JPH01193231A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 良！直二社亜先」 本発明は、インターロイキン−２と百日咳毒素とを組み
合わせてなる抗腫瘍剤に関する。

従来の技術 インターロイキン−２（以下、ｒｌＬ−２４と略称する
こともある。）などのいわゆるリンホカインを抗腫瘍剤
として用い、ヒトの悪性腫瘍を治療する試み〔癌と化学
療法、１３，９７７（１９８６））が行われ、治療効果
が報告〔ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メ
ディシン（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ　　Ｊ、　Ｍｅｄ、）
、３１６，８８９（１９８７）；　キャンサー・リサー
チ（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、）、４７゜２１８４（１
９８７））されている。最近、ＩＬ−２は遺伝子工学手
法で得られたもの（以下、ｒｒｌＬ−２」と略称するこ
ともある。）〔特開昭６０−１１５５２８号公報、特開
昭６１−７８７９９号公報〕も用いられている。

一方、百日咳毒素〔蛋白質核酸酵素、旦。

３００（１９８６））は多彩な生物活性を有することが
知られており、抗腫瘍作用を有すること〔Ｃａｎｃｅｒ
　　Ｒｅｓ、、４７．５４３９（１９８７））も報告さ
れている。

発明が解決しようとする課題 上記したインターロイキン−２は、単独で腫瘍の治療へ
の応用が試みられているが、百日咳毒素については、腫
瘍の治療への臨床応用は試みられていない。

本発明は、インターロイキン−２と百日咳毒素とを組み
合わせてなる抗腫瘍剤を提供することにあり、両物質を
組み合わせることにより格別に顕著な抗腫瘍効果を発揮
させるものである。

課題を解決するための手段 本発明者は、ＩＬ−２と百日咳毒素とを組み合わせて動
物に投与すると、格別に顕著な抗腫瘍作用が発揮され、
しかも低用量で・強い効果が発揮されることを見い出し
、これらの知見に基づいて研究した結果、本発明を完成
した。

本発明は、インターロイキン−２と百日咳毒素とを組み
合わせてなる抗腫瘍剤である。

上記インターロイキン−２としては、ＩＬ−２活性、す
なわちＴ細胞をその機能を維持したまま継代維持しうる
作用を有する物質であればいずれでもよい。

例えば動物体内や動物細胞で産生される天然のＩＬ−２
や遺伝子組み換え技術で生産されるＩＬ−２やこれらの
関連物質が挙げられる。上記ＩＬ−２やこれらの関連物
質は、蛋白質である場合、糖鎖を有していてもよくまた
有さなくてもよい。

具体的には、例えば第１図で示されるアミノ酸配列を有
するポリペプチド（■）（ヒトＩＬ−２）や、その生物
学的もしくは免疫学的活性に必要な一部分のアミノ酸配
列からなるフラグメントでもよい。

上記フラグメントとしては、例えばポリペプチド（１）
のアミノ末端から１個のアミノ酸（ＥＰＣ公開９１５３
９号公報）または４個のアミノ酸を欠くフラグメント（
特開昭６０−１２６０８８号公報）やカルボキシル末端
部の数個のアミノ酸を欠くフラグメントなどが挙げられ
る。さらに第１図で示されるアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド（＋）の構成アミノ酸の一部が欠損しているか
他のアミノ酸に置換されたもの、例えば１２５位のシス
ティン残基がセリン残基に置換されたもの［特開昭５９
−９３０９３号公報］でもよい。

また上記ＩＬ−２は、ポリエチレングリコール誘導体等
で化学修飾されたものでもよい［例えば号公報］、本発
明においては遺伝子組み換え技術で製造され、第１図で
示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２を用いるの
が好ましく、この場合そのアミノ末端にさらにメチオニ
ン残基（Ｍｅｔ）を有するものと有さないものとの混合
物［特開昭６０−１１５５２８号公報、特開昭６１−７
８７９９号公報］であってもよく、またアミノ末端にＭ
ｅｔを有さずアラニン（Ａｌａ）で始まるもの［特開昭
６１−７８７９９号公報］でもよい。

百日咳毒素は百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒ
ｔｕｓｓｉｓ）由来の毒素（ｔｏｘｉｎ）であればよい
。該毒素は白血球増多作用、ヒスタミン増感作用、イン
スリン分泌増強活性、血球凝集能、ア′）：Ｌバンド活
性などの生物活性〔菜根出版株式会社発行、医学細菌学
、！。

５７（１９８６））を示し、その生物活性の発現の相異
により、白血球増多因子（ｌｅｕｋｏｃｙｔｏｓｉｓ（
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ）　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　
　ｆａｃｔｏｒ；　　Ｌ　Ｐ　Ｆ　）〔バイオヒミカ・
工・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　
　ｅｔ　　Ｂｉｏｐｈｙｓｔｃａ　　Ａｃｔａ）、４４
４゜７６５（１９７６））、ヒスタミン増感因子（ｈｉ
ｓｔａｍｉｎｅ　　ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ　　ｆａｃ
ｔｏｒ；　　ＨＳ　Ｆ　）　（ンヤーナル・オブ・イム
ノロジー（Ｊ、　　ｒｍｍｕｎｏｌ、　）。

１１３．１８（＋　９７４））、膵島（インスリン分泌
）活性化蛋白質（ｉｓｌｅｔ　　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ
　　ｐｒｏｔｅｉｎ；　　［ＡＰ）（ジャーナル・オブ
・バイオケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）、
８３，３０５（１９７Ｂ））　、血球凝集素（ｈｅｍａ
ｇｇｌｕｔｉｎｉｎ；　　ＨＡ）、マウス感染防御抗原
（ｍｏｕｓｅ　　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　　ａｎｔｉｇ
ｅｎ；　　ＭＰＡ）、百日咳菌毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉ
ｓ　　ｔｏｘｉｎ；　　ＰＴ）（レビューズ・オブ・イ
ンフェクシャス・デイシーズ（Ｒｅｖ、　Ｅ　ｒ＋４ｅ
ｃｔ、　Ｄ　ｉｓ、）、上、４０１（１９７９））など
の異なった名称が与えられているが、白血球増多作用を
有するものであればいずれを用いてもよい。本発明にお
いては、百日咳毒素の構成成分であるＡプロトマー、Ｂ
オリゴマー、Ｃサブユニット〔蛋白質核酸酵素、３１．
３００（＋　９８６））を用いてもよく、また百日咳毒
素を含有する沈降精製百日咳ワクチン〔ランセット（Ｌ
　ａｎｃｅｔ）Ｊａｎｕａｒｙ　　２１，１２２（１９
８４））、全菌体百日咳ワクチン〔生物学的製剤基準（
＋９７１））等を用いてもよい。さらに、ホルマリン等
により不活化処理したもの、ポリエチレングリコール誘
導体等で化学修飾したもの〔ＥＰＣ公開公開２５１７仔
７ 用いてもよい。

上記百日咳毒素は、例えばＪ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．
、　８　３　。

２　９　５（＋　９　７　８）、Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ
．、８　３，３　０　５（１９７８）、インフェクショ
ン・アンド・イムニティ−（ｒ　ｒ＋４ｅｃｔ、　　ｒ
ｍｍｕｎ、　）、４１．３１３（１９８５）などに記載
の方法に従って製造されるが、なかでもＳＳ培地で培養
した百日咳菌の培養上清を、ハイドロオキシアパタイト
カラムクロマトにかけてＬＰＦ’画分を分離し、溶出液
をハプトグロビン−セファロース４Ｂのアフィニティー
クロマトで精製したＬＰＰが好都合に用いられる。

Ｉ　Ｌ−２の比活性は約２０，０００〜８０，０００単
位／ｍｇであることが望ましく、水溶液として約１〜８
０．０００単位／Ｔｎ１．、とりわけ約ＩＯ〜５０．０
００単位／威のＩＬ−２活性を有するものが何利に用い
られる。

また、百日咳毒素の比活性は、ＬＰＦとして約４０．０
００〜５０，０００ＥＬ　Ｉ　ＳＡ単位／＋ｎｇ蛋白で
あることが望ましく、水溶液として約５０〜５００ＥＬ
ＩＳＡ単位／蔵、とりわけ約１５０〜３００ＥＬＩＳＡ
単位／戒のＬＰＦ活性を有するものが有利に用いられる
（ＬＰＦ活性の測定は、ジャーナル・オブ・ミクロバイ
オロジカル・メンツズ（Ｊ　、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
　Ｍｅｔｈｏｄｓ）、　１　、９９　（１９８３）参照
〕。

本発明におけるＩＬ−２と百日咳毒素との使用量は、そ
の使用方法、使用目的などにより異なるが、ＩＬ−２の
タンパク質ｆｉ１ｍｃｇ（ＩＬ−２活性として３５ユニ
ツト（Ｕ）、なお、ｆＬ−２活性の測定に関して特開昭
６０−１１５５２８号公報参照〕に対参照画日咳毒素を
約０．０１〜５０ｍｃｇの割合で用いることが望ましく
、とりわけ約０．１〜ｌｏｍｃｇを用いるのが好ましい
。本発明の抗腫瘍剤は、経口的または非経口的に投与す
ることができる。また本発明の抗腫瘍剤の投与量は、使
用するＩＬ−２や百日咳毒素の種類によって異なるが、
たとえばマウスでは合計量のタンパク量として約５〜１
００　ｍｃｇ／　ｋｇが好ましく、後述のネコ、イヌ、
牛、馬、羊、山羊、家兎、ヒトなどの哺乳動物では合計
量のタンパク量として約０．００５〜２０　ｍｃｇ／　
ｋｇが好ましい。

ＩＬ−２の１日投与量としては、たとえばマウスでは約
１〜５００　ｗＣｇ／ｋｇが好ましく、ネコ、イヌ、牛
、馬、羊、山羊、家兎、ヒトなどの哺乳動物では約０．
００５〜１０ｍｃｇ／ｋｇが好ましい。

百日咳毒素の１日投与量としては、たとえばマウスでは
約５〜２　、ＯＯＯｍｃｇ／ｋｇが好ましく、ネコ、イ
ヌ、牛、馬、羊、山羊、家兎、ヒトなどの哺乳動物では
約０　、０１〜５０　ｍｃｇ／ｋｇが好ましい。

本発明のＩＬ−２は低毒性である。たとえば１、第１図
に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２のアミノ
末端にさらにＭｅｔを有するものと有さないものとの混
合物を、特開昭６０−１１５５２８号公報に記載の方法
と同様の方法で精製されたヒトＩＬ−２をマウスやラッ
トの静脈内に１０ｍｇ／ｋｇ（１ｍｇ＝３．５ｘ　ｌ　
Ｏ’単位）投与しても毒性によって死亡するものはみら
れない。

本発明に用いる百日咳毒素は、体重的１５ｇのマウスに
３０ｍｃｇを腹腔内に投与しても死亡あるいは体重低下
するものはみられないが、曲記した如く、生体に投与し
たとき種々の生物活性を発現するので、投与量、投与期
間、投与経路について注意しながら使用する必要がある
。

本発明の抗ｍ瘍剤は、各成分をあらかじめ水溶液とした
もの、各成分を凍結乾燥することによって固型状の混合
物としたもの、それぞれの水溶液としたものを凍結乾燥
することによってそれぞれの固型状のものとしたもの、
いずれかが水溶液で別の成分が凍結乾燥することによっ
て固型状のものなどの形態が挙げられる。

本発明の抗腫瘍剤は、これらの物質を、公知の製剤学的
製造法に準じ、所望により製剤学的に許容され得る希釈
剤、賦形剤などを用い、混合して一剤として投与出来る
。またそれぞれの物質を別途、所望により製剤学的に許
容され得る希釈剤。

賦形剤などを用い、製剤化し用時希釈剤等を用いて一剤
として投与することができる。さらに上記したようにそ
れぞれ別途製剤化したものを、別個に同時にまたは時間
差をおいて、同一対象に対して同一経路または異なった
経路で投与することもできる。

本発明の抗腫瘍剤が水溶液である場合は、水性溶剤（例
、蒸留水）、水溶性溶剤（例、生理的食塩水。

リンゲル液）、油性溶剤（例、ゴマ油、オリーブ油）等
の溶剤、または所望により溶解補助剤（例、サリチル酸
ナトリウム、酢酸ナトリウム）、緩衝剤（例、クエン酸
ナトリウム、グリセリン）１等張化剤（例、ブドウ糖、
転化糖）、安定剤（例、ヒト血清アルブミン、ポリエチ
レングリコール）、保存剤（例、ベンジルアルコール、
フェノール）、無痛化剤（例、塩化ベンザルコニウム、
塩酸ブロカイン）等の添加剤を用いて、常套手段により
製造される。

該水溶液におけるＩＬ−２の濃度は、約０．３〜１００
０ｍｇ／顧、さらに好ましくは約３〜５００　ｍｇ／ｄ
である。

該水溶液における百日咳毒素の濃度は約０、Ｏ１〜２０
ｎｇ／蔵、さらに好ましくは約０．０５〜１０ｍｇ／ｄ
である。

また、該水溶液におけるｐ）ｌは、約３〜７に、さらに
好ましくは約５〜７に調整される。上記１）Ｈ範囲に調
整するためには、たとえば稀塩酸や稀アルカリ（例、希
水酸化ナトリウム、希炭酸水素ナトリウム）などを添加
することにより行われる。

また、本発明の抗腫瘍剤が固型状のものは、たとえば各
成分を凍結乾燥するか、あるいは固型状（例、粉末状）
の各成分に希釈剤（例、蒸留水、生理的食塩水、ブドウ
糖）、賦形剤（例、カルボキシメチルセルロース（ＣＭ
Ｃ）、アルギン酸ナトリウム）。

保存剤（例、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウ
ム、フェノール）、無痛化剤（ブドウ糖、グルコン酸カ
ルシウム、塩酸ブロカイン）等を混合し、常套手段によ
り、固型状筋肉内注射用製剤に製造することができる。

本発明の抗腫瘍剤の製剤化にあたって、ＩＬ−２を含有
する水溶剤である注射剤にさらにヒト血清アルブミン（
以下、ＩＳＡと略称することもある。）を配合し、溶液
状態でｐ）（約３〜７を示すように調整すると、保存中
および凍結や凍結乾燥操作におけるＩＬ−２活性の低下
が少なく、また凍結乾燥品においてはその再溶解時の溶
状が澄明であるので好都合である。

ＩＳＡとしては、いかなるものでもよいが、本組成物を
臨床応用するためには、非経口投与に用いる程度の品質
のものが好ましく、例えば健康人血漿を原料として、Ｃ
ｏｈｎのエタノール分画第６法によって分画精製したも
のが用いられる。

また安定剤としてアセチルトリプトファンナトリウムや
、カプリル酸ナトリウムをさらに含有するものであって
もよい。

ＨＳＡは、各成分を水溶液とした場合に、水溶液１ｄ当
り約０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、とりわけ約０．５ｍｇ〜２
０Ｂ含有させることが好ましい。

