JP2996405B2 - 発酵法 - Google Patents
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- JP2996405B2 JP2996405B2 JP1509770A JP50977089A JP2996405B2 JP 2996405 B2 JP2996405 B2 JP 2996405B2 JP 1509770 A JP1509770 A JP 1509770A JP 50977089 A JP50977089 A JP 50977089A JP 2996405 B2 JP2996405 B2 JP 2996405B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
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- Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は改良された発酵法、特に、アルブミンを培地
に分泌することができるγDNA−含有微生物の発酵によ
り生産する人血清アルブミン（以下アルブミンと称す）
の量を増加する方法に関する。
に分泌することができるγDNA−含有微生物の発酵によ
り生産する人血清アルブミン（以下アルブミンと称す）
の量を増加する方法に関する。
アルブミンは血漿の主要成分であり、火傷、出血性シ
ョックおよび他の症状を治療するために、代用血漿又は
代用血清として使用することができる。組換えDNA技術
により、アルブミンの遺伝子を導入した微生物の発酵に
より、アルブミンを生産することができる方法が記述さ
れている（GB−Ａ−2147903）。
ョックおよび他の症状を治療するために、代用血漿又は
代用血清として使用することができる。組換えDNA技術
により、アルブミンの遺伝子を導入した微生物の発酵に
より、アルブミンを生産することができる方法が記述さ
れている（GB−Ａ−2147903）。
細胞内のアルブミンは多くの異種蛋白質と同様に、不
活性な、不溶解性の形態で生産され、それ等から天然の
蛋白質を得ることは非常に困難であるから、周囲の培養
液にアルブミンを分泌するような微生物を構築すること
が好ましい（例えば、M.Latta等による、1958年度、Bio
/Technology ５巻、1309から1314頁参照）。製造法の
生産性を最大にするために、高速で撹拌し、通気した発
酵槽内で微生物を増殖して、高濃度の細胞と生成物を得
るのが望ましい。残念ながら、これ等の条件は、分泌蛋
白質を細胞内媒質において物理的、化学的および酵素的
分解に曝され、その結果発酵槽で生産されるアルブミン
の量は、温和な条件における微生物の生産から期待され
る量よりかなり少ない。
活性な、不溶解性の形態で生産され、それ等から天然の
蛋白質を得ることは非常に困難であるから、周囲の培養
液にアルブミンを分泌するような微生物を構築すること
が好ましい（例えば、M.Latta等による、1958年度、Bio
/Technology ５巻、1309から1314頁参照）。製造法の
生産性を最大にするために、高速で撹拌し、通気した発
酵槽内で微生物を増殖して、高濃度の細胞と生成物を得
るのが望ましい。残念ながら、これ等の条件は、分泌蛋
白質を細胞内媒質において物理的、化学的および酵素的
分解に曝され、その結果発酵槽で生産されるアルブミン
の量は、温和な条件における微生物の生産から期待され
る量よりかなり少ない。
或種の化学薬剤の添加は、特に最小培地（即ち、複合
有機窒素源を含有しない生育培地）における分泌アルブ
ミン濃度を上昇さすのに効果的であることが分かった。
特に、通常泡の抑制に必要な量より一層多い量で或種の
消泡剤を添加すれば、この安定化効果を示す。効果的な
薬剤にはポリプロピレングリコール（平均分子量2,00
0）および「ポリリシネート」（Croda Chemicalsより製
造された、ひまし油脂肪酸とエチレンオキシドとの縮合
物）を含む。
有機窒素源を含有しない生育培地）における分泌アルブ
ミン濃度を上昇さすのに効果的であることが分かった。
特に、通常泡の抑制に必要な量より一層多い量で或種の
消泡剤を添加すれば、この安定化効果を示す。効果的な
薬剤にはポリプロピレングリコール（平均分子量2,00
0）および「ポリリシネート」（Croda Chemicalsより製
造された、ひまし油脂肪酸とエチレンオキシドとの縮合
物）を含む。
適当なポリアルキレンの重合体又は他の化合物との共
重合体、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレ
ングリコール、ポリソルベート80、エチレンオキシドと
プロピレンオキシドとの共重合体、およびエチレンオキ
シドおよび／又はプロピレンオキシドと、脂肪酸、脂肪
族アルコール、糖およびポリオール、例えばシュガーア
ルコール（後えばソルビトール）、エチレングリコー
ル、ペンタエリスリトリトールおよびグリセロールのよ
うな他の化合物との共重合体を使用することができる。
重合体、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレ
ングリコール、ポリソルベート80、エチレンオキシドと
プロピレンオキシドとの共重合体、およびエチレンオキ
シドおよび／又はプロピレンオキシドと、脂肪酸、脂肪
族アルコール、糖およびポリオール、例えばシュガーア
ルコール（後えばソルビトール）、エチレングリコー
ル、ペンタエリスリトリトールおよびグリセロールのよ
うな他の化合物との共重合体を使用することができる。
ポリオキシプロピレン重合体は一般式HO−（CH2−CH
（CH3）−Ｏ）ｎ−Ｈを有する。適当なポリオキシエチ
レンとポリオキシプロピレンの共重合体は、Ｘ−（Ｏ−
（CH2−CH（CH3）−Ｏ）ｍ−（CH2−CH2O）ｎ−Ｈ）Ｌ
（式中、Ｘが１ヒドロキシ基含有ポリオールであり、Ｌ
は２〜６であり、ｍは10〜30であり、ｎは０〜10であ
る）を示すことができるものである。他の適当な一連の
化合物はポリオールとして、２つの利用可能な水酸基を
有し、各々は−Ｏ（CH2−CH（CH3）−Ｏ）ｎ−Ｈ基によ
って置換可能であり、各々のｎは同一であるか又は異な
るポリエチレングリコールを使用する。
（CH3）−Ｏ）ｎ−Ｈを有する。適当なポリオキシエチ
レンとポリオキシプロピレンの共重合体は、Ｘ−（Ｏ−
（CH2−CH（CH3）−Ｏ）ｍ−（CH2−CH2O）ｎ−Ｈ）Ｌ
（式中、Ｘが１ヒドロキシ基含有ポリオールであり、Ｌ
は２〜６であり、ｍは10〜30であり、ｎは０〜10であ
る）を示すことができるものである。他の適当な一連の
化合物はポリオールとして、２つの利用可能な水酸基を
有し、各々は−Ｏ（CH2−CH（CH3）−Ｏ）ｎ−Ｈ基によ
って置換可能であり、各々のｎは同一であるか又は異な
るポリエチレングリコールを使用する。
上記の全ての化合物は、本明細書では「ポリオキシア
ルキレン化合物」と呼ぶ。これ等の化合物は通常消泡化
合物である。そのような化合物が消泡特性を有しない場
合には、「望ましくない水準の泡の発生を抑制するのに
必要な量以上」は、零より大きな量を意味する。
ルキレン化合物」と呼ぶ。これ等の化合物は通常消泡化
合物である。そのような化合物が消泡特性を有しない場
合には、「望ましくない水準の泡の発生を抑制するのに
必要な量以上」は、零より大きな量を意味する。
適当な化合物には「Darastil」という商品名で入手で
きるもの（例えば「Darastil 8231」）（Grace Dearbor
n Ltd,Widnes,Cheshire,英国）およびBrexo FMT30（Wat
er Management Chemicals Ltd,Kidderminster,Worcs,英
国）を含む。
きるもの（例えば「Darastil 8231」）（Grace Dearbor
n Ltd,Widnes,Cheshire,英国）およびBrexo FMT30（Wat
er Management Chemicals Ltd,Kidderminster,Worcs,英
国）を含む。
微生物発酵における高細胞密度は、一般に流加培養に
より達成される。これ等の条件下で、発酵槽はその方法
の出発時に一部満たされており、少量の炭素基質だけが
含まれている。発酵が進んだ時、炭素基質の濃厚溶液お
よびその他の栄養素を漸次添加する。消泡剤はそのよう
