JP3095752B2 - Ｔａｇ‐７２及びヒト癌腫に対して結合特異性を有する第二世代モノクローナル抗体及びその使用方法 - Google Patents

Ｔａｇ‐７２及びヒト癌腫に対して結合特異性を有する第二世代モノクローナル抗体及びその使用方法

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は約＞106dの分子量を有する腫瘍付随糖タンパ
ク質（以後「TAG−72」と称する）及びヒト癌腫に対し
て結合特異性を有する第二世代モノクローナル抗体、及
びその使用方法に関する。
発明の背景 各種ヒト癌腫に対して結合特異性を有する数多くのモ
ノクローナル抗体が開発されてきた〔Schlom et al.、
「腫瘍学における重要な進歩（Important Advances in
Oncology）」、Philadelphia、PA,J.B.Lippincott C
o.、Vol.1、pp.170−192（1984）及びSchlom、Cancer R
es.、46;3225−3238（1986）参照〕。B72.3と称される
これらのモノクローナル抗体の一つ〔Colcher et al.,P
roc.Natl.Acad.Sci.USA,78:3199−3203（1981）及び米
国特許4,522,918号及び4,612,282号各明細書参照〕はネ
ズミIgG1であり、免疫原としてヒト乳癌抽出物を用いて
開発された。モノクローナル抗体B72.3はハイブリドー
マB72.3（ATCCNo.HB−8108）により生産され、広範に研
究されてきた。モノクローナル抗体B72.3は下記の点に
基づいてその他の公知のモノクローナル抗体と区別され
ることが示されてきた：（１）TAG−72に対するその結
合特異性〔Johnson et al.,Cancer Res.,46:857−859
（1986）参照〕；（２）乳癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸
癌、子宮内膜癌及び膵臓癌組織などの各種タイプのヒト
癌腫組織に対するその結合特異性〔Nuti et al.,Intl.
J.Cancer,29:539−545（1982）;Stramignoni,et al.,In
tl.J.Cancer,31:543−552（1982）;Thor,et al.,J.Nat
l.Cancer Inst.76:995−1006（1986）；及びThor et a
l.,Cancer Res.,46:3118−3124（1986）参照〕、（３）
その正常ヒト大人組織に対する結合特異性の欠乏〔Nut
i,et al.,Intl.J.Cancer,29:539−545（1982）;Stramig
noni,et al.,Intl.J.Cancer,31:543−552（1983）;Tho
r,et al.,J.Natl.Cancer Inst.,76:995−1006（198
6）；及びThor,et al.,Cancer Res.,46:3118−3124（19
86）参照〕；（４）その血清におけるTAG−72の検出能
力〔Paterson,et al.,Intl.J.Cancer,37:659−666（198
6）及びKlug,et al.,Intl.J.Cancer,38:661−669（198
6）参照〕；（５）そのヒト滲出液中の及び微細針吸引
生検中の癌腫細胞の検出能力〔Szpak,et al.,Acta.Cyto
logica,28:356−367（1984）;Johnston,et al.,Cancer
Res.,45:1894−1900（1986）;Szpak,et al.,Am.J.Pat
h.,122:252−260（1986）;Johnston,et al.,Human Pat
h.,17:501−513（1986）;Martin,et al.,Am.J.Clim.Pat
h.,86:10−18（1986）;Nuti,et al.,Intl.J.Cancer,37:
493−498（1986）；及びJohnston,et al.,Cancer Res.,
46:6462−6470（1986）参照〕；及び（６）その実験動
物系〔kennan,et al.,J.Nucl.Med.,25:1197−1203（198
4）及びColcher,et al.,Cancer Res,44:5744−5751（19
84）参照〕及び臨床試験〔Colcher,et el.,Cancer Re
s.,47:1185−1189（1987）及びEsteban,et al.,Intl.J.
Cancer,39:50−58（1987）参照〕の両者におけるヒト癌
腫に対する結合特異性及び長期結合。
しかしながら、モノクローナル抗体B72.3は次の点に
おいて不利である。即ち、（１）B72.3は特別のタイプ
例えば卵巣、結腸癌腫などの各組織などのいずれのヒト
癌腫組織に対しても結合特異性を有する訳ではない〔Nu
ti,et al.,Intl.J.Cancer,29:539−545（1982）;Strami
gnoni,et al.,Intl.J.Cancer,31:543−552（1983）;Tho
r,et al.,J.Natl.Cancer Inst.,76:995−1006（1986）;
Thor,et al.,Cancer Res.,46:3118−3124（1986）；及
びHand,et al.,Cancer Res.,43:728−735（1983）参
照〕；（２）B72.3は所定のヒト癌腫集合体中の全ての
癌腫細胞に対して結合特異性を有する訳ではない〔Nut
i,et al.,Intl.J.Cancer,29:539−545（1982）;Stramig
noni,et al.,Intl.J.Cancer,31:543−552（1983）;Tho
r,et al.,J.Ntal.Cancer Inst.,76:995−1006（1986）;
Thor,et al.,Cancer Res.,46:3118−3124（1986）；及
びHand,et al.,Cancer Res.,43:728−735（1983）参
照〕； （３）B72.3は培養液中の殆んどのヒト癌腫細胞系に対
して結合特異性を有さない〔Hand,et al.,Cancer Res.,
43:728−735（1983）;Hand,et al.,Cancer Res.,45:833
−840（1985）；及びFriedman,et al.,Cancer Res.,45:
5648−5655（1985）参照〕；（４）効率的なinvivoの免
疫診断及び治療応用に必要である高度に免疫反応性のB7
2.3からのＦ（ab′）２、Ｆ（ab′）及びＦ（ab）断片
を得ることが困難である；そして（５）B72.3はIgG1ア
イソタイプのものであるのでB72.3を用いてモノクロー
ナル抗体エフェクター細胞媒介細胞毒性或いは補体媒介
細胞毒性研究を行うことが困難である（IgG2a、IgG2b或
いはIgMアイソタイプはこれらの応用に対してはより効
率的である）。
発明の概要 従って、本発明の目的はB72.3が本質的に結合特異性
を有さない所定のタイプのヒト癌腫を含む各種ヒト癌腫
に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体を提供
することである。
本発明はもう一つの目的は、TAG−72及びヒト癌腫に
対して高い結合親和性を有するモノクローナル抗体を提
供することである。
更に本発明の目的は、ヒト癌腫のin vivoの免疫診断
及び治療用の高度に免疫反応性のＦ（ab′）２、Ｆ（a
b′）及びＦ（ab）断片を容易に得ることができるモノ
クローナル抗体を提供することである。
更に本発明の目的は、ヒト癌腫のin vivoの免疫診断
及び治療用の組換え抗体を得ることのできるモノクロー
ナル抗体を提供することである。
更に本発明の目的は、モノクローナル抗体エフェクタ
ー細胞媒介細胞毒性或いは補体媒介細胞毒性研究を行う
用途のためのヒト癌腫に対して結合特異性を有するIgG
2a、IgG2b及びIgMアイソタイプのモノクローナル抗体を
提供することである。
更に本発明の目的は、これらのモノクローナル抗体を
用いてin vitro及びin vivoでヒト癌腫を診断する方法
及びヒト癌腫を治療する方法を提供することである。
本発明のその他の目的及び利点は、以下に示す発明の
具体的説明から明らかとなるであろう。
本発明の上記及び各種その他の目的及び利点はTAG−7
2及びLS−174T抗原の両者に対して結合親和性を有する
本発明の第二世代モノクローナル抗体により達成され
る。
特に断りのない限り、茲で用いられる全ての技術的及
び化学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者に共
通的に理解されている同一の意味を有する。茲で説明さ
れるものと同様或いは同等の任意の方法及び材料を本発
明の実施或いは試験において用いることができるが、好
ましい方法及び材料は以下に説明される。以下に述べら
れる全ての刊行物は茲に準用する。
茲に用いられる「第二世代モノクローナル抗体」とい
う表現は、免疫原として第一世代モノクローナル抗体で
アフィニティ精製された抗原を用いて産生されたモノク
ローナル抗体を意味する。茲に用いられる「第一世代モ
ノクローナル抗体」という用語は、免疫原として粗製細
胞抽出物を用いて産生されたモノクローナル抗体を意味
する。
茲において用いられる「実質的」という用語は、殆ん
ど全部或いは大部分を意味するが、しかし全くを意味す
るものではない。
LS−174T（ATCC No.CRL−188）はLS180（ATCC No.C
RL−187）結腸腺癌系の一変種である。それは親株より
もより容易に二次培養することができる。それはヌード
マウスにおいて、発癌性である。核型は大部分の細胞に
Ｘ染色体を失ったLS180のそれと同様である。電子顕微
鏡研究は多量の細絨毛及び細胞室内ムチン空胞を示す
〔Tom,et al.,In Vitro,12:180−191（1976）参照〕。
TAG−72はLS−174T腫瘍細胞系にみられる抗原であ
る。モノクローナル抗体B72.3はTAG−72として同定され
る高分子量腫瘍付随糖タンパク質に結合する。Johnson,
et al.,Cancer Res.,46:850−857（1986）に記載される
ようなデータが示されるこのTAG−72分子をムチンと特
性付けた。この結論は次の観察に基づくものである：
（ａ）TAG−72はそのSepharose CL−4Bカラムからの排
除により示されるように高分子量（＞１×106）を有す
る； （ｂ）CsCl中にいて平衡遠心分離により求められたTAG
−72の密度は1.45gm/mlであり、ひどくグリコシル化さ
れた糖タンパク質を示した； （ｃ）TAG−72はノイラミニダーゼ消化後に移動におけ
る変化を示し、それがムチン類に特徴的な多量のＯ−グ
リコシド的に結合したオリゴ糖類を有するひどくシアリ
ル化された分子であることを示す；（ｄ）ムチン類上に
普通見られる血液基抗原がアフィニティ−精製TAG−72
に見られる；及び（ｅ）コンドロイチナーゼABC消化はT
AG−72に何等の効果も有さず、従ってTAG−72エピトー
プはコンドロイチンサルフェートタンパク質グリカン上
に発現されないことを示す。
即ち、本発明の目的は、TAG−72及び抗体B72.3がそれ
に対して最少の結合特異性を有するヒト癌腫を含むヒト
癌腫に対して結合特異性を有し、又正常ヒト大人組織に
対しては最少の結合特異性を有する本発明の第二世代モ
ノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え体
により達成された。
もう一つの実施態様に対しては、本発明の上記目的は
下記工程を含んでなるヒト癌腫或いは転移の診断方法に
より達成された： （ａ）患者から体液、組織或いは生検などの体試料を得
る工程； （ｂ）この体試料材料を本発明の第二世代モノクローナ
ル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え体と接触させ
る工程； （ｃ）第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応性断
片或いは組換え体の体試料材料への結合レベルを決定す
る工程；及び （ｄ）体試料内に存在する物質に結合した第二世代モノ
クローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え体の
量を、対照試料或いは所定規定レベルと比較して、その
結果対照レベルより大きい結合がヒト癌腫或いはその転
移の存在を示す工程。
更に別の実施態様においては、本発明の上記目的は下
記工程を含んでなるヒト癌腫或いはその転移の存在の診
断方法により達成された： （ａ）患者に像形成マーカーに接合した本発明の第二世
代モノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換
え体を投与する工程；及び （ｂ）患者を該像形成マーカーを検出する手段に曝して
該患者におけるヒト癌腫或いはその転移部位に対応する
像形成マーカーの領域を同定する工程。
更に別の実施態様においては、本発明の上記目的はヒ
ト癌腫或いはその転移に罹患した患者の治療方法であっ
て、癌腫或いはその転移に罹患した患者に薬学的に有効
量の治療剤に接合した本発明の第二世代モノクローナル
抗体、その免疫活性断片或いは組換え体を投与すること
を特徴とする方法により達成された。
図面の簡単な説明 第１図は次のものの概略図である：（１）B72.3との
競争ラジオイムノアッセイ（以下「RIA」）における本
発明のCC及びMATAGモノクローナル抗体のLS−174T結腸
癌腫細胞（ATCC No.CRL−188）に対する示差結合特異
性；（２）本発明のCC及びMATAGモノクローナル抗体の
アイソタイプ；及び（３）本発明のCC及びMATAGモノク
ローナル抗体の固相RIA（以下「SPRIA」）中の各種結腸
癌腫に対する結合特異性。
第２図はB72.3との競争RIAにおけるモノクローナル抗
体CC41のLS−174T結腸癌腫細胞抽出物に対する結合特異
性の分析である。第2B図はSPIRAにおけるモノクローナ
ル抗体B72.3及びCC41のLS−174T結腸癌腫細胞系抽出物
（LS）及び乳癌腫生検抽出物（Br.Ca.）に対する結合特
異性の定量分析である。
第2C図は、B72.3との競争RIAにおけるモノクローナル
抗体CC60のLS−174T結腸癌腫細胞抽出物に対する結合特
異性の分析である。第2D図はSPIRAにおけるモノクロー
ナル抗体B72.3及びCC60のLS−174T結腸癌腫細胞系抽出
物（LS）及び乳癌生検抽出物（Br.Ca.）に対する結合特
異性の定量分析である。
第2E図は、B72.3との競争RIAにおけるモノクローナル
抗体CC83のLS−174T結腸癌腫細胞抽出物に対する結合特
異性の分析である。第2F図はSPIRAにおけるモノクロー
