JP3093383B2 - 抗体標識のための放射性ヨウ素化合物 - Google Patents
抗体標識のための放射性ヨウ素化合物Info
- Publication number
- JP3093383B2 JP3093383B2 JP03309476A JP30947691A JP3093383B2 JP 3093383 B2 JP3093383 B2 JP 3093383B2 JP 03309476 A JP03309476 A JP 03309476A JP 30947691 A JP30947691 A JP 30947691A JP 3093383 B2 JP3093383 B2 JP 3093383B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- radioactive iodine
- added
- iodine compound
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/26—2-Pyrrolidones
- C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
- C07D207/27—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals directly attached to the ring nitrogen atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、イムノラジオメトリッ
クアッセイにおいて、抗体分子に放射性同位体元素を導
入するための標識用試薬として用いられる、放射性ヨウ
素化合物、およびそれを調製するための中間体に関す
る。
クアッセイにおいて、抗体分子に放射性同位体元素を導
入するための標識用試薬として用いられる、放射性ヨウ
素化合物、およびそれを調製するための中間体に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】目的とするタンパクを抗原抗体反応によ
り検出もしくは定量する際に、抗体を何らかの物質によ
り標識することが行なわれている。標識抗体を用いた定
量法としては、イムノフルオロメトリックアッセイ、イ
ムノエンザイモメトリックアッセイ、イムノラジオメト
リックアッセイなどが知られている。イムノラジオメト
リックアッセイは、抗体を125Ｉのような放射性同位体
元素で標識して、抗原抗体複合物の放射活性を測定する
ことにより抗原量を測定する方法である。極微量の抗原
を測定することができるため、幅広く用いられている。
り検出もしくは定量する際に、抗体を何らかの物質によ
り標識することが行なわれている。標識抗体を用いた定
量法としては、イムノフルオロメトリックアッセイ、イ
ムノエンザイモメトリックアッセイ、イムノラジオメト
リックアッセイなどが知られている。イムノラジオメト
リックアッセイは、抗体を125Ｉのような放射性同位体
元素で標識して、抗原抗体複合物の放射活性を測定する
ことにより抗原量を測定する方法である。極微量の抗原
を測定することができるため、幅広く用いられている。
【０００３】イムノラジオメトリックアッセイにおい
て、抗体分子に、125Ｉを結合させる方法としては、ク
ロラミンＴ法、酵素法などが知られている。これらの方
法では、例えば、Na125Iを酸化して、遊離した125Iが抗
体分子内のTyr残基に導入される。さらに、Bolton-Hunt
er試薬法も知られている。しかし、このような方法で
は、抗体の特異的結合部位に125Iが結合する場合がある
ため、抗体活性が低下して測定感度が低下することがあ
る。
て、抗体分子に、125Ｉを結合させる方法としては、ク
ロラミンＴ法、酵素法などが知られている。これらの方
法では、例えば、Na125Iを酸化して、遊離した125Iが抗
体分子内のTyr残基に導入される。さらに、Bolton-Hunt
er試薬法も知られている。しかし、このような方法で
は、抗体の特異的結合部位に125Iが結合する場合がある
ため、抗体活性が低下して測定感度が低下することがあ
る。
【０００４】抗体分子に、125Ｉを結合させる他の方法
として、125Ｉを含有する化合物を直接抗体分子に結合
させる方法がある。125Ｉを含有する化合物としては、
P.C.Srivastavaら、J.Nucl.Med.,31(5),906(1990)に、下
記式(II)で表される化合物が記載されている：
として、125Ｉを含有する化合物を直接抗体分子に結合
させる方法がある。125Ｉを含有する化合物としては、
P.C.Srivastavaら、J.Nucl.Med.,31(5),906(1990)に、下
記式(II)で表される化合物が記載されている：
【０００５】
【化２】
【０００６】しかし、このような化合物は比較的不安定
であり、かつ合成工程が繁雑であるという欠点がある。
であり、かつ合成工程が繁雑であるという欠点がある。
【０００７】上記標識抗体を用いたタンパクの検出もし
くは定量がますます必要とされることから、上記125Ｉ
を簡便に導入することの可能な標識試薬が、さらに求め
られている。
くは定量がますます必要とされることから、上記125Ｉ
を簡便に導入することの可能な標識試薬が、さらに求め
られている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗体
分子の活性を損なうことなく、抗体分子に放射性同位体
元素、すなわち125Ｉを導入することが可能な、放射性
ヨウ素化合物、およびそれを調製するための中間体を提
供することにある。
分子の活性を損なうことなく、抗体分子に放射性同位体
元素、すなわち125Ｉを導入することが可能な、放射性
ヨウ素化合物、およびそれを調製するための中間体を提
供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、抗体標識のた
めに用いられる、下記の一般式（Ｉ）で表される放射性
ヨウ素化合物、およびそれを調製するための中間体を提
供し、そのことにより上記目的が達成される：
めに用いられる、下記の一般式（Ｉ）で表される放射性
ヨウ素化合物、およびそれを調製するための中間体を提
供し、そのことにより上記目的が達成される：
【００１０】
【化３】
【００１１】ここで、Ｒは水素、または125Ｉである。
【００１２】本発明のヨウ素化合物、すなわち、4-(N-
マレイミドメチル)シクロヘキサン酸3-([125Ｉ]ヨード)
チラミドは、例えば、以下のようにして合成され得る。
マレイミドメチル)シクロヘキサン酸3-([125Ｉ]ヨード)
チラミドは、例えば、以下のようにして合成され得る。
【００１３】まず、チラミンのメタノール溶液に、リン
酸緩衝液、Na125I、およびクロラミンＴ溶液を順次加
え、チラミンのベンゼン環に125Ｉを導入する。この反
応液にピロ亜硫酸ナトリウム溶液を添加して、反応を停
止させた後、逆相HPLCによって、3-(125Ｉ)ヨードチラ
ミンを分取する。
酸緩衝液、Na125I、およびクロラミンＴ溶液を順次加
え、チラミンのベンゼン環に125Ｉを導入する。この反
応液にピロ亜硫酸ナトリウム溶液を添加して、反応を停
止させた後、逆相HPLCによって、3-(125Ｉ)ヨードチラ
ミンを分取する。
【００１４】次いで、上記3-(125Ｉ)ヨードチラミンを
リン酸緩衝液に加え、これにスクシンイミジル4-(N-マ
レイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレートの
ジメチルホルムアミド溶液を加えて反応させる。反応液
を逆相HPLCを用いて分画すると、本発明の放射性ヨウ素
化合物が得られる。
リン酸緩衝液に加え、これにスクシンイミジル4-(N-マ
レイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレートの
ジメチルホルムアミド溶液を加えて反応させる。反応液
を逆相HPLCを用いて分画すると、本発明の放射性ヨウ素
化合物が得られる。
【００１５】本発明のヨウ素化合物は、また、以下のよ
うにして合成される。
うにして合成される。
【００１６】まず、チラミン(4-ヒドロキシフェネチル
アミン)にスクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シ
クロヘキサン-1-カルボキシレートと1-ヒドロキシベン
ゾトリアゾールとを加えて反応させ、4-(N-マレイミド
メチル)シクロヘキサン酸チラミドを合成する。この4-
(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸チラミド溶液に
Na125I溶液を加え、次いで、クロラミンＴ溶液を加えて
反応させることにより125Ｉがベンゼン環に導入され
る。反応液を直ちに逆相HPLCを用いて分画すると、本発
明の放射性ヨウ素化合物が得られる。
アミン)にスクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シ
クロヘキサン-1-カルボキシレートと1-ヒドロキシベン
ゾトリアゾールとを加えて反応させ、4-(N-マレイミド
メチル)シクロヘキサン酸チラミドを合成する。この4-
(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸チラミド溶液に
Na125I溶液を加え、次いで、クロラミンＴ溶液を加えて
反応させることにより125Ｉがベンゼン環に導入され
る。反応液を直ちに逆相HPLCを用いて分画すると、本発
明の放射性ヨウ素化合物が得られる。
【００１７】上記の4ー(N-マレイミドメチル)シクロヘキ
サン酸チラミドもまた、本発明に包含され、本発明の放
射性ヨウ素化合物である4-(N-マレイミドメチル)シクロ
ヘキサン酸3-（[125Ｉ]ヨード）チラミドを得る中間体
として有用である。
サン酸チラミドもまた、本発明に包含され、本発明の放
射性ヨウ素化合物である4-(N-マレイミドメチル)シクロ
ヘキサン酸3-（[125Ｉ]ヨード）チラミドを得る中間体
として有用である。
【００１８】このようにして得られた本発明の放射性ヨ
ウ素化合物は、穏和な条件下、例えば、pH６でSH基と反
応して共有結合し得る。抗体は、メルカプトエチルアミ
ンなどの還元剤を作用させると、ヒンジ部のジスルフィ
ド結合が還元されてSH基が露出する。このSH基を有する
抗体分子と本発明の放射性ヨウ素化合物とを反応させる
と、容易に複合体が得られ、抗体分子に放射性ヨウ素を
導入することができる。しかも、抗体のヒンジ部は、抗
体が抗原と結合する部位と離れた位置にあるので、抗体
の活性が損なわれにくい。
ウ素化合物は、穏和な条件下、例えば、pH６でSH基と反
応して共有結合し得る。抗体は、メルカプトエチルアミ
ンなどの還元剤を作用させると、ヒンジ部のジスルフィ
ド結合が還元されてSH基が露出する。このSH基を有する
抗体分子と本発明の放射性ヨウ素化合物とを反応させる
と、容易に複合体が得られ、抗体分子に放射性ヨウ素を
導入することができる。しかも、抗体のヒンジ部は、抗
体が抗原と結合する部位と離れた位置にあるので、抗体
の活性が損なわれにくい。
【００１９】本発明の放射性ヨウ素化合物を用いて、ヒ
ンジ部に放射性ヨウ素化合物を結合する方法は、モノク
ローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれにも適
用可能である。さらに、IgG、IgM、IgA、IgE、Fab'など
いずれの形態の抗体分子にも適用することができる。こ
のように、本発明の放射性ヨウ素化合物を用いると、い
ずれの抗体分子をも125Ｉで標識することができる。そ
して、得られた抗体分子と放射性ヨウ素化合物との複合
体（本発明の放射性ヨウ素化合物で標識された抗体）は
イムノラジオメトリックアッセイに有用である。
ンジ部に放射性ヨウ素化合物を結合する方法は、モノク
ローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれにも適
用可能である。さらに、IgG、IgM、IgA、IgE、Fab'など
いずれの形態の抗体分子にも適用することができる。こ
のように、本発明の放射性ヨウ素化合物を用いると、い
ずれの抗体分子をも125Ｉで標識することができる。そ
して、得られた抗体分子と放射性ヨウ素化合物との複合
体（本発明の放射性ヨウ素化合物で標識された抗体）は
イムノラジオメトリックアッセイに有用である。
【００２０】例えば、ヒトα-ナトリウム利尿ポリペプ
チド（α-hANP）のモノクローナル抗体である、KY-ANP-1
のFab'と本発明の放射性ヨウ素化合物とを結合させた複
合体をイムノラジオメトリックアッセイに用いて、ヒト
血漿中のα-hANPを検出・定量することができる。このF
ab'と放射性ヨウ素化合物との複合体は、抗体の活性が
損なわれていないので、測定感度が良好であり、従来用
いられているクロラミンＴ法で標識した抗体分子よりも
高い測定感度を示す。
チド（α-hANP）のモノクローナル抗体である、KY-ANP-1
のFab'と本発明の放射性ヨウ素化合物とを結合させた複
合体をイムノラジオメトリックアッセイに用いて、ヒト
血漿中のα-hANPを検出・定量することができる。このF
ab'と放射性ヨウ素化合物との複合体は、抗体の活性が
損なわれていないので、測定感度が良好であり、従来用
いられているクロラミンＴ法で標識した抗体分子よりも
高い測定感度を示す。
【００２１】このように、上記放射性ヨウ素化合物は、
イムノラジオメトリックアッセイに用いられる標識抗体
を調製するのに好適に用いられ得る。
イムノラジオメトリックアッセイに用いられる標識抗体
を調製するのに好適に用いられ得る。
【００２２】
【実施例】本発明を以下の実施例につき説明する。
【００２３】（実施例１） 〔放射性ヨウ素化合物の合成〕チラミン（ナカライテス
ク社製）の７mg/mlメタノール溶液0.01mlをガラスチュ
ーブにとり、これに、0.5Ｍリン酸緩衝液（pH7.5）0.05
ml、Na125I（3.7GBq/ml、Amersham社製）0.05mlおよび
0.2％クロラミンＴ溶液0.01mlを順次添加し、室温で１
分間攪拌した。次いで、この反応液に１％ピロ亜硫酸ナ
トリウム溶液0.01mlを加えて反応を停止させた。得られ
た反応液を逆相HPLC（カラム：Nucleosil 10C18,内径4.
6mm×長さ300mm、溶媒：0.1％トリフルオロ酢酸を含む
アセトニトリル）で分画し、3-（[125Ｉ]ヨード）チラ
ミン150MBqを分取した。
ク社製）の７mg/mlメタノール溶液0.01mlをガラスチュ
ーブにとり、これに、0.5Ｍリン酸緩衝液（pH7.5）0.05
ml、Na125I（3.7GBq/ml、Amersham社製）0.05mlおよび
0.2％クロラミンＴ溶液0.01mlを順次添加し、室温で１
分間攪拌した。次いで、この反応液に１％ピロ亜硫酸ナ
トリウム溶液0.01mlを加えて反応を停止させた。得られ
た反応液を逆相HPLC（カラム：Nucleosil 10C18,内径4.
6mm×長さ300mm、溶媒：0.1％トリフルオロ酢酸を含む
アセトニトリル）で分画し、3-（[125Ｉ]ヨード）チラ
ミン150MBqを分取した。
【００２４】上記3-（[125Ｉ]ヨード）チラミン150MBq
を、0.1Ｍリン酸緩衝液（pH7.0)0.05mlに加え、スクシ
ンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-
カルボキシレート（SMCC、Pierce社製）の７mg/mlジメ
チルホルムアミド溶液0.01mlを加えて、室温で１時間攪
拌した。反応液を上記と同じ条件の逆相HPLCを用いて分
画し、本発明の放射性ヨウ素化合物である、4-(N-マレ
イミドメチル)シクロヘキサン酸3-([125Ｉ]ヨード)チラ
ミド110MBqを得た。
を、0.1Ｍリン酸緩衝液（pH7.0)0.05mlに加え、スクシ
ンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-
カルボキシレート（SMCC、Pierce社製）の７mg/mlジメ
チルホルムアミド溶液0.01mlを加えて、室温で１時間攪
拌した。反応液を上記と同じ条件の逆相HPLCを用いて分
画し、本発明の放射性ヨウ素化合物である、4-(N-マレ
イミドメチル)シクロヘキサン酸3-([125Ｉ]ヨード)チラ
ミド110MBqを得た。
【００２５】この放射性ヨウ素化合物は、後述の参考例
１の方法で調製した、非放射性の4-(N-マレイミドメチ
ル)シクロヘキサン酸3-ヨードチラミドを用いて同定さ
れた。図１には、非放射性の4-(N-マレイミドメチル)シ
クロヘキサン酸3-ヨードチラミドの逆相HPLCのクロマト
グラム（280nmにおける吸光度）を上段に示し、上記の3
-（[125Ｉ]ヨード）チラミンとSMCCとの反応液の逆相HP
LCのクロマトグラム（放射活性）を下段に示す。図１か
ら、非放射性4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸
3-ヨードチラミドのピーク１と同じ溶出位置に溶出する
物質のピーク２が、本発明の放射性ヨウ素化合物に相当
することがわかる。
１の方法で調製した、非放射性の4-(N-マレイミドメチ
ル)シクロヘキサン酸3-ヨードチラミドを用いて同定さ
れた。図１には、非放射性の4-(N-マレイミドメチル)シ
クロヘキサン酸3-ヨードチラミドの逆相HPLCのクロマト
グラム（280nmにおける吸光度）を上段に示し、上記の3
-（[125Ｉ]ヨード）チラミンとSMCCとの反応液の逆相HP
LCのクロマトグラム（放射活性）を下段に示す。図１か
ら、非放射性4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸
3-ヨードチラミドのピーク１と同じ溶出位置に溶出する
物質のピーク２が、本発明の放射性ヨウ素化合物に相当
することがわかる。
【００２６】（参考例１） 〔非放射性の4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸
３−ヨードチラミドの合成〕 a)3-ヨードチラミド・CF3COOHの合成 チラミン300mg(2.2mmol)をCH3OH 10mlに溶解させ、これ
に28％CH3ONa/CH3OH 0.475ml(CH3ONa、2.2mmol)、次い
でI2 560mg(2.2mmol)のCH3OH(6ml)溶液を加えて、室温
で15分間攪拌を行なった。これに12％ピロ亜硫酸ナトリ
ウム水溶液0.4mlを加えて反応を停止させた。
３−ヨードチラミドの合成〕 a)3-ヨードチラミド・CF3COOHの合成 チラミン300mg(2.2mmol)をCH3OH 10mlに溶解させ、これ
に28％CH3ONa/CH3OH 0.475ml(CH3ONa、2.2mmol)、次い
でI2 560mg(2.2mmol)のCH3OH(6ml)溶液を加えて、室温
で15分間攪拌を行なった。これに12％ピロ亜硫酸ナトリ
ウム水溶液0.4mlを加えて反応を停止させた。
【００２７】溶媒を減圧溜去し、残渣に酢酸エチル100m
lおよび水30mlを加え、生じた沈澱を濾過して除いた。
濾液を濃縮後、逆相HPLC（カラム：YMC S-50 120A ODS,
AM-type, 200mm×30mmφ；溶媒：０〜40％CH3CN/0.1％
CF3COOH、2000ml、の直線的濃度勾配）にかけて精製し
た。これをさらにCH3OH-酢酸エチル-石油エーテルを用
いて結晶化し、次いで再結晶して目的物を得た。収量29
1mg(35％)、ｍｐ１７７−１７８℃。
lおよび水30mlを加え、生じた沈澱を濾過して除いた。
濾液を濃縮後、逆相HPLC（カラム：YMC S-50 120A ODS,
AM-type, 200mm×30mmφ；溶媒：０〜40％CH3CN/0.1％
CF3COOH、2000ml、の直線的濃度勾配）にかけて精製し
た。これをさらにCH3OH-酢酸エチル-石油エーテルを用
いて結晶化し、次いで再結晶して目的物を得た。収量29
1mg(35％)、ｍｐ１７７−１７８℃。
【００２８】元素分析値：Ｃ８Ｈ１０ＮＯＩ・CF3COOH 理論値(％)：C,31.85；H,2.94；N,3.71；I,33.65；F,15.11 実測値(％)：C,32.17；H,3.15；N,3.64；I,33.35；F,14.93 b)4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸3-ヨードチ
ラミドの合成 ａ項で得られた3-ヨードチラミド・CF3COOH 186mg(0.49
mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド２mlに溶解させ、こ
れにN、N-ジイソプロピルエチルアミン0.17ml(0.98mmo
l)および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール66mg(0.49mmo
l)を加えた。さらに、スクシンイミジル4-(N-マレイミ
ドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート165mg(0.
49mmol)を加えて、室温で１時間反応させた。次いで溶
媒を減圧溜去し、残渣を酢酸エチルに溶解させた。これ
を１M HClおよび水で順次洗浄後、硫酸マグネシウム上
で乾燥した。溶媒を再び溜去し、残渣を酢酸エチルで結
晶化し、さらにCH3OHから再結晶して目的物を得た。収
量107mg（45％）、mp.204-206℃（分解点）。
ラミドの合成 ａ項で得られた3-ヨードチラミド・CF3COOH 186mg(0.49
mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド２mlに溶解させ、こ
れにN、N-ジイソプロピルエチルアミン0.17ml(0.98mmo
l)および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール66mg(0.49mmo
l)を加えた。さらに、スクシンイミジル4-(N-マレイミ
ドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート165mg(0.
49mmol)を加えて、室温で１時間反応させた。次いで溶
媒を減圧溜去し、残渣を酢酸エチルに溶解させた。これ
を１M HClおよび水で順次洗浄後、硫酸マグネシウム上
で乾燥した。溶媒を再び溜去し、残渣を酢酸エチルで結
晶化し、さらにCH3OHから再結晶して目的物を得た。収
量107mg（45％）、mp.204-206℃（分解点）。
【００２９】元素分析値：Ｃ20Ｈ23Ｎ2Ｏ4Ｉ・1/3Ｈ2Ｏ 理論値(％)：C,49.19;H,4.89;N,5.47;I,25.99 実測値(％)：C,49.20;H,4.90;N,5.79;I,26.20。
【００３０】（実施例２） 〔4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸チラミドの
合成〕4-ヒドロキシフェネチルアミン82.3mgをジメチル
フォルムアミド４mlに溶解し、これにスクシンイミジル
4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサンー1ーカルボキシ
レート200mg（0.6mmol）と1-ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール81.1mg（0.6mmol）を加え、室温で60分間反応させ
た。溶媒を減圧溜去後、残渣を酢酸エチル30mlに溶解
し、0.5M塩酸（10ml）および水（15ml×３）で洗浄後硫
酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を溜去したのち結晶
性残渣をクロロホルム−メタノールから再結晶して目的
物を得た。収量113mg（52％）、mp211-212.5℃。
合成〕4-ヒドロキシフェネチルアミン82.3mgをジメチル
フォルムアミド４mlに溶解し、これにスクシンイミジル
4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサンー1ーカルボキシ
レート200mg（0.6mmol）と1-ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール81.1mg（0.6mmol）を加え、室温で60分間反応させ
た。溶媒を減圧溜去後、残渣を酢酸エチル30mlに溶解
し、0.5M塩酸（10ml）および水（15ml×３）で洗浄後硫
酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を溜去したのち結晶
性残渣をクロロホルム−メタノールから再結晶して目的
物を得た。収量113mg（52％）、mp211-212.5℃。
【００３１】元素分析値：Ｃ20Ｈ24Ｎ2Ｏ4・1/3Ｈ2Ｏ 理論値(％)：C,66.28;H,6.67;N,7.73 実測値(％)：C,66.40;H,6.73;N,7.73。
【００３２】〔放射性ヨウ素化合物の合成〕4ー(N-マレ
イミドメチル)シクロヘキサン酸チラミド１mgをジメチ
ルスルホキシド（和光純薬社製）に溶解させて１mlと
し、0.05mlずつに分けて、−20℃以下で保存した。この
溶液の0.015ml（上記化合物15μg(41nmol)を含む）をガ
ラスチューブにとり、これに0.2Mリン酸緩衝液（pH7.
0）0.04mlおよびNa125I（Amersham社製 IMS-30）を含
む溶液0.04ml(148MBq)を加え混和後、0.05％クロラミン
Ｔ溶液0.01ml(7.1nmol)を加えて３０秒間攪拌した。
イミドメチル)シクロヘキサン酸チラミド１mgをジメチ
ルスルホキシド（和光純薬社製）に溶解させて１mlと
し、0.05mlずつに分けて、−20℃以下で保存した。この
溶液の0.015ml（上記化合物15μg(41nmol)を含む）をガ
ラスチューブにとり、これに0.2Mリン酸緩衝液（pH7.
0）0.04mlおよびNa125I（Amersham社製 IMS-30）を含
む溶液0.04ml(148MBq)を加え混和後、0.05％クロラミン
Ｔ溶液0.01ml(7.1nmol)を加えて３０秒間攪拌した。
【００３３】次に、0.1％のトリフルオロ酢酸を含むア
セトニトリル0.05mlを加え混和後、直ちに反応液を逆相
HPLC（カラム：Nucleosil 10C18 内径4mm×長さ300mm、
溶媒：0.05％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル・
メタノール・水混液（30:20:50）で分画し、本発明の放
射性ヨウ素化合物である4-(N-マレイミドメチル)シクロ
ヘキサン酸3-（[125Ｉ]ヨード）チラミド114MBqを得
た。
セトニトリル0.05mlを加え混和後、直ちに反応液を逆相
HPLC（カラム：Nucleosil 10C18 内径4mm×長さ300mm、
溶媒：0.05％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル・
メタノール・水混液（30:20:50）で分画し、本発明の放
射性ヨウ素化合物である4-(N-マレイミドメチル)シクロ
ヘキサン酸3-（[125Ｉ]ヨード）チラミド114MBqを得
た。
【００３４】（実施例３） 〔イムノラジオメトリックアッセイ〕以下に、実施例１
で調製した本発明の放射性ヨウ素化合物を、ヒトα−ナ
トリウム利尿ポリペプチド（α-hANP）のイムノラジオ
メトリックアッセイに応用した例を示す。
で調製した本発明の放射性ヨウ素化合物を、ヒトα−ナ
トリウム利尿ポリペプチド（α-hANP）のイムノラジオ
メトリックアッセイに応用した例を示す。
【００３５】a)KY-ANP-1・Fab'の作製 マウス抗α-hANP-ウシサイログロブリン[BTG]抗体産生
ハイブリドーマ（KY-ANP-1、特開平1-061500号公報参
照）をマウスに投与して得た腹水１mlを、アフィニティ
ーカラム（Affi-Gel Protein AMAPS-II、Bio-Rad社製）
にかけて精製し、KY-ANP-1・IgG 2.9mgを得た。このIgG
２mgを、塩化ナトリウムを0.1Ｍ含有する0.1Ｍ酢酸緩衝
液（pH4.2）に添加した。この溶液にブタ胃粘膜由来の
ペプシン（Boehringer Mannheim社製）0.08mgを加えて
混合した後、37℃で16時間インキュベートした。次い
で、反応液に、２Ｍトリス塩酸緩衝液（pH8.0）0.02ml
を加え、ゲル濾過（カラム:Ultrogel AcA44、IBF社製、
1.5×55cm；溶媒：５mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)
を含有する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0））して、KY-ANP
-1のF(ab')2 1.1mgを得た。
ハイブリドーマ（KY-ANP-1、特開平1-061500号公報参
照）をマウスに投与して得た腹水１mlを、アフィニティ
ーカラム（Affi-Gel Protein AMAPS-II、Bio-Rad社製）
にかけて精製し、KY-ANP-1・IgG 2.9mgを得た。このIgG
２mgを、塩化ナトリウムを0.1Ｍ含有する0.1Ｍ酢酸緩衝
液（pH4.2）に添加した。この溶液にブタ胃粘膜由来の
ペプシン（Boehringer Mannheim社製）0.08mgを加えて
混合した後、37℃で16時間インキュベートした。次い
で、反応液に、２Ｍトリス塩酸緩衝液（pH8.0）0.02ml
を加え、ゲル濾過（カラム:Ultrogel AcA44、IBF社製、
1.5×55cm；溶媒：５mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA)
を含有する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0））して、KY-ANP
-1のF(ab')2 1.1mgを得た。
【００３６】上記のF(ab')2 0.3mgを、５mM EDTAを含有
する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0）0.1mlに加え、さら
に、0.1Ｍのメルカプトエチルアミン（ナカライテスク
社製）溶液0.01mlを加えて、37℃で1.5時間インキュベ
ートした。反応液をHPLC（カラム：TSK-GEL G2000 S
WXL、東ソー社製、0.75×30cm；溶媒：５mM EDTAを含有
する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0））にかけて、0.19mgの
KY-ANP-1・Fab'画分を分取した。
する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0）0.1mlに加え、さら
に、0.1Ｍのメルカプトエチルアミン（ナカライテスク
社製）溶液0.01mlを加えて、37℃で1.5時間インキュベ
ートした。反応液をHPLC（カラム：TSK-GEL G2000 S
WXL、東ソー社製、0.75×30cm；溶媒：５mM EDTAを含有
する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0））にかけて、0.19mgの
KY-ANP-1・Fab'画分を分取した。
【００３７】b)KY-ANP-1・Fab'の125Ｉ標識 上記KY-ANP-1・Fab'60μg（1.3nmol）と上記実施例１で
得た、放射性ヨウ素化合物93MBq（1.3nmol）とを、５mM
EDTAを含有する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0）0.12ml中
に添加し、室温で１時間インキュベートした。この反応
液に１％S-カルボキシメチル化ウシ血清アルブミン溶液
0.02mlを加えて混合した後、ゲル濾過（PD-10、Pharmac
ia社製）して、KY-ANP-1・Fab'と本発明の放射性ヨウ素
化合物との複合体80MBqを得た。この複合体を、125Ｉ標
識抗体として以下に示すイムノラジオメトリックアッセ
イに用いた。
得た、放射性ヨウ素化合物93MBq（1.3nmol）とを、５mM
EDTAを含有する0.1Ｍリン酸緩衝液（pH6.0）0.12ml中
に添加し、室温で１時間インキュベートした。この反応
液に１％S-カルボキシメチル化ウシ血清アルブミン溶液
0.02mlを加えて混合した後、ゲル濾過（PD-10、Pharmac
ia社製）して、KY-ANP-1・Fab'と本発明の放射性ヨウ素
化合物との複合体80MBqを得た。この複合体を、125Ｉ標
識抗体として以下に示すイムノラジオメトリックアッセ
イに用いた。
【００３８】c)抗体ビーズの作製 マウス抗α-hANP(17-28)-BTG抗体、AN111（特開平2-276
591号公報参照）のIgGを25μg/mlの濃度で、0.1Ｍ塩化
ナトリウム含有0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.0）に添加
し、この溶液50mlをポリスチレンビーズ（粒径：6.4m
m、Precision PlasticBall社製）400個に加え、４℃で2
4時間放置した。ビーズを洗浄後、0.1％ウシ血清アルブ
ミン溶液で処理して抗体ビーズを得た。
591号公報参照）のIgGを25μg/mlの濃度で、0.1Ｍ塩化
ナトリウム含有0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.0）に添加
し、この溶液50mlをポリスチレンビーズ（粒径：6.4m
m、Precision PlasticBall社製）400個に加え、４℃で2
4時間放置した。ビーズを洗浄後、0.1％ウシ血清アルブ
ミン溶液で処理して抗体ビーズを得た。
【００３９】d)イムノラジオメトリックアッセイ 標準α-hANP溶液（濃度：５〜2000pg/ml）0.1mlと測定
緩衝液（１mM EDTA・2Na、0.2mMシスチン二塩酸塩、0.1
％アジ化ナトリウム、0.3Ｍ塩化ナトリウム、103KIU/ml
アプロチニンおよび0.1％ウシ血清アルブミンを含有す
る0.1Ｍリン酸緩衝液（pH7.0））0.2mlとをポリスチレ
ンチューブに取り、抗体ビーズ１個を加えて、４℃で24
時間インキュベートした。上清を吸引除去し、洗浄液
（0.1％ Tween20を含有する0.1Ｍリン酸緩衝化生理食塩
水（pH7.0））１mlで２回洗浄した。この抗体ビーズ
に、上記b項で作製した125Ｉ標識抗体を５×105cpm/ml
の濃度で含有する上記測定緩衝液溶液0.3mlを加え、さ
らに、４℃で24時間インキュベートした。反応後のビー
ズを上記洗浄液１mlで２回洗浄した後、ポリスチレンビ
ーズに結合した125Ｉ標識抗体の放射活性をガンマカウ
ンターで計測した。横軸に標準α-hANP溶液の濃度を、
縦軸に放射活性の計測値（cpm）から算出した結合率（B
/T(％)、添加した総放射活性に対する結合型放射活性の
割合）をプロットして図２に示す標準曲線を得た。最小
検出感度は２pg/mlであった。
緩衝液（１mM EDTA・2Na、0.2mMシスチン二塩酸塩、0.1
％アジ化ナトリウム、0.3Ｍ塩化ナトリウム、103KIU/ml
アプロチニンおよび0.1％ウシ血清アルブミンを含有す
る0.1Ｍリン酸緩衝液（pH7.0））0.2mlとをポリスチレ
ンチューブに取り、抗体ビーズ１個を加えて、４℃で24
時間インキュベートした。上清を吸引除去し、洗浄液
（0.1％ Tween20を含有する0.1Ｍリン酸緩衝化生理食塩
水（pH7.0））１mlで２回洗浄した。この抗体ビーズ
に、上記b項で作製した125Ｉ標識抗体を５×105cpm/ml
の濃度で含有する上記測定緩衝液溶液0.3mlを加え、さ
らに、４℃で24時間インキュベートした。反応後のビー
ズを上記洗浄液１mlで２回洗浄した後、ポリスチレンビ
ーズに結合した125Ｉ標識抗体の放射活性をガンマカウ
ンターで計測した。横軸に標準α-hANP溶液の濃度を、
縦軸に放射活性の計測値（cpm）から算出した結合率（B
/T(％)、添加した総放射活性に対する結合型放射活性の
割合）をプロットして図２に示す標準曲線を得た。最小
検出感度は２pg/mlであった。
【００４０】さらに、標準α-hANP溶液に代えて３種の
ヒト血漿試料を用いて上記と同様にしてイムノラジオメ
トリックアッセイを実施した。図３にヒト血漿の希釈試
料を測定して得られた希釈曲線３〜５と、標準曲線６と
を合わせて示す。希釈曲線は標準曲線と良好な平行性を
示した。
ヒト血漿試料を用いて上記と同様にしてイムノラジオメ
トリックアッセイを実施した。図３にヒト血漿の希釈試
料を測定して得られた希釈曲線３〜５と、標準曲線６と
を合わせて示す。希釈曲線は標準曲線と良好な平行性を
示した。
【００４１】e)ヒト血漿中のα-hANP濃度の測定 健常成人血漿26検体のα-hANP濃度を上記のイムノラジ
オメトリックアッセイによって測定した。その結果を表
１に示す。α-hANP濃度は、２〜53pg/mlであり、平均値
±標準偏差は、16.6±12.6pg/mlであった。11検体のα-
hANP濃度が10pg/ml以下であったが、これらの検体もす
べて測定可能であった。
オメトリックアッセイによって測定した。その結果を表
１に示す。α-hANP濃度は、２〜53pg/mlであり、平均値
±標準偏差は、16.6±12.6pg/mlであった。11検体のα-
hANP濃度が10pg/ml以下であったが、これらの検体もす
べて測定可能であった。
【００４２】
【表１】
【００４３】（比較例１）本発明の放射性ヨウ素化合物
で標識した標識抗体に代えて、KY-ANP-1・IgGおよびFab'
をクロラミンＴ法によって標識した125Ｉ標識抗体を用
いて、実施例３のd項と同様にしてイムノラジオメトリ
ックアッセイを行ない、標準曲線を作成した。その結果
を図４に示す。図４から、クロラミンＴ法で125I標識し
たIgGおよびFab'を用いた場合（直線７および８）は、
本発明の放射性ヨウ素化合物を用いて標識した抗体を用
いた場合（直線９）に比較して、最小検出限界が高く
（＞10pg/ml）、低感度であることがわかる。
で標識した標識抗体に代えて、KY-ANP-1・IgGおよびFab'
をクロラミンＴ法によって標識した125Ｉ標識抗体を用
いて、実施例３のd項と同様にしてイムノラジオメトリ
ックアッセイを行ない、標準曲線を作成した。その結果
を図４に示す。図４から、クロラミンＴ法で125I標識し
たIgGおよびFab'を用いた場合（直線７および８）は、
本発明の放射性ヨウ素化合物を用いて標識した抗体を用
いた場合（直線９）に比較して、最小検出限界が高く
（＞10pg/ml）、低感度であることがわかる。
【００４４】
【発明の効果】このように、抗体分子の活性を損なうこ
となく、抗体分子を放射性ヨウ素で標識することのでき
る放射性ヨウ素化合物、および該化合物を調製するため
に有用な中間体が提供される。上記放射性ヨウ素化合物
は化学的に安定であり、かつ容易に調製され得る。本発
明の放射性ヨウ素化合物は、モノクローナル抗体または
ポリクローナル抗体のいずれであっても標識が可能であ
り、かつIgG、IgA、IgM、IgE、Fab'などいずれの形態の
抗体分子にも標識が可能である。本発明の放射性ヨウ素
化合物で標識されたこれらの抗体分子は、その活性が良
好に保持されているため、イムノラジオメトリックアッ
セイの標識抗体として好ましく用いられ得る。特に、測
定感度が高いため、微量のタンパクを定量するのに好適
に使用され得る。
となく、抗体分子を放射性ヨウ素で標識することのでき
る放射性ヨウ素化合物、および該化合物を調製するため
に有用な中間体が提供される。上記放射性ヨウ素化合物
は化学的に安定であり、かつ容易に調製され得る。本発
明の放射性ヨウ素化合物は、モノクローナル抗体または
ポリクローナル抗体のいずれであっても標識が可能であ
り、かつIgG、IgA、IgM、IgE、Fab'などいずれの形態の
抗体分子にも標識が可能である。本発明の放射性ヨウ素
化合物で標識されたこれらの抗体分子は、その活性が良
好に保持されているため、イムノラジオメトリックアッ
セイの標識抗体として好ましく用いられ得る。特に、測
定感度が高いため、微量のタンパクを定量するのに好適
に使用され得る。
【図１】4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン酸3-ヨ
ードチラミド（上段）、および3-（[125Ｉ]ヨード）チ
ラミンとSMCCとの反応後の反応液（下段）の、逆相HPLC
のクロマトグラムである。
ードチラミド（上段）、および3-（[125Ｉ]ヨード）チ
ラミンとSMCCとの反応後の反応液（下段）の、逆相HPLC
のクロマトグラムである。
【図２】本発明の放射性ヨウ素化合物により125Ｉ標識
したKY-ANP-1・Fab'を用いて、既知量のα-hANPを含む試
料のイムノラジオメトリックアッセイを行なったときに
得られる標準曲線を示すグラフである。
したKY-ANP-1・Fab'を用いて、既知量のα-hANPを含む試
料のイムノラジオメトリックアッセイを行なったときに
得られる標準曲線を示すグラフである。
【図３】本発明の放射性ヨウ素化合物により125Ｉ標識
したKY-ANP-1・Fab'を用いて、ヒト血漿中のα-hANPをイ
ムノラジオメトリックアッセイにより測定したときの血
漿量と放射活性との関係を示すグラフである。
したKY-ANP-1・Fab'を用いて、ヒト血漿中のα-hANPをイ
ムノラジオメトリックアッセイにより測定したときの血
漿量と放射活性との関係を示すグラフである。
【図４】本発明の化合物を用いて125I標識された抗体を
用いて、およびクロラミンＴ法により125Ｉ標識された
抗体を用いて、α-hANPのイムノラジオメトリックアッ
セイを行なったときの標準曲線を示すグラフである。
用いて、およびクロラミンＴ法により125Ｉ標識された
抗体を用いて、α-hANPのイムノラジオメトリックアッ
セイを行なったときの標準曲線を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 井上 健 神戸市西区伊川谷町前開1296 (56)参考文献 Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ. 31，Ｎｏ．５，Ｐ．906（1990) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/534 C07D 207/452
Claims (3)
- 【請求項１】 以下の式（Ｉ）で示される化合物： 【化１】 ここで、Ｒは水素、または125Ｉである。
- 【請求項２】 Ｒが125Ｉである、請求項１に記載の化
合物。 - 【請求項３】 抗体標識のために用いられる、請求項２
に記載の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33887190 | 1990-11-30 | ||
| JP2-338871 | 1990-11-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH052019A JPH052019A (ja) | 1993-01-08 |
| JP3093383B2 true JP3093383B2 (ja) | 2000-10-03 |
Family
ID=18322179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03309476A Expired - Fee Related JP3093383B2 (ja) | 1990-11-30 | 1991-11-25 | 抗体標識のための放射性ヨウ素化合物 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5252748A (ja) |
| EP (1) | EP0488778B1 (ja) |
| JP (1) | JP3093383B2 (ja) |
| KR (1) | KR0182312B1 (ja) |
| AT (1) | ATE113935T1 (ja) |
| CA (1) | CA2056633C (ja) |
| DE (1) | DE69105098T2 (ja) |
| DK (1) | DK0488778T3 (ja) |
| ES (1) | ES2064052T3 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6954398A (en) | 1997-04-11 | 1998-11-11 | G.D. Searle & Co. | Antagonistic anti-avb3 integrin antibodies |
| US6193968B1 (en) | 1997-04-11 | 2001-02-27 | The Burnham Institute | Methods for using anti-αvβ3 integrin antibody |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1542975A (en) * | 1976-11-01 | 1979-03-28 | Shell Int Research | Unsaturated alcohols and esters |
| FR2566271B1 (fr) * | 1984-06-20 | 1986-11-07 | Sanofi Sa | Nouveaux conjugues cytotoxiques utilisables en therapeutique et procede d'obtention |
| US4659839A (en) * | 1984-10-10 | 1987-04-21 | Mallinckrodt, Inc. | Coupling agents for radiolabeled antibody fragments |
| CA1340387C (en) * | 1987-10-30 | 1999-02-09 | Carol A. Schlesinger | Heterobifunctional coupling agents |
-
1991
- 1991-11-25 JP JP03309476A patent/JP3093383B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-29 ES ES91311108T patent/ES2064052T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-29 AT AT91311108T patent/ATE113935T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-11-29 EP EP91311108A patent/EP0488778B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-29 DK DK91311108.4T patent/DK0488778T3/da active
