
時に蒸発させて、乾燥残渣をピリジン（１．３リット
ル）中に溶解した。ジメトキシトリチルクロリドの第１
アリコート（９４．３ｇ，０．２７８Ｍ）を加えて、混
合物を室温において１時間攪拌した。ジメトキシトリチ
ルクロリドの第２アリコート（９４．３ｇ，０．２７８
Ｍ）を加えて、反応をさらに１時間攪拌した。次に、メ
タノール（１７０ｍｌ）を加えて、反応を停止させた。
ＨＰＬＣは約７０％生成物の存在を示した。溶媒を蒸発
させ、ＣＨ3ＣＮ（２００ｍｌ）と共に磨砕した。残渣
をＣＨＣｌ3（１．５リットル）中に溶解して、２ｘ５
００ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ3と２ｘ５００ｍｌの飽和Ｎ
ａＣｌとによって抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾
燥させ、濾過し、蒸発させた。２７５ｇの残渣が得られ
た。残渣を３．５ｋｇのシリカゲル・カラム上で精製
し、０．５％Ｅｔ3ＮＨ含有ＥｔＯＡｃ／ヘキサン／ア
セトン（５：５：１）によって充填し、溶出した。純粋
な画分を蒸発させて、１６４ｇの生成物を得た。さらに
約２０ｇを不純な画分から得て、１８３ｇの総収量（５
７％）を得た。
【０１３３】（ｉｖ）３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−
メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−
メチルウリジン： ２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−
Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン（１０６
ｇ，０．１６７Ｍ）、ＤＭＦ／ピリジン（５６２ｍｌの
ＤＭＦと１８８ｍｌのピリジンとから調製された３：１
混合物７５０ｍｌ）及び無水酢酸（２４．３８ｍｌ，
０．２５８Ｍ）を一緒にして、室温において２４時間攪
拌した。ＭｅＯＨの添加によってｔｌｃサンプルを最初
にクエンチすることによって、反応をｔｌｃによってモ
ニターした。ｔｌｃによって判断して、反応の完成時
に、ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）を加えて、混合物を３５℃に
おいて蒸発させた。残渣をＣＨＣｌ3（８００ｍｌ）中
に溶解して、２ｘ２００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム
と２ｘ２００ｍｌの飽和ＮａＣｌとによって抽出した。
水層を２００ｍｌのＣＨＣｌ3によって逆抽出した。一
緒にした有機物質を硫酸ナトリウムによって乾燥させ、
蒸発させて、１２２ｇの残渣（約９０％生成物）を得
た。残渣を３．５ｋｇのシリカゲル・カラム上で精製し
て、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：１）を用いて溶出し
た。純粋な生成物画分を蒸発させて、９６ｇ（８４％）
を得た。
【０１３４】（ｖ）３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メ
トキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メ
チル−４−トリアゾールウリジン： ３’−Ｏ−アセチ
ル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシ
トリチル−５−メチルウリジン（９６ｇ，０．１４４
Ｍ）をＣＨ3ＣＮ（７００ｍｌ）中に溶解することによ
って、第１溶液を調製して、わきに置いた。トリエチル
アミン（１８９ｍｌ，１．４４Ｍ）をＣＨ3ＣＮ（１リ
ットル）中のトリアゾール（９０ｇ，１．３Ｍ）の溶液
に加えて、−５℃に冷却し、オーバーヘッド・スターラ
ーを用いて、０．５時間攪拌した。０〜１０℃に維持し
た攪拌溶液にＰＯＣｌ3を３０分間にわたって滴加し、
得られた混合物をさらに２時間攪拌した。第１溶液をあ
との溶液(later solution)に４５分間にわたって滴加し
た。得られた反応混合物を低温室中で一晩貯蔵した。塩
を反応混合物から濾過し、溶液を蒸発させた。残渣をＥ
ｔＯＡｃ（１リットル）中に溶解し、不溶な固体を濾過
によって除去した。濾液を１ｘ３００ｍｌのＮａＨＣＯ
3と２ｘ３００ｍｌの飽和ＮａＣｌとによって洗浄し、
硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させた。残さをＥｔ
ＯＡｃと共に磨砕して標題化合物を得た。
【０１３５】（ｖｉ）２’−Ｏ−メトキシエチル−５’
−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルシチジン： ジ
オキサン（５００ｍｌ）及びＮＨ4ＯＨ（３０ｍｌ）中
の３’−Ｏ−アセチル−２’−Ｏ−メトキシエチル−
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチル−４−トリ
アゾールウリジン（１０３ｇ，０．１４１Ｍ）の溶液を
室温において２時間攪拌した。ジオキサン溶液を蒸発さ
せて、残渣をＭｅＯＨ（２ｘ２００ｍｌ）と共沸蒸留し
た。残渣をＭｅＯＨ（３００ｍｌ）中に溶解し、２リッ
トル・ステンレス鋼圧力容器に移した。ＮＨ3ガスによ
って飽和したメタノール（４００ｍｌ）を加え、容器を
１００℃に２時間加熱した（薄層クロマトグラフィー、
ｔｌｃは完全な転化を示した）。容器の中身を蒸発乾固
して、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）中に溶解して、
飽和ＮａＣｌ（２００ｍｌ）によって１回洗浄した。有
機物質を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を蒸発させ
て、８５ｇ（９５％）の標題化合物を得た。
【０１３６】（ｖｉｉ）Ｎ4−ベンゾイル−２’−Ｏ−
メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−
メチルシチジン： ２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−
Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルシチジン（８５
ｇ，０．１３４Ｍ）をＤＭＦ（８００ｍｌ）中に溶解し
て、無水安息香酸（３７．２ｇ，０．１６５Ｍ）を攪拌
しながら加えた。３時間攪拌した後に、ｔｌｃは反応が
ほぼ９５％完成したことを示した。溶媒を蒸発させて、
残渣をＭｅＯＨ（２００ｍｌ）と共に共沸蒸留した。残
渣をＣＨＣｌ3（７００ｍｌ）中に溶解し、飽和ＮａＨ
ＣＯ3（２ｘ３００ｍｌ）と飽和ＮａＣｌ（２ｘ３００
ｍｌ）とによって抽出し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸
発させて、残渣（９６ｇ）を得た。残渣を１．５ｋｇシ
リカ・カラム上で、溶離溶媒(eluting solvent)として
０．５％Ｅｔ3ＮＨ含有ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：
１）を用いてクロマトグラフィーした。純粋な生成物画
分を蒸発させて、９０ｇ（９０％）の標題化合物を得
た。
【０１３７】（ｖｉｉｉ）Ｎ4−ベンゾイル−２’−Ｏ
−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５
−メチルシチジン−３’−アミダイト： Ｎ4−ベンゾ
イル−２’−Ｏ−メトキシエチル−５’−Ｏ−ジメトキ
シトリチル−５−メチルシチジン（７４ｇ，０．１０
Ｍ）をＣＨ2Ｃｌ2（１リットル）中に溶解した。テトラ
ゾールジイソプロピルアミン（７．１ｇ）と２−シアノ
エトキシ−テトラ（イソプロピル）ホスフィット（４
０．５ｍｌ，０．１２３Ｍ）とを窒素雰囲気下で攪拌し
ながら加えた。得られた混合物を室温において２０時間
攪拌した（ｔｌｃは反応が９５％完成したことを示し
た）。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（１ｘ３００ｍ
ｌ）と飽和ＮａＣｌ（３ｘ３００ｍｌ）とによって抽出
した。水性洗液(aqueous washes)をＣＨ2Ｃｌ2（３００
ｍｌ）によって逆抽出し、抽出物を一緒にして、ＭｇＳ
Ｏ4上で乾燥させ、濃縮した。得られた残渣を１．５ｋ
ｇシリカ・カラム上で、溶離溶媒としてＥｔＯＡｃ／ヘ
キサン（３：１）を用いてクロマトグラフィーした。純
粋な画分を一緒にして、９０．６ｇ（８７％）の標題化
合物を得た。
【０１３８】Ｃ．精製： 制御多孔質ガラスカラム（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）から開裂(cleav
age)し、５５℃の濃水酸化アンモニウム中で１８時間脱
ブロックした後に、オリゴヌクレオチドを０．５Ｍ Ｎ
ａＣｌから２．５倍量のエタノールによって２回沈降さ
せることによって精製した。分析ゲル電気泳動を２０％
アクリルアミド、８Ｍ尿素、４５ｍＭトリス−ボレート
緩衝剤、ｐＨ７．０中で行った。オリゴデオキシヌクレ
オチドとそれらのホスホロチオエート類似体とは電気泳
動から８０％を超える全長物質であると判定された。
【０１３９】実施例２： ＰＥＣＡＭ−１をターゲット
とするオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列 Ａ．ヒトＰＥＣＡＭ−１をコードする核酸をターゲット
とするオリゴヌクレオチド： 表１は、ヒトＰＥＣＡＭ
−１ｍＲＮＡｓとそれらの対応ＩＳＩＳとに特異的にハ
イブリダイズするように設計されたオリゴヌクレオチド
のセットのヌクレオチド配列と配列番号とを列挙する。
ターゲット遺伝子のヌクレオチド配位体(co-ordinates)
及び遺伝子ターゲット領域も包含される。ヌクレオチド
配位体はＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．
Ｍ２８５２６，遺伝子座名称“ＨＵＭＰＥＣＡＭ１”に
由来する（Ｎｅｗｍａｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９
０，２４７，１２１９も参照のこと；配列番号：１）。
遺伝子ターゲット領域の略号は次の通りである：５’−
ＵＴＲ，５’非翻訳領域；ＡＵＧ，翻訳開始領域；ＯＲ
Ｆ，オープンリーディングフレーム；ｓｔｏｐ，翻訳終
止領域；３’−ＵＴＲ，３’非翻訳領域。オリゴヌクレ
オチドの配列に相補的なターゲット配列の位置(locatio
n)を図１に示す。
【０１４０】表１にその配列を示したオリゴヌクレオチ
ドのヌクレオチドはホスホロチオエート結合によって結
合され、２’位置において非修飾である（即ち、２’−
デオキシ）。オリゴヌクレオチドのこの初期セットを含
む研究を行った後に、付加的な化学修飾を含むオリゴヌ
クレオチドの第２群を製造した。これらの“第２世代”
オリゴヌクレオチド（これらの一部は初期ホスホロチオ
エート・オリゴヌクレオチドに由来する）は表２に記載
する。
【０１４１】表１ ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオエ
ート・オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列
【表１】 1 ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ２
８５２６，遺伝子座名称“ＨＵＭＰＥＣＡＭ１”からの
配位体、配列番号：１ （Ｎ．Ｂ．：配列番号：１７，１８＝ヒトＰＥＣＡＭ−
１のＰＣＲのためのホスホジエステル・プライマー）
【０１４２】表２ ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする“第２世代”オ
リゴヌクレオチドのヌクレオチド配列
【表２】
【０１４３】
【表３】
【０１４４】Ｂ．ネズミＰＥＣＡＭ−１をコードする核
酸をターゲットとするオリゴヌクレオチド： 表３と４
は、ネズミＰＥＣＡＭ−１をコードするｍＲＮＡｓに特
異的にハイブリダイズするように設計されたオリゴヌク
レオチドのセットとそれらの対応ＩＳＩＳとのヌクレオ
チド配列及び化学と、配列番号とを記載する。ターゲッ
ト遺伝子のヌクレオチド配位体及び遺伝子ターゲット領
域も包含される。ヌクレオチド配位体はＧｅｎＢａｎｋ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ０６０３９，遺伝子座
名称“ＭＵＳＰＥＣＡＭ１”に由来する（Ｘｉｅ等，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，
１９９３，９０，５５６９の図１も参照のこと；配列番
号：３０）。
【０１４５】表３ ネズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオ
エート・オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列
【表４】 1 ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ０
６０３９，遺伝子座名称“ＭＵＳＰＥＣＡＭ１”からの
配位体、配列番号：３０ （Ｎ．Ｂ．：配列番号：５１，５２＝マウスＰＥＣＡＭ
−１のＰＣＲのためのホスホジエステル・プライマー
（それぞれ、ＩＳＩＳ１４２４４，１４２４５）
【０１４６】表４ ネズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする“第２世代”
オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列
【表５】 1 太字残基、２’−メトキシエトキシ−残基（他は
２’−デオキシ−である）、“Ｃ”残基、５−メチル−
シトシンを包含する；“ｏ”、ホスホジエステル結合；
“ｓ”、ホスホロチオエート結合。2 ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ０
６０３９，遺伝子座名称“ＭＵＳＰＥＣＡＭ１”からの
塩基配位体、配列番号：３０
【０１４７】実施例３： ＨＵＶＥＣ細胞におけるＰＥ
ＣＡＭ−１ｍＲＮＡ発現のオリゴヌクレオチド仲介阻害
に関するアッセイ Ａ．一般的方法： 可能なヒトＰＥＣＡＭ−１モジュレ
ーティング・オリゴヌクレオチドの活性を評価するため
に、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから
の臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉ
ｌｌｅ，ＭＤ；或いは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉ
ｌｌｅ，ＭＤからのＡＴＣＣ ＣＲＬ−１７３０が使用
可能である）を増殖させ、以下に詳述するように、オリ
ゴヌクレオチド又は対照溶液によって処理した。ネズミ
ＰＥＣＡＭ−１遺伝子をターゲットとするオリゴヌクレ
オチドに関しては、オリゴヌクレオチド処理細胞はｂＥ
ＮＤ．３内皮細胞系であった（Ｄｒ．Ｗｅｒｎｅｒ Ｒ
ｉｓａｕからの贈り物；Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ等，Ｃｅｌ
ｌ，１９９０，６２，４３５及びＳｔｅｐｋｏｗｓｋｉ
等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５３，５３３
６参照）。回収後に、細胞抽出物を調製し、特異的ＰＥ
ＣＡＭ−１コーディングｍＲＮＡレベル又はＰＥＣＡＭ
−１タンパク質レベルに関して検査した（例えば、それ
ぞれ、ノーザン・アッセイ又はフローサイトメトリー・
アッセイ）。全ての場合に、“発現％”は、非処理細胞
（又はオリゴヌクレオチドを含まない対照溶液によって
処理した細胞）を基準とした、オリゴヌクレオチド処理
細胞におけるＰＥＣＡＭ−１特異的シグナルの量を意味
