JP3093661B2 - 眼疾患治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カルボスチリル誘
導体またはその塩を有効成分とする眼疾患治療剤、さら
に詳しくは、下記一般式（Ｉ）

【化２】 ［式中、Ｒはハロゲン原子を意味し、該カルボスチリル
骨格上の置換位置は３位または４位であり、またカルボ
スチリル骨格の３位と４位間の結合は１重結合または２
重結合を示す］で示されるカルボスチリル誘導体または
その塩、とくに好ましくは２−（４−クロルベンゾイル
アミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン
酸またはその塩を有効成分とする眼疾患治療剤、ことに
ドライアイと通称される眼球乾燥症候群の治療剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】上記
一般式（Ｉ）で示されるカルボスチリル誘導体およびそ
の製法は特公昭６３−３５６２３号公報に記載されてお
り、それらが抗潰瘍剤として有用であることも知られて
いる。ドライアイとは、涙の量が減少して、目の表面が
正常状態を保てなくなった状態をいう。また、涙の量の
異常ばかりでなく、涙の性質の異常によっても目の表面
の粘膜（角膜および結膜の上皮）が異常を起こすことが
ある（ドライアイ、日本評論社、坪田一男著、１１
頁）。また、シェーグレン症候群でもドライアイとな
り、涙液の異常が見られ、スチーブンジョンソン症候群
も末期にはドライアイとなり、角結膜が障害されること
が知られている。

【０００３】涙液は眼球の最外層を覆う厚さ約７μｍの
非常に薄い液層であり、油層・水層・ムチン層の３層構
造を有している。一番表層にある油層は油の膜であり、
主にマイボーム線と呼ばれるまぶたのまわりにある腺か
ら産生されて水層全体を覆っている。この層は水分の蒸
発を防ぐ機能を持っているといわれている。水層はいわ
ゆる涙と呼ばれている部分で、涙液の厚さの大半を占
め、その構成成分の９８％は水である。この水層の減少
がいわゆるドライアイである。ムチン層は疎水性である
角膜上皮の表面を覆い、親水性に変え、涙液中の水層の
保持、伸展を助け、水層を角膜上皮の表面に保持するこ
とができる。そのムチン層を産生している細胞がゴブレ
ット細胞である。このように、ドライアイを引き起こす
直接の原因である涙液も種々の組織細胞が関与してお
り、またドライアイの概念も複雑であって、通常の目薬
では一時的な処置をもたらすに過ぎず、その根本的な治
療法が見い出されていないのが現状である。したがっ
て、ドライアイの新しい治療方法、新しい治療剤の開発
が強く望まれている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、種々研究
を重ねるうちに、前記一般式（Ｉ）で表されるカルボス
チリル誘導体、なかんずく、２−（４−クロルベンゾイ
ルアミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）プロピオ
ン酸またはその塩が眼のゴブレット細胞の増加作用、眼
の粘液増加作用、角膜上皮細胞の増殖促進作用、さらに
涙液増加作用を有し、ドライアイ、すなわち眼球乾燥症
候群の治療剤として有用であることを見い出し、本発明
を完成するに至った。本発明の一般式（Ｉ）で表される
カルボスチリル誘導体、なかんずく、２−（４−クロル
ベンゾイルアミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）
プロピオン酸またはその塩は眼のゴブレット細胞を増加
することによってムチンの産生量を増加し、ドライアイ
にみられるムチンの減少を防ぐ一方、眼の粘液量を増加
して水層を保持する。また、涙液量の増加作用を示し、
ドライアイ治療剤として有用である。さらに、本発明の
化合物はドライアイ症状を示すシェーグレン症候群やス
チーブンジョンソン症候群にも有用であるばかりでな
く、ドライアイに起因する２次疾患あるいはゴブレット
細胞や粘液量の低下によって起こる種々の眼疾患の予防
および／または治療剤として有用である。また、ドライ
アイは眼球が乾燥しているため非常に傷つき易いが、本
発明の化合物は角膜上皮細胞の増殖作用を有するため、
眼の創傷、特に角膜上皮の創傷治療剤あるいは眼手術
（白内障、硝子体、縁内障）時の眼内潅流および洗浄剤
等としても有用である。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明の眼疾患治療剤は、前記一
般式（Ｉ）で示されるカルボスチリル誘導体またはその
塩を有効成分とし、一般的な医薬製剤の形態に調製され
る。そのような製剤は通常使用される充填剤、増量剤、
結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの希
釈剤あるいは賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤
としては各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その
代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、
乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤(液剤、懸濁
剤等)、エアゾール剤、シロップ剤などが挙げられる。
また、樹脂などに配合して徐放性を高めて使用すること
もできる。本発明の眼疾患治療剤は、その適応症から
も、眼適用製剤、例えば点眼剤、眼軟膏剤等の形に調製
するのが特に好ましい。

【０００６】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプ
ン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸などの賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シ
ロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カル
ボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロー
ス、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合
剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン
末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウ
ム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、
ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリ
ド、デンプン、乳糖などの崩壊剤、白糖、ステアリン、
カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、第四級ア
ンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促
進剤、グリセリン、デンプンなどの保湿剤、デンプン、
乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸など
の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポ
リエチレングリコールなどの滑沢剤などが例示できる。
さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例え
ば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーテ
ィング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。

【０００７】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例え
ば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物
油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、
トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラ
ミナラン、カンテンなどの崩壊剤などが例示できる。坐
剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知の
ものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、
カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル
類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることが
できる。

【０００８】注射剤として調製される場合には、液剤、
乳剤または懸濁剤として調製され、それらは、通常、殺
菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これら液
剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するのに際しては、
希釈剤としてこの分野において慣用されているものをす
べて使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレ
ングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることが
できる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに充分
な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを該治療剤中
に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝
剤、無痛化剤などを、更に必要に応じて着色剤、保存
剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を該治療剤
中に含有せしめてもよい。

【０００９】エアゾール剤は、通常、殺菌された液剤ま
たは懸濁剤とし、これに噴射剤を配合して調製される。
これら液剤および懸濁剤の形態に成形するに際しては、
希釈剤としてこの分野において慣用されているものすべ
て使用でき、例えば上記注射剤で挙げたものを例示でき
る。噴射剤としては、この分野において慣用されている
ものすべて使用でき、例えば、フロン１２等の塩化フッ
化炭素、フロン１２３等の液化ガス噴射剤、さらに窒
素、炭酸ガス等の圧縮ガス噴射剤が挙げられる。またこ
のエアゾール剤には、通常の溶解補助剤、緩衝剤など、
更に必要に応じて、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘
味剤などを含有せしめてもよい。

【００１０】点眼剤、眼軟膏剤等の眼適用製剤は通常の
眼科用製剤担体を用い常法にしたがって製造される。す
なわち、該有効成分を適当な基剤と混合し、滅菌処理す
ることにより製造される。例えば、眼軟膏剤を製造する
には、慣用の乳剤性基剤、水溶性基剤、懸濁性基剤等を
使用できる。これら基剤の代表例としては、例えば白色
ワセリン、精製ラノリン、流動パラフィン等を例示でき
る。また、点眼剤を製造するには、基剤として代表的に
は滅菌蒸留水を使用できる。さらに、眼適用製剤には必
要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、抗酸化剤、防腐剤、等
張化剤、ｐＨ調整剤等を配合することができる。溶解補
助剤としては例えば、カルボキシメチルセルロースナト
リウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオ
キシエチレンオレイルエーテル等のポリオキシエチレン
グリコールエーテル類、ポリエチレングリコールモノラ
ウレート、ポリエチレングリコールモノオレート等のポ
リエチレングリコール高級脂肪酸エステル類、ポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチ
レン脂肪酸エステル等が挙げられる。緩衝剤としては、
例えばリン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン
酸水素カリウム、硼酸、硼酸ナトリウム、クエン酸、ク
エン酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、酢酸、
酢酸ナトリウム、イプシロンアミノカプロン酸、グルタ
ミン酸ナトリウム等が挙げられる。抗酸化剤としては、
例えば亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、重亜
硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム、アスコルビン
酸等が挙げられる。防腐剤としては、例えばクロロブタ
ノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、
フェニル水銀塩、チメロサル、フェネチルアルコール、
メチルパラベン、プロピルパラベン等が挙げられる。等
張化剤としては、例えば食塩、ブドウ糖、Ｄ−マンニト
ール、グリセリン等が挙げられる。溶解剤としてＮ−メ
チルグルカミン等を用いても良い。またｐＨ調整剤とし
ては、例えば水酸化ナトリウム、塩酸等が挙げられる。

【００１１】本発明の薬剤に含有されるべきカルボスチ
リル誘導体（Ｉ）またはその塩の量はとくに限定されず
広範囲に選択されるが、通常全組成物中１〜７０重量
％、好ましくは５〜５０重量％である。眼疾患治療剤と
してとくに好ましい眼適用製剤の場合は、通常、製剤組
成物全量当り約０.００５〜５重量％、好ましくは０.０
１〜３重量％とするのが良い。また、投与方法には特に
制限はなく、各種製剤形態、患者の年令、性別その他の
条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。例え
ば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、シロップ
剤およびカプセル剤の場合には経口投与される。また注
射剤の場合には単独であるいはブドウ糖、アミノ酸など
の通常の補液と混合して静脈内投与され、さらには必要
に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与
される。坐剤の場合には直腸内投与される。また、眼適
用製剤は従来の眼適用製剤と同様に、例えば、眼軟膏剤
の場合には眼に塗布され、また、点眼剤の場合は従来の
点眼剤と同様の方法で投与でき、例えば適当な点滴容器
から眼に１〜２滴滴下するか、または噴霧装置により眼
に噴射すれば良い。

【００１２】本発明の薬物の投与量は、投与方法、患者
の年齢、性別その他の条件、疾患の程度により適宜選択
されるが、通常カルボスチリル誘導体（Ｉ）またはその
塩の量は１日当り体重１kg当り０．６〜５０mgとするの
がよい、また、投与単位形態中に有効成分を１０〜１０
００mg含有せしめるのがよい。また、眼適用製剤、例え
ば点眼剤または眼軟膏剤は１日当たり１〜１５回、好ま
しくは１〜１０回の範囲で投与される。

【００１３】

【実施例】つぎに製剤例および薬理実験を挙げて本発明
の眼疾患治療剤をさらに具体的に説明する。

【００１４】製剤例１ ２−（４−クロルベンゾイルアミノ） −３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン酸 ０.２ｇ 塩化ベンザルコニウム ０.０１ｇ リン酸二水素ナトリウム ０.５６ｇ リン酸二水素カリウム ０.８ｇ 蒸留水 適 宜 計 １００.０ｍｌ 上記各成分を蒸留水に溶解し、適当なフィルターペーパ
ーを用いて滅菌濾過して点眼剤の形態を有する本発明薬
剤を製造した。

【００１５】製剤例２ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 １５０g アビセル(商標名、旭化成(株)製) ４０g コーンスターチ ３０g ステアリン酸マグネシウム ２g ヒドロキシプロピルメチルセルロース １０g ポリエチレングリコール−６０００ ３g ヒマシ油 ４０g メタノール ４０g 本発明化合物、アビセル、コーンスターチおよびステア
リン酸マグネシウムを混合研磨後、糖衣Ｒ１０mmのキネ
で打錠する。得られた錠剤をヒドロキシプロピルメチル
セルロース、ポリエチレングリコール−６０００、ヒマ
シ油およびメタノールからなるフィルムコーティング剤
で被覆を行ないフィルムコーティング錠を製造する。

【００１６】製剤例３ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 １５０g クエン酸 １.０g ラクトース ３３.５g リン酸二カルシウム ７０.０g プルロニックＦ−６８ ３０.０g ラウリル硫酸ナトリウム １５.０g ポリビニルピロリドン １５.０g ポリエチレングリコール(カルボワックス１５００) ４.５g ポリエチレングリコール(カルボワックス６０００) ４５.０g コーンスターチ ３０.０g 乾燥ラウリル硫酸ナトリウム ３.０g 乾燥ステアリン酸マグネシウム ３.０g エタノール 適 量

【００１７】本発明化合物、クエン酸、ラクトース、リ
ン酸二カルシウム、プルロニックＦ−６８およびラウリ
ル硫酸ナトリウムを混合する。上記混合物をＮo．６０
スクリーンでふるい、ポリビニルピロリドン、カルボワ
ックス１５００および６０００を含むアルコール性溶液
で湿式粒状化する。必要に応じてアルコールを添加して
粉末をペースト状塊にする。コーンスターチを添加し、
均一な粒子が形成されるまで混合を続ける。Ｎo.１０ス
クリーンを通過させ、トレイに入れ１００℃のオーブン
で１２〜１４時間乾燥する。乾燥粒子をＮo.１６スクリ
ーンでふるい、乾燥ラウリル硫酸ナトリウムおよび乾燥
ステアリン酸マグネシウムを加え混合し、打錠機で所望
の形状に圧縮する。上記の芯部をワニスで処理し、タル
クを散布し湿気の吸収を防止する。芯部の周囲に下塗り
層を被覆する。内服用のために十分な回数のワニス被覆
を行う。錠剤を完全に丸くかつ滑かにするためにさらに
下塗層および平滑被覆が適用される。所望の色合が得ら
れるまで着色被覆を行う。乾燥後、被覆錠剤を磨いて均
一な光沢の錠剤にする。

【００１８】製剤例４ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 ５g ポリエチレングリコール(分子量:４０００) ０.３g 塩化ナトリウム ０.９g ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ０.４g メタ重亜硫酸ナトリウム ０.１g メチル−パラベン ０.１８g プロピル−パラベン ０.０２g 注射用蒸留水 １０.０ml

【００１９】上記パラベン類、メタ重亜硫酸ナトリウム
および塩化ナトリウムを撹拌しながら８０℃で上記の約
半量の蒸留水に溶解する。得られた溶液を４０℃まで冷
却し、本発明化合物、つぎにポリエチレングリコールお
よびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートをそ
の溶液中に溶解する。次にその溶液に注射用蒸留水を加
えて最終の容量に調製し、適当なフィルターペーパーを
用いて滅菌濾過することにより滅菌して、注射剤を調製
する。

【００２０】薬理実験１ （１）供試液 本発明の活性成分の具体例である２−（４−クロルベン
ゾイルアミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）プロ
ピオン酸（以下、単に本発明化合物という）を用い、下
記のようにして溶解液および懸濁液を調製し、これを試
験液とした。 ａ）３％溶解液 本発明化合物 ３.００ｇ メグルミン（N-メチルグルカミン） ２.６４ｇ 濃グリセリン １.８０ｇ 塩酸 適 量 １０％塩化ベンザルコニウム ０.１０ml 水 全量１００mlに調製 ｐＨ ８.３〜９.３の範囲で調節 ｂ）３％懸濁液 本発明化合物 ３.００ｇ リン酸二水素ナトリウム ０.４０ｇ リン酸水素ナトリウム ０.４７ｇ 塩化ナトリウム ０.５０ｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム ０.２０ｇ ポリソルベート８０ ０.１６ｇ １０％塩化ベンザルコニウム ０.１０ml 水 全量１００mlに調製 ｐＨ ６.５〜７.５の範囲で調節 なお、コントロールとして生理食塩水を用いた。

【００２１】（２）実験方法および結果 正常家兎（各群３羽６眼）の両眼に、上記供試液を１回
５０μｌ／眼の用量で４回／日点眼し、２週間点眼を続
けたのち、家兎を屠殺し、下記３項目について測定し
た。

【００２２】（イ）結膜被覆粘液量の測定 −アルシアンブルー（Alcian Blue）色素結合法による
測定 上記家兎を屠殺後、全結膜を摘出し、この結膜を氷冷し
た０.２５Ｍショ糖水溶液で洗浄したのち、その組織重
量を測定した。上記結膜を０.１％アルシアンブルー１
０ｍｌ中で室温にて１.５時間インキュベートしたの
ち、０.２５Ｍショ糖水溶液で１５分、さらに同液で４
５分洗浄した。この結膜を、さらに０.５Ｍ ＭｇＣｌ₂
水溶液１０ｍｌ中で室温にて２時間インキュベートして
結膜の粘液に結合した色素を溶出した。この溶出液をジ
エチルエーテル１０ｍｌで洗浄し、その水層を６０５ｎ
ｍにて吸光度を測り、組織重量当りの吸光度（Ｏ.Ｄ．
単位／ｇ組織）（平均±Ｓ.Ｅ.，ｎ＝４）を算出した。
その結果を図１に示す。図１から明らかなように、本発
明化合物の３％溶解液および３％懸濁液を点眼した家兎
では、その結膜粘液に結合した色素量がコントロールに
比し大きく、本発明化合物が結膜被覆粘液量を増大した
ことを示す。

【００２３】（ロ）結膜ゴブレット細胞数の測定 −インプレッションサイトロジーによる測定 前記供試液で処理した家兎の眼球上部鼻側眼球結膜を軽
く乾燥させ、それにミリポアフィルターを置き、圧迫し
て結膜上皮細胞およびゴブレット細胞を採取した。これ
らの細胞を７０％エタノールにより固定したのち、過ヨ
ウ素酸シッフ反応〔Periodic Acid Schiff reaction
（ＰＡＳ）〕およびヘマトキシンを用いて染色し、つい
でキシレンにてフィルターを透明化し、プレパラートに
封入した。これを写真撮影して、一定面積（０.０９ｍ
ｍ²）当りのゴブレット細胞数（平均±Ｓ.Ｅ.，ｎ＝
４）を算定した。その結果を図２に示す。図２から明ら
かなように、本発明化合物の３％溶解液および３％懸濁
液を点眼した家兎では、コントロールに比し、ゴブレッ
ト細胞数が増大しており、本発明の化合物がムチン量の
増大、ひいては涙液量の増大をもたらすことが判る。

【００２４】（ハ）涙液量の測定 −シルマーテスト第１法変法による測定 前記供試液で処理した家兎に、下記涙液測定の５分前に
ベノキシール（参天製薬）３０μｌを点眼し、４分間放
置後、眼表面の水分を拭きとった。１分後、その下眼瞼
にシルマー試験紙を挿み（涙液測定開始）、５分間放置
したのち、シルマー試験紙にしみ込んだ涙液の長さ（ｍ
ｍ）（平均±Ｓ.Ｅ.，ｎ＝４）を測定した。その結果を
図３に示す。図３から明らかなように、本発明化合物の
３％溶解液および３％懸濁液を点眼した家兎では、コン
トロールに比し、涙液量が増大した。

【００２５】薬理実験２ （１）実験方法 ニュージーランドホワイト種雌性家兎眼球を摘出して強
角膜片を作製し、実体顕微鏡下でデスメ膜および内皮細
胞を剥離したのち強角膜片をリン酸緩衝生理食塩水で４
〜５回洗浄し無菌にした。ついで、その強角膜片をダル
ベッコ改変イーグル培地Ｆ１２（ＤＭＥ／Ｆ１２）
（１：１）に入れ、カミソリで全角膜から２〜３ｍｍ角
の角膜ブロックを１個の角膜から約２０個切り出した。
６０ｍｍ径の組織培養皿に７〜８個／皿の角膜ブロック
を角膜上皮が上になるように密着させ、１０％ＦＣＳ、
１０ｎｇ／ｍｌ ｈＥＧＦ添加ＤＭＥ／Ｆ１２（１：
１）培地中で５％ＣＯ₂−９５％Ａir、３７℃にて培養
した。培養２日後に、角膜上皮片を除去し、培地を交換
した。４〜５日間培養を続け（培地交換１〜３回）、培
地を除去し、リン酸緩衝液で洗浄後、０.１％トリプシ
ン−０.０２％ＥＤＴＡで細胞を浮遊させ、１０％ＦＣ
Ｓ入りのＤＭＥ／Ｆ１２（１：１）培地に懸濁し、２×
１０⁴cells／wellになるよう１２穴マルチウエル培養皿
に播種した。約１２時間後に１％ＦＣＳを含むＤＭＥ／
Ｆ１２培地に交換し、薬理実験１で用いたのと同じ本発
明化合物を最終濃度が１０^-4〜１０^-6Ｍになるように加
えた。該化合物はＤＭＳＯで溶解した。本発明化合物添
加約４８時間後に、上記の本発明化合物を含む培地の交
換を行った。本発明化合物添加約９６時間後に０.１％
トリプシン−０.０２％ＥＤＴＡで細胞を浮遊させ、コ
ールターカウンターにより細胞数（平均±Ｓ.Ｅ.，ｎ＝
６）を測定した。なお、対照として本発明化合物の代わ
りにヒアルロン酸ナトリウム（１ｍｇ／ｍｌ）を用いて
同様に測定した。 （２）結果 その結果を図４に示す。図４から明らかなように、本発
明化合物で処理した場合、角膜上皮細胞増殖作用を有す
ることが知られているヒアルロン酸ナトリウムよりもさ
らに優れた角膜上皮細胞の増殖作用が認められた。な
お、図４中、＊：ｐ＜０.０５、＊＊：ｐ＜０.０１を意
味する。

【００２６】薬理実験３ 送風ドライアイモデルでの実
験 （１）供試液 下記処方にしたがって、本発明の化合物の１％点眼液を
調製した。また、下記処方から本発明化合物を除いたも
のを対照液（コントロール）として用いた。 本発明化合物 ０.５ｇ Ｎ−メチルグルカミン １.３２ｇ 濃グリセリン ０.４５ｇ １０％塩化ベンザルコニウム ５０μｌ 生理食塩水 全量５０mlに調製 ｐＨ８.８〜９.３の範囲で調節 浸透圧２９０〜３００ｍＯｓｍに調節

【００２７】（２）実験方法 塩酸ケタミン２００ｍｇ／体重の筋肉注射および塩酸オ
キシブプロカイン２滴／眼の点眼による麻酔下、瞬膜を
切除したＮＺＷ種雌性家兎〔１群５羽、１０眼（ｎ＝１
０）〕を用いた。ドライヤーと角膜の距離１０ｃｍ、送
風時間１０分にてドライヤーによる風を角膜のみに正面
から当てることにより、該実験動物の涙液を蒸発させて
角膜を乾燥し、障害（ムチン被覆障害、角膜上皮障害）
を作製した。この実験動物に対し、上記供試液を、２.
５時間間隔にて１日４回点眼し、送風前２週間から前投
与、送風後２週間までの後投与を行った。

【００２８】（３）評価方法および結果 供試液の点眼開始前、送風開始前、送風開始後１、４、
７、１０および１４日に下記の生体染色を行って障害を
評価した。 ローズベンガル生体染色による障害のスコア評価 ローズベンガル生体染色：ムチンで覆われていない細胞
を染色した（角膜上のムチン被覆障害を評価）。 スコア評価について（満点：３点） スコア０：角膜が全く染色されない。 スコア１：全角膜の1/3以下の面積が均一に染色され
る、もしくは2/3以下の面積が点状に染色される。 スコア２：全角膜の1/3〜2/3の面積が均一に染色され
る、もしくは2/3以上の面積が点状に染色される、もし
くは全角膜の1/3以下の面積が均一に染色され点状の染
色も認められる。 スコア３：全角膜の2/3以上の面積が均一に染色され
る、もしくは全角膜の1/3〜2/3の面積が均一に染色され
点状の染色も認められる。 その結果（平均±Ｓ.Ｅ.、ｎ＝１０眼、ｐ＜０.０５ ｖ
ｓ コントロール）を図５に示す。図５から明らかなよ
うに、本発明の１％点眼液を投与した群では、ムチン被
覆障害がコントロール群に比べて有意に抑えられた。 フルオレセインナトリウム生体染色による障害スコア
評価 フルオレセインナトリウム生体染色：細胞の欠損部や細
胞間隙の異常部を染色した（角膜上皮障害を評価）。 スコア評価について：ローズベンガル生体染色の場合に
同じ。 その結果、送風後１日後にコントロール群ではフルオレ
セインナトリウム生体染色による障害スコア評価が２以
上であったのに対し、本発明の１％点眼液投与群では約
１であった。このことから本発明化合物は点眼により送
風による角膜上皮障害を有意に抑制した。

【００２９】薬理実験４ 強制開瞼ドライアイモデルで
の実験 （１）実験方法 ウレタン２ｇ／ｋｇ（ｉ.ｐ.）麻酔下に瞬膜を切除した
ＮＺＷ種雌性家兎〔１群４羽、８眼（ｎ＝８）〕を用
い、室温（約２５℃）にて開瞼器により眼を強制的に２
時間開瞼させた角膜を乾燥させ障害を作製した。この実
験動物に対し、前記薬理実験３で用いたと同じ供試液を
用い、２.５時間間隔で１日４回、開瞼前２週間から強
制開瞼５分前まで点眼させた。

【００３０】（２）評価方法と結果 強制開瞼２時間後にメチレンブルーにより下記の操作に
したがって角膜上皮障害部（細胞の欠損部）を染色し、
その色素量を測定することにより定量的に評価した（角
膜上皮障害を評価）。 強制開瞼終了後、１％メチレンブルー溶液５０μｌを
点眼し、 生理食塩水で十分に洗浄し、 過剰量のペントバルビタール注射液の静注により安楽
死させたのち、角膜を摘出し、 アセトン／飽和硫酸ナトリウム（７：３）混合液で摘
出した角膜よりメチレンブルーを一晩かけて抽出し、 その抽出液の６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。 その結果を図６に示す（平均±Ｓ.Ｅ.、( ）内は眼数を
示す）。図６から明らかなように本発明の１％点眼液を
投与した群では有意に色素量が少なく、強制開瞼による
角膜上皮障害が抑制されたことがわかる。

