JP2558446B2 - 試料の低温固定装置 - Google Patents

試料の低温固定装置

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JP2558446B2 JP60095696A JP9569685A JP2558446B2 JP 2558446 B2 JP2558446 B2 JP 2558446B2 JP 60095696 A JP60095696 A JP 60095696A JP 9569685 A JP9569685 A JP 9569685A JP 2558446 B2 JP2558446 B2 JP 2558446B2
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Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明は、試料、特に、水もしくは液体の含量の高い
生物学的、医学的もしくは技術的な試料を低温固定させ
るための装置に関する。
本発明は一般的に、 冷却剤の収納槽によって囲まれた浸漬用冷却媒体のた
めの金属タンクを備えると共に、 試料を保持する試料投入手段を備え、 生物学的、医学的又は技術的目的のための、水分ない
し液体成分の含有の高い試料を冷却固定する形式の低温
固定装置に関する。
[従来の技術] 光学的検査、特に電子顕微鏡による検査のために、液
体含量の高い試料、例えば生物学的もしくは医学的試
料、ゲル又は懸濁体を低温固定(急速冷凍)させるため
に、2つの方法が賞用されている。これらは、浸漬低温
固定法、即ち、冷却浴中に試料を浸漬させる方法と、金
属ミラー低温固定法、即ち、高度に研磨された金属面に
試料を当接する方法である。どちらの方法においても、
水相又は液混合相の分離偏析が最小に縮減されるよう
に、最短時間内に最大可能な熱量を試料から抽出するこ
とがたいせつである。
この点に関連して、いずれの方法も、全部の既知の試
料及び全部の既知の後調整にとって理想的ではない。例
えば浸漬低温固定法は、(裸グリッド法による)グリッ
ドメッシュ中の極微細な液フィルム及び薄い「サンドイ
ッチ」調製物を冷凍させることに特に適合し、金属ミラ
ー法は、この場合には使用できない。
他方では、高度に冷却させた金属ミラーに動物もしく
は植物の器官及び組織を衝突させた場合には、予め存在
している表面レリーフ(突部)が衝撃により相当程度ま
で扁平化させるため、最適の扁平面が得られる。従っ
て、金属ミラー上に生じた表面は、低温−超ミクロトー
ムにより切片を後に調製することに理想的に適合してい
るが、浸漬後は、低温固定組織は、この使用に適合させ
ることについて実質的な制限を受ける。
従って、冷却用、温度測定用及び調節用、試料の投入
用の各種部材等、さらには凍結切断及び凍結エッチング
装置、低温置替装置又は低温−ウルトラミクロトーム等
による後の調製等の以降の処理のための装置へ或いは電
子顕微鏡へ冷凍試料を後に低温移送するための装置等の
如く、多くの点で同種の部分から必然的に成立っている
2つの別々の高価な機器を多くの場合に必要とすること
は、実用上不具合であり、コスト高にもなる。
[発明が解決しようとする問題点] 従って、本発明の目的は、複雑な変換ステップ(異っ
た操作系統間の切替、適合操作)を必要とせず、基本的
な装置の生産コストを増大させたり、構造的な設計を過
度に複雑にしたりせずに、前記の形式の試料を金属ミラ
ー面上もしくは冷却浴中において凍結させるための浸漬
及び金属ミラー低温固定のための万能型の装置を提供す
ることにある。
[問題点を解決するための手段] 本発明は、供給面に沿って試料を投入することによっ
て試料を低温固定させる装置であって、冷却剤の容器
と、該容器の内部に配された試料冷却媒体用のタンク
と、ミラー面を備えた部材とを有し、該部材は、該供給
路内の或る位置に着脱自在に配置されるようになってお
り、該タンクと該部材との間には高度の熱伝導接触が与
えられるようにした、試料の低温固定装置を提供する。
即ち、本発明によれば、冒頭に記載した形式の試料の
低温固定装置において、 金属ミラー面部材(17、17′;19、20、20′;19′、2
1、21′)が浸漬用冷却媒体(4)のための金属タンク
(3)に外嵌又は内嵌状態に上方から着脱可能にかつ金
属タンク(3)と良好な熱伝導を保って装着されるよう
構成されると共に、 該金属ミラー面部材の装着時にその上面をなすミラー
面(17′、20′、21′)が前記冷却剤の収納槽内に位置
するように構成され、 該金属ミラー面部材のミラー面(17′、20′、21′)
が試料(9)の供給路(i)内において試料投入手段
(10、11、12)に対向して配設され、 金属タンク(3)内の液状の浸漬用冷却媒体中へ試料
を浸漬するため、該金属ミラー面部材を除去可能であ
り、かつ、該金属ミラー面部材の装着時に金属ミラー面
へ試料を載置可能に構成され、 浸漬法又は金属ミラー法による試料冷却を切替可能で
ある、 ことを特徴とする。
タンクは、ミラー面を備えた部材がタンクに、ミラー
面とタンクとの間の良好な接触を保って容易に固着され
るように構成することができる。この部材は通常は金属
ミラー面と共に、金属から作製する。
このようにすると、浸漬によっても、金属ミラー表面
上においても、低温固定装置を交替して使用でき、その
目的のために2つの複雑な装置部品を購入し組立てる必
要はない。そのため、資本費が節減されるだけでなく、
実験室のスペースも節減される。装置を取扱う要員の訓
練も、単一のシステムのみについて行なうだけでよい。
本発明の好ましい実施態様によれば、前記部材は、キ
ャリヤと、該キャリヤ内に挿入されるかその上に配され
るようにした小さな寸法の交換可能なミラー要素とを備
えており、該キャリヤは、冷却浴のタンクに脱着可能に
固定することができる。金属ミラー表面は、ミラー要素
上に形成することができる。この実施態様によれば、使
用済のミラー面をすみやかに交換すると共に、特に簡単
に洗浄し再研磨することが可能になる。更に、この実施
態様によれば、特別に適合した高価な材料から金属ミラ
ーを作製し、特別に適切な高価な被覆を金属ミラーに付
与することができる。
本発明の別の好ましい実施態様によれば、金属ミラー
のキャリヤは、試料冷却媒体のタンク(一般には円筒
体)と同一の幾何学的形状を有するため、金属ミラーの
キャリヤが冷却浴の役目をする。そのため装置を実際上
同一に作動させることができ、どちらの方法について
も、完全に再現可能な温度調節及び温度測定がなされる
と共に、一の方法から他の方法への切替を簡単に行なわ
れる。
試料冷却媒体は、プロパン、エタンもしくはハロゲン
化炭火水素のような低温発生冷却媒体としてもよい。
本発明の更に別の有利な実施態様によれば、ミラー面
は、投入の間試料の供給路及び/又は投入装置の軸線と
平行でそれに対し偏心し垂直軸線の回りに回動させるこ
とができる。この手段によれば、1回の低温固定操作の
終了後にミラーを回動させ、次の低温固定のためにミラ
ー面の未使用の別の領域を使用可能とすることが可能に
なる。
次に本発明を図面に基づいて一層詳細に説明する。
[実施例] 第3図に示した従来の浸漬低温固定方式において、試
料冷却媒体4によって形成された試料冷却浴のための浸
漬タンク3は、絶縁材2によって囲まれた容器1内に配
置されている。浸漬タンク3は、液体窒素(LN2)の形
の冷却剤5によって一般に冷却される。スタンバイ中の
LN2とタンク3との間の直接の接触は、スリーブ6によ
って阻止される。このようにして、LN2の大きな損失な
しに、加熱カートリッジ7、熱センサ8及び電気制御系
(図示しない)によって、冷却剤5の沸点(−196℃)
よりも高い一定の温度に調節し、この温度を保持するこ
とができる。これは、普通に使用される大部分の冷却媒
体4(例えばプロパン、エタンもしくはハロゲン化炭火
水素)にとって非常にたいせつである。
試料9は、案内要素11内において正確に案内される投
入ロッド10上に支持されている。投入ロッド10は、トリ
ガ12の作動後に、重力作用のみによって、或いは、ばね
力又は他の電気機械手段もしくは液圧手段による加速下
に、矢印の方向に供給路に沿って、試料9と共に下行
し、試料9を冷却媒体4中に、低温固定のために浸漬さ
せる。
金属ミラー面上に低温固定する場合には、これと全く
別の手順が取られる。これは、第4図の簡単な従来技術
の構造に示されている。冷却材5としてLN2を使用する
場合、それは、デユワーびん13のような適当な容器中に
保持される。LN2は金属製のブロック14を−196℃に近い
温度まで冷却する。ブロック14は、インサート15によっ
て支持され、インサート15は一例として、円筒状の室1
5′を囲むように形成することができ、室15′は断熱カ
バー16によって最初に頂部を閉ざすことができる。気体
窒素(GN2)は、矢印によって示すように、LN2から絶え
ず発生し、インサート15の通路15aを経てデユワーびん1
3を離れ、室15′に入り、カバー16の通路16′を経て、
カバー16から排出される。室15′の基底部を形成するブ
ロック14の表面は、高度に研摩され、金属ミラー面14′
を形成している。試料9は、カバー16を取外し、トリガ
12を作動させた後に、高速でミラー面14′に衝突するこ
とにより、常に存在している表面のリリーフを平たんに
する。この方法によって、試料9の外層の構造が良好に
保存されるため、後に低温超ミクロトミーを行なうため
の最適条件が得られる。
第3,4図に示した別々の方式は、第1図に示した本発
明による単一の装置(第3図の装置に関連している)と
して組合わせることができる。金属ミラー面の低温固定
のために、金属ミラー面を形成する高度に研摩された上
面17′を備えた回動自在な金属製の回動部材17は、冷却
媒体4の金属製タンク3上に単にカバー状に載置され
る。この場合に、それぞれの扁平な表面と円筒状の表面
とが良好な熱接触を確実に保ちうるようにするだけでよ
い。これは、円筒面の軸線が対応する扁平な表面と正確
に直交し、また使用された金属の熱膨張を勘案して、単
に回動部材17をタンク3上に固定的に配置したりそれか
ら取出したりすることを可能にする量だけ円筒面(複
数)の半径が相異している場合に達せられる。
金属面による低温固定を行なう前に、第3図に示した
レベルよりも、冷却材5のレベルを高くし、冷却材5
(第3図)の表面5′のレベルがスリーブ6の頂部縁の
上方にあるようにして、冷却剤5を金属製の回動部材17
と直接に接触させることが望ましい。それは、この場合
にLN2の沸点(−196℃)に非常に近い最低温度が達せら
れるからである。浸漬低温固定方式と金属鏡面低温固定
方式との本発明による図示の組合せによれば、冷却媒体
4を系中から取出さなくともよいため、冷却媒体4への
浸漬と金属ミラー17′への当接とによって次々に同一の
材料を固定することが可能になる。
第2a〜2c図に本発明による低温固定装置の変形例が示
され、そのうち第2a図は、第3図にほぼ対応した浸漬低
温固定装置を示し第2b図は、金属ミラー面の低温固定に
適した装置を示す。第2a、2b図において、冷却媒体4
は、タンク3中に配された円筒管18中に保持されてい
る。円筒管18は、金属製の円筒状キヤリヤ19の形状のミ
ラー面を備えた部材と交換することができる。交替操作
について、液体冷却剤は、後に浸漬低温固定を行なうた
めに圧力容器内に、又は低温において既知の適宜の仕方
で貯蔵しておくことができる。
第2a,2b図に示した方式の有利な変形として、円筒状
のキヤリア19自身ではなく、低温固定終了後に同一の部
材と交換可能な小型の載置又は挿入可能なミラー要素20
上に、金属ミラー面20′を配設してもよい。
ミラー面は、金属ミラー面の低温固定の間に多少劣化
することが多いので、この交換により、作業を迅速に行
なうことができる。これは、要素20を支持するキヤリア
19及びタンク3の熱容量に比べて要素20の熱容量が低い
ので、交換後にLN2の温度に冷却する操作を短時間に終
了させることができるためである。この構成の別の利点
は、金属ミラー面の研摩がより簡単に行なわれること、
キヤリア19全体を特別に適切な材料例えば純度99.999%
のCuないしAgから製造する必要がないこと、貴金属又は
他の特に適切な層例えばテフロン被覆を過大なコストを
要せずにミラー面上に形成しうること、である。第1図
に示した低温固定装置の場合と同様に、金属ミラー面作
業にとって、冷却剤5を冷却剤のレベル5′まで高く
し、それによって、冷却剤5をミラー面20′上に溢注さ
せることなく、少くとも金属製のタンク3に、そして特
に好ましくは、ミラー要素20に、LN2を直接に接触させ
ることが適切である。
第2c図に、ミラー面21′を備えたミラー板21を軸線AA
の回りに回動自在に配設した変形実施例を示す。軸線AA
は、供給軸線及び投入ロツド10の軸線に対し偏心させて
平行に配設されているため、完全に清浄な未使用の表面
領域を後の低温固定のために投入ロツド10の下方にもっ
てくるには、キヤリア19′又はタンク3に対してミラー
板21を回動させるだけでよい。
第1,2図に示した構成のいろいろの変更を本発明の範
囲内で試みることができる。一例として、本発明の原理
は、温度調節又は温度測定方式によっても、冷却媒体4
を液化したりLN2(冷却剤5)のレベル5′を調節した
りするための補助装置によっても影響されない。金属ミ
ラーは、異なった形状又は締着形式の要素上に配置し、
または異なった仕方で表面処理することができる。資料
の投入手段並びに投入装置及びトリガの構成も適宜変更
するこができる。
〔発明の効果〕
本発明の構成により、浸漬法によっても、金属ミラー
法によっても、同じ低温固定装置をその簡単な構成部品
の交換により、選択的に使用でき、その目的のために2
つの複雑な部品を購入し組立てる必要がない。そのた
め、複雑な変換ステップ(即ち、異った操作系統間の切
替、適合操作)を必要とせず、装置の基本的構造、設計
を複雑化することなく、双方の冷却固定方法が、容易に
選択して操作可能となった。
その結果、生産コストも基本的に増大することなく2
系統の操作が切替可能となったことは、多数の試料を迅
速に冷却固定する上で、顕著な効果を奏するものであ
る。しかもその交替のための操作性が極めてよく、双方
の系統と共に、操作上の不都合が存在しないことも本発
明の効果を一層裏付けるものである。
【図面の簡単な説明】
第1図は、浸漬低温固定と金属ミラー表面上の低温固定
とを交互に行ないうるようにした本発明による低温固定
装置の略断面図、第2a,2b,2c図は、本発明による低温固
定装置の変形実施例を示す略断面図である。第3図は、
従来の技術による浸漬低温固定装置の略断面図、第4図
は、従来の技術による金属ミラー表面の低温固定装置を
示す第3図と同様の略断面図を示す。 符号の説明 1……容器。3……タンク。 4……冷却媒体。5……冷却剤。 9……試料。 17……回動部材(ミラー面を備えた部材)。 17′……上面(ミラー面)。 20……ミラー要素(ミラー面を備えた部材)。 20′……ミラー面。

Claims (7)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】(a)冷却剤の収納槽によって囲まれた浸
    漬用冷却媒体のための金属タンクを備えると共に、 (b)試料を保持する試料投入手段を備え、 (c)生物学的、医学的又は技術的目的のための、水分
    ないし液体成分の含有の高い試料を、冷却固定する形式
    の低温固定装置であって、 (d)金属ミラー面部材(17、17′;19、20、20′;1
    9′、21、21′)が浸漬用冷却媒体(4)のための金属
    タンク(3)に外嵌又は内嵌状態に上方から着脱可能に
    かつ金属タンク(3)と良好な熱伝導を保って装着され
    るよう構成されると共に、 (e)該金属ミラー面部材の装着時にその上面をなすミ
    ラー面(17′、20′、21′)が前記冷却剤の収納槽内に
    位置するように構成され、 (f)該金属ミラー面部材のミラー面(17′、20′、2
    1′)が試料(9)の供給路(i)内において試料投入
    手段(10、11、12)に対向して配設され、 (g)金属タンク(3)内の液状の浸漬用冷却媒体中へ
    試料を浸漬するため、該金属ミラー面部材を除去可能で
    あり、かつ、該金属ミラー面部材の装着時に金属ミラー
    面へ試料を載置可能に構成され、 (h)浸漬法又は金属ミラー法による試料冷却を切替可
    能である、 ことを特徴とする低温固定装置。
  2. 【請求項2】該金属ミラー面部材は、回転自在なキャリ
    ヤ(19、19′)と、交換可能なミラー要素(20、21)と
    を含み、該ミラー面(20′、21′)は、該交換可能なミ
    ラー要素上に形成され、該交換可能なミラー要素は該キ
    ャリヤにより密接支持されている特許請求の範囲第1項
    記載の試料の低温固定装置。
  3. 【請求項3】該金属ミラー面部材のキャリヤ(19、1
    9′)を該タンク(3)の円筒状の室に嵌装可能であ
    り、該タンク(3)は浸漬用冷却媒体(4)を受容する
    か又は浸漬用冷却媒体(4)を収納する着脱可能な円筒
    管(18)を受容することを特徴とする特許請求の範囲第
    1項又は第2項記載の低温固定装置。
  4. 【請求項4】該供給路から隔てられ該供給路(i)と平
    行な軸線(AA)の回りに該ミラー面を回転自在とし、該
    回転軸線(AA)から供給路(i)を偏心させた特許請求
    の範囲第1項ないし第3項の一に記載の試料の低温固定
    装置。
  5. 【請求項5】低温発生用の該冷却剤として液化窒素を用
    い−100℃以下の温度に該タンク(3)を冷却するよう
    にした特許請求の範囲第1項ないし第4項の一に記載の
    試料の低温固定装置。
  6. 【請求項6】該ミラー面(17′、20′、21′)を該供給
    路(i)に対しほぼ直角に配した特許請求の範囲第1項
    ないし第5項の一に記載の試料の低温固定装置。
  7. 【請求項7】該金属ミラー面部材の上部が、収納槽内の
    液面上昇した冷却剤と、ミラー面を除いて直接接触可能
    に構成されたことを特徴とする特許請求の範囲第1項な
    いし第6項の一に記載の試料の低温固定装置。
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