し、“阻害％”は１００％ − 発現％ ＝ 阻害％と
して計算される。
【０１４８】Ｂ．ＲＮＡアッセイ： 各ＰＥＣＡＭ−１
タンパク質のｍＲＮＡ発現は、“ノーザン”アッセイに
おいて、それに特異的にハイブリダイズする核酸プロー
ブを用いることによって測定した。ヒト及びネズミＰＥ
ＣＡＭ−１に特異的な核酸プローブは実施例４〜６に述
べる。これらのプローブを当該技術分野において周知の
手段によって放射能標識した（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌ等編集，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９
２，３−１１〜２−３−４４及び４−１７〜４−１８
頁；Ｒｕｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２６巻，Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅｓ，Ａｇｒａｗａｌ編集，Ｈｕｍａｎｓ Ｐｒ
ｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９４，第
６章，１６７〜１８５頁；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ等編集，第１０章，１０．１
〜１０．７０頁参照）。ＲＮＡの等しい負荷を確認し、
ＰＥＣＡＭ−１転写体のレベルをＧ３ＰＤＨシグナルに
関して標準化するために、ブロットを取り出し、32Ｐ標
識グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ
３ＰＤＨ）プローブ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）
によって再検査した。
【０１４９】ＨＵＶＥＣ（ヒト）又はｂＥＮＤ．３（ネ
ズミ）細胞をＴ−７５フラスコにおいて、それぞれ、１
０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する、ＥＧＭ（Ｃｌ
ｏｎｅｔｉｃｓ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）又
は高グルコースＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ Ｌｉｆ
ｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕ
ｒｇ，ＭＤ）培地中で、８０〜９０％集密性まで増殖さ
せた。この時点において、細胞を１０ｍｌのＯｐｔｉ−
ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）によって３回洗浄し
た。次に、１０μｇ／ｍｌ（ＨＵＶＥＣ）又は１５μｇ
／ｍｌ（ｂＥＮＤ．３）のＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録
商標）（即ち、１：１（ｗ／ｗ）ＤＯＴＭＡ／ＤＯＰ
Ｅ、この場合ＤＯＴＭＡ＝Ｎ−［１−（２，３−ジオレ
イオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモ
ニウムクロリド及びＤＯＰＥ＝ジオレオイルホスファチ
ジルエタノールアミン；ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を含有す
る５ｍｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地と適当量のオリゴヌク
レオチドとを細胞に加えた（以下に述べる実験におい
て、オリゴヌクレオチドの添加時点はｔ＝０ｈであ
る）。対照として、細胞をオリゴヌクレオチドを含まな
いＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）によって、オリゴ
ヌクレオチド処理サンプルと同じ条件下及び同じ時間に
わたって処理した。３７℃における４時間（ｔ＝４ｈ）
後に、培地を、１０％ＦＢＳを含有する、新鮮なＥＧＭ
（ＨＵＶＥＣ）又は高グルコースＤＭＥＭ（ｂＥＮＤ．
３）培地と交換した。細胞は典型的に２時間回収した。
次に、総細胞ＲＮＡをグアニジニウム(guanidinium)中
に抽出して、ゲル電気泳動を受けさせ、当該技術分野に
おいて知られた方法に従ってフィルターに移した（例え
ば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋ等編集，第７章，７．１−７．８７頁，及びＳｈｏ
ｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌ等編集，Ｊ
ｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９９２，２−２４〜２−３０及び４−１４〜４−
２９頁参照）。
【０１５０】ＲＮＡ転移後に、ハイブリダイゼーション
緩衝剤（ＱＵＩＫＨＹＢTMハイブリダイゼーション溶
液、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）
中の問題の特定ＰＥＣＡＭ−１エンコーディング遺伝子
に対して特異的なプローブに、フィルターを典型的に一
晩ハイブリダイズさせた。これに続いて、室温（〜２４
℃）において２ｘＳＳＣ，０．１％ＳＤＳ中で１５分
間、２回洗浄し、６０℃において０．１ｘＳＳＣ，０．
１％ＳＤＳ中で３０分間、１回洗浄した。ハイブリダイ
ジング帯を、Ｘ−ＯＭＡＴ ＡＲフィルムへの暴露によ
って可視化し、ＰＨＯＳＰＨＯＲＩＭＡＧＥＲ（登録商
標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎ
ｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて、製造者の指示に本質的
に従って、定量した。ＰＨＯＳＰＨＯＲＩＭＡＧＥＲ
（登録商標）又は同様な機器による定量はＲＮＡレベル
を測定する好ましい手段であるが、これらの“ノーザ
ン”アッセイの結果は当該技術分野で知られた他の手段
によっても測定することができる。
【０１５１】Ｃ．タンパク質アッセイ： ＨＵＶＥＣ又
はｂＥＮＤ．３細胞を１２穴プレートにおいて増殖さ
せ、上述したようにオリゴヌクレオチドによって処理し
た、但し、一般に細胞は一晩（例えば、一般に約１８時
間）で回収して、タンパク質抽出物を調製することがで
きた。細胞を洗浄し、トリプシン（ＧＩＢＣＯ−ＢＲ
Ｌ）又はＥＤＴＡによる処理によって遊離させた(relea
sed)。詳しくは、ＨＵＶＥＣ細胞は典型的にトリプシン
処理によって遊離させ（ＥＤＴＡ処理も同様に機能する
としても）、ｂＥＮＤ．３細胞は特に、Ｃａ++及びＭｇ
++を含まない１ｘＰＢＳ緩衝剤（ＨＢＳＳ；ＧＩＢＣＯ
−ＢＲＬ）中の２ｍＭ ＥＤＴＡによる処理によって遊
離させる。実験下でＰＥＣＡＭ−１タンパク質を特異的
に認識する適当な蛍光標識一次抗体によって、細胞を染
色し、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ（登録商標））方
法を用いて、各ＰＥＣＡＭ−１タンパク質の量を測定し
た（例えば、Ｒｅｃｋｔｅｎｗａｌｄへの米国特許第
４，７２７，０２０号、Ｋｏｒｔｒｉｇｈｔ等への第
５，２２３，３９８号、及びＳｉｚｔｏ等への第５，５
５６，７６４号参照）。各ＰＥＣＡＭ−１タンパク質に
特異的な蛍光標識一次抗体は適当な実施例において記載
する。或いは、ＰＥＣＡＭ−１に対する非標識一次抗体
（幾つかは実施例において記載する）を用いて、これら
を蛍光標識二次（即ち、一次抗体に対して特異的な）抗
体を用いて検出することができる。
【０１５２】ＰＥＣＡＭ−１レベルを測定するための代
替え方法では、細胞溶解物(cell lysate)とタンパク質
抽出物とを電気泳動させ（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ニトロ
セルロースフィルターに移し、当該技術分野において知
られた手段によって検出する（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａ
ｎｕａｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ等編集，第１８
章，１８．３４，１８．４７〜１８．５４及び１８．６
０〜１８．７５頁参照）。ＰＥＣＡＭ−１に対する非標
識一次抗体を用いて、例えば、一次抗体と結合する二次
抗体による一次抗体の検出（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕｂｅｌ等編集，Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２，
１０−３３〜１０−３５；及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａ
ｌ，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ等編集，第１８章，１
８．１〜１８．７５及び１８．８６〜１８．８８頁参
照）を包含する当該技術分野において周知の手段によっ
て検出し、当該技術分野において知られた、他の抗体に
基づくアッセイを用いて定量することができる。このよ
うな抗体に基づくアッセイは、非限定的に、ＥＬＩＳＡ
アッセイ、ウェスターン・アッセイ等を包含する（例え
ば、Ｗａｎｄｓへの米国特許第４，８７９，２１９号及
びＳｃｈｏｅｍａｋｅｒ等への第４，８３７，１６７
号；並びにＳｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第２版，Ａｕｓｕ
ｂｅｌ等編集，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２，１１−５〜１１−１７参
照）。ＰＥＣＡＭ−１活性は当該技術分野において知ら
れた、適当な細胞接着アッセイで測定することができる
（例えば、Ａｌｂｅｌｄａ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．，１９９１，１１４，１０５９；ＤｅＬｉｓｓｅｒ
等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，２６８，１
６３０７；及びＭｕｌｌｅｒ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，１９９２，１７５，１４０１参照）。
【０１５３】実施例４： ホスホロチオエート・オリゴ
ヌクレオチドによるヒトＰＥＣＡＭ−１発現のアンチセ
ンス仲介阻害： Ａ．ヒトＰＥＣＡＭ−１特異的プローブ： ヒトＰＥＣ
ＡＭ−１配列由来オリゴヌクレオチド・セット（表１）
の生物学的活性に関する初期スクリーニングでは、ＨＵ
ＶＥＣ細胞からのＲＮＡと、ＰＣＲ反応のプライマーと
しての１対のホスホジエステル・オリゴヌクレオチド、
５’−ＴＣＣＧＡＴＧＴＣＡＡＧＣＴＡＧＧＡＴＣＡＴ
（配列番号：１７）及び５’−ＧＧＣＡＴＧＧＧＡＡＴ
ＧＧＣＡＡＴＴＡＴＣＴ（配列番号：１８）とを用い
て、ＰＲＩＭＥ−Ａ−ＧＥＮＥ（登録商標）標識キット
（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって、
放射能標識したＰＥＣＡＭ−１特異的ＰＣＲ生成物を作
製した。得られた32Ｐ−シトシン放射能標識８４４−ｂ
ｐ生成物はヒトＰＥＣＡＭ−１のオープンリーディング
フレーム（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎ
ｏ．Ｍ２８５２６，遺伝子座名称“ＨＵＭＰＥＣＡＭ
１”のヌクレオチド７５２〜１５９６）にハイブリダイ
ズする。しかし、代替え的に他のＰＣＲプローブを製造
することができる、又は表１又は２のオリゴヌクレオチ
ドの１種類以上を検出可能に標識して、当該技術分野に
おいて知られた方法によってヒトＰＥＣＡＭ−１特異的
プローブとして用いることができる。
【０１５４】Ｂ．ＰＥＣＡＭ−１オリゴヌクレオチドの
活性： ＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートすることが
できる活性化合物に関する初期スクリーニングでは、Ｈ
ＵＶＥＣ細胞を１００ｎＭのＰＥＣＡＭ−１特異的なホ
スホロチオエート・オリゴヌクレオチド・シリーズ（Ｉ
ＳＩＳ ８９８８〜８９９６、配列番号：２〜１０）に
よって処理して、ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡレベルをノー
ザン分析によって測定した。スクリーニングからのデー
タ（表５、実験１）は下記結果を示す。ＰＥＣＡＭ−１
ｍＲＮＡレベルの≧約３５％から約１００％までの阻害
レベル（この場合、“約”は±５％を意味する）によっ
て示される、このアッセイにおいて活性を示すオリゴヌ
クレオチドは、ＩＳＩＳ ８９８８、８９９１、８９９
２、８９９３、８９９４、８９９５及び８９９６（それ
ぞれ、配列番号：２、５、６、７、８、９及び１０）を
包含する。したがって、これらのオリゴヌクレオチドは
ＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートするための本発明の
好ましい実施態様である。このアッセイにおいてＰＥＣ
ＡＭ−１ｍＲＮＡレベルの≧約５０％から約１００％ま
での阻害レベル（この場合、“約”は±５％を意味す
る）を示すオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ ８９９
４、８９９５及び８９９６（それぞれ、配列番号：８、
９及び１０）を包含する。したがって、これらのオリゴ
ヌクレオチドはＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートする
ための本発明のより好ましい実施態様である。
【０１５５】ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチド
の第２セットのスクリーニング（表５、実験２）はヒト
ＰＥＣＡＭ−１に対する付加的なアンチセンス配列を生
じた。詳しくは、ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡレベルの≧約
５０％から約１００％までの阻害レベル（この場合、
“約”は±５％を意味する）によって示される、このア
ッセイにおいて活性を示すオリゴヌクレオチドは、ＩＳ
ＩＳ １１５９１、１１５９３、１１５９４及び１１５
９５（それぞれ、配列番号：１１、１２、１３及び１
４）を包含する；したがって、これらのオリゴヌクレオ
チドはＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートするための本
発明の好ましい実施態様である。このアッセイにおいて
ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡの≧約８５％から約１００％ま
での阻害レベル（この場合、“約”は±５％を意味す
る）を示すオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ１１５９４
及び１１５９５（それぞれ、配列番号：１３及び１４）
を包含する。したがって、これらのオリゴヌクレオチド
はＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートするための本発明
のより好ましい実施態様である。
【０１５６】最初にスクリーニングしたホスホロチオエ
ート・オリゴヌクレオチドのなかでは、本発明の最も好
ましい実施態様は、このアッセイにおいてＰＥＣＡＭ−
１ｍＲＮＡの≧約５５％から約１００％までの阻害レベ
ル（この場合、“約”は±５％を意味する）を示すもの
であり、即ち、ＩＳＩＳ ８９９４、８９９６、１１５
９１、１１５９３、１１５９４及び１１５９５（それぞ
れ、配列番号：８、１０、１１、１２，１３及び１４）
である。