な方法においての一般的な加工助剤であり、泡の制御は
発酵槽の最上部近くに取り付けたセンサーにより行わ
れ、泡を感知した時消泡剤が添加される。発酵槽は出発
時には一部満たされているだけであるから、発酵の初期
段階では、消泡剤はほとんどあるいは全く添加せず、泡
の上部がセンサーに達して、センサーが作動するのは、
工程の終期近くに容器が充満する時だけである。代表的
な使用率は0.02から0.2g/の発酵ブロスである。対照
的に、ここで記載する方法では、安定剤を発酵の出発時
（又は初期段階で）から添加する。その薬剤は１回分ず
つ発酵の出発時又はその近くで添加することができ、或
は一連の試料に、工程を通じて徐々に又は間欠的に添加
することができる。このように、一方は細胞の生物量又
はアルブミンそして他方は薬剤の間の釣合いをほぼ保持
することができる。
より達成される。これ等の条件下で、発酵槽はその方法
の出発時に一部満たされており、少量の炭素基質だけが
含まれている。発酵が進んだ時、炭素基質の濃厚溶液お
よびその他の栄養素を漸次添加する。消泡剤はそのよう
な方法においての一般的な加工助剤であり、泡の制御は
発酵槽の最上部近くに取り付けたセンサーにより行わ
れ、泡を感知した時消泡剤が添加される。発酵槽は出発
時には一部満たされているだけであるから、発酵の初期
段階では、消泡剤はほとんどあるいは全く添加せず、泡
の上部がセンサーに達して、センサーが作動するのは、
工程の終期近くに容器が充満する時だけである。代表的
な使用率は0.02から0.2g/の発酵ブロスである。対照
的に、ここで記載する方法では、安定剤を発酵の出発時
（又は初期段階で）から添加する。その薬剤は１回分ず
つ発酵の出発時又はその近くで添加することができ、或
は一連の試料に、工程を通じて徐々に又は間欠的に添加
することができる。このように、一方は細胞の生物量又
はアルブミンそして他方は薬剤の間の釣合いをほぼ保持
することができる。
１種以上の適当な安定剤化合物を使用することができ
る。この方法の使用割合は、0.5から10g/（好ましく
は１から5g/）の安定剤濃度、（１つより多く使用す
る場合には全安定剤の濃度）を生ずるようにする。流化
培養の利用は特に異種蛋白質の生産のための高細胞密度
生産に適するけれども、その方法はこの形式の発酵に限
定されるものではない。これ等の濃度でこれ等の薬剤の
使用は単純なバッチ式培養又は連続培養のアルブミンの
生産にも適用することができる。後者の場合、薬剤を連
続的又は間欠的に添加して0.5から10g/（好ましくは
１から5g/）の望ましい範囲に濃度を保持することが
できる。
る。この方法の使用割合は、0.5から10g/（好ましく
は１から5g/）の安定剤濃度、（１つより多く使用す
る場合には全安定剤の濃度）を生ずるようにする。流化
培養の利用は特に異種蛋白質の生産のための高細胞密度
生産に適するけれども、その方法はこの形式の発酵に限
定されるものではない。これ等の濃度でこれ等の薬剤の
使用は単純なバッチ式培養又は連続培養のアルブミンの
生産にも適用することができる。後者の場合、薬剤を連
続的又は間欠的に添加して0.5から10g/（好ましくは
１から5g/）の望ましい範囲に濃度を保持することが
できる。
本発明の安定剤の使用は比較的収率の低い酵母の菌株
に有利であることが分った。高いアルブミンの収率が得
られる或種の酵母の菌株では、赤い細胞密度を生ずるよ
うな発酵条件の場合、有利な効果は余り認められず、低
い細胞密度で生産するのが目的の場合には、効果を認め
ることができる。
に有利であることが分った。高いアルブミンの収率が得
られる或種の酵母の菌株では、赤い細胞密度を生ずるよ
うな発酵条件の場合、有利な効果は余り認められず、低
い細胞密度で生産するのが目的の場合には、効果を認め
ることができる。
アルブミンは天然由来のもの又は修飾形、例えばその
断片でよいが、但し、化合物はHSAの少くとも１つの機
能性、例えばその腫瘍症の又は配位子結合の特性又は実
験用培地での有用性を保有する必要がある。特にアルブ
ミンはEP−Ａ−322,094号の開示される断片のものでよ
い。分泌は適当なシグナル配列、例えばpre−HSA配列又
は酵母アルファ因子シグナル配列によって伝達すること
ができる。
断片でよいが、但し、化合物はHSAの少くとも１つの機
能性、例えばその腫瘍症の又は配位子結合の特性又は実
験用培地での有用性を保有する必要がある。特にアルブ
ミンはEP−Ａ−322,094号の開示される断片のものでよ
い。分泌は適当なシグナル配列、例えばpre−HSA配列又
は酵母アルファ因子シグナル配列によって伝達すること
ができる。
微生物は適当な細菌の菌株（例えばBacillus又はStre
ptomyces SPP.）又は酵母（Saccharomyces cerevisiae
又はKluyveromyces lactis等）のような、発酵培地にア
ルブミンを分泌する微生物（動物又は植物細胞培養物を
含む）でよい。アルブミン分泌酵母およびそれ等の、ア
ルブミンを生産する発酵については、Ep−Ａ−322,094
号およびEp−Ａ−201,239号に開示されている。
ptomyces SPP.）又は酵母（Saccharomyces cerevisiae
又はKluyveromyces lactis等）のような、発酵培地にア
ルブミンを分泌する微生物（動物又は植物細胞培養物を
含む）でよい。アルブミン分泌酵母およびそれ等の、ア
ルブミンを生産する発酵については、Ep−Ａ−322,094
号およびEp−Ａ−201,239号に開示されている。
例 例１ 発酵培地中のアルブミンの安定化 実験室発酵槽を、50ml/の塩混合物（114g/のKH2P
O4,12g/のMgSO4,3.0g/のCaCl2・6H2O,2.0g/のNa2
EDTAを含有する）;3g/のZnSO4・7H2O,10g/のFeSO4
・7H2O,3.2g/のMnSO4・4H2O,79mg/のCuSO4・5H2O,
1.5g/のH3BO3,0.2g/のKl,0.5g/のNa2MoO4・2H2O,
0.56g/のCoCl2・6H2O,75ml/のH3PO4を含む10ml/
の微量成分の溶液;20g/のスクロース;1.6g/のパン
トテン酸カルシウム,1.2g/のニコチン酸,12.8g/の
ｍ−イノシトール,0.32g/のチアミンHCl,0.8g/のピ
リドキシンHClおよび8mg/のビオチンを含有する50ml/
のビタミン混合物を包含する最初の「バッチ」培地
で、公称の作業量の半分まで満たした。100ml/の塩混
合物、20ml/の微量成分溶液、500g/のスクロースお
よび100ml/のビタミン溶液を含有する等量の「供給」
培地を、計量ポンプによって発酵槽に接続する独立した
貯蔵容器に入れた。
O4,12g/のMgSO4,3.0g/のCaCl2・6H2O,2.0g/のNa2
EDTAを含有する）;3g/のZnSO4・7H2O,10g/のFeSO4
・7H2O,3.2g/のMnSO4・4H2O,79mg/のCuSO4・5H2O,
1.5g/のH3BO3,0.2g/のKl,0.5g/のNa2MoO4・2H2O,
0.56g/のCoCl2・6H2O,75ml/のH3PO4を含む10ml/
の微量成分の溶液;20g/のスクロース;1.6g/のパン
トテン酸カルシウム,1.2g/のニコチン酸,12.8g/の
ｍ−イノシトール,0.32g/のチアミンHCl,0.8g/のピ
リドキシンHClおよび8mg/のビオチンを含有する50ml/
のビタミン混合物を包含する最初の「バッチ」培地
で、公称の作業量の半分まで満たした。100ml/の塩混
合物、20ml/の微量成分溶液、500g/のスクロースお
よび100ml/のビタミン溶液を含有する等量の「供給」
培地を、計量ポンプによって発酵槽に接続する独立した
貯蔵容器に入れた。
500mg/のアルブミンをSaccharomyces cenevisiaeを
接種した発酵槽に添加した。pHをアンモニア又は硫酸の
自動添加により5.7±0.2に保持し、温度を30℃に保ち、
撹拌機の速度を、1v/v/分の空気流速において20％の空
気飽和度以上の溶存酸素応力（DOT）を示すように調節
した。最初の基質が消費された時に、定量ポンプが作動
し、約0.15h-1の生長速度が保持される。この生長速度
を保持するため、ポンプの速度を、撹拌機の速度が最大
値に達する迄増加し、その最大値の地点では、最小値が
生ずる可能性のある15％空気飽和度以下にDOTが下がる
ことなく、ポンプ速度を更に増加することは不可能であ
った。PPG2000は泡のセンサーの反応に応じて添加し
た。50％以上の供給溶液が添加される迄は何も添加しな
かった。添加の最終の水準は0.2g/であった。発酵の
終期における生物量は93g/であった。最初にあったア
ルブミンの約90％は、供給の出発時の24時間以内に分解
した。
接種した発酵槽に添加した。pHをアンモニア又は硫酸の
自動添加により5.7±0.2に保持し、温度を30℃に保ち、
撹拌機の速度を、1v/v/分の空気流速において20％の空
気飽和度以上の溶存酸素応力（DOT）を示すように調節
した。最初の基質が消費された時に、定量ポンプが作動
し、約0.15h-1の生長速度が保持される。この生長速度
を保持するため、ポンプの速度を、撹拌機の速度が最大
値に達する迄増加し、その最大値の地点では、最小値が
生ずる可能性のある15％空気飽和度以下にDOTが下がる
ことなく、ポンプ速度を更に増加することは不可能であ
った。PPG2000は泡のセンサーの反応に応じて添加し
た。50％以上の供給溶液が添加される迄は何も添加しな
かった。添加の最終の水準は0.2g/であった。発酵の
終期における生物量は93g/であった。最初にあったア
ルブミンの約90％は、供給の出発時の24時間以内に分解
した。
別の同一条件下でその後の実験で、PPGを発酵の出発
時に1g/の水準で添加した。発酵の経過は非常に類似
しており、94g/の最終乾物重量に達したが、この場合
にはアルブミンの分解がその後減少し、その結果発酵の
終期には最初にあったアルブミンの約60％が分解した。
時に1g/の水準で添加した。発酵の経過は非常に類似
しており、94g/の最終乾物重量に達したが、この場合
にはアルブミンの分解がその後減少し、その結果発酵の
終期には最初にあったアルブミンの約60％が分解した。
例２ 分泌アルブミンの濃度増加 この場合、呼吸商（RQ）も測定するコンピューター制
御系を使用してRQが1.2を越えた場合には供給速度を減
ずるように、ポンプ速度を自動的に増加するような修正
をして、一連の実験を上記のバッチ供給の試料を使用し
て行なった。この方法は「クラブトリー効果」により起
り得る収率減が避けられる。全ての場合、分泌アルブミ
ン生産をコードするプラスミドを含有するSaccharomyce
s cerevisiaeを発酵槽に接種した。次のプロトコールは
次の結果を伴う消泡剤添加に使用した。
御系を使用してRQが1.2を越えた場合には供給速度を減
ずるように、ポンプ速度を自動的に増加するような修正
をして、一連の実験を上記のバッチ供給の試料を使用し
て行なった。この方法は「クラブトリー効果」により起
り得る収率減が避けられる。全ての場合、分泌アルブミ
ン生産をコードするプラスミドを含有するSaccharomyce
s cerevisiaeを発酵槽に接種した。次のプロトコールは
次の結果を伴う消泡剤添加に使用した。
例2A（比較例） PPG2000を単独で泡センサーの反応によって添加し
た。発酵の出発時における零は、10％の供給後0.1g/
に増加し、ついで最後の50％の供給の間に0.2g/の最
終の水準まで上昇した。最終生物量は84g/であり、ア
ルブミンの水準は任意の基準で1.0単位であることが示
された。
た。発酵の出発時における零は、10％の供給後0.1g/
に増加し、ついで最後の50％の供給の間に0.2g/の最
終の水準まで上昇した。最終生物量は84g/であり、ア
ルブミンの水準は任意の基準で1.0単位であることが示
された。
例2B ポリリシネートを発酵の出発時に1.5g/添加し、35
％の供給物を添加した後更に2.2g/増加し、供給が完
了した時に2.5g/の水準を保持するために更に増加し
た。供給が終った痕に更に添加して3.5g/の最終水準
まで上昇した。最終の生物量は83g/で、アルブミン水
準は3.81単位であった。
％の供給物を添加した後更に2.2g/増加し、供給が完
了した時に2.5g/の水準を保持するために更に増加し
た。供給が終った痕に更に添加して3.5g/の最終水準
まで上昇した。最終の生物量は83g/で、アルブミン水
準は3.81単位であった。
例2C PPG2000を1g/の初期の値迄添加し、50％および80％
