JP2024518200A - Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ｃｄ４４治療薬を含む組成物 - Google Patents

Abstract

Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬を含む医薬組成物、並びにがん細胞を死滅させるためのその使用が、本明細書に開示される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年５月１８日出願の米国特許仮出願第６３／１８９，７３７号の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

（発明の分野）
本開示は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬を利用した組成物及びがん治療に関する。

（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年２月２８日に作成され、名称はＪＢＩ６５５３ＷＯＰＣＴ１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔであり、サイズは２４，５７６バイトである。

いくつかの治療選択肢にもかかわらず、現在、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia、ＡＭＬ）及び多発性骨髄腫（multiple myeloma、ＭＭ）の治療法は存在しない。骨髄（bone marrow、ＢＭ）中の白血病芽球（ＡＭＬ）又は形質細胞（ＭＭ）の存在が５％以下であるとして定義される血液学的完全寛解（complete hematologic remission、ＣＲ）を高い率（５０％～８０％）で達成した後でさえ（１、２）、ＡＭＬ又はＭＭを有する患者の大部分が再発する（３～５）。再発は、少数のがん幹細胞（cancer stem cell、ＣＳＣ）、又は他の悪性前駆細胞が除去されず、療法後でさえ存続する、微小残存病変（minimal residual disease、ＭＲＤ）に関連付けられている（６）。再発を予防し、ＡＭＬ及びＭＭの治療法を見つけるためには、ＭＲＤを排除するためのより良好な戦略を見つける必要がある。

造血幹細胞（hematopoietic stem cell、ＨＳＣ）と同様に、ＡＭＬ及びＭＭにおけるＣＳＣがＢＭニッチに存在し、選択的に存続する（７、８）。ＢＭニッチは、可溶性成長因子の分泌及びＣＳＣを保護する細胞間相互作用を介して、特殊な微小環境を提供する（９）。更に、ＢＭニッチは、免疫抑制性であり、正常な造血及び免疫細胞生成を可能にするために、定常状態で免疫特権の部位であると理解される（１０）。ＢＭニッチのこれらの態様は、化学療法、標的小分子阻害剤、及び抗体ベースの療法を含むいくつかの抗がん薬に対する耐性をもたらし、その有効性を最小限に抑えた（１１～１４）。

Ｔ細胞が腫瘍細胞を特異的に溶解し、サイトカインを分泌してがんに対する免疫を動員及び支持する能力により、それらは治療法の魅力的な選択肢となる。とりわけ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（小さい二重特異性生物製剤）、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）、及び二重特異性抗体などのいくつかのアプローチが、この戦略を利用している（１５）。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー及び抗体媒介性リダイレクトは、腫瘍細胞上の特定のエピトープ及びＴ細胞上のＣＤ３を関与させることによって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に交差結合し、Ｔ細胞の活性化、及び最終的に腫瘍細胞を死滅させるパーフォリン及びグランザイムの分泌をもたらす。これらのＣＤ３リダイレクト療法は、急性リンパ芽球性リンパ腫（acute lymphoblastic lymphoma、ＡＬＬ）に対するＣＤ１９×ＣＤ３（ブリナツモマブ）の承認とともに、臨床における有効な抗がん戦略として確認されている（１６）。しかしながら、ＢＭニッチの免疫抑制及び保護の性質は、潜在的に、Ｔ細胞リダイレクト療法に大きなハードルをもたらす。

例えば、本明細書に示されるように、特異的腫瘍抗原（ＣＤ１２３）及びＣＤ３を標的とする二重特異性抗体を使用して、ＢＭ間質細胞とのＡＭＬ細胞株の共培養が、インビトロで、二重特異性Ｔ細胞媒介性溶解からがん細胞を有意に保護したことが観察された。低下したＣＤ３リダイレクト細胞傷害性は、低減したＴ細胞エフェクター応答と相関し、それによって二重特異性抗体の活性の喪失を説明するためのメカニズムを提供した。

Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬を含む医薬組成物であって、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、Ｔ細胞表面抗原に免疫特異的に結合する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に免疫特異的に結合する第２の結合領域と、を含む、医薬組成物が本明細書において提供される。

医薬組成物の一実施形態では、組成物は、医薬的に許容される担体を更に含む。

医薬組成物の更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、抗体又はその抗原結合断片である。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＴＡＡは、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位と、を有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である。一実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は、対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、対になって、第２の抗原結合部位を形成する。一実施形態では、ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位と、を有するＢＣＭ×ＣＤ３二重特異性抗体である。一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は、対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、対になって、第２の抗原結合部位を形成する。一実施形態では、ＨＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片である。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、ＣＤ４４アンタゴニストである。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、組成物は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含む。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４アンタゴニストである。

医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４アンタゴニストは、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択される。

がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の上記の医薬組成物をその対象に投与することを含む、方法が、本明細書で更に提供される。

本方法の一実施形態では、対象は、新たに診断されたがんを有する。

本方法の更なる実施形態では、対象は、再発しているか、又は以前の抗がん療法に対して不応性である。

本方法のなお更なる実施形態では、がんは、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である。

本方法のなお更なる実施形態では、対象は、ＡＭＬ又はＭＭを有する。

本方法のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬は、同時に又は連続的に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、同時に又は連続的に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、同時に又は連続的に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤の投与前に投与される。

本方法のなお更なる実施形態では、抗ＣＤ４４治療薬は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤の投与後に投与される。

