JP3149216B2

JP3149216B2 - 転写活性増強因子ＰｉｔＩをコードするＤＮＡ

Info

Publication number: JP3149216B2
Application number: JP24414191A
Authority: JP
Inventors: 潔宮井; 圭太巽; 継宣納富; 雄一遠藤
Original assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Current assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Priority date: 1991-08-30
Filing date: 1991-08-30
Publication date: 2001-03-26
Anticipated expiration: 2016-03-26
Also published as: JPH0690762A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトの成長ホルモン
（以下ＧＨと略す）遺伝子、ヒトのプロラクチン（以下
ＰＲＬと略す）遺伝子に対する転写活性増強因子Ｐｉｔ
Ｉ（ＧＨＦ−Ｉとも呼ばれる、以下ＰｉｔＩと略す）ペ
プチドをコードするＤＮＡ、その用途、あるいはこのＤ
ＮＡの発現産物に関するものである。ＧＨやＰＲＬの遺
伝子の転写を増強する物質であるＰｉｔＩをコードする
ＤＮＡは、ＰｉｔＩの研究を進める上で不可欠である。
またＧＨやＰＲＬの分泌異常による疾患の治療や診断に
おいてもＰｉｔＩは重要な物質である。

【０００２】

【従来技術の問題点】ＰｉｔＩは、ＧＨ遺伝子およびＰ
ＲＬ遺伝子のプロモーター領域に結合し、それぞれの遺
伝子の転写活性を上昇させる脳下垂体組織に特異的な核
蛋白として発見された。現在ウシとラットのＰｉｔＩに
ついては、ｃＤＮＡのクローニングが報告され、配列中
にＰＯＵ領域やＨｏｍｅｏＢｏｘを持つこと等が解明
されている。（Cell,55,P505-,1988、Cell,55,P519-,19
88）

【０００３】ＰｉｔＩは、その転写増強作用によりＧＨ
やＰＲＬの分泌異常の治療に利用できる可能性がある。
しかし先に述べたとおり現在構造が解明されているＰｉ
ｔＩはウシやラットに由来するものであり、これら他種
動物蛋白はヒトに対して抗原性を持つため治療用として
は好ましくない。ヒト下垂体から抽出すれば抗原性の問
題は回避できるが、原料の調達は非常に困難である。抗
原性の問題がなく、しかも安価なＰｉｔＩを大量に得る
ためには、ＰｉｔＩをコードするＤＮＡを利用する遺伝
子操作の手法が有効である。

【０００４】更に、ヒトのＰｉｔＩの機能や構造につい
て研究を進めて行くためにも、そのＤＮＡが必要となる
ことは言うまでもない。しかしヒトのＰｉｔＩについて
は存在そのものは指摘されていたものの構造決定にはい
たっておらず、その構造決定とＤＮＡのクローニングが
待たれていた。

【０００５】

【発明の課題】本発明は、ヒトのＰｉｔＩのアミノ酸配
列をコードするＤＮＡ、その発現産物、並びに用途の提
供を目的とするものである。

【０００６】

【発明の構成】本発明は、ヒトの成長ホルモン遺伝子
と、ヒトのプロラクチン遺伝子に対する転写活性増強因
子ＰｉｔＩのアミノ酸配列（配列１）持つペプチドをコ
ードするＤＮＡである。なお配列１に示したアミノ酸の
略号は、それぞれ次のようにアミノ酸と対応している。 Ala:アラニン Leu:ロイシン Arg:アルギニン Lys:リジン Asn:アスパラギン Met:メチオニン Asp:アスパラギン酸 Phe:フェニルアラニン Cys:システイン Pro:プロリン Glu:グルタミン酸 Ser:セリン Gln:グルタミン Thr:トレオニン Gly:グリシン Trp:トリプトファン His:ヒスチジン Tyr:チロシン Ile:イソロイシン Val:バリン

【０００７】このようなＤＮＡとしては例えば配列２に
示したような塩基配列を持つものなどが挙げられる。こ
の塩基配列（配列２）は実施例にも示すように、ヒト脳
下垂体組織からクローニングされた配列３のＤＮＡか
ら、ペプチドをコードしている部分のみを選択したもの
である。