【００３１】薬理実験５ ムチン除去ドライアイモデル
による実験 （１）実験方法 ＮＺＷ種雌性家兎〔１群５羽、１０眼（ｎ＝１０）、正
常眼では３羽、６眼（ｎ＝６）〕に、Ｎ−アセチルシス
テイン（濃度１０％）を１日間だけ２時間間隔で６回点
眼することにより、結膜上のムチンを溶解、除去して障
害を作製した。上記実験動物に、そのムチン除去処理の
翌日から、前記薬理実験３で用いたと同じ供試液を、
２.５時間間隔にて１日４回、２週間点眼した。

【００３２】（２）評価方法と結果 点眼開始２週間後に、以下の操作にしたがって、アルシ
アンブルー色素結合法により結膜被覆ムチン様物質の量
を測定することにより定量的に評価した。 過剰量のペントバルビタール注射液の静注により安楽
死させたのち、角膜を摘出し、 氷冷した０.２５Ｍショ糖で洗浄し、 水分を除去したのち、結膜組織重量を測定し、 ０.１％アルシアンブルー溶液１０ｍｌ中で結膜を室
温で１.５時間インキュベートし、 ０.２５Ｍショ糖１０ｍｌで余分な色素を洗浄、除去
し、 ０.５Ｍ塩化マグネシウム溶液１０ｍｌ中で結膜を室
温で２時間インキュベートして結膜粘液に結合した色素
を溶出し、 溶出液をジエチルエーテル溶液１０ｍｌで洗浄し、 溶出液の水層についてその吸光度を６０５ｎｍで測定
し、アルシアンブルー色素結合量を、吸光度／ｇ組織重
量で表示した。 その結果（平均±Ｓ.Ｅ.）を図７に示す。図７から明ら
かなように、本発明の１％点眼液投与群では結膜ムチン
様物質の量がコントロール群に比べて有意に増加し、正
常眼に近い値を示しており、ムチン欠失障害に対して有
効であることがわかる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 アルシアンブルー色素結合法による正常家兎
における結膜被覆粘液量に対する本発明化合物の影響を
示すグラフ。

【図２】 正常家兎のゴブレット細胞数に対する本発明
化合物の影響を示すグラフ。

【図３】 正常家兎の涙液量に対する本発明化合物の影
響を示すグラフ。

【図４】 家兎角膜上皮細胞の増殖に対する本発明化合
物の作用を示すグラフ。

【図５】 送風ドライアイモデル（家兎）における本発
明化合物のムチン被覆障害抑制作用を示すグラフ。

【図６】 強制開瞼ドライアイモデル（家兎）における
本発明化合物の角膜上皮障害抑制作用を示すグラフ。

【図７】 ムチン除去ドライアイモデル（家兎）におけ
る本発明化合物の結膜ムチン様物質増加作用を示すグラ
フ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 国際公開97／13515（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 31/4704 ＣＡ（ＳＴＮ)

Claims (10)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 ［式中、Ｒはハロゲン原子を意味し、該カルボスチリル
   骨格上の置換位置は３位または４位であり、またカルボ
   スチリル骨格の３位と４位間の結合は１重結合または２
   重結合を示す］で示されるカルボスチリル誘導体または
   その塩を有効成分とする眼疾患治療剤。
2. 【請求項２】 眼のゴブレット細胞増加剤である請求項
   １に記載の眼疾患治療剤。
3. 【請求項３】 眼の粘液量増加剤である請求項１に記載
   の眼疾患治療剤。
4. 【請求項４】 涙液増加剤である請求項１に記載の眼疾
   患治療剤。
5. 【請求項５】 眼疾患が眼球乾燥症候群（ドライアイ）
   である請求項１に記載の眼疾患治療剤。
6. 【請求項６】 眼の創傷治療剤である請求項１に記載の
   眼疾患治療剤。
7. 【請求項７】 眼の創傷が角膜上皮創傷である請求項６
   に記載の眼疾患治療剤。
8. 【請求項８】 有効成分が２−（４−クロルベンゾイル
   アミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン
   酸またはその塩である請求項１〜７項のいずれかに記載
   の眼疾患治療剤。
9. 【請求項９】 眼に適用する製剤形態である請求項８に
   記載の眼疾患治療剤。
10. 【請求項１０】 ２−（４−クロルベンゾイルアミノ）
    −３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン酸または
    その塩および眼科用製剤担体を含有する眼に適用する製
    剤。