JP3154833B2 - ギョウジャニンニクの組織培養による大量増殖法 - Google Patents
ギョウジャニンニクの組織培養による大量増殖法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、組織培養法を利用した
ギョウジャニンニクの大量増殖法の確立に関するもの
で、これにより苗の周年供給およびギョウジャニンニク
の安定的大量生産を可能とする。
ギョウジャニンニクの大量増殖法の確立に関するもの
で、これにより苗の周年供給およびギョウジャニンニク
の安定的大量生産を可能とする。
【０００２】
【従来の技術】ギョウジャニンニクは北海道から本州北
部にかけて自生するユリ科ネギ属の多年草で、これらの
地方では古くから郷土色豊かな山菜として食用に供され
てきた。更に、ギョウジャニンニクはアリチアミン効果
による疲労回復やコレステロール抑制作用、抗血栓作用
などの薬理効果を持つことから健康食品、機能性食品用
の素材として種々の形で加工利用されている。近年の自
然食品ブームとも相まってギョウジャニンニクに対する
需要は飛躍的に高まっているが、供給源はもっぱら山野
に自生する個体の採集に依存しており、また自然環境下
では生育が極めて遅く栽培法も確立されていないため資
源の枯渇が懸念されている。
部にかけて自生するユリ科ネギ属の多年草で、これらの
地方では古くから郷土色豊かな山菜として食用に供され
てきた。更に、ギョウジャニンニクはアリチアミン効果
による疲労回復やコレステロール抑制作用、抗血栓作用
などの薬理効果を持つことから健康食品、機能性食品用
の素材として種々の形で加工利用されている。近年の自
然食品ブームとも相まってギョウジャニンニクに対する
需要は飛躍的に高まっているが、供給源はもっぱら山野
に自生する個体の採集に依存しており、また自然環境下
では生育が極めて遅く栽培法も確立されていないため資
源の枯渇が懸念されている。
【０００３】ギョウジャニンニクを組織培養により増殖
しようという試みは、根から不時出芽する不定芽を利用
する方法（園芸学雑誌６０巻別冊２、Ｐ２３２−２３
３、１９９１）や生長点の培養による増殖法に関する報
告がある（北海道立工業試験場報告、１−２４、１９８
８及び特開平３−２４７２１７）。しかし、いずれも増
殖率は種子繁殖と比較して飛躍的な増大とは言い難い。
本発明による方法はこれらの報告と比較して操作がより
簡便である上、はるかに高い増殖率が得られることを特
徴とする。
しようという試みは、根から不時出芽する不定芽を利用
する方法（園芸学雑誌６０巻別冊２、Ｐ２３２−２３
３、１９９１）や生長点の培養による増殖法に関する報
告がある（北海道立工業試験場報告、１−２４、１９８
８及び特開平３−２４７２１７）。しかし、いずれも増
殖率は種子繁殖と比較して飛躍的な増大とは言い難い。
本発明による方法はこれらの報告と比較して操作がより
簡便である上、はるかに高い増殖率が得られることを特
徴とする。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は植物組
織培養の手法を用いてギョウジャニンニクの幼苗を大量
に増殖させるための最適条件を確立することであり、そ
れによって大きな需要に対応することができ、ひいては
天然資源の保護にも貢献できる。
織培養の手法を用いてギョウジャニンニクの幼苗を大量
に増殖させるための最適条件を確立することであり、そ
れによって大きな需要に対応することができ、ひいては
天然資源の保護にも貢献できる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明はユリ科ネギ属植
物であるギョウジャニンニクの鱗茎基部を植物ホルモン
を含む培養培地上で培養して不定芽を誘導し、それをさ
らに増殖、肥大させた後発根させる過程より成る幼苗の
連続的大量増殖法である。
物であるギョウジャニンニクの鱗茎基部を植物ホルモン
を含む培養培地上で培養して不定芽を誘導し、それをさ
らに増殖、肥大させた後発根させる過程より成る幼苗の
連続的大量増殖法である。
【０００６】１．培養に供する植物体の部位 組織培養法を植物の増殖のための手段として適用する場
合、若い葉、茎、鱗茎部、生長点や根部など種々の組織
を使ってカルスや不定芽、不定胚を誘導させる方法が考
えられる。一般に植物の組織培養により増殖を行なう場
