JP2579771B2 - 胸腺抽出物、その製造方法及びそれを含む薬剤組成物 - Google Patents

胸腺抽出物、その製造方法及びそれを含む薬剤組成物

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Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、経口投与の後にも活性であり、哺乳動物
胸腺の部分酸分解によって製造される、Ｔリンパ球の分
化を刺激する胸腺誘導体、サイモリンフォトロピン（th
ymolymphotropin、TLT）に関する。サイモリンフォトロ
ピンを含む薬剤組成物は、第１及び第２免疫欠陥の治療
に用いられる。
サイモンポイエチン（米国特許第4,077,949号）、胸
腺体液因子（Thymic Humoral Factor）（米国特許第4,2
50,084号）及びサイモシン・ザッツ・エムら、Biol.Res
p.Cancer 1:129,1982）のような、Ｔリンバ球に対して
活性ないくつかのペプチド誘導体が胸腺から得られてい
ることが知られている。
また、これらの誘導体は全て、非経口的経路で投与そ
れた場合にのみ治療的に有効であることがわかってい
る。
従って、非経口投与に関する多くの不便さを克服する
ために、経口投与後であっても活性な胸腺誘導体が存在
することが重要である。
この要求は、この発明に係るサイモリンフォトロピン
によって完全に満足される。実際、この胸腺誘導体は、
経口投与後も活性を有するという特徴（治療用途の観点
から非常に重要）を有する。
哺乳動物の部分的酸分解によって得られるサイモリン
フォトロピンは、抗腫瘍治療又は感染症によって誘導さ
れる生理的免疫老衰（immunosenescence）及び免疫抑制
のような、二次免疫欠陥の治療に有効であることが示さ
れた。
この発明によると、サイモリンフォトロピンは、主と
して低分子量（1000ダルトン未満）のポリペプチドを得
るために哺乳動物の胸腺、さらに詳細にはウシ胸腺か
ら、該胸腺の部分的酸分解によって得られる。この方法
は、透析によって抽出物から塩を排除する前に、異なる
等電点において限外ろ過によって４段階で１万ダルトン
以上の分子量のタンパク質を排除することを含む。
すなわち、本発明は、Ｔリンパ球の分化及び機能を促
進することができ、そのタンパク質成分が実質的に分子
量１万ダルトン未満のタンパク質から成り、ペプチド含
量が487.9mg/g±9.8％であり、総窒素含量が139.7mg/g
±8.4％であり、アルファアミノ窒素含量が28.2mg/g±
8.4％であり、核酸塩基含量が34.7mg/g±30.1％であ
り、ペントースとヘキソースとの含量が合計83.9mg/g±
14.3％であり、280nmにおける液体高速クロマトグラフ
ィーの結果が実質的に第２図に示され、ポリアクリルア
ミドゲル上での電気泳動図が実質的に第５図に示され、
アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、
グリシン、スレオニン、アラニン、アルギニン、チロシ
ン、メチオニン、バリン、フェニルアラニン、イソロイ
シン、ロイシン、リジン及びプロリンから成る総遊離ア
ミノ酸含量が90.9mg/g±15.2％である胸腺抽出物であっ
て、 （ａ） 胸腺組織をほぼ室温で無機酸で18時間ないし24
時間処理する工程と、 （ｂ） 生成物の温度を40℃ないし48℃に上げ、この温
度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｃ） 生成物の温度を50℃ないし55℃に上げ、この温
度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｄ） 得られた溶液のpHを4.3ないし4.8に上げ、該溶
液を75℃ないし85℃に30分間維持する工程と、 （ｅ） 溶液をろ過して第１のろ液を得る工程と、 （ｆ） 該第１のろ液のpHを6.2ないし6.8に調節する工
程と、 （ｇ） 前記第１のろ液をろ過して第２のろ液を得る工
程と、 （ｈ） 第２のろ液のpHを9.2ないし9.7に調節する工程
と、 （ｉ） 前記第２のろ液をろ過して第３のろ液を得る工
程と、 （ｊ） 該第３のろ液のpHを6.6ないし6.8に調節する工
程と、 （ｋ） 前記第３のろ液から高分子量タンパク質を除
き、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ダルトン
未満の第４のろ液を得る工程と、 （ｌ） 該第４のろ液から塩を除去する工程とを含む製
造方法により製造される胸腺抽出物、該製造方法、及び
