FI96040C - Fermentointimenetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi - Google Patents
Fermentointimenetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI96040C FI96040C FI902259A FI902259A FI96040C FI 96040 C FI96040 C FI 96040C FI 902259 A FI902259 A FI 902259A FI 902259 A FI902259 A FI 902259A FI 96040 C FI96040 C FI 96040C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- albumin
- added
- fermentation
- medium
- polyoxyalkylene compound
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 title claims abstract description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 title claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 12
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 33
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 11
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 4
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000005187 foaming Methods 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 claims description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 claims description 2
- 229920005606 polypropylene copolymer Polymers 0.000 claims 1
- -1 polyoxypropylene Polymers 0.000 abstract description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003254 anti-foaming effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
Description
5 96040
Fermentointimenetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi - Fermenteringsförfarande för framställning av human serumalbumin Tämä keksintö koskee parannettuja fermentointimenetelmiä, ja erityisesti menetelmää, jolla lisätään ihmisen seerumin albumiinin (tästä lähtien "albumiini") määrää, jota tuotetaan fermentoimalla albumiinia väliaineeseen erittämään kykene-10 vää, rDNAita sisältävää mikro-organismia.
Albumiini on veriplasman pääkomponentti, ja sitä voidaan käyttää plasman tai seerumin korvikkeena palovammoja, verenvuodon aiheuttaman shokin ja muiden tilojen hoidossa. On 15 kuvattu menetelmiä, joissa albumiinia voidaan tuottaa fer-mentoimalla mikro-organismeja, joihin on lisätty albumiini-geeni yhdistelmä-DNA-teknologialla (GB-A-2 147 903).
Tällaiset organismit muodostetaan edullisesti erittämään al-20 bumiinin ympäröivään kasvatusnesteeseen, koska solunsisäinen albumiini, yhteisesti monien muiden heterologisten proteiinien kanssa, muodostuu ei-aktiivisessa, ei-liukoisessa muodossa, josta natiiviproteiini on saatavissa vain hyvin vaikeasti (katso esimerkiksi: M. Latta et ai; Bio/Technology 5 25 (1987) 1309-1314). Valmistusprosessin tuottavuuden maksimoi- miseksi on suotavaa kasvattaa mikro-organismeja kiivaasti sekoitetussa fermenttorissa solujen ja tuotteiden suurten konsentraatioiden saavuttamiseksi. Epäonneksi nämä olosuhteet jättävät eritetyn proteiinin alttiiksi fysikaaliselle, 30 kemialliselle ja entsymaattiselle hajoamiselle väliaineessa niin, että fermenttorissa tuotetun albumiinin määrä on pal- . jon pienempi kuin mitä voitaisiin odottaa organismien toi- * minnasta vähemmän voimaperäisissä olosuhteissa.
35 Nyt on keksitty, että määrättyjen kemiallisten reagenssien lisäys on tehokas eritetyn albumiinin konsentraation nostamiseen erityisesti minimaalisessa väliaineessa (ts. kasva-tusvällaineessa, joka ei sisällä kompleksisia orgaanisia 2 96040 typpilähteitä). Erityisesti määrättyjen vaahtoamisenestoai-neiden lisäyksellä määriin, jotka ylittävät paljon normaaliin vaahtoamisen kontrolliin vaaditut määrät, on tämä stabiloiva vaikutus. Tehokkaisiin reagensseihin kuuluvat poly-5 propyleeniglykoli (keskimääräinen molekyylipaino 2000) ja "polyrisinaatti" (risiiniöljyrasvahappojen ja etyleenioksi-din kondensaatti, jota tuottaa Croda Chemicals).
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa pa-10 tenttivaatimuksissa.
Voidaan käyttää mitä hyvänsä sopivaa polyalkyleenipolymeeriä tai -sekapolymeeriä toisen yhdisteen kanssa, esimerkiksi po-lyetyleeniglykolia; polypropyleeniglykolia; polysorbaatti 15 80:tä; etyleenioksidin ja propyleenioksidin sekapolymeerejä; ja etyleenioksidin ja/tai propyleenioksidin sekapolymeerejä muiden yhdisteiden, kuten rasvahappojen, rasva-alkoholien, sokerien ja polyolien, esimerkiksi sokerialkoholien (esimerkiksi sorbitolin), etyleeniglykolin, pentaerytritolin ja 20 glyserolin kanssa.
Polyoksipropyleenipolymeereillä on yleinen kaava HO- (CH2-CH(CH3) -O)n-H. Sopiviin polyoksietyleeni/polyoksipro-pyleeni-sekapolymeereihin kuuluvat sellaiset, jotka voidaan 25 esittää kaavalla X-(O-(CH2-CH(CH3)-O)m-(CH2-CH20)n-H)L, jossa ;· X on polyoli, joka sisältää 1 hydroksyyliryhmää, 1 on 2-6, m on 10-30 ja n on 0-10. Toisessa sopivassa yhdistesarjassa käytetään polyetyleeniglykolia, kuten polyolia, jossa on kaksi saatavilla olevaa hydroksyyliryhmää, jotka molemmat 30 ovat korvattavissa ryhmällä -O (CHj-CH(CH3)-0)n-H, jossa kukin n on sama tai erilainen.
*
Kaikkia edellä mainittuja yhdisteitä ja yhdisteluokkia kutsutaan tässä nimellä "polyoksialkyleeniyhdisteet". Nämä yh-35 disteet ovat tavallisesti, mutteivät aina, vaahtoamisenes- toyhdisteitä. Mikäli tällaisella yhdisteellä ei ole vaahtoa-misenesto-ominaisuuksia, niin käsite "ylimäärä verrattuna • « • · 3 96040 määrään, joka vaaditaan ei-toivotun vaahtoamisen määrän ehkäisemiseen" tarkoittaa määrää, joka on suurempi kuin 0.
Sopivia yhdisteitä ovat mm. kauppanimillä "Darastil" (esi-5 merkiksi "Darastil 8231") (Grace Dearborn Ltd, Widnes,
Cheshire, Iso-Britannia) ja Breox FMT30 (Water Management Chemicals Ltd, Kidderminster, Worcs, Yhdistynyt kuningaskunta) .
10 Mikrobitermentoinnin suuria solutiheyksiä saavutetaan tavallisesti syöttöpanosreaktorikasvatuksella. Näissä olosuhteissa fermenttori on prosessin alussa osittain täynnä ja sisältää vain pienen osan hiilisubstraatista. Fermentoinnin edetessä lisätään vaiheittain konsentroitua hiilisubstraattili-15 uosta, ja mahdollisesti muita ravinteita. Vaahtoamisenesto-aineet ovat tällaisissa prosesseissa tavallisia apuneuvoja, jolloin vaahtoamisen kontrolli saavutetaan fermenttorin huippua lähellä sijaitsevalla sensorilla, joka käynnistää vaahtoamisenestoaineen vaahtoa havaittaessa. Koska ferment-20 tori on alussa vain osittain täytetty, lisätään fermentoinnin alkuvaiheissa vain hieman tai ei lainkaan vaahtoamisen-estoainetta, ja vasta prosessin edetessä loppua kohden, astian täyttyessä, vaahdon huippu todennäköisesti yltää sensoriin ja käynnistää sen. Tyypillisiä käyttömääriä ovat 25 0,02-0,2 g/1 fermentointikasvatusliuosta. Vastakohtana tässä ;· kuvatussa prosessissa stabilointiaineita lisätään fermen toinnin alusta (tai aikaisessa vaiheessa). Reagenssi voidaan lisätä joko yhtenä ainoana annoksena fermentoinnin alussa tai lähellä sitä, tai ajoittain sarjana eriä prosessin läpi. 30 Tällä tavalla on mahdollista pitää yllä toisaalta solubio-massan tai albumiiniin ja toisaalta reagenssin välisiä likimääräisiä suhteita.
•
Voidaan käyttää yhtä tai useampia stabilisaattoriyhdisteitä. 35 Tässä prosessissa käyttömäärät ovat sellaisia, että ne tuottavat stabilisaattorin (tai stabilisaattoreiden kokonaismäärän, jos useampia kuin yhtä käytetään) konsentraation välil-• lä 0,5 ja 10 g/1 (edullisesti 1-5 g/1). Vaikka syöttöpanos- 4 96040 reaktorikasvatuksen käyttö on erityisen soveliasta suurten solutiheyksien tuottoon heterologisten proteiinien tuotannossa, ei prosessi rajoitu tämän tyyppiseen fermentointiin. Näiden reagenssien käyttöä näillä konsentraatioilla voidaan 5 soveltaa myös albumiinin tuottoon yksinkertaisessa panoskas-vatuksessa tai jatkuvatoimisessa kasvatuksessa. Jäljemmässä tapauksessa reagenssia voidaan lisätä jatkuvasti tai ajoittain pitämään yllä konsentraatiota toivotulla alueella 0,5-10 g/1 (edullisesti 1-5 g/1).
10
Keksinnön mukaisten stabilisaattoreiden käyttö on havaittu edulliseksi suhteellisen pienisaantoisilla hiivakannoilla. Määrätyillä hiivakannoilla, jotka tuottavat suurempia albu-miinisaantoja, edullinen vaikutus voi olla vähemmän merkit-15 tävä jos fermentointitapa on sellainen, että sillä tuotetaan suuria solutiheyksiä, mutta se on edelleen havaittava, jos tuotetaan alhaisempia solutiheyksiä. Albumiini voi olla luonnollisesti esiintyvä tai albumiinin modifioitua muotoa, mukaanlukien niiden fragmentit, sillä ehdolla, että yhdiste 20 säilyttää ainakin yhden HSA:n ominaispiirteen, esimerkiksi sen turvotus- tai ligandinsitomisominaisuudet tai sen käytön laboratoriovällaineena. Erityisesti albumiini voi olla EP-patenttihakemuksessa 322 094 esitetty. Eritystä voi välittää mikä hyvänsä sopiva signaalisekvenssi, esimerkiksi pre-HSA-25 sekvenssi tai hiivan a-faktorisignaalisekvenssi.
Mikro-organismi voi olla mikä hyvänsä organismi (mukaan lukien eläin- ja kasvisoluviljelmät), joka erittää albumiinia fermentointiväliaineeseen, kuten sopivat bakteerikannat 30 (esimerkiksi Bacillus tai Streptomyces spp.) tai hiivat (kuten Saccharomyces cerevisiae tai Kluvveromyces lactis). Al-bumiinia erittävät hiivat ja niiden fermentointi albumiinin tuottamiseksi on esitetty EP-patenttihakemuksissa 322 094 ja 201 239.
35
Esimerkki 1. Albumiinin stabilointi fermentointiväliaineessa Laboratoriofermenttori täytettiin puoleen nimellisestä työ-• tilavuudestaan alku-"panos"-väliaineella, joka sisälsi 50 5 96040 ml/1 suolaseosta (sisältäen 114 g/1 KH2P04f 12 g/1 MgS04, 3,0 g/1 CaCl2*6H20, 2,0 g/1 Na2EDTA; 10 ml/1 hivenaineliuosta, joka sisälsi 3 g/1 ZnS04-7H20, 10 g/1 FeS04-7H20, 3,2 g/1 MnS04· 4H20, 79 mg/1 CuS04-5H20, 1,5 g/1 H3B03, 0,2 g/1 KI, 0,5 5 g/1 Na2Mo04· 2H20, 0,56 g/1 CoC12-6H20, 75 ml/1 H3P04; 20 g/1 sakkaroosia; 50 ml/1 vitamiiniseosta, joka sisälsi 1,6 g/1 Ca-pantotenaattia, 1,2 g/1 nikotiinihappoa, 12,8 g/1 m ino-sitolia, 0,32 g/1 tiamiini-HCl, 0,8 g/1 pyridoksiini·HC1 ja 8 mg/1 biotiinia. Yhtä suurta tilavuutta "syöttö"-väliainet-10 ta, joka sisälsi 100 ml/1 suolaseosta, 20 ml/1 hivenaineliuosta, 500 g/1 sakkaroosia ja 100 ml/1 vitamiiniliuosta, pidettiin erillisessä säiliössä, joka oli yhdistetty ferment-toriin mittapumpulla.
15 500 mg/1 albumiinia lisättiin fermenttoriin, joka oli siir- rostettu Saccharomyces cerevisiaella. pH pidettiin arvossa 5,7 ± 0,2 ammoniakin tai rikkihapon automaattisella lisäyksellä, lämpötila pidettiin 30°C:ssa, ja sekoittimen nopeus säädettiin antamaan liuenneen hapen osapaineen (DOT) > 20-% 20 ilmakylläisyysasteen ilmavirtanopeudella 1 tilavuus/tila- vuus/min. Kun alkuperäinen substraatti oli kulutettu, mitta-pumppu käynnistettiin, pitäen yllä kasvunopeutta noin 0,15 h'1. Pumpun nopeutta kasvatettiin tämän kasvunopeuden ylläpitämiseksi, kunnes sekoittimen nopeus saavutti maksi-25 miarvonsa, jossa pisteessä pumpun nopeuden lisääminen oli mahdotonta aiheuttamatta DOT:n laskemista alle 15-% ilmakyl-läisyyteen, joka oli pienin sallittu arvo. PPG 2000:ta lisättiin vasteena vaahtosensorille. Sitä ei lisätty lainkaan, ennen kuin yli 50 % syöttöliuoksesta oli lisätty. Lisäyksen 30 lopputaso oli 0,2 g/1. Biomassakonsentraatio fermentoinnin lopussa oli 93 g/1. Noin 90 % albumiinista, joka oli läsnä .’ alunperin, oli hajonnut 24 h sisällä syötön alkamisesta.
Seuraavassa kokeessa muuten identtisissä olosuhteissa PPG:tä 35 lisättiin fermentoinnin alussa määrä 1 g/1. Fermentoinnin eteneminen oli hyvin samanlainen, saavuttaen lopullisen kuivapainon 94 g/1, mutta tässä tapauksessa albumiinin hajoaminen väheni myöhemmin niin, että fermentoinnin lopussa noin 6 96040 60 % alunperin läsnä olevasta albumiinista oli hajoamattomana.
Esimerkki 2. Eritetyn albumiinin konsentraation kasvattami-5 nen Järjestettiin koesarja edellä kuvattua syöttöpanosreaktori-kasvatustapaa käyttäen modifioiden siten, että tässä tapauksessa pumpun nopeutta lisättiin automaattisesti tietokone-kontrollijärjestelmää käyttäen, joka tarkkaili myös hengi-10 tysosamäärää (RQ) niin, että syöttönopeutta alennettiin, jos RQ ylitti 1,2. Tällä tavalla vältetään "Crabtree"-affektista johtuva saannon aleneminen. Fermenttorit siirrostettiin kaikissa tapauksissa Saccharomyces cerevisiaella. joka sisälsi plasmidin, joka koodittaa eritetyn albumiinin tuotantoa.
15 Vaahtoamisenestoaineen lisäykseen käytettiin seuraavia työtapoja, jolloin saatiin seuraavat tulokset.
Esimerkki 2A (vertaava esimerkki) PPG 2000:ta lisättiin ainoastaan vasteena vaahtosensorille. 20 Fermentoinnin alussa ei lisätty lainkaan, kasvattaen määrään 0,1 g/1, kun 10 % syötöstä oli lisätty, ja kohottaen sitten lopulliseen tasoon 0,2 g/1 syötön viimeisen 50 %:n aikana. Lopullinen biomassa oli 84 g/1, ja albumiinitasoksi havaittiin mielivaltaisella skaalalla 1,0 yksikköä.
25
• Esimerkki 2B
Polyrisinaattia lisättiin tasoon 1,5 g/1 fermentoinnin alussa, lisäten edelleen tasoon 2,2 g/1, kun 35 % syötöstä oli lisätty, lisäten edelleen pitämään yllä tason 2,5 g/1, kun 30 syöttö oli lähes lopussa. Edelleen lisäys sen jälkeen, kun syöttö oli loppunut, nosti lopullisen tason 3,5 g/1:aan.
:* Lopullinen biomassa 83 g/1, albumiinitaso 3,81 yksikköä.
Esimerkki 2C
35 PPG 2000:ta lisättiin alkuarvoon 1 g/1, lisäten edelleen sen jälkeen, kun 50 % ja 80 % syötöstä oli lisätty, tämän kon-sentraation ylläpitämiseksi. Lopullinen biomassa 88 g/1, albumiinikonsentraatio 4,2 yksikköä.
Il 7 96040
Esimerkki 3. Eritetyn albumiinin konsentraation kasvattaminen (toinen tapaus) Järjestettiin sarja syöttöpanosreaktorifermentointeja esimerkin 2 tavan mukaisesti paitsi, että käytettiin eri S_s_ 5 cerevisiae-kantoi a (mutta jotka edelleen sisälsivät plasmi- din albumiinin erittämiseksi). Vaahtoamisenestoaineita lisättiin esimerkin 2C tavalla, jolloin saatiin seuraavat tulokset .
10 Vaahtoamisenesto- Biomassa Albumiinikonsentraatio aine (g/1) (mielivaltaista yksikköä) maapähkinäölj y 95,4 1,0
Crill 1 86,8 0,8 15 Breox FMT30 81,8 3,2
Darstil 8231 81,6 2,5
On ilmeistä, että polyalkeenioksidiperäiset vaahtoamisenes-toaineet (Darastil 8231 ja Breox FMT30) tuottivat muita suu-20 remmat albumiinisaannot.
• ·
Claims (7)
1. Menetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi fermentoimalla albumiinia erittävää mikro-organismia sopivassa väliaineessa niin, että albumiini erittyy väliainee- 5 seen, tunnettu siitä, että väliaineeseen lisätään fermen-toinnin alussa tai aikaisessa vaiheessa polyoksialkyleeni-yhdistettä antamaan keskimääräinen taso yli 0,2 g/1, joka on ylimäärä verrattuna määrään, joka vaaditaan ei-toivottujen vaahtoamisen määrien ehkäisemiseen. 10
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polyoksialkyleeniyhdistettä lisätään antamaan keskimääräinen taso 1,0-6,0 g/1.
3. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel mä, tunnettu siitä, että polyoksialkyleeniyhdiste on vaahto-amisenestoyhdiste.
4. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel-20 mä, tunnettu siitä, että polyoksialkyleeniyhdiste on poly- propyleeniglykoli; risiiniöljyrasvahappojen ja etyleenioksi-din kondensaatti; propyleenioksidin ja etyleenioksidin seka-polymeeri polyolin kanssa; tai propyleenioksidi/polyetylee-niglykoli-sekapolymeeri. 25
5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mikro-organismi on hiiva.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu sii-30 tä, että hiiva on Saccharomyces cerevisiae.
: 7. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetel mä, tunnettu siitä, että väliaine on minimaalinen väliaine. II 9 96040
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8820951 | 1988-09-07 | ||
| GB888820951A GB8820951D0 (en) | 1988-09-07 | 1988-09-07 | Fermentation method |
| GB8901046 | 1989-09-06 | ||
| PCT/GB1989/001046 WO1990002808A2 (en) | 1988-09-07 | 1989-09-06 | Fermentation of genetically engineered yeast in the presence of a polyalkylene compound |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI902259A0 FI902259A0 (fi) | 1990-05-04 |
| FI96040B FI96040B (fi) | 1996-01-15 |
| FI96040C true FI96040C (fi) | 1996-04-25 |
Family
ID=10643175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI902259A FI96040C (fi) | 1988-09-07 | 1990-05-04 | Fermentointimenetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0386222B1 (fi) |
| JP (1) | JP2996405B2 (fi) |
| KR (1) | KR900702001A (fi) |
| AT (1) | ATE118249T1 (fi) |
| AU (1) | AU618413B2 (fi) |
| CA (1) | CA1336416C (fi) |
| DE (1) | DE68921063T2 (fi) |
| DK (1) | DK107490A (fi) |
| FI (1) | FI96040C (fi) |
| GB (1) | GB8820951D0 (fi) |
| HU (1) | HU207350B (fi) |
| IE (1) | IE61268B1 (fi) |
| WO (1) | WO1990002808A2 (fi) |
| ZA (1) | ZA896847B (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0404317A3 (en) * | 1989-06-22 | 1991-10-02 | Petrolite Corporation | Use of ethoxylated propoxylated alcohols to prevent or reduce foam in fermentation broths |
| JPH0671432B2 (ja) * | 1991-03-20 | 1994-09-14 | 株式会社ミドリ十字 | ヒト血清アルブミンの製造方法 |
| DE59600783D1 (de) * | 1995-04-27 | 1998-12-10 | Sucher & Holzer Bauplan Handel | Schneckenpresse |
| CA2286395C (en) * | 1997-04-03 | 2009-06-23 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries Ltd. | Production method of heterologous protein |
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| CA2658654A1 (en) | 2006-07-24 | 2008-01-31 | Biorexis Pharmaceutical Corporation | Exendin fusion proteins |
| JP7050528B2 (ja) * | 2017-03-01 | 2022-04-08 | 三洋化成工業株式会社 | 有用物質の生産方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2417410C2 (de) * | 1973-04-11 | 1983-02-24 | Cincinnati Milacron-Heald Corp., 01606 Worcester, Mass. | Schleifmaschine zum Bearbeiten von hohlzylindrischenWerkstücken mit von der Kreisform abweichendem Querschnitt |
| DE2917535C2 (de) * | 1979-04-30 | 1986-10-30 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gegen Denaturierung beständige Insulinlösungen |
| IL66614A (en) * | 1981-08-28 | 1985-09-29 | Genentech Inc | Method of constructing a dna sequence encoding a polypeptide,microbial production of human serum albumin,and pharmaceutical compositions comprising it |
| GB8613388D0 (en) * | 1986-06-03 | 1986-07-09 | Delta Biotechnology Ltd | Induction of galactose regulated gene expression in yeast |
| EP0262516A2 (en) * | 1986-09-29 | 1988-04-06 | Miles Inc. | Genetic transformation of lactic acid bacteria |
-
1988
- 1988-09-07 GB GB888820951A patent/GB8820951D0/en active Pending
-
1989
- 1989-09-06 WO PCT/GB1989/001046 patent/WO1990002808A2/en not_active Ceased
- 1989-09-06 AU AU43107/89A patent/AU618413B2/en not_active Ceased
- 1989-09-06 IE IE286489A patent/IE61268B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-09-06 KR KR1019900700909A patent/KR900702001A/ko not_active Ceased
- 1989-09-06 HU HU895572A patent/HU207350B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-09-06 JP JP1509770A patent/JP2996405B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-06 EP EP89910461A patent/EP0386222B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-06 DE DE68921063T patent/DE68921063T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-06 AT AT89910461T patent/ATE118249T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-09-07 ZA ZA896847A patent/ZA896847B/xx unknown
