JP3283288B2 - 生理活性ペプチド製剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、生理活性ペプチド製剤
に関し、ヒアルロン酸またはその非毒性塩と高分子物質
とを含有する臨床上の応用に適した製剤に関する。ま
た、特に癌およびウィルス性疾患等の治療に有用なイン
ターフェロン（ＩＦＮ）を含有する製剤に関する。

【０００２】

【従来技術】近年種々な生理活性ペプチド類に関する研
究が活発に行われ、その作用機序等が明らかになるとと
もに新規医薬品の開発へと進展してきている。しかし生
理活性ペプチド類の多くは、生体内での効果持続時間は
短く、有効濃度を維持することは極めて困難である。そ
のため生理活性ペプチド類を臨床に用いる場合、高価な
薬剤を出来る限り少量で有効性を発揮させ、かつ投与回
数も少なく一定濃度に維持し長時間効果が持続しうるべ
く投与形態の検討がなされてきた。ヒアルロン酸を含有
する医薬製剤としては、ヒアルロン酸と生理活性ペプチ
ド類とを化学的に結合させてなる場合とヒアルロン酸と
薬剤とを混合することからなる場合とがある。ヒアルロ
ン酸と薬剤とを混合しているような特許出願の例として
は、特開昭６１−２３６７３２、同６２−１２９２２
６、特開平１−３１９４２７、同２−２１３、同２−２
３１４２９等があるが実用上の効果等で課題が残されて
いた。

【０００３】例えば、ＩＦＮの場合には、特に生体内で
の効果持続時間が短く、有効濃度を維持することは極め
て困難であり、ＩＦＮを臨床に用いる場合、高価なＩＦ
Ｎを大量に用いる必要がある。このように大量に且つ頻
繁にＩＦＮを投与することは現実的ではないことなどか
ら、薬剤をできるだけ少量で有効性を発揮できるように
すると共に、その投与回数も少なく一定濃度に維持して
長時間効果が持続するようなものとすることが強く求め
られている。このような目的のために、例えば、インタ
ーフェロンをリポソーム封入〔特開昭６３−５０２１１
７〕、コラーゲン包理〔米国特許第４，８５５，１３
４〕および抗体結合〔特開昭６０−５０２１０４〕させ
て、血中半減期を増加させる試みがなされているが、血
中半減期の長さ、抗原性及び医薬としての安全性に対し
て十分に満足できるものではなかった。

【０００４】

【課題の解決】本発明は、抗ウィルス作用、抗癌作用、
創傷治療作用、抗炎症作用又は骨関連疾患治癒作用を有
する生理活性ペプチドと、ヒアルロン酸またはヒアルロ
ン酸の非毒性塩と、ヒアルロン酸またはその非毒性塩と
共に生体に投与しうる高分子物質とからなる医薬製剤を
提供することからなる。

【０００５】本発明者らは、生理活性ペプチド製剤、特
には、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、上皮
細胞成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ
Ｆ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、及びインター
フェロン（ＩＦＮ）のいずれかを含有する生理活性ペプ
チド製剤の改良を種々試みた結果、ヒアルロン酸を該製
剤中に加えることにより、該生理活性ペプチド製剤単独
を用いる場合に比して優れた特性を得られることを見出
した。

【０００６】特に、こうして得られた製剤は、優れた治
癒効果、優れた薬剤放出効果、優れた安定性などの作用
効果が期待できる。

【０００７】更に本発明者らは、このような知見に基づ
いて研究を進め、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯ
Ｄ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因
子（ＦＧＦ）、副甲状腺ホルモン、副腎皮質ホルモン、
副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出因
子、レニン、アンジオテンシン、血液凝固因子、ヒト成
長ホルモン、カルシトニン、性腺ホルモン、性腺刺激ホ
ルモン、インシュリン、バソプレッシン、オキシトシ
ン、ソマトスタチン、セクレチン、ガストリン、ガスト
リン分泌ペプチド、胃酸分泌抑制ペプチド、モチリン、
造血因子、エリスロポエチン、ティッシュ・プラスミノ
ーゲン・アクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プ
ロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、トロンボモジュ
リン、プロティンＣ、ヒルジン、コロニー刺激因子（Ｇ
−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ）、インシュリン
様成長因子（ＩＧＦ）、肝実質細胞成長因子（ＨＧ
Ｆ）、骨形成因子（ＢＭＦ）、神経成長・栄養因子、ナ
トリウム利尿ペプチド、幹細胞増殖因子、血小板増殖因
子、免疫抑制剤、非特異的免疫賦活剤、胸腺細胞活性化
因子（ＴＡＦ）、インターロイキン、腎臓成長因子、腫
瘍壊死因子（ＴＮＦ−α及びβ）、及びインターフェロ
ン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γ）から選ば
れた１種又は２種以上のものからなる生理活性ペプチド
（但し、トランスフォーミング成長因子及び蛋白分解酵
素阻害剤を除く）製剤中にヒアルロン酸を加えることに
より、該生理活性ペプチド製剤単独を用いる場合に比し
て優れた特性を得られることを見出した。更に本発明者
らは、このような知見に基づいて研究を進め、該生物活
性ペプチドとヒアルロン酸との配合製剤中に、更に高分
子物質の１種又は２種以上を適量共存させることによ
り、一層優れた特性が得られることを見出した。

【０００８】特に、該生理活性ペプチド、ヒアルロン
酸、及び高分子物質を互いに選択することにより、複合
体を形成させることができ、こうして得られる複合体は
さらに優れた特性を示すことを見出した。このように複
合体を形成したものは、その利用性などが優れたり、持
続性が増すなどの大変に優れたものである。かくして得
られるヒアルロン酸と高分子物質とからなる新しいタイ
プの複合体製剤は、単にヒアルロン酸を配合した製剤に
比し、より優れた治癒効果、優れた薬剤吸収性、優れた
薬剤放出性、優れた薬剤安定性、優れたターゲッティン
グ効果に加えて、製剤製造加工上の様々な利点が期待し
うるものである。これらの特性の代表的なものとして
は、作用効果の持続時間の延長、効果発現パターンの調
節製剤の保存、安定性の増加、製剤の分解変質の防止、
などがあげられよう。

【０００９】本発明で用いられる生理活性ペプチドとし
ては、ホルモン、酵素、リンホカイン、成長因子等の動
物組織より抽出精製されたり、細胞培養あるいは遺伝子
組換え技術により得られたペプチド鎖を有する生理活性
物質を指す。但し、トランスフォーミング成長因子及び
蛋白分解酵素阻害剤は除かれる。

【００１０】本発明で用いられる生理活性ペプチドとし
ては、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、上皮
細胞成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ
Ｆ）、副甲状腺ホルモン、副腎皮質ホルモン、副腎皮質
刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、レニ
ン、アンジオテンシン、血液凝固因子、ヒト成長ホルモ
ン、カルシトニン、性腺ホルモン、性腺刺激ホルモン、
インシュリン、バソプレッシン、オキシトシン、ソマト
スタチン、セクレチン、ガストリン、ガストリン分泌ペ
プチド、胃酸分泌抑制ペプチド、モチリン、造血因子、
エリスロポエチン、ティッシュ・プラスミノーゲン・ア
クチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プロウロキナ
ーゼ、ストレプトキナーゼ、トロンボモジュリン、プロ
ティンＣ、ヒルジン、コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、
ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ）、インシュリン様成長因子
（ＩＧＦ）、肝実質細胞成長因子（ＨＧＦ）、骨形成因
子（ＢＭＦ）、神経成長・栄養因子、ナトリウム利尿ペ
プチド、幹細胞増殖因子、血小板増殖因子、免疫抑制
剤、非特異的免疫賦活剤、胸腺細胞活性化因子（ＴＡ
Ｆ）、インターロイキン、腎臓成長因子、腫瘍壊死因子
（ＴＮＦ−α及びβ）、及びインターフェロン（ＩＦＮ
−α、ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γ）から選ばれた１種又
は２種以上のものからなる生理活性ペプチド（但し、ト
ランスフォーミング成長因子及び蛋白分解酵素阻害剤を
除く）が挙げられる。本発明で用いられる生理活性ペプ
チドとしては、特に好ましいものは、スーパーオキシド
ジスムターゼ（ＳＯＤ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α及
びβ）、インターフェロン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β及
びＩＦＮ−γ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、線維芽
細胞成長因子、インターロイキン１等のインターロイキ
ン、コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ
−ＣＳＦ）などがあげられる。本発明で有利に生理活性
ペプチドとして、胃酸分泌抑制ペプチド、モチリン、造
血因子、エリスロポエチン、ティッシュ・プラスミノー
ゲン・アクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プロ
ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、トロンボモジュリ
ン、プロティンＣ、ヒルジン、インシュリン様成長因子
（ＩＧＦ）、肝実質細胞成長因子（ＨＧＦ）、骨形成因
子（ＢＭＦ）、神経成長・栄養因子、ナトリウム利尿ペ
プチド、幹細胞増殖因子、血小板増殖因子、免疫抑制
剤、非特異的免疫賦活剤、胸腺細胞活性化因子（ＴＡ
Ｆ）、腎臓成長因子等が用いられうる。本発明では、生
理活性ペプチドとして、副甲状腺ホルモン、副腎皮質ホ
ルモン、副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン
放出因子、レニン、アンジオテンシン、血液凝固因子、
ヒト成長ホルモン、カルシトニン、性腺ホルモン、性腺
刺激ホルモン、インシュリン、バソプレッシン、オキシ
トシン、ソマトスタチン、セクレチン、ガストリン、ガ
ストリン分泌ペプチド等も用いられうる。これら生理活
性ペプチドは、天然物由来のものであっても、化学合成
されたものあるいは部分的に修飾されたもの、あるいは
遺伝子組換え法によって得られたものであってよい。特
に遺伝子組換え法で得られたものが好ましい。

【００１１】ＩＦＮは、リンパ球や線維芽細胞が産生す
る生理活性物質で抗ウィルス作用や抗癌作用を示すこと
が知られてきている。このＩＦＮには、ＩＦＮ−α、Ｉ
ＦＮ−β、およびＩＦＮ−γの３種が存在することが知
られ、細胞培養技術および遺伝子組換えなどの進歩によ
り大量に入手しうるようになってきた。

【００１２】このＩＦＮは多発性骨髄腫、腎癌、膠芽
腫、皮膚悪性黒色腫、Ｂ型肝炎等の治療薬として、使用
が開始され、さらには非Ａ非Ｂ型肝炎、エイズ、その他
の癌やリウマチ等の治療薬としての期待がかけられてい
る。

【００１３】本発明に従えば優れた製剤が得られること
から、これら用途以外の抗ウィルス作用並びに抗腫瘍作
用、さらには関節炎治癒作用などへの応用も期待しう
る。本発明においてはこのＩＦＮは、種々のものが用い
ることができる。

【００１４】更に、本発明に従えば優れた製剤が得られ
ることから、その用途範囲を拡大しての応用も期待しう
る。本発明においては、特に抗原性及び早い血中消失速
度の問題の指摘されている遺伝子組換え手法により得ら
れたものについて、優れた結果が望むことができる。

【００１５】ヒアルロン酸はＮ−アセチルグルコサミン
とグルクロン酸のくり返し単位からなる重合体であり、
自然界に広く存在し、多くの哺乳類中に見出される。例
えば、鶏冠から抽出されたヒアルロン酸が、変形性膝関
節症の治療剤として使用され、また、ある種のバクテリ
ア、例えばストレプトコッカス属によって産生されてヒ
アルロン酸も、医薬品として開発されつつある。本発明
に用いるヒアルロン酸は、遊離の形でもよく又はその塩
でもよく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩等の非毒性塩が挙げられる。本発明に用いるヒア
ルロン酸としては、特に起源を問わない。

【００１６】しかしながら、上記のようにある種のバク
テリア、例えばストレプトコッカス属により産生される
ヒアルロン酸は、比較的均一なより高分子形態のものが
高い純度で得られることから好ましい。

【００１７】特に、本発明の製剤においては、薬剤の効
果持続時間とその使用ヒアルロン酸の分子量との間には
密接な関係が認められ、ヒアルロン酸のうち高純度のも
のであって、インターフェロン以外のものにあってはそ
の分子量が２０〜３００万程度のものが好ましく、場合
によっては５０万〜３００万程度のものが特に好まし
い。またインターフェロンにあっては、好ましくは５０
万〜３００万程度のものであり、場合によっては１００
万〜３００万程度のものが特に好ましい。このように、
その使用ヒアルロン酸として特定の分子量のものを使用
することにより、本発明の製剤では種々の医薬製剤とし
て望ましい特性のものを得ることができる。

【００１８】ヒアルロン酸又はその塩は、該生物活性ペ
プチドに対して種々の量で使用することができる。ヒア
ルロン酸又はその塩の濃度はその分子量にもよるが、製
剤あたり０．１〜５０重量％の範囲で用いることができ
る。また、本発明において、特に好ましいヒアルロン酸
塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム
塩、カルシウム塩等があげられ、薬学的に安定であるも
のが好ましい。

【００１９】本発明に従い、上記生物活性ペプチドとヒ
アルロン酸又はその非毒性塩とからなる配合剤に、ヒア
ルロン酸又はその塩と共に生体投与することが可能な高
分子物質をさらに配合した医薬製剤が得られる。このよ
うな高分子物質はその１種又は２種以上、例えば３種又
は４種を配合することができる。このような配合は、生
物活性ペプチドに応じて選択することができる。

【００２０】該高分子物質としては、アテロコラーゲ
ン、ゼラチン、アルブミン、フィブリン、フィブリノー
ゲン、ポリリジン又はポリグルタミン酸などの天然由来
又は人工的に合成された蛋白質、あるいはそれらの加水
分解又は修飾物など、キチン、コンドロイチン硫酸、コ
ロミン酸又はそれらの脱アセチル化物、デキストラン、
ＤＥＡＥ−デキストラン、シクロデキストラン、イヌリ
ン、ラミナラン等の多糖類、さらにポリ乳酸、ポリグリ
コール酸又はそれらのコポリマーあるいはヘテロポリマ
ー、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニル
ポリマー、カルボキシメチルセルロース等の合成高分子
などがあげられる。

【００２１】該高分子物質は、目的に応じて種々の量で
用いることができ、例えばその種類にもよるがヒアルロ
ン酸に対し、１０〜２００重量％配合することができ
る。例えば高分子物質は、それが蛋白質の場合、ヒアル
ロン酸に対し、０．１〜１．５倍の量、多糖類の場合ヒ
アルロン酸に対し、０．１〜１．５倍の量、合成高分子
の場合ヒアルロン酸に対し０．１〜１．５倍の量、配合
すると優れた結果が得られうる。特に、これら高分子物
質はヒアルロン酸と相互作用して、効果発現に望ましい
働きをなす。例えば、これら高分子物質はヒアルロン酸
と相互作用して、より強固な高分子マトリックスを形成
したり、又特に蛋白質の場合にはヒアルロン酸と強く結
合し、ヒアルロン酸に曳糸性をもたらすような粘性等の
物性変化をきたしたりすることにより薬剤の効果発現保
持時間、発現パターンを調節したり薬剤の安定性を改善
する働きがある。顆粒剤、錠剤もしくは液剤などの使用
形態に応じ適当な高分子物質と製造条件が選択される
が、一般的には、高分子物質の使用量はヒアルロン酸に
対し０．１〜１．５倍量で複合体形成ｐＨは３〜１０、
好ましくは４〜８である。

【００２２】インターフェロンについての製剤は、より
良好な結果を与えるものであり、好ましい。このような
良好な結果としては、前記したように高い治療効果が達
成されたり、幅広い製剤形態がとり得たり、薬剤安定性
が得られたり、生体内持続性が得られたり、注射の際の
無痛性が達成されたり、製剤加工性が改善されたり、バ
イオアベイラビリティーが改善されたりすることがあげ
られる。

【００２３】本発明においては、生理活性ペプチドに対
して、ヒアルロン酸はその目的に応じて種々の量配合し
て用いることができ、また高分子物質はその種類にもよ
るがこれまたその目的に応じて種々の量配合して用いる
ことができる。例えば、インターフェロンを用いた場
合、インターフェロンは１０⁵ 〜１０¹²単位の量、さら
に好ましくは１０⁶ 〜１０¹⁰単位の量を製剤中に含める
ようにできる。それに対し、ヒアルロン酸又はその非毒
性塩は製剤あたり剤形に応じて種々の量用いることがで
き、例えば０．１〜５０重量％、さらに好ましくは０．
５〜１０重量％の量用いることができる。また、ヒアル
ロン酸又はその非毒性塩は、製剤あたり、液体の剤形の
場合０．１〜１０重量％、固体の場合０．５〜５０重量
％、半液体の場合０．５〜１０重量％を例示することが
できる。また、高分子物質は、種々のものが種々の量で
用いることができるが、例えばヒアルロン酸に対し、
０．１〜１．５重量％の量、さらに好ましくは、０．５
〜１．２重量％の量加えると好ましい結果が得られる。

【００２４】本発明の配合物は、固体または液体の形
態、さらにはゲル状の半液体の形態にすることができ、
固体または液体の医薬用担体または賦形剤、安定剤等を
添加して適切な製剤形態とすることができる。このよう
な添加物のうちには、炭素数２〜８の水溶性脂肪族カル
ボン酸、適当な界面活性剤、電解質、防腐剤、酸化防止
剤などがあげられる。この他の添加剤としては、ｐＨ調
整剤、基剤、ゲル安定化剤、湿潤剤等を適宜選択しう
る。

【００２５】このカルボン酸としては、例えばモノカル
ボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸等があげられ
る。モノカルボン酸としては、低級脂肪酸、１〜７個の
水酸基を有するモノカルボン酸などがあげられ、ジまた
はトリカルボン酸としてはアルカン鎖中に任意に２〜３
個のカルボキシル基を有するものがあげられ、それらは
また任意に１〜３個の水酸基を含有してよい。さらにこ
れらカルボン酸はアミノ基を有することもできる。これ
らカルボン酸の具体例としては、酢酸、プロピオン酸、
乳酸、グルコン酸、グルクロン酸、マロン酸、コハク
酸、クエン酸、アスコルビン酸、酒石酸、リング酸、グ
ルタル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸などがあげら
れ、これらのものは部分的に塩とされたり、エステル化
されたりされることもできる。

【００２６】適当な界面活性剤としては、医薬添加剤と
して許容されるものがあげられ、例えばソルビタンモノ
パルミテート、ソルビタントリステアレート、ソルビタ
ンセスキオレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル
類；ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、
ポリオキシエチレンモノオレエートなどのポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類；グリセリンモノス
テアレート、グリセリン・ヤシ油脂肪酸エステル、グリ
セリンモノオレエート、アセチル化グリセリルモノステ
アレート、アセトアセチル化グリセリルモノステアレー
トなどのグリセリン脂肪酸エステル類；プロピレングリ
コールモノラウレートなどのプロピレングリコール脂肪
酸エステル類；ポリオキシエチレングリセリンモノステ
アレートなどのポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エ
ステル類；ポリオキシエチレンモノステアレート、ポリ
オキシエチレンオレエートなどのポリオキシエチレン脂
肪酸エステル類；ポリオキシエチレンラウリルエーテ
ル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエ
チレンオレイルエーテルなどのポリオキシエチレンアル
キルエーテル類；ポリオキシエチレンノニルフェニルエ
ーテルなどのポリオキシエチレンアルキルフェニルエー
テル類；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシ
エチレンラノリンなどのポリオキシエチレン誘導体類；
ポリオキシエチレンステアリルアミン、ポリオキシエチ
レンオレイン酸アミンなどのポリオキシエチレンアルキ
ルアミンおよびアミド類；ラウリル硫酸ナトリウム、ラ
ウリル硫酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレン
ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンなどのアル
キル硫酸エステル塩およびポリオキシエチレンアルキル
エーテル硫酸エステル塩類；ピリドキシン脂肪酸エステ
ル類；アスコルビルジパルミテートなどのアスコルビン
酸脂肪酸エステル類；ショ糖ラウレートなどのショ糖脂
肪酸エステル類；リジウムラウレートなどのカルボン酸
塩類；ラウリルリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレン
セチルエーテルリン酸ナトリウムなどのアルキルリン酸
エステルおよびポリオキシエチレンアルキルエーテルリ
ン酸エステル類；ヤシ油脂肪酸モノグリセリド硫酸エス
テルナトリウムなどの硫酸エステル塩類；大豆レシチ
ン、ケファリン、リポイノシトールなどのリン脂質類；
セネガサポニンなどのサポニン類、ウルソデオキシコー
ル酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウムなどのコー
ル酸およびその塩類などが挙げられ、これらの１種又は
２種以上が用いられる。

【００２７】適当な電解質としては、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、炭酸ナトリウム、硫酸マグネシウムなど
があげられる。防腐剤としては、メチルパラベン、ソル
ビン酸、ベンジルアルコール、クロールブタノールなど
があげられる。

【００２８】適当な酸化防止剤としては、亜硫酸水素ナ
トリウム、ブチルヒドロキシアニゾール、アスコルビン
酸、亜硫酸ナトリウム、トコフェロールなどがあげられ
る。

【００２９】適当なｐＨ調整剤としては、適当な酸、塩
基または緩衝液などがあげられ、例えば水溶性脂肪族カ
ルボン酸、無機酸、有機又は無機塩基があげられ、具体
的には塩酸、ホウ酸、リン酸、硫酸、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等
があげられる。

【００３０】基剤のうち水性ゲル基剤としては、たとえ
ば、トラガントガム、アカシアガム、カラヤガム、グア
ヤクガム、キサンタンガム等の天然ガム類、ポリビニル
ピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチル
エーテル、カルボキシポリメチレン等のビニルポリマ
ー、デンプン、ペクチン、アルギン酸ソーダなどがあげ
られる。

【００３１】またその他の基剤としては、カカオ脂、パ
ーム油、パーム核油、ヤシ油、分画ココナッツ油、ラー
ド、ウィテップゾール^(R) などトリグリセリドを主体と
する油脂類；ラノリン、還元ラノリンなどのロウ類；ワ
セリン、スクワレン、スクワランなどの炭化水素類；カ
プリン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、オレイン酸など
の中長鎖脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、
ステアリルアルコール、オレイルアルコールなどの高級
アルコール類；ステアリン酸ブチル、マロン酸ジラウリ
ルなどの脂肪酸エステル類；トリオレイン、トリステア
リンなどのグリセリン中長鎖カルボン酸エステル又はグ
リセリンアセト酢酸エステルなどのグリセリン−置換カ
ルボン酸エステル等のグリセリンエステル類；マクロゴ
ール、セトマクロゴールなどのポリエチレングリコール
類などがあげられ、これら１種又は２種以上が用いられ
る。

【００３２】本発明の製剤は通常の方法を適用すること
により、その製造を行うことができる。例えば、液剤の
場合、ヒアルロン酸又はその無毒性塩を含む溶液に、生
物活性ペプチドを適当なｐＨ調整剤等の入った溶液に溶
解又は懸濁化したものを添加し、攪拌する。この場合、
必要に応じて前記したような添加剤を加えることによ
り、最適なものとすることができる。こうして得られた
製剤は、さらに高分子物質を添加して、より良好な製剤
とすることができ、特には複合体を形成せしめて大変に
優れた製剤とすることができる。

【００３３】このようにして得られた溶液剤は、さらに
任意にｐＨ調整剤、防腐剤なども加えることができ、更
に凍結乾燥したり、減圧下に液を濃縮したり、あるいは
適当なゲル化剤を加えるなどして、固体あるいは粉末体
にしたり、ゲル化物にすることができる。本発明に従え
ば、適宜必要に応じ再溶解、あるいは分散化処理するこ
ともでき、更には適当に加熱あるいは冷却処理をして所
望の製剤とすることができる。

【００３４】本発明の製剤は、剤型、主薬の種類、対象
動物（例、マウス、ラット、ウシ、ウマ、人等の温血動
物）、投与目的により変えることができるが、その１回
投与量は有効量であればよく、例えば、約１mg〜５００
mg／kg体重の範囲から適宜選択することができる。また
投与回数も上記と同様に変えることができるが、週に１
〜４回から１日に１〜３回の範囲で適宜選択しうる。

【００３５】本発明に従って得られた製剤は、優れた性
質を示すが、特にＩＦＮ−ヒアルロン酸を有する製剤
は、長期治療を必要とする癌及びウィルス疾患の治療に
あっても望ましく用いられる。

【００３６】本発明に従って得られた製剤は、顆粒剤、
錠剤もしくは液剤として、経鼻または経口投与すること
もできるし、皮膚などに塗布することもでき、注射剤と
して、静脈内投与、筋肉内投与あるいは皮下投与などを
することもできる。注射剤としては粉末として用時調製
して使用してもよい。

【００３７】特にインターフェロンについての製剤にあ
っては、成人に対し、１日量１００〜１，０００mg投与
するのが好ましいが、年令、症状により適宜増減するこ
とも可能である。前記１日量の本発明のインターフェロ
ンの製剤は、１日１回投与することも可能だが、３日も
しくは、７日に１回投与でも十分の効果が望めるもので
ある。

【００３８】次に、本発明のＩＦＮを含有する生理活性
ペプチド製剤を製造する方法につきさらに説明する。す
なわちヒアルロン酸又は無毒性塩を含む溶液にＩＦＮを
添加・攪拌し、ヒアルロン酸−ＩＦＮ混合物を得る。必
要に応じ高分子物質を添加し液体製剤として用いてもよ
い。更にこのものを濃縮あるいは添加物の濃度を増した
り、あるいは組合せを選択することによりゲル状の半液
体状にして使用してもよいし、又凍結乾燥などにより固
体粉末化し用いることも可能で適用用途に応じ自由に選
択できる。

【００３９】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明について具体的
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。なお、以下の実施例等において、インターフ
ェロン力価の測定はＶＳウィルスおよびヒト羊膜由来の
株化細胞（ＦＬ細胞）を用い、細胞変性効果法により国
際単位（Ｉ．Ｕ．）に換算した。

【００４０】実施例１ ヒト・インターフェロン−α（組換え型）１×１０⁸ 単
位をヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量２１０万）
０．５wt％生理食塩水溶液５mlに添加し混合した。この
ものに脱アセチル化キチン（キトサン）（平均分子量１
０００）５％水溶液１mlを添加混合しｐＨを６．０に６
時間維持し、注射用ＩＦＮ・ヒアルロン酸複合体を得
た。上記方法にて得られたインターフェロン−α・ヒア
ルロン酸複合体０．５ｍｌをラット（Ｗｉｓｔｅｒ系、
雄、体重２００ｇ、７週令・日本チャールスリバー社）
の大腿部の筋肉内に注射投与し、血中の力価を測定し
た。結果を第１図に示す。図１において−●−は、イン
ターフェロン−α・ヒアルロン酸複合体の、−○−は、
対照としたインターフェロン−α単独の測定結果を示
す。インターフェロン−α・ヒアルロン酸複合体製剤は
優れた特性を有している。

【００４１】実施例２（ゲル剤） ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１００万）１．５
wt％生理食塩水溶液１０mlにヒト・インターフェロン−
β（天然型）１×１０⁸ 単位を混合後、アテロコラーゲ
ン（シグマ社製）０．５ｇを添加、ｐＨ調整後溶解し
た。このゲル状製剤は、経口投与剤として使用できる。
この製剤は優れた特性を有している。

【００４２】実施例３（ゲル剤） ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量２５０万）１．５
wt％生理食塩水溶液１００mlにヒトＥＧＦ（組換え型）
５０μｇを混合後、アテロコラーゲン５ｇを添加、ｐＨ
調整後溶解した。こうして得られたゲル状製剤は、火傷
の治療剤として使用される。

【００４３】実施例４（粉末剤） 無菌条件下ヒトＣｕ−Ｚｎ−ＳＯＤ（組換え型）１mgを
ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１５０万）１wt％
生理食塩水溶液１０００mlに溶解後、ヒドロキシプロピ
ルセルロース１０ｇを添加し、溶解させ、凍結乾燥し
た。乾燥物を粉末化し用時調製タイプの関節リウマチ注
射用無菌製剤として使用される。

【００４４】実施例５（軟膏剤） 日本薬局方マクロゴール軟膏８４０ｇを軟膏板にとり、
セタノール５０ｇを軟膏板で練合し、次にＩＬ−１β
（組換え型）（ゼンザイム社）１mg、ヒアルロン酸ナト
リウム（平均分子量１５０万）１０ｇ、ポリリジン１０
ｇおよび適当量の防腐剤を加え、最後に生理食塩水を加
え１０００ｇとし、よく練合し調製した。このものは、
手術後の傷口や老人の床ずれの治療薬として使用され
る。

【００４５】実施例６ 実施例１のキトサンに代えて、ゼラチン、アルブミン、
フィブリン、フィブリノーゲン、ポリリジン、ポリグル
タミン酸、コンドロイチン硫酸、コロミン酸、デキスト
ラン、シクロデキストラン、ＤＥＡＥ−デキストラン、
イヌリン、ラミナラン、ポリ乳酸（分子量：５００
０）、ポリグリコール酸（分子量：１００００）から選
ばれた各々のうちの一つを１％含有する生理食塩液を用
いて同様にして溶液剤を得た。こうして得られた製剤は
優れた作用を有している。

【００４６】実施例７ 牛赤血球由来Ｃｕ−Ｚｎ−ＳＯＤ（和光純薬）５００Ｕ
をヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１８０万）０．
６wt％生理食塩水溶液５mlに溶解後、ゼラチン（新田ゼ
ラチン）２ｍｇを添加して溶解した。得られた製剤にお
けるＳＯＤの凍結乾燥における安定性をその前後でＳＯ
Ｄの酵素活性を測定することで検討した。結果を第１表
に示す。

【００４７】

【数１】

【００４８】

【表１】

【００４９】ＳＯＤ、ヒアルロン酸、ゼラチンの混合製
剤は、他の製剤に比べて良好な活性保持効果を有してい
た。

【００５０】実施例８ マクロファージ・コロニー刺激因子（組換え型）１ｍｇ
にヒト血清アルブミン１０ｍｇを加えヒアルロン酸ナト
リウム（平均分子量１６０万）０．６wt％生理食塩水溶
液１０mlに溶解後凍結乾燥した。この製剤は、用時調製
タイプの注射用抗癌剤として使用される。

【００５１】実施例９ 腫瘍壊死因子のＴＮＦ−β（組換え型）１×１０⁶ 単位
をヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量１８０万）２．
０wt％リン酸緩衝液（ｐＨ７．２）溶液３mlに添加し混
合した。このものに脱アセチル化キチン（キトサン）
（平均分子量１５万）２％塩酸溶液（０．０５Ｍ）６ml
を添加混合し、注射用ＴＮＦ−β・ヒアルロン酸複合体
を得た。上記方法にて得られたＴＮＦ−β・ヒアルロン
酸複合体１．０ｍｌをラット（Ｗｉｓｔｅｒ系、雄、体
重２００ｇ、７週令・日本チャールスリバー社）の背部
皮下に注射投与し、血中のＴＮＦ−β量を酵素免疫測定
法にて測定した。結果を第２図に示す。図２において−
●−は、ＴＮＦ−β・ヒアルロン酸複合体の、−○−
は、対照としたＴＮＦ−βとヒアルロン酸の混合製剤
の、−□−は、対照としたＴＮＦ−β単独の測定結果を
示す。ＴＮＦ−β・ヒアルロン酸複合体製剤は優れた特
性を有している。

【００５２】

【発明の効果】本発明の製剤は、ヒアルロン酸に加えて
高分子物質を添加することによりヒアルロン酸と複合体
を形成せしめることができ、治療用薬剤として大変に優
れている。さらに、その製剤としての加工性においても
好ましい。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１に示したインターフェロン−α・ヒア
ルロン酸ナトリウム複合体の筋注におけるラット血清中
でのクリアランスの遅延効果を示す。

【図２】実施例２に示したＴＮＦ−β・ヒアルロン酸ナ
トリウム複合体の皮下投与におけるラット血清中でのク
リアランスの遅延効果を示す。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−156912（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−146827（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−155136（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−59000（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−236721（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−59625（ＪＰ，Ａ) 国際公開90／5522（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 38/45 A61K 38/00 A61K 38/21 A61K 47/36 A61K 47/42 ＣＡ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯ
   Ｄ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α及びβ）、及びインタ
   ーフェロン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γ）
   から成る群から選ばれたものからなる生理活性ポリペプ
   チド製剤であって、 (a) 該生理活性ペプチドが、スーパーオキシドジスム
   ターゼの場合、スーパーオキシドジスムターゼ及びヒア
   ルロン酸またはヒアルロン酸の非毒性塩及び、ヒアルロ
   ン酸またはその非毒性塩と共に生体に投与しうる高分子
   物質であって且つ、ゼラチンからなるものであり、 (b) 該生理活性ペプチドが、腫瘍壊死因子及びインタ
   ーフェロンから成る群から選ばれたものの場合、腫瘍壊
   死因子及びインターフェロンから成る群から選ばれたも
   の及びヒアルロン酸またはヒアルロン酸の非毒性塩及
   び、ヒアルロン酸またはその非毒性塩と共に生体に投与
   しうる高分子物質であって且つ、脱アセチル化キチン
   （キトサン）あるいはアテロコラーゲンからなるもので
   あることを特徴とする生理活性ポリペプチド製剤。
2. 【請求項２】 該製剤が、固体、液体又はゲル状の半液
   体の投与形態のものである請求項１に記載の製剤。
3. 【請求項３】 該製剤が、含有される生理活性ペプチド
   に応じて、抗ウィルス剤、抗癌剤、創傷治療剤、抗炎症
   剤又は骨関連疾患治療剤として使用されるものである請
   求項１に記載の製剤。