JP2574269B2 - ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有するモノクロ−ナル抗体類およびそれらを使用する方法 - Google Patents
ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有するモノクロ−ナル抗体類およびそれらを使用する方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト前立腺腫瘍関連抗原（human prostat
e tumor−associated antigens）に対する結合特異性
（binding specificty）をもつが、前立腺特異性抗原
（prostate−specific antigen）（PSA）または前立腺
酸性ホスファターゼ（PAP）に対する結合特異性をもた
ないモノクローナル抗体、およびそれを使用する診断法
および処置法に関する。
e tumor−associated antigens）に対する結合特異性
（binding specificty）をもつが、前立腺特異性抗原
（prostate−specific antigen）（PSA）または前立腺
酸性ホスファターゼ（PAP）に対する結合特異性をもた
ないモノクローナル抗体、およびそれを使用する診断法
および処置法に関する。
腫瘍関連抗体に対する結合特異性を有する物質を発見
することを試みて、多年にわたって、種々のモノクロー
ナル抗体が開発されてきている。これらのモノクローナ
ル抗体は腫瘍の診断および処置において有用であろうこ
とが望まれてきた。
することを試みて、多年にわたって、種々のモノクロー
ナル抗体が開発されてきている。これらのモノクローナ
ル抗体は腫瘍の診断および処置において有用であろうこ
とが望まれてきた。
モノクローナル抗体はハイブリドーマとして知られる
細胞系により産生される。ハイブリドーマは、その腫瘍
組織に関連する抗原に対する結合親和性を有するモノク
ローナル抗体を産生するような腫瘍組織を使用してつく
ることができる。ほとんどのモノクローナル抗体は、次
のような欠点を有する：（１）それらはそれらが発現さ
れた腫瘍に非常に密接に関連するもの以外の多くの腫瘍
のタイプに結合することができないか、あるいは（２）
結合特異性に極端に欠ける、すなわち、それらは、細胞
が悪性であるかあるいは悪性でないかのいかんにかわら
ず、ほとんどすべてのタイプの細胞に結合する。結局、
これらのモノクローナル抗体は、（１）極端な結合特異
性をもつため、診断または処置すべき各腫瘍のために独
特のモノクローナル抗体を開発することが必要である
か、あるいは（２）結合特異性に極端に欠乏するため
に、モノクローナル抗体は悪性の細胞と悪性でない細胞
とを区別することができないので、一般に臨床的に有用
ではない。
細胞系により産生される。ハイブリドーマは、その腫瘍
組織に関連する抗原に対する結合親和性を有するモノク
ローナル抗体を産生するような腫瘍組織を使用してつく
ることができる。ほとんどのモノクローナル抗体は、次
のような欠点を有する：（１）それらはそれらが発現さ
れた腫瘍に非常に密接に関連するもの以外の多くの腫瘍
のタイプに結合することができないか、あるいは（２）
結合特異性に極端に欠ける、すなわち、それらは、細胞
が悪性であるかあるいは悪性でないかのいかんにかわら
ず、ほとんどすべてのタイプの細胞に結合する。結局、
これらのモノクローナル抗体は、（１）極端な結合特異
性をもつため、診断または処置すべき各腫瘍のために独
特のモノクローナル抗体を開発することが必要である
か、あるいは（２）結合特異性に極端に欠乏するため
に、モノクローナル抗体は悪性の細胞と悪性でない細胞
とを区別することができないので、一般に臨床的に有用
ではない。
診断法および治療法におけるモノクローナル抗体の有
用性に関して発生した関心事にかかわらず、器官特異性
である、すなわち、特定の器官にのみ関連する抗原に結
合できるが、それらの器官特異性が与えられると、特定
の器官中に発生する多くの異なるタイプの腫瘍に関連す
る抗原に結合できるモノクローナル抗体を開発できる
と、なお、信じられる。
用性に関して発生した関心事にかかわらず、器官特異性
である、すなわち、特定の器官にのみ関連する抗原に結
合できるが、それらの器官特異性が与えられると、特定
の器官中に発生する多くの異なるタイプの腫瘍に関連す
る抗原に結合できるモノクローナル抗体を開発できる
と、なお、信じられる。
前立腺癌は米国における男性の間の最も優勢な悪性腫
瘍である。この病気は頻繁に存在するが、女性の集団に
おいて検出されないと仮定される。その上、前立腺癌は
長い潜伏期間をしばしば示すことが認められる。さら
に、前立腺癌はその高い転移可能性をもつことが知られ
ている。これらの理由で、前立腺腫瘍の存在について生
体内または生体外で診断するために、および殊に腫瘍が
いったん転移したとき、このような腫瘍を処置するため
に有用な１種または２種以上の物質を開発することが望
まれてきた。
瘍である。この病気は頻繁に存在するが、女性の集団に
おいて検出されないと仮定される。その上、前立腺癌は
長い潜伏期間をしばしば示すことが認められる。さら
に、前立腺癌はその高い転移可能性をもつことが知られ
ている。これらの理由で、前立腺腫瘍の存在について生
体内または生体外で診断するために、および殊に腫瘍が
いったん転移したとき、このような腫瘍を処置するため
に有用な１種または２種以上の物質を開発することが望
まれてきた。
前立腺抗原マーカー（marker）に対する種々のモノク
ローナル抗体は従来記載されてきた。これらの従来記載
されたモノクローナル抗体は、前立腺特異性抗原（PS
A）に［ワング（Wang）,M.C.ら，泌尿器学（Urol.），1
7:159−169（1979）］（特別にここに引用によって加え
る）、あるいは前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）に
［チュー（Chu）］,T.M.ら，泌尿器学（Urol.），15:31
9−322（1978）］（特別にここに引用によって加え
る）、あるいは両者に結合する。これらの従来記載され
たモノクローナル抗体は、ある前立腺腫瘍に結合するこ
とができないので、欠点を有する。
ローナル抗体は従来記載されてきた。これらの従来記載
されたモノクローナル抗体は、前立腺特異性抗原（PS
A）に［ワング（Wang）,M.C.ら，泌尿器学（Urol.），1
7:159−169（1979）］（特別にここに引用によって加え
る）、あるいは前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）に
［チュー（Chu）］,T.M.ら，泌尿器学（Urol.），15:31
9−322（1978）］（特別にここに引用によって加え
る）、あるいは両者に結合する。これらの従来記載され
たモノクローナル抗体は、ある前立腺腫瘍に結合するこ
とができないので、欠点を有する。
したがって、本発明の１つの目的は、ヒト前立腺腫瘍
関連抗原に対する結合特異性をもつが、PSAまたはPAPに
結合しないモノクローナル抗体を提供することである。
関連抗原に対する結合特異性をもつが、PSAまたはPAPに
結合しないモノクローナル抗体を提供することである。
本発明の他の目的は、すべての前立腺腫瘍に関連する
抗原に結合しかつ前立腺以外の器官に由来する細胞にほ
とんどあるいはまったく結合しないモノクローナル抗体
を提供することができる。
抗原に結合しかつ前立腺以外の器官に由来する細胞にほ
とんどあるいはまったく結合しないモノクローナル抗体
を提供することができる。
本発明の追加の目的は、これらのモノクローナル抗体
を使用する前立腺腫瘍およびその転移を診断する方法を
提供することである。
を使用する前立腺腫瘍およびその転移を診断する方法を
提供することである。
本発明のほかの目的は、これらのモノクローナル抗体
を使用する前立腺腫瘍およびその転移を処置する方法を
提供することである。
を使用する前立腺腫瘍およびその転移を処置する方法を
提供することである。
本発明の他の目的および利点は、以後の本発明の詳細
な説明から明らかとなるであろう。
な説明から明らかとなるであろう。
１つの実施態様において、前述の目的は、ヒト前立腺
腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異
性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特
異性をもたないモノクローナル抗体によって達成され
た。下に詳述する手順により開発された、これらのモノ
クローナル抗体の２つの例をTURP−27およびTURP−73と
表示する。TURP−27およびTURP−73は、アメリカン・タ
イプ・カルチャー・コレクション（American Type Cu
lture Collection,12301 Parklawn Drive,Rockvill
e,Maryland,U.S.A.20852）にそれぞれ受託番号40292お
よび40293で受託された。
腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異
性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特
異性をもたないモノクローナル抗体によって達成され
た。下に詳述する手順により開発された、これらのモノ
クローナル抗体の２つの例をTURP−27およびTURP−73と
表示する。TURP−27およびTURP−73は、アメリカン・タ
イプ・カルチャー・コレクション（American Type Cu
lture Collection,12301 Parklawn Drive,Rockvill
e,Maryland,U.S.A.20852）にそれぞれ受託番号40292お
よび40293で受託された。
モノクローナル抗体TURP−27およびTURP−73の各々
は、同一抗原と交差反応せず、悪性前立腺組織上に存在
する独特のエピトープに向けられる。さらに、各々は、
変化するが、臨床的に許容されうる程度に、前立腺組織
のために器官特異性であるかあるいは器官に関連する。
こうして、これらの新規なモノクローナル抗体は前立腺
腫瘍およびその転移の存在の診断およびそれを処置する
ために有用である。
は、同一抗原と交差反応せず、悪性前立腺組織上に存在
する独特のエピトープに向けられる。さらに、各々は、
変化するが、臨床的に許容されうる程度に、前立腺組織
のために器官特異性であるかあるいは器官に関連する。
こうして、これらの新規なモノクローナル抗体は前立腺
腫瘍およびその転移の存在の診断およびそれを処置する
ために有用である。
他の実施態様において、本発明の前述の目的は、工
程： （ａ） 患者から体液の試料を入手し、 （ｂ） 前記体液をヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結
合特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性
ホスファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体に暴露し、 （ｃ） 体液中に存在する物質に結合するモノクローナ
ル抗体の量を決定し、そして （ｄ） 体液の物質に結合したモノクローナル抗体の量
を前もって決定した基本水準と比較して、前立腺腫瘍ま
たはその転移の存在を確認する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移を診断する方法、によって達成される。
程： （ａ） 患者から体液の試料を入手し、 （ｂ） 前記体液をヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結
合特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性
ホスファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体に暴露し、 （ｃ） 体液中に存在する物質に結合するモノクローナ
ル抗体の量を決定し、そして （ｄ） 体液の物質に結合したモノクローナル抗体の量
を前もって決定した基本水準と比較して、前立腺腫瘍ま
たはその転移の存在を確認する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移を診断する方法、によって達成される。
なお他の実施態様において、本発明の前述の目的は、
工程： （ａ） 患者に、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合
特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホ
スファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロー
ナル抗体を投与し、ここで前記モノクローナル抗体はマ
ーカーに接合（conjugate）されており、そして （ｂ） 前記患者を検出装置に暴露して、前立腺腫瘍部
位またはその転移部位に対応するマーカーの区域を同定
する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移の存在を診断する方法、によって達成された。
工程： （ａ） 患者に、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合
特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホ
スファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロー
ナル抗体を投与し、ここで前記モノクローナル抗体はマ
ーカーに接合（conjugate）されており、そして （ｂ） 前記患者を検出装置に暴露して、前立腺腫瘍部
位またはその転移部位に対応するマーカーの区域を同定
する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移の存在を診断する方法、によって達成された。
なおさらに他の実施態様において、本発明の前述の目
的は、前立腺腫瘍またはその転移に悩む患者に製薬学的
に有効な量のモノクローナル抗体−治療剤を投与するこ
とからなり、ここで前記モノクローナル抗体はヒト前立
腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特
異性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合
特異性をもたないことを特徴とする前立腺腫瘍またはそ
の転移に悩む患者を処置する方法、によって達成され
た。
的は、前立腺腫瘍またはその転移に悩む患者に製薬学的
に有効な量のモノクローナル抗体−治療剤を投与するこ
とからなり、ここで前記モノクローナル抗体はヒト前立
腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特
異性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合
特異性をもたないことを特徴とする前立腺腫瘍またはそ
の転移に悩む患者を処置する方法、によって達成され
た。
本発明によれば、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結
合特異性をもつが、PSAまたはPAPに対する結合特異性を
もたないモノクローナル抗体は、次のようにして生成し
かつ単離することができる。
合特異性をもつが、PSAまたはPAPに対する結合特異性を
もたないモノクローナル抗体は、次のようにして生成し
かつ単離することができる。
マウスを前立腺腫瘍調製物で免疫化する。免疫化され
たマウスからの脾細胞を単離し、そしてマウス骨髄腫細
胞と融合し、そしてハイブリドーマの生長のみを許す条
件下に培養する。次いで、ヒト前立腺腫瘍関連抗原を所
望のモノクローナル抗体の生成についてスクリーニング
する。
たマウスからの脾細胞を単離し、そしてマウス骨髄腫細
胞と融合し、そしてハイブリドーマの生長のみを許す条
件下に培養する。次いで、ヒト前立腺腫瘍関連抗原を所
望のモノクローナル抗体の生成についてスクリーニング
する。
マウスの免疫化、免疫化された細胞の単離、単離され
た細胞とマウス骨髄腫細胞との融合、およびハイブリド
ーマの生長を許す条件下の培養は、すべて、この分野に
おいてよく知られているか、あるいは当業者により容易
に決定される方法によって実施される。
た細胞とマウス骨髄腫細胞との融合、およびハイブリド
ーマの生長を許す条件下の培養は、すべて、この分野に
おいてよく知られているか、あるいは当業者により容易
に決定される方法によって実施される。
マウス比細胞の免疫化のため、前立腺腫瘍関連抗原を
有する任意の腫瘍からの調製物を用いることができる。
好ましい腫瘍調製物は、両性の前立腺増性（hyperplasi
as）および前立腺癌、とくに前立腺癌からのものを包含
する。
有する任意の腫瘍からの調製物を用いることができる。
好ましい腫瘍調製物は、両性の前立腺増性（hyperplasi
as）および前立腺癌、とくに前立腺癌からのものを包含
する。
さらに、免疫化はちょうど１つの腫瘍あるいは１また
は２以上の腫瘍のタイプからなる１種または２種以上の
腫瘍の混合物からの調製物を用いて実施できる。これに
関して、ことに好ましい調製物は３種類の両性前立腺増
生および１種類の前立腺癌の混合物から成る。
は２以上の腫瘍のタイプからなる１種または２種以上の
腫瘍の混合物からの調製物を用いて実施できる。これに
関して、ことに好ましい調製物は３種類の両性前立腺増
生および１種類の前立腺癌の混合物から成る。
マウス骨髄腫細胞系はこの分野において入手容易なあ
る数のもののいずれであることもできる。１つの殊に好
ましいよく知られた入手容易なマウス骨髄腫細胞系はP3
−NS−１−Ag4−１［NIGMS ヒューマン・ジェネティッ
ク・ミュータント・セル・レポジタリー（Human Genet
ic Mutant Cell Repository）、受託番号GM3573）
（NS−１）］である。
る数のもののいずれであることもできる。１つの殊に好
ましいよく知られた入手容易なマウス骨髄腫細胞系はP3
−NS−１−Ag4−１［NIGMS ヒューマン・ジェネティッ
ク・ミュータント・セル・レポジタリー（Human Genet
ic Mutant Cell Repository）、受託番号GM3573）
（NS−１）］である。
所望のモノクローナル抗体の生成についてのスクリー
ニングは、前立腺抗原に対する制限された結合活性、す
なわち、前立腺腫瘍関連抗原に結合するが、PSAまたはP
APに結合しない制限された結合活性を決定することによ
り、および正常の膀胱、乳房、結腸、腎臓、肺、膵臓お
よび肝臓を包含する、正常の抗原に対する交差反応性の
欠乏により達成される。臨床的に許容されうるために
は、モノクローナル抗体はPSAおよびPAPに対する反応性
に欠け、かつ前立腺以外の正常の抗原に対する交差反応
性に望ましくは完全に欠けなくてはならない。しかしな
がら、抗原が臨床的応用におけるモノクローナル抗体の
使用に関係しない組織からのものである場合、モノクロ
ーナル抗体は前立腺以外の正常の抗原に対して多少の反
応性を有することができる。前立腺抗原に対する制限さ
れた結合活性および前立腺以外の正常の抗原に対する交
差反応性についてのアッセイは、当業者により容易に決
定される。
ニングは、前立腺抗原に対する制限された結合活性、す
なわち、前立腺腫瘍関連抗原に結合するが、PSAまたはP
APに結合しない制限された結合活性を決定することによ
り、および正常の膀胱、乳房、結腸、腎臓、肺、膵臓お
よび肝臓を包含する、正常の抗原に対する交差反応性の
欠乏により達成される。臨床的に許容されうるために
は、モノクローナル抗体はPSAおよびPAPに対する反応性
に欠け、かつ前立腺以外の正常の抗原に対する交差反応
性に望ましくは完全に欠けなくてはならない。しかしな
がら、抗原が臨床的応用におけるモノクローナル抗体の
使用に関係しない組織からのものである場合、モノクロ
ーナル抗体は前立腺以外の正常の抗原に対して多少の反
応性を有することができる。前立腺抗原に対する制限さ
れた結合活性および前立腺以外の正常の抗原に対する交
差反応性についてのアッセイは、当業者により容易に決
定される。
モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を生成す
るハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔中に注射し、そし
て適当な時間後、非常に高い力価の相同抗体を生ずるマ
ウスからの腹水を収穫し、そしてそれからモノクローナ
ル抗体を単離することによって、大量に生産される。あ
るいは、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を
生産する細胞を生体外で培養し、そして分泌されたモノ
クローナル抗体を細胞培養基から単離することによって
生産することができる。
るハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔中に注射し、そし
て適当な時間後、非常に高い力価の相同抗体を生ずるマ
ウスからの腹水を収穫し、そしてそれからモノクローナ
ル抗体を単離することによって、大量に生産される。あ
るいは、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を
生産する細胞を生体外で培養し、そして分泌されたモノ
クローナル抗体を細胞培養基から単離することによって
生産することができる。
TURP−27およびTURP−73と表示するモノクローナル抗
体を発現するハイブリドーマを、上の方法に従って生産
した。これらの２つのモノクローナル抗体の結合特異性
およびこれらの抗体と既知の前立腺モノクローナル抗体
との比較は、下の実施例１において論じられている。
体を発現するハイブリドーマを、上の方法に従って生産
した。これらの２つのモノクローナル抗体の結合特異性
およびこれらの抗体と既知の前立腺モノクローナル抗体
との比較は、下の実施例１において論じられている。
本発明の他の実施態様は、前立腺腫瘍または転移を診
断する生体外方法を包含する。
断する生体外方法を包含する。
前述のように、体液を患者から入手し、そして本発明
のモノクローナル抗体に暴露する。次いで、体液中に存
在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を決定
し、そして体液の物質に結合したモノクローナル抗体の
量を前もって決定した基本の水準と比較することによっ
て診断を実施する。基本の水準を越える結合したモノク
ローナル抗体の量は、前立腺腫瘍またはその転移が存在
する可能性を示す。
のモノクローナル抗体に暴露する。次いで、体液中に存
在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を決定
し、そして体液の物質に結合したモノクローナル抗体の
量を前もって決定した基本の水準と比較することによっ
て診断を実施する。基本の水準を越える結合したモノク
ローナル抗体の量は、前立腺腫瘍またはその転移が存在
する可能性を示す。
生体外方法において使用できる体液は、ヒト前立腺腫
瘍関連抗原を含有することが疑われる任意の体液であ
る。その例は、血液、血清、精液漿（seminal plasm
a）、精液、尿および前立腺液（prostatic fluid）を
包含する。体液は当業者によく知られているかあるいは
当業者により容易に決定される方法により得ることがで
きる。
瘍関連抗原を含有することが疑われる任意の体液であ
る。その例は、血液、血清、精液漿（seminal plasm
a）、精液、尿および前立腺液（prostatic fluid）を
包含する。体液は当業者によく知られているかあるいは
当業者により容易に決定される方法により得ることがで
きる。
体液を、この分野においてよく知られている免疫化学
的アッセイ、例えば、次の文献に記録されているアッセ
イにより、モノクローナル抗体に対して暴露し、そして
体液中の物質に結合したモノクローナル抗体の量を決定
する：クルグ（Klug）,T.L.ら，癌の研究（Cancer Re
s.）44:1048（1984）、ヘルリン（Herlyn）,M.ら，ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・イムノロジー（Ｊ．Clin．
Immunol.），２,135（1982）、メツズガー（Metzgar）,
R.S.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシズ（Proc． Natl. Acad.
Sci.），USA，81,5242（1984）、パプシデロ（Papsider
o）,L.D.ら，癌の研究（Cancer Res.），44:4653（198
4）、ハイズ（Hayes）,D.F.ら，ジャーナル・オブ・ク
リニカル・イムノロジー（Ｊ．Clin．Immunol.），75,1
671（1985）、キリアン（Killian）,C.S.ら，ジャーナ
ル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート
（J. Natl. Cancer Inst.），76,179（1986）、キリ
アン（Killian）,C.S.ら，癌の研究（Cancer Res.），
45:886（1985）、ヘディン（Hdin）,A.ら，プロシーデ
ィングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシズ（Proc． Natl. Acad. Sci.），USA，80,34
70（1983）、ペカリイ（Pekary）,A.E.ら、クリニカル
・ケミストリー（Clin. Chem.），30:1213−1215（198
4）、バスト（Bast）,R.C.ら，ニュー・イングランド・
ジャーナル・オブ・メディシン（New Ｅ ngland J.
Med.），309,883−887（1983）、ベレット（Belle
t）,D.H.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Aca
d. Ｓ ci.），USA，81,3869−3873（1984）（これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
的アッセイ、例えば、次の文献に記録されているアッセ
イにより、モノクローナル抗体に対して暴露し、そして
体液中の物質に結合したモノクローナル抗体の量を決定
する：クルグ（Klug）,T.L.ら，癌の研究（Cancer Re
s.）44:1048（1984）、ヘルリン（Herlyn）,M.ら，ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・イムノロジー（Ｊ．Clin．
Immunol.），２,135（1982）、メツズガー（Metzgar）,
R.S.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシズ（Proc． Natl. Acad.
Sci.），USA，81,5242（1984）、パプシデロ（Papsider
o）,L.D.ら，癌の研究（Cancer Res.），44:4653（198
4）、ハイズ（Hayes）,D.F.ら，ジャーナル・オブ・ク
リニカル・イムノロジー（Ｊ．Clin．Immunol.），75,1
671（1985）、キリアン（Killian）,C.S.ら，ジャーナ
ル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート
（J. Natl. Cancer Inst.），76,179（1986）、キリ
アン（Killian）,C.S.ら，癌の研究（Cancer Res.），
45:886（1985）、ヘディン（Hdin）,A.ら，プロシーデ
ィングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシズ（Proc． Natl. Acad. Sci.），USA，80,34
70（1983）、ペカリイ（Pekary）,A.E.ら、クリニカル
・ケミストリー（Clin. Chem.），30:1213−1215（198
4）、バスト（Bast）,R.C.ら，ニュー・イングランド・
ジャーナル・オブ・メディシン（New Ｅ ngland J.
Med.），309,883−887（1983）、ベレット（Belle
t）,D.H.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Aca
d. Ｓ ci.），USA，81,3869−3873（1984）（これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
適当なよく知られた免疫化学的アッセイの例は、「サ
ンドイッチ」または「２部位」免疫放射線測定アッセ
イ、競合的結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセ
イ、およびエンザイムイムノアッセイを包含し、そして
エンザイムイムノアッセイにおいて酵素試薬は分光光度
測定または分光蛍光測定により検出することができる。
ンドイッチ」または「２部位」免疫放射線測定アッセ
イ、競合的結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセ
イ、およびエンザイムイムノアッセイを包含し、そして
エンザイムイムノアッセイにおいて酵素試薬は分光光度
測定または分光蛍光測定により検出することができる。
本発明において有用な免疫化学的アッセイの１つのタ
イプの例はサンドイッチ免疫放射線測定アッセイ（IRM
A）であり、ここで抗原はそれを過剰の標識抗体と反応
させることによって直接測定される。このようなアッセ
イにおいて、抗原を標識抗体と反応させる前に、抗原を
特異的に結合する免疫吸着剤上に固定化する。免疫吸着
剤は本発明のモノクローナル抗体を添付することによっ
て形成される。モノマーである抗原のためのサンドイッ
チアッセイにおいて、抗原への結合について競合が起こ
らないように、抗原上の明確なエピトープを認識する２
つの抗体を必要とする。一方は免疫吸着剤を形成するた
めに使用し、そして他方は標識トレーサーとして使用す
る。二量体またはポリマーの抗原のためのアッセイにお
いて、同一の抗体を使用して標識トレーサーとして免疫
吸着剤を形成することができる。
イプの例はサンドイッチ免疫放射線測定アッセイ（IRM
A）であり、ここで抗原はそれを過剰の標識抗体と反応
させることによって直接測定される。このようなアッセ
イにおいて、抗原を標識抗体と反応させる前に、抗原を
特異的に結合する免疫吸着剤上に固定化する。免疫吸着
剤は本発明のモノクローナル抗体を添付することによっ
て形成される。モノマーである抗原のためのサンドイッ
チアッセイにおいて、抗原への結合について競合が起こ
らないように、抗原上の明確なエピトープを認識する２
つの抗体を必要とする。一方は免疫吸着剤を形成するた
めに使用し、そして他方は標識トレーサーとして使用す
る。二量体またはポリマーの抗原のためのアッセイにお
いて、同一の抗体を使用して標識トレーサーとして免疫
吸着剤を形成することができる。
サンドイッチIRMAは前進、あるいは同時のモードで実
施することができる。
施することができる。
ヒト前立腺腫瘍関連抗原のための前進サンドイッチア
ッセイにおいて、本発明のモノクローナル抗体を固相に
添付して、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して特異的な免
疫吸着剤を形成する。ヒト前立腺腫瘍関連抗原を含有す
る液体試料を免疫吸着剤とともにインキュベーションす
る。インキュベーションは、液体試料中のヒト前立腺腫
瘍関連抗原が免疫吸着剤上の免疫化モノクローナル抗体
と結合できるために十分な時間の間維持する。この第１
インキュベーション後、固相の免疫吸着剤をインキュベ
ーション混合物から分離する。この免疫吸着剤を洗浄し
て、また、液体試料中に存在することがある結合しない
妨害物質、例えば、非特異的結合蛋白質を除去する。免
疫化モノクローナル抗体へ結合したヒト前立腺腫瘍関連
抗原を含有する免疫吸着剤を、引続いて、本発明の標識
モノクローナル抗体とともにインキュベーションする。
再び、インキュベーションをヒト前立腺腫瘍関連抗原へ
の標識抗体の結合を保証するために十分な時間にわたっ
てかつ条件下に実施する。第２インキュベーション後、
他の洗浄を実施して結合しない標識抗体を固相の免疫吸
着剤から除去する。次いで、固相の免疫吸着剤へ結合し
た標識抗体を測定し、そして検出された標識抗体の量は
ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の直接の測度として役立
つ。
ッセイにおいて、本発明のモノクローナル抗体を固相に
添付して、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して特異的な免
疫吸着剤を形成する。ヒト前立腺腫瘍関連抗原を含有す
る液体試料を免疫吸着剤とともにインキュベーションす
る。インキュベーションは、液体試料中のヒト前立腺腫
瘍関連抗原が免疫吸着剤上の免疫化モノクローナル抗体
と結合できるために十分な時間の間維持する。この第１
インキュベーション後、固相の免疫吸着剤をインキュベ
ーション混合物から分離する。この免疫吸着剤を洗浄し
て、また、液体試料中に存在することがある結合しない
妨害物質、例えば、非特異的結合蛋白質を除去する。免
疫化モノクローナル抗体へ結合したヒト前立腺腫瘍関連
抗原を含有する免疫吸着剤を、引続いて、本発明の標識
モノクローナル抗体とともにインキュベーションする。
再び、インキュベーションをヒト前立腺腫瘍関連抗原へ
の標識抗体の結合を保証するために十分な時間にわたっ
てかつ条件下に実施する。第２インキュベーション後、
他の洗浄を実施して結合しない標識抗体を固相の免疫吸
着剤から除去する。次いで、固相の免疫吸着剤へ結合し
た標識抗体を測定し、そして検出された標識抗体の量は
ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の直接の測度として役立
つ。
サンドイッチIRMAは、また、逆および同時のモードで
実施できる。逆のモードにおいて、試験すべき液体試料
とヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して向けられた可溶性標
識抗体とからインキュベーション混合物を形成する。こ
の混合物をインキューベションし、次いでヒト前立腺腫