合、植物の種により最適な部位は異なることが知られて
おり、一義的に定まるものではなく、部位の選択が重要
である。予備実験の結果、本発明のギョウジャニンニク
の場合は茎盤部を含む根茎基部を培養し不定芽を誘導さ
せる方法が最も効率が良いことが明らかになった。しか
も、本発明において使用される根茎部は生長点を含むご
く限られた小切片である必要はなく、外側の包葉を剥い
で残る直径１cm前後の部分すべてを分割して培養に供試
できるので、従来の方法に比べ格段に大量の不定芽を一
度に誘導することが可能である。
合、若い葉、茎、鱗茎部、生長点や根部など種々の組織
を使ってカルスや不定芽、不定胚を誘導させる方法が考
えられる。一般に植物の組織培養により増殖を行なう場
合、植物の種により最適な部位は異なることが知られて
おり、一義的に定まるものではなく、部位の選択が重要
である。予備実験の結果、本発明のギョウジャニンニク
の場合は茎盤部を含む根茎基部を培養し不定芽を誘導さ
せる方法が最も効率が良いことが明らかになった。しか
も、本発明において使用される根茎部は生長点を含むご
く限られた小切片である必要はなく、外側の包葉を剥い
で残る直径１cm前後の部分すべてを分割して培養に供試
できるので、従来の方法に比べ格段に大量の不定芽を一
度に誘導することが可能である。
【０００７】２．不定芽の誘導 不定芽を誘導させるための培地はＭＳ培地又はＭＳ培地
の無機塩類にＢ５培地の有機成分を加えたＭＳ改変培地
が使用できる。本願発明におけるＭＳ改変培地は表１に
示す組成のものである。
の無機塩類にＢ５培地の有機成分を加えたＭＳ改変培地
が使用できる。本願発明におけるＭＳ改変培地は表１に
示す組成のものである。
【０００８】
【表１】
【０００９】上記培地に添加する植物ホルモンは、オー
キシン類としては、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、サイト
カイニン類としてはベンジルアデニン（ＢＡ）を組み合
わせて添加することにより効果的に不定芽を誘導するこ
とができる。従来、オーキシンとしてはＮＡＡの他に
２．４ジクロロフェノキン酢酸（２，４−Ｄ），サイト
カイニンとしてはＢＡの他にカイネチンを用いることが
知られているが、予備実験の結果、ＮＡＡとＢＡの組み
合わせが最も好ましいことが明らかになった。さらに、
ＮＡＡ濃度は０．１〜０．３ｍｇ／ｌ、ＢＡ濃度は１．
０〜５．０ｍｇ／ｌとするのが好ましい。また、カザミ
ノ酸を１００〜５００ｍｇ／ｌ添加すると更に効率が良
くなる。
キシン類としては、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、サイト
カイニン類としてはベンジルアデニン（ＢＡ）を組み合
わせて添加することにより効果的に不定芽を誘導するこ
とができる。従来、オーキシンとしてはＮＡＡの他に
２．４ジクロロフェノキン酢酸（２，４−Ｄ），サイト
カイニンとしてはＢＡの他にカイネチンを用いることが
知られているが、予備実験の結果、ＮＡＡとＢＡの組み
合わせが最も好ましいことが明らかになった。さらに、
ＮＡＡ濃度は０．１〜０．３ｍｇ／ｌ、ＢＡ濃度は１．
０〜５．０ｍｇ／ｌとするのが好ましい。また、カザミ
ノ酸を１００〜５００ｍｇ／ｌ添加すると更に効率が良
くなる。
【００１０】３．不定芽の増殖 最初に誘導された不定芽の集合体（多芽体）は分割して
増殖培地に移植を繰り返すことにより急速にかつ連続的
に不定芽を増殖させることができる。培地は上記と同様
で良く、植物ホルモンはオーキシン濃度を０．１〜０．
２ｍｇ／ｌに、サイトカイニン濃度は１．０〜３．０ｍ
ｇ／ｌの範囲で使用するのが好ましい。
増殖培地に移植を繰り返すことにより急速にかつ連続的
に不定芽を増殖させることができる。培地は上記と同様
で良く、植物ホルモンはオーキシン濃度を０．１〜０．
２ｍｇ／ｌに、サイトカイニン濃度は１．０〜３．０ｍ
ｇ／ｌの範囲で使用するのが好ましい。
【００１１】４．不定芽の成長と発根の促進 増殖した不定芽はサイトカイニンの濃度で０．１〜０．
５ｍｇ／ｌに下げた培地に移植することにより、増殖率
は低下する代わりに個々の個体は肥大成長が顕著にな
り、一部では発根が観察される場合もある。ＭＳ培地成
分の内、主要塩類を２分の１に減らし、植物ホルモンと
してインドール酪酸（ＩＢＡ）を０．５〜２．０ｍｇ／
ｌ添加した培地上で培養すると活発に発根し始め、完全
な幼植物体を得ることができる。
５ｍｇ／ｌに下げた培地に移植することにより、増殖率
は低下する代わりに個々の個体は肥大成長が顕著にな
り、一部では発根が観察される場合もある。ＭＳ培地成
分の内、主要塩類を２分の１に減らし、植物ホルモンと
してインドール酪酸（ＩＢＡ）を０．５〜２．０ｍｇ／
ｌ添加した培地上で培養すると活発に発根し始め、完全
な幼植物体を得ることができる。
【００１２】５．馴化と鉢上げ 発根促進培地上で旺盛な発根が認められかつ茎葉部が３
cm以上に成長した幼植物体は根に付着した寒天を完全に
洗い落としてからバーミキュライトを入れた容器に植え
込み、透明フィルムなどで覆って水分の蒸発を防ぎなが
ら２〜４週間、１８〜２５℃、光量５００〜２，０００
Lux 、１６時間日長下で育てると植物体全体が外部環境
に耐えられる丈夫さになる。これら幼植物を培養土の入
った鉢や育苗バットに移植して温室内で１カ月以上育て
ることにより戸外の土壌へ移植可能な健全なギョウジャ
ニンニク苗を大量に生産することが可能である。
cm以上に成長した幼植物体は根に付着した寒天を完全に
洗い落としてからバーミキュライトを入れた容器に植え
込み、透明フィルムなどで覆って水分の蒸発を防ぎなが
ら２〜４週間、１８〜２５℃、光量５００〜２，０００
Lux 、１６時間日長下で育てると植物体全体が外部環境
に耐えられる丈夫さになる。これら幼植物を培養土の入
った鉢や育苗バットに移植して温室内で１カ月以上育て
ることにより戸外の土壌へ移植可能な健全なギョウジャ
ニンニク苗を大量に生産することが可能である。
【００１３】
【実施例】ギョウジャニンニク植物体を流水中でよく洗
浄し、１，０００倍希釈した市販漂白剤溶液の中で伸長
葉と根を取り除く。クリーンベンチ内で緑色の茎葉部分
と根の着生部分をメスで切除し白色の鱗茎部を取り出
す。この鱗茎部を最初７０％エタノール溶液に２０〜３
０秒間、次いで２０％次亜塩素酸ナトリウム溶液（有効
塩素濃度１％）に５〜２０分間浸漬した後、滅菌水で３
回洗った。次亜塩素酸ナトリウム溶液への浸漬時間は５
分間でも十分と考えられるが、ごくまれに雑菌の混入が
認められた場合があるのでなるべくそれ以上の時間処理
したほうが良いと考えられる。２０分間以上の処理はか
えって鱗茎部が薬害を受けるので避けたほうが良い。た
だし、次亜塩素酸ナトリウム溶液の濃度を低くして浸漬
時間を長くすることは可能である。
浄し、１，０００倍希釈した市販漂白剤溶液の中で伸長
葉と根を取り除く。クリーンベンチ内で緑色の茎葉部分
と根の着生部分をメスで切除し白色の鱗茎部を取り出
す。この鱗茎部を最初７０％エタノール溶液に２０〜３
０秒間、次いで２０％次亜塩素酸ナトリウム溶液（有効
塩素濃度１％）に５〜２０分間浸漬した後、滅菌水で３
回洗った。次亜塩素酸ナトリウム溶液への浸漬時間は５
分間でも十分と考えられるが、ごくまれに雑菌の混入が
認められた場合があるのでなるべくそれ以上の時間処理
したほうが良いと考えられる。２０分間以上の処理はか
えって鱗茎部が薬害を受けるので避けたほうが良い。た
だし、次亜塩素酸ナトリウム溶液の濃度を低くして浸漬
時間を長くすることは可能である。
【００１４】消毒した根茎基部は茎盤を含む部分を０．
５〜１cmの厚さに横断し、さらにそれを８〜１０個に縦
断分割して不定芽を誘導するための培地に移植した。不
定芽誘導にはＭＳ培地の無機塩類にＢ５培地の有機成分
を加えたものを基本培地とし、カザミノ酸５００ｍｇ／
ｌ、オーキシンとしてＮＡＡを０．１〜０．３ｍｇ／
ｌ、サイトカイニンとしてＢＡを０〜５．０ｍｇ／ｌ、
蔗糖を３０ｇ／ｌを添加した。ｐＨを５．８に調整し、
０．８％の寒天を加えてオートクレーブ滅菌した後、ク
リーンベンチ内であらかじめ滅菌しておいた培養容器に
分注した。ＢＡ濃度を1.0 ｍｇ／ｌに固定したときのＮ
ＡＡ濃度の効果については表２に示したように、0.1 〜
0.3 ｍｇ／ｌ区が最も良い成績が得られた。
５〜１cmの厚さに横断し、さらにそれを８〜１０個に縦
断分割して不定芽を誘導するための培地に移植した。不
定芽誘導にはＭＳ培地の無機塩類にＢ５培地の有機成分
を加えたものを基本培地とし、カザミノ酸５００ｍｇ／
ｌ、オーキシンとしてＮＡＡを０．１〜０．３ｍｇ／
ｌ、サイトカイニンとしてＢＡを０〜５．０ｍｇ／ｌ、
蔗糖を３０ｇ／ｌを添加した。ｐＨを５．８に調整し、
０．８％の寒天を加えてオートクレーブ滅菌した後、ク
リーンベンチ内であらかじめ滅菌しておいた培養容器に
分注した。ＢＡ濃度を1.0 ｍｇ／ｌに固定したときのＮ
ＡＡ濃度の効果については表２に示したように、0.1 〜
0.3 ｍｇ／ｌ区が最も良い成績が得られた。
【００１５】
【表２】
【００１６】培養開始後６週間目に不定芽の形成を観察
した結果を表３に示した。（ＮＡＡは０．１ｍｇ／ｌ添
加の場合）
した結果を表３に示した。（ＮＡＡは０．１ｍｇ／ｌ添
加の場合）
【００１７】
【表３】
【００１８】表３の結果から、ＢＡの濃度が１．０ｍｇ
／ｌ以上で不定芽形成率が明らかに高くなり５．０ｍｇ
／ｌまでその効果が認められた。オーキシンはＮＡＡ以
外、例えば２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−
Ｄ）を使用した場合不定芽の形成率は２〜４割ほど低下
したことから、ＮＡＡとＢＡの組み合わせが最も適して
いると考えられた。カザミノ酸の添加は不定芽の誘導と
肥大成長に補足的な役割を果しているように思われた。
／ｌ以上で不定芽形成率が明らかに高くなり５．０ｍｇ
／ｌまでその効果が認められた。オーキシンはＮＡＡ以
外、例えば２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−
Ｄ）を使用した場合不定芽の形成率は２〜４割ほど低下
したことから、ＮＡＡとＢＡの組み合わせが最も適して
いると考えられた。カザミノ酸の添加は不定芽の誘導と
肥大成長に補足的な役割を果しているように思われた。
【００１９】成長した不定芽の集合体を分割し、ＭＳ培
地またはＭＳ改変培地にＮＡＡ０．１ｍｇ／ｌ，ＢＡ
２．０ｍｇ／ｌを添加した培地上で継代培養すると６週
間毎に２倍以上の増殖率が得られた。継代培養における
ＢＡ濃度の影響についての結果を表４に示す。表中の数
値はそれぞれ１０回の反復実験の平均値である。
地またはＭＳ改変培地にＮＡＡ０．１ｍｇ／ｌ，ＢＡ
２．０ｍｇ／ｌを添加した培地上で継代培養すると６週
間毎に２倍以上の増殖率が得られた。継代培養における
ＢＡ濃度の影響についての結果を表４に示す。表中の数
値はそれぞれ１０回の反復実験の平均値である。
【００２０】
【表４】
【００２１】表４から明らかなように、ＢＡの濃度は不
定芽の形成と肥大成長に大きな影響を持ち、低濃度では
新しい不定芽の誘導を抑え、既に形成されている不定芽
を成長させる。高濃度では逆に不定芽の成長はそれほど
目立たないが、新しい不定芽の活発な誘導が認められ
た。従って、不定芽を増殖する目的のためには１．０〜
３．０ｍｇ／ｌのＢＡ濃度を、発根培地に移植する前に
個体の発育を促すためには０．１〜０．５ｍｇ／ｌの範
囲の濃度を用いると良い。
定芽の形成と肥大成長に大きな影響を持ち、低濃度では
新しい不定芽の誘導を抑え、既に形成されている不定芽
を成長させる。高濃度では逆に不定芽の成長はそれほど
目立たないが、新しい不定芽の活発な誘導が認められ
た。従って、不定芽を増殖する目的のためには１．０〜
３．０ｍｇ／ｌのＢＡ濃度を、発根培地に移植する前に
個体の発育を促すためには０．１〜０．５ｍｇ／ｌの範
囲の濃度を用いると良い。
【００２２】不定芽が３cmほどに成長したら１〜２本ず
つ切り離して発根促進用培地へ移植する。ＢＡの濃度を
低くするか無添加にしてもある程度の発根は認められた
が、本数、長さおよび太さのいずれも馳化できるまで育
てるのに長期間の培養が必要であった。そこで、培地成
分と、ＢＡ以外の植物ホルモンの効果について調べた。
その結果、培地成分としてはＭＳ培地成分の主要塩類を
２分の１に希釈した培地が、また、植物ホルモンの種類
ではＩＢＡが特異的に発根促進に効果を持つことが明ら
かになった。表５にＩＢＡの濃度と発根促進効果の関係
を示した。各区とも２０反復の平均値で表示した。
つ切り離して発根促進用培地へ移植する。ＢＡの濃度を
低くするか無添加にしてもある程度の発根は認められた
が、本数、長さおよび太さのいずれも馳化できるまで育
てるのに長期間の培養が必要であった。そこで、培地成
分と、ＢＡ以外の植物ホルモンの効果について調べた。
その結果、培地成分としてはＭＳ培地成分の主要塩類を
２分の１に希釈した培地が、また、植物ホルモンの種類
ではＩＢＡが特異的に発根促進に効果を持つことが明ら
かになった。表５にＩＢＡの濃度と発根促進効果の関係
を示した。各区とも２０反復の平均値で表示した。
【００２３】
【表５】
【００２４】表５の結果から０．５〜２．０ｍｇ／ｌの
範囲においてＩＢＡの添加は活発な発根を促進させる作
用を有することが推察された。また、ＭＳ培地にＩＢＡ
を添加しても「普通」〜「悪い」の評価しか得られなか
ったことから、ＭＳ培地成分のうち無機塩類を２分の１
に減らすことも発根を促進するうえで重要な要因である
ことが明らかとなった。
範囲においてＩＢＡの添加は活発な発根を促進させる作
用を有することが推察された。また、ＭＳ培地にＩＢＡ
を添加しても「普通」〜「悪い」の評価しか得られなか
ったことから、ＭＳ培地成分のうち無機塩類を２分の１
に減らすことも発根を促進するうえで重要な要因である
ことが明らかとなった。
【００２５】
【発明の効果】本発明の方法によれば、１本の親植物か
ら１年間でフラスコ苗であれば１０００本以上、馴化、
鉢上げした成苗でも２５０本以上の大量増殖が可能であ
る。このようにして誘導、増殖した多数の不定芽を発根
させて馴化、鉢上げすれば、周年的にかつ連続的に大量
のギョウジャニンニク苗を生産供給することができる。
ら１年間でフラスコ苗であれば１０００本以上、馴化、
鉢上げした成苗でも２５０本以上の大量増殖が可能であ
る。このようにして誘導、増殖した多数の不定芽を発根
させて馴化、鉢上げすれば、周年的にかつ連続的に大量
のギョウジャニンニク苗を生産供給することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A01H 4/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (1)
- 【請求項１】ギョウジャニンニクの根茎基部を、茎盤を
含む部分を横断した後、これを縦断分割し培養すること
を特徴とするギョウジャニンニクの培養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27550292A JP3154833B2 (ja) | 1992-09-19 | 1992-09-19 | ギョウジャニンニクの組織培養による大量増殖法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27550292A JP3154833B2 (ja) | 1992-09-19 | 1992-09-19 | ギョウジャニンニクの組織培養による大量増殖法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0698650A JPH0698650A (ja) | 1994-04-12 |
| JP3154833B2 true JP3154833B2 (ja) | 2001-04-09 |
Family
ID=17556387
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27550292A Expired - Fee Related JP3154833B2 (ja) | 1992-09-19 | 1992-09-19 | ギョウジャニンニクの組織培養による大量増殖法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3154833B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105265316B (zh) * | 2015-11-02 | 2017-11-28 | 吉林省蔬菜花卉科学研究院 | 一种葱属植物鳞茎盘快速繁殖方法 |
| CN105265317B (zh) * | 2015-11-02 | 2017-10-31 | 吉林省蔬菜花卉科学研究院 | 一种茖葱快速繁殖方法 |
| CN111492981A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-08-07 | 包头市农牧业科学研究院 | 一种红葱的组培快繁方法 |
-
1992
- 1992-09-19 JP JP27550292A patent/JP3154833B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0698650A (ja) | 1994-04-12 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |