JP2653460B2 - 脂質膜構造体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は脂質膜構造体，更に詳しくはマンノビオース
モノ脂肪酸エステル及び／又はアミノ−デオキシ−マン
ノビオースのモノ脂肪酸アミドを含有する脂質膜構造体
に関する。

＜産業上の利用分野＞ 本発明の脂質膜構造体は，マクロファージ系細胞に対
し特異的指向性を有し，医療上有用なものである。

＜従来の技術＞ 静脈内投与されたリポソームは，通常肝臓，脾臓，肺
臓等の細網内皮系に分布しやすいが，その分布はリポソ
ーム膜組成やリポソームのサイズにも依存することが知
られている。例えばホスファチジルセリンをリポソーム
膜に添加した場合には肺への分布割合が高まる［ジャー
ナル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンスィ
ズ，73,203（1984）］例や，小さなリポソームほどこれ
ら細網内皮系への分布が抑制される［バイオキミカ・バ
イオフィジカ・アクタ，761,142（1983）］例等が報告
されている。

マクロファージ系細胞への標的化を目的としたリポソ
ームの製剤研究としては，例えばSzoka等の報告［バイ
オケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーションズ，110,140〜146（1983）］がある。本研究に
おいては，指向性を生じさせるためにリポソーム脂質膜
に含有される物質としてジマンノシルグリセリドの脂肪
酸ジエステルが用いられているが，本物質はルテウス球
菌から単離された天然物質であり，工業的生産が困難で
ある。

又，合成物質をリポソーム脂質膜修飾物質として用い
て，マイクロファージ系細胞に標的化させる研究として
は,Bachhawat等の報告［バイオキミカ・バイオフィジカ
・アクタ，632,562〜572（1980）］やShen等の報告［バ
イオキミカ・バイオフィジカ・アクタ，674,19〜29（19
81）］等がある。

しかしながら前者においては,p−ニトロフェニル−Ｄ
−マンノシドを還元したｐ−アミノフェニル−Ｄ−マン
ノシドと，天然リン脂質の中では純品として得るには非
常に高価なホスファチジルエタノールアミンとを，グル
タールアルデヒドでカップリングさせた三化合物からな
る縮合物を用いている。又，後者においては，コレステ
ロールの３位水酸基にヘキシル基−（CH₂）_６−を結合
し，更にチオ基−Ｓ−を介してＤ−マンノースの１位と
結合させた化合物を用いている。前者，後者ともに化合
物としては複雑な構造を有し，原価や合成方法等の工業
的生産性の面，或は生体に投与した後の安全性の面等か
ら有益な方法とは言い難い。

以上記した如く，マクロファージ系細胞への標的化を
目的としたリポソーム製剤の研究は行われてきてはいる
が，その標的化の効率や工業的生産性等を考えた場合，
その目的が達成されたとは言いは難い。

＜発明が解決しようとする問題点＞ 本発明者等は，より単純な修飾物質によって，効率的
なマイクロファージ系細胞への特異的指向性を有し，か
つ工業的に再現性よく大量生産可能な脂質膜構造体につ
いて鋭意検討した結果，本発明を完成した。

＜発明の構成＞ 本発明はマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又
はアミノ−デオキシ−マンノビオースのモノ脂肪酸アミ
ド（以下，マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又
はアミド）を含有する脂質膜構造体に関する。

本発明にかかわるマンノビオースモノ脂肪酸エステル
とは，マンノビオースの水酸基のいずれか一つにアシル
基が結合した化合物を意味する。本発明にかかわるアミ
ノ−デオキシ−マンノビオースのモノ脂肪酸アミドと
は，マンノビオースの水酸基のいずれか一つがアシルア
ミノ基に置換した化合物を意味する。

即ち，本発明にかかわるマンノビオースモノ脂肪酸エ
ステル及びアミノ−デオキシ−マンノビオースのモノ脂
肪酸アミドは下記一般式（Ｉ）で示すことができる。

［式中,R₁〜R₅は−OH,−OR₆,−NHR₆（R₆はアシル基を意
味する）又は以下の式（ａ），（ｂ），（ｃ），（ｄ）
もしくは（ｅ）で示される基を意味する。

但し,R₁〜R₅の１つは−Ｏ−R₆又は−NHR₆であり，残
りの４つのうち１つは下記式（ａ）〜（ｅ）で示される
基のいずれかであり，その他の３つは−OHである。］ 式（Ｉ）において、式（ａ）〜（ｅ）で示される基に
ついては式（ａ）で示される基が好ましく，中でもR₃,R
₄又はR₆が該基である化合物が好ましい。

アシル基としては炭素数12〜30のものを好適に使用す
ることができ，その例としてはドデカノイル，トリデカ
ノイル，テトラデカノイル，ペンタデカノイル，ヘキサ
デカノイル，ヘプタデカノイル，オクタデカノイル，ノ
ナデカノイル，エイコサノイル，ヘニコサノイル，ドコ
サノイル，トリコサノイル，テトラコサノイル，ヘキサ
コサノイル，トリアコンタノイル,9−ヘキサデセノイ
ル,9−オクタデセノイル,9,12−オクタデカジエノイル,
9,12,15−オクタデカトリエノイル,11−エイコセノイ
ル,11,14−エイコサジエノイル,11,14,17−エイコサト
リエノイル,4,8,12,16−エイコサテトラエノイル,13−
ドコセノイル,4,8,12,15,19−ドコサペンタエノイル,15
−テトラコセノイル,2−デカニルヘキサデカノイル,2−
テトラデシルヘキサデカノイル,2−テトラデシルヘキサ
デセノイル,2−テトラデセニルヘキサデカノイル等の直
鎖もしくは分枝状の飽和もしくは不飽和脂肪酸由来のア
シル基があげられる。

