JP3507076B2 - アルカリリパーゼ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、例えば洗剤中において有用である新規な位
置非特異性のアルカリリパーゼに関する。本発明は又、
新規なリパーゼの製造方法及び新規なリパーゼを含んで
なる洗剤組成物に関する。

背景技術 過去５年以内において、菌類フミコラ ラヌギノサ
（Humicola lanuginosa）由来の微生物リパーゼが、脂
肪の汚れの除去を改善するため多くの商業ブランドの洗
剤中に導入されてきている。他の微生物リパーゼがまた
洗剤中で使用するため提案された、例えばシュドモナス
セパシア（Pseudomonas cepacia）由来の細菌リパー
ゼ（米国特許4,876,024）である。

多くの洗剤は溶液中高pH（例えばpH10付近）を有する
アルカリ性でありそしてCa⁺⁺イオンを結合させるための
ビルダーを含有する。本発明の目的はCa⁺⁺の不存在下、
高pHで高活性を有するリパーゼを提供することである。
リパーゼはトリグリセリド中の全てのエステル結合を加
水分解し得るため位置非特異性であるべきである。

発明の要約 驚くべきことに、本発明者は高アルカリ性の、位置非
特異性リパーゼがストレプトマイセス（Streptomyce
s）、クラスター（cluster）１の菌株から得られること
を見出した。ストレプトマイセスのクラスター１の菌株
が、リパーゼを生産することはこれまで知られていなか
った。

従って、その第一の面において、本発明は （１）位置非特異性であり、 （２）pH10で活性を有しそしてその活性は最適pHで活性
の50％を超えており（両活性を、基質としてオリーブ油
そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で
20分間Ca⁺⁺フリーアッセイにおいて測定するとき）、そ
して （３）ストレプトマイセス クラスター（Streptomyces
cluster）１の菌株を培養することにより生産可能であ
る、 リパーゼ調製品を提供する。

別の面において、本発明は （１）位置非特異性であり、 （２）９−11の範囲内のpHで最適活性を有する（基質と
してオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコー
ルを用い40℃で20分間測定するとき）、そして （３）ストレプトマイセス クラスター（Streptomyces
cluster）１に生来の細胞外リパーゼと免疫学的に同一
であるか又は部分的に同一である、リパーゼを提供す
る。

第三の面において、本発明は炭素および窒素源並びに
無機塩を含有する適当な普通培地中で、ストレプトマイ
セス クラスター（Streptomyces cluster）１のリパー
ゼ生産株を培養し、次いでリパーゼ調製品を回収するこ
とを含んでなる、リパーゼ調製品の製造方法を提供す
る。

更に他の面において、本発明は本発明のリパーゼを含
んでなる洗剤組成物を提供する。

図面の簡単な説明 本発明を添付の図面を参照して更に説明する。

図１−７は、次の菌株から由来する本発明のリパーゼ
調製品の活性に対するpHプロフィルを示す:S.グリセウ
ス（griseus）LB 501（DSM 7349）、S.グリセウス（gri
seus）LB 502（DSM 7350）、S.コエリカラー（coelicol
or）LB 511（FERM BP−4236）、S.コエリカラー（coeli
color）LB 512（FERM BP−4237）、S.グリセウス（gris
eusu）LB 524（DSM 8672）、S.コエリカラー（coelicol
or）N 2293（ATCC 23899）およびS.パルバス（parvus）
N 2300（ATCC 12433）。更に詳しくは例６に示される。

図８は、（LB 502由来の）本発明のリパーゼ調製品お
よび従来技術の位置特異性リパーゼ（リポラーゼ）を用
いたオリーブ油の加水分解後ラトロスカン（latrosca
n）からのクロマトグラムを示す。更に詳しくは例８に
示される。

図９は本発明のリパーゼ調製品の活性に対するCa⁺⁺添
加の効果を示す。更に詳しくは例11に示される。

発明の詳細な開示 微生物 本発明で用いられる微生物は、S.T.ウリアム等、Jour
nal of General Microbiology（1983）,129,1743−1813
により定義される如き、ストレプトマイセス クラスタ
ー（Streptomyces cluster）１に属する放線菌目の細菌
である。

ストレプトマイセス クラスター１の内で、次のサブ
クラスタ（subclusters）、種および菌株が好ましい。
前記リパーゼを生産し得るその突然変異株および変異株
も又本発明において使用できる。

前記ATCC株は、アメリカン カルチュア コレクショ
ン（米国，メリーランド，ロックビレ,12301パークロー
ン ドライブ）から自由に入手可能である。

次の菌株は、特許手続上の微生物の国際的承認に関す
るブダペスト条約のもとで発明者によって寄託された。
菌株は次の如く分類された。

ここで、DSMはドイッチェ ザンムルク フオン ミ
クロオルガニスメン ウント ツェルカルツレン（DS
M）（ドイツ国,3300ブラウンシュワイク マッシュルオ
ーデル ベーク 1b）になされた寄託を示す。FERHは通
算産業省、工業技術院、生命工学工業技術研究所（NIBH
T）（日本国305茨城県つくば市東１丁目１−３） リパーゼの位置特異性 リパーゼの位置特異性は、トリグリセリドの部分加水
分解および形成されるジグリセリドの分析によってチェ
ックできる。本発明のリパーゼは1,3−ジグリセリドお
よび1,2−ジグリセリドの双方を形成しそして従って位
置非特異性であり、すなわち本発明のリパーゼはトリグ
リセリド中の全ての３個のエステル結合と反応する。