【０１５７】Ｃ．配列特異性： アンチセンス・オリゴ
ヌクレオチドによるＰＥＣＡＭ−１のモジュレーション
の特異性を、ＩＳＩＳ ８９９４と、この活性オリゴヌ
クレオチドのセンス（即ち、逆補体）又はそのスクラン
ブル・バージョン(scrambledversion)のいずれかである
配列を有する対照オリゴヌクレオチドのセットとを用い
て確認した。詳しくは、ＩＳＩＳ ８９９４に対して、
ＩＳＩＳ １１９１４（配列番号：１５）は“センス”
対照であり、ＩＳＩＳ １１９１５（配列番号：１６）
は“スクランブル”対照である。ＨＵＶＥＣ細胞を５０
ｎＭのこれらのオリゴヌクレオチドによって処理して、
上記のようにノーザン分析によって評価した。結果（表
６）は、活性オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ８９９
４）はこれらの条件下でＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡの９０
％阻害を生じたが、対照オリゴヌクレオチドによる細胞
の処理はＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡ発現に対して殆ど効果
を有さなかった（即ち、ＩＳＩＳ １１９１４では１４
％阻害、ＩＳＩＳ １１９１５では２６％阻害）ことを
実証する。したがって、活性アンチセンス化合物のＰＥ
ＣＡＭ−１モジュレーティング活性は配列特異的であ
る。
【０１５８】Ｄ．時間経過： １００ｎＭのＩＳＩＳ
８９９４又はＩＳＩＳ ８９９６による処理後のＨＵＶ
ＥＣ細胞におけるＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡ発現の阻害の
時間経過を表７に示す。ＩＳＩＳ ８９９４による処理
の４時間後に、ＰＥＣＡＭ−１の阻害レベルは約８５％
（ｔ＝４ｈ）より大きくなり、ｔ＝６ｈには約９８％阻
害に上昇し、その後、少なくともｔ＝１２ｈまで、約９
５％以上に留まった（この場合、“約”は±５％を意味
する）。ＩＳＩＳ ８９９６に関しても、ヒトＰＥＣＡ
Ｍ−１の時間的モジュレーションの同様なパターンが見
られた。
【０１５９】Ｅ．タンパク質レベル： ＰＥＣＡＭ−１
ｍＲＮＡとタンパク質レベルとの相互関係を評価するた
めに、ＨＵＶＥＣ細胞を５０ｎＭの種々なオリゴヌクレ
オチドによって処理して、ｔ＝４ｈ、２４ｈ及び４８ｈ
にサンプルを採取する実験を行った。サンプルを分割し
て、（１）ＰＥＣＡＭ−１タンパク質のレベルを、ＦＡ
ＣＳ（登録商標）によって、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉ
ｎｓｏｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）から
のフィコエリトリン（ＰＥ）にコンジュゲートしたＰＥ
ＣＡＭ−１（ＣＤ３１）に対するモノクローナル抗体を
用いて測定し、（２）ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡレベルを
先行実施例におけるように測定した。細胞をトリプシン
又はＥＤＴＡのいずれによって溶解させても、またヒト
ＰＥＣＡＭ−１に対するＰＥ−標識抗体又はＦＩＴＣ−
（フルオレセインイソチオシアネート）標識抗体のいず
れを用いても、ＦＡＣＳ（登録商標）結果は同じであっ
た。ヒトＰＥＣＡＭ−１に対するＰＥ−標識抗体及びＦ
ＩＴＣ−標識抗体は例えばＢｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）；Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｒ
ＤＩ，Ｆｌａｎｄｅｒｓ，ＮＪ）；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｈ
ｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；及びＢｉｏＳ
ｏｕｒｃｅ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）から入手可能
である。アイソタイプ（マウスＩｇＧ−１カッパ）対照
は典型的に基底シグナルの≦５％のシグナルを生じた。
標識二次抗体と組み合わせた、ＦＡＣＳ（登録商標）分
析に適したヒトＰＥＣＡＭ−１に対する他の一次抗体は
例えばＲＤＩ；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅ
ｉｍ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｅｎｄｏｇｅｎ（以前
は、Ｔ Ｃｅｌｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｗｏｂｕ
ｒｎ，ＭＡ）；ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（ＳａｎＤｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）；ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
（以前は、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｕｎｉ
ｏｎｄａｌｅ，ＮＹ）；Ｓｅｒｏｔｅｃ（ＯＸｆｏｒ
ｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）；及びＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｃ
Ａ）から入手可能である。
【０１６０】結果（表８）は、少なくともＩＳＩＳ ８
９９４と８９９６に関して、ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡ発
現の阻害はｔ＝４ｈ〜ｔ＝４８ｈにおいてかなり一定し
たレベル（約６０〜９０％阻害、この場合“約”は±５
％を意味する）において生ずる。これに反して、ＰＥＣ
ＡＭ−１タンパク質発現の阻害はｍＲＮＡレベルのアン
チセンス・モジュレーションに“遅れる”；即ち、ＰＥ
ＣＡＭ−１タンパク質レベルの低下はｔ＝２４ｈ時点ま
では見られない。さらに、少なくともＩＳＩＳ８９９５
の場合には、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質発現のアンチセ
ンス・モジュレーションは実験の最後の時点（ｔ＝４８
ｈ）を超えて上昇し続けうる。
【０１６１】Ｆ．用量反応： 種々の濃度のＩＳＩＳ
８９９４又は８９９６による２４時間処理後のＨＵＶＥ
Ｃ細胞におけるＰＥＣＡＭ−１タンパク質発現の用量反
応を表９に示す。ＰＥＣＡＭ−１タンパク質のレベルを
上記のようにＦＡＣＳ（登録商標）によって測定した。
これらの条件下で、これらのアンチセンス・オリゴヌク
レオチドの両方が、１０ｎＭの濃度で施用されたとき
に、ＰＥＣＡＭ−１タンパク質レベルの約３０％阻害
（この場合“約”は±５％を意味する）を生じた。ＩＳ
ＩＳ ８９９４では、阻害度は２５ｎＭにおいて約５０
％に上昇し、５０〜１００ｎＭの濃度では約５０％に上
昇した。ＩＳＩＳ ８９９５では、阻害度は２５ｎＭに
おいて約６０％に上昇し、これより高いオリゴヌクレオ
チド濃度においてもこのレベルに留まった。
【０１６２】表５ ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオエ
ート・アンチセンス・オリゴヌクレオチド（ＡＳＯｓ）
の活性
【表６】
【０１６３】表６ ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオエ
ート・オリゴヌクレオチドの配列特異性
【表７】 1 オリゴヌクレオチド濃度＝５０ｎＭ、ｔ＝４ｈ
【０１６４】表７ ＰＥＣＡＭ−１アンチセンス・オリゴヌクレオチド（Ａ
ＳＯｓ）に対するＨＵＶＥＣ細胞の反応の時間経過
【表８】 1 オリゴヌクレオチド濃度＝１００ｎＭ
【０１６５】表８ ＰＥＣＡＭ−１アンチセンス・オリゴヌクレオチド（Ａ
ＳＯｓ）によるｍＲＮＡレベル及びタンパク質レベルの
モジュレーションの時間経過
【表９】 1 オリゴヌクレオチド濃度＝５０ｎＭ
【０１６６】表９ ＰＥＣＡＭ−１アンチセンス・オリゴヌクレオチド（Ａ
ＳＯｓ）に対するＨＵＶＥＣ細胞の用量反応
【表１０】 1 ｔ＝２４ｈ
【０１６７】実施例５： 第２世代(second generatio
n)オリゴヌクレオチドによるヒトＰＥＣＡＭ−１発現の
アンチセンス仲介阻害 Ａ．“第２世代”ヒトＰＥＣＡＭ−１オリゴヌクレオチ
ドの設計： ＰＥＣＡＭ−１特異的ホスホロチオエート
・オリゴヌクレオチドからの結果は、ＰＥＣＡＭ−１発
現をモジュレートするために最も活性なホスホロチオエ
ート・オリゴヌクレオチドはＩＳＩＳ ８９９４及び８
９９５（それぞれ、配列番号：８及び９）を包含する。
これらのオリゴヌクレオチドに基づくが付加的な化学修
飾を有する“第２世代”オリゴヌクレオチドを設計し、
合成して、これらの研究結果を確認し、拡大した。表２
に詳述したように、ＩＳＩＳ １２４６６、１２４６７
及び１７５５５〜１７５６０はＩＳＩＳ ８９９４に相
当する“ギャップマー(gapmer)”である。即ち、これら
のオリゴヌクレオチドの全ては配列番号：８を含み、
２’−メトキシエトキシフランク(flank)又は“ウィン
グ(wing)”と、ターゲットｍＲＮＡ分子に対するＲＮア
ーゼＨ活性を支持するように設計された中央２’−デオ
キシ“ギャップ”とを有する。ＩＳＩＳ １７５６６と
１７６５１とはＩＳＩＳ ８９９４に相当するヘミマー
（又は“ウィングマー”）であり、２’−メトキシエト
キシ、ＲＮアーゼＨ−無反応性５’若しくは３’第１部
分及び、２’−デオキシ残基を含む、それぞれ、３’若
しくは５’第２部分（“ウィング”）を有する。ギャッ
プマーの中央“ギャップ”部分と同様に、ヘミマーのオ
リゴヌクレオチドの第２、２’−デオキシ部分はターゲ
ットＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡに対するＲＮアーゼＨ活性
を支持するように設計される。これらのオリゴヌクレオ
チドの２’−メトキシエトキシ部分（“ウィング”）は
また、一部の核酸における二本鎖安定性を高めることが
知られている５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）残基を含
有する（例えば、Ｈｏｈｅｉｓｅｌ等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，１９９０，２６５，１６６５６参照）。
【０１６８】他の“第２世代”化合物は、先行実施例の
ホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドのいずれにも
基づかない配列を有する。これらはＩＳＩＳ １７５６
１〜１７５７０（それぞれ、配列番号：１９〜２６）
と、ＩＳＩＳ １７５６１に対する２つの対照（ＩＳＩ
Ｓ １７９６６及び１７９７０、それぞれ、配列番号：
２８及び２９）とを包含する。
【０１６９】Ｂ．第２世代ＰＥＣＡＭ−１オリゴヌクレ
オチドの活性： ＩＳＩＳ ８９９４及び８９９５（そ
れぞれ、配列番号：８及び９）の化学修飾誘導体を下記
修飾によって上述したＰＥＣＡＭ−１タンパク質アッセ
イ（ＦＡＣＳ（登録商標））において試験した：オリゴ
ヌクレオチドを５０ｎＭ又は１００ｎＭの最終濃度まで
細胞に加えて、以下に示すように、２４ｈ及び／又は４
８ｈにおいて分析のためにサンプルを採取した。結果は
表１０（実験１、２ａ、２ｂ及び４）に示す。（実験４
では、ＩＳＩＳ １４３９１を対照として用いた；この
オリゴヌクレオチドは配列
【化１】 を含む、この場合、太字残基は２’−メトキシエトキシ
修飾残基を意味し、下線付き“Ｃ”残基は５−メチルシ
トシンを意味し、ホスホロチオエート・バックボーンを
有する）。ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする化学
修飾アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、ｔ＝２４ｈ
におけるＰＥＣＡＭ−１レベルの≧約４５％から１００
％までの阻害レベルと、ｔ＝４８ｈにおける≧約３０％
から１００％までの阻害レベル（この場合、“約”は±
５％を意味する）とによって分かるような、ＰＥＣＡＭ
−１発現を長時間モジュレートするそれらの能力のため
に、本発明の好ましい実施態様である。ＩＳＩＳ １２
４６７、１７５５５、１７５５６、１７５５７、１７５
５９、１７５６０、１７５６１及び１７５６７が特に好
ましい。
【０１７０】ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする付
加的なオリゴヌクレオチドをＰＥＣＡＭ−１タンパク質
アッセイを用いて評価した。結果（表１０、実験３）
は、化学修飾オリゴヌクレオチドの全てがＰＥＣＡＭ−
１タンパク質レベルをｔ＝２４ｈにおいてＰＥＣＡＭ−
１レベルの≧約４５％から約１００％まで阻害する（こ
の場合、“約”は±５％を意味する）ことを示す。した
がって、このような化学修飾アンチセンス化合物は本発
明の好ましい実施態様である。ＩＳＩＳ １７５６１、
１７５６２、１７５６３、１７５６４、１７５６５、１
７５６８、１７５６９及び１７５７０（それぞれ、配列
番号：１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５及び
２６）が特に好ましい。
【０１７１】化学修飾アンチセンス・オリゴヌクレオチ
ドによるＰＥＣＡＭ−１モジュレーションの特異性をＩ
ＳＩＳ １７５６１と、活性オリゴヌクレオチドの配列
のミスマッチ・バージョン又はスクランブル・バージョ
ンのいずれかである配列を有する対照オリゴヌクレオチ
ドのセットとを用いて確認した。詳しくは、ＩＳＩＳ１
７９６６（配列番号：２８）はターゲットＰＥＣＡＭ−
１配列との３塩基ミスマッチを有する対照オリゴヌクレ
オチドであり、ＩＳＩＳ １７９７０（配列番号：２
９）はＩＳＩＳ １７５６１に対する“スクランブル”
対照である。ＨＵＶＥＣ細胞を２５ｎＭのこれらのオリ
ゴヌクレオチドによって処理して、上記のようにＦＡＣ
Ｓ（登録商標）によって評価した。結果（表１０、実験
５）は、対照オリゴヌクレオチドのいずれもＰＥＣＡＭ
−１発現を阻害することができず、したがって、本発明
の好ましい実施態様の活性の範囲（即ち、ＰＥＣＡＭ−
１タンパク質レベルの≧約３５％から約１００％までの
阻害）に入らないことを実証する。要するに、化学修飾
（“第２世代”）アンチセンス化合物のＰＥＣＡＭ−１
モジュレーティング活性は配列特異性である。
【０１７２】表１０ ヒトＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする“第２世代”ア
ンチセンス・オリゴヌクレオチドの活性
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【０１７３】Ｃ．ヒトＰＥＣＡＭ−１をコードする核酸
のアンチセンス・モジュレーションのために好ましい領
域： 本発明のアンチセンス化合物は、ＰＥＣＡＭ−１
をコードする核酸の任意の部分と特異的にハイブリダイ
ズ可能な（をターゲットとする）ように設計することが
できる。しかし、上記結果は、ヒトＰＥＣＡＭ−１をコ
ードする核酸の幾つかの領域と、このような領域内の配
列とがヒトＰＥＣＡＭ−１のアンチセンス・モジュレー
ションのために好ましい領域であり、したがって、ヒト
ＰＥＣＡＭ−１をモジュレートするように設計される、
さらなるアンチセンス化合物のために好ましいターゲッ
ト領域であることを実証する。
【０１７４】１．ヒトＰＥＣＡＭ−１の５’−ＵＴＲ
は、本発明の好ましい実施態様であるＩＳＩＳ ８９８
８（配列番号：２）のターゲット領域であった。
【０１７５】２．ヒトＰＥＣＡＭ−１のＡＵＧ（出発）
コドン領域は、本発明の好ましい実施態様であるＩＳＩ
Ｓ ８９９１（配列番号：５）のターゲット領域であっ
た。