又，式（Ｉ）において−NHR₆及び−OR₆が結合する位
置については特に限定されないが、一般にはR₁が−NHR₆
又は−OR₆であることが望ましい。

本発明にかかわるマンノビオースモノ脂肪酸エステル
は，以下のようにして製造することができる。即ち，酵
母由来のα−1,6−マンノビオース，コンニャク由来の
β−1,4−マンノビオース，茸の一種から得られるα−
1,3−マンノビオース等のマンノビオースに通常のアシ
ル化剤，例えば脂肪酸ハライド又は脂肪酸無水物を水系
溶媒中で又は非水系溶媒中塩基の存在下で反応させるこ
とにより製造することができる。得られたマンノビオー
スモノ脂肪酸エステルにおいて，脂肪酸エステルの置換
位置が異なるものが複数存在する場合には，これらを分
離することなくそのまま用いても良いし，更にカラムク
ロマトグラフィー等の分離手段によって単一成分のマン
ノビオースモノ脂肪酸エステルに分離したのち用いても
良い。

又，マンノビオースの還元性末端側マンノースの１位
水酸基に選択的にアシル基をエステル結合させるには,R
oulleau等［テトラヘドロン・レターズ，24,719〜722
（1983）］の方法を使用すればよい。即ち，ピリジン等
の塩基の存在下Ｎ−アシルチアゾリジン−２−チオン,4
−アシルオキシニトロベンゼン,2−アシルチオベンゾチ
アゾール,8−アシルオキシキノリン等の反応性アシル化
合物で前記の如きマンノビオースを処理することにより
還元性末端側のマンノースの１位水酸基にアシル基が結
合したマンノビオースモノ脂肪酸エステルを得ることが
できる。

本発明にかかわるアミノ−デオキシ−マンノビオース
のモノ脂肪酸アミドは，以下のようにして製造すること
ができる。即ち，ベンジル基，ベンジリデン基，アセチ
ル基等の保護基を適宜組合せて前記の如きマンノビオー
スの水酸基を保護し，次いで公知の方法に従いマンノビ
オースの目的水酸基位置にアミノ基を導入し，更に該ア
ミノ基に活性エステル法等の方法を用いてアシル基を結
合させ，次いで保護基を脱離させることによりマンノビ
オースの目的水酸基位置にアシルアミノ基が結合したア
ミノ−デオキシ−マンノビオースのモノ脂肪酸アミドを
製造することができる。

例えば，マンノビオースの還元性末端側マンノースの
１位水酸基がアシルアミノ基に置換した化合物を製造す
るには以下のようにすればよい。即ち，マンノビオース
の水酸基をアセチル基で保護したのち，還元性末端側マ
ンノースの１位アセチルオキシル基をブロム原子に置換
させる。次いでアジド塩と反応させて該ブロム基をアジ
ド基に置換し，更に還元することにより還元性末端側マ
ンノースの１位水酸基かアミノ基に置換したマンノビオ
ースモノアミンを得ることができる。該アミノ基に活性
エステル法を用いてアシル基を結合させ，次いで目的位
置以外の水酸基をナトリウムメトキシド等のアルカリを
用いて脱保護することにより目的とするマンノビオース
の還元性末端側マンノースの１位水酸基がアシルアミノ
基に置換したアミノ−デオキシ−マンノビオースのモノ
脂肪酸アミドを製造することができる。

又，マンノビオースの還元性末端側もしくは非還元性
末端側マンノースの２位水酸基がアシルアミノ基に置換
した化合物は以下のようにすれば製造することができ
る。即ち，マンノサミンとマンノースを公知の縮合反応
を用いて縮合させ，次いで得られたマンノピラノシル−
マンノサミン又は２−デオキシ−２−アミノ−マンノピ
ラノシル−マンノピラノースを上記活性エステル法を用
いてR₆COOHと反応させることにより，マンノビオースの
還元性末端側もしくは非還元性末端側マンノースの２位
水酸基がアシルアミノ基に置換した化合物を製造するこ
とができる。

本発明の脂質膜構造体とは極性脂質の極性基が界面の
水相側に向って配列した膜構造を有する粒子を意味し，
その例としてはリポソーム，水溶性ミセル及びマイクロ
エマルジョン等があげられる。

次に本発明のマンノビオースモノ脂肪酸アミド及び／
又はアミドを含有する脂質膜構造体の製造法を前記のよ
うな脂質膜構造体の例について説明する。

ａ） マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はア
ミドを含有するリポソームの製造法 ホスファチジルコリン，スフィンゴミエリン，ホスフ
ァチジルエタノールアミン等のリン脂質，糖脂質並びに
ジアルキル型合成界面活性剤等の膜成分物質を用いて公
知の方法［アニュアル，レビュー，オブ，バイオフィジ
ックス，アンド，バイオエンジニアリング ９,467〜50
8（1980）］に従いリポソームの水分散液を調製する。
かかるリポソームは膜安定化剤としてコレステロール，
コレスタノール等のステロール類、ジアルキルホスフェ
ート，ジアシルホスファチジン酸，ステアリルアミン等
の荷電物質及びα−トコフェロール等の酸化防止剤等を
含んでいても良い。調製したリポソームの水分散液にマ
ンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はアミドの水
溶液を加えて一定時間放置，好ましくは膜の相転移温度
以上もしくは40℃以上に加温し，次いで放冷することに
より目的とするマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び
／又はアミドを含有するリポソームを製造することがで
きる。又，前記膜成分物質とマンノビオースモノ脂肪酸
エステル及び／又はアミドをあらかじめ混合し，これを
公知のリポソームの製造法に従って処理することによっ
ても目的のリポソームを製造することができる。

ｂ） マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はア
ミドを含有するミセルの製造法 ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Twee
n），脂肪酸ナトリウム及びポリオキシエチレン等のミ
セル形成界面物質を，ミセル形成臨界濃度以上の濃度で
水に加え，ミセルの水分散液を調製する。調製したミセ
ルの水分散液にマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び
／又はアミドの水溶液を加え一定時間放置，好ましくは
40℃以上に加温し，次いで放冷することにより目的とす
るマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はアミド
を含有するミセルを製造することができる。又，ミセル
形成物質とマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又
はアミドをあらかじめ混合し，次いで公知のミセルの製
造法に従って処理することによっても目的のミセルを製
造することができる。