アルカリpHでのリパーゼの活性 本発明によって提供されるリパーゼ（脂肪分解酵素）
は、高アルカリ性である。本発明のリパーゼは、Ca⁺⁺の
不存在下基質としてオリーブ油および乳化剤としてポリ
ビニルアルコールを用い40℃で20分間測定するとき、pH
10でその最適活性の50％超（好ましくは80％超）を有す
ることを特徴とする。

択一的に、本発明のリパーゼは基質としてオリーブ油
そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で
20分間測定するとき、９又はそれ以上の最適活性を有す
る。好ましくは、最適pHは９−11の範囲内にあり、例え
ば9.5又はそれ以上のpHであり、最も好ましくは10又は
それ以上のpH、例えばpH9.5〜pH10.5の範囲内にある。

洗剤の存在下でのリパーゼ活性 本発明の好ましいリパーゼは、洗剤の存在下で高活性
を維持している。本発明のリパーゼは、pH10.2の洗剤溶
液中で活性を有することを特徴とし、この活性はpH10の
グリシン又はジエタノールアミン緩衝液中50％を超える
活性である（双方の活性を基質としてオリーブ油を用い
60分の反応時間で測定するときである）、そして洗剤溶
液は0.35g/の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、0.
15g/のアルコール エトキシレート、1.25g/のトリ
ポリリン酸ナトリウム、1.00g/の硫酸ナトリウム、0.
45g/の炭酸ナトリウムおよび0.15g/のメタ珪酸ナト
リウムから成る。

択一的に、好ましいリパーゼはpH7.5の洗剤溶液中で
活性を有することを特徴とし、その活性は同じpHの緩衝
液中の活性の少なくとも75％である（双方の活性を、基
質としてｐ−ニトロフェニル ブチラートを用い40℃で
30分の反応時間測定する）、緩衝液は0.2Mトリス−HCl
であり、そして洗剤溶液は0.1％アルコール エトキシ
レート又は直鎖アルキルスルホネートである。

洗剤溶液中で示される活性を有するリパーゼは、スト
レプトマイセス サブクラスター（Streptomyces subcl
uster）1A又は1B、例えば種S.グリセウス（griseus
u）、S.コエリカラー（coelicolor）又はS.パルバス（p
arvus）、特に菌株S.グリセウス（griseus）DSM 7349,D
SM 7350,DSM 8672、S.コエリカラー（coelicolor）FERM
BP−4236,FERM BP−4237,ATCC 23899又はS.パルバス
（parvus）ATCC 12433から得ることができる。

Ca⁺⁺の不存在下のリパーゼ活性 特に好ましい態様において、本発明のリパーゼは、50
mM Ca⁺⁺での活性の50％を超えるCa⁺⁺の不存在下での活
性を有する（双方の活性は下記のオリーブ油/PVA法によ
り測定するとき）。

Ca⁺⁺の不存在下で述べられた活性を有するリパーゼを
生産し得る微生物菌株は、新規でありそして本発明によ
って提供される。好ましい菌株はS.グリセウス（griseu
s）DSM 7350である。

免疫化学的性質 ストレプトマイセス クラスター１の菌株に生来の細
胞外リパーゼの免疫学的性質と同一又は部分的同一の免
疫学的性質を有しそして高pHで言及された活性を有する
位置非特異性リパーゼは、本発明の範囲内である。免疫
化学的性質は、免疫学的交差反応同定試験によって測定
できる。同定試験は公知のオクテロニー二重免疫拡散法
又は双頭交差免疫電気泳動（I.M.ロリット;lmmunology,
Gower Medical Publishing（1985）およびN.X.アレクセ
ン;Handbook of Immunoprecipitation−in−Gel Techni
ques,Blackwell Scientific Publications（1983）、５
章および14章による）。語句免疫学的同一（抗原同一）
および部分的免疫同一（部分的抗原同一）は、アレクセ
ン等同上、5,9および20章およびロリット同上６章に記
載されている。

免疫学試験において使用するための単一特異性抗血清
は、例えばN.H.アレクセン同上の41章又はN.H.アレクセ
ン等、A Manual of Quantitative immuno electrophore
sis,Blackwell Scientific Publications（1973）に記
載される如く、例えば家兎において精製されたリパーゼ
に対して生じ得る。

リパーゼ活性の測定 リパーゼ活性は、基質としてポリビニルアルコールと
共にオリーブ油（容量比1:3のオリーブ油および２％PVA
溶液;PVA、ｎ＝1750±50）を用いて測定する。0.1mlの
リパーゼ溶液、0.2mlの200mMジエタノールアミン緩衝液
および0.2mlのオリーブ油/PVAエマルションの混合物を4
0℃で10分又は20分間撹拌する。反応は、0.1mlの1N HCl
を加えることにより停止する。

停止後、内部標準として0.1％のリトコール酸を含有
するクロロホルムおよびメタルールの１対１混合物2.0m
lを反応媒質に加え、次いでこの媒質を激しく撹拌す
る。沈降後、溶剤相を除去しそしてTLC−FID分析（ラト
スカン（商標））をより遊離した脂肪酸の測定に委ね
る。

リパーゼの生産 本発明のリパーゼは、炭素および窒素源並びに無機塩
を含有する、適当な普通培地中で前記微生物の１種を培
養し、引き続きリパーゼを回収することによって生産で
きる。

リパーゼは又当業者に公知の方法による組換えDNA工
学により、例えばリパーゼをエンコードするDNA断片を
単離し、DNA断片を適当なベクター内の適当な発現シグ
ナルと結合させ、ベクター又はその一部を自己複製プラ
ミドとして又は染色体に組込まれたものとして適当な宿
主（すなわち、大腸菌、属バシラス、ストレプトマイセ
ス又はサッカロマイセスの一員、又は線維状菌類、好ま
しくはアスペルギルス属の一員）に導入し、リパーゼの
発現に至る条件下で宿主生物を培養し、次いで培地より
リパーゼを回収することにより得ることができる。