該胸腺抽出物を含むＴリンパ球の分化及び機能促進剤組
成物を提供する。
次にこの発明の方法の非限定的実施例を示す。
1.生理学的に退縮していない、活性状態にある、従っ
て、明瞭な脂肪の浸潤が認められないウシ胸腺を採用し
た。この器官を切り刻んで直径約2mmの断片にし、これ
を８〜12％の無機酸、特には比重1.090ないし1.096の塩
酸と混合した。この混合物を室温（20〜24℃）に18〜24
時間保持した。
2.上記時間経過後、混合物の温度を40℃ないし48℃に上
げ、この時間で70時間ないし80時間保持した。この際、
５ないし10時間の間隔で30分間づつかき混ぜた。
3.次に混合物の温度を50℃ないし55℃上げ、この温度に
70時間ないし80時間加熱し、この際、５ないし10時間お
きに30分づつかきまぜた。
4.混合物をかき混ぜながら、１ないし2N水酸化ナトリウ
ムで処理してpHを4.3ないし4.8にした。温度を75℃ない
し85℃に上げ、この温度で30分間加熱した。次に混合物
をフィルタープレス（サイツ・スープラ、サイツ・フィ
ルター社、西独国、クロイツナッハ、バッド）でろ過し
た。ろ液を冷却（ないし＋２℃）し、12時間から18時間
保持した。フィルタープレス（filter press）及びサイ
ツ・スープラフィルターによってさらにろ過を行なっ
た。
5.ろ液を20〜25にし、かきまぜながら１〜2Nの水酸化ナ
トリウムを加えてpHを6.2ないし6.8にした。温度を75℃
ないし85℃に上げ、30分後、20℃ないし25℃に下げ、フ
ィルタープレスとサイツ・スープラフィルターでろ過を
行なった。ろ液を０℃ないし＋２℃に冷却し、この温度
に12時間ないし18時間保持し、次いでフィルタープレス
及びサイツ・スープラフィルターでろ過を行なった。
6.20〜25℃に加熱したろ液をpH9.2ないし9.7になるまで
１〜2N水酸化ナトリウムで処理した。次に温度を75℃な
いし85℃に上げ、30分後、20℃ないし25℃に下げた。フ
ィルタープレスとサイツ・フィルターでろ過した。得ら
れたろ液を０℃ないし２℃に冷却し、12ないし18時間
後、フィルタープレス及びサイツ・スープラフィルター
でろ過した。
7.ろ液を20℃ないし25℃に加熱した後、かきまぜながら
１〜2Nの塩酸をpHgが6.6ないし6.8になるまで加え、75
℃ないし85℃に20分ないし30分間加熱した。次に20℃な
いし25℃に冷却し、フィルタープレス及びサイツ・スー
プラフィルターでろ過した。得られたろ液を０℃ないし
２℃に冷却し、この温度で72時間保持した。
8.次にミリポアカートリッジ（ミリポア・カンパニー、
米国マサチューセッツ州ベッドフォード）でろ過した。
9.次に得られた液をPTGCミリポアメンブレン（ミリポア
・カンパニー、米国マサチューセッツ州ベッドフォー
ド）でろ過した。
10.得られた液液を「メンブレン」装置（イタリア国、
ミラノ）と、アニオン交換樹脂及びカチオン交換樹脂を
充填したポリエチレン膜で電気透析した。
11.分子量１万ダルトン未満の物質を含む溢出物を、溶
液の乾物量が13％ないし16％になるまで蒸発により濃縮
した（真空薄層蒸発濃縮機（ルワ・エイ・ジー・スイス
国チューリッヒ）。
12.ニロ・アトマイザー社製（デンマーク国コペンハー
ゲン）のスプレードライヤーによって上記濃縮溶液を乾
燥した。
サイモリンフォトロピンの性質 このようにして得られたサイモリンフォトロピンは次
のような性質を示す。
I:化学的性質 1.HPLCマップ 逆層C18カラムを用いて波長280nmにて高速液体クロマ
トグラフィーを行なった（第２図）。
2.ペプチド ペプチドの定量は、ビウレット反応を利用し、波長54
6nmにおいて分光光度計による吸光度測定によった。サ
イモリンフォトロピンの平均ペプチド含量は乾燥基準で
487.9mg/gであった（変動係数9.8％−第１表）。
3.総窒素量 総窒素量はケルダール法によって行なった。平均値は
乾燥基準で139.7mg/gであった（変動係数8.4％−第１
表）。
4.アルファ−アミノ窒素 アルファ−アミノ窒素はギ酸との反応の後、酸滴定に
より行なった。平均値は乾燥基準で28.2mg/gであった
（変動係数8.4％−第１表）。
5.遊離アミノ酸 遊離アミノ酸の定性及び定量分析のために、20種類の
アミノ酸の対象標準混合物をオルソフタルアルデヒド又
はダンシル（danysl）クロリドとの反応によって予備カ
ラム誘導（pre−columnderivatization）した。同じ操
作によって、サイモリンフォトロピン試料を制御下に誘
導した。以下のアミノ酸を、積分器にインターフェース
された蛍光検出器を用いて、C18カラムによる高速液体
クロマトグラフィーによって確認した。アスパラギン
酸、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、グリシン、ス
レオニ、アラニン、アルギニン、チロシン、メチオニ
ン、バリン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイシ
ン、リジン、プロリン（第３図及び第４図）。遊離アミ
ノ酸の平均総含量は乾燥基準で90.9mg/gであった（変動
係数15.2％−第１表）。なお、第３図及び第４図に示さ
れた高速液体クロマトグラフィーの結果を表にまとめる
と以下の第２表及び第３表にようになる。
6.核酸塩基 核酸塩基は、逆相カラム（C18）を用いた、波長260nm
における高速液体クロマトグラフィーによって測定し
た。平均値は乾燥基準で34.7mg/gであった（変動係数3
0.1％−第１表）。
7.炭水化物（ペントース＋ヘキソース） 炭水化物は、アントロン反応を利用し、対照標準とし
てリボースを用い、波長625nmにおける着色産物の吸光
度を分光光度計によって読むことによって行なった。平
均値は乾燥基準で83.9mg/gであった（変動係数14.3％−
第１表）。
II:電気泳動特性 以下の操作条件で等電点電気泳動を行ない、サイモリ
ンフォトロピンの電気泳動特性を得た。
アクリルアミド７％ ビスアクリルアミド：アクリルアミド比:1:25、 尿素 8M フォーカシングは10W一定で４時間 電圧：平衡で1000mV 染色:AgNO3 個々のバッチにサイモリンフォトロピン200mcgを装填 電気泳動図は酸及び塩基側にいくつかのペプチド画分
の存在を示している（第５図）。
III:毒性 サイモリンフォトロピンの急性毒性は、マウス、ラッ
トのいずれにおいても全くなく、LD50は5g/kgを越え
る。
IV:免疫学的性質 サイモリンフォトロピンは以下の性質を有する。
1.Tリンパ球の分化 サイモリンフォトロピンは、先天的無胸腺マウス及び
正常マウスの脾臓からの未成熟リンパ球（pre−Ｔ）上
のThy1.2抗原（Ｔ細胞マーカー）の出現を誘導するの
で、サイモリンフォトロピンは生体外においてＴ細胞の
分化を促進する。
2.TdT発現の生体外変化 TdT陽性細胞の現象によって示されるように、サイモ
リンフォトロピンは、生体外での胸腺リンパ球の成熟を
誘起する。
3.リンホカイン産生の生体外刺激 100mcg/mlの濃度のサイモリンフォトロピンがフォト
ヘマグルチニン（PHA）の存在下でヒト末梢血リンパ球
（PBL）によるインターロイキン−２及びBCGFの産生を
促進する。PBL上清中のリンホカインの存在は、標識チ
ミジンの取り込みによって決定される、Ｔ及びＢリンパ
球に対するPBL上清の細胞分裂誘起活性を評価すること
によって行なった。
4.循環胸腺ホルモン活性の回復 ３月令の先天的無胸腺（ヌード）マウスにサイモリフ
ォトロピンを経口投与又は腹腔内投与することにより、
投与１時間後の未成熟Ｔリンパ球におけるThy1.2抗原誘
起試験によって評価される、循環胸腺ホルモンの活性が
有効に回復した。
正常な成熟マウスにおいては、アザチオプリンのロゼ
ット阻害試験によって評価される循環胸腺ホルモン活性
は、胸腺切除後10日で完全に消失する。サイモリンフォ
トロピンの経口投与により、50％のロゼット形成細胞中
における、アザチオプリンに対する感受性を誘起するこ
とができる最大希釈率として表わされる。胸腺ホルモン
活性が正常なレベルにまで回復する。
5.免疫抑制又は免疫老衰動物中の抗体反応の活性化 全実験期間を通じて毎日1.5mg/マウスのサイモリンフ
ォトロピンを皮下投与することにより、第２日ないし第
４日に注射されたサイクロフォスファミドによって免疫
抑制された、第０日及び第21日にヒツジ赤血球（SRBC）
で免疫化したマウスの第２抗体反応が回復した。老衰マ
ウス（24月令）にサイモリンフォトロピンを免疫化の10
日前から10日後まで毎日、次いで28日後まで隔日に0.65
mg/マウス腹腔内投与することにより、抗体反応は顕著
に回復した。
V.治療効果 治療的観点から、サイモリンフォトロピンは、一次及
び二次免疫欠陥、特にガン患者における二次免疫欠陥、
又は化学放射治療において誘導された二次免疫欠陥、フ
イルス又は細菌による感染症における二次免疫欠陥、又
は、加令のような、生理的性質が退縮的に逸脱した免疫
欠陥において用いることができる。
1.化学放射治療を受けているガン患者の免疫刺激 抗ガン化学治療を受けており、以前の放射化学治療に
基づく初期免疫抑制を示している患者に対し、12.5mg/
日の投与量で１カ月毎日、次いで隔日にさらに３カ月、
さらに少なくとも２週間に１回でさらに３カ月間、二重
盲検法により、サイモリンフォトロピンを筋肉内注射し
たところ、66％の患者において皮膚試験に対する応答が
増加した。一方、対照は42％であった。
2.老人における免疫機能の回復 75歳以上の老人に対し、サイモリンフォトロピンを50
〜500mgの投与量でカプセルによって急性経口投与する
と、ロゼット抑制試験によって評価されるFTS（Facteur
Thymique Serique）用活性が血清中に出現した。
65〜75歳の老人に対しサイモリンフォトロピンを１日
当たり12.5mgづつ20日間筋肉内投与すると、87％の老人
が５つの異なる皮下回復試験において陽性の応答を示し
た。一方、対照群は45％であった。
3.水痘 ３〜11歳の水痘にかかった子供10人にサイモリンフォ
トロピンを37.5mg/日の投与量で30日間にわたって飲用
液として投与したところ、発熱及び胞状期間並びに細菌
性合併症の数が減少した。対照群では3/10の合併症（気
管肺炎）が観察された処理群では全くなかった。
4.急性ウイルス肝炎 急性Ｂ型肝炎患者に二重盲検法により、サイモリンフ
ォトロピンを１日当り75mgの投与量で30日間投与した。
治療の終りにおいて、SGOT及びSGPTが対照に比べて減少
し、Ｂ型肝炎表面抗原が63％の患者で陰性となり（対照
では53％）、総Ｔリンパ球及びOKT4＋（ヘルパー）リン
パ球が変化せず、一方、OKT8＋（サプレッサー）リンパ
球は有意に減少した。OKT4/OKT8比率は処置患者では1.2
8から1.66に有意に増加し、一方、対照群では1.55から
1.45にわずかに減少した。
医薬形態の例 サイモリンフォトロピンは、例えば、非経口投与のた
めには減菌水、生理食塩水（アンプル又は凍結乾燥アン
プル）、経口投与のためには蒸留水又はエチルセルロー
ス（それぞれドロップ若しくは飲用液又はゼラチンカプ
セル）のような適合性を有する担体中にこれを含む薬剤
組成物として、医薬として用いることができる。
薬剤組成物は、減菌のような従来の薬剤操作に付すこ
とができ、また、保存料、安定剤、加湿剤のような従来
の添加物を含んでいてよい。
薬剤組成物は、周知の方法により調製することができ
る。
ここで、医薬製剤のいくつかの例を示す。
例１ 筋肉内投与のための、溶媒アンプルを有する凍結乾燥
アンプル。それぞれが７〜14mgのサイモリンフォトロピ
ンを含む。マニトール及び／又はラクトース及び／又は
アミノ酢酸を担体として用いることができる。
例２ 経口投与のためのバイアル。30〜75mgのサイモリンフ
ォトロピンを甘味剤（ソルビトール、ショ糖又はサッカ
リン）と共に含む10mlの溶液。pHは４ないし６であり、
これはクエン酸によって適当に調節することができる。
例３ 70mgのサイモリンフォトロピンを含むゼラチンカプセ
ル。沈殿シリカ及び微結晶セルロースを担体として用い
る。
例４ 28mg/mlのサイモリンフォトロピンと保存料（ｐ−ヒ
ドロキシ安息香酸又は安息香酸ナトリウム）とを含む、
ドロップとしての投与のための溶液 例５ ２％のサイモリンフォトロピン並びに水、グリセロー
ル、親水性又は親油性乳化剤、コンシステンシー剤、親
水性又は親油性保存料及び場合によてはパーファム（pa
rfum）を含む、局所用クリーム。
【図面の簡単な説明】
第１図はこの発明の方法の工程図、 第２図はサイモリンフォトロピンの高速液体クロマトグ
ラフィーの結果を示す図、 第３図及び第４図はサイモリンフォトロピン中の遊離ア
ミノ酸についての高速液体クロマトグラフィーの結果を
示す図、 第５図はpH3.5から10の間における等電点電気泳動の結
果を示す図である。
フロントページの続き (72)発明者 マルコ・プラダ イタリア共和国・ミラノ・20123 コル ソ・ディ・ポルタ・ティシネッセ・89 エレム・インダストリア・ファーマセウ ティカ・エス・ピー・エー内 (56)参考文献 特開 昭57−82320（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−48422（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−143945（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−258120（ＪＰ，Ａ) 実開 昭52−31816（ＪＰ，Ｕ) 特公 昭45−22558（ＪＰ，Ｂ１) 特表 昭59−501786（ＪＰ，Ａ) 米国特許3657417（ＵＳ，Ａ) 米国特許4120951（ＵＳ，Ａ)

Claims (13)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】Ｔリンパ球の分化及び機能を促進すること
    ができ、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ダル
    トン未満のタンパク質から成り、ペプチド含量が487.9m
    g/g±9.8％であり、総窒素含量が139.7mg/g±8.4％であ
    り、アルファアミノ窒素含量が28.2mg/g±8.4％であ
    り、核酸塩基含量が34.7mg/g±30.1％であり、ペントー
    スとヘキソースとの含量が合計83.9mg/g±14.3％であ
    り、280nmにおける液体高速クロマトグラフィーの結果
    が実質的に第２図に示され、ポリアクリルアミドゲル上
    での電気泳動図が実質的に第５図に示され、アスパラギ
    ン酸、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、グリシン、
    スレオニン、アラニン、アルギニン、チロシン、メチオ
    ニン、バリン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイ
    シン、リジン及びプロリンから成る総遊離アミノ酸含量
    が90.9mg/g±15.2％である胸腺抽出物であって、 （ａ） 胸腺組織をほぼ室温で無機酸で18時間ないし24
    時間処理する工程と、 （ｂ） 生成物の温度を40℃ないし48℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｃ） 生成物の温度を50℃ないし55℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｄ） 得られた溶液のpHを4.3ないし4.8に上げ、該溶
    液を75℃ないし85℃に30分間維持する工程と、 （ｅ） 溶液をろ過して第１のろ液を得る工程と、 （ｆ） 該第１のろ液のpHを6.2ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｇ） 前記第１のろ液をろ過して第２のろ液を得る工
    程と、 （ｈ） 該第２のろ液のpHを9.2ないし9.7に調節する工
    程と、 （ｉ） 前記第２のろ液をろ過して第３のろ液を得る工
    程と、 （ｊ） 該第３のろ液のpHを6.6ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｋ） 前記第３のろ液から高分子量タンパク質を除
    き、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ダルトン
    未満の第４のろ液を得る工程と、 （ｌ） 該第４のろ液から塩を除去する工程とを含む製
    造方法により製造される胸腺抽出物。
  2. 【請求項２】（ａ） 胸腺組織をほぼ室温で無機酸で18
    時間ないし24時間処理する工程と、 （ｂ） 生成物の温度を40℃ないし48℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｃ） 生成物の温度を50℃ないし55℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｄ） 得られた溶液のpHを4.3ないし4.8に上げ、該溶
    液を75℃ないし85℃に30分間維持する工程と、 （ｅ） 溶液をろ過して第１のろ液を得る工程と、 （ｆ） 該第１のろ液のpHを6.2ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｇ） 前記第１のろ液をろ過して第２のろ液を得る工
    程と、 （ｈ） 第２のろ液のpHを9.2ないし9.7に調節する工程
    と、 （ｉ） 前記第２のろ液をろ過して第３のろ液を得る工
    程と、 （ｊ） 該第３のろ液のpHを6.6ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｋ） 前記第３のろ液から高分子量タンパク質を除
    き、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ドルトン
    未満の第４のろ液を得る工程と、 （ｌ） 該第４のろ液から塩を除去する工程とを含む胸
    腺抽出物の製造方法。
  3. 【請求項３】前記高分子量タンパク質は、前記第３のろ
    液をろ過及び限外ろ過に付すことによって行なわれる特
    許請求の範囲第２項記載の方法。
  4. 【請求項４】前記（ａ）工程における処理において採用
    される無機酸は塩酸である特許請求の範囲第２項又は第
    ３項記載の方法。
  5. 【請求項５】前記第１のろ液のpHを6.2ないし6.8に約12
    時間ないし18.5時間維持される特許請求の範囲第２項な
    いし第４項のいずれか１項に記載の方法。
  6. 【請求項６】前記第２のろ液のpHを9.2ないし9.7に少な
    くとも約30分間維持される特許請求の範囲第２項ないし
    第５項のいずれか１項に記載の方法。
  7. 【請求項７】前記第３のろ液はpHを6.6ないし6.8に少な
    くとも約20分間維持される特許請求の範囲第２項ないし
    第６項のいずれか１項に記載の方法。
  8. 【請求項８】前記第１のろ液はpHを6.6ないし6.8、温度
    75℃ないし85℃に約30分間維持される特許請求の範囲第
    ２項ないし第７項のいずれか１項記載の方法。
  9. 【請求項９】前記第２のろ液はpHを9.2ないし9.7、温度
    75℃ないし85℃に約30分間維持される特許請求の範囲第
    ２項ないし第８項のいずれか１項に記載の方法。
  10. 【請求項１０】前記第３のろ液はpHを6.6ないし6.8、温
    度75℃ないし85℃に約20分ないし40分間維持される特許
    請求の範囲第２項ないし第９項のいずれか１項に記載の
    方法。
  11. 【請求項１１】前記第４のろ液は０℃ないし２℃に約72
    時間維持される特許請求の範囲第２項ないし第10項のい
    ずれか１項に記載の方法。
  12. 【請求項１２】前記胸腺組織はウシ胸腺組織である特許
    請求の範囲第２項ないし第10項のいずれか１項に記載の
    方法。
  13. 【請求項１３】Ｔリンパ球の分化及び機能を促進するこ
    とができ、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ダ
    ルトン未満のタンパク質から成り、ペプチド含量が487.
    9mg/g±9.8％であり、総窒素含量が139.7mg/g±8.4％で
    あり、アルファアミノ窒素含量が28.2mg/g±8.4％であ
    り、核酸塩基含量が34.7mg/g±30.1％であり、ペントー
    スとヘキソースとの含量が合計83.9mg/g±14.3％であ
    り、280nmにおける液体高速クロマトグラフィーの結果
    が実質的に第２図に示され、ポリアクリルアミドゲル上
    での電気泳動図が実質的に第５図に示され、アスパラギ
    ン酸、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、グリシン、
    スレオニン、アラニン、アルギニン、チロシン、メチオ
    ニン、バリン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイ
    シン、リジン及びプロリンから成る総遊離アミノ酸含量
    が90.9mg/g±15.2％である胸腺抽出物であって、 （ａ） 胸腺組織をほぼ室温で無機酸で18時間ないし24
    時間処理する工程と、 （ｂ） 生成物の温度を40℃ないし48℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｃ） 生成物の温度を50℃ないし55℃に上げ、この温
    度に約70時間ないし80時間維持する工程と、 （ｄ） 得られた溶液のpHを4.3ないし4.8に上げ、該溶
    液を75℃ないし85℃に30分間維持する工程と、 （ｅ） 溶液をろ過して第１のろ液を得る工程と、 （ｆ） 該第１のろ液のpHを6.2ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｇ） 前記第１のろ液をろ過して第２のろ液を得る工
    程と、 （ｈ） 第２のろ液のpHを9.2ないし9.7に調節する工程
    と、 （ｉ） 前記第２のろ液をろ過して第３のろ液を得る工
    程と、 （ｊ） 該第３のろ液のpHを6.6ないし6.8に調節する工
    程と、 （ｋ） 前記第３のろ液から高分子量タンパク質を除
    き、そのタンパク質成分が実質的に分子量１万ダルトン
    未満の第４のろ液を得る工程と、 （ｌ） 該第４のろ液から塩を除去する工程とを含む製
    造方法により製造される、Ｔリンパ球を刺激するのに有
    効な量の胸腺抽出物と薬理的に許容できる担体又は希釈
    剤とを含む、Ｔリンパ球の分化及び機能促進剤組成物。
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