- 1991-11-29 DE DE69105098T patent/DE69105098T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-29 CA CA002056633A patent/CA2056633C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-30 KR KR1019910021840A patent/KR0182312B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-12-02 US US07/801,810 patent/US5252748A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．５，Ｐ．９０６（１９９０） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR920009794A (ko) | 1992-06-25 |
| CA2056633A1 (en) | 1992-05-31 |
| JPH052019A (ja) | 1993-01-08 |
| EP0488778A2 (en) | 1992-06-03 |
| US5252748A (en) | 1993-10-12 |
| EP0488778A3 (en) | 1992-11-25 |
| ES2064052T3 (es) | 1995-01-16 |
| ATE113935T1 (de) | 1994-11-15 |
| CA2056633C (en) | 2002-06-11 |
| DK0488778T3 (da) | 1994-12-27 |
| KR0182312B1 (ko) | 1999-05-01 |
| DE69105098T2 (de) | 1995-03-23 |
| DE69105098D1 (de) | 1994-12-15 |
| EP0488778B1 (en) | 1994-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4187929B2 (ja) | 機能性ビタミンＤ誘導体の製造方法および２５−ヒドロキシおよび１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ代謝物の検出用試薬セット | |
| US4959306A (en) | Labeling design for a binding assay reagent | |
| JPS6318139B2 (ja) | ||
| JPH0467914B2 (ja) | ||
| JP2517187B2 (ja) | アナライト変異体分析 | |
| Freytag et al. | A highly sensitive affinity-column-mediated immunometric assay, as exemplified by digoxin. | |
| US5591589A (en) | Process for separating and measuring glycoprotein | |
| JP2599096B2 (ja) | 遊離リガンドアッセイのための組成物 | |
| EP0639272B1 (en) | Method for the determination of the amount of a thyroid hormone ligand in a biological fluid and kit for carrying out such a method | |
| JPH0373852A (ja) | 特異的糖鎖を有する物質の測定法 | |
| JP3093383B2 (ja) | 抗体標識のための放射性ヨウ素化合物 | |
| US5324650A (en) | Situ process for production of conjugates | |
| EP0109078B1 (en) | Immunochemical assay of human chorionic gonadotropin and reagent therefor | |
| KR930000057B1 (ko) | 6-치환-에스트리올-3-설페이트 단백질 접합체의 제조방법 | |
| EP0094251B1 (en) | 4- or 6-substituted aldosterones, their production and use in immunoassay | |
| US4339390A (en) | Preferential immunoreactivity of syn-isomer of cortisol derivative | |
| JPH08505369A (ja) | 精製されたｔｓｈ製剤、その製法、及び、ｔｓｈ受容体検定用ｔｓｈトレーサー製造での及びｔｓｈ受容体検定でのその用途 | |
| CA1218300A (en) | Immunochemical assay of human chorionic gonadotropin and reagent therefor | |
| JP3376955B2 (ja) | 複合体の分離方法 | |
| JPH02304365A (ja) | エラスターゼ１の測定方法 | |
| EP0614912B1 (de) | Lipoprotein (a)-Peptide und deren Verwendung | |
| Gershagen et al. | Immunoradiometric assay of sex-hormone binding globulin with use of two different monoclonal antibodies. | |
| KR930000056B1 (ko) | 에스트리올-3-설페이트의 면역분석 | |
| Navakouski et al. | Interaction of triiodothyronine-biotin conjugate with binding proteins in immunoassay systems | |
| JPH04216465A (ja) | リガンドを免疫学的に測定するための方法及び試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20000711 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090728 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |