JP3365693B2 - 長期間にわたり安定で澄明な血清の製造方法 - Google Patents
長期間にわたり安定で澄明な血清の製造方法Info
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Description
【０００１】本発明は、長期間にわたり安定な澄明な血
清の製造方法およびそれらの診断における使用に関す
る。免疫学的診断方法は、その高い特異性、感度および
迅速性により、その使用はますます増大しつつある。こ
れらの中で、血清蛋白質を定量的に測定するための沈降
法（放射免疫拡散法、比濁分析および濁度法）はとくに
重要な役割を果たしている。それらの高い正確度、それ
らの迅速性および自動化が可能なことから、比濁分析お
よび濁度法による定量法は、この数年間現在も、医学研
究検査室での利用が増加を続けている。これらの方法
は、抗原および／または抗体が免疫化学的反応における
相当するパートナーと免疫複合体を形成する性質を利用
するものである。この２つのパートナーを混合すると開
始される抗原／抗体複合体の形成をついで光度測定法に
よって測定できる。
清の製造方法およびそれらの診断における使用に関す
る。免疫学的診断方法は、その高い特異性、感度および
迅速性により、その使用はますます増大しつつある。こ
れらの中で、血清蛋白質を定量的に測定するための沈降
法（放射免疫拡散法、比濁分析および濁度法）はとくに
重要な役割を果たしている。それらの高い正確度、それ
らの迅速性および自動化が可能なことから、比濁分析お
よび濁度法による定量法は、この数年間現在も、医学研
究検査室での利用が増加を続けている。これらの方法
は、抗原および／または抗体が免疫化学的反応における
相当するパートナーと免疫複合体を形成する性質を利用
するものである。この２つのパートナーを混合すると開
始される抗原／抗体複合体の形成をついで光度測定法に
よって測定できる。
【０００２】血清蛋白質の定量的な測定は、診断および
疾患の経過の評価に重要な手がかりを提供する。たとえ
ば血清蛋白質に関連して診断に用いられる抗血清は極め
て需要が高くなっている。抗血清は、高濃度の特異的抗
体が含まれている上に、様々な温度での高度な安定性お
よび高度な透明性をもたねばならない。これは標準血清
および対照血清にも適用される。これらの血清はすべて
以下の記載では一括して「血清」と呼ぶことにする。
疾患の経過の評価に重要な手がかりを提供する。たとえ
ば血清蛋白質に関連して診断に用いられる抗血清は極め
て需要が高くなっている。抗血清は、高濃度の特異的抗
体が含まれている上に、様々な温度での高度な安定性お
よび高度な透明性をもたねばならない。これは標準血清
および対照血清にも適用される。これらの血清はすべて
以下の記載では一括して「血清」と呼ぶことにする。
【０００３】このような血清を調製する際に生じる困難
性は、血清が不安定な成分を含み、調製時にこれらを可
能な限り除去しなければならないことである。十分に除
去されないと、濁りやフロキュレーションを生じ、これ
らは血清の使用前にろ過または遠心分離によって除去し
なければならない。血清サンプル中の濁りの除去のため
にはこれまで様々な方法が提案されてきたが、これらの
方法は、とくに動物血清の場合には限られた価値しかな
い。
性は、血清が不安定な成分を含み、調製時にこれらを可
能な限り除去しなければならないことである。十分に除
去されないと、濁りやフロキュレーションを生じ、これ
らは血清の使用前にろ過または遠心分離によって除去し
なければならない。血清サンプル中の濁りの除去のため
にはこれまで様々な方法が提案されてきたが、これらの
方法は、とくに動物血清の場合には限られた価値しかな
い。
【０００４】すなわち、Clin. Chem. 29, 120−125 (19
83) に記載されている方法では、たとえば血清の濁りは
有機溶媒の混合物と振盪することによる抽出で除去され
る。この方法では付加的な処理工程が必要となり、とく
に著しい高脂血清の場合には、中でもサンプル材料の容
量に制御し難い変化がさらに起こり、測定結果の歪曲が
生じる。最後に、この方法を用いた場合には、抽出時に
すべてまたは一部が除去される血清の構成成分を測定す
ることはも早不可能である。
83) に記載されている方法では、たとえば血清の濁りは
有機溶媒の混合物と振盪することによる抽出で除去され
る。この方法では付加的な処理工程が必要となり、とく
に著しい高脂血清の場合には、中でもサンプル材料の容
量に制御し難い変化がさらに起こり、測定結果の歪曲が
生じる。最後に、この方法を用いた場合には、抽出時に
すべてまたは一部が除去される血清の構成成分を測定す
ることはも早不可能である。
【０００５】さらに、抽出剤の廃棄は、とくにこれがハ
ロゲン化炭化水素である場合には問題である。共通の特
徴はフェニル基またはアルキル基が結合する親水性マト
リックスである一連の選択的結合吸着剤も、リポ蛋白質
の吸着に使用されてきた。二酸化ケイ素をベースとし
た、たとえばエロジールRの名称で市販されているリポ
蛋白質結合吸着剤も報告されている。
ロゲン化炭化水素である場合には問題である。共通の特
徴はフェニル基またはアルキル基が結合する親水性マト
リックスである一連の選択的結合吸着剤も、リポ蛋白質
の吸着に使用されてきた。二酸化ケイ素をベースとし
た、たとえばエロジールRの名称で市販されているリポ
蛋白質結合吸着剤も報告されている。
【０００６】ＥＰ ０ １３７ ２２１には、ポリヒドロ
キシメチレンを用いるリポ蛋白質の除去が記載されてい
る。デキストラン硫酸またはヘパリンのようなポリアニ
オンもカチオン（Ｍｇ2+およびＭｎ2+）の存在下におけ
る沈殿に使用できる。欠点は、ほとんどの場合に上清中
に残ったポリアニオンおよび金属イオンを除去しなけれ
ばならないことである。ＥＰ ０ ２９４ ７１４には、
凍結乾燥した対照血清が再溶解時に白濁することを防止
するため、ポリビニルピロリドン約０.３重量％を使用
することが記載されている。
キシメチレンを用いるリポ蛋白質の除去が記載されてい
る。デキストラン硫酸またはヘパリンのようなポリアニ
オンもカチオン（Ｍｇ2+およびＭｎ2+）の存在下におけ
る沈殿に使用できる。欠点は、ほとんどの場合に上清中
に残ったポリアニオンおよび金属イオンを除去しなけれ
ばならないことである。ＥＰ ０ ２９４ ７１４には、
凍結乾燥した対照血清が再溶解時に白濁することを防止
するため、ポリビニルピロリドン約０.３重量％を使用
することが記載されている。
【０００７】ＤＥ−Ａ−２８ ２９ ５３１は、血清蛋白
質の免疫化学的測定における干渉を防止するために、陽
イオン界面活性剤を使用する。ＥＰ ０ １３０ ５３７
では、ポリエトキシ化トリグリセライドおよびｎ−アル
カンスルホネートからなる界面活性剤、ならびに必要に
応じて非イオンまたは陰イオン界面活性剤を、生物学的
液体（たとえば血清）に添加して濁りが除去されてい
る。
質の免疫化学的測定における干渉を防止するために、陽
イオン界面活性剤を使用する。ＥＰ ０ １３０ ５３７
では、ポリエトキシ化トリグリセライドおよびｎ−アル
カンスルホネートからなる界面活性剤、ならびに必要に
応じて非イオンまたは陰イオン界面活性剤を、生物学的
液体（たとえば血清）に添加して濁りが除去されてい
る。
【０００８】記載された方法では、光度測定分析を実施
する場合、カイロミクロンならびにＶＬＤＬ（超低密度
リポ蛋白質）によって誘発された濁りにはある種の矯正
効果は得られるものの、とくに長期間の保存時（≧１
年）では濁りとフロキュレーションは時間とともに再び
発生することが見出されている。これらの濁りはきわめ
て広範囲の多様な因子によって起こり得て、脂質および
リポ蛋白質によって起こるのはそのごく一部である。そ
のほかにたとえば、免疫処置の間に生成する免疫複合体
もその原因となり得る。
する場合、カイロミクロンならびにＶＬＤＬ（超低密度
リポ蛋白質）によって誘発された濁りにはある種の矯正
効果は得られるものの、とくに長期間の保存時（≧１
年）では濁りとフロキュレーションは時間とともに再び
発生することが見出されている。これらの濁りはきわめ
て広範囲の多様な因子によって起こり得て、脂質および
リポ蛋白質によって起こるのはそのごく一部である。そ
のほかにたとえば、免疫処置の間に生成する免疫複合体
もその原因となり得る。
【０００９】したがって、本発明の目的は、とくに蛋白
質の免疫化学的定量のための長期にわたり安定な澄明な
血清を製造する簡単な方法および／または試剤を見出す
ことにある。驚くべきことに、既知の欠点は、血清と式
（Ｉ）
質の免疫化学的定量のための長期にわたり安定な澄明な
血清を製造する簡単な方法および／または試剤を見出す
ことにある。驚くべきことに、既知の欠点は、血清と式
（Ｉ）
【化２】
（式中、ｎは０〜８、好ましくは１＝４である）の化合
物を用いることによって克服できることが見出されたの
である。
物を用いることによって克服できることが見出されたの
である。
【００１０】それ自体本技術分野の熟練者には既知のこ
れらの化合物は、環状カルボキサミドに属し、高い双極
子能率ときわめて良好な溶解性で知られている。ブチロ
ラクタム（ピロリドン）、バレロラクタムおよびカプロ
ラクタムはこの群の化合物の好ましい代表である。本発
明はしたがって、長期間に渡って安定で診断に使用され
る澄明な血清の調製方法であって、濁りの防止および／
または除去に十分な量の式（Ｉ）の化合物を血清に添加
する方法に関する。これらの化合物は単独でもまた混合
物としても使用できる。ブチロラクタムとカプロラクタ
ムの混合物がとくに有利である。
れらの化合物は、環状カルボキサミドに属し、高い双極
子能率ときわめて良好な溶解性で知られている。ブチロ
ラクタム（ピロリドン）、バレロラクタムおよびカプロ
ラクタムはこの群の化合物の好ましい代表である。本発
明はしたがって、長期間に渡って安定で診断に使用され
る澄明な血清の調製方法であって、濁りの防止および／
または除去に十分な量の式（Ｉ）の化合物を血清に添加
する方法に関する。これらの化合物は単独でもまた混合
物としても使用できる。ブチロラクタムとカプロラクタ
ムの混合物がとくに有利である。
【００１１】本発明の化合物は、概して０.２〜３０重
量％の濃度で、好ましくは１〜１０重量％、とくに好ま
しくは１.５〜３重量％の濃度で使用される。本発明の
化合物は最初に適当な水性溶液に溶解し、それをついで
血清に添加するのも便利である。このような水性溶液は
本技術分野の熟練者にはそれ自体既知であり、適当な溶
液の例としては、食塩の等張性溶液もしくは０.１５モ
ルのグリシン／ＮａＣｌ緩衝液、pH７.２〜pH１０、好
ましくはpH約８.０を挙げることができ、Tris、リン酸
塩、ホウ酸塩／イミダゾールまたは酢酸塩緩衝液も適当
である。
量％の濃度で、好ましくは１〜１０重量％、とくに好ま
しくは１.５〜３重量％の濃度で使用される。本発明の
化合物は最初に適当な水性溶液に溶解し、それをついで
血清に添加するのも便利である。このような水性溶液は
本技術分野の熟練者にはそれ自体既知であり、適当な溶
液の例としては、食塩の等張性溶液もしくは０.１５モ
ルのグリシン／ＮａＣｌ緩衝液、pH７.２〜pH１０、好
ましくはpH約８.０を挙げることができ、Tris、リン酸
塩、ホウ酸塩／イミダゾールまたは酢酸塩緩衝液も適当
である。
【００１２】本発明の意味の範囲では、血清はまた血清
の精製時に得られる分画、とくにγ−グロブリン分画等
であってもよい。本発明の化合物は、ヒト蛋白質に対す
る動物抗血清、たとえば抗−ヒトＩｇＧ（ウサギか
ら）、抗−α2−マクログロブリン（ウサギから）、抗
−ヒトＩｇＭ（ヤギから）、抗−ヒトアルブミン（ヒツ
ジから）、抗−α1−アンチトリプシン（ウサギか
ら）、抗−ヒトアポリポ蛋白質Ａ−１（ウサギから）も
しくは抗−ヒトアポリポ蛋白質Ｂ（ウサギから）、また
はたとえばリウマトイド因子および／もしくは免疫複合
体を含有してもよいヒト起源の標準血清および対照血清
の安定化にとくに適している。
の精製時に得られる分画、とくにγ−グロブリン分画等
であってもよい。本発明の化合物は、ヒト蛋白質に対す
る動物抗血清、たとえば抗−ヒトＩｇＧ（ウサギか
ら）、抗−α2−マクログロブリン（ウサギから）、抗
−ヒトＩｇＭ（ヤギから）、抗−ヒトアルブミン（ヒツ
ジから）、抗−α1−アンチトリプシン（ウサギか
ら）、抗−ヒトアポリポ蛋白質Ａ−１（ウサギから）も
しくは抗−ヒトアポリポ蛋白質Ｂ（ウサギから）、また
はたとえばリウマトイド因子および／もしくは免疫複合
体を含有してもよいヒト起源の標準血清および対照血清
の安定化にとくに適している。
【００１３】本発明の化合物は実際に、濃度が０.２〜
３０重量％になるような量、広範囲の自然の抗血清に添
加されるのが好ましい。他の既知の安定化物質、たとえ
ば、ナトリウムアジドまたは抗生物質をさらに加えるこ
ともできる。本発明の化合物が添加されたならば、血清
は好ましくはろ過によって滅菌し、ついで滅菌条件下に
瓶に充填する。本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物１種
または２種以上を濁りの防止および／または除去に有効
な量含有する、診断用の血清に関する。
３０重量％になるような量、広範囲の自然の抗血清に添
加されるのが好ましい。他の既知の安定化物質、たとえ
ば、ナトリウムアジドまたは抗生物質をさらに加えるこ
ともできる。本発明の化合物が添加されたならば、血清
は好ましくはろ過によって滅菌し、ついで滅菌条件下に
瓶に充填する。本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物１種
または２種以上を濁りの防止および／または除去に有効
な量含有する、診断用の血清に関する。
【００１４】本発明はまた、診断方法における標準血清
および／または対照血清としての本発明の血清の使用に
関する。本発明の血清は、たとえば放射免疫拡散法、比
濁分析および濁度法のような、免疫沈降に基づく診断方
法に使用するのが有利である。とくに図から明らかなよ
うに、本発明の添加物を加えない試剤では瓶に充填した
直後から高いブランク値を示し、これは保存過程でさら
に上昇するのに対して、本発明の添加物を含む試剤は澄
明で、ブランク値はわずかな上昇を示すのみである。本
発明の添加物はまた、表１から推測できるように何らか
の安定化作用をもつことがわかる。
および／または対照血清としての本発明の血清の使用に
関する。本発明の血清は、たとえば放射免疫拡散法、比
濁分析および濁度法のような、免疫沈降に基づく診断方
法に使用するのが有利である。とくに図から明らかなよ
うに、本発明の添加物を加えない試剤では瓶に充填した
直後から高いブランク値を示し、これは保存過程でさら
に上昇するのに対して、本発明の添加物を含む試剤は澄
明で、ブランク値はわずかな上昇を示すのみである。本
発明の添加物はまた、表１から推測できるように何らか
の安定化作用をもつことがわかる。
【００１５】透過光シグナルまたは分散光シグナルのい
ずれかを濁度の尺度として使用することができる。本発
明の試剤中での濁度の上昇は、１２カ月の保存期間に５
０％未満までであることが好ましい。血清は、たとえ
ば、実施例に用いられた条件下に１０００mV未満、好ま
しくは６００mV未満、とくに好ましくは３００mV未満の
分散光シグナルを示す場合に、光学的に澄明であるとい
う。本発明の意味の範囲内では、長期間にわたって安定
の語は、血清が１２カ月にわたって、好ましくは２４カ
月にわたって、有利には２〜８℃の温度で、光学的に澄
明に維持されることを意味する。
ずれかを濁度の尺度として使用することができる。本発
明の試剤中での濁度の上昇は、１２カ月の保存期間に５
０％未満までであることが好ましい。血清は、たとえ
ば、実施例に用いられた条件下に１０００mV未満、好ま
しくは６００mV未満、とくに好ましくは３００mV未満の
分散光シグナルを示す場合に、光学的に澄明であるとい
う。本発明の意味の範囲内では、長期間にわたって安定
の語は、血清が１２カ月にわたって、好ましくは２４カ
月にわたって、有利には２〜８℃の温度で、光学的に澄
明に維持されることを意味する。
【００１６】以下の実施例は本発明を例示するものであ
って、いかなる意味においても本発明を限定するもので
はない。 例１ ａ） １.５容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）および０.２８５ｇのナトリウムアジドを、３０
０mlのヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血清（ウサギ
から）に加え、ついで抗血清をろ過して滅菌した。滅菌
ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充填し
た。この抗血清を＋２〜＋８℃で７、１６および２４カ
月保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。
瓶に充填した血清はすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い３００mlのヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血清
（ウサギから）を例１ａ）の記載と同様にしてろ過して
滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。すべて
の瓶の抗血清に、わずか７カ月後に濁りを生じ、前もっ
てろ過しないとアポリポ蛋白Ａ−Ｉの比濁分析による測
定は不可能であった。血清は、標準系列を比濁測定に付
して試験した。この目的には、アポリポ蛋白１,６２０m
g／リットルを含んだ標準血清を使用し、標準系列は自
動装置を用い１：５から１：１６０に希釈した。すなわ
ち、３２４〜１０mg／リットルの濃度が得られた。標準
希釈液１０μｌをヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血
清４０μｌとともに使用して測定を行った。
って、いかなる意味においても本発明を限定するもので
はない。 例１ ａ） １.５容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）および０.２８５ｇのナトリウムアジドを、３０
０mlのヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血清（ウサギ
から）に加え、ついで抗血清をろ過して滅菌した。滅菌
ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充填し
た。この抗血清を＋２〜＋８℃で７、１６および２４カ
月保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。
瓶に充填した血清はすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い３００mlのヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血清
（ウサギから）を例１ａ）の記載と同様にしてろ過して
滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。すべて
の瓶の抗血清に、わずか７カ月後に濁りを生じ、前もっ
てろ過しないとアポリポ蛋白Ａ−Ｉの比濁分析による測
定は不可能であった。血清は、標準系列を比濁測定に付
して試験した。この目的には、アポリポ蛋白１,６２０m
g／リットルを含んだ標準血清を使用し、標準系列は自
動装置を用い１：５から１：１６０に希釈した。すなわ
ち、３２４〜１０mg／リットルの濃度が得られた。標準
希釈液１０μｌをヒトアポリポ蛋白Ａ−Ｉに対する抗血
清４０μｌとともに使用して測定を行った。
【００１７】
【表１】
【００１８】例２
ａ） ３.０容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）および０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５０
０mlのヒトＩｇＧに対する抗血清(ウサギから)に加え、
ついで抗血清をろ過して滅菌した。滅菌ろ過後、抗血清
を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充填した。この抗血清
を＋２〜＋８℃で２８カ月間保存したのちも標準曲線の
経路は変化しなかった。瓶に充填した血清はすべて澄明
であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い５００mlのヒトＩｇＧに対する抗血清（ウサギから）
を例２ａ）の記載と同様にしてろ過滅菌し、瓶に充填
し、＋２〜＋８℃で保存した。２年後すべての瓶の抗血
清に濁りとフロキュレーションを生じ、再びろ過しない
とＩｇＧの比濁分析にはも早不適当であった。血清は、
標準系列を比濁測定に付して試験した。この目的には、
１２,０００mg／リットルのＩｇＧを含んだ標準血清を
使用し、標準系列は自動装置を用いて１：８０から１：
２,５６０に希釈した。すなわち、１５０〜４.６mg／リ
ットルの濃度が得られた。標準希釈液１００μｌをヒト
ＩｇＧに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を
行った。
タム）および０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５０
０mlのヒトＩｇＧに対する抗血清(ウサギから)に加え、
ついで抗血清をろ過して滅菌した。滅菌ろ過後、抗血清
を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充填した。この抗血清
を＋２〜＋８℃で２８カ月間保存したのちも標準曲線の
経路は変化しなかった。瓶に充填した血清はすべて澄明
であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い５００mlのヒトＩｇＧに対する抗血清（ウサギから）
を例２ａ）の記載と同様にしてろ過滅菌し、瓶に充填
し、＋２〜＋８℃で保存した。２年後すべての瓶の抗血
清に濁りとフロキュレーションを生じ、再びろ過しない
とＩｇＧの比濁分析にはも早不適当であった。血清は、
標準系列を比濁測定に付して試験した。この目的には、
１２,０００mg／リットルのＩｇＧを含んだ標準血清を
使用し、標準系列は自動装置を用いて１：８０から１：
２,５６０に希釈した。すなわち、１５０〜４.６mg／リ
ットルの濃度が得られた。標準希釈液１００μｌをヒト
ＩｇＧに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を
行った。
【００１９】
【表２】
【００２０】例３
ａ） １.５容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。
滅菌ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充
填した。この抗血清を＋２〜＋８℃で１カ月間にわたり
保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶
に充填した血清サンプルはすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血
清（ウサギから）を例３ａ）の記載と同様にしてろ過し
て滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わず
か１カ月後、すべての瓶中の抗血清に濁りとフロキュレ
ーションを生じた。再度ろ過したのちにのみ、比濁分析
に適当であった。血清は、標準系列を比濁測定に付して
試験した。この目的には１,６５０mg／リットルのα1−
アンチトリプシンを含んだ標準血清を使用し、標準系列
は自動装置を用いて１：５から１：１６０に希釈した。
すなわち、３３０〜１０.３mg／リットルの濃度が得ら
れた。標準希釈液２０μｌをヒトα1−アンチトリプシ
ンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を行っ
た。
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。
滅菌ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充
填した。この抗血清を＋２〜＋８℃で１カ月間にわたり
保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶
に充填した血清サンプルはすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血
清（ウサギから）を例３ａ）の記載と同様にしてろ過し
て滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わず
か１カ月後、すべての瓶中の抗血清に濁りとフロキュレ
ーションを生じた。再度ろ過したのちにのみ、比濁分析
に適当であった。血清は、標準系列を比濁測定に付して
試験した。この目的には１,６５０mg／リットルのα1−
アンチトリプシンを含んだ標準血清を使用し、標準系列
は自動装置を用いて１：５から１：１６０に希釈した。
すなわち、３３０〜１０.３mg／リットルの濃度が得ら
れた。標準希釈液２０μｌをヒトα1−アンチトリプシ
ンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を行っ
た。
【００２１】
【表３】
【００２２】例４
ａ） １.５容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。
滅菌ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充
填した。この抗血清を＋２〜＋８℃で６カ月間にわたり
保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶
に充填した血清サンプルはすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血
清（ウサギから）を例４ａ）の記載と同様にしてろ過し
て滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わず
か６カ月後、すべての瓶中の抗血清に濁りとフロキュレ
ーションを生じた。標準曲線はα1−アンチトリプシン
の測定に使用できなかった。血清は、標準系列を比濁測
定に付して試験した。この目的には２,０００mg／リッ
トルのα1−アンチトリプシンを含んだ標準血清を使用
し、標準系列は自動装置を用いて１：５から１：１６０
に希釈した。すなわち、４００〜１２.５mg／リットル
の濃度が得られた。標準希釈液２０μｌをヒトα1−ア
ンチトリプシンに対する抗血清４０μｌとともに使用し
て測定を行った。
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。
滅菌ろ過後、抗血清を滅菌条件下、５ml容量ずつ瓶に充
填した。この抗血清を＋２〜＋８℃で６カ月間にわたり
保存したのちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶
に充填した血清サンプルはすべて澄明であった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対する抗血
清（ウサギから）を例４ａ）の記載と同様にしてろ過し
て滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わず
か６カ月後、すべての瓶中の抗血清に濁りとフロキュレ
ーションを生じた。標準曲線はα1−アンチトリプシン
の測定に使用できなかった。血清は、標準系列を比濁測
定に付して試験した。この目的には２,０００mg／リッ
トルのα1−アンチトリプシンを含んだ標準血清を使用
し、標準系列は自動装置を用いて１：５から１：１６０
に希釈した。すなわち、４００〜１２.５mg／リットル
の濃度が得られた。標準希釈液２０μｌをヒトα1−ア
ンチトリプシンに対する抗血清４０μｌとともに使用し
て測定を行った。
【００２３】
【表４】
【００２４】例５
１.５％のδ−バレロラクタムと０.０９５ｇのナトリウ
ムアジドを１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対
する抗血清（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により
滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。６カ月
後、本発明の試剤を添加しないと、抗血清は濃厚なフロ
キュレーションを生じ、一方、添加されたδ−バレロラ
クタムを含有するプレパレーション（本発明によって調
製）は完全に澄明で、濁りもフロキュレーションも認め
られなかった。
ムアジドを１００mlのヒトα1−アンチトリプシンに対
する抗血清（ウサギから）に加え、抗血清をろ過により
滅菌し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。６カ月
後、本発明の試剤を添加しないと、抗血清は濃厚なフロ
キュレーションを生じ、一方、添加されたδ−バレロラ
クタムを含有するプレパレーション（本発明によって調
製）は完全に澄明で、濁りもフロキュレーションも認め
られなかった。
【００２５】例６
ａ） １.５容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトプレアルブミンに対する抗血清（ウサギか
ら）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。滅菌ろ過
後、抗血清を滅菌条件下、２ml容量ずつ瓶に充填した。
この抗血清は＋２〜＋８℃で１カ月間にわたり保存した
のちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶に充填し
た血清サンプルはすべて完全に澄明で、フロキュレーシ
ョンは認められなかった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトプレアルブミンに対する抗血清（ウサ
ギから）を例６ａ）の記載と同様にしてろ過して滅菌
し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わずか１カ
月後、すべての瓶中の抗血清に実質的な濁りを生じた。
フロキュレーションをろ過して除いた場合にのみ、抗血
清はプレアルブミンの測定に使用できた。血清は、標準
系列を比濁測定に付して試験した。この目的には３１０
mg／リットルのプレアルブミンを含んだ標準血清を使用
し、標準系列は自動装置を用いて１：２.５から１：８
０に希釈した。すなわち、１２４〜３.９mg／リットル
の濃度が得られた。標準希釈液５０μｌをヒトプレアル
ブミンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を
行った。
タム）ならびに０.０９５ｇのナトリウムアジドを、１
００mlのヒトプレアルブミンに対する抗血清（ウサギか
ら）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。滅菌ろ過
後、抗血清を滅菌条件下、２ml容量ずつ瓶に充填した。
この抗血清は＋２〜＋８℃で１カ月間にわたり保存した
のちも、標準曲線の経路は変化しなかった。瓶に充填し
た血清サンプルはすべて完全に澄明で、フロキュレーシ
ョンは認められなかった。 ｂ） ２−ピロリドン（γ−ブチロラクタム）を含まな
い１００mlのヒトプレアルブミンに対する抗血清（ウサ
ギから）を例６ａ）の記載と同様にしてろ過して滅菌
し、瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存した。わずか１カ
月後、すべての瓶中の抗血清に実質的な濁りを生じた。
フロキュレーションをろ過して除いた場合にのみ、抗血
清はプレアルブミンの測定に使用できた。血清は、標準
系列を比濁測定に付して試験した。この目的には３１０
mg／リットルのプレアルブミンを含んだ標準血清を使用
し、標準系列は自動装置を用いて１：２.５から１：８
０に希釈した。すなわち、１２４〜３.９mg／リットル
の濃度が得られた。標準希釈液５０μｌをヒトプレアル
ブミンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を
行った。
【００２６】
【表５】
【００２７】例７
ａ） ３.０容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）ならびに０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５
００mlのヒトアポリポ蛋白質Ｂに対する抗血清（ウサギ
から）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。５ml容量
ずつ瓶に充填したのち、サンプルを＋２〜＋８℃で保存
した。このサンプルには３年後にも、濁りもフロキュレ
ーションも認められなかった。 ｂ） ４５.３ｇのナトリウムアジドを、４７,７１０ml
のヒトアポリポ蛋白質Ｂに対する抗血清（ウサギから）
に加え、抗血清をろ過により滅菌し、５ml容量ずつ瓶に
充填した。瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存したサンプ
ルは３０カ月後に、濁りおよびフロキュレーションを生
じた。
タム）ならびに０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５
００mlのヒトアポリポ蛋白質Ｂに対する抗血清（ウサギ
から）に加え、抗血清をろ過により滅菌した。５ml容量
ずつ瓶に充填したのち、サンプルを＋２〜＋８℃で保存
した。このサンプルには３年後にも、濁りもフロキュレ
ーションも認められなかった。 ｂ） ４５.３ｇのナトリウムアジドを、４７,７１０ml
のヒトアポリポ蛋白質Ｂに対する抗血清（ウサギから）
に加え、抗血清をろ過により滅菌し、５ml容量ずつ瓶に
充填した。瓶に充填し、＋２〜＋８℃で保存したサンプ
ルは３０カ月後に、濁りおよびフロキュレーションを生
じた。
【００２８】例８リウマトイド因子、抗−ストレプトリジンＯおよびＣＲ
Ｐに対する対照血清（ヒト）の調製 ４名のドナーそれぞれからの５０mlのリウマトイド因子
陽性血清（ヒト）を混合し、６７４IU／mlのＲＦを含む
血清プール１９mlを、８１mlの等張性食塩溶液、ならび
に約１８００IU／mlのＡＳＬ（純度少なくとも９５
％）、１０mg／mlのＣＲＰ、０.２ｇのナトリウムアジ
ド、５mlのブチロラクタムおよび０.４ｇの塩化ベンズ
アミジニウムを含むヒトγ−グロブリンの１.８％溶液
１００mlで希釈した。ろ過滅菌して瓶に充填したのち、
サンプルを＋２〜＋８℃、室温および＋３７℃で保存し
た。ブチロラクタムを加えないと、標準血清はわずか２
週後にフロキュレーションを生じたが、本発明によりブ
チロラクタムが添加され、瓶に充填されたサンプルは、
６カ月後にも澄明で、フロキュレーションは認められな
かった。
Ｐに対する対照血清（ヒト）の調製 ４名のドナーそれぞれからの５０mlのリウマトイド因子
陽性血清（ヒト）を混合し、６７４IU／mlのＲＦを含む
血清プール１９mlを、８１mlの等張性食塩溶液、ならび
に約１８００IU／mlのＡＳＬ（純度少なくとも９５
％）、１０mg／mlのＣＲＰ、０.２ｇのナトリウムアジ
ド、５mlのブチロラクタムおよび０.４ｇの塩化ベンズ
アミジニウムを含むヒトγ−グロブリンの１.８％溶液
１００mlで希釈した。ろ過滅菌して瓶に充填したのち、
サンプルを＋２〜＋８℃、室温および＋３７℃で保存し
た。ブチロラクタムを加えないと、標準血清はわずか２
週後にフロキュレーションを生じたが、本発明によりブ
チロラクタムが添加され、瓶に充填されたサンプルは、
６カ月後にも澄明で、フロキュレーションは認められな
かった。
【００２９】例９
ａ） ３.０容量％の２−ピロリドン（γ−ブチロラク
タム）ならびに０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５
００mlのヒトα2−マクログロブリンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、ついで抗血清をろ過して滅菌し
た。５ml容量ずつ瓶に充填したのち、この瓶を＋２〜＋
８℃で保存した。瓶に充填したサンプルは２、５、１７
および２６カ月後にも完全に澄明であった。 ｂ） ０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５００mlの
ヒトα2−マクログロブリンに対する抗血清（ウサギか
ら）に加え、抗血清をろ過して滅菌した。瓶に充填した
サンプルを例７ａ）と同様に保存したところ、滅菌して
瓶に充填してからわずか９週後に、濁りとフロキュレー
ションを生じた。血清は、標準系列を比濁測定に付して
試験した。この目的には、α2−マクログロブリン１,７
９０mg／リットルを含んだ標準血清を使用し、標準系列
は自動装置を用い１：５から１：１６０に希釈した。す
なわち、３５８〜１１.２mg／リットルの濃度が得られ
た。標準希釈液２０μｌを、ヒトα2−マクログロブリ
ンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を行っ
た。
タム）ならびに０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５
００mlのヒトα2−マクログロブリンに対する抗血清
（ウサギから）に加え、ついで抗血清をろ過して滅菌し
た。５ml容量ずつ瓶に充填したのち、この瓶を＋２〜＋
８℃で保存した。瓶に充填したサンプルは２、５、１７
および２６カ月後にも完全に澄明であった。 ｂ） ０.４７５ｇのナトリウムアジドを、５００mlの
ヒトα2−マクログロブリンに対する抗血清（ウサギか
ら）に加え、抗血清をろ過して滅菌した。瓶に充填した
サンプルを例７ａ）と同様に保存したところ、滅菌して
瓶に充填してからわずか９週後に、濁りとフロキュレー
ションを生じた。血清は、標準系列を比濁測定に付して
試験した。この目的には、α2−マクログロブリン１,７
９０mg／リットルを含んだ標準血清を使用し、標準系列
は自動装置を用い１：５から１：１６０に希釈した。す
なわち、３５８〜１１.２mg／リットルの濃度が得られ
た。標準希釈液２０μｌを、ヒトα2−マクログロブリ
ンに対する抗血清４０μｌとともに使用して測定を行っ
た。
【００３０】
【表６】
【図１】本発明の添加物を添加および添加しない抗血清
の保存後のブランク値を示す。
の保存後のブランク値を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 ゲールハルト・ミユンシヤー
ドイツ連邦共和国デー−35041マルブル
ク．アルテフーテ９
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/531
G01N 33/96
A61K 35/16
Claims (11)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 （式中、ｎは０〜８である）の化合物の少なくとも１種
を血清に、濁りの防止および／または除去に十分な量添
加する、長期間にわたり安定で診断に使用される澄明な
血清の製造方法。 - 【請求項２】 式（Ｉ）の化合物を血清に、これらの化
合物の血清中の濃度が０.２〜３０重量％であるような
量で添加する請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 式（Ｉ）の化合物はブチロラクタムであ
る請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 式（Ｉ）の化合物の少なくとも２種類か
らなる混合物を添加する請求項１〜３のいずれか一項に
記載の方法。 - 【請求項５】 ブチロラクタムとカプロラクタムが加え
られる請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 血清は抗血清である請求項１〜５のいず
れか一項に記載の方法。 - 【請求項７】 血清は標準および／または対照血清であ
る請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項８】 請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の１種
または２種以上を、濁りの防止および／または除去に有
効な量で含有する、診断に用いるための血清。 - 【請求項９】 式（Ｉ）の化合物の濃度が０.２〜３０
重量％である請求項８に記載の血清。 - 【請求項１０】 濃度が１〜１０重量％である請求項９
に記載の血清。 - 【請求項１１】 診断が比濁分析または濁度法でなされ
る請求項８に記載の血清。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4344868:2 | 1993-12-29 | ||
| DE4344868A DE4344868A1 (de) | 1993-12-29 | 1993-12-29 | Verfahren zur Herstellung langzeitstabiler klarer Seren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07209298A JPH07209298A (ja) | 1995-08-11 |
| JP3365693B2 true JP3365693B2 (ja) | 2003-01-14 |
Family
ID=6506473
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32726394A Expired - Lifetime JP3365693B2 (ja) | 1993-12-29 | 1994-12-28 | 長期間にわたり安定で澄明な血清の製造方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5714333A (ja) |
| EP (1) | EP0661541B1 (ja) |
| JP (1) | JP3365693B2 (ja) |
| AT (1) | ATE187252T1 (ja) |
| AU (1) | AU700355B2 (ja) |
| CA (1) | CA2138594C (ja) |
| DE (2) | DE4344868A1 (ja) |
| DK (1) | DK0661541T3 (ja) |
| ES (1) | ES2141190T3 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| DE2829531A1 (de) * | 1978-07-05 | 1980-01-24 | Heuck Claus Christian Dr Rer N | Verfahren zur quantitativen bestimmung eines serumproteins in getruebten serum- und plasma-proben |
| DE3303083A1 (de) * | 1983-01-31 | 1984-08-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches latex-agglutinationsverfahren und mittel |
| JPS6234059A (ja) * | 1985-08-07 | 1987-02-14 | Sankyo Co Ltd | 固相化試薬の安定化剤 |
| DE3719196A1 (de) * | 1987-06-09 | 1988-12-29 | Behringwerke Ag | Verwendung von polyinylpyrrolidon (pvp) zur truebungsminderung von seren, kontrollseren enthaltend pvp und verfahren zu deren herstellung |
| DE4202923A1 (de) * | 1992-02-01 | 1993-08-05 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von antigenen oder antikoerpern in gegenwart eines immunkomplexes |
| TW593567B (en) * | 2000-07-31 | 2004-06-21 | Ciba Sc Holding Ag | Dispersant compositions improving the heat stability of transparent pigments |
| EP1372211A3 (en) * | 2002-06-12 | 2004-01-07 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Dielectric filter, communication apparatus, and method of controlling resonance frequency |
-
1993
- 1993-12-29 DE DE4344868A patent/DE4344868A1/de not_active Withdrawn
-
1994
- 1994-12-19 EP EP94120089A patent/EP0661541B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-19 DK DK94120089T patent/DK0661541T3/da active
- 1994-12-19 DE DE59408965T patent/DE59408965D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-19 AT AT94120089T patent/ATE187252T1/de active
- 1994-12-19 ES ES94120089T patent/ES2141190T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-20 CA CA002138594A patent/CA2138594C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-23 AU AU81774/94A patent/AU700355B2/en not_active Ceased
- 1994-12-28 US US08/365,019 patent/US5714333A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-28 JP JP32726394A patent/JP3365693B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0661541T3 (da) | 2000-04-25 |
| CA2138594C (en) | 2008-11-18 |
| DE59408965D1 (de) | 2000-01-05 |
| CA2138594A1 (en) | 1995-06-30 |
| EP0661541A3 (de) | 1996-01-31 |
| AU8177494A (en) | 1995-07-06 |
| EP0661541B1 (de) | 1999-12-01 |
| EP0661541A2 (de) | 1995-07-05 |
| JPH07209298A (ja) | 1995-08-11 |
| AU700355B2 (en) | 1999-01-07 |
| ES2141190T3 (es) | 2000-03-16 |
| US5714333A (en) | 1998-02-03 |
| DE4344868A1 (de) | 1995-08-03 |
| ATE187252T1 (de) | 1999-12-15 |
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