JP2615236B2 - ガラクタナーゼｓ―１及びこれを産生するバチルスエスピーｓ―１ - Google Patents
ガラクタナーゼｓ―１及びこれを産生するバチルスエスピーｓ―１Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規ガラクタナーゼ及びこれを産生する新規
微生物に関する。
微生物に関する。
従来、食物繊維等の分解には酸分解、アルカリ分解又
は酵素分解等が用いられてきたが、これらの方法では単
糖類の生成が多く、食物繊維等を改質（例えば可溶化、
低分子化等）やオリゴ糖を目的とする場合にはその収率
が下がる欠点を有している。
は酵素分解等が用いられてきたが、これらの方法では単
糖類の生成が多く、食物繊維等を改質（例えば可溶化、
低分子化等）やオリゴ糖を目的とする場合にはその収率
が下がる欠点を有している。
食物繊維のなかでも、かんきつ類、じゃがいも、大豆
等の植物由来の繊維はβ−1,4ガラクトシド結合した主
鎖を有し、このβ−1,4ガラクトシド結合を加水分解す
る酵素としてβ−1,4ガラクタナーゼが知られている
が、従来知られているβ−1,4ガラクタナーゼも単糖
（ガラクトース）まで分解してしまう。
等の植物由来の繊維はβ−1,4ガラクトシド結合した主
鎖を有し、このβ−1,4ガラクトシド結合を加水分解す
る酵素としてβ−1,4ガラクタナーゼが知られている
が、従来知られているβ−1,4ガラクタナーゼも単糖
（ガラクトース）まで分解してしまう。
一方、β−1,4ガラクタナーゼを産生する微生物とし
てカビ（例えば、Penicillium citrinum起源のもの）、
バクテリア（例えばBacillus属起源のもの）が知られて
いるが、いずれもβ−1,4ガラクトシド結合を加水分解
して単糖類（ガラクトース）を生成し、ガラクトオリゴ
糖の生成が少ないものである。
てカビ（例えば、Penicillium citrinum起源のもの）、
バクテリア（例えばBacillus属起源のもの）が知られて
いるが、いずれもβ−1,4ガラクトシド結合を加水分解
して単糖類（ガラクトース）を生成し、ガラクトオリゴ
糖の生成が少ないものである。
前述したように食物繊維を酸、アルカリ、酵素等によ
る加水分解を行うと単糖が多く生成しオリゴ糖の収率が
低下する問題があった。
る加水分解を行うと単糖が多く生成しオリゴ糖の収率が
低下する問題があった。
本発明者等は食物繊維を加水分解しても単糖（ガラ
クトース等）の生成が極めて少なく、高収率でオリゴ糖
（ガラクトオリゴ糖等）を得ることができる新規のガラ
クタナーゼ及びかかるガラクタナーゼを産生する新規
微生物を目的とした。
クトース等）の生成が極めて少なく、高収率でオリゴ糖
（ガラクトオリゴ糖等）を得ることができる新規のガラ
クタナーゼ及びかかるガラクタナーゼを産生する新規
微生物を目的とした。
本発明者等は前記目的を達成すべく鋭意研究の結果、
自然界の土壌から前記目的に適合した酵素を産生するバ
チルス属に属する微生物をスクリーニングでき（表−１
にBacillus subtilisとの相違点を示す）、目的とする
ガラクタナーゼを生成・分離・同定することができ（表
−２にカビ由来及びBacillus subtilis由来のガラクタ
ナーゼとの相違点を示す）、本発明を完成するに至っ
た。即ち、本発明は（、次の酵素学的性質を有するバチ
ルス エスピーＳ−１（微工研菌寄第11228号）由来の
ガラクタナーゼＳ−１である。a.作用：大豆繊維に作用
してガラクトオリゴ糖を生成し単糖（ガラクトース）を
殆ど遊離しない。
自然界の土壌から前記目的に適合した酵素を産生するバ
チルス属に属する微生物をスクリーニングでき（表−１
にBacillus subtilisとの相違点を示す）、目的とする
