TWI497073B - ９６孔盤格式運用於放射免疫分析之方法 - Google Patents

Description

96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法

本發明係有關於一種96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法，尤指涉及一種使用96孔盤格式改進放射免疫分析之方法。

放射免疫分析係在1959年由Yalow與Berson兩人所開發，當時係用以檢測糖尿病患者血液中胰島素之含量。

傳統之放射係將要檢測之目標物作為抗原製作出抗體，將抗體黏覆於試管底部，取得要偵測之目標物之純化品標上碘125稱為示蹤劑，再將樣本與示蹤劑加入試管中反應，樣本中未標記之目標物及示蹤劑中有標記碘125之目標物便會與試管底之抗體結合，並會互相競爭結合之位置，若樣本中目標物含量多則標有碘125之目標物結合上抗體的量就少，故最後計數輻射量，若樣本中目標物濃度高則計數低、目標物濃度低則計數高。此方法簡稱為放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)。後來又有開發出另一種方法，稱為免疫放射分析法(Immunoradiometric assay,IRMA)，其做法係將欲檢測之目標物作為抗原，製作出兩株抗體，這兩株抗體辨認之位置需不一樣，首先將第一株抗體黏覆於試管底部，而第二株抗體則標上碘125，之後將樣本加入試管中反應，此時樣本中之目標物會被試管底部之第一株抗體抓住，再來加入第二株抗體到試管中，第二株抗體將辨認被第一株抗體抓住之目標物，最後計數輻射量。當目標物越多則第二株抗體被抓在於試管中之量也越多，所以輻射量也越高，其輻射量與目標物濃度成正比，此法俗稱為三明治法。

放射免疫分析方法通常係在單一根試管進行，在管內塗上一層抗體，加入樣本反應，使抗體抓住樣本中之目標物後，清洗去除其他物質，再加入標有放射性同位素之抗體，以辨認此目標物，接著再清洗過量之抗體，最後計數放射線之強度即可得知樣本中目標物之濃度。一般使用之放射性同位素係碘125，故計數時係測量加馬射線，但由於加馬射線具有穿透性，所以計讀時都只能一個讀取頭計數一根試管，若使用96孔盤進行實驗，則計讀時每一孔之加馬射線會互相干擾。然而，使用試管進行實驗仍有其缺點，主要由於放射免疫分析係屬於早期開發之技術，自動化或半自動之儀器開發很少又很貴，所以成本會比較高，若不使用儀器而用手工操作，將對於速度與處理數量有所限制，反之，若購買儀器，則需要承受較高之成本。

傳統上亦有使用多孔盤進行放射免疫分析之方法，係將塑膠小珠塗上抗體，再置於多孔盤中反應，反應完後再將小珠倒進試管中做輻射計數。惟此種規格並沒有成為主流，所以相關儀器與器材也係稀少而昂貴。

另外若是使用放射貝他射線之核種，如3H進行放射免疫分析，也有做成96孔盤格式，其方法係使用液體閃爍計數，因為貝他射線穿透力不強，在96孔盤中無法穿透塑膠壁，故孔與孔之間不會互相干擾，偵測時就加入閃爍計數液，貝他射線與閃爍計數液反應會放出光子，再用96孔盤格式之液體閃爍計數器偵測之。然而，因為放射免疫分析使用之核種主要還係以碘125為主，故此法並不普及，一般習用者仍係無法符合使用者於實際使用時之所需。

本發明之主要目的係在於，克服習知技藝所遭遇之上述問題並提供一種設計簡單且實施容易之使用96孔盤格式改進放射免疫分析之方法，於操作之過程中，將傳統之單一試管，改成使用96孔盤，可提升樣本之處理數量，並提高操作過程中之自動化程度，以使成本下降。

為達以上之目的，本發明係一種96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法，係先取得一可拆解之96孔盤；依一般放射免疫分析之方法進行，例如先加入一抗體，使該抗體覆著於該96孔盤孔中之壁，並將多餘之抗體吸除，再加入一阻隔劑使未覆著抗體之表面封閉，且於倒去該阻隔劑後加入一樣本，待震盪反應一段時間後，倒去該樣本，再以清洗液清洗數次，之後加入標有碘125之抗體，再震盪反應一段時間後，倒去該標有碘125之抗體，再以清洗液清洗數次，最後將該96孔盤倒置於衛生紙塔上，使孔中液體流乾；以及將該96孔盤每一孔拆解成單一之小孔，每一小孔投入一試管之中，再將該試管以加馬計數器(Gamma Counter)計數，俾以定量樣本中之待測物濃度。

請參閱『第1圖』所示，係本發明之改進流程示意圖。如圖所示：本發明係一種96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法，其至少包含下列步驟：