【０００８】これらＤＮＡは、そのシーケンス内にある
制限酵素サイトや必要に応じて導入した制限酵素サイト
を利用して、適当な調節遺伝子（プロモーター配列やリ
ーダー配列）を持った発現用ベクターに組み込むことが
できる。

【０００９】このようにして得られたベクターを用い、
大腸菌等のホストに導入して形質転換させれば、組換え
ＰｉｔＩを大量に入手することができる。あるいはま
た、大量にコピーされたＰｉｔＩをコードするＤＮＡを
回収して標識すれば、遺伝子分析用のプローブとするこ
ともできる。プローブとして利用するときには必ずしも
配列２や３の全ての部分を含んでいる必要はなく、より
特異的な配列を適宜選択し、断片の状態で利用すること
が可能である。もちろんこれらＤＮＡプローブは、ＤＮ
Ａ合成装置等によって化学的に合成してもよい。本発明
によるＰｉｔＩのＤＮＡプローブは、ヒトＰｉｔＩ遺伝
子の異常等の診断に用いることができる。

【００１０】更に、本発明は前記ヒトＰｉｔＩのＤＮＡ
を発現させることによって得られる産物の用途に及ぶも
のである。本発明によるヒトＰｉｔＩのＤＮＡ発現産物
そのもの、あるいはその抗体は、ヒトＰｉｔＩの免疫分
析に有用である。ＰｉｔＩの免疫分析は、ＧＨやＰＲＬ
の分泌異常の診断において意義を持つことが予想される
のみならず、ＰｉｔＩの研究を進める上でも重要な分析
系の一つである。加えて、本発明による発現産物を免疫
原として得られる抗体、ことにモノクローナル抗体は、
ＰｉｔＩの機能や構造の解析に不可欠である。

【００１１】また本発明によるＰｉｔＩのＤＮＡの発現
産物は、ヒトＰｉｔＩと同じ構造を持つのでヒトに対し
ては抗原性が無く、イン・ビボでの使用に際して安全性
が高い。

【００１２】

【発明の作用】本発明における配列１に示したアミノ酸
配列は、ヒトＰｉｔＩの一次構造である。この一次構造
に基づいて決定されるＤＮＡの塩基配列は、遺伝子操作
による組換えヒトＰｉｔＩの生産を可能とする。以下、
実施例に基づいて本発明を詳しく説明する。

【００１３】

【実施例】

１．ｃＤＮＡの合成ヒト脳下垂体組織からヒトＰｉｔＩのｃＤＮＡを合成し
た全ＲＮＡ抽出はH.Okayama らの方法（RECOMBINANT DNA
METHODOLOGY,P235;1989 ）に従い、グアニジン・イソシ
アネートを用いてヒト脳下垂体組織０．５g より０．５
mgの全ＲＮＡを得た。この全ＲＮＡ１μg をテンプレー
トとし、図１に示す３種のプライマーを用い、Ｍ−ＭＬ
ＶＲＴａｓｅ（ＢＲＬ製）を４２℃で１時間反応させて
ｃＤＮＡ合成を行った。図１のプライマー中、ＸＳＨ＋
Ｔ１５はOligo dT15にXhoI、SalI、HindIII のサイトに
相当する配列を付加したものであり、また２９２ｒはラ
ットとウシのＰｉｔＩのｃＤＮＡ配列データ（Cell,55,
P505-,1988、Cell,55,P519-,1988）より類似性を類推し
て設定した配列にXbaI、BglII のサイトに相当する配列
を組み入れたものである。５’端側のクローニングは、
２９２ｒプライマーを用いて１本鎖ｃＤＮＡを合成した
後、この１本鎖の３’末端にターミナル・デオキシヌク
レオチジル・トランスフェラーゼ（TerminalDeoxynucle
otidyl Transferase 、ＴｄＴ）を用いてｄＧＴＰまた
はｄＡＴＰを付加することによって行った。

