JP3158090B2 - 新規乳酸菌株 - Google Patents
新規乳酸菌株Info
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Description
有するラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ク
レモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) 菌株
に関する。
酸菌が注目されてきている。そして、このような乳酸菌
は、プロビオティック乳酸菌と呼ばれ、特に、ラクトバ
チルス(Lactobacillus) 属菌やビフィドバクテリウム(B
ifidobacterium) 属菌等が、プロビオティック乳酸菌と
して有望視されている。なお、これらの乳酸菌について
は、整腸、消化吸収改善、血清コレステロール低下、血
圧降下、抗腫瘍効果等の保健効果が報告されている。
って様々な生育阻害因子が存在している。したがって、
プロビオティック乳酸菌に必要な性質の一つとして、こ
れらの生育阻害因子に対する耐性を有していることが挙
げられる。そして、特に、腸管内に存在する胆汁酸につ
いては、強力な界面活性作用を有すると共に、細胞膜に
直接作用して殺菌作用を示すので、プロビオティック乳
酸菌にとって、この胆汁酸に対する耐性を有することは
有利な性質であるといえる。
ール酸やケノデオキシコール酸が、グリシンやタウリン
とアミド結合した抱合型胆汁酸として存在している。こ
の抱合型胆汁酸は、肝臓で合成された後、胆汁成分とし
て腸管に分泌され、大半が脂肪の吸収に寄与することが
知られている。そして、脂肪の吸収に寄与しなかった抱
合型胆汁酸は、腸管内に存在する腸内細菌の作用により
脱抱合されて、二次胆汁酸であるデオキシコール酸やリ
トコール酸に変換される。したがって、プロビオティッ
ク乳酸菌にとっては、抱合型胆汁酸のみならず、一次胆
汁酸であるコール酸やケノデオキシコール酸、あるい
は、二次胆汁酸であるデオキシコール酸やリトコール酸
に対する耐性を有することも重要であると考えられる。
造する際に使用されているラクトコッカス・ラクチス・
サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis sub
sp.cremoris) が、抱合型胆汁酸に対する耐性を有する
ことが知られている(Bergey's manual of Systematic B
acteriology)。この抱合型胆汁酸に対する耐性は、強酸
性の状態で、抱合型胆汁酸が細胞膜を通過しないことに
よるものと考えられている。しかし、一次胆汁酸である
コール酸やケノデオキシコール酸、あるいは、二次胆汁
酸であるデオキシコール酸やリトコール酸に対する耐性
を有するラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・
クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) に
ついては知られていない。
オティック乳酸菌として利用可能な乳酸菌株を得るべく
鋭意研究を進めていたところ、通常の性質を有している
ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリ
ス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) の菌株か
ら、コール酸耐性能を有するラクトコッカス・ラクチス
・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis s
ubsp. cremoris) の変異株を得ることに成功し、本発明
を完成するに至った。なお、このラクトコッカス・ラク
チス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lact
is subsp. cremoris) 菌株のコール酸耐性能は、ATP
駆動型の能動排出系によるものであり、乳酸菌において
初めて見出された性質である。
乳酸菌としての利用が期待されるコール酸耐性能を有す
るラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモ
リス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) 菌株を提
供することを課題とする。
能を有するラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ
・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)
菌株である。なお、本発明でいうコール酸耐性能とは、
10mM濃度以上のコール酸ナトリウムを添加した培地にお
いても生育する能力である。
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) 菌株は、次のように
して得ることができる。すなわち、代表的な実験室株と
して知られているラクトコッカス・ラクチス・サブスピ
ーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. crem
oris) MG1363 (J. Bacteriol., vol.154, pp.1-9, 198
3) を親株とし、この親株を2mM濃度のコール酸ナトリ
ウムを添加した培地に接種して、生育する菌株を分離す
る。そして、培地に添加するコール酸ナトリウムの濃度
を段階的に増加させながら、最終14mM濃度になるまで同
様の操作を繰り返すことにより、コール酸耐性能を有す
るラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモ
リス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) 菌株を得
ることができる。このようにして得ることができるラク
トコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(L
actococcus lactis subsp. cremoris) 菌株は、親株が
3mM濃度のコール酸ナトリウムを培地に添加することで
生育が阻害されるのに対して、20mM濃度のコール酸ナト
リウムを培地に添加しても生育するという性質を有す
る。
ピーシズ・クレモリス(Lactococcuslactis subsp. crem
oris) のコール酸耐性能に係る機構を調べる目的で、菌
体内にコール酸を多量に取り込ませた後、グルコースを
添加して、エネルギー依存性の排出活性を調べたとこ
ろ、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレ
モリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) にコー
ル酸を能動的に排出する系が存在することが判った。そ
して、コール酸耐性能を有する菌株は、エネルギー依存
性の排出活性が著しく高いことも判った。さらに、コー
ル酸耐性能を有する菌株は、親株と比べ、菌体の膜電位
や細胞膜を隔てたpH勾配に変化がなく、また、コール酸
を排出する活性がATP阻害剤により消失することか
ら、本排出系がATP駆動型の能動排出系であることを
確認した。
ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリ
ス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) 菌株は、通
常の性質を有しているラクトコッカス・ラクチス・サブ
スピーシズ・クレモリス(Lactococcuslactis subsp. cr
emoris) を親株として、段階的にコール酸ナトリウムの
濃度を増加させた培地に接種を繰り返し、生育する株を
分離することにより得ることができる。
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) 菌株は、高濃度のコ
ール酸存在下でも生育が可能であり、プロビオティック
乳酸菌として、そのまま利用したり、チーズ等の発酵乳
製品を製造する際にスターター乳酸菌として利用したり
することができる。
さらに詳しく説明する。
のコール酸ナトリウムを添加した培地を調製した。
チス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lact
is subsp. cremoris) MG1363を接種し、30℃で1晩培養
して、生育した菌株を取得した。そして、培地に添加す
るコール酸ナトリウムの濃度を段階的に増加させなが
ら、最終14mM濃度になるまで同様の操作を繰り返し、コ
ール酸耐性能を有するラクトコッカス・ラクチス・サブ
スピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp.
cremoris) 菌株を得た。
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) C41-2 として、工業
技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている (受託
番号;FERM P-16643) 。
コッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lac
tococcus lactis subsp. cremoris) C41-2 は、表2に
示した通り、親株として用いたラクトコッカス・ラクチ
ス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis
subsp. cremoris) MG1363と同様の性質を有しているの
で、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレ
モリス(Lactococcuslactis subsp. cremoris) であると
同定できる。
るラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモ
リス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) C41-2 に
ついて、表1に示した組成の17GM17培地に添加するコー
ル酸ナトリウムの濃度を2〜20mMまで段階的に変えて調
製した培地に接種し、30℃で6時間培養して、それぞれ
の生育状態を調べた。また、親株として用いたラクトコ
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) MG1363についても、
同様にして、それぞれの生育状態を調べた。その結果を
図1に示す。なお、生育状態は、コール酸ナトリウム無
添加の培地で培養した場合の 660nmにおける培養液のO
D値を 100とし、コール酸ナトリウムを添加したそれぞ
れの培地で培養した場合の 660nmにおける培養液のOD
値をパーセンテージで表すことにより判断した。
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) MG1363においては、
2〜3mM濃度のコール酸ナトリウム存在下で生育しなく
なったのに対し、コール酸耐性能を有するラクトコッカ
ス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococc
us lactis subsp. cremoris) C41-2 においては、コー
ル酸ナトリウムの濃度が高くなるに従って生育は悪くな
ったものの、20mM濃度のコール酸ナトリウム存在下でも
生育することが判った。
有するラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ク
レモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris) C41-
2 、及び親株として用いたラクトコッカス・ラクチス・
サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis sub
sp. cremoris) MG1363の生育が50%阻害されるコール酸
ナトリウム濃度(IC50)を求めた。その結果を表3に示
す。
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lacto
coccus lactis subsp. cremoris) MG1363の生育が50%
阻害されるコール酸ナトリウム濃度(IC50)は 0.8mMであ
ったのに対し、コール酸耐性能を有するラクトコッカス
・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus
lactis subsp. cremoris) C41-2 の生育が50%阻害さ
れるコール酸ナトリウム濃度(IC50)は 2.5mMであった。
ブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus lactis subs
p. cremoris) 菌株は、高いコール酸耐性能を有するの
で、プロビオティック乳酸菌として、そのまま利用した
り、チーズ等の発酵乳製品を製造する際にスターター乳
酸菌として利用したりすることができる。
た培地での各菌株の生育状態を示す。
Claims (2)
- 【請求項1】 コール酸耐性能を有するラクトコッカス
・ラクチス・サブスピーシズ・クレモリス(Lactococcus
lactis subsp. cremoris) 菌株。 - 【請求項2】 ラクトコッカス・ラクチス・サブスピー
シズ・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremor
is) C41-2 (FERM P-16643)である請求項1記載の菌株。
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Applications Claiming Priority (1)
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