JP3369421B2 - ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム - Google Patents
ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルムInfo
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- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
- C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2367/00—Characterised by the use of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Derivatives of such polymers
- C08J2367/04—Polyesters derived from hydroxy carboxylic acids, e.g. lactones
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ポリ（３−ヒドロ
キシブタン酸）からなるフィルム及びその製造方法に関
する。詳しくは、引張強度及び破断伸びが高い生分解性
フィルム及びそれを製造する方法に関する。
キシブタン酸）からなるフィルム及びその製造方法に関
する。詳しくは、引張強度及び破断伸びが高い生分解性
フィルム及びそれを製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】多くの微生物は、菌体内貯蔵物質として
ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）（以下、「ＰＨＢ」と
もいう。）を合成し、細胞質内にグラニュルの形で蓄積
することが知られている（Anderson, A.J. and Dawes,
E.A., Microbiol. Rev., 54:450-472(1990)）。菌体か
ら分離されるＰＨＢは、生分解性と生体適合性とをもつ
熱可塑性樹脂として近年注目され（Doi, Y., In:Microb
ial polyesters. VCH, New York(1990)）、フィルムや
繊維などの成形品への利用が検討されている。
ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）（以下、「ＰＨＢ」と
もいう。）を合成し、細胞質内にグラニュルの形で蓄積
することが知られている（Anderson, A.J. and Dawes,
E.A., Microbiol. Rev., 54:450-472(1990)）。菌体か
ら分離されるＰＨＢは、生分解性と生体適合性とをもつ
熱可塑性樹脂として近年注目され（Doi, Y., In:Microb
ial polyesters. VCH, New York(1990)）、フィルムや
繊維などの成形品への利用が検討されている。
【０００３】しかしながら、従来のＰＨＢホモポリマー
は、固くてもろいという物性上の欠点があって単独で成
形に用いることが困難であることから、実用化が見送ら
れてきた。これに対し、３−ヒドロキシブタン酸成分に
３−ヒドロキシペンタン酸等の共重合成分を組み合わせ
ると、耐衝撃性が向上し柔軟な材料となることが見い出
され、種々の組成の共重合体をしなやかなフィルム等に
加工する試みがなされている（Holmes, P.A., Phys. Te
chnol., 16, p32-36(1985)、土肥義治編「生分解性高分
子材料」（工業調査会、1990）第２７頁等参照）。しか
し、このような共重合成分を加える方法は、製造コスト
の上昇につながり経済性が悪化しかねない。ＰＨＢホモ
ポリマーに延伸処理を施して高強度フィルムを作成する
試みが報告されているが、複雑な条件設定や何段階にも
わたるプロセスが必要となる上に再現性が得られなかっ
た（Holmes, P.A., In:Developments in Crystalline P
olymers-2, Bassett, D.C.(ed.) p1-65, Elsevier(198
8)）。
は、固くてもろいという物性上の欠点があって単独で成
形に用いることが困難であることから、実用化が見送ら
れてきた。これに対し、３−ヒドロキシブタン酸成分に
３−ヒドロキシペンタン酸等の共重合成分を組み合わせ
ると、耐衝撃性が向上し柔軟な材料となることが見い出
され、種々の組成の共重合体をしなやかなフィルム等に
加工する試みがなされている（Holmes, P.A., Phys. Te
chnol., 16, p32-36(1985)、土肥義治編「生分解性高分
子材料」（工業調査会、1990）第２７頁等参照）。しか
し、このような共重合成分を加える方法は、製造コスト
の上昇につながり経済性が悪化しかねない。ＰＨＢホモ
ポリマーに延伸処理を施して高強度フィルムを作成する
試みが報告されているが、複雑な条件設定や何段階にも
わたるプロセスが必要となる上に再現性が得られなかっ
た（Holmes, P.A., In:Developments in Crystalline P
olymers-2, Bassett, D.C.(ed.) p1-65, Elsevier(198
8)）。
【０００４】したがって、生分解性を保持したまま物性
を改善したＰＨＢからなるフィルムを簡便且つ再現性よ
く製造する方法の開発が望まれていた。
を改善したＰＨＢからなるフィルムを簡便且つ再現性よ
く製造する方法の開発が望まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＰＨＢから
なるフィルムを簡便且つ再現性よく製造する方法を提供
すること、及び生分解性を保持したまま物性の改善され
た前記フィルムを提供することを課題とする。
なるフィルムを簡便且つ再現性よく製造する方法を提供
すること、及び生分解性を保持したまま物性の改善され
た前記フィルムを提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意検討
した結果、一定以上の分子量を有する特定のＰＨＢホモ
ポリマーを用いることにより上記課題を解決できること
を見出し、本発明を完成した。
した結果、一定以上の分子量を有する特定のＰＨＢホモ
ポリマーを用いることにより上記課題を解決できること
を見出し、本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、数平均分子量が500,
000以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）を２倍以上
の延伸倍率で延伸する延伸工程を含むことを特徴とす
る、ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム
の製造方法に関する。
000以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）を２倍以上
の延伸倍率で延伸する延伸工程を含むことを特徴とす
る、ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム
の製造方法に関する。
【０００８】また、本発明は、数平均分子量が500,000
以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィル
ムであって、引張強度が３０ＭＰａ以上、かつ破断伸び
が１５％以上であるフィルムに関する。
以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィル
ムであって、引張強度が３０ＭＰａ以上、かつ破断伸び
が１５％以上であるフィルムに関する。
【０００９】本発明の方法により得られるポリ（３−ヒ
ドロキシブタン酸）からなるフィルム（以下、「ＰＨＢ
フィルム」ともいう。）は、生分解性を保持したまま、
従来知られているＰＨＢの物性をはるかにしのぐ、汎用
ポリマー（例えばポリプロピレン、ナイロン−６，６
等）並の物性にまで改善することができる。また、これ
により、物性改善のために共重合体やポリマーブレンド
にする必要がなく、ＰＨＢホモポリマーを単独で成形に
用いることができるため経済性も向上する。
ドロキシブタン酸）からなるフィルム（以下、「ＰＨＢ
フィルム」ともいう。）は、生分解性を保持したまま、
従来知られているＰＨＢの物性をはるかにしのぐ、汎用
ポリマー（例えばポリプロピレン、ナイロン−６，６
等）並の物性にまで改善することができる。また、これ
により、物性改善のために共重合体やポリマーブレンド
にする必要がなく、ＰＨＢホモポリマーを単独で成形に
用いることができるため経済性も向上する。
【００１０】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を説明
する。 （１）本発明のフィルムの製造方法 本発明の製造方法は、数平均分子量（Ｍｎ）が500,000
以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）を２倍以上の延
伸倍率で延伸する延伸工程を含む。
する。 （１）本発明のフィルムの製造方法 本発明の製造方法は、数平均分子量（Ｍｎ）が500,000
以上のポリ（３−ヒドロキシブタン酸）を２倍以上の延
伸倍率で延伸する延伸工程を含む。
【００１１】(i)数平均分子量500,000以上のＰＨＢ
本発明の製造方法では、数平均分子量500,000以上のＰ
ＨＢをフィルム成形材料として用いる。一般に、ＰＨＢ
を得る方法としては、発酵合成法と化学合成法とがあ
る。化学合成法は、通常の有機合成の手法に従って化学
合成する方法であり、ポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキシブ
タン酸］とポリ［（Ｓ）−３−ヒドロキシブタン酸］と
の混合物（ラセミ体）が得られる。これに対し発酵合成
法は、ＰＨＢ生産能を有する微生物を培養しその菌体内
に蓄積されるＰＨＢを取り出す方法である。発酵合成法
により得られるＰＨＢは、ポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキ
シブタン酸］ホモポリマーである。
ＨＢをフィルム成形材料として用いる。一般に、ＰＨＢ
を得る方法としては、発酵合成法と化学合成法とがあ
る。化学合成法は、通常の有機合成の手法に従って化学
合成する方法であり、ポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキシブ
タン酸］とポリ［（Ｓ）−３−ヒドロキシブタン酸］と