瘍関連抗原に対して向けられたモノクローナル抗体をま
た含有する固相の免疫吸着剤とともにインキュベーショ
ンする。他のインキュベーション後、免疫吸着剤を混合
物から分離し、そして免疫吸着剤に結合した標識を液体
試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の指示として採用
する。
実施できる。逆のモードにおいて、試験すべき液体試料
とヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して向けられた可溶性標
識抗体とからインキュベーション混合物を形成する。こ
の混合物をインキューベションし、次いでヒト前立腺腫
瘍関連抗原に対して向けられたモノクローナル抗体をま
た含有する固相の免疫吸着剤とともにインキュベーショ
ンする。他のインキュベーション後、免疫吸着剤を混合
物から分離し、そして免疫吸着剤に結合した標識を液体
試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の指示として採用
する。
同時のモードにおいて、インキュベーション混合物を
液体試料、標識モノクローナル抗体および固相の免疫吸
着剤から形成する。適当なインキュベーション後、固相
の免疫吸着剤を混合物から分離し、そして免疫吸着剤に
関連する標識を測定して液体試料中のヒト前立腺腫瘍関
連抗原の量の指示を得る。
液体試料、標識モノクローナル抗体および固相の免疫吸
着剤から形成する。適当なインキュベーション後、固相
の免疫吸着剤を混合物から分離し、そして免疫吸着剤に
関連する標識を測定して液体試料中のヒト前立腺腫瘍関
連抗原の量の指示を得る。
アッセイの種々のフォーマットにおける各インキュベ
ーション工程のため、インキュベーション時間および条
件は、固定化抗体および標識抗体に対してヒト前立腺腫
瘍関連抗原が最高に結合するように選択する。
ーション工程のため、インキュベーション時間および条
件は、固定化抗体および標識抗体に対してヒト前立腺腫
瘍関連抗原が最高に結合するように選択する。
ここに記載するIRMAに加えて、本発明において有用な
他のイムノアッセイは競合的結合アッセイ、例えば、ラ
ジオイムノアッセイ（RIA）を包含する。RIAの１つの適
当なタイプは固相RIAである。
他のイムノアッセイは競合的結合アッセイ、例えば、ラ
ジオイムノアッセイ（RIA）を包含する。RIAの１つの適
当なタイプは固相RIAである。
固相の免疫吸着剤はIRMAについて説明したように調製
する。
する。
次いで、免疫吸着剤を液体試料および既知量の標識ヒ
ト前立腺腫瘍関連抗原とともに、免疫吸着剤へのヒト前
立腺腫瘍関連抗原を可能とするために十分な時間にわた
ってかつ条件下にインキュベーションする。免疫吸着剤
を液体試料から分離し、そしてそれと関連する標識を評
価する。免疫吸着剤に関連する（associated with）標
識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の間の関係を定める前もって
確立した阻害曲線を参照することによって、液体試料中
の非標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量を決定する。
ト前立腺腫瘍関連抗原とともに、免疫吸着剤へのヒト前
立腺腫瘍関連抗原を可能とするために十分な時間にわた
ってかつ条件下にインキュベーションする。免疫吸着剤
を液体試料から分離し、そしてそれと関連する標識を評
価する。免疫吸着剤に関連する（associated with）標
識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の間の関係を定める前もって
確立した阻害曲線を参照することによって、液体試料中
の非標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量を決定する。
種々の固相アッセイにおいて、永代試料、標識抗体ま
たは両者を含有するインキュベーション混合物から免疫
吸着剤を分離する。分離は任意の慣用の分離技術、例え
ば、沈降または遠心により達成することができる。好ま
しくは、かならずしも必要ではないが、免疫吸着剤はそ
れとの接触前に、必要なとき、第２インキュベーション
媒質で洗浄し、次いで免疫吸着剤と関連する標識の量を
測定する。この洗浄は非特異的妨害物質または、アッセ
イの精度および感度に影響を及ぼしうる過剰の標識抗体
を除去する。
たは両者を含有するインキュベーション混合物から免疫
吸着剤を分離する。分離は任意の慣用の分離技術、例え
ば、沈降または遠心により達成することができる。好ま
しくは、かならずしも必要ではないが、免疫吸着剤はそ
れとの接触前に、必要なとき、第２インキュベーション
媒質で洗浄し、次いで免疫吸着剤と関連する標識の量を
測定する。この洗浄は非特異的妨害物質または、アッセ
イの精度および感度に影響を及ぼしうる過剰の標識抗体
を除去する。
本発明による生体外診断法の最後の工程として、体液
中に存在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を
前もって決定した基本水準と比較する。
中に存在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を
前もって決定した基本水準と比較する。
予期すべきモノクローナル抗体のモノクローナル抗体
アッセイの結合の基本水準の決定は、この種の診断試験
の読取りのために必要なパラメーターを定めるとき、こ
の分野において日常的になされる決定である。これらの
特定は、不都合な実験を実施しないで、とくにここに記
載する教示に照らしてなすことができる。
アッセイの結合の基本水準の決定は、この種の診断試験
の読取りのために必要なパラメーターを定めるとき、こ
の分野において日常的になされる決定である。これらの
特定は、不都合な実験を実施しないで、とくにここに記
載する教示に照らしてなすことができる。
一般に、「基本水準（base level）」は、（１）正
常の個体数（population）の平均より上の２つの標準偏
差として、あるいは（２）正常の個体数の99％がそれよ
り低いところにある水準として定義される。
常の個体数（population）の平均より上の２つの標準偏
差として、あるいは（２）正常の個体数の99％がそれよ
り低いところにある水準として定義される。
本発明の第３の実施態様において、前立腺腫瘍または
その転移の生体内診断法が提供される。
その転移の生体内診断法が提供される。
この方法は、患者にマーカーに接合した（cnjugate
d）本発明のモノクローナル抗体を投与し、次いで患者
を適当な検出装置に暴露することによってマーカーの存
在を検出することを包含する。
d）本発明のモノクローナル抗体を投与し、次いで患者
を適当な検出装置に暴露することによってマーカーの存
在を検出することを包含する。
マーカーに接合したモノクローナル抗体の投与および
検出ならびにモーカーへの抗体の接合法は、当業者によ
く知られた方法あるいは当業者により容易に決定される
方法により達成される。例えば、次の文献を参照：ゴー
ルデンバーグ（Goldenberg）,D.M.ら，ニュー・イング
ランド・ジャーナル・オブ・メディシン（New England
J. Med.），298,1384−1388（1978）、ゴールデンバ
ーグ（Goldenberg）,D.M.ら，ジャーナル・オブ・アメ
リカン・メディカル・アソシエーション（J. A. M.
A.），250,630−635（1983）、ゴールデンバーグ（Gold
enberg）,D.M.ら，消化器病学（Gastroenterol.），84,
524−532（1983）、シッカルディ（Siccardi）,A.G.
ら，癌の研究（Cancer Res.），46:4817−4822（198
6）、エペネトス（Epenetos）,A.A.ら、癌（Cancer），
55:984−987（1985）、フィルベン（Philben）,V.J.
ら、癌（Cancer），57:571−576（1986）、チオウ（Chi
ou）,R.ら，癌の研究（Cancer Res.），45:6140−6146
（1985）およびワング（Hwang）,K.M.ら，ジャーナル・
オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート（J.
Natl. Cancer Inst.），76,849−855（1986）（こ
れらのすべてを特別にここに引用によって加える）。
検出ならびにモーカーへの抗体の接合法は、当業者によ
く知られた方法あるいは当業者により容易に決定される
方法により達成される。例えば、次の文献を参照：ゴー
ルデンバーグ（Goldenberg）,D.M.ら，ニュー・イング
ランド・ジャーナル・オブ・メディシン（New England
J. Med.），298,1384−1388（1978）、ゴールデンバ
ーグ（Goldenberg）,D.M.ら，ジャーナル・オブ・アメ
リカン・メディカル・アソシエーション（J. A. M.
A.），250,630−635（1983）、ゴールデンバーグ（Gold
enberg）,D.M.ら，消化器病学（Gastroenterol.），84,
524−532（1983）、シッカルディ（Siccardi）,A.G.
ら，癌の研究（Cancer Res.），46:4817−4822（198
6）、エペネトス（Epenetos）,A.A.ら、癌（Cancer），
55:984−987（1985）、フィルベン（Philben）,V.J.
ら、癌（Cancer），57:571−576（1986）、チオウ（Chi
ou）,R.ら，癌の研究（Cancer Res.），45:6140−6146
（1985）およびワング（Hwang）,K.M.ら，ジャーナル・
オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート（J.
Natl. Cancer Inst.），76,849−855（1986）（こ
れらのすべてを特別にここに引用によって加える）。
投与量は患者の年令および体重に依存して変化するで
あろうが、一般に約0.1〜20mg（のマーカーに接合した
モノクローナル抗体）／患者の１回の投与量は十分であ
る。より好ましい投与量は約1.0〜2.0mg（のマーカーに
接合したモノクローナル抗体）／患者である。
あろうが、一般に約0.1〜20mg（のマーカーに接合した
モノクローナル抗体）／患者の１回の投与量は十分であ
る。より好ましい投与量は約1.0〜2.0mg（のマーカーに
接合したモノクローナル抗体）／患者である。
抗体に接合することができるマーカーの例は、この分
野においてよく知られており、そして核磁気共鳴の像形
成、すなわち、核磁気スピン共鳴アイソトープ、および
放射性物質により検出できる物質を包含する。
野においてよく知られており、そして核磁気共鳴の像形
成、すなわち、核磁気スピン共鳴アイソトープ、および
放射性物質により検出できる物質を包含する。
核磁気スピン共鳴アイソトープの好ましい例はガドリ
ニウム（Gd）である。
ニウム（Gd）である。
放射性マーカーの適当な例は、I125、I131、I123、In
111、In113、Ga67、Ga68、Ru97、Ru103、Hg197、Hg203
及びTc99mを包含する。In111およびTc99mは、エネルギ
ーが低いかつ長い範囲の検出に適するので、好ましい。
111、In113、Ga67、Ga68、Ru97、Ru103、Hg197、Hg203
及びTc99mを包含する。In111およびTc99mは、エネルギ
ーが低いかつ長い範囲の検出に適するので、好ましい。
放射性マーカーの検出は、上の文献中に記載されるガ
ンマシンチレーションカメラなどによる。
ンマシンチレーションカメラなどによる。
核磁気像形成装置を使用して核磁気スピン共鳴アイソ
トープのマーカーを検出することができる。
トープのマーカーを検出することができる。
第４実施態様において、本発明は前立腺腫瘍またはそ
の転移に悩む患者を処置する方法を提供する。
の転移に悩む患者を処置する方法を提供する。
この方法は患者に製薬学的に有効な量のモノクローナ
ル抗体−治療剤を投与することを包含し、ここでモノク
ローナル抗体は本発明によるものである。
ル抗体−治療剤を投与することを包含し、ここでモノク
ローナル抗体は本発明によるものである。
モノクローナル抗体−治療剤を調製しかつ投与する方
法ならびに適当な投与量は、この分野においてよく知ら
れているか、あるいは当業者により容易に決定される。
代表的プロトコールは下に引用する文献に記載されてい
る。
法ならびに適当な投与量は、この分野においてよく知ら
れているか、あるいは当業者により容易に決定される。
代表的プロトコールは下に引用する文献に記載されてい
る。
治療において使用するモノクローナル抗体−治療剤の
例は、次のものを包含する：薬物、例えば、メトトレキ
セートおよびアドリアマイシンに結合した抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、デグチ（Deguch
i）,T.ら，癌の研究（Cancer Res.），46:3751（198
6）、デグチ（Deguchi）,T.ら，フェデレイション・プ
ロシーデングス（Fed. Proc.），44:1684（1985）、エ
ムプレトン（Embleton）,M.J.ら，ブリティッシ・ジャ
ーナル・オブ・キャンサー（Br. J. Cancer），49,55
9（1984）およびピム（Pimm）,M.V.ら，癌の免疫学免疫
治療（Cancer Immunol. Immunother.），12,125−134
（1982）、（これらのすべてを特別にここに引用によっ
て加える）；毒素に結合した抗体、例えば、次の文献に
記載されているもの、ウール（Uhr）,J.W.ら，モノクロ
ーナル抗体および癌（Monoclonal Antibodies and C
ancer），アカデミック・プレス・インコーポレーテッ
ド（Academic Press,Inc.）,85−98ページ（1983）、
ビテッタ（Vitetta）,E.S.ら，バイオテクノロジー・ア
ンド・バイオロジカル・フロンテイァーズ（Biotechnol
ogy and Biol. Frontiers）,P.H.エイベルソン（Abe
lson）,73−85ページ（1984）およびビテッタ（Vitett
a）,E.S.ら，サイエンス（Science），219,644−650（1
983）、（これらのすべてを特別にここに引用によって
加える）；アイソトープ、例えば、I131、Yt90、Sc47、
Cu67、Bi212、Pb212およびAt211に結合した抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、ゴールデンバーグ
（Goldenberg）,D.M.ら，癌の研究（Cancer Rs.），4
1:4353（1981）、カラスクイロ（Carrasquillo）,J.A.
ら，癌の処置の報告（Cancer Treat. Rep.），68,317
（1984）、ザルクバーグ（Zalcberg）,J.R.ら，ジャー
ナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュー
ト（J. Natl. Cancer Inst.），72,697（1984）、ジ
ョーンズ（Jones）,D.H.ら，インターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・キャンサー（Int. J. Cancer），35:7
15（1985）、ランゲ（Lnge）,P.H.ら，外科学（Surger
y），98,143（1985）、カルトヴィッチ（Kaltovich）,
F.A.ら，ジャーナル・オブ・ニュークリアー・メディシ
ン（J. Nucl. Med.），27:897（1986）、オーグー（O
der）,S.E.ら，Int. J. Radiother. Oncol. Biol.
Phys.），８,121（1982）およびコーテナイ−ルック
（Courtenay−Luck）,N.ら，ランセット（Lancet），
１:1441（1984）、（これらのすべてを特別にここに引
用によって加える）；ヘテロ二官能性（heterobifuncti
onal）抗体、例えば、複合体が腫瘍および体自身のキラ
ー細胞の両者に結合するように、他の抗体へ結合または
スプライシングされた抗体、例えば、次の文献に記載さ
れているもの、ペレズ（Perez）,P.ら，ジャーナル・オ
ブ・イクスペリメンタル・メディシン（J. Exp. Me
d.），163:166−178（1986）およびラウ（Lau）,M.A.
ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sc
i.），USA，82,8648−8652（1984）、（これらの両者を
特別にここに引用によって加える）；および自然の、す
なわち、接合または複合体化されていない、抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、ヘルリン（Herly
n）,D.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad.
Sci.），USA，79,4761（1982）、シュルズ（Schul
z）,G.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad.
Sci.），USA，80,5407（1983）、ケイポン（Capon
e）,P.M.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Aca
d. Ｓ ci.），USA，80,7328（1983）、シアーズ（Sea
rs）,H.F.ら，癌の研究（Cancer Res.），45:5910（19
85）、ネポム（Nepom）、G.T.ら，プロシーディングス
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，81,2864（198
4）、コプロウスキー（Koprowski）,H.ら，プロシーデ
ィングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，81,216
（1984）およびホウブトン（Houghton）,A.N.ら，プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci. USA，8
2,1242（1985）、（これらのすべてを特別ここに引用に
よって加える）。
例は、次のものを包含する：薬物、例えば、メトトレキ
セートおよびアドリアマイシンに結合した抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、デグチ（Deguch
i）,T.ら，癌の研究（Cancer Res.），46:3751（198
6）、デグチ（Deguchi）,T.ら，フェデレイション・プ
ロシーデングス（Fed. Proc.），44:1684（1985）、エ
ムプレトン（Embleton）,M.J.ら，ブリティッシ・ジャ
ーナル・オブ・キャンサー（Br. J. Cancer），49,55
9（1984）およびピム（Pimm）,M.V.ら，癌の免疫学免疫
治療（Cancer Immunol. Immunother.），12,125−134
（1982）、（これらのすべてを特別にここに引用によっ
て加える）；毒素に結合した抗体、例えば、次の文献に
記載されているもの、ウール（Uhr）,J.W.ら，モノクロ
ーナル抗体および癌（Monoclonal Antibodies and C
ancer），アカデミック・プレス・インコーポレーテッ
ド（Academic Press,Inc.）,85−98ページ（1983）、
ビテッタ（Vitetta）,E.S.ら，バイオテクノロジー・ア
ンド・バイオロジカル・フロンテイァーズ（Biotechnol
ogy and Biol. Frontiers）,P.H.エイベルソン（Abe
lson）,73−85ページ（1984）およびビテッタ（Vitett
a）,E.S.ら，サイエンス（Science），219,644−650（1
983）、（これらのすべてを特別にここに引用によって
加える）；アイソトープ、例えば、I131、Yt90、Sc47、
Cu67、Bi212、Pb212およびAt211に結合した抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、ゴールデンバーグ
（Goldenberg）,D.M.ら，癌の研究（Cancer Rs.），4
1:4353（1981）、カラスクイロ（Carrasquillo）,J.A.
ら，癌の処置の報告（Cancer Treat. Rep.），68,317
（1984）、ザルクバーグ（Zalcberg）,J.R.ら，ジャー
ナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュー
ト（J. Natl. Cancer Inst.），72,697（1984）、ジ
ョーンズ（Jones）,D.H.ら，インターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・キャンサー（Int. J. Cancer），35:7
15（1985）、ランゲ（Lnge）,P.H.ら，外科学（Surger
y），98,143（1985）、カルトヴィッチ（Kaltovich）,
F.A.ら，ジャーナル・オブ・ニュークリアー・メディシ
ン（J. Nucl. Med.），27:897（1986）、オーグー（O
der）,S.E.ら，Int. J. Radiother. Oncol. Biol.
Phys.），８,121（1982）およびコーテナイ−ルック
（Courtenay−Luck）,N.ら，ランセット（Lancet），
１:1441（1984）、（これらのすべてを特別にここに引
用によって加える）；ヘテロ二官能性（heterobifuncti
onal）抗体、例えば、複合体が腫瘍および体自身のキラ
ー細胞の両者に結合するように、他の抗体へ結合または
スプライシングされた抗体、例えば、次の文献に記載さ
れているもの、ペレズ（Perez）,P.ら，ジャーナル・オ
ブ・イクスペリメンタル・メディシン（J. Exp. Me
d.），163:166−178（1986）およびラウ（Lau）,M.A.
ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sc
i.），USA，82,8648−8652（1984）、（これらの両者を
特別にここに引用によって加える）；および自然の、す
なわち、接合または複合体化されていない、抗体、例え
ば、次の文献に記載されているもの、ヘルリン（Herly
n）,D.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad.
Sci.），USA，79,4761（1982）、シュルズ（Schul
z）,G.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad.
Sci.），USA，80,5407（1983）、ケイポン（Capon
e）,P.M.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・
アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Aca
d. Ｓ ci.），USA，80,7328（1983）、シアーズ（Sea
rs）,H.F.ら，癌の研究（Cancer Res.），45:5910（19
85）、ネポム（Nepom）、G.T.ら，プロシーディングス
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，81,2864（198
4）、コプロウスキー（Koprowski）,H.ら，プロシーデ
ィングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，81,216
（1984）およびホウブトン（Houghton）,A.N.ら，プロ
シーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci. USA，8
2,1242（1985）、（これらのすべてを特別ここに引用に
よって加える）。
本発明のこの実施態様において、モノクローナル抗体
−治療剤は腫瘍部位に直接供給し、これにより腫瘍組織
を治療剤に直接暴露することができる。
−治療剤は腫瘍部位に直接供給し、これにより腫瘍組織
を治療剤に直接暴露することができる。
次の実施例は例示のみを目的とし、そして本発明の範
囲をいかなる方法においても限定しない。
囲をいかなる方法においても限定しない。
実施例１ モノクローナル抗体TURP−27およびTURP−73の生成 （Ａ） ハイブリドーマの生成 ３匹の雌のBALB/c［ハーラン・スプレイク−ダウレイ
（Harlan Spraque−Dawley）、インディアナ州インデ
ィアナポリス、生後20週］を、３つの良性前立腺増生
（BPH）検体および１つの前立腺腺癌の経尿道切除検体
のプールから誘導された粗製膜抗原調製物に対して超免
疫化した。
（Harlan Spraque−Dawley）、インディアナ州インデ
ィアナポリス、生後20週］を、３つの良性前立腺増生
（BPH）検体および１つの前立腺腺癌の経尿道切除検体
のプールから誘導された粗製膜抗原調製物に対して超免
疫化した。
粗製膜抗原調製物は、単細胞懸濁液を20ミリモルのヘ
ペス（Hepes）（pH7.1）、5.0ミリモルのNaCl、1.0ミリ
モルのMgCl2、0.1モルのNaFおよび1.0ミリモルのPMSFか
らなる低張緩衝液中で１〜２時間インキュベーションし
た。次いで、細胞をダウンス（Dounce）ホモジナイゼイ
ションにより溶解した。核部分（nuclear traction）
を200×ｇにおいて５分間遠心することにより除去し、
そして上澄みをデカンテーションし、そして25,000×ｇ
および４℃において30分間再遠心した。次いで、生ずる
沈殿物を20ミリモルのヘペス（pH6.8）、40ミリモルのN
aCl、0.1ミリモルのEDTAおよび2.0ミリモルのPMSFから
なる膜緩衝液中の37％（v/v）スクロース溶液の1.5ml中
に再溶解し、膜緩衝液中の20％（v/v）スクロース溶液
の3.0mlを上に配置し、そして2,000rpmおよび２℃にお
いて16時間遠心した。次いで、膜に富んだ（20〜37％）
界面をほぼ1.0mlにおいて除去し、10mlの膜緩衝液で希
釈し、そして40,000rpmおよび10℃において遠心して粗
製膜抗原調製物を得た。
ペス（Hepes）（pH7.1）、5.0ミリモルのNaCl、1.0ミリ
モルのMgCl2、0.1モルのNaFおよび1.0ミリモルのPMSFか
らなる低張緩衝液中で１〜２時間インキュベーションし
た。次いで、細胞をダウンス（Dounce）ホモジナイゼイ
ションにより溶解した。核部分（nuclear traction）
を200×ｇにおいて５分間遠心することにより除去し、
そして上澄みをデカンテーションし、そして25,000×ｇ
および４℃において30分間再遠心した。次いで、生ずる
沈殿物を20ミリモルのヘペス（pH6.8）、40ミリモルのN
aCl、0.1ミリモルのEDTAおよび2.0ミリモルのPMSFから
なる膜緩衝液中の37％（v/v）スクロース溶液の1.5ml中
に再溶解し、膜緩衝液中の20％（v/v）スクロース溶液
の3.0mlを上に配置し、そして2,000rpmおよび２℃にお
いて16時間遠心した。次いで、膜に富んだ（20〜37％）
界面をほぼ1.0mlにおいて除去し、10mlの膜緩衝液で希
釈し、そして40,000rpmおよび10℃において遠心して粗
製膜抗原調製物を得た。
等体積の完全フロインドアジュバントと混合した100
μｇの粗製膜抗原調製物で、マウスを皮下的に（0.1m）
および筋肉内に（後部の脇腹、0.05ml）免疫化した（第
０日）。これらのマウスを、第６日および第36日に、0.
1mlのPBS中の100μｇの粗製膜抗原調製物の腹腔内注射
により促進（boost）した。第66日に、マウスに0.1mlの
PBS中の100μｇの粗製膜抗原調製物を静脈内注射し、そ
して脾臓を融合のため４日後に除去した。超免疫化した
マウスからの脾細胞を、コーラー（Kohler）,G.ら、ユ
ーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur.
J. Immun．）,6,292−295（1976）（特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして、50％の
ポリエチレングリコールの存在下に［アメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（American Type Cult
ure Collection）、分子量1300−1600］、コプロウス
キー（Koprowski）,H.ら，プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc.
Natl. Acad. Sci.），USA，74,2985−2988（1977）
（特別にここに引用によって加える）により確立された
手順に従い、P3−NS−１−Ag4−１マウス骨髄腫細胞と
融合した。融合後、細胞（3.0×108の脾および3.0×107
の骨髄腫）を洗浄し、そして10％（v/v）のウシ胎児血
清［ハイクローン・ラボラトリーズ（Hyclone Laborat
ories,Logan,Utah）］、1.0×10-4モルのハイポキサン
チン、4.0×10-7モルのアミノプリテン、6.4×10-5モル
のチミジンおよび50μg/mlのゲンタマイシン［グランド
・アイランド・バイオロジカル・カンパニー（Grand I
sland Biolgical Co.,Grand Island,New York）］
を含有する300mlのHSILoSM培地［ハイブリドーマ・サイ
エンシズ・インコーポレーテッド（Hybridoma Science
s,Inc.,Atlanta,Georgia）］中に再懸濁した。次いで、
細胞を0.2mlのアリコートで96ウェル（well）のマイク
ロタイタープレート［コースター（Costar）,Cambridg
e,Massachusetts）中に分散された。問題のものである
ことが決定された、すなわち、前立腺抗原に対する結合
特異性をもつが、前立腺抗原以外の抗原に対する結合特
異性をもたないモノクローナル抗体を生産するハイブリ
ドーマを、限界希釈により二重クローニングした。この
方法で、TURP−27およびTURP−73と表示するモノクロー
ナル抗体を生産する２つのハイブリドーマが発現され
た。TURP−27およびTURP−73はアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（American Type Culture C
ollection,12301 Parklawn Drive,Rockville,Marylan
d,U.S.A.20852）に、それぞれ、ATCC No.40292およびA
TCC No.40293で受託された。
μｇの粗製膜抗原調製物で、マウスを皮下的に（0.1m）
および筋肉内に（後部の脇腹、0.05ml）免疫化した（第
０日）。これらのマウスを、第６日および第36日に、0.
1mlのPBS中の100μｇの粗製膜抗原調製物の腹腔内注射
により促進（boost）した。第66日に、マウスに0.1mlの
PBS中の100μｇの粗製膜抗原調製物を静脈内注射し、そ
して脾臓を融合のため４日後に除去した。超免疫化した
マウスからの脾細胞を、コーラー（Kohler）,G.ら、ユ
ーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur.
J. Immun．）,6,292−295（1976）（特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして、50％の
ポリエチレングリコールの存在下に［アメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（American Type Cult
ure Collection）、分子量1300−1600］、コプロウス
キー（Koprowski）,H.ら，プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc.
Natl. Acad. Sci.），USA，74,2985−2988（1977）
（特別にここに引用によって加える）により確立された
手順に従い、P3−NS−１−Ag4−１マウス骨髄腫細胞と
融合した。融合後、細胞（3.0×108の脾および3.0×107
の骨髄腫）を洗浄し、そして10％（v/v）のウシ胎児血
清［ハイクローン・ラボラトリーズ（Hyclone Laborat
ories,Logan,Utah）］、1.0×10-4モルのハイポキサン
チン、4.0×10-7モルのアミノプリテン、6.4×10-5モル
のチミジンおよび50μg/mlのゲンタマイシン［グランド
・アイランド・バイオロジカル・カンパニー（Grand I
sland Biolgical Co.,Grand Island,New York）］
を含有する300mlのHSILoSM培地［ハイブリドーマ・サイ
エンシズ・インコーポレーテッド（Hybridoma Science
s,Inc.,Atlanta,Georgia）］中に再懸濁した。次いで、
細胞を0.2mlのアリコートで96ウェル（well）のマイク
ロタイタープレート［コースター（Costar）,Cambridg
e,Massachusetts）中に分散された。問題のものである
ことが決定された、すなわち、前立腺抗原に対する結合
特異性をもつが、前立腺抗原以外の抗原に対する結合特
異性をもたないモノクローナル抗体を生産するハイブリ
ドーマを、限界希釈により二重クローニングした。この
方法で、TURP−27およびTURP−73と表示するモノクロー
ナル抗体を生産する２つのハイブリドーマが発現され
た。TURP−27およびTURP−73はアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（American Type Culture C
ollection,12301 Parklawn Drive,Rockville,Marylan
d,U.S.A.20852）に、それぞれ、ATCC No.40292およびA
TCC No.40293で受託された。
（Ｂ） ハイブリドーマの上澄みのスクリーニングイブ
リドーマの上澄みのスクリーニング 活性的に生長するハイブリドーマからの上澄みを、あ
る数の正常の、増生の、ウイルス形質転換した悪性細胞
系［スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Can
cer Res.），42:3084−3089（1982）］（特別にここに
引用によって加える）、および粗製膜抽出物に対する結
合活性を、スターリング（Starling）,J.J.ら，ジャー
ナル・オブ・スプラモレキュラー・ストラクチャー（J.
Supramol. Struct.）11,563−577（1979）（特別に
ここに引用によって加える）に記載されている固相RIA
を用いてスクリーニングした。
リドーマの上澄みのスクリーニング 活性的に生長するハイブリドーマからの上澄みを、あ
る数の正常の、増生の、ウイルス形質転換した悪性細胞
系［スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Can
cer Res.），42:3084−3089（1982）］（特別にここに
引用によって加える）、および粗製膜抽出物に対する結
合活性を、スターリング（Starling）,J.J.ら，ジャー
ナル・オブ・スプラモレキュラー・ストラクチャー（J.
Supramol. Struct.）11,563−577（1979）（特別に
ここに引用によって加える）に記載されている固相RIA
を用いてスクリーニングした。
モノクローナル抗体は、標準の培養条件下に10％（v/
v）の胎児子牛血清の存在下に生長させたハイブリドー
マからの培養上澄みとして使用した。蛋白質濃度は、ロ
ウリー（Lowry）,O.H.ら，ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）193:265−2
75（1951）（特別にここに引用によって加える）の方法
により決定した。培養上澄みはほぼ15〜30μg/mlのモノ
クローナル抗体を含有することがわかった。
v）の胎児子牛血清の存在下に生長させたハイブリドー
マからの培養上澄みとして使用した。蛋白質濃度は、ロ
ウリー（Lowry）,O.H.ら，ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）193:265−2
75（1951）（特別にここに引用によって加える）の方法
により決定した。培養上澄みはほぼ15〜30μg/mlのモノ
クローナル抗体を含有することがわかった。
全細胞または粗製膜抽出物は、96ウェルのポリ塩化ビ
ニルのマイクロタイタープレート［ダイナテク・ラボラ
トリーズ・インコーポレーテッド（Dynateck Laborato
ries,Inc.,Alexandria,Virginia）］の個々のウェルに
取り付けた。さらに詳しくは、全細胞または粗製膜抽出
物3.0μg/ウェルを各ウェルに添加し、そしてウェルを
乾燥した。次いで、0.1％（v/v）のグルタルアルデヒド
を各ウェルに数分間添加し、そしてPBSで洗浄した。固
定された細胞をハイブリドーマ培養上澄みとともに室温
において１時間インキュベーションした。よく洗浄した
後、ウサギ抗マウスIgG血清［マイルズ・ラボラトリー
ズ（Miles Lboratories,Elkhardt,Indiana）］の親和
精製した［グイメゼインス（Guimezanes）,A.ら、ユー
ロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur. J.
Immun.），６,69−72（1976）］（特別にここに引用
によって加える）、125I標識［ハンター（Hunter）,R.
ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sc
i.），USA，133,989−992（1970）］（特別にここに引
用によって加える）、Ｆ（ab′）２断片［フリドマン
（Fridman）,W.H.ら，セル・イムノロジー（Cell Immu
nol.），11,442−445（1974）］（特別にここに引用に
よって加える）の25mlを、各ウェル（100,000cpm）に１
時間添加した。プレートを洗浄し、そして個々のウェル
を柔軟なマイクロタイタープレートから切取り、そして
ガンマカウンターで計数した。結果を下の表１および表
２に示す。
ニルのマイクロタイタープレート［ダイナテク・ラボラ
トリーズ・インコーポレーテッド（Dynateck Laborato
ries,Inc.,Alexandria,Virginia）］の個々のウェルに
取り付けた。さらに詳しくは、全細胞または粗製膜抽出
物3.0μg/ウェルを各ウェルに添加し、そしてウェルを
乾燥した。次いで、0.1％（v/v）のグルタルアルデヒド
を各ウェルに数分間添加し、そしてPBSで洗浄した。固
定された細胞をハイブリドーマ培養上澄みとともに室温
において１時間インキュベーションした。よく洗浄した
後、ウサギ抗マウスIgG血清［マイルズ・ラボラトリー
ズ（Miles Lboratories,Elkhardt,Indiana）］の親和
精製した［グイメゼインス（Guimezanes）,A.ら、ユー
ロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Eur. J.
Immun.），６,69−72（1976）］（特別にここに引用
によって加える）、125I標識［ハンター（Hunter）,R.
ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sc
i.），USA，133,989−992（1970）］（特別にここに引
用によって加える）、Ｆ（ab′）２断片［フリドマン
（Fridman）,W.H.ら，セル・イムノロジー（Cell Immu
nol.），11,442−445（1974）］（特別にここに引用に
よって加える）の25mlを、各ウェル（100,000cpm）に１
時間添加した。プレートを洗浄し、そして個々のウェル
を柔軟なマイクロタイタープレートから切取り、そして
ガンマカウンターで計数した。結果を下の表１および表
２に示す。
上の表１および表２中の結果が示すように、TURP−27
と表示するモノクローナル抗体は試験したヒト細胞系の
いずれに対しても反応性でなく（表１）、４種類の前立
腺腺癌の４種類、５種類のBPHのうちの４種類および７
種類の正常の前立腺膜調製物の１種類に結合しなかった
（表２）。TURP−27は、また、膀胱、卵巣、結腸、腎、
肝、リンパ節、膵臓、脾、睾丸、尿道および乳房を包含
するRIAにおいて検査した他の正常組織のいずれとも反
応しなかった（表２）。
と表示するモノクローナル抗体は試験したヒト細胞系の
いずれに対しても反応性でなく（表１）、４種類の前立
腺腺癌の４種類、５種類のBPHのうちの４種類および７
種類の正常の前立腺膜調製物の１種類に結合しなかった
（表２）。TURP−27は、また、膀胱、卵巣、結腸、腎、
肝、リンパ節、膵臓、脾、睾丸、尿道および乳房を包含
するRIAにおいて検査した他の正常組織のいずれとも反
応しなかった（表２）。
他方において、TURP−73と表示するモノクローナル抗
体はより広い範囲の細胞系および組織に対する反応性を
示した。詳しくは、TURP−73は３種類のよく特徴づけら
れたヒト前立腺腺癌細胞系（DU145、PC−３、LNCaP）な
らびにZR−75−１乳癌およびSW1116およびCX−１結腸直
腸癌の細胞系に結合した（表１）。TURP−73は、また、
試験したすべての正常の、良性の増生、および悪性の前
立腺膜調製物と強く反応し、そしてまた、正常の腎に結
合した（表２）。
体はより広い範囲の細胞系および組織に対する反応性を
示した。詳しくは、TURP−73は３種類のよく特徴づけら
れたヒト前立腺腺癌細胞系（DU145、PC−３、LNCaP）な
らびにZR−75−１乳癌およびSW1116およびCX−１結腸直
腸癌の細胞系に結合した（表１）。TURP−73は、また、
試験したすべての正常の、良性の増生、および悪性の前
立腺膜調製物と強く反応し、そしてまた、正常の腎に結
合した（表２）。
（Ｃ） 免疫蛍光着色 生きている細胞および固定された細胞の免疫蛍光は、
スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Cancer
Res.），42:3084−3089（1982）、およびスターリン
グ（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Cancer Res.），4
5:804−808（1985）（これらの両者を特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして実施し
た。
スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Cancer
Res.），42:3084−3089（1982）、およびスターリン
グ（Starling）,J.J.ら，癌の研究（Cancer Res.），4
5:804−808（1985）（これらの両者を特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして実施し
た。
さらに詳しくは、106の細胞をプラスチック管内に入
れ、そして冷PBSで２回洗浄した。細胞の沈殿を100μｌ
のハイブリドーマ培養上澄み中に再懸濁し、そして４℃
で30分間インキュベーションした。細胞の沈殿を冷PBS
で２回洗浄し、次いでフルオレセインイソチオシアネー
ト接合抗マウスIgG［重鎖および軽鎖特異的；カッペル
・ラボラトリーズ（Cappel Laboratories,Cochranvill
e,Pennsylvania）］の1:20希釈物の25mlと混合し、そし
て４℃で30分間インキュベーションした。細胞を冷PBS
中で２回以上洗浄し、そして再調査の準備が整うまで氷
上で貯蔵した。細胞の懸濁液の湿ったマウントをできる
だけ早くつくり、そしてツァイス（Zeiss）蛍光顕微鏡
で検査した。合計300の細胞のなかから陽性の蛍光を示
す細胞の数を計数して、蛍光を示す細胞の百分率を決定
した。
れ、そして冷PBSで２回洗浄した。細胞の沈殿を100μｌ
のハイブリドーマ培養上澄み中に再懸濁し、そして４℃
で30分間インキュベーションした。細胞の沈殿を冷PBS
で２回洗浄し、次いでフルオレセインイソチオシアネー
ト接合抗マウスIgG［重鎖および軽鎖特異的；カッペル
・ラボラトリーズ（Cappel Laboratories,Cochranvill
e,Pennsylvania）］の1:20希釈物の25mlと混合し、そし
て４℃で30分間インキュベーションした。細胞を冷PBS
中で２回以上洗浄し、そして再調査の準備が整うまで氷
上で貯蔵した。細胞の懸濁液の湿ったマウントをできる
だけ早くつくり、そしてツァイス（Zeiss）蛍光顕微鏡
で検査した。合計300の細胞のなかから陽性の蛍光を示
す細胞の数を計数して、蛍光を示す細胞の百分率を決定
した。
TURP−27は、免疫蛍光により、生きているか、あるい
はメタノール：酢酸、ホルマリンまたはエタノールで固
定されたDU145または0C−３細胞に結合しないことがわ
かり、これによりRIAで観測した前立腺腫瘍細胞系にこ
のモノクローナル抗体が非反応性であることが確証され
た。他方において、TURP−73は、アルコールまたはホル
マリンの固定後に生存し続けるPC−３細胞の強い膜の蛍
光を提供することがわかった。
はメタノール：酢酸、ホルマリンまたはエタノールで固
定されたDU145または0C−３細胞に結合しないことがわ
かり、これによりRIAで観測した前立腺腫瘍細胞系にこ
のモノクローナル抗体が非反応性であることが確証され
た。他方において、TURP−73は、アルコールまたはホル
マリンの固定後に生存し続けるPC−３細胞の強い膜の蛍
光を提供することがわかった。
（Ｄ） 定量的吸収 粗製膜抗原調製物または全細胞を利用するモノクロー
ナル抗体吸収分析を、スターリング（Starling）,J.J.
ら，癌の研究（Cancer Res.），42:3084−3089（198
2）（特別にここに引用によって加える）に記載される
ようにして実施し、そして蛋白質の決定をロウリー（Lo
wry）,O.H.ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（J. Biol. Chem.）193:263−275（1951）
（特別にここに引用によって加える）の方法により実施
した。それぞれ、TURP−27およびTURP−73からの培養上
澄みの希釈物（1:20および1:500）を使用した。変化量
の粗製膜抗原調製物を添加し、そして最終体積は0.11ml
であった。アッセイはライトイ（Wright）,G.L.ら，泌
尿器科学（Urol.），19:351−355（1982）（特別にここ
に引用によって加える）に記載されているようにして実
施した。結果を第1A図および第1B図に示す。
ナル抗体吸収分析を、スターリング（Starling）,J.J.
ら，癌の研究（Cancer Res.），42:3084−3089（198
2）（特別にここに引用によって加える）に記載される
ようにして実施し、そして蛋白質の決定をロウリー（Lo
wry）,O.H.ら，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（J. Biol. Chem.）193:263−275（1951）
（特別にここに引用によって加える）の方法により実施
した。それぞれ、TURP−27およびTURP−73からの培養上
澄みの希釈物（1:20および1:500）を使用した。変化量
の粗製膜抗原調製物を添加し、そして最終体積は0.11ml
であった。アッセイはライトイ（Wright）,G.L.ら，泌
尿器科学（Urol.），19:351−355（1982）（特別にここ
に引用によって加える）に記載されているようにして実
施した。結果を第1A図および第1B図に示す。
第1A図および第1B図において、●はCa1124前立腺腺癌
を表わし、■はCa 1126前立腺腺癌を表わし、▲はＰ−
144−80良性前立腺増生を表わし、△はＰ−151−80良性
前立腺増生を表わし、○はCa−1122良性前立腺増生を表
わし、□はＰ−16−80正常前立腺を表わし、 はＰ−117−80正常前立腺を表わし、 はCa 1026正常肝を表わし、そして はCa 1005正常結腸を表わす。第1A図および第1B図にお
いて、結合活性の百分率は次のように定義する： ここでａは吸着されたモノクローナル抗体のcpmであ
り、ｂはP3X63/Ag8骨髄腫MOPC 21 IgG1対照モノクロ
ーナル抗体のcpmであり、そしてｃは吸着されないモノ
クローナル抗体のcpmである。使用した標的抗原はCa 1
124前立腺腺癌膜調製物であった。
を表わし、■はCa 1126前立腺腺癌を表わし、▲はＰ−
144−80良性前立腺増生を表わし、△はＰ−151−80良性
前立腺増生を表わし、○はCa−1122良性前立腺増生を表
わし、□はＰ−16−80正常前立腺を表わし、 はＰ−117−80正常前立腺を表わし、 はCa 1026正常肝を表わし、そして はCa 1005正常結腸を表わす。第1A図および第1B図にお
いて、結合活性の百分率は次のように定義する： ここでａは吸着されたモノクローナル抗体のcpmであ
り、ｂはP3X63/Ag8骨髄腫MOPC 21 IgG1対照モノクロ
ーナル抗体のcpmであり、そしてｃは吸着されないモノ
クローナル抗体のcpmである。使用した標的抗原はCa 1
124前立腺腺癌膜調製物であった。
第1A図および第1B図が立証するように、TURP−27はRI
Aにおいて明らかな結合活性をもたない組織（正常肝、
正常結腸、正常前立腺P16−80）と反応性ではないが、R
IAにおいて事実反応した組織（表２）は、また、TURP−
27について有意の吸収活性示した。TURP−73は同様なパ
ターンを示したが、RIAにおいてTURP−73と反応性では
ない正常結腸膜抽出物（Ca 1005）（表２）の高いレベ
ルで多少の吸収が観測された。
Aにおいて明らかな結合活性をもたない組織（正常肝、
正常結腸、正常前立腺P16−80）と反応性ではないが、R
IAにおいて事実反応した組織（表２）は、また、TURP−
27について有意の吸収活性示した。TURP−73は同様なパ
ターンを示したが、RIAにおいてTURP−73と反応性では
ない正常結腸膜抽出物（Ca 1005）（表２）の高いレベ
ルで多少の吸収が観測された。
また、107のDU145、PC−３またはLNCaP細胞あるいは1
00μｇのこれらの前立腺腫瘍経の細胞蛋白質抽出物によ
るTURP−27の吸収は、このモノクローナル抗体のCa 11
26前立腺癌標的抗原への結合を減少できないことが発見
され、これに対して、標的抗原へのTURP−73の結合の50
〜85％は全細胞または細胞リゼイトにより減少されるこ
とが発見された。
00μｇのこれらの前立腺腫瘍経の細胞蛋白質抽出物によ
るTURP−27の吸収は、このモノクローナル抗体のCa 11
26前立腺癌標的抗原への結合を減少できないことが発見
され、これに対して、標的抗原へのTURP−73の結合の50
〜85％は全細胞または細胞リゼイトにより減少されるこ
とが発見された。
（Ｅ） 免疫組織化学 TURP−27およびTURP−73の結合特異性を、また、免疫
ペルオキシダーゼアッセイにより評価した。アビジン−
ビオチン免疫ペルオキシダーゼの分析は、ABCベクタス
チン（Vectastin）キット［ベクター・ラボラトリーズ
（Vector Laboratories,Burlingame,California）］を
使用して、ライト（Wright）,G.L.ら，癌の研究（Cance
r Res.），43:5509−5516（1983）（特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして実施し
た。結果を下表３に記載する。
ペルオキシダーゼアッセイにより評価した。アビジン−
ビオチン免疫ペルオキシダーゼの分析は、ABCベクタス
チン（Vectastin）キット［ベクター・ラボラトリーズ
（Vector Laboratories,Burlingame,California）］を
使用して、ライト（Wright）,G.L.ら，癌の研究（Cance
r Res.），43:5509−5516（1983）（特別にここに引用
によって加える）に記載されているようにして実施し
た。結果を下表３に記載する。
上の表３中の結果から明らかなように、TURP−27はす
べての前立腺検体と反応し、そして膀胱、結腸、腎、肺
または膵臓から誘導された正常または悪性の組織に結合
しなかった。TURP−27は６つの乳癌の検体と反応性では
なかったが、６つの正常乳房組織の試料のうち３つと事
実反応したが、反応性は正常の肝のあるものをライニン
グ（lining）するわずかの細胞に限定された。しかしな
がら、上において考察したように、定量的吸着分析はこ
れらの乳房組織へのTURP−27モノクローナル抗体による
結合を検出することができなかった。モノクローナル抗
体TURP−73は、また、免疫ペルオキシダーゼアッセイに
おいて正常の、良性の増生、および悪性の前立腺組織と
反応性であり、そして６つの結腸癌のうち２つに対して
反応性であった。正常の腎検体における基部細管および
腎円柱（renal cast）の弱い着色は、また、TURP−73
で観測された。
べての前立腺検体と反応し、そして膀胱、結腸、腎、肺
または膵臓から誘導された正常または悪性の組織に結合
しなかった。TURP−27は６つの乳癌の検体と反応性では
なかったが、６つの正常乳房組織の試料のうち３つと事
実反応したが、反応性は正常の肝のあるものをライニン
グ（lining）するわずかの細胞に限定された。しかしな
がら、上において考察したように、定量的吸着分析はこ
れらの乳房組織へのTURP−27モノクローナル抗体による
結合を検出することができなかった。モノクローナル抗
体TURP−73は、また、免疫ペルオキシダーゼアッセイに
おいて正常の、良性の増生、および悪性の前立腺組織と
反応性であり、そして６つの結腸癌のうち２つに対して
反応性であった。正常の腎検体における基部細管および
腎円柱（renal cast）の弱い着色は、また、TURP−73
で観測された。
（Ｆ） PAPおよびPSAへのモノクローナル抗体の結合 1. 直接結合性固相RIA 前述のように乾燥しかつポリ塩化ビニルのマイクロタ
イタープレートの個々のウェルに固定した30ngのPAPお
よび150ngのPSAに対する直接結合性固相RIAを用いて、
精製したヒトPAPおよびPSAへの精製したTURP−27および
TURP−73の結合活性を評価した。
イタープレートの個々のウェルに固定した30ngのPAPお
よび150ngのPSAに対する直接結合性固相RIAを用いて、
精製したヒトPAPおよびPSAへの精製したTURP−27および
TURP−73の結合活性を評価した。
TURP−27およびTURP−73は、ライト（Wright）,G.L.
ら，癌の研究（Cancer Res.），43:5509−5516（198
3）（特別にここに引用によって加える）に従来記載さ
れているようにして、TURP−73（IgG2a）についてプロ
テイン−Ａ−セファロース（Sepharose）［シグマ・ケ
ミカル・カンパニー（Sigma Chemical Co.,St.Louis,
Missouri］親和クロマトグラフィーにより、およびTURP
−27モノクローナル抗体（IgG2）を5.0ミリモルのトリ
ス−HCl、pH7.2に対する透析により沈殿させ、そしてJ.
J.ランゴーン（Langone），ジャーナル・オブ・イムノ
ロジカル・メソッズ（J. Immunol. Meth.）55:277−2
96（1982）およびJ.W.ゴウディング（Goding），ジャー
ナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（J. Immunol.
Meth.）39:285−308（1980）（これらの両者を特別に
ここに引用によって加える）に開示されている方法に従
い再構成することにより、血清不含培地［HSI LoSM、I
TS予備混合物が補充された、コラボレイティブ・リサー
チ・インコポーレーテッド（Collaborative Reseach,I
nc.,Lexington,Massachusetts）］中で生長させたハイ
ブリドーマから95％の均質性（homogeneity）に精製し
た。精製の程度はポリアクリルアミンドゲルの電気泳動
により決定し、そして定性的に評価した。血清不含調製
物を１〜2.3mg/mlのモノクローナル抗体に濃縮した。
ら，癌の研究（Cancer Res.），43:5509−5516（198
3）（特別にここに引用によって加える）に従来記載さ
れているようにして、TURP−73（IgG2a）についてプロ
テイン−Ａ−セファロース（Sepharose）［シグマ・ケ
ミカル・カンパニー（Sigma Chemical Co.,St.Louis,
Missouri］親和クロマトグラフィーにより、およびTURP
−27モノクローナル抗体（IgG2）を5.0ミリモルのトリ
ス−HCl、pH7.2に対する透析により沈殿させ、そしてJ.
J.ランゴーン（Langone），ジャーナル・オブ・イムノ
ロジカル・メソッズ（J. Immunol. Meth.）55:277−2
96（1982）およびJ.W.ゴウディング（Goding），ジャー
ナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（J. Immunol.
Meth.）39:285−308（1980）（これらの両者を特別に
ここに引用によって加える）に開示されている方法に従
い再構成することにより、血清不含培地［HSI LoSM、I
TS予備混合物が補充された、コラボレイティブ・リサー
チ・インコポーレーテッド（Collaborative Reseach,I
nc.,Lexington,Massachusetts）］中で生長させたハイ
ブリドーマから95％の均質性（homogeneity）に精製し
た。精製の程度はポリアクリルアミンドゲルの電気泳動
により決定し、そして定性的に評価した。血清不含調製
物を１〜2.3mg/mlのモノクローナル抗体に濃縮した。
前立腺特異性抗原（PSA）は、ヒト精子漿からワング
（Wang）,M.C.ら，腫瘍学（Oncol.），39:1−５（198
2）（特別にここに引用によって加える）に記載される
方法に従い精製した。また、それはハイブリテク・イン
コポレーテッド（Hybritech,Inc.,La Jolla,Californi
a）から商業的に入手可能である。前立腺酸性ホスファ
ターゼはシグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemi
cal Co.）から商業的に入手できる。
（Wang）,M.C.ら，腫瘍学（Oncol.），39:1−５（198
2）（特別にここに引用によって加える）に記載される
方法に従い精製した。また、それはハイブリテク・イン
コポレーテッド（Hybritech,Inc.,La Jolla,Californi
a）から商業的に入手可能である。前立腺酸性ホスファ
ターゼはシグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemi
cal Co.）から商業的に入手できる。
２、 ブロッキングラジオイムノアッセイ 300ngの精製したPAPまたは4.0μｇのPSAの不存在下ま
たは存在下に10％（v/v）のガンマグロブリン不含ウマ
血清を含有する0.11mlの最終体積のPBS中で20μg/ml濃
度の各モノクローナル抗体（2.0μg/ml）の11μｌをイ
ンキュベーションすることによって、ブロッキングラジ
オイムノアッセイをまた実施した。ヒト前立腺腺癌膜粗
製抽出物Ca 1126を標的抗原として3.0μg/ウェルで使
用した。結果を下表５に示す。
たは存在下に10％（v/v）のガンマグロブリン不含ウマ
血清を含有する0.11mlの最終体積のPBS中で20μg/ml濃
度の各モノクローナル抗体（2.0μg/ml）の11μｌをイ
ンキュベーションすることによって、ブロッキングラジ
オイムノアッセイをまた実施した。ヒト前立腺腺癌膜粗
製抽出物Ca 1126を標的抗原として3.0μg/ウェルで使
用した。結果を下表５に示す。
上の表４および表５中に結果が示すように、TURP−27
およびTURP−73は直接結合RIAにおいてマイクロタイタ
ープレートへ吸収させかつ固定したPAPまたはPSAに結合
せず（表４）、またTURP−27およびTURP−73とPAPまた
はPSAとのインキュベーションはブロッキングアッセイ
において標的抗原へのTURP−27およびTURP−73の結合を
減少させなかった（表５）。
およびTURP−73は直接結合RIAにおいてマイクロタイタ
ープレートへ吸収させかつ固定したPAPまたはPSAに結合
せず（表４）、またTURP−27およびTURP−73とPAPまた
はPSAとのインキュベーションはブロッキングアッセイ
において標的抗原へのTURP−27およびTURP−73の結合を
減少させなかった（表５）。
３、 競合的結合アッセイ 競合的結合アッセイは、マークウェル（Markwell）,
M.A.K.,アナリティカル・バイオケミストリー（Anal.
Biochem.），125:427−432（1982）（特別にここに引用
によって加える）に記載される方法に従い、ヨウドビー
ド（Iodebead）［ピアース・ケミカル・カンパニー（Pi
erce Chmemical Co.,Rockford,Illinois）］を使用し
て、140μｇの精製したモノクローナル抗体TURP−27お
よびTURP−73を0.5mCoのNa125I（ICN,Irvine,Californi
a）でTURP−27について2.5×106cpm/μｇおよびTURP−7
3について3.0×106cpm/μｇに比活性に標識することに
よって実施した。
M.A.K.,アナリティカル・バイオケミストリー（Anal.
Biochem.），125:427−432（1982）（特別にここに引用
によって加える）に記載される方法に従い、ヨウドビー
ド（Iodebead）［ピアース・ケミカル・カンパニー（Pi
erce Chmemical Co.,Rockford,Illinois）］を使用し
て、140μｇの精製したモノクローナル抗体TURP−27お
よびTURP−73を0.5mCoのNa125I（ICN,Irvine,Californi
a）でTURP−27について2.5×106cpm/μｇおよびTURP−7
3について3.0×106cpm/μｇに比活性に標識することに
よって実施した。
変化量の非放射性モノクローナル抗体を、標的抗原、
すなわち、Ca 1136前立腺腺癌の粗製膜調製物に室温で
１時間結合させた。結合しないモノクローナル抗体を洗
浄除去した後、230,000cpmの125I標識モノクローナル抗
体を室温において１時間添加した。その後、プレートを
洗浄し、そして個々のウェルをガンマカウンターで計数
した。結果を第2A図および第2B図に示す。
すなわち、Ca 1136前立腺腺癌の粗製膜調製物に室温で
１時間結合させた。結合しないモノクローナル抗体を洗
浄除去した後、230,000cpmの125I標識モノクローナル抗
体を室温において１時間添加した。その後、プレートを
洗浄し、そして個々のウェルをガンマカウンターで計数
した。結果を第2A図および第2B図に示す。
第2A図および第2B図において、○はPSAに対して特異
性のモノクローナル抗体による結合の阻害を表わし、△
はPAPに対して特異性のモノクローナル抗体による結合
の阻害を表わし、そして●はTURP−27（第2A図）または
TURP−73（第2B図）による遺伝子の阻害を表わす。第2A
図および第2B図において、阻害の百分率は次のように定
義される： ここでａはブロッキング抗体の存在下のCa 1126標識
抗原へ結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−
73のcpmであり、ｂは標的抗原を含有しないPBS対照ウェ
ルへ結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−73
のcpmであり、そしてｃはブロッキング抗体の不存在下
の結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−73の
cpmである。
性のモノクローナル抗体による結合の阻害を表わし、△
はPAPに対して特異性のモノクローナル抗体による結合
の阻害を表わし、そして●はTURP−27（第2A図）または
TURP−73（第2B図）による遺伝子の阻害を表わす。第2A
図および第2B図において、阻害の百分率は次のように定
義される： ここでａはブロッキング抗体の存在下のCa 1126標識
抗原へ結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−
73のcpmであり、ｂは標的抗原を含有しないPBS対照ウェ
ルへ結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−73
のcpmであり、そしてｃはブロッキング抗体の不存在下
の結合した125I標識TURP−27または125I標識TURP−73の
cpmである。
第2A図および第2B図中の結果から明らかなように、PS
AまたはPAPに対するモノクローナル抗体はCa 1126膜標
的への125I標識TURP−27または125I標識TURP−73の結合
を効果的にブロッキングすることはできなかったが、非
標識TURP−27およびTURP−73はそれぞれ放射性TURP−27
およびTURP−73結合のブロッキングにおいて非常に効率
的であった。
AまたはPAPに対するモノクローナル抗体はCa 1126膜標
的への125I標識TURP−27または125I標識TURP−73の結合
を効果的にブロッキングすることはできなかったが、非
標識TURP−27およびTURP−73はそれぞれ放射性TURP−27
およびTURP−73結合のブロッキングにおいて非常に効率
的であった。
（Ｇ） 相互的（reciprocal）結合アッセイ 精製したTURP−27およびTURP−73を前述のように125I
で標識した。１系列の非標識モノクローナル抗体の２倍
希釈物を標的抗原（3.0μｇ、Ca 1126）に添加し、そ
して室温において１時間インキュベーションした。洗浄
後、１×106cpmの標識TURP−27またはTURP−73を各ウェ
ルに添加し、そして室温においてさらに１時間インキュ
ベーションした。ウェルを洗浄し、そして放射能をガン
マカウンターで計数した。結果を第3A図および第3B図に
示す。
で標識した。１系列の非標識モノクローナル抗体の２倍
希釈物を標的抗原（3.0μｇ、Ca 1126）に添加し、そ
して室温において１時間インキュベーションした。洗浄
後、１×106cpmの標識TURP−27またはTURP−73を各ウェ
ルに添加し、そして室温においてさらに１時間インキュ
ベーションした。ウェルを洗浄し、そして放射能をガン
マカウンターで計数した。結果を第3A図および第3B図に
示す。
第3A図において、１は非標識抗体を添加しない場合を
表わし、２は非標識TURP−27の添加後を表わし、そして
３は非標識TURP−73の添加後を表わす。第3B図におい
て、４は非標識抗体を添加しない場合を表わし、５は非
標識TURP−73の添加後を表わし、そして６は非標識TURP
−27の添加後を表わす。
表わし、２は非標識TURP−27の添加後を表わし、そして
３は非標識TURP−73の添加後を表わす。第3B図におい
て、４は非標識抗体を添加しない場合を表わし、５は非
標識TURP−73の添加後を表わし、そして６は非標識TURP
−27の添加後を表わす。
第3A図および第3B図から明らかなように、標識モノク
ローナル抗体の結合は地元の（autologous）クローンか
らの非標識抗体によってのも阻害される。これらのデー
タが立証するように、TURP−27およびTURP−73は明確な
抗原決定基を検出する。
ローナル抗体の結合は地元の（autologous）クローンか
らの非標識抗体によってのも阻害される。これらのデー
タが立証するように、TURP−27およびTURP−73は明確な
抗原決定基を検出する。
（Ｈ） モノクローナル抗体のアイソタイピング ペーリンガー−マンハイム・バイオケミカルス（Boeh
ringer−Mannheim Biochemicals,Indianapolis,Indian
a）から入手可能なマウス免疫グロブリンサブタイプ（s
uptype）同定キットを使用して、抗体の重鎖および型鎖
のクラスを決定した。TURP−27はアイソタイプIgG3、Ｋ
であると決定され、そしてTURP−73はアイソタイプIgG2
a、Ｋであると決定された。
ringer−Mannheim Biochemicals,Indianapolis,Indian
a）から入手可能なマウス免疫グロブリンサブタイプ（s
uptype）同定キットを使用して、抗体の重鎖および型鎖
のクラスを決定した。TURP−27はアイソタイプIgG3、Ｋ
であると決定され、そしてTURP−73はアイソタイプIgG2
a、Ｋであると決定された。
（Ｉ） 結果の要約 TURP−27は試験したヒト細胞系のいずれに対しても反
応性ではなかった（表１）が、BPHおよび前立腺腺癌組
織検体対して事実反応した（表２および表３）反応性
は、また、７つの正常前立腺膜調製物の１つに対して観
察された。RIA（表２）におけるTURP−27の前立腺特異
性結合活性は、また、わずかの正常管内にいくつかの着
色細胞を含有する３つの正常乳房検体を除外して、イム
ノペルオキシダーゼアッセイにおいて見られた（表
３）。３つの乳房検体の２つは凍結組織として入手可能
であり、そして粗製膜調製物の調製に利用した。モノク
ローナル抗体TURP−27は固相RIAにおいて３つの検体と
反応性ではなく、またこれらの組織のいずれを用いても
100μｇ程度に高い吸収性蛋白質の濃度においても吸収
活性が観測されなかった。しかしながら、実質的な吸収
活性は、100μｇより非常に低い蛋白質レベルにおいてT
URP−27反応性試料により観測された（第1A図）。
応性ではなかった（表１）が、BPHおよび前立腺腺癌組
織検体対して事実反応した（表２および表３）反応性
は、また、７つの正常前立腺膜調製物の１つに対して観
察された。RIA（表２）におけるTURP−27の前立腺特異
性結合活性は、また、わずかの正常管内にいくつかの着
色細胞を含有する３つの正常乳房検体を除外して、イム
ノペルオキシダーゼアッセイにおいて見られた（表
３）。３つの乳房検体の２つは凍結組織として入手可能
であり、そして粗製膜調製物の調製に利用した。モノク
ローナル抗体TURP−27は固相RIAにおいて３つの検体と
反応性ではなく、またこれらの組織のいずれを用いても
100μｇ程度に高い吸収性蛋白質の濃度においても吸収
活性が観測されなかった。しかしながら、実質的な吸収
活性は、100μｇより非常に低い蛋白質レベルにおいてT
URP−27反応性試料により観測された（第1A図）。
モノクローナル抗体TURP−73は、正常の、BPH、およ
び悪性の前立腺組織に、ならびに結腸直腸癌、乳癌、お
よび正常の腎検体に強く結合した（表１、表２および表
３）。このモノクローナル抗体は前立腺以外の正常また
は悪性の細胞と広く交差反応性ではないが、その抗原は
TURP−27抗原より広い細胞のタイプおよび組織の死上に
存在した。
び悪性の前立腺組織に、ならびに結腸直腸癌、乳癌、お
よび正常の腎検体に強く結合した（表１、表２および表
３）。このモノクローナル抗体は前立腺以外の正常また
は悪性の細胞と広く交差反応性ではないが、その抗原は
TURP−27抗原より広い細胞のタイプおよび組織の死上に
存在した。
TURP−27は、構想RIAにより６つの正常前立腺物質膜
調製物の１つに結合した（表２）。６つの非反応性正常
前立腺検体は年令が18〜23才の若い男性からのものであ
ったが、１つの反応性試料は66才の女性のものであっ
た。この年令における男性について潜在的な増生および
新生物の出現率は前立腺において高い［スターリング
（Starling）,J.J.ら、モノクローナル抗体および癌（M
onconal Antibodies and Cancer）,253−286ページ
（1984），ニューヨーク、マーセル・デッカー（Marcel
Dekker）］（特別にここに引用によって加える）の
で、この検体が正常でない細胞で汚染されていた可能性
がある。このTURP−27による正常前立腺への明らかな低
い反応性を、また、定量的吸着分析により検査した（第
1A図）。この技術が示唆するように、TURP−27抗原は正
常の前立腺組織中に存在するが、その能動はBPHおよび
前立腺腺癌におけるよりは非常に低くかった（表２およ
び第1A図）。免疫ペルオキシダーゼアッセイにおいて検
査した正常の前立腺検体（表３）のうちで、管上皮細胞
のわずかに10％がTURP−27モノクローナル抗体と反応性
であった。この結果は、これらの検体についての酵素RI
Aおよび定量的吸着アッセイにおけるTURP−27の低い結
合活性と一致した。集約すると、TURP−27抗原は良性お
よび／または悪性の生長のために有用なマーカーであろ
うことをデータは立証している。
調製物の１つに結合した（表２）。６つの非反応性正常
前立腺検体は年令が18〜23才の若い男性からのものであ
ったが、１つの反応性試料は66才の女性のものであっ
た。この年令における男性について潜在的な増生および
新生物の出現率は前立腺において高い［スターリング
（Starling）,J.J.ら、モノクローナル抗体および癌（M
onconal Antibodies and Cancer）,253−286ページ
（1984），ニューヨーク、マーセル・デッカー（Marcel
Dekker）］（特別にここに引用によって加える）の
で、この検体が正常でない細胞で汚染されていた可能性
がある。このTURP−27による正常前立腺への明らかな低
い反応性を、また、定量的吸着分析により検査した（第
1A図）。この技術が示唆するように、TURP−27抗原は正
常の前立腺組織中に存在するが、その能動はBPHおよび
前立腺腺癌におけるよりは非常に低くかった（表２およ
び第1A図）。免疫ペルオキシダーゼアッセイにおいて検
査した正常の前立腺検体（表３）のうちで、管上皮細胞
のわずかに10％がTURP−27モノクローナル抗体と反応性
であった。この結果は、これらの検体についての酵素RI
Aおよび定量的吸着アッセイにおけるTURP−27の低い結
合活性と一致した。集約すると、TURP−27抗原は良性お
よび／または悪性の生長のために有用なマーカーであろ
うことをデータは立証している。
（Ｊ） TURP−27およびTURP−73対既知の前立腺抗体 TURP−27およびTURP−73と前立腺抗原に対して誘導さ
れた他のモノクローナル抗体と比較すると、TURP−27お
よびTURP−73は新規な前立腺器官および腫瘍に関連する
抗原を定めたことが明らかとなる。モノクローナル抗体
D83.21［スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究
（Cancer Res.），42:3084−3089（1982）およびスタ
ーリング（Starling）,J.J.ら，モノクローナル抗体お
よび癌（Monclonal Antibodies and Cancer）,253−
286ページ（1984），ニューヨーク、マーセル・デッカ
ー（Marcel Dekker）］（これらの両者を特別にここに
引用によって加える）、およびP6.2［ライト（Wrigh
t）,G.L.ら，癌の研究（Cancer Res.），43:5509−551
6（1983）およびスターリング（Starling）,J.J.ら，モ
ノクローナル抗体および癌（Monclonal Antibodies a
nd Cancer）,253−286ページ（1984），ニューヨー
ク、マーセル・デッカー（Marcel Dekker）］（これら
の両者を特別にここに引用によって加える）｛それぞ
れ、ミッケイ（Mickey）,D.D.ら，Prog. Clin. Biol.
Res.，37:67−84（1980）（特別にここに引用によっ
て加える）に記載れるDU145細胞系、およびカイン（Kai
ghn）,M.E.ら，Prog. Clin. Biol. Res.，37:85−10
9（1980）（特別にここに引用によって加える）に記載
れるPC−３細胞系に対して誘導された｝のの血清学的活
性は、TURP−27が試験した細胞系のいずれとにも結合せ
ず（表１）そしてTURP−73がBPH検体に強く結合する
（表２および表３）が、D83.21またはP6.2のいずれもPB
Hに対して高い活性もたないということにおいて、TURP
−27およびTURP−73と非常に異なる。さらに、限られた
研究において、D83.21およびP6.2のいずれもTURP−27お
よびTURP−73のそれらへのそれぞれの標的への結合をブ
ロッキングしなかった。
れた他のモノクローナル抗体と比較すると、TURP−27お
よびTURP−73は新規な前立腺器官および腫瘍に関連する
抗原を定めたことが明らかとなる。モノクローナル抗体
D83.21［スターリング（Starling）,J.J.ら，癌の研究
（Cancer Res.），42:3084−3089（1982）およびスタ
ーリング（Starling）,J.J.ら，モノクローナル抗体お
よび癌（Monclonal Antibodies and Cancer）,253−
286ページ（1984），ニューヨーク、マーセル・デッカ
ー（Marcel Dekker）］（これらの両者を特別にここに
引用によって加える）、およびP6.2［ライト（Wrigh
t）,G.L.ら，癌の研究（Cancer Res.），43:5509−551
6（1983）およびスターリング（Starling）,J.J.ら，モ
ノクローナル抗体および癌（Monclonal Antibodies a
nd Cancer）,253−286ページ（1984），ニューヨー
ク、マーセル・デッカー（Marcel Dekker）］（これら
の両者を特別にここに引用によって加える）｛それぞ
れ、ミッケイ（Mickey）,D.D.ら，Prog. Clin. Biol.
Res.，37:67−84（1980）（特別にここに引用によっ
て加える）に記載れるDU145細胞系、およびカイン（Kai
ghn）,M.E.ら，Prog. Clin. Biol. Res.，37:85−10
9（1980）（特別にここに引用によって加える）に記載
れるPC−３細胞系に対して誘導された｝のの血清学的活
性は、TURP−27が試験した細胞系のいずれとにも結合せ
ず（表１）そしてTURP−73がBPH検体に強く結合する
（表２および表３）が、D83.21またはP6.2のいずれもPB
Hに対して高い活性もたないということにおいて、TURP
−27およびTURP−73と非常に異なる。さらに、限られた
研究において、D83.21およびP6.2のいずれもTURP−27お
よびTURP−73のそれらへのそれぞれの標的への結合をブ
ロッキングしなかった。
ウェアー（Ware）,J.L.ら，癌の研究（Cancer Re
s.），42:1215−1222（1984）に記載れる、PC−３細胞
系に対して生成された、モノクローナル抗体Pro−３
は、免疫化性細胞系に強く結合するが、DU145前立腺腫
瘍細胞に結合せず、そしてBPH組織を使用するときより
も非常に強く前立腺腺癌を反応する。TURP−27は、他方
において、DU145またはPC−３細胞系のいずれにも結合
しないが、TURP−73は両者の細胞系に結合する（表
１）。TURP−27およびTURP−73は、また、BPHおよび悪
性前立腺組織の両者と反応する（表２および表３および
第A2図および第2B図）。
s.），42:1215−1222（1984）に記載れる、PC−３細胞
系に対して生成された、モノクローナル抗体Pro−３
は、免疫化性細胞系に強く結合するが、DU145前立腺腫
瘍細胞に結合せず、そしてBPH組織を使用するときより
も非常に強く前立腺腺癌を反応する。TURP−27は、他方
において、DU145またはPC−３細胞系のいずれにも結合
しないが、TURP−73は両者の細胞系に結合する（表
１）。TURP−27およびTURP−73は、また、BPHおよび悪
性前立腺組織の両者と反応する（表２および表３および
第A2図および第2B図）。
モノクローナル抗体35および24は、フランケル（Fran
kel）,A.E.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Ac
ad. Sci.），USA，99,903−907（1982）（特別にここ
に引用によって加える）に記載された。これらのモノク
ローナル抗体はTURP−27およびTURP−73と異なり、モノ
クローナル抗体24はPC−３細胞系と反応し、そしてまた
悪性前立腺組織へよりも正常の前立腺に強く結合する
［フランケル（Frankel）,A.E.ら，プロシーディングス
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，99,903−907（1
982）］（特別にここに引用によって加える）。他方に
おいて、TURP−27はPC−３に結合せず（表１）そしてこ
のモノクローナル抗体は正常の前立腺よりも前立腺腺癌
と強く反応する（表２および表４および第2A図）。モノ
クローナル抗体35はTURP−73と区別され、モノクローナ
ル抗体35はTK−24膀胱癌の細胞におよび正常の乳房組織
に決定する［フランケル（Frankel）,A.E.ら，プロシー
ディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，99,9
03−907（1982）］（特別にここに引用によって加え
る）が、TURP−73はこれらの抗原源のいずれとも反応し
ない（表１、表２および表３）。
kel）,A.E.ら，プロシーディングス・オブ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc. Natl. Ac
ad. Sci.），USA，99,903−907（1982）（特別にここ
に引用によって加える）に記載された。これらのモノク
ローナル抗体はTURP−27およびTURP−73と異なり、モノ
クローナル抗体24はPC−３細胞系と反応し、そしてまた
悪性前立腺組織へよりも正常の前立腺に強く結合する
［フランケル（Frankel）,A.E.ら，プロシーディングス
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，99,903−907（1
982）］（特別にここに引用によって加える）。他方に
おいて、TURP−27はPC−３に結合せず（表１）そしてこ
のモノクローナル抗体は正常の前立腺よりも前立腺腺癌
と強く反応する（表２および表４および第2A図）。モノ
クローナル抗体35はTURP−73と区別され、モノクローナ
ル抗体35はTK−24膀胱癌の細胞におよび正常の乳房組織
に決定する［フランケル（Frankel）,A.E.ら，プロシー
ディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシズ（Proc. Natl. Acad. Sci.），USA，99,9
03−907（1982）］（特別にここに引用によって加え
る）が、TURP−73はこれらの抗原源のいずれとも反応し
ない（表１、表２および表３）。
PC−３前立腺腫瘍細胞系に対して向けられたモノクロ
ーナル抗体、KR−P8、はレイナー（Raynor）,R.H.ら，
ジャーナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチ
チュート（J. Natl. Cancer Ｉ ｎ st.），73,617
−625（1984）（特別にここに引用によって加える）に
記載された。KR−P8抗原は新規な前立腺特異性マーカー
であると述べられているが、ヒト正常および腫瘍組織の
大きいパネル対するこのモノクローナル抗体の広範な結
合研究は実施されていない。TURP−27はPC−３細胞と反
応しないので、TURP−27はKR−P8抗原に対して向けられ
ていると思われない（表１）。TURP−73は、また、KR−
P8と区別され、TURP−73抗原の免疫ペルオキシダーゼ着
色は柱上上皮細胞の内腔境界に位置するが、KR−P8抗原
はこれらの細胞の細胞質中に広く見出される［レイナー
（Raynor）,R.H.ら，ジャーナル・オブ・ナショナル・
キャンサー・インスチチュート（J. Natl. Cancer
Ｉ ｎ st.），73,617−625（1984）］（特別にここに
引用によって加える）。
ーナル抗体、KR−P8、はレイナー（Raynor）,R.H.ら，
ジャーナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスチ
チュート（J. Natl. Cancer Ｉ ｎ st.），73,617
−625（1984）（特別にここに引用によって加える）に
記載された。KR−P8抗原は新規な前立腺特異性マーカー
であると述べられているが、ヒト正常および腫瘍組織の
大きいパネル対するこのモノクローナル抗体の広範な結
合研究は実施されていない。TURP−27はPC−３細胞と反
応しないので、TURP−27はKR−P8抗原に対して向けられ
ていると思われない（表１）。TURP−73は、また、KR−
P8と区別され、TURP−73抗原の免疫ペルオキシダーゼ着
色は柱上上皮細胞の内腔境界に位置するが、KR−P8抗原
はこれらの細胞の細胞質中に広く見出される［レイナー
（Raynor）,R.H.ら，ジャーナル・オブ・ナショナル・
キャンサー・インスチチュート（J. Natl. Cancer
Ｉ ｎ st.），73,617−625（1984）］（特別にここに
引用によって加える）。
PC−３に対して生成された３つのモノクローナル抗体
は、カロル（Caroll）,A.M.ら，クリニカル・イムノロ
ジー・アンド・イムノパソロジー（Clin. Immunol. I
mmunopath.），33:268−281（1984）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。すべての３つのモノ
クローナル抗体はPC−３標的に結合するが、これに対し
てTURP−27は試験したいずれの腫瘍細胞系にも結合しな
い（表１）。TURP−73は、また、これら３つのモノクロ
ーナル抗体と区別され、TURP−73は乳房腺癌細胞系BT−
20（表１）および乳癌組織（表３）に結合しないが、こ
れらの３つのモノクローナル抗体の１つはこれらの両者
に強く結合した。これらのモノクローナル抗体は、ま
た、正常乳房組織の切片を着色することが発見された
が、これに対して、TURP−73は正常に乳房組織に結合し
なかった（表２および表３）。
は、カロル（Caroll）,A.M.ら，クリニカル・イムノロ
ジー・アンド・イムノパソロジー（Clin. Immunol. I
mmunopath.），33:268−281（1984）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。すべての３つのモノ
クローナル抗体はPC−３標的に結合するが、これに対し
てTURP−27は試験したいずれの腫瘍細胞系にも結合しな
い（表１）。TURP−73は、また、これら３つのモノクロ
ーナル抗体と区別され、TURP−73は乳房腺癌細胞系BT−
20（表１）および乳癌組織（表３）に結合しないが、こ
れらの３つのモノクローナル抗体の１つはこれらの両者
に強く結合した。これらのモノクローナル抗体は、ま
た、正常乳房組織の切片を着色することが発見された
が、これに対して、TURP−73は正常に乳房組織に結合し
なかった（表２および表３）。
ヒト前立腺癌細胞系に対して向けられた８つのモノク
ローナル抗体のパネルは、最近、リンドグレン（Lindgr
en）,J.ら，ハイブリドーマ（Hybridoma），４,37−45
（1985）（特別にここに引用によって加える）に記載さ
れた。これらのモノクローナル抗体の７つは免疫ペルオ
キシダーゼアッセイにおいて固定された組織と強く反応
せず、これによりこれらのモノクローナル抗体はTURP−
27およびTURP−73と区別される。この報告中に記載され
る１つの免疫組織化学的に反応性のモノクローナル抗体
は試験したすべての細胞中に存在する核の抗原に結合
し、これはTURP−27およびTURP−73により見られるパタ
ーン（表３）と明瞭に異なる。
ローナル抗体のパネルは、最近、リンドグレン（Lindgr
en）,J.ら，ハイブリドーマ（Hybridoma），４,37−45
（1985）（特別にここに引用によって加える）に記載さ
れた。これらのモノクローナル抗体の７つは免疫ペルオ
キシダーゼアッセイにおいて固定された組織と強く反応
せず、これによりこれらのモノクローナル抗体はTURP−
27およびTURP−73と区別される。この報告中に記載され
る１つの免疫組織化学的に反応性のモノクローナル抗体
は試験したすべての細胞中に存在する核の抗原に結合
し、これはTURP−27およびTURP−73により見られるパタ
ーン（表３）と明瞭に異なる。
前立腺癌をもつ患者からの領域のドレイニング（regi
onal draining）リンパ節からのリンパ球をネズミ骨髄
腫細胞と融合することによって生成されたヒトIgMモノ
クローナル抗体、MGH−７と表示される、は最近ロウエ
（Lowe）,D.H.ら，ジャーナル・オブウロロジー（J. U
rol.），132:780−785（1984）（特別にここに引用によ
って加える）に記載された。この抗体は正常および悪性
の前立腺組織の両者に結合し、こうして、TURP−27およ
びTURP−73の両者の結合に類似する。TURP−27とMGH−
７との相違は、TURP−27がヒト細胞系のいずれとも結合
しないが、これに対して、MGH−７はNLCaPおよびPC−３
前立腺腫瘍細胞系の両者に結合するが、DU145前立腺腫
瘍細胞系に結合しないことである。DU145細胞への結合
および肺腺癌細胞への結合に欠けることは、これらの細
胞のタイプのいずれとも反応しない（表１および表３）
TURP−73とMGH−７の結合を区別する。
onal draining）リンパ節からのリンパ球をネズミ骨髄
腫細胞と融合することによって生成されたヒトIgMモノ
クローナル抗体、MGH−７と表示される、は最近ロウエ
（Lowe）,D.H.ら，ジャーナル・オブウロロジー（J. U
rol.），132:780−785（1984）（特別にここに引用によ
って加える）に記載された。この抗体は正常および悪性
の前立腺組織の両者に結合し、こうして、TURP−27およ
びTURP−73の両者の結合に類似する。TURP−27とMGH−
７との相違は、TURP−27がヒト細胞系のいずれとも結合
しないが、これに対して、MGH−７はNLCaPおよびPC−３
前立腺腫瘍細胞系の両者に結合するが、DU145前立腺腫
瘍細胞系に結合しないことである。DU145細胞への結合
および肺腺癌細胞への結合に欠けることは、これらの細
胞のタイプのいずれとも反応しない（表１および表３）
TURP−73とMGH−７の結合を区別する。
実施例２ ラジオイムノローカリゼイション TURP−73をヌードマウス（nude mice）中で生長する
ヒト腫瘍を標的にする（target）能力について分析し
た。さらに詳しくは、完全な親和精製したTURP−73を1.
0mCiのNa I125で前述の方法によりより、ほぼ4.0μCi/
μｇの比活性に標識した。抗原の特異性は、前述のよう
に直接結合固相RIAにより決定し、そして生物分布の研
究を次のように実施した。６つのLSI74T（結腸癌）また
はＣ−３（前立腺癌）の群に、8.0μCiのI125TURP−73
またはI125CM72（無関係のモノクローナル抗体に合致す
るアイソタイプ）を静脈内注射した。マウスの群を24、
48、72および96時間後に殺し、そして器官を取り出し、
秤量し、そしてガンマカウンターで計数して、I125TURP
−73またはI125CM72の生物分布を決定した。PC−３前立
腺腫瘍異質移植物（xenografts）NOTURP−73ローカリゼ
イション（localization）についての生物分布のデータ
の結果を下表６に示す。
ヒト腫瘍を標的にする（target）能力について分析し
た。さらに詳しくは、完全な親和精製したTURP−73を1.
0mCiのNa I125で前述の方法によりより、ほぼ4.0μCi/
μｇの比活性に標識した。抗原の特異性は、前述のよう
に直接結合固相RIAにより決定し、そして生物分布の研
究を次のように実施した。６つのLSI74T（結腸癌）また
はＣ−３（前立腺癌）の群に、8.0μCiのI125TURP−73
またはI125CM72（無関係のモノクローナル抗体に合致す
るアイソタイプ）を静脈内注射した。マウスの群を24、
48、72および96時間後に殺し、そして器官を取り出し、
秤量し、そしてガンマカウンターで計数して、I125TURP
−73またはI125CM72の生物分布を決定した。PC−３前立
腺腫瘍異質移植物（xenografts）NOTURP−73ローカリゼ
イション（localization）についての生物分布のデータ
の結果を下表６に示す。
上の表６の結果から明らかなように、TURP−73はPC−
３腫瘍を標的にし、I125TURP−73の注射投与量の平均1
1.30％を濃縮し、これに比較してIgG2aアイソタイプ合
致対照抗体、I125CM72の注射投与量の濃縮はわずかに1.
41％であった。肝、脾、腎および肺における標識TURP−
73の高い腫瘍対組織の比は、TURP−73を放射線像形成す
るために応用できることを立証する。
３腫瘍を標的にし、I125TURP−73の注射投与量の平均1
1.30％を濃縮し、これに比較してIgG2aアイソタイプ合
致対照抗体、I125CM72の注射投与量の濃縮はわずかに1.
41％であった。肝、脾、腎および肺における標識TURP−
73の高い腫瘍対組織の比は、TURP−73を放射線像形成す
るために応用できることを立証する。
当業者は種々の変更および変化を本発明の方法および
前立腺についてなすことができることは明らかである。
こうして、本発明のこれらの変更および変化が特許請求
の範囲内に包まれるかぎり、本発明はこれらの変更およ
び変化を包含する。
前立腺についてなすことができることは明らかである。
こうして、本発明のこれらの変更および変化が特許請求
の範囲内に包まれるかぎり、本発明はこれらの変更およ
び変化を包含する。
第1A図および第1B図は、ヒト組織の組成膜調製物を使用
する、それぞれ、モノクローナル抗体TURP−27およびTU
P−73の定量的吸収をグラフで示す。 第2A図および第2B図は、前立腺抗原に対して向けられた
非標識モノクローナル抗体による、それぞれ、125I標識
TURP−27および125I標識TURP−73の結合阻害をグラフト
で示す。 第8A図および第3B図は、Call26前立腺癌の組成膜抽出抗
原調製物に対する、それぞれ、TURP−27およびTURP−73
の間の結合の交差ブロッキングをグラフで示す。
する、それぞれ、モノクローナル抗体TURP−27およびTU
P−73の定量的吸収をグラフで示す。 第2A図および第2B図は、前立腺抗原に対して向けられた
非標識モノクローナル抗体による、それぞれ、125I標識
TURP−27および125I標識TURP−73の結合阻害をグラフト
で示す。 第8A図および第3B図は、Call26前立腺癌の組成膜抽出抗
原調製物に対する、それぞれ、TURP−27およびTURP−73
の間の結合の交差ブロッキングをグラフで示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (56)参考文献 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，79［３］（1982）Ｐ．903 −907 Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，36［６ ］（1985）Ｐ．677−683 Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓ ｔ．，73［３］（1984）Ｐ．617−625 Ｈｙｂｖｉｄｏｍａ，４［１ ］（1985）Ｐ．37−45 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，42 ［４］（1982）Ｐ．1215−1222
Claims (13)
- 【請求項１】ハイブリドーマATCC No.HB8977によって
分泌される、ヒト前立腺腫瘍関連性膜抗原に対する結合
特異性を有するモノクローナル抗体TURP−27。 - 【請求項２】（ａ）採取された体液を、ハイブリドーマ
ATCC No.8977によって分泌される、ヒト前立腺腫瘍関
連性膜抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル
抗体TURP−27に暴露し、 （ｂ）体液中に存在する物質に結合するモノクローナル
抗体の量を決定し、そして （ｃ）体液物質に結合したモノクローナル抗体の量を前
もって決定した基本水準と比較して、ヒト前立腺腫瘍関
連性膜抗原の存在を確認する、 ことを特徴とするヒト前立腺腫瘍関連性膜抗原の検出方
法。 - 【請求項３】該体液が血液、血清、精液漿、精液、尿お
よび前立腺液から成る群より選択される１種のものであ
る特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項４】体液中に存在する物質に結合するモノクロ
ーナル抗体の量をラジオイムノアッセイにより決定する
特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項５】体液中に存在する物質に結合するモノクロ
ーナル抗体の量をエンザイムイムノアッセイにより決定
する特許請求の範囲第２項記載の方法。 - 【請求項６】検出可能な標識に接合された、ハイブリド
ーマATCC No.HB8977によって分泌される、ヒト前立腺
腫瘍関連性膜抗原に対する結合特異性を有するモノクロ
ーナル抗体TURP−27を有効成分として含有することを特
徴とする前立腺腫瘍またはその転移の存在の診断剤。 - 【請求項７】検出可能な標識が核磁気スピン共鳴アイソ
トープである特許請求の範囲第６項記載の診断剤。 - 【請求項８】検出可能な標識がガドリニウムである特許
請求の範囲第７項記載の診断剤。 - 【請求項９】検出可能な標識が放射性物質である特許請
求の範囲第６項記載の診断剤。 - 【請求項１０】放射性物質がI125、I131、I123、I
n111、In113、Ca67、Ga68、Ru97、Ru103、Hg197、Hg203
およびTC99mから成る群より選択される１種のものであ
る特許請求の範囲第９項記載の診断剤。 - 【請求項１１】放射性物質はIn111またはTc99mである特
許請求の範囲第10項記載の診断剤。 - 【請求項１２】モノクローナル抗体−治療剤を有効成分
として含有し、該モノクローナル抗体が、ハイブリドー
マATCC No.HB8977によって分泌される、ヒト前立腺腫
瘍関連性膜抗原に対する結合特異性を有するモノクロー
ナル抗体TURP−27であることを特徴とする前立腺腫瘍ま
たはその転移に悩む患者の処置剤。 - 【請求項１３】モノクローナル抗体−治療剤が、薬物に
結合した抗体、毒素に結合した抗体、アイソトープに結
合した抗体、ヘテロ二官能性抗体および自然抗体から成
る群より選択される１種のものである特許請求の範囲第
12項記載の処置剤。
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