培養後、リパーゼは常法により、例えば疎水性クロマ
トグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法およ
びそれらの組合せにより培養ブロスから回収されそして
精製される。

リパーゼの適用 本発明のリパーゼは、リパーゼの通常の適用において
特に高pHで例えば洗たく物および皿洗い用洗剤中、社会
のおよび産業上の洗浄において並びに皮革加工において
用いることができる。

本発明のリパーゼは、位置非特異性であり（すなわ
ち、トリグリセリド中全ての３個のエステル結合を加水
分解し得る）そして該リパーゼは油脂の全加水分解に対
して使用できる。適当な条件はpH7、60℃であってよ
い、何故ならリパーゼは中性pH付近でより熱安定である
からである。

洗たく物洗剤組成物 本発明によれば、リパーゼは典型的には洗剤組成物の
一成分であってよい。そのようなものとして、そのリパ
ーゼは無粉塵性粒質物、安定化液体、又は保護された酵
素の形態で洗剤組成物に含ましめることができる。無粉
塵性粒質物は、例えば米国特許4,106,991および4,661,4
52（両特許ともノボ インダストリー A/Sに付与）に
開示される如く製造されそして所望により当業者に公知
の方法で塗布され得る。ワックスの塗布材料の例は、平
均モル重量1000〜20000を有するポリ（エチレンオキシ
ド）製品（ポリオキシエチレングリコール、PEG）、16
〜15個の酸化エチレン単位を有するノニルフェノール；
エトキシル化脂肪アルコール（ここにおいてアルコール
は12〜20個の炭素原子を有しそしてここにおいて15〜18
個の酸化エチレン単位が存在する）；脂肪アルコール；
脂肪酸；および脂肪酸のモノ−およびジ−およびトリグ
リセリドである。流動床技術により適用に対して適当な
フィルム形成性塗布材料の例は、英国特許1483591に示
される。流体酵素調製品は、確立された方法に従い、ポ
リオール例えばポリエチレングリコール、糖もしくは糖
アルコール、乳酸もしくはホウ酸を添加することにより
安定化できる。他の酵素安定剤は当業者に周知である。
保護された酵素は、ヨーロッパ特許238,216に開示され
る方法に従って調製できる。

本発明の洗剤組成物は、如何なる好都合の形態であっ
てよく、例えば粉末、顆粒、ペースト又は液体として存
在し得る。液体洗剤は、水性（典型的には70％の水およ
び０−30％の有機溶剤を含有する）、又は非水性であ
る。

洗剤組成物は１種又はそれ以上の界面活性剤を含んで
なり、それらの各々はアニオン性、カチオン性又は双性
イオン性であってよい。洗剤は通常０−50％のアニオン
界面活性剤例えば直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩
（LAS）、α−オレフィンスルホネート（AOS）、アルキ
ルスルフェート（脂肪アルコールスルフェート）（A
S）、アルコール エトキシスルフェート（AEOS又はAE
S）、第二級アルカンスルホネート（SAS）、α−スルホ
脂肪酸メチルエステル、アルキル−又はアルケニルコハ
ク酸又は石けんを通常含有するであろう。洗剤は又は０
−40％の非イオン界面活性剤、例えばアルコール エト
キシレート（AEO又はAE）、カルボキシル化アルコール
エトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、
アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキ
シド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪
酸モノエタノールアミド、アルキル（Ｎ−メチル）−グ
リコサミド又はポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド
（例えば国際公開92/06154に記載される如く）を含有で
きる。

洗剤組成物は追加的に１種又はそれ以上の他の酵素、
例えばアミラーゼ、クチナーゼ、プロテアーゼ、セルラ
ーゼ、ペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含んでも
よい。

洗剤は１−65％の洗剤用ビルダー又は錯化剤例えばゼ
オライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホ
ネート、シトラート、ニトリロトリ酢酸（NTA）、エチ
レンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミンペ
ンタ酢酸（DTMPA）、アルキル−又はアルケニルコハク
酸、可溶性シリケート、加層シリケート（例えばヘキス
ト社からのSKS−６）を含有できる。洗剤は又ビルダー
を加えなくてもよい、すなわち洗浄用ビルダーが本質的
に無くてもよい。

洗剤は１種又はそれ以上のポリマーを含んでもよい。
そのポリマーの例は、カルボキシメチルセルロース（CM
C）、ポリ（ビニルピロリドン）（PVP）、ポリエチレン
グリコール（PEG）、ポリ（ビニルアルコール）（PV
A）、ポリカルボキシレート例えばポリアクリレート、
マレイン酸／アクリル酸コポリマーおよびラウリルメタ
クリレート／アクリル酸コポリマーである。

洗剤は漂白系を含んでいてもよくその漂白系はH₂O₂源
例えばパーボレート又はパーカーボネートを含んでよく
これらは過酸−形成漂白活性化剤例えばテトラアセチル
エチレンジアミン（TAED）又はノナノイルオキシベンゼ
ンスルホネート（NOBS）と組合せてもよい。択一的に、
漂白系は例えばアミド、イミド又はスルホンタイプのペ
ルオキシ酸を含んでいてもよい。

本発明の洗剤組成物の酵素は、通常の安定化剤、例え
ばポリオール例えばプロピレングリコール又はグリセロ
ール、糖もしくは糖アルコール、乳酸、ホウ酸、又はホ
ウ酸誘導体例えば芳香族ボレートエステルを用いて安定
化できそして組成物は例えば国際公開92/19709および国
際公開92/19708に記載される如く製剤化され得る。

洗剤は又他の通常の洗剤成分、例えば粘土を含む布帛
柔軟剤、起泡増進剤、起泡抑制剤、耐蝕剤、土壌−沈殿
防止剤、抗土壌−再付着剤、染料、殺菌剤、螢光増白剤
又は香料を含むことができる。

pH（使用濃度で水性溶液中に測定された）は通常、中
性又はアルカリ性、例えば７−11であろう。

本発明の範囲内の洗剤組成物の特定の形態には次のも
のが含まれる： １）以下の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密
度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ７−12％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばC_12-18アル
コール、１−2EO）又はアルキルスルフェート（例えばC
_16-18） １−４％ −アルコール エトキシレート（例えばC_14-15アルコー
ル、7EO） ５−９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 14−20％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） ２−６％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 15−22％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ０−６％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H₅Na₃O₇/C₆H₈O₇と
して） ０−15％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） 11−18％ −TAED ２−６％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、PVP,PEG） ０−３％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料、螢光増白剤、光
漂白剤） ０−５％ ２）次の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密度
を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ６−11％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばC_12-18アル
コール、１−2EO）又はアルキルスルフェート（例えばC
_16-18） １−３％ −アルコール エトキシレート（例えばC_14-15アルコー
ル、7EO） ５−９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 15−21％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） １−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 24−34％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ４−10％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H₅Na₃O₇/C₆H₈O₇と
して） ０−15％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、PVP,PEG） １−６％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料） ０−５％ ３）次の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密度
を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ５−９％ −アルコールエトキシフェート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO） ７−14％ −脂肪酸としての石けん（例えばC_16-22） １−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 10−17％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） ３−９％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 23−33％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ０−４％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） ８−16％ −TAED ２−８％ −ホスホネート（例えばEDTMPA） ０−１％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、PVP,PEG） １−３％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料、螢光増白剤） ０−５％ ４）次の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密度
を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ８−12％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO） 10−25％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 14−22％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） １−５％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 25−35％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ０−10％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、PVP,PEG） １−３％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料） ０−５％ ５）次の成分を含んでなる水性液体組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−21％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO又はC_12-15アルコール、5EO） 12−18％ −脂肪酸としての石けん（例えばオレイン酸）３−13％ −アルケニルコハク酸（C_12-14） ０−13％ −アミノエタノール ８−18％ −クエン酸 ２−８％ −ホスホネート ０−３％ −ポリマー（例えばPVP,PEG） ０−３％ −ボレート（B₄O₇として） ０−２％ −エタノール ０−３％ −プロピレングリコール ８−14％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば分散剤、起泡抑制剤、香料、螢光増
白剤） ０−５％ ６）次の成分を含んでなる水性に組立てられた液体洗剤
組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−21％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO又はC_12-15アルコール、5EO） ３−９％ −脂肪酸として石けん（例えばオレイン酸） ３−10％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 14−22％ −クエン酸カリウム ９−18％ −ボレート（B₄O₇として） ０−２％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばPEG,PVP） ０−３％ −定着ポリマー（anchoring polymer）例えばラウリル
メタクリレート／アクリル酸コポリマーとして；モル比
25:1;MW3800 ０−３％ −グリセロール ０−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば、分散剤、起泡抑制剤、香料、螢光
増白剤） ０−５％ ７）次の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密度
を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −脂肪アルコールスルフェート ５−10％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド ３−９％ −脂肪酸のような石けん ０−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） ５−10％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） １−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 20−40％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ２−８％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） 12−18％ −TAED ２−７％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、PEG） １−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば螢光増白剤、起法抑制剤、香料） ０−５％ ８）次の成分を含んでなる粒質物として製剤化される洗
剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ８−14％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド ５−11％ −脂肪酸のような石けん ０−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） ４−10％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） １−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 30−50％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ３−11％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇として） ５−12％ −ポリマー（例えばPVP、マレイン酸／アクリル酸コポ
リマー、PEG） １−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料） ０−５％ ９）次の成分を含んでなる粒質物として製剤化される洗
剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） ６−12％ −非イオン界面活性剤 １−４％ −脂肪酸のような石けん ２−６％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 14−22％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 18−32％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ５−20％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇として） ３−８％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） ４−９％ −漂白活性化剤（例えばNOBS又はTAED） １−５％ −カルボキシメチルセルロース ０−２％ −ポリマー（例えばポリカルボキシレート又はPEG） １−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば螢光増白剤、香料） ０−５％ 10）次の成分を含んでなる水性液洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−23％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、２−3EO） ８−15％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO又はC_12-15アルコール、5EO） ３−９％ −脂肪酸のような石けん（例えばラウリン酸）０−３％ −アミノエタノール １−５％ −クエン酸ナトリウム ５−10％ −ヒドロトロープ（例えばナトリウムトルエンスルホネ
ート） ２−６％ −ボレート（B₄O₇として） ０−２％ −カルボキシメチルセルロース ０−１％ −エタノール １−３％ −プロピレングリコール ２−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えばポリマー、分散剤、香料、螢光増白
剤） ０−５％ 11）次の成分を含んでなる水性液体洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 20−32％ −アルコール エトキシレート（例えばC_12-15アルコー
ル、7EO又はC_12-15アルコール、5EO） ６−12％ −アミノエタノール ２−６％ −クエン酸 ８−14％ −ボレート（B₄O₇として） １−３％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマ
ー、定着ポリマー例えばアウリルメタクリレート／アク
リル酸コポリマーおよびCMCとして） ０−３％ −グリセロール ３−８％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えばヒドロトロープ、分散剤、香料、螢
光増白剤） ０−５％ 12）次の成分を含んでなる少なくとも600g/の嵩密度
を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −アニオン界面活性剤（直鎖アルキルベンゼンスルホン
酸塩、アルキルスルフェート、α−オレフィンスルホネ
ート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルカンスル
ホネート、石けん） 25−40％ −非イオン界面活性剤（例えば、アルコールエトキシレ
ート） １−10％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） ８−25％ −可溶性シリケート（Na₂O,2SiO₂として） ５−15％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として） ０−５％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 15−28％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・4H₂Oとして） ０−20％ −漂白活性化剤（TAED又はNOBS） ０−５％ −酵素 ０−５％ −少量成分（例えば、香料、螢光増白剤） ０−３％ 13）１）−12）で記載されるような洗剤組成物であって
直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩の含量又はその一部
がアルキルスルフェート（C₁₂−C₁₈）により置換されて
いる。

14）１）−13）で記載されるような洗剤組成物であっ
て、追加成分又は既に述べた漂白系の代替物として安定
化又は封入された過酸を含有する。

15）３）,7）,9）および12）で記載される洗剤組成物で
あって、パーボレートの含量がパーカーボネートにより
置換されている。

16）例えば直鎖アルコキシル化一級アルコールのような
液体非イオン界面活性剤、ビルダー系（例えばホスフェ
ート）、酵素およびアルカリを含んでなる非水性洗剤液
体として製剤化される洗剤組成物。洗剤は又アニオン界
面活性剤および／又は漂白系を含んでいてもよい。

本発明のリパーゼは好都合には洗剤中で用いられる濃
度で配合され得る。今日次のように考えられている；す
なわち本発明の洗剤組成物中でリパーゼは洗液１当た
り50〜10,000LU、好ましくは100〜2,000LU/、又は洗
剤1g当たり50〜50,000LU、好ましくは500〜10,000LU/g
に対応する量で添加され得る。リパーゼタンパク質の量
は、洗液１当たり0.001〜100mg又は洗剤1g当たり0.00
1〜100mgであってよい。

皿洗い用組成物 皿洗い用洗剤組成物は、界面活性を含んでなり、これ
はアニオン、非イオン、カチオン、双性イオン又はこれ
らのタイプの混合物であってよい。洗剤は、０−90％の
非イオン界面活性剤例えば低−もしくは非−発泡エトキ
シル化プロポキシル化直鎖アルコールを含有するであろ
う。

洗剤組成物は、無機および／又は有機タイプの洗剤用
ビルダー塩を含有してよい。洗剤用ビルダーはリン−含
有および／又は非リン−含有タイプであってよい。洗剤
組成物は、通常１−90％の洗剤ビルダーを含有する。

リン−含有無機アルカリ洗剤用ビルダーの例には、水
溶性塩、特にアルカリ金属ピロホスフェート、オルソホ
スフェート、ポリホスフェート、およびホスホネートが
含まれる。非−リン−含有無機ビルダーの例には、水溶
性アルカリ金属カーボネート、ボレートおよびシリケー
ト並びに種々のタイプの水不溶性結晶又は非結晶アルミ
ノシリケートが含まれこの内ゼオライトが最も良く知ら
れた代表例である。

適当な有機ビルダーの例には、アルカリ金属、アンモ
ニウムおよび置換アンモニウム、シトレート、スクシネ
ート、マロネート、脂肪酸スルホネート、カルボキシメ
トキシ スクシネート、アンモニウムポリアセテート、
カルボキシレート、ポリカルボキシレート、アミノポリ
カルボキシレート、ポリアセチル カルボキシレートお
よびポリヒドロキシスルホネートが含まれる。

他の適当な有機ビルダーには、ビルダーの性質を有す
ることが知られている高分子量ポリマーおよびコポリマ
ー、例えば適当なポリアクリル酸、ポリマレイン酸およ
びポリアクリル酸／ポリマレイン酸コポリマーおよびそ
れらの塩が含まれる。

皿洗い用洗剤組成物は、塩素／臭素系又は酸素系の漂
白剤を含有できる。無機塩素／臭素系漂白剤の例は、リ
チウム、ナトリウム又はカルシウムハイポクロライトお
よびハイポブラマイト並びに塩素化三ナトリウムホスフ
ェートである。有機塩素／臭素系漂白剤の例は、複素環
式Ｎ−ブロモおよびＮ−クロロイミド例えばトリクロロ
イソシアヌル酸、トリブロモイソシアヌル酸、ジブロモ
イソシアヌル酸およびジクロロイソシアヌル酸並びに水
可溶性カチオン例えばカリウムおよびナトリウムとそれ
らの塩である。ヒダントイン化合物も又適当である。

酸素漂白剤は、無機過塩の形態で、好ましくは漂白剤
前駆体と共に又はペルオキシ酸化合物として好ましい。
適当なペルオキシ化合物の典型的例は、アルカリ金属パ
ーボレート、四水和物および一水和物の双方、アルカリ
金属パーカーボネート、パーシリケートおよびパーホス
フェートである。好ましい活性剤の物質はTAEDおよびグ
リセロールトリアセテートである。

本発明の皿洗浄用洗剤組成物は、（１以上の）酵素に
対する通常の安定剤、例えばポリオール例えばプロピレ
ングリコール、糖もしくは糖アルコール、乳剤、ホウ
酸、又はホウ酸誘導体、例えば芳香族ボレートエステル
を用いて安定化できる。

本発明の皿洗浄用洗剤組成物は又、他の通常の成分、
例えば解膠剤物質、充てん物、発泡抑制剤、耐蝕剤、土
壌−沈殿防止剤、金属イオン封鎖剤、抗土壌−再付着
剤、脱水剤、染料、殺菌剤、螢光剤、シックナーおよび
香料を含有してもよい。