ナル抗体B72.3及びCC83のLS−174T結腸癌腫細胞系抽出
物（LS）及び乳癌腫生検抽出物（Br.Ca.）に対する結合
特異性の定量分析である。
第2G図は、B72.3との競争RIAにおけるモノクローナル
抗体CC49のLS−174T結腸癌腫細胞抽出物に対する結合特
異性の分析である。第2H図はSPIRAにおけるモノクロー
ナル抗体B72.3及びCC49のLS−174T結腸癌腫細胞系抽出
物（LS）及び乳癌腫生検抽出物（Br.Ca.）に対する結合
特異性の定量分析である。
第３図は、CC49との競争RIAの分析であり、同分析に
おいて125I−標識化CC49モノクローナル抗体をLS−174T
結腸癌腫細胞抽出物と反応させ、精製CC30、CC46、CC83
及びB72.3を競争抗体として用いた。
第4A図は、LS−147T結腸癌腫異種移植片のモノクロー
ナル抗体CC11によるin vivoのねらい打ちの分析であ
る。
第4B図は、LS−147T結腸癌腫異種移植片のモノクロー
ナル抗体CC46によるin vivoのねらい打ちの分析であ
る。
発明の具体的説明 I.モノクローナル抗体の特性 本発明において特に開発されたCC1〜CC92（IgGモノク
ローナル抗体）及びMATAG1〜MATAG18（IgMモノクローナ
ル抗体）（第１図参照）と命名されたモノクローナル抗
体は、全てTAG−72及び数多くのタイプのヒト癌腫（乳
癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌及び膵臓癌
を含む）に対して結合特異性を有し、B72.3とは次の点
において異る： （１）それらが正常ヒト大人組織に対する特異性を本質
的に有さないことを維持しながらB72.3よりもより多く
のヒト癌腫に対して結合特異性を有すること； （２）それらがTAG−72に対してB72.3よりより高い結合
親和性、即ち３×109M、好ましくは８×109Mより大きい
オーダーで有し、従ってin vivoでヒト癌腫をより高い
効率で結合すること； （３）それらがヒト癌腫をin situでねらい打ちするに
際しB72.3より50％以上の効率を示すこと（即ち、B72.3
よりも50％多量の注射投与量／グラム腫瘍及び好ましく
はB72.3よりも100％多量注射投与量／グラム腫瘍）； （４）それらがペプシンによって容易に断片化されて高
度に免疫反応性であるＦ（ab′）２、Ｆ（ab′）及びＦ
（ab）断片を得ることができること；及び （５）それらがIgG2a、IgG2b、及びIgMアイソタイプの
モノクローナル抗体を包合するため、それらをより効率
的にモノクローナル抗体目標エフェクター細胞媒介細胞
毒或いは補体媒介細胞毒研究に用いることができるこ
と。
本発明のCC及びMATAGモノクローナル抗体の開発は又
今や二重決定基RIA（以下「DDRIA」）の癌患者の体液及
び生検におけるヒト癌腫抗原のより効率的検出への使用
を実現可能にする。
II.モノクローナル抗体の産生 本発明のCC及びMATAgモノクローナル抗体はマウス
（或いはラット、ウサギ、ヤギ及びヒトなどのその他の
動物）を各種異種移植片例えばLS−174T癌腫細胞（ATCC
No.CRL−188）を用いて調製されたLS−174Tヒト結腸
癌腫異種移植片及びOVCAR−３癌腫細胞〔Hamilton et a
l.,Cancer Res.,43:5379−5389（1983）参照〕を用いて
調製されたOVCAR−３ヒト卵巣癌異種移植片から得られ
る精製TAG−72免疫化することにより産生される。
TAG−72は周知の方法により異種移植片から精製され
る。即ち次の工程により精製される： （１）細胞を破壊する工程；（２）細胞破片を除去する
ために遠心分離及び／又は過する工程； （３）＞106dの分子量、即ちTAG−72の分子量を有する
タンパク質を得るためにサイジングカラムクロマトグラ
フィーを行う工程；及び次いで（４）目的TAG−72を得
るためにB72.3アフィニティカラムクロマトグラフィを
行う工程〔Paterson,et al.,intl.J.Cancer,37:659−66
6（1986）参照〕。
動物例えばマウスの精製TAG−72による免疫化、免疫
化細胞の単離、免疫化細胞とマウス骨髄腫細胞（或いは
ラット、ウサギ、ヤギ及びヒトなどのその他の種の骨髄
腫）との融合は全て周知であり、容易に利用可能であ
り、又得られる融合細胞のハイブリドーマの生育を可能
にする条件下での培養は全て周知の或いは容易に決定さ
れる方法により行われる〔Herzenberg,et al.,「実験免
疫学便覧（Handbook of Experimental Immunolog
y）」、Oxford,Blackwell,pp.25.1〜25.7;Calcher,et a
l.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.78:3199−3203（1981）；
及びMurano,et al.,intl.J.Cancer,39:34−44（1987）
参照〕。
得られたハイブリドーマを次いで試験してTAG−72及
びヒト癌腫に結合特異性を有するが、しかし正常ヒト大
人組織に対しては有さないモノクローナル抗体を産生す
るものを単離する。このスクリーニングはより詳細に以
下の具体例において説明されるSPRIAを用いて行われ
る。
TAG−72に対するモノクローナル抗体の結合親和性は
周知の手段により〔Heyman,et al.,J,Immunol.Methods,
68:193−204（1984）参照〕、又以下の具体例において
詳細に説明されるようにして決定される。
これらのモノクローナル抗体のアイソタイプ（IgG1、
IgG2a、IgG2b、IgG3或いはIgM）は周知の手段により〔C
olcher,et al.,Cancer Res.41:1451−1459（1981）参
照〕、又以下の具体例において詳細に説明されるように
して決定される。
以下に与えられる非−限定的具体例においては、四千
を越えるハイブリドーマが（ｉ）LS−174Tヒト結腸癌腫
異種移植片から得られた精製TAG−72で免疫されたマウ
スの脾臓細胞、及び（ii）周知の容易に利用可能なNS−
１マウス骨髄腫系（ATCC No.TIB−18）を融合させるこ
とにより産生した。これらのハイブリドーマから44個の
二重クローン化ハイブリドーマ（29個のCC第二世代モノ
クローナル抗体及び15MATAG第二世代モノクローナル抗
体）を選択し、以下に与えられる具体例に説明されるよ
うにして特性化した。
本発明のCCモノクローナル抗体を周知の方法により酵
素ペプシンを用いて〔Colcher,et al.,Cancer Res.,43:
736−742（1983）参照〕、又以下に与えられる具体例に
より詳細に説明されるようにして断片化して高度に免疫
活性のＦ（ab′）２及びＦ（ab）断片を得る。得られる
Ｆ（ab′）２、Ｆ（ab′）及びＦ（ab）断片の免疫反応
性は完全モノクローナル抗体分子について上記した如く
競争RIA或いはSPRIAにおいて決定する。
本発明の第二世代抗体は又周知の分子生物学技術によ
り組換え形態にも作成される〔Rice,et al.,Proc.Natl.
Acad.Sci.USA、79:7862−7865（1982）;Kurokawa,et a
l.,Nucleic Acids・Res.,11:3077−3085（1983）;Oi,et
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:825−829（1983）;Bo
xx,et al.,Nucleic Acids Res.,12:3791−3806（198
4）;Boulianne,et al.,Nature（London）,312:643−646
（1984）;Cabily,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:3
273−3277（1984）;Kenten,et al.,Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA,81:2955−2959（1984）;Liu,et al.,Proc.Natl.A
cad.Sci.USA,81:5369−5373（1984）;Morrison,et al.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851−6855（1984）;Neube
rger,et al.,Nature（London）,312:604−608（1984）;
Potter,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:7161−7165
（1984）;Neuberger,et al.,Nature（London）,314:268
−270（1985）;Jones,et al.,Nature（London）,321:52
2−523（1986）;Oi,et al.,Biotechniques,4:214−221
（1986）;Sahagan,et al.,J.Immunol.,137:1066−1074
（1986）;Sun,et al.,Hybridoma 5（Suppl.1）:S−17−
S20（1986）；及びSun,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.US
A,84:214−218（1987）参照〕、これらの全ては特に茲
において準用する。
上記文献に記載されるような公知の組換えDNA技術に
より、マウス不変部の代りに例えばヒト不変部（Fc領
域）を置換することによりキメラ形態に変更される。こ
れらのFc領域は各種ヒトアイソタイプ、即ちIgG1、Ig
G2、IgG3、IgG4或いはIgMのものであり得る。
加えて、本発明の第二世代のモノクローナル抗体は、
アフィニティ変性形態、アビジチィ変性形態、或いは両
者に上記文献に記載される周知の組換えDNA技術を用い
て結合部位を変更することにより或いはヒンジ領域を変
更することにより変更される。
組換え抗体形態は又本発明の第二世代モノクローナル
抗体が断片化された上記同一方法により断片化して免疫
活性断片Ｆ（ab′）２、Ｆ（ab′）或いはＦ（ab）が生
成される。
従って、茲において用いられる「組換え抗体」という
表現は集合的にFc領域が別の種或いはアイソタイプのFc
領域で置換された本発明の第二世代モノクローナル抗体
のキメラ／組換え形態、結合部位が変更された本発明の
第二世代モノクローナル抗体のアフィニティ変成形態、
ヒンジ領域が変更された本発明の第二世代モノクローナ
ル抗体のアビジチィ変性形態、それらの免疫反応性断片
及びそれらの組合わせを包合するものである。
本発明の第二世代モノクローナル抗体は、本発明の第
二世代モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを
プリスタン−下塗りマウスの腹腔内に注射し、適当な時
間（約１〜２週間）後、極めて高力価の均質モノクロー
ナル抗体を与える腹水をマウスから採取し、及びそれか
らモノクローナル抗体を周知の方法〔Stramignoni et a
l.,Intl.J.Cancer,31:543−552（1983）参照〕により単
離することにより大量に製造される。或いは又、第二世
代モノクローナル抗体は、本発明の第二世代モノクロー
ナル抗体を産生するバイブリドーマをin vitroで培養
し、細胞培養培地から分泌したモノクローナル抗体を周
知の方法〔Colcher,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,7
8:3199−3203（1981）参照〕により単離することにより
製造される。
本発明のCC及びMATAGモノクローナル抗体は上記方法
により、このようにして製造される。これらのモノクロ
ーナル抗体の結合特異性及び結合親和性及びそれらとB7
2.3との比較は以下に与えられる具体例においてより詳
細に説明される。
III.モノクローナル抗体の用途 本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫活性
断片或いは組換え体は単独、相互の組合わせ、或いは他
の抗体、例えばB72.3或いはその免疫反応性断片と組合
わせて次のような用途に用いることができる： （１）患者の体液中のTAG−72の検出のための標識化モ
ノクローナル抗体を用いるin vitroの診断アッセイ； （２）癌腫病巣のin situ検出のための像形成マーカー
に接合された本発明の第二世代モノクローナル抗体、そ
の免疫反応性断片或いはその組換え体を用いるin vivo
診断アッセイ（診断像形成）；（３）本発明の第二世代
モノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え
体を単独或いは放射線核種、薬品、毒素、エフェクター
細胞、その他の抗体に接合したもの、或いは補体機構を
介して用いるin vivo癌治療；（４）癌腫細胞の検出或
いは表現形決定のための免疫組織病理学或いは免疫細胞
化学；及び（５）癌腫に対する活性免疫治療のための抗
−イディオタイプ網状組織を活性化する免疫原。
A. in vitro診断アッセイ 本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応
性断片或いは組換え体を用いる患者の体液中においてTA
G−72を検出することによるヒト癌腫或いはその転移のi
n vitro診断アッセイを以下により詳細に説明する。
患者から得られた体液を本発明のモノクローナル抗
体、その免疫反応性断片或いは組換え体と接触させる。
診断は次いで体液中に存在する物質（TAG−72）に結合
するモノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組
換え体を決定し、体液物質に結合したモノクローナル抗
体、その免疫反応性断片或いは組換え体の量を以下に規
定される所定の基底レベルと対比することにより行う。
基底レベルを越える結合モノクローナル抗体、その免疫
反応性断片或いは組換え体の量はヒト癌腫或いはその転
移の存在を示す。
このin vitro法に用いることのできる体液の具体例と
しては、TAG−72を含有することが疑われた任意の体液
である。その好ましい具体例としては、血液（血清或い
は血漿）、唾液、乳頭排出物、嚢胞液、腹水、胸膜滲出
液、精漿、精液、尿及び前立腺液及び／又は生検標本な
どが挙げられる。血清或いは血漿が本発明で用いられる
より好ましい体液である。体液は当業者に容易に公知で
あるか決定される方法により得ることができる。
体液は本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免
疫反応性断片或いは組換え体と接触され、及び体液中の
物質に結合したモノクローナル抗体、その免疫反応性断
片或いは組換え体の量は例えば下記の文献に記載される
当業者に周知の免疫化学アッセイによって決定される
〔Klug,et al.,Cancer Res.44:1048−1053（1984）;Klu
g,et al.,Intl.J.Cancer,38:661−669（1986）;Herlyn,
et al.,J.Clin,Immunol.,2:135−140（1982）;Metzgar,
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:5242−5246（198
4）;Papsidero,et al.,Cancer Res.,44:4653−4657（19
84）;Hayes,et al.,J.Clin.Invest.75:1671−1678（198
5）;killian,et al.,Cancer Res.,45:886−891（198
5）;Hedin,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:3470−3
474（1983）;Pekary,et al.,Clin.Chem,30:1213−1215
（1984）;Bast,et al.,New England J.Med.,309:883−8
87（1983）；及びBellet,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U
SA,81:3869−3873（1984）（これらの開示内容は全て茲
に特に準用する）〕。
本発明において有用である一つのタイプの免疫化学ア
ッセイの一例はサンドイッチ放射測定アッセイ（以下
「IRMA」）である。このタイプのアッセイにおいて、抗
原（TAG−72）の存在はそれを過剰の標識化モノクロー
ナル抗体と反応させることにより直接測定される。その
ようなアッセイにおいては、抗原が標識化モノクローナ
ル抗体と反応させられる前に、抗原が抗原に特異的に結
合する免疫吸着剤上に不溶化される。この免疫吸着剤
は、第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応性断片
或いは組換え体を免疫ビーズなどの基材上に添付するこ
とにより形成される。単量体である抗原のサンドイッチ
アッセイにおいては抗原上に別々のエピトープを認識す
る二つの抗体が必要とされる、即ち所謂「二重決定基」
アッセイが必要とされ、その結果、抗原に対する結合の
競争がない。サンドイッチアッセイにおいては、一つの
抗体は免疫吸着剤に結合され、他方の抗体は標識化トレ
ーサーとして用いられる。二量体或いは重合体抗原のア
ッセイにおいては、同一抗体が標識化トレーサーとして
免疫吸着剤に結合され得る。
サンドイッチIRMAは前進、逆進或いは同時モードで行
われてよい。
TAG−72に対する前進サンドイッチアッセイにおいて
は、モノクローナル抗体は免疫ビーズなどの固相に添付
されてTAG−72に特異的な免疫吸着剤を形成する。TAG−
72を含有する体液試料を次いでこの免疫吸着剤とインキ
ュベートする。インキュベーションは体液中のTAG−72
を免疫吸着剤上の固定化モノクローナル抗体に結合させ
るのに十分な時間維持される。この最初のインキュベー
ション後、固相免疫吸着剤をインキュベーション混合物
から分離する。この免疫吸着剤を洗浄して体液中にも存
在するかもしれない非−特異的結合タンパク質などの未
結合妨害物質を除去する。固定化モノクローナル抗体に
結合されたTAG−72を含有する免疫吸着剤を引続き標識
化されたモノクローナル抗体、その免疫反応性断片或い
は組換え体と共にインキュベーションする。ここでも又
インキュベーションは標識化モノクローナル抗体、その
免疫反応性断片或いは組換え体のTAG−72への結合を確
実に行うのに十分な時間及び条件下において行われる。
この第二のインキュベーション後、もう一回の洗浄を行
って固相免疫吸着剤から未結合標識化モノクローナル抗
体、その免疫反応性断片或いは組換え体を除去する。次
いで固相免疫吸着剤に結合した標識化モノクローナル抗
体、その免疫反応性断片或いは組換え体を測定し、検出
された標識化モノクローナル抗体、その免疫反応性断片
或いは組換え体の量が大気中に存在するTAG−72の量の
直接の目安として役立つ。
サンドイッチIRMAは又逆進及び同時モードで行われて
もよい。逆進モードにおいては、インキュベーション混
合物が被試験体液及びTAG−72に向けられた可溶性標識
化モノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換
え体により形成される。この混合物をインキュベート
し、次いで又TAG−72に向けられたモノクローナル抗
体、その免疫反応性断片或いは組換え体を含有する固相
免疫吸着剤と接触させる。もう一回のインキュベーショ
ン後、免疫吸着剤を混合物から分離し、免疫吸着剤に結
合した標識を体液中のTAG−72の表示として採用する。
同時モードにおいては、インキュベーション混合物を
体液、標識化モノクローナル抗体、その免疫反応性断片
或いは組換え体及び固相免疫吸着剤から形成する。十分
な時間のインキュベーション後、固相免疫吸着剤を混合
物から分離し、免疫吸着剤に伴う標識を測定して体液中
のTAG−72の量の表示を与える。
上記各種アッセイモードにおける各インキュベーショ
ン工程に対して、インキュベーション時間及び条件はTA
G−72の固定化モノクローナル抗体、その免疫反応性断
片或いは組換え体及び標識化モノクローナル抗体、その
免疫反応性断片或いは組換え体に対する最大の結合を保
障するように選択されるが、しかし通常室温（22゜〜27
℃）において約６〜16時間である。
上記IRMAに加えて、本発明において有用なその他のイ
ムノアッセイとしては、RIA及び蛍光或いは酵素結合イ
ムノアッセイ（以下「ELISA」）などが挙げられる。RIA
の中で適したタイプのものはSPRIAである。
SPRIAに対しては、固相免疫吸着剤はIRMAについて説
明した如く調製される。
この免疫吸着剤を次いで体液及び公知量の標識化TAG
−72とTAG−72の免疫吸着剤への結合を可能にする時間
及び条件下においてインキュベートする、この免疫吸着
剤を体液から分離し、それに伴う標識の量を評価する。
免疫吸着剤に伴う標識化TAG−72との間の関係を規定す
る予備確立された抑制曲線を参照することにより体液中
の未標識ヒトTAG−72の量が求められる。
各種SPRIAにおいて、免疫吸着剤は体液、標識化抗体
或いは両者を含有するインキュベーション混合物から分
離される。分離は沈降或いは遠心分離などの任意の通常
の分離技術により達成することができる。必須ではない
が、好ましくは免疫吸着剤を必要に応じてそれを第二イ
ンキュベーション培地と接触するに先立ち且つ免疫吸着
剤に伴う標識の量を測定するのに先立ち洗浄するのがよ
い。この洗浄はアッセイの精度及び感度に影響を及ぼす
ことのある非−特異的妨害物質或いは過剰の標識化抗体
を除去する。
上記アッセイにおいて本発明の第二世代モノクローナ
ル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え体或いはTAG
−72を標識化するために用いられる特別の標識は、本発
明に対しては重要ではなく、IRMA及びRIAに対しては
32P、14C、3H、125I、131I、或いは35Sなどの放射性同
位元素或いはフルオレッセン或いはローダミンなどの蛍
光性分子或いは適当な基質の存在下において基質をELIS
Aのための着色生成物に転換する酵素であり得る。その
ような酵素の具体例としては、アルカリホスファターゼ
及びワサビダイコンペルオキシダーゼが挙げられる。
本発明に従うin vitroの診断方法における最終工程と
して、体液中に存在する物質（TAG−72）に結合する第
二世代モノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは
組換え体の量を所定の基底レベルと対比する。
予想されるモノクローナル抗体アッセイ結合の基底レ
ベルの決定はこの種の診断試験の読取りに対して必要な
パラメータを規定するに際して当業者により日常的に行
われる決定である。これらの決定は、ここに示される教
示に照らして不当な実験を行うことなくなされる。
一般的に「基底レベル」は、（１）正常個体数の平均
を越える二つの標準偏差、或いは（２）正常個体数の99
％該当するレベルと規定される。
B. in vivo診断アッセイ 本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応
性断片或いは組換え体を用いるヒト癌腫或いはその転移
のin vivoの診断アッセイを以下により詳細に説明す
る。
像形成マーカーに接合した本発明の第二世代モノクロ
ーナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え体を患者
に投与（或いは引続き第二世代モノクローナル抗体の投
与後マーカー或いはリンカー接合体マーカーを投与）、
次いで患者中の像形成マーカーの存在を、患者をマーカ
ーを検出するための適当な手段に曝すことにより検出す
る。
抗体−像形成マーカー接合体の投与及び検出並びに抗
体の像形成マーカーへの接合方法は、例えば以下に示す
当業者に容易に公知であり或いは容易に決定される方法
により達成される〔Goldberg,et al.,New England J.Me
d.,298:1384−1388（1978）;Goldberg,et al.,J.A.M.
A.,250:630−635（1983）;Goldberg,et al.,Gatstroent
erol.,84:524−532（1983）;Siccardi,et al.,Cancer R
es.,45:4817−4822（1986）;Epenetos,et al.,Cancer,5
5:984−987（1985）;Philben,et al.,Cancer,57:571−5
76（1986）;Chiou,et al.,Cancer Res.,45:6140−6146
（1985）;Hwang,et al.,J.Natl.Cancer Inst.,76:849−
855（1986）;Colcher,et al.,Cancer Res.,43:736−742
（1983）;Colcher,et al.,「生物学及び医学免疫診断に
おける実験室研究方法（Laboratory Research Methods
in Biology and medicine Immunodiagnostics）」、New
York,Alan R.Liss,pp.215−258（1983）;Keenan,et a
l.,J.Nucl.Med.,25:1197−1203（1984）;Colcher,et a
l.,Cancer Res.,43:1185−1189（1987）;Esteban,et a
l.,Intl.J.Cancer,39:50−59（1987）;Martin,et al.,C
urr.Surg.,41;193−194（1984）;Martin,et al.,Hybrid
oma,5:S97−S108（1986）；及びMartin,et al.,Am.J.Su
rg.,150:672−675（1985）（これら全ての開示内容は茲
に特に準用する）〕。
投与量は患者の年令及び体重に応じて異るが、しか
し、患者当り約0.1〜20mgの抗体−マーカー接合体の一
回の投与量が十分である。より好ましい投与量は患者当
り約1.0〜2.0mgの抗体−マーカー接合体である。
抗体に接合することのできる像形成マーカーの具体例
は当業者に周知であり、上記文献により説明されている
ようなガンマスキャナー或いは手持ちガンマプローブ或
いはポジトロン・エミッション・トモグラフィー（Posi
tron Emission tomogrphy）などの診断像形成により検
出されることのできる物質及び上記引用文献に記載され
るような核磁気共鳴分光光度計を用いる核磁気共鳴像形
成により検出されることのできる物質などが挙げられ
る。
ガンマスキャナーなどを用いて検出されることのでき
る物質の適当な具体例としては、125I、131I、123I、
111I、及び99mTcなどが挙げられる。111Tn及び99mTcが
それらの低エネルギー及び長範囲検出用の適性により好
ましい。
核磁気共鳴分光光度計などを用いて検出されることの
できる物質の一例は、核磁気スピン−共鳴同位体ガドリ
ニウム（Gd）である。
C. in vivo治療 本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応
性断片或いは組換え体を用いるヒト癌腫或いはその転移
のin vivo治療を以下により詳細に説明する。
薬学的に有効量の治療剤に未接合或いは接合した本発
明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応性断片
或いは組換え体を患者に投与する。
モノクローナル抗体−治療剤接合体の調製及び投与方
法並びに適当な投与量は、患者の年令及び体重及び用い
られる治療剤に応じて異り、当業者に周知であるか或い
は容易に決定される。代表的な実験方法は以下に引用す
る文献に記載されている。
治療に用いることのできるモノクローナル抗体−治療
剤の具体例としては、131T、90Y、105Rh、47Sc、67Cu、
212Bi、及び211Atなどの放射線核腫にカップリングした
抗体〔Goldenberg,et al.,Cancer Res.,41:4354−4360
（1981）;Carrasquillo,et al.,Cancer Treat.Rep.,68:
317−328（1984）;Zalcberg,et al.,J.Natl.Cancer Ins
t.,72:697−704（1984）;Jones,et al.,Int.J.Cancer,3
5:715−720（1985）;Lange,et al.,Surgery,98:143−15
0（1985）;Kaltovich,et al.,J.Nucl.Med.,27:897（198
6）;Order,et al.,Intl.J.Radiother.Oncl.Biol.Phys.,
8:259−261（1982）;Courtenay−Luck,et al.,Lancet,
1:1441−1443（1983）；及びEttinger,et al.,Cancer T
reat.Rep.,66:289−297（1982）に記載されており、そ
れらの全開示内容は茲に特に準用する〕；メトトレキセ
ート、アドリアマイシン及びインターフェロンなどのそ
の他の薬品或いは生物学的応答変成剤にカップリングし
た抗体〔例えば、Chabner,et al.,「癌、腫瘍学の原理
及び実践（Cancer,Principles and Practice of Oncolo
gy）」Philadelphia,PA,J.B.Lippincott Co.,Vol.1,pp.
290−328（1985）;Oldham,et al.,「癌、腫瘍学の原理
及び実践（Cancer,Principles and Practice of Oncolo
gy）」、Philadelphia,PA,J.B.Lippincott Co.,Vol.2,p
p.2223−2245（1985）;Deguchi,et al.,Cancer Res.,4
6:3751−3755（1986）;Deguchi,et al.,Fed.Proc.,44:1
684（1985）;Embleton,et al.,Br.J.Cancer,49:559−56
5（1984）；及びPimm,et al.,Cancer Immunol.Immunoth
er.,12:125−134（1982）に記載され、それらの開示内
容は全て特に茲に準用する〕；毒素にカップリングした
抗体〔例えば、Uhr,et al.,「モノクローナル抗体及び
癌（Monoclonal Antibodies and Cancer）」,Academic
Press,Inc.,pp.85−98（1983）;Vitetta,et al.,「バイ
オ技術及びバイオ新領域（Biotechnology and Bio.Fron
tiers）」、P.H.Abelson編、pp.73−85（1984）；及びV
itetta,et al.,Sci.,219:644−6540（1983）に記載さ
れ、その開示内容は全て特に茲に準用する〕；ヘテロ二
官能性抗体、例えば複合体が癌腫及びエフェクター細
胞、例えばＴ細胞などのキラー細胞の両者に結合するよ
うにもう一つの抗体とカップリング或いは組合わされた
抗体〔例えば、Perez,et al.,J.Exper,Med.,163:166−1
78（1986）；及びLau,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,
81:8648−8652（1985）に記載されており、その開示内
容は共に茲に特に準用する〕；及び自生の、即ち非−接
合或いは非−複合化抗体〔例えば、Herlym,et al.,Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA,79:4761−4765（1982）;Schulz,e
t al.,Proc.Natl.Acad Sci.USA,80:5407−5411（198
3）;Capone,et al.,Proc.Natl.,Acad.Sci.USA,80:7328
−7332（1983）;Sears,et al.,Cancer Res.,45:5910−5
913（1985）;Nepom,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,8
1:2864−2867（1984）;Koprowski,et al.,Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA,81:216−219（1984）；及びHoughton,et a
l.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:1242−1246（1985）に
記載されており、その全ては茲に特に準用する〕などが
挙げられる。
この方法においては、モノクローナル抗体−治療剤接
合体を癌腫部位に投与して、癌腫組織を直接に治療剤に
曝すことができる。
D.免疫組織化学及び免疫細胞化学アッセイ 本発明の第二世代モノクローナル抗体を用いるヒト癌
腫或いは転移の診断のための或いは示差診断を行うため
の免疫組織化学（以下「IHC」）及び免疫細胞化学（以
下「ICC」）アッセイは以下に詳細に説明するようにし
て行われる。
本発明の第二世代モノクローナル抗体を生検標本（IH
Cについて）或いは体液（例えば胸膜滲出物、腹水、唾
液或いは腟液）からの細胞（ICCについて）の５μ部分
を含有するスライドに添加する。一連のリンカー（ビオ
チニル化ウマ抗−マウスIgG後アビジンDH:ビオチニル化
ワサビダイコンペルオキシダーゼ複合体）及び染料
（例、ジアミノベンジジン）を次いでスライドに添加し
て色反応により第二世代モノクローナル抗体、その免疫
反応性断片或いは組換え体と生検或いは体液中の癌腫細
胞との結合を検出する。即ち、癌腫細胞は常態のままで
は赤褐色に見えるのに対し、良性細胞は青色（バックグ
ラウンド染色）に見える。茲に準用される文献〔Sternb
erger,「免疫細胞化学」（Immunocytochemistry）」New
York,John Wiley ＆ Sons,第二版、pp.82−169（197
9）参照〕に記載されているようなその他のリンカー、
染料及び引続く色反応を勿論適用してよい。この方法に
より、（ａ）癌腫細胞が癌の診断を行う補助として生検
標本及び体液内に検出することができ、及び（ｂ）示差
診断を行うことができる、例えばTAG−72は肺の腺癌及
び肺の腺鱗状癌腫に存在するがしかし小細胞癌腫には存
在しないことが示されている。即ち、本発明の第二世代
モノクローナル抗体、その免疫反応性断片或いは組換え
体の肺生検に対する結合の検出は小細胞肺癌を除外す
る。更にTAG−72は悪性の中皮腫には発現されないこと
が示されているので、本発明の第二世代モノクローナル
抗体は、従って肺の腺癌を悪性の中皮腫から区別するこ
とに用いることができる。
癌の診断のための或いは示差診断を行うためのIHC及
びICCアッセイの使用は例えば次の文献に記載されてい
るようにして、当業者に公知であるか容易に決定される
方法により達成される〔例えば、Nuti,et al.,Intl.J.C
ancer,29:539−545（1982）;Stramignoni,et al.,Intl.
J.Cancer,31:543−552（1983）;Szpak,et al.,Acta Cyt
ologica,28:356−367（1984）;Johnston,et al.,Cancer
Res.,45:1894−1900（1985）;Szpak,et al.,Am.J.Pat
h.,122:252−260（1986）;Martin,et al.,Am.J.Clin.Pa
th.,86:10−18（1986）;Nuti,et al.,Intl.J.Cancer,3
7:493−498（1986）;Johnston,et al.,Cancer Res.,46:
850−857（1986）;Thor,et al.,Cancer Res.,46:3118−
3124（1986）;Ohuchi,et al.,Intl.J.Cancer,38:643−6
50（1986）;Johnston,et al.,Cancer Res.,45:6462−64
70（1986）；及びThor,et al.,Cancer Res.,47:505−51
2（1987）（これらの開示内容は全て茲に特に準用す
る）〕。
スライド当り用いられる本発明の第二世代モノクロー
ナル抗体の量及びインキュベーション時間及び温度は変
えられてよいが、しかし通常IHC及びICCアッセイは約40
μg/mlのモノクローナル抗体を用いて約４℃で約18時間
行われる。
E.抗−イディオタイプ網目の活性化 本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応
性断片或いは組換え体を用いる癌治療のための抗−イデ
ィオタイプ網目の活性化は以下に詳細に説明されるよう
に行われる。
本発明の第二世代モノクローナル抗体、その免疫反応
性断片或いは組換え体（Ab1と命名される）を多間隔で
患者に投与する。患者の免疫系はAb1の結合部位に結合
特異性を有する抗体（Ab2と命名される）の発生により
応答する。これらの抗−イディオタイプ抗体（Ab2）は
次いでAb2の結合部位に結合特異性を有する抗体（Ab3b
と命名される）の形成を顕在下する。Ab2抗体は元のTAG
−72の内部像であり、従ってAb3抗体は結合特異性を有
し、且つ潜在的に癌腫産生TAG−72を破壊する。
イディオタイプ網目を活性化するモノクローナル抗体
の使用及びこれを達成するために用いられる操作は、例
えば次の文献に記載されるように当業者に容易に公知で
あるか容易に決定される〔Nisonoff,et al.,Clin.Immun
ol.and Path.,21;397−406（1981）;Forstrom,et al.,N
ature,303:627−629（1983）;Kauffman,et al.,J.Immun
ol,131:2539−2541（1983）;Reagen,et al.,J.Virol.,4
8:660−666（1983）;Koprowski,et al.,Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA,81:216−219（1984）;Herlyn,et al.,J.Immu
nol.,143:1300−1304（1985）;Koprowski,et al.,J.Imm
unol.Metho.,85:27−38（1985）;Koprowski,et al.,Sci
ence,232:100−102（1985）;Greene,et al.,J.Immuno
l.,137:2930−2936（1986）;Kohler,et al.,J.Immuno
l.,137:1743−1749（1986）;Notkins,et al.,J.Exp.Me
d.,163:1355−1360（1986）（これらの開示内容は全て
茲に特に準用する）〕。
抗−イディオタイプ網目の活性化を用いて患者が癌腫
産生TAG−72に対して活性免疫応答を装備できるように
患者の免疫系を刺戟することができる。
以下の具体例は例示を目的としてのみ提供されるもの
であり、本発明の範囲を制限する趣旨のものではない。
例１ モノクローナル抗体の調製 A.免疫原の調製 LS−174T結腸癌腫細胞（ATCC No.CRL−188）を、10
％（v/v）熱−不活性化ウシ胎児血清、100単位/mlペニ
シリン及び100μg/mlストレプトマイシンを補給した非
−必須アミノ酸を有するEagleの最少必須培地中におい
て生育した。これらのLS−174T細胞をマイコプラズマ
（Mycoplasma）種の存在について試験を行ったところ陰
性であることが判明した。
４週令のメス無胸腺マウスに0.1mlの培養培地中の１
×106個のLS−174T細胞を皮下接種した。癌腫異種移植
片をそれらが約1.0cm直径に到達した時点（細胞移植後1
5〜20日後）で採取して、液体窒素中に迅速凍結し、−7
0℃に貯蔵した。大きな癌腫異種移植片は壊死のために
用いられなかった。
その後、約3gの凍結LS−174Tヒト癌腫異種移植片をを
20mM Tris（pH7.2）及び150mM Naclを含んでなる緩衝
液（以下「TBS」）中においてOmniミキサーで45秒ホモ
ジナイズした。ホモジナイズされた異種移植片を次いで
ガラスウールを通して濾過し、予めTBS中にいて平衡化
したSepharose CL−4Bカラムサイジングカラム（Pharm
acia,Upsala,Sweden）（5.5×25cm）にかけた。このカ
ラムをTBS（pH7.2）を用いて溶出した。
7.0mlの画分を集め、直接結合アッセイ1/10容稀釈液
中で調べた。即ち、50μの稀釈液を96−ウエルのポリ
塩化ビニルマイクロタイタープレート（Dynatech Labor
atories,Inc.,Alexandriva VA）のウエルに添加した。
非特異的タンパク質吸着を最少にするために、これらの
マイクロタイターウエルを8.0mM Na2HPO4、2.5mM KC
l、140mM NaCl、0.5mM MgCl2、1.0mM CaCl2を含んで
なるリン酸緩衝化塩水（pH7.2）（以下「PBS」）中の、
100μの5.0％ウシ血清アルブミン（以下「BSA」）で
処理し、37℃で１時間インキュベートした。次いて、BS
Aを除去し、Colcher,et al.,Cancer Res.,44:5744−575
1（1984）に記載されるようにして、ウエル当り50,000c
pm/25μで調製された125I−B72.3を各ウエルに添加し
た。４℃における一晩のインキュベーション後、未結合
125I−B72.3をPBS中1.0％BSA（v/v）で洗浄することに
より除去した。結合125I−B72.3は個々のウエルをプレ
ートから切取り、放射能をガンマカウンター（RIAgamm
a,LKB,Bromma,Sweden）中において測定することにより
検出した。
その後、ピーク画分をプールし（130mlの材料）、TBS
で洗浄されたB72.3アフィニティカラムにかけた。このB
72.3アフィニティカラムはJohnson,et al.,Cancer Re
s.,46:850−857（1986）に記載されるようにして調製さ
れ、200mgのB72.3とカップリングされた100mlの1,1′−
カルボニルジイミダゾール活性化アフィニティマトリッ
クスReacta−Gel HW65F（Pierce,Rockford,IL）をを含
んでなるものであった。このカラムをTBSで洗浄し、結
合タンパク質をTBS中3.0M NaIで溶出した。このカラム
を最終的にTBSで洗浄した。
5.0mlの画分を集め、上記の如く行われた第二の直接
結合アッセイにおいて調べた。ピーク画分をプールし
（92mlのタンパク質）、４℃で一晩4.0の20mM Tris
（pH7.2）に対して透析した。このようにして得られた
精製TAG−72をカルボキシメチルセルロースのナトリウ
ム塩であるAquacide II（Calbiochem,San Diego,CA）中
で濃縮して免疫原として用いた。
B.免疫化 1.CC群 以下にCCと命名される群として、３匹の４週令のBALB
/cマウスを、等容量の完全フロイントのアジュバントと
予備混合された上記の如く精製された10μｇのTAG−72
を腹腔内接種することにより免疫化した。80日後、これ
らのマウスは等容の不完全フロイントのアジュバントと
予備混合された上記の如く精製された50gのTAG−72のブ
ースター投与量を腹腔内に受取った。７日後、これらの
マウスは静脈内接種により塩水中10μｇのTAG−72を受
取った。脾臓を３日後細胞注入のために採取した。
2.MATAG群 以下にMATAGと命名される群として、２匹の４週令のB
ALB/cマウスを、等容量の完全フロイントのアジュバン
トで予備混合された上記の如く精製された50μｇのTAG
−72を腹腔内接種することにより免疫化した。７日後、
これらのマウスは等容量の不完全フロイントのアジュバ
ントで予備混合された上記の如く精製された50μｇのTA
G−72のブースター投与量を腹腔内に受取った。７日
後、これらのマウスは静脈内接種により塩水中10μｇの
TAG−72を受取った。脾臓を３日後細胞融合のために採
取した。
C.ハイブリドーマの調製 体細胞のハイブリッド（ハイブリドーマ）をHerzenbe
rg,等の「実験免疫学便覧（Handbook of Experimental
Immunology）」（Oxford,Blackwell,pp.25.1−25.7（19
78））の方法の修正法を用いて調製した。即ち、免疫化
マウスからの脾臓細胞の単細胞浮遊液をマウスの脾臓組
織をNo.3メッシュステンレススクリーン（B.Fenenco C
o.,Inc.,Norcester,MA）を通すことにより作製した。こ
れらの脾臓細胞及びNS−１マウス骨髄腫細胞（ATCC N
o.TIB−18）を2.0mMグルタミン、1.0mMピルビン酸ナト
リウム、50単位/mlのペニシリン、50μg/mlのストレプ
トマイシン及び0.25μg/mlの抗真菌混合物であるFungiz
one（Grand Island Biological Company,Grand Island,
NY）を含有するRPMI−1640培地中で洗浄した。次いで脾
臓細胞及びNS−１マウス骨髄腫細胞を4:1の比率で混合
し、50％（v/v）ポリエチレングリコール（分子量150
0）（BDH Chemical Ltd.,Poole,England）を用いて融合
した。融合後、96−ウエルのマイクロタイタープレート
（Costar,Cambridge,MA）の個々のウエルに１×106個の
全細胞数（0.1ml）の細胞浮遊液を播種した。融合細胞
を次いでHAT培地を用いる生育のために選択した。
ハイブリドーマ細胞系のクローニングは限界稀釈法に
より行った。即ち、96−ウエルマイクロタイタープレー
ト（Costar,Cambridge,MA）の24個のウエルに次の濃度
のハイブリドーマ細胞の一つを播種した:10細胞／ウエ
ル、５細胞／ウエル、1.0細胞／ウエル、或いは0.5細胞
／ウエル。４週令のBALB/cマウスの胸腺から得られたマ
ウス胸腺細胞を106細胞／ウエルの濃度でフィーダー細
胞として各ウエルに添加した。ウエルは最終的に単細胞
培養液の生育を生ずる濃度で播種された。
CC群については合計2.567の初期ハイブリドーマ培養
物が得られ、MATAG群については合計2000の初期ハイブ
リドーマ培養物が得られた。更にスクリーニングのため
に選ばれた全てのハイブリドーマ細胞系を２回クローニ
ングした。
D.固相ラジオイムノアッセイ 1.CC群 CC群を転移乳癌及び正常脾臓及び肝臓からの細胞抽出
物を用いてSPRIAにおいてアッセイした。
即ち、50μの細胞抽出物（５μｇ）をCooke丸底ポ
リ塩化ビニルマイクロタイター（Dynatech Loboratorie
s,Alexandria,VA）の各ウエルに添加し、乾燥させた。
非−特異的タンパク質吸着を最少にするために、マイク
ロタイターウエルをPBS中100の5.0％（v/v）BSAで処
理し、試料を被覆して１時間インキュベートした。この
インキュベーション及び全ての引続くインキュベーショ
ンは37℃で行われた。BSAを次いで除去し、ウエルを１
回PBS中1.0％（v/v）BSAで洗浄した。次いで、50μの
ハイブリドーマ上澄液をウエル当り添加した。１時間イ
ンキュベーション後、未結合イムノグロブリンをプレー
トをPBS中1.0％（v/v）BSAで100μ／ウエル／洗浄で
３回洗浄することにより除去した。
抗体結合を決定するために、ウエルを次いで25μの
125I−ヤギ−抗−マウスIgG（γ鎖特異性）（Kirkegaar
d ＆ Perry,Gaithersburg,MD）でウエル当り75,000cpm/
25μにて37℃で１時間インキュベートした。上澄液を
吸引し、プレートをPBS中1.0％（v/v）で100μ／ウエ
ル／洗浄にて４回洗浄した。
これらのプレートを次いでKodak XARフィルム及びDup
ont Lightning−Plus補力スクリーンを用いるオートラ
ジオグラフィに付した。これらのフィルムを16時間後、
−70℃で現像した。結合cpmは又プレートから個々のウ
エルを切取りcpmをガンマカウンター中で測定すること
により検出した。
結果はSPRIAにおいて癌腫抽出物に特異性を有する
が、しかし正常抽出物には有さない433個のCC培養物を
もたらした。
これらの433個のCC培養物を次いで下記表Ｉに示され
る細胞抽出物を用いて上記の如くSPRIAにてアッセイし
た。
これらの結果、SPRIAにおいて癌腫抽出物に対して特
異性を有するが、しかし上記表１に掲げた正常抽出物に
対しては有さない99個のCC培養物をもたらした。
次いで、全ての99個の培養物を9504個のウエル中にク
ローニングし、各ウエルについて単一コロニーの生育を
チェックした。単一コロニーを有するウエルを更にアッ
セイのために選択した。選択されたウエルをヒト乳癌及
び一次結腸癌腫並びに正常肝臓の抽出物を用いて上記の
如くSPRIAでアッセイした。SPRIAにおいて、癌腫抽出物
に対して特異性を有するが、しかし、正常肝臓抽出物に
対しては有さないコロニーを再クローニングし、再びSP
RIAにおいて結腸癌腫抽出物に対して結合特異性を有す
るがしかし正常肝臓抽出物に対しては有しないことにつ
いてアッセイした。この結果、結腸癌腫に対しては結合
特異性を有するがしかし正常肝臓抽出物については有し
ない29個のCCモノクローナル抗体が得られた（第１図参
照）。
第１図に示される29個のCCモノクローナル抗体の全て
は、直腸腺癌腫の抽出物に対して結合特異性を示すが、
しかし次の正常及び／又は良性組織の抽出物に対しては
結合特異性に欠ける：結腸（表面杯状細胞に対して最少
結合特異性），卵巣、胃（腸変質形成の杯状細胞に対し
て最少の結合特異性）、内子宮頸（腺表皮に対する最少
結合特異性）、脳、腎臓、脾臓、肺（表皮に対する最少
結合特異性）、皮膚（皮脂様腺上皮にする最少結合特異
性）、肝臓、前立腺、子宮（分泌相子宮内膜のみに対す
る結合特異性）、副腎、膵臓、心臓、リンパ節、骨髄、
乳房及び小腸（表面粘膜細胞に対する最少結合特異
性）。
そのように産生された29個のCCモノクローナル抗体の
うち、好ましいモノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマをAmerican Type Culture CollectionにCC49（AT
CC No.HB−9459;CC83（ATCC No.HB−9454）;CC30（AT
CC No.HB−9457）;CC11（ATCC No.HB−9455）；及びC
C15（ATCC No.HB−9460）の下に寄託した。
2.MATAG群 MATAG群を抗体の結合を検出するために、50μのウ
サギ−抗−マウスIgM（Cooper Biomedical,Malvern,P
A）を各ウエルに添加した以外は、ウエル当り1/80稀釈
率のPBS中のTAG−72を用いてCC群について本質的に上記
したと同様にしてSPRIAにおいてアッセイした。これら
のプレートを37℃で１時間インキュベート後、125I−標
識化タンパク質Ａ（SPA）（Pharmacia,Upsala,Sweden）
を50000cpm/25μにてウエル当り添加し、再37℃で１
時間インキュベートさせた。未結合SPAをPBS中1.0％（v
/v）BSAで十分に洗浄して除去した。
TAG−72及びPBSを用いてアッセイした2000個のMATAG
培養物のうち、110個はTAT−72に対する結合特異性を有
することが判明した。TAG−72を用いる、上記の如くSPR
IAにおいて更にクローニング及びアッセイを行ったとこ
ろ、結腸癌抽出物及びTAG−72に対して結合特異性を有
するが、しかし、正常肝臓抽出物については有さない34
個の培養物を得た。これらを3264個のウエルにクローニ
ングし、元の34個の培養物の各々の20ウエルのアッセイ
を上記と同様にしてSPRIAにおいてTAG−72及びPBSを用
いてアッセイした。これによりTAG−72に結合特異性を
有する23個の培養物が得られた。これらの23個の培養物
を引続き生育させ、更に正常脾臓及び正常肝臓に対する
結合特異性の欠乏、及び転移乳癌抽出物に対する結合特
異性について、上記の如くSPRIAにおいて更にアッセイ
し又TAG−72及びPBSを用いて上記の如くSPRIAにおいて
アッセイした。これらの結果は、癌腫瘍抽出物及びTAG
−72に結合特異性を示すがしかし正常抽出物には示さな
い15個の培養物をもたらした。これらの培養物を次いで
上記の如くSPRIA中において再クローニング及び再アッ
セイして15個のMATAGモノクローナル抗体を生成した
（第１図参照）。
第１図に示される全てのMATAGモノクローナル抗体は
卵巣癌腫、結腸腺癌腫、乳房の浸潤脈管癌腫瘍、非−小
細胞排癌腫に対しては結合特異性を示すが、しかし、次
の正常及び又は良性組織の抽出物に対しては結合特異性
を欠く：結腸（粘膜杯状細胞に対する最少結合特異
性）、卵巣、良性滲出液（リンパ球及び中皮細胞に対す
る最少結合特異性）、肺（気管上皮に対する最少結合特
異性）、脾臓、肝臓、乳房、腎臓、骨髄、胃（（表面上
皮に対する最少結合特異性）、皮膚、神経、上皮小体、
心臓、膵臓、リンパ節、副腎、甲状線、小腸（表面粘膜
に対する最少結合特異性）、脳、胆嚢、子宮頸、子宮
（子宮内膜の分泌相のみに対する結合特異性）、子宮内
膜（子宮内膜腺上皮に対する最少結合特異性）、膀胱、
虫垂、ラッパ管、筋肉、唾液腺、胸腺、精巣及び食道。
そのように産生された15個のMATAGモノクローナル抗
体のうち、ハイブリドーマ産生MATAG12が好ましく、Ame
rican Type Culture CollectionにMATAG 12（ATCC N
o.HB−9456）の下に寄託された。
例２ アイソタイプ決定アッセイ 1.CC群 CC群として、50μのポリクローナル抗−マウスIgG
（Jackson Immunoresaerch Laboratouies,Inc.,West Gr
ove,PA）を96−ウエルのポリ塩化ビニル（Dynateah Lab
oratories,Alexandria,VA）マイクロタイタープレート
に吸着させた。IgGをPBSで稀釈した。これらのプレート
を37℃で一晩インキュベートした。翌日、100μのPBS
中の5.0％（w/v）BSAを各ウエルに添加し、１時間イン
キュベートさせて非−特異的吸着を最少にした。これら
のウエルを次いでPBS中1.0％（w/v）BSAで洗浄した。５
μの未稀釈CC培養上澄液を二つのウエルの各々に添加
した。これらのプレートを再び37℃で１時間インキュベ
ート後、PBS中1.0％（w/v）BSAで３回洗浄した。ウサギ
−抗−マウスIgG1、IgG2b、IgG3、IgM、IgA（Cooper Bi
omedical,Malvern,PA）DC−12（NIH、NCI、LTIB）及びP
BS中対照1.0（w/v）BSAをウエル当り50μで添加し
た。１時間のインキュベーション後、プレートを上記の
如く３回洗浄した。次いで、50,000cpmの125I−標識化
タンパク質Ａ（SPA）を各ウエルに添加し、１時間イン
キュベートし、PBS中1.0％（w/v）BSAで４回洗浄し、ウ
エル当りのcpmをガンマカウンター中で計数した。結果
を第１図に示す。
2.MATAG群 MATAG群として、アイソタイプを、CC群について上記
したのと本質的に同様にして、平行アッセイにより決定
した。しかしながら、検出のために、125I−標識化タン
パク質Ａ（SPA）に代えて、一方のアッセイは125I−標
識化ヤギ−抗−マウスIgG（Kirkegaard ＆ Perry,Gaith
ersburg,MD）を用い、他方のアッセイは125I−標識化ヤ
ギ−抗−マウスIgM（Kirkegaard ＆ Perry,Gaithersbur
g,MD）を用いた。
このMATAG群は、更に高速液体クロマトグラフィ（以
下「HPLC」）分析によりそれらの五量体構造を特性化し
た。HPLC分析は0.2Mリン酸ナトリウム（pH6.8）中で平
衡化したZorbax GF−450カラム、0.94×25cm（Dupont,
Wilmington,DE）を用いて行った。100μのMATAG培養
上澄液をカラムにかけ、カラムを0.5ml/分の流速で運転
し、0.5ml画分を１分間隔で集めた。これらの画分につ
いて上記の如くアイソタイプを分析した。結果を第１図
に示す。
例３ 競争RIA 競争RIAはB72.3及び本発明のCCモノクローナル抗体が
異った抗原決定基を認識するか否かを決定するために行
われた。即ち、B72.3及びCCモノクローナル抗体につい
てそれらのLS−174T結腸癌腫細胞の抽出物に対する125I
−標識化B72.3の結合に対して競争する能力を次のよう
にしてアッセイした。
5.0μｇのLS−174T結腸癌腫細胞抽出物をポリ塩化ビ
ニルマイクロタイタプレート（Dynatech Laboratories,
Alexandria,VA）の各ウエルに吸着させ、各種量の競争C
Cモノクローナル抗体（10μg/μ〜0.004μg/μ）を
添加して結合部位を飽和した。４℃で６時間インキュベ
ーション後、50,000cpm/25μの125I−B72.3を各ウエ
ルに添加し、４℃で12時間インキュベートした。結合
125I−B72.3を個々のウエルを切取りウエル内のcpmをガ
ンマカウンターで測定することにより求めた。競争体と
しての飽和量のB72.3で予備インキュベートしたウエル
内のcpmを100％競争率と考えた。結果を第2A、2C、2E及
び2G図に示す。第2A図において、CC41を競争抗体として
用いた。第2C図においてはCC60を競争抗体として用い
た。第2E図においてはCC83を競争抗体として用いた。第
2Gにおいては、CC49を競争抗体として用いた。
第2A及び2C図に示される如く、CC41及びCC60はB72.3
とは全く競争しなかった。これはCC41及びCC60がB72.3
に対するよりもTAG−72上の異ったエピトープに対して
特異性を有することを示す。第2E及び2G図に示される如
く、CC83及びCC49はB72.3と部分的に競争する。これ
は、CC83及びCC49により認識されるエピトープがTAG−7
2分子上のB72.3エピトープと部分的（しかし完全ではな
い）相同性を共有するか、或いは、CC83及びCC49エピト
ープがB72.3エピトープと区別されるが、しかし、近く
にあって立体的障害を生ずることを示す。
その後、CC49がB72.3、CC30、CC46、及びCC83と同一
或いは異った抗原決定基を認識するか否かを決定するた
めに競争RIAを行った。即ち、これらの抗体について上
記の如きLS−174T結腸癌腫細胞の抽出物に対する125I−
標識化CC49の結合に対するそれらの競争能力をアッセイ
した。得られた結果を第３図に示す。第３図は、（１）
モノクローナル抗体CC46及びB72.3により認識されるTAG
−72上のエピトープは、モノクローナル抗体CC49により
認識されるエピトープと殆んど全く相同性を共有しな
い； （２）CC83により認識されるエピトープはCC49により認
識されるそれと相当な相同性を有するが、しかしCC83曲
線の変位により示されるように同一ではない；及び
（３）モノクローナル抗体CC30により認識されるエピト
ープはCC49により認識されるそれと部分的相同性を共有
するか或いはCC49のそれと区別されるが、しかし近い位
置にあって立体障害を生ずることを示している。
例４ 結合親和性 TAG−72に対する本発明の第二世代モノクローナル抗
体の結合親和性（親和性定数）をHeyman等のJ.Immunol.
Methods,68:193−204（1984）の操作の修正方法を用い
るSPRIAにより決定した。即ち、PBS中280単位/mlの濃度
に稀釈した（単位数はPaterson et al.,intl.J.Cancer,
37:659−666（1986）に記載される如く決定した）30μ
の精製TAG−72を96ウエルのポリ塩化ビニルマイクロ
タイタープレート（Dynatech Laboratories,Alexandri
a,VA）で乾燥した。残存非−特異的活性基をPBS中5.0％
（v/v）BSAで保護した。次いで下記表２に示される精製
モノクローナル抗体（Colcher,et al.,Cancer Res.,44:
5744−5751（1984）に記載されるようにして精製）の1:
1.5を逐次稀釈液20μを1.0μg/mlから出発してウエル
に添加した。４℃で一晩インキュベート後、プレートを
PBS中1.0％（v/v）BSAで３回洗浄した。次いで125I−標
識ヤギ−抗−マウスIgG（Kirkegaard ＆ Perry,Gaithrs
burg,MD）をウエル当り75,000cpm/25μで添加し、37
℃で１時間反応させた。PBS中1.0％（v/v）BSAで３回洗
浄後、個々のウエル中のcpmを上記の如く計数した。
cpm値を結合モノクローナル抗体の濃度に変換するた
めに、TAG−72と共にインキュベートされたが、しか
し、それに結合されなかった上澄液中の残存遊離モノク
ローナル抗体を4.0g/mlのヒツジ抗−マウスIgG（Jackso
n Immunoresearch Laboratories,Inc.,West Grove,PA）
で予備被覆されたもう一つの96ウエルポリ塩化ビニルマ
イクロタイタープレート上でインキュベートし、125I−
標識化ヤギ抗−マウスIgG（Kirkegaard ＆ Perry,Gaith
ersburg,MD）を用いて検出した。このようにして、上澄
液中に遊離モノクローナル抗体が存在しない濃度を、各
モノクローナル抗体について決定した。これらのデータ
からコンピュータ曲線から得られ、各モノクローナル抗
体の結合親和性定数を決定した。これらの結果を下記表
２に示す。
表２は、第二世代モノクローナル抗体CC46、CC30、CC
15、CC29、CC92、CC49及びCC83は全て第一世代モノクロ
ーナル抗体B72.3よりも高い結合親和性定数を有するこ
とを示している。
このCC群をLS−174T細胞系及び転移乳癌腫からの細胞
抽出物を用いたSPRIAにおいてアッセイした。50μの
細胞抽出物（５μｇ）をCook丸底ポリ塩化ビニルマイク
ロタイタープレート（Dynatech Laboratories,Alexandr
ia,VA）の各ウエルに添加し乾燥させた。非−特異的タ
ンパク質吸着を最少にするために、マイクロタイターウ
エルを100μのPBS中5.0％（v/v）BSAで処理し、１時
間インキュベーション被覆した。これ及び全ての引続く
インキュベーションは37℃で行った。BSAを次いで除去
し、ウエルをPBS中1.0％（v/v）BSAで１回洗浄した。次
いで50μのハイブリドーマ上澄液及び1:5稀釈率の上
澄液をウエル当り添加した。１時間のインキュベーショ
ン後、未結合イムノグロブリンをプレートをPBS中1.0％
（v/v）BSAで100μ／ウエル／洗浄で３回洗浄するこ
とにより除去した。
抗体結合を決定するために、ウエルを次いで25μの
125I−ヤギ−抗−マウスIgG（ガンマ鎖特異性）（Kirke
gaard ＆ Perry,Gaithersburg,MD）でウエル当り75,000
cpm/25μで37℃で１時間インキュベートした。上澄液
を吸引し、プレートをPBS中1.0％（v/v）BSAで100μ
／ウエル／洗浄にて４回洗浄した。結合cpmを個々のウ
エルをプレートから切取り、CPMをガンマカウンターで
測定することにより検出した。
第2B図に示される如く、CC41はLS抽出物と反応する
が、B72.3は反応しない。第2B図及び表２は、CC41がB7
2.3よりもBr.Ca.に対してより高い結合親和性（曲線の
傾斜）を有することを示していることに注意。第2D図
は、CC60がB72.3と同様にLS抽出物に対して結合特異性
を有しないが、CC60はB72.3よりもBr.Ca.に対してより
高い結合親和性（曲線の傾斜）を有することを示してい
る。第2F図は、、CC83及びB72.3がBr.Ca.抽出物に対し
て同様な結合特性を有するが、しかし、CC83がLS抽出物
に対して高い結合親和性を有するのに対し、B72.3が有
さないことを示す。第2H図は、CC49がLS及びBr.Ca.抽出
物の両者に対して高い結合親和性を有するのに対して、
B72.3はLS抽出物に対して本質的に結合親和性を有さな
いことを示す。
例５ ウエスタンブロッティング 0.125M Tris−HCl（pH6.8）4.0％（w/v）SDS、20％
（v/v）グリセロール及び10％（v/v）２−メルカプトエ
タノールよりなるSDS−PAGE試料緩衝液中で稀釈された4
0μｇのLS−174T細胞抽出物或いはヒト乳癌抽出物を、
３〜12％（v/v）線形勾配SDS−PAGEにかけた。９℃で５
ミリアンプ／ゲルにて８時間電気泳動を行った後、ゲル
を25mM Tris−HCl（pH8.3）、192mMグリシン、20％（v
/v）メタノールを4M尿素及び0.5％Triton−Ｘ−100と共
に含んでなる転移緩衝液で室温で１時間処理した。ゲル
を次いで転移緩衝液で平衡化させ、タンパク質をニトロ
セルロース紙（0.45μｍ孔径）に30Vにおいて４℃で16
時間転移させた。次いで、ニトロセルロース紙をPBS中
0.05％（v/v）Tween−20を有する5.0（w/v）BSAと共に
室温で３時間インキュベートし、PBS中0.05％（w/v）Tw
een−20で洗浄した。次いで、10mlの全てのCC及びMATAG
モノクローナル抗体のハイブリドーマ組織培養上澄液を
添加し、インキュベーションを静かに攪拌しながら室温
で２時間継続した。0.05％（v/v）Tween−20を含有する
PBSで洗浄後、ニトロセルロース紙を室温で125I−標識
化ヤギ−抗−マウスIgG（Kirkegaard ＆ Perry,Gaither
sburg,MD）と共に１時間インキュベートした。このニト
ロセルロース紙を次いで一晩十分に洗浄し、DuPont Lig
htning Plus補力スクリーンを用いて−70℃で２時間Kod
ak XAR−５ Ｘ−線フィルムに曝露した。全ての実験に
ついてNS−１組織培養上澄液を陰性対照例として用い
た。
このウエスタンブロッティングアナリシスはCC及びMA
TAG抗体の５〜12％の分解ゲルを有する積層ゲルの分解
ゲルに約1cm侵入した界面において始まる拡散バンドに
対する反応性を示した。この拡散バンドは高分子量TAG
−72ムチン−様分子と一致する。この高分子量バンドは
試験された全てのCC及びMATAG抗体に観察され、LS−174
T細胞系抽出物及びヒト乳癌転移抽出物の両者に検出さ
れた。
例６ 免疫ペルオキシダーゼ研究 スライド上のホルマリン−固定或いは凍結組織断片の
5.0μ断片を用いた。固定組織をキシレン中で脱パラフ
ィンさせ、等級化H2O/エタノール濯ぎ液中で水和させ
た。メタノール中0.3％（v/v）H2O2による15分間のイン
キュベーションを用いて内因性ペルオキシダーゼ活性を
ブロックした。Ca+2及びMg+2なしにPBS中で濯いだ後ス
ライドをMATAGと命名した抗体について1:10（v/v）の正
常ヤギ血清の稀釈液と15分間インキュベートした。この
インキュベーション及び全ての引続くインキュベーショ
ンは室温で行われたが、但し、一次MATAG抗体は４℃で1
6時間のインキュベーションが行われた。正常なブロッ
キング血清を除去し、モノクローナル抗体の未稀釈組織
培養上澄液を組織断片上に置き、スライドを一晩インキ
ュベートした。上澄液のIgMを除去し、スライドをCa+2
及びMg+2のないPBS中で15分間濯いだ。MATAGと命名され
た抗体について、1:167（v/v）の稀釈のビオチニル化ヤ
ギ抗−ネズミIgG（Vector Laboratories,Inc.）の稀釈
率で組織断片の各々に添加し、30分間インキュベートさ
せた。これらのスライドを再びCa+2及びMg+2なしにPBS
中で濯ぎ、次いで室温でABC（Vector Laboratories,In
c.）ペルオキシダーゼと30分間インキュベートした。も
う一回PBS濯ぎ後、0.06％（v/v）3,3′−ジアミノベン
ジジン（Sigma Chemical Co.,St.Louis,Mo）を0.01％
（v/v）H2O2と共に５分間添加した。これらの断片を水
中で簡単に濯ぎ、ヘマトキシリンで対比染色し、等級化
エタノール/H2O濯ぎ液中で脱水させ、キシレン中で透明
化し（残存H2Oの除去）、カバースリップ下にPermount
（組織学搭載培地、Fisher Scientific Co.）を用いて
搭載し、光学顕微鏡を用いて検査した。各断片のモノク
ローナル抗体結合を示す赤褐色ジアミノベンジジン沈澱
の存在を評価した。陽性癌腫細胞の概略パーセントは各
モノクローナル抗体で陽性の癌腫細胞の数を全癌腫細胞
数で除し、100をかけて与えられた。結果を下記表３に
示す。
表３に示される如く、B72.3と反応性の腫瘍細胞パー
セントはMATAG−12に対するよりも相当低い。これはMAT
AGが上記癌腫に対してより高い結合特異性従って免疫組
織化学的或いは免疫細胞化学的アッセイ並びに癌のin v
ivo診断及び治療においてより有用であることを示す。
例７ in vivo癌腫試験 下記表４に示すモノクローナル抗体をIodogen（Pierc
e Chemical,Rockford,IL）を用いてNa125Iで標識化し
た。即ち、40μｇの表４に示したモノクローナル抗体を
0.1mlの0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液（pH7.2）で調整
し、次いで12cm×75cmの20μｇのIodogenで被覆された
ガラス管に添加した後、0.5mCiのNa125I（New England
Nuclear,Boston,MA）を添加した。室温で２分間インキ
ュベーション後タンパク質を不溶性Iodogenから除去
し、未導入125Iを10mMリン酸ナトリウム、pH7.2を含ん
でなる緩衝液を用いる10mlカラムSephadex G−25を通す
ゲル過により抗体から分離した。空隙中のこの標識化
モノクローナル抗体をプールし、5.0mM NaIを含有する
10mMリン酸ナトリウム緩衝液（pH7.2）に対して透析し
た。このヨード化実験方法は、5.0〜15μCi/μｇ（約8.
0〜25×106cpm/μｇ）の比活性を有する標識化IgGモノ
クローナル抗体を与えた。
BALB/cバックグラウンド上のメス無胸腺マウス（nu/n
u）を、約４週令にてCharles River,Inc.或いはFrederi
ck Cancer Research Facilityから得た。１週間後、マ
ウスにLS−174Tヒト結腸癌腫細胞（１×106細胞／動
物）を皮下接種した（0.1ml/マウス）。
0.3〜1.5cm直径の癌腫を有する無胸腺マウスに、細胞
の接種後２〜３週間後に上記の如くヨード化した下記表
４に示すモノクローナル抗体のPBS中の1.5μCi（0.1μ
ｇ）の注射を腹腔内に与えた。５匹の群のマウスを各種
時間において放血により殺し、癌腫及び正常組織を切除
及び秤量し、cpmをガンマカウンターで測定した。各組
織のcpm/mgを次いで求め、癌腫に見られたそれと比較し
た。結果を表４及び第4A及び4B図に示す。
第４図に示される如く、B72.3に対する腫瘍への注入
投与量パーセントは、本発明のCC抗体に対するそれより
も相当低い。モノクローナル抗体CC46はB72.3よりも僅
かに高い親和性定数を有するに過ぎないが、表４はCC46
がB72.3よりもin situでヒト腫瘍をねらい打ちするに際
し、明らかにより効率的であることを示している。これ
は本発明の第二世代モノクローナル抗体がモノクローナ
ル抗体B72.3よりもin vivoの癌腫のねらい打ちに対して
より効率的であり、従って、癌のin vivo診断及び治療
においてより有用であることを示している。第4A及び4B
図は、それぞれCC11及びCC46に対する各種時点における
異った結合速度論及び癌種／正常組織比を示す。第4A及
び4B図は、これらのモノクローナル抗体が癌腫を効率的
に結合する能力を有し、長時間（即ち、少なくとも７日
間）癌腫に結合されていることを示している。
例８ モノクローナル抗体の断片化 動物モデル及び臨床試験の両者におけるバイオ分布研
究は、そのままのIgGが正常器官において最少のバック
グラウンドを有する最適の腫瘍局在化を得るための抗体
分子の最良形態でないことを示した。その結果、本発明
の第二世代モノクローナル抗体及びB72.3をペプシンで
断片化する研究がColcher等、Cancer Res.,43:746−742
（1983）に記載されたのと同様にして行われた。得られ
た断片を上記の如く125Iで放射線標識化し、LS−174T結
腸癌腫細胞抽出物を用いて上記の如くSPRIAにて結合特
異性を試験した。結果を表５に示す。
表５に示される如く、CC49のＦ（ab′）２断片は限ら
れた量の抗原を用いてSPRIAにおいて50％より大きい入
力カウント数を結合することができ、又CC46断片は70％
を越える入力活性を結合したのに対し、B72.3から得ら
れた断片は本質的に全ての免疫反応性に欠けた、即ち２
％未満の結合特異性を維持したに過ぎなかった。
本発明の第二世代抗体を生理食塩水、非−毒性緩衝液
などの薬学的に許容可能な非−毒性無菌担体中に含んで
なる医薬組成物も今や可能となった。この医薬組成物中
の該抗体の量は該抗体が特異性親和性或いは中和反応性
を有する抗原との有効な結合を達成するのに十分である
べきである。この医薬組成物は、必要に応じてアジュバ
ント或いは添加剤と共に単一或いは多投与で該抗体を必
須とする宿主に任意の適当な方法で投与される。
本発明を詳細にその特別の実施態様に関して説明した
が、当業者には各種変更及び修正が本発明の趣旨及びそ
の範囲から離れることなくなされ得ることが明らかであ
ろう。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 35/00 Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｄ Ｃ１２Ｎ 5/00 33/577 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｃ１２Ｐ 21/08 33/577 Ａ６１Ｋ 49/02 Ａ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） 微生物の受託番号 ＡＴＣＣ ＨＢ−９４５７ 微生物の受託番号 ＡＴＣＣ ＨＢ−９４５８ 微生物の受託番号 ＡＴＣＣ ＨＢ−９４５９ 微生物の受託番号 ＡＴＣＣ ＨＢ−９４６０ 前置審査 (56)参考文献 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．46（1986) ｐ．3118−3124 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．46（1986) ｐ．850−857 細胞工学 １［１］（1982）ｐ．48− 64 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．131［５ ］（1983）ｐ．2533−2538 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (50)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対し
    て結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対しては
    実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和性
    が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であって、
    該抗体が寄託番号ATCC HB 9459を有するハイブリドー
    マにより産出される抗体CC49である、モノクローナル抗
    体またはその免疫学的に活性な断片。
  2. 【請求項２】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対し
    て結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対しては
    実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和性
    が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であって、
    該抗体が寄託番号ATCC HB 9453を有するハイブリドー
    マにより産出される抗体CC83である、モノクローナル抗
    体またはその免疫学的に活性な断片。
  3. 【請求項３】該抗体がヒト癌腫をin situで標的とする
    に際し、B72.3抗体より約50％多い効率を有する、請求
    項１または２記載のモノクローナル抗体またはその免疫
    学的に活性な断片。
  4. 【請求項４】該抗体が、B72.3と０〜30％の競争率を示
    す、請求項１または２記載のモノクローナル抗体または
    その免疫学的に活性な断片。
  5. 【請求項５】該抗体がIgG2a、IgG2b,IgG3、及びIgMより
    なる群から選ばれるアイソタイプを有する、請求項１ま
    たは２記載のモノクローナル抗体またはその免疫学的に
    活性な断片。
  6. 【請求項６】該抗体が標識、腫瘍検出マーカー、または
    治療剤に結合されてなる、請求項１または２記載のモノ
    クローナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  7. 【請求項７】該標識が放射性同位元素、螢光性分子、及
    び酵素よりなる群から選ばれる、請求項６記載のモノク
    ローナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  8. 【請求項８】該放射性同位元素が32P、14C、3H、125I、
    及び35Sよりなる群から選ばれる、請求項７記載のモノ
    クローナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  9. 【請求項９】該螢光性分子がフルオレシン及びローダミ
    ンよりなる群から選ばれる、請求項７記載のモノクロー
    ナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  10. 【請求項１０】該酵素がアルカリホスファターゼ及びワ
    サビダイコンペルオキシダーゼよりなる群から選ばれ
    る、請求項７記載のモノクローナル抗体またはその免疫
    学的に活性な断片。
  11. 【請求項１１】該腫瘍検出マーカーが125I、131I、
    123I、111In、67Ga、99mTc及びGdよりなる群から選ばれ
    る、請求項６記載のモノクローナル抗体またはその免疫
    学的に活帷な断片。
  12. 【請求項１２】該治療剤が放射線核種、医薬、毒素及び
    第二抗体より選ばれる請求項６記載のモノクローナル抗
    体またはその免疫学的に活性な断片。
  13. 【請求項１３】該放射線核種が131I、90Y、105Rh、47S
    c、67Cu、212Bi及び211Atよりなる群から選ばれる、請
    求項12記載のモノクローナル抗体またはその免疫学的に
    活性な断片。
  14. 【請求項１４】該医薬がメトトレキセート及びアドレア
    マイシンよりなる群から選ばれる、請求項12記載のモノ
    クローナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  15. 【請求項１５】該第二抗体がキラーＴ−細胞に対して特
    異的結合親和性を有する、請求項12記載のモノクローナ
    ル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  16. 【請求項１６】TAG−72に対して結合親和性を有し、そ
    の親和性が約3.64×109M-1〜約27.72×109M-1の範囲に
    ある、請求項１または２記載のモノクローナル抗体また
    はその免疫学的に活性な断片。
  17. 【請求項１７】（ａ）患者から体液または生検の試料を
    得、 （ｂ）その体液または生検を請求項１または２記載のモ
    ノクローナル抗体またはその免疫学的に活性な断片と接
    触させ、 （ｃ）モノクローナル抗体またはその免疫学的に活性な
    断片の体液または生検材料に対する結合量を決定し、そ
    して （ｄ）工程（ｃ）における結合量を対照試料または所定
    の基底レベルと対比する ことよりなり、基底レベルより大きい結合が癌腫または
    その転移の存在を示すことを特徴とする、ヒト癌腫また
    はその転移の検出力法。
  18. 【請求項１８】該体液が血液、血漿、血清、乳頭排出
    物、嚢胞流体、腹水、胸膜滲山液、精漿、精液、尿及び
    前立腺液よりなる群から選ばれる、請求項17記載の方
    法。
  19. 【請求項１９】体液または生検中に存在する材料へのモ
    ノクローナル抗体の結合量がラジオイムノアッセイによ
    り決定される、請求項17記轍の方法。
  20. 【請求項２０】体液または生検中に存在する物質に対す
    るモノクローナル抗体の結合量が酵素イムノアッセイに
    より決定される、請求項17記載の方法。
  21. 【請求項２１】該抗体がB72.3抗体と０〜30％の競争率
    を示す、請求項17記載の方法。
  22. 【請求項２２】該抗体がIgG2a、IgG2b、IgG3及びIgMよ
    りなる群から選ばれるアイソタイプのものである、請求
    項17記載の方法。
  23. 【請求項２３】抗癌剤と、該抗癌剤が接合された請求項
    １または２記載のモノクローナル抗体またはその免疫学
    的に活性な断片の、これらが親和性を有する抗原に結合
    するのに十分な量と、薬学的に許容可能な非−毒惟、無
    菌担体とを含んでなる、癌治療用医薬組成物。
  24. 【請求項２４】精製されたTAG−72へのアフィニティー
    クロマトグラフィーを用いた方法によって製造された、
    請求項１または２記載のモノクローナル抗体またはその
    免疫学的に活性な断片。
  25. 【請求項２５】モノクローナル抗体B72.3かアフィニテ
    ィークロマトグラフィーにおいて用いられてなる、請求
    項24に記載のモノクローナル抗体またはその免疫学的に
    活性な断片。
  26. 【請求項２６】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9459を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC49を産出する、ハイブリドーマ。
  27. 【請求項２７】ATCC HB−9459である、請求項26記載の
    ハイブリドーマ。
  28. 【請求項２８】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9453を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC83を産出する、ハイブリドーマ。
  29. 【請求項２９】ATCC HB 9453である、請求項28記載の
    ハイブリドーマ。
  30. 【請求項３０】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が寄託番号ATCC HB 9458を寝するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体CC46である、モノクローナ
    ル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  31. 【請求項３１】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が寄託番号ATCC HB 9454を有するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体抗体CC92である、モノクロ
    ーナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  32. 【請求項３２】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するか、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性か３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が寄託番号ATCC HB 9457を有するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体CC30である。モノクローナ
    ル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  33. 【請求項３３】TAG−72及びLS−174丁細胞系の両者に対
    して結合親和伴を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が寄託番号ATCC HB 9455を有するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体CC11である、モノクローナ
    ル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  34. 【請求項３４】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が害託番号ATCC HB 9460を有するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体CC15であるモノクローナル
    抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  35. 【請求項３５】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    杵が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体であっ
    て、該抗体が寄託番号ATCC HB 9456を有するハイブリ
    ドーマにより産出される抗体MATAG12である、モノクロ
    ーナル抗体またはその免疫学的に活性な断片。
  36. 【請求項３６】（ａ）患者から体液または生検の試料を
    得、 （ｂ）その体液または生検を請求項30〜35のいずれか一
    項に記載のモノクローナル抗体またはその免疫学的に活
    性な断片と接触させ、 （ｃ）モノクローナル抗体またほその免疫学的に活性な
    断片の体液または生検材料に対する結合量を決定し、そ
    して （ｄ）工程（ｃ）における結合量を対照試料または所定
    の基底レベルと対比する ことよりなり、基底レベルより大きい結合が癌腫または
    その転移の存在を示すことを特徴とするヒト癌腫または
    その転移の検出方法。
  37. 【請求項３７】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9458を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC46を産生する、ハイブリドーマ。
  38. 【請求項３８】ATCC No.HB−9458である、請求項37に
    記載のハイブリドーマ。
  39. 【請求項３９】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組成に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9454を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC92を産生する、ハイブリドーマ。
  40. 【請求項４０】ATCC HB 9454である、請求項39に記載
    のハイブリドーマ。
  41. 【請求項４１】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9457を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC30を産生する、ハイブリドーマ。
  42. 【請求項４２】ATCC HB 9457である、請求項41に記載
    のハイブリドーマ。
  43. 【請求項４３】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9455を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC11を産生する、ハイブリドーマ。
  44. 【請求項４４】ATCC HB 9455である、請求項43に記載
    のハイブリドーマ。
  45. 【請求項４５】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9460を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体CC15を産生する、ハイブリドーマ。
  46. 【請求項４６】ATCC HB 9460である、請求項45に記載
    のハイブリドーマ。
  47. 【請求項４７】TAG−72及びLS−174T細胞系の両者に対
    して結合親和性を有するが、正常ヒト大人組織に対して
    は実質的に結合親和性を有さず、TAG−72に対する親和
    性が３×109M-1より大きなモノクローナル抗体である、
    寄託番号ATCC HB 9456を有するハイブリドーマにより
    産出される抗体MATAG12を産出する、ハイブリドーマ。
  48. 【請求項４８】ATCC HB 9456である、請求項47に記載
    のハイブリドーマ。
  49. 【請求項４９】請求項１または２記載のモノクローナル
    抗体またはその免疫学的に活性な断片の、これらか親和
    性を有する抗原に結合するのに十分な量を含んでなる、
    ヒト癌腫またはその転移を検出するための診断用組成
    物。
  50. 【請求項５０】請求項49に記載の診断用組成物を含んで
    なる、ヒト癌腫またはその転移を検出するための診断用
    キット。
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Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5756065A (en) * 1988-06-24 1998-05-26 The Dow Chemical Company Macrocyclic tetraazacyclododecane conjugates and their use as diagnostic and therapeutic agents
US6641999B1 (en) 1988-10-19 2003-11-04 The Dow Chemical Company Probing method for identifying antibodies specific for selected antigens
US6051225A (en) * 1988-10-19 2000-04-18 The Dow Chemical Company Family of high affinity, modified antibodies for cancer treatment
US5993813A (en) * 1988-10-19 1999-11-30 The Dow Chemical Company Family of high affinity, modified antibodies for cancer treatment
CA2008213A1 (en) * 1989-02-21 1990-08-21 David A. Hilborn Method of fragmenting certain monoclonal antibodies
US6495137B1 (en) 1990-04-19 2002-12-17 The Dow Chemical Company Humanized anti-tag-72 monoclonal antibodies using human subgroup 4 kappa light chains
US5976531A (en) * 1990-04-19 1999-11-02 The Dow Chemical Company Composite antibodies of human subgroup IV light chain capable of binding to tag-72
WO1993012231A1 (en) * 1991-12-13 1993-06-24 Dow Chemical (Australia) Limited Composite antibodies of human subgroup iv light chain capable of binding to tag-72
SG55079A1 (en) 1992-12-11 1998-12-21 Dow Chemical Co Multivalent single chain antibodies
PT1007533E (pt) 1996-08-27 2005-09-30 Univ Utah Res Found Bioconjugados e administracao de agentes bioactivos
US6348581B1 (en) 1996-10-31 2002-02-19 The Dow Chemical Company High affinity humanized anti-TAG-72 monoclonalantibodies
US6045774A (en) 1997-01-10 2000-04-04 Epicyte Pharmaceutical Inc. J chain polypeptide targeting molecule linked to an imaging agent
US5919135A (en) * 1997-02-28 1999-07-06 Lemelson; Jerome System and method for treating cellular disorders in a living being
US6418338B1 (en) * 1998-02-06 2002-07-09 Phylatron Ltd. Method for detecting and surgically removing lymphoid tissue involved in tumor progression
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6897044B1 (en) * 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6696620B2 (en) * 2000-05-02 2004-02-24 Epicyte Pharmaceutical, Inc. Immunoglobulin binding protein arrays in eukaryotic cells
US6471968B1 (en) 2000-05-12 2002-10-29 Regents Of The University Of Michigan Multifunctional nanodevice platform
US20030224415A1 (en) * 2001-06-29 2003-12-04 Gala Design, Inc. Selection free growth of host cells containing multiple integrating vectors
US20040235173A1 (en) * 2000-07-03 2004-11-25 Gala Design, Inc. Production of host cells containing multiple integrating vectors by serial transduction
CA2413156C (en) * 2000-07-03 2009-08-18 Gala Design, Inc. Expression vectors
US6852510B2 (en) 2000-07-03 2005-02-08 Gala Design Inc Host cells containing multiple integrating vectors
WO2002096948A2 (en) 2001-01-29 2002-12-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
BR0206985A (pt) * 2001-01-29 2005-04-19 Idec Pharma Corp Anticorpos modificados e métodos de uso
AU2002307037B2 (en) * 2001-04-02 2008-08-07 Biogen Idec Inc. Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
US7384738B2 (en) * 2002-03-28 2008-06-10 Bremel Robert D Retrovirus-based genomic screening
US20040038304A1 (en) * 2002-03-28 2004-02-26 Gala Design, Inc. Antibody libraries
AU2003248744C1 (en) 2002-06-28 2009-12-24 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Humanized anti-TAG-72 CC49 for diagnosis and therapy of human tumors
US7589181B2 (en) 2003-08-29 2009-09-15 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Minimally immunogenic variants of SDR-grafted humanized antibody CC49 and their use
AU2004290070A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal Fc receptor (FcRn)-binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto
US20050221429A1 (en) * 2004-01-16 2005-10-06 Cardinal Health Pts, Llc Host cells containing multiple integrating vectors comprising an amplifiable marker
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
JP2008501337A (ja) * 2004-06-04 2008-01-24 ジェネンコー・インターナショナル・インク 抗体重鎖を用いたスクリーニング法
CA2578205A1 (en) * 2004-08-25 2006-03-30 The Regents Of The University Of Michigan Partially acetylated dendrimers and related methods of use
WO2006074397A2 (en) 2005-01-05 2006-07-13 Biogen Idec Ma Inc. Cripto binding molecules
US20070041934A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Regents Of The University Of Michigan Dendrimer based compositions and methods of using the same
JP2009541333A (ja) 2006-06-23 2009-11-26 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 修飾リボヌクレアーゼ
EP2049151A4 (en) * 2006-07-17 2010-03-24 Quintessence Biosciences Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER
US20090088376A1 (en) * 2007-04-19 2009-04-02 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer based compositions and methods of using the same
US8916135B2 (en) * 2007-08-22 2014-12-23 Colorado School Of Mines Lanthanide nanoparticle conjugates and uses thereof
US8697062B2 (en) * 2007-10-08 2014-04-15 Quintessence Biosciences, Inc. Compositions and methods for ribonuclease-based therapeutics
US8252834B2 (en) 2008-03-12 2012-08-28 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
WO2010096464A1 (en) 2009-02-18 2010-08-26 Boyes Stephen G Gold/lanthanide nanoparticle conjugates and uses thereof
WO2010039861A2 (en) 2008-09-30 2010-04-08 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
EP2334695B1 (en) 2008-10-01 2015-12-23 Quintessence Biosciences, Inc. Therapeutic ribonucleases
BRPI0920552A2 (pt) 2008-10-09 2019-09-24 Univ Northeastern nanosistemas poliméricos auto-organizáveis multifuncionais
US9017644B2 (en) 2008-11-07 2015-04-28 The Regents Of The University Of Michigan Methods of treating autoimmune disorders and/or inflammatory disorders
WO2011059609A2 (en) 2009-10-13 2011-05-19 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer compositions and methods of synthesis
WO2011059586A2 (en) 2009-10-30 2011-05-19 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules
US20110201076A1 (en) 2010-01-22 2011-08-18 Colorado School Of Mines Harvesting micro algae
US9738707B2 (en) 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
TWI497073B (zh) * 2011-08-11 2015-08-21 Atomic Energy Council ９６孔盤格式運用於放射免疫分析之方法
WO2013085718A1 (en) 2011-12-08 2013-06-13 The Regents Of The University Of Michigan Multifunctional small molecules

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4361544A (en) * 1980-03-03 1982-11-30 Goldenberg Milton David Tumor localization and therapy with labeled antibodies specific to intracellular tumor-associated markers
US4565687A (en) * 1981-11-16 1986-01-21 The Reagents Of The University Of Michigan Monoclonal antibodies specific for the unbound β subunit of human chorionic gonadotropin
US4522918A (en) * 1981-12-15 1985-06-11 Jeffery Schlom Process for producing monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
US4612282A (en) * 1981-12-15 1986-09-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
US4634586A (en) * 1984-05-21 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Reagent and method for radioimaging leukocytes

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４６（１９８６）ｐ．３１１８−３１２４
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４６（１９８６）ｐ．８５０−８５７
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１［５］（１９８３）ｐ．２５３３−２５３８
細胞工学 １［１］（１９８２）ｐ．４８−６４

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