上記に提供される医薬組成物を含むキットが、本明細書になお更に提供される。

前述の概要、並びに本出願の詳細な説明及び実施形態は、添付される特許請求の範囲及び図面と併せて読まれることで、よりよく理解されるであろう。ただし、本発明は、本明細書に開示される正確な記述に限定されるものでないことは理解されるべきである。
間質細胞（４×１０^４細胞／ウェル）の非存在下（四角）又は存在下（黒丸）において、ヒトＴ細胞（８×１０^４細胞／ウェル）をＣＦＳＥ標識ＫＧ－１又はＨＬ－６０（４×１０^４細胞／ウェル）と共培養した場合の細胞傷害性を示すグラフである。 間質細胞（４×１０^４細胞／ウェル）の非存在下（四角）又は存在下（黒丸）において、ヒトＴ細胞（８×１０^４細胞／ウェル）をＣＦＳＥ標識ＫＧ－１又はＨＬ－６０（４×１０^４細胞／ウェル）と共培養した場合のＴ細胞活性化率を示すグラフである。ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体を、１００ｎＭ（１５μｇ／ｍＬ）から開始して各後続用量の条件に対して１０倍に希釈して、用量応答で４８時間添加した（共培養の２４時間後）。死滅ＣＦＳＥ^＋標的細胞の割合を計算することによって細胞傷害性（図１Ａ）を評価し、これは、フローサイトメトリーによって定量化された。Ｔ細胞活性化（図１Ｂ）を生存ＣＤ４５^＋／ＣＤ３^＋／ＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合として評価した。用量滴定を３人の個々のＴ細胞ドナーからプロットし、４パラメータ非線形回帰曲線あてはめで分析した。３人の健常ドナー由来のＴ細胞を、示された細胞株を用いてＴ細胞リダイレクションアッセイにおいて試験した。平均±ＳＤをグラフ化した。平均±ＳＤは、２つの実験を代表するものであった。ＭＳＣ：間葉幹細胞。 ＢＭ間質細胞をＫＧ－１細胞と共培養したときの、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体によって媒介される分泌サイトカインの変化を示す棒グラフである。ＫＧ－１細胞との７２時間の共培養アッセイからの上清を、ＭＩＬＬＩＯＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰキットにおいて、ヒトサイトカインＩＬ－１β（ａ．）、ＩＬ－１ｒａ（ｂ．）、ＩＬ－２（ｃ．）、ＩＬ－３（ｄ．）、ＴＮＦ－α（ｅ．）、ＩＦＮ－γ（ｆ．）及びケモカインＧ－ＣＳＦ（ｇ．）及びＶＥＧＦ（ｈ．）について評価した。条件には、ＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞（「間質なし」）又はＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞＋ＢＭ間質細胞（「ＢＭ間質」）が含まれた。上清を各Ｔ細胞ドナーについて２連で２回の実験からプールし、平均±ＳＤとしてグラフ化した。 ＢＭ間質細胞をＨＬ－６０細胞と共培養したときの、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体によって媒介される分泌サイトカインの変化を示す棒グラフである。ＨＬ－６０細胞との７２時間の共培養アッセイからの上清を、ＭＩＬＬＩＯＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰキットにおいて、ヒトサイトカインＩＬ－１β（ａ．）、ＩＬ－１ｒａ（ｂ．）、ＩＬ－２（ｃ．）、ＩＬ－３（ｄ．）、ＴＮＦ－α（ｅ．）、ＩＦＮ－γ（ｆ．）並びにケモカインＧ－ＣＳＦ（ｇ．）及びＶＥＧＦ（ｈ．）について評価した。条件には、ＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞（「間質なし」）又はＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞＋ＢＭ間質細胞（「ＢＭ間質」）が含まれた。上清を各Ｔ細胞ドナーについて２連で２回の実験からプールし、平均±ＳＤとしてグラフ化した。 ＣＤ４４がＡＭＬ及びＨＳ－５間質細胞上で発現され、原発性ＡＭＬ患者試料上で有意に増加することを示すグラフである。ＡＭＬ細胞株及びＨＳ－５間質細胞を、細胞表面マーカーについてフローサイトメトリーによって評価して、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＶＬＡ－４、ＶＬＡ－５、ＣＸＣＲ４、ＦＬＴ３を確認した図であり、ＣＤ３抗原を陰性対照として使用した。上：未染色；中央：アイソタイプ；下：染色。 ＣＤ４４がＡＭＬ及びＨＳ－５間質細胞上で発現され、原発性ＡＭＬ患者試料上で有意に増加することを示すグラフである。公開データセット（ＧＳＥ１５０６１）のバイオインフォマティクス分析は、ＡＭＬ、ＭＤＳ、及び非白血病骨髄試料（正常）上での発現を示すグラフである。ｍＲＮＡ発現をｙ軸上にｌｏｇ_２スケールでプロットした（ＡＭＬ、ｎ＝２０２；ＭＤＳ、ｎ＝１６４、正常、ｎ＝６９）。テューキー多重比較検定（α＝０．０５）による一元配置分散分析を行って、群を比較した（^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。ｎｓ、有意差なし。図４Ａは、３回の実験反復を表現する。 ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体による死滅の間質媒介性抑制が、抗ＣＤ４４抗体によって回復したことを示すグラフである。ヒトＴ細胞（８０，０００細胞／ウェル）を、ＣＦＳＥ標識ＡＭＬ（ＫＧ－１、ＨＬ－６０、ＭＶ４－１１、ＭＯＬＭ－１３、ＳＫＮＯ－１）及びＨＳ－５間質細胞（４０，０００細胞／ウェル；黒色の線）を抗ＣＤ４４（２０μｇ／ｍＬ）と共培養した。２４時間後、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体を、１００ｎＭ（１５μｇ／ｍＬ）で開始し、更に４８時間の後続用量のために１０倍に希釈して、用量反応で添加した。死滅ＣＦＳＥ^＋標的細胞の割合を計算することによって細胞傷害性を評価した。Ｔ細胞活性化をＣＤ２５^＋及びＰＤ－１^＋Ｔ細胞の割合として評価し、これはフローサイトメトリーによって定量化された。３人の健常ドナー由来のＴ細胞を、示された細胞株を用いてＴ細胞リダイレクションアッセイにおいて試験した。平均±ＳＤをグラフ化した。平均±ＳＤは、少なくとも３回以上の実験を代表するグラフであった。ＮＳ＝間質なし。 ＣＤ４４、ＶＬＡ－４及びＣＸＣＲ－４がＫＧ－１細胞、Ｔ細胞及び間質細胞上で発現されることを示すグラフである。ＫＧ－１細胞、Ｔ細胞、初代骨髄（ＢＭ）間質細胞、及びＨＳ－５間質細胞を、細胞表面マーカーについてフローサイトメトリーによって評価して、ＣＤ４４、ＶＬＡ－４、及びＣＸＣＲ４発現を評価した。間質細胞株は、非常に高レベルのＣＤ４４を発現し、ＫＧ－１及びＴ細胞上では中程度に低レベルであった。ＶＬＡ－４は、試験した全ての細胞の間で均一なレベルで観察された。ＣＸＣＲ４は、ＫＧ－１細胞上でより低いレベルで発現され、Ｔ細胞及び間質細胞上でより高いレベルで発現された。示されたデータは、２回の実験反復を代表するものであった。上：アイソタイプ；下：染色。 ＫＧ－１細胞との共培養におけるＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体のＨＳ－５間質媒介性抑制が、抗ＣＤ４４抗体によって回復されたことを示すグラフである。７２時間の共培養アッセイからの上清を、ＭＩＬＬＩＯＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰキットにおいて、ヒトサイトカインＩＬ－２、ＩＬ－３、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γについて評価した。条件は、ＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞（間質なし）＋／－抗ＣＤ４４抗体、又はＫＧ－１細胞＋Ｔ細胞＋ＨＳ－５間質細胞＋／－抗ＣＤ４４抗体、又は細胞単独を含んだ。上清を各Ｔ細胞ドナーについて２連で２回の実験からプールし、平均±ＳＤとしてグラフ化した。 ＣＤ４４がＫＧ－１及びＨＳ－５ ＣＤ４４ ＫＯ細胞株において検出可能ではないことを示すグラフである。ＣＤ４４をＫＧ－１及びＨＳ－５間質細胞株からノックアウトし、限界希釈によって生成してクローン集団を作製した。細胞表面マーカーについてフローサイトメトリーによって細胞を評価して、ＣＤ４４のノックアウトと、他の細胞表面マーカー、ＣＤ１２３、ＶＬＡ－４、ＶＬＡ－５、ＣＸＣＲ４、及びＦＬＴ３が変化しなかったこととを確認した。ＣＤ３抗原を陰性対照として用いた。データは、３回の実験を代表するものであった。上：未染色；中央：アイソタイプ；下：染色。 ＫＧ－１及びＨＳ－５細胞におけるＣＤ４４の遮断が、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体により細胞傷害性及びＴ細胞活性化の間質媒介性抑制を回復させたことを示すグラフである。抗ＣＤ４４抗体（２０μｇ／ｍＬ）を有するＨＳ－５^ｗｔ又はＨＳ－５^{ＣＤ４４ＫＯ}間質細胞（４×１０^４細胞／ウェル）の非存在下又は存在下で、ヒトＴ細胞（８×１０^４細胞／ウェル）をＣＦＳＥ標識ＡＭＬ（ＫＧ－１^ｗｔ又はＫＧ－１^{ＣＤ４４ＫＯ}）と共培養した。２４時間後、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体を０．００１ｎＭ（０．０４５μｇ／ｍＬ）で更に２４時間添加した。死滅ＣＦＳＥ^＋標的細胞の割合を計算することによって、細胞傷害性を評価した。Ｔ細胞活性化をＣＤ２５^＋Ｔ細胞の割合として評価し、これはフローサイトメトリーによって定量化された。平均±ＳＤをグラフ化した。平均±ＳＤは、２回の実験を代表するグラフであった。ＨＳ－５細胞と共に培養されたＫＧ－１細胞は、実験において観察された最大抑制を示す。３人の健常ドナー由来のＴ細胞を、示された細胞株を用いてＴ細胞リダイレクションアッセイにおいて試験した。平均±ＳＤをグラフ化した。平均±ＳＤは、２回の実験を代表するグラフであった。 ＣＤ４４の遮断がグランザイム－Ｂレベルを高め、ＰＤ－１発現を増加させたことを示すグラフである。ヒトＴ細胞（８×１０^４細胞／ウェル）は、抗ＣＤ４４（２０μｇ／ｍＬ）を有するＣＦＳＥ標識ＡＭＬ（ＫＧ－１^ｗｔ又はＫＧ－１^{ＣＤ４４ＫＯ}）及びＨＳ－５^ｗｔ又はＨＳ－５^{ＣＤ４４ＫＯ}間質細胞（４×１０^４細胞／ウェル）と共培養した。２４時間後、ＣＤ１２３ｘＣＤ３を０．００１ｎＭ（０．０４５μｇ／ｍＬ）で更に２４時間添加した。Ｔ細胞におけるグランザイム－Ｂレベル並びにＴ細胞初期活性化を、ＰＤ－１^＋Ｔ細胞の割合として評価し、これはフローサイトメトリーによって定量化された。３人の健常ドナー由来のＴ細胞を、示された細胞株を用いてＴ細胞リダイレクションアッセイにおいて試験した。平均±ＳＤをグラフ化した。平均±ＳＤは、少なくとも２回以上の実験を代表するグラフであった。

「背景技術」において、また、本明細書全体を通して各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。

特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。

別途記載されない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用される場合、数値範囲の使用は、文脈上別途明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。

別途記載のない限り、一連の要素に先行する用語「少なくとも」は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識するか、又は確認することができよう。かかる均等物は、本発明によって包含されることが意図される。

本明細書で使用するとき、用語「備える（comprises）、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」、又はこれらの任意の他の変形は、述べられている整数又は整数群を含むことが意図されるが、これら以外の他の整数又は整数群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はかかる組成物、混合物、プロセス、方法、物品、若しくは装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって満たされる。

本明細書に使用される場合、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書に使用される場合、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。

本明細書で使用するとき、用語「からなる（consists of）」、又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用されるとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含するが、追加の整数又は整数群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されないことを示す。

本明細書で使用されるとき、用語「から本質的になる（consists essentially of）」、又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用されるとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照されたい。

本明細書で使用するとき、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用される場合、用語「哺乳動物」は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。

「右」、「左」、「下方」、及び「上方」という語は、参照される図面内での方向を指定する。

好ましい本発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定又は他の系統的誤差、製造公差など）を使用すると、最小有効数字は変化しない変形形態を含むであろう。

本明細書で使用するとき、「単離（された）」という用語は、生物学的構成成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの構成成分が天然に生じる生物の他の生物学的構成成分（すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質）から実質的に分離されたか、これらの他の成分とは別に生成されたか、又はこれらの他の成分から精製されたものであることを意味する。このため、「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、その組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離される。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。

本明細書で使用するとき、用語「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってもよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってもよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ又は２つ以上の修飾された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと称される）も包含する。

本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのことである。

本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれのタイプの細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本発明の核酸分子をトランスフェクト又は形質導入した細胞である。別の一実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクト又は形質導入された細胞の子孫又は潜在的な子孫である。ある細胞の子孫は、例えば、後続の世代で生じ得る変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞との同一性を有していない場合がある。

本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。この用語はまた、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳も包含し、全ての天然に生じる、転写後及び翻訳後修飾も更に包含する。

本明細書で使用するとき、「抗体」という用語は、広義の意味を有し、モノクローナル抗体（マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含む）、抗原結合断片、二重特異性、三重特異性、四重特異性などの多重特異性抗体、二量体、四量体、又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された形態を含む免疫グロブリン分子を含む。「完全長抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された、２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えばＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（light chain constant region、ＣＬ）で構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼称される超可変領域に更に細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。どのような脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てることができる。

本明細書で使用するとき、「モノクローナル抗体」という用語は、抗体分子の実質的に均質な集団（すなわち、集団を含む個々の抗体が、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去、あるいはアミノ酸異性化若しくはアミド分解、メチオニン酸化、又はアスパラギン若しくはグルタミンアミド分解などの翻訳後修飾などの、可能な周知の変化を除いて同一である）から入手される抗体を指す。モノクローナル抗体は、典型的には、１つの抗原性エピトープに結合する。二重特異性モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内で不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性であってもよく、又は、二重特異性などの多重特異性であってもよく、一価、二価、又は多価であってもよい。