の混合物（ラセミ体）が得られる。これに対し発酵合成
法は、ＰＨＢ生産能を有する微生物を培養しその菌体内
に蓄積されるＰＨＢを取り出す方法である。発酵合成法
により得られるＰＨＢは、ポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキ
シブタン酸］ホモポリマーである。
【００１２】本発明においては、ポリ［（Ｒ）−３−ヒ
ドロキシブタン酸］のみが得られる発酵合成法を用いる
のが、得られるＰＨＢの物性の面から好ましい。発酵合
成法で利用できる微生物としては、高分子量のＰＨＢ生
産能を有する微生物であれば特に限定されない。ＰＨＢ
は、アルカリゲネス・ユートロファス（Alcaligeneseut
rophus）、アルカリゲネス・ラタス（Alcaligenes latu
s）、アルカリゲネス・ファエカリス（Alcaligenes fae
calis）等のアルカリゲネス属をはじめ６０種以上の天
然微生物の体内に蓄積されることが知られている。特に
本発明で用いる数平均分子量500,000以上の高分子量Ｐ
ＨＢを生産するものとして、メチロバクテリウム（Meth
ylobacterium）属に属する菌種の菌株、具体的にはMeth
ylobacterium extorquens ATCC55366が挙げられる（Bou
rque, D. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol(199
5)）。これらの菌株はAmerican Type Culture Collecti
on（ＡＴＣＣ）にて市販されている。
ドロキシブタン酸］のみが得られる発酵合成法を用いる
のが、得られるＰＨＢの物性の面から好ましい。発酵合
成法で利用できる微生物としては、高分子量のＰＨＢ生
産能を有する微生物であれば特に限定されない。ＰＨＢ
は、アルカリゲネス・ユートロファス（Alcaligeneseut
rophus）、アルカリゲネス・ラタス（Alcaligenes latu
s）、アルカリゲネス・ファエカリス（Alcaligenes fae
calis）等のアルカリゲネス属をはじめ６０種以上の天
然微生物の体内に蓄積されることが知られている。特に
本発明で用いる数平均分子量500,000以上の高分子量Ｐ
ＨＢを生産するものとして、メチロバクテリウム（Meth
ylobacterium）属に属する菌種の菌株、具体的にはMeth
ylobacterium extorquens ATCC55366が挙げられる（Bou
rque, D. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol(199
5)）。これらの菌株はAmerican Type Culture Collecti
on（ＡＴＣＣ）にて市販されている。
【００１３】発酵合成法においては、通常これらの微生
物を、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその
他の有機成分を含有する通常の培地で培養することによ
り菌体内にＰＨＢを蓄積させることができる。菌体から
のＰＨＢの採取は、クロロホルム等の有機溶媒による抽
出や、菌体成分をリゾチーム等の酵素で分解した後ＰＨ
Ｂグラニュールを濾別する方法等により実施できる。
物を、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその
他の有機成分を含有する通常の培地で培養することによ
り菌体内にＰＨＢを蓄積させることができる。菌体から
のＰＨＢの採取は、クロロホルム等の有機溶媒による抽
出や、菌体成分をリゾチーム等の酵素で分解した後ＰＨ
Ｂグラニュールを濾別する方法等により実施できる。
【００１４】また、発酵合成法の一態様として、ＰＨＢ
合成遺伝子を含む組換えＤＮＡを導入して形質転換させ
た微生物を培養し、その菌体内に生成したＰＨＢを採取
する方法が挙げられる。この方法においては、アルカリ
ゲネス・ユートロファス等を直接培養する場合と異な
り、組換えＤＮＡを導入して形質転換させた微生物は菌
体内にＰＨＢ分解酵素を持たないため、格段に高分子量
のＰＨＢを蓄積することができることから、本発明にお
いて特に好ましい。
合成遺伝子を含む組換えＤＮＡを導入して形質転換させ
た微生物を培養し、その菌体内に生成したＰＨＢを採取
する方法が挙げられる。この方法においては、アルカリ
ゲネス・ユートロファス等を直接培養する場合と異な
り、組換えＤＮＡを導入して形質転換させた微生物は菌
体内にＰＨＢ分解酵素を持たないため、格段に高分子量
のＰＨＢを蓄積することができることから、本発明にお
いて特に好ましい。
【００１５】ＰＨＢ合成の代謝系と酵素に関しては、ア
ルカリゲネス・ユートロファスにおいて詳しく研究され
ている（Haywood et al., FEMS Microbiol. Lett. 52:9
1-96, 259-264(1988)、Haywood et al., FEMS Microbio
l. Lett. 57:1-6(1989)参照）。すなわち、ＰＨＢはア
セチル−ＣｏＡから三つの酵素の働きによって合成され
る。まず、３−ケトチオラーゼによって二分子のアセチ
ル−ＣｏＡが可逆的に縮合され、アセトアセチル−Ｃｏ
Ａが合成される。このアセトアセチル−ＣｏＡは、ＮＡ
ＤＰＨと結合したアセトアセチル−ＣｏＡリダクターゼ
によって（Ｒ）−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡに還
元され、次いでＰＨＢシンターゼによって（Ｒ）−３−
ヒドロキシブチリル−ＣｏＡが重合し、ＰＨＢとなる。
アルカリゲネス・ユートロファスのこれら三つの酵素の
遺伝子については、すでにクローニング及び解析が行わ
れ、それらの遺伝子は、シンターゼ−チオラーゼ−リダ
クターゼをそれぞれコードするphbC-phbA-phbB遺伝子を
含む生合成オペロンを形成していることが明らかになっ
ている（Steinbuchel A. and Schlegel H.G., Mol.Micr
obiol., 5:535-542(1991)）。
ルカリゲネス・ユートロファスにおいて詳しく研究され
ている（Haywood et al., FEMS Microbiol. Lett. 52:9
1-96, 259-264(1988)、Haywood et al., FEMS Microbio
l. Lett. 57:1-6(1989)参照）。すなわち、ＰＨＢはア
セチル−ＣｏＡから三つの酵素の働きによって合成され
る。まず、３−ケトチオラーゼによって二分子のアセチ
ル−ＣｏＡが可逆的に縮合され、アセトアセチル−Ｃｏ
Ａが合成される。このアセトアセチル−ＣｏＡは、ＮＡ
ＤＰＨと結合したアセトアセチル−ＣｏＡリダクターゼ
によって（Ｒ）−３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡに還
元され、次いでＰＨＢシンターゼによって（Ｒ）−３−
ヒドロキシブチリル−ＣｏＡが重合し、ＰＨＢとなる。
アルカリゲネス・ユートロファスのこれら三つの酵素の
遺伝子については、すでにクローニング及び解析が行わ
れ、それらの遺伝子は、シンターゼ−チオラーゼ−リダ
クターゼをそれぞれコードするphbC-phbA-phbB遺伝子を
含む生合成オペロンを形成していることが明らかになっ
ている（Steinbuchel A. and Schlegel H.G., Mol.Micr
obiol., 5:535-542(1991)）。
【００１６】上記した形質転換体を用いるＰＨＢ発酵合
成法においては、このアルカリゲネス・ユートロファス
のＰＨＢ合成遺伝子（以下、「phbCAB」ともいう。）を
含む組換えＤＮＡを宿主に導入する。宿主としては、例
えばエシェリチア属に属する菌種、具体的には、大腸菌
（エシェリチア・コリ：Escherichia coli）の菌株が用
いられる。具体的には、Escherichia coli XL1-Blue、J
M109、DH5α、B,W等が挙げられる。上記phbCABを含む組
換えＤＮＡは、例えばプラスミドベクター、ファージベ
クター等にphbCABを挿入することによって得られる。そ
のようなベクターとしては、pSYL、pUC、pBluescript、
pJRD、pGEM等のプラスミドベクターが挙げられる。宿主
への組換えＤＮＡの導入は常法に従って行うことができ
る。
成法においては、このアルカリゲネス・ユートロファス
のＰＨＢ合成遺伝子（以下、「phbCAB」ともいう。）を
含む組換えＤＮＡを宿主に導入する。宿主としては、例
えばエシェリチア属に属する菌種、具体的には、大腸菌
（エシェリチア・コリ：Escherichia coli）の菌株が用
いられる。具体的には、Escherichia coli XL1-Blue、J
M109、DH5α、B,W等が挙げられる。上記phbCABを含む組
換えＤＮＡは、例えばプラスミドベクター、ファージベ
クター等にphbCABを挿入することによって得られる。そ
のようなベクターとしては、pSYL、pUC、pBluescript、
pJRD、pGEM等のプラスミドベクターが挙げられる。宿主
への組換えＤＮＡの導入は常法に従って行うことができ
る。
【００１７】例えば、後記実施例において用いた、Esch
erichia coli XL1-BlueにphbCABを含むプラスミドpSYL1
05を導入して得られる形質転換株Escherichia coli XL1
-Blue(pSYL105)は、以下の方法で作製することができる
（Lee, S. Y., et al., Biotechnol. Bioeng., 44:1337
-1374(1994)、Meynell, E. and Datta, N., Genet.Res.
Camb., 7, 134-140(1966)、Rasmussen, P.B., et al.,
Mol. Gen. Genet.,209,122-128(1987)、Gerdes, K., B
io/Technology, 6, 1402-1405(1988)、Schubert, P. et
al., J. Bacteriol., 173:168-175(1991)、Schubert,
P., et al.,J. Bacteriol., 170:5837-5847(1988)等参
照）。
erichia coli XL1-BlueにphbCABを含むプラスミドpSYL1
05を導入して得られる形質転換株Escherichia coli XL1
-Blue(pSYL105)は、以下の方法で作製することができる
（Lee, S. Y., et al., Biotechnol. Bioeng., 44:1337
-1374(1994)、Meynell, E. and Datta, N., Genet.Res.
Camb., 7, 134-140(1966)、Rasmussen, P.B., et al.,
Mol. Gen. Genet.,209,122-128(1987)、Gerdes, K., B
io/Technology, 6, 1402-1405(1988)、Schubert, P. et
al., J. Bacteriol., 173:168-175(1991)、Schubert,
P., et al.,J. Bacteriol., 170:5837-5847(1988)等参
照）。
【００１８】すなわち、プラスミドpSYL105は、プラス
ミドＲ１（Meynell, E. and Datta,N., Genet. Res. Ca
mb., 7, 134-140(1966)）由来のparB(hok/sok)locusを
持つpKG1022（Gerdes, K., Bio/Technology, 6, 1402-1
405(1988)）のEcoRI-HindIII断片（0.6kb）と、アルカ
リゲネス・ユートロファスH16(ATCC17699)由来のＰＨＢ
合成オペロンphbCAB及びアンピシリン耐性遺伝子を持つ
pSK2665（Schubert, P. et al., J. Bacteriol., 173:1
68-175(1991)）のEcoRI-HindIII断片（8.2kb）とから構
成される。pKG1022は、プラスミドの安定性に寄与し、
また高いコピー数が得られる。pSK2665は、ＰＨＢ合成
のための３つの酵素（３−ケトチオラーゼ、ＮＡＤＰＨ
依存性アセトアセチル−ＣｏＡリダクターゼ、ＰＨＢシ
ンターゼ）の合成に寄与し、また培地に抗生物質を加え
ることによって、薬剤耐性を持つ組換えＤＮＡにより形
質転換された目的の組換え大腸菌のみを選択的に増殖さ
せることができる。
ミドＲ１（Meynell, E. and Datta,N., Genet. Res. Ca
mb., 7, 134-140(1966)）由来のparB(hok/sok)locusを
持つpKG1022（Gerdes, K., Bio/Technology, 6, 1402-1
405(1988)）のEcoRI-HindIII断片（0.6kb）と、アルカ
リゲネス・ユートロファスH16(ATCC17699)由来のＰＨＢ
合成オペロンphbCAB及びアンピシリン耐性遺伝子を持つ
pSK2665（Schubert, P. et al., J. Bacteriol., 173:1
68-175(1991)）のEcoRI-HindIII断片（8.2kb）とから構
成される。pKG1022は、プラスミドの安定性に寄与し、
また高いコピー数が得られる。pSK2665は、ＰＨＢ合成
のための３つの酵素（３−ケトチオラーゼ、ＮＡＤＰＨ
依存性アセトアセチル−ＣｏＡリダクターゼ、ＰＨＢシ
ンターゼ）の合成に寄与し、また培地に抗生物質を加え
ることによって、薬剤耐性を持つ組換えＤＮＡにより形
質転換された目的の組換え大腸菌のみを選択的に増殖さ
せることができる。
【００１９】pKG1022の作製は次のようにして実施でき
る。すなわち、EcoRI-BamHI断片を持つ580bpのparB+遺
伝子（プラスミドＲ１由来：遺伝子配列はRasmussen,
P.B., et al., Mol. Gen. Genet., 209,122-128(1987)
のFig 3に記載されている）を、pGEM3（プロメガ：東京
都中央区東日本橋３−６−１８）のmultiple cloning r
egionに挿入し、このmultiple cloning regionを含むpG
EM4（プロメガ）のEcoRI-PvuII断片（104kb）をpKG1020
のEcoRI-PvuII regionに挿入し、これをpKG1021とす
る。pKG1021の唯一のSmaIサイトに大腸菌のトランスポ
ゾンTn5由来のPstI断片（カナマイシン耐性遺伝子を含
む）を挿入することによって、pKG1022を作製すること
ができる。
る。すなわち、EcoRI-BamHI断片を持つ580bpのparB+遺
伝子（プラスミドＲ１由来：遺伝子配列はRasmussen,
P.B., et al., Mol. Gen. Genet., 209,122-128(1987)
のFig 3に記載されている）を、pGEM3（プロメガ：東京
都中央区東日本橋３−６−１８）のmultiple cloning r
egionに挿入し、このmultiple cloning regionを含むpG
EM4（プロメガ）のEcoRI-PvuII断片（104kb）をpKG1020
のEcoRI-PvuII regionに挿入し、これをpKG1021とす
る。pKG1021の唯一のSmaIサイトに大腸菌のトランスポ
ゾンTn5由来のPstI断片（カナマイシン耐性遺伝子を含
む）を挿入することによって、pKG1022を作製すること
ができる。
【００２０】pSK2665の作製は、次のようにして実施で
きる。すなわち、アルカリゲネス・ユートロファスH16
(ATCC17699)のＤＮＡの12.5kbのEcoRI断片（PP1:Schube
rt, P. et al., J. Bacteriol., 170,5837-5847(198
8)）を制限酵素SmaIで消化し、5.2kbのEcoRI-SmaI断片
（SE52:Schubert, P. et al., J. Bacteriol., 173:168
-175(1991)）を新たに得る。これをプラスミドpBluescr
ipt SK-（東洋紡：東京都中央区日本橋小網町１７−
９）に挿入することによってpSK2665を作製することが
できる。
きる。すなわち、アルカリゲネス・ユートロファスH16
(ATCC17699)のＤＮＡの12.5kbのEcoRI断片（PP1:Schube
rt, P. et al., J. Bacteriol., 170,5837-5847(198
8)）を制限酵素SmaIで消化し、5.2kbのEcoRI-SmaI断片
（SE52:Schubert, P. et al., J. Bacteriol., 173:168
-175(1991)）を新たに得る。これをプラスミドpBluescr
ipt SK-（東洋紡：東京都中央区日本橋小網町１７−
９）に挿入することによってpSK2665を作製することが
できる。
【００２１】プラスミドpSYL105は、このようにして作
製されるpKG1022のEcoRI-HindIII断片（0.6kb）を、pSK
2665のEcoRI-HindIII部位に挿入することによって得ら
れる。
製されるpKG1022のEcoRI-HindIII断片（0.6kb）を、pSK
2665のEcoRI-HindIII部位に挿入することによって得ら
れる。
【００２２】このようにして得られるプラスミドpSYL10
5を、エレクトロポレーション法等の常法に従ってEsche
richia coli XL1-Blueに導入することにより、目的とす
る形質転換体が得られる。
5を、エレクトロポレーション法等の常法に従ってEsche
richia coli XL1-Blueに導入することにより、目的とす
る形質転換体が得られる。
【００２３】形質転換株Escherichia coli XL1-Blue(pS
YL105)は、Stratagene Cloning System（11011 North T
orrey Pines Road La Jolla CA92037, USA）から入手す
ることができる。
YL105)は、Stratagene Cloning System（11011 North T
orrey Pines Road La Jolla CA92037, USA）から入手す
ることができる。
【００２４】形質転換体は好適な培地で培養し、ＰＨＢ
を菌体内に蓄積させる。使用する培地としては、炭素
源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその他の有機成
分を含有する通常の培地が挙げられる。大腸菌を用いる
場合、炭素源としてはグルコース等が挙げられ、窒素源
としてはイーストエキス、トリプトン等の天然物由来の
ものが挙げられる。その他、アンモニウム塩などの無機
の窒素化合物等が含まれていてもよい。培養は好気的条
件下で１２〜２０時間、培養温度は３０〜３７℃、培養
中のｐＨは６．０〜８．０に制御することが好ましい。
菌体からのＰＨＢの採取は、クロロホルム等の有機溶媒
による抽出や、菌体成分をリゾチーム等の酵素で分解し
た後ＰＨＢグラニュールを濾別する方法等により実施で
きる。具体的には、例えば培養液から分離回収した乾燥
菌体からＰＨＢを適当な貧溶媒で抽出した後沈殿剤で沈
殿させることにより実施できる。
を菌体内に蓄積させる。使用する培地としては、炭素
源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその他の有機成
分を含有する通常の培地が挙げられる。大腸菌を用いる
場合、炭素源としてはグルコース等が挙げられ、窒素源
としてはイーストエキス、トリプトン等の天然物由来の
ものが挙げられる。その他、アンモニウム塩などの無機
の窒素化合物等が含まれていてもよい。培養は好気的条
件下で１２〜２０時間、培養温度は３０〜３７℃、培養
中のｐＨは６．０〜８．０に制御することが好ましい。
菌体からのＰＨＢの採取は、クロロホルム等の有機溶媒
による抽出や、菌体成分をリゾチーム等の酵素で分解し
た後ＰＨＢグラニュールを濾別する方法等により実施で
きる。具体的には、例えば培養液から分離回収した乾燥
菌体からＰＨＢを適当な貧溶媒で抽出した後沈殿剤で沈
殿させることにより実施できる。
【００２５】上記ＰＨＢ合成遺伝子phbCABを含む組換え
ＤＮＡを導入して形質転換された大腸菌が大量のＰＨＢ
を蓄積することが報告されている（Slater et al., J.
Bacteriol., 170:4431-4436(1988)、Schubert et al.,
J. Bacteriol., 170:5837-5847(1988)）。また最近、ア
ルカリゲネス・ユートロファスのＰＨＢシンターゼのオ
ーバープロダクションと精製に成功したことが報告され
ている（Gerngross etal., Biochemistry 33:9311-9320
(1994)）。分離精製されたＰＨＢシンターゼによるin v
itroのＰＨＢ合成によって、アルカリゲネス・ユートロ
ファスから得られる標準的なＰＨＢの分子量を大幅に上
回る超高分子量（Ｍｎ＞１０×１０6）のものが得られ
た（Gerngross T.U. and Martin D.P., Proc. Natl. Ac
ad. Sci., USA 92:6279-6283(1995)）。一方、アルカリ
ゲネス・ユートロファスの菌体内においては、ＰＨＢは
菌体内分解酵素によって（Ｒ）−３−ヒドロキシブタン
酸へ加水分解されることが知られている（Hippe H. and
Schlegel H.G., Arch.Mikrobiol., 56:278-299(196
7)）。アルカリゲネス・ユートロファスにおけるＰＨＢ
合成と分解による分子量変化の経時変化に関する研究も
行われ、また生合成の速度論モデルも提案されている
（Kawaguchi, Y., et al., Macromolecules, 25:2324-2
329(1992)、Koizumi F. and Doi Y., J. Macromol. Sc
i., Pure Appl.Chem., A32:759-774(1995)）。
ＤＮＡを導入して形質転換された大腸菌が大量のＰＨＢ
を蓄積することが報告されている（Slater et al., J.
Bacteriol., 170:4431-4436(1988)、Schubert et al.,
J. Bacteriol., 170:5837-5847(1988)）。また最近、ア
ルカリゲネス・ユートロファスのＰＨＢシンターゼのオ
ーバープロダクションと精製に成功したことが報告され
ている（Gerngross etal., Biochemistry 33:9311-9320
(1994)）。分離精製されたＰＨＢシンターゼによるin v
itroのＰＨＢ合成によって、アルカリゲネス・ユートロ
ファスから得られる標準的なＰＨＢの分子量を大幅に上
回る超高分子量（Ｍｎ＞１０×１０6）のものが得られ
た（Gerngross T.U. and Martin D.P., Proc. Natl. Ac
ad. Sci., USA 92:6279-6283(1995)）。一方、アルカリ
ゲネス・ユートロファスの菌体内においては、ＰＨＢは
菌体内分解酵素によって（Ｒ）−３−ヒドロキシブタン
酸へ加水分解されることが知られている（Hippe H. and
Schlegel H.G., Arch.Mikrobiol., 56:278-299(196
7)）。アルカリゲネス・ユートロファスにおけるＰＨＢ
合成と分解による分子量変化の経時変化に関する研究も
行われ、また生合成の速度論モデルも提案されている
（Kawaguchi, Y., et al., Macromolecules, 25:2324-2
329(1992)、Koizumi F. and Doi Y., J. Macromol. Sc
i., Pure Appl.Chem., A32:759-774(1995)）。
【００２６】アルカリゲネス・ユートロファスのＰＨＢ
合成遺伝子phbCABを含む組換えＤＮＡを導入して形質転
換した大腸菌を利用して合成したＰＨＢについては、そ
の分子量の経時変化に関する報告がなされている（Kusa
ka et al., Polymer Preprints, Japan, vol.45, No.4
(1996)）。組換えＤＮＡを導入した形質転換体を用いた
この方法によれば、従来のアルカリゲネス・ユートロフ
ァスを培養して得られるものより格段に高分子量のＰＨ
Ｂが得られる。本発明においては、数平均分子量500,00
0以上、好ましくは1,000,000以上、さらに好ましくは2,
000,000以上という高分子量のＰＨＢが用いられる。分
子量が低すぎると高倍率での延伸が困難となり、十分な
強度のフィルムが得られない。数平均分子量の上限は特
に制限されないが、入手容易性及び成形性の点から、好
ましくは20,000,000以下、特に好ましくは15,000,000以
下のものが用いられる。
合成遺伝子phbCABを含む組換えＤＮＡを導入して形質転
換した大腸菌を利用して合成したＰＨＢについては、そ
の分子量の経時変化に関する報告がなされている（Kusa
ka et al., Polymer Preprints, Japan, vol.45, No.4
(1996)）。組換えＤＮＡを導入した形質転換体を用いた
この方法によれば、従来のアルカリゲネス・ユートロフ
ァスを培養して得られるものより格段に高分子量のＰＨ
Ｂが得られる。本発明においては、数平均分子量500,00
0以上、好ましくは1,000,000以上、さらに好ましくは2,
000,000以上という高分子量のＰＨＢが用いられる。分
子量が低すぎると高倍率での延伸が困難となり、十分な
強度のフィルムが得られない。数平均分子量の上限は特
に制限されないが、入手容易性及び成形性の点から、好
ましくは20,000,000以下、特に好ましくは15,000,000以
下のものが用いられる。
【００２７】本発明におけるフィルムの成形材料として
は、上記ＰＨＢ以外に通常フィルムに用いられる各種添
加剤、例えば滑剤、紫外線吸収剤、耐候剤、帯電防止
剤、酸化防止剤、熱安定剤、核剤、流動改良剤、着色剤
等を必要に応じて含有させることができる。
は、上記ＰＨＢ以外に通常フィルムに用いられる各種添
加剤、例えば滑剤、紫外線吸収剤、耐候剤、帯電防止
剤、酸化防止剤、熱安定剤、核剤、流動改良剤、着色剤
等を必要に応じて含有させることができる。
【００２８】(ii)延伸工程
本発明の方法においては、上述した方法で得られる数平
均分子量500,000以上のＰＨＢを溶融し延伸してフィル
ムとする。延伸方法は特に限定されず、通常のプラスチ
ックフィルムの延伸技術のいずれを採用することもでき
るが、好ましくはソルベントキャスト法により厚さ２０
〜１００μｍ程度のフィルムを形成させ、これを延伸機
に固定して加熱下に一定方向に張力をかけて延伸する。
加熱はオイルバス等を用い、好ましくは１５５〜１８０
℃の温度とする。このとき、オイルバス等に浸漬すると
通常直ちにフィルムが軟化するので、重り等を用いて延
伸することができる。ただし、オイルバス等に長時間浸
漬するとフィルムの溶解が起こるため、好ましくは１〜
３秒間浸漬してフィルムを延伸した後すばやくオイルバ
ス等から取り出すのがよい。また、延伸方向は一方向で
あっても（１軸延伸）、二方向（２軸延伸）であっても
よいが、本発明では一方向に延伸するのが適してい
る。。
均分子量500,000以上のＰＨＢを溶融し延伸してフィル
ムとする。延伸方法は特に限定されず、通常のプラスチ
ックフィルムの延伸技術のいずれを採用することもでき
るが、好ましくはソルベントキャスト法により厚さ２０
〜１００μｍ程度のフィルムを形成させ、これを延伸機
に固定して加熱下に一定方向に張力をかけて延伸する。
加熱はオイルバス等を用い、好ましくは１５５〜１８０
℃の温度とする。このとき、オイルバス等に浸漬すると
通常直ちにフィルムが軟化するので、重り等を用いて延
伸することができる。ただし、オイルバス等に長時間浸
漬するとフィルムの溶解が起こるため、好ましくは１〜
３秒間浸漬してフィルムを延伸した後すばやくオイルバ
ス等から取り出すのがよい。また、延伸方向は一方向で
あっても（１軸延伸）、二方向（２軸延伸）であっても
よいが、本発明では一方向に延伸するのが適してい
る。。
【００２９】延伸倍率は２倍以上、好ましくは２〜１０
倍、特に好ましくは４〜１０倍である。従来の方法では
延伸が容易ではなく、２倍未満の倍率でもすぐに破断し
てしまったが、本発明の方法では、高分子量のＰＨＢを
用いているためこのような高い倍率で延伸することがで
き、高強度と柔軟性を有するフィルムを製造することが
できる。この延伸倍率が低すぎるとＰＨＢの結晶配向が
弱くなり、強度が低下するため好ましくない。延伸倍率
が高すぎるとフィルムが破断する。
倍、特に好ましくは４〜１０倍である。従来の方法では
延伸が容易ではなく、２倍未満の倍率でもすぐに破断し
てしまったが、本発明の方法では、高分子量のＰＨＢを
用いているためこのような高い倍率で延伸することがで
き、高強度と柔軟性を有するフィルムを製造することが
できる。この延伸倍率が低すぎるとＰＨＢの結晶配向が
弱くなり、強度が低下するため好ましくない。延伸倍率
が高すぎるとフィルムが破断する。
【００３０】延伸後、オイルバスからフィルムを取り出
し、室温に冷却することにより目的とする延伸フィルム
を得ることができる。
し、室温に冷却することにより目的とする延伸フィルム
を得ることができる。
【００３１】(iii)熱処理工程
本発明の方法においては、前記延伸工程につづいて、熱
処理工程を含めることができる。熱処理温度は６０〜１
７０℃、より好ましくは１００〜１６０℃である。熱処
理は、フィルムの縮みや変形を抑制するために張力をか
けた状態で行うのが好ましい。具体的には、前記延伸工
程で得られた延伸フィルムを治具等に固定した状態で熱
処理を行う。空気中で行う。熱処理時間は、好ましくは
２０分〜２時間である。このような熱処理を行うことに
より、さらに引張強度及び破断伸びを向上させることが
できる。
処理工程を含めることができる。熱処理温度は６０〜１
７０℃、より好ましくは１００〜１６０℃である。熱処
理は、フィルムの縮みや変形を抑制するために張力をか
けた状態で行うのが好ましい。具体的には、前記延伸工
程で得られた延伸フィルムを治具等に固定した状態で熱
処理を行う。空気中で行う。熱処理時間は、好ましくは
２０分〜２時間である。このような熱処理を行うことに
より、さらに引張強度及び破断伸びを向上させることが
できる。
【００３２】熱処理を行う場合は、数平均分子量が2,00
0,000以上のＰＨＢからなるフィルムを用いることが、
効果が顕著に現れることから特に好ましい。数平均分子
量が2,000,000以上のＰＨＢからなるフィルムでは、引
張強度、破断伸び等の物性の更なる向上が見られる。一
方、数平均分子量が2,000,000未満のＰＨＢからなるフ
ィルムの場合は、熱処理中の熱分解による分子量低下に
よって物性が逆に低下する場合がある。
0,000以上のＰＨＢからなるフィルムを用いることが、
効果が顕著に現れることから特に好ましい。数平均分子
量が2,000,000以上のＰＨＢからなるフィルムでは、引
張強度、破断伸び等の物性の更なる向上が見られる。一
方、数平均分子量が2,000,000未満のＰＨＢからなるフ
ィルムの場合は、熱処理中の熱分解による分子量低下に
よって物性が逆に低下する場合がある。
【００３３】（２）本発明のフィルム
本発明のフィルムは、数平均分子量が500,000以上のＰ
ＨＢ（ポリ（３−ヒドロキシブタン酸））からなるフィ
ルムであって、引張強度が３０ＭＰａ以上、かつ破断伸
びが１５％以上である。
ＨＢ（ポリ（３−ヒドロキシブタン酸））からなるフィ
ルムであって、引張強度が３０ＭＰａ以上、かつ破断伸
びが１５％以上である。
【００３４】従来は、ＰＨＢホモポリマーは固くてもろ
いという物性上の欠点があり、フィルム化が困難であっ
たが、本発明においては、従来の汎用ポリマーと同等以
上の物性を有するＰＨＢホモポリマーからなるフィルム
を提供することができる。
いという物性上の欠点があり、フィルム化が困難であっ
たが、本発明においては、従来の汎用ポリマーと同等以
上の物性を有するＰＨＢホモポリマーからなるフィルム
を提供することができる。
【００３５】ここでいう引張強度は、ＪＩＳ−Ｋ−６３
０１に準拠して測定されたものであり、本発明のフィル
ムでは３０ＭＰａ以上、好ましくは５０ＭＰａ以上であ
る。破断伸びは、ＪＩＳ−Ｋ−６３０１に準拠して測定
されたものであり、１５％以上、好ましくは３０％以上
である。本発明のＰＨＢフィルムの融点は、好ましくは
１７５℃以上、より好ましくは１８２〜１８６℃であ
る。
０１に準拠して測定されたものであり、本発明のフィル
ムでは３０ＭＰａ以上、好ましくは５０ＭＰａ以上であ
る。破断伸びは、ＪＩＳ−Ｋ−６３０１に準拠して測定
されたものであり、１５％以上、好ましくは３０％以上
である。本発明のＰＨＢフィルムの融点は、好ましくは
１７５℃以上、より好ましくは１８２〜１８６℃であ
る。
【００３６】また、本発明のフィルムは、従来のフィル
ム用汎用ポリマーと同等以上の柔軟性を有し、例えばヤ
ング率が３ＧＰａ以下、より好ましくは０．５〜２ＧＰ
ａである。
ム用汎用ポリマーと同等以上の柔軟性を有し、例えばヤ
ング率が３ＧＰａ以下、より好ましくは０．５〜２ＧＰ
ａである。
【００３７】このような物性を有するフィルムは、例え
ば上述した製造方法により数平均分子量が500,000以上
の高分子量ＰＨＢを延伸することにより得られる。ま
た、数平均分子量が500,000以上のＰＨＢとしては、上
述した発酵合成法等により得ることができる。
ば上述した製造方法により数平均分子量が500,000以上
の高分子量ＰＨＢを延伸することにより得られる。ま
た、数平均分子量が500,000以上のＰＨＢとしては、上
述した発酵合成法等により得ることができる。
【００３８】本発明のフィルムは、ＰＨＢフィルム中の
結晶部の向きが一定方向である配向結晶性フィルムであ
る。従来のＰＨＢは配向結晶化させるのが難しく、配向
結晶性のフィルムを得ることが容易ではなかったが、本
発明においては、一定以上の高分子量ＰＨＢを延伸する
ことにより、配向結晶性フィルムを得ることができる。
本発明のフィルムの結晶化度は好ましくは７５％以上で
ある。
結晶部の向きが一定方向である配向結晶性フィルムであ
る。従来のＰＨＢは配向結晶化させるのが難しく、配向
結晶性のフィルムを得ることが容易ではなかったが、本
発明においては、一定以上の高分子量ＰＨＢを延伸する
ことにより、配向結晶性フィルムを得ることができる。
本発明のフィルムの結晶化度は好ましくは７５％以上で
ある。
【００３９】本発明のフィルムは、上述したように十分
な強度と柔軟性を有し、且つ生分解性及び生体適合性に
優れたＰＨＢからなるものであり、医療用器具、食品そ
の他の包装材料、農業用ビニールシート、苗用の鉢、建
設土木用シート等に有用である。
な強度と柔軟性を有し、且つ生分解性及び生体適合性に
優れたＰＨＢからなるものであり、医療用器具、食品そ
の他の包装材料、農業用ビニールシート、苗用の鉢、建
設土木用シート等に有用である。
【００４０】
【実施例】以下に、本発明の実施例を説明する。
【００４１】
【製造例】＜ＰＨＢの合成＞
（１）形質転換株（Escherichia coli XL1-Blue(pSYL10
5)）の調製 プラスミドＲ１由来のparB(hok/sok)locusを含むpKG102
2（0.6kb）を、次のようにして作製した（Gerdes, K.,
Bio/Technology, 6, 1402-1405(1988)）。すなわち、Ec
oRI-BamHI断片を持つ580bpのparB+遺伝子（遺伝子配列
はRasmussen, P.B., et al., Mol. Gen. Genet., 209,1
22-128(1987)参照）を、pGEM3（プロメガ）のmultiple
cloning regionに挿入し、このmultiple cloning regio
nを含むpGEM4（プロメガ）のEcoRI-PvuII断片（104kb）
をpKG1020のEcoRI-PvuII regionに挿入し、これをpKG10
21とした。pKG1021の唯一のSmaIサイトに大腸菌のトラ
ンスポゾンTn5由来のPstI断片（カナマイシン耐性遺伝
子を含む）を挿入することによって、pKG1022を作製し
た。
5)）の調製 プラスミドＲ１由来のparB(hok/sok)locusを含むpKG102
2（0.6kb）を、次のようにして作製した（Gerdes, K.,
Bio/Technology, 6, 1402-1405(1988)）。すなわち、Ec
oRI-BamHI断片を持つ580bpのparB+遺伝子（遺伝子配列
はRasmussen, P.B., et al., Mol. Gen. Genet., 209,1
22-128(1987)参照）を、pGEM3（プロメガ）のmultiple
cloning regionに挿入し、このmultiple cloning regio
nを含むpGEM4（プロメガ）のEcoRI-PvuII断片（104kb）
をpKG1020のEcoRI-PvuII regionに挿入し、これをpKG10
21とした。pKG1021の唯一のSmaIサイトに大腸菌のトラ
ンスポゾンTn5由来のPstI断片（カナマイシン耐性遺伝
子を含む）を挿入することによって、pKG1022を作製し
た。
【００４２】また、アルカリゲネス・ユートロファスH1
6（ATCC17699）のＰＨＢ生合成オペロンを含むpSK2665
を、次のようにして作製した（Schubert, P. et al.,
J. Bacteriol., 173:168-175(1991)）。すなわち、アル
カリゲネス・ユートロファスH16(ATCC17699)のＤＮＡの
12.5kbのEcoRI断片（PP1:Schubert, P. et al., J. Bac
teriol., 170,5837-5847(1988)）を制限酵素SmaIで消化
し、5.2kbのEcoRI-SmaI断片（SE52:Schubert, P. et a
l., J. Bacteriol., 173:168-175(1991)）を新たに得
て、これをプラスミドpBluescript SK-（東洋紡）に挿
入することによってpSK2665を作製した。
6（ATCC17699）のＰＨＢ生合成オペロンを含むpSK2665
を、次のようにして作製した（Schubert, P. et al.,
J. Bacteriol., 173:168-175(1991)）。すなわち、アル
カリゲネス・ユートロファスH16(ATCC17699)のＤＮＡの
12.5kbのEcoRI断片（PP1:Schubert, P. et al., J. Bac
teriol., 170,5837-5847(1988)）を制限酵素SmaIで消化
し、5.2kbのEcoRI-SmaI断片（SE52:Schubert, P. et a
l., J. Bacteriol., 173:168-175(1991)）を新たに得
て、これをプラスミドpBluescript SK-（東洋紡）に挿
入することによってpSK2665を作製した。
【００４３】pKG1022のEcoRI-HindIII断片（0.6kb）をp
SK2665のEcoRI-HindIII部位に挿入することによってプ
ラスミドpSYL105（8.8kb）を得た。得られたプラスミド
pSYL105の構造を図１に示す（Lee, S. Y., et al., Bio
technol. Bioeng., 44:1337-1374(1994)参照）。
SK2665のEcoRI-HindIII部位に挿入することによってプ
ラスミドpSYL105（8.8kb）を得た。得られたプラスミド
pSYL105の構造を図１に示す（Lee, S. Y., et al., Bio
technol. Bioeng., 44:1337-1374(1994)参照）。
【００４４】Escherichia coli XL1-Blueへのプラスミ
ドpSYL105の導入をエレクトロポレーション法により行
い、形質転換株（Escherichia coli XL1-Blue(pSYL10
5)）を調製した。尚、Escherichia coli XL1-Blueは、S
tratagene Cloning System（11011 North Torrey Pines
Road La Jolla CA92037, USA）から入手した。
ドpSYL105の導入をエレクトロポレーション法により行
い、形質転換株（Escherichia coli XL1-Blue(pSYL10
5)）を調製した。尚、Escherichia coli XL1-Blueは、S
tratagene Cloning System（11011 North Torrey Pines
Road La Jolla CA92037, USA）から入手した。
【００４５】（２）発酵合成
(i)前培養
イーストエキス１０ｇ／Ｌ、トリプトン５ｇ／Ｌ、塩化
ナトリウム１０ｇ／ＬからなるLuria-Bertani（ＬＢ）
培地３．５ｍＬを入れた２０ｍＬ試験管に、−８０℃で
保存しておいたEscherichia coli XL1-Blue（pSYL105）
の１０ｖ／ｖ％のグリセロールストック１ｍＬを接種
し、３７℃で１２時間好気的に培養した。これを、ＬＢ
培地７５ｍＬを入れた５００ｍＬ坂口フラスコに接種
し、３７℃で１２時間好気的に培養した。この前培養で
はグルコースを与えないことが重要である。
ナトリウム１０ｇ／ＬからなるLuria-Bertani（ＬＢ）
培地３．５ｍＬを入れた２０ｍＬ試験管に、−８０℃で
保存しておいたEscherichia coli XL1-Blue（pSYL105）
の１０ｖ／ｖ％のグリセロールストック１ｍＬを接種
し、３７℃で１２時間好気的に培養した。これを、ＬＢ
培地７５ｍＬを入れた５００ｍＬ坂口フラスコに接種
し、３７℃で１２時間好気的に培養した。この前培養で
はグルコースを与えないことが重要である。
【００４６】(ii)本培養
丸菱バイオエンジModel２５０にＬＢ培地１３３５ｍＬ
を加え、１２１℃で１５分滅菌した。別に、グルコース
３０ｇ／水１００ｍＬ溶液を同条件で滅菌しておき、フ
ァーメンターに加えた。ファーメンターは、温度３７℃
に調整し、０．７５Ｌ／ｍｉｎでフィルター滅菌した酸
素を供給し、撹拌速度４００ｒｐｍで撹拌した。培地の
ｐＨは、２Ｎ−ＮａＣｌ、２Ｎ−Ｈ2ＳＯ4で培地のｐＨ
をモニターしながら、自動的に６．０〜７．０に制御し
た。ここに、前培養で得られた培養液７５ｍＬを接種
し、１２〜１５時間培養したのち、培養液を回収した。
を加え、１２１℃で１５分滅菌した。別に、グルコース
３０ｇ／水１００ｍＬ溶液を同条件で滅菌しておき、フ
ァーメンターに加えた。ファーメンターは、温度３７℃
に調整し、０．７５Ｌ／ｍｉｎでフィルター滅菌した酸
素を供給し、撹拌速度４００ｒｐｍで撹拌した。培地の
ｐＨは、２Ｎ−ＮａＣｌ、２Ｎ−Ｈ2ＳＯ4で培地のｐＨ
をモニターしながら、自動的に６．０〜７．０に制御し
た。ここに、前培養で得られた培養液７５ｍＬを接種
し、１２〜１５時間培養したのち、培養液を回収した。
【００４７】（３）菌体の回収
回収した培養液を４℃で、１５０００ｇ、１０分間遠心
分離機にかけ、上清を取り除いた。回収した菌体は蒸留
水とよく混ぜ合わせて洗浄し、洗浄液は再び遠心分離機
にかけて分離した。集めた菌体を、次いで凍結乾燥し
た。
分離機にかけ、上清を取り除いた。回収した菌体は蒸留
水とよく混ぜ合わせて洗浄し、洗浄液は再び遠心分離機
にかけて分離した。集めた菌体を、次いで凍結乾燥し
た。
【００４８】このようにして得られた乾燥菌体を細かく
すりつぶし、常温のクロロホルム２Ｌに対して乾燥菌体
約５ｇの割合で加え、よく撹拌した。ＰＨＢが完全にク
ロロホルム中に溶けだした後、フィルターで菌体を除去
した。溶液はロータリーエバポレーターで約１０分の１
に濃縮した。これを、１０倍量のヘキサンにゆっくり注
ぎ、白いＰＨＢの沈殿を得た。濾過によりヘキサンを除
去し、よく乾燥させて目的とするＰＨＢを得た。
すりつぶし、常温のクロロホルム２Ｌに対して乾燥菌体
約５ｇの割合で加え、よく撹拌した。ＰＨＢが完全にク
ロロホルム中に溶けだした後、フィルターで菌体を除去
した。溶液はロータリーエバポレーターで約１０分の１
に濃縮した。これを、１０倍量のヘキサンにゆっくり注
ぎ、白いＰＨＢの沈殿を得た。濾過によりヘキサンを除
去し、よく乾燥させて目的とするＰＨＢを得た。
【００４９】得られたＰＨＢの数平均分子量（Ｍｎ）
は、島津１０ＡＧＰＣシステムと、６Ａ示差屈折計、Sh
odex K802, K806Mカラムを直列接続したものを用い、４
０℃で測定した。溶離液にはクロロホルムを用い、流速
は０．８ｍＬ／ｍｉｎとし、サンプル濃度は０．２５ｍ
ｇ／ｍＬとした。数平均分子量1,200〜2,900,000の多分
散度の狭いポリスチレンスタンダードを使用して検量線
を作成し、ＧＰＣより得られたデータから島津クロマト
パックＣ−Ｒ７Ａで、ＧＰＣプログラムを使って分子量
を計算した。起こりうる分子量測定誤差は±２０％であ
る。このようにして300,000、750,000、1,000,000、2,0
00,000、6,000,000及び14,000,000の数平均分子量を有
するＰＨＢ（後記表１〜２参照）が得られた。
は、島津１０ＡＧＰＣシステムと、６Ａ示差屈折計、Sh
odex K802, K806Mカラムを直列接続したものを用い、４
０℃で測定した。溶離液にはクロロホルムを用い、流速
は０．８ｍＬ／ｍｉｎとし、サンプル濃度は０．２５ｍ
ｇ／ｍＬとした。数平均分子量1,200〜2,900,000の多分
散度の狭いポリスチレンスタンダードを使用して検量線
を作成し、ＧＰＣより得られたデータから島津クロマト
パックＣ−Ｒ７Ａで、ＧＰＣプログラムを使って分子量
を計算した。起こりうる分子量測定誤差は±２０％であ
る。このようにして300,000、750,000、1,000,000、2,0
00,000、6,000,000及び14,000,000の数平均分子量を有
するＰＨＢ（後記表１〜２参照）が得られた。
【００５０】
【比較例１〜２、実施例１〜９】上記製造例で得られた
表１に示す各数平均分子量を有するＰＨＢを用い、ソル
ベントキャスト法（溶媒：クロロホルム、濃度：１ｗｔ
／ｖｏｌ％）により厚さ５０μｍのフィルムを成形し、
これを１０×２０ｍｍのサイズに切ってこれを試験用フ
ィルムとした（比較例１〜２、実施例１〜１２）。この
試験用フィルムを、延伸倍率に応じた重さの重りを延伸
機に固定し、オイルバスに１〜３秒間浸漬した。延伸機
に試験用フィルムを固定したところを図２に模式図とし
て示す。図２中、１は試験用フィルム、２は重りであ
る。延伸温度（オイルバスの温度）は、用いるＰＨＢに
応じて表１に示すように調整した。
表１に示す各数平均分子量を有するＰＨＢを用い、ソル
ベントキャスト法（溶媒：クロロホルム、濃度：１ｗｔ
／ｖｏｌ％）により厚さ５０μｍのフィルムを成形し、
これを１０×２０ｍｍのサイズに切ってこれを試験用フ
ィルムとした（比較例１〜２、実施例１〜１２）。この
試験用フィルムを、延伸倍率に応じた重さの重りを延伸
機に固定し、オイルバスに１〜３秒間浸漬した。延伸機
に試験用フィルムを固定したところを図２に模式図とし
て示す。図２中、１は試験用フィルム、２は重りであ
る。延伸温度（オイルバスの温度）は、用いるＰＨＢに
応じて表１に示すように調整した。
【００５１】試験用フィルムは、オイルバスに浸漬した
後直ちに軟化し、重りによって延伸された。各フィルム
の延伸度を表１に示す。このようにして得られた延伸フ
ィルムを素早くオイルバスから取り出し、室温で冷却し
た。尚、数平均分子量が300,000のＰＨＢを用いた場合
（比較例１〜２）は、オイルバス中でフィルムが切断
し、延伸できなかった。
後直ちに軟化し、重りによって延伸された。各フィルム
の延伸度を表１に示す。このようにして得られた延伸フ
ィルムを素早くオイルバスから取り出し、室温で冷却し
た。尚、数平均分子量が300,000のＰＨＢを用いた場合
（比較例１〜２）は、オイルバス中でフィルムが切断
し、延伸できなかった。
【００５２】得られた延伸フィルムについて、引張強
度、破断伸び、及びヤング率を測定した。結果を表１に
示す。尚、引張強度、破断伸び、及びヤング率は、ＪＩ
Ｓ−Ｋ−６３０１に準拠し、今田製作所製ＳＶ−２００
型引張圧縮試験機を用いて測定した。用いたサンプルの
形状は、ＪＩＳ−Ｋ−６３０１のサイズ４のダンベル型
サンプルとし、引張速度は２０ｍｍ／分とした。
度、破断伸び、及びヤング率を測定した。結果を表１に
示す。尚、引張強度、破断伸び、及びヤング率は、ＪＩ
Ｓ−Ｋ−６３０１に準拠し、今田製作所製ＳＶ−２００
型引張圧縮試験機を用いて測定した。用いたサンプルの
形状は、ＪＩＳ−Ｋ−６３０１のサイズ４のダンベル型
サンプルとし、引張速度は２０ｍｍ／分とした。
【００５３】この結果からわかるように、本発明の方法
によれば、引張強度及び破断伸びが高く優れた物性を有
するＰＨＢフィルムが得られる。
によれば、引張強度及び破断伸びが高く優れた物性を有
するＰＨＢフィルムが得られる。
【００５４】
【表１】
【００５５】
【実施例１０〜１８】上記製造例で得られた表２に示す
各数平均分子量を有するＰＨＢを用い、実施例１〜９と
同様の方法で延伸フィルムを作成した。延伸倍率は表２
に示す通りとした。このようにして得られた延伸フィル
ムを、フィルムの縮みや変形を抑えるために治具に固定
し、空気中で１６０℃にて２時間熱処理した。熱処理後
の延伸フィルムにおけるＰＨＢの数平均分子量を表２に
示す。また、実施例１と同様の方法で引張強度、破断伸
び及びヤング率を測定した。結果を表２に示す。
各数平均分子量を有するＰＨＢを用い、実施例１〜９と
同様の方法で延伸フィルムを作成した。延伸倍率は表２
に示す通りとした。このようにして得られた延伸フィル
ムを、フィルムの縮みや変形を抑えるために治具に固定
し、空気中で１６０℃にて２時間熱処理した。熱処理後
の延伸フィルムにおけるＰＨＢの数平均分子量を表２に
示す。また、実施例１と同様の方法で引張強度、破断伸
び及びヤング率を測定した。結果を表２に示す。
【００５６】この結果から、数平均分子量2,000,000以
上のＰＨＢからなる延伸フィルムは、一定条件下に熱処
理を施すことにより、熱処理前よりさらに物性が向上す
ることがわかる。
上のＰＨＢからなる延伸フィルムは、一定条件下に熱処
理を施すことにより、熱処理前よりさらに物性が向上す
ることがわかる。
【００５７】
【表２】
【００５８】
【実施例１９】ＰＨＢからなる延伸フィルム（上記実施
例７のもの）及びそれに熱処理を施したフィルム（上記
実施例１６のもの）について、酵素分解試験を行った。
分解酵素は、アルカリゲネス・ファエカリス（Alcalige
nes faecalis）由来の菌体外ＰＨＢ分解酵素を用いた。
ｐＨ７．５に調整した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝
溶液中に酵素を１０μｇ／ｍｌになるように加え、５ｍ
ｍ×１０ｍｍ×０．０２ｍｍの大きさ、厚さのフィルム
を入れ、３７℃で反応させると、２０〜３０時間でいず
れのフィルムも完全に分解した。
例７のもの）及びそれに熱処理を施したフィルム（上記
実施例１６のもの）について、酵素分解試験を行った。
分解酵素は、アルカリゲネス・ファエカリス（Alcalige
nes faecalis）由来の菌体外ＰＨＢ分解酵素を用いた。
ｐＨ７．５に調整した５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝
溶液中に酵素を１０μｇ／ｍｌになるように加え、５ｍ
ｍ×１０ｍｍ×０．０２ｍｍの大きさ、厚さのフィルム
を入れ、３７℃で反応させると、２０〜３０時間でいず
れのフィルムも完全に分解した。
【００５９】
【実施例２０】上記製造例で得られたＰＨＢを用い、実
施例１〜９と同様の方法で以下のフィルム（ＰＨＢ
(1)、ＰＨＢ(2)及びＰＨＢ(3)）を作成した。尚、熱処
理は実施例１０〜１８におけるのと同様の方法で行っ
た。また、未延伸のものについては、実施例１〜９にお
ける延伸処理前の試験用フィルムと同様の方法で作成し
たものである。
施例１〜９と同様の方法で以下のフィルム（ＰＨＢ
(1)、ＰＨＢ(2)及びＰＨＢ(3)）を作成した。尚、熱処
理は実施例１０〜１８におけるのと同様の方法で行っ
た。また、未延伸のものについては、実施例１〜９にお
ける延伸処理前の試験用フィルムと同様の方法で作成し
たものである。
【００６０】
ＰＨＢ(1)：数平均分子量300,000、未延伸。
ＰＨＢ(2)：数平均分子量6,000,000、延伸度６２０％。
ＰＨＢ(3)：数平均分子量6,000,000、延伸度６２０％＋
熱処理（１６０℃、２時間）。
熱処理（１６０℃、２時間）。
【００６１】このようにして得られたＰＨＢフィルムと
従来からフィルム材料として使用されている高密度ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ）及びポリアミド樹脂（ナイロン−６，６）
について、融点（Ｔｍ：℃）、ガラス転移点（Ｔｇ：
℃）、結晶化度（％）、ヤング率（ＧＰａ）、引張強度
（ＭＰａ）及び破断伸び（％）を測定した。結果を表３
に示す。
従来からフィルム材料として使用されている高密度ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ）及びポリアミド樹脂（ナイロン−６，６）
について、融点（Ｔｍ：℃）、ガラス転移点（Ｔｇ：
℃）、結晶化度（％）、ヤング率（ＧＰａ）、引張強度
（ＭＰａ）及び破断伸び（％）を測定した。結果を表３
に示す。
【００６２】この結果から、本発明のＰＨＢからなる延
伸フィルムは、従来の汎用プラスチックスとして用いら
れているポリマーと同等程度の十分な強度及び柔軟性を
有することがわかる。
伸フィルムは、従来の汎用プラスチックスとして用いら
れているポリマーと同等程度の十分な強度及び柔軟性を
有することがわかる。
【００６３】
【表３】
【００６４】
【実施例２１】上記実施例１６で得られた延伸フィルム
について分子配向を調べるため、Ｘ線撮影を行った。Ｘ
線撮影は、ラウエカメラ（透過法）を用い、Ｘ線源；Ｎ
ｉフィルターにより単色化したＣｕＫα、カメラ長；
３．８５ｃｍとして、４０ＫＶ、３０ｍＡの条件で６時
間露光することにより行った。
について分子配向を調べるため、Ｘ線撮影を行った。Ｘ
線撮影は、ラウエカメラ（透過法）を用い、Ｘ線源；Ｎ
ｉフィルターにより単色化したＣｕＫα、カメラ長；
３．８５ｃｍとして、４０ＫＶ、３０ｍＡの条件で６時
間露光することにより行った。
【００６５】結果を図３〜４に示す。図３はＸ線写真で
あり、図４はその回折パターンを表す模式図である。こ
れにより本発明の延伸フィルムは配向結晶性を有するこ
とがわかる。尚、未延伸のＰＨＢフィルム（非配向）に
ついても同様にしてＸ線撮影を行った。この非配向のフ
ィルムの回折パターンのＸ線写真を図５に、またその回
折パターンの模式図を図６に参考として示す。非配向の
フィルムでは、回折点は見られず、リングパターンが得
られるのみである。
あり、図４はその回折パターンを表す模式図である。こ
れにより本発明の延伸フィルムは配向結晶性を有するこ
とがわかる。尚、未延伸のＰＨＢフィルム（非配向）に
ついても同様にしてＸ線撮影を行った。この非配向のフ
ィルムの回折パターンのＸ線写真を図５に、またその回
折パターンの模式図を図６に参考として示す。非配向の
フィルムでは、回折点は見られず、リングパターンが得
られるのみである。
【００６６】
【発明の効果】本発明によれば、十分な強度と柔軟性を
有し、且つ生分解性、生体適合性をもつＰＨＢ延伸フィ
ルムを簡便且つ再現性よく得ることができる。
有し、且つ生分解性、生体適合性をもつＰＨＢ延伸フィ
ルムを簡便且つ再現性よく得ることができる。
【図１】 製造例で得られたプラスミドpSYL105の構造
を表す図である。
を表す図である。
【図２】 実施例１〜９で用いた延伸機にフィルムを固
定したところを表す模式図である。
定したところを表す模式図である。
【図３】 実施例２１における延伸フィルムのＸ線写真
である。
である。
【図４】 実施例２１における延伸フィルムのＸ線写真
の回折パターンを表す模式図である。
の回折パターンを表す模式図である。
【図５】 実施例２１における非配向のフィルムのＸ線
写真である。
写真である。
【図６】 実施例２１における非配向のフィルムのＸ線
写真の回折パターンを表す模式図である。
写真の回折パターンを表す模式図である。
１・・・試験用フィルム
２・・・重り
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ０８Ｌ 67:04 Ｃ０８Ｌ 67:04
(72)発明者 日下 聡
埼玉県羽生市東５丁目４番71号株式会社
曙ブレーキ中央技術研究所内
(56)参考文献 特開 平４−325526（ＪＰ，Ａ)
特開 平10−110047（ＪＰ，Ａ)
特開 平10−108682（ＪＰ，Ａ)
特開 平７−205278（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−132572（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C08J 5/00 - 5/24
C12P 1/00 - 41/00
Claims (6)
- 【請求項１】 数平均分子量が500,000以上のポリ（３
−ヒドロキシブタン酸）を２倍以上の延伸倍率で延伸す
る延伸工程を含む、ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）か
らなるフィルムの製造方法。 - 【請求項２】 前記延伸を１５５〜１８０℃の温度下で
行うことを特徴とする、請求項１記載の製造方法。 - 【請求項３】 数平均分子量が500,000以上のポリ（３
−ヒドロキシブタン酸）が、ポリ（３−ヒドロキシブタ
ン酸）合成遺伝子を含む組換えＤＮＡを導入して形質転
換された微生物を培養し、その菌体内に生成したポリ
（３−ヒドロキシブタン酸）を採取することにより得ら
れるものである、請求項１記載の製造方法。 - 【請求項４】 前記延伸工程で得られる延伸フィルムを
６０〜１７０℃の温度にて熱処理する熱処理工程をさら
に含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記
載の製造方法。 - 【請求項５】 数平均分子量が500,000以上のポリ（３
−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルムであって、引
張強度が３０ＭＰａ以上、かつ破断伸びが１５％以上で
あるフィルム。 - 【請求項６】 前記ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）が
一定方向に配向した結晶性フィルムであることを特徴と
する、請求項５記載のフィルム。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33838296A JP3369421B2 (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム |
| EP97310259A EP0849311A3 (en) | 1996-12-18 | 1997-12-18 | Poly(3-hydroxybutanoic acid) film |
| US08/992,883 US5917002A (en) | 1996-12-18 | 1997-12-18 | Poly(3-hydroxybutanoic acid) film |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33838296A JP3369421B2 (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10176070A JPH10176070A (ja) | 1998-06-30 |
| JP3369421B2 true JP3369421B2 (ja) | 2003-01-20 |
Family
ID=18317636
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33838296A Expired - Fee Related JP3369421B2 (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ポリ（３−ヒドロキシブタン酸）からなるフィルム |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5917002A (ja) |
| EP (1) | EP0849311A3 (ja) |
| JP (1) | JP3369421B2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| ATE254531T1 (de) | 1997-07-25 | 2003-12-15 | Metabolix Inc | Beschichtungen aus polyhydroxyalkanoat |
| EP2305324B1 (en) * | 1999-03-25 | 2014-09-17 | Metabolix, Inc. | Medical devices and applications of polyhydroxyalkanoate polymers |
| US6794023B1 (en) | 1999-10-28 | 2004-09-21 | The Procter & Gamble Company | Polymer products comprising soft and elastic biodegradable polyhydroxyalkanoate copolymer compositions and methods of preparing such polymer products |
| US6821612B1 (en) | 1999-10-28 | 2004-11-23 | The Procter & Gamble Company | Methods for preparing soft and elastic biodegradable polyhydroxyalkanoate copolymer compositions and polymer products comprising such compositions |
| WO2003070450A1 (fr) * | 2002-02-21 | 2003-08-28 | Riken | Film d'acide polyhydroxyalcanoique haute resistance et procede de production associe |
| US7241495B2 (en) * | 2002-02-28 | 2007-07-10 | Riken | Polyhydroxyalkanoic acid fibers with high strength, fibers with high strength and high modulus of elasticity, and processes for producing the same |
| JP2003311825A (ja) * | 2002-04-25 | 2003-11-06 | Inst Of Physical & Chemical Res | ポリヒドロキシアルカン酸からなる高強度フィルムおよびその製造法 |
| US8034270B2 (en) | 2003-05-08 | 2011-10-11 | Tepha, Inc. | Polyhydroxyalkanoate medical textiles and fibers |
| EP1651273B1 (en) * | 2003-07-08 | 2012-08-29 | Tepha, Inc. | Poly-4-hydroxybutyrate matrices for sustained drug delivery |
| JP2007503221A (ja) * | 2003-08-22 | 2007-02-22 | テファ， インコーポレイテッド | ポリヒドロキシアルカノエート神経再生デバイス |
| WO2006038373A1 (ja) | 2004-10-01 | 2006-04-13 | Riken | 生分解性脂肪族ポリエステルの高強度繊維およびその製造方法 |
| US7943683B2 (en) * | 2006-12-01 | 2011-05-17 | Tepha, Inc. | Medical devices containing oriented films of poly-4-hydroxybutyrate and copolymers |
| JP2008189861A (ja) * | 2007-02-07 | 2008-08-21 | Tosoh Corp | 色調に優れるポリ３−ヒドロキシブチレート系重合体及びポリ３−ヒドロキシブチレート系重合体の精製方法 |
| EP2910641B1 (en) | 2012-10-22 | 2023-07-26 | Kaneka Corporation | High molecular weight pha-producing microbe and method of producing high molecular weight pha using same |
| EP3180040B1 (en) | 2014-08-15 | 2020-05-13 | Tepha, Inc. | Self-retaining sutures of poly-4-hydroxybutyrate and copolymers thereof |
| US10626521B2 (en) | 2014-12-11 | 2020-04-21 | Tepha, Inc. | Methods of manufacturing mesh sutures from poly-4-hydroxybutyrate and copolymers thereof |
| EP3230500A1 (en) | 2014-12-11 | 2017-10-18 | Tepha, Inc. | Methods of orienting multifilament yarn and monofilaments of poly-4-hydroxybutyrate and copolymers thereof |
| CA2920431A1 (en) * | 2015-02-10 | 2016-08-10 | The Governors Of The University Of Alberta | Polyhydroxyalkanoate film formation using alkanoic acids |
| JP2020031631A (ja) * | 2018-08-28 | 2020-03-05 | 国立大学法人岩手大学 | アルギン酸を炭素源とするポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
| CN113825620A (zh) * | 2019-05-13 | 2021-12-21 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 脂肪族聚酯共聚物 |
| CN115698398A (zh) | 2020-06-02 | 2023-02-03 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 包括利用加热的预处理的高分子成型物的制造方法 |
| CN115698399A (zh) | 2020-06-02 | 2023-02-03 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 高分子成型物的制造方法 |
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| WO2024185564A1 (ja) * | 2023-03-09 | 2024-09-12 | 東レ株式会社 | 脂肪族ポリエステルフィルムおよび包装体、農林水産業資材、生分解方法、農林水産素材 |
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|---|---|---|---|---|
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| JPH0686594B2 (ja) * | 1985-09-20 | 1994-11-02 | 日本石油株式会社 | モノドメイン化されたコレステリツク液晶性ポリエステルフイルムまたはシ−トの製造方法 |
| GB9300554D0 (en) * | 1993-01-13 | 1993-03-03 | Zeneca Ltd | Film formation |
| US5585249A (en) * | 1994-10-03 | 1996-12-17 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Polyhydroxybutyrate and polyphosphate membranes with channels |
| DE59505669D1 (de) * | 1994-10-12 | 1999-05-20 | Siemens Ag | Optisches messverfahren und optische messvorrichtung zum messen einer elektrischen wechselspannung oder eines elektrischen wechselfeldes mit temperaturkompensation |
| GB9526165D0 (en) * | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Zeneca Ltd | Oriented polyester |
| DE19748067A1 (de) * | 1997-10-31 | 1999-05-12 | Braun Gmbh | Haarformgerät und Verfahren zum Formen der Haare |
-
1996
- 1996-12-18 JP JP33838296A patent/JP3369421B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-12-18 US US08/992,883 patent/US5917002A/en not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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