JP2668656B2 - アルカリホスファターゼ用乾式分析素子 - Google Patents
アルカリホスファターゼ用乾式分析素子Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アルカリホスファター
ゼ（以下ＡＬＰと略記する）を定量するための改良され
た乾式分析素子に関する。 【０００２】 【従来の技術】ＡＬＰは、りん酸モノエステラーゼの１
種であり、りん酸モノエステルの加水分解を触媒する酵
素である。これは動物の組織に広く分布し、殊に、骨、
腸粘膜、腎皮質、乳腺、乳汁、肝臓、胆汁、血清及び胎
盤に存在していることが知られている。そして、ＡＬＰ
活性の増加は、例えば、肝、腸又は骨に関連する病気、
あるいは受精の指標とされている。そこで、１９３０年
から、このＡＬＰの検出、更に進んで定量分析するため
の方法の研究が進められている。従来、ＡＬＰの検出又
は定量方法としては各種の方法が開発されている。それ
らは大別して、ＡＬＰの基質、すなわちりん酸のモノエ
ステル又はその塩にＡＬＰを作用させ、直接色素を放出
させて、その色素濃度を測定する方法（例えば、特公昭
４５−３４８７２号、同５２−４２４３８号、特開昭５
４−１０４３９０号各公報等参照）と、直接色素を放出
しない基質にＡＬＰを作用させ、その生成物を、酸化又
は他の化合物と反応させて色素を生成させ、その濃度を
測定する方法（例えば、特公昭４９−４２９４９号、同
４５−２７１９９号、特開昭５５−１０２４００号各公
報等参照）とがある。これらは、いずれも操作が煩雑で
あるという問題点がある。他方、上述のごとき従来の分
析方法に対して操作性の簡便なドライ・ケミストリイー
を用い、その上高い定量性を有する多層分析素子が知ら
れている。例えば特公昭５３−２１６７７号、特開昭５
５−１６４３５６号、同５７−１２５８４７号、同５７
−１９７４６６号及び同５８−９０１６７号各公報等に
上記多層分析素子が記載されている。これら素子は、支
持体上に、試薬層及び／又は展開層等を設けたもので、
その定量分析操作が簡便なものである。しかしながら、
既述のＡＬＰの定量分析用に、前記の多層分析素子を使
用した公知例はない。そこで本発明者らは、ＡＬＰの定
量分析用に、前記の多層分析素子を使用することについ
て検討を重ねた結果、本発明に到達した。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、操作
が簡便であり、且つ保存安定性の優れたＡＬＰ定量用乾
式分析素子を提供することにある。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明はＡＬＰ定量用乾式分析素子に関する発明であっ
て、支持体上にＡＬＰの基質が含有されている層を有す
るＡＬＰを定量するための乾式分析素子において、固体
の基質を溶媒に溶解して溶液を作製し、前記基質を溶解
しない溶媒中に前記溶液を分散させて作製した分散液を
用いることによって、前記基質が前記層中に微粉末の状
態で含有されていることを特徴とする。 【０００５】ＡＬＰの基質としては、既述のように各種
の物質が知られているが、本発明の分析素子において
は、ＡＬＰの作用によって直接色素を放出する基質が好
適である。そのような基質としては、ｐ−ニトロフェニ
ルりん酸、チモールフタレインりん酸、フェノールフタ
レインりん酸及びそれらの塩が知られている。これらの
うち、ＡＬＰの作用で生成するチモールフタレインは、
高アルカリ性（ｐＨ≧１２）でないと発色しない点で、
またフェノールフタレインは発色が極端に低い点で、い
ずれもあまり適当でなく、それに対して、ｐ−ニトロフ
ェニルりん酸（以下、ｐ−ＮＰＰと略記する）又はその
塩は、ＡＬＰ活性が最高のｐＨ１０．４前後で直接発色
する色素を放出する点で、本発明の分析素子用に最適の
ＡＬＰ基質である。 【０００６】一般に、分析試薬を多層分析素子中に組込
むには、その均一分散を確保するために、通常該試薬を
適当な溶媒中に溶解して溶液を造り、それを試薬層塗布
液中に溶解させて使用するか、該溶液をまず粉末ろ紙に
含浸させ、それを展開層中に分散させる方法が採られて
いる。本発明者らは、この常法に従って、前記ＡＬＰの
基質を多層分析素子に組込んだところ、いずれの場合に
も、程度の差はあるが、素子の作成直後から強く呈色を
示すため、また更に５℃における１日の保存で基質の分
解を示すフェノール類の生成が確認され、実用上不適当
なものであることが判明した。そこで本発明者らは鋭意
検討した結果、本発明における微粉末分散法を見出し
た。 【０００７】本発明の分析素子におけるＡＬＰ基質の粒
度は、均一分散の面から小さい程好ましいが、微粒子化
の操作及びコスト上からの制限がある。しかして、本発
明者らの実験によれば、平均粒径が５０μｍ以下であれ
ば、大なる影響はなく、１μｍ程度で、十分定量分析に
実用できることを見出した。また、これらＡＬＰの基質
粉末は、多層分析素子の展開層中に分散させるのが好適
であることも見出した。したがって、識別能は劣るが、
ＡＬＰの基質粉末を、試薬層又は反射層中に分散させて
もよい。 【０００８】それ故、本発明の分析素子の構成は、支持
体上に展開層のみを有する構成、又は支持体上に少なく
とも１層の親水性コロイド層及び展開層を有する構成、
あるいはこれらに必要に応じて他の試薬層及び／又は反
射層を設けた構成としてよい。 【０００９】そして、ＡＬＰの基質を組込む方法として
は、基質を混入させる層の塗布液として、該基質を溶解
しない液を用い、それに予め基質を溶解した溶液を添加
し、均一に分散させればよく、それには、分散剤、助
剤、粉末ろ紙等を更に添加してもよい。しかして、この
基質は、その添加後（すなわち液中）に微粉砕して微粉
末の状態とすれば良い。該基質を溶解しない液として
は、好ましくはキシレン、トルエン等の有機溶媒が用い
られる。また、基質を溶解する溶媒としては、好ましく
はメタノール等の低級アルコールが用いられる。 【００１０】定量分析は、本発明の分析素子にＡＬＰ含
有被検液、例えば血清を滴下し、インキュベートしなが
ら、生成する加水分解物、例えばｐ−ＮＰＰの場合はｐ
−ニトロフェノールの濃度の経時変化を特定スペクトル
で光学測定することにより行えばよい。本発明の分析素
子は、５℃における保存で３ヵ月以上も安定である。 【００１１】 【実施例】以下、本発明を実施例及び参考例により具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されな
い。 【００１２】参考例１ （１）塗布液調製 （ａ）試薬層−１ ゼチラン７．５ｇ、トリイソプロピルナフタレンスルホ
ン酸ナトリウム１ｇ及び炭酸水素ナトリウム２．５２ｇ
を蒸留水８０ｍｌに溶解後、４モル／リットルの水酸化
ナトリウム水溶液でｐＨ１０．４に調整し、次いで蒸留
水を加えて全量を１００ｇに調整して、試薬層−１用塗
布液とした。 （ｂ）試薬層−２ ゼチラン１０ｇ及びトリイソプロピルナフタレンスルホ
ン酸ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｍｌに溶解後、１，２
−ビス（ビニルスルホニル）エタン０．３３３ｇを添加
し、蒸留水を加えて全量を１００ｇに調整して、試薬層
−２用塗布液とした。 （ｃ）展開層 キシレン２８０ｍｌにスチレン−グリシジルメタクリレ
ート共重合体〔共重合比９：１（重量比）〕１５ｇ、ト
ライトンＸ−１００（ロームアンドハース社製）１０ｇ
を加え溶解してキシレン溶液とした。硫酸マグネシウム
・７水和物をふるいにかけ２００メッシュ以上の細かい
ものを４．２ｇ、及び同じく２００メッシュ以上の細か
いｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物０．５２６ｇを
前記キシレン溶液に添加後、サンドグラインダーにより
４時間かくはんした後、ガーゼでろ過し、ろ液１３５．
７ｇに粉末ろ紙Ｃ〔東洋ろ紙（株）製、３００メッシュ
以上〕４５ｇを加え、よくかくはんして展開層用塗布液
とした。 【００１３】（２）分析素子製造 透明な膜厚約１８０μｍの下塗り済ポリエチレンテレフ
タレート支持体上に、試薬層−１用塗布液を２５０μｍ
の厚さにドクターブレードで塗布し、４２±２℃で４０
分間乾燥して、試薬層−１を得た。この試薬層−１上
に、試薬層−２用塗布液を１２５μｍの厚さにドクター
