JP2957275B2 - 血管作動性バソトシン誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規バソトシン誘導体、更に詳しくはバソト
シン（VT）構造が１、４、８及び場合により２位で修正
されていることで天然ホルモンと異なるようなバソトシ
ン誘導体に関する。

新規VT誘導体は血管作動性で、更に詳しくは血圧を特
異的に高めることによるが、一部のケースでは著しく長
い効果を有する。

背景 下垂体の後葉で産生されるペプチドホルモンバソプレ
シンは主に２つの機能、即ちそのホルモンは抗利尿効果
（尿の排出減少）及び血管壁における平滑筋の収縮効果
を双方とも有し、後者の効果は血圧増加及び出血傾向減
少を示す。このため臨床使用の場合、バソプレシンは短
期間の非特異的効果を有する。

今日、長期効果を有するバソプレシンアナログ、即
ち、Ｎ末端で３つのアミノ酸残基により伸長されたリジ
ン−バソプレシンが市販されている。このバソプレシン
アナログはいわゆるプロホルモン又はホルモノゲンとし
て作用し、即ちそれはバソプレシン効果の期間を増加さ
せる。伸長されたバソプレシンアナログは本質的に非常
に小さな薬理効果を有するが、これは余分なＮ末端アミ
ノ酸残基が酵素加水分解により開裂されて遊離リジン−
バソプレシンが形成されるまで生じない。長期効果とは
別に、このようなプロホルモンは過量のリスクが遊離さ
れたバソプレシンの血漿レベルを決定する生物の制限さ
れた酵素能力により最小化されるという点で有利であ
る。こうして、患者を害する異常な血圧増加を起こす可
能性があるバソプレシンの過度に高い血漿レベルを避け
ることができる。しかしながら、上記バソプレシンアナ
ログは低い効力を有しかつバソプレシンのように非特異
的であるため大きな欠点を伴う。

出血阻害剤として及びいわゆる起立性低血圧、即ち体
位の変化後における血圧降下状態において使用のための
血管収縮性物質に対する必要性がある。これらの物質は
血圧を特異的に増加させ、このため長期治療に付される
患者で水中毒を避ける上で低い抗利尿効果を有するべき
である。しかも、それらは長期の効果を示すならば有利
である。

最近、我々は特異的な血圧増加活性を有するバソトシ
ン誘導体に関するスウェーデン特許出願SE第8703855−
０号（PCT/SE88/00509に対応）を（1987年10月７日付
で）出願した。本発明によるバソトシン誘導体は、主に
それらがバソトシン構造の４位で更に修正を有するこ
と、即ちそれらが４位にホモグルタミン又はホモシトル
リンを有することで、上記スウェーデン特許出願による
バソトシン誘導体と構造的に異なる。

発明の説明 本発明の新規な血管作動性バソトシン誘導体は血圧を
特異的に増加させ、即ちそれらは昇圧特異性であるが、
これは高比率の血圧対抗利尿活性を意味する。特に、親
分子の抗利尿効果（尿の排出減少）が除去される。更
に、それらは一部のケースで著しい長期効果を有する。
本発明による化合物は出血阻害と体位の変化後における
血圧降下状態、いわゆる起立性低血圧において、更に一
般的血圧増加剤として医薬組成物に使用される。本発明
によるVT誘導体は下記式を有する： 上記式中 Hmp＝２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオン酸残
基 Ｚ＝フェニルアラニン（Phe）又はチロシン（Tyr） Ｙ＝ホモグルタミン（Hgn）又はホモシトルリン（Hci） Ｑ＝Ｈあるいは同一又は異なる天然又は非天然Ｌ−又は
Ｄ−アミノ酸の１〜３のアミノ酸残基、及び ｎ＝１、２又は３である。

本発明によるVT誘導体は、本発明による少なくとも１
種のVT誘導体が薬学上許容される添加剤及び／又は希釈
剤と一緒に活性成分として含有された医薬組成物の形で
提供することができる。本発明による医薬組成物は非経
口投与に適した製剤の形であることが好ましい。それら
は注射、注入又は鼻内適用で投与されることが適切であ
る。希釈剤は例えば生理塩水溶液である。

本発明による医薬組成物は、効果を持続化するように
長い持続期間を有する特異的血圧増加誘導体と組合せて
即時効果を示すように比較的短い持続期間を有する特異
的血圧増加誘導体を含有している。

本発明によるVT誘導体の製造 本発明によるVT誘導体はペプチド分野で公知の方法と
類似した方法から製造することができる。

例えば、本発明による化合物は例えばLaw,H.B. ＆ Du
Vigneaud,V.,Journal of the American Chemical Socie
ty,82（1960）,4579−4581,Zhuze,A.L.,Jost,K.,Kasaf
i′rek,E. ＆ Rudinger,J.,Collection of Czechoslova
k Chemical Communications,29（1964）,2648−2662で
開示されかつLarsson,L.−E.,5 Lindeberg,G.,Melin,P.
/Pliska,V.,Journal of Medicinal Chemistry,21（197
8）,352−356で修正されたような液相でアミノ酸を段階
的に互いにカップリングさせることにより常法で製造す
ることができる。相互のアミノ酸カップリングはいわゆ
るペプチド結合を生じるが、第一アミノ酸のＣ末端がカ
ップリングされる出発物質として固相（通常樹脂）とも
行われ、その後次のアミノ酸のＣ末端が第一アミノ酸の
Ｎ末端にカップリングされ、以下同様に行われる。最後
に、最終ペプチドが固相から遊離される。下記例におい
て、このいわゆる固相技術はMerrifield,R.B.,J.Am.Che
m.Soc.（1963）,85,2149,Merrifield,R.B.,Biochemistr
y（1964）,3,1385及びKonig,W.,Geiger,R.,Chem.Ber.
（1970）,103,788の開示に従い用いられた。

合成の一般的な説明 下記例で構造されたすべてのVT誘導体は第二カップリ
ング後に終結ステップと共に二重カップリングプログラ
ムを用いてアプライド・バイオシステムズ（Applied Bi
osystems）430Aペプチドシンセサイザーで合成した。用
いられた樹脂は理論的担持量0.65meq/gの４−メチルベ
ンズヒドリルアミンタイプ〔ペニンシュラ・ラボラトリ
ーズ社（Peninsula Laboratories Inc.）,USA〕であっ
た。合成の最終生成物は真空下で一夜乾燥させた。次い
でペプチドは除去剤としてアニソール及びエチルメチル
スルフィドの存在下液体フッ化水素（HF:アニソール:EM
S−10:05:05）との処理により樹脂から開裂させた。蒸
発によるフッ化水素の除去後、樹脂を酢酸エチル（100m
l）に懸濁し、濾過した。固体物を更に酢酸エチル（３
×100ml）によりフィルター上で洗浄し、開裂されたペ
プチドを酢酸（100ml）で抽出した。抽出物を直ちにメ
タノール中20％酢酸で1.5の容量まで希釈し、淡褐色
が残るまでメタノール中ヨウ素の0.1M溶液で処理した。
次いでアセテート形のダウエックス（Dowex）１×８イ
オン交換樹脂（15g）〔バイオ−ラッド（Bio−Rad），
リッチモンド,CA〕を加え、混合液を濾過した。濾液を
蒸発させ、残渣を水から凍結乾燥した。次いで生成物は
0.1％トリフルオロ酢酸水溶液中にアセトニトリルを含
有した適切な系でクロマシル（Kromasil ）13μ〔EKA
ノベル（EKA Nobel），サート（Surte），スウェーデ
ン〕で充填されたカラムにおいて逆相液体クロマトグラ
フィーにより精製した。カラムから集めたサンプルはバ
イダック（Vydac）５μC18カラム（バイダック社,USA）
を装備した分析高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）
〔スペクトラ・フィジクス社（Spectra Physics In
c.）,USA8800〕で分析した。純粋物質含有分画をプール
し、溶媒を蒸発させ、生成物を水から凍結乾燥した。最
終HPLC分析は準備した生成物で行い、ペプチドの構造は
アミノ酸分析及び高速原子衝突質量スペクトル測定（FA
B MS）で確認した。合成中に用いられるすべてのアミノ
酸はＬ−アミノ酸であり、それらはα−アミノ官能基に
おいてtert−ブトキシカルボニル基で保護した。側鎖は
下記のように保護した： Hmp（Mob）、Cys（Mob）、Dab（Cbz） 括弧内の略記は以下である： Cbz＝カルボベンゾキシ Mob＝４−メトキシベンジル及び Boc＝ｔ−ブトキシカルボニル アミノ酸誘導体はスイスのベーチェム社（Bachem A
G）から供給された。

更に下記略記が用いられている： Dab＝Ｌ−2,4−ジアミノ酪酸 Abu＝Ｌ−２−アミノ酪酸 Hgn＝ホモグルタミン Hci＝ホモシトルリン Hmp＝２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオン酸 OPfp＝ペンタフルオロフェニルエステル DIPEA＝ジイソプロピルエチルアミン 例１ １−Hmp−２−Phe−４−Hgn−８−Dab−VT （ｎ＝２及びＱ＝Ｈ） ペプチドは一般的な説明に従い合成した。２−ヒドロ
キシメルカプトプロピオン酸〔Ｓ−（ｐ−メトキシ）ベ
ンジル〕を１位に用いた。純度（HPLC）:99.5％（0.1％
TFA中18.4％アセトニトリル、保持時間1.5ml/minで9.13
min、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例２ １−Hmp−２−Phe−４−Hgn−８−Dab（Ala）−VT （ｎ＝２及びＱ＝Ala） 酸化及び精製されたノナペプチドHmp−Phe−Ile−Hgn
−Asn−Cys−Pro−Dab−Gly−NH₂（150mg;一般的な説明
に従い固相法で製造）をDMF（2ml）に溶解し、既に形成
されたBoc−Ala−OPfp（４当量）を加え、pHを８〜8.5
（DIPEA）に調整した。反応混合液を室温で一夜撹拌し
た。生成物を酢酸エチル沈降、濾過及び真空乾燥により
単離した。

次いで生成物をTFA/CH₂Cl₂1:1（20ml）で処理し、30
分間撹拌し、蒸発させ、しかる後ジエチルエーテル（10
0ml）で処理した。沈澱物を濾過により分離し、真空乾
燥した。

生成物は逆相液体クロマトグラフィーにより精製し
た。

純度（HPLC）:99.8％（0.1％TFA中17.6％アセトニト
リル、保持時間2ml/minで8.56min、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例３ １−Hmp−２−Phe−４−Hgn−８−Dab（Abu）−VT （ｎ＝２及びＱ＝Abu） 酸化及び精製されたノナペプチドHmp−Phe−Ile−Hgn
−Asn−Cys−Pro−Dab−Gly−NH₂（100mg;一般的な説明
に従い固相法で製造）をDMF（2ml）に溶解し、既に形成
されたBoc−Abu−OPfp（４当量）を加え、pHを８〜8.5
（DIPEA）に調整した。反応混合液を室温で一夜撹拌し
た。生成物を酢酸エチル沈降、濾過及び真空乾燥により
単離した。

次いで生成物をTFA/CH₂Cl₂1:1（20ml）で処理し、30
分間撹拌し、蒸発させ、しかる後ジエチルエーテル（10
0ml）で処理した。沈澱物を濾過により分離し、真空乾
燥した。

生成物は逆相液体クロマトグラフィーにより精製し
た。

純度（HPLC）:99.5％（0.1％TFA中17.6％アセトニト
リル、保持時間2ml/minで9.82min、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例４ １−Hmp−２−Phe−４−Hci−８−Dab−VT （ｎ＝２及びＱ＝Ｈ） ペプチドは一般的な説明に従い合成した。２−ヒドロ
キシメルカプトプロピオン酸〔２−（ｐ−メトキシ）ベ
ンジル〕を１位に用いた。純度（HPLC）:98.5％（0.1％
TFA中17.6％アセトニトリル、保持時間2ml/minで10.68m
in、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例５ １−Hmp−２−Phe−４−Hci−８−Dab（Abu）−VT （ｎ＝２及びＱ＝Abu） 酸化及び精製されたノナペプチドHmp−Phe−Ile−Hci
−Asn−Cys−Pro−Dab−Gly−NH₂（100mg;一般的な説明
に従い固相法で製造）をDMF（2ml）に溶解し、既に形成
されたBoc−Abu−OPfn（４当量）を加え、pHを８〜8.5
（DIPEA）に調整した。反応混合液を室温で一夜撹拌し
た。生成物を酢酸エチル沈降、濾過及び真空乾燥により
単離した。

次いで生成物をTFA/CH₂Cl₂1:1（20ml）で処理し、30
分間撹拌し、蒸発させ、しかる後ジエチルエーテル（10
0ml）で処理した。沈澱物を濾過により分離し、真空乾
燥した。

生成物は逆相液体クロマトグラフィーにより精製し
た。

純度（HPLC）99.5％（0.1％TFA中20.0％アセトニトリ
ル、保持時間2ml/minで5.94min、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例６ １−Hmp−４−Hgn−８−Orn−VT （ｎ＝２及びＱ＝Ｈ） ペプチドは一般的な説明に従い合成した。２−ヒドロ
キシメルカプトプロピオン酸〔Ｓ−（ｐ−メトキシ）ベ
ンジル〕を１位に用いた。純度（HPLC）:98.5％（0.1％
TFA中14.4％アセトニトリル、保持時間2ml/minで5.83mi
n、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

例７ １−Hmp−４−Hgn−８−Dab−VT （ｎ＝２及びＱ＝Ｈ） ペプチドは一般的な説明に従い合成した。２−ヒドロ
キシメルカプトプロピオン酸〔Ｓ−（ｐ−メトキシ）ベ
ンジル〕を１位に用いた。純度（HPLC）：＞99％（0.1
％TFA中16.0％アセトニトリル、保持時間2ml/minで4.98
min、223nmで検出） 構造はアミノ酸分析及びFAB MS分析で確認した。

薬理試験 本発明によるバソトシン誘導体を血圧及び抗利尿活性
双方の効力に関していわゆる４ポイント試験で試験し、
即ち試験物質の活性を標準製剤（AVP＝アルギニンバソ
プレシン）と比較し、各物質に関する２用量レベルの効
果を分析した。加えて、我々の前出願SE第8703855−０
号による３種の昇圧特異性VT誘導体、即ち１−Hmp−２
−Phe−８−Orn−VT（表１の化合物２）、１−Hmp−２
−Phe−８−Dab−VT（表１の化合物３）及び１−Hmp−
２−Phe−８−Dab（Ala）−VT（表１の化合物５）を比
較のため試験した。

血圧試験はジベナミンで予め処置された麻酔スプラグ
・ドーリー（Sprague Dawley）ラット（約250g）で実施
した（Dekanski.J.,1952,Br.J.Pharmacol.,7,567）。ペ
プチドの静注液における最大血圧増加を効果の尺度とし
て用い、強度として表示した。

効果強度に基づく効力測定に加えて、その効果の長さ
の尺度が述べられている〔持続性のインデックス（I.
P.）,Pliska,V.,1966,Arzheim.Forsch.,16,886〕。この
無次元のファクターは標準AVPと比較した各アナログの
効果期間の尺度である。

抗利尿効力は麻酔された水注入スプラグ・ドーリーラ
ット（200g）を用いて測定した。

（Larsson,L.E.,Lindeberg,G.,Mekin,P.及びPliska,V.,
1978,J.Med.Chem.,21,353）。静注後の尿コンダクティ
ビティ（conductivity）の最大増加を効果パラメーター
として用いた。

これらの２つの試験において、比較は各誘導体の効果
と標準製剤AVPの効果とで行い、効力は４ポイント試験
を用いて測定し、国際単位／マイクロモル（IU/μ mo
l）で示されている（Sturmer.E.,Handbook of Experime
ntal Pharmacology,1966,Vol.23,pp130−189）。

血圧に関する特異性は血圧効力／抗利尿効力の比（BP
/AD）で示されている。

薬理結果は表１で示されている。

表１から、本発明による化合物は血圧増加及び効果期
間に関して非常に高い効力を有することがわかる。

４位におけるホモグルタミン又はホモシトルリンの導
入により、抗利尿活性は実際上除かれた。このため、本
発明は昇圧特異性（血圧対抗利尿活性の比）が我々のSE
第8703855−０号の従前の昇圧特異性誘導体（親分子の
１、２及び８位における修正；表１参照）と比較して約
２〜10倍増加したという点で独特である。

この修正と１、２及び８位で既に行われた置換との組
合せから高い効力、長い作用期間及び極端な昇圧特異性
のあるアナログを得た。このため、示された動物実験に
基づき、新規置換体は治療上においていかなる水蓄積効
果（抗利尿）も完全に欠き、ひいては患者の水中毒のリ
スクも総合的に回避できると期待される。

医薬組成物の製造例 VT誘導体をマンニトールと一緒に蒸留水に溶解する。
その溶液をアンプルに注ぎ、凍結乾燥して、シールす
る。次いでアンプルの内容物は所望時に投与に適した濃
度まで等張塩水溶液で希釈することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 トロイナル，イエルジー スエーデン国ビントリエ、ステナーレガ タン、36 (56)参考文献 国際公開89／3393（ＷＯ，Ａ１) Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．, Ｖｏｌ．148，Ｎｏ．１（1988）ｐ．93 −99 Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖ ｏｌ．67，Ｎｏ．４（1979）ｐ．575− 585 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07K 7/16 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (10)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式のバソトシン誘導体 〔上記式中 Hmp＝２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオン酸残
   基 Ｚ＝フェニルアラニン（Phe）又はチロシン（Tyr） Ｙ＝ホモグルタミン（Hgn）又はホモシトルリン（Hci） Ｑ＝Ｈ、アラニル（Ala）又はＬ−２−アミノブチリル
   （Abu）、及びｎ＝１、２又は３である〕。
2. 【請求項２】Ｚ＝Phe、 Ｙ＝Hgn、 ｎは２である、及び ＱはＨである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
3. 【請求項３】Ｚ＝Phe、 Ｙ＝Hgn、 ｎは２である、及び Ｑはアラニルである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
4. 【請求項４】Ｚ＝Phe、 Ｙ＝Hgn、 ｎは２である、及び ＱはＬ−２−アミノブチリルである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
5. 【請求項５】Ｚ＝Phe、 Ｙ＝Hci、 ｎ＝２、及び Ｑ＝Ｈである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
6. 【請求項６】Ｚ＝Tyr、 Ｙ＝Hgn、 ｎ＝３、及び Ｑ＝Ｈである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
7. 【請求項７】Ｚ＝Tyr、 Ｙ＝Hgn、 ｎ＝２、及び Ｑ＝Ｈである、 請求項１に記載のバソトシン誘導体。
8. 【請求項８】薬学上許容される添加剤及び／又は希釈剤
   と一緒に活性成分として請求項１に記載された少なくと
   も１種のバソトシン誘導体を含む血管収縮剤。
9. 【請求項９】非経口投与に適した製剤の形である、請求
   項８に記載の血管収縮剤。
10. 【請求項１０】鼻内投与に適した溶液の形である、請求
    項９に記載の血管収縮剤。