【００１４】２．ｃＤＮＡの増幅ＰｉｔＩのｃＤＮＡをＰＣＲ法によって増幅した。ラッ
トとウシのＰｉｔＩのｃＤＮＡ配列データより、その類
似性を類推して図２に示すプライマー０ｐと２５１ｐを
設定した。これらのプライマーと図１のプライマーを利
用し、変性：９７℃／１５秒、アニール：５５℃／２
分、伸長：７５℃／２分のサイクルを４０回繰り返すこ
とによってＰＣＲ法を行った。具体的には、０ｐと２９
２ｒの組合せで蛋白コード領域に相当する中央部の配列
が、ＸＳＨ・ｄＴ（またはＸＳＨ・ｄＣ）と２９２ｒの
組合せで５’端側の配列が、そして２５１ｐとＸＳＨの
組合せで３’端側の配列を増幅することができた。この
ように３つの部分に分割して増幅した各ＰＣＲ産物の長
さは、５’端が１．０Kb、中央部が０．９Kb、３’端が
０．４５Kbであった。各ＰＣＲ産物はフェノール／クロ
ロフォルム処理後エタノール沈澱で回収して精製し、ｃ
ＤＮＡ内に存在する制限酵素サイトまたはそれぞれのプ
ライマー内に設けた制限酵素のサイトで消化した。各Ｐ
ＣＲ産物と制限酵素の組合せは次のとおりである。５’側：SalI（ＸＳＨ）/PstI （ｃＤＮＡ内）中央部：XbaI（０ｐと２９２ｒに共通）３’側：XhoI（２５１ｐ）/SalI （ＸＳＨ）

【００１５】３．組み込みとクローニング２で得た各ＤＮＡ断片を、予め制限酵素サイトを調製し
たプラスミドベクター（Bluescript II SK- 、ＳＴＲＡ
ＴＡＧＥＮＥ製）と連結した。反応は、各ｃＤＮＡ断
片：プラスミドベクターのモル比を３：１でそれぞれ混
合し、市販のライゲーション・キット（寶酒造製）を用
い１６℃で３時間〜１晩反応させることによって行っ
た。各反応液でＪＭ１０９細胞を形質転換した後、アン
ピシリン加ＬＢアガーに接種し３７℃で１晩培養した。
培養後生じたコロニーを釣菌し、そのなかからラピッド
・アイソレーションにより目的とするｃＤＮＡを組み込
まれたコロニーを選別した。得られた陽性クローンを２
４０mlのＬＢに接種して３７℃で１晩振とう培養後、塩
化セシウムを用いる超遠心法でプラスミドを単離・精製
した。

【００１６】４．塩基配列の決定ポリメラーゼによるミス・リードを除くために、塩基配
列の決定には少なくとも３クローン以上について塩基配
列分析を行った。シーケンス反応は、Ｓｅｑｅｎａｓｅ
Ｖｅｒｓｉｏｎ２．０（登録商標、ＵＳＢ製）を用い
たジ・デオキシ法に従った。塩基配列分析の結果から、
配列３に示すヒトＰｉｔＩのＤＮＡ構造を決定した。配
列３中、実際にペプチドをコードしている構造遺伝子に
相当する部分（「中央部」としてクローニングした部
分）は配列２に示すとおりである。

【００１７】５．発現実験ｃＤＮＡの塩基配列を決定した後、構造遺伝子にコード
されるアミノ酸が変化しないように前記０ｐプライマ
ー、および２９２ｒプライマーを各々図３に示す配列
（０ｐ’と２９２ｒ’）に修正し、再度中央部のクロー
ニングを行った。こうして用意したヒトＰｉｔＩの構造
遺伝子を全て含むＤＮＡ断片（０．９kb、両端はBamHI
サイト）を、高レベルＴ７−プラスミド発現ベクターｐ
ＧＥＭＥＸ−Ｉ（登録商標、プロメガ社）のBamHI サイ
トに連結し、常法により大腸菌（ＪＭ１０９；ＤＥ３）
に形質転換した。目的のプラスミドを含んだ菌の選択
は、形成したコロニーからのラピッド・アイソレーショ
ンによるＤＮＡの回収、制限酵素による消化、そして電
気泳動分離により行った。すなわち、ラピッド・アイソ
レーション後EcoRI 消化を行い７．５％ポリアクリルア
ミドゲルで電気泳動した際、４．７kb、０．４５kb、
０．０８kbのバンドが認められるものを選別した。同時
にBamHI で消化したところ、４．３kbのベクターのバン
ドと０．９kbのバンドが確認されたので目的のインサー
トが正しく挿入されていることが分かった。

【００１８】正しい方向で挿入断片の組み込まれたプラ
スミドｐｈＰｉｔ・Ｅｘ１が導入された単一コロニー
を、５０mlのアンピシリン含有（５０μg/ml）ＬＢ培地
で３７℃、１夜培養した。培養液の２mlを別のアンピシ
リン加ＬＢ培地５０mlに植え継ぎ、約３時間後６００nm
における培養液の吸光度が０．３となったところで、Ｉ
ＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオ−ガラクトピラノ
シド）を０．５mM（最終濃度）となるように加え、更に
４時間培養を続けた。培養後、培養液を２００μl マイ
クロ遠心チューブに採り、１００００rpm で１時間遠心
して上清を捨てた。ペレットを１００μl のLysis 緩衝
液（５０mMトリス−塩酸、２mMＥＤＴＡ、０．１M Ｎａ
Ｃｌ、ｐＨ７．５）に懸濁し、更に最終濃度が１００μ
g/mlになるようにリゾチーム（シグマ製）を加えた。３
０℃で１５分間インキュベートした後、反応液の一部を
遠心して上清をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクマッシーブリ
リアント・ブルー染色により分析した。その結果、プラ
スミドを組み込まないＪＭ１０９の溶菌分画では認めら
れない、融合蛋白に相当する６７kdのバンドを確認し
た。

【００１９】

【発明の効果】本発明によればＰｉｔＩをコードするＤ
ＮＡが得られ、これを発現させることによってヒトＰｉ
ｔＩを容易に量産することが可能となる。このようにし
て得られるＰｉｔＩはヒトの脳下垂体から抽出したもの
と同じ構造を持つので抗原性の問題を生じないうえ、感
染等の危険もない。そのため治療などを目的としてヒト
に投与する場合にも安全である。またＰｉｔＩを安価に
量産することができるので、ＰｉｔＩそのもの、あるい
はその抗体を利用する免疫分析用試薬の供給が容易にな
る。本発明によるヒトＰｉｔＩをコードするＤＮＡは、
ＰｉｔＩ遺伝子の分析に用いることもできる。ＰｉｔＩ
をコードするＤＮＡの配列決定により、ＧＨやＰＲＬの
分泌異常をはじめとする種々の疾病の解明を進める上で
有用な情報が提供されるものと予想される。以上のよう
にヒトＰｉｔＩをコードするＤＮＡの提供は、ＰｉｔＩ
を用いた治療や、未だ解明が不十分なヒトＰｉｔＩの構
造や機能の研究を進める上で非常に有意義である。

【００２０】

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：291 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド起源：ヒト組織の種類：脳下垂体他の情報：ヒトＰｉｔＩペプチド配列 Met Ser Cys Gln Ala Phe Thr Ser Ala Asp Thr Phe Ile Pro Leu 1 5 10 15 Asn Ser Asp Ala Ser Ala Thr Leu Pro Leu Ile Met His His Ser 20 25 30 Ala Ala Glu Cys Leu Pro Val Ser Asn His Ala Thr Asn Val Met 35 40 45 Ser Thr Ala Thr Gly Leu His Tyr Ser Val Pro Ser Cys His Tyr 50 55 60 Gly Asn Gln Pro Ser Thr Tyr Gly Val Met Ala Gly Ser Leu Thr 65 70 75 Pro Cys Leu Tyr Lys Phe Pro Asp His Thr Leu Ser His Gly Phe 80 85 90 Pro Pro Ile His Gln Pro Leu Leu Ala Glu Asp Pro Thr Ala Ala 95 100 105 Asp Phe Lys Gln Glu Leu Arg Arg Lys Ser Lys Leu Val Glu Glu 110 115 120 Pro Ile Asp Met Asp Ser Pro Glu Ile Arg Glu Leu Glu Lys Phe 125 130 135 Ala Asn Glu Phe Lys Val Arg Arg Ile Lys Leu Gly Tyr Thr Gln 140 145 150 Thr Asn Val Gly Glu Ala Leu Ala Ala Val His Gly Ser Glu Phe 155 160 165 Ser Gln Thr Thr Ile Cys Arg Phe Glu Asn Leu Gln Leu Ser Phe 170 175 180 Lys Asn Ala Cys Lys Leu Lys Ala Ile Leu Ser Lys Trp Leu Glu 185 190 195 Glu Ala Glu Gln Val Gly Ala Leu Tyr Asn Glu Lys Val Gly Ala 200 205 210 Asn Glu Arg Lys Arg Lys Arg Arg Thr Thr Ile Ser Ile Ala Ala 215 220 225 Lys Asp Ala Leu Glu Arg His Phe Gly Glu Gln Asn Lys Pro Ser 230 235 240 Ser Gln Glu Ile Met Arg Met Ala Glu Glu Leu Asn Leu Glu Lys 245 250 255 Glu Val Val Arg Val Trp Phe Cys Asn Arg Arg Gln Arg Glu Lys 260 265 270 Arg Val Lys Thr Ser Leu Asn Gln Ser Leu Phe Ser Ile Ser Lys 275 280 285 Glu His Leu Glu Cys Arg 290

【００２１】配列番号：2 配列の長さ：873 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA アンチセンス：No 起源生物名：ヒト組織の種類：脳下垂体配列の特徴特徴を表す記号：exon 存在位置：1..873 特徴を決定した方法：E 配列 ATGAGTTGCC AAGCTTTTAC TTCGGCTGAT ACCTTTATAC CTCTGAATTC TGACGCCTCT 60 GCAACTCTGC CTCTGATAAT GCATCACAGT GCTGCCGAGT GTCTACCAGT CTCCAACCAT 120 GCCACCAATG TGATGTCTAC AGCAACAGGA CTTCATTATT CTGTTCCTTC CTGTCATTAT 180 GGAAACCAGC CATCAACCTA TGGAGTGATG GCAGGTAGTT TAACCCCTTG TCTTTATAAA 240 TTTCCTGACC ACACCTTGAG TCATGGATTT CCTCCTATAC ACCAGCCTCT TCTGGCAGAG 300 GACCCCACAG CTGCTGATTT CAAGCAGGAA CTCAGGCGGA AAAGTAAATT GGTGGAAGAG 360 CCAATAGACA TGGATTCTCC AGAAATCAGA GAACTTGAAA AGTTTGCCAA TGAATTTAAA 420 GTGAGACGAA TTAAATTAGG ATACACCCAG ACAAATGTTG GGGAGGCCCT GGCAGCTGTG 480 CATGGCTCTG AATTCAGTCA AACAACAATC TGCCGATTTG AAAATCTGCA GCTCAGCTTT 540 AAAAATGCAT GCAAACTGAA AGCAATATTA TCCAAATGGC TGGAGGAAGC TGAGCAAGTA 600 GGAGCTTTGT ACAATGAAAA AGTGGGAGCA AATGAAAGGA AAAGAAAACG AAGAACAACT 660 ATAAGCATTG CTGCTAAAGA TGCTCTGGAG AGACACTTTG GAGAACAGAA TAAACCTTCT 720 TCTCAAGAGA TCATGAGGAT GGCTGAAGAA CTGAATCTGG AGAAAGAAGT AGTAAGAGTT 780 TGGTTTTGCA ACCGGAGGCA GAGAGAAAAA CGGGTGAAAA CAAGTCTGAA TCAGAGTTTA 840 TTTTCTATTT CTAAGGAACA TCTTGAGTGC AGA

【００２２】配列番号：3 配列の長さ：1262 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA アンチセンス：No 起源生物名：ヒト組織の種類：脳下垂体配列の特徴特徴を表す記号：exon 存在位置：1..873 特徴を決定した方法：E 配列 CTCAG -121 AGCCTTCCTG ATGTATATAT GCAGGTAGTG AGAATTGAAT CGGCCCTTTG AGACAGTAAT - 61 ATAATAAAAC TCTGATTTGG GGAGCAGCGG TTCTCCTTAT TTTTCTACTC TCTTGTGGGA -1 ATGAGTTGCC AAGCTTTTAC TTCGGCTGAT ACCTTTATAC CTCTGAATTC TGACGCCTCT 60 GCAACTCTGC CTCTGATAAT GCATCACAGT GCTGCCGAGT GTCTACCAGT CTCCAACCAT 120 GCCACCAATG TGATGTCTAC AGCAACAGGA CTTCATTATT CTGTTCCTTC CTGTCATTAT 180 GGAAACCAGC CATCAACCTA TGGAGTGATG GCAGGTAGTT TAACCCCTTG TCTTTATAAA 240 TTTCCTGACC ACACCTTGAG TCATGGATTT CCTCCTATAC ACCAGCCTCT TCTGGCAGAG 300 GACCCCACAG CTGCTGATTT CAAGCAGGAA CTCAGGCGGA AAAGTAAATT GGTGGAAGAG 360 CCAATAGACA TGGATTCTCC AGAAATCAGA GAACTTGAAA AGTTTGCCAA TGAATTTAAA 420 GTGAGACGAA TTAAATTAGG ATACACCCAG ACAAATGTTG GGGAGGCCCT GGCAGCTGTG 480 CATGGCTCTG AATTCAGTCA AACAACAATC TGCCGATTTG AAAATCTGCA GCTCAGCTTT 540 AAAAATGCAT GCAAACTGAA AGCAATATTA TCCAAATGGC TGGAGGAAGC TGAGCAAGTA 600 GGAGCTTTGT ACAATGAAAA AGTGGGAGCA AATGAAAGGA AAAGAAAACG AAGAACAACT 660 ATAAGCATTG CTGCTAAAGA TGCTCTGGAG AGACACTTTG GAGAACAGAA TAAACCTTCT 720 TCTCAAGAGA TCATGAGGAT GGCTGAAGAA CTGAATCTGG AGAAAGAAGT AGTAAGAGTT 780 TGGTTTTGCA ACCGGAGGCA GAGAGAAAAA CGGGTGAAAA CAAGTCTGAA TCAGAGTTTA 840 TTTTCTATTT CTAAGGAACA TCTTGAGTGC AGATAAGATT TTTCTATTGT ATAATAGCCT 900 TTTTCTCCCG TTTCATTCCT TTCTCTTCTT CAACAAAAAC AGAAATTACT TGGTTGACTT 960 AAAATCATTT TATATCAATA GCTTTTACAG AAGCTTTACT TTTCCACTTT TTTTTAAAAA 1020 AAAGAAACCA ACAATTTAAA TTATATTGAT GTTATTTACT TAAAATAATT ATTCTCAGAA 1080 GCCACATTAT CTATTTTAAG CCAAATATAT TAACAGTAAT AAAATGATCT CTCTGTC

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ヒトＰｉｔＩのｃＤＮＡの合成に利用
したプライマーの配列を示したものである。

【図２】図２は、ヒトＰｉｔＩｃＤＮＡの構造とその主
な制限酵素地図、およびＰＣＲ法による増幅に用いたプ
ライマーの配列と、その位置関係を示した模式図（スト
ラテジー）である。図中ボックスで示した部分は、蛋白
のコード領域を示す。

【図３】図３は、Ｐｉｔの構造遺伝子の発現に当たっ
て利用したプライマーの配列（図２のプライマーを一部
改変したもの）を示した図である。

【図４】図４は、実施例５における７．５％ポリアクリ
ルアミド・ゲル電気泳動の泳動像を示した図である。pB
R322/Hinf I で示したレーンはpBR322をHinf Iで消化し
たもの（コントロール）、その他のレーンは各々に示し
た制限酵素でプラスミドｐｈＰｉｔ・Ｅｘ１を消化し
たものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/00 ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ（ＧＥＮＥＴＹＸ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】次のアミノ酸配列（配列１）で示される、
ヒトの成長ホルモン遺伝子と、ヒトのプロラクチン遺伝
子に対する転写活性増強因子ＰｉｔＩをコードするＤＮ
Ａアミノ酸配列： Met Ser Cys Gln Ala Phe Thr Ser Ala Asp Thr Phe Ile Pro Leu 1 5 10 15 Asn Ser Asp Ala Ser Ala Thr Leu Pro Leu Ile Met His His Ser 20 25 30 Ala Ala Glu Cys Leu Pro Val Ser Asn His Ala Thr Asn Val Met 35 40 45 Ser Thr Ala Thr Gly Leu His Tyr Ser Val Pro Ser Cys His Tyr 50 55 60 Gly Asn Gln Pro Ser Thr Tyr Gly Val Met Ala Gly Ser Leu Thr 65 70 75 Pro Cys Leu Tyr Lys Phe Pro Asp His Thr Leu Ser His Gly Phe 80 85 90 Pro Pro Ile His Gln Pro Leu Leu Ala Glu Asp Pro Thr Ala Ala 95 100 105 Asp Phe Lys Gln Glu Leu Arg Arg Lys Ser Lys Leu Val Glu Glu 110 115 120 Pro Ile Asp Met Asp Ser Pro Glu Ile Arg Glu Leu Glu Lys Phe 125 130 135 Ala Asn Glu Phe Lys Val Arg Arg Ile Lys Leu Gly Tyr Thr Gln 140 145 150 Thr Asn Val Gly Glu Ala Leu Ala Ala Val His Gly Ser Glu Phe 155 160 165 Ser Gln Thr Thr Ile Cys Arg Phe Glu Asn Leu Gln Leu Ser Phe 170 175 180 Lys Asn Ala Cys Lys Leu Lys Ala Ile Leu Ser Lys Trp Leu Glu 185 190 195 Glu Ala Glu Gln Val Gly Ala Leu Tyr Asn Glu Lys Val Gly Ala 200 205 210 Asn Glu Arg Lys Arg Lys Arg Arg Thr Thr Ile Ser Ile Ala Ala 215 220 225 Lys Asp Ala Leu Glu Arg His Phe Gly Glu Gln Asn Lys Pro Ser 230 235 240 Ser Gln Glu Ile Met Arg Met Ala Glu Glu Leu Asn Leu Glu Lys 245 250 255 Glu Val Val Arg Val Trp Phe Cys Asn Arg Arg Gln Arg Glu Lys 260 265 270 Arg Val Lys Thr Ser Leu Asn Gln Ser Leu Phe Ser Ile Ser Lys 275 280 285 Glu His Leu Glu Cys Arg 290
【請求項２】次の塩基配列（配列２）からなる請求項１
のＤＮＡ塩基配列： ATGAGTTGCC AAGCTTTTAC TTCGGCTGAT ACCTTTATAC CTCTGAATTC TGACGCCTCT 60 GCAACTCTGC CTCTGATAAT GCATCACAGT GCTGCCGAGT GTCTACCAGT CTCCAACCAT 120 GCCACCAATG TGATGTCTAC AGCAACAGGA CTTCATTATT CTGTTCCTTC CTGTCATTAT 180 GGAAACCAGC CATCAACCTA TGGAGTGATG GCAGGTAGTT TAACCCCTTG TCTTTATAAA 240 TTTCCTGACC ACACCTTGAG TCATGGATTT CCTCCTATAC ACCAGCCTCT TCTGGCAGAG 300 GACCCCACAG CTGCTGATTT CAAGCAGGAA CTCAGGCGGA AAAGTAAATT GGTGGAAGAG 360 CCAATAGACA TGGATTCTCC AGAAATCAGA GAACTTGAAA AGTTTGCCAA TGAATTTAAA 420 GTGAGACGAA TTAAATTAGG ATACACCCAG ACAAATGTTG