本発明の抗腫瘍剤の製剤化にあたっては、上記Ｈ８Ａに
加えさらにグリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、
アラニン、プロリンなどのアミノ酸とりわけモノアミノ
脂肪族アミノ酸、もしくは環状アミノ酸、ブドウ糖、マ
ンノースなどの単糖類、ソルビット、マンニット等の糖
アルコール類、およびこれ−らの生理学的に許容できる
塩もしくは誘導体の１種または２種以上を配合してもよ
い。

上記配合剤は、各成分を水溶液とした場合に、水溶液ｌ
−当り、単糖類または糖アルコール類に関しては約１０
〜１００＋ｎｇ、アミノ酸に関しては約５〜５０＋＋ｇ
配合することが好ましい。

本発明の抗腫瘍剤を製剤化したもの（Ｉ　Ｓ　Ａを配合
したもの）を溶液状態でｐＨ約３〜７．好ましくはｌ）
Ｈ約３〜５．５に示すように調整するために、グルタミ
ン酸などの酸性アミノ酸を配合する場合は該物質を上記
所定量加えることにより所定のｐＨに調整でき、また所
望により、または上記酸性アミノ酸を配合しない場合は
塩酸、リン酸等の鉱酸、もしくはコハク酸、酒石酸、ク
エン酸等の緩衝剤で所定のｐＨに調整する。

本発明の抗腫瘍剤は、水溶液、凍結品または凍結乾燥品
の形態が好ましく、とりわけ凍結乾燥品が好ましい。

本発明の抗腫瘍剤は、！Ｌ−２活性の減刑を防止するた
めに、たとえば以下の方法により製造することができる
。

Ｉ　Ｌ−２を約１〜８０，０００単位／旙、さらに好ま
しくは約１０〜５０，０００単位／！Ｒ１、さらに百日
咳毒素を含有する場合にはこれを約５０〜５００ＥＬＩ
ＳＡ単位／−１さらに好ましくは約１５０〜３００ＥＬ
　Ｉ　ＳＡ単位／成を含有する水溶液に、所望によりＩ
ＳＡを前記所定の濃度になるように加え、前記した方法
でｐＨＱ整を行う。

また、所望により、単糖類、糖アルコール類、アミノ酸
なども前記した濃度として加えることもできる。また所
望により等張化剤、界面活性剤などら加えろことができ
る。なお、ＨＳＡ以外の物質を添加する場合には、最終
水溶液のｐＨが前記ｐＨを示すように、前記した方法で
ｐＨ１Ｆ］整を行う。

かくして得られる水溶液としての本発明の抗腫瘍剤は、
下記の凍結および凍結乾燥品の原料としても用いること
ができる。

凍結品としての本発明の抗腫瘍剤は、たとえば上記水溶
液を通常約−８０〜−２０℃で凍結することにより製造
できる。該凍結組成物は約−８０〜−１θ℃で保管する
ことが好ましい。

凍結乾燥品としての本発明の抗腫瘍剤は、例えば上記凍
結組成物を常法により減圧乾燥するか上記水溶液または
上記凍結組成物の融解により得られる水溶液を、所望に
より小分けし、上記同様凍結した後、常法により減圧乾
燥することにより製造することができる。

また前記の方法により製造した凍結乾燥品を、例えば前
記した単糖類、糖アルコール類、アミノ酸等を含有し、
所望により塩酸等でｐＨＩ整された溶解液によって再溶
解することによって溶液状態の本発明の抗腫瘍剤を製造
することができる。

注射用製剤としての本発明の凍結乾燥した抗腫瘍剤を製
造する場合は、各成分の水溶液および配合剤含有水溶液
をそれぞれ除菌ろ過して混合するか、これらの混合液を
小分けする前に除菌ろ過等により精製し、無菌操作によ
りバイアル瓶等に分注小分けした後上記凍結乾燥処理に
付すことが好ましい。この場合、容器の空間部を真空に
するか、窒素ガス置換することにより、該組成物の安定
性を高めることができる。

また、アミノ酸や単糖類あるいは糖アルコール類を含有
する水溶液で、凍結乾燥品を溶解する場合には、その水
溶液は除菌ろ過し、無菌操作によりアンプル等に分注小
分後、常法により蒸気滅菌したものを用いることが好ま
しい。

本発明の抗腫瘍剤は哺乳動物（例、マウス、ネコ。

イヌ、牛、馬、羊、山羊、家兎、ヒト）の腫瘍の治療ま
たは予防に有用であり、例えば腫瘍を保持する哺乳動物
の延命に著効を奏する。かかる対象疾患としては各種白
面病、悪性リンパ腫、骨肉腫、悪性黒色腫、悪性絨毛上
皮、筋肉腫、卵巣癌、子宮癌、前立、腺癌、膵癌、胃な
らびに腸などの消化器癌、肺癌１食道癌、頚頭部腫瘍、
脳腫瘍などが挙げられる。

本発明の抗腫瘍剤を投与する際、該組成物が水溶液のも
のである場合には、そのまま注射用溶解液として用いる
。

該組成物が凍結乾燥により固型状のものである場合には
、蒸留水もしくは生理的食塩水などを用いて溶解し注射
用溶解液として用いる。なお、所望により前記したと同
様の単糖類、糖アルコール類、アミノ酸等を含有し、前
記と同様にｐＩ（ｌ整された溶解液で溶解後便用するこ
とも出来る。

本発明の抗腫瘍剤において、ＩＬ−２と百日咳毒素とを
別途製剤化したものを、同時に同一対象に投与すること
ができ、また、時間差をおいて同一対象に投与すること
ができる。

本発明の抗腫瘍剤は、それぞれの単独使用では得ること
が出来ない顕著な抗腫瘍作用を示し、後述の実験例から
明らかな如く、低用量の組み合わせでも強い抗腫瘍作用
を示す。

本発明の製剤にＩＳＡを配合したものは、保存中および
凍結や凍結乾燥操作におけろＩＬ−２活性の低下が少な
く、また凍結乾燥品においてはその再溶解時の溶状が澄
明である点等に優れた特徴を有するものである。

本発明の製剤にＩＳＡを配合したもの、とりわけその凍
結乾燥品は、その外観が向上し、その器壁への吸着が防
止される効果をも奏するものである。

本発明の製剤（ＩＳＡを配合している。）に、さらにア
ミノ酸を配合した組成物は凍結乾燥品とした場合にその
外観が向上し、注射剤として投与する場合の疼痛を軽減
する効果をも奏する。また単糖類や糖アルコール類をさ
らに配合した組成物は注射剤として投与する場合の疼痛
を軽減する効果をも奏する。

実施例 以下に実験例および実施例を示し、本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

なお、実験例または実施例で用いたＩＬ−２は、第１図
に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２すなわち
アミノ末端がアラニンで始まるＩＬ−２（以下、ｒ■ｔ
、−２Ａｌａ分子種」と称する。）とそのアミノ末端に
メチオニンが付加したＩＬ−２（以下、ｒｌＬ−２Ｍｅ
ｔ分子種」と称する。）との混合物である。該ＩＬ−２
は、形質転換体エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ　　ｃｏｌｉ）　Ｎ４８３０／ｐＴＢ２８５（Ｉ
ＦＯ１４４３７，ＦＥＲＭ　　ＢＰ−８５２）を用い、
特開昭６１−７８７９９号公報に記載の方法と同様の方
法で培養し、特開昭６０−１１５５２８号公報に記載の
方法と同様の方法で高度に精製され、製造されたもので
あり、その比活性は約３．５ＸＩＯ’単位／ｍｇである
。

一方、実験例または実施例で用いた百日咳毒素は、［ｎ
ｒｅｃｔ、　　Ｉ＋ｎｏ＋ｕｎ、、４１．３１３（１９
８５）に記載の方法と同様の方法で、百日咳菌Ｉ相菌東
浜株〔特開昭５７−５０９２５号公報参照、ＩＦＯ１４
０７３）より製造されたものであり、実施例で用いた百
日咳毒素Ｂオリゴマーは、Ｉ　ｎｆｅｃｔ。

Ｉｍｍｕｎ、、５５．１１３２（１９８７）に記載の方
法と同様の方法で製造されたものである。

なお、上記形質転換体エシェリヒア・コリ　Ｎ４８３０
／ｐＴＢ２８５は、昭和６０年４月２５日から財団法人
発酵研究所（ＩＦＯ）に、受託番号ＩＦＯ１４４３７と
して寄託され、また昭和６０年４月３０日から通商産業
省工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ’ＲＩ）に、受
託番号ＦＥＲＭＰ−８１９９として寄託され、該寄託は
ブタペスト条約に基づく寄託に切換えられて、受託番号
ＦＥＲＭ　　ＢＰ−８５２として同研究所（ＦＲＩ）に
保管されている。

一方、百日咳菌■相菌東浜株は、昭和５５年８月１３日
からＩＦＯに、受託番号ＩＦＯ１４０７３として寄託さ
れている。

実験例Ｉ　腫瘍的投与による抗腫瘍作用：体重的２０ｇ
の雌のＢＡＬＢ／Ｃマウスの側腹部皮下にｌＸｌ０’個
のＭｅｔｈ−Ａ線維肉腫（Ｍｅｔｈ−Ａ腫瘍細胞）を注
射筒を用いて移植し、移植後７日目に腫瘍が一定の大き
さに達したものを選び、群分けを行い薬物投与を開始し
た。薬物投与は、ＩＬ−２の場合は腫瘍移植部位とは反
対側の側腹部の皮下に１日１回連続ＩＯ日間行い、百日
咳毒素は腫瘍部の皮下に２回（移植後７日目と！２２日
目行った。ＩＬ−２は正常マウス血清を５％添加した生
理食塩水（溶解液）に溶解し、投与液量として０．１ｍ
／マウスとなるよう調製した。百日咳毒素はグリセリン
を含む生理食塩水に溶解し、投与液量として０．０５ｄ
／マウスとなるよう調製した。抗腫瘍効果の評価は腫瘍
移植後２１１日目腫瘍重量を測定し、各実験群の平均腫
瘍重量を求め、薬物投与群（Ｔ、−群５匹）と薬物無処
理対照群（Ｃ，−群５匹）との腫瘍重量比（Ｔ／Ｃ％）
を求めて行った。なお、薬物の１日当りの投与量はマウ
ス１匹当りの薬物重量（ｍｃｇ）で表わした。結果は第
１表のとおりである。

第１表 投与量　　　動物数　　腫瘍重量　腫瘍　体重槽（ｍｃ
ｇ／マウス　　　　　　　　　　重量比　加（ｇ）７日
）　　（匹）　　　　　（ｇ）　　　（Ｔ／Ｃ％）（７
日−無投与対照　　　５　　７．００±１．４３　　　
　　５．４０　　１０　　　５”　　２．２３±０．７
９　　３３　　０．４ｔｏ　　　Ｏ５３，３４±１．９
４　　４８　　３．０１０　　　ｔｏ　　　　５　　０
．６３±０．３０　　９　　０．８１５例中１例が毒性
により死亡した。

実験例２　静脈内、皮下および腫瘍的投与による抗腫瘍
作用： 実験例１と同様の腫瘍移植条件のもとで、薬物投与を移
植後９日目に開始した場合の抗腫瘍作用を検討した。薬
物の調整は実験例１と同様に行い、ＩＬ−２は移植後９
日目より腫瘍移植部位とは反対側の皮下に１日１回連続
１０日間投与した。百８咳毒素は、移植後９日目と１４
４日目それぞれ１回ずつ計２回、腫瘍移植部とは反対側
の皮下もしくは腫瘍内（腫瘍部の皮下）に投与し、静脈
内投与の場合は、移植後９日目に１回尾静脈に投与した
。腫瘍移植後２１１日目腫瘍重量を測定し、抗腫瘍効果
の評価を実験例１と同様に行った。結果は第２表に示す
とおりであった。

第２表 投与量　　　動物数　　腫瘍重量　腫瘍　体重増（ｍｃ
ｇ／マウス７日）　　　　　　　　　　重量比　加（ｇ
）ＩＬ−２百日咳毒素（匹）　　　　　（ｇ）　　　（
Ｔ／Ｃ％）（９日−無投与対照　　５　　６．８１±１
．１０　　　　　５．２０　５（腫瘍内）５　　　２．
８７±０．９８　４２　　　３．００　５（皮下）　　
　５　　　２．９４±０．６３　４３　　　２．２０　
５（静脈内）５１　１．８１±０．６１　２６　　−０
．７１００　　　　　５３゜３４±１．２０　４９　　
４Ｊ１０５（腫瘍内）５　　　０．８３±０．６５　１
２　　１．７１０　５（皮下）５１．３８±０．２９　
２０　　　１．９”５例中１例が毒性により死亡した。

１′ｍ５例中２例が毒性により死亡した。

実施例１　注射用製剤： ＩＬ−２１０ｍｇ 百日咳毒素　　　　　　　　　　　　２０＋ｎｇ乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　８５ｍｇＨｒ’Ｃ−Ｌ（
オキシプロピルセルローズ）ｍｇ 計１２０ｍｇ 上記の割合で、囲者を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水に溶解し、ヒト血清アルブミン（ＩＳＡ）
を０．５％になるように添加してメンブランフィルタ−
（口径０．２２μｍ）を用いてろ過後、得られたろ液を
無菌的にｔｙずつバイアル瓶に分注して凍結乾燥し、注
射用抗腫瘍剤を調製した。本注射用製剤は、用時注射用
蒸留水１ｄに溶解する。

実施例２　注射用製剤： ＩＬ−２１０ｍｇ 百日咳毒素Ｂオリゴマー　　　　　　３０ｍｇ計４０ｍ
ｇ 上記の割合で、三者を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水に溶解し、ヒト血清アルブミン（ＩＳＡ）
を０．５％になるように添加してメンブランフィルタ−
（口径０．２２μｆｆ１）を用いてろ過後、得られたろ
液を無菌的にＩｄずつバイアル瓶に分注して凍結乾燥し
、注射用抗腫瘍剤を調製した。本注射用製剤は、用時注
射用蒸留水１滅に溶解する。

発明の効果 本発明のＩＬ−２と百日咳毒素とを組み合わせてなる抗
腫瘍剤は、それぞれの単独使用では得ることができない
強い抗腫瘍作用を奏する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明で使用するＩＬ−２のアミノ酸配列の
一例を示す。 Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｔｈｒ　　Ｓｅｒ　　５ｅｒＬｅ
ｕ　　Ｇｌｕ　　Ｈｉｓ　　Ｌｅｕ　　ＬｅｕＧｌｙ　
工１ｅ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　ＴｙｒＬｅｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈ
ｅ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　’Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｌｅ
ｕ　Ｇｉｎ　ＩＬｅｕ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　
　Ｌｅｕ　　ｊＨｉｓ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｒ
ｇ　ｊＩｌｅ　Ｖａｌ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ
　　］Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　＋Ｌ
ｅｕ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　工ｌｅ　ｊＴｈｒ　　
Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ １図 Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌ
ｅｕ　ＧｉｎＬｅｕ　　Ａｓｐ　　Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　
Ｍｅ七　Ｉｌｅ　　Ｌｅｕ　　ＡｓｎＬｙｓ　　Ａｓｎ
　　Ｐｒｏ　　Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ａｒｇ
　　Ｍｅ七ｒｙｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　
Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ：ｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌ
ｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒ。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. インターロイキン−２と百日咳毒素とを組み合わせてな
   る抗腫瘍剤。