【０１７６】３．ヒトＰＥＣＡＭ−１のＯＲＦ（オープ
ンリーディングフレーム）領域は、ＩＳＩＳ ８９９
２、８９９３、１１５９４、１７５６５、１７５６９及
び１７５７０（それぞれ、配列番号：６、７、１３、２
３、２４、２５及び２６）のターゲット領域であり、こ
れらの全ては本発明の好ましい実施態様である。
【０１７７】４．ヒトＰＥＣＡＭ−１の終止コドン領域
は本発明の好ましい実施態様のターゲット領域である。
図２に示すように、ヒトＰＥＣＡＭ−１のこの領域の配
列（配列番号：１の塩基２３０５〜２３９４；ＧｅｎＢ
ａｎｋ ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．Ｍ２８５２６）は、
ＩＳＩＳ １７５６１、１１５９５、８９９４、１７５
６４、１１５９４及び１７５６８を包含する配列（配列
番号：５４）を有する。これらのオリゴヌクレオチドか
らの結果は、一緒に考慮すると、ヒトＰＥＣＡＭ−１を
コードする核酸の終止コドン領域がアンチセンス・モジ
ュレーションを特に受けやすいことを実証する。さらに
詳しくは、配列番号：５５又は５７（図２参照）に特異
的にハイブリダイズするアンチセンス化合物が、ヒトＰ
ＥＣＡＭ−１をコードする核酸の終止コドン領域に特異
的にハイブリダイズするアンチセンス化合物のなかで好
ましい。
【０１７８】２種類以上のアンチセンス化合物の共有部
分から誘導可能な共通配列のいずれかを含むようなアン
チセンス化合物が特に好ましい。例えば、２種類のアン
チセンス化合物間で共有される共通配列は配列番号：５
８（ＩＳＩＳ １７５６１と１１５９５に共通）、配列
番号：５９（ＩＳＩＳ １１５９５と８９９４）、及び
配列番号：６０（ＩＳＩＳ ８９９４と１７５６４）を
包含する。３種類以上のアンチセンス化合物の共有部分
から誘導可能な共通配列、即ち、５’−ＧＴＧＣＡＴＣ
（ＩＳＩＳ １７５６１、１１５９５及び８９９４に共
通）及び５’−ＴＧＧＣＣ（ＩＳＩＳ １１５９５、８
９９４及び１７５６４に共通）を含むアンチセンス化合
物が特に好ましい。
【０１７９】５．ヒトＰＥＣＡＭ−１の３’−ＵＴＲ
（非翻訳領域）は本発明の好ましい実施態様のターゲッ
ト領域である。図３に示すように、ヒトＰＥＣＡＭ−１
のこの領域の配列（配列番号：１の塩基２４３６〜２５
２０；ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ
２８５２６）は、ＩＳＩＳ ８９９６、１１５９３、１
７５６３、８９９５及び１１５９１を包含する配列（配
列番号：６１）を有する。これらのオリゴヌクレオチド
からの結果は、一緒に考慮すると、ヒトＰＥＣＡＭ−１
をコードする核酸の３’−非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）
がアンチセンス・モジュレーションを特に受けやすいこ
とを実証する。さらに詳しくは、配列番号：６２、６４
又は６６（図３参照）に特異的にハイブリダイズするア
ンチセンス化合物が、ヒトＰＥＣＡＭ−１をコードする
核酸の３’−ＵＴＲに特異的にハイブリダイズするアン
チセンス化合物のなかで好ましい。
【０１８０】２種類以上のアンチセンス化合物の共有部
分から誘導可能な共通配列のいずれかを含むようなアン
チセンス化合物が特に好ましい。例えば、２種類のアン
チセンス化合物間で共有される共通配列は配列番号：６
５（ＩＳＩＳ ８９９６と１１５９３に共通）である。
３種類以上のアンチセンス化合物の共有部分から誘導可
能な共通配列、即ち、配列番号：６７（ＩＳＩＳ １７
５６３、８９９５及び１１５９１に共通）を含むアンチ
センス化合物が特に好ましい。
【０１８１】実施例６： ホスホロチオエート・オリゴ
ヌクレオチドによる、ネズミＰＥＣＡＭ−１発現のアン
チセンス仲介阻害 Ａ．ネズミＰＥＣＡＭ−１特異的プローブ： ネズミＰ
ＥＣＡＭ−１配列に由来するオリゴヌクレオチド・セッ
ト（表３）の生物学的活性に関する初期スクリーニング
では、ｂＥＮＤ．３細胞からのＲＮＡと、ＰＣＲプライ
マーとしての１対のホスホジエステル・オリゴヌクレオ
チド、即ち、５’−ＧＡＧＧＡＣＡＣＴＴＣＣＡＣＴＴ
ＣＴＧＴＧＴ（ＩＳＩＳ １４２４４、配列番号：５
１）；及び５’−ＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＧＡＴＣＣＡ
ＧＧＴＧＴ（ＩＳＩＳ １４２４５、配列番号：５２）
とを用いて、ＰＲＩＭＥ−Ａ−ＧＥＮＥ（登録商標）標
識キット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を
用いるＰＣＲ反応において、放射能標識したマウスＰＥ
ＣＡＭ−１特異的ＰＣＲ生成物を作製した。得られた32
Ｐ−シチジン放射能標識８９８−ｂｐ生成物はネズミＰ
ＥＣＡＭ−１のオープンリーディングフレーム（Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ０６０３９，
遺伝子座名称“ＭＵＳＰＥＣＡＭ１”のヌクレオチド１
２５７〜２１５５）にハイブリダイズする。しかし、代
替え的に他のＰＣＲプローブを製造することができる、
又は表３若しくは４のオリゴヌクレオチドの１種類以上
を検出可能に標識して、当該技術分野において知られた
方法によってネズミＰＥＣＡＭ−１特異的プローブとし
て用いることができる。
【０１８２】Ｂ．ネズミＰＥＣＡＭ−１オリゴヌクレオ
チドの活性： ＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートする
ことができる活性化合物に関する初期スクリーニングで
は、ｂＥＮＤ．３細胞を２００ｎＭのＰＥＣＡＭ−１特
異的なホスホロチオエート・オリゴヌクレオチド・シリ
ーズ（ＩＳＩＳ １３９８３〜１３９９９、配列番号：
３１〜４７）によって処理して、ＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮ
Ａレベルをノーザン分析によって測定した。スクリーニ
ングからのデータ（表１１）は下記結果を示す。ＰＥＣ
ＡＭ−１ｍＲＮＡレベルの≧約３５％から約１００％ま
での阻害レベル（この場合、“約”は±５％を意味す
る）によって示される、このアッセイにおいて活性を示
すオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ １３９８５、１３
９８６、１３９８８、１３９８９、１３９９０、１３９
９１、１３９９２、１３９９３，１３９９４、１３９９
５及び１３９９６（それぞれ、配列番号：３３、３４、
３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３及び
４４）を包含する。したがって、これらのオリゴヌクレ
オチドはネズミＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートする
ための本発明の好ましい実施態様である。このアッセイ
においてＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡの≧約５０％から約１
００％までの阻害レベル（この場合、“約”は±５％を
意味する）を示すオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ １
３９８９、１３９９０、１３９９１、１３９９２、１３
９９３，１３９９４、１３９９５及び１３９９６（それ
ぞれ、配列番号：３７、３８、３９、４０、４１、４
２、４３及び４４）を包含する。したがって、これらの
オリゴヌクレオチドはネズミＰＥＣＡＭ−１発現をモジ
ュレートするための本発明のより好ましい実施態様であ
る。最初にスクリーニングしたホスホロチオエート・オ
リゴヌクレオチドのなかでは、本発明の最も好ましい実
施態様は、このアッセイにおいてＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮ
Ａの≧約６５％から約１００％までの阻害レベル（この
場合、“約”は±５％を意味する）を示すオリゴヌクレ
オチド、即ち、ＩＳＩＳ １３９９０、１３９９１、１
３９９２及び１３９９５（それぞれ、配列番号：３８、
３９、４０及び４３）である。
【０１８３】Ｃ．配列特異性： アンチセンス・オリゴ
ヌクレオチドによるＰＥＣＡＭ−１のモジュレーション
の特異性を、ＩＳＩＳ １３９８９と、この活性オリゴ
ヌクレオチドの配列のスクランブル・バージョンを有す
る対照オリゴヌクレオチドとを用いて確認した。詳しく
は、ＩＳＩＳ ８９９４に対して、ＩＳＩＳ １４４４
９（配列番号：５０）は“スクランブル”対照である。
ｂＥＮＤ．３細胞を５０ｎＭのこれらのオリゴヌクレオ
チドによって処理して、ｔ＝２４ｈにおいてＦＡＣＳ
（登録商標）分析によって評価した。これらの実験にお
いて、ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ，ＣＡ）にコンジュゲートしたネズミＰＥＣＡＭ
−１に対するモノクローナル抗体を用いるＦＡＣＳ（登
録商標）分析によって、ネズミＰＥＣＡＭ−１タンパク
質レベルを測定した。アイソタイプ（ラットＩｇＧ−２
ａ カッパ）ＦＩＴＣ標識対照は典型的に基底シグナル
(basal signal)の≦５％のシグナルを生じた。標識二次
抗体と組み合わせて、ＦＡＣＳ（登録商標）分析に適し
た、ネズミＰＥＣＡＭ−１に対する他の一次抗体は、例
えば、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）；Ｅｎｄｏｇｅｎ
（以前には、Ｔ Ｃｅｌｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，
Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）；ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；及びＰａｅｓｅｌ ＆ Ｌｏｒ
ｅｉ（Ｈａｎａｕ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能であ
る。
【０１８４】結果（表１２）は、対照（スクランブル）
オリゴヌクレオチドはＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレー
トすることができなかった（５％阻害）が、活性化合物
（ＩＳＩＳ １３９８９）は約５０％阻害を生じたこと
を実証する。したがって、活性アンチセンス化合物のＰ
ＥＣＡＭ−１モジュレーティング活性は配列特異的であ
る。
【０１８５】Ｄ．時間経過： ３００ｎＭのＩＳＩＳ
１３９８９、１３９９１及び１３９９５による処理後の
ｂＥＮＤ．３細胞におけるＰＥＣＡＭ−１ｍＲＮＡ発現
の阻害の時間経過を、ＦＡＣＳ（登録商標）分析によっ
て測定して、表１３に示す。ＩＳＩＳ １３９８９によ
る処理の２４時間後に、ネズミＰＥＣＡＭ−１の阻害レ
ベルは約３９％（ｔ＝２４ｈ）であり、ｔ＝４８ｈには
約７０％阻害に上昇し、その後、ｔ＝７２ｈに、約１５
％に低下した（この場合、“約”は±５％を意味す
る）。ＩＳＩＳ １３９９１と１３９９５に関しても、
モジュレーションの同様な時間的パターンが見られた。
【０１８６】Ｅ．用量反応： 種々な濃度のＩＳＩＳ
１３９８９、１３９９１又は１３９９５による処理後の
ｂＥＮＤ．３細胞におけるＰＥＣＡＭ−１タンパク質発
現の用量反応を表１４に示す。ＰＥＣＡＭ−１タンパク
質レベルをＦＡＣＳ（登録商標）によって測定した。こ
れらの条件下及び３７．５ｎＭの濃度において、ＩＳＩ
Ｓ １３９８９はＰＥＣＡＭ−１タンパク質レベルの約
４０％の阻害を生じたが、ＩＳＩＳ１３９９１と１３９
９５とはＰＥＣＡＭ−１タンパク質レベルの約２０％の
阻害を生じた（この場合、“約”は±５％を意味す
る）。ＩＳＩＳ １３９８９では、阻害度は７５ｎＭに
おいて約５０％に上昇し、１５０ｎＭにおいては約６０
％に上昇し、３００ｎＭにおいては約７０％に上昇し
た。ＩＳＩＳ１３９９１では、阻害度は７５ｎＭにおい
て約２５％に上昇し、１５０ｎＭにおいては約４５％に
上昇し、３００ｎＭにおいては約６０％に上昇した。Ｉ
ＳＩＳ１３９９５では、阻害度は７５ｎＭにおいて約３
０％に上昇し、１５０ｎＭ及び３００ｎＭにおいては約
６０％に上昇した。
【０１８７】表１１ ネズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオ
エート・オリゴヌクレオチドの活性
【表１６】 1 オリゴヌクレオチド濃度＝２００ｎＭ、ｔ＝４ｈ
【０１８８】表１２ ネズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするホスホロチオ
エート・アンチセンス・オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ
ｓ）の配列特異性
【表１７】 1 ５０ｎＭ（最終濃度）の指示オリゴヌクレオチドに
よって処理したｂＥＮＤ．３細胞；ｔ＝２４ｈにおいて
採取されたサンプル
【０１８９】表１３ ネズミＰＥＣＡＭ−１アンチセンス・オリゴヌクレオチ
ド（ＡＳＯｓ）に対するｂＥＮＤ．３細胞の反応の時間
経過
【表１８】 1 ３００ｎＭ（最終濃度）の指示オリゴヌクレオチド
によって処理したｂＥＮＤ．３細胞2 ２サンプルに由来；他の全てのデータ・ポイントは
３サンプルからの平均値である。
【０１９０】表１４ ネズミＰＥＣＡＭ−１アンチセンス・オリゴヌクレオチ
ド（ＡＳＯｓ）に対するネズミｂＥＮＤ．３細胞の用量
反応
【表１９】 1 ｔ＝４８ｈ
【０１９１】実施例７： 第２世代オリゴヌクレオチド
による、ネズミＰＥＣＡＭ−１発現のアンチセンス仲介
阻害 Ａ．“第２世代”ヒトＰＥＣＡＭ−１オリゴヌクレオチ
ドの設計： ネズミＰＥＣＡＭ−１特異的ホスホロチオ
エート・オリゴヌクレオチドからの結果は、ＰＥＣＡＭ
−１発現をモジュレートするための好ましいホスホロチ
オエート・オリゴヌクレオチドの１つがＩＳＩＳ １３
９８９（配列番号：３７）であることを実証する。ＩＳ
ＩＳ １３９８９と同じ核酸塩基配列を有するが、付加
的な化学修飾を有する“第２世代”オリゴヌクレオチド
を設計し、合成して、これらの研究結果を確認し、拡大
した。表４に詳述したように、ＩＳＩＳ １７０５０、
１７０５１、１７０５２、１７０５３及び２０３８０は
ＩＳＩＳ １３９８９と同じ核酸塩基配列を有する“ギ
ャップマー”であり、これらのオリゴヌクレオチドの全
ては２’−メトキシエトキシ・フランク又は“ウィン
グ”と、ターゲットｍＲＮＡ分子に対するＲＮアーゼＨ
活性を支持するように設計された中央２’−デオキシ
“ギャップ”とを有する。ＩＳＩＳ １７０４９と１７
０５４とはＩＳＩＳ １３９８９と同じ核酸塩基配列を
有し、２’−メトキシエトキシ、ＲＮアーゼＨ−無反応
性３’若しくは５’第１部分及び、２’−デオキシ残基
を含む、それぞれ、５’若しくは３’第２部分（“ウィ
ング”）を有するするヘミマーである。ギャップマーの
中央“ギャップ”部分と同様に、ヘミマーのオリゴヌク
レオチドの第２、２’−デオキシ部分はターゲットＰＥ
ＣＡＭ−１ｍＲＮＡに対するＲＮアーゼＨ活性を支持す
るように設計される。これらのオリゴヌクレオチドの
２’−メトキシエトキシ部分（“ウィング”）はまた、
５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）残基を含有する。
【０１９２】Ｂ．第２世代ネズミＰＥＣＡＭ−１オリゴ
ヌクレオチドの活性： ＩＳＩＳ１３９８９（配列番
号：３７）の化学修飾誘導体を下記修飾によって上述し
たＰＥＣＡＭ−１タンパク質アッセイ（ＦＡＣＳ（登録
商標））において試験した：オリゴヌクレオチドを５０
ｎＭの最終濃度まで細胞に加えて、２４ｈにおいて分析
のためにサンプルを採取した。結果は表１５に示す。ネ
ズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする化学修飾アンチ
センス・オリゴヌクレオチドは、親ホスホロチオエート
・アンチセンス化合物ＩＳＩＳ １３９８９と同じ又は
より大きい程度に（ｔ＝２４ｈにおけるＰＥＣＡＭ−１
レベルの≧約５０％から１００％までの阻害レベルによ
って分かるように、この場合、“約”は±５％を意味す
る）ＰＥＣＡＭ−１発現をモジュレートするそれらの能
力のために、本発明の好ましい実施態様である。ＩＳＩ
Ｓ １７０４９、１７０５０、１７０５１、１７０５
２、１７０５３及び１７０５４が好ましい。ｔ＝２４ｈ
においてＰＥＣＡＭ−１レベルの≧約７０％から１００
％までの阻害レベルを生じるようなアンチセンス化合
物、即ち、ＩＳＩＳ １７０５０、１７０５１、１７０
５２及び１７０５３が特に好ましい。
【０１９３】表１５ ネズミＰＥＣＡＭ−１をターゲットとする“第２世代”
アンチセンス・オリゴヌクレオチドの活性
【表２０】 1 ５０ｎＭ（最終濃度）の指示オリゴヌクレオチドに
よって処理したｂＥＮＤ．３細胞；ｔ＝２４ｈにおいて
採取したサンプル。
【０１９４】実施例８： ＰＥＣＡＭ−１のアンチセン
ス・モジュレーションのための動物モデル 本発明は、白血球のトランスマイグレーションをモジュ
レートし、それによって、望ましくない関連免疫応答、
例えば炎症を制御するための組成物及び方法を提供す
る。細胞トランスマイグレーションをモジュレートす
る、本発明のアンチセンス化合物の能力を試験するため
に、チオグリコレートの代わりにリポ多糖（ＬＰＳ）を
用いる、Ｗａｔｓｏｎ等のチオグリコレート(thioglyco
llate)誘導腹膜炎モデルの変形（Ｎａｔｕｒｅ，１９９
１，３４９，１６４；Ｌｉａｏ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，１９９７，１８５，１３４９及びＢｏｇｅｎ等，
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９４，１７９，１０５９を
も参照のこと）を用いた。雌Ｃ５７Ｂｌａｃｋ６マウス
の群（ｎ＝５／群）に生理食塩水又は種々な用量（０．
３、１、３、１０又は３０ｍｇ／ｋｇ）のアンチセンス
・オリゴヌクレオチドをｉ．ｖ．１日１回によって７日
間投与して、ｉ．ｐ．投与したサルモネラ・チフス（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｏｓａ）からのＬＰＳ
（ＤＩＦＣＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｉｖｏｎｉ
ａ，ＭＩ）２５μｇ／マウスによって試験した(challen
ged)。１８時間後に、腹膜洗浄を行って、細胞をＣＹＴ
ＯＳＰＩＮ（登録商標）細胞遠心分離機(cytocentrifug
es)（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｌｉｐｓｈａｗ，Ｐｉｔｔｓｂ
ｕｒｇｈ，ＰＡ）を用いて調製した。腹膜液(peritonea
l fluid)中に存在する多形核好中球(polymorphonuclear
neutrophil granulocytes)（ＰＭＮｓ）の割合を測定
するために、細胞をＷｒｉｇｈｔ／Ｇｉｅｍｓａステイ
ン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）によって染色して、ＰＭＮｓを含め
た、多様な種類の細胞をカウントした。
【０１９５】結果（表１６）は、ＩＳＩＳ １３９８９
（配列番号：３７）による処理が腹膜液中へのＰＭＮｓ
のトランスマイグレーションを減じたことを示す。詳し
くは、３ｍｇ／ｋｇの用量において、ＰＭＮｓの絶対割
合は約７０％に低下した、この場合“約”は±５％を意
味する。１０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で
は、ＩＳＩＳ １３９８９によって処理された動物はそ
れぞれ約４０％及び２５％の腹膜ＰＭＮ％を有した。こ
れとは対照的に、ＩＳＩＳ １３９８９のスクランブル
対照であるＩＳＩＳ １４４４９によって処理された動
物は３ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇの用量において、
それぞれ、約６５％及び５５％のＰＭＮレベルを示し
た。これらの結果は、白血球トランスマイグレーション
及び望ましくない関連免疫応答をモジュレートする、本
発明のアンチセンス化合物の能力を実証する。
【０１９６】表１６ 腹膜炎の動物モデルにおけるＰＥＣＡＭ−１をモジュレ
ートするアンチセンス化合物の活性
【表２１】
【０１９７】実施例９： 治療方法 本発明のアンチセンス化合物はｉｎ ｖｉｖｏにおいて
免疫抑制効果及び抗炎症効果を生じるので、このような
効果を必要とするヒトを含めた動物に予防的、緩和的及
び治療的利益を与えるために当業者によって用いること
ができる。本発明のアンチセンス化合物は癌細胞の転移
を阻害する、それらの能力に関しても評価され、過度増
殖性障害からの予防的、緩和的及び治療的解放を生じる
ために用いられる。本発明のアンチセンス化合物を用い
る治療方法は、非限定的に、下記例を包含する。
【０１９８】Ａ．望ましくない免疫応答イベントのモジ
ュレーション： 本発明は動物においてＰＥＣＡＭ−１
によって直接的又は間接的に仲介される又は影響される
免疫応答イベントをモジュレートする方法を提供する。
このような免疫応答イベントは例えば炎症のような望ま
しくない効果をもたらしうる。ＰＥＣＡＭ−１によって
仲介される又は影響される免疫応答イベントをモジュレ
ートする方法は、動物に必要な場合に製薬的製剤として
本発明の１種類以上のアンチセンス化合物（又はそれら
と、１種類以上の抗炎症性又は免疫抑制性非アンチセン
ス性(non-antisense-based)作用剤又はＮＡＢＡｓとの
組み合わせ；後記参照）を投与することを含む。本発明
のアンチセンス化合物に関する幾つかの特異的治療形式
を例として次に挙げるが、これらは本発明の範囲を限定
することを意図しない。
【０１９９】１．血管外遊出： 本発明は、動物に必要
な場合に製薬的製剤として本発明の１種類以上のアンチ
センス化合物又はそれらと、１種類以上の抗炎症性又は
免疫抑制性非アンチセンス性作用剤との組み合わせを投
与することを含む、動物におけるＰＥＣＡＭ−１仲介血
管外遊出をモジュレートする方法を提供する。血管外遊
出、循環系から損傷組織又は感染組織への免疫応答細胞
（例えば、白血球）の経内皮マイグレーション(transen
dothelial migration)は、炎症性損傷における重要なイ
ベントであると考えられる（レビューに関しては、Ａｌ
ｂｅｌｄａ等，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９９４，８，５０４
参照）。幾つかの系統の証拠は、ＰＥＣＡＭ−１が、例
えば、多形核好中球（ＰＭＮｓ又は好中球）及び例えば
単球のような一部のマクロファージを包含する白血球(w
hite blood cells)と、例えばナチュラル・キラー（Ｎ
Ｋ）細胞及びＴリンパ球（Ｔ細胞）のようなリンパ球の
ような、一部の細胞の血管外遊出に関して特に重要であ
ることを示唆する。第一に、ＰＥＣＡＭ−１に対する抗
体は、好中球（Ｖａｐｏｒｃｉｙａｎ等，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，１９９３，２６２，１５８０）、単球（Ｍｕｌｌｅ
ｒ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９３，１７８，４４
９；Ｓｈｅｎ等，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９９
６，２７０，Ｈ１６２４）、白血球（Ｍｕｌｌｅｒ，Ａ
ｇｅｎｔｓＡｃｔｉｏｎｓ Ｓｕｐｐｌ．，１９９５，
４６，１４７）及びＮＫ細胞（Ｂｅｒｍａｎ等，Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５６，１５１５）のトラ
ンスマイグレーションを阻止する。第二に、ＰＥＣＡＭ
−１の一部に対応するポリペプチドはｉｎ ｖｉｔｒｏ
とｉｎ ｖｉｖｏの両方においてＰＭＮｓと単球との経
内皮マイグレーションを阻止する（Ｌｉａｏ等、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８５，１３４９）。動物
に必要な場合に適当な薬剤組成物の一部として、本発明
のアンチセンス化合物を投与することは、血管外遊出と
その後の好ましくない免疫応答イベント、例えば炎症及
び炎症性損傷を抑制すると期待される。このような処理
は１種類以上の抗炎症性及び／又は免疫抑制性ＮＡＢＡ
ｓと、また付加的又は代替的に、例えばＣＡＭタンパク
質、Ｂ７タンパク質又はタンパク質キナーゼＣをターゲ
ットとする１種類以上の付加的なアンチセンス化合物と
組み合わせることができる（後記参照）。このような投
与は全身的又は、血管外遊出、炎症及び／又は炎症性損
傷の部位（単数又は複数）に直接的であることができ
る。本発明のアンチセンス化合物を、例えば、このセク
ションに挙げた参考文献中に記載されたアッセイ、Ｌｕ
ｓｃｉｎｓｋａｓ等のｉｎ ｖｉｔｒｏフローモデル(f
low model)（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５
７，３２６）、Ｂｅｎｎｅｔｔ等への米国特許第５，５
１４，７８８号（本明細書に援用される）の実施例２２
に記載されたカラジーナン浸漬スポンジを用いるマウス
モデル及び／又は他の関連動物モデルを用いて、血管外
遊出とその後の好ましくない炎症及び／又は炎症性損傷
とをモジュレートする、それらの能力に関して評価す
る。
【０２００】２．急性炎症： 本発明はまた、動物に必
要な場合に薬剤製剤として、１種類以上の本発明のアン
チセンス化合物又はそれらと、１種類以上の抗炎症剤又
は免疫抑制剤との組み合わせを投与することを含む、動
物における例えば腹膜炎で生じるような急性炎症をモジ
ュレートする方法を提供する。ＰＥＣＡＭ−１に対する
ネズミ・モノクローナル抗体は腹膜炎のｉｎ ｖｉｖｏ
（ネズミ）モデルにおいて急性炎症を阻止し（Ｂｏｇｅ
ｎ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９４，１７９，１０
５９）、同様に、ウサギ・ポリクローナル抗体はネコに
おけるグリコーゲン誘導腹膜炎において白血球トランス
マイグレーションを阻害する（Ｍｕｒｏｈａｒａ等，
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５６，３５５
０）。動物に必要な場合に、適当な薬剤組成物の一部と
して、本発明のアンチセンス化合物を投与することは、
望ましくない急性炎症とその結果の炎症性損傷とを阻害
すると期待される。このような投与は全身的であること
も、炎症の部位（単数又は複数）に直接的であることも
できる。このような処理は１種類以上の抗炎症性及び／
又は免疫抑制性ＮＡＢＡｓと、また付加的又は代替的
に、ＣＡＭタンパク質、Ｂ７タンパク質又はタンパク質
キナーゼＣをターゲットとする１種類以上の付加的なア
ンチセンス化合物と組み合わせることができる（後記参
照）。本発明のアンチセンス化合物を、例えば、このセ
クションに挙げた参考文献中に記載されたアッセイ、又
は当該技術分野において知られたアッセイ及び／又は適
当な動物モデルを用いて、急性炎症とその後のイベント
とをモジュレートする、それらの能力に関して評価す
る。
【０２０１】３．角膜炎症： 本発明はまた、動物に必
要な場合に薬剤製剤として、１種類以上の本発明のアン
チセンス化合物又はそれらと、１種類以上の抗炎症剤又
は免疫抑制剤との組み合わせを投与することを含む、動
物における角膜炎症の治療方法を提供する。ＰＥＣＡＭ
−１は、広範囲な角膜炎症性疾患からの標本中の明確な
炎症帯に発見されると述べられている（Ｇｏｌｄｂｅｒ
ｇ，Ｏｐｔｈａｍｏｌｏｇｙ，１９９４，１０１，１６
１）。動物に必要な場合に、適当な薬剤組成物の一部と
して、本発明のアンチセンス化合物を投与することは、
望ましくない角膜炎症とその結果の炎症性損傷とを阻害
すると期待される。このような投与は全身的であること
も、炎症を示す角膜（単数又は複数）に直接的であるこ
ともできる。このような処理は１種類以上の抗炎症性及
び／又は免疫抑制性ＮＡＢＡｓと、また付加的又は代替
的に、ＣＡＭタンパク質、Ｂ７タンパク質又はタンパク
質キナーゼＣをターゲットとする１種類以上の付加的な
アンチセンス化合物と組み合わせることができる（後記
参照）。本発明のアンチセンス化合物を、当該技術分野
において知られた１種類以上のアッセイ及び／又は１種
類以上の適当な動物モデルを用いて、角膜炎症とその後
のイベントとをモジュレートする、それらの能力に関し
て評価する。
【０２０２】４．同種移植片拒絶とＧＶＨＤ： 本発明
は、動物に必要な場合に、薬剤製剤として本発明の１種
類以上のアンチセンス化合物又はそれらと、１種類以上
の抗炎症剤又は免疫抑制剤との組み合わせを投与するこ
とを含む、動物における対宿主移植片病（ＧＶＨＤ）の
治療又は予防を含めた、同種移植片拒絶を回避する方法
をも提供する。少なくとも１つの研究は、ヒトＰＥＣＡ
Ｍ−１をコードする核酸が多形性であること、ドナーと
レシピエントとのＰＥＣＡＭ−１遺伝子型が骨髄移植片
においてマッチしないときには、急性ＧＶＨＤの危険性
が増大することを示唆する（Ｂｅｈａｒ等，Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．，１９９６，３３４，２８
６）。したがって、１種類以上の本発明のＰＥＣＡＭ−
１モジュレーティングアンチセンス化合物（必要な場合
には、他の作用剤と組み合わせて、適当な薬剤組成物の
一部として）を動物に投与することは、同種移植片拒絶
とＧＶＨＤをモジュレートすると期待される。
【０２０３】このような投与は全身的であることも、移
植された組織（単数又は複数）若しくは器官（単数又は
複数）の領域（単数又は複数）に直接的であることもで
きる、又はｅｘ ｖｉｖｏにおいて組織（単数又は複
数）若しくは器官（単数又は複数）にそれらの移植前に
投与されることもできる。このような治療は、１種類以
上の抗炎症性及び／又は免疫抑制性ＮＡＢＡｓと、また
付加的又は代替的に、ＣＡＭタンパク質、Ｂ７タンパク
質又はタンパク質キナーゼＣをターゲットとする１種類
以上の付加的なアンチセンス化合物と組み合わせること
ができる（後記参照）。本発明のアンチセンス化合物
を、当該技術分野において知られた１種類以上のアッセ
イ及び／又は１種類以上の適当な動物モデルを用いて、
同種移植片拒絶をモジュレートする、それらの能力に関
して評価する（例えば、Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ等，Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５３，５３３６；及び
Ｂｅｎｎｅｔｔ等への米国特許第５，５１４，７８８号
（本明細書に援用される）の実施例２１参照）。
【０２０４】５．関節炎： 本発明は、動物に必要な場
合に、薬剤製剤として本発明の１種類以上のアンチセン
ス化合物又はそれらと、１種類以上の抗炎症剤又は免疫
抑制剤との組み合わせを投与することを含む、動物にお
ける種々な形態の関節炎の治療方法をも提供する。この
ような投与は全身的であることも、例えば滑液のような
関与組織に直接的であることもできる。ＥＬＡＭ−１、
ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１及びＰＥＣＡＭ−１を含め
たＣＡＭｓの増大した発現が、（慢性）関節リウマチを
有する患者からの滑液中で検出されている（Ｔａｋ等，
Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏ
ｌ．，１９９５，７７，２３６）。このような形態の関
節炎は、例えば、幾つかの形態の（慢性）関節リウマチ
（ＲＡ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）及び強直性脊椎炎（Ａ
Ｓ）を含めた自己免疫形の関節炎；ＲＡ、ＰＡ、及びＡ
Ｓの非自己免疫形；例えば、スピロヘータ（ｓｐｉｒｏ
ｃｈｅｔｅｓ）による感染（ＬＤ又はライム（Ｌｙｍ
ｅ）関節炎としても知られるライム病はボレリア・ブル
グドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅ
ｒｉ）によって生じ、ライター（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ）症
候群（ＲＳ）の幾つかの実例はクラミジア・トラコマチ
ス（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）に関
係するように思われる）、細菌感染（ブドウ球菌、例え
ば、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈｅｍｏｐｈｉｌ
ｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ストレプトコッカス
（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍ
ｏｃｏｃｃｉ）、グラム陰性菌等）、ウイルス感染（例
えば、風疹（ｒｕｂｅｌｌａ）、おたふくかぜ（ｍｕｍ
ｐｓ）、ヒト パルボウイルス（ｐａｒｖｏｖｉｒｕ
ｓ）又はＢ型肝炎）、及び／又は真菌感染（例えば、ス
ポロトリックス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ
ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、コクシジオイデス・イミチス
（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラ
ストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ
ｄｅｒｍａｔｉｄｉｄｉｓ）又はカンジダ・アルビカ
ンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ））から生じ
るような感染性関節炎を包含する（Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ，第１５版，１２３９〜１２６７頁，Ｂｅ
ｒｋｏｗ等編集，Ｒａｈａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９８７参
照）。このような治療は１種類以上の付加的なアンチセ
ンス化合物又は抗炎症性及び／又は免疫抑制性ＮＡＢＡ
ｓと組み合わせることができ、治療すべき関節炎が病原
体による動物の感染に少なくとも部分的に起因する場合
には、付加的に又は代替的に、１種類以上の抗生物質と
組み合わせることができる（後記参照）。本発明のアン
チセンス化合物を、当該技術分野において知られた１種
類以上のアッセイ及び／又は１種類以上の適当な動物モ
デルを用いて、関節炎とそれらに起因する炎症性損傷と
をモジュレートする、それらの能力に関して評価する
（例えば、Ｂｅｎｏｉｓｔ等への公開ＰＣＴ出願第ＷＯ
９５／３２２８５号参照）。
【０２０５】６．腸の炎症性障害： 本発明はまた、動
物に必要な場合に、薬剤製剤として本発明の１種類以上
のアンチセンス化合物又はそれらと、１種類以上の抗炎
症剤又は免疫抑制剤との組み合わせを投与することを含
む、動物における腸の種々な炎症性障害の治療方法をも
提供する。このような障害は例えばクローン（Ｃｒｈ
ｎ’ｓ）病（ＣＤ）と他の形態の限局性腸炎；及び潰瘍
性大腸炎（ＵＣ）と、肉芽腫性、虚血性及び放射線(rad
iation)大腸炎とを含めた、種々な形態の大腸炎を包含
する（Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉ
ａｇｎｏｓｉｓａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，第１５版，７
９７〜８０６頁，Ｂｅｒｋｏｗ等編集，Ｒａｈａｙ，
Ｎ．Ｊ．，１９８７参照）。このような治療は１種類以
上の付加的なアンチセンス化合物又は抗炎症性及び／又
は免疫抑制性ＮＡＢＡｓと組み合わせることができる
（後記参照）。本発明のアンチセンス化合物を、当該技
術分野において知られた１種類以上のアッセイ及び／又
は１種類以上の適当な動物モデルを用いて、腸の炎症性
障害をモジュレートする、それらの能力に関して評価す
る（例えば、Ｏｋａｙａｓｕ等，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅ
ｒｏｌ．，１９９０，９８，６９４，及びＢｅｎｎｅｔ
ｔへの米国特許第５，５１４，７８８号（本明細書に援
用される）の実施例２０参照）。
【０２０６】７．自己免疫疾患及び障害： 本発明はま
た、非限定的に、自己免疫性甲状腺障害(autoimmune th
yroid disorders)；自己免疫形の関節炎；多発性硬化症
（ＭＳ）；幾つかの形態の若年型真性糖尿病；重症筋無
力症；尋常性天疱瘡；及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ又
は狼瘡）を含めた、種々な自己免疫疾患及び障害の治療
方法をも提供する（自己免疫障害のレビューのために
は、Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｓｃｉ．Ａｍｅｒ．，１９９
３，２６９，１０７参照）。本発明の好ましい実施態様
は自己免疫性甲状腺障害、例えばグレーヴズ（Ｇｒａｖ
ｅｓ’）病（甲状腺中毒症）、橋本病及びド・ケルヴァ
ン甲状腺炎（ｄｅ Ｑｕｅｒｖａｉｎ ｔｈｙｒｏｉｄ
ｉｔｉｓ）の治療又は予防を包含する、というのは、Ｐ
ＥＣＡＭ−１がこのような状態に関与する細胞上に発現
することが観察されているからである（Ｍａｒａｚｕｅ
ｌａ等，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９
５，１０２，３２８；Ａｕｂｅｒｔ等，Ｃｌｉｎ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，１９９５，
７６，１７０）。動物に必要な場合に適当な薬剤組成物
の一部として、本発明のアンチセンス化合物を投与する
ことは、自己免疫疾患とそれに続く望ましくないイベン
トとの発生を予防又は阻害すると期待される。このよう
な治療は１種類以上の抗炎症性及び／又は免疫抑制性Ｎ
ＡＢＡｓと、また付加的又は代替的に、例えばＣＡＭタ
ンパク質、Ｂ７タンパク質又はタンパク質キナーゼＣを
ターゲットとする１種類以上の付加的なアンチセンス化
合物と組み合わせることができる（後記参照）。このよ
うな投与は、障害の性質に依存して、全身的又は特定の
組織に直接的であることができる。例えば、ＳＬＥに対
しては全身投与の方が適切であると考えられるが、グレ
ーヴズ病の場合には甲状腺又は隣接組織への直接投与が
より効果的であると考えられる。本発明のアンチセンス
化合物を、当業者に知られた適当なアッセイ及び動物モ
デルを用いて、自己免疫疾患を予防又は阻害する、それ
らの能力に関して評価する（例えば、Ｂｕｒｋｈａｒｄ
ｔ等，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．，１９９７，１
７，９１参照）。
【０２０７】Ｂ．心血管系障害： 本発明は、心血管系
損傷中若しくは後又は心血管系疾患若しくは障害の経過
中の動物においてＰＥＣＡＭ−１によって直接的又は間
接的に仲介又は影響される望ましくないイベントをモジ
ュレートする方法を提供する。ＰＥＣＡＭ−１によって
仲介又は影響される免疫応答性イベントをモジュレート
する方法は、動物に必要な場合に適当な薬剤製剤とし
て、本発明の１種類以上のアンチセンス化合物を投与す
ることを含む。本発明のアンチセンス化合物の幾つかの
特定の治療形式を例として以下に挙げるが、これらは本
発明の範囲を限定することを意図しない。
【０２０８】１．心筋虚血／再灌流損傷(reperfusion i
njury)： 本発明は、動物に必要な場合に、薬剤製剤と
して本発明の１種類以上のアンチセンス化合物又はそれ
らと、１種類以上の抗炎症剤又は免疫抑制剤との組み合
わせを投与することを含む、動物における心筋虚血／再
灌流（ＭＩ／Ｒ）損傷を軽減又は予防する方法を提供す
る。冠状動脈再灌流は急性心筋梗塞を有する患者の効果
的な治療法である。しかし、再灌流自体はしばしば心筋
組織の損傷の増進をもたらす。虚血性心筋中へのＰＭＮ
ｓのトランスマイグレーションは心筋虚血／再灌流損傷
に何らかの関与をすると考えられる（Ｅｎｔｍａｎ等，
ＦＡＳＥＢ Ｊ．，１９９１，５，２５２９；Ｌｅｆｅ
ｒ等，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，１９９１，５，２０２９）。
ＰＥＣＡＭ−１に対する抗体はネコ及びげっ歯類モデル
においてｉｎ ｖｉｖｏでＭＩ／Ｒ損傷を緩和する（Ｇ
ｕｍｉｎａ等，Ｃｉｒｃ．，１９９６，９４，３３２
７；Ｍｕｒｏｈａｒａ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９
９６，１５６，３５５０）。動物に必要な場合に適当な
薬剤組成物の一部として、本発明のアンチセンス化合物
を投与することは、ＭＩ／Ｒ損傷をモジュレートすると
期待される。このような投与は全身的であることも、循
環系に直接的であることも可能である。このような治療
は、例えばＣＡＭタンパク質、Ｂ７タンパク質又はタン
パク質キナーゼＣをターゲットとする１種類以上の付加
的なアンチセンス化合物と組み合わせることができる
（後記参照）。本発明のアンチセンス化合物を、当該技
術分野において知られた１種類以上のアッセイ及び／又
は例えばこのセクションに挙げた参考文献に記載された
ような、１種類以上の適当な動物モデルを用いて、ＭＩ
／Ｒ損傷をモジュレートする、それらの能力に関して評
価する。
【０２０９】２．発作関連損傷： 本発明は、動物に必
要な場合に薬剤製剤として本発明の１種類以上のアンチ
センス化合物を投与することを含む、発作若しくは一連
の発作中若しくは後の動物における白血球誘導損傷を軽
減する方法、又は発作を有しやすいと知られた動物にお
ける発作からの白血球誘導損傷を予防する方法を提供す
る。発作は、脳に対する不充分な血液供給（虚血）を生
ずる脳における又は脳に至る血管の遮断(blockage)又は
出血（例えば、動脈瘤性くも膜下出血(aneurysmal suba
rachnoid hemorrhage)）である。脳虚血後に、摂動を受
けた(perturbed)血管内皮に白血球が接着して、再灌流
損傷をさらに悪化させて、最終的に場合によっては慢性
血管痙攣（即ち、動脈又は静脈の突然の狭窄）を生じ、
次には重度な、望ましくない結果をもたらしうると考え
られる。ＩＣＡＭ−１を含めた接着分子は、虚血性発作
の１８日間以内に死亡したヒト対象の脳セクションから
急性梗塞形成においてアップレギュレーションを受ける
（Ｌｉｎｄｓｂｅｒｇ等，Ｃｉｒｃ．，１９９６，９
４，９３９）。動物モデルでは、ＩＣＡＭ−１に対する
モノクローナル抗体は血管痙攣を抑制した（Ｏｓｈｉｒ
ｏ等，Ｓｔｒｏｋｅ，１９９７，２８，２０３１）。動
物に必要な場合に適当な薬剤組成物の一部として、本発
明のアンチセンス化合物を投与することは、発作関連損
傷をモジュレートすると期待される。このような投与は
全身的であることも、循環系に直接的であることも可能
である。このような治療は、ＣＡＭタンパク質、Ｂ７タ
ンパク質又はタンパク質キナーゼＣをターゲットとする
１種類以上の付加的なアンチセンス化合物と組み合わせ
ることができる（後記参照）。或いは、本発明のこの方
法では、ＣＡＭタンパク質、Ｂ７タンパク質又はタンパ
ク質キナーゼＣをターゲットとする化合物をＰＥＣＡＭ
−１をターゲットとするアンチセンス化合物なしに用い
ることも、相互に組み合わせて用いることもできる。本
発明のアンチセンス化合物を、当該技術分野において知
られた１種類以上のアッセイ及び／又は例えばこのセク
ションに挙げた参考文献に記載されたような、１種類以
上の適当な動物モデルを用いて、発作関連損傷をモジュ
レートする、それらの能力に関して評価する。
【０２１０】Ｃ．過度増殖性障害の治療： 良性腫瘍及
び、発生過程で早期に検出された原発性悪性腫瘍を有す
る患者はしばしば該良性腫瘍又は該原発性腫瘍の手術に
よる除去によって上首尾に治療されることができる。し
かし、検査されない場合には、悪性腫瘍からの細胞は侵
襲及び転移によって患者の身体全体に広がる。侵襲は癌
細胞が付着した原発性部位から分離して、例えば下方に
横たわる基底膜に浸透する能力を意味する。転移は、
（１）癌細胞が細胞外マトリックスから分離して、
（２）分離癌細胞がしばしば循環系を介して患者の身体
の別の部分にマイグレートし、（３）遠位の不適当な(i
nappropriate)細胞外マトリックスに付着して、それに
よって二次腫瘍が発生する病巣を形成する、一連のイベ
ントを意味する。正常な細胞は、このようなイベントが
生じるとしても、侵襲又は転移する及び／又はアポプト
シス（プログラムされた(programmed)細胞死）を受ける
能力を有さない（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｓｃｉ．Ａｍｅ
ｒ．，１９９６，２７５，７２）。
【０２１１】散在性(disseminating)前癌細胞又は癌細
胞は、上述した転移プロセスの段階（３）を促進しうる
接着分子の異所性発現をしばしば示す。このような接着
分子の例はＩＣＡＭ−１、ＰＥＣＡＭ−１及び他のＣＡ
Ｍｓを包含する（レビューに関しては、Ｔａｎｇ等，Ｉ
ｎｖａｓｉｏｎ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１９９４，１
４，１０９参照）。したがって、本発明のアンチセンス
化合物を用いた１種類以上のＣＡＭｓのモジュレーショ
ンは遠位及び／又は不適当なマトリックスに付着する散
在性癌細胞の能力を低下させて、それによって原発性腫
瘍の転移をモジュレートすることができる。さらに、Ｐ
ＥＣＡＭ−１は細胞−細胞相互作用に関与する他の分子
の発現及び／又は活性の調節をも明らかに助けるので
（Ｌｉｔｗｉｎ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９９
７，１３９，２１９）、本開示のオリゴヌクレオチドに
よるＰＥＣＡＭ−１のモジュレーションは、細胞−細胞
相互作用に関与する分子の発現のモジュレーションをも
生じて、さらに腫瘍の転移能力を制限する。
【０２１２】したがって、本発明は、動物に必要な場合
に薬剤製剤として１種類以上の本発明のアンチセンス化
合物を投与することを含む、動物における転移をモジュ
レートする又は予防する方法をも提供する。このような
治療は１種類以上の付加的なアンチセンス化合物又は抗
癌性化学療法ＮＡＢＡｓと組み合わせることができる
（後記参照）。本発明のアンチセンス化合物を、当該技
術分野において知られた１種類以上のアッセイ及び／又
は１種類以上の適当な動物モデルを用いて転移をモジュ
レートする、それらの能力に関して評価する（例えば、
Ｂｅｎｎｅｔｔ等への米国特許第５，５１４，７８８号
（本明細書に援用される）の実施例１６〜１８参照）。
他の例として、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，
ＭＤ）からの細胞系番号ＣＲＬ−１１４４８は、免疫欠
損マウスにおいて転移性腫瘍を形成するカポージ肉腫を
有する患者に由来するＰＥＣＡＭ−１／ＣＤ３１+内皮
細胞系である。ＣＲＬ−１１４４８を用いて、ＰＥＣＡ
Ｍ−１をターゲットとする本発明のアンチセンス化合物
がｉｎ ｖｉｖｏにおいて転移イベントをモジュレート
する能力を評価することができる。
【０２１３】Ｄ．異常な脈管形成のモジュレーション：
脈管形成、既存脈管からの新たな血管の形成は腫瘍増
殖の必要条件である、この理由は腫瘍が、腫瘍組織の栄
養的必要条件を支持するための新血管の形成なしには、
極めて小さいサイズを超えて増殖することも、転移する
こともできないからである。脈管形成阻害剤は抗腫瘍薬
としての使用に関して評価されている。制御されない脈
管形成は眼においても生じて、視力低下(loss of visio
n)を惹起する可能性がある。この例は、早期(prematuri
ty)の網膜症、糖尿病性網膜症、及び眼の他の血管閉塞
性疾患を包含する。過度の脈管形成は（慢性）関節リウ
マチを有する患者の滑膜組織(synovialtissue)及び乾癬
性病巣(psoriatic lesions)においても生じる。したが
って、ターゲットとしてＰＥＣＡＭ−１を用いる脈管形
成の阻害が望ましい。ある一定の他の状態では、例え
ば、アテローム性硬化症によって遮断された脈管を迂回
するために脈管形成の増加が望ましい。したがって、
“異常な”脈管形成とは過度若しくは不充分な脈管形
成、又は望ましくない脈管形成（例えば、腫瘍増殖を支
持する脈管形成の場合と同様）を意味することができ
る。
【０２１４】Ｅ．組み合わせ療法と組成物 望ましくない障害又は疾患の防止又は予防の必要なレベ
ルに達するために、必要な場合には、ＰＥＣＡＭ−１
（又は他のＣＡＭ）の発現の治療的アンチセンス・モジ
ュレーションに付加的な療法を組み合わせることができ
る。このような組み合わせは、例えば、（ａ）２種類以
上のＣＡＭｓをターゲットとする２種類以上のアンチセ
ンス化合物、又は（ｂ）２種類以上のアンチセンス化合
物、ＣＡＭをターゲットとするものと、別の遺伝的ター
ゲットに対するもの；又は（ｃ）炎症を有する動物を治
療する場合に、ＣＡＭをターゲットとするアンチセンス
化合物と、非アンチセンス性抗炎症剤又は免疫抑制剤と
の組み合わせを同時に投与することによって実施するこ
とができる。過度増殖性疾患又は障害を有する動物を治
療すべき場合には、ＣＡＭをターゲットとするアンチセ
ンス化合物を非アンチセンス性化学療法剤と組み合わせ
ることができる。本発明のアンチセンス化合物と共に用
いる場合には、このような非アンチセンス性作用剤（Ｎ
ＡＢＡｓ）を単純な組み合わせ（例えば、ＮＡＢＡとア
ンチセンス化合物との投与）として、連続的に（例え
ば、第１ＮＡＢＡとアンチセンス化合物とを一定期間投
与した後に、第２ＮＡＢＡとアンチセンス化合物とを投
与する）、又は１種類以上の他のこのような非アンチセ
ンス性作用剤又は物理的治療の組み合わせ（例えば、Ｎ
ＡＢＡとアンチセンス化合物との投与、又は例えば過度
増殖性障害の治療では、１種類以上のＮＡＢＡｓ及びア
ンチセンス化合物と、放射線療法との組み合わせ）とし
て用いることができる。２種類（又は２種類以上）のア
ンチセンス化合物又は１種類以上のアンチセンス化合物
と１種類以上のＮＡＢＡｓとの組み合わせを治療計画に
おいて同時に投与すべき場合には、１つの好ましい組成
物は両方の（又は全ての）化合物を含む脂質小胞、特に
立体的に安定化した脂質小胞を含む組成物である。本発
明に関連して、“治療計画”なる用語は治療的、緩和的
及び予防的形式を包含する意味である。
【０２１５】１．アンチセンス化合物の組み合わせ：
上述したように、２種類以上のアンチセンス化合物を同
時に投与することができる。組み合わせ治療を最初に
（１）１種類以上のＣＡＭｓをターゲットとする１種類
以上のアンチセンス化合物（又はそれらと１種類以上の
抗炎症／免疫抑制剤又は化学療法剤との組み合わせ）を
含む第１組成物を第１期間にわたって投与し、次に
（２）１種類以上のＣＡＭｓをターゲットとする１種類
以上のアンチセンス化合物（又はそれらと１種類以上の
抗炎症剤又は化学療法剤との組み合わせ）を含む第２組
成物の第２期間にわたる投与に“切り替える”ことによ
っても行うことができる。同時に投与する、又は連続的
に投与するのいずれにせよ、アンチセンス化合物の好ま
しいペアリング(pairing)は、例えば（１）ＰＥＣＡＭ
−１とＩＣＡＭ−１；（２）ＰＥＣＡＭ−１とＶＣＡＭ
−１；（３）ＰＥＣＡＭ−１とＥＬＡＭ−１；（４）Ｐ
ＥＣＡＭ−１と、例えばＢ７−１又はＢ７−２のような
Ｂ７タンパク質；（５）ＩＣＡＭ−１とＶＣＡＭ−１；
（６）ＩＣＡＭ−１とＥＬＡＭ−１；（７）ＩＣＡＭ−
１とＢ７タンパク質；（８）ＶＣＡＭ−１とＥＬＡＭ−
１；（９）ＶＣＡＭ−１とＢ７タンパク質；（１０）Ｅ
ＬＡＭ−１とＢ７タンパク質のような、細胞接着を仲介
する分子をターゲットとするものを包含する。ＩＣＡＭ
−１、ＶＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１及びＢ７タンパク質
をターゲットとするアンチセンス化合物は、米国特許第
５，５１４，７８８号と第５，５９１，６２３号、及び
同時係属米国特許出願第０８／７７７，２６６号（１９
９６年１２月３１日出願）（これらの全てはＢｅｎｎｅ
ｔｔ等へ）に記載されている。
【０２１６】タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）はＰＥＣ
ＡＭ−１リン酸化及び活性化に必要であるか、又は少な
くとも関与するように思われる（Ｚｅｈｎｄｅｒ等，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，２６７，５２４
３；Ｌａｓｔｒｅｓ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９
４，１５３，４２０６；Ｓｈｅｎ等，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ．，１９９６，２７０（Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒ
ｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，３９），Ｈ１６２４）ので、本
発明のＰＥＣＡＭ−１をターゲットとするアンチセンス
化合物と、ＰＫＣをターゲットとするアンチセンス化合
物との組み合わせは特に効果的であると考えられ、本発
明の好ましい実施態様である。ＰＫＣをターゲットとす
るアンチセンス化合物はＣｏｏｋ等への米国特許第５，
６２０，９６３号及びＢｏｇｇｓ等への第５，６８１，
７４７号に記載されている。例えばスタウロスポリンの
ような、ＰＫＣを阻害するＮＡＢＡｓを本発明のアンチ
センス化合物と組み合わせて付加的に又は代替的に用い
ることができる。当業者はアンチセンス化合物のさらに
複雑な組み合わせ、即ち、３種類以上のアンチセンス化
合物を投与すること以外は、上述したような方法と組成
物とを用意して、試験することができる。
【０２１７】２．化学療法剤との組み合わせ： 過度増
殖性障害を治療するために、本発明のアンチセンス化合
物を非アンチセンス性(non-antisense-based)化学療法
剤と組み合わせて付加的に又は代替的に用いることがで
きる。本発明のアンチセンス化合物と組み合わせて用い
ることができる、このような化学療法剤の例は、非限定
的に、ダウノルビシン、ダウノマイシン、ダクチノマイ
シン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン(i
darubicin)、エソルビシン、ブレオマイシン、マホスフ
ァミド(mafosfamide)、イホスファミド、シトシン、ア
ラビノシド、ビス−クロロエチルニトロソ尿素、ブスル
ファン、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、ミス
ラマイシン、プレドニソン、ヒドロキシプロゲステロ
ン、テストステロン、タモキシフェン、ダカルバジン(d
acarbazine)、プロカルバジン、ヘキサメチルメラミ
ン、ペンタメチルメラミン、ミトキサントロン、アムサ
クリン(amsacrine)、クロラムブシル(chlorambucil)、
ナイトロジェンマスタード、メチルシクロヘキシルニト
ロソ尿素、メルファラン(melphalan)、シクロホスファ
ミド、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタ
ラビン（ＣＡ）、５−アザシチジン、ヒドロキシ尿素、
デオキシコフォルマイシン、５−フルオロウラシル（５
−ＦＵ）、４−ヒドロキシペルオキシシクロホスホルア
ミド、５−フルオロデオキシウリジン（５−ＦＵｄ
Ｒ）、メトトレキセート（ＭＴＸ）、コルヒチン、ビン
クリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、トリメトレ
キサート、テニポシド、シスプラチン及びジエチルスチ
ルベストロール（ＤＥＳ）を包含する（一般的には、Ｔ
ｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏ
ｓｉｓａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，第１５版，１２０６〜
１２２８頁，Ｂｅｒｋｏｗ等編集，Ｒａｈａｙ，Ｎ．
Ｊ．，１９８７参照）。
【０２１８】３．抗炎症／免疫抑制剤との組み合わせ：
本発明のアンチセンス化合物と組み合わせて用いるこ
とができる非アンチセンス性抗炎症剤又は免疫抑制剤の
例は、非限定的に、サリチレート；インドメタシン、イ
ブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、ナ
プロキセン、ピロキシカム、フェニルブタゾン、オキシ
フェンブタゾン、スリンダク及びメクロフェナマート(m
eclofenamate)を含めた非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳ
ＡＩＤｓ）；例えばオーラノフィンのような金化合物；
Ｄ−ペニシラミン；シクロホスファミド；メトトレキセ
ート；アザチオプリン；コルヒチン；ヒドロキシクロロ
キン；コルチコトロピン；ステロイド及び例えばヒドロ
コルチゾン、デオキシヒドロコルチゾン、フルドロコル
チゾン、プレドニソロン、メチルプレドニソロン、プレ
ドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベータ
メタゾン及びパラメタゾンのようなコルチコステロイド
を包含する。（一般的には、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａ
ｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ，第１５版，１２３９〜１２６７頁及び２４９
７〜２５０６頁、Ｂｅｒｋｏｗ等編集，Ｒａｈａｙ，
Ｎ．Ｊ．，１９８７参照）。
【０２１９】４．抗生物質との組み合わせ： 幾つかの
形態の関節炎は例えば細菌又はスピロヘータのような病
原体による動物の感染と、その後の免疫系仲介イベン
ト、例えば炎症に起因する。このような望ましくない免
疫応答を少なくとも部分的に説明することができる観察
は、関節炎関連スピロヘータ、ボレリア・ブルグドルフ
ェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）の
抽出物がｂＥＮＤ．３細胞上の幾つかの細胞接着分子
（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン及びＰ
−セレクチンを包含する）のアップレギュレーションを
誘発することであり、これは抗炎症剤プレドニソロンに
よって阻止される効果である（Ｈｕｒｔｅｎｂａｃｈ
等，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，
１９９６，１８，２８１；Ｂｏｇｇｅｍｅｙｅｒ等，Ｃ
ｅｌｌ．Ａｄｈｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９４，２，
１４５）。本発明は、必要な場合に薬剤製剤として本発
明の１種類以上のアンチセンス化合物を動物に投与する
ことを含む、動物のスピロヘータ感染を治療する方法を
提供する。
【０２２０】望ましくない炎症が病原体からの感染に起
因する場合には、抗炎症剤又は免疫抑制剤を含む或いは
抗炎症剤も免疫抑制剤も含まない本発明のアンチセンス
化合物と組み合わせて、１種類以上の抗生物質を用いる
こともできる。用いる抗生物質（単数又は複数種類）の
選択は病原体（単数又は複数種類）（即ち、例えば球
菌、バチルス等のような細菌、又はスピロヘータ）の性
質に依存する。このような抗生物質は、非限定的に、ナ
フシリン（グラム陽性球菌）；ペニシリンＧ（グラム陰
性球菌）；ゲンタマイシン及び／又はピペラシリン（グ
ラム陰性バチルス）；並びに１種類以上のテトラサイク
リン、１種類以上のペニシリン誘導体、エリスロマイシ
ン、ドキシサイクリン、クロラムフェニコール及び／又
はストレプトマイシン（例えばボレリア・ブルグドルフ
ェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）及
びトレポネーマ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａ
ｌｌｉｄｕｍ）のようなスピロヘータ）を包含する（一
般的には、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，第１５
版，１３２〜１３６頁，２３６〜２４３頁，１２３９〜
１２６７頁及び１９１８〜１９１９頁、Ｂｅｒｋｏｗ等
編集，Ｒａｈａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９８７参照）。病原体
感染に起因する望ましくない免疫応答の発生の原因及び
段階に依存して、さらに複雑な組み合わせを同時に又は
連続的に投与することが、場合によっては好ましい可能
性があることを当業者は理解するであろう。即ち、本発
明は、例えば（１）１種類以上のＣＡＭｓをターゲット
とする１種類以上のアンチセンス化合物、（２）１種類
以上の抗生物質、及び（３）１種類以上の抗炎症性／免
疫抑制性ＮＡＢＡｓを含むような、より複雑な組成物及
び治療計画を包含する。 ［図面の簡単な説明］
【図１】図１Ａ〜１Ｅは、ヒトＰＥＣＡＭ−１をコード
するｃＤＮＡの配列（配列番号：１；Ｇｅｎｂａｎｋ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ２８５２６，遺伝子座名
称“ＨＵＭＰＥＣＡＭ１”）と、実施例に述べたアンチ
センス・オリゴヌクレオチドの位置及び配列とを示す。
ｃＤＮＡ配列は５’から３’まで描かれ、１０塩基毎を
示す垂直標識を有し、配列中の塩基の累積数は各ライン
の右側に太字で記載される。出発（ＡＴＧ）コドンと終
止（ＴＡＧ）コドンとは太字で描かれ、二重下線が施さ
れる。アンチセンス・オリゴヌクレオチドのヌクレオチ
ド塩基配列は、それらの相補性を示すために３’から
５’まで描かれ、それらのＩＳＩＳ番号は各ラインの右
側に括弧内で示す。
【図２】図２は、ヒトＰＥＣＡＭ−１をコードするｃＤ
ＮＡの終止コドン領域の配列の一部（配列番号：１の塩
基２３０５〜２３９４；Ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓ
ｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ２８５２６，遺伝子座名称“ＨＵＭＰ
ＥＣＡＭ１”）と、実施例に述べた種々なアンチセンス
・オリゴヌクレオチドの位置及び配列とを示す。ｃＤＮ
Ａ配列は３’から５’まで描かれ、塩基２３５０は垂直
標識によって示され、終止コドンは太字で描かれ、下線
が施される。アンチセンス・オリゴヌクレオチドのヌク
レオチド塩基配列は、５’から３’まで描かれる。
【図３】図３は、ヒトＰＥＣＡＭ−１をコードするｃＤ
ＮＡの３’非翻訳領域の配列の一部（配列番号：１の塩
基２４３６〜２５２０）と、実施例に述べた種々なアン
チセンス・オリゴヌクレオチドの位置及び配列とを示
す。ｃＤＮＡ配列は３’から５’まで描かれ、塩基２４
５０及び２５００は垂直標識によって示される。アンチ
センス・オリゴヌクレオチドのヌクレオチド塩基配列
は、５’から３’まで描かれる。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 19/34 Ａ Ｃ１２Ｐ 19/34 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者 コンドン，トーマス・ピー アメリカ合衆国カリフォルニア州92008, カールズバッド，マーク・サークル 2450 (72)発明者 フローノイ，シン・チェン アメリカ合衆国カリフォルニア州92131, サンディエゴ，サンセット・リッジ・ド ライブ 10960 (72)発明者 ザン，ホン アメリカ合衆国カリフォルニア州92009, カールズバッド，カデンシア・ストリー ト 3339 (56)参考文献 特表 平10−502529（ＪＰ，Ａ) 特表 平５−508308（ＪＰ，Ａ) 国際公開96／019589（ＷＯ，Ａ１) Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．153 （９）， ｐ．4206−4218 （1994) Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ｏｇｙ， Ｖｏｌ．15， ｐ．537−541 （1997) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/68 A61K 31/711 A61K 48/00 A61P 1/04 A61P 9/00 A61P 19/02 A61P 29/00 A61P 35/00 A61P 43/00 C12N 15/09 C12P 19/34 ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ ＢＩＯＳＩＳ／ＣＡ／ＭＥＤＬＩＮＥ／Ｗ ＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒト血小板内皮細胞接着分子１をコード
    する核酸領域と特異的にハイブリダイズ可能である、配
    列番号：８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
    ９、２０、２１、２２、２３及び２４からなる群から選
    択される核酸塩基配列を含む、共有結合によって結合し
    た３０個までの核酸塩基から成るアンチセンス化合物で
    あって、前記ヒト血小板内皮細胞接着分子１の発現を阻
    害する前記アンチセンス化合物。
  2. 【請求項２】 ヒト血小板内皮細胞接着分子１をコード
    する核酸領域と特異的にハイブリダイズ可能な核酸塩基
    配列を含む、共有結合によって結合した１３〜３０個の
    核酸塩基から成るアンチセンス化合物であって、前記領
    域が配列番号：５５又は６８の配列を有し、前記ヒト血
    小板内皮細胞接着分子１の発現を阻害する前記アンチセ
    ンス化合物。
  3. 【請求項３】 前記核酸塩基配列が配列５’−ＧＴＧＣ
    ＡＴＣ又は５’−ＴＧＧＣＣを含む、請求項２記載のア
    ンチセンス化合物。
  4. 【請求項４】 前記核酸塩基配列が配列番号：５８、５
    ９若しくは６０の配列を含む、請求項２記載のアンチセ
    ンス化合物。
  5. 【請求項５】 前記核酸塩基配列が配列番号：１９、１
    ４、８、２２若しくは１３の配列を含む、請求項２記載
    のアンチセンス化合物。
  6. 【請求項６】 ヒト血小板内皮細胞接着分子１をコード
    する核酸領域と特異的にハイブリダイズ可能な核酸塩基
    配列を含む、共有結合によって結合した１３〜３０個の
    核酸塩基から成るアンチセンス化合物であって、前記領
    域が配列番号：６２の配列を有し、前記ヒト血小板内皮
    細胞接着分子１の発現を阻害する前記アンチセンス化合
    物。
  7. 【請求項７】 前記核酸塩基配列が配列番号：６４又は
    ６６の配列を含む、請求項６記載のアンチセンス化合
    物。
  8. 【請求項８】 前記核酸塩基配列が配列番号：６５又は
    ６７の配列を含む、請求項６記載のアンチセンス化合
    物。
  9. 【請求項９】 前記核酸塩基配列が配列番号：１０、１
    ２、２１、９若しくは１１の配列を含む、請求項６記載
    のアンチセンス化合物。
  10. 【請求項１０】 請求項１〜９のいずれか１項に記載の
    アンチセンス化合物、または、その製剤的に受容される
    塩、エステル、エステルの塩を含む薬剤組成物であっ
    て、腹膜炎を治療又は予防するための薬剤組成物。
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Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7119184B2 (en) * 1991-08-12 2006-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
US8153602B1 (en) * 1991-11-19 2012-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Composition and methods for the pulmonary delivery of nucleic acids
US7812149B2 (en) * 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US9096636B2 (en) * 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20050118605A9 (en) * 1996-06-06 2005-06-02 Baker Brenda F. Oligomeric compounds having modified bases for binding to adenine and guanine and their use in gene modulation
US20040161844A1 (en) * 1996-06-06 2004-08-19 Baker Brenda F. Sugar and backbone-surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US20040171028A1 (en) * 1996-06-06 2004-09-02 Baker Brenda F. Phosphorous-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US20040171030A1 (en) * 1996-06-06 2004-09-02 Baker Brenda F. Oligomeric compounds having modified bases for binding to cytosine and uracil or thymine and their use in gene modulation
US20040266706A1 (en) * 2002-11-05 2004-12-30 Muthiah Manoharan Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20040171032A1 (en) * 1996-06-06 2004-09-02 Baker Brenda F. Non-phosphorous-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20040161777A1 (en) * 1996-06-06 2004-08-19 Baker Brenda F. Modified oligonucleotides for use in RNA interference
US7910548B2 (en) * 1997-06-06 2011-03-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating obesity
US6277967B1 (en) 1998-07-14 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate or 2′-modified oligonucleotides having alternating internucleoside linkages
NZ513402A (en) 1999-02-12 2003-06-30 Sankyo Co Novel nucleosides and oligonucleotide analogues
US20030092647A1 (en) * 2001-08-08 2003-05-15 Crooke Rosanne M. Antisense modulation of cholesteryl ester transfer protein expression
JP4151751B2 (ja) * 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
SI1296713T1 (en) * 2000-06-08 2004-02-29 Intercell Biomedizinische Forschungs- Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
US20030171310A1 (en) * 2001-02-23 2003-09-11 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of RECQL expression
US20030203481A1 (en) * 2002-02-25 2003-10-30 Surber Mark W. Conjugated minicells
US9150606B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US9150605B2 (en) * 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
CA2504554A1 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
AU2003291753B2 (en) * 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP2957568B1 (en) * 2002-11-05 2016-12-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US20050261221A1 (en) * 2004-03-01 2005-11-24 Li Wang Compositions and methods for enhanced delivery of compounds via transfection complexes
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
US8415315B2 (en) 2004-05-06 2013-04-09 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for inhibiting the proliferation of cancer cells
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
US7884196B2 (en) * 2004-10-06 2011-02-08 Oliver Lawless Vaccine composition comprising methylated DNA and immunomodulatory motifs
US20090208934A1 (en) * 2005-01-05 2009-08-20 The Johns Hopkins University Pecam-1 genotype
WO2007106690A2 (en) * 2006-03-15 2007-09-20 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Degenerate nucleobase analogs
US20110262466A1 (en) * 2008-10-16 2011-10-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions containing thrombomodulin domains and uses thereof
US20110274745A1 (en) * 2009-11-10 2011-11-10 Lipella Pharmaceuticals Inc. Instillation of liposomal formulation of sirna and antisense oligonucleotides
CA3122219A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 The Children's Hospital Corporation Sustained polypeptide expression from synthetic, modified rnas and uses thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0490951B1 (fr) * 1989-09-06 1996-04-24 Institut Pasteur Fragments d'acides nucleiques derives d'un genome de mycobacterie appropriee, leurs applications dans le diagnostic des infections a mycobacteries et plasmides contenant lesdits fragments
US5264554A (en) * 1990-01-19 1993-11-23 The Blood Center Of Southeastern Wisconsin, Inc. Platelet cell adhesion molecule and variants thereof
US5668012A (en) * 1994-07-05 1997-09-16 The Blood Center Research Foundation, Inc. Platelet endothelial cell adhesion molecule-1 promoters and uses thereof
US6350576B1 (en) * 1994-12-20 2002-02-26 Cold Spring Harbor Laboratory Cancer detection probes
AU7161096A (en) * 1995-09-19 1997-04-09 Texas Biotechnology Corporation Compositions and methods for inhibiting the binding of pecam
WO1999060010A1 (en) * 1998-05-21 1999-11-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the pulmonary delivery of nucleic acids
AU757894B2 (en) * 1998-05-21 2003-03-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the pulmonary delivery of nucleic acids

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．１５， ｐ．５３７−５４１ （１９９７）
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．１５３（９）， ｐ．４２０６−４２１８ （１９９４）

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