の供給時に更に添加してこの濃度を維持した。最終生物
量は86g/、アルブミン濃度は4.2単位であった。
の供給時に更に添加してこの濃度を維持した。最終生物
量は86g/、アルブミン濃度は4.2単位であった。
例３ 分泌アルブミンの濃度増加（第２事例） 異なる菌株のS.cerevisiae（然し分泌アルブミンのプ
ラズマはやはり含有している）を使用した以外は一連の
バッチ供給の発酵を例２の方法により行った。消泡剤を
例2Cの条件により添加し、次の結果を得た。
ラズマはやはり含有している）を使用した以外は一連の
バッチ供給の発酵を例２の方法により行った。消泡剤を
例2Cの条件により添加し、次の結果を得た。
消泡剤 生物量 アルブミン濃度 （g/） （任意の単位） 落花生油 95.4 1.0 Crill 1 86.8 0.8 Breox FMT 30 81.8 3.2 Darastil 8231 81.6 2.5 消泡剤（Darastil 8231およびBreox FMT30）に由来
するポリアルケンオキシドはその他のものより高いアル
ブミン収率を与えることが明らかである。
するポリアルケンオキシドはその他のものより高いアル
ブミン収率を与えることが明らかである。
フロントページの続き (72)発明者 コリンズ，スチーブン ヒュー イギリス国エヌジー12 ２ジェイジー ノッティンガムシャー，ラッドクリフ オン トレント，クロップウェル ロー ド 76 (72)発明者 メッド，デビッド ジョン イギリス国エヌジー12 ２イーエフ ノ ッティンガムシャー，ラッドクリフ オ ン トレント，グランビル クレスセン ト ４ (56)参考文献 特開 昭63−74493（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−157518（ＪＰ，Ａ) 特公 昭50−1475（ＪＰ，Ｂ２) 特公 昭45−30189（ＪＰ，Ｂ１) Ｆｏｌｉａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．，Ｌ ｅｉｐｚｉｇ 109，（1982），Ｐ．849 −855 Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌ．，Ｖｏｌ．27, （1987），Ｐ．174−180 Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌ．，Ｖｏｌ．27, （1987），Ｐ．181〜185
Claims (8)
- 【請求項１】アルブミン分泌性の微生物を適当な培地で
発酵させて、アルブミンを培地に分泌させてヒト血清ア
ルブミンを製造する方法であって、 所定量のポリオキシアルキレン化合物を培地に添加して
アルブミンを安定化すること、及び 該所定量は望ましくない発生量の泡を抑制するのに必要
なポリオキシアルキレン化合物の添加量を超える量であ
ることを特徴とする、上記方法。 - 【請求項２】ポリオキシアルキレン化合物を、0.5から1
0g/の平均濃度を示すように添加する、請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】ポリオキシアルキレン化合物を、1.0から
5.0g/の平均濃度を示すように添加する、請求項２記
載の方法。 - 【請求項４】ポリオキシアルキレン化合物は消泡化合物
である、請求項１から請求項３の何れか１項に記載の方
法。 - 【請求項５】ポリオキシアルキレン化合物はポリプロピ
レングリコール、ひまし油脂肪酸とエチレンオキシドの
縮合物、プロピレンオキシドおよびエチレンオキシドと
ポリオールとの共重合体、又はプロピレンオキシドとポ
リエチレングリコールとの共重合体である、請求項１か
ら４の何れか１項に記載の方法。 - 【請求項６】微生物は酵母である、請求項１から５の何
れか１項に記載の方法。 - 【請求項７】酵母はサッカロミセス セレビシエ（Sacc
haromyces cerevisiae）である、請求項６記載の方
法。 - 【請求項８】培地は最小培地である、請求項１から７の
何れか１項に記載の方法。
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