JP2935965B2 - 凝集検査方法 - Google Patents
凝集検査方法Info
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Description
【０００１】本発明は、抗原抗体反応のような特異結合
反応による反応結果に基づいて、生物試料中の被検物質
を測定するための凝集検査方法に関する。
反応による反応結果に基づいて、生物試料中の被検物質
を測定するための凝集検査方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫学的検査法としては従来ヘテロジニ
アスＥＩＡ法が広く使われている。その中でもサンドイ
ッチ法が最も検査適用範囲が広くまた感度の高い方法で
ある。図４にその一例として従来技術１を示す。図示す
る方法ではまずステップ１において、抗体２を内壁面に
固相化した反応容器１内に試料を分注する。次にステッ
プ２において第１反応が行われ、試料中に目的の抗原が
存在する場合には、抗原抗体反応により抗体２と抗原３
とが結合する。次にステップ３において抗体２と結合し
た抗原と結合しなかった抗原を洗浄操作により分離する
Ｂ／Ｆ分離が行われ、反応容器１の内部には抗体２と結
合した抗原だけが残る。次にステップ４で酵素標識抗体
４を分注する。ステップ５で第２反応が行われ抗体２と
結合した抗原３と上記酵素標識抗体４とが抗原・抗体反
応により結合し、抗原３をはさんで抗体２と酵素標識抗
体４とがサンドイッチ状の結合物を形成し、抗原３に結
合した酵素標識抗体４は反応容器１の内壁に固定され
る。
アスＥＩＡ法が広く使われている。その中でもサンドイ
ッチ法が最も検査適用範囲が広くまた感度の高い方法で
ある。図４にその一例として従来技術１を示す。図示す
る方法ではまずステップ１において、抗体２を内壁面に
固相化した反応容器１内に試料を分注する。次にステッ
プ２において第１反応が行われ、試料中に目的の抗原が
存在する場合には、抗原抗体反応により抗体２と抗原３
とが結合する。次にステップ３において抗体２と結合し
た抗原と結合しなかった抗原を洗浄操作により分離する
Ｂ／Ｆ分離が行われ、反応容器１の内部には抗体２と結
合した抗原だけが残る。次にステップ４で酵素標識抗体
４を分注する。ステップ５で第２反応が行われ抗体２と
結合した抗原３と上記酵素標識抗体４とが抗原・抗体反
応により結合し、抗原３をはさんで抗体２と酵素標識抗
体４とがサンドイッチ状の結合物を形成し、抗原３に結
合した酵素標識抗体４は反応容器１の内壁に固定され
る。
【０００３】ここで試料中に抗原３が無い場合には、抗
体２と酵素標識抗体４とを連結することができないので
酵素標識抗体４は反応管内壁に固定されることはない。
次にステップ６において結合した酵素標識抗体と結合し
なかった酵素標識抗体とを洗浄によって分離する。Ｂ／
Ｆ分離が行われ、上記抗原３に結合し、反応容器１の内
壁に固定された標識抗体だけが反応容器１内に残る。
体２と酵素標識抗体４とを連結することができないので
酵素標識抗体４は反応管内壁に固定されることはない。
次にステップ６において結合した酵素標識抗体と結合し
なかった酵素標識抗体とを洗浄によって分離する。Ｂ／
Ｆ分離が行われ、上記抗原３に結合し、反応容器１の内
壁に固定された標識抗体だけが反応容器１内に残る。
【０００４】次にステップ７において、上記酵素標識抗
体４に結合している酵素５と反応して発色する発色基質
を分注し、ステップ８において発色反応を行わせた後、
ステップ９において、その発色の度合いを比色法にて測
定する。試料中に抗原３が無い場合には、上記酵素標識
抗体は、ステップ６のＢ／Ｆ分離操作により洗い流され
て、反応容器内に残っていないから、上記発色反応は起
こらない。上記発色反応の発色の度合いは、結合した酵
素の量に応じて異なる。また試料中の抗原の量に応じて
上記固相化抗体２に結合する抗原３の量も異なり、従っ
てその結合した抗原３に結合する酵素標識抗体の量も異
なるので、上記発色反応による発色の度合いを知ること
により試料中の検査目的とする抗原の量を知ることがで
きる。
体４に結合している酵素５と反応して発色する発色基質
を分注し、ステップ８において発色反応を行わせた後、
ステップ９において、その発色の度合いを比色法にて測
定する。試料中に抗原３が無い場合には、上記酵素標識
抗体は、ステップ６のＢ／Ｆ分離操作により洗い流され
て、反応容器内に残っていないから、上記発色反応は起
こらない。上記発色反応の発色の度合いは、結合した酵
素の量に応じて異なる。また試料中の抗原の量に応じて
上記固相化抗体２に結合する抗原３の量も異なり、従っ
てその結合した抗原３に結合する酵素標識抗体の量も異
なるので、上記発色反応による発色の度合いを知ること
により試料中の検査目的とする抗原の量を知ることがで
きる。
【０００５】次に、図５に他の例として従来技術２（特
開昭６３−２８１０５３号参照）を示す。図示する例で
は、内部にグラスファイバーなどで形成した微細孔を有
するフィルター６を充填した円筒状の反応容器１に微粒
子の表面に抗体を固相化した固相担体７を多数含む第１
の反応試薬と試料を分注する。上記フィルター６の微細
孔のポアサイズは上記固相担体７が単独でも洗浄などに
よってもフィルター６を通過できずにフィルター上ある
いは内部に引っ掛かって留まる程度の大きさである。
開昭６３−２８１０５３号参照）を示す。図示する例で
は、内部にグラスファイバーなどで形成した微細孔を有
するフィルター６を充填した円筒状の反応容器１に微粒
子の表面に抗体を固相化した固相担体７を多数含む第１
の反応試薬と試料を分注する。上記フィルター６の微細
孔のポアサイズは上記固相担体７が単独でも洗浄などに
よってもフィルター６を通過できずにフィルター上ある
いは内部に引っ掛かって留まる程度の大きさである。
【０００６】ステップ１で分注された試料と固相担体７
はステップ２で第１反応を行い試料中に目的の抗原が存
在する場合には、固相担体７上に固相化された抗体２と
試料中の抗原３とが抗原・抗体反応を起こして抗原３
は、固相担体７表面上に結合する。次にステップ３で固
相担体７に結合した抗原と結合しない抗原を洗浄操作に
より分離するＢ／Ｆ分離を行う。すなわち反応容器１の
上方から洗浄液を注入すると固相担体と結合しなかった
抗原あるいは抗体は洗浄液と一緒にフィルター６を通過
して下方に流出する。これにより反応容器１内には固相
担体７表面に結合した抗原だけが残ることになる。
はステップ２で第１反応を行い試料中に目的の抗原が存
在する場合には、固相担体７上に固相化された抗体２と
試料中の抗原３とが抗原・抗体反応を起こして抗原３
は、固相担体７表面上に結合する。次にステップ３で固
相担体７に結合した抗原と結合しない抗原を洗浄操作に
より分離するＢ／Ｆ分離を行う。すなわち反応容器１の
上方から洗浄液を注入すると固相担体と結合しなかった
抗原あるいは抗体は洗浄液と一緒にフィルター６を通過
して下方に流出する。これにより反応容器１内には固相
担体７表面に結合した抗原だけが残ることになる。
【０００７】次にステップ４で酵素標識抗体４を分注す
るとステップ５で第２反応が行われ、反応容器１内の固
相担体７の表面上に結合された抗原３と酵素標識抗体４
とが抗原・抗体反応により結合し、抗原３をはさんで抗
体２と酵素標識抗体４とがサンドイッチの結合物を形成
し、抗原３に結合した酵素標識抗体４は、固相担体の表
面に固定されることになる。ここで試料中に抗原３が無
い場合には、酵素標識抗体４と抗体２とを連結すること
ができないので、酵素標識抗体４は、固相担体表面に固
定されることはない。
るとステップ５で第２反応が行われ、反応容器１内の固
相担体７の表面上に結合された抗原３と酵素標識抗体４
とが抗原・抗体反応により結合し、抗原３をはさんで抗
体２と酵素標識抗体４とがサンドイッチの結合物を形成
し、抗原３に結合した酵素標識抗体４は、固相担体の表
面に固定されることになる。ここで試料中に抗原３が無
い場合には、酵素標識抗体４と抗体２とを連結すること
ができないので、酵素標識抗体４は、固相担体表面に固
定されることはない。
【０００８】次にステップ６において、固相担体７の表
面に固定された酵素標識抗体と固定されなかった標識抗
体とを上記ステップ３と同様な方法で洗浄して分離する
Ｂ／Ｆ分離を行う。Ｂ／Ｆ分離後、ステップ７で酵素標
識抗体４に標識された酵素５と反応して螢光を発する螢
光基質を分注し、発生した螢光を受光素子１１で測光
し、その光量から試料中の検査目的とする抗原の量を知
ることができる。
面に固定された酵素標識抗体と固定されなかった標識抗
体とを上記ステップ３と同様な方法で洗浄して分離する
Ｂ／Ｆ分離を行う。Ｂ／Ｆ分離後、ステップ７で酵素標
識抗体４に標識された酵素５と反応して螢光を発する螢
光基質を分注し、発生した螢光を受光素子１１で測光
し、その光量から試料中の検査目的とする抗原の量を知
ることができる。
【０００９】図６に更に他の例の従来技術３を示す。図
示する例では、まずステップ１において内壁に検査目的
に応じた抗体２を固相化した反応容器１の中で、試料お
よび試料中の目的の抗原３と同じ抗原に酵素５を標識し
た標識抗原８を混合するとステップ２において、試料中
の抗原３と標識抗原８とが抗体２に対して競合的に反応
し、抗原３と標識抗原８の量の比によって、それぞれが
抗体２と結合する量が決まり標識抗原８の分注量を一定
にしておけば、試料中の抗原３の量に応じて、抗体２に
結合する量が決まる。
示する例では、まずステップ１において内壁に検査目的
に応じた抗体２を固相化した反応容器１の中で、試料お
よび試料中の目的の抗原３と同じ抗原に酵素５を標識し
た標識抗原８を混合するとステップ２において、試料中
の抗原３と標識抗原８とが抗体２に対して競合的に反応
し、抗原３と標識抗原８の量の比によって、それぞれが
抗体２と結合する量が決まり標識抗原８の分注量を一定
にしておけば、試料中の抗原３の量に応じて、抗体２に
結合する量が決まる。
【００１０】ステップ３において、Ｂ／Ｆ分離を行い、
反応にあずからなかった余分の抗原３やその他の共存物
質を除去した後、ステップ４において標識酵素５と反応
して、発色する発色基質を分注し、ステップ５において
発色反応を行わせた後、ステップ６においてその発色の
程度を光源９からの励起光を当て受光素子１１により比
色することにより試料中の目的抗原の量を知ることがで
きる。
反応にあずからなかった余分の抗原３やその他の共存物
質を除去した後、ステップ４において標識酵素５と反応
して、発色する発色基質を分注し、ステップ５において
発色反応を行わせた後、ステップ６においてその発色の
程度を光源９からの励起光を当て受光素子１１により比
色することにより試料中の目的抗原の量を知ることがで
きる。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】上述した従来技術１
は、免疫反応を２回行うためＢ／Ｆ分離などの操作が繁
雑でまた結果の出るまでの時間も長かった。また固相化
抗体の固相は反応容器内壁面に限定されるため、検液中
の抗原と固相化抗体との接触の機会を多くし反応を安定
して迅速に行わせようとすると、反応工程の間常に攪拌
操作を行わせていなければならない不便さがあった。
は、免疫反応を２回行うためＢ／Ｆ分離などの操作が繁
雑でまた結果の出るまでの時間も長かった。また固相化
抗体の固相は反応容器内壁面に限定されるため、検液中
の抗原と固相化抗体との接触の機会を多くし反応を安定
して迅速に行わせようとすると、反応工程の間常に攪拌
操作を行わせていなければならない不便さがあった。
【００１２】また従来技術２は、多数の微粒子の表面に
抗体を固相化してあるので、反応工程においてこの微粒
子が検液の中で均一に分散して抗原・抗体反応が行われ
るため特別な攪拌操作をしなくても検液中の抗原と微粒
子表面上の抗体との接触の機会は多く迅速な抗原・抗体
反応は得られるが、免疫反応は２回必要でありＢ／Ｆ分
離などの操作精度が繁雑であり、また検査結果を得るま
でに時間がかかる。
抗体を固相化してあるので、反応工程においてこの微粒
子が検液の中で均一に分散して抗原・抗体反応が行われ
るため特別な攪拌操作をしなくても検液中の抗原と微粒
子表面上の抗体との接触の機会は多く迅速な抗原・抗体
反応は得られるが、免疫反応は２回必要でありＢ／Ｆ分
離などの操作精度が繁雑であり、また検査結果を得るま
でに時間がかかる。
【００１３】更に、従来技術３においては、免疫反応は
１回で済むが、従来技術１と同様、反応工程中、常に撹
拌操作を必要とする煩わしさが有る上に、反応容器に予
め抗体等を固定するという余分な工程が有るので、適用
できる被検物質が限られるため、広範囲の検査項目に適
用できないという欠点が有る。本発明は以上のような従
来技術の欠点を解決し、少ない工程で被検物質に関する
特異結合反応から測定までを安定に実施でき、反応した
成分のみを特異的に測定できる方法を提供することを目
的とする。
１回で済むが、従来技術１と同様、反応工程中、常に撹
拌操作を必要とする煩わしさが有る上に、反応容器に予
め抗体等を固定するという余分な工程が有るので、適用
できる被検物質が限られるため、広範囲の検査項目に適
用できないという欠点が有る。本発明は以上のような従
来技術の欠点を解決し、少ない工程で被検物質に関する
特異結合反応から測定までを安定に実施でき、反応した
成分のみを特異的に測定できる方法を提供することを目
的とする。
【００１４】上記目的を達成した本発明は、上記微細孔
を用いる技術に凝集反応を巧みに組合せたものであり、
特異結合反応による凝集反応に基づいて生物試料中の被
検物質を測定するための凝集検査方法において、少なく
とも一定時間液相を保持し得るともに１個の微粒子は通
過するが凝集した微粒子は通過しない微細孔部分を下部
に有する反応容器を用い、検査すべき生物試料と検査目
的に応じた特異結合性物質を固相化した複数の前記微粒
子とを前記反応容器に供給する工程と、供給後の試料お
よび微粒子を含む検液を特異結合反応が進行する間前記
反応容器中に保持する工程と、特異結合反応後に液相お
よび未凝集の微粒子が前記微細孔部分を通過するように
圧力で強制移動させて、前記微細孔部分の下方に除去す
る工程と、除去工程の後に前記反応容器に残った微粒子
を光学的に測定する工程とを備えたことを特徴とするも
のである。
を用いる技術に凝集反応を巧みに組合せたものであり、
特異結合反応による凝集反応に基づいて生物試料中の被
検物質を測定するための凝集検査方法において、少なく
とも一定時間液相を保持し得るともに１個の微粒子は通
過するが凝集した微粒子は通過しない微細孔部分を下部
に有する反応容器を用い、検査すべき生物試料と検査目
的に応じた特異結合性物質を固相化した複数の前記微粒
子とを前記反応容器に供給する工程と、供給後の試料お
よび微粒子を含む検液を特異結合反応が進行する間前記
反応容器中に保持する工程と、特異結合反応後に液相お
よび未凝集の微粒子が前記微細孔部分を通過するように
圧力で強制移動させて、前記微細孔部分の下方に除去す
る工程と、除去工程の後に前記反応容器に残った微粒子
を光学的に測定する工程とを備えたことを特徴とするも
のである。
【００１５】ここで、微粒子の表面が標識物質でコ−テ
ィングされていることが好ましく、特に、微粒子が発光
性物質でコ−ティングされており、光学測定工程が、発
光をもたらす液状試薬の存在下で行なわれることが好ま
しい。本発明で使用する標識物質には、発色性物質、螢
光性物質、酵素、放射性物質、発光基質および螢光基質
等が含まれる。
ィングされていることが好ましく、特に、微粒子が発光
性物質でコ−ティングされており、光学測定工程が、発
光をもたらす液状試薬の存在下で行なわれることが好ま
しい。本発明で使用する標識物質には、発色性物質、螢
光性物質、酵素、放射性物質、発光基質および螢光基質
等が含まれる。
【００１６】
【実施例】実施例１ 本例は血清中のホルモン、ウイルス、腫瘍マーカー、薬
物などの検査に好適な方法であり、以下図１Ａ，Ｂによ
り説明する。螢光物質を表面にコーティングした直径３
μｍ程度の微粒子に抗体２を感作したものを固相担体７
として用いた。
物などの検査に好適な方法であり、以下図１Ａ，Ｂによ
り説明する。螢光物質を表面にコーティングした直径３
μｍ程度の微粒子に抗体２を感作したものを固相担体７
として用いた。
【００１７】図１Ａは試料中に検査目的の抗原が存在す
る場合であり、図１Ｂは試料中に検査目的の抗原が無い
場合である。まず図１Ａにおいてステップ１で固相担体
７の１個は通過させるが、複数個の結合物は通過できな
い程度、本例では５μｍ程度の微孔質フィルター６を充
てんした円筒状の反応容器１の中に試料と固相担体７を
多数含む反応液を分注しフィルター６上で混和した。図
１Ａにおいては、試料中の検査目的の抗原３がステップ
２における抗原・抗体反応で、フィルター６が反応液を
反応容器１中に保持した状態で、抗原３を仲立ちにして
固相担体７同士が結合するいわゆる凝集反応による凝集
が安定に起こり、凝集物を生成した。一方、図１Ｂにお
いては試料中に目的の抗原がなく、固相担体同士を仲立
ちして結合させるものがないから凝集は起こらない。次
にステップ３において洗浄操作を行った。洗浄のやり方
としては本例では上記反応時間後の反応容器１の上方か
ら洗浄液を注入し、それと同時に反応容器１の下方から
陰圧で強制的に、洗浄液を吸引したが、あるいは、吸収
性の物質を同反応容器１に充てんしたフィルター６の下
部に接触させてフィルター６の上部から注入した洗浄液
を、フィルター６の下部から吸い取る方法等種々の方法
が考えられる。
る場合であり、図１Ｂは試料中に検査目的の抗原が無い
場合である。まず図１Ａにおいてステップ１で固相担体
７の１個は通過させるが、複数個の結合物は通過できな
い程度、本例では５μｍ程度の微孔質フィルター６を充
てんした円筒状の反応容器１の中に試料と固相担体７を
多数含む反応液を分注しフィルター６上で混和した。図
１Ａにおいては、試料中の検査目的の抗原３がステップ
２における抗原・抗体反応で、フィルター６が反応液を
反応容器１中に保持した状態で、抗原３を仲立ちにして
固相担体７同士が結合するいわゆる凝集反応による凝集
が安定に起こり、凝集物を生成した。一方、図１Ｂにお
いては試料中に目的の抗原がなく、固相担体同士を仲立
ちして結合させるものがないから凝集は起こらない。次
にステップ３において洗浄操作を行った。洗浄のやり方
としては本例では上記反応時間後の反応容器１の上方か
ら洗浄液を注入し、それと同時に反応容器１の下方から
陰圧で強制的に、洗浄液を吸引したが、あるいは、吸収
性の物質を同反応容器１に充てんしたフィルター６の下
部に接触させてフィルター６の上部から注入した洗浄液
を、フィルター６の下部から吸い取る方法等種々の方法
が考えられる。
【００１８】ここで、図１Ａにおいては凝集反応が起こ
り複数個の固相担体７の結合物が形成され、その結合し
た固相担体はフィルター上に残り、凝集反応にあずから
なかった単体の固相担体と、その他の試料中反応試液が
フィルター６を通過して下方に強制濾過された。図１Ｂ
においては、試料中に目的の抗原が存在せず、凝集反応
が起こらず、全ての固相担体が単体なので、洗浄操作に
よりフィルター６上に固相担体が残ることはない。
り複数個の固相担体７の結合物が形成され、その結合し
た固相担体はフィルター上に残り、凝集反応にあずから
なかった単体の固相担体と、その他の試料中反応試液が
フィルター６を通過して下方に強制濾過された。図１Ｂ
においては、試料中に目的の抗原が存在せず、凝集反応
が起こらず、全ての固相担体が単体なので、洗浄操作に
よりフィルター６上に固相担体が残ることはない。
【００１９】次に図１Ａの場合はステップ４で、フィル
ター６の表面に光源９により励起光を当てると、フィル
ター６の表面に残った固相担体７の表面にコーティング
された螢光物質が励起され螢光を発するのでこの螢光の
強度を適当な光学フィルター１０を通して受光素子１１
で測光した。ここで測定される螢光の強度はフィルター
６上に残った、凝集した固相担体７の数に関係し、更に
凝集した固相担体の数は、試料中の抗原の量に関係する
ので、上記螢光の強度を知ることにより、試料中の目的
の抗原の量を知ることができる。 上記、凝集反応は少
量の液中に多量の微粒子の固相担体を含んだ検液が上記
フィルター６の表面に一面に広がった極めて薄い検液層
の中で固相担体が密集した状態で行われるため試料中の
抗原３と固相担体７の表面上の抗体２とが接触する機会
で極めて多く、従って凝集反応は迅速に行われ、検査結
果を早く知ることができるとともに、反応から測光まで
の一連の検査工程を１つの反応容器で容易に実施でき
た。実施例２ 本例も血清中のホルモン、ウイルス、腫瘍マーカー、薬
物などの検査に好適な方法であり、発光性物質としてル
ミノールを用い、ルミノールを表面にコーティングした
微粒子に抗体を感作したものを固相担体７として用い
た。
ター６の表面に光源９により励起光を当てると、フィル
ター６の表面に残った固相担体７の表面にコーティング
された螢光物質が励起され螢光を発するのでこの螢光の
強度を適当な光学フィルター１０を通して受光素子１１
で測光した。ここで測定される螢光の強度はフィルター
６上に残った、凝集した固相担体７の数に関係し、更に
凝集した固相担体の数は、試料中の抗原の量に関係する
ので、上記螢光の強度を知ることにより、試料中の目的
の抗原の量を知ることができる。 上記、凝集反応は少
量の液中に多量の微粒子の固相担体を含んだ検液が上記
フィルター６の表面に一面に広がった極めて薄い検液層
の中で固相担体が密集した状態で行われるため試料中の
抗原３と固相担体７の表面上の抗体２とが接触する機会
で極めて多く、従って凝集反応は迅速に行われ、検査結
果を早く知ることができるとともに、反応から測光まで
の一連の検査工程を１つの反応容器で容易に実施でき
た。実施例２ 本例も血清中のホルモン、ウイルス、腫瘍マーカー、薬
物などの検査に好適な方法であり、発光性物質としてル
ミノールを用い、ルミノールを表面にコーティングした
微粒子に抗体を感作したものを固相担体７として用い
た。
【００２０】以下図２Ａ，Ｂにより説明する。図２Ａの
反応工程のステップ１からステップ３までは実施例１と
同様であるが、ステップ４において強制的濾過を行なっ
た反応容器１内にルミノールを発光させる物質、すなわ
ち本例では、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）とＨ2 Ｏ2 を
液状試薬として分注した状態で光学測定をした。このと
き、凝集してフィルター６上に残った固相担体表面にコ
ーティングされたルミノールが液状試薬の存在下で発光
するので、この発光強度を適当なフィルター１０を通し
て受光素子１１にて測光することにより試料中の目的の
抗原の濃度を精度良く知ることができた。
反応工程のステップ１からステップ３までは実施例１と
同様であるが、ステップ４において強制的濾過を行なっ
た反応容器１内にルミノールを発光させる物質、すなわ
ち本例では、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）とＨ2 Ｏ2 を
液状試薬として分注した状態で光学測定をした。このと
き、凝集してフィルター６上に残った固相担体表面にコ
ーティングされたルミノールが液状試薬の存在下で発光
するので、この発光強度を適当なフィルター１０を通し
て受光素子１１にて測光することにより試料中の目的の
抗原の濃度を精度良く知ることができた。
【００２１】また図２Ｂに示すように試料中に目的の抗
原がない時には、凝集反応は起こらないのでステップ３
における強制濾過による洗浄操作の後のフィルター６上
には固相担体７は残っていないために、ステップ４にお
いてペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）およびＨ2 Ｏ2 などを
反応容器１内に分注しても発光は起こらないので試料中
に目的の抗原が存在しなかった事が分かった。このよう
に、本実施例によれば、上記実施例１と同様に、凝集反
応が迅速に行われるとともに、発光（または発色）用の
液状試薬を用いる場合でも、抗原・抗体反応から測光ま
での一連の検査工程を１つの反応容器で容易かつ安定に
実施できることが分かった。
原がない時には、凝集反応は起こらないのでステップ３
における強制濾過による洗浄操作の後のフィルター６上
には固相担体７は残っていないために、ステップ４にお
いてペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）およびＨ2 Ｏ2 などを
反応容器１内に分注しても発光は起こらないので試料中
に目的の抗原が存在しなかった事が分かった。このよう
に、本実施例によれば、上記実施例１と同様に、凝集反
応が迅速に行われるとともに、発光（または発色）用の
液状試薬を用いる場合でも、抗原・抗体反応から測光ま
での一連の検査工程を１つの反応容器で容易かつ安定に
実施できることが分かった。
【００２２】以上実施例１および実施例２において固相
担体７の表面に、試料中の目的の抗体に対する抗原を固
相化しておけば、試料中の抗体を検出することもでき
る。実施例３ 本例は、赤血球凝集反応による血液型判定のＡＢＯ式血
液型を判定する場合について示す。
担体７の表面に、試料中の目的の抗体に対する抗原を固
相化しておけば、試料中の抗体を検出することもでき
る。実施例３ 本例は、赤血球凝集反応による血液型判定のＡＢＯ式血
液型を判定する場合について示す。
【００２３】以下図３Ａ，Ｂより説明する。図３Ａに示
すステップ１において赤血球を含む試料（全血あるいは
赤血球浮遊液）と抗血清の抗Ａ血清を反応容器１内に分
注し混和した。次にステップ２で抗原・抗体反応が行わ
れ、試料中の赤血球１５の表面に上記分注した抗血清中
の抗体２に対応する血液型抗原１６と凝集反応が安定に
起こり、上記赤血球同士が抗体２を仲立ちにして凝集し
フィルター６上に凝集塊を形成した。
すステップ１において赤血球を含む試料（全血あるいは
赤血球浮遊液）と抗血清の抗Ａ血清を反応容器１内に分
注し混和した。次にステップ２で抗原・抗体反応が行わ
れ、試料中の赤血球１５の表面に上記分注した抗血清中
の抗体２に対応する血液型抗原１６と凝集反応が安定に
起こり、上記赤血球同士が抗体２を仲立ちにして凝集し
フィルター６上に凝集塊を形成した。
【００２４】一方図３Ｂに示す場合には、試料中の赤血
球１５の表面に、上記分注した抗血清中の抗体２に対応
する血液型抗原１６が存在しない場合には凝集反応は行
われず従ってフィルター６上あるいはフィルター中には
単体の赤血球１５のみが存在することになる。次にステ
ップ３で洗浄操作を行った。洗浄の方法は実施例１と同
様である。
球１５の表面に、上記分注した抗血清中の抗体２に対応
する血液型抗原１６が存在しない場合には凝集反応は行
われず従ってフィルター６上あるいはフィルター中には
単体の赤血球１５のみが存在することになる。次にステ
ップ３で洗浄操作を行った。洗浄の方法は実施例１と同
様である。
【００２５】そうすると、図３Ａの場合には凝集にあず
からなかった余分の赤血球１５やその他の共存物質はフ
ィルター６を通して濾過除去され、フィルター６上には
凝集反応にあずかって凝集した赤血球の凝集塊だけが残
るので、図３Ａ−ａに示すように、凝集にあずからなか
った余分な赤血球によるボヤケなどのない凝集塊だけの
クリヤーな凝集像１４を得ることができた。これをステ
ップ４においてレンズ１２などの光学系を通して撮像素
子１３などでパターン認識させ、凝集を判定するかある
いは目視判定した。
からなかった余分の赤血球１５やその他の共存物質はフ
ィルター６を通して濾過除去され、フィルター６上には
凝集反応にあずかって凝集した赤血球の凝集塊だけが残
るので、図３Ａ−ａに示すように、凝集にあずからなか
った余分な赤血球によるボヤケなどのない凝集塊だけの
クリヤーな凝集像１４を得ることができた。これをステ
ップ４においてレンズ１２などの光学系を通して撮像素
子１３などでパターン認識させ、凝集を判定するかある
いは目視判定した。
【００２６】一方図３Ｂの場合にはステップ３で洗浄操
作を行うとフィルター上の赤血球は全て単体であるから
全ての赤血球および検液中の、その他の共存物質はフィ
ルター６を通して濾過除去されるので図３Ｂ−ｂに示す
ようにフィルター６上には赤血球は全く残らないので、
これをステップ４において撮像素子１３でパターン認識
したり目視観察した時、明確に非凝集であることが分か
る。
作を行うとフィルター上の赤血球は全て単体であるから
全ての赤血球および検液中の、その他の共存物質はフィ
ルター６を通して濾過除去されるので図３Ｂ−ｂに示す
ようにフィルター６上には赤血球は全く残らないので、
これをステップ４において撮像素子１３でパターン認識
したり目視観察した時、明確に非凝集であることが分か
る。
【００２７】以上の反応において、抗血清として抗Ａ血
清および抗Ｂ血清を用いればＡＢＯ式血液型を判定する
ことができ、その他種々の抗血清を用いることにより種
々の血液型を判定することができる。また、血清あるい
は血漿を試料とし、不規則抗体スクリーニング用のＯ型
赤血球を試薬として上記操作を行えば試料中の不規則抗
体の検出もできる。また、従来の酵素免疫測定法（ＥＩ
Ａ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、発光免疫測定
法（ＦＩＡ）などと同様にホルモン、ウイルスの抗原あ
るいはウイルスの抗体、腫瘍マーカー、および薬物など
の遺伝学的、生理学的被検物質の凝集検査にも適用でき
る。
清および抗Ｂ血清を用いればＡＢＯ式血液型を判定する
ことができ、その他種々の抗血清を用いることにより種
々の血液型を判定することができる。また、血清あるい
は血漿を試料とし、不規則抗体スクリーニング用のＯ型
赤血球を試薬として上記操作を行えば試料中の不規則抗
体の検出もできる。また、従来の酵素免疫測定法（ＥＩ
Ａ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、発光免疫測定
法（ＦＩＡ）などと同様にホルモン、ウイルスの抗原あ
るいはウイルスの抗体、腫瘍マーカー、および薬物など
の遺伝学的、生理学的被検物質の凝集検査にも適用でき
る。
【００２８】
【発明の効果】以上説明してきたように、本発明による
と、特異結合反応の工程と未結合成分の除去の工程とが
１回で済むため、反応から測定までの一連の検査工程を
１つの反応容器中で容易かつ安定に実施できる。特に、
凝集反応の間は、全ての微粒子を検液中に保持しながら
充分な反応を行うことができるとともに、反応工程後
は、未結合の微粒子を微細孔部分を通過させることで凝
集した微粒子のみが残った状態での測定ができるので、
被検物質を精度良く検査することができる。
と、特異結合反応の工程と未結合成分の除去の工程とが
１回で済むため、反応から測定までの一連の検査工程を
１つの反応容器中で容易かつ安定に実施できる。特に、
凝集反応の間は、全ての微粒子を検液中に保持しながら
充分な反応を行うことができるとともに、反応工程後
は、未結合の微粒子を微細孔部分を通過させることで凝
集した微粒子のみが残った状態での測定ができるので、
被検物質を精度良く検査することができる。
【図１】図１Ａは実施例１の方法の工程図である。図１
Ｂは実施例１の対象方法の工程図である。
Ｂは実施例１の対象方法の工程図である。
【図２】図２Ａは実施例２の方法の工程図である。図２
Ｂは実施例２の対象方法の工程図である。
Ｂは実施例２の対象方法の工程図である。
【図３】図３Ａは実施例３の方法の工程図である。図３
Ａ−ａは実施例３のステップ３で濾過した後のフィルタ
ー上の赤血球の凝集像を示す説明図である。図３Ｂは実
施例３の対象方法の工程図である。図３Ｂ−ｂは実施例
３の対象方法のステップ３で濾過した後のフィルター上
の状態を示す説明図である。
Ａ−ａは実施例３のステップ３で濾過した後のフィルタ
ー上の赤血球の凝集像を示す説明図である。図３Ｂは実
施例３の対象方法の工程図である。図３Ｂ−ｂは実施例
３の対象方法のステップ３で濾過した後のフィルター上
の状態を示す説明図である。
【図４】図４は従来技術１の方法の工程図である。
【図５】図５は従来技術２の方法の工程図である。
【図６】図６は従来技術３の方法の工程図である。
１ 反応容器 ２ 抗体 ３ 抗原 ４ 酵素標識抗体 ５ 酵素 ６ フィルター ７ 固相担体 ８ 標識抗原 ９ 光源 １０ フィルター １１ 受光素子 １２ レンズ １３ 撮像素子 １４ 凝集像 １５ 赤血球 １６ 血液型抗原
Claims (3)
- 【請求項１】特異結合反応による凝集反応に基づいて生
物試料中の被検物質を測定するための凝集検査方法にお
いて、少なくとも一定時間液相を保持し得るともに１個
の微粒子は通過するが凝集した微粒子は通過しない微細
孔部分を下部に有する反応容器を用い、検査すべき生物
試料と検査目的に応じた特異結合性物質を固相化した複
数の前記微粒子とを前記反応容器に供給する工程と、供
給後の試料および微粒子を含む検液を特異結合反応が進
行する間前記反応容器中に保持する工程と、特異結合反
応後に液相および未凝集の微粒子が前記微細孔部分を通
過するように圧力で強制移動させて、前記微細孔部分の
下方に除去する工程と、除去工程の後に前記反応容器に
残った微粒子を光学的に測定する工程とを備えたことを
特徴とする凝集検査方法。 - 【請求項２】微粒子の表面が標識物質でコーティングさ
れていることを特徴とする請求項１に記載の凝集検査方
法。 - 【請求項３】標識物質が発光性または発色性であり、光
学測定工程が発光または発色をもたらす液状試薬の存在
下で行われることを特徴とする請求項２に記載の凝集検
査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28722195A JP2935965B2 (ja) | 1995-11-06 | 1995-11-06 | 凝集検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28722195A JP2935965B2 (ja) | 1995-11-06 | 1995-11-06 | 凝集検査方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2106404A Division JP2690802B2 (ja) | 1990-04-24 | 1990-04-24 | 免疫学的検査法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08211061A JPH08211061A (ja) | 1996-08-20 |
| JP2935965B2 true JP2935965B2 (ja) | 1999-08-16 |
Family
ID=17714618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28722195A Expired - Lifetime JP2935965B2 (ja) | 1995-11-06 | 1995-11-06 | 凝集検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2935965B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080003692A1 (en) * | 2004-04-21 | 2008-01-03 | Mitsuyasu Kawano | Immunoassay and Reagent |
| WO2010125932A1 (ja) * | 2009-04-28 | 2010-11-04 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 融合タンパク質含有集合体、その製造方法及び該集合体を用いたアッセイ法 |
| WO2015046293A1 (ja) * | 2013-09-30 | 2015-04-02 | 凸版印刷株式会社 | 被検物質の検出システム |
-
1995
- 1995-11-06 JP JP28722195A patent/JP2935965B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08211061A (ja) | 1996-08-20 |
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