GGGAGGCCCT GGCAGCTGTG 480 CATGGCTCTG AATTCAGTCA AACAACAATC TGCCGATTTG AAAATCTGCA GCTCAGCTTT 540 AAAAATGCAT GCAAACTGAA AGCAATATTA TCCAAATGGC TGGAGGAAGC TGAGCAAGTA 600 GGAGCTTTGT ACAATGAAAA AGTGGGAGCA AATGAAAGGA AAAGAAAACG AAGAACAACT 660 ATAAGCATTG CTGCTAAAGA TGCTCTGGAG AGACACTTTG GAGAACAGAA TAAACCTTCT 720 TCTCAAGAGA TCATGAGGAT GGCTGAAGAA CTGAATCTGG AGAAAGAAGT AGTAAGAGTT 780 TGGTTTTGCA ACCGGAGGCA GAGAGAAAAA CGGGTGAAAA CAAGTCTGAA TCAGAGTTTA 840 TTTTCTATTT CTAAGGAACA TCTTGAGTGC AGA
【請求項３】次の塩基配列（配列３）からなる請求項１
のＤＮＡを含むＤＮＡ塩基配列： CTCAG -121 AGCCTTCCTG ATGTATATAT GCAGGTAGTG AGAATTGAAT CGGCCCTTTG AGACAGTAAT - 61 ATAATAAAAC TCTGATTTGG GGAGCAGCGG TTCTCCTTAT TTTTCTACTC TCTTGTGGGA -1 ATGAGTTGCC AAGCTTTTAC TTCGGCTGAT ACCTTTATAC CTCTGAATTC TGACGCCTCT 60 GCAACTCTGC CTCTGATAAT GCATCACAGT GCTGCCGAGT GTCTACCAGT CTCCAACCAT 120 GCCACCAATG TGATGTCTAC AGCAACAGGA CTTCATTATT CTGTTCCTTC CTGTCATTAT 180 GGAAACCAGC CATCAACCTA TGGAGTGATG GCAGGTAGTT TAACCCCTTG TCTTTATAAA 240 TTTCCTGACC ACACCTTGAG TCATGGATTT CCTCCTATAC ACCAGCCTCT TCTGGCAGAG 300 GACCCCACAG CTGCTGATTT CAAGCAGGAA CTCAGGCGGA AAAGTAAATT GGTGGAAGAG 360 CCAATAGACA TGGATTCTCC AGAAATCAGA GAACTTGAAA AGTTTGCCAA TGAATTTAAA 420 GTGAGACGAA TTAAATTAGG ATACACCCAG ACAAATGTTG GGGAGGCCCT GGCAGCTGTG 480 CATGGCTCTG AATTCAGTCA AACAACAATC TGCCGATTTG AAAATCTGCA GCTCAGCTTT 540 AAAAATGCAT GCAAACTGAA AGCAATATTA TCCAAATGGC TGGAGGAAGC TGAGCAAGTA 600 GGAGCTTTGT ACAATGAAAA AGTGGGAGCA AATGAAAGGA AAAGAAAACG AAGAACAACT 660 ATAAGCATTG CTGCTAAAGA TGCTCTGGAG AGACACTTTG GAGAACAGAA TAAACCTTCT 720 TCTCAAGAGA TCATGAGGAT GGCTGAAGAA CTGAATCTGG AGAAAGAAGT AGTAAGAGTT 780 TGGTTTTGCA ACCGGAGGCA GAGAGAAAAA CGGGTGAAAA CAAGTCTGAA TCAGAGTTTA 840 TTTTCTATTT CTAAGGAACA TCTTGAGTGC AGATAAGATT TTTCTATTGT ATAATAGCCT 900 TTTTCTCCCG TTTCATTCCT TTCTCTTCTT CAACAAAAAC AGAAATTACT TGGTTGACTT 960 AAAATCATTT TATATCAATA GCTTTTACAG AAGCTTTACT TTTCCACTTT TTTTTAAAAA 1020 AAAGAAACCA ACAATTTAAA TTATATTGAT GTTATTTACT TAAAATAATT ATTCTCAGAA 1080 GCCACATTAT CTATTTTAAG CCAAATATAT TAACAGTAAT AAAATGATCT CTCTGTC
【請求項４】請求項１または２のＤＮＡが、発現可能な
ように調節遺伝子ＤＮＡと有効に結合しているＰｉｔＩ
発現ベクター
【請求項５】請求項１または２のＤＮＡを発現させて得
られる、ヒトの成長ホルモン遺伝子と、ヒトのプロラク
チン遺伝子に対する転写活性増強因子ＰｉｔＩポリペプ
チド
【請求項６】配列１のアミノ酸配列で示される、ヒトの
成長ホルモン遺伝子と、ヒトのプロラクチン遺伝子に対
する転写活性増強因子ＰｉｔＩポリペプチド
【請求項７】請求項１、２または３のＤＮＡから選択さ
れた塩基配列、並びにその相補配列からなる、転写活性
増強因子ＰｉｔＩ遺伝子の検出用プローブ
【請求項８】請求項５に記載のポリペプチドと特異的に
反応する抗体
【請求項９】請求項７に記載の抗体を含む転写活性増強
因子の免疫学的分析試薬
【請求項１０】請求項５に記載のポリペプチドを用いる
ヒトの成長ホルモン遺伝子および／またはヒトのプラク
チン遺伝子の転写活性増強方法