- 1989-09-07 CA CA000610647A patent/CA1336416C/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-05-01 DK DK107490A patent/DK107490A/da not_active Application Discontinuation
- 1990-05-04 FI FI902259A patent/FI96040C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE61268B1 (en) | 1994-10-19 |
| WO1990002808A2 (en) | 1990-03-22 |
| EP0386222A1 (en) | 1990-09-12 |
| WO1990002808A3 (en) | 1990-04-19 |
| KR900702001A (ko) | 1990-12-05 |
| FI902259A0 (fi) | 1990-05-04 |
| DK107490D0 (da) | 1990-05-01 |
| AU618413B2 (en) | 1991-12-19 |
| CA1336416C (en) | 1995-07-25 |
| AU4310789A (en) | 1990-04-02 |
| JPH03500969A (ja) | 1991-03-07 |
| JP2996405B2 (ja) | 1999-12-27 |
| FI96040B (fi) | 1996-01-15 |
| HUT56398A (en) | 1991-08-28 |
| ZA896847B (en) | 1990-07-25 |
| GB8820951D0 (en) | 1988-10-05 |
| DK107490A (da) | 1990-05-01 |
| EP0386222B1 (en) | 1995-02-08 |
| DE68921063T2 (de) | 1995-07-06 |
| DE68921063D1 (de) | 1995-03-23 |
| IE892864L (en) | 1990-03-07 |
| HU895572D0 (en) | 1991-07-29 |
| HU207350B (en) | 1993-03-29 |
| ATE118249T1 (de) | 1995-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Preusting et al. | Continuous production of poly (3-hydroxyalkanoates) by Pseudomonas oleovorans in a high-cell-density, two-liquid-phase chemostat | |
| US5260202A (en) | Fermentation method | |
| EP0843004B1 (en) | Defoamer for fermentation and process for fermentative production with the use of the same | |
| Märkl et al. | Cultivation of Escherichia coli to high cell densities in a dialysis reactor | |
| Oh et al. | Lactic acid production through cell-recycle repeated-batch bioreactor | |
| FI96040C (fi) | Fermentointimenetelmä ihmisen seerumialbumiinin valmistamiseksi | |
| SE462394B (sv) | Foerfarande foer framstaellning av cellulolytiska enzym | |
| Bushell et al. | Cyclic fed‐batch culture for production of human serum albumin in Pichia pastoris | |
| Krouwel et al. | Continuous isopropanol-butanol-ethanol fermentation by immobilized Clostridium beijerinckii cells in a packed bed fermenter | |
| CN112608963A (zh) | 半连续发酵培养毕赤酵母工程菌的方法 | |
| KR860000893B1 (ko) | 단세포 단백질의 제조방법 | |
| Bayraktar et al. | Production of citric acid using immobilized conidia of Aspergillus niger | |
| CN107022591A (zh) | 一种提高胰岛素及其类似物前体表达的毕赤酵母发酵方法 | |
| Pourrat et al. | Production of tannase (tannin acyl hydrolase EC 3.1. 1.20) by a strain of Aspergillus niger | |
| Ulmer et al. | Phanerochaete chrysosporium: growth pattern and lignin degradation | |
| EP0136805A2 (en) | Industrial-scale process for the production of polyols by fermentation of sugars | |
| CN102517223A (zh) | 一种甲醇型毕赤酵母的高密度发酵工艺及设备 | |
| Larroche et al. | Optimization of the spore production of Penicillium roqueforti in solid substrate fermentation on buckwheat seeds | |
| Marzuki et al. | [52] Modification of yeast mitochondria by diet in specific mutants | |
| CN1218043C (zh) | 连续发酵生产l－谷氨酸的方法 | |
| US20060270004A1 (en) | Fermentation processes with low concentrations of carbon-and nitrogen-containing nutrients | |
| EP0323717A2 (en) | Process for the production of microbial cellulose | |
| Fukushima et al. | Efficient production of mycelium of Lentinus edodes by a continuous culture and the effect of lignin on growth | |
| KR0177321B1 (ko) | 재조합 효모로부터 인간 알파 인터페론의 대량 생산 방법 | |
| Mergler et al. | Cell density-correlated induction of pyruvate decarboxylase under aerobic conditions in the yeast Pichia stipitis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: DELTA BIOTECHNOLOGY LIMITED |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: NOVOZYMES DELTA LIMITED Free format text: NOVOZYMES DELTA LIMITED |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: NOVOZYMES BIOPHARMA UK LIMITED Free format text: NOVOZYMES BIOPHARMA UK LIMITED |
|
| MA | Patent expired |