ガラクタナーゼを生成・分離・同定することができ（表
−２にカビ由来及びBacillus subtilis由来のガラクタ
ナーゼとの相違点を示す）、本発明を完成するに至っ
た。即ち、本発明は（、次の酵素学的性質を有するバチ
ルス エスピーＳ−１（微工研菌寄第11228号）由来の
ガラクタナーゼＳ−１である。a.作用：大豆繊維に作用
してガラクトオリゴ糖を生成し単糖（ガラクトース）を
殆ど遊離しない。
b.基質特異性：β−1,4ガラクタンに作用するがβ−1,3
ガラクタンには作用しない。c.作用pHは８〜12。d.作用
温度は30〜60℃。e.最適pHが10.0。f.pH安定性が４〜1
2。g.温度安定性が50℃未満。h.最適温度が40℃。
ガラクタンには作用しない。c.作用pHは８〜12。d.作用
温度は30〜60℃。e.最適pHが10.0。f.pH安定性が４〜1
2。g.温度安定性が50℃未満。h.最適温度が40℃。
又、本発明は、バチルス属に属しガラクタナーゼを産
生する次の菌学的性質を有するバチルスエスピーＳ−１
（微工研菌寄第11228号）である。ａ生理学的性質等：
脱窒素反応が陰性。グルコースからのガス発生性が
陽性。クエン酸の利用においてコーサ培地は陰性。
生育のpH範囲が7.5〜10。b.嫌気的生育が陽性、VPテス
トが陰性、カゼイン加水分解が陰性である。c.硝酸塩の
還元が陽性である。
生する次の菌学的性質を有するバチルスエスピーＳ−１
（微工研菌寄第11228号）である。ａ生理学的性質等：
脱窒素反応が陰性。グルコースからのガス発生性が
陽性。クエン酸の利用においてコーサ培地は陰性。
生育のpH範囲が7.5〜10。b.嫌気的生育が陽性、VPテス
トが陰性、カゼイン加水分解が陰性である。c.硝酸塩の
還元が陽性である。
以下はスクリーニングした菌の性質の内公知のBacill
us subtilisと異なる主な性質を表にしたものである。
us subtilisと異なる主な性質を表にしたものである。
又、以下はBacillus sp.S−１から得たガラクタナー
ゼの酵素的性質の内公知のカビ（Penicillium）由来の
もの、Bacillus subtilis K−50由来のもの、Bacillus
subtilis var amylosacchariticus、Bacillus subtilis
WT168由来のものとの比較表である。
ゼの酵素的性質の内公知のカビ（Penicillium）由来の
もの、Bacillus subtilis K−50由来のもの、Bacillus
subtilis var amylosacchariticus、Bacillus subtilis
WT168由来のものとの比較表である。
先ず本発明のガラクタナーゼＳ−１について説明す
る。
る。
本発明のガラクタナーゼＳ−１の酵素学的性質は次の
通りである。
通りである。
a.作用は、大豆繊維に作用してガラクトオリゴ糖を生成
し単糖（ガラクトース）を殆ど遊離しない。
し単糖（ガラクトース）を殆ど遊離しない。
b.基質特異性は、β−1,4ガラクタンに作用するがβ−
1,3ガラクタンには作用しない。
1,3ガラクタンには作用しない。
c.作用pHは８〜12、d.作用温度は30〜60℃。
e.最適温度が40℃である。
又、最適pHは10.0、pH安定性は４〜12、温度安定性は
50℃未満である。
50℃未満である。
又、ガラクタナーゼＳ−１の反応生成物はGalが極め
て少なく（ほとんどない）、Gal2〜Gal4を主に生成す
る。
て少なく（ほとんどない）、Gal2〜Gal4を主に生成す
る。
尚、酵素活性の測定方法及びこれに用いた緩衝液は次
の通りである。
の通りである。
１％精製大豆繊維を含有する次表に示す0.1M緩衝液0.