ｃ） マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はア
ミドを含有するマイクロエマルジョンの製造法 前記ｂ）に従って製造したマンノビオースモノ脂肪酸
エステル及び／又はアミドを含有するミセルに大豆油等
の油脂を加えてミセル内を飽和させ，不可逆的な油層分
離が生じない程度まで油相を増加させることにより目的
とするマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はア
ミドを含有するマイクロエマルジョンを製造することが
できる。又，公知の方法に従って調製したマイクロエマ
ルジョンにマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又
はアミドの水溶液を加え一定時間放置，好ましくは40℃
以上に加温し，次いで放冷することによっても目的のマ
イクロエマルジョンを製造することができる。

以上のような脂質膜構造体の製造法において全脂質成
分に対するマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又
はアミドの割合を変化させることにより生成する脂質膜
構造体の種類を変化させることができる。例えば，脂質
としてマンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はア
ミド以外にホスファチジルコリンのみを用いた場合に
は，マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はアミ
ドの全脂肪成分に対する割合を約2/3モル比以下にする
とリポソームが生成し，またそれ以上にするとミセル又
はマイクロエマルジョンが生成する。

このようにして製造される本発明の脂質膜構造体がマ
イクロファージ系細胞への指向性を有するには，通常そ
の調製工程においてマンノビオースモノ脂肪酸エステル
及び／又はアミドの全脂質膜成分に対する割合を約1/40
モル比以上にすることが望ましい。

本発明の脂質膜構造体が特異的に指向するマクロファ
ージ系細胞としては肝クッパー細胞，マクロファージ，
単球，脾細胞，リンパ球，肺胞マクロファージ等をあげ
ることができる。

本発明の脂質膜構造体が保持しうる薬物は脂質膜構造
体の種類によって異なる。例えば，リポソームが保持し
うるものとしては特に制限がなく，水溶性薬物及び脂溶
性薬物，例えばインターフェロン及びムラミルジペプチ
ド誘導体等をあげることができる。又，ミセルの場合に
は水難溶性の薬物を，更にマイクロエマルジョンの場合
には脂溶性薬物を保持可能なものとしてあげることがで
きる。

本発明の脂質膜構造体においてマンノビオースモノ脂
肪酸エステル及び／又はアミドは脂質膜構造体に疎水性
相互作用を介して強固に結合して組込まれており，又，
モノマーとして遊離するマンノビオースモノ脂肪酸エス
テル及び／又はアミドは非常に少ないことをゲル濾過法
によって確認した。

＜発明の効果＞ 本発明の脂質膜構造体は優れたマクロファージ系細
胞，特に肝クッパー細胞への指向性を有し，かつ再現性
よく大量生産することができる。又，従来の技術におい
てマクロファージ系細胞への指向性を生じさせることが
可能な脂質膜構造体はリポソームのみであったが，本発
明においてはリポソームのみならず，ミセル，マイクロ
エマルジョン等にもマクロファージ系細胞への指向性を
生じさせることができる。更に，従来技術において脂質
膜構造体にマクロファージ系細胞への指向性を生じさせ
る物質，即ち，脂質膜構造体の表面修飾物質は水に不溶
であったが，本発明において使用されるマンノビオース
モノ脂肪酸エステル及び／又はアミドは水に可溶であ
り，既製の脂質膜構造体の水分散液をマンノビオースモ
ノ脂肪酸エステル及び／又はアミドの水溶液と混合し，
次いでインキュベートすることにより容易に目的の脂質
膜構造体を得ることができる。

更に本発明の脂質膜構造体は静脈内に注射すると当初
肝クッパー細胞に良く取りこまれ，その後時間を経るに
つれてこの他に血流中を遊走しているマクロファージや
単球等の白血球及び脾細胞，肺胞マクロファージにも取
り込まれることが期待できる。又，本脂質膜構造体を腹
腔内注射や皮下注射，皮内注射した場合には肝クッパー
細胞を主体とした肝への分布が静脈内注射時に比べて減
少し，リンパやリンパ節への分布が増大することが期待
できる。

次に実施例により本発明を説明するが，本発明はこれ
らに限定されるものではない。

＜参考例＞ 参考例１ ２−０−α−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラ
ノース400mgを水1mlに溶解し，これに10％苛性ソーダ水
溶液を加えpH9.0に調整した。次に10％苛性ソーダ水溶
液で反応pHを9.0に保ちながら，別にアラキジン酸と塩
化チオニルより調製したアラキジン酸クロライド277mg
を50℃で徐々に加え，同温で１時間撹拌した。

反応終了後，生成した沈殿を濾取し，メタノールより
再結晶した。得られた結晶化物をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー［溶媒系：クロロホルム／メタノール＝
30/1〜５−１］で２回精製して２−０−α−Ｄ−マンノ
ピラノシル−Ｄ−マンノピラノースのモノエイコサン酸
エステルの複数成分混合物を得た。

収量 50mg TLC:Rf値0.5以下（複数成分） （CHCl₃/MeOH＝2/1） 元素分析値:C₃₂H₆₀O₁₂（分子量636.49）として 計算値 C 60.38,H 9.43,O 30.15 実験値 C 60.75,H 10.05,O 29.20 IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.40（39H,Eicosanoyl） 2.8〜4.0（21H,Mannobiose ring protons） 参考例２ ４−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラ
ノース400mgをヘキサメチルフォスフォリックトリアミ
ド（HMPA）8mlに溶解し，これにピリジン8ml加えた。別
にアラキジン酸と塩化チオニルより調製したアラキジン
酸クロライド730mgをトルエン1.5mlに溶解し，上記反応
液に30℃以下で加えた後,80〜85℃で約４時間撹拌下反
応させた。

反応終了後，反応液を減圧濃縮した後，シラップをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー［溶媒系：クロロホ
ルム／アセトン＝30/1〜5/1］で２回精製し,4−０−β
−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラノースのモノ
エイコサン酸エステルの４成分混合物を得た。

収量 447mg TLC:Rf値0.5以下（４成分混合物） （CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₃₂H₆₀O₁₂（分子量636.49）として 計算値 C 60.38,H 9.43,O 30.15 実験値 C 60.50,H 9.94,O 29.56¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.40（39H,Eicosanoyl） 2.8〜4.0（21H,Mannobiose ring protons） 参考例３ 参考例２で得た４成分混合物300mgをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー［溶媒系：クロロホルム／メタノ
ール＝10/1〜7/1］で分画し，クロロホルム／メタノー
ル（1/1），エーテルで粉末化してC₆′位の水酸基にエ
イコサン酸がモノエステル結合した４−０−（６−０−
エイコサノイル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−Ｄ−マ
ンノピラノースを得た。本化合物をマンノビオースモノ
アラキジン酸エステル（Ｉ）と命名した。

収量;126mg 分解点;152〜158℃ TLC;Rf値0.5（CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₃₂H₆₀O₁₂（分子量636.49）として 計算値 C 60.38,H 9.43,O 30.15 実験値 C 60.28,H 9.82,O 29.90¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.7〜1.40（39H,Eicosanoyl） 2.8〜4.0（21H,Mannobiose ring protons）¹³ C−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 173.0,100.9,100.8,93.8,77.9,74.2,73.2 71.0,70.6,70.4,69.0,66.9.63.7,60.6 参考例４ 参考例３の４−０−（６−０−エイコサノイル−β−
Ｄ−マンノピラノシル）−Ｄ−マンノピラノースを溶出
したカラムを，更にクロロホルム／メタノール＝5/1〜1
/1の溶媒で溶出することによって,C₆,C₃′又はC₂位の水
酸基にエイコサン酸がモノエステル結合した６−０−エ
イコサノイル−４−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ
−マンノピラノース,4−０−（３−０−エイコサノイル
−β−Ｄ−マンノピラノシル）−Ｄ−マンノピラノース
及び２−０−エイコサノイル−４−０−β−Ｄ−マンノ
ピラノシル−Ｄ−マンノピラノースの３成分混合物を得
た。本混合物をマンノビオースモノアラキジン酸エステ
ル（II）と命名した。

収量;108mg 分解点;148〜152℃ TLC;Rf値0.12（３成分）（CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₃₂H₆₀O₁₂（分子量636.49）として 計算値 C 60.38,H 9.43,O 30.15 実験値 C 60.67,H 9.73,O 29.60¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.7〜1.4（39H,Eicosanoyl） 2.8〜4.0（Mannobiose ring protons）¹³ C−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 173.0,172.9,172.8,103.1,102.6,96.4,81.4 79.1,77.4,74.3,73.6,73.3,71.1,70.7, 70.5,70.3,69.1,67.5,67.0,65.1,63.9, 63.7,61.1,61.0 参考例５ ４−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラ
ノース300mgをHMPA 6mlに溶解し，これにピリジン6mlを
加えた。別にミリスチン酸と塩化チオニルより調製した
ミリスチン酸クロライド365mgをトルエン1mlに溶解し，
上記反応液に30℃以下で加えた後80〜85℃で４時間，撹
拌下反応させた。反応終了後，反応液を減圧濃縮し，得
られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
［溶媒系：クロロホルム／メタノール＝30/1〜5/1］で
２回精製し,4−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マ
ンノピラノースのモノミリスチン酸エステルの複数成分
混合物を得た。

収量;237mg TLC;Rf値0.48以下（複数成分） （CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₂₆H₄₈O₁₂（分子量552.43）として 計算値 C 56.52,H 8.69,O 34.73 実験値 C 56.74,H 9.97,O 33.29¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.40（27H,Myristoyl） 2.8〜4.0（Mannobiose ring protons） 参考例６ 参考例５で得た複数成分のマンノビオースモノミリス
チン酸エステル150mgをシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー［溶媒系：クロロホルム／メタノール＝5/1〜3/
1］で更に２回分画し,C₆位の水酸基にミリスチン酸がエ
ステル結合した６−０−ミリストイル−４−０−β−Ｄ
−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラノースを得た。

収量;32mg TLC;Rf値0.15（CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1735（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₂₆H₄₈O₁₂（分子量552.43）として 計算値 C 56.52,H 8.69,O 34.73 実験値 C 56.22,H 9.01,O 34.77¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.40（27H,Myristoyl） 2.8〜4.0（Mannobiose ring protons）¹³ C−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 173.1,100.9,95.8,92.4,77.7,77.4,73.6, 70.7,70.6,70.1,69.1,67.0,63.5,61.4 参考例７ ミリスチン酸クロライド365mgをステアリン酸クロラ
イド449mgに変更した以外は参考例５と同様に操作して
４−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラノ
ースのモノステアリン酸エステルの複数成分混合物を得
た。

収量;267mg TLC;Rf値0.51以下（複数成分） （CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₃₀H₅₆O₁₂（分子量608.47）として 計算値 C 59.12,H 9.20,O 31.53 実験値 C 59.11,H 9.11,O 31.78¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.4（35H,Stearoyl） 2.8〜4.0（Mannobiose ring protons） 参考例８ ミリスチン酸クロライド365mgをベヘイン酸クロライ
ド530mgに変更した以外は参考例５と同様に操作して４
−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラノー
スのモノベヘイン酸エステルの複数成分混合物を得た。

収量;262mg TLC;Rf値0.51以下（複数成分） （CHCl₃/MeOH＝2/1） IR（KBr）;2845,2910,1465（CH）,1730（−CO−Ｏ−） 元素分析値:C₃₄H₆₄O₁₂（分子量664.51）として 計算値 C 61.45,H 9.63,O 28.88 実験値 C 61.30,H 9.99,O 28.71¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.7〜1.40（43H,Behenoyl） 2.8〜4.0（21H,Mannobiose ring protons） 参考例９ １） ４−０−（2,3,4,6−テトラ−０−アセチル−β
−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,6−トリ−０−アセチ
ル−Ｄ−マンノピラノシルアミン（以下，化合物Ａ） ４−０−β−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラ
ノース2gにピリジン16ml,無水酢酸10mlを加え，室温で
一夜撹拌した。生成物を常法で処理して白色粉末状の４
−０−（2,3,4,6−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−マ
ンノピラノシル）1,2,3,6−テトラ−０−アセチル−Ｄ
−マンノピラノース3.98gを得た。これをジクロルメタ
ン20mlに溶解し，氷冷下，臭化水素飽和酢酸溶液20ml
（30％,w/v）を加え,0℃,15時間撹拌した。反応液を氷
水中に注ぎ，クロロホルムで抽出し，氷水，氷冷炭酸水
素ナトリウム水の順に洗浄し，乾燥（無水硫酸マグネシ
ウム）後，濃縮し,4−０−（2,3,4,6−テトラ−０−ア
セチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）2,3,6−トリ−０
−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルブロミド3.97gを得
た。得られた化合物3.97gをジメチルホルムアミド80ml
に溶解し，アジ化ナトリウム8.0gを加えて一夜撹拌し
た。反応混合物を氷水へ注ぎ，クロロホルムで抽出し，
氷水,5％塩酸水，氷冷炭酸水素ナトリウム水で洗浄後，
乾燥し，未精製の４−０−（2,3,4,6−テトラ−０−ア
セチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,6−トリ−
０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアジド3,84gを得
た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶媒
系：クロロホルム−アセトン（30:1）］で精製し,4−０
−（2,3,4,6−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−マンノ
ピラノシル）−2,3,6−トリ−０−アセチル−Ｄ−マン
ノピラノシルアジド2.98gを得た。このアジド2.88gをメ
タノール140mlに溶解し，二酸化白金300mg存在下,2.0時
間接触還元した後，触媒をセライトで濾取し，濾液を濃
縮して，非晶質の表題化合物A 2.57gを得た。

TLC;Rf値0.3（クロロホルム：エタノール＝19:1） ２） Ｎ−エイコサノイル−４−０−（2,3,4,6−テト
ラ−０−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,
6−トリ−０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物A 580mgをエタノール25mlに溶解し，これ
にベンゼン30mlに溶解したアラキジン酸627mgを加えた
後,N−エトキシカルボニル−２−エトキシ−1,2−ジヒ
ドロキノリン（EEDQ）494mgを加え室温で48時間撹拌し
た。反応液を冷却し，析出した未反応のアラキジン酸を
濾取した後，濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー［溶媒系：クロロホルム−
アセトン（30:1）］で精製すると白色粉末状の標記物質
が得られた。

収量;696mg TLC;Rf値 0.45（クロロホルム：アセトン＝6:1）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（39H,Eicosanoyl） 1.97〜2.20（21H,all s,OAc×７） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OAc）,1660（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₄₆H₇₅O₁₆N（分子量930.10）として 計算値 C 59.40,H 8.13,N 1.51 実験値 C 59.60,H 8.25,N 1.39 ３） Ｎ−エイコサノイル−４−０−β−Ｄ−マンノピ
ラノシル−β−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物550mgをクロロホルム40ml,メタノール80ml
に溶解しナトリウムメチラート40mgを加え，室温で６時
間撹拌した。生じた析出物を濾取した後，これをメタノ
ール，エーテルで充分洗浄し表題化合物を得た。本化合
物をマンノビオースモノアラキジン酸アミドと命名し
た。

収量;240mg 融点;194〜200℃¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.50（39H,Eicosanoyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（OH,NH）,1650（アミドＩ）,153
0（アミドII） 元素分析値:C₃₂H₆₁O₁₁N（分子量635.83）として 計算値 C 60.45,H 9.67,N 2.20 実験値 C 60.25,H 9.57,N 2.15 参考例10 １） Ｎ−ラウロイル−４−０−（2,3,4,6−テトラ−
０−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）2,3,6−ト
リ−０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 化合物A 390mgを参考例９の２）のアラキジン酸627mg
をラウリル酸270mgに変更した以外は参考例９の２）と
同様に操作して表題化合物を得た。

収量;465mg TCL;Rf値0.44（クロロホルム：アセトン＝6:1） 融点;194〜200℃¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（23H,Lalroyl） 1.97〜2.21（21H,all s,OAc×７） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OAc）,1660（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₃₈H₅₉O₁₈N（分子量817.87）として 計算値 C 55,81,H 7.27,N 1.17 実験値 C 55.60,H 7.38,N 1.58 ２） Ｎ−ラウロイル−４−０−β−Ｄ−マンノピラノ
シル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物360mgを無水メタノール25mlに溶解し，ナ
トリウムメチラート25mgを加え参考例９の３）と同様に
操作して表題化合物を得た。

収量;158mg¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.50（23H,Lauroyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（OH,NH）,1650（アミドＩ）,153
0（アミドII） 元素分析値:C₂₄H₄₅O₁₁N（分子量523.61）として 計算値 C 55.05,H 8.66,N 2.68 実験値 C 54.82,H 8.72,N 2.67 参考例11 １） Ｎ−ミリストイル−４−０−（2,3,4,6−テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,6
−トリ−０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 化合物A 390mgを参考例９の２）のアラキジン酸627mgを
ミリスチン酸315mgに変更した以外は参考例９の２）と
同様に操作して表題化合物を得た。

収量;458mg TLC;Rf値0.43（クロロホルム：アセトン＝6:1）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（27H,Myristoyl） 1.97〜2.22（21H,all S,OAc×７） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OAc）,1665（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₄₀H₆₃O₁₈N（分子量845,93）として 計算値 C 56.79,H 7.51,N 1.66 実験値 C 56.38,H 7.71,N 1.58 ２） Ｎ−ミリストイル−４−０−β−Ｄ−マンノピラ
ノシル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物360mgを無水メタノール25mlに溶解し，ナ
トリウムメチラート25mgを加え参考例９の３）と同様に
操作して表題化合物を得た。

収量;175mg¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.50（27H,Myristoyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（OH,NH）,1650（アミドＩ）,153
0（アミドII） 元素分析値:C₂₆H₄₉O₁₁N（分子量551.67）として 計算値 C 56.61,H 8.95,N 2.54 実験値 C 56.88,H 8.77,N 2.48 参考例12 １） Ｎ−パルミトイル−４−０−（2,3,4,6−テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,6
−トリ−０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 化合物A 390mgを参考例９の２）のアラキジン酸627mg
をバラミチン酸346mgに変更した以外は参考例９の２）
と同様に操作して表題化合物を得た。

収量;480mg TLC;Rf値0.45（クロロホルム：アセトン＝6:1）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（31H,Palmitoyl） 1.97〜2.20（21H,all s,OAc×７） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OAc）,1660（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₄₂H₆₇O₁₈N（分子量873.98）として 計算値 C 57.72,H 7.53,N 1.60 実験値 C 57.82,H 7.32,N 1.68 ２） Ｎ−パルミトイル−４−０−β−Ｄ−マンノピラ
ノシル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物360mgを無水メタノール25mlに溶解し，ナ
トリウムメチラート25mgを加え参考例９の３）と同様に
操作して表題化合物を得た。

収量;160mg¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.52（31H,Palmitoyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（NH）,1650（アミドＩ）,1530
（アミドII） 元素分析値:C₂₈H₅₃O₁₁N（分子量579.72）として 計算値 C 58.01,H 9.12,N 2.42 実験値 C 58.18,H 9.50,N 2.32 参考例13 １） Ｎ−ステアロイル−４−０−（2,3,4,6−テトラ
−０−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−2,3,6
−トリ−０−アセチル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 化合物A 390mgを参考例９の２）のアラキジン酸627mg
をステアリン酸383mgに変更した以外は参考例９の２）
と同様に操作して表題化合物を得た。

収量;472mg TLC;Rf値 0.45（クロロホルム：アセトン＝6:1）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（35H,Stearoyl） 1.97〜2.22（21H,all s,OAc×７） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OAc）,1660（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₄₄H₇₁O₁₈N（分子量902.04）として 計算値 C 58.59,H 7.93,N 1.55 実験値 C 58.63,H 8.02,N 1.70 ２） Ｎ−ステアロイル−４−０−β−Ｄ−マンノピラ
ノシル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物360mgを無水メタノール25mlに溶解し，ナ
トリウムメチラート25mgを加え参考例９の３）と同様に
操作して表題化合物を得た。

収量;192mg¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.50（35H,Stearoyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（OH,NH）,1650（アミドＩ）,153
0（アミドII） 元素分析値:C₃₀H₅₇O₁₁N（分子量607.78）として 計算値 C 59.29,H 9.45,N 2.30 実験値 C 59.42,H 9.58,N 2.58 参考例14 １） Ｎ−オレイル−３−０（2,3,4,6−テトラ−０−
ベンゾイル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−2,4,6−ト
リ−０−ベンゾイル−１−デオキシ−１−Ｎ−オレオイ
ル−Ｄ−マンノピラノシルアミン ３−０−α−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ−マンノピラ
ノース500mgを参考例９の１）の無水酢酸10mlを塩化ベ
ンゾイル3.2mlに変更した以外は参考例９の１）と同様
に操作して３−０−（2,3,4,6−テトラ−０−ベンゾイ
ル−α−Ｄ−マンノピラノシル）−2,4,6−トリ−０−
ベンゾイル−Ｄ−マンノピラノシルアミン410mgを得
た。

次のこのアミン410mgを参考例９の２）のアラキジン
酸627mgをオレイン酸403mgに変更した以外は参考例９の
２）と同様に操作して表題化合物を得た。

収量;380mg TLC;Rf値0.43（クロロホルム：アセトン＝6:1）¹ H−NMR（90MHz,CDCl₃/TMS）；δ 0.80〜1.60（33H,Oleoyl） 6.22（d,1H,J_NH.1＝9Hz,NH） 7.2〜8.3（35H,Bz×７） IR（KBr）;3300（NH）,1750（OBz）,1660（アミドＩ）,
1540（アミドII） 元素分析値:C₈₁H₈₉O₁₈N（分子量1364.59）として 計算値 C 71.30,H 6.57,N 1.03 実験値 C 71.12,H 6.87,N 0.98 ２） Ｎ−オレイル−２−０−α−Ｄ−マンノピラノシ
ル−Ｄ−マンノピラノシルアミン 上記化合物360mgを無水メタノール25mlに溶解し，ナ
トリウムメチラート25mgを加え参考例９の３）と同様に
操作して表題化合物を得た。

収量:102mg¹ H−NMR（90MHz,DMSO−d₆/TMS）；δ 0.80〜1.50（33H,Oleoyl） 4.60（d,1H,J_NH.1＝10Hz,NH） IR（KBr）;3400〜3300（OH,NH）,1650（アミドＩ）,153
5（アミドII） 元素分析値:C₃₀H₅₅O₁₁N（分子量605.76）として 計算値 C 59.48,H 9.15,N 2.31 実験値 C 59.62,H 9.43,N 2.22 実施例１ 卵黄ホスファチジルコリン8.0μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmcol,参考例３で
得たマンノビオースモノアラキジン酸エステル（Ｉ）1.
6μmolを試験管中でクロロホルム及びメタノール混液
（容積比2:1）に溶かした。次に窒素ガス気流中で有機
溶媒を除去して試験管のガラス壁にlipid filmを生成さ
せた。ここにリン酸緩衝化生理食塩水（pH7.4,以下PBS
と略す）を3.2mlを加えて振盪し，更に軽く超音波処理
してリポソームの懸濁液を調製した。これを40〜45℃に
加温し，次いで0.2μｍの孔径を有するポリカーボネー
ト製メンブランフィルターを通過させ，粒径0.2μｍ以
下のリポソームの懸濁液を調製した。次にこの1mlをゲ
ル濾過クロマトグラフィー［カラム:Sepharose CL−4B,
1.5cmφ×15cm,溶出液:PBS（pH7.4）］にかけて更にリ
ポソーム分画としてvoid volumeに溶出する画分7.7mlを
得た。このリポソーム分画につき，卵黄ホスファチジル
コリンのコリン基をマーカーとして酵素法により定量
し，全脂質として0.5μmol/mlとなるようにPBS（pH7.
4）により希釈した。

実施例２ 卵黄ホスファチジルコリン8.8μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmol,参考例４で得
たマンノビオースモノアラキジン酸エステル（II）0.8
μmolをクロロホルム及びメタノール混液に溶かす以外
は実施例１と同様に処理し，リポソーム懸濁液1mlから
ゲル濾過により6mlのリポソーム画分を得たのち，希釈
して全脂質として0.5μmol/mlとなるようにした。

実施例３ 卵黄ホスファチジルコリン8.0μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmol,マンノビオー
スモノアラキジン酸エステル（II）1.6μmolをクロロホ
ルム及びメタノール混液に溶かす以外は実施例１と同様
に処理し，リポソーム懸濁液1mlからゲル濾過により6.9
mlのリポソーム画分を得たのち，希釈して全脂質として
0.5μmol/mlとなるようにした。

実施例４ 卵黄ホスファチジルコリン8.8μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmol,参考例９で得
たマンノビオースモノアラキジン酸アミド0.8μmolをク
ロロホルム及びメタノール混液（容積比2:1）に溶かす
以外は実施例１と同様に処理し，リポソーム懸濁液1ml
からゲル濾過により6mlのリポソーム画分を得たのち，
希釈して全脂質として0.5μmol/mlとなるようにした。

実施例５ 卵黄ホスファチジルコリン8.0μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmol,マンノビオー
スモノアラキジン酸アミド1.6μmolをクロロホルムメタ
ノール混液に溶かす以外は実施例１と同様に処理し，リ
ポソーム懸濁液1mlからゲル濾過により6.8mlのリポソー
ム画分を得たのち，希釈して全脂質として0.5μmol/ml
となるようにした。

対照例１ 卵黄ホスファチジルコリン8.8μmol,コレステロール
5.6μmol,ジセチルホスフェート0.8μmolをクロロホル
ム及びメタノール混液に溶かすこと，及びlipid filmに
加えるPBS（pH7.4）量が2.88mlであること以外は実施例
１と同様に処理し，リポソーム懸濁液1mlからゲル濾過
により6.2mlのリポソーム画分を得たのち，希釈して全
脂質として0.5μmol/mlとなるようにした。

実施例６ Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン68.6μ
mol,コレステロール68.6μmol,ジセチルホスフェート6.
8μmol,マンノビオースモノアラキジン酸エステル
（Ｉ）16μmolを試験管中でクロロホルム及びメタノー
ル混液（容積比2:1）に溶かした。次に窒素ガス気流中
で有機溶媒を除去して試験管のガラス壁にlipid filmを
生成させた。ここに³H−イヌリン240μCiを含有する1mM
イヌリンのPBS（pH7.4）溶液6mlを加えて振盪し，更に
軽く超音波処理してリポソームの懸濁液を調製した。こ
れを40〜45℃に加温し，次いで0.2μｍの孔径を有する
ポリカーボネート製メンブランフィルターに通過させ，
粒径0.2μｍ以下のリポソーム懸濁液を調製した。次に
これを超遠心分離（15万×g,1時間,2回）し，上澄みを
除去することによりリポソームに保持させなかったイヌ
リンを除去し,PBS（pH7.4）を加え，全量5.0mlのリポソ
ームの懸濁液を得た。Ｌ−α−ジミリストイルホスファ
チジルコリンのコリン基をマーカーとして酵素法により
定量したところ得られた懸濁液は0.5mlあたり全脂質と
して10μmolの脂質を有していた。又，このリポソーム
の懸濁液は0.5mlあたり0.82μCiのイヌリンをリポソー
ム内に保持していた。

実施例７ マンノビオースモノアラキジン酸エステル（Ｉ）16μ
molの代わりにマンノビオースモノアラキジン酸エステ
ル（II）16μmolを用いる以外は実施例６と同様に処理
し，全量5.7mlをリポソームの懸濁液を得た。得られた
懸濁液は0.5mlあたり全脂質として10μmolの脂質を有
し，又,0.95μCiのイヌリンをリポソーム内に保持して
いた。

実施例８ Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン72.4μ
mol,コレステロール72.4μmol,ジセチルホスフェート7.
2μmol,参考例３で得たマンノビオースモノアラキジン
酸アミド８μmolを試験管中でクロロホルム及びメタノ
ール混液（容積比2:1）に加温して溶かす以外は実施例
６と同様に処理し，全量5.3mlのリポソームの懸濁液を
得た。得られた懸濁液は0.5mlあたり全脂質として10μm
olの脂質を有していた。又，このリポソームの懸濁液は
0.5mlあたり0.88μCiのイヌリンをリポソーム内に保持
していた。

実施例９ Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン68.6μ
mol,コレステロール68.6μmol,ジセチルホスフェート6.
8μmol,マンノビオースモノアラキジン酸アミド16μmol
をクロロホロム及びメタノール混液に溶かす以外は実施
例６と同様に処理し，全量5.5mlのリポソームの懸濁液
を得た。得られた懸濁液は0.5mlあたり全脂質として10
μmolを脂質及び0.98μCiのイヌリンをリポソーム内に
保持していた。

