JP3444665B2 - グリココンジュゲートの測定方法および試薬 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は糖鎖結合性物質を利用し
て、グリココンジュゲートを測定する方法および試薬に
関する。特にリウマチ因子の測定法および試薬として適
切な、グリココンジュゲートの測定方法および試薬に関
する。

【０００２】

【従来の技術】グリココンジュゲートとは、糖蛋白質、
糖脂質など、糖を保有する化合物の総称であるが、ま
ず、グリココンジュゲートの一例として、糖蛋白質であ
るリウマチ因子について記載する。慢性関節リウマチ患
者（以下ＲＡ患者と略す）の血清中にはいわゆるリウマ
チ因子といわれる自己免疫抗体が存在し、これはヒト免
疫グロブリンＧ（以下ＩｇＧと略す）のＦｃ部位に存在
する抗原を認識することが知られている（H. G. Kunkel
et al., Adv. Immunol., 4, 351, 1964）。すなわちリ
ウマチ因子は、自己の免疫グロブリンであるＩｇＧに対
する自己抗体であり、その種類によってＩｇＡ、Ｉｇ
Ｇ、ＩｇＭタイプなどに分類することができる。

【０００３】リウマチ因子はＲＡの重要な病因の一つで
あり、この検定はＲＡ患者の診断手段として有効であ
り、これまでいくつかの方法が診断試薬として利用され
ている。代表的な方法を挙げると、変性ＩｇＧをラテッ
クスビーズに結合させたものと、検体血清を反応させ
て、ラテックスビーズの凝集反応の有無でリウマチ因子
の存在を測定する方法（ Singer,J. M. et al., Am. J.
Med., 21, 888, 1956）、および固相化したＩｇＧまた
はＩｇＧＦｃに検体試料中のリウマチ因子をトラップ
し、免疫グロブリンのＦａｂ部分を認識する抗体に酵素
標識したものを第二抗体として用いる酵素免疫測定法が
ある（ＧＢ２００１１７１Ａ）。

【０００４】凝集反応を用いる方法は測定できるリウマ
チ因子がほとんどＩｇＭタイプであり、他のＩｇＡ、Ｉ
ｇＧなどのタイプの検出はできない欠点を有し、測定精
度の点にも問題がある。酵素免疫測定法を用いる方法
は、健常人でも数％の偽陽性がみられ、肝疾患、慢性関
節リウマチ以外の自己免疫疾患、変形性関節症などで高
い偽陽性がでるため、別の手法による確認試験が必要と
なる。さらに慢性関節リウマチ疾患での偽陰性が多く、
信頼性の点で満足しえる状態ではない。

【０００５】リウマチ因子の測定手段として、第二抗体
を使用せずリウマチ因子の糖鎖を利用する方法が最近報
告された。すなわち、リウマチ因子は自己抗体であるゆ
え、免疫グロブリンであり、糖蛋白質であることから糖
鎖と結合性を有するレクチンを用いて測定する方法であ
る（特開平３−４８７００号公報）。この方法はリウマ
チ患者血中のＩｇＧの糖鎖を分析した結果、正常者Ｉｇ
Ｇと比較してガラクトースが欠損しているとの知見をも
とに、ガラクトース欠損糖鎖と正常糖鎖に対するレクチ
ンの反応性の差を利用したものである。この方法は反応
性の差を利用するゆえ使用しうるレクチンが限定される
欠点を有し、ガラクト−ス欠損ＩｇＧ作成の煩雑性、経
済性などの点からまだ完成されておらず改良の必要があ
る。

【０００６】このように、リウマチ因子の糖鎖を利用し
てリウマチ因子を測定する方法を改良し、特異性の高い
高精度なリウマチ因子の測定法の開発が望まれている。
さらに、糖鎖を利用するこの測定法はリウマチ因子に限
らず、広くグリココンジュゲート、いわゆる糖を含む化
合物の測定に応用できる可能性があることから、グリコ
コンジュゲート全般に及ぶ簡便な信頼性のある測定法の
確立が期待される。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、上記
現状に鑑み、まずレクチンを用いるリウマチ因子の測定
法の改良を行い、疾患特異性が高く、精度のよいリウマ
チ因子の測定法を確立すると共に、グリココンジュゲー
ト全般にわたる基本的な測定法を確立することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】検体試料中のリウマチ因
子をトラップする方法は、リウマチ因子の特性から固相
化ＩｇＧまたは固相化ＩｇＧＦｃを使用することが常用
され、最も優れている。しかし、レクチンを用いて、ト
ラップしたリウマチ因子を測定する際には固相化したＩ
ｇＧまたはＩｇＧＦｃとレクチンとの反応性が大きな問
題となる。そこで本発明者は、ＩｇＧの糖鎖を化学的に
処理して、リウマチ因子との結合性はそのまま残し、レ
クチンとの結合性だけを失わしめたＩｇＧを使用するこ
とにより感度、精度を改良し優れた測定法を創生しえる
のではないかと考えた。

【０００９】糖の水酸基がレクチンとの結合性に重要な
役割を果たすことが知られている。そこで過ヨウ素酸処
理によりＩｇＧ糖鎖の水酸基を酸化し、レクチンとの結
合性が消失したＩｇＧとリウマチ因子との結合性を検討
したところ、驚くべきことに、過ヨウ素酸処理ＩｇＧは
正常ＩｇＧと同様にリウマチ因子との結合能を保持して
いることを初めて確認した。この過ヨウ素酸処理ＩｇＧ
を用い鋭意研究の結果、目的とする優れたリウマチ因子
の測定法を確立し、さらに、その方法がグリココンジュ
ゲート全般の測定系に応用し得ることが判明し、本発明
を完成するに到った。

【００１０】すなわち、本発明は、サンドイッチ法によ
りグリココンジュゲートを測定する方法であって、 1) グリココンジュゲートと特異的に結合性を有する物
質の糖鎖を化学的処理を行うことにより、糖鎖結合性物
質との結合活性を消失させた修飾物質（修飾第一反応物
質）と検体を反応させ、検体中のグリココンジュゲート
を結合させ、 2) 第二反応物質として、グリココンジュゲートの糖鎖
と結合活性を有する糖鎖結合性物質を反応させ、 3) 結合した糖鎖結合性物質の量を測定する、ことから
なる、グリココンジュゲートの測定方法、およびこの方
法に基づくグリココンジュゲートの測定試薬に関する。
具体的にグリココンジュゲートの一つであるリウマチ因
子については、過ヨウ素酸処理した免疫グロブリンＧ
（ＩｇＧ）を修飾第一反応物質とし、レクチンを糖鎖結
合性物質として用いるリウマチ因子の測定方法および測
定試薬に関するものである。

【００１１】本発明の特徴は、測定目的のグリココンジ
ュゲートと特異的に結合する物質（Ａ）をそのまま第一
反応物質として使用せずに、化学的処理を行い該物質
（Ａ）の糖鎖を修飾し、糖鎖結合性物質との結合活性を
消失させた修飾物質（Ａ）、いわゆる修飾第一反応物質
を使用することにある。この処理により、第二反応物質
である糖鎖結合性物質は測定目的のグリココンジュゲー
トとのみ結合することから、グリココンジュゲートの測
定精度を上げ、信頼性のある結果を得ることを可能にし
たものである。これは、物質（Ａ）を適切な条件で化学
的処理を行うことにより、糖鎖を修飾しても目的のグリ
ココンジュゲートとの結合性が失われないことを本発明
者が初めて見出したことにより完成したものである。

【００１２】グリココンジュゲートとは、糖蛋白質、糖
脂質など、糖を保有する化合物の総称であり、本発明は
これらグリココンジュゲートの測定における基本的技術
に関するものである。以下にグリココンジュゲートの一
つの例として、糖蛋白質であるリウマチ因子の測定法を
中心に本発明を詳細に説明する。

【００１３】リウマチ因子と特異的に結合する物質とし
てＩｇＧを使用するが、レクチンと結合性を有しない修
飾ＩｇＧ（そのＦｃ断片などの場合も含む）とは、Ｉｇ
Ｇを化学的、生物学的または物理学的に処理することに
よってレクチンとの結合性をなくしたＩｇＧを意味す
る。処理方法としては、例えば糖分解酵素処理によりＩ
ｇＧの糖鎖を部分分解または完全分解させる方法、レク
チンとの結合性に重要な役割を果たす糖鎖水酸基を酸化
処理する方法、糖鎖に別の有機基または無機基を付加、
結合させる方法などが挙げられる。また、他の化学的処
理方法として遺伝子組換手法も含まれる。すなわち、Ｉ
ｇＧの製造法として遺伝子組換手法を用いて発現させる
際に、糖鎖が付加しない条件を選択することにより、無
糖鎖ＩｇＧまたはレクチンと反応しないＩｇＧを製造す
ることができる。いずれの方法にせよ、レクチンとの反
応性を消失させたＩｇＧであればよく、処理方法のいか
んを問わず本発明の範囲に含まれる。処理方法として好
ましくは、糖鎖水酸基を酸化させる過ヨウ素酸処理法、
糖分解酵素処理法などが挙げられる。もちろん修飾Ｉｇ
Ｇがリウマチ因子との結合性を消失しないことが必要で
ある。また修飾ＩｇＧのレクチン反応性は完全に消失し
なくともわずかに反応性が残っていても実用に供しえ、
本発明に含まれるが、望ましくは完全に消失させること
であることは言うまでもない。

【００１４】ＩｇＧの過ヨウ素酸処理法は常法に従い、
中性溶液下２５ｍＭ過ヨウ素酸溶液中で室温１時間反応
させたのち、透析することにより、修飾ＩｇＧを調製す
ることができる。糖分解酵素処理法はシアリダーゼ、マ
ンノシダ−ゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダ−ゼ、ガラ
クトシダーゼなど単独または混合して反応させることに
よって、修飾ＩｇＧを調製することができる。

【００１５】レクチンとの反応性をなくしたＩｇＧはそ
のまま測定系に、また試薬系に使用することもできる
が、操作の簡便性から固相化して使用するのが好まし
い。固相体としては、ポリスチレンビーズ、ポリエチレ
ンビーズ、シリコンビーズなどの合成樹脂ビーズ、ガラ
スビーズ、磁性粒子、赤血球、タイタープレート、ニト
ロセルロ−ス膜などいずれの固相体も使用することがで
きる。好ましくはタイタープレート、ポリスチレンビー
ズが挙げられる。また修飾ＩｇＧは全体を使用しなくと
も、Ｆｃ部分などの断片の使用も可能であり本発明に含
まれることは言うまでもない。

【００１６】リウマチ因子の定量はトラップされたリウ
マチ因子とのレクチンの結合量を測定することによりな
される。結合レクチン量の測定法としては、標識レクチ
ンの使用、抗レクチン抗体の利用、レクチン結合性試薬
の利用などが挙げられ、あらゆるレクチン測定法を利用
することができる。標識レクチンの標識化合物は測定、
定量しうるものであればいずれでもよく、例えば酵素、
蛍光物質、色素、化学発光物質、電気発光物質、金属、
同位元素などが挙げられる。これら標識物質は直接的に
レクチンに結合させてもよく、またアビチン、ビオチン
などを介して間接的に結合させて利用することもでき
る。標識酵素としては、アルカリホスファターゼ、グル
コースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ベータガラク
トシダーゼなどが挙げられ、好ましくはペルオキシダー
ゼである。電気、化学発光物質としてはランタニド金属
化合物などが挙げられる。

【００１７】第二反応物質として使用する糖鎖結合性物
質は、リウマチ因子の糖鎖と結合性を有する物質であれ
ば天然物、有機化合物、無機化合物などを含め特に限定
はされない。具体的には、レクチン、糖鎖に対する抗
体、ボロン酸誘導体などが挙げられるが、好ましくはレ
クチン、糖鎖に対する抗体であり、さらに好ましくはレ
クチンが挙げられる。

【００１８】レクチンとしては糖鎖結合性を有するもの
であればいずれも使用することができ、例えば、コンカ
ナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、リスナスコミニス アグルチ
ニン（ＲＣＡ１２０），レンズクリナリス（ＬＣＡ）、
バンデラエ シンプリシフオリア（ＢＳII）、フィトラ
カ アメリカナ、リコペリシコン エスキュレンタム、
ドリコス ビフロラス、ファセオラス ブルガリス（Ｐ
ＨＡ−Ｅ）などが挙げられ、リウマチ因子測定の場合、
好ましくはＲＣＡ１２０、ＣｏｎＡ、ＬＣＡが挙げられ
る。

【００１９】次に本発明によるリウマチ因子測定法は、
例えば次のように実施される。測定系全体の構成要素は
固相、固相コート用過ヨウ素酸処理ＩｇＧ、標準リウマ
チ因子または検体血清、ビオチン化ＲＣＡ１２０、アビ
ジン化ペルオキシダーゼおよび酵素基質である。固相と
してはマイクロタイタープレートのウエルを用いる。測
定に先立ち、過ヨウ素酸処理ＩｇＧを炭酸緩衝液（pH
8.5）に溶解し、ウエルに入れ４℃で一夜放置すれば固
相表面はコートされる。コートされていない表面部分は
牛血清アルブミンをリン酸緩衝液に溶解してウエルに加
え、同様に放置し牛血清アルブミンによってコートす
る。

【００２０】本発明によるリウマチ因子測定は通常の手
順に従って行なえばよい。例えば実施例に示されるごと
く、コートしたウエルに標準リウマチ因子または検体血
清を加えインキュベートし、続いてビオチン化ＲＣＡ１
２０を加えインキュベートし、次いでアビジン化ペルオ
キシダーゼを加え、最後に基質を加えインキュベートし
たのち反応を停止せしめてから、基質の分解量を分光光
度計を用いて測定すればよい。

【００２１】次に本発明の一例として、リウマチ因子測
定試薬の具体的態様を酵素標識の場合について示せば次
のごとくになる。すなわち、過ヨウ素酸処理ＩｇＧ単独
または該ＩｇＧ固定用マイクロタイタープレート、リウ
マチ因子陽性および陰性対照試料、ＲＣＡ１２０，アビ
ジン、ビオチン、ペルオキシダーセおよび基質よりなる
組み合わせたもののセットである。ここにおいて、セッ
ト中にマイクロタイタープレートが過ヨウ素酸処理Ｉｇ
Ｇによってコートされた状態で提供されること、ビオチ
ンとＲＣＡ１２０が、また酵素とアビジンがコンジュゲ
イトした状態で提供されることは自由であり、これらも
同様に本発明測定試薬の態様に含まれる。標識物質が酵
素以外の場合は、それぞれの標識物質の性質に応じて試
薬の構成を変えることは言うまでもない。また測定の実
施の便益のために適当な標準希釈液、反応希釈液、基質
溶解液、反応停止液などがセット中に添付されることも
自由であり、これらは本発明を限定するものではない。

【００２２】本発明の一つとしては、レクチンと反応性
を有しないＩｇＧを使用し、レクチンの糖鎖反応性を利
用してリウマチ因子を測定する新規な方法である。二抗
体サンドイッチ法に相当する簡便な方法であり、特異性
の高い、高感度なリウマチ因子測定法を提供するもので
ある。これまでのリウマチ因子測定系において、レクチ
ン無反応性ＩｇＧを使用したものはなく、慢性関節リウ
マチ患者に特異性を発揮する優れた効果を有し、臨床の
場において実用性が高い。

【００２３】以上の如く、リウマチ因子の測定法を中心
に説明したが、この基本的手法はグリココンジュゲート
全般に応用することができる。測定目的のグリココンジ
ュゲートと特異的に結合する第一反応物質の化学的処理
方法、糖鎖結合性物質、標識化合物などは上記説明の方
法に準じて適宜選択すればよい。

【００２４】グリココンジュゲート測定の実例として下
記の如き事項が挙げられる。例えば、バクテリア、ウィ
ルスなどの表面蛋白質は糖蛋白質であることから、これ
らに感染したか否かの診断が可能である。すなわち、バ
クテリアの抗体が血清中に存在するか否かはバクテリア
の構成糖蛋白質を修飾して修飾第一反応物質として使用
し、第二反応物質としてレクチンを使用すればよい。逆
にバクテリア自身、いわゆる抗原の有無を検定する場合
には、該バクテリアの抗体を修飾第一反応物質として使
用し、第二反応物質としてレクチンを使用することによ
り、血清中に該バクテリア（抗原）が存在するか否かの
検定が可能である。

【００２５】また、生体成分の糖蛋白質を測定する場合
には、その抗体を修飾第一反応物質として用いればよ
く、特に測定目的の糖蛋白質が病理学的にある疾患と密
接に関係している場合、例えば、癌と関連するα−フェ
トプロテイン、β−ガラクトシダーゼなどの糖蛋白質の
測定系に利用することができ、病理学的にも臨床学的に
も非常に大きな意義を有するものとなる。

【００２６】また、糖脂質に関しても、疾患と密接に関
連する糖脂質が知られている。例えば、神経疾患の一つ
ギランバレー症候群患者の血清中にはガングリオシドの
一種ＧＭ１、ＧＤ１ｂ、アシアリルＧＭ１などと反応す
る抗体（一種の自己抗体）の存在が確認されている(Yuk
i N. et al., Neurology, 40, 1900, 1990) 。これら抗
体がしびれ、感覚障害、筋力低下などの神経障害を引き
起こす原因と考えられており、本発明の方法は、これら
抗体の検定に使用することができる。

【００２７】さらにレクチンなど糖鎖結合性物質を用い
るこの新しい手法は別の意義も期待される。すなわち、
ある疾患と密接に関連するグリココンジュゲートが疾患
時に血中に放出されるものは正常な形ではなく、糖鎖部
分が変化している可能性もあることから（例えば、肝細
胞癌患者血清中のα−フェトプロテインの糖鎖は正常の
ものとは異なる）、第二反応物質である糖鎖結合性物質
を適宜選択することにより、これまでの測定法による結
果とは異なる新しい臨床データ、臨床像を示す可能性が
あると期待される。

【００２８】

【実施例】以下に記載する実験例、実施例をもって本発
明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定される
ものではない。

【００２９】実施例１ ＩｇＧの過ヨウ素酸処理 メタ過ヨウ素酸をＰＢＳ（50 mM phosphate buffer, 0.
15M NaCl, pH7.4 ）に溶解し、ヒトＩｇＧ溶液（１mg／
ml PBS）に等量添加し、遮光条件下室温にて１時間静置
し、酸化反応を行った。反応後４℃にてＰＢＳへ透析
し、過ヨウ素酸処理ＩｇＧを調製した。以下、メタ過ヨ
ウ素酸処理ＩｇＧをＬＮ−ＩｇＧ（LectinNonreactive
IgG）と略記する。

【００３０】実施例２ ＬＮ−ＩｇＧの固相化 ＬＮ−ＩｇＧをＰＢＳにて５μg ／mlに調製し、ポリス
チレン製マイクロプレートウエルに１００μl ずつ分注
し、４℃一昼夜静しＬＮ−ＩｇＧを固相化した。固相化
反応後、ＬＮ−ＩｇＧ溶液を吸引し、１％ＢＳＡ（ＰＢ
Ｓ）を各ウエルに３００μl ずつ添加し、４℃一昼夜ブ
ロッキングを行い実験に供し、本発明診断試薬の一構成
要素とする。

【００３１】実施例３ ＬＮ−ＩｇＧの抗ＩｇＧ抗体お
よびレクチンとの反応性 ＬＮ−ＩｇＧ、未処理ＩｇＧおよびコントロールＩｇＧ
（それぞれ１mg／ml）を２μl ずつニトロセルロース膜
にドットブロットし、乾燥後ゲラチン緩衝液（0.25％ゲ
ラチン、0.05％、NP-40, 0.15M NaCl, pH7.4）にてブロ
ッキングを６０分間、室温で行った。ブロッキング終了
後、ペルオキシダーゼ標識レクチン（RCA 120, Con Aま
たはLCA、 2.5μg ／ml）またはペルオキシダーゼ標識ヤ
ギ抗ヒトＩｇＧ抗体（市販の溶液を 500倍に希釈したも
の）５００μl を加えて室温６０分反応させ、ブロッキ
ングバッファーで洗浄した後、ペルオキシダーゼの基質
である４−クロロナフトール液（４−クロロナフトール
60mg, H₂O₂ 20μl, メタノール20ml／50mM Tris-HCl,
0.5M NaCl, pH7.4, 100μl ）を添加し、発色を観察し
た。

【００３２】その結果、ＬＮ−ＩｇＧは未処理ＩｇＧと
同様に抗ヒトＩｇＧ抗体と反応することを確認した。す
なわちメタ過ヨウ素酸処理したＩｇＧの抗原性は消失し
ていないことを意味する。また、レクチン（ＲＡＣ１２
０，ＣｏｎＡ，ＬＣＡ）との反応性については、未処理
ＩｇＧ(normal ＩｇＧ）は反応するがＬＮ−ＩｇＧは全
く反応しないことが確認された（表１参照）。すなわ
ち、ＬＮ−ＩｇＧはレクチン認識部位がブロックされて
いることを意味する。以上の結果から、ＬＮ−ＩｇＧ
は、抗原性は保持し、レクチン反応性のみが消失してい
ることが判明した。

【００３３】

【表１】

【００３４】実施例４ 患者および健常人血清試料の測
定 慢性関節リウマチ（ＲＡ）２０例、変形性関節症（Ｏ
Ａ）１８例、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）１０
例、肝疾患（Liver Disease)１０例、健常人 (Healthy)
２０例の血清試料中のリウマチ因子を測定した。 測定法 血清試料を予め、ゼラチン緩衝液（2.5 ％ゼラチン、0.
15M NaCl, 0.05％ NP-40, 50mM Tris-HCl, pH7.4）にて
２００倍に希釈し、その２００μl を実施例２の方法で
作製したＬＮ−ＩｇＧ固相化ウエルに添加する。２５℃
６０分間反応させた。洗浄後、ＲＣＡ１２０−ビオチン
（ 2.5μg ／ml）１００μl を各ウエルに添加し、２５
℃６０分間反応させた。反応後洗浄し、ストレプトアビ
ジン−ペルオキシダーゼ（市販品を1000倍希釈したも
の）を１００μl ずつウエルに添加し、２５℃６０分間
反応させた。洗浄後、ペルオキシダーゼの基質溶解液
（ATBS6mg, 10μl H₂O₂／4ml 0.1Mクエン酸バッファ
ー、pH4.3 ）を１００μl ずつウエルに添加し、３７℃
３０分間反応させた。反応終了後、２ｍＭ ＮａＮ₃ を
１００μl ずつウエルに添加し、２波長４０５−４９０
にて定量化した。カットオフ値は健常人血清測定平均値
の３倍（インデックス３）として設定し、カットオフ値
以上を陽性と判定した。結果は図１に示す如く、ＲＡ患
者のみ陽性率８０％（16／20）であり、ＯＡ、ＳＬＥ、
Liver Disease 、患者群に陽性検体はなかった。すなわ
ちＲＡ患者群に非常に特異的であった。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例４で行った各種患者血清中のリウマチ
因子の測定結果を示す図である。

Claims (9)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 サンドイッチ法によりリウマチ因子を測
   定する方法であって、 1) 過ヨウ素酸処理された免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）
   と検体を反応させ、検体中のリウマチ因子を結合させ、 2) リウマチ因子の糖鎖と結合活性を有する糖鎖結合性
   物質を反応させ、 3) 結合した糖鎖結合性物質の量を測定する、 ことからなる、リウマチ因子の測定方法。
2. 【請求項２】 糖鎖結合性物質が標識された糖鎖結合性
   物質である、請求項１記載のリウマチ因子の測定方法。
3. 【請求項３】 糖鎖結合性物質がレクチンである、請求
   項１記載のリウマチ因子の測定方法。
4. 【請求項４】 レクチンが標識されたレクチンである、
   請求項３記載のリウマチ因子の測定方法。
5. 【請求項５】 過ヨウ素酸処理されたＩｇＧが固相化さ
   れていることを特徴とする、請求項１記載のリウマチ因
   子の測定方法。
6. 【請求項６】 レクチンがリスナスコミニス アグルチ
   ニン（ＲＣＡ１２０）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）
   またはレンズクリナリス（ＬＣＡ）である請求項３記載
   のリウマチ因子の測定方法。
7. 【請求項７】 リウマチ因子を測定する試薬であって、
   過ヨウ素酸処理されたＩｇＧと糖鎖結合性物質を必須の
   構成成分とするリウマチ因子の測定試薬。
8. 【請求項８】 糖鎖結合性物質がレクチンである請求項
   ７記載のリウマチ因子の測定試薬。
9. 【請求項９】 レクチンがＲＣＡ１２０、ＣｏｎＡまた
   はＬＣＡである請求項８記載のリウマチ因子の測定試
   薬。