ブレードで塗布し、４２±２℃で３０分間乾燥して、試
薬層−２を得た。この試薬層−２上に展開層用塗布液を
３７５μｍの厚さにドクターブレードで塗布し、４２±
２℃で３０分間乾燥して、参考例１の分析素子を得た。 【００１４】こうして得た、分析素子の各層の組成を以
下に示す。 （ａ）試薬層−１ ゼラチン １８．７５ ｇ／ｍ2 トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム ２．５ ｇ／ｍ2 炭酸水素ナトリウム ６．３ ｇ／ｍ2 （ｂ）試薬層−２ ゼラチン １２．５ ｇ／ｍ2 トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム １．２５ ｇ／ｍ2 １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．４１７ｇ／ｍ2 （ｃ）展開層 粉末ろ紙（Ｃ） ９３．７５ ｇ／ｍ2 トライトンＸ−１００ １０．４１７ｇ／ｍ2 スチレン−グリシジルメタクリレート（９：１）共重合体 １５．６２５ｇ／ｍ2 硫酸マグネシウム・７水和物 ４．３７５ｇ／ｍ2 ｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物 ０．５４８ｇ／ｍ2 【００１５】この分析素子に、種々のＡＬＰ活性を有す
る血清を滴下し、３７℃で５分間保温した時の反射光学
濃度（ＤR ）の経時変化をｐ−ニトロフェノールの４１
０ｎｍ付近の吸収で測定した。その結果を図１に示す。
すなわち図１は、各種のＡＬＰ活性をもつ血清滴下時の
濃度の経時変化を、時間（分）（横軸）と反射光学濃度
（ＤR ）（縦軸）との関係で示したグラフである。図１
に明らかなように、濃度と経時変化が比例しているの
で、これからＡＬＰ活性を定量することができる。 【００１６】実施例１ 以下のようにして、素子の保存安定性を対比試験した。 （１）水溶液 親水性コロイド溶液に、あらかじめ蒸留水中に溶解した
ｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物を添加して、試薬
層塗布液とした。この塗布液は黄色を呈していた。これ
を支持体に塗布し、乾燥して展開層とし、素子を作成し
た。この素子自体も黄色を呈しており、反射吸収スペク
トルを測定すると４１０ｎｍ付近に強いピークを示し
た。また、本素子を５℃で１日保存後、同様に反射吸収
スペクトルを測定すると、４１０ｎｍの反射光学濃度は
更に増大しており、経時劣化の著しいことが判明した。 （２）有機溶液（本発明） 前記（１）の基質をメタノール中に溶解し、キシレン中
に分散させた後、この液を粉末ろ紙に含浸させた。この
粉末ろ紙を減圧乾燥し、展開層塗布液中に分散させた。
こうして得た塗布液、及びこれを支持体に塗布し、乾燥
して得た本発明の素子も淡黄色を呈した。そして、この
素子の反射吸収スペクトルを測定すると、４１０ｎｍ付
近に弱いピークしか示さなかった。しかし、この素子を
５℃で１日保存すると黄色を呈し、反射吸収スペクトル
は４１０ｎｍ付近に強いピークを示した。 （３）参考例の微粉末 前記（１）の基質を微粉末状に粉砕し、非溶解性の展開
層塗布液中に直接分散した。こうして得た塗布液、及び
これを支持体に塗布し、乾燥して得た素子も、共に白色
を呈した。これを５℃で１日保存後、その反射吸収スペ
クトルを測定すると、保存前と同様に、４１０ｎｍ付近
にピークが見られなかった。そこで、４０℃で強制劣化
試験を行ったところ、３日目までスペクトルの変化はな
く、１０日目でようやく弱いピークが確認できる程度の
ＤR 変化を示した。 【００１７】参考例２ 粒度の差による性質の差を調べた。前記参考例１のもの
を標準とし（１）、対照として、参考例１の基質をふる
いにかけ５００メッシュ以上の細かいものを用い、サン
ドグラインダー分散を行わない展開層用塗布液を用いた
素子（２）、また、同様に２００メッシュ以上の細かい
ものを用いるがサンドグラインダー分散を行わない展開
層塗布液を用いた素子（３）について試験した。まず、
各展開層用塗布液中の各基質の平均粒径を光学顕微鏡で
測定した。その結果を下記表１に示す。 【００１８】 【表１】 【００１９】次に、各種のＡＬＰ活性を有する人血清
を、これら３つの素子に滴下し、３７℃でインキュベー
トしながら、反射光学濃度（ＤR ）を４分間測定した。
図２に、ＡＬＰ活性（Ｋ−Ｕ）（横軸）と、滴下４分後
のＤR と２分後のＤRの差（ΔＤR ）（縦軸）との関係
で表した検量線を示す。図２から明らかなように、３本
の検量線に有意差はない。次に、これらの検量線にΔＤ
R を代入して、同時再現性（分析精度）を検討した。そ
の結果を下記表２に相対標準偏差（％）として示す。 【００２０】 【表２】 【００２１】表２から明らかなように、ｐ−ＮＰＰ・２
Ｎａ・６Ｈ2 Ｏの粒径が小さくなるほど、相対標準偏差
が小さく、且つ一定であって良好である。これは、基質
粒子が小さくなるほど均一分散が可能となり、且つ分散
状態が安定となり、単位面積当りの付着量が一定化する
ためと推定される。更に、保存安定性について試験した
ところ、３つの素子共、ほぼ同じ安定性を示した。 【００２２】 【発明の効果】以上説明したように、本発明の分析素子
は、ＡＬＰ活性の定量測定を従来の分析技術よりも簡便
に行えるものであり、また問題となる保存安定性につい
ても常法の溶液適用よりもはるかに優れており、もちろ
ん分析精度も十分満足できるという顕著な効果を奏する
ものである。
ゼ（以下ＡＬＰと略記する）を定量するための改良され
た乾式分析素子に関する。 【０００２】 【従来の技術】ＡＬＰは、りん酸モノエステラーゼの１
種であり、りん酸モノエステルの加水分解を触媒する酵
素である。これは動物の組織に広く分布し、殊に、骨、
腸粘膜、腎皮質、乳腺、乳汁、肝臓、胆汁、血清及び胎
盤に存在していることが知られている。そして、ＡＬＰ
活性の増加は、例えば、肝、腸又は骨に関連する病気、
あるいは受精の指標とされている。そこで、１９３０年
から、このＡＬＰの検出、更に進んで定量分析するため
の方法の研究が進められている。従来、ＡＬＰの検出又
は定量方法としては各種の方法が開発されている。それ
らは大別して、ＡＬＰの基質、すなわちりん酸のモノエ
ステル又はその塩にＡＬＰを作用させ、直接色素を放出
させて、その色素濃度を測定する方法（例えば、特公昭
４５−３４８７２号、同５２−４２４３８号、特開昭５
４−１０４３９０号各公報等参照）と、直接色素を放出
しない基質にＡＬＰを作用させ、その生成物を、酸化又
は他の化合物と反応させて色素を生成させ、その濃度を
測定する方法（例えば、特公昭４９−４２９４９号、同
４５−２７１９９号、特開昭５５−１０２４００号各公
報等参照）とがある。これらは、いずれも操作が煩雑で
あるという問題点がある。他方、上述のごとき従来の分
析方法に対して操作性の簡便なドライ・ケミストリイー
を用い、その上高い定量性を有する多層分析素子が知ら
れている。例えば特公昭５３−２１６７７号、特開昭５
５−１６４３５６号、同５７−１２５８４７号、同５７
−１９７４６６号及び同５８−９０１６７号各公報等に
上記多層分析素子が記載されている。これら素子は、支
持体上に、試薬層及び／又は展開層等を設けたもので、
その定量分析操作が簡便なものである。しかしながら、
既述のＡＬＰの定量分析用に、前記の多層分析素子を使
用した公知例はない。そこで本発明者らは、ＡＬＰの定
量分析用に、前記の多層分析素子を使用することについ
て検討を重ねた結果、本発明に到達した。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、操作
が簡便であり、且つ保存安定性の優れたＡＬＰ定量用乾
式分析素子を提供することにある。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明はＡＬＰ定量用乾式分析素子に関する発明であっ
て、支持体上にＡＬＰの基質が含有されている層を有す
るＡＬＰを定量するための乾式分析素子において、固体
の基質を溶媒に溶解して溶液を作製し、前記基質を溶解
しない溶媒中に前記溶液を分散させて作製した分散液を
用いることによって、前記基質が前記層中に微粉末の状
態で含有されていることを特徴とする。 【０００５】ＡＬＰの基質としては、既述のように各種
の物質が知られているが、本発明の分析素子において