対照例２ Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン76.2μ
mol,コレステロール76.2μmol,ジセチルホスフェート7.
6μmolをクロロホルムに溶かす以外は実施例６と同様に
処理し，全量5.0mlのリポソームの懸濁液を得た。得ら
れた懸濁液は0.5mlあたり全脂質として10μmolの脂質を
有し，又,1.29μCiのイヌリンをリポソーム内に保持し
ていた。

対照例３ 前述の³H−イヌリン240μCiを含有する1mMイヌリンの
PBS（pH7.4）溶液6mlをPBS（pH7.4）に20倍に希釈し，
全量0.5mlあたり１μCiのイヌリンを含有する溶液を調
製した。

対照例４ 対照例２と全く同一処方で同様に処理し，全量5.3ml
のリポソームの懸濁液を得た。得られた懸濁液は0.5ml
あたり前脂質として10μmolの脂質を有し，又,1,80μCi
のイヌリンをリポソーム内に保持していた。

実施例10 実施例７と全く同一処方で同様に処理し，全量5.1ml
のリポソームの懸濁液を得た。得られた懸濁液は0.5ml
あたり前脂質として10μmolの脂質を有し，又,0.83μCi
のイヌリンをリポソーム内に保持していた。

実施例11 実施例９と全く同一処方で同様に処理し，全量4.8ml
のリポソームの懸濁液を得た。得られた懸濁液は0.5ml
あたり前脂質として10μmolの脂質を有し，又,0.91μCi
のイヌリンをリポソーム内に保持していた。

試験例１ Ｄ−マンノースに糖特異性を有するレクチン（ソラマ
メ（Vicia fava）由来，シグマ社製）を200μg/ml含むP
BS（pH7.4）溶液を調製した。次に実施例１〜５又は対
照例１で得たリポソームの懸濁液とレクチン溶液とを1:
1の比率で混合し，軽く振盪して分光光度計測定用のセ
ルに各々分注後、波長450nmにおける吸光度を経時的に
測定（30分間）した。

マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又はアミド
を処方したリポソームの懸濁液では，経時的に吸光度が
増加することによりリポソームの凝集が認められ，その
程度は実施例１≦実施例２＜実施例３＝実施例４＜実施
例５のリポソームの順であった。これに対して対照例１
のリポソームでは特に凝集性は認められなかった。以上
のことから本発明のリポソームではマンノビオースモノ
脂肪酸エステル及び／又はアミドがリポソーム膜に組込
まれ，マンノース残基がリポソーム膜表面に露出してい
ることが確認された。

試験例２ 実施例6,7,8,9もしくは対照例２で得たリポソームの
懸濁液又は対照例３で得た³H−イヌリン溶液をそれぞれ
SD系雄性ラット（体重140〜160g）の後肢静脈内に体重1
00gあたり0.5ml注入した。30分後頚動脈放血して開腹
し，肝，肺，腎及び脾臓を摘出した。これらの臓器の一
部又は全部をとり，リン酸緩衝化生理食塩水中でホモジ
ェナイズした。次いで液体シンチレーション法により放
射活性を測定し，投与量に対する回収率（％）を求め
た。又，血清中の放射活性回収率はラットの全血液を体
重の6.5％，血清量を全血液の50％とみつもって計算し
た。結果を表１に示す。尚，表中の値は平均値±標準偏
差であり，（ ）内はラット数を示す。これらの値は静
脈注射後30分の値である。

表１より明らかなように，実施例6,7,8,9のリポソー
ムの肝への分布は対照例２のリポソームに比べ有意に大
きく，又マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／又は
アミドの添加量を増すほど肝への指向性が増大すること
が確認された。

試験例３ 実施例７もしくは９で得たリポソームの懸濁液又は対
照例４で得たリポソームの懸濁液を用いて末端にＤ−マ
ンノースを有し，肝クッパー細胞指向性を有するマンナ
ンによる阻害効果をみた。即ち，試験例２と同一の条件
でラットにリポソームの懸濁液を投与する１分前に，マ
ンナンのリン酸緩衝化生理食塩水を後肢静脈内（リポソ
ーム注入側と反対側の後肢）に前投与し，以後試験例２
と同様の操作を行った。マンナンの投与量はラット体重
100gあたり13,3mgとした。結果，つまりマンナンによる
肝への分布阻害効果を表２に示す。ここで表中の値は平
均値±標準偏差であり，（ ）内はラット数であり，こ
れらは静脈注射後30分の値である。

表２により明らかなように，実施例７及び９のリポソ
ームの肝臓への分布は有意に抑制された。これに対して
対照のリポソーム（対照例４）ではマンナンによる影響
は受けなかった。

以上のことから本発明のリポソームは，優れた肝クッ
パー細胞への指向性を有することが確認された。

試験例４ 実施例10又は11で得たリポソームの懸濁液をSD系雄性
ラット（体重140〜160g）の後肢静脈内に体重100gあた
り0.5ml注入した。30分後ネンブタールを腹腔内に投与
し開腹してすぐにBerry−Friend及びSeglenの潅流法に
従い肝臓を前潅流用緩衝液，コラゲナーゼ溶液及び細胞
洗浄用ハンクス液にて潅流し，遊離肝細胞懸濁液を調製
した。これを冷却遠心分離し，肝実質細胞画分と，肝ク
ッパー細胞に富む非実質細胞画分とを得た。

両画分の放射活性を測ったところ,95％以上の放射活
性が肝クッパー細胞に富む非実質細胞画分から回収さ
れ，肝実質細胞画分からはほとんど回収されなかった。

以上のことから本発明の脂質膜構造体は肝クッパー細
胞に対し優れた特異的指向性を有することが確認され
た。

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】マンノビオースモノ脂肪酸エステル及び／
   又はアミノ−デオキシ−マンノビオースのモノ脂肪酸ア
   ミドを含有する脂質膜構造体