(A)取得孔盤11：取得一可拆解之96孔盤21，其中8個小孔22一排，共12連排；

(B)進行放射免疫分析程序12：先加入一抗體31，使該抗體31覆著於該96孔盤孔21中之壁，並將多餘之抗體吸除，再加入一阻隔劑32使未覆著抗體之表面封閉，且於倒去該阻隔劑後加入一樣本33，待震盪反應一段時間後，倒去該樣本，再以清洗液清洗數次，之後加入標有碘125之抗體34，再震盪反應一段時間後，倒去該標有碘125之抗體，再以清洗液清洗數次，最後將該96孔盤21a倒置於衛生紙塔上，使孔中液體流乾；以及

(C)拆解孔盤並行加馬計數13：將該96孔盤21a先拆下一條8個孔，再將條狀之8孔拆解成單一之小孔22a，每一小孔22a投入一試管23之中，再將該試管23以加馬計數器(Gamma Counter)24計數，俾以定量樣本中之待測物濃度。其中，該試管23係一般用以進行放射免疫分析之試管。

本發明係可用以改進放射免疫分析之方法，於操作之過程中，係將傳統之單一試管，改成使用96孔盤，可提升樣本之處理數量，並提高操作過程中之自動化程度，以使成本下降。當運用時，係使用特殊可拆解之96孔盤，依一般放射免疫分析之方法進行，例如加樣本、反應、清洗、加示蹤劑(如碘125)、反應、清洗，最後再將此96孔盤每一孔拆下，投入單根試管中，再進行加馬射線之計數。

藉此，本發明係具有下述諸多優點：

(1)因為使用96孔盤格式進行放射免疫分析，所以可以使用96孔盤之相關儀器與器材，譬如液體分注器、震盪器及清洗機等，又由於96孔盤係較為開放之格式，所以市面上有非常多家廠商開發了各式之儀器與器材，在競爭壓力下，96孔盤格式之相關儀器也就比單根試管式之儀器便宜，另外在功能上也比較好。

(2)承上點，可節省儀器開發成本。

(3)96孔盤比96根試管體積小，可節省實驗空間。

(4)使用96孔盤可以處理較多之樣本數量。

(5)96孔盤材質之表面處理較為先進，目前市面上已有廠商開發可以用共價鍵連接抗原或抗體至微孔之內壁；而試管則皆以傳統氫鍵或凡得瓦耳力之方式使抗體抗原吸附。並且，使用共價鍵連接之好處包括可接上不易吸附之分子、共價鍵較穩固所以可用較高強度之清洗液、以及可降低非特異性結合等，故改用96孔盤可增進效能。

(6)96孔盤格式通行多年，使用方法亦廣為人知，使用容易，故廠商將舊有之檢驗試劑格式改成96孔盤重新開發時，所需成本及時間不會太高。

(7)本發明設計簡單，實施容易。

綜上所述，本發明係一種96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法，可有效改善習用之種種缺點，於操作之過程中，係將傳統之單一試管，改成使用96孔盤，可提升樣本之處理數量，並提高操作過程中之自動化程度，以使成本下降，進而使本發明之產生能更進步、更實用、更符合使用者之所須，確已符合發明專利申請之要件，爰依法提出專利申請。

惟以上所述者，僅為本發明之較佳實施例而已，當不能以此限定本發明實施之範圍；故，凡依本發明申請專利範圍及發明說明書內容所作之簡單的等效變化與修飾，皆應仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。

11．．．步驟(A)取得96孔盤

12．．．步驟(B)進行放射免疫分析程序

13．．．步驟(C)拆解孔盤並行加馬計數

21、21a．．．96孔盤

22、22a．．．小孔

23．．．試管

24．．．加馬計數器

31．．．抗體

32．．．阻隔劑

33．．．樣本

34．．．標有碘125之抗體

第1圖，係本發明之改進流程示意圖。

11．．．步驟(A)取得96孔盤

12．．．步驟(B)進行放射免疫分析程序

13．．．步驟(C)拆解孔盤並行加馬計數

21、21a．．．96孔盤

22、22a．．．小孔

23．．．試管

24．．．加馬計數器

31．．．抗體

32．．．阻隔劑

33．．．樣本

34．．．標有碘125之抗體

Claims (1)

1. 一種96孔盤格式運用於放射免疫分析之方法，其至少包含下列步驟：(A)取得孔盤：取得一可拆解之96孔盤；(B)進行放射免疫分析程序：先加入一抗體，使該抗體覆著於該96孔盤孔中之壁，並將多餘之抗體吸除，再加入一阻隔劑使未覆著抗體之表面封閉，且於倒去該阻隔劑後加入一樣本，待震盪反應一段時間後，倒去該樣本，再以清洗液清洗數次，之後加入標有碘125之抗體，再震盪反應一段時間後，倒去該標有碘125之抗體，再以清洗液清洗數次，最後將該96孔盤倒置於衛生紙塔上，使孔中液體流乾；以及(C)拆解孔盤並行加馬計數：將該96孔盤每一孔拆解成單一之小孔，每一小孔投入一試管之中，再將該試管以加馬計數器(Gamma Counter)計數，俾以定量樣本中之待測物濃度，其中，該試管係一般用以進行放射免疫分析之試管。