は、ＡＬＰの作用によって直接色素を放出する基質が好
適である。そのような基質としては、ｐ−ニトロフェニ
ルりん酸、チモールフタレインりん酸、フェノールフタ
レインりん酸及びそれらの塩が知られている。これらの
うち、ＡＬＰの作用で生成するチモールフタレインは、
高アルカリ性（ｐＨ≧１２）でないと発色しない点で、
またフェノールフタレインは発色が極端に低い点で、い
ずれもあまり適当でなく、それに対して、ｐ−ニトロフ
ェニルりん酸（以下、ｐ−ＮＰＰと略記する）又はその
塩は、ＡＬＰ活性が最高のｐＨ１０．４前後で直接発色
する色素を放出する点で、本発明の分析素子用に最適の
ＡＬＰ基質である。 【０００６】一般に、分析試薬を多層分析素子中に組込
むには、その均一分散を確保するために、通常該試薬を
適当な溶媒中に溶解して溶液を造り、それを試薬層塗布
液中に溶解させて使用するか、該溶液をまず粉末ろ紙に
含浸させ、それを展開層中に分散させる方法が採られて
いる。本発明者らは、この常法に従って、前記ＡＬＰの
基質を多層分析素子に組込んだところ、いずれの場合に
も、程度の差はあるが、素子の作成直後から強く呈色を
示すため、また更に５℃における１日の保存で基質の分
解を示すフェノール類の生成が確認され、実用上不適当
なものであることが判明した。そこで本発明者らは鋭意
検討した結果、本発明における微粉末分散法を見出し
た。 【０００７】本発明の分析素子におけるＡＬＰ基質の粒
度は、均一分散の面から小さい程好ましいが、微粒子化
の操作及びコスト上からの制限がある。しかして、本発
明者らの実験によれば、平均粒径が５０μｍ以下であれ
ば、大なる影響はなく、１μｍ程度で、十分定量分析に
実用できることを見出した。また、これらＡＬＰの基質
粉末は、多層分析素子の展開層中に分散させるのが好適
であることも見出した。したがって、識別能は劣るが、
ＡＬＰの基質粉末を、試薬層又は反射層中に分散させて
もよい。 【０００８】それ故、本発明の分析素子の構成は、支持
体上に展開層のみを有する構成、又は支持体上に少なく
とも１層の親水性コロイド層及び展開層を有する構成、
あるいはこれらに必要に応じて他の試薬層及び／又は反
射層を設けた構成としてよい。 【０００９】そして、ＡＬＰの基質を組込む方法として
は、基質を混入させる層の塗布液として、該基質を溶解
しない液を用い、それに予め基質を溶解した溶液を添加
し、均一に分散させればよく、それには、分散剤、助
剤、粉末ろ紙等を更に添加してもよい。しかして、この
基質は、その添加後（すなわち液中）に微粉砕して微粉
末の状態とすれば良い。該基質を溶解しない液として
は、好ましくはキシレン、トルエン等の有機溶媒が用い
られる。また、基質を溶解する溶媒としては、好ましく
はメタノール等の低級アルコールが用いられる。 【００１０】定量分析は、本発明の分析素子にＡＬＰ含
有被検液、例えば血清を滴下し、インキュベートしなが
ら、生成する加水分解物、例えばｐ−ＮＰＰの場合はｐ
−ニトロフェノールの濃度の経時変化を特定スペクトル
で光学測定することにより行えばよい。本発明の分析素
子は、５℃における保存で３ヵ月以上も安定である。 【００１１】 【実施例】以下、本発明を実施例及び参考例により具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されな
い。 【００１２】参考例１ （１）塗布液調製 （ａ）試薬層−１ ゼチラン７．５ｇ、トリイソプロピルナフタレンスルホ
ン酸ナトリウム１ｇ及び炭酸水素ナトリウム２．５２ｇ
を蒸留水８０ｍｌに溶解後、４モル／リットルの水酸化
ナトリウム水溶液でｐＨ１０．４に調整し、次いで蒸留
水を加えて全量を１００ｇに調整して、試薬層−１用塗
布液とした。 （ｂ）試薬層−２ ゼチラン１０ｇ及びトリイソプロピルナフタレンスルホ
ン酸ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｍｌに溶解後、１，２
−ビス（ビニルスルホニル）エタン０．３３３ｇを添加
し、蒸留水を加えて全量を１００ｇに調整して、試薬層
−２用塗布液とした。 （ｃ）展開層 キシレン２８０ｍｌにスチレン−グリシジルメタクリレ
ート共重合体〔共重合比９：１（重量比）〕１５ｇ、ト
ライトンＸ−１００（ロームアンドハース社製）１０ｇ
を加え溶解してキシレン溶液とした。硫酸マグネシウム
・７水和物をふるいにかけ２００メッシュ以上の細かい
ものを４．２ｇ、及び同じく２００メッシュ以上の細か
いｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物０．５２６ｇを
前記キシレン溶液に添加後、サンドグラインダーにより
４時間かくはんした後、ガーゼでろ過し、ろ液１３５．
７ｇに粉末ろ紙Ｃ〔東洋ろ紙（株）製、３００メッシュ
以上〕４５ｇを加え、よくかくはんして展開層用塗布液
とした。 【００１３】（２）分析素子製造 透明な膜厚約１８０μｍの下塗り済ポリエチレンテレフ
タレート支持体上に、試薬層−１用塗布液を２５０μｍ
の厚さにドクターブレードで塗布し、４２±２℃で４０
分間乾燥して、試薬層−１を得た。この試薬層−１上
に、試薬層−２用塗布液を１２５μｍの厚さにドクター
ブレードで塗布し、４２±２℃で３０分間乾燥して、試
薬層−２を得た。この試薬層−２上に展開層用塗布液を
３７５μｍの厚さにドクターブレードで塗布し、４２±
２℃で３０分間乾燥して、参考例１の分析素子を得た。 【００１４】こうして得た、分析素子の各層の組成を以
下に示す。 （ａ）試薬層−１ ゼラチン １８．７５ ｇ／ｍ2 トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム ２．５ ｇ／ｍ2 炭酸水素ナトリウム ６．３ ｇ／ｍ2 （ｂ）試薬層−２ ゼラチン １２．５ ｇ／ｍ2 トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム １．２５ ｇ／ｍ2 １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．４１７ｇ／ｍ2 （ｃ）展開層 粉末ろ紙（Ｃ） ９３．７５ ｇ／ｍ2 トライトンＸ−１００ １０．４１７ｇ／ｍ2 スチレン−グリシジルメタクリレート（９：１）共重合体 １５．６２５ｇ／ｍ2 硫酸マグネシウム・７水和物 ４．３７５ｇ／ｍ2 ｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物 ０．５４８ｇ／ｍ2 【００１５】この分析素子に、種々のＡＬＰ活性を有す
る血清を滴下し、３７℃で５分間保温した時の反射光学
濃度（ＤR ）の経時変化をｐ−ニトロフェノールの４１
０ｎｍ付近の吸収で測定した。その結果を図１に示す。
すなわち図１は、各種のＡＬＰ活性をもつ血清滴下時の
濃度の経時変化を、時間（分）（横軸）と反射光学濃度
（ＤR ）（縦軸）との関係で示したグラフである。図１
に明らかなように、濃度と経時変化が比例しているの
で、これからＡＬＰ活性を定量することができる。 【００１６】実施例１ 以下のようにして、素子の保存安定性を対比試験した。 （１）水溶液 親水性コロイド溶液に、あらかじめ蒸留水中に溶解した
ｐ−ＮＰＰ・２ナトリウム・６水和物を添加して、試薬
層塗布液とした。この塗布液は黄色を呈していた。これ
を支持体に塗布し、乾燥して展開層とし、素子を作成し
た。この素子自体も黄色を呈しており、反射吸収スペク
トルを測定すると４１０ｎｍ付近に強いピークを示し
た。また、本素子を５℃で１日保存後、同様に反射吸収
スペクトルを測定すると、４１０ｎｍの反射光学濃度は
更に増大しており、経時劣化の著しいことが判明した。 （２）有機溶液（本発明） 前記（１）の基質をメタノール中に溶解し、キシレン中
に分散させた後、この液を粉末ろ紙に含浸させた。この
粉末ろ紙を減圧乾燥し、展開層塗布液中に分散させた。
こうして得た塗布液、及びこれを支持体に塗布し、乾燥
して得た本発明の素子も淡黄色を呈した。そして、この
素子の反射吸収スペクトルを測定すると、４１０ｎｍ付
近に弱いピークしか示さなかった。しかし、この素子を
５℃で１日保存すると黄色を呈し、反射吸収スペクトル
は４１０ｎｍ付近に強いピークを示した。 （３）参考例の微粉末 前記（１）の基質を微粉末状に粉砕し、非溶解性の展開
層塗布液中に直接分散した。こうして得た塗布液、及び
これを支持体に塗布し、乾燥して得た素子も、共に白色
を呈した。これを５℃で１日保存後、その反射吸収スペ
クトルを測定すると、保存前と同様に、４１０ｎｍ付近
にピークが見られなかった。そこで、４０℃で強制劣化
試験を行ったところ、３日目までスペクトルの変化はな
く、１０日目でようやく弱いピークが確認できる程度の
ＤR 変化を示した。 【００１７】参考例２ 粒度の差による性質の差を調べた。前記参考例１のもの
を標準とし（１）、対照として、参考例１の基質をふる
いにかけ５００メッシュ以上の細かいものを用い、サン
ドグラインダー分散を行わない展開層用塗布液を用いた
素子（２）、また、同様に２００メッシュ以上の細かい
ものを用いるがサンドグラインダー分散を行わない展開
層塗布液を用いた素子（３）について試験した。まず、
各展開層用塗布液中の各基質の平均粒径を光学顕微鏡で
測定した。その結果を下記表１に示す。 【００１８】 【表１】 【００１９】次に、各種のＡＬＰ活性を有する人血清
を、これら３つの素子に滴下し、３７℃でインキュベー
トしながら、反射光学濃度（ＤR ）を４分間測定した。
図２に、ＡＬＰ活性（Ｋ−Ｕ）（横軸）と、滴下４分後
のＤR と２分後のＤRの差（ΔＤR ）（縦軸）との関係
で表した検量線を示す。図２から明らかなように、３本
の検量線に有意差はない。次に、これらの検量線にΔＤ
R を代入して、同時再現性（分析精度）を検討した。そ
の結果を下記表２に相対標準偏差（％）として示す。 【００２０】 【表２】 【００２１】表２から明らかなように、ｐ−ＮＰＰ・２
Ｎａ・６Ｈ2 Ｏの粒径が小さくなるほど、相対標準偏差
が小さく、且つ一定であって良好である。これは、基質
粒子が小さくなるほど均一分散が可能となり、且つ分散
状態が安定となり、単位面積当りの付着量が一定化する
ためと推定される。更に、保存安定性について試験した
ところ、３つの素子共、ほぼ同じ安定性を示した。 【００２２】 【発明の効果】以上説明したように、本発明の分析素子
は、ＡＬＰ活性の定量測定を従来の分析技術よりも簡便
に行えるものであり、また問題となる保存安定性につい
ても常法の溶液適用よりもはるかに優れており、もちろ
ん分析精度も十分満足できるという顕著な効果を奏する
ものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】参考例の分析素子に各種ＡＬＰ活性をもつ血清
を滴下したときの時間と反射光学濃度との関係を示すグ
ラフである。 【図２】本発明の分析素子における基質の粒径差に伴う
ＡＬＰ活性と反射光学濃度差との関係を示すグラフであ
る。
を滴下したときの時間と反射光学濃度との関係を示すグ
ラフである。 【図２】本発明の分析素子における基質の粒径差に伴う
ＡＬＰ活性と反射光学濃度差との関係を示すグラフであ
る。
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フロントページの続き
(72)発明者 神山 幹夫
東京都日野市さくら町１番地 小西六写
真工業株式会社内
(72)発明者 栗山 治子
東京都日野市さくら町１番地 小西六写
真工業株式会社内
(72)発明者 ▲アベ▼野 裕子
東京都日野市さくら町１番地 小西六写
真工業株式会社内
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．支持体上に、アルカリホスファターゼの基質が含有
されている層を有するアルカリホスファターゼを定量す
るための乾式分析素子において、固体の基質を溶媒に溶
解して溶液を作製し、前記基質を溶解しない溶媒中に前
記溶液を分散させて作製した分散液を用いることによっ
て、前記基質が前記層中に微粉末の状態で含有されてい
ることを特徴とするアルカリホスファターゼ定量用乾式
分析素子。 ２．該分析素子が、支持体上に少なくとも１層の親水性
コロイド層及び展開層を有して構成されており、該基質
が該展開層中に含有されている請求項１記載のアルカリ