5mlに酵素溶液0.1mlを混合し、40℃で60分間反応させ
た。反応後遠心分離（15,000R.P.M.×１分）して得た上
澄液中の全糖量をフェノール硫酸法により測定する。こ
の条件下で１分間に１μmolのガラクトースに相当する
糖を生成する酵素量を１単位と定義する。
5mlに酵素溶液0.1mlを混合し、40℃で60分間反応させ
た。反応後遠心分離（15,000R.P.M.×１分）して得た上
澄液中の全糖量をフェノール硫酸法により測定する。こ
の条件下で１分間に１μmolのガラクトースに相当する
糖を生成する酵素量を１単位と定義する。
次に本発明のガラクタナーゼを産生する微生物につい
て説明する。
て説明する。
この微生物の菌学的性質は以下の通りである。
1.形態の顕微鏡観察によれば桿菌である。菌体の大きさ
は、バチルス エスピーＳ−１は0.5〜0.7μｍ×2.0〜
3.0μｍである。菌体の片端は卵形の内性胞子（0.5〜1.
0μｍ×1.0〜2.0μｍ）を作る。周鞭毛もあり、運動性
を有する。
は、バチルス エスピーＳ−１は0.5〜0.7μｍ×2.0〜
3.0μｍである。菌体の片端は卵形の内性胞子（0.5〜1.
0μｍ×1.0〜2.0μｍ）を作る。周鞭毛もあり、運動性
を有する。
2.グラム染色性は陽性。3.抗酸性はない。b.生育状態等
（以下数値は重量％）は以下の通りである。
（以下数値は重量％）は以下の通りである。
肉汁寒天平板培地（Difco Nutrient borth0.8、寒天
1.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）での生育状態は普通。コロ
ニーの形状は、バチルス エスピーＳ−１は不規則。表
面は粗野で、周縁は糸状。色調はやや白色の不透明で、
光沢はない。
1.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）での生育状態は普通。コロ
ニーの形状は、バチルス エスピーＳ−１は不規則。表
面は粗野で、周縁は糸状。色調はやや白色の不透明で、
光沢はない。
肉汁寒天斜面培地（肉汁寒天平板培地と同組成）での
生育は普通で、バチルス エスピーＳ−１は羽毛状で、
光沢はなく、色調はやや白色の不透明である。
生育は普通で、バチルス エスピーＳ−１は羽毛状で、
光沢はなく、色調はやや白色の不透明である。
肉汁液体培地（Difco Nutrient borth0.8Na2CO3 1.
0、pH10.0）で生育するが、表面生育はない。
0、pH10.0）で生育するが、表面生育はない。
次に、ｃ生理学的性質等はつぎの通りである。１倍地
（KNO30.1、Difco Nutrient borth0.8、Na2CO3 1.0、pH
10.0）による硝酸塩の還元はバチルス エスピーＳ−１
は陽性である。
（KNO30.1、Difco Nutrient borth0.8、Na2CO3 1.0、pH
10.0）による硝酸塩の還元はバチルス エスピーＳ−１
は陽性である。
同倍地による脱窒素反応は陰性。
2.培地（ペプトン1.0、ブドウ糖0.5、Na2CO3 1.0、pH1
0.0）によるVPテストはバチルス エスピーＳ−１は陰
性である。
0.0）によるVPテストはバチルス エスピーＳ−１は陰
性である。
3.培地（ペプトン1.0、NaCL0.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）
によるインドールの生成は陰性。
によるインドールの生成は陰性。
4.培地（Difco Nutrient borth0.8、Na2CO3 1.0、pH10.
0）及び培地（Difco SIM medium指示量、Na2CO3 1.0、p
H10.0）による酢酸鉛紙法、及びSIM培地での硫化水素の
生成は共に陰性。
0）及び培地（Difco SIM medium指示量、Na2CO3 1.0、p
H10.0）による酢酸鉛紙法、及びSIM培地での硫化水素の
生成は共に陰性。
5.培地（可溶性澱粉1.0、ポリペプトン0.5、酵母エキス
0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO3
1.0、pH10.0）による澱粉の分解は陽性。
0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO3
1.0、pH10.0）による澱粉の分解は陽性。
6.培地（Difco Nutrient broth0.8、ゼラチン0.4、寒天
1.5、NaOHにてpH10.0に調整）によるゼラチン分解活性
は陽性。
1.5、NaOHにてpH10.0に調整）によるゼラチン分解活性
は陽性。
7.培地（スキムミルム1.0、ポリペプトン0.5、酵母エキ
ス0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO
3 1.0 pH10.0）によるカゼイン分解はバチルス エスピ
ーＳ−１は陰性である。
ス0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO
3 1.0 pH10.0）によるカゼイン分解はバチルス エスピ
ーＳ−１は陰性である。
8.クエン酸の利用に関して、コーサ培地（NH4H2PO4
0.1、K2HPO4 0.1、クエン酸0.2、NaCL0.5、MgSO4・7H2O
0.02、Na2CO3 1.0、pH10.0）は陰性。しかし、クリス
テンセン培地（酵母エキス0.05、システイン塩酸塩0.0
1、クエン酸ナトリウム0.3、NaCL0.5、ブドウ糖0.02、K
H2PO4 0.1、寒天1.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）は陽性であ
る。
0.1、K2HPO4 0.1、クエン酸0.2、NaCL0.5、MgSO4・7H2O
0.02、Na2CO3 1.0、pH10.0）は陰性。しかし、クリス
テンセン培地（酵母エキス0.05、システイン塩酸塩0.0
1、クエン酸ナトリウム0.3、NaCL0.5、ブドウ糖0.02、K
H2PO4 0.1、寒天1.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）は陽性であ
る。
9.培地（ブドウ糖1.0、NaCL0.5、MgSO4・7H2O0.02、K2H
PO4 0.1、NH4H2PO4又はKHO3 0.1、NaHCO3 1.0、pH9.2）
による無機窒素源の利用は硝酸塩、アンモニウム塩共に
陰性。
PO4 0.1、NH4H2PO4又はKHO3 0.1、NaHCO3 1.0、pH9.2）
による無機窒素源の利用は硝酸塩、アンモニウム塩共に
陰性。
10.培地（可溶性澱粉1.0、ポリペプチド0.5、酵母エキ
ス0.5、K2HPO4 0.4、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO
3 1.0、pH10.0）による色素の生成は陰性。
ス0.5、K2HPO4 0.4、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO
3 1.0、pH10.0）による色素の生成は陰性。
11.培地（KH2PO4 0.1、Na2HPO4 0.1、尿素2.1、酵母エ
キス0.01、0.02％フェノールレッド溶液5.0、pH7.0）に
よるウレアーゼは陰性。
キス0.01、0.02％フェノールレッド溶液5.0、pH7.0）に
よるウレアーゼは陰性。
12.MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO3 1.0、pH10.0）
によるオキシダーゼはバチルス エスピーＳ−１は陰性
である。
によるオキシダーゼはバチルス エスピーＳ−１は陰性
である。
13.培地（可溶性澱粉1.0、ポリペプチド0.5酵母エキス
0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO3
1.0、pH10.0）によるカタラーゼは陽性。
0.5、K2HPO4 0.1、MgSO4・7H2O0.02、寒天1.5、Na2CO3
1.0、pH10.0）によるカタラーゼは陽性。
14.バチルス エスピーＳ−１の生育温度範囲は20〜40
℃、生育最適温度範囲は25〜35℃が適当である。
℃、生育最適温度範囲は25〜35℃が適当である。
バチルス エスピーＳ−１の生育pH範囲は7.5〜10、
生育最適pH範囲は８〜9.5が適当である。
生育最適pH範囲は８〜9.5が適当である。
15.糖類からの酸及びガスの生成の有無は表−３の通り
である。
である。
16.食塩含有培地における生育は、バチルス エスピー
Ｓ−１は食塩10％まで生育する。
Ｓ−１は食塩10％まで生育する。
17.ジハイドロキシアセトンの生成は陰性。
以上の菌学的性質についてバージーズ マニュアル
（Bergy's Manual of Determinative Bacteriology）第
８版を参考にして比較・探索した結果これらの菌は有胞
子桿菌のバチルス（Bacillus）属の一種であると認めら
れるものの、公知のバチルス属の菌株の中には一致する
ものがなく、この菌は新菌株であると判断した。これら
の菌株をバチルスエスピーＳ−１と命名し微生物工業技
術研究所に奇託した。微工研菌寄第11228号である。
（Bergy's Manual of Determinative Bacteriology）第
８版を参考にして比較・探索した結果これらの菌は有胞
子桿菌のバチルス（Bacillus）属の一種であると認めら
れるものの、公知のバチルス属の菌株の中には一致する
ものがなく、この菌は新菌株であると判断した。これら
の菌株をバチルスエスピーＳ−１と命名し微生物工業技
術研究所に奇託した。微工研菌寄第11228号である。
本発明のバチルス属微生物を培地を用いて培養してガ
ラクタナーゼを産生せしめることができる。
ラクタナーゼを産生せしめることができる。
培地に用いる炭素源、窒素源等は資化し得るものであ
ればいずれも利用できる。例えば炭素源として大豆粕、
小麦ふすま等の植物繊維質、廃糖密、澱粉、各種糖類
等、又窒素源として、各種アミノ酸、コーンスティープ
リカー、大豆粉、ペプチド、酵母エキス、尿素等の窒素
含有物を利用することができる。
ればいずれも利用できる。例えば炭素源として大豆粕、
小麦ふすま等の植物繊維質、廃糖密、澱粉、各種糖類
等、又窒素源として、各種アミノ酸、コーンスティープ
リカー、大豆粉、ペプチド、酵母エキス、尿素等の窒素
含有物を利用することができる。
その他必要に応じミネラル、ビタミン等を適宜用いる
ことができる。
ことができる。
本発明のバチルス属微生物を培養した後、菌体を遠心
分離、ろ過等の公知の手段により除去して粗酵素液とす
ることができる。又、塩析、透析、限外ろ過等の手段を
用い、乾燥等して粗酵素を得ることもできる。さらに精
製して精製酵素とすることもできる。
分離、ろ過等の公知の手段により除去して粗酵素液とす
ることができる。又、塩析、透析、限外ろ過等の手段を
用い、乾燥等して粗酵素を得ることもできる。さらに精
製して精製酵素とすることもできる。
以下実施例により本発明の実施態様を説明する。
実施例１ 鳥取県米子市付近から採取した土壌約0.5gを滅菌水に
懸濁し、分離用寒天培地（＊１）に塗布し、37℃で１〜
２日間培養しコロニーを形成させた。コロニー周辺にガ
ラクタンの分解に基づく透明帯（ハロー）を形成するも
のを選出し、ガラクタナーゼ生産菌を取得した。菌学的
性質は前記発明の詳細な説明の項に記載した通りであっ
た。
懸濁し、分離用寒天培地（＊１）に塗布し、37℃で１〜
２日間培養しコロニーを形成させた。コロニー周辺にガ
ラクタンの分解に基づく透明帯（ハロー）を形成するも
のを選出し、ガラクタナーゼ生産菌を取得した。菌学的
性質は前記発明の詳細な説明の項に記載した通りであっ
た。
次に、これら取得菌を更に液体培地（＊２）に接種し
37℃にて２日間振とう培養し、遠心分離（10,000R.P.M.
×10分）して得た上澄について次の方法でガラクタナー
ゼ活性を測定（＊３）した。
37℃にて２日間振とう培養し、遠心分離（10,000R.P.M.
×10分）して得た上澄について次の方法でガラクタナー
ゼ活性を測定（＊３）した。
以上の方法にてガラクターゼ活性の強い菌をスクリー
ニングし、その一つバチルス エスピーＳ−１を得た。
ニングし、その一つバチルス エスピーＳ−１を得た。
＊１（寒天培地）・・・pH10.0 オカラ〔不二製油（株）製「プロプラスSA」〕 1 ％ 酵母エキス 0.5 ％ K2HPO4 0.1 ％ MgSO4・7H2O 0.02％ Na2CO3 1 ％ 寒天 1.5 ％ ＊２（液体培地）・・pH10.0 オカラ〔不二製油（株）製「プロプラスSA」〕 2 ％ ポリペプトン 0.5 ％ 酵母エキス 0.5 ％ NaCl 0.5 ％ K2HPO4 0.1 ％ MgSO4・7H2O 0.02％ Na2CO3 1 ％ ＊３（ガラクタナーゼ活性の測定法は前述の酵素活性測
定法） 実施例２ 実施例１で得たバチルス エスピーＳ−１株を液体培
地（実施例１の＊２と同様）に接種し37℃で40日間振と
う培養し、菌体を遠心分離して得た上澄液を粗酵素ガラ
クタナーゼＳ−１とした。pH10におけるガラクタナーゼ
活性（実施例１の＊３の方法による）は1.1単位/mlであ
った。
定法） 実施例２ 実施例１で得たバチルス エスピーＳ−１株を液体培
地（実施例１の＊２と同様）に接種し37℃で40日間振と
う培養し、菌体を遠心分離して得た上澄液を粗酵素ガラ
クタナーゼＳ−１とした。pH10におけるガラクタナーゼ
活性（実施例１の＊３の方法による）は1.1単位/mlであ
った。
次に、オカラ（「プロプラスSA」，不二製油（株）
製）1gに前記粗酵素ガラクタナーゼＳ−１を25単位加
え、pH10.0、40℃で６時間反応させた。
製）1gに前記粗酵素ガラクタナーゼＳ−１を25単位加
え、pH10.0、40℃で６時間反応させた。
反応後100℃で３分間加熱して酵素失活させ、エタノ
ール150ml加え、沈澱画分を遠心分離（6000R.P.M.×10
分）して除き、上澄を減圧濃縮し41％の収率でガラクト
オリゴ糖を得た。
ール150ml加え、沈澱画分を遠心分離（6000R.P.M.×10
分）して除き、上澄を減圧濃縮し41％の収率でガラクト
オリゴ糖を得た。
得られたガラクトオリゴ糖をHPLC（高速液体クロマト
グラフィー）にて下記条件にて分析したところ、ガラク
トビオース８％、ガラクトトリオース33％、ガラクトテ
トラオース35％、ガラクトペンタオース18％でガラクト
ースは６％であった。
グラフィー）にて下記条件にて分析したところ、ガラク
トビオース８％、ガラクトトリオース33％、ガラクトテ
トラオース35％、ガラクトペンタオース18％でガラクト
ースは６％であった。
（HPLC条件） カラム：センシューパック（NH2−1251N）¢4.6×250mm カラム温度：室温 溶出液：アセトニトリル／水＝2/1（V/V） 流 速:1ml/min 検出器：示差屈折計 比較例１ 市販セルラーゼ（Sigma社製のPenicillium属起源のも
の）及び市販セルラーゼ（協和醗酵工業（株）製Polypo
rus属起源のもの）をそれぞれ25単位づつ実施例２と同
様にしてオカラに加え、pH4.5にて６時間反応させ、オ
リゴ糖を得た。
の）及び市販セルラーゼ（協和醗酵工業（株）製Polypo
rus属起源のもの）をそれぞれ25単位づつ実施例２と同
様にしてオカラに加え、pH4.5にて６時間反応させ、オ
リゴ糖を得た。
HPLCにより分析した結果、前者は収率54％、糖として
ガラクトースがほぼ100％であった。後者は収率57％、
糖はガラクトース44％、ガラクトビオース26％、ガラク
トトリオース24％、ガラストテトラオース６％であっ
た。
ガラクトースがほぼ100％であった。後者は収率57％、
糖はガラクトース44％、ガラクトビオース26％、ガラク
トトリオース24％、ガラストテトラオース６％であっ
た。
実施例３ β−1,3ガラクタンには作用しない例。
実施例１で得られたガラクタナーゼＳ−１をβ−1,3
ガラクタン（Sigma社製）に実施例２の条件で作用させ
たが、いずれも分解しなかった。
ガラクタン（Sigma社製）に実施例２の条件で作用させ
たが、いずれも分解しなかった。
実施例４ （最適pH及びpH安定性） 前記〔酵素活性測定法〕により、実施例１で得られた
ガラクタナーゼＳ−１の最適pHを調べた。結果を第１図
に示す。
ガラクタナーゼＳ−１の最適pHを調べた。結果を第１図
に示す。
又、各々のpHで20℃、15時間保持した後の残存活性を
測定してpH安定性を調べた結果を第２図に示す。
測定してpH安定性を調べた結果を第２図に示す。
実施例５ （最適温度度及び温度安定性） 実施例１で得られたガラクタナーゼＳ−１の最適温度
及び温度安定性（各温度で15分間処理した後の残存活性
を測定）を前記〔酵素活性測定法〕により調べた。結果
を第３図及び第４図に示す。
及び温度安定性（各温度で15分間処理した後の残存活性
を測定）を前記〔酵素活性測定法〕により調べた。結果
を第３図及び第４図に示す。
（効果） 以上説明したように、本発明により、β−1,4ガラ
クタンに作用してガラクトースを殆ど生成せず高収率で
ガラクトオリゴ糖を生成する新規なガラクタナーゼが可
能になり、又かかるガラクタナーゼを産生する新規微
生物が可能になったものである。
クタンに作用してガラクトースを殆ど生成せず高収率で
ガラクトオリゴ糖を生成する新規なガラクタナーゼが可
能になり、又かかるガラクタナーゼを産生する新規微
生物が可能になったものである。
第１図はガラクタナーゼＳ−１の最適pHを示す図面であ
る 第２図はガラクタナーゼＳ−１のpH安定性を示す図面で
ある 第３図はガラクタナーゼＳ−１の最適温度を示す図面で
ある 第４図はガラクタナーゼＳ−１の温度安定性を示す図面
である
る 第２図はガラクタナーゼＳ−１のpH安定性を示す図面で
ある 第３図はガラクタナーゼＳ−１の最適温度を示す図面で
ある 第４図はガラクタナーゼＳ−１の温度安定性を示す図面
である
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (2)
- 【請求項１】次の酵素学的性質を有するバチルス エス
ピーＳ−１（微工研菌寄第11228号）由来のガラクタナ
ーゼＳ−１ a.作用 大豆繊維に作用してガラクトオリゴ糖を生成し単糖（ガ
ラクトース）を殆ど遊離しない。 b.基質特異性 β−1,4ガラクタンに作用するがβ−1,3ガラクタンには
作用しない。 c.作用pHは８〜12。 d.作用温度は30〜60℃。 e.最適pHが10.0 f.pH安定性が４〜12 g.温度安定性が50℃未満 h.最適温度が40℃ - 【請求項２】バチルス属に属しガラクタナーゼを産生す
る次の菌学的性質を有するバチルスエスピーＳ−１（微
工研菌寄第11228号）。 ａ生理学的性質等 脱窒素反応が陰性。 グルコースからのガス発生性が陽性。 クエン酸の利用においてコーサ培地は陰性。 生育のpH範囲が7.5〜10。 b.嫌気的生育が陽性、VPテストが陰性、カゼイン加水分
解が陰性である c.硝酸塩の還元が陽性である
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2040627A JP2615236B2 (ja) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | ガラクタナーゼｓ―１及びこれを産生するバチルスエスピーｓ―１ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2040627A JP2615236B2 (ja) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | ガラクタナーゼｓ―１及びこれを産生するバチルスエスピーｓ―１ |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8244364A Division JP2894293B2 (ja) | 1996-09-17 | 1996-09-17 | ガラクタナーゼｓ−３９及びこれを産生するバチルスエスピーｓ−３９ |
| JP8244363A Division JP2894292B2 (ja) | 1996-09-17 | 1996-09-17 | ガラクタナーゼｓ−２及びこれを産生するバチルスエスピーｓ−２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03244382A JPH03244382A (ja) | 1991-10-31 |
| JP2615236B2 true JP2615236B2 (ja) | 1997-05-28 |
Family
ID=12585782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2040627A Expired - Fee Related JP2615236B2 (ja) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | ガラクタナーゼｓ―１及びこれを産生するバチルスエスピーｓ―１ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2615236B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001059083A1 (en) * | 2000-02-08 | 2001-08-16 | Novozymes A/S | Bacterial galactanases and use thereof |
-
1990
- 1990-02-20 JP JP2040627A patent/JP2615236B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03244382A (ja) | 1991-10-31 |
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