本明細書で使用するとき、「ヒト抗体」という用語は、ヒト対象に投与されたときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を指す。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、その定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットである。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ ＭｏｌＢｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。

本明細書で使用するとき、「ヒト化抗体」という用語は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。

「単離抗体」という用語は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない抗体を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された抗体を包含する。

本明細書で使用するとき、「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子の一部分を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素により入手可能なポリペプチド、又は遺伝子組換えされたポリペプチドであってよく、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの、抗体のＣＤＲを再現するアミノ酸残基からなる最小認識単位、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３が挙げられる。ＶＨ及びＶＬドメインは互いに、合成リンカーを介して結合し、様々なタイプの一本鎖抗体設計を形成することができ、ＶＨ及びＶＬドメインが、別個の一本鎖抗体構築物により発現される場合では、ＶＨ／ＶＬドメインが分子内、又は分子間で対形成し、一価の抗原結合部位、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができ、これらは、例えば国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、及び同第１９９２／０１０４７号に記載されている。

「二重特異性」という用語は、２つの異なる抗原、又は同じ抗原内の２つの異なるエピトープに特異的に結合する抗体を指す。二重特異性抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えば、Ｍａｃａｃａ ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（例えば、カニクイザル（cynomolgus、ｃｙｎｏ））若しくはＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓなどの他の種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有し得るか、あるいは２つ又は３つ以上の異なる抗原間で共有されているエピトープに結合し得る。

本明細書で使用するとき、「多重特異性」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原、又は同じ抗原内の少なくとも２つの異なるエピトープに特異的に結合する抗体を指す。多重特異性抗体は、例えば、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの異なる抗原、又は同じ抗原内の異なるエピトープに結合し得る。

抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的結合」若しくは「免疫特異的結合」、又はそれらの派生語は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされるドメインを介して、分子の混合集団を含有するサンプル中の他の分子に優先的に結合することなく、目的のタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイによって測定された場合、約１×１０^－８Ｍ未満のＫ_ｄで、同種抗原に結合する。

「がん」という用語は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞分裂及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「がん」又は「がん組織」は、腫瘍を含み得る。

本明細書で使用するとき、「組み合わせ」という用語は、２つ又は３つ以上の治療薬が、混合物中で一緒に、単独の薬剤として同時に、又は単独の薬剤として任意の順番で連続的に対象に投与されることを意味する。

本明細書で使用するとき、「向上させる」又は「向上した」という用語は、対照分子と比較したときの試験分子、又は１つ若しくは２つ以上の対照分子と比較したときの試験分子の組み合わせの１つ又は２つ以上の機能の向上を指す。測定され得る例示的な機能は、腫瘍細胞死滅、Ｔ細胞活性化、相対的若しくは絶対的Ｔ細胞数、Ｆｃ媒介性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／若しくはＡＤＣＰ）、又はＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）若しくはＦｃＲｎへの結合である。「向上した」とは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、若しくはそれ以上の向上、又は統計的に有意な向上であることができる。

本明細書で使用するとき、「変異」という用語は、参照配列と比較したときのポリペプチド又はポリヌクレオチド配列における操作された変化又は自然発生的変化を指す。変更は、１つ又は２つ以上のアミノ酸又はポリヌクレオチドの置換、挿入、又は欠失であってもよい。

本明細書で使用するとき、「非固定組み合わせ」という用語は、異なる実体として、特定の中断時間の制限なしに同時、併行的、又は連続的のいずれかで投与されるＴ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤の別々の医薬組成物を指し、ここで、そのような投与は、対象の体内で２つの化合物の有効なレベルを提供する。

本明細書で使用するとき、「医薬組成物」という用語は、有効成分及び医薬的に許容される担体を含む組成物を指す。

「医薬的に許容される担体」又は「賦形剤」という用語は、対象に対して毒性のない、活性成分以外の医薬組成物中の成分を指す。

本明細書で使用するとき、「組換え」という用語は、異なる供給源由来のセグメントが結合されて組換えＤＮＡ、抗体、又はタンパク質を産生するときに、組換え手段によって調製、発現、作製、又は単離されるＤＮＡ、抗体、及び他のタンパク質を指す。

本明細書で使用するとき、「低減する」又は「低減された」という用語は、対照分子と比較したときの試験分子、又は１つ若しくは２つ以上の対照分子と比較したときの試験分子の組み合わせの１つ又は２つ以上の機能の低減を指す。測定され得る例示的な機能は、腫瘍細胞死滅、Ｔ細胞活性化、相対的若しくは絶対的Ｔ細胞数、Ｆｃ媒介性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／若しくはＡＤＣＰ）、又はＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）若しくはＦｃＲｎへの結合である。「低減した」は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、若しくはそれ以上の低減、又は統計的に有意な向上であり得る。

本明細書で使用するとき、「難治性」という用語は、外科的介入に対して修正可能ではなく、初期には療法に対して応答しないがんを指す。

本明細書で使用するとき、「再発性」という用語は、治療に応答したが、その後再発するがんを指す。

本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物などの全ての脊椎動物を含む。記載されている場合を除き、「患者」及び「対象」という用語は、互換的に使用される。

本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、所望の治療結果を得るための、必要な用量及び期間での有効量を指す。治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を誘発する治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって変動し得る。有効な治療薬又は治療薬の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の改善された健康が挙げられる。

本明細書で使用するとき、「治療する」、又は「治療」という用語は、治療的処置、及び予防的（prophylactic）若しくは予防的（preventative）手段の両方を意味し、目的は、望ましくない生理学的変化又は障害を予防する、又は減速する（減少させる）ことである。有益な又は所望の臨床結果としては、検出可能又は検出不可能にかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的又は全体的にかかわらず）が挙げられる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。治療を必要とする者には、既に病態若しくは疾患を有している者、及び、病態若しくは疾患を有しやすい者、又は病態若しくは疾患を予防しようとする者が含まれる。

本明細書で使用するとき、「腫瘍細胞」又は「がん細胞」という用語は、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する、インビボ、エクスビボ、又は組織培養のいずれかにおけるがん性、前がん性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発がん物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／がんは、ヌードマウスなどの好適な動物宿主、インビトロ、インビボ、及びエクスビボにおける形態学的変化、細胞の不死化、異常な成長制御、病巣の形成、増殖、悪性腫瘍、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、腫瘍成長によって例示される。

Ｔ細胞リダイレクト治療薬
本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬（本出願全体を通して、「Ｔ細胞リダイレクト二重特異性抗体」又は「二重特異性抗体」とも称される）は、２つ又は３つ以上の結合領域を含有する分子であり、結合領域のうちの１つは、標的細胞又は組織上の細胞表面抗原（腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）など）に特異的に結合し、分子の第２の結合領域は、Ｔ細胞表面抗原（ＣＤ３など）に特異的に結合する。この二重／多重標的結合能力は、Ｔ細胞を標的細胞又は組織に動員して、標的細胞又は組織の根絶をもたらす。

本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、抗体、抗体由来タンパク質、又は例えば、抗原結合部位を示す組換えタンパク質であってもよい。一実施形態では、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、二重特異性抗体であり、「全」抗体、例えば、全ＩｇＧ又はＩｇＧ様分子、及び小さい組換え形式、例えば、タンデム一本鎖可変断片分子（tandem single chain variable fragment molecule、ｔａＦｖ）、ダイアボディ（diabody、Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（single chain diabody、ｓｃＤｂ）、並びにこれらの様々な他の誘導体を包含する（様々な二重特異性抗体形式を示す図２を含むＢｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２によって記載されるような二重特異性抗体形式；Ｗｅｉｄｌｅ Ｕ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０：１－１８、特に、様々な二重特異性抗体形式を示す図１；及び様々な二重特異性抗体形式を示す図３を含むＣｈａｎ，Ａ．Ｃ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．（２０１０）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕ １０：３０１－３１６を参照されたい）。二重特異性抗体形式の例としては、クアドローマ、化学的に結合されたＦａｂ（断片抗原結合）、及びＢｉＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）が挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、トリオマブ、ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマ）、多重特異性アンチカリンプラットフォーム（Ｐｉｅｒｉｓ）、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、タンデム一本鎖Ｆｖ断片、ＴａｎｄＡｂ、三重特異性Ａｂ（Ａｆｆｉｍｅｄ）（１０５～１１０ｋＤａ）、Ｄａｒｔ（ｄｕａｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ、二重親和性再標的化、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）、二重特異性Ｘｍａｂ（Ｘｅｎｃｏｒ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（Ｂｉｔｅ、Ａｍｇｅｎ、５５ｋＤａ）、トリプルボディ、トライボディ＝Ｆａｂ－ｓｃＦｖ融合タンパク質（ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏｌａｂｓ）多官能性組換え抗体誘導体（１１０ｋＤａ）、デュオボディプラットフォーム（Ｇｅｎｍａｂ）、ドックアンドロックプラットフォーム、ノブイントゥーホール（Ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅ、ＫＩＨ）プラットフォーム、ヒト化二重特異性ＩｇＧ抗体（ＲＥＧＮ１９７９）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、Ｍａｂ２二重特異性抗体（Ｆ－Ｓｔａｒ）、ＤＶＤ－Ｉｇ＝二重可変ドメイン免疫グロブリン（Ａｂｂｖｉｅ）、カッパ－ラムダボディ、四価二重特異性タンデムＩｇ、及びＣｒｏｓｓＭａｂを含む群から選択され得る。

更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホール集合、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、トリオマブ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、及び直交Ｆａｂを含む、二重特異性ＩｇＧ様抗体（ＢｓＩｇＧ）から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦＶ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、及びＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）を含む追加の抗原結合部分を有する、ＩｇＧ付加抗体から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ナノボディ、ナノボディ－ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃ－ダイアボディ－ＣＨ３、ダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びイントラボディを含む、二重特異性抗体断片から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ドックアンドロック、ＩｍｍＴＡＣ、ＨＳＡｂｏｄｙ、ｓｃダイアボディ－ＨＡＳ、及びタンデムｓｃＦｖ－Ｔｏｘｉｎを含む、二重特異性融合タンパク質から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＩｇＧ－ＩｇＧ、Ｃｏｖ－Ｘボディ、及びｓｃＦｖ１－ＰＥＧ－ｓｃＦｖ２を含む、二重特異性抗体コンジュゲートから選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、任意の免疫グロブリンクラス（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）及びサブクラス（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４など）に基づき得る。態様では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、通常、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含むＩｇＧ様形式（ＩｇＧに基づき、（「ＩｇＧタイプ」とも称される）を有し得る。ＩｇＧ様形式を有する抗体の例としては、クアドローマ及び様々なＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式を含み（Ｂｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２；図２Ａ～図２Ｅ）、２つの異なるハイブリドーマの融合によって生成されるクアドローマが好ましい。ＩｇＧクラス内で、二重特異性抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラスに基づき得る。

なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＩｇＧ様抗体形式であり、これは、例えば、ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマ）、共通軽鎖を含むノブイントゥーホール、様々なＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式、様々なｓｃＦｖ－ＩｇＧ形式、ツーインワンＩｇＧ、二重ＶドメインＩｇＧ、ＩｇＧ－Ｖ、及びＶ－ＩｇＧを含み、これらは、例えば、Ｃｈａｎ，Ａ．Ｃ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．（２０１０）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕ １０：３０１－３１６の図３ｃに示され、当該論文に記載される。更なる例示的な二重特異性ＩｇＧ様抗体形式としては、例えば、ＤＡＦ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＩｇＧ－ｄｓｓｃＦｖ、ＤＶＤ、ＩｇＧ－ｄｓＦＶ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、及びＦｖ２－Ｆｃが挙げられ、これらは、Ｗｅｉｄｌｅ Ｕ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０：１－１８の図１Ａに示され、当該論文に記載される。なお更なる例示的な二重特異性ＩｇＧ様抗体形式としては、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール集合、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、トリオマブ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦＶ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、及びＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び説明されるような）が挙げられる。

例えば、二重特異性抗体は、３つの異なる方法：（ｉ）化学的架橋を伴う化学的コンジュゲーション、（ｉｉ）２つの異なるハイブリドーマ細胞株の融合、又は（ｉｉｉ）組換えＤＮＡ技術を伴う遺伝的アプローチによって産生され得る。２つの異なるハイブリドーマの融合は、二重特異性分子を含む不均一な抗体集団を分泌するハイブリッド－ハイブリドーマ（又は「クアドローマ」）を産生する。代替的なアプローチは、２つの異なるｍＡｂ及び／又はより小さい抗体断片の化学的コンジュゲーションを含んだ。２つの異なる抗体又は抗体断片を連結するための酸化再会合戦略は、複数の天然ジスルフィド結合の再酸化中の副反応の存在に起因して非効率的であることがわかった。化学的コンジュゲーションのための現在の方法は、ホモ又はヘテロ二官能性架橋試薬の使用に焦点を当てている。組換えＤＮＡ技術は、遺伝子の人工操作を通して二重特異性抗体の最大範囲をもたらし、二重特異性抗体生成のための最も多様なアプローチを表す（過去２０年で４５個の形式、Ｂｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２を参照されたい）。

特に、そのような組換えＤＮＡ技術を使用することによって、更なる多重特異性抗体も近年出現している。「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上のパラトープ、及び２つ又は３つ以上の異なるエピトープに結合する能力を有するタンパク質を指す。したがって、「多重特異性抗体」という用語は、上記で定義されたような二重特異性抗体を含むが、典型的には、特に３つ又は４つ以上の異なるエピトープに結合するタンパク質、例えば、抗体、足場、すなわち、３つ又は４つ以上のパラトープを有する抗体も含む。特に３つ又は４つ以上のパラトープを有する、そのような多重特異性タンパク質は、典型的には、組換えＤＮＡ技術によって達成される。本発明の文脈において、抗体はまた、特に３つ以上の特異性、したがって、３つ以上のパラトープも有し得、これは、少なくとも２つのパラトープ、例えば、標的細胞に対して１つ、及びＴ細胞に対してもう１つが、本発明に従って必要とされるためである。したがって、本発明に従って使用される抗体は、２つのパラトープに加えて、特に更なる特異性に関連して更なるパラトープを有し得る。したがって、本発明はまた、多重特異性抗体を含む。したがって、本発明は、二重特異性抗体に限定されないが、本明細書では特に、最小要件を表す二重特異性抗体に言及されることが理解される。したがって、二重特異性抗体について本明細書で述べられることは、多重特異性抗体にも適用され得る。

上記で定義された二重特異性抗体及び多重特異性抗体は、疾患プロセスにおいて重要な役割を果たす標的細胞に対してエフェクター細胞をリダイレクトすることができる。特に、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト特異性抗体は、例えば、Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）複合体に結合し、例えば腫瘍細胞などの標的細胞にＴ細胞を「リダイレクトする」ことができる。この目的で、本明細書で使用されるそのような二重特異性抗体は、典型的には、少なくとも１つの特異性、例えば、Ｔ細胞、好ましくはＴ細胞表面抗原、例えば、ＣＤ３に特異的である、Ｔ細胞を動員するための少なくとも１つのパラトープ、及び少なくとも１つの他の特異性、例えば、腫瘍細胞、好ましくは腫瘍細胞上のＴＡＡに特異的である、Ｔ細胞を腫瘍細胞に方向付けるための少なくとも１つのパラトープを有する。Ｔ細胞リダイレクト二重特異性抗体による腫瘍細胞へのＴ細胞のそのような「リダイレクト」は、典型的には、腫瘍細胞のＴ細胞媒介性細胞死滅をもたらす。

一実施形態では、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、Ｔ細胞表面抗原に対する特異性を有する第１の結合領域と、腫瘍細胞上のＴＡＡに対する特異性を有する第２の結合領域と、を含む。

更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃから選択され得る。又は、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である。

なお更なる実施形態では、ＴＡＡは、Ｂ細胞成熟抗原（B-cell maturation antigen、ＢＣＭＡ）、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ１０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＲＯＲ１、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ３、ＨＭ１．２４、ＳＬＡＭＦ７、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３、ＣＤ１３５）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（chondroitin sulfate proteoglycan 4、ＣＳＰＧ４、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、上皮成長因子受容体（epidermal growth factor receptor、ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、ＩＧＦＲ、ＩＬ３Ｒ、線維芽細胞活性化タンパク質（fibroblast activating protein、ＦＡＰ）、ＣＤＣＰ１、Ｄｅｒｌｉｎ１、テネイシン、ｆｒｉｚｚｌｅｄ １－１０、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ／ＦＬＫ１）、ＶＥＧＦＲ３（ＦＬＴ４、ＣＤ３０９）、ＰＤＧＦＲ－アルファ（ＣＤ１４０ａ）、ＰＤＧＦＲ－ベータ（ＣＤ１４０ｂ）、エンドグリン、ＣＬＥＣ１４、Ｔｅｍ１－８、又はＴｉｅ２から選択され得る。腫瘍細胞上の更なる例示的なＴＡＡとしては、Ａ３３、ＣＡＭＰＡＴＨ－１（ＣＤｗ５２）、がん胎児性抗原（Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ、ＣＥＡ）、カルボアンヒドラーゼＩＸ（ＭＮ／ＣＡ ＩＸ）、ｄｅ２－７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ、Ｅｐ－ＣＡＭ、葉酸結合タンパク質、Ｇ２５０、ｃ－Ｋｉｔ（ＣＤ１１７）、ＣＳＦ１Ｒ（ＣＤ１１５）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＩＧＦＲ、ＩＬ－２受容体、ＩＬ３Ｒ、ＭＣＳＰ（melanoma-associated cell surface chondroitin sulphate proteoglycane、黒色腫関連細胞表面コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、Ｍｕｃ－１、前立腺幹細胞抗原（prostate stem cell antigen、ＰＳＣＡ）、前立腺特異的抗原（prostate specific antigen、ＰＳＡ）、ｈＫ２、ＴＡＧ－７２、又は腫瘍細胞新生抗原が挙げられる。又は、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７から選択され得る。又は、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ若しくはＣＤ１２３から選択され得る。又は、ＴＡＡは、ＣＤ１２３であり得る。

一実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３^＋ ＡＭＬ細胞及びＣＤ３ Ｔ細胞に免疫特異的に結合する、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である。ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＵＳ９，８５０，３１０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるもののような二重特異性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）抗体であってもよい。一実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は、対になって、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。

配列番号１
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＤＰＳＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＤＧＳＴＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

配列番号２
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＤＹＧＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号３
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＹＮＡＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

配列番号４
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ

一実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＢＣＭＡ^＋ ＭＭ細胞及びＣＤ３ Ｔ細胞に免疫特異的に結合する、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＷＯ２００７／１１７６００、ＷＯ２００９／１３２０５８、ＷＯ２０１２／０６６０５８、ＷＯ２０１２／１４３４９８、ＷＯ２０１３／０７２４０６、ＷＯ２０１３／０７２４１５、ＷＯ２０１４／１２２１４４、及びＵＳ１０，０７２，０８８（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものから選択され得る。

一実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、配列番号５のアミノ酸配列を有する第１の重鎖（ＨＣ１）、配列番号６のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖（ＬＣ１）、配列番号７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖（ＨＣ２）、及び配列番号８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖（ＬＣ２）を含むＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体であり、ＨＣ１及びＬＣ１は、対になって、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。

配列番号５
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

配列番号６
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＧＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ

配列番号７
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ

配列番号８
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ

抗ＣＤ４４治療薬
ＣＤ４４抗原は、細胞間相互作用、細胞接着及び移動に関与する細胞表面糖タンパク質である。ヒトでは、ＣＤ４４抗原は、第１１染色体上のＣＤ４４遺伝子によってコードされる。ＣＤ４４は、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び白血病幹細胞（ＬＳＣ）の接着特性に寄与することが示されている（例えば、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，「ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｒｏｍａｌ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ」，Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ ５１，Ｎｏ．４，Ｄｅｃ ２０１６及びＰｌｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ ａｎｄ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ Ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ－Ｍａｓｔｅｒｓ ｏｆ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ Ｃｌｏｎａｌｉｔｙ」，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１６，１７，１００９を参照されたい）。ＡＭＬでは、ＣＤ４４は、ＡＭＬ芽球及びＬＳＣ上で上方制御され、様々な経路を介して生存シグナルとして機能する（例えば、Ｇｕｌ－Ｕｌｕｄａｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＣＤ４４ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ＣＤ３４＋ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ」，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；３８（１１）：１２９９－１３０８；Ｇａｒｇ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＭＬ ｂｌａｓｔ」，Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１６；１０３（５）：５６７－５７１；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａｎｔｉ－ＣＤ４４ ｔｈｅｒａｐｙ ｐａｒｔｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ－ｐ２７（Ｋｉｐ１）ａｘｉｓ」，Ｍｏｌ Ｃａｒｃｉｎｏｇ．２０１５；５４（１２）：１６７８－１６８５；及びＧａｄｈｏｕｍ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉ－ＣＤ４４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｂｏｔｈ ｍＴＯＲＣ１ ａｎｄ ｍＴＯＲＣ２：ａ ｎｅｗ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ＣＤ４４－ｉｎｄｕｃｅｄ ＡＭＬ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ」，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１６；３０（１２）：２３９７－２４０１を参照されたい）。以下の実施例の節において提供されるように、ＣＤ４４タンパク質は、種々のＡＭＬ細胞株において一貫して発現される（図４Ａ）。初代ＡＭＬ細胞（ｎ＝２０２）におけるＣＤ４４ ｍＲＮＡ発現もまた評価し、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ；ｎ＝１６４）及び正常対照（ｎ＝６９；図４Ｂ）と比較して有意な上方制御が観察された。これは、ＭＤＳ疾患からＡＭＬ疾患への疾患進行においてＣＤ４４発現が重要であり得るという考えと一致する。

任意の好適な抗ＣＤ４４治療薬が本明細書中で使用され得、これには、開示される抗ＣＤ４４抗体又はそれに由来するＣＤ４４結合断片、ＣＤ４４アンタゴニストなどが挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態では、本明細書で使用される抗ＣＤ４４治療薬は、抗ＣＤ４４抗体又はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片などの抗ＣＤ４４抗体に由来するＣＤ４４結合断片；重鎖単量体又は二量体；軽鎖単量体又は二量体であってもよく、１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体も、本明細書で企図される。そのような抗体断片は、化学的方法によって、例えば、ペプシン若しくはパパインなどのプロテアーゼでインタクトな抗体を切断することによって、又は組換えＤＮＡ技術を介して、例えば、切断された重鎖及び／若しくは軽鎖遺伝子で形質転換された宿主細胞を使用することによって産生され得る。重鎖及び軽鎖単量体は、同様に、インタクトな抗体をジチオトレイトール若しくはβ－メルカプトエタノールなどの還元剤で処理することによって、あるいは所望の重鎖若しくは軽鎖のいずれか若しくは両方をコードするＤＮＡで形質転換された宿主細胞、又はモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を使用することによって産生され得る。

ＣＤ４４機能性を遮断することができる任意の好適な抗ＣＤ４４抗体又はＣＤ４４結合断片が本明細書で使用され得、これには、ＲＧ７３５６、抗ＣＤ４４ ａｂクローンＡ３Ｄ８、抗ＣＤ４４ ａｂクローンＨ９０、抗ＣＤ４４ ａｂクローン５１５が挙げられるが、これらに限定されない。好適な抗ＣＤ４４抗体はまた、米国特許第７３６１３４７号、米国特許出願公開第２０１４０３０８３０１号、同第２００７０２３７７６１号、同第２００９０００４１０３号、同第２０１０００９２４８４号、及び同第２００５０２１４２８３号に開示されるものから選択されてもよい。

ＶＬＡ－４接着経路阻害剤
α４β１と呼ばれることも知られている最晩期抗原－４（Very late antigen-4、ＶＬＡ－４）は、細胞表面受容体のβ１インテグリンファミリーのメンバーである。ＶＬＡ－４は、α４鎖及びβ１鎖を含有し、細胞間相互作用に関与する。その発現は、主にリンパ球及び骨髄細胞に制限される。それは、細胞接着において重要な役割を果たす。研究はまた、ＶＬＡ－４がＢＭ中のＡＭＬ／ＭＭ－間質相互作用を媒介する際に重要な役割を果たすことを示している。血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１）（骨芽細胞及び内皮細胞によって発現）並びにフィブロネクチン（細胞外マトリックスの構成成分）は、ＶＬＡ－４の２つのリガンドである。

本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができる任意の分子であってもよい。

例えば、本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、抗ＶＬＡ－４抗体又はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片などの抗ＶＬＡ－４抗体に由来するＶＬＡ－４結合断片；重鎖単量体又は二量体；軽鎖単量体又は二量体であってもよく、１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体も、本明細書で企図される。そのような抗体断片は、化学的方法によって、例えば、ペプシン若しくはパパインなどのプロテアーゼでインタクトな抗体を切断することによって、又は組換えＤＮＡ技術を介して、例えば、切断された重鎖及び／若しくは軽鎖遺伝子で形質転換された宿主細胞を使用することによって産生され得る。重鎖及び軽鎖単量体は、同様に、インタクトな抗体をジチオトレイトール若しくはβ－メルカプトエタノールなどの還元剤で処理することによって、あるいは所望の重鎖若しくは軽鎖のいずれか若しくは両方をコードするＤＮＡで形質転換された宿主細胞、又はモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を使用することによって産生され得る。

ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができる任意の好適な抗ＶＬＡ－４抗体又はＶＬＡ－４結合断片が、本明細書で使用され得、これには、ナタリズマブ、並びに米国特許第６，６０２，５０３号及び米国特許出願公開第２０１４／０１６１７９４（Ａ１）号（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものが含まれるが、これらに限定されない。

特定の実施形態では、本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができるＶＬＡ－４アンタゴニストであってもよい。本明細書で使用される例示的なＶＬＡ－４アンタゴニストとしては、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製のＶＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＶＣＡＭ－１及びフィブロネクチンが、ＶＬＡ－４のリガンドであるため、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＣＡＭ－１又はフィブロネクチンのアンタゴニスト（抗体を含む）も含み得る。

医薬組成物
上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が、本明細書に更に開示される。本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、宿主細胞、及び／又は遺伝子操作された免疫細胞と、それらを含む組成物はまた、本明細書で言及される治療用途のための薬剤の製造において有用である。特定の実施形態では、医薬組成物は、上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、医薬的に許容される担体と、を含む別個の組成物である。他の実施形態では、医薬組成物は、上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、医薬的に許容される担体と、を含む別個の組成物ではない。

一実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、上記に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含み得る。一態様では、医薬組成物は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬と、抗ＣＤ４４治療薬と、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、を含む別個の組成物である。別の態様では、医薬組成物は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬を含む第１の組成物と、抗ＣＤ４４治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む第２の組成物と、を含む別個の組成物である。なお別の態様では、医薬組成物は、別個の組成物ではなく、医薬組成物は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬と、抗ＣＤ４４治療薬と、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、医薬的に許容される担体と、を含む。

本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知である他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書に使用される場合、「医薬的に許容される担体」という用語は、本発明による組成物の有効性にも本発明による組成物の生物学的活性にも干渉しない非毒性性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮すると、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、宿主細胞、及び／又は遺伝子操作された免疫細胞の医薬組成物における使用に好適な、任意の医薬的に許容される担体を、本発明で使用できる。

医薬的に許容される担体を有する医薬的活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）及びそれ以降の任意の改訂版）にあるように、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ以上の医薬的に許容される担体が、本発明の医薬組成物を配合する際に使用され得る。

本開示の一実施形態では、医薬組成物は、液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含んでいてもよい。

一実施形態では、医薬組成物は、例えば注射デバイス（例えば、注射器又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射剤として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、又は静脈内に送達され得る。

別の一実施形態では、医薬組成物は、固体製剤、例えば、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／若しくは希釈剤を加える、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。

使用方法
別の一般的な態様では、本発明は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬、抗ＣＤ４４治療薬を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法に関する。一実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含み得る。

別の一般的な態様では、本発明は、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬を含む組成物に供することを含む、方法に関する。一実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含み得る。

対象は、新たに診断されたがんを有し得るか、又は以前の抗がん療法に対して再発性若しくは難治性である。がんは、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍であり得る。

本発明の実施形態によると、医薬組成物は、治療有効量の本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬、抗ＣＤ４４治療薬、及び任意選択的なＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む。本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。

Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬に関して本明細書で使用するとき、治療有効量とは、免疫応答の調節を必要とする対象においてそれを行う、抗ＣＤ４４治療薬と組み合わせたＴ細胞リダイレクト治療薬の量を意味する。また、Ｔ細胞リダイレクト治療薬に関して本明細書で使用するとき、治療有効量とは、疾患、障害、若しくは状態の治療をもたらすか、疾患、障害、若しくは状態の進行を予防する若しくは遅延させるか、又は疾患、障害、若しくは状態に関連する症状を低減する若しくは完全に緩和する、抗ＣＤ４４治療薬を伴うＴ細胞リダイレクト治療薬の量を意味する。

治療有効量又は用量は、治療される疾患、障害又は状態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び、治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な因子によって異なり得る。治療投薬量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。

特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に好適であるように製剤化することができる。

本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療すること（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、がんに関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「治療する」、「治療すること」、及び「治療」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、腫瘍若しくはより好ましくはがんなどの疾患、障害、若しくは病態と関連する１つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。

特定の実施形態によると、がんの治療で使用される医薬組成物が提供される。がん療法のために、提供される医薬組成物は、化学療法、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＴＩＭ－３ｍＡｂ、抗ＬＡＧ－３ｍＡｂ、抗ＥＧＦＲｍＡｂ、抗ＨＥＲ－２ｍＡｂ、抗ＣＤ１９ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ｍＡｂ、抗ＣＤ４７ｍＡｂ、抗ＣＤ７３ｍＡｂ、抗ＤＬＬ－３ｍＡｂ、抗アペリンｍＡｂ、抗ＴＩＰ－１ｍＡｂ、抗ＦＯＬＲ１ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ－４ｍＡｂ、抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂ、抗ＰＤ－１ｍＡｂ、他の免疫腫瘍学薬、抗血管新生薬、放射線療法、抗体－薬物複合体（antibody-drug conjugate、ＡＤＣ）、標的療法、又は他の抗がん薬が挙げられるがこれらに限定されない、別の治療法と併用され得る。

特定の実施形態によると、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法は、本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬及び任意選択的なＶＬＡ－４接着経路阻害剤と組み合わせてＴ細胞リダイレクト治療薬を、対象に投与することを含む。

本明細書で使用するとき、対象への２つ以上の療法の投与の文脈における用語「組み合わせで」は、２つ以上の療法の使用を指す。用語「組み合わせで」の使用は、療法を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載されるＴ細胞リダイレクト治療薬）は、対象への第２の治療薬（例えば、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤）の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、若しくは１２週間前）、それと同時、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、若しくは１２週間後）に投与され得る。

キット
別の一般的な態様では、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、任意選択的に本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、任意選択的に医薬担体と、を含むキット、単位投与量、及び製造物品が本明細書に提供される。特定の実施形態では、キットは、好ましくは、その使用のための取扱説明書を提供する。

別の特定の態様では、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、を含むキットが本明細書に提供される。

別の特定の態様では、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、（３）本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、を含むキットが本明細書に提供される。

別の特定の態様では、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、（３）医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物を含むキットが本明細書に提供される。

別の特定の態様では、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示される抗ＣＤ４４治療薬と、（３）本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、（４）医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物を含むキットが本明細書に提供される。

実施形態
本発明の実施形態１は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬を含む医薬組成物であって、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、Ｔ細胞表面抗原に免疫特異的に結合する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に免疫特異的に結合する第２の結合領域と、を含む、医薬組成物を含む。

本発明の実施形態２は、医薬的に許容される担体を更に含む、実施形態１に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態３は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１又は２に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態４は、Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態５は、Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３である、実施形態４に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態６は、ＴＡＡが、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される、実施形態１～５のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態７は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位と、を有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である、実施形態６に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態８は、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が、対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、対になって、第２の抗原結合部位を形成する、実施形態７に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態９は、ＨＣ１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１０は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である、実施形態６に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１１は、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が、対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が、対になって、第２の抗原結合部位を形成する、実施形態１０に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１２は、ＨＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１１に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１３は、抗ＣＤ４４治療薬が、抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１４は、抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、実施形態１３に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１５は、抗ＣＤ４４治療薬が、ＣＤ４４アンタゴニストである、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１６は、医薬組成物が、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含む、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１７は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１６に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１８は、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、実施形態１７に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態１９は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、ＶＬＡ－４アンタゴニストである、実施形態１６に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態２０は、ＶＬＡ－４アンタゴニストが、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択される、実施形態１９に記載の医薬組成物を含む。

本発明の実施形態２１は、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態２２は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態２１に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２３は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態２２に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２４は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態２２に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２５は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態２６は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態２５に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２７は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態２６に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２８は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態２６に記載の方法を含む。

本発明の実施形態２９は、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態３０は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態２９に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３１は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３０に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３２は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３０に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３３は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することと、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることと、を含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態３４は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態３３に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３５は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３４に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３６は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３４に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３７は、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態３８は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態３７に記載の方法を含む。

本発明の実施形態３９は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３８に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４０は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３８に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４１は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態４２は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態４１に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４３は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態４２に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４４は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態４２に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４５は、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態４６は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態４５に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４７は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態４６に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４８は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態４６に記載の方法を含む。

本発明の実施形態４９は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することと、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることと、を含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。

本発明の実施形態５０は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態４９に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５１は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態５０に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５２は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態５０に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５３は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法であって、治療有効量の実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を含む。

本発明の実施形態５４は、対象が、新たに診断されたがんを有する、実施形態５３に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５５は、対象が、以前の抗がん療法に対して再発性又は難治性である、実施形態５３に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５６は、がんが、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である、実施形態５３～５５のいずれか１つに記載の方法を含む。

本発明の実施形態５７は、対象が、ＡＭＬ又はＭＭを有する、実施形態５７に記載の方法を含む。

本発明の実施形態５８は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬が、同時に又は連続的に投与される、実施形態５３～５７のいずれか１つに記載の方法を含む。

本発明の実施形態５９は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態５８に記載の方法を含む。

本発明の実施形態６０は、抗ＣＤ４４治療薬が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態５８に記載の方法を含む。

本発明の実施形態６１は、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物を含むキットを含み、医薬組成物は、別個にパッケージングされている。

本発明の実施形態６２は、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の医薬組成物を含むキットを含み、医薬組成物は、一緒にパッケージングされている。

本発明の実施形態６３は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤を投与することを更に含む、実施形態２１～６０のいずれか１つに記載の方法を含む。

本発明の実施形態６４は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、治療有効量の実施形態１～２０のいずれかに記載の医薬組成物に関して同時に又は連続的に投与される、実施形態６３に記載の方法を含む。

材料及び方法
抗体設計
ヒトＣＤ１２３及びＣＤ３を標的とする二重特異性抗体を産生し、抗ＣＤ１２３抗体及び抗ＣＤ３抗体を、Ｇｅｎｍａｂ技術を使用して制御された断片抗原結合アーム交換を生成することによって、精製後に一緒に結合した（１７、１８）。これにより、ヒトＣＤ１２３＋ＡＭＬ細胞及びＣＤ３ Ｔ細胞に特異的に結合する一価の結合二官能性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）抗体が得られた。抗体媒介性エフェクター機能を最小限に抑えるために、Ｆｃドメインに変異を導入して、Ｆｃγ受容体との相互作用を低減した。以下の実験で使用されるＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は、対になって、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。以下の実施例で使用されるＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含む。

インビトロ細胞傷害性アッセイ
腫瘍細胞株（ＫＧ－１、ＨＬ－６０、ＭＯＬＭ－１３、ＭＶ４－１１、及びＳＫＮＯ－１）を計数し、ＤＰＢＳ^－／－（カルシウム又はマグネシウムを含まない）で２回洗浄した後、生存可能な色素であるカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ、１５０μＬのジメチルスルホキシドに再懸濁し、１：１０，０００に希釈した）を含有する５～１５ｍＬのＤＰＢＳ^－／－と暗所で室温（room temperature、ＲＴ）で８分間インキュベートした。染色を等量の熱不活性化（heat inactivated、ＨＩ）ウシ胎児血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）でクエンチした。ＡＭＬ標的細胞を完全培地中で２回洗浄した後、完全培地中に３×１０^５細胞／ｍＬで再懸濁した。ＨＳ－５間質細胞を採取し、完全培地で洗浄し、完全培地中に３×１０^５細胞／ｍＬで再懸濁した。凍結した初代脂肪細胞、ＢＭ間質細胞、ＭＳＣ、Ｔ細胞、及び骨芽細胞を解凍し、完全培地中で１回洗浄し、再懸濁した（間質細胞：３×１０^５細胞／ｍＬ及びＴ細胞：６×１０^５細胞／ｍＬ）。等量（６７μＬ）のＡＭＬ、間質細胞及びＴ細胞を９６ウェルＴＣ処理Ｕ底プレート［エフェクター：標的：間質（２：１：１）］に添加した。間質細胞を含まない対照ウェルには、６７μＬの完全培地を添加した。次に、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，Ａｌａｂａｍａ）から入手した０．５ｍｇ／ｍＬの滅菌無アジド低エンドトキシンヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ）を、Ｆｃブロックとして添加した。９６ウェルプレートを、５％ＣＯ_２中３７℃で一晩インキュベートした。

ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体を完全培地中で１００ｎＭの最終開始濃度に希釈し、更に１０倍希釈し、適切なウェルに添加した。全てのプレートを、３７℃、５％ＣＯ_２で、更に２４～４８時間インキュベートした。次いで、細胞をＤＰＢＳで洗浄し、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ近赤外線を含有する様々なマーカーで室温で３０分間染色した。最後に、細胞を洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁した。

抗ＣＤ４４抗体を含有する試験は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）から入手し、ＤＰＢＳ^－／－中で再構成し、細胞添加時に示された条件に２０μｇ／ｍＬで添加した（ＣＤ１２３ｘＣＤ３添加の２４時間前）。

フローサイトメトリー分析
ＣＤ４４、ＶＬＡ－４、ＶＬＡ－５、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ５４、ＣＤ３、及びＦｌｔ３［抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から購入した］の表面発現を、ＫＧ－１^ｗｔ、ＫＧ－１^{ＣＤ４４ ＫＯ}、ＭＶ４－１１^ｗｔ、ＭＶ４－１１^{ＣＤ４４ ＫＯ}、ＨＬ－６０^ｗｔ、ＨＬ－６０^{ＣＤ４４ ＫＯ}、ＨＳ－５^ｗｔ、及びＨＳ－５^{ＣＤ４４ ＫＯ}細胞株で評価した。ＡＭＬ細胞株を完全培地中で約７０％コンフルエンスまで増殖させ、回収し、１回洗浄し、ＤＰＢＳ中に１×１０^６細胞／ｍＬ^－／－で再懸濁した。ＨＳ－５間質細胞株を完全培地中で培養し、１回洗浄し、ＤＰＢＳ^－／－中に再懸濁した。

全ての細胞株を９６ Ｕ底プレートに１００μＬ／ウェル（１×１０^５細胞／ウェル）で添加した。プレートを遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を、各抗原又はアイソタイプについて、ＲＴでＤＰＢＳ^－／－中のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ色素で個々に染色した。

ＡＭＬ及びＭＤＳサンプルのＣＤ４４発現
ＣＤ４４発現を、ＡＭＬ、骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome、ＭＤＳ）及び正常対照におけるＭｉｌｌｓ Ｈｅｍｅ（ＧＳＥ１５０６１）研究から評価し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン９（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用してプロットした。

統計的方法
全てのデータをＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアＰｒｉｓｍバージョン９によって分析した。非線形回帰（４パラメータ）曲線あてはめを図１及び図５に利用した。ＥＣ_５０及び最大細胞傷害性値は、前述の分析から得られた。トップパラメータ（α＝０．０５）を比較することによって、４パラメータ非線形あてはめに対してＦ検定分析を行い、図１の統計的有意性を評価した。図４ｂ（テューキー多重比較検定、^＊１００ｎＭ条件分析）、図５（１００ｎＭ評価、テューキー多重比較検定）、図９及び図１０（ダネット多重比較検定）について多重比較検定（α＝０．０５）を用いてＡＮＯＶＡ分析を行った。

サイトカイン分析
図１及び図５からの上清を、ヒトサイトカイン及びケモカインを測定するＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ ＫＩＴ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して分析した。上清を、湿った氷上で解凍し、４℃で５分間、５００×重力（ｇ）で遠心分離させ、次いで氷上に置いた。試料をニート（希釈なし）濃度で使用した。磁気ビーズパネルキットは、製造業者のプロトコルに従った。標準曲線を、ＲＰＭＩ媒体中で再構成された、提供された較正物質の連続希釈によって調製した。各試料又は標準の２５μＬアリコートを、技術的に２連でプレートに直接添加した。その後のインキュベート及び洗浄は、全て製造元のプロトコルに従って手持ち磁石を使用して実施した。アッセイプレートをＦＬＥＸＭＡＰ ３Ｄ（登録商標）システムで読み取った。分析をプログラムＦＬＥＸＭＡＰ ３Ｄ（登録商標）ソフトウェアで実施して、試料ごとのサイトカインの濃度を決定した。最後に、データを、可視化のためにＰｒｉｓｍバージョン９を使用して配置した。

結果
初代骨髄間質細胞は、インビトロでＫＧ－１細胞に対するＣＤ１２３ｘＣＤ３抗体の有効性を低減する
骨髄は、免疫細胞及び間質細胞の異種集団から構成される。ＢＭ間質細胞の構成成分の１つは、線維芽細胞、骨芽細胞、及び脂肪細胞に分化することができる間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。ＢＭ間質線維芽細胞は、ＶＬＡ－４に関与する細胞間相互作用を介してＴ細胞リダイレクト媒介細胞傷害性を抑制することができることが以前に示されている（Ｎａｉｒ－Ｇｕｐｔａ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ＶＬＡ４ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｍａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ＣＤ３ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０２０；１０（６））。ＢＭの他の構成成分がＴ細胞リクルーター抗体の細胞傷害性効果を低減することができるかどうかを試験するために、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体を、健常対照（ＨＣ）汎ＣＤ３^＋ Ｔ細胞及び様々なＢＭ間質細胞型の存在下で、ＣＤ１２３^＋ ＡＭＬ細胞に対して試験した。（Ｎａｉｒ－Ｇｕｐｔａ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ＶＬＡ４ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｍａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ＣＤ３ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０２０；１０（６）；Ｇａｕｄｅｔ Ｆ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ＣＤ１２３ｘＣＤ３ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＪＮＪ－６３７０９１７８）ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ （ＡＭＬ）．Ｂｌｏｏｄ．２０１６；１２８（２２）：２８２４）間質細胞の非存在下では、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体は、ＫＧ－１細胞を効果的に死滅させた（最大細胞傷害性７８％、ＣＤ１２３^ｈｉｇｈ；骨髄起源（図１））。対照的に、ＨＳ－５間質細胞の存在は、ＫＧ－１細胞の死滅の有意な減少をもたらした（３８～５０％；図１及び表１）。同様の結果が、初代ＢＭ間質細胞、間葉系幹細胞、ヒト骨芽細胞及び脂肪細胞などの他のＢＭ間質成分で観察され、ＢＭのいくつかの成分がＴ細胞媒介性細胞傷害性を抑制し得ることが示唆された（図１及び表１）。ＫＧ－１細胞株は、元々、白血病患者のＢＭから単離されたものであり、間質相互作用の影響をより受けやすい可能性がある（Ｍｒｏｚｅｋ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＫＧ－１ ａｎｄ ＫＧ－１ａ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｂｙ ｕｓｅ ｏｆ ｓｐｅｃｔｒａｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ． Ｇｅｎｅｓ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ Ｃａｎｃｅｒ． ２００３；３８（３）：２４９－２５２）。ＢＭに由来しないＣＤ１２３^＋細胞株がＢＭ間質細胞によって同様に影響を受けるかどうかを評価するために、これらの間質細胞の影響を、前骨髄性白血病の末梢血に由来し、間質相互作用への依存性が潜在的に低い可能性があるＨＬ－６０細胞（ＣＤ１２３^ｌｏｗ）の存在下で評価した（Ｃｏｌｌｉｎｓ ＳＪ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｌａｒ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９７８；７５（５）：２４５８－２４６２）。実際に、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体は、ＨＬ－６０細胞を死滅させることができたが、ＢＭ間質細胞は、細胞傷害活性にそれほど有意に影響を与えなかった（５～２２％の低減；表２及び表３）。興味深いことに、Ｔ細胞活性化（ＣＤ２５細胞表面マーカーを用いて評価したとき）は、間質細胞（骨芽細胞を除く）と共培養した場合、ＫＧ－１細胞において中程度にしか影響を受けなかったが、ＨＬ－６０細胞は、有意に変化しなかった（図１及び表１）。間質細胞の存在下で観察されたＣＤ２５の発現の低減もまた、サイトカイン分泌の低減と相関した（図２及び図３）。これらの結果は、間質細胞の存在がＴ細胞機能を抑制し、標的細胞の死滅の低減をもたらし得ることを示唆している。

ＥＣ、有効濃度；ＮＳ、間質細胞の添加なし；ＢＭ、骨髄間質細胞；ＭＳＣ、間葉系幹細胞；ＥＣ_５０値は、４８時間時点からのものである；％Ｍａｘは、４パラメータ非線形フィット曲線からの最高値を表す。

ＥＣ、有効濃度；ＮＳ、間質なし。
ＥＣ５０値は、４８時間の時点からのものであり、％Ｍａｘは、４パラメータ非線形フィット曲線からの最高値を表す。

上に示したＰ値は、ＣＤ１２３ｘＣＤ３細胞傷害性又はＴ細胞活性化（ＣＤ２５又はＰＤ－１）のＨＳ－５媒介性抑制のいずれかの統計的有意性、及びそれぞれの各ＡＭＬ細胞株への抗ＣＤ４４添加の回復効果の表示である。ＣＤ１２３ｘＣＤ３（１００ｎＭ）のテューキー多重比較検定による一元配置ＡＮＯＶＡを評価した（α＝０．０５）。Ｐ値＞０．０５、有意差なし。
Ａｂ、抗体；ＮＳ、間質細胞なし。

ＣＤ４４はＡＭＬ細胞上で上方制御される
ＶＬＡ－４が腫瘍細胞と間質細胞（線維芽細胞）との間の相互作用を媒介してＴ細胞抑制をもたらし得ること、及びＶＬＡ－４の遮断がＴ細胞リダイレクト剤からの死滅を回復させ得ることが示されている（Ｎａｉｒ－Ｇｕｐｔａ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ＶＬＡ４ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｍａ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ＣＤ３ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０２０；１０（６））。この抑制を媒介し得る更なるタンパク質を同定するために、ＡＭＬにおける細胞－細胞表面相互作用に関与する種々の候補タンパク質を考慮した。１つの特定のタンパク質であるＣＤ４４は、ＨＳＣ及びＬＳＣの接着特性に寄与することが示されている（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｓ．２０１６；５１（４）：２２５－２３２；Ｐｌｅｙｅｒ Ｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ ａｎｄ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ Ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ－Ｍａｓｔｅｒｓ ｏｆ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ Ｃｌｏｎｉｃｉｔｙ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ ２０１６；１７（７））。ＡＭＬでは、ＣＤ４４は、ＡＭＬ芽球及びＬＳＣ上で上方制御され、様々な経路を介して生存シグナルとして機能する（Ｇｕｌ－Ｕｌｕｄａｇ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＣＤ４４ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ＣＤ３４＋ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ． Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；３８（１１）：１２９９－１３０８；Ｇａｒｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＭＬ ｂｌａｓｔ．Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１６；１０３（５）：５６７－５７１；Ｃｈｅｎ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａｎｔｉ－ＣＤ４４ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ－ｐ２７（Ｋｉｐ１）ａｘｉｓ．Ｍｏｌ Ｃａｒｃｉｎｏｇ．２０１５；５４（１２）：１６７８－１６８５；及びＧａｄｈｏｕｍ ＳＺ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－ＣＤ４４ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｂｏｔｈ ｍＴＯＲＣ１ ａｎｄ ｍＴＯＲＣ２：ａ ｎｅｗ ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ＣＤ４４－ｉｎｄｕｃｅｄ ＡＭＬ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１６；３０（１２）：２３９７－２４０１）。様々なＡＭＬ細胞株におけるＣＤ４４タンパク質発現を評価し、一貫して発現されることが見出された（図４Ａ）。次に、初代ＡＭＬ細胞（ｎ＝２０２）におけるＣＤ４４ ｍＲＮＡ発現を評価し、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ；ｎ＝１６４）及び正常対照（ｎ＝６９；図４Ｂ）と比較して有意な上方制御が見出された（Ｍｉｌｌｓ ＫＩ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ－ｂａｓｅｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｍｏｄｅｌｓ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｏｆ ＡＭＬ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１４（５）：１０６３－１０７２）。これは、ＭＤＳからＡＭＬ疾患への疾患進行においてＣＤ４４発現が重要であり得るという考えと一致する。

抗ＣＤ４４はＣＤ１２３ｘＣＤ３による死滅の間質媒介性抑制を回復する
ＣＤ４４がＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体によるＴ細胞死滅の間質媒介性抑制に関与するかどうかを評価するために、抗ＣＤ４４抗体を共培養物に添加してＣＤ４４を中和した。更なるＡＭＬ細胞株（ＭＶ４－１１、ＭＯＬＭ－１３、及びＳＫＮＯ－１；全てのＣＤ１２３^＋）もまた試験した。図５に示すように、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体は、間質細胞の非存在下で試験された全ての細胞株の中で強固かつ有意な細胞傷害活性をもたらした（表３及び表４）。これに関連して、抗ＣＤ４４抗体は、細胞傷害活性又はＴ細胞活性化に影響を及ぼさなかった。対照的に、ＡＭＬ細胞株を間質細胞と共培養した場合、抗ＣＤ４４抗体、細胞傷害効果及びＴ細胞活性化は、ＣＤ４４^ｌｏｗであるＨＬ－６０細胞を除いて、試験した全ての細胞株において様々な程度に回復した（図５）。試験した全ての細胞は、ＣＤ４４を発現することが示された（図６）。これらの結果は、他のＣＤ１２３^＋ ＡＭＬ細胞を用いた以前の知見が、ＡＭＬにおけるＣＤ４４の役割がより広い可能性があることを示唆することを更に確実なものとする。サイトカインを上清中で更に評価し、細胞傷害性と相関することを見出した。詳細には、間質の非存在下でＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の添加は、試験されたＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の２つの最高濃度でＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、及びＴＮＦ－αの強力な放出をもたらした。しかしながら、ＨＳ－５細胞の添加は、サイトカイン放出を鈍化させた。抗ＣＤ４４の添加は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－３及びＴＮＦ－αの同様のレベルをもたらしたが、ＩＬ－２レベルをバックグラウンド近くまで低減した。ＨＳ－５細胞を含有する共培養物に抗ＣＤ４４を添加した場合、ＩＦＮ－γレベルは、完全に回復したが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、及びＴＮＦ－αのレベルは、部分的に回復した（図７）。要約すると、これらの結果は、ＣＤ４４発現が間質細胞の存在下でＴ細胞リダイレクト治療薬に対する感受性を低減し得ること、及び抗体によるＣＤ４４の遮断がこの活性を回復させ得ることを示唆する。

Ｐ値は、それぞれの間質細胞を間質細胞なしの条件と比較したＣＤ１２３ｘＣＤ３細胞の細胞傷害性についての統計的有意性の表示として上に示した。上位パラメータ（α＝０．０５）を比較することによって、４パラメータ非線形曲線あてはめ内で追加の二乗和Ｆ検定分析を行った。Ｐ値＞０．０５、有意差なし。
ＢＭ、骨髄間質細胞；ＭＳＣ、間葉系幹細胞。

ＣＤ４４ ＫＯ細胞株はＣＤ１２３ｘＣＤ３のＨＳ－５間質媒介性抑制に対して耐性である
共培養物への抗ＣＤ４４抗体の添加は、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の機能を回復させたので、ＣＤ４４が、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体によるＴ細胞媒介性死滅の抑制において重要な役割を果たしていると仮定された。ＣＤ４４は、ＨＳ－５間質細胞及びＫＧ－１ ＡＭＬ細胞上で発現される。抗ＣＤ４４抗体の影響が、間質細胞又は腫瘍細胞（又は両方）に対するＣＤ４４の遮断に由来するかどうかを確立するために、ＨＳ－５細胞及び腫瘍細胞におけるＣＤ４４のＫＯを作製した。図８に示すように、もはやＣＤ４４を発現しない細胞が問題なく作製された（一方、対照ＶＬＡ－４及びＣＸＣＲ４のレベルは不変のままであった）。次いで、これらの細胞を、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の存在下での細胞傷害性アッセイにおいて使用して、いずれかの細胞型の表面上のＣＤ４４の喪失の影響を評価した。図９は、ＨＳ－５ＣＤ４４ＫＯ又はＫＧ－１ＣＤ４４ＫＯ細胞（表５）を共培養系において使用した場合に、細胞傷害性が有意に回復したことを示す。データは、ＣＤ４４が腫瘍細胞又は間質細胞において欠失されたかどうかにかかわらず、影響が同様であったことを示唆する。両方の細胞型におけるＣＤ４４の欠失は、いかなる付加的結果ももたらさなかった。このデータは、ＨＳ－５及びＫＧ－１の両方で発現されるＣＤ４４が、ＨＳ－５細胞で見られる抑制効果に寄与することができ、いずれかの細胞型上のＣＤ４４の欠失が、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害機能を回復させることができることを立証する。これらの知見は、上記の抗ＣＤ４４を用いた実験と一致しており、ＡＭＬにおけるＴ細胞リダイレクトに対する耐性機構としてのＣＤ４４発現を更に確立する。

上に示したＰ値は、そのそれぞれの比較についての各サイトカインの統計的有意性の表示である。ＣＤ１２３ｘＣＤ３のダネット多重比較検定による一元配置ＡＮＯＶＡを評価した（α＝０．０５）。Ｐ値＞０．０５、有意差なし。
ＫＯ、ノックアウト；ｗｔ、野生型。

ＣＤ４４の遮断はグランザイム－Ｂレベルを増強し、ＰＤ－１発現を増加させる
腫瘍細胞又は間質細胞上のＣＤ４４の中和又は除去がＴ細胞機能に直接影響を与えるかどうかを確立するために、Ｔ細胞によってシナプス中に分泌され、腫瘍細胞によって取り込まれ、アポトーシスの誘導をもたらす、Ｔ細胞中のグランザイム－Ｂのレベルを決定することとした。図１０及び表５に示されるように、ＫＧ－１又はＨＳ－５細胞における抗ＣＤ４４抗体又はＣＤ４４のＫＯの添加は、Ｔ細胞におけるグランザイム－Ｂの増加をもたらし、これは、より大きな細胞傷害性を部分的に説明し得る。驚くべきことに、抗ＣＤ４４の添加はまた、Ｔ細胞をＫＧ－１ＣＤ４４ ＫＯ細胞と共にインキュベートした場合にグランザイム－Ｂの増加をもたらした。同様の結果が、Ｔ細胞上のＰＤ－１発現を評価したときに見出された（図１０及び表５）。これらの結果は、ＣＤ４４発現が、腫瘍細胞上での発現以外の機構を介してＴ細胞リダイレクト抗体の細胞傷害性を抑制し得ることを示唆する。

考察
ＡＭＬにおける一次化学療法又は自己造血幹細胞移植に続く微小残存病変は、再発の主要な理由である。ＢＭはＡＭＬ ＬＳＣに対して保護的微小環境であるので、これらのがん細胞は、一般に二次療法及び処置に対して耐性である。ＢＭ微小環境の状況における耐性の機構を理解することは、免疫リダイレクトアプローチを含む現在及び将来の治療にとって重要である。

本明細書では、複数のＢＭ間質細胞型が、ＫＧ－１細胞に対するＴ細胞リダイレクタ抗体であるＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の活性を阻害し得ることが示される。一方、Ｔ細胞活性化（ＣＤ２５発現）はあまり影響を受けなかった。サイトカイン放出は、初代ＢＭ間質細胞によって強力に抑制され、これは細胞傷害性と相関した。

結果は、ＢＭ間質細胞及び腫瘍細胞上のＣＤ４４発現が、ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害活性のＢＭ間質抑制において重要な役割を果たすことを立証する。腫瘍細胞又は間質細胞のいずれかにおける、抗ＣＤ４４抗体によるＣＤ４４の阻害、又はＣＲＩＳＰＲによるＣＤ４４遺伝子のＫＯは、使用される細胞株に応じて、間質媒介性抑制を様々な程度まで回復させた。ＣＤ４４の阻害は、本発明者らのＴ細胞リダイレクト剤であるＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害性を回復させただけでなく、腫瘍細胞死滅と一致して、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン放出の増加も引き起こした。

Claims (27)

1. Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び抗ＣＤ４４治療薬を含む医薬組成物であって、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、Ｔ細胞表面抗原に免疫特異的に結合する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に免疫特異的に結合する第２の結合領域と、を含む、医薬組成物。
2. 医薬的に許容される担体を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、抗体又はその抗原結合断片である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
4. 前記Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
5. 前記Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である、請求項４に記載の医薬組成物。
6. 前記ＴＡＡは、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
7. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位と、を有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である、請求項６に記載の医薬組成物。
8. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１は、対になって、前記第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２は、対になって、前記第２の抗原結合部位を形成する、請求項７に記載の医薬組成物。
9. 前記ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
10. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位と、を有するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である、請求項６に記載の医薬組成物。
11. 前記ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１は、対になって、前記第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２は、対になって、前記第２の抗原結合部位を形成する、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 前記ＨＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 前記抗ＣＤ４４治療薬は、抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
14. 前記抗ＣＤ４４抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. 前記抗ＣＤ４４治療薬は、ＣＤ４４アンタゴニストである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
16. ＶＬＡ－４接着経路阻害剤を更に含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
17. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 前記抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
19. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４アンタゴニストである、請求項１６に記載の医薬組成物。
20. 前記ＶＬＡ－４アンタゴニストは、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
21. がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を治療有効量の請求項１～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物に供することを含む、方法。
22. 前記がんは、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である、請求項２０に記載の方法。
23. 前記がんは、ＡＭＬ又はＭＭである、請求項２２に記載の方法。
24. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び前記抗ＣＤ４４治療薬は、同時に又は連続的に投与される、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記抗ＣＤ４４治療薬は、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、請求項２４に記載の方法。
26. 前記抗ＣＤ４４治療薬は、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、請求項２４に記載の方法。
27. 請求項１～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物を含むキット。

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