最後に、本発明のリパーゼは通常の皿洗浄用洗剤、例
えば次の特許公報のいずれかに記載されている任意の洗
剤中に用いることができる： ヨーロッパ特許551670、ヨーロッパ特許533239、国際
公開9303129、ヨーロッパ特許507404、米国特許514166
4、英国特許2247025、ヨーロッパ特許414285、英国特許
2234980、ヨーロッパ特許408278、英国特許2228945、英
国特許2228944、ヨーロッパ特許387063、ヨーロッパ特
許385521、ヨーロッパ特許373851、ヨーロッパ特許3642
60、ヨーロッパ特許349314、ヨーロッパ特許331370、ヨ
ーロッパ特許318279、ヨーロッパ特許318204、英国特許
2204319、ヨーロッパ特許266904、米国特許5213706、ヨ
ーロッパ特許530870、カナダ特許2006687、ヨーロッパ
特許481547、ヨーロッパ特許337760、国際公開93/1418
3、米国特許5223179、国際公開93/06202、国際公開93/0
5132、国際公開92/19707、国際公開92/09680、国際公開
92/08777、国際公開92/06161、国際公開92/06157、国際
公開92/06156、国際公開91/13959、ヨーロッパ特許3997
52、米国特許4941988、米国特許4908148。

実施例 次の実施例は更に本発明を説明するが、いかなる場合
も請求の範囲で請求される本発明の範囲を制限するもの
ではない。

例 １ リパーゼの生産 下記の組成（g/）のワックスマン培地中で菌株LB 5
01（DSM 7349）,LB 502（DSM 7350）,LB 511（FERM BP
−4236）、およびLB 512（FERM BP−4237）の各々か
ら、振とうフラスコ中で種培養物を生産した： グルコース 10 ペプトン ５ 肉エキス ５ NaCl ５ pHを7.0に調節 30℃でかつ230rpmで２日後、5mlの種培養物を下記の
培地（g/）100mlを含有する振とうフラスコ中で接種
した： ファルマメディア（Pharmamedia）（商標）（トラデル
スプロテイン、ザ プロクター アンド ギャンブル
オイルシード プロダクツ社より提供） 20g コーン スティープ パウダー 10g グリセロール 10g K₂HPO₄ 1g MgSO₄,7H₂O 0.5g オートクレーブ処理前にpHを7.0に調節 オートクレーブ処理20分/121℃ ホホバ油1mlを各振とうフラスコに加え、次いでフラ
スコを27℃で４日間230rpmで培養した。

培養ブロスを遠心分離により液体／固体分離に委ね
た。上澄みを凍結乾燥しそして粗製粉末調製品を得た。

例 ２ リパーゼの調製 下記に示すように、次の組成（ml/SFは振とうフラス
コ当たりのmlを示す）を有する、ACT−1,ACT−2,ACT−
3,ACT−４およびACT−５と表示される培地100mlを有す
る250mlの振とうフラスコ中で菌株を培養した： 各菌株を27℃で４日間培養した。培養の終了時に培養
ブロスのpHとリパーゼ活性（LU）を測定した。１リパー
ゼ単位（LU）は、標準条件下（すなわち、30.0℃で;pH
7.0;およびトリブチリン基質）、毎分当たり１μmolの
滴定可能な酪酸を遊離する酵素の量である。

例 ３ リパーゼの生産 以下に示すように、菌株を培地ACT−１（例２に示
す）を含有する振とうフラスコ中で27℃で培養した。培
養ブロスのpHおよびリパーゼ活性を３日、４日および５
日後に測定した。結果は次の通りであった。

例 ４ S.グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からリパ
ーゼの生産 菌株を以下の組成を有する培地上振とうフラスコ内で
27℃で培養した： ４日後、収率は約30LU/mlであった。

例 ５ リパーゼの精製 S.グリセウス（griseus）LB 501（DSM 7349）からの
粗製リパーゼを次の如く、疎水性クロマトグラフィー次
いでイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。

疎水性クロマトグラフィー：例１で生産された粗製リ
パーゼ粉末を溶解し次いで3.5M CH₃COONH₄に調節した。
これをｔ−ブチルマクロペプHIC（バイオラボ社の製
品）のカラムに適用し、次いでカラムを同じ濃度のCH₃C
OONH₄で洗い大部分の色とタンパク質を除いた。公配を
開始後、最初に急速に1Mに降下させ、次いでゆっくり0M
に下げる。２つのピークがクロマトグラム中に見られ、
従って２つのプールのリパーゼを採取した。リパーゼ活
性の全回収は80％を超えていた。

イオン交換クロマトグラフィー：限外濾過による濃縮
および脱イオン化後（高粘度のため、回収率60−70
％）、各プールをDEAE−トヨパール（Tpyopearl）のカ
ラムに適用した。リパーゼ活性を含有する１個の幅広い
ピークがクロマトグラム上に認められそして集められ
た。幾分かの色彩を除きそしてリパーゼ活性の回収は80
％を超えていた。最後に、各プールを再たび限外濾過し
た（80％を超える回収率）。

出発物質は16,500LUの総リパーゼ活性を有していた。
プール１およびプール２は、それぞれ74.4LU/mgタンパ
ク質および43.3LU/mgタンパク質のリパーゼ比活性、並
びに3350LUおよび1860LUの総リパーゼ活性を有してい
た。従って、リパーゼ活性の全体の回収は32％であっ
た。

両プールは、5.5又はそれ以下の等電点（等電点電気
泳動による）および28〜43kDの分子量を有する少なくと
も２個のリパーゼを含有することが見出された。

例 ６ リパーゼ調製品のpH活性曲線 pHプロフィルを次の菌株からのリパーゼ調製品に対し
て測定した： 菌 株： S.グリセウス（griseus）LB 501（DSM 7349） S.グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350） S.コエリカラー（coelicolor）LB 511（FERM BP−423
6） S.コエリカラー（coelicolor）LB 512（FERM BP−423
7） S.グリセウス（griseus）LB 524（DSM 8672） S.コエリカラー（coelicolor）N 2293（ATCC 23899） S.パルバス（parvus）N 2300（ATCC 12433） リパーゼ調製品のpHプロフィルを、Ca⁺⁺の不存在下基
質としてオリーブ油そして乳化剤としてPVAを用い、20
分の反応時間でpH8.5−10.5の緩衝液を用いて測定し
た。結果をpHに対する相対活性（相対活性％）として図
１−７に示す。

図より、リパーゼがCa⁺⁺の不存在下約pH9−10に最適
活性を有しそしてリパーゼはpH10で最適活性の50％を超
えていることが明らかである。

例 ７ アルカリpHでリパーゼの活性 リパーゼ調製品を、拡散プレート法によりpH6−10で
リパーゼ活性に対して試験した。

例３で３日および４日培養後に得られたリパーゼ調製
品を試験した。拡散プレートを、それぞれpH6,8.5およ
び10で、オリーブ油およびPVAを含有する試験培地を用
い国際公開88/02775の例11に記載されるように調製し、
そして培地のpHにおけるリパーゼ活性の存在又は不存在
をクリアリング ゾーン（clearing zone）の出現から
測定した。

結果は、例３からの全てのリパーゼ調製品はpH6,8.5
および10で活性を示すことを表わしていた、すなわち全
てのリパーゼ調製品はpH10までの高いpHで全て活性であ
った。

例 ８ 位置特異性 位置特異性をトリグリセリドの加水分解および本発明
のリパーゼ調製品で形成されたジグリセリドの分析によ
り測定した。

S.グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からの
リパーゼ調製品を、pH10で乳化剤としてPVAを用いグリ
シン緩衝液中、pH10で30分間基質としてのオリーブ油を
加水分解するために用い、しかる後加水分解生成物をラ
トロスカン（latroscan）により分析した。

リポラーゼ、すなわちフミコラ ラヌギノサ（Humico
la lanuginosa）由来の従来技術の位置特異性リパーゼ
を比較のために用いた。

結果を図８に示す。図より本発明のリパーゼ調製品に
関して、より多くの1,3−ジグリセリドが1,2−ジグリセ
リドよりも形成されており、このことは本発明のリパー
ゼ調製品は位置非特異性であり、トリグリセリドの１位
および３位よりも２位により高い活性を有することを示
している。リポラーゼは殆ど1,3−ジグリセリドの形成
を与えず、位置特異的であることが確認される、すなわ
ちリポラーゼはトリグリセリドの１位および３位中にの
み反応する。

S.グリセウス（griseus）LB 524（DSM 8672）、S.コ
エリカラー（coelicolor）N 2293（ATCC 23899）および
S.パルバス（parvus）N 2300（ATCC 12433）からの本発
明のリパーゼ調製品は、LB 502と同様の結果を生ぜしめ
た。

例 ９ リパーゼ活性に関する洗剤の効果 種々のリパーゼ調製品のリパーゼ活性を、pH7.5で0.1
％の非イオン又はアニオン界面活性剤（アルコール エ
トキシレート又は直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩）
の存在下で測定しそして洗剤を含まない対照と比較し
た。

例２のリパーゼ調製品を用いた。各試験において、0.
1mlのリパーゼ溶液を、0.2Mのトリス−HCl（pH7.5）に
溶解したｐ−ニトロフェル ブチラートの1.0mM溶液0.4
mlおよび0.2％洗剤溶液0.5mlを混合した。対照は洗剤溶
液の代わりに水を用いて作成した。混合物を40℃で30分
間インキュベートし、次いで加水分解の程度を、415nm
で光学濃度を測定することにより測定した。

結果を対照と比較して洗剤の存在下で相対活性として
表わす。

以下の内容は明らかである、すなわちアルコール エ
トキシレートの存在下、全てのリパーゼ調製品はそれら
の活性の50％超、を保持し、大抵は75％超を保持しそし
て幾つかは90％超の活性を保持する。直鎖アルキルベン
ゼンスルホン酸塩の存在下、大抵のリパーゼ調製品はそ
れらの活性の少なくとも50％を保持し、大抵のこれらの
菌株は少なくとも75％の活性そして幾つかは90％超の活
性を保持する。

例 10 洗剤中のリパーゼ活性 種々のリパーゼ調製品のリパーゼ活性を、高pHのビル
ダー入り洗剤溶液中で測定しそして洗剤なしの対照と比
較した。

各試験において、リパーゼ調製品を次の組成（活性物
質として示される）の洗剤溶液に添加した。混合物を40
℃で60分間基質としてのオリーブ油および乳化剤として
PVAと共にインキュベートし、しかる後形成した遊離酸
の量を測定した。対照は、洗剤溶液の代わりに同じpHの
グリシン又はジエタノール緩衝剤を用いて作成した。

結果は、対照と比較して洗剤の存在下相対活性として
表わされる。

上記リパーゼ調製品が、対照と比較して洗剤溶液中50
％を超える相対活性を有することは明らかである。

例 11 リパーゼ活性に対するCa⁺⁺の効果 本発明のリパーゼ調製品の活性を、Ca⁺⁺の添加なしで
および種々の量のCa⁺⁺を添加して測定した。

S.グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からの
リパーゼ調製品を、pH10のジエタノールアミン緩衝液中
40℃で10分間基質としてオリーブ油および乳化剤として
PVAと共にインキュベートし、しかる後加水分解の程度
を測定した。種々の濃度のカルシウム塩を添加して実験
を繰り返した。

結果を図９に示す。この調製品のリパーゼ活性は、Ca
⁺⁺濃度が低下したとき減少しないことが明らかである。

フロントページの続き (31)優先権主張番号 ４４２／９３ (32)優先日 平成５年４月20日(1993．4．20) (33)優先権主張国 デンマーク（ＤＫ） 微生物の受託番号 ＤＳＭ ７３４９ 微生物の受託番号 ＤＳＭ ７３５０ 微生物の受託番号 ＤＳＭ ８６７２ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−４２３６ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−４２３７ (56)参考文献 米国特許3431175（ＵＳ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 9/14- 9/46 ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（１）位置非特異性であり、 （２）基質としてオリーブ油及び乳化剤としてポリビニ
   ルアルコールを用い、40℃で20分間Ca⁺⁺不存在下での測
   定において、pH10で活性を有しそしてその活性は最適pH
   での活性の50％を超えており、 （３）ストレプトマイセス・コエリカラー（Streptomyc
   es coelicolor）、ストレプトマイセス・リモサス（Str
   eptomyces limosus）、ストレプトマイセス・アルボビ
   リジス（Streptomyces alboviridis）、ストレプトマイ
   サス・グリセウス（Streptomyces griseus）、ストレプ
   トマイサス・パルバス（Streptomyces parvus）、S.セ
   トニー（Streptomyces setonii）又はストレプトマイサ
   ス・ニトロスポレウス（Streptomyces nitrosporeus）
   の菌株を培養することにより生産可能であり、そして （４）基質としてオリーブ油及び乳化剤としてポリビニ
   ルアルコールを用い、pH10で測定するとき、Ca⁺⁺の不存
   在下で活性を有し、そしてその活性は50mMのCa⁺⁺の存在
   下での活性の50％を超えるものである、 ことを特徴とするリパーゼ調製品。
2. 【請求項２】基質としてオリーブ油及び乳化剤としてポ
   リビニルアルコールを用い、60分の反応時間で測定した
   場合、pH10.2の洗剤溶液中で活性を有しそしてその活性
   はpH10のジエタノールアミン緩衝液中での活性の50％を
   超えており、前記洗剤溶液が0.35g/lの直鎖アルキルベ
   ンゼンスルホン酸塩、0.15g/lのアルコール エトキシ
   レート、1.25g/lのトリポリリン酸ナトリウム、1.00g/l
   の硫酸ナトリウム、0.45g/lの炭酸ナトリウムおよび0.1
   5g/lのメタ珪酸ナトリウムを含んで成る、請求の範囲第
   １項記載のリパーゼ調製品。
3. 【請求項３】無粉塵性粒質物、安定化液体、スラリー又
   は保護された酵素の形態で洗剤用添加剤として提供され
   る、請求の範囲第１又は２に記載のリパーゼ調製品。
4. 【請求項４】（１）位置非特異性であり、 （２）基質としてオリーブ油及び乳化剤としてポリビニ
   ルアルコールを用い、40℃で20分間Ca⁺⁺不存在下での測
   定において、９〜11の範囲内のpHで最適活性を有し、 （３）ストレプトマイセス・コエリカラー（Streptomyc
   es coelicolor）、ストレプトマイセス・リモサス（Str
   eptomyces limosus）、ストレプトマイセス・アルボビ
   リジス（Streptomyces alboviridis）、ストレプトマイ
   サス・グリセウス（Streptomyces griseus）、ストレプ
   トマイサス・パルバス（Streptomyces parvus）、S.セ
   トニー（Streptomyces setonii）又はストレプトマイサ
   ス・ニトロスポレウス（Streptomyces nitrosporeus）
   の菌株を培養することにより生産可能であり、そして （４）基質としてオリーブ油及び乳化剤としてポリビニ
   ルアルコールを用い、pH10で測定するとき、Ca⁺⁺の不存
   在下で活性を有し、そしてその活性は50mMのCa⁺⁺の存在
   下での活性の50％を超えるものである、 ことを特徴とするリパーゼ。
5. 【請求項５】炭素および窒素源並びに無機塩を含有する
   培地中で、ストレプトマイセス・コエリカラー（Strept
   omyces coelicolor）、ストレプトマイセス・リモサス
   （Streptomyces limosus）、ストレプトマイセス・アル
   ボビリジス（Streptomyces alboviridis）、ストレプト
   マイサス・グリセウス（Streptomyces griseus）、スト
   レプトマイサス・パルバス（Streptomyces parvus）、
   S.セトニー（Streptomyces setonii）又はストレプトマ
   イサス・ニトロスポレウス（Streptomyces nitrosporeu
   s）のリパーゼ生産株を培養し、次いでリパーゼ調製品
   又はリパーゼを回収することを含んでなる、請求の範囲
   第１〜３項のいずれか１項に記載のリパーゼ調製品又は
   請求項４に記載のリパーゼの製造方法。
6. 【請求項６】界面活性剤および請求の範囲第１〜３項の
   いずれか１項に記載のリパーゼ調製品又は請求の範囲４
   に記載のリパーゼを含んでなる、洗剤組成物。
7. 【請求項７】更に１〜40％の洗剤用ビルダーを含んでな
   り、そして水性溶液中で測定してpH7−11を有する、請
   求の範囲第６項記載の洗剤組成物。