ホスファターゼ定量用乾式分析素子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6234492A JP2668656B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | アルカリホスファターゼ用乾式分析素子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6234492A JP2668656B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | アルカリホスファターゼ用乾式分析素子 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9303184A Division JPS60237999A (ja) | 1984-05-11 | 1984-05-11 | アルカリホスフアタ−ゼ用乾式分析素子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07147998A JPH07147998A (ja) | 1995-06-13 |
| JP2668656B2 true JP2668656B2 (ja) | 1997-10-27 |
Family
ID=16971882
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6234492A Expired - Lifetime JP2668656B2 (ja) | 1994-09-05 | 1994-09-05 | アルカリホスファターゼ用乾式分析素子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2668656B2 (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54104390A (en) * | 1978-01-20 | 1979-08-16 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Composite substance for measuring activity of alkaline phosphatase |
| JPS55164356A (en) * | 1979-06-08 | 1980-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multi-layer analysis sheet for liquid sample analysis |
| JPS57197466A (en) * | 1981-04-29 | 1982-12-03 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Analysis element |
-
1994
- 1994-09-05 JP JP6234492A patent/JP2668656B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54104390A (en) * | 1978-01-20 | 1979-08-16 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Composite substance for measuring activity of alkaline phosphatase |
| JPS55164356A (en) * | 1979-06-08 | 1980-12-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | Multi-layer analysis sheet for liquid sample analysis |
| JPS57197466A (en) * | 1981-04-29 | 1982-12-03 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Analysis element |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07147998A (ja) | 1995-06-13 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |