JP2024532167A - 抗ｆｌｔ３抗体、ｃａｒ、ｃａｒ ｔ細胞、及び使用方法 - Google Patents

抗ｆｌｔ３抗体、ｃａｒ、ｃａｒ ｔ細胞、及び使用方法 Download PDF

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エリナ シュレスタ，
レイモンド リアン，
カリーナ レイチェル シロチンスキー，
ジェフダ， ロナン ベン
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ヒーモジェニックス ファーマシューティカルズ エルエルシー
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Abstract

本明細書では、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域と、単鎖フラグメントとを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント）を提供する。いくつかの態様において、抗体またはフラグメントは、ヒトＦＬＴ３に特異的に結合する。また、本明細書では、このような抗体またはフラグメントを含む組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））も提供する。また、本明細書では、このようなＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）も提供する。また、本明細書では、このような抗体またはフラグメント、ＣＡＲ、及び免疫細胞の使用方法も提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願第６３／２３３，５３０号（２０２１年８月１６日出願）及び米国仮特許出願第６３／２５３，００９号（２０２１年１０月６日出願）の利益を主張し、これらの各出願は参照により全体として本明細書に援用される。
電子配列表の参照
電子配列表（ＨＥＰＨ＿００１＿００２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ、サイズ：２２８，８４５バイト、作成日：２０２２年８月１１日）の内容は、参照により全体として本明細書に援用される。
いくつかの態様において、本発明は、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、このような抗体またはフラグメントを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、このようなＣＡＲを発現する免疫細胞、ならびにこのような抗体、ＣＡＲ、及び細胞の使用に関する。
ＦＬＴ３
ＦＬＴ３とは、Ｆｍｓ関連受容体チロシンキナーゼ３のことである。ＦＬＴ３は、胎児肝キナーゼ２（ＦＬＫ２）の別名でも知られている。ＦＬＴ３は、クラスＩＩＩチロシンキナーゼ受容体ファミリーのメンバーであり、正常な造血前駆細胞及び白血病芽球内で発現し、細胞の増殖、分化、及び生存に重要な役割を果たしている。ＦＬＴ３リガンドによるＦＬＴ３受容体の活性化は、受容体の二量化及びリン酸化をもたらし、下流のシグナル伝達経路（ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）２シグナル伝達因子（ＪＡＫ２）、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）５、及びマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路を含む）を活性化する。ＡＭＬ患者のおよそ４０％に認められるＦＬＴ３遺伝子の変異は、その自己リン酸化及び構成的活性化を促進し、リガンド非依存性増殖につながると考えられている（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ Ｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００７）１９（６）：６３５－６４９）。
正常なＦＬＴ３発現は、ほとんどの場合ＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）、初期造血前駆細胞（ＨＰ）、及び樹状細胞（ＤＣ）に限定される。ＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）との結合を通じたＦＬＴ３の活性化は、下流の血液系列の正常な分化を促進する。
ＦＬＴ３は、様々な血液悪性腫瘍（ＡＭＬ患者の大部分を含む）で高発現する。ＡＭＬを有する患者における大半のＡＭＬ芽球はＦＬＴ３を発現し、この発現が生存及び増殖を促進すると考えられている。ＦＬＴ３を特異的に標的とするためにチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）が開発されているが、ＦＬＴ３に対する耐性をもたらす二次変異が大きな障害としてとどまっている。
造血幹細胞
造血幹細胞は、全ての血液細胞の共通先祖である。多分化能細胞として複数の細胞系列（ただし、三胚葉に由来する全ての細胞系列ではない）に分化することができる。造血幹細胞の分化により、造血の２つの主な分岐であるリンパ系及び骨髄系の細胞系列が生じる（Ｋｏｎｄｏ，Ｍ．“Ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１０ Ｎｏｖ；２３８（１）：３７－４６）。リンパ系列細胞としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。骨髄系系列としては、巨核球及び赤血球（ＭｅｇＥ）に加えて、骨髄系系列に属する顆粒球（好中球、好酸球、及び好塩基球）、単球、マクロファージ、ならびにマスト細胞（ＧＭ）の種々のサブセットが挙げられる（同上、Ｋｏｎｄｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；２１：７５９－８０６．，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ：ｂａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．２０００ Ｆｅｂ ２５；２８７（５４５７）：１４４２－６を引用；またＩｗａｓｋａｋｉ，Ｈ．ａｎｄ Ａｋａｓｈｉ，Ｋ．“Ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２６（６）Ｊｕｎｅ ２００７，７２６－４０も参照）。
ＨＳＣは、自己複製能力及び血液系列への分化能力を提示する。すなわち、幹細胞が分裂すると、平均で娘細胞の５０％が細胞系列に関与し、一方残りの５０％は分化しない。このプロセスは、非対称細胞分裂により同じ数の幹細胞を維持し、分裂する各幹細胞が１つの新たな幹細胞及び１つの分化した細胞を生じるようにする。これに対し、対称分裂の場合、幹細胞は１００％の同一の幹細胞を生じる（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ．：Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ，Ｖ．，Ｃａｔｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｔｕｄｄｅｎｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００５）：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｉｃｈｅ ａｎｄ Ｗｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｐｐ．１－１２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．）。
リンパ系及び骨髄系の系列は、前駆細胞レベルで分離可能である。リンパ系共通前駆細胞（ＣＬＰ）は、生理的条件下では、際立った骨髄系潜在能力を伴わずに全てのタイプのリンパ球に分化することができ（Ｋｏｎｄｏ Ｍ，Ｓｃｈｅｒｅｒ ＤＣ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｋｉｎｇ ＡＧ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｓｕｇａｍｕｒａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ－ｆａｔｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｂｙ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００ Ｓｅｐ ２１；４０７（６８０２）：３８３－６）、実験条件によっては、いくつかの骨髄系関連遺伝子がＣＬＰで検出される場合がある（Ｄｅｌｏｇｕ Ａ，Ｓｃｈｅｂｅｓｔａ Ａ，Ｓｕｎ Ｑ，Ａｓｃｈｅｎｂｒｅｎｎｅｒ Ｋ，Ｐｅｒｌｏｔ Ｔ，Ｂｕｓｓｌｉｎｇｅｒ Ｍ．Ｇｅｎｅ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｐａｘ５ ｉｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００６ Ｍａｒ；２４（３）：２６９－８１）。
同様に、骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）は、Ｂ細胞の潜在能力を伴わずに、または極めて低いレベル潜在能力を伴って、全てのクラスの骨髄系細胞を生じ得る（Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ．Ａ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｔｈａｔ ｇｉｖｅｓ ｒｉｓｅ ｔｏ ａｌｌ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００ Ｍａｒ ９；４０４（６７７４）：１９３－７）。もう１つの細胞タイプである樹状細胞（ＤＣ）は、ＣＬＰからもＣＭＰからも発生し得るため、ＤＣはリンパ系または骨髄系いずれの系列にも明確には分類されない（Ｍａｎｚ ＭＧ， Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００１ Ｊｕｎ １；９７（１１）：３３３３－４１，Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｍａｎｚ Ｍ，Ｍｅｒａｄ Ｍ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｅｎｇｌｅｍａｎ ＥＧ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ８ａｌｐｈａ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．２０００ Ｄｅｃ １５；２９０（５４９９）：２１５２－４））。ＣＭＰは増殖し、巨核球－赤血球（ＭｅｇＥ）前駆細胞及び顆粒球－単球（ＧＭ）前駆細胞に分化し、さらに巨核球、赤血球、顆粒球、単球などを生じる（Ｉｗａｓａｋｉ Ｈ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ．Ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００７；２６：７２６－７４０）。
転写因子の発現レベルの違いが、分化細胞の系列所属を決定する可能性がある。転写因子ＰＵ．１及びＧＡＴＡ－１は、それぞれ骨髄系及び赤血球／巨核球の系列分化と関連付けられている（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ．：Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ，Ｖ．，Ｃａｔｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｔｕｄｄｅｎｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００５）：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｉｃｈｅ ａｎｄ Ｗｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｐｐ．１－１２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．）。
ＨＳＣの特性評価
ＨＳＣは未分化であり、小リンパ球に似ている。ＨＳＣの大部分は、細胞周期のＧ０期における休止状態にあり、これにより細胞周期依存性薬物の作用から保護されている。幹細胞の休止状態は、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ－β）により維持されている。ＴＧＦ－βの活性はｐ５３により媒介される。これは、細胞増殖を調節し、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤ｐ２１を標的とする腫瘍抑制遺伝子である（Ｇｏｒｄｏｎ， Ｍ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ．：Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ，Ｖ．，Ｃａｔｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｔｕｄｄｅｎｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００５）：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｉｃｈｅ ａｎｄ Ｗｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｐｐ．１－１２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．）。ＨＳＣの休止は、幹細胞コンパートメントを保護し、長期間の間幹細胞プールを維持するために不可欠であるだけでなく、複製に関連する変異の蓄積を最小限に抑えるためにも不可欠である。ＨＳＣの休止を維持する内因性転写因子の多くは、白血病に関連することが分かっている。例えば、急性骨髄性白血病において、ＦｏｘＯ及び骨髄系／リンパ系または混合系列の白血病の融合をもたらす染色体転座が報告されている（例えば、Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１を参照）。
正常なＨＳＣの大半は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋骨髄細胞分画に存在し、また一部のＨＳＣはＣＤ３４－／Ｌｉｎ－細胞にも観察される。
ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋細胞分画は、短期間の再増殖活性が付与されたいくつかのＨＳＣを含む。他の認識されているマーカーとしては、ＣＤ４及びＣＤ８などの最終分化マーカーの欠如を伴ったチロシンキナーゼ受容体ｃ－ｋｉｔ（ＣＤ１１７）が挙げられる（Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１１）７５０（２）：４７－５９）。
ＨＳＣの分類
造血幹細胞プールは、３つの主な群に細分することができる：（１）短期ＨＳＣ：分化細胞のクローンを４～６週間のみ生成可能；（２）中期ＨＳＣ：分化細胞の後代を６～８か月間保持可能、その後消滅；（３）長期ＨＳＣ：造血を無期限に維持可能。（Ｔｅｓｔａ Ｕ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１１）９０（３）：２４５－２７１）。
造血
造血は、ＨＳＣが成熟血球に分化する高度に協調されたプロセスであり、特殊な調節性微小環境によって支持され、この微小環境は、幹細胞及び前駆細胞の運命指定を制御する構成要素からなり、また、必須の因子を供給することによってそれらの発達を維持している（「ニッチ」）。本明細書で使用する場合、「骨髄（ＢＭ）ニッチ」という用語は、多様な系列の血液細胞の生存、成長、及び分化に必須な役割を担う要素（例えば、骨芽細胞、破骨細胞、骨髄内皮細胞、間質細胞、脂肪細胞、細胞外マトリックスタンパク質（ＥＣＭ））から構成される、十分に組織化された構造を指す。骨髄ニッチは、ＨＳＣが増殖し、成熟し、骨髄系及びリンパ系の前駆細胞を生じる上での重要な出生後の微小環境である。
骨髄（ＢＭ）は、全ての動物の骨の骨髄腔に存在する。骨髄は、様々な前駆細胞及び成熟細胞タイプからなり、これには造血細胞（成熟した血液細胞の前駆細胞）及び間質細胞（広範囲の結合組織細胞の前駆細胞）が含まれつが、これらはいずれも他の細胞タイプにも分化可能であるように思われる。骨髄の単核分画には、間質細胞、造血前駆細胞、及び内皮前駆細胞が含まれる。
二次リンパ系臓器（例えば、赤脾髄及び白脾髄を含む明確な肉眼的構造を有する脾臓）とは異なり、ＢＭは、骨芽細胞を含む骨内膜以外には明確な構造的特徴を有しない。骨内膜領域は、石灰化した硬質の骨に接触しており、ＨＳＣの活性維持に必要な特殊な微小環境を提供する（Ｋｏｎｄｏ Ｍ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１０）２３８（１）：３７－４６；Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１）。
ＨＳＣは、ニッチ内で複数の供給源（線維芽細胞、内皮及び細網細胞、脂肪細胞、骨芽細胞、ならびに間葉幹細胞（ＭＳＣ）を含む）から生じる支持及び成長シグナルを受け取っていると考えられている。ニッチの主な機能は、栄養、酸素、傍分泌及び自己分泌シグナルにおける局所的変化を統合すること、ならびに全身循環からのシグナルに応答してＨＳＣの休止、輸送、及び／または拡大を変化させることである（Ｂｒｏｎｅｒ，Ｆ．＆ Ｃａｒｓｏｎ，ＭＣ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ．２００９；４：ｐｐ．２－４．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ．）。
真のＭＳＣの性質は依然として誤解されているものの、最近では、ＣＸＣケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）発現ＣＤ１４６ ＭＳＣが、類洞表面に存在し、類洞壁構造の構成に寄与する自己複製前駆細胞であり、アンジオポエチン１（Ａｎｇ－１）を生成し、骨内膜性ニッチを形成する骨芽細胞を生成可能であることが報告された（Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ，ＭＹ，＆ Ｊｏｒｄａｎ，ＣＴ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（２０１１）９（５）：５９１－５９９）。これらのＣＸＣＬ１２細網細胞は、必須であるが異なる維持シグナルが提供される骨芽細胞及び血管ニッチ間で、ＨＳＣを往復させるための通過経路として機能する可能性がある。
骨髄ＭＳＣにより生成されるサイトカイン及びケモカインは、様々な局所的生成に伴い、またサイトカイン結合グリコサミノグリカンの効果により、特定のニッチ内で濃縮する。これらのうち、ＣＸＣＬ１２／間質細胞由来因子１アルファは、ＨＳＣホーミングを正に調節し、一方形質転換成長因子ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（Ｆｌｔ３）リガンド及びＡｎｇ－１は、休止因子として作用する（例えば、Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１を参照）。ＣＸＣＬ１２－ＣＸＣＲ４シグナル伝達は、個体発生時におけるＨＳＣのＢＭへのホーミングに加えて、コロニー形成前駆細胞の生存及び増殖にも関与する。ＨＳＣの末梢血へのＣＸＣＲ４選択的アンタゴニスト誘導性動員は、ＨＳＣを造血器内に保持する上でのＣＸＣＬ１２の役割をさらに示すものである。ＢＭ細胞生着は、ＢＭＳＣに生成される複合細胞外マトリックスによる後続の細胞間相互作用を伴う。したがって、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ－１）またはフィブロネクチンは、ＢＭ由来ＭＳＣとの接着に不可欠である。このように、造血幹細胞の増殖動態の制御は、正しい造血細胞生成を調節するために極めて重要である。これらの制御機序は、幹細胞にとって内因性であるか、外因性であるか、または両方の組合せに分類することができる（例えば、Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１を参照）。
ＨＳＣの自己再生及び分化は、外的要因により制御することができ（外因性制御）、例えば、造血微小環境における細胞間相互作用、またはサイトカイン、例えば、ＳＣＦ（幹細胞因子）及びその受容体ｃ－ｋｉｔ、Ｆｌｔ－３リガンド、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α
などがある。サイトカインは、様々な造血細胞機能を複数のシグナル伝達経路の活性化により調節する。細胞の増殖及び分化に関連する主な経路としては、ヤヌスキナーゼ（Ｊａｋ）／シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼ、及びホスファチジルイノシトール（ＰＩ）３－キナーゼの経路がある（Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ（Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１）。
さらに、他の転写因子、例えば、幹細胞白血病（ＳＣＬ）造血転写因子；ＧＡＴＡ－２；ならびに細胞周期制御に関与する遺伝子産物、例えば、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＫＩ）ｐｌ６、ｐ２１、及びｐ２７の発現が、最初期段階からの造血細胞発生に必須である（内因性制御）ことが示されている（Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１）。
Ｎｏｔｃｈ－１－Ｊａｇｇｅｄ経路は、
細胞内シグナル伝達及び細胞周期制御により細胞外シグナルと統合する役割を果たすことができる。Ｎｏｔｃｈ－１は、造血器幹細胞膜の表面受容体であり、間質細胞上にあるそのリガンドＪａｇｇｅｄに結合する。この結果、Ｎｏｔｃｈ－１の細胞質部分が切断され、これが今度は転写因子として作用し得る（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ．：Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ，Ｖ．，Ｃａｔｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｔｕｄｄｅｎｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００５）：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｉｃｈｅ ａｎｄ Ｗｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｐｐ．１－１２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．）。
ＢＭ／ＨＳＣ移植を用いて治療される障害
骨髄（ＢＭ）／造血幹細胞
（ＨＳＣ）移植を用いて治療される障害としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、非悪性遺伝性及び後天性骨髄障害（例えば、鎌状赤血球貧血、ベータ－サラセミアメジャー、難治性ダイヤモンド－ブラックファン貧血、骨髄異形成症候群、特発性重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、赤芽球ろう、ファンコーニ貧血、
無巨核球増加（ａｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）、または先天性血小板減少症）、多発性骨髄腫、及び重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）が挙げられる。
造血器悪性腫瘍
ほとんどの造血器悪性腫瘍は、機能的に不均質な細胞を含み、がん幹細胞として知られるサブセットのみが腫瘍の維持に関与する。がん幹細胞は、自己再生、生存期間延長を含めた正常な組織幹細胞を想起させる性質と、より分化した特性を有する細胞を生じる能力とを有することから、このような名称が与えられている（Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＳＡ，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８ Ｊａｎ；１４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １）：１２－１６）。
造血幹細胞における形質転換事象は、腫瘍形成性ヒットに関連する分化の程度に応じて、いくつかの異なる悪性腫瘍（限定されるものではないが、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、及びおそらくは急性リンパ性白血病すらも含む）をもたらす可能性がある（Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＳＡ，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８ Ｊａｎ；１４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １）：１２－１６）。
がん幹細胞という概念は、特定の組織の腫瘍がしばしば、起源の組織に認められる細胞不均一性を再現「しようとする」ように見え、したがって、腫瘍内には様々な細胞タイプを生じる幹細胞のような細胞が存在するという考えに基づくものである。この仮説に対する基本的な試験は、腫瘍細胞が、腫瘍を再生する能力を有する細胞と、この能力を有しない細胞とに分けられるかどうかである。この細胞階層は、急性骨髄性白血病において最も明確に実証されており、一部のＡＭＬは、免疫不全マウスにおいて白血病を開始できるユニークな免疫表現型を有する細胞を所持し、一方ほとんどの細胞は白血病発生を開始できない。さらに、白血病を開始する細胞は、腫瘍開始活性を喪失した細胞も生じ、そのため、元の腫瘍に認められる細胞不均一性を再現する（Ｌａｐｉｄｏｔ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．１９９４；３６７：６４５－６４８；Ｂｏｎｎｅｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．１９９７；３：７３０－７３７）。
急性骨髄性白血病
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、骨髄系系列における分化の停止及び骨髄内の未熟な前駆細胞の蓄積を特徴とし、結果として造血不全が生じる、クローン性障害である（Ｐｏｌｌ ｙｅａ ＤＡ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１１）１５２（５）：５２３－５４２）。白血病芽球の外観は、患者間で幅広い多様性が認められる。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における白血病開始細胞の発見は、ＡＭＬ芽球の大部分が増殖せず、ごく少数が新しいコロニーを形成可能であるという発見により始まった（Ｔｅｓｔａ Ｕ，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１１）９０（３）：２４５－２７１）。全てのＡＭＬ症例に共通する特徴は異常な分化停止であり、これにより骨髄内に２０％超の芽球が蓄積する（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ＤＧ ａｎｄ Ｔａｌｌｍａｎ ＭＳ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００２）１（５）：４１７－４２０）。
骨髄性白血病の８０％超は少なくとも１つの染色体細片に関連し（Ｐａｎｄｏｌｆｉ ＰＰ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００１）２０（４０）：５７２６－５７３５）、１００超の異なる染色体転座がクローニングされている（Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ＤＧ ａｎｄ Ｔａｌｌｍａｎ ＭＳ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００２）１（５）：４１７－４２０）。これらの転座にはしばしば、造血系列発生に重要な役割を果たすことが示されている転写因子をコードする遺伝子が関与している。したがって、転写機構の改変は、分化停止につながる共通の機序であるように思われる（Ｐａｎｄｏｌｆｉ ＰＰ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００１）２０（４０）：５７２６－５７３５；Ｔｅｎｅｎ ＤＧ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２００３）３（２）：８９－１０１）。
臨床研究及び実験動物モデルからは、急性白血病の臨床的徴候には少なくとも２つの遺伝子改変を要することが示唆される。Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ ＆ Ｔａｌｌｍａｎ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００２）１（５）：４１７－４２０）により提唱されたモデルによると、クラスＩ活性化変異と分化の終結を誘導するクラスＩＩ変異との協同作用によりＡＭＬが生じる。クラスＩ変異、例えば、受容体チロシンキナーゼ遺伝子ＦＬＴ３及びＫＩＴ、ＲＡＳファミリーメンバーにおける変異、ニューロフィブロミン１の機能喪失は、典型的にはシグナル伝達経路の異常な活性化の結果として、造血前駆細胞に増殖及び／または生存の利点を付与する。クラスＩＩ変異は、転写因子または共活性化物質への干渉により、分化の停止をもたらす（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ Ｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００７）１９（６）：６３５－６４９）。白血病幹細胞（ＬＳＣ）は、過去にＨＳＣについて特定した細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ７１）の多くを共有しているように見えるが、いくつかのグループが、２つの集団において発現が異なる表面マーカーを報告している。例えば、ＣＤ９０またはＴｈｙ－１は、ＬＳＣコンパートメントに対し潜在的に特異的であると説明されている。Ｔｈｙ－１は、最も原始的な幹細胞が前駆細胞の段階に進行するに伴って、正常な造血において下方調節される（Ｈｏｐｅ ＫＪ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３４（６）：５０７－５１４）。
白血病前駆細胞におけるＣＸＣＬ１２（間質細胞由来因子１アルファ）とその受容体ＣＸＣＲ４との間の相互作用は、当該細胞の骨髄微小環境へのホーミングに寄与する。ＡＭＬ患者由来の白血病細胞においては、ＣＸＣＲ４レベルが顕著に上昇しており、ＣＸＣＲ４発現は予後不良に関連する（Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ ＭＹ ａｎｄ Ｊｏｒｄａｎ ＣＴ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（２０１１）２９（５）：５９１－５９９）。
初代ヒトＡＭＬ幹細胞における核因子カッパｆ３（ＮＦ－ｋβ）経路の恒常的活性化により、ＮＦ－ｋβがＬＳＣの全生存に加えてＡＭＬ細胞タイプ全般の全生存にも重要な役割を担っている証拠が示された（Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ ＭＹ ａｎｄ Ｊｏｒｄａｎ ＣＴ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（２０１１）２９（５）：５９１－５９９）。
ＡＭＬ患者の臨床的予後は不良であり、治療選択肢は限られており、骨髄破壊の後に行う造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）が唯一の治癒的治療である。一般的に使用されているコンディショニングレジメンは、全ての増殖性が高い細胞タイプを無差別に殺滅するため、生命を脅かす副作用をもたらし、また休止しているＡＭＬ亜集団に対して無効である可能性もある。
リンパ系悪性腫瘍
ほとんどの組織における自己複製能力は、細胞が分化の正常な段階により進行するに伴って喪失し、例えば、造血幹細胞のレベルを超えた骨髄系系列血液細胞は、もはや自己複製能力を有しない。分化に付随する自己再生喪失の注目すべき例外はリンパ系であり、リンパ系の場合、自己再生能力は、生涯にわたる免疫記憶を維持するため、メモリーリンパ球段階まで保持される（Ｆｅａｒｏｎ ＤＴ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００１；２９３：２４８－２５０；Ｌｕｃｋｅｙ ＣＪ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳ Ａ．２００６；１０３：３３０４－３３０９）。体細胞超変異は、Ｂ細胞悪性腫瘍が生じる分化段階におけるマーカーとして機能する。概して、体細胞超変異の存在により、胚中心または胚中心後のＢ細胞に生じた腫瘍が識別され、一方、変異がないことで胚中心前Ｂ細胞が識別される。骨髄性悪性腫瘍とは対照的であるが、系列の自己再生能力保持と一致して、免疫グロブリン（ｌｇ）の変異パターンからは、Ｂ細胞悪性腫瘍がＢ細胞分化段階の全体にわたり細胞から生じ得ることが示唆される（Ｌａｐｉｄｏｔ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．１９９４；３６７：６４５－６４８；Ｂｏｎｎｅｔ Ｄ ａｎｄ Ｄｉｃｋ ＪＥ，Ｎａｔ Ｍｅｄ．１９９７；３：７３０－７３７；Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．２００４；９６：５８３－５８５）。
多発性骨髄腫
概して、多発性骨髄腫（ＭＭ）は悪性形質細胞の疾患と考えられており、この疾患の臨床的結果の多くが形質細胞バルクに起因している。しかし、正常な形質細胞は最終分化し自己再生能力が欠如しており、３０年以上にわたり、クローン原性であるマウス及びヒトのＭＭ由来の細胞は少数にとどまることが明らかであった。これらの希少なクローン原性細胞は「腫瘍幹細胞」と称されている（Ｐａｒｋ ＣＨ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１９７１；４６：４１１－４２２；Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ ＡＷ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎ ＳＥ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９７７；１９７：４６１－４６３）。ＭＭ形質細胞は、メモリーＢ細胞に似ている自己再生がん幹細胞の小さな集団から生じる。これらのクローン型Ｂ細胞はほとんどの患者で循環しているだけでなく、多くの標準的抗ＭＭ剤に対し抵抗性であるため、ほとんどの疾患再発の原因となっているように思われる（Ｍａｔｓｕｉ ＷＨ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００４；１０３：２３３２－２３３６；Ｋｕｋｒｅｊａ Ａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００６；２０３：１８５９－１８６５；Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＳＡ，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８ Ｊａｎ；１４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １）：１２－１６）。
ホジキンリンパ腫
ホジキンリンパ腫（ＨＬ）の特質であるリード－シュテルンベルグ（ＲＳ）細胞は、形質細胞以外でＣＤ１３８を発現することがある唯一の血液細胞である（Ｃａｒｂｏｎｅ Ａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９８；９２：２２２０－２２２８）。ＨＬ細胞株は、残りの細胞には存在するＲＳマーカーＣＤ１５及びＣＤ３０が欠如した小さな細胞集団を含み、その一方でメモリーＢ細胞の表現型と一致するマーカーを発現することが示されている（Ｎｅｗｃｏｍ ＳＲ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｃｌｏｎｉｎｇ．１９８８；６：４１７－４３１；Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８：４７０）。この表現型記憶Ｂ細胞の小さな亜集団は、ＨＬ細胞株内の全てのクローン原性能力を有した。ほとんどのＨＬ患者（初期段階の患者を含む）は、患者のＲＳ細胞と同じクローナルＩｇ遺伝子再構成を伴う循環メモリーＢ細胞を有する（Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００６；１０８：４７０；Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＳＡ，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８ Ｊａｎ；１４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １）：１２－１６）。これらのデータは、これらのクローン型メモリーＢ細胞がＨＬ幹細胞に相当する可能性を示唆している。
血液悪性腫瘍の治療
造血幹細胞（ＨＳＣ）は、骨髄移植において血液悪性腫瘍の治療に、そして非悪性障害の治療にも使用されている（Ｗａｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００４）２３（４３）：７１６４－７１７７）。骨髄切除患者におけるドナーの造血系及び免疫系の生着に関与する細胞構成要素が研究者により発見されるまで、骨髄（ＢＭ）は、長年にわたり未分画細胞プールとして移植されてきた（例えば、Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ（Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－ ３０７－９３０－ｌを参照）。骨髄／造血幹細胞（ＢＭ／ＨＳＣ）移植のための患者の準備及びコンディショニングは、この手順における不可欠な要素である。これは、（１）患者に十分な免疫抑制をもたらし、移植ＨＳＣのために骨髄内に十分なニッチスペースを空け、それにより移植細胞がレシピエント内で生着できるようにし、（２）しばしば悪性腫瘍の発生源を根絶するのを助ける、といった２つの主な目的を果たす。
従来、患者のコンディショニングは、放射線照射のありまたはなしで最大耐用量の化学療法剤のカクテルを投与することにより達成されてきた。カクテルの構成要素は、多くの場合、毒性が重複しないように選択される。現在使用されている全ての準備レジメンは毒性を有し、生命を脅かし得る重篤な副作用を有する。これらの副作用に含まれるものとしては、粘膜炎、悪心及び嘔吐、脱毛、下痢、発疹、末梢神経障害、不妊、肺毒性、ならびに肝毒性がある。これらの副作用の多くは、高齢及び病気の患者にとって特に危険であり、多くの場合、患者が移植を受けるかどうかを決める上で決定的な構成要素となる。
したがって、骨髄／造血幹細胞（ＢＭ／ＨＳＣ）移植に適格な患者に対し、これらの毒性を伴わずに準備またはコンディショニングする必要性が存在する。
また、ＡＭＬなどの血液悪性腫瘍をこれらの毒性を伴わずに治療する必要性も存在する。
Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ Ｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００７）１９（６）：６３５－６４９ Ｋｏｎｄｏ，Ｍ．"Ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ，"Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１０ Ｎｏｖ；２３８（１）：３７－４６ Ｋｏｎｄｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；２１：７５９－８０６． Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ ｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ：ｂａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．２０００ Ｆｅｂ ２５；２８７（５４５７）：１４４２－６ Ｉｗａｓｋａｋｉ，Ｈ．ａｎｄ Ａｋａｓｈｉ，Ｋ．"Ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，"Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２６（６）Ｊｕｎｅ ２００７，７２６－４０ Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍ．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈａｅｍｏｐｏｉｅｓｉｓ．：Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ，Ｖ．，Ｃａｔｏｖｓｋｙ，Ｄ．，Ｔｕｄｄｅｎｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００５）：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｉｃｈｅ ａｎｄ Ｗｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｐｐ．１－１２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ． Ｋｏｎｄｏ Ｍ，Ｓｃｈｅｒｅｒ ＤＣ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｋｉｎｇ ＡＧ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｓｕｇａｍｕｒａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ－ｆａｔｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｂｙ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００ Ｓｅｐ ２１；４０７（６８０２）：３８３－６ Ｄｅｌｏｇｕ Ａ，Ｓｃｈｅｂｅｓｔａ Ａ，Ｓｕｎ Ｑ，Ａｓｃｈｅｎｂｒｅｎｎｅｒ Ｋ，Ｐｅｒｌｏｔ Ｔ，Ｂｕｓｓｌｉｎｇｅｒ Ｍ．Ｇｅｎｅ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｐａｘ５ ｉｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００６ Ｍａｒ；２４（３）：２６９－８１ Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ．Ａ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｔｈａｔ ｇｉｖｅｓ ｒｉｓｅ ｔｏ ａｌｌ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｉｎｅａｇｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００ Ｍａｒ ９；４０４（６７７４）：１９３－７ Ｍａｎｚ ＭＧ， Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＩＬ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００１ Ｊｕｎ １；９７（１１）：３３３３－４１ Ｔｒａｖｅｒ Ｄ，Ａｋａｓｈｉ Ｋ，Ｍａｎｚ Ｍ，Ｍｅｒａｄ Ｍ，Ｍｉｙａｍｏｔｏ Ｔ，Ｅｎｇｌｅｍａｎ ＥＧ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ８ａｌｐｈａ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａ ｃｏｍｍｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ．２０００ Ｄｅｃ １５；２９０（５４９９）：２１５２－４） Ｓｅｒｇｉｏ Ｐａｕｌｏ Ｂｙｄｌｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｆｅｌｉｐｅ ｄｅ Ｌａｒａ Ｊａｎｚ（２０１２）．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｒ．Ｒｏｓａｎａ Ｐｅｌａｙｏ （Ｅｄ．），ＩＳＢＮ：９７８－９５３－３０７－９３０－１ Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１１）７５０（２）：４７－５９ Ｔｅｓｔａ Ｕ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１１）９０（３）：２４５－２７１ Ｂｒｏｎｅｒ，Ｆ．＆ Ｃａｒｓｏｎ，ＭＣ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ．２００９；４：ｐｐ．２－４．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ． Ｊｏｎｅｓ ＲＪ ａｎｄ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＳＡ，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００８ Ｊａｎ；１４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １）：１２－１６ Ｌａｐｉｄｏｔ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．１９９４；３６７：６４５－６４８；Ｂｏｎｎｅｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．１９９７；３：７３０－７３７ Ｐｏｌｌ ｙｅａ ＤＡ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１１）１５２（５）：５２３－５４２ Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ＤＧ ａｎｄ Ｔａｌｌｍａｎ ＭＳ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２００２）１（５）：４１７－４２０ Ｐａｎｄｏｌｆｉ ＰＰ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００１）２０（４０）：５７２６－５７３５
いくつかの態様において、本開示は、ヒト及びアカゲザルのＦＬＴ３に結合する（例えば、特異的に結合する）ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの態様において、本開示は、ヒトＦＬＴ３に結合する（例えば、特異的に結合する）ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、抗配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び／または
（ｉｉ）配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、ＶＬは配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＶＨは配列番号３のアミノ酸配列を含む。前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＶＨは配列番号３のアミノ酸配列を含む。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本開示は、ＶＬが、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８８のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔにより定められている通りである。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本開示は、ＶＨが、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するＣＤＲを含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔにより定められている通りである。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本開示は、（ｉ）ＶＬが、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８８のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、（ｉｉ）ＶＨが、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するＣＤＲを含む、抗ＦＬＴ３ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔにより定められている通りである。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗ＦＬＴ３抗体の抗原結合フラグメントは、単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）（例えば、本明細書に記載のまたは前述の態様及び実施形態で言及されている任意のＶＨ及び任意のＶＬを含むｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４、配列番号５、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４、配列番号５、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、ＶＬとＶＨとの間にリンカーを含み、リンカーは式（Ｇｌｙ３～４－Ｓｅｒ）１～４を有する。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖはＶＬとＶＨとの間にリンカーを含み、リンカーはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５３）である。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＦＬＴ３との結合に関しＦＬＴ３リガンドと競合しない（または実質的に競合しない）。
いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及び抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のいずれかをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及び抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のいずれかをコードする核酸を含むベクターを提供する。いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のいずれかを含む組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体）を提供する。いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のいずれかを含む組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体）をコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のいずれかを含む組換え受容体をコードする核酸を含むベクターを提供する。
いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）（ａ）前述のもしくは関連する任意の態様の抗体もしくはフラグメント、または（ｂ）前述のもしくは関連する任意の態様及び実施形態の抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）細胞内ドメインとを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、またはＣＤ２８膜貫通ドメインである。ＣＡＲのいくつかの実施形態において、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン）である。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、細胞内ドメインは活性化ドメインを含む（例えば、ＣＡＲがＴ細胞内で発現したときに、活性化ドメインは、細胞外ドメインがＦＬＴ３に結合した後に、活性化シグナルを伝達する）。いくつかの実施形態において、本開示は、（細胞内ドメイン内の）活性化ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、またはＦｃＲガンマの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、ＣＤ３ゼータ活性化ドメイン／細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを提供する。ＣＡＲのいくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、１つ以上の共刺激ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の共刺激ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態において、１つ以上の共刺激ドメインは、ＣＤ２８及び／または４－１ＢＢに由来する。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、ＣＡＲは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサーまたはヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、スペーサーまたはヒンジ領域は、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８アルファ）の細胞外ドメインに由来する。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、細胞外ドメインは、切断性シグナルペプチドをさらに含む。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、細胞外ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含み、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータの細胞内シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号６、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、及び配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号６のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号９のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む（またはそれから実質的になる、またはそれからなる）。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、ＣＡＲは、安全スイッチポリペプチドをさらに含む（例えば、安全スイッチポリペプチドは、自己切断ペプチドによりＣＡＲに結合する）。いくつかの実施形態において、安全スイッチポリペプチドは、ｉＣａｓｐ９またはＥＧＦＲｔである。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドは、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、またはＩＲＥＳである。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＴ２Ａである。
ＣＡＲの前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、細胞外ドメインがＦＬＴ３（例えば、がん細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、または樹状細胞の表面）に結合したときに、増殖するように活性化または刺激される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の表面に発現したときに、免疫細胞に、ＦＬＴ３を発現する細胞を殺滅するように指示する。
いくつかの態様において、本開示は、前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態のＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供する。いくつかの態様において、本開示は、前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態のＣＡＲをコードする核酸を含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団を提供する。前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または単球である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞である。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は核酸を含み、核酸は、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、及び配列番号６９からなる群より選択される配列を含む。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲまたは核酸を導入する前に、対象（例えば、ヒト）から誘導されている。いくつかの実施形態において、ＣＡＲを発現するまたは核酸を含む免疫細胞は、免疫細胞の集団を生成するためにさらに拡大される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＭＬ細胞に対し細胞傷害性を有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の免疫細胞は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲの安定した発現を特徴とする。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する任意の免疫細胞は、高い増殖可能性を特徴とする。
いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）前述のまたは関連する態様及び実施形態のいずれか１つのヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントと、（ｉｉ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、（ｉ）前述のまたは関連する態様及び実施形態のいずれか１つのｓｃＦｖと、（ｉｉ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）前述のまたは関連する態様及び実施形態のいずれか１つの免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）と、（ｉｉ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）前述のまたは関連する態様及び実施形態のいずれか１つの免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団と、（ｉｉ）医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、血液癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に、（例えば、治療有効量の）（ｉ）前述のもしくは関連する態様及び実施形態のいずれか１つのヒト化抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）、または（ｉｉ）このようなヒト化抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、血液癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に、（例えば、治療有効量の）（ｉ）前述のもしくは関連する任意の態様及び実施形態の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）（例えば、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する細胞）、（ｉｉ）前述のもしくは関連する任意の態様及び実施形態の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の集団（例えば、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する細胞）、または（ｉｉ）このような免疫細胞もしくは免疫細胞の集団の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、造血細胞移植のための準備またはコンディショニングを、それを必要とする対象に行うための方法であって、対象に、（例えば、治療有効量の）（ｉ）前述のまたは関連する態様及び実施形態のいずれか１つのヒト化抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）、または（ｉｉ）このようなヒト化抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、造血細胞移植のための準備またはコンディショニングを、それを必要とする対象に行うための方法であって、対象に、（例えば、治療有効量の）（ｉ）前述のもしくは関連する任意の態様及び実施形態の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）（例えば、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する細胞）、（ｉｉ）前述のもしくは関連する任意の態様及び実施形態の免疫細胞の集団（例えば、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する細胞）、または（ｉｉ）このような免疫細胞もしくは免疫細胞の集団の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
コンディショニングの方法の前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、この方法は、投与後に、対象に造血細胞移植を実施することをさらに含む。いくつかの実施形態において、造血細胞移植は、対象に、造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を移植することを含む。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から５日～６週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約２～３週間後に行われる。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、非悪性遺伝性もしくは後天性骨髄障害、多発性骨髄腫、または樹状細胞新生物である。いくつかの実施形態において、血液癌はＡＭＬである。いくつかの実施形態において、血液癌はＡＬＬである。いくつかの実施形態において、血液癌は樹状細胞新生物である。いくつかの実施形態において、血液癌は、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）である。いくつかの実施形態において、血液癌はＢ系列白血病である。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、それを必要とする対象は、血液癌（例えば、本明細書に記載の任意のがん）を有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＦＬＴ３を発現する細胞集団を少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、または少なくとも７５％）低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＦＬＴ３を発現する細胞集団を少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％）低減する。この低減は、対象の血液、骨髄細胞、及び／またはがん細胞のいずれか１つ以上におけるベースラインに対する低減であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＨＳＣ及び／またはＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＣ及び初期前駆細胞）を少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％）低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＨＳＣ及び／またはＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＣ及び初期前駆細胞）を少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％）低減する。この低減は、対象の血液細胞及び／または骨髄細胞におけるベースラインに対する低減であり得る。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、投与は、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を特異的に標的とする。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＣＤ３４＋ＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＣ及び初期前駆細胞）を少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％）低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象におけるＣＤ３４＋ＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＣ及び初期前駆細胞）を少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％）低減する。この低減は、対象の血液細胞及び／または骨髄細胞におけるベースラインに対する低減であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象における樹状細胞を少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％）低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与（例えば、治療有効量での投与）は、対象における樹状細胞を少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％）低減する。この低減は、対象の血液細胞及び／または骨髄細胞におけるベースラインに対する低減であり得る。
いくつかの実施形態において、投与は、対象における骨髄系列の頻度及び数を低減する（例えば、骨髄系列の頻度及び／または数をベースラインレベルに対し少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％低減する）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の投与は、対象における循環骨髄系系列を低減する（例えば、循環骨髄系系列をベースラインレベルに対し少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％低減する）。
いくつかの実施形態において、投与は、対象の骨髄単核細胞におけるヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞集団を（例えば、ベースラインレベルに対し少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、もしくは少なくとも６５％）低減し、及び／または対象の骨髄単核細胞におけるヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞集団を（例えば、ベースラインレベルに対し少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも８５％）低減する。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のがん（例えば、ＡＭＬ）の治療、及び／またはＨＳＣＴのための患者のコンディショニングに有効である。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のがん（例えば、ＡＭＬ）の進行の緩徐化に有効である。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のがん（例えば、ＡＭＬ）の腫瘍負荷の低減に有効である。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のがん（例えば、ＡＭＬ）を有する対象の生存期間の増加に有効である。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞または免疫細胞の集団の治療有効量は、約５０，０００，０００～１０，０００，０００，０００細胞の用量である。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞または免疫細胞の集団の治療有効量は、約１００，０００，０００～２，０００，０００，０００細胞の用量である。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞または免疫細胞の集団の治療有効量は、約２００，０００，０００～１，０００，０００，０００細胞の用量である。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞または免疫細胞の集団の治療有効量は、約３００，０００，０００～７００，０００，０００細胞の用量である。
本明細書に記載の方法の前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、投与は静脈内投与である。いくつかの実施形態において、静脈内投与は、対象への注入により行われる。いくつかの実施形態において、静脈内投与は、対象へのボーラス注射により行われる。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、投与は１回行われる。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、投与は３～７日ごとに２～３週間行われる。
本明細書に記載の方法の前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、この方法は、投与ステップの前に、以下のステップ：
（ｉ）対象から血液を採取すること、
（ｉｉ）血液から免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を単離すること、
（ｉｉｉ）前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態のＣＡＲをコードする核酸を、単離免疫細胞に導入すること、ならびに
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）で得られた単離免疫細胞を拡大することをさらに含み、この拡大は、投与ステップ中に投与された免疫細胞または免疫細胞の集団をもたらす。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、チェックポイント阻害剤をさらに含む。前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、本明細書に記載の方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ４のアンタゴニスト（例えば、当技術分野で知られている任意のこのようなアンタゴニスト、例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ１抗体などのアンタゴニスト抗体）である。
前述のまたは関連する任意の態様及び実施形態において、対象はヒトである（例えば、本明細書に記載の任意の方法を用いて治療される対象）。
定義
本明細書で使用する場合、「約」という用語は、数値の修飾に使用される場合、数値の上下１０％までの偏差が、挙げられた数値の意図された意味の範囲内にとどまることを示す。
本明細書で使用する場合、「ＶＬ」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指す。
本明細書で使用する場合、「ＶＨ」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指す。
本明細書で使用する場合、参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント」または「配列同一性パーセント」という用語は、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。配列同一性パーセントは、配列をアラインメントし、必要な場合はギャップを導入して、最大の配列同一性パーセントを達成した後に決定される。アミノ酸配列同一性パーセントを定量するためのアラインメントは、当技術分野で知られている様々な方法で達成することができる。例示的なアラインメントツールとしては、限定されるものではないが、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアが挙げられる。
ＦＬＴ３リガンドを伴うまたは伴わないＲＥＨ細胞における、キメラ抗体１－１８ＢＡ（マウスＶＬ（配列番号２５）及びマウスＶＨ（配列番号２７）及びヒトＩｇＧを含む）の結合競合を示している。 ヒト化抗ＦＬＴ３ ＩｇＧ（配列番号１のＶＬ及び配列番号３のＶＨを有する）のＲＥＨ細胞に対する結合親和性を示している。 ヒト化抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ（配列番号４、Ｃ末端にＨｉｓタグをさらに含む）のＲＥＨ細胞に対する結合親和性を示している。 自己由来ＣＡＲ－Ｔ細胞の生成及び自己由来ＣＡＲ Ｔ療法としての使用を示す概略図である。 ＦＬＴ３発現細胞（例えば、ＨＳＰＣ、樹状細胞、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））を標的とする抗ＦＬＴ３ ｓｃＦＶ ＣＡＲのＣＡＲ構造を示す概略図である。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞による標的ＦＬＴ３細胞の殺細胞機序を示す概略図である。標的細胞におけるＦＬＴ３によるＣＡＲの活性化は、細胞パーフォリン及びグランザイムの発現を誘導して標的細胞におけるアポトーシスを誘導する。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を生成し、形質導入効率及び細胞傷害性を評価するための方法の概要である。 抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖを含む抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（配列番号１６によりコードされるＣＡＲ（以下の方向でドメインをコード：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ））を形質導入したＴ細胞における、経時的な異なるウイルスＭＯＩの形質導入効率（ＧＦＰ＋Ｔ細胞％として報告）を示す棒グラフである。 ＭＯＩ＝１０で形質導入したＣＡＲ Ｔ細胞（図２Ａ）の拡大倍数を示すプロットである。 ＣＡＲ Ｔ細胞培養１０日目の異なるＭＯＩにおけるＧＦＰ発現パーセント（％）（上）、及び抗Ｆａｂ ＡＰＣ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ；ｎｏ．１０９－６０７－００３）を用いての抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ発現ｖｓＧＦＰ発現（下）を示すフロープロットである（図２ＡのＣＡＲ Ｔ細胞を使用）。 同上。 抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｂに記載）がＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対し細胞傷害性を有することを示している。代表的な実験方法を示している。 抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｂに記載）がＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対し細胞傷害性を有することを示している。非形質導入または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養してから２４時間後（上）及び４８時間後（下）のＥ：Ｔ比１：１における、死滅ＭＯＬＭ１３標的細胞（７－ＡＡＤ＋ＣｅｌｌＴｒａｃｅ＋）の頻度を示す代表的なフロープロットを示している。 抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞（図３Ｂに記載）がＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対し細胞傷害性を有することを示している。２４時間後（上）及び４８時間後（下）の示されたＥ：Ｔ比における標的細胞（ＭＯＬＭ１３）殺滅の平均及び標準誤差を表す棒グラフを示している。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＴのＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対するｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。ＭＯＬＭ－１３細胞（ＡＭＬ細胞株）を有するマウスにおける抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ Ｔ細胞（図３Ｂに記載）の生着のタイムラインを示している。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＴのＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対するｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞により処置したマウスの７３日間の生存曲線である。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＴのＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対するｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。対照またはＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後の末梢血単核分画におけるヒトＣＤ４５＋ ＭＯＬＭ－１３細胞の全体的な頻度を個々のマウスごとに示している。「Ｘ」は、２８日目までに全てのマウスが死亡したため、対照群でマウスを測定しなかったことを示している。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＴのＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対するｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。対照またはＧＦＰ＋ ＣＡＲ Ｔ細胞による処置後の末梢血単核分画における全Ｔ細胞及びＧＦＰ＋抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ 細胞の頻度を示している。「Ｘ」は、２８日目までに全てのマウスが死亡したため、対照群でマウスを測定しなかったことを示している。 抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ ＴのＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ細胞に対するｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示している。対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞による処置後の末梢血単核分画におけるＭＯＬＭ－１３細胞の頻度を示している。 （ヒトバンク細胞による生着により「ヒト化」されたマウスの）自己由来ＣＡＲ Ｔ細胞によるコンディショニングの成功を示している。ＣＤ１２３（ＣＤ３４＋）細胞を移植し、対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与したマウス（図３Ｂに記載）のタイムラインを示している。 （ヒトバンク細胞を用いた生着により「ヒト化」されたマウスの）自己由来ＣＡＲ Ｔ細胞によるコンディショニングの成功を示している。対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後のＭＮＣ分画におけるヒトＣＤ４５＋細胞の全体的な頻度を、２つのコホートにおける個々のマウスについて示している。 （ヒトバンク細胞を用いた生着により「ヒト化」されたマウスの）自己由来ＣＡＲ Ｔ細胞によるコンディショニングの成功を示している。対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後のＴ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及び骨髄系細胞（ＣＤ３３＋）の系列頻度を、２つのコホートにおける全てのマウスの平均として示している。 （ヒトバンク細胞を用いた生着により「ヒト化」されたマウスの）自己由来ＣＡＲ Ｔ細胞によるコンディショニングの成功を示している。処置前の頻度に対する系列頻度の倍数変化を、対照Ｔ細胞及び抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔコホートにおける個々のマウスについて示している。抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与したマウスにおける骨髄系コンパートメントは、対照Ｔ細胞を投与したマウスと比較して顕著に低下していることを示している。 抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞及び対照Ｔ細胞を移植したマウス（図３Ｂに記載）由来の大腿骨及び脛骨を示している（肉眼的解剖学的差異は観察されなかった）。 対照Ｔ細胞移植及び抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ細胞移植における、ＢＭ由来のＭＮＣ（ＢＭ－ＭＮＣ）の総細胞カウント及びフローサイトメトリー解析、ならびにヒトＣＤ４５＋細胞の頻度を示している。 ２つのコホートにおける全てのマウスの平均として示されるＢＭ－ＭＮＣにおける系列頻度（Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及び骨髄系細胞（ＣＤ３３＋））を示している。 ２つのコホートにおける個々のマウスについて、対照または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後のＢＭにおける系列細胞カウント（Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及び骨髄系細胞（ＣＤ３３＋））を示している。 対照Ｔ細胞及び抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ（図３Ｂに記載）処置マウスにおけるｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋Ｌｉｎ－でゲーティングした代表的な等高線プロット（抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ処置マウスにおけるＨＳＰＣ ＣＤ３８＋ＣＤ３４＋及びＣＤ３８－ＣＤ３４＋集団の、対照と比較しての有意な枯渇を示している）を示しており、また、ＣＤ３８＋ＣＤ３４＋及びＣＤ３８－ＣＤ３４＋ＨＳＰＣの要約グラフを、対照Ｔ細胞及び抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ処置マウスの個々のマウスごとに示す全骨髄単核細胞（ＢＭ－ＭＮＣ）のパーセンテージとして示している。抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞処置マウスが有する骨髄内の前駆細胞は、対照マウスと比較して有意に少ない。 造血幹細胞（ＨＳＣ、ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－）及び多能性前駆細胞（ＭＰＰ、ＣＤ９０－ＣＤ４５ＲＡ－）の頻度を、対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置した個々のマウスごとに示す全ＢＭ－ＭＮＣのパーセンテージとして示している。抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞処置マウスが有する骨髄内の前駆細胞は、対照マウスと比較して有意に少ない。 ヒトＴ細胞における抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ表面発現に基づいて自殺ＣＡＲベクターの形質導入の効率を測定するフローサイトメトリープロットを示しており、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞、抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔ（得られるＣＡＲは、配列番号７のアミノ酸配列を有し、以下の方向でドメインをコードする：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ）、及び抗ＦＬＴ３－ＣＡＲ－ｉｃａｓｐ９（得られるＣＡＲは、配列番号８のアミノ酸配列を有し、以下の方向でドメインをコードする：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ｉＣａｓｐ９）細胞の頻度を示している（それぞれ３５．３％、２７．５％、及び１６．９％）。 元のコンストラクトＣＡＲ３ａと比較しての、自殺スイッチＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔまたはＣＡＲ３ａ－ｉｃａｓｐ９を有する抗ＣＡＲ Ｔ細胞の、様々なエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比（１０：１、５：１、２：１、１：１、１：２、及び１：５）における、標的ＡＭＬ ＮＯＭＯ－１細胞（ＦＬＴ３を発現）に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験の概略図である。 エフェクター細胞及び標的細胞を２４時間共培養した後、デブリを除外した後のフローデータを示す代表的なドットプロットを示している。標的細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ＋として、エフェクター細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ－として特定された。この図面は、ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ＋細胞でゲーティングした後の、死（７ＡＡＤ＋）標的細胞の頻度を示している。 ＮＯＭＯ－１細胞と２４時間共培養した抗ＦＬＴ３ ＣＡＲについて、様々なＴ細胞エフェクター：ＮＯＭＯ－１標的細胞比における死（７ＡＡＤ＋）細胞の頻度を示す棒グラフである。全てのＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＦＬＴ３＋ＮＯＭＯ－１細胞に対し、対照Ｔ細胞と比較して有意に高い細胞傷害効果を示している。２つの自殺ＣＡＲ Ｔ細胞のいずれかと元のＣＡＲコンストラクトとの間で、細胞傷害効果に有意差は認められない。 ＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔレンチウイルスベクター（図９Ａに記載）を形質導入したＴ細胞における抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ（ｓｃＦｖを検出）及びＥＧＦＲｔ（セツキシマブを使用）の表面発現を示すフロープロットを示している。 ＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）試験の概略図である。 様々な用量のセツキシマブで処置した後に残存する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞のパーセント（％）を示すグラフであり、Ｔ細胞のみで、全同種異系ＭＮＣ細胞とともに、またはＴ細胞が枯渇した同種異系ＭＮＣ細胞とともに培養した。単独で培養した形質導入Ｔ細胞は、セツキシマブによる処置後にＣＡＲ３ａ発現細胞の有意な減少を示さず、一方、全同種異系ＭＮＣまたはＴ細胞が枯渇したこのようなＭＮＣと培養した形質導入細胞は、セツキシマブによる用量依存的なＣＡＲ３ａ発現細胞の枯渇を示した。結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＥＧＦＲｔ発現抗ＦＬＴ ＣＡＲ Ｔ細胞に対するＡＤＣＣの機能を支持するものである。 ＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ－Ｔ（図９Ａに記載）細胞または対照Ｔ細胞で処置した後の、ＥＧＦＰ－ＭＯＬＭ－１３細胞を有するマウスの末梢血におけるＣＡＲ－Ｔ細胞の生存及び頻度を測定したｉｎ ｖｉｖｏ実験のタイムラインを示している。 対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ ＥＦＧＲｔ－Ｔ細胞（セツキシマブあり及びなし）で処置したマウスの生存曲線（ＡＭＬ注射後６５日まで作成）を示している。 対照Ｔ細胞または抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞（セツキシマブありまたはなし）による処置後２週間、４週間、及び６週間における末梢血（ＰＢ）中のＭＯＬＭ－１３（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＥＧＦＰ＋）細胞及びＴ細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋）の頻度を示している。 ＣＡＲ ＤＮＡレベル（ヒトアクチンＤＮＡを基準に正規化）により測定したＣＡＲ Ｔ細胞の投与後４週間及び６週間における循環抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ ＥＦＧＲｔ－Ｔ細胞（セツキシマブあり／なし）の相対量を示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１６のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号７のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号８のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号６のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１２のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１１のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１０のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号９のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１３のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１４のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。 ＣＡＲのプラスミドコンストラクトを示している。配列番号１５のＣＡＲを発現するプラスミドを示している。
ある特定の態様において、いかなる作用機序にも束縛されるものではないが、がんを標的とする上での有効性及び抵抗性という課題に対処するため、本明細書では、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）を発現する細胞を特異的かつ効果的に標的化し殺滅することができる抗体、抗原結合フラグメント、ＣＡＲ Ｔ細胞について記載する。本明細書に記載の抗体、フラグメント、及びＣＡＲ Ｔ細胞は、がん細胞（例えば、ＡＭＬ芽球などの白血病細胞）の表面に発現するＦＬＴ３に加えてＨＳＣ／ＨＳＰＣを標的とし、このような細胞を特異的に除去することができ、それにより、その後のがん治療及び／または造血幹細胞移植が可能になる。本明細書に記載の抗体及び抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、がんの場合に共通して変異する領域以外の細胞外膜近位ＦＬＴ３ドメインに結合することができ、ＦＬＴ３との結合に関してＦＬＴ３リガンドと競合しない。他の既知の治療法とは異なり、本明細書に記載の抗体、フラグメント、ＣＡＲ Ｔ細胞、組成物、及び方法は、ＦＬＴ３受容体における一般的に知られている変異に関係なく、ＦＬＴ３発現細胞を標的とすることができる。
１つの態様において、本明細書では、ＦＬＴ３またはその抗原結合フラグメント（例えば、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、単鎖フラグメント（例えば、ｓｃＦＶ））に特異的に結合するヒト化抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書で提供するヒト化抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合フラグメントは、ヒト及びサル（例えば、アカゲザル）のＦＬＴ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書で提供するヒト化抗ＦＬＴ３抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＦＬＴ３に特異的に結合する。
別の態様において、本明細書で提供するヒト化抗ＦＬＴ３抗体及び抗原結合フラグメントをコードする核酸が提供される。また、本明細書では、本明細書で提供するヒト化抗ＦＬＴ３抗体及び抗原結合フラグメントをコードする核酸を含むベクターも提供する。また、このような抗体及びフラグメントを生成するためのこのような核酸を発現する細胞、ならびにこのような抗体及びフラグメントを作製するための方法も提供する。
１つの態様において、本明細書では、ＦＬＴ３に特異的に結合するキメラ抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書で提供するキメラ抗ＦＬＴ３抗体は、ヒト及びサル（例えば、アカゲザル）のＦＬＴ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書で提供するキメラ抗ＦＬＴ３抗体は、ヒトＦＬＴ３に特異的に結合する。また、本明細書では、本明細書で提供するキメラ抗ＦＬＴ３抗体をコードする核酸も提供する。また、本明細書で提供するキメラ抗ＦＬＴ３抗体をコードする核酸を含むベクターも提供する。また、このような抗体を生成するためのこのような核酸を発現する細胞、ならびにこのような抗体及びフラグメントを作製するための方法も提供する。
別の態様において、本明細書では、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組換え受容体を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
別の態様において、本明細書では、本明細書に記載のＣＡＲを含む免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）を提供する。
また別の態様において、本明細書では、本明細書に記載のヒト化抗ＦＬＴ３抗体、その抗原結合フラグメント、ＣＡＲのような組換え受容体、及び免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）の使用方法を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、（例えば、ヒトに抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与することによる）抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ免疫細胞を用いた血液悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）の治療方法を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、（例えば、ヒトに抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与することによる）抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いたＨＳＣ移植コンディショニングの方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＨＳＣ移植のコンディショニングの方法の後に、造血細胞移植を行うことができる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（例えば、ヒトに抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントを投与することによる）抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを用いた血液悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）の治療方法を提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、（例えば、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントをヒトに投与することによる）抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを用いるＨＳＣ移植コンディショニングの方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＨＳＣ移植のコンディショニングの方法の後に、造血細胞移植を行うことができる。
抗ＦＬＴ３抗体
本明細書では、ＦＬＴ３に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。本明細書で言及する抗体フラグメントは、記載されている抗体の抗原結合フラグメントを指す。ある特定の実施形態において、本明細書では、ヒト及びアカゲザルのＦＬＴ３に特異的に結合する抗体及びそのフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、ヒトＦＬＴ３に特異的に結合する抗体及びそのフラグメントを提供する。本明細書に記載の抗体及びフラグメントは、（ヒト及びアカゲザルに加えて）１つ以上の他の種由来のＦＬＴ３と交差反応性を示し得る。いくつかの実施形態において、ヒト及び／またはサル（例えば、アカゲザル）ＦＬＴ３に特異的に結合し、他の種由来のＦＬＴ３との交差反応性を示さない抗体及びそのフラグメントも企図されている。ある特定の実施形態において、本明細書では、ＦＬＴ３に結合するヒト化抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、ＦＬＴ３に結合するキメラ抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、企図されている抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意のＣＤＲを含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦＶ）を提供する。いくつかの実施形態において、企図されている抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域、及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域を含む、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦＶ）を提供する。
いくつかの実施形態において、企図されているヒト化抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、企図されているヒト化抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、記載されている抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域、及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列、及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域を含む、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を提供する。
いくつかの実施形態において、記載されている抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域（ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％の同一性を有する）、及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域（ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％の同一性を有する）を含む。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する軽鎖可変領域（ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％の同一性を有する）、及び／または本明細書に記載の任意の重鎖可変領域に対し少なくとも９５％の同一性を有する配列を有する重鎖可変領域（ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％の同一性を有する）を含む、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦＶ）を提供する。
相補性決定領域
相補性決定領域（ＣＤＲ）は、当技術分野において様々な方法で（Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴを含む）定義されている。いくつかの実施形態において、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムに従って定義される。Ｋａｂａｔシステムは、配列可変性に基づいている（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔａｌ，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１を参照）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムを用いて決定される。
いくつかの実施形態において、抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ
システムに従って定義される。Ｃｈｏｔｈｉａシステムは、免疫グロブリン構造ループ領域の位置に基づいている（例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ＆ Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７；米国特許第７，７０９，２２６号；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８；及びＣｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７を参照）。「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」という用語及び同様の用語は当技術分野で認識されており、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７に従って定められる抗体ＣＤＲ配列を指す（また、例えば、米国特許第７，７０９，２２６号及びＭａｒｔｉｎ，Ａ．，“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ”（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｉｉｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１））も参照）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａシステムを用いて決定される。
いくつかの実施形態において、抗体のＣＤＲは、ＡｂＭシステムに従って定義される。ＡｂＭシステムは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループの妥協点に相当する超可変領域に基づいており、ＣＤＲは、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｉｎｃ．）を用いて決定される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングシステムを用いて決定される。
いくつかの実施形態において、抗体のＣＤＲは、ＩＭＧＴシステムに従って定義される（ＩＭＧＴ（登録商標）（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））ウェブサイトｉｍｇｔ．ｏｒｇ（設立者兼理事：Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ）を参照；例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２７：２０９－２１２及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，１９９９，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２７：２０９－２１２を参照）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、ＩＭＧＴシステムを用いて決定される。
いくつかの実施形態において、抗体のＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔシステムに従って定義される。Ｃｏｎｔａｃｔの定義は、利用可能な複合体結晶構造（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）の解析に基づいている（例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ”（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｉｉｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ５：７３２－７４５を参照）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔシステムを用いて決定される。
Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ＩＭＧＴ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲの位置は抗体に応じて変動する可能性があり、当技術分野で知られている方法に従って決定することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８６のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）を含む軽鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８７のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）を含む軽鎖可変領域を有する、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む軽鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８６、８７、及び８８をそれぞれ有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８９のアミノ酸配列を有する相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）を含む重鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号９０のアミノ酸配列を有する相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）を含む重鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号９１のアミノ酸配列を有する相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む重鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号８９、９０、及び９１をそれぞれ有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８７のＣＤＲ－Ｌ２、及び／または配列番号８８のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域、及び／または（ｉｉ）配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ２、及び／または配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ３を含む重鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８８のＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ３を含む重鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムを用いて決定される。
いくつかの実施形態において、本明細書では、上述のＣＤＲ定義系（例えば、Ｋａｂａｔ）のいずれかに従って定義される、本明細書に記載の任意の抗体のＣＤＲを含む抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２８の可変領域の１つ、２つ、もしくは３つ全てのＣＤＲ、及び／または（ｉｉ）配列番号１７の可変領域の１つ、２つ、もしくは３つ全てのＣＤＲを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号２８の可変領域の３つのＣＤＲと、配列番号１７の可変領域の３つのＣＤＲとを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている（例えば、配列番号１７を含む重鎖可変領域及び／または配列番号２８を含む軽鎖可変領域を有する、抗ＦＬＴ３抗体のヒト化抗体またはフラグメント）。具体的な実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔにより定められている通りである。
いくつかの実施形態において、本明細書では、米国特許公開第２０１９０１２７４６４号に記載の任意のマウス抗ＦＬＴ３抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、米国特許公開第２０１９０３８９９５５号に記載の、（米国特許公開第２０１９０３８９９５５号の配列番号に基づく）配列番号２５のＶＬと配列番号２７のＶＨとを有するマウス抗ＦＬＴ３抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含む抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、米国特許公開２０１９０１２７４６４号に記載の任意のマウス抗ＦＬＴ３抗体の６つ全てのＣＤＲを含む抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）（例えば、米国特許公開２０１９０１２７４６４ａ号に記載の、配列番号５のＶＬと配列番号７のＶＨとを有する抗体）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。具体的な実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔにより定められている通りである。
また、本明細書では、上述のＣＤＲ配列内に置換、欠失、または挿入を伴う抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）も企図されている。ある特定の実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のＣＤＲに対し少なくとも９７％のＣＤＲ配列同一性を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のＣＤＲに対し少なくとも９８％のＣＤＲ配列同一性を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のＣＤＲに対し少なくとも９９％のＣＤＲ配列同一性を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のＣＤＲ配列内に１つ、２つ、または３つまでの置換、欠失、または挿入を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のいずれか１つのＣＤＲ配列内に１つ、２つ、または２つまでの置換、欠失、または挿入を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の抗体及びフラグメントの６つのＣＤＲ内に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０までの総数の置換、欠失、または挿入を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の抗体及びフラグメントの６つのＣＤＲ内に１つ、２つ、または３つまでの総数の置換、欠失、または挿入を有する、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントはヒト化されている。
当技術分野で知られているように、ＣＤＲは、フレームワーク領域に囲まれている。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントは、ヒトまたはヒト由来のフレームワーク領域を有する。本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントのいくつかの実施形態において、フレームワーク領域はヒトフレームワーク領域である。本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントのいくつかの実施形態において、フレームワーク領域はヒト由来フレームワーク領域である。
使用することができ、当技術分野で知られているヒトフレームワーク領域としては、限定されるものではないが、（ｉ）ヒト生殖系列フレームワーク領域、（ｉｉ）ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域、（ｉｉｉ）「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域、（ｉｖ）軽鎖及び重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域、ならびに（ｖ）スクリーニングＦＲライブラリーに由来するフレームワーク領域が挙げられる。例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７－４７９（１９９８）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）；Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）；及びＡｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照。
本明細書に記載のＣＤＲは、既知のＤＮＡ組換え技法を用いて、本明細書に記載の任意のフレームワーク領域に挿入することができる。
例示的な抗ＦＬＴ３抗体：ＶＬ及びＶＨ
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）であって、配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）であって、配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３及び１７～２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１、２、及び２８～３８のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、記載されている任意の軽鎖可変領域と、上に記載されている任意の重鎖可変領域とを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）が企図されている。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２７のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号２７のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むヒト化抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、キメラ抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えばｓｃＦｖ）を提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する、アミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、この段落で指定する配列を含むＶＨ及びＶＬをともに含むキメラ抗ＦＬＴ３抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。
ｓｃＦｖ
ある特定の実施形態において、本明細書では、本明細書に記載のヒト化抗ＦＬＴ３抗体のｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意のＶＨ及び／またはＶＬ（本明細書に記載の任意のＶＨ及びＶＬの対を含む）を含む、ｓｃＦｖフラグメントを提供する。単鎖可変フラグメント抗体の作製する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ｓｃＦｖ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域を短いペプチドリンカーを介し融合させることにより、作製することができる。好適な短いペプチドリンカーは当技術分野で知られており、例示的なリンカーを本明細書に記載する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、及び４０～４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、及び４０～４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、及び４０～４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、４４～４７、及び４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、４４～４７、及び４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４、５、４４～４７、及び４９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号５のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号５のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号５のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４４のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４４のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４４のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４５のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４５のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４５のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４６のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４６のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４６のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４７のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４７のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４７のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４９のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号４９のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号４９のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号３９のアミノ酸配列を含む抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号３９のアミノ酸配列に対し少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。ある特定の実施形態において、これらの配列内の置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、フレームワーク領域）内で生じる。ある特定の実施形態において、本明細書では、配列番号３９のアミノ酸配列に対し少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、フレームワーク領域内で少なくとも９５％（または少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有し、ＣＤＲ領域内で少なくとも９７％（または少なくとも９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
ｓｃＦｖｓに使用することができるリンカー
いくつかの実施形態において、本開示は、ＶＨ及びＶＬを接続する１つ以上のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を提供する。「リンカー」とは、２つ以上のポリペプチドまたは核酸が互いに接続するように共有結合する官能基のことである。リンカーは、当技術分野で知られている任意のリンカーであり得る。いくつかの実施形態において、リンカーは親水性アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーはグリシン及びセリンを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは式（Ｇｌｙ３～４－Ｓｅｒ）１～４を有する。いくつかの実施形態において、リンカーはＧｌｙ４Ｓｅｒリンカーであり、１～４回繰り返される。いくつかの実施形態において、リンカーはＧｌｙ３Ｓｅｒリンカーであり、１～４回繰り返される。いくつかの実施形態において、リンカーはＧｌｙ４Ｓｅｒ及びＧｌｙ３Ｓｅｒを含み、各々１～４回繰り返される。
ある特定の実施形態において、リンカーは４～２５アミノ酸長である。ある特定の実施形態において、リンカーは４～２１アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは５アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは１９アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、リンカーは２０アミノ酸長である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５５のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５６のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号５９のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の軽鎖可変領域（ＶＬ）を本明細書に記載の任意の重鎖可変領域（ＶＨ）に結合する本明細書に記載の任意のリンカー（または本明細書に記載の任意のＶＬ／ＶＨ対）を含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、本明細書に記載の任意のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、配列番号５０のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、配列番号５１のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、配列番号５２のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、配列番号５３のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨに結合する、配列番号５４のリンカーを含む、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
さらなる抗ＦＬＴ３抗体、フラグメント、及び特性
いくつかの実施形態において、本明細書では、抗ＦＬＴ３抗体であって、抗体が、本明細書に記載の任意のＶＨ及びＶＬ領域を含む免疫グロブリンである、抗ＦＬＴ３抗体について記載する。使用することができる免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＹ、ＩｇＡ）である。使用することができる免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）である。使用することができる免疫グロブリン分子は、任意のサブクラスである。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンはＩｇＧである。
いくつかの実施形態において、本明細書では、重鎖のみまたは軽鎖のみ（本明細書に記載の任意のＶＨまたはＶＬを含む）を有する、単一ドメイン抗ＦＬＴ３抗体について記載する。いくつかの実施形態において、本明細書では、重鎖（本明細書に記載の任意のＶＨを含む）のみを有する単一ドメイン抗ＦＬＴ３抗体について記載する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、抗ＦＬＴ３抗体の抗原結合フラグメント（限定されるものではないが、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、またはジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）を含む）について記載する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、キメラ抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントであって、キメラ抗体が、マウス可変領域と、別の種（例えば、ヒト）の定常領域とを有する、キメラ抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントについて記載する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、多重特異的抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメント（例えば、二重特異的抗体及びフラグメント）であって、（本明細書に記載の抗原結合フラグメントを用いて）ＦＬＴ３に特異的に結合することに加えて、１つ以上のさらなる抗原（例えば、第２の追加の抗原）に特異的に結合する、多重特異的抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントについて記載する。１つまたはいくつかのさらなる抗原は、標的細胞（例えば、ＡＭＬ細胞）の表面に露出した抗原であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書では、ＦＬＴ３タンパク質に対する結合親和性を、約０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．５ｎＭ～５０ｎＭ、または１ｎＭ～１０ｎＭのＥＣ５０で有する、抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、ＦＬＴ３タンパク質に対する結合親和性を、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０で有する、抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、ＦＬＴ３タンパク質に対する結合親和性を、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または２．５ｎＭ未満のＥＣ５０で有する、抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントについて記載する。当技術分野で知られているように、ＡＤＣＣは、細胞表面に結合した抗体がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞にあるＦｃ受容体と相互作用することにより作動する。ＮＫ細胞は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３サブクラスを認識する受容体Ｆｃ．ガンマ．ＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を発現する。ＡＤＣＣの殺滅機序は、パーフォリン及びグランザイムを含む細胞質顆粒の放出を伴う。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＦＬＴ３との結合に関してＦＬＴ３リガンドと競合しない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントは、ＦＬＴ３リガンドの存在下で（または細胞をＦＬＴ３リガンドで前処置した後に）、ＦＬＴ３リガンドの非存在下（または細胞をＦＬＴ３リガンドで前処置しない場合）とほぼ同じように、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで（当技術分野で知られているまたは本明細書に記載されている（例えば、実施例１を参照）競合的結合を評価するための任意の方法論を用いて）、ＦＬＴ３に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントのＦＬＴ３との結合は、ＦＬＴ３リガンドの存在下で（またはＦＬＴ３リガンドで細胞を前処置した後に）、ＦＬＴ３リガンドの非存在下（またはＦＬＴ３リガンドで細胞を前処置しない場合）と比較して、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで（当技術分野で知られているまたは本明細書に記載されている（例えば、実施例１を参照）競合的結合を評価するための任意の方法論を用いて）、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、または１％未満低減される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメントのＦＬＴ３との結合は、ＦＬＴ３リガンドの存在下で（または細胞をＦＬＴ３リガンドで前処置した後に）、ＦＬＴ３リガンドの非存在下（または細胞をＦＬＴ３リガンドで前処置しない場合）と比較して、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで（当技術分野で知られているまたは本明細書に記載されている（例えば、実施例１を参照）競合的結合を評価するための任意の方法論を用いて）、５％未満、３％未満、または１％未満低減される。
本明細書では、ＦＬＴ３発現細胞を標的とし、除去または殺滅することができる、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。本明細書では、細胞表面に発現するＦＬＴ３を標的とすることができる、抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を提供する。例えば、本明細書では、がん細胞（例えば、ＡＭＬ芽球などの白血病細胞）の表面に発現するＦＬＴ３を標的とすることができる、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントを提供する。また、本明細書では、ＨＳＣ及び／またはＨＳＰＣの表面に発現するＦＬＴ３を標的とすることができる、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントも提供する。また、本明細書では、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られているＦＬＴ３を発現する任意の造血細胞系列の表面に発現するＦＬＴ３を標的とすることができる、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントも提供する。いかなる理論または作用機序にも束縛されるものではないが、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、細胞外膜近位ＦＬＴ３ドメインに結合することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントは、野生型及び変異体ＦＬＴ３の両方（例えば、がん（例えば、このような抗体／フラグメントを用いて治療されるがん）が変異することが知られている、またはそのように判定されているＦＬＴ３）に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントは、がんが変異しない（例えば、がん（例えば、記載されている抗体／フラグメントを用いて治療されるがん）が変異することが知られていない、またはがんが変異しないと判定されている）ＦＬＴ３の領域に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントは、ＦＬＴ３発現細胞が野生型ＦＬＴ３を発現するか変異体ＦＬＴ３を発現するかにかかわらず、ＦＬＴ３発現細胞に結合する、またはそれを標的とする（例えば、殺滅する）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントは、野生型及び変異体ＦＬＴ３を発現するＦＬＴ３発現がん細胞に結合する、またはそれを標的とする（例えば、殺滅する）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントは、変異体ＦＬＴ３を発現するＦＬＴ３発現がん細胞（例えば、変異体ＦＬＴ３を発現することが知られているか、または変異体ＦＬＴ３を発現すると判定されている（例えば、当技術分野で知られているＦＬＴ３の任意の変異を有する））に結合する、またはそれを標的とする（例えば、殺滅する）。
抗体の作製
本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びその抗原結合フラグメントは、当技術分野で知られている及び／または本明細書に記載の任意の方法により作製することができる。
モノクローナル抗体を作製する方法は当技術分野で知られており、例えば、ハイブリドーマ技術を使用する。例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ，１９８１）；Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５；Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ （Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｏｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を参照。ハイブリドーマ技術を使用する際は、マウスまたは別の適切な宿主動物を標的タンパク質（例えば、ＦＬＴ３）で免疫して、標的タンパク質に特異的に結合する抗体を生成するリンパ球を誘発することができ、次いでリンパ球を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを形成する。次いでハイブリドーマ細胞を培養基で成長させ、抗体の生成についてアッセイする。この方法により生成された抗体の結合特異性は、当技術分野で知られている方法、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により定量することができる。モノクローナル抗体は、さらに精製することができる。
また、モノクローナル抗体は、組換え技術及びファージディスプレイ技術を用いたりヒト化マウスを用いたりして作製することもできる。例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｌａｆｆｌｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９０１：１４９－５９；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ １８７：９－１８を参照。
キメラ抗体を作製する方法は当技術分野で知られている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－７；Ｇｉｌｌｉｅｓ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２；Ｏｉ ＶＴ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１を参照。キメラ抗体を作製する場合、ある種（例えばマウス）の可変領域を別の種（例えばヒト）の定常領域と連結する。
ヒト化抗体を作製する方法は当技術分野で知られており、限定されるものではないが、ＣＤＲグラフティングによる方法が挙げられる。例えば、Ｐａｄｌａｎ ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ＧＭ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ，（１９９４）ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３；Ｔａｎ Ｐ ｅｔ ａｌ，（２００２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：１１１９－２５；Ｃａｌｄａｓ Ｃ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０；Ｍｏｒｅａ Ｖ ｅｔ ａｌ，（２０００），Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７－７９；Ｂａｃａ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２（１６）：１０６７８－８４；Ｒｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１０）：８９５ ９０４；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５（８）：１７１７－２２；Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ＪＴ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２３５（３）：９５９－７３）を参照。
ヒト抗体を作製する方法は当技術分野で知られており、このような方法としては、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いたファージディスプレイ法が挙げられる。例えば、国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、第ＷＯ９８／５０４３３号、第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９８／１６６５４号、第ＷＯ９６／３４０９６号、第ＷＯ９６／３３７３５号、及び第ＷＯ９１／１０７４１号を参照。
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む抗体フラグメントを作製する方法も当技術分野で知られている。例えば、Ａｈｍａｄ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１２／９８０２５０；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７８，９９７－１００４；Ｐａｎｓｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００９，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６を参照。例えば、ｓｃＦｖは、（組換え発現技法を用いて）短いポリペプチドリンカーを介し重鎖及び軽鎖可変領域を融合させることにより構築することができ、所望の抗原結合特性を有するｓｃＦｖ抗体は、当技術分野で知られている方法により選択することができる。さらに、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、それぞれパパイン及びペプシンを用いた免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により生成することができる。
シングルドメイン抗体（例えば、軽鎖なし）を作製する方法も当技術分野で知られている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ ＆ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，１９９９，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３１：２５－３８；Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，２００１，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２を参照。
二重特異性抗体を作製する方法は当技術分野で周知されている。例えば、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎ，２０１２，ＭＡｂｓ ４：１８２－１９７；Ｇｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＭＡｂｓ ５：９６２－９７３を参照。
マウス抗ＦＬＴ３抗体を作製する方法は、米国特許公開第２０１９０１３７４６４号及び米国特許公開第２０１９０３８９９５５号に記載されている（これらの各々は、参照により全体として、具体的にはマウス抗ＦＬＴ３抗体の作製を記載するものとして、本明細書に援用される）。ヒト化抗ＦＬＴ３抗体及びキメラ抗ＦＬＴ３抗体を作製する方法について本出願に記載する（例えば、実施例を参照）。
抗体の組換え生成の方法も当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体（またはその抗原結合フラグメント）の組換え生成のために、抗体（またはその抗原結合フラグメント）をコードする核酸が単離され、宿主細胞内で発現するために１つ以上のベクターに挿入される。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養することと、宿主細胞（または宿主細胞培養基）から抗体を回収することと、任意選択で抗体をさらに精製することとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３抗体の抗原結合フラグメントを作製する方法であって、フラグメントの発現に適した条件下で、前述のフラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、宿主細胞（または宿主細胞培養基）からフラグメントを回収することと、任意選択でフラグメントをさらに精製することとを含む、方法を提供する。
組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体）
１つの態様において、本明細書では、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、組換え受容体を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体の任意の抗原結合フラグメントを含む、組換え受容体を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＶＨ及び／またはＶＬを含む、組換え受容体を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖを含む、組換え受容体を提供する。企図されている組換え受容体に含まれるものとしては、機能的非ＴＣＲ抗原受容体がある。いくつかの実施形態において、本明細書では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のシグナル伝達ドメインと、ＦＬＴ３抗原認識ドメイン（例えば、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ（例えば、本明細書に記載のいずれか１つ））とのキメラを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する組換え受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。また、本明細書では、本明細書に記載の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、免疫細胞）も提供する。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、本明細書ではＣＡＲ Ｔ細胞と称する。また、本明細書では、療法（例えば、ＦＬＴ３発現に関連する疾患の治療）における、本明細書に記載の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、免疫細胞）の使用も提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、がん（例えば、ＡＭＬ、ＡＬＬ、または樹状細胞新生物）の治療における、本明細書に記載の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、免疫細胞）の使用を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、造血細胞移植前の対象のコンディショニングにおける、本明細書に記載の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞（例えば、免疫細胞）の使用を提供する。
抗原受容体（ＣＡＲを含む）の例は、当技術分野で周知されている。それらを作製する方法も、当技術分野で周知されている。例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３ Ａｐｒｉｌ；３（４）：３８８－３９８；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＬＯＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，２４（５）：６３３－３９；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，１８（２）：１６０－７５を参照。
本明細書で提供するＣＡＲは、概して、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメント（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント）を含む細胞外ドメインを含む。ある特定の実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の任意の膜貫通ドメイン）及び細胞内ドメイン（例えば、本明細書に記載の任意の細胞内ドメイン）をさらに含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、及び／または膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間のリンカーをさらに含む。本明細書で提供するＣＡＲに使用することができる例示的なリンカーを本明細書に記載する。いくつかの実施形態において、リンカーは親水性アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーはグリシン及びセリンを含む。
当技術分野では、４つの世代のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が知られている。第一世代ＣＡＲは、ヒンジ及び膜貫通ドメインを介し、抗体由来ｓｃＦｖをＴ細胞受容体のＣＤ３ゼータ（ζまたはｚ）の細胞内シグナル伝達ドメインに連結する。第二世代ＣＡＲは、追加のドメインを細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（４１ＢＢ）、またはＩＣＯＳ）に組み込んで、共刺激シグナルを供給する。第三世代ＣＡＲは、２つの共刺激ドメイン（ＴＣＲ ＣＤ３ゼータ鎖と融合）を含む。第三世代の共刺激ドメインは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、及び０Ｘ４０のうちの少なくとも２つの任意の組合せを含み得る。第四世代ＣＡＲは、１つ以上の刺激性サイトカインを含み得る。ＣＡＲの例としては、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、抗原結合ｓｃＦｖを含むもの）と、リンカーまたはヒンジ領域と、膜貫通ドメインと、ＣＤ３ｚ及び／または共刺激分子に由来する１つ（第１世代）、２つ（第２世代）、または３つ（第３世代）のシグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインとを含むＣＡＲが挙げられる（Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．２０１５；１２５（２６）：４０１７－４０２３；Ｋａｋａｒｌａ ａｎｄ Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２０１４；２０（２）：１５１－１ ５５）。機能的には、Ｔ細胞受容体のＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインは、結合すると、Ｔ細胞を活性化し増殖を誘導するが、アネルギー（身体の防御機構による反応の欠如（結果的に末梢リンパ球寛容の直接誘導に至る））を引き起こすことがある。リンパ球は、特定の抗原に反応しないとアネルギーとみなされる。第二世代ＣＡＲにおける共刺激ドメインの追加により、修飾Ｔ細胞の複製能力及び持続性が改善し得る。第三世代ＣＡＲは複数のシグナル伝達ドメイン（共刺激）を組み合わせており、これにより効力が増強し得る。第四世代のＣＡＲは刺激性サイトカインを発現し、これにより移植後の拡大及び持続性が改善し得る。本明細書では任意のこのようなＣＡＲを提供し、細胞外ドメインは抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント、例えば、ｓｃＦｖ）を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書では第一世代ＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では第二世代ＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では第三世代ＣＡＲを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では第四世代ＣＡＲを提供する。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、抗ＦＬＴ３抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む細胞外（ｅｃｔｏ）ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内（ｅｎｄｏ）ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、抗ＦＬＴ３抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む細胞外（外部（ｅｃｔｏ））ドメインと、膜貫通ドメインと、活性化ドメイン及び共刺激ドメインを含む細胞内（内部（ｅｎｄｏ））ドメインとを含む。
細胞外ドメイン／外部ドメイン
ある特定の実施形態において、細胞外ドメインは、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む（例えば、企図されている抗ＦＬＴ３抗体及びそのフラグメントについて記載する上述の「抗ＦＬＴ３抗体」セクションにおける開示内容（使用することができる抗ＦＬＴ３ ＶＨ及び／またはＶＬ領域について記載するサブセクションを含む）を参照）。ある特定の実施形態において、細胞外ドメインは、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む（例えば、上述の「抗ＦＬＴ３抗体」のセクションにおける開示内容（抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖに使用することができるＶＨ及び／またはＶＬ領域、ならびに記載のＶＨ及びＶＬ領域を連結するために使用することができるリンカーについて記載するサブセクションを含む）を参照）。抗ＦＬＴ３フラグメント（例えば、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲの細胞外ドメインに使用することができるできるｓｃＦｖフラグメント）については、本出願の他の箇所に記載しているため、このセクションでは、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖの具体的で非限定的な例のみについて具体的に論じる。ＣＡＲの細胞外ドメイン内のｓｃＦｖは、ＣＡＲが、表面にＦＬＴ３を発現する標的細胞に結合するのを可能にする（すなわち、ＣＡＲがその標的抗原に結合するのを可能にする）。
具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４のアミノ酸配列（または配列番号４に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号５のアミノ酸配列（または配列番号５に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４４のアミノ酸配列（または配列番号４４に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４５のアミノ酸配列（または配列番号４５に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４６のアミノ酸配列（または配列番号４６に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４７のアミノ酸配列（または配列番号４７に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。具体的な実施形態において、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖは、配列番号４９のアミノ酸配列（または配列番号４９に対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列）を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインはシグナルペプチドまたはリーダー配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは切断性シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外ドメインは、抗ＦＬＴ３抗原結合ドメインの前（例えば、抗原結合ドメインに対しＮ末端側）にシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、当技術分野でＣＡＲコンストラクトにおける使用について知られている。いくつかのシグナルペプチドは、ＣＡＲの新生タンパク質を小胞体に導くのを助ける。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドはＧＭ－ＣＳＦシグナルペプチドまたはＩｇｋ－鎖シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号７１に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号７７のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号７７に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、シグナルペプチドを抗ＦＬＴ３抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ））に接続する。いくつかの実施形態において、リンカーは、シグナルペプチドを抗ＦＬＴ３軽鎖可変領域（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＦＴ３ ＶＬ）に接続する。いくつかの実施形態において、リンカーは、シグナルペプチドを抗ＦＬＴ３重鎖可変領域（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＦＴ３ ＶＨ）に接続する。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドを抗原結合ドメインに接続するリンカーは、１～２５個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸）を含み、任意選択でグリシン及び／またはセリンを含む。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドを抗原結合ドメインに接続するリンカーは、２アミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドを抗原結合ドメインに接続するリンカーは、グリシンセリン（例えば、ＧＳ）リンカーである。
いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞外ドメインをスペーサーまたはヒンジ領域に接続する。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインをスペーサー領域またはヒンジ領域に接続するリンカーは、１～２５個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸）を含み、任意選択でグリシン及び／またはセリンを含む。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインをスペーサー領域またはヒンジ領域に接続するリンカーは、２アミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態において、細胞外ドメインをスペーサー領域またはヒンジ領域に接続するリンカーは、グリシンセリン（例えば、ＧＳ）リンカーである。
スペーサーまたはヒンジ領域
いくつかの実施形態において、細胞外ドメインは、ヒンジ領域またはスペーサー領域により膜貫通ドメインに接続している。ヒンジ領域は、当技術分野で知られている任意のヒンジ領域とすることができる。ヒンジ領域の例としては、限定されるものではないが、ＣＤ８、ＣＤ２８に由来するもの、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ４から誘導されるものが挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８細胞外ドメインに由来する。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域はＣＤ８（例えばＣＤ８α）ヒンジである。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域はＣＤ２８ヒンジである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８αヒンジは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８αヒンジは、配列番号７２に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８αヒンジは、配列番号７８のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８αヒンジは、配列番号７８に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインとは、細胞膜に広がる疎水性のアルファヘリックスのことである。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関しては、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞膜への挿入を可能にする。
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、以下のいずれか１つ以上の膜貫通ドメインである：４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＬＥＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤｌｌａ、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤｌｌｄ、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭｌ（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－ｌ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ｍｔｅｇｒｉｎ、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭＪＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦｌ）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、または４－１－ＢＢ膜貫通ドメインに由来する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ３膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの膜貫通ドメインは４－１－ＢＢ膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号７３に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号７９の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号７９に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
細胞内ドメイン／エンドドメイン
ＣＡＲの細胞内ドメイン（すなわち、エンドドメイン）は受容体の機能的末端である。抗原認識後に受容体がクラスター形成し、シグナルが細胞に伝達される。細胞内ドメインは、ＣＡＲを発現する免疫細胞を活性化するための内部シグナルを中継するシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達（または活性化）ドメインを含む。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、３つの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＩＴＡＭは、抗原がＣＡＲに結合した後に、ＣＡＲを含む細胞に活性化シグナルを送信する。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号７６に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号８２の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号８２に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ε（イプシロン）シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲの細胞内ドメインは、ＦｃγＲ（ＦｃＲガンマ）シグナル伝達ドメインを含む。当技術分野で知られている他の活性化ドメインも使用することができる。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメイン／エンドドメインは、共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインまたは別の活性化ドメイン）及び共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、以下のいずれか１つ以上の共刺激ドメインである：ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死１（ＰＤ－１）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１（ＣＤ１ １ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ－１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、ＳＬＡＭタンパク質、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１ １ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１ １ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１ １ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、またはこれらの任意の組合せ。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号７４に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号８０の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号８０に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号７５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号７５に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号８１の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号８１に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ２８及び４－１ＢＢ共刺激ドメインの両方を含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、配列番号７４及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ２７の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＯＸ４０の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＩＣＯＳの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ２８共刺激ドメインを含む。
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、配列番号７６のアミノ酸配列を有するＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、配列番号７５のアミノ酸配列を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有するＣＤ２８共刺激ドメインを含む。
安全スイッチ
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは安全スイッチを含む。いくつかの実施形態において、安全スイッチは、限定されるものではないが、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導性カスパーゼ９（ｉｃａｓｐ９）、及び切断ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドから選択される。いくつかの実施形態において、自殺遺伝子は、本明細書に記載の任意のＣＡＲをコードする核酸を含むベクター内に含まれる。このようにして、安全スイッチを活性化するように設計されたプロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ９を活性化するＡＰ１９０３）を投与すると、安全スイッチ及び活性化ＣＡＲ発現細胞においてアポトーシスが作動する。
いくつかの実施形態において、自殺遺伝子／安全スイッチはｉｃａｓｐ９である。いくつかの実施形態において、ｉｃａｓｐ９は、二量体化の化学的誘導物質（例えば、ＡＰ１９０３またはＡＰ２０１８７）が投与された後に免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の除去を可能にする。いくつかの実施形態において、ｉｃａｓｐ９は、配列番号８５の核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態において、ｉｃａｓｐ９遺伝子は、配列番号８５に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｉｃａｓｐ９安全スイッチは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ｉｃａｓｐ９安全スイッチは、配列番号１０５に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、自殺遺伝子／安全スイッチはＥＧＦＲｔである。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲｔは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えばセツキシマブ）が投与された後に免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の除去を可能にする。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲｔは、配列番号８４の核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲｔ遺伝子は、配列番号８４に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲｔ安全スイッチは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥＧＦＲｔ安全スイッチは、配列番号１０４に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の安全スイッチ含有ＣＡＲは、安全スイッチをＣＡＲに接続する自己切断ペプチドを含む。例示的な自己切断ペプチドとしては、２Ａファミリーのペプチド（例えば、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、及びＰ２Ａペプチド）ならびにＩＲＥＳが挙げられる。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＴ２Ａペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｔ２Ａペプチドは、配列番号８３の核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態において、Ｔ２Ａは、配列番号８３に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態において、Ｔ２Ａペプチドは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｔ２Ａペプチドは、配列番号１０３に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＥ２Ａペプチドである。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＦ２Ａペプチドである。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＰ２Ａペプチドである。いくつかの実施形態において、自己切断ペプチドはＩＲＥＳペプチドである。
ＣＡＲを発現する単離核酸
本明細書では、本明細書で提供するＣＡＲのうちの１つ以上をコードする核酸配列（ポリヌクレオチド）を提供する。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の形質転換に適した任意のベクター内に含まれる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、合成ベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、自己複製プラスミド、ウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）を用いて形質転換される。
Ｔリンパ球の形質転換に適したレンチウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、例えば、米国特許第５，９９４，１３６号；同第６，１６５，７８２号；同第６，４２８，９５３号；同第７，０８３，９８１号；及び同第７，２５０，２９９号に記載のレンチウイルスベクターが挙げられる（これらの開示内容は、参照により全体として本明細書に援用される）。Ｔリンパ球の形質転換に適したＨＩＶベクターとしては、限定されるものではないが、例えば、米国特許第５，６６５，５７７号に記載のベクターが挙げられる（この開示内容は、参照により全体として本明細書に援用される）。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６０の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６１の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６２の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６３の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６４の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６５の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６６の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６７の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６８の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６９の核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号７０の核酸を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６０に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６１に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６２に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６３に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６４に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６５に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６６に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６７に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６８に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６９に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号７０に対し少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９２のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９３のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９４のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９５のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９６のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９７のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９８のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９９のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１００のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１０１のプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１０２のプラスミドにより発現する。
ＣＡＲを作製する方法
ＣＡＲを作製する方法は、当技術分野で広く知られており、例えば、米国特許第６，４１０，３１９号、米国特許第７，４４６，１９１号、米国特許公開第２０１０／０６５８１８号、米国特許第８，８２２，６４７号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号、米国特許第７，５１４，５３７号、及びＢｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：５４２６に記載されている（これらの各々は、参照により全体として本明細書に援用される）。
本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗原結合フラグメントまたはｓｃＦｖ）とＦＬＴ３との結合は、当技術分野で知られている方法を用いて確認することができる。例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ解析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウェスタンブロットアッセイを使用することができる。これらのアッセイの各々は、概して、目的の複合体に特異的な標識試薬（例えば、抗体またはｓｃＦｖ）を用いることにより、特定のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖを放射性標識しラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）に使用することができる。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用などの手段により、またはオートラジオグラフィーにより、検出することができる。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーにより標識される。蛍光マーカーの非限定的な例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、及びｍＫａｌａｍａｌ）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、及びＣｙＰｅｔ）、ならびに黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、及びＹＰｅｔ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ＧＦＰにより標識される。いくつかの実施形態において、ＧＦＰ標識ＣＡＲは、配列番号７０の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＧＦＰ標識ＣＡＲは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
例示的なＣＡＲコンストラクト
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、以下のドメインを含む：
シグナルペプチド－リンカー１－ＶＬ－リンカー２－ＶＨ－リンカー３－ヒンジ－ＴＭドメイン－１つまたは２つの共刺激ドメイン－シグナル伝達／活性化ドメイン。いくつかの実施形態において、ドメインの順序はここで指定する通りである。いくつかの実施形態において、リンカードメインのいずれか１つ以上が存在しない。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、以下のドメインを含む：
シグナルペプチド－リンカー１－ＶＬ－リンカー２－ＶＨ－リンカー３－ヒンジ－ＴＭドメイン－１つまたは２つの共刺激ドメイン－シグナル伝達／活性化ドメイン－自己切断ペプチド－安全スイッチ。いくつかの実施形態において、ドメインの順序はここで指定する通りである。いくつかの実施形態において、リンカードメインのいずれか１つ以上が存在しない。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、以下のドメインを含む：
シグナルペプチド－リンカー１－ＶＬ－リンカー２－ＶＨ－リンカー３－ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ－ＣＤ２８共刺激ドメイン及び／または４－１ＢＢ共刺激ドメイン－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン。いくつかの実施形態において、ドメインの順序はここで指定する通りである（ただし、例えば、共刺激ドメインは、両方存在する場合、任意の順序で出現する）。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、以下のドメインを含む：
シグナルペプチド－リンカー１－ＶＬ－リンカー２－ＶＨ－リンカー３－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８αＴＭ－ＣＤ２８共刺激ドメイン－４－１ＢＢ共刺激ドメイン－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン。いくつかの実施形態において、ドメインの順序はここで指定する通りである。
いくつかの実施形態において、このセクションで例示するＣＡＲにおいて、
ＶＬは、配列番号１、２、及び２８～３８のうちの１つを含むアミノ酸配列から選択され、ＶＨは、配列番号３、及び１７～２７のうちの１つを含むアミノ酸配列から選択される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、以下のドメインを含む：
シグナルペプチド－リンカー１－ＶＬ－リンカー２－ＶＨ－リンカー３－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８αＴＭ－ＣＤ２８共刺激ドメイン－４－１ＢＢ共刺激ドメイン－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン；ここで、
（ｉ）ＶＬは、配列番号１、２、及び２８～３８のうちの１つを含むアミノ酸配列から選択され、
（ｉｉ）ＶＨは、配列番号３及び１７～２７のうちの１つを含むアミノ酸配列から選択され、
（ｉｉｉ）リンカー２は配列番号５３を含み、
（ｉｖ）シグナルペプチドは配列番号７１を含み、
（ｖ）ＣＤ８αヒンジは配列番号７２を含み、
（ｖｉ）ＣＤ８αＴＭは配列番号７３を含み、
（ｖｉｉ）ＣＤ２８共刺激ドメインは配列番号７４を含み、
（ｖｉｉｉ）４－１ＢＢ共刺激ドメインは配列番号７５を含み、
（ｉｘ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは配列番号７６を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、（ｉ）配列番号４、５、４４、４５、４６、４７、及び４９のいずれか１つを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）細胞内ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）細胞内ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＣＡＲは、（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）細胞内ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインならびにＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインを含む細胞内ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインならびにＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインを含む細胞内ドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインならびにＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインを含む細胞内ドメインと、（ｉｖ）安全スイッチポリペプチドとを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインならびにＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインを含む細胞内ドメインと、（ｉｖ）安全スイッチポリペプチドとを含む。
本明細書では、例示的なＣＡＲコンストラクトを提供する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６０～７０のいずれか１つの核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６０の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６１の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６２の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６３の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６４の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６５の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６６の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６７の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６８の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６９の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号７０の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６～１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１６のＣＡＲ）は、図１２Ａに描写されるプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号７のＣＡＲ）は、図１２Ｂに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号８のＣＡＲ）は、図１２Ｃに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号６のＣＡＲ）は、図１２Ｄに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１２のＣＡＲ）は、図１２Ｅに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１１のＣＡＲ）は、図１２Ｆに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１０のＣＡＲ）は、図１２Ｇに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号９のＣＡＲ）は、図１２Ｈに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１３のＣＡＲ）は、図１２Ｉに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１４のＣＡＲ）は、図１２Ｊに示すプラスミドにより発現する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ（例えば、配列番号１５のＣＡＲ）は、図１２Ｋに示すプラスミドにより発現する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦＶ）は、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦＶ）は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）は、配列番号４、配列番号５、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４９からなる群より選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５のアミノ酸配列に対し少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
ＣＡＲ発現免疫細胞
本明細書では、本明細書に記載のＣＡＲを含む（発現する）免疫細胞を提供する。本明細書では、本明細書に記載のＣＡＲを含む（発現する）免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔリンパ球）を提供する。１つ以上のエフェクター機能（例えば、細胞傷害性細胞殺滅活性、サイトカインの分泌、抗体指向性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘導、及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ））を有する任意の免疫細胞を使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入、形質移入、または感染させる。
いくつかの実施形態において、免疫細胞はリンパ球である。Ｔリンパ球または「Ｔ細胞」としては、限定されるものではないが、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はＴヘルパー（Ｔｈ）細胞（例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞）である。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－Ｔ細胞、または他の任意のＴ細胞のサブセットとすることができる。いくつかの実施形態における使用に適したＴ細胞の他の例示的集団としては、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｔリンパ球はナイーブＴリンパ球またはＭＨＣ制限Ｔリンパ球である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＴリンパ球は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。
いくつかの実施形態において、免疫細胞はナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＮＫＴ細胞である。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は単球である。
いくつかの実施形態において、免疫細胞はマクロファージである。
当業者には理解されるであろうように、他の細胞も、本明細書に記載のＣＡＲを用いた免疫エフェクター細胞として使用することができる。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は同種異系である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は自己由来である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は自己由来Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ＣＡＲ発現免疫細胞により治療する対象ではない対象から得られる。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、健康なドナーから得られる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、がんまたは腫瘍に罹患した患者から得られる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍生検から単離される、または腫瘍生検から単離された免疫細胞から拡大される。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、限定されるものではないが、骨髄、胎児、新生児、成体、または他の造血細胞源、例えば、胎児肝臓、末梢血、リンパ節組織、胸腺組織、脾臓組織、または臍帯血から単離される。
いくつかの実施形態において、Ｔリンパ球は、健康なドナーから得られる。いくつかの実施形態において、Ｔリンパ球は、がんまたは腫瘍に罹患した患者から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔリンパ球は、がんまたは腫瘍に罹患した患者から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔリンパ球は、腫瘍生検から単離され、または腫瘍生検から単離されたＴリンパ球から拡大される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、限定されるものではないが、骨髄、胎児、新生児、成体、または他の造血細胞源、例えば胎児肝臓、末梢血、リンパ節組織、胸腺組織、脾臓組織、または臍帯血から単離される。
当技術分野で知られている様々な技法を用いて細胞を分離することができる。モノクローナル抗体は、特定の細胞系列及び／または分化段階に関連するマーカーを、正及び負の選択両方において特定するのに特に有用である。最終分化した細胞の大部分は、比較的粗い分離により最初に除去することができる。例えば、磁気ビーズ分離を最初に使用して、多数の無関係な細胞を除去することができる。分離のための手順としては、限定されるものではないが、密度勾配遠心分離、リセット、細胞密度を修飾する粒子との結合、抗体コーティング磁気ビーズによる磁気分離、アフィニティークロマトグラフィー、ｍＡｂと連結するまたはそれと組み合わせて使用する細胞傷害性薬剤（限定されるものではないが、補体及び細胞毒素を含む）、ならびに固体マトリックス（例えば、プレート、チップ）に抗体を結合するパニング、水簸、または他の任意の好都合な技法が挙げられる。分離及び解析のためのさらなる技法としては、限定されるものではないが、フローサイトメトリーが挙げられ、これは様々な程度の精巧性（例えば、複数のカラーチャネル、小角及び鈍角光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネル）を有し得る。細胞は、死細胞に関連する色素（例えば、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ））を用いることにより、死細胞に対し選択することができる。
いくつかの実施形態において、本開示は、（例えば、がんの治療または造血移植の前のコンディショニングのための）本明細書に記載のＣＡＲを含む（例えば、発現する）免疫細胞の集団を提供する。例えば、免疫細胞の集団は、（例えば、本明細書に記載の任意のがんと診断された）患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から得ることができ、本明細書に記載のＣＡＲを発現するように修飾することができる。ＰＢＭＣは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋及びＣＤ８＋であり得る。
本開示は、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する免疫細胞を作製するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、この方法は、免疫細胞が本明細書に記載の１つ以上のＣＡＲを発現するように、個体から単離された免疫細胞を形質移入または形質導入することを含む。形質移入、形質導入、及び感染のための方法は、当技術分野で周知されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドにより形質転換される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドにより形質転換される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫細胞は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸により形質転換する前及び／または後に拡大される（すなわち、増殖される）。
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、個体から単離され、ｉｎ ｖｉｔｒｏでさらなる操作なしでＣＡＲを発現するように遺伝子修飾され、次いで個体に再投与される。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、最初にｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖するように活性化または刺激され、その後にＣＡＲを発現するように遺伝子修飾される。免疫細胞は、遺伝子修飾される（すなわち、本明細書で企図されているＣＡＲを発現するように形質導入または形質移入される）前及び／または後に、培養または拡大することができる。
いくつかの実施形態において、自己由来ＣＡＲ療法のための免疫細胞は、対象の白血球を採取し、（例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて）白血球からＴ細胞を単離し、Ｔ細胞に抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載の任意のＣＡＲ）を形質導入し、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を拡大して、自己由来ＣＡＲ Ｔ療法に使用することができる抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞の集団を生成することにより、調製される。このような細胞は、元の白血球を得た同じ対象に注入することができる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の代わりに他の免疫細胞が対象から単離され、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを形質導入され、自己由来療法に使用するために拡大される。
いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約１～約４、約２～約４、約３～約４、約１～約２、約１～約３、または約２～約３の本明細書に記載のＣＡＲのベクターコピー数／細胞を発現する。
いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号６０～７０のいずれか１つの核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号６～１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号６０～７０のいずれか１つに対し少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号６～１６のいずれか１つに対し少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６０の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６１の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６２の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６３の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６４の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６５の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６６の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６７の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６８の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６９の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号７０の核酸配列を含むＣＡＲを発現する。これらの実施形態のいずれかにおいて、Ｔ細胞の代わりに別の免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、マクロファージ、または単球）を使用することができる。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する。これらの実施形態のいずれかにおいて、Ｔ細胞の代わりに別の免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、マクロファージ、または単球）を使用することができる。
いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４、５、４４、４５、４６、４８、または４９のいずれか１つのアミノ酸配列のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号５のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４４のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４５のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４６のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４７のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、配列番号４９のｓｃＦｖを含む、本明細書に記載の任意のＣＡＲを発現する。
医薬組成物
本明細書では、（ｉ）本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、本明細書に記載の任意のｓｃＦｖ）または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（免疫細胞の集団を含む）と、（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。適切な医薬的に許容される担体（限定されるものではないが、賦形剤及び安定剤を含む）は、当技術分野で知られている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照）。
いくつかの実施形態において、医薬的に許容される担体としては、限定されるものではないが、等張剤、バッファー、懸濁化剤、分散剤、乳化剤、湿潤剤、封鎖剤、キレート剤、ｐＨ緩衝剤、溶解性増強剤、酸化防止剤、麻酔剤、及び／または抗微生物剤が挙げられる。いくつかの実施形態において、担体は、限定されるものではないが、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、デンプン、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、プロピレン、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、及びデキストロース、ならびにこれらの組合せのうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態において、医薬的に許容される担体は、結合タンパク質の貯蔵寿命または有効性を増強する補助物質、例えば、湿潤もしくは乳化剤、保存剤、またはバッファーをさらに含む。
いくつかの実施形態において、非経口投与される場合、医薬的に許容される担体としては、限定されるものではないが、食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、薬剤（例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、または他の薬剤）を含む溶液が挙げられる。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、投与後に活性成分の急速放出、持続放出、または遅延放出をもたらすように製剤化される。投与後に活性成分の急速放出、持続放出、または遅延放出をもたらすための製剤は、当技術分野で知られている（Ｍｉｓｈｒａ，Ｍ．Ｋ．（２０１６）．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ．Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ（ＣＲＣ ＰｒｅｓｓはＩｎｆｏｒｍａの一部門のＴａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐのインプリント）（参照により全体として本明細書に援用される））。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する医薬組成物は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、本明細書に記載の任意のｓｃＦｖ）または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（免疫細胞の集団を含む）と、１つ以上の他の治療剤（例えば、抗がん剤）とを医薬的に許容される担体中に含む。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、対象への任意の投与経路のために製剤化される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は注射用に製剤化され、注射前に溶液または懸濁液にするのに適した溶液、懸濁液、エマルション、または固体形態として調製される。
いくつかの実施形態において、医薬組成物中の本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント（例えば、本明細書に記載の任意のｓｃＦｖ）または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（免疫細胞の集団を含む）は、治療有効量で存在する。治療有効量は、当技術分野で知られている方法により決定される。
治療方法
がん治療
いくつかの実施形態において、本開示は、がんを治療するための方法であって、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、対象に、細胞の（例えば、標的細胞の）ＦＬＴ３エピトープに結合する本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、がんを治療する方法は、対象に、がん細胞（例えば、ＡＭＬ細胞）のＦＬＴ３エピトープに結合する本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。
いくつかの実施形態において、本開示は、他のがん療法（単数または複数）（例えば、ワクチン、化学療法、放射線療法、低分子療法、または免疫療法（例えば、別の抗体による治療））に対し抵抗性を有するがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、がんは化学療法に抵抗性である。いくつかの実施形態において、がんは放射線療法に抵抗性である。いくつかの実施形態において、がんは低分子療法に抵抗性である。いくつかの実施形態において、がんは免疫療法に抵抗性である。
本明細書に記載の方法は、細胞表面にＦＬＴ３を発現することが予想される、知られている、または判定されているがんの治療に適している。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従う本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与は、（ｉ）がん細胞の頻度または数の減少、（ｉｉ）がん成長またはがん細胞数増加の低減、（ｉｉｉ）がん細胞成長の進行の阻害、（ｉｖ）がんの退縮、（ｖ）がん再発の阻害、（ｖｉ）がんの根絶、（ｖｉｉ）がんの１つ以上の症状の重症度または期間の低減または緩和、（ｖｉｉｉ）がんに関連する１つ以上の症状の発生または発症の阻害、（ｉｘ）別の抗がん療法の治療効果の増強または改善、（ｘ）対象の余命または生存期間の増加、（ｘｉ）対象における入院（例えば、入院期間）の低減、（ｘｉｉ）対象におけるクオリティーオブライフの改善、（ｘｉｉｉ）死亡率の低減、（ｘｉｖ）対象における無再発生存期間または寛解の長さの増加、のうちの１つ以上を達成するため、またはそれをもたらすために行われる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従う本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与は、対象における腫瘍負荷の低減（例えば、治療前の対象における腫瘍負荷と比較して腫瘍負荷の低減に有効である）を達成するため、またはそれをもたらすために行われる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与は、単独で、または別の療法と組み合わせて使用したときに、対象におけるがんの治療（例えば、がん細胞の頻度もしくは数の低減、がん細胞の成長もしくは増殖の低減、余命もしくは生存期間の増加、がんの根絶、またはがんの１つ以上の症状の改善）に有効である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、がん細胞の細胞頻度もしくは数の低減、またはがん細胞の除去に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象におけるがん細胞のレベルに対する）がん細胞の数または頻度の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象におけるがん細胞のレベルに対する）がん細胞の数または頻度の少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象におけるがん細胞のレベルに対する）がん細胞の数または頻度の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象におけるがん細胞のレベルに対する）がん細胞の数または頻度の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、本明細書に記載の任意のがん（例えば、ＡＭＬ）の治療に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、本明細書に記載の任意のがん（例えば、ＡＭＬ）の進行の緩徐化に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、本明細書に記載の任意のがん（例えば、ＡＭＬ）の腫瘍負荷の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、本明細書に記載の任意のがんを有する対象の生存期間の増加に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与は、治療されていないまたはプラセボで治療された対象との比較における対象の生存期間中央値の増加に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与は、標準治療法で治療された対象との比較における対象の生存期間中央値の増加に有効である。
本明細書に記載の方法を用いて数を低減または除去することができるがん細胞の例としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の芽細胞、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）のリンパ芽球または白血病芽球、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の骨髄芽球、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の芽球が挙げられる。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する免疫細胞は、本明細書に記載の対象を治療する方法に使用される。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、治療される対象にとって自己由来である。いくつかの実施形態において、血液（例えば、白血球）が、（例えば、アフェレーシスにより）対象から採取され、次に免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が、（例えば、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて）血液から単離され、次に抗ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする核酸を単離免疫細胞に導入し（任意選択で、次に抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離免疫細胞を拡大してもよい）、次いでこのように得られた抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む免疫細胞を、（例えば、注入により）対象（すなわち、免疫細胞を単離した同じ対象）に投与する。この自己由来ＣＡＲ Ｔ療法を図２Ａに示す。他の実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、治療される対象にとって自己由来ではない。
造血細胞コンディショニング
いくつかの実施形態において、本開示は、造血細胞移植のための準備またはコンディショニングを、それを必要とする対象において行うための方法を提供する。いくつかの実施形態において、それを必要とする対象は、骨髄（ＢＭ）造血幹細胞及び／または造血前駆細胞移植を受ける資格がある、受ける予定である、または受けている患者である。いくつかの実施形態において、造血細胞移植を必要とする対象は、がん（例えば、本明細書に記載の任意のがん）を有する。
いくつかの実施形態において、本開示は、造血細胞移植のための準備またはコンディショニングを、それを必要とする対象において行うための方法であって、対象が、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与される、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象を準備またはコンディショニングする方法は、対象に、造血幹細胞のＦＬＴ３エピトープに結合する、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象を準備またはコンディショニングする方法は、対象に、造血前駆細胞のＦＬＴ３エピトープに結合する、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象を準備またはコンディショニングする方法は、対象に、樹状細胞のＦＬＴ３エピトープに結合する、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象を準備またはコンディショニングする方法は、対象に、骨髄系細胞のＦＬＴ３エピトープに結合する、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象を準備またはコンディショニングする方法は、対象に、リンパ系細胞のＦＬＴ３エピトープに結合する、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメントまたは本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与することを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、造血細胞移植を行う前の対象のコンディショニングに有効である。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現する免疫細胞は、本明細書に記載の対象を治療する方法に使用される。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、治療される対象にとって自己由来である。いくつかの実施形態において、血液が対象から採取され、次に免疫細胞（例えばＴ細胞）が血液から単離され、次に抗ＦＬＴ３ ＣＡＲをコードする核酸を単離免疫細胞に導入し（任意選択で、次に抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む単離免疫細胞を拡大してもよい）、次いでこのように得られた抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを含む自己免疫細胞を対象に投与する。他の実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、治療される対象にとって自己由来ではない。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び／または造血前駆細胞（ＨＰＣ）（例えば、初期造血前駆細胞）の細胞の頻度もしくは数の顕著な低減、またはそれらの除去に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ（例えば、初期ＨＰＣ）の数または頻度の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ（例えば、初期ＨＰＣ）の数または頻度の少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ（例えば、初期ＨＰＣ）の数または頻度の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ（例えば、初期ＨＰＣ）の数または頻度の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＨＳＣ及び／またはＨＰＣの低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）及び／または共通前駆細胞（ＣＰ）の細胞の頻度もしくは数の顕著な低減、またはそれらの除去に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＭＰＰ及び／またはＣＰの数または頻度の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＭＰＰ及び／またはＣＰの数または頻度の少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＭＰＰ及び／またはＣＰの数または頻度の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対する（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対する）ＭＰＰ及び／またはＣＰの数または頻度の少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％の低減に有効である。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＭＰＰまたはＣＰの低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、骨髄（ＢＭ）ＨＳＣ及び／またはＨＰＣ（例えば、早期ＨＰＣ）移植を受けている患者のコンディショニングに有効である。いくつかの実施形態において、対象はＨＳＣ移植を受ける。いくつかの実施形態において、対象はＨＰＣ移植を受ける。いくつかの実施形態において、対象はＨＳＣ及びＨＰＣ（例えば、早期ＨＰＣ）の両方の移植を受ける。いくつかの実施形態において、対象はＭＰＰ及び／またはＣＰを受ける。いくつかの実施形態において、ＨＳＣ／ＨＰＣ移植は、本明細書に記載の任意の血液癌、例えば、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、樹状細胞新生物を治療するために行われる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、骨髄系細胞系列（例えば、循環骨髄系系列細胞または単球）の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、骨髄系系列細胞（例えば、循環骨髄系系列細胞または単球）の数または頻度を少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、骨髄系系列細胞（例えば、循環骨髄系系列細胞または単球）の数または頻度を少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、骨髄系列細胞の数または頻度を顕著に低減しない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の免疫細胞を発現する抗ＦＬＴ３ＣＡＲの対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、骨髄系列細胞の数または頻度を６０％未満、５５％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、または２０％未満低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、骨髄系列細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、骨髄系列細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、または少なくとも６０％低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ４５、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を発現する細胞集団を低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を発現する細胞集団の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を発現する細胞集団の低減は、治療される対象の循環血液細胞内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＦＬＴ３、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）を発現する細胞集団を低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）を発現する細胞集団の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ３３、及びＣＤ３４のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、または４つ）を発現する細胞集団の低減は、治療される対象の循環血液細胞内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも６０％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも７０％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも８０％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも９０％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＦＬＴ３発現細胞の数または頻度を少なくとも９５％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＦＬＴ３発現細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＦＬＴ３発現細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＦＬＴ３発現細胞の低減は、治療される対象におけるがん細胞の低減である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３４＋造血幹細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３４＋造血幹細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋造血幹細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋造血幹細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、初期造血前駆細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、初期造血前駆細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、初期造血前駆細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、初期造血前駆細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、樹状細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、樹状細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、樹状細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、樹状細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞の数または頻度を少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞の数または頻度を少なくとも５５％、約５０％、約４５％、約４０％、または約３５％（または約３０％～５５％）低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞の数または頻度を少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３４を発現する細胞集団を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＦＬＴ３を発現する細胞集団を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３３＋細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３３＋細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３３を発現する細胞集団を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３３発現細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３３発現細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ１ｃ＋骨髄系樹状細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ１ｃ＋骨髄系樹状細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ１ｃ＋骨髄系樹状細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ１ｃ＋骨髄系樹状細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ１４１＋骨髄系樹状細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ１４１＋骨髄系樹状細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ１４１＋骨髄系樹状細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ１４１＋骨髄系樹状細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、ＣＤ３０３＋形質細胞様樹状細胞の数または頻度を低減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の対象への投与は、対照またはベースラインに対し（例えば、この療法を投与する前の対象における細胞のレベルに対し）、ＣＤ３０３＋形質細胞様樹状細胞の数または頻度を少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％低減する。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３０３＋形質細胞様樹状細胞の低減は、治療される対象の骨髄内（例えば、骨髄単核細胞内）で生じる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＣＤ３０３＋形質細胞様樹状細胞の低減は、治療される対象の循環血液細胞内で生じる。
いくつかの実施形態において、ＨＳＣ／ＨＰＣ移植の方法は、ドナーＨＳＣ／ＨＰＣ細胞の移植を含む。いくつかの実施形態において、ドナー細胞は健康な対象に由来する。他の実施形態において、ＨＳＣ／ＨＰＣ移植は、自己由来細胞（例えば、治療される疾患が発症する前に得られたもの）の移植を含む。
いくつかの実施形態において、本開示は、対象における造血幹細胞／造血前駆細胞移植の方法であって、
（ｉ）本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を対象に投与することにより、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び／または造血前駆細胞（ＨＰＣ）の数を低減することと、
（ｉｉ）ＨＳＣ／ＨＰＣ（例えば、ドナーＨＳＣ／ＨＰＣ）を対象に移植することとを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、対象における造血幹細胞／造血前駆細胞移植の方法であって、
（ｉ）配列番号６及び９～１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＡＲを発現する免疫細胞の集団を対象に投与することにより、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び／または造血前駆細胞（ＨＰＣ）の数を低減することと、
（ｉｉ）ＨＳＣ／ＨＰＣ（例えば、ドナーＨＳＣ／ＨＰＣ）を対象に移植することとを含む、方法を提供する。
治療対象となるがん
がんは、本明細書に記載の方法に従って治療することができる。いくつかの実施形態において、治療対象となるがんは造血器癌または血液癌である。本明細書に記載の方法に従って治療される血液癌の例としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害、多発性骨髄腫、及び樹状細胞新生物が挙げられる。いくつかの実施形態において、がんは血液癌である。いくつかの実施形態において、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）である。いくつかの実施形態において、がんは末梢Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは濾胞性リンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんはびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、がんは神経芽腫である。いくつかの実施形態において、がんは非悪性遺伝性または後天性骨髄障害である。いくつかの実施形態において、がんは多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態において、がんは樹状細胞新生物である。
いくつかの実施形態において、がんは非悪性遺伝性または後天性骨髄障害の結果である。本明細書に記載の方法に従って治療される非悪性遺伝性または後天性骨髄障害の例としては、限定されるものではないが、鎌状赤血球貧血、ベータ－サラセミアメジャー、難治性ダイヤモンド－ブラックファン貧血、骨髄異形成症候群、特発性重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、赤芽球ろう、ファンコーニ貧血、無巨核球増加（ａｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）、及び先天性血小板減少症が挙げられる。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は鎌状赤血球貧血である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害はベータ－サラセミアメジャーである。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は難治性ダイヤモンド－ブラックファン貧血である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は骨髄異形成症候群である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は特発性重症再生不良性貧血である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は発作性夜間ヘモグロビン尿症である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は赤芽球ろうである。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害はファンコーニ貧血である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は無巨核球増加（ａｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）である。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性または後天性骨髄障害は先天性血小板減少症である。
投与方法
本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、任意の好適な手段（限定されるものではないが、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、骨内、脳内、脳室内、髄腔内、皮下）、腹腔内、腫瘍内、肺内、皮内、経皮、経結膜、眼内、鼻内、気管内、経口、及び局所的病巣内投与経路を含む）により、対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（免疫細胞に言及した場合、このような免疫細胞の集団も含む）は、静脈内、動脈内、腹腔内、または腫瘍内投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、（例えば、ボーラスまたは持続注入により）静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、腹腔内投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、皮下投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、腫瘍内投与される（例えば、治療されるがんの腫瘍内への注射により投与される）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内投与される。
本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体及びフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、及び本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の様々な投与スケジュールが、単回投与または一定期間にわたる複数回投与を含めて企図されている。投与方法としては、限定されるものではないが、ボーラス投与、パルス注入、及び持続注入が挙げられる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、１回投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、（例えば、さらなる反復投与なしで）１回静脈内投与されると、本明細書に記載の方法で有効である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、約１～７日ごとに約１～８週間投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、約１～７日ごとに約１～４週間投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、約３～７日ごとに約２～３週間投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、約３日ごとに約２週間～約７日ごとに約３週間投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、約２～４日ごとに約２～３週間（例えば、２週間または３週間）投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、週に１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日（例えば、週に１回、週に２回、２日ごとに、または毎日）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、または８週間投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、６週間未満、５週間未満、４週間未満、３週間未満、または２週間未満投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、２日に１回またはそれより少ない頻度で（例えば、１～３週間に１回）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、３日に１回またはそれより少ない頻度で（例えば、１～３週間に１回）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、４日に１回またはそれより少ない頻度で（例えば、１～３週間に１回）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、５日に１回またはそれより少ない頻度で（例えば、１～３週間に１回）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、週に１回またはそれより少ない頻度で（例えば、１～３週間に１回）投与される。
いくつかの実施形態において、（本明細書に記載の抗体、フラグメント、組成物、または免疫細胞の）投与は、約３日ごとに約２週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、４日ごとに約２週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、５日ごとに約２週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、７日ごとに約２週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、３日ごとに約３週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、４日ごとに約３週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、５日ごとに約３週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、７日ごとに約３週間行われる。
いくつかの実施形態において、投与は、週に１回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に２回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に３回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に４回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に５回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に６回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。いくつかの実施形態において、投与は、週に７回、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間行われる。
いくつかの実施形態において、投与は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、または６週間に１回行われる。いくつかの実施形態において、投与は、（例えば、治療過程で）１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、または２０回行われる。
本明細書に記載の投与は、本明細書に記載の任意の療法の初回用量の後に１回以上の低用量が続くレジメン、または初回用量の後に１回以上の高用量が続くレジメンを含む。いくつかの実施形態において、初回投与の後には１回以上の低用量が続く。いくつかの実施形態において、初回投与の後には１回以上の高用量が続く。
いくつかの実施形態において、最初の治療期間（本明細書に記載の任意の療法が、例えば月に１回、２週間に１回、週に１回、週に２回、または週に３回投与される期間）の後には、療法が投与されない休薬期間（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、２か月、３か月、４か月、６か月、または１年間）が続き、その後に第２の治療期間（療法が、例えば月に１回、２週間に１回、週に１回、週に２回、または週に３回投与される期間）が続く。このような最初の治療期間及び第２の治療期間は、例えば、２週間、３週間、４週間、６週間持続し得る（最初の治療期間は、第２の治療期間と同じでも異なってもよい）。この治療過程（最初の治療期間、休薬期間、第２の治療期間を有する）は、２回、３回、４回、５回、６回、１０回、または１０回より多く繰り返すことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の治療有効量が、対象または患者に投与される。治療有効量は、使用される方法、治療されるがん、治療されるがんの重症度、投与経路、標的部位、患者の状態（例えば、年齢、体重、健康状態）、患者の応答性、患者が使用する他の薬剤、及び治療を実施する医療従事者の裁量で考慮される他の要因に依存する。
いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約１×１０６、約５×１０６、約１×１０７、約２×１０７、約３×１０７、約４×１０７、約５×１０７、約６×１０７、約７×１０７、約８×１０７、約９×１０７、約１×１０８、約２×１０８、約３×１０８、約４×１０８、約５×１０８、約６×１０８、約７×１０８、約８×１０８、約９×１０８、約１×１０９、約２×１０９、約３×１０９、約４×１０９、約５×１０９、約６×１０９、約７×１０９、約８×１０９、約９×１０９、約１×１０１０、約２×１０１０、約３×１０１０、約４×１０１０、または約５×１０１０細胞の量で投与される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約５×１０７、約６×１０７、約７×１０７、約８×１０７、約９×１０７、約１×１０８、約２×１０８、約３×１０８、約４×１０８、約５×１０８、約６×１０８、約７×１０８、約８×１０８、約９×１０８、約１×１０９、約２×１０９、約３×１０９、約４×１０９、約５×１０９、約６×１０９、約７×１０９、約８×１０９、約９×１０９、または １×１０１０細胞の量で投与される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約１×１０８、約２×１０８、約３×１０８、約４×１０８、約５×１０８、約６×１０８、約７×１０８、約８×１０８、約９×１０８、約１×１０９、約２×１０９細胞の量で投与される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約５×１０７～約１×１０１０細胞の量で投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、約１×１０８細胞～約２×１０９細胞の量で投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの用量は、患者の体重に対し約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメントの投与量は、患者の体重に対し約０．３ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態において、造血細胞移植は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与から５日～５週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞の投与から約２～３週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約１週間～４週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約１０日～２５日後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約１０日～２０日後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約２週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から約３週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から少なくとも５日または１週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から少なくとも２週間後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から３週間未満後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から４週間未満後に行われる。いくつかの実施形態において、造血細胞移植の実施は、投与から５週間未満後に行われる。
患者集団
いくつかの実施形態において、患者または対象は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞で治療される。いくつかの実施形態において、患者または対象は、哺乳類、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、またはブタである。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、がんを有する（例えば、そのように診断されている）。がん診断のための方法は、当技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、がんは早期がんである。いくつかの実施形態において、がんは進行期がんである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、造血器癌または血液癌を有する（例えば、そのように診断されている）。いくつかの実施形態において、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＭＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、多発性骨髄腫、非悪性遺伝性もしくは後天性骨髄障害、または樹状細胞新生物である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、末梢性Ｔ細胞リンパ腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、濾胞性リンパ腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、ホジキンリンパ腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、非ホジキンリンパ腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、神経芽腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、多発性骨髄腫と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、樹状細胞新生物と診断されている。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、非悪性遺伝性後天性骨髄障害を有する（例えば、そのように診断されている）。いくつかの実施形態において、非悪性遺伝性後天性骨髄障害は、鎌状赤血球貧血、ベータ－サラセミアメジャー、難治性ダイヤモンド－ブラックファン貧血、骨髄異形成症候群、特発性重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、赤芽球ろう、ファンコーニ貧血、無巨核球増加、先天性血小板減少症、または重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、鎌状赤血球貧血と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、ベータ－サラセミアメジャーと診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、難治性ダイヤモンド－ブラックファン貧血と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、骨髄異形成症候群と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、特発性重症再生不良性貧血と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、発作性夜間ヘモグロビン尿症と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、赤芽球ろうと診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、ファンコーニ貧血と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、無巨核球増加と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、先天性血小板減少症と診断されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）と診断されている。
いくつかの実施形態において、治療される患者または対象は、過去に１つ以上のがん療法（例えば、ワクチン、低分子標的療法、化学療法、放射線療法、または免疫療法）を受けており、過去のがん療法のうちの１つ以上に対する抵抗性を生じている。いくつかの実施形態において、治療される患者または対象は、化学療法に抵抗性である。いくつかの実施形態において、治療される患者または対象は、低分子標的治療に対し抵抗性である。いくつかの実施形態において、治療される患者または対象は、別の免疫療法に抵抗性である。
いくつかの実施形態において、患者または対象は、細胞表面にＦＬＴ３を発現することが知られている、またはそのように予想されるタイプのがんを有する。
いくつかの実施形態において、治療される患者または対象は、当技術分野で知られている方法を用いて、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞により標的化することができるその細胞の表面にＦＬＴ３を発現すると判定されたがんを有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、造血細胞移植を必要としている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される患者または対象は、造血幹細胞及び／または造血前駆細胞による骨髄移植を必要としている。
併用療法及びキット
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、１つ以上の抗がん療法と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、抗がん療法は、化学療法、手術療法、放射線療法、抗体療法、低分子療法、または当技術分野で知られている他の抗がん療法である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、化学療法と組み合わせて対象に投与される。本明細書に記載の方法に使用することができる化学療法剤のタイプの例としては、限定されるものではないが、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アロマターゼ阻害剤、抗腫瘍抗生剤、植物に由来するアルカロイド、ホルモンアンタゴニスト、Ｐ－糖タンパク質阻害剤、及び白金錯体誘導体が挙げられる。本明細書に記載の方法で使用することができる化学療法薬の具体的な例としては、限定されるものではないが、タキソール、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、ダウノルビシン、コルチシン、ミトキサントロン、タモキシフェン、シクロホスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ウラムスチン、マスタージェン（ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）、イホサミド（ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ベンダムスチン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、フォテムスチン、ストレプトゾシン、チオテパ、マイトマイシン、ジアジコン、テトラジン、アルトレタミン、ミトゾロミド、テモゾロミド、プロカルバジン、ヘキサメチルメラミン、アルトレタミン、ヘキサレン、トロホスファミド、エストラムスチン、トレオスルファン、マンノスルファン、トリアジコン、カルボコン、ニムスチン、ラニムスチン、アザチオプリン、スルファニルアミド、フルオロピリミジン、チオプリン、チオグアニン、メルカプトプリン、クラドリビン、カペシタビン、ペメトレキセド、フルダラビン、ヒドロキシウレア、ネララビンまたはクロファラビン、シタラビン、デシタビン、プララトレキサート、フロクスウリジン、チオクアニン、アザシチジン、クラドリビン、ペントスタチン、メルカプトプリン、イマチニブ、ダクチノマイシン、セルビジン、アクチノマイシン、ルテオマイシン、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルニン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、テニポシド、ツルニチニチソウ、ビンカ、タキサン、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、テニポシド、ピラルビシン、ノボビオシン、メルバロン、アクラルビシン、アムサクリン、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、ビカルタミド、メドロキシプロゲステロン、フルオキシメステロン、ジエチルスチルベストロール、エストレイス（ｅｓｔｒａｃｅ）、オクトレオチド、メゲストロール、ラロキシフェン、トレミフェン、フルベストラント、プレドニゾン、フルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン、アミノグルテチミド、テストラクトン、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ボロゾール、ホルメスタン、ファドロゾール、アンドロステン、レスベラトロール、ミオスミン、カテキン、アピゲニン、エリオジクチオール、イソリキリチゲニン、マンゴスチン、アミオダロン、アジスロマイシン、カプトプリル、クラリスロマイシン、シクロスポリン、ピペリン、ケルセチン、キニジン、キニーネ、レセルピン、リトナビル、タリキダール、ベラパミル、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、トランスプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、トリプラチン、及びカルボプラチンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、以下の群：アントラサイクリン（例えば、ダウノマイシン及びドキソルビシン）、アウリスタチン、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ビンデシン、ネオカルジノスタチン、ｃｉｓ－白金、クロラムブシル、シトシンアラビノシド、５－フルオロウリジン、メルファラン、リシン及びカリチアマイシン（ドキソルビシン、ブレオマイシン、及びビンブラスチン、及びダカルバジン（ＡＢＶＤ）などの併用化学療法を含む）、ＢＥＡＣＯＰＰまたは漸増ＢＥＡＣＯＰＰ（ブレオマイシン、エトポシド、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジン、及びプレドニゾン）、ならびにスタンフォードＶ（ドキソルビシン、ビンブラスチン、メクロレタミン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、エトポシド、及びプレドニゾン）、から選択される１つ以上の抗腫瘍剤と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、免疫療法（例えば、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）、免疫毒素（例えば、ブレンツキシマブベドチン（ＳＧＮ－３５）（抗チューブリン剤モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に結合したＣＤ－３０指向性抗体から構成される免疫毒素））、養子免疫療法（細胞傷害性Ｔリンパ球）、プログラム死１（ＰＤ－１）遮断（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ）のうちの１つ以上と組み合わせて対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、前述のがんに適応される化学療法薬（複数可）と組み合わせて、がんを有する対象に投与され、この化学療法薬は、任意選択で、前述のがん（例えば、ＡＭＬまたはＡＬＬ）に適応される投与量及び／またはレジームで投与することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、免疫療法と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、免疫療法は、チェックポイント阻害剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１アンタゴニスト、抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、及び抗ＣＴＬＡ４アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ－１抗体）である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１抗体）である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は抗ＣＴＬＡ４アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ４抗体）である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤はＬａｇ３アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤はＴｉｍ３アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤はＴＩＧＩＴアンタゴニストである。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤はＯＸ４０アンタゴニストである。
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ１アンタゴニストは、限定されるものではないが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＰＤＲ００１、ペムブロリムマブ（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ Ｃｌｏｎｅ Ｊ１１６（カタログ番号ＢＥ０１８８）、セミピリマブ、及びピディリズマブからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、限定されるものではないが、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５、及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、抗ＣＴＬＡ４アンタゴニストは、限定されるものではないが、イピリムマブ及びトレメリムマブから選択される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、以下の配列番号：６及び９～１５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ、または以下の核酸配列：６０及び６３～６９のいずれか１つを含む免疫細胞）は、化学療法と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＶＨ及び／またはＶＬを有する任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメント、あるいは本明細書に記載の任意のｓｃＦｖは、化学療法と組み合わせて対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、以下の配列番号：６及び９～１５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ、または以下の核酸配列：配列番号６０及び６３～６９のいずれか１つを含む免疫細胞）は、免疫療法（例えば、チェックポイント阻害剤）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＶＨ及び／またはＶＬを有する任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメント、あるいは本明細書に記載の任意のｓｃＦｖは、免疫療法（例えば、チェックポイント阻害剤）と組み合わせて対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、以下の配列番号：６及び９～１５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ、または以下の核酸配列：６０及び６３～６９のいずれか１つを含む免疫細胞）は、抗ＰＤ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ１抗体）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、以下の配列番号：６及び９～１５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ、または以下の核酸配列：配列番号６０及び６３～６９のいずれか１つを含む免疫細胞）は、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＬ１抗体）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（例えば、以下の配列番号：６及び９～１５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ、または以下の核酸配列：配列番号６０及び６３～６９のいずれか１つを含む免疫細胞）は、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＶＨ及び／またはＶＬを有する任意の抗ＦＬＴ３抗体またはフラグメント、あるいは本明細書に記載の任意のｓｃＦｖは、本明細書に記載の任意の抗ＰＤ－１アンタゴニスト、任意の抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、または任意の抗ＣＴＬＡ４アンタゴニストと組み合わせて対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、放射線療法（例えば、Ｘ線、ガンマ線、電子ビーム）と組み合わせて対象に投与される。
いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与する前に投与される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞と同時に投与される。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤は、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与した後に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、第２の療法の前、最中、または後に対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の医薬組成物、または本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞を投与する前に、抗がん療法を受けていない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、抗体またはフラグメントを投与する前に抗がん治療を受けた対象に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞は、免疫抑制療法から回復している、または免疫抑制療法を受けている対象に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞と、１つ以上のさらなる抗がん剤とを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、治療有効量のもの）と、（ｉｉ）１つ以上の化学療法薬（例えば、治療有効量のもの；抗体、フラグメント、または免疫細胞なしで使用される場合の薬物（単数または複数）の治療量より少なくてもよい）とを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、治療有効量のもの）と、（ｉｉ）本明細書に記載の１つ以上のチェックポイント阻害剤（例えば、治療有効量のもの；抗体、フラグメント、または免疫細胞なしで使用される場合の薬物（単数または複数）の治療量より少なくてもよい）とを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、（ｉ）本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３抗体もしくはフラグメント、本明細書に記載の任意の医薬組成物、または本明細書に記載の任意の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ発現免疫細胞（例えば、治療有効量のもの）と、（ｉｉ）１つ以上の抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、治療有効量のもの；抗体、フラグメント、または免疫細胞なしで使用される場合の薬物（単数または複数）の治療量より少なくてもよい）とを含む、キットを提供する。
以下の実施例は、限定としてではなく、例として提供するものである。本明細書で提供する全般的な説明を考慮すれば、本発明の様々な他の実施形態を実施することができる。
実施例１：ヒト化抗体及び単鎖可変フラグメントの生成。
ヒト化の前に、キメラ抗ＦＬＴ３抗体を、ＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）との競合的結合について評価した。具体的には、ＲＥＨ細胞を１０ｎＭの組換えヒトＦＬＴ３Ｌ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）と２０分間インキュベートし、ＰＢＳ＋２％ ＢＣＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ（フローバッファー）で洗浄した。次いで細胞を、フローバッファー中で調製した様々な濃度のキメラモノクローナル抗体で染色した。細胞をフローバッファーで５回洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８と結合体化した抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；１０９－５４５－００８）で染色した。細胞を７－ＡＡＤ（７－ＡＡＤ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ４２０４０４）で染色し、次にフローサイトメトリー解析を行った。キメラ抗体１－１８ＢＡ（マウスＶＬ（配列番号２８）及びマウスＶＨ（配列番号１７）及びヒトＩｇＧを含む）の結合は、図１Ａに示すように、ＦＬＴ３Ｌ前処置では低減されず、むしろＦＬＴ３Ｌ前処置なしの場合とほぼ同じであった。このことから、１１８ＢＡは、ＦＬＴ３との結合に関してＦＬＴ３Ｌと競合しないことが示唆される。
本明細書に記載のヒト化抗体及び単鎖可変フラグメントを生成するため、以下の方法を使用した。
材料及び方法
可変ドメイン解析及びＣＤＲ特定
ＣＤＲを特定し、最も近いマッチング生殖系列配列を解析する目的で、ＩＭＧＴドメインギャップアラインメントツールを使用した。（ｈｔｔｐ＿ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉ）
分子モデリング
過去に発表された抗体結晶構造に対するフーロジー（ｈｏｏｌｏｇｙ）に基づき、ソフトウェアを用いてＶＨドメイン及びＶＬドメインの分子モデルを構築した。
遺伝子合成及びクローニング
（ＦＬＴ３の）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを５’末端及び３’末端の適切な制限部位とともに設計して、Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙクローニング及び発現ベクターへのクローニングを可能にした。可変ドメイン配列を、ヒト細胞内での発現用にコドン最適化した。遺伝子合成後、可変ドメインを適切な種及びタイプのＡｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙベクターにクローニングした。正しい配列をサンガーシークエンシングにより検証し、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅソフトウェアを用いて生データを解析した。確認したら、適切なサイズのプラスミドＤＮＡプレップを実施して、形質移入に用いる十分な量の高品質なＤＮＡを生成した。
発現及び精製
プラスミドを生成したら、ＨＥＫ２９３（ヒト胎児由来腎臓２９３）哺乳類細胞を一過性形質移入に最適な段階まで継代した。細胞に重鎖及び軽鎖発現ベクターを一過性に形質移入し、さらに６日間培養した。培養物を４０００ｒｐｍで遠心分離することにより収集し、０．２２μＭフィルターで濾過した。精製の第１ステップをプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより実施し、クエン酸塩ｐＨ３．０バッファーで溶出し、次に０．５Ｍのトリス（ｐＨ９．０）で中和した。次いで溶出タンパク質を、脱塩カラムを用いてＰＢＳにバッファー交換した。抗体濃度をＵＶ分光法により定量し、必要に応じて抗体を濃縮した。
抗体の解析
抗体の純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳動）及びＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により定量した。ＳＥＣ－ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズの装置で、適切なサイズ排除カラム（ＳＥＣ）を用いて実施した。抗体発現力価をプロテインＡ ＨＰＬＣにより定量した。
ヒト化
配列解析
米国特許公開２０１９０３８９９５５号（この内容の全体が本明細書に援用される）に記載の方法を用いて生成した１－１８ＢＡにおけるＶＨ及びＶＬの配列（それぞれ、配列番号１７及び配列番号２８）を、ＩＧＭＴ Ｇａｐ Ａｌｉｇｎツールにかけて、全ての既知の抗体生殖系列配列に対し解析した。ＩＭＧＴの定義を用いてＣＤＲ領域を割り当てた。この配列はｍｕｓｅに対し最も明確にアラインメントされており、具体的には、ＶＨについてはＩＧＨＶ８－８ファミリー、ＶＬについてはＩＧＫＶ９－１２４に対しアラインメントされている。
分子モデリング
構造誘導ヒト化を可能にするため、１－１８ＢＡマウスのＶＨ及びＶＬ配列のためのモデルを構築した。
生殖系列の選択
ＶＨ及びＶＬの配列を、ヒト生殖系列配列のＡｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙデータベースによりアラインメントした。表１に、ヒト化のためのフレームワークとして選択された生殖系列配列を示す。
ＣＤＲグラフティング
抗体をヒト化するため、ＶＨ及びＶＬ配列をＣＤＲグラフティングアルゴリズムにかけて、マウス抗体１－１８ＢＡ（配列番号１７のＶＨ及び配列番号２８のＶＬを有する）由来のＣＤＲを、選択したヒト生殖系列配列に移した。ＣＤＲは、主に抗原との結合に関与するものとして定義されているが、これらの領域の外側にあるアミノ酸（フレームワーク領域として知られているもの）が結合に直接関与したり、ＣＤＲを正しく方向づける役割を果たしたりする可能性がある。構造誘導アプローチを使用して、結合の完全性を保持するにはどのフレームワークアミノ酸を元のマウスのアミノ酸として残すかを決定した。表２は、生成した配列を要約している。
配列傾向解析
非常に望ましくない配列傾向がヒト化配列に導入されていないことを確認するため、元のマウス配列及びヒト化配列をＡｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ配列傾向ツールにかけた。最も懸念される配列傾向は、グリコシル化モチーフ及び遊離システインである。元の親ＶＨ配列は、Ｎ－結合型グリコシル化モチーフを含む。このモチーフはＣＤＲ－Ｈ２内にあり、結合に影響を及ぼし得る。このモチーフは、ｃＡｂ１９８１を除くほとんどのヒト化ＶＨ配列に残っていた。
抗体の生成及び解析
抗体クローニング
上述のように、合計４つのヒト化重鎖及び３つのヒト化軽鎖を設計した。これらの各々を別々に合成し、ヒトＩｇＧ１及びｓｃＦｖとしてクローニングした。形質移入の時点で、ヒト化配列の全ての可能な組合せを作製して、合計１２種の異なるヒト化ＩｇＧ及び１２種のヒト化ｓｃＦｖを創出した。
抗体の発現及び精製
全ての抗体を小規模に発現し、次いでタンパク質をプロテインＡまたはニッケルクロマトグラフィーにより精製した。全ての精製産物は、非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ下で予想通りであるように思われた。ｃＡＢ１９８４－１０．０を除く全てのＩｇＧが十分に発現した。ｓｃＦｖは混在した発現レベルを示し、６種（ｃＡｂ１９７７、ｃＡｂ１０８１、ｃＡｂ１９８２、ｃＡｂ１９８３、及びｃＡｂ１９８８）は完全には発現しなかった。ＩｇＧ及びｓｃＦＶの収量を表３及び表４に示す。
凝集の解析
精製したＩｇＧに対し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣにより凝集及びフラグメント化を解析した。単量体含量を表３に報告する。全ての抗体が９５％超の単量体純度を示し、大半が９８％超の単量体純度を示している。
実施例２：新たに発見された完全ヒト化抗ＦＬＴ３ ＩｇＧクローン及びそのｓｃＦｖの結合親和性
この実施例は、ヒト化抗ＦＬＴ３抗体（例えば、本明細書に記載の抗体）がＦＬＴ３に対し高い結合親和性を有することを示している。具体的には、この実施例は、ヒト化抗ＦＬＴ３ ＩｇＧ及び抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖが、ＦＬＴ３を発現する細胞に対し高い結合親和性を有することを示している。
完全ヒト化抗ヒトＦＬＴ３モノクローナルＩｇＧ１、クローンｈｕｍ １－１８ＢＡ－ｖ１、クローンＩＤ ｃＡｂ１９７８－３０．１１、抗体（配列番号１のＶＬ及び配列番号３のＶＨを有する）ならびにｈｉｓタグ付きｓｃＦｖ、クローンｈｕｍ １－１８ＢＡ－ｖ１、ＩｇＧ１と同じＶＨ及びＶＬを有する抗体（配列番号４及びＣ末端上のＨｉｓタグを含む）を上述のように開発した。ＦＬＴ３を高発現するＲＥＨ細胞（急性リンパ性白血病細胞株、ＡＴＣＣ；ｎｏ．ＣＲＬ－８２８６）を用いて、ｓｃＦｖ分子の結合親和性をＩｇＧ１モノクローナル分子と比較した。ＲＥＨ細胞を、１００μＬの最終体積のＦＡＣＳバッファー（以下、単に「バッファー」と称する；リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｃａｉｓｓｏｎ Ｌａｂｓ；ｎｏ．ＰＢＬ０６）＋２％ ＢＣＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；ｎｏ．ＳＨ３００７３．０４）＋１ｍＭ ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．１５５７５０２０））で希釈した様々な濃度（１０－１～１０４ｎｇ／ｍＬ）のＩｇＧ１分子またはｓｃＦｖ分子と、三重反復で、４℃で３０分間インキュベートした。細胞をバッファーで３回洗浄し、二次抗体とインキュベートした。ＩｇＧ１を１：２００ヤギ抗ヒトＦｃ ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ）二次抗体で検出し、ｓｃＦｖを抗Ｈｉｓ ＦＩＴＣ（１：２００）二次抗体で検出した。二次抗体を、１００μＬ最終体積において三重反復で、４℃で３０分間インキュベートした。細胞をバッファーで１回洗浄し、２００ｕＬのバッファー＋１：１００ ７－ＡＡＤ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ｎｏ．４２０４０４）に再懸濁し、フローサイトメトリーにより解析した。フローサイトメトリーの取得をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析をＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。プロットは、ＲＥＨ細胞の蛍光強度中央値ｖｓ使用した一次抗体の濃度を示している。可変勾配（４パラメーター）曲線をデータに適合させ、ＥＣ５０を使用して結合親和性を比較した。ＩｇＧ１分子は６２．１ｎｇ／ｍＬ（０．４１ｎＭ）のＥＣ５０を有し、ｓｃＦｖ分子は８５．４５ｎｇ／ｍＬ（３．４２ｎＭ）のＥＣ５０を有する（図１Ｂ～１Ｃ）。
実施例３：第三世代抗ＦＬＴ３キメラ抗原受容体の生成
ＣＡＲを生成するため、ＥＦ－１αプロモーターの転写制御下で第三世代ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを使用した（図２Ｂ）。このＣＡＲは、実施例１に記載の抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖ配列（配列番号４）を含むポリペプチドをコードし、その後にＣＤ２８及び４－１ＢＢ共刺激ドメインが続き、その後にＣＤ３ζ活性化ドメインが続く。ＣＡＲ配列の後には、自己切断Ｔ２Ａ配列（配列番号１６）により結合したＣｏｐＧＦＰ配列が続く。このベクターは、単一のＲＮＡ転写産物からＣＡＲ及びＣｏｐＧＦＰの二重発現を可能にする。全てのコンストラクトをシークエンシングにより検証した。
ＦＬＴ３は、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）ならびに樹状細胞に発現し、また急性骨髄性白血病で発現する。Ｔ細胞内でＣＡＲを発現させることにより、Ｔ細胞がＦＬＴ３＋標的細胞に曝露されたときに、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖを介したＭＨＣ非依存的一次活性化が可能になる。ＣＡＲ内の共刺激ドメイン及び活性化ドメインを通じて、この活性化はパーフォリンとグランザイムの発現をもたらし、これらが最終的には標的細胞に対し細胞傷害性を有する（図２Ｃ）。
実施例４：Ｔ細胞の単離及び形質導入
抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞を生成するため、以下のプロトコルを実行した。この実施例は、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞の生成に成功したこと、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞の発現が形質導入から４日後にピークに達したこと、及び抗ＦＬＴ３ ＣＡＲを発現するＴ細胞が１８日で約１２５倍に拡大したことを示している。
１日目に、ｎｅｇａｔｉｖｅ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｎｏ．１７９５１）を用いて成人末梢血（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，ＮＹＢＣから購入）からＴ細胞を単離した。Ｔ細胞をＤｙｎａｂｅａｄｓ（Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８；Ｇｉｂｃｏ；ｎｏ．１１１．６１Ｄ）とともに１：１の細胞：ビーズ比で混合し、２００ｕｌの培地（ＲＰＭＩ １６４０培地（ＡＴＣＣ；ｎｏ．３０－２００１）＋１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｂｉｏｗｅｓｔ；ｎｏ．Ｓ１６２０）＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ；ｎｏ．１５１４０１２２））が入った無処置の９６ウェル平底細胞培養プレートに８×１０４細胞／ウェルもしくは１．６×１０５細胞／ウェルの密度で播種し、または１ｍｌの培地が入った２４ウェルプレートに１０６細胞／ウェルの密度で播種した。２日目に、１：１０００ポリブレン（５ｍｇ／ｍＬ）（ＶｅｃｔｏｒＢｕｉｌｄｅｒ）を用いて、Ｔ細胞にＣＡＲ Ｔレンチウイルスベクターを複数のＭＯＩ（０、２、５、１０、及び２０）で形質導入した。４日目に、形質導入の効率をフローサイトメトリーにより定量した。ＧＦＰ陽性細胞の形質導入に成功した。ポリクローナル抗Ｆａｂ ＡＰＣ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ；ｎｏ．１０９－６０７－００３）を用いて、ｓｃＦｖの表現発現を確認した。Ｔ細胞をｓｃＦｖ検出抗体により４℃で３０分間染色した。細胞をバッファーで１回洗浄し、２００μＬのバッファーに再懸濁し、フローサイトメトリーにより解析した。フローサイトメトリーの取得をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析をＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。Ｔ細胞培地を交換し、最終濃度１０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；ｎｏ．１３００９７７４５）を補充した。Ｔ細胞を必要に応じて分割して、細胞密度を０．５～１×１０６細胞／ｍｌに維持した。７日目に、形質導入の効率を、上述のようにフローサイトメトリーにより評価した。１０日目に、形質導入の効率を、上述のようにフローサイトメトリーにより評価し、Ｔ細胞は機能的細胞傷害性試験を行う準備ができている（図３Ａ）。
ＣＡＲ Ｔ細胞を上述のように生成及び拡大した。具体的には、細胞に配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＡＲ（以下の方向のドメイン：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ）を形質導入した。形質導入の効率を、１０日間にわたり異なるＭＯＩで定量した。具体的には、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ（配列番号１６）を形質導入した細胞におけるＧＦＰ発現を測定した。ＧＦＰ発現は４日目にピークに達し、７日目までは減少し、１０日目には全てのＭＯＩで安定化するように思われた（図３Ｂ）。抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａを形質導入したところ、Ｔ細胞は１８日でおよそ１２５倍に拡大した（図３Ｃ）。ＧＦＰの発現（すなわち、ＣＡＲコンストラクトの発現）は、予想されたようにｓｃＦｖの発現との直線的な相関を示した（図３Ｄ）。
実施例５：ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－ＴのＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３に対する細胞傷害性
この実施例は、実施例４に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＭＬ細胞株に対し、ｉｎ ｖｉｖｏで白血病の動物モデルにおいて生存期間の増加に有効であることを示している。
ＣＡＲ Ｔ細胞を上述のように生成及び拡大し、次いで機能的細胞傷害性アッセイに使用した。具体的には、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ｎｏ．Ｃ３４５７１）で標識したＭＯＬＭ－１３ （ＤＳＭＺ；ｎｏ．ＡＣＣ ５５４）などのＦＬＴ３を発現するＡＭＬ細胞株を用いて、細胞の細胞傷害性を測定した（図４Ａ）。配列番号１６によりコードされるＣＡＲ（以下の方向でドメインをコード：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＧＦＰ）を発現するＣＡＲ Ｔ細胞（エフェクター細胞）を標識ＡＭＬ細胞（標的細胞）とともに、様々なエフェクター：標的細胞比（１０：１、５：１、２：１、１：１、１：２、及び１：５）で２４時間及び４８時間共培養した。細胞を収集し、ＦＡＣＳバッファーで洗浄し、２００μＬの１１：１００ ７－ＡＡＤ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ｎｏ．４２０４０４）に再懸濁し、フローサイトメトリーにより解析した。フローサイトメトリーの取得は、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析は、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。代表的なドットプロットは、デブリ除外後のフローデータを示している。標的細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ＋、エフェクター細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ－として識別される。ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ＋細胞でゲーティングし、死標的細胞（７ＡＡＤ＋）及び生標的細胞（７ＡＡＤ－）の頻度を定量した。ＭＯＬＭ－１３に対する細胞傷害性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞とともに共培養したところ、２４時間時及び４８時間時に、対照Ｔ細胞と比較して有意に高かった（図４Ｂ及び４Ｃ）。
白血病に対する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を、ＭＯＬＭ－１３細胞株（ＤＳＭＺ；ｎｏ．ＡＣＣ ５５４）（ＥＧＦＰを発現するように形質導入したＡＭＬ細胞）を移植した雌のＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＴａｃマウス（以下ＮＯＧマウスと略記、Ｔａｃｏｎｉｃ；ｎｏ．ＮＯＧ－Ｆ）において評価した。１日目に、各ＮＯＧマウス（ｎ＝１４）に２×１０５個のＥＧＦＰ－ＭＯＬＭ－１３細胞を静脈内移植した。５日目及び３２日目に、各マウスに４×１０６個の対照Ｔ細胞（ｎ＝７）または４×１０６個の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ Ｔ細胞（３３％ ＣＡＲ＋）（ｎ＝７）のいずれかを投与した。一部のマウスに、４×１０６個のＣＡＲ－Ｔ細胞（３３％ ＣＡＲ＋）（ｎ＝４）を投与して、ＣＡＲ－Ｔ単体（すなわち、ＭＯＬＭ－１３細胞を含まない抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ Ｔ細胞）がマウスに及ぼす効果を評価した（図５Ａ）。生理的苦痛、カヘキシー、または後肢麻痺の症状を示したマウスを屠殺した。抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞処置により、生存期間中央値は、対照Ｔ細胞マウスの２４日に対し４７日に延長した（図５Ｂ）。Ｔ細胞投与後、２週間ごとにマウスから採血した。末梢血単核球を抗マウスＣＤ４５ ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．１０３１１２）、抗ヒトＣＤ４５ ＡＰＣ－ｅＦｌｕｏｒ７８０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．４７０４５９４２）、抗ヒトＣＤ３３ ＢＶ５１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３６６６１０）、及び抗ヒトＣＤ３ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３００４２０）で染色し、フローサイトメトリーにより、循環するＭＯＬＭ－１３細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３３＋ＥＧＦＰ＋）及びＴ細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋）またはＣＡＲ－Ｔ細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＥＧＦＰ＋）の頻度を測定した。フローサイトメトリーの取得をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析をＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。（全単核球の頻度に対する）Ｔ細胞の頻度は、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ－Ｔ細胞処置マウスでは４７日目まで維持され、場合によっては７２日目まで維持されたが、対照Ｔ細胞処置マウスは２８日目までに死亡した（図５Ｃ～５Ｅ）。
実施例６：造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）コンディショニングのためのＦＬＴ３－ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＣＤ３４＋骨髄ＨＳＰＣの標的化
この実施例は、本明細書に記載の抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ３４＋ＨＳＰＣの枯渇の達成に有効であることを示している。これは、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞をＨＳＣＴのために使用できる可能性を示している。
ヒトＨＳＣの調製及び移植
新鮮な臍帯血（ＣＢ）単位（Ｃａｒｏｌｉｎａ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ）由来の単核細胞（ＭＮＣ）を、フィコール分離培地（ＳｔｅｍＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｎｏ．０７８６１）を用いた密度遠心分離により単離した。ＭＮＣをさらに精製するため、溶解バッファー（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ；ｎｏ．Ｊ６２１５０－ＡＰ）を用いて赤血球を溶解した。次いで、抗ヒトＣＤ３４マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；ｎｏ．１３０－０４６－７０３）を用いてＣＢ ＭＮＣをヒトＣＤ３４＋細胞について濃縮した。陰性磁気単離（ＳｔｅｍＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｎｏ．１７９５１）を用いて、ＭＮＣのＣＤ３４－分画に対し、Ｔ細胞を濃縮した。
３～４週齢の雌のＮＯＧマウスに、２．４×１０５個のＣＤ３４＋細胞及び１０５個のＴ細胞を注射した。４週間ごとにマウスの顎下静脈から採血して（約１００μＬ）、ヒトキメラ化を評価した（図６Ａ）。ＰＢＭＣを以下のｍＡｂパネルで染色して、ヒト化のレベル及び系列発生を定量した：抗マウスＣＤ４５ ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．１０３１１２）、抗ヒトＣＤ４５ ＡＰＣ－ｅＦｌｕｏｒ７８０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．４７０４５９４２）、抗ヒトＣＤ３ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３００４２０）、抗ヒトＣＤ１９ ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３０２２０８）、抗ヒトＣＤ３３ ＦＩＴＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３０３３０４）、抗ヒトＣＤ４ ＢＶ６０５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３１７４３８）、抗ヒトＣＤ８ ＢＶ５１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３４４７３２）、抗ヒトＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３０４１３６）、抗ヒトＣＤ４５ＲＯ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３０４２１６）。
自己由来ＣＡＲ－Ｔ細胞によるコンディショニング
上述のマウス（図６Ａ）がロバストなヒト生着（１％以上のヒトＣＤ４５＋）を示したら、移植後２７週目に、マウスに５×１０６個の自己由来対照Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞と同じ方法で拡大）または５×１０６個の自己由来ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例３に記載のＣＡＲを発現）のいずれかを投与した。Ｔ細胞投与後の４日目、１４日目、１８日目にマウスから採血した。Ｔ細胞による処置後１８日目にマウスを安楽死させ、末梢血及び骨髄（ＢＭ）を単離した。対照Ｔ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後の末梢血のＭＮＣ分画におけるヒトＣＤ４５＋細胞の全体的な頻度を測定し、対照Ｔ細胞と抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞との間で同様の生着が示された（図６Ｂ）。対照またはＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後の末梢血における系列頻度（Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及び骨髄系細胞（ＣＤ３３＋））を測定し（図６Ｃ）、経時的な頻度の変化を測定した（図６Ｄ）。骨髄系細胞は、対照Ｔ細胞処置マウスと比較して抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置マウスにおいて有意な減少を示した。次いで、単離骨髄（ＢＭ）における細胞頻度の変化を測定した。マウスからの大腿骨と脛骨について、肉眼的な解剖学的差異を目視で評価したが、対照Ｔ細胞と抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞処置動物との間の差異は示されなかった（図７Ａ）。ＢＭからのＭＮＣ（ＢＭ－ＭＮＣ）の総細胞カウントを記録した。ＢＭ－ＭＮＣも上述のようにフローサイトメトリーにより解析し、ヒトＣＤ４５＋細胞の頻度を定量した（図７Ｂ）。ＢＭ－ＭＮＣにおける系列頻度（Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、骨髄系細胞（ＣＤ３３＋））を測定した（図７Ｃ）。対照またはＣＡＲ－Ｔ細胞による処置の前後の系列細胞カウント（Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、及び骨髄系細胞（ＣＤ３３＋））を、２つのコホートにおける個々のマウスについてに示している（図７Ｄ）。ＣＤ４５＋ＣＤ１９＋のＢ細胞カウントは、ＣＡＲ－Ｔ処置マウスでは低い（対照と比較して５４．４％低い）傾向にあった。理論に束縛されるものではないが、ＨＳＣ、ＭＰＰ、及びＣＰの数が低減したためにＢ細胞カウントが低減した可能性がある。
ＢＭ－ＭＮＣを以下のｍＡｂｓパネルで染色して、ＨＳＰＣの頻度を定量した：抗マウスＣＤ４５ ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．１０３１１２）、抗ヒトＣＤ４５ ＡＰＣ－ｅＦｌｕｏｒ７８０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．４７０４５９４２）、抗ヒト系列カクテルＢＶ５１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３４８８０７）、抗ヒトＣＤ３４ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３４３５１６）、抗ヒトＣＤ３８ ＦＩＴＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３５６６１０）、抗ヒトＣＤ９０ ＰＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．１２０９０９４２）、及び抗ヒトＣＤ４５ＲＡ ＢＶ６５０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３０４１３６）。ＦＬＴ３－ＣＡＲ Ｔ処置マウスにおいて、対照と比較して有意な造血幹細胞及び前駆細胞（ＣＤ３８＋ＣＤ３４＋及びＣＤ３８－ＣＤ３４＋集団）の枯渇が観察された（図８Ａ）。ＣＡＲ Ｔ細胞処置マウスが有する骨髄内の前駆細胞は、対照マウスと比較して有意に少ない。ＣＤ３８－ＣＤ３４＋集団のさらなるゲーティングにより、「真の」造血幹細胞（ＨＳＣ）（ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ－）、多能性前駆細胞（ＭＰＰ）（ＣＤ９０－ＣＤ４５ＲＡ－）、及び共通前駆細胞（ＣＰ）（ＣＤ９０－ＣＤ４５ＲＡ＋）の有意な枯渇が明らかになった（図８Ａ及び８Ｂ）。
実施例７：自殺スイッチを有するＣＡＲコンストラクトの生成
自殺安全スイッチを組み込んだＣＡＲコンストラクトを生成した。具体的には、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に基づく安全性スイッチであるＥＧＦＲｔ（切断ＥＧＦＲ）を、Ｔ２Ａペプチド配列の後にＣＡＲプラスミドで共発現させた（得られたＣＡＲは、配列番号７のアミノ酸配列を有し、以下の方向でドメインを含む：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ）。Ｔ２Ａによるペプチドの自己切断により、ＥＧＲＦｔの表面発現が可能になる。「自殺」は、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞をオプソニン化の標的とするセツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）を用いた処置により、達成される。
第２のコンストラクトである、安全自殺スイッチに基づく誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）を生成した。ｉＣａｓｐ９分子を、Ｔ２Ａペプチド配列の後にＣＡＲプラスミドで共発現させた（得られたＣＡＲは、配列番号８のアミノ酸配列を有し、以下の方向でドメインを有する：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ｉＣａｓｐ９）。Ｔ２Ａによるペプチドの自己切断により、ｉＣａｓｐ９の表面発現が可能になる。「自殺」は、ｉＣａｓｐ９の二量体化をもたらしアポトーシス経路を誘発するＡＰ１９０３（リミデュシド）で処置することにより、達成される。
ヒトＴ細胞における、抗ＦＬＴ３ ｓｃＦｖの表面発現に基づく自殺－ＣＡＲベクターの形質導入効率を測定した。ポリクローナル抗Ｆａｂ ＡＰＣ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ；ｎｏ．１０９－６０７－００３）を用いてｓｃＦｖの発現を検出した。Ｔ細胞をｓｃＦｖ検出抗体により４℃で３０分間染色した。細胞をバッファーで１回洗浄し、２００μＬのバッファー＋１：１００ ７－ＡＡＤ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ｎｏ．４２０４０４）に再懸濁し、フローサイトメトリーにより解析した。フローサイトメトリーの取得をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析をＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。ＣＡＲ－Ｔ頻度は、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ（配列番号１６）、ＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔ（配列番号７）、及びＣＡＲ３ａ－ｉｃａｓｐ９（配列番号８）試料において、それぞれ３５．３％、２７．５％、及び１６．９％と定量された（図９Ａ）。
自殺ＣＡＲ３ａコンストラクトＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔ及びＣＡＲ３ａ－ｉｃａｓｐ９による細胞傷害性の評価
自殺スイッチＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔ及びＣＡＲ３ａ－ｉｃａｓｐ９を有するＣＡＲ－Ｔ細胞のＡＭＬ細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を、元のコンストラクト抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａと比較して測定した。ＮＯＭＯ－１細胞（ＦＬＴ３を発現するＡＭＬ細胞）をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ｎｏ．Ｃ３４５７１）で標識した。ＣＡＲＴ細胞（エフェクター細胞）を標識ＮＯＭＯ－１（標的細胞）と様々なエフェクター：標的細胞比（１０：１、５：１、２：１、１：１、１：２、及び１：５）で合わせた。使用する全Ｔ細胞の量は、ＣＡＲ－Ｔ頻度の差を考慮せずに同じに保った（図９Ｂ）。２４時間の共培養後、全ての細胞を採取し、７－ＡＡＤ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ｎｏ．４２０４０４）で標識し、フローサイトメトリーにより解析した。フローサイトメトリーの取得は、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）により実施し、解析は、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）により実施した。代表的なドットプロットは、デブリ除外後のフローデータを示している。標的細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ＋として、エフェクター細胞はＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ－として特定された。ＣＡＲ－３ａ、ＣＡＲ３ａ－ＥＧＦＲｔ、及びＣＡＲ３ａ－ｉｃａｓｐ９を発現するＴ細胞と様々なエフェクター：標的比でインキュベートしたときの７ＡＡＤ＋死標的細胞の頻度を測定した。全てのＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＦＬＴ３＋ＮＯＭＯ－１細胞に対し、対照Ｔ細胞と比較して有意に高い細胞傷害効果を示している。２つの自殺ＣＡＲ－Ｔ細胞（すなわち、抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－ＥＧＦＲｔ及び抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ－ｉｃａｓｐ９）のいずれかと、元のＣＡＲコンストラクト（抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａ）との間で、細胞傷害効果における有意差はなかった（図９Ｃ）。
実施例８：ＥＧＦＲｔ－ＣＡＲＴ細胞自殺スイッチの機能的試験としてのｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣによるＣＡＲ－Ｔのセツキシマブ媒介性枯渇
この実施例は、ＥＧＦＲｔ自殺遺伝子を発現するＣＡＲ Ｔ細胞が、抗体依存性の細胞傷害性により首尾よく枯渇したことを示している。
ＥＧＦＲｔ自殺スイッチの発現を検証するため、ヒトＴ細胞に、ＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ（配列番号７；以下の方向でドメインをコード：シグナルペプチド－リンカー－配列番号４のｓｃＦＶ－リンカー－ＣＤ８αヒンジ－ＣＤ８α膜貫通ドメイン－ＣＤ２８－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ）レンチウイルスベクターを発現するプラスミド（図１２Ｂに示す）を形質導入した。ポリクローナル抗Ｆａｂ ＡＰＣ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ；ｎｏ．１０９－６０７－００３）を用いて抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ３ａの表面発現を検出した。セツキシマブ（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ Ａ２０００）及びヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ＦＩＴＣ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）を二次抗体として用いて、ＥＧＦＲｔの表面発現を確認した（図１０Ａ）。
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）試験を実施して、ＡＤＣＣによるＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ Ｔ細胞のセツキシマブ媒介性枯渇を測定した。具体的には、ＣＡＲ３ａ－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＲｔ－形質導入Ｔ細胞を上述のように拡大した。８日目に、同種異系の単核球（ＭＮＣ）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ（ＮＹＢＣ））（エフェクター細胞）（全Ｔ細胞または陰性磁気分離（ＳｔｅｍＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｎｏ．１７９５１）を用いてＴ細胞を枯渇させたもの）を前述のようにＣｅｌｌＴｒａｃｅで標識し、１０：１のエフェクター：標的比で形質導入Ｔ細胞（標的細胞）とともに培養物に加えた。セツキシマブを１～１００００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で共培養物に加えた。１２日目に、共培養物から全ての細胞を採取し、染色して前述のようにｓｃＦｖを検出し、フローサイトメトリーにより解析した（図１０Ｂ）。単独で培養した形質導入Ｔ細胞（ＰＢＭＣなし）は、セツキシマブで処置した後にＣＡＲ３ａ発現細胞の有意な減少を示さない（図１０Ｃ）。全同種異系ＭＮＣ（ＰＢＭＣ）とともに培養した形質導入Ｔ細胞は、セツキシマブにより用量依存的なＣＡＲ３ａ発現細胞の枯渇を示している。Ｔ細胞（ＰＢＭＣ－Ｔ細胞）を枯渇させた同種異系ＭＮＣとともに培養した形質導入Ｔ細胞は、セツキシマブにより用量依存的なＣＡＲ３ａ発現細胞の枯渇を示している。結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＥＧＦＲｔ発現ＣＡＲＴ細胞に対する抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）機能を支持するものである。
実施例９：ｉｎ ｖｉｖｏでのＥＧＦＲｔ－ＣＡＲ ＴのＡＭＬに対する有効性、及びｉｎ ｖｉｖｏでのＡＤＣＣによるセツキシマブ媒介性ＣＡＲ－Ｔ枯渇。
この実施例は、ＥＧＦＲｔ自殺遺伝子を発現する抗ＦＬＴ３ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＡＭＬ（ＭＯＬＭ－１３細胞）を有するマウスの生存期間を改善することができ、セツキシマブで処置すると抗体依存性の細胞傷害性により枯渇することを示している。
白血病に対する抗ＦＬＴ３ ＥＧＦＲｔ－ＣＡＲ－Ｔ細胞（実施例８に記載）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を、ＥＧＦＰを発現するように形質導入したＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３（ＤＳＭＺ；ｎｏ．ＡＣＣ ５５４）を移植した雌のＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＴａｃ（以下、ＮＯＧマウスと略記；Ｔａｃｏｎｉｃ；ｎｏ．ＮＯＧ－Ｆ）において評価した。１日目に、各ＮＯＧマウス（ｎ＝１５）に２×１０５個のＥＧＦＰ－ＭＯＬＭ－１３細胞を静脈内移植した。また、１日目に、各マウスに１０×１０６個の対照Ｔ細胞（ｎ＝５）または１０×１０６ 個のＥＧＦＲｔ－ＣＡＲ３ａ Ｔ細胞（２０％ ＣＡＲ＋）（ｎ＝１０）のいずれかも投与した。１８日目に、全てのマウス（ｎ＝１５）に９×１０６ 個のエフェクター細胞（Ｔ細胞が枯渇したＭＮＣ）を投与し、ＥＧＦＲｔ－ＣＡＲＴマウスの１群（ｎ＝５）には２００ｕｇのセツキシマブの腹腔内注射も投与した。マウスの３つの群は、ＣＡＲ Ｔ（－）セツキシマブ（ｎ＝５）（セツキシマブなし）、ＣＡＲ Ｔ（＋）セツキシマブ（ｎ＝５）、及び対照Ｔ（－）セツキシマブ（ｎ＝５）である（図１１Ａ）。ＡＭＬ注射後６５日までの生存曲線を作成した。生理的苦痛、カヘキシー、または後肢麻痺の症状を示したマウスを屠殺した。ＦＬＴ３ ＣＡＲ－Ｔ処置（ＣＡＲＴ自殺の誘導なし）は、生存期間中央値を、対照Ｔ細胞マウスの１９日に対し４５日まで延長した。ＣＡＲ Ｔ＋セツキシマブマウスの生存期間中央値は５２日であった（図１１Ｂ）。マウスから２週間ごとに採血して、ＡＭＬ及びＴ細胞の生着を判定した。ＰＢＭＣを、抗マウスＣＤ４５ ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．１０３１１２）、抗ヒトＣＤ４５ ＡＰＣ－ｅＦｌｕｏｒ７８０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｎｏ．４７０４５９４２）、及び抗ヒトＣＤ３ ＰＥ－Ｃｙ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；ｎｏ．３００４２０）で染色し、フローサイトメトリーにより解析して、ＭＯＬＭ－１３細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＥＧＦＰ＋）及びＴ細胞（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋）の頻度を定量した。（左）ＣＡＲ－Ｔ細胞処置マウスは、第２週に対照Ｔ細胞処置マウスと比較してはるかに少ないＭＯＬＭ－１３の増殖を示している。第４週及び第６週目までに、全ての対照Ｔ細胞マウスは死亡が確認された、または安楽死させた。（右）末梢血中のＴ細胞頻度（ｍＣＤ４５－ｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋）を、各群ごとに様々な時点で定量した（図１１Ｃ）。また、マウスにおける循環ＣＡＲ－Ｔ細胞の相対量も、ｑＰＣＲによってＣＡＲ特異的ＤＮＡの相対的レベルを定量化することにより、第４週及び第６週に定量した。セツキシマブ処置は、循環ＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を有効に低減した（図１１Ｄ）。
参照による援用
本明細書では、特許、特許出願、及び刊行物などの様々な文献を引用しているが、これらの開示内容は、参照により全体として本明細書に援用される。

Claims (65)

  1. ヒトＦＬＴ３に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはフラグメントが、
    ｉ．配列番号１、配列番号２、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び／または
    ｉｉ．配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７からなる群より選択される配列のいずれか１つに対し少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
  2. （ｉ）前記ＶＬが、配列番号８６のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８７のＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号８８のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号８９のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９０のＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列に対し少なくとも９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するＣＤＲを含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはフラグメント。
  3. 前記ＶＬが配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはフラグメント。
  4. 前記ＶＬが配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはフラグメント。
  5. 請求項１～４のいずれか１項に記載の抗原結合フラグメントを含む、単鎖可変ドメイン（ｓｃＦｖ）。
  6. 前記ＶＬと前記ＶＨとの間にリンカーを含み、前記リンカーが式（Ｇｌｙ３～４－Ｓｅｒ）１～４を有する、請求項５に記載のｓｃＦｖ。
  7. 前記ｓｃＦｖが、配列番号４、配列番号５、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５に記載のｓｃＦｖ。
  8. 前記ｓｃＦｖが配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項７に記載のｓｃＦｖ。
  9. 前記ｓｃＦｖが配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項７に記載のｓｃＦｖ。
  10. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、（ｉ）（ａ）請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメントまたは（ｂ）請求項５～９のいずれか１項に記載のｓｃＦｖを含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）細胞内ドメインとを含む、前記ＣＡＲ。
  11. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、またはＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項１０に記載のＣＡＲ。
  12. 前記細胞内ドメインが活性化ドメインを含み、前記ＣＡＲがＴ細胞内で発現したときに、前記活性化ドメインが、前記細胞外ドメインがＦＬＴ３に結合した後に、活性化シグナルを伝達する、請求項１０または１１に記載のＣＡＲ。
  13. 前記細胞内ドメインが活性化ドメインを含み、前記活性化ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、またはＦｃＲガンマの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１０または１１に記載のＣＡＲ。
  14. 前記細胞内ドメインが１つ以上の共刺激ドメインをさらに含む、請求項１２または１３に記載のＣＡＲ。
  15. 前記１つ以上の共刺激ドメインが、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳのうちの１つ以上に由来する、請求項１４に記載のＣＡＲ。
  16. 前記１つ以上の共刺激ドメインが、ＣＤ２８及び／または４－１ＢＢに由来する、請求項１５に記載のＣＡＲ。
  17. 前記ＣＡＲが、前記細胞外ドメインと前記膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域またはヒンジ領域を含む、請求項１０～１６のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  18. 前記スペーサーまたは前記ヒンジ領域が、ＣＤ８の細胞外ドメインに由来する、請求項１７に記載のＣＡＲ。
  19. 前記細胞外ドメインが切断性シグナルペプチドをさらに含む、請求項１０～１８のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  20. 前記細胞外ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８膜貫通ドメインを含み、前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ゼータの細胞内シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８及び／または４－１ＢＢの共刺激ドメインとを含む、請求項１０に記載のＣＡＲ。
  21. 前記ＣＡＲが、配列番号６、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、及び配列番号１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載のＣＡＲ。
  22. 安全スイッチポリペプチドをさらに含み、前記安全スイッチポリペプチドが、自己切断ペプチドにより前記ＣＡＲに結合する、請求項１０～２０のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  23. 前記安全スイッチポリペプチドがｉＣａｓｐ９またはＥＧＦＲｔであり、前記自己切断ペプチドがＴ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、またはＩＲＥＳである、請求項２２に記載のＣＡＲ。
  24. 前記ＣＡＲを発現するＴ細胞が、前記細胞外ドメインがＦＬＴ３に結合したときに、増殖するように活性化または刺激される、請求項１０～２３のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  25. 前記ＣＡＲが、Ｔ細胞の表面に発現したときに、前記Ｔ細胞に、ＦＬＴ３を発現する細胞を殺滅するように指示する、請求項１０～２４のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  26. 請求項１０～２５のいずれか１項に記載のＣＡＲを発現する、または請求項１０～２５のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸を含む、免疫細胞。
  27. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、または単球である、請求項２６に記載の免疫細胞。
  28. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項２６または２７に記載の免疫細胞。
  29. 前記免疫細胞が核酸を含み、前記核酸が、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、及び配列番号６９からなる群より選択される配列を含む、請求項２６～２８のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  30. 前記免疫細胞が、前記ＣＡＲまたは前記核酸を導入する前に、対象から誘導されている、請求項２６～２９のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  31. 前記対象がヒトである、請求項３０に記載の免疫細胞。
  32. 前記ＣＡＲを発現するまたは前記核酸を含む前記免疫細胞が、細胞の集団を生成するためにさらに拡大される、請求項２６～３１のいずれか１項に記載の免疫細胞。
  33. 請求項１０～２５のいずれか１項に記載のＣＡＲを発現する、または請求項１０～２５のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸を含む、免疫細胞の集団。
  34. 医薬組成物であって、（ｉ）請求項１～４のいずれか１項に記載のヒト化抗体もしくはフラグメント、請求項５～９のいずれか１項に記載のｓｃＦｖ、請求項２６～３２のいずれか１項に記載の免疫細胞、または請求項３３に記載の免疫細胞の集団と、（ｉｉ）医薬的に許容される担体とを含む、前記医薬組成物。
  35. 血液癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、治療有効量の：（ｉ）請求項２６～３２のいずれか１項に記載の免疫細胞、（ｉｉ）請求項３３に記載の免疫細胞の集団、または（ｉｉ）請求項３４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  36. 前記血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、非悪性遺伝性もしくは後天性骨髄障害、多発性骨髄腫、または樹状細胞新生物である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記血液癌がＡＭＬである、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記血液癌がＡＬＬである、請求項３６に記載の方法。
  39. 前記血液癌が樹状細胞新生物である、請求項３６に記載の方法。
  40. 造血細胞移植のための準備またはコンディショニングを、それを必要とする対象において行うための方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の：（ｉ）請求項２６～３２のいずれか１項に記載の免疫細胞、（ｉｉ）請求項３３に記載の免疫細胞の集団、または（ｉｉ）請求項３４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  41. 前記治療有効量が、前記対象内でＦＬＴ３を発現する細胞集団を少なくとも９０％低減する、請求項４０に記載の方法。
  42. それを必要とする前記対象が血液癌を有する、請求項４０または４１に記載の方法。
  43. 前記血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、神経芽腫、非悪性遺伝性もしくは後天性骨髄障害、多発性骨髄腫、または樹状細胞新生物である、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記血液癌がＡＭＬである、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記血液癌がＡＬＬである、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記血液癌が樹状細胞新生物である、請求項４３に記載の方法。
  47. 前記投与が、前記対象における循環骨髄系系列を低減し、任意選択で、前記投与が循環骨髄系系列を、ベースラインレベルに対し少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％低減する、請求項３５～４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記投与が、前記対象における骨髄系列の頻度及び数を低減し、任意選択で、前記投与が、骨髄の頻度及び／または数を、ベースラインレベルに対し少なくとも５０％、少なくとも５５％または少なくとも６０％低減する、請求項３５～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記投与が、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を特異的に標的とする、請求項３５～４８のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記投与が、前記対象の骨髄単核細胞内のヒトＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞集団を、ベースラインレベルに対し少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、もしくは少なくとも６５％低減し、及び／または前記対象の骨髄単核細胞内のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞集団を、ベースラインレベルに対し少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも８５％低減する、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記投与後に、前記対象に造血細胞移植を実施することをさらに含む、請求項３５～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記造血細胞移植が、前記対象に、造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を移植することを含む、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記造血細胞移植の前記実施が、前記投与から５日～６週間後に行われる、請求項５１または５２に記載の方法。
  54. 前記造血細胞移植の前記実施が、前記投与から約２～３週間後に行われる、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記免疫細胞または前記免疫細胞の集団の治療有効量が、約５０，０００，０００～１０，０００，０００，０００細胞の用量である、請求項３５～５４のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記免疫細胞または前記免疫細胞の集団の治療有効量が、約１００，０００，０００～２，０００，０００，０００細胞の用量である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記投与が静脈内投与である、請求項３５～５６のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記静脈内投与が、前記対象への注入により行われる、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記投与が１回行われる、請求項３５～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記投与が３～７日ごとに２～３週間行われる、請求項３５～５８のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記方法が、前記投与ステップの前に、以下のステップ：
    （ｖ）前記対象から血液を採取すること、
    （ｖｉ）前記血液から免疫細胞を単離すること、
    （ｖｉｉ）請求項１０～２５のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸を、前記単離免疫細胞に導入すること、及び
    （ｖｉｉｉ）ステップ（ｉｉｉ）で得られた単離免疫細胞を拡大することを含み、前記拡大が、前記投与ステップ中に投与された前記免疫細胞または前記免疫細胞の集団をもたらす、請求項３５～６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項３５～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ４のアンタゴニストである、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記アンタゴニストがアンタゴニスト抗体である、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記対象がヒトである、請求項３５～６４のいずれか１項に記載の方法。
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