FI109703B - Menetelmä vasoaktiivisten vasotosiinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

109703

Menetelmä vasoaktiivisten vasotosiinijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av vasoaktiva vasotocinderivat 5 Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien vasotosiini-johdannaisten valmistamiseksi, erityisesti sellaisten vasotosiinijohdannaisten, jotka poikkeavat natiivista hormonista siten, että vasotosiinin (VT) rakennetta on muutettu asemissa 1, 4 ja 8 ja mahdollisesti asemassa 2.

10

Uudet VT-johdannaiset ovat vasoaktiivisia, erityisesti siten, että ne kohottavat spesifisesti verenpainetta, ja joissain tapauksissa niillä on huomattavasti pidentynyt vaikutus.

15

Vasopressiinillä, peptidihormonilla, jota syntyy aivolisäkkeen takalohkossa, on pääasiassa kaksi funktiota, so. hormonilla on sekä antidiureettinen vaikutus (virtsan vähentynyt eritys) että verisuonten seinämien sileitä 20 lihaksia supistava vaikutus, jolloin jälkimmäinen vaikutus saa aikaan verenpaineen kohoamisen ja alentuneen verenvuototaipumuksen. Kliinisessä käytössä vasopressiinillä on siis ei-spesifinen, lyhytaikainen vaikutus. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Tänä päivänä markkinoilla on vasopressiinianalogi, jolla ···* on pidentynyt vaikutus, nimittäin lysiini-vasopressiini, 2 jota on pidennetty N-päästä kolmella aminohappotähteellä.

3 • v Tämä vasopressiinianalogi toimii kuten nk. prohormoni tai 4 • t < 5 : hormonogeeni, so. se pidentää vasopressiinivaikutuksen 6 kestoa. Pidennetyllä vasopressiinianalogilla on itsessään 7 hyvin pieni farmakologinen vaikutus, joka tulee esiin 8 vasta kun ylimääräiset N-terminaaliset aminohappotähteet 9 : lohkeavat entsymaattisen hydrolyysin vaikutuksesta ja 10 vapaa lysiini-vasopressiini muodostuu. Pidentyneen vaiku- 11 tuksen lisäksi tällainen prohormoni on edullinen siinä suhteessa, että yliannostuksen vaara minimoituu vapautu-neen vasopressiinin pitoisuuden plasmassa määräävän organismin entsyymikapasiteetin rajallisuuden vuoksi.

2 109703 Tällä tavalla on mahdollista välttää vasopressiinin ylisuuret pitoisuudet plasmassa, jotka mahdollisesti johtavat epänormaalisti kohonneeseen verenpaineeseen, joka voi vahingoittaa potilasta. Yllä mainitun vasopres-5 siinianalogin pääasiallinen haittapuoli on kuitenkin sen alhainen teho ja, samoin kuin vasopressiinillä, sen epä-spesifisyys.

On olemassa tarve verisuonia supistavista aineista, joita 10 voidaan käyttää verenvuodon estämisessä ja ns. ortostaat-tisessa hypotensiossa, so. tiloissa, joissa verenpaine äkillisesti laskee johtuen muutoksista kehon asennossa. Näiden aineiden pitäisi spesifisesti kohottaa verenpainetta, jolloin niillä on vähäinen antidiureettinen 15 vaikutus, jotta vältettäisiin vesimyrkytystila (water intoxication) pitkäkestoista hoitoa saavilla potilailla. On myös edullista, jos niiden vaikutus on pitkäaikainen.

Jokin aika sitten olemme jättäneet suomalaisen patentti- 20 hakemuksen FI 901773 (vastaa hakemusta WO 89/03393), joka koskee vasotosiinijohdannaisia, joilla on spesifinen verenpainetta kohottava aktiivisuus. Tämän keksinnön mukaiset vasotosiinijohdannaiset eroavat rakenteeltaan ·*. mainitun aikaisemman FI-patenttihakemuksen mukaisista t· ; 25 vasotosiinijohdannaisista pääasiassa siinä suhteessa, ! , että niissä on lisämodifikaatio vasotosiinirakenteen ,, ; asemassa 4, so. niillä on homoglutamiini tai homositrul- 1 ·' liini asemassa 4.

• * · i ? » ‘ 3 0 Keksinnön kuvaus i Tämän keksinnön mukaiset vasoaktiiviset vasotosiinijoh- dannaiset kohottavat spesifisesti verenpainetta, so. ne . ovat pressorispesifisiä, mikä tarkoittaa sitä, että ‘ ; 35 niillä verenpaineaktiivisuuden suhde antidiureettiseen aktiivisuuteen on suuri. Erityisesti kantamolekyylin *: · : antidiureettinen vaikutus (virtsan vähentynyt eritys) on 3 109703 eliminoitu. Edelleen niillä on huomattavasti pidentynyt vaikutus joissakin tapauksissa. Keksinnön mukaiset yhdisteet on tarkoitettu käytettäviksi farmaseuttisessa koostumuksessa verenvuodon estämiseksi ja tiloissa, joissa 5 verenpaine äkillisesti laskee johtuen muutoksista kehon asennossa, eli ns. ortostaattisessa hypotensiossa, sekä myös yleisinä verenpainetta kohottavina aineina. Keksinnön mukaisilla VT-johdannaisilla on kaava 10 12345 6 789

Hmp-Z-Ile-Y-Asn-Cys-Pro-X-Gly-NH2 jossa kaavassa Hmp = 2-hydroksi-3-merkaptopropionihappo-15 tähde (-0-CH-C0-) ch2 s- 20 Z = fenyylialaniini (Phe) tai tyrosiini (Tyr) Y = homoglutamiini (Hgn) tai homositrulliini (Hei) X = -HN-CH-CO- (CH2)n

NH

: 25 Q

! Q tarkoittaa vetyä tai yhtä luonnollisen tai ei-luonnol- \ *. lisen L- tai D-aminohapon tähdettä, ja n on 1, 2 tai 3.

* * · I · ' 3 0 Tämän keksinnön mukaiset VT-johdannaiset voivat esiintyä farmaseuttisten koostumusten muodossa, joihin vähintään ·/; yksi keksinnön mukainen VT-johdannainen sisältyy aktii- visena aineosana yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävien ,·* ; lisäaineiden ja/tai laimennusaineiden kanssa. Keksinnön 35 mukaiset farmaseuttiset koostumukset ovat edullisesti t · parenteraaliseen antoon soveltuvien valmisteiden muodos-sa. Ne annetaan sopivasti injektoimalla, infuusiolla tai • · 4 109703 intranasaalisesti. Laimennusaine voi olla esimerkiksi fysiologinen suolaliuos.

Keksinnön mukainen farmaseuttinen koostumus voi sisältää 5 spesifisesti verenpainetta kohottavaa johdannaista, jolla on suhteellisen lyhyt vaikutusaika, jotta saadaan välitön vaikutus, yhdistettynä spesifisesti verenpainetta kohottavaan johdannaiseen, jolla on pitkä vaikutusaika, jotta saadaan pidentynyt vaikutus.

10

Keksinnön mukaisten VT-johdannaisten valmistaminen

Keksinnön mukaiset VT-johdannaiset voidaan valmistaa peptidikemiassa tunnettuja menetelmiä vastaavilla mene-15 telmillä.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan esimerkiksi valmistaa tavanomaisella tavalla kytkemällä aminohapot vaiheittain toisiinsa nestefaasissa, esimerkiksi siten kuin on 20 esitetty seuraavissa julkaisuissa: Law, H. B. & Du Vigne-aud, V., Journal of the American Chemical Society 82. (1960), 4579-4581; Zhuze, A. L., Jost, K., Kasafi'rek, E. & Rudinger, J., Collection of Czechoslovak Chemical Communications 29 (1964), 2648-2662; ja edellisen muun-25 nos, Larsson, L.-E., Lindeberg, G., Melin, P. & Pliäka, V., Journal of Medicinal Chemistry 21, (1978), 352-356.

/, : Aminohappojen kytkeminen toisiinsa, jolloin saadaan ns.

peptidisidoksia, voidaan myös suorittaa käyttäen kiinteää t i · ,!! faasia (yleensä hartsia) lähtöaineena, johon ensimmäisen t · » f 1 30 aminohapon C-pää kytketään, minkä jälkeen seuraavan «li ” aminohapon C-pää kytketään ensimmäisen aminohapon N- • 1 « V 1 päähän ja niin edelleen. Lopuksi valmis peptidi vapaute taan kiinteästä faasista. Jäljempänä esitetyissä esimer- » · '/·· keissä on käytetty nk. kiinteän faasin tekniikkaa sen : 35 mukaisesti kuin on esitetty julkaisuissa Merrifield, R.

B., J. Am. Chem. Soc. (1963) 85, 2149; Merrifield, R. B., * 1 i » #« . t < k I t

• I I

« 4 5 109703

Biochemistry (1964), 3, 1385 ja König, W. & Geiger, R., Chem. Ber. (1970), 103. 788.

Synteesin yleinen kuvaus 5

Kaikki esimerkeissä valmistetut VT-johdannaiset syntetisoitiin Applied Biosystemsin 430A-peptidisyntetisaatto-rilla käyttäen kaksoiskytkentäohjelmaa, jossa oli lo-petusvaihe toisen kytkennän jälkeen. Käytetty hartsi oli 10 4-metyylibentshydryyliamiinityyppinen, ja sen teoreet tinen sitomiskapasiteetti oli 0,65 meq/g (Peninsula Laboratories Inc. USA). Synteesin lopullinen tuote kuivattiin tyhjössä yli yön. Peptidi lohkaistiin sitten hartsista käsittelemällä nestemäisellä fluorivedyllä 15 anisolin ja etyylimetyylisulfidin läsnäollessa, joita käytettiin sammuttajina (HF:anisoli:EMS - 10:05:05). Kun fluorivety oli poistettu haihduttamalla, jäännös suspen-doitiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja suodatettiin.

Kiinteä aine pestiin suodattimena vielä etyyliasetaatil-20 la (3 x 100 ml), ja lohkaistu peptidi uutettiin etikkaha-polla (100 ml). Uute laimennettiin heti tilavuuteen 1,5 1 20%:isella etikkahapolla metanolissa ja käsiteltiin jodin 0,1M metanoliliuoksella, kunnes heikko ruskea väri pysyi. Sitten lisättiin asetaattimuodossa olevaa Dowex 1x8 25 ioninvaihtajaa (15 g) (Bio-Rad, Richmond, CA) ja seos • · · ·...· suodatettiin. Suodos haihdutettiin ja jäännös kylmäkui- vattiin vedestä. Tuote puhdistettiin sitten käänteisfaa-:Y: si-nestekromatografiällä pylväässä, joka oli täytetty

Kromasililla® (13 μ) (EKA Nobel, Surte, Ruotsi) sopivassa 30 järjestelmässä, joka sisälsi asetonitriiliä 0,l%:isessa trifluorietikkahappo-vesi-liuoksessa. Pylväästä kerätyt • · ·

erät analysoitiin analyyttisellä korkean erotuskyvyn . . nestekromatografiällä (HPLC) (Spectra Physics Inc. USA

8800), joka oli varustettu Vydac 5 μ C18 -kolonnilla • · · '·' ’ 35 (Vydac Inc., USA). Puhdasta ainetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, liuotin haihdutettiin ja tuote kylmäkuivat- • · tiin vedestä. Lopullinen HPLC-analyysi suoritettiin 1 • · » · 6 109703 valmiille tuotteelle ja peptidin rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja "fast atom bombardment" -massaspektrometrialla (FAB MS).

5 Kaikki synteesin kuluessa käytetyt aminohapot olivat L- aminohappoja, ja ne oli α-aminofunktiossa suojattu tert.-butoksikarbonyyliryhmällä. Sivuketjut oli suojattu seuraavasti : 10 Hmp(Mob), Cys(Mob), Dab(Cbz).

Lyhenteet suluissa ovat:

Cbz = karbobentsoksi, 15 Mob = 4-metoksibentsyyli ja

Boc = t-butyylioksikarbonyyli.

Aminohappojohdannaiset hankittiin Bachem AG:Itä Sveitsistä.

20

Muut käytetyt lyhenteet ovat:

Dab = L-2,4-diaminovoihappo

Abu = L-2-aminovoihappo 25 Hgn = homoglutamiini ·...· Hei = homositrulliini :/·· Hmp = 2-hydroksi-3-merkaptopropionihappo : Opfp = pentafluorifenyyliesteri ·'·*: DIPEA = di-isopropyylietyyliamiini 30

Esimerkki 1

Iti

. . l-Hmp-2-Phe-4-Hgn-8-Dab-VT

[n = 2 ja Q = H] :·; : 35

Peptidi syntetisoitiin yleisen kuvauksen mukaisesti. Asemassa 1 käytettiin 2-hydroksi-merkaptopropionihappo[S-

I I I

• » I

• t 109703 7 (p-metoksi)bentsyyliä]. Puhtaus (HPLC): 99,5 % (18,4%linen asetonitriili 0,l%:isessa TFArssa, retentioaika 9,13 min virtausnopeudella 1,5 ml/min, detektio 223 nm:ssä).

5 Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS -analyysillä.

Esimerkki 2

10 l-Hmp-2-Phe-4-Hgn-8-Dab(Ala)-VT

[n = 2 ja Q = Ala]

Hapetettu ja puhdistettu nonapeptidi Hmp-Phe-Ile-Hgn-Asn-Cys-Pro-Dab-Gly-NH2 (150 mg; valmistettu kiinteäfaasi-15 menetelmällä yleisen kuvauksen mukaisesti) liuotettiin DMFtään (2 ml) ja aikaisemmin valmistettu Boc-Ala-Opfp (4 ekvivalenttia) lisättiin ja pH säädettiin 8 - 8,5:een (DIPEA). Reaktioseosta sekoitettiin yli yön huoneenlämmössä. Tuote eristettiin seostamalla etyyliasetaatilla, 20 suodattamalla ja kuivaamalla tyhjössä.

Tuote käsiteltiin sitten TFA/CH2C12:11a 1:1 (20 ml), sekoitettiin 30 minuuttia, haihdutettiin ja käsiteltiin dietyylieetterillä (100 ml). Sakka erotettiin suodatta-25 maila ja kuivattiin tyhjössä.

• · · • · · ·,'·· Tuote puhdistettiin käänteisfaasi-nestekromatografialla.

Puhtaus (HPLC): 99,8 % (17,6%:inen asetoni triili 0,l%:i-: 30 sessa TFA:ssa, retentioaika 8,56 min virtausnopeudella 2 ml/min, detektio 223 nm:ssä).

t I |

. . Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS

• · » -analyysillä.

‘ 35 8 109703

Esimerkki 3 l-Hmp-2-Phe-4-Hgn-8-Dab(Abu)-VT [n = 2 ja Q = Abu] 5

Hapetettu ja puhdistettu nonapeptidi Hmp-Phe-Ile-Hgn-Asn-Cys-Pro-Dab-Gly-NH2 (100 mg; valmistettu kiinteäfaasi-menetelmällä yleisen kuvauksen mukaisesti) liuotettiin DMFrään (2 ml) ja aikaisemmin valmistettu Boc-Abu-Opfp (4 10 ekvivalenttia) lisättiin ja pH säädettiin 8 - 8,5reen (DIPEA). Reaktioseosta sekoitettiin yli yön huoneenlämmössä. Tuote eristettiin seostamalla etyyliasetaatilla, suodattamalla ja kuivaamalla tyhjössä.

15 Tuote käsiteltiin sitten TFA/CH2C12:11a 1:1 (20 ml), sekoitettiin 30 minuuttia, haihdutettiin ja käsiteltiin dietyylieetterillä (100 ml). Sakka erotettiin suodattamalla ja kuivattiin tyhjössä.

20 Tuote puhdistettiin käänteisfaasi-nestekromatografiällä.

Puhtaus (HPLC): 99,5 % (17,6%:inen asetonitriili 0,l%:i-sessa TFArssa, retentioaika 9,82 min virtausnopeudella 2 ml/min, detektio 223 nmrssä).

25

*...· Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS

:/·· -analyysillä.

• · · •'·’; Esimerkki 4 30

l-Hmp-2-Phe-4-Hci-8-Dab-VT

I · · [n = 2 ja Q = H]

Peptidi syntetisoitiin yleisen kuvauksen mukaisesti.

’·* 35 Asemassa 1 käytettiin 2-hydroksi-merkaptopropionihappo[S- (p-metoksi)bentsyyliä]. Puhtaus (HPLC): 98,5 % (17,6%:i- 9 109703 nen asetonitriili 0,l%:isessa TFA:ssa, retentioaika 10,68 min virtausnopeudella 2 ml/min, detektio 223 nmrssä).

Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS 5 -analyysillä.

Esimerkki 5 l-Hmp-2-Phe-4-Hci-8-Dab(Abu)-VT 10 [n = 2 ja Q = Abu]

Hapetettu ja puhdistettu nonapeptidi Hmp-Phe-Ile-Hci-Asn-Cys-Pro-Dab-Gly-NH2 (100 mg; valmistettu kiinteäfaasi-menetelmällä yleisen kuvauksen mukaisesti) liuotettiin 15 DMFrään (2 ml) ja aikaisemmin valmistettu Boc-Abu-Opfp (4 ekvivalenttia) lisättiin ja pH säädettiin 8 - 8,5reen (DIPEA). Reaktioseosta sekoitettiin yli yön huoneenlämmössä. Tuote eristettiin seostamalla etyyliasetaatilla, suodattamalla ja kuivaamalla tyhjössä.

20

Tuote käsiteltiin sitten TFA/CH2Cl2:lla 1:1 (20 ml), sekoitettiin 30 minuuttia, haihdutettiin ja käsiteltiin dietyylieetterillä (100 ml). Sakka erotettiin suodattamalla ja kuivattiin tyhjössä.

25

Tuote puhdistettiin käänteisfaasi-nestekromatografiällä.

• ♦ ·

Puhtaus (HPLC): 99,5 % (20,0%:inen asetonitriili 0,l%:i-sessa TFArssa, retentioaika 5,94 min virtausnopeudella 2 ;\j 30 ml/min, detektio 223 nmrssä).

Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS . , -analyysillä.

»Il * · f t · · • » I · • · · • ·

» I * t I I

10 109703

Esimerkki 6 l-Hmp-4-Hgn-8-Orn-VT [n = 2 ja Q = H] 5

Peptidi syntetisoitiin yleisen kuvauksen mukaisesti. Asemassa 1 käytettiin 2-hydroksi-merkaptopropionihappo[S-(p-metoksi)bentsyyliä]. Puhtaus (HPLC): 98,5 % (14,4%:i-nen asetonitriili 0,l%:isessa TFArssa, retentioaika 5,83 10 min virtausnopeudella 2 ml/min, detektio 223 nm:ssä).

Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS -analyysillä.

15 Esimerkki 7 l-Hmp-4-Hgn-8-Dab-VT [n = 2 ja Q = H] 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Peptidi syntetisoitiin yleisen kuvauksen mukaisesti.

2

Asemassa 1 käytettiin 2-hydroksi-merkaptopropionihappo[S- 3 (p-metoksi)bentsyyliä]. Puhtaus (HPLC): >99 % (16,0%:inen 4 asetonitriili 0,l%:isessa TFA:ssa, retentioaika 4,98 min 5 virtausnopeudella 2 ml/min, detektio 223 nm:ssä).

6 7

·...· Rakenne varmistettiin aminohappoanalyysillä ja FAB MS

8 ·/·· -analyysillä.

9 • I · 10

Farmakologiset kokeet 11

Keksinnön mukaisia vasotosiinijohdannaisia on testattu sekä niiden verenpaineaktiivisuuden että antidiureettisen . . aktiivisuuden suhteen nk. 4-pistetestillä, so. koeyhdis- teiden aktiivisuutta on verrattu standardipreparaatin '·' 35 (AVP = arginiini-vasopressiini) aktiivisuuteen, ja kahden annostason vaikutus kummallakin aineella on analysoitu. Lisäksi vertailun vuoksi on testattu kolme pressorispe- I · · • » ft 1X 109703 sifistä VT-johdannaista, jotka on kuvattu aikaisemmassa patenttihakemuksessamme FI 901773, nimittäin l-Hmp-2-Phe-8-Orn-VT (yhdiste 2 taulukossa l), l-Hmp-2-Phe-8-Dab-VT (yhdiste 3 taulukossa 1) ja l-Hmp-2-Phe-8-Dab(Ala)-VT 5 (yhdiste 5 taulukossa 1).

Verenoainekokeet suoritettiin nukutetuilla Sprague Dawley -rotilla (noin 250 g), jotka oli etukäteen käsitelty dibenamiinilla (Dekanski, J., 1952, Br. J. Pharmacol. 7, 10 567). Peptidin intravenoosien injektioiden jälkeistä maksimaalista verenpaineen kohoamista käytettiin vaikutuksen mittana, joka esitettiin intensiteettinä.

Vaikutuksen intensiteettiin perustuvan voimakkuuden 15 määrityksen lisäksi on esitetty vaikutuksen pituuden mitta [pysyvyysindeksi (index of persistence, I.P.), Piiska, V., 1966, Arzneim. Forsch. 16, 886]. Tämä dimen-sioton tekijä mittaa kunkin analogin vaikutuksen kestoa verrattuna standardi-AVP:n vaikutuksen kestoon.

20

Antidiureettinen vaikutus määritettiin nukutettujen, vain vettä saaneiden Sprague Dawley -rottien (200 g) avulla (Larsson, L. E., Lindeberg, G., Melin, P. ja Piiska, V., • ·. 1978, J. Med. Chem. 21, 353). Vaikutuksen parametrinä 25 käytettiin maksimaalista kasvua virtsan johtokyvyssä.

• > * Näissä kahdessa testissä verrattiin kulloisenkin johdan-·' ·’ naisen ja standardivalmisteen, AVP, vaikutusta, ja voi- \ ! makkuus määritettiin 4-pistetestin avulla ja esitetään : 30 kansainvälisinä yksiköinä/mikromooli (Ιϋ/μιηοοίΐ) (Stiir- mer, E., Handbook of Experimental Pharmacology, 1966, : Voi. 23, s. 130-189) .

I t I

,* . Spesifisyys verenpaineen suhteen on esitetty suhteena ’· ’· 35 verenpainevaikutus/antidiureesivaikutus (VP/AD) .

·:··· Farmakologiset tulokset on esitetty taulukossa 1.

12 109703

Taulukosta 1 käy ilmi, että keksinnön mukaisilla yhdisteillä on hyvin voimakas verenpainetta kohottava vaikutus ja vaikutuksen kesto.

5 Liittämällä homoglutamiini tai homositrulliini asemaan 4 antidiureettinen aktiivisuus on käytännöllisesti katsoen eliminoitu. Siten tämä keksintö on ainutlaatuinen sikäli että pressorispesifisyys (verenpaineaktiivisuuden suhde antidiureettiseen aktiivisuuteen) on lisääntynyt noin 2-10 10 kertaseksi verrattuna jo pressorispesifisiin johdan naisiin, jotka on esitetty FI-hakemuksessamme 901773 (modifikaatiot kantamolekyylin asemissa 1, 2 ja 8, ks. taulukko l).

15 Tämän modifikaation yhdistelmä aikaisemmin tehtyihin substituutioihin asemissa 1, 2 ja 8 on johtanut analogei-hin, joilla on voimakas vaikutus, pitkäkestoinen vaikutus ja äärimmäinen pressorispesifisyys. Siten, perustuen esitettyihin eläinkokeisiin, on odotettavissa, että 20 uusilta aineilta voi terapiassa puuttua täysin kyky akkumuloida vettä (antidiureettinen vaikutus), mikä täysin poistaa riskin vesimyrkytystilan esiintymisestä potilailla.

25 Esimerkki farmaseuttisen koostumuksen valmistamisesta ’*’ VT-johdannainen liuotetaan tislattuun veteen yhdessä ·* ·’ mannitolin kanssa. Liuos kaadetaan ampulliin, kylmäkuiva- taan, ja ampulli suljetaan. Ampullin sisältö voidaan » « » ’ 30 sitten haluttaessa laimentaa isotonisella suolaliuoksella annettavaksi sopivaan konsentraatioon.

» · • t · » » » 1 3 __ 109703

0 0)(0 O

rfl -H -P · m P h in oo xf in oo coin coin Λ-γΗ-η ^ ro h co co in moo t>- oo > co g i> m oo in oo χφ h a) a c co a) H (N3 (N rH LD ^ cn-H HHoroo o oo cs in fr] ··«·· « ·· · · ω o x# H os o o o o oo oo a o in οαε h < a +i +i +i +i +i +i +i +! +i +i +i Q \ ho s< oo oo cs cs oo cs οσ> hH ········· Z ο σ> co o χί O O OO h cs

<C CS H

ID

I in p οοΌΐηιηο oo o i> co oo I «···· » * * ♦ ♦ •h d e hoohh cs oo h o co a) « > co c +i +i +i +i +i +i +i +i +i +i

W ^ Q

^ . D p OHC^OOC^lO VO C^VD 0000 ryi Hi P C/) ...... · ·· ·· S . d CD (0 H CO N O) CO co 00 H00 00

H HAIÄP

<--

1-1 Z

_ fi -Η ιηποΜΟΗΐο in coin Nn O S rH CS xjl 00 00 HH voin X ä q ^ £5 O +i +i +i +i +i +i +i +i +i +i +i D ·> g p 3. χ* cs t>. ^ o i> oo c·* >· oo vo

0 \ HHinHVDHVDinvOC^OO

< o VOxivOCSOOHHH x* in

E" H

s H x^* . .

ε ε rl Ε-ι E-ι Ή f , . CO > > CO > '-''-x a) I I 0) I VO !> ,, —' ; (Odd·· ' · Eh H X! Eh jQ g g

’ * > Eh < < > < -Η -H

..: I > — —« I —- co co ; * a I Λ Λ Λ Λ Q> <1) ; cd —' (d (0 (0 (0 •w-w

: Q (0 Q Q Q Q

,, H Ex Ex I H I I I I E-1 E-4 « O > > 00 < 00 00 COCO >>

. o I I I w I i I I I I

... p d£!d^dd-H-HdjQ

; ; ; < u<oa>(00)0>uou<a

• S ODXQffi K 5C EC OP

tC -— I I I I I I II II

d oo co x)1 oo χί χ* χ* xi< oooo

H I I I I I I II II

-HCDCDCDCDCDCDCDcDGd • · · <o.g.£.g.g.c.c.c.gö)0) ,,, ΡίιΜΙ,Ριβι^Ρι^β,ρ,^χχ

... i-ll I I I iCMIOOl ILOI I

. (DCSCSCSCSCSCSCSCSxfxi

• >11111 «I «II · I I

v, w ο. a a a a ε a ε a a ε a a . . . ε ε ε ε ε -h g -n g g -h g g

· cuKKKÄKcofficoffifficoxK

'". >ιιιιια)ΐ(1)ιια)ΐι

', rij H H H H H ‘—' rH —'.—I H .—^ H H

M.’ h cs oo χί in vo [> oo σ> Oh ,·. : 1-11-1 I I I ^^ t > ' .................... ' ——

Claims (7)

14 109703

1. Menetelmä kaavan I 5 12345 6 789 Hmp-Z-Ile-Y-Asn-Cys-Pro-X-Gly-NH2 mukaisen vasotosiinijohdannaisen valmistamiseksi, jossa kaavassa Hmp = 2-hydroksi-3-merkaptopropionihappotähde 10 (-0-CH-C0-) CH, s- Z = fenyylialaniini (Phe) tai tyrosiini (Tyr)

15 Y = homoglutamiini (Hgn) tai homositrulliini (Hei) X = -HN-CH-CO- (CH2)n NH Q 20 Q tarkoittaa vetyä tai yhtä luonnollisen tai ei-luonnol-lisen L- tai D-aminohapon tähdettä, ja n on l, 2 tai 3, tunnettu siitä, että mainittu vasotosiinijohdan-···. nainen valmistetaan tavanomaisella tavalla kytkemällä ! 25 aminohapot vaiheittain toisiinsa, jolloin syntyy nk. ; . peptidisidoksia, minkä jälkeen hapetetaan disulfidisidok- i( ; sen muodostamiseksi. • · ·: 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n - • · · : 30 n e t t u siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa Z on Phe, Y on : Hgn, n on 2 ja Q on H. I I I . 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n - • * 35 n e t t u siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa Z on Phe, Y on ·;··: Hgn, n on 2 ja Q on alanyyli. 15 109703

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa z on Phe, Y on Hgn, n on 2 ja Q on L-2-aminobutyryyli. 5

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa Z on Phe, Y on Hei, n on 2 ja Q on H. 10

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa Z on Tyr, Y on Hgn, n on 3 ja Q on H. 15

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen vasotosiinijohdannainen, jossa kaavassa Z on Tyr, Y on Hgn, n on 2 ja Q on H. 20 t · > »· » · * · t # · i i : » · * * 1 » » » * » * · • · • » > 16 109703