JP2024512855A - 抗アミロイドベータ抗体及びその使用方法 - Google Patents

抗アミロイドベータ抗体及びその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2024512855A
JP2024512855A JP2023538973A JP2023538973A JP2024512855A JP 2024512855 A JP2024512855 A JP 2024512855A JP 2023538973 A JP2023538973 A JP 2023538973A JP 2023538973 A JP2023538973 A JP 2023538973A JP 2024512855 A JP2024512855 A JP 2024512855A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
human
antibody
antibodies
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023538973A
Other languages
English (en)
Inventor
リャオ，ファン
チャーヤ，メア
マクラスキー，アンドリュー・ジェイ
ブラウン，ネイサン・ジェイ
Original Assignee
アッヴィ・インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アッヴィ・インコーポレイテッド filed Critical アッヴィ・インコーポレイテッド
Publication of JP2024512855A publication Critical patent/JP2024512855A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本発明の概念は、アルツハイマー病（ＡＤ）などの障害の治療における使用に適した、脳内のアミロイド－ベータ（Ａβ）斑を対象とし、それに特異的に結合し、それを取り除くことが可能な抗体などの、抗体、例えば、組換えヒト化及びモノクローナル抗体、抗体の作製方法、並びに抗体の使用方法に関する。

Description

本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０２１年１０月２８日に出願した米国仮特許出願第６３／２６３２０４号の利益を主張するものである。
電子化された配列表の参照
本明細書に開示されるアミノ酸配列及びＤＮＡ配列を含む、配列番号１～配列番号３７が含まれる「ＡＢＶ２１３９７ＵＳＯ１＿ＳＴ２６．ｘｍｌ」という表題の配列表の全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出されている。配列表は、２０２２年１０月２７日に作成され、サイズは２２，５２８バイトである。
本出願は、とりわけ、抗アミロイドベータ（Ａβ）抗体及びその作製及び使用方法に関する。
アルツハイマー病（ＡＤ）のアミロイド仮説は、Ａβのクリアランスと産生の間の不均衡により、脳内へのタンパク質蓄積が生じることを示唆するものである。これにより、いくつかの下流の事象が開始され、それが最終的にニューロン及びシナプスの減少に至り、ＡＤの臨床症状として顕在化する（Ｓｅｌｋｏｅ及びＨａｒｄｙ ２０１６）。最近のＡＤを治療するための薬物の開発では、可溶性の単量体Ａβと不溶性の沈着形態のＡβの両方を減少させる化合物に焦点が当てられており、ここ２０年で異なる形態のＡβに結合するいくつかのｍＡｂが試験されている（ｖａｎ Ｄｙｃｋ ２０１８）。ＡＤを治療するために抗Ａβ ｍＡｂを投与する手法では、ｍＡｂがＡβに結合して、当該タンパク質の消去に役立つ免疫応答を刺激するので、主に基礎をなすのは受動免疫療法である。
歴史的に、Ａβを標的とするｍＡｂは、ＡＤにおける認知及び機能低下を緩徐化することに関する有効性を実証することができていない。しかし、これらの試験により、安全性に関連する重要なデータがもたらされている。さらに、これらの試験により、ＡＤ進行を緩徐化するために標的とする必要があり得る特定の形態のＡβに関する洞察がもたらされており、Ａβがなお、ＡＤ治療法を開発するための妥当な標的であると多くの人に考えられるに至っている（ｖａｎ Ｄｙｃｋ ２０１８）；（Ａｉｓｅｎ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、２０２０）。実際に、どちらもＡβを標的とするｍＡｂである、アデュカヌマブ（ＮＣＴ０２４８４５４７）に関する第３相試験及びドナネマブ（ＮＣＴ０３３６７４０３）に関する第２相試験からの最近の結果は、このクラスの化合物がＡＤの治療において効果的であり得ることを示唆している。したがって、ＡＤのアミロイド仮説に関する科学的裏付け及び抗Ａβ ｍＡｂの最近の試験において認められた前向きな兆しを考慮すると、新しい抗Ａβ ｍＡｂの開発は、有効なＡＤ治療の探索におけるさらなる見込みをもたらす。
抗Ａβ ｍＡｂは、多数の臨床試験において何千名もの対象に投与されている。全体として、抗Ａβ ｍＡｂは忍容性が良好である。いくつかのｍＡｂを含めた、Ａβを標的とする能動及び受動免疫学的化合物を精査するメタ分析は、ほぼ全ての有害事象、重篤な有害事象及び死亡に関してプラセボと差異がないことを明らかにしている（Ｐｅｎｎｉｎｋｉｌａｍｐｉ，Ｂｒｏｔｈｅｒｓら、２０１７）。有害事象データに関する１つの例外は、抗Ａβ ｍＡｂを受けた対象ではアミロイド関連画像異常（ＡＲＩＡ）が生じる可能性がより高いことであった。
ＡＲＩＡは、ＭＲＩによって検出される脳血管異常に適用される用語である。ＡＲＩＡは、２つのカテゴリーに分類される：ＡＲＩＡ－Ｅは、血管原生浮腫、脳溝滲出及び時々の脳回腫大に関連する画像所見を表し、一方、ＡＲＩＡ－Ｈは、脳実質内微小出血（ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ ｍｉｃｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇ）及びヘモジデリン沈着を反映するＭＲＩシグナル異常を捕捉する（Ｓｐｅｒｌｉｎｇ、Ｊａｃｋら、２０１１）。どちらの型も抗Ａβ ｍＡｂ試験において実証されているが、ＡＲＩＡ－Ｅは、抗Ａβ ｍＡｂ投与の結果としてより頻繁に生じる（Ｐｅｎｎｉｎｋｉｌａｍｐｉ，Ｂｒｏｔｈｅｒｓら、２０１７、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｂａｃｓｋａｉら、２０２０）。ＡＲＩＡの正確な機構（複数可）は分かっていないが、大脳脈管構造からのアミロイドのクリアランスに関し得る又は血管アミロイド沈着の部位における炎症反応が惹起されることによるものであり得る（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｂａｃｓｋａｉら、２０２０）。ＡＲＩＡの危険因子としては、ＡβペプチドのＮ末端を標的とするｍＡｂの投与、以前の微小出血（ｍｉｃｒｏｂｌｅｅｄ）歴、アポリポタンパク質遺伝子のε４対立遺伝子保因及び高用量の薬物が挙げられるが、ＡＲＩＡリスクの上昇が、絶対的な用量レベルに関連付けられるものであるか力価測定を伴わない高用量の投与に関連付けられるものであるかは不明である（ｖａｎ Ｄｙｃｋ ２０１８、Ａｉｓｅｎ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、２０２０、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｂａｃｓｋａｉら、２０２０）。
Ｓｅｌｋｏｅ及びＨａｒｄｙ ２０１６ ｖａｎ Ｄｙｃｋ ２０１８ Ａｉｓｅｎ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓら、２０２０ Ｐｅｎｎｉｎｋｉｌａｍｐｉ，Ｂｒｏｔｈｅｒｓら、２０１７ Ｓｐｅｒｌｉｎｇ、Ｊａｃｋら、２０１１ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｂａｃｓｋａｉら、２０２０
（発明の要旨）
ＡＣ－２６４７１３は、ｈｕ Ａβ（ＡＣ－２６４７１３）［ｈｕ ＩｇＧ１／Ｋ］としても公知であり、Ａβの特に急速に凝集する不溶性の凝集形態である、Ｎ末端が短縮されており３位のアミノ酸がピログルタミン酸修飾されたＡβ（ＡβｐＥ３）、に結合する組換えヒト化免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）カッパモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ＡＣ－２６４７１３は、ヒトＡβｐＥ３－４２原線維に選択的に結合し、その半数効果濃度（ＥＣ５０）は０．７ｎＭであり、また、ピログルタミン酸修飾されていない全長形態のＡβには結合しない。
したがって、アミロイド斑をＡＤ脳から除去するために適した、Ａβ（ＡβｐＥ３）に特異的に結合する組換えヒト化ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体のアミノ酸配列が提供される。当該抗体は、構造的に、ＡβｐＥ３－４２原線維に選択的に結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変重鎖及び可変軽鎖を含む。断片結晶化可能領域（Ｆｃ）を含む重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む抗体も提供される。抗体のアミノ酸配列によってコードされるこれらの構造要素は、患者におけるＡＤの治療に有効な医薬組成物をもたらす。
３つのＣＤＲを含む可変重鎖（ｖＨ）；及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含む可変軽鎖（ｖＬ）を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
抗ヒトＡβｐＥ３抗体が、本明細書に記載される。
ある特定の実施形態では、抗ヒトＡβｐＥ３抗体は、配列番号７として記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８として記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、抗ヒトＡβｐＥ３抗体は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含み、各重鎖が、配列番号９として記載されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖が、配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、抗ヒトＡβｐＥ３抗体は、ＩｇＧ定常領域を含む。
ある特定の実施形態では、抗ヒトＡβｐＥ３抗体は、Ｆｃ部分を含むヒト重鎖定常領域を含み、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭアイソタイプである。
ある特定の実施形態では、抗ヒトＡβｐＥ３抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。
３つのＣＤＲを含む可変重鎖（ｖＨ）及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含む可変軽鎖（ｖＬ）を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体を含む組成物であって、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
組成物もまた、本発明で提供される。
神経変性障害を治療するための方法であって、３つのＣＤＲを含む可変重鎖（ｖＨ）及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含む可変軽鎖（ｖＬ）を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
抗体を、それを必要とする患者に投与するステップを含む方法もまた、本発明で提供される。
ある特定の実施形態では、神経変性障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）である。
抗ヒトＡβｐＥ３抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗体が、（ｉ）３つのＣＤＲを含むｖＨ鎖及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含むｖＬ鎖を含み、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
ポリヌクレオチドもまた、本発明で提供される。
抗ヒトＡβｐＥ３抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターであって、抗体が、（ｉ）３つのＣＤＲを含むｖＨ鎖及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含むｖＬ鎖を含み、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
ベクターもまた、本発明で提供される。
抗ヒトＡβｐＥ３抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターを用いて形質転換された真核生物宿主細胞であって、抗体が、（ｉ）３つのＣＤＲを含むｖＨ鎖及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含むｖＬ鎖を含み、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
真核生物宿主細胞もまた、本発明で提供される。
ある特定の実施形態では、真核生物宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。
抗ヒトＡβｐＥ３抗体を産生する方法であって、（ａ）哺乳動物宿主細胞を培養するステップ及び（ｂ）抗ヒトＡβｐＥ３抗体を回収するステップを含む方法もまた、本発明で提供される。
２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、各重鎖が配列番号３７として記載されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖が配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む、抗ヒトＡβｐＥ３抗体が、本発明でさらに提供される。
ＡＣ－２６４７１３のヒトＡβｐＥ３－４２原線維への代表的な結合を示す図である。ＡＣ－２６４７１３のヒトＡβｐＥ３－４２原線維への結合を直接結合ＥＬＩＳＡにおいて評定した。ヒトＡβｐＥ３－４２原線維（５０ｎｇ／ウェル）でコーティングしたプレートを、段階希釈したＡＣ－２６４７１３と一緒にインキュベートした。ＥＬＩＳＡを３回繰り返した。代表的な図が示されている。Ｙ軸に４５０ｎｍにおける光学濃度がプロットされている。ヒトＡβｐＥ３－４２原線維へのＡＣ－２６４７１３結合のＥＣ５０値は０．７ｎＭである。 前頭皮質由来の新鮮凍結ヒトＡＤ組織内のＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１が結合した斑の面積を示す図である。６体のＡＤドナー由来の組織を分析し、データを平均±ＳＥＭとして表した。ＡＣ－２６４７１３はＡＤ脳組織内の斑に濃度依存的に結合した。線は、実施例３に記載の通り組み合わせた６体のドナーについてのデータに対するフィッティングを表す。 ＡＣ－２６４７１３が、固定されていないＡＰＰＰＳ１－２１脳組織からのｈｉＰＳＣ由来食細胞によるアミロイド斑の除去を刺激することを示す図である。ｈｉＰＳＣ由来食細胞を、種々の濃度のＡＣ－２６４７１３と一緒にプレインキュベートしたＡＰＰＰＳ１－２１脳組織と共培養した。組織内の残りのアミロイド斑を、チオフラビンＳを使用して染色し、数量化した。データを平均±ＳＥＭとして表し、一元配置ＡＮＯＶＡ、その後、ダネットの多重比較検定を用いて解析した。＊、ｐは０．０５未満。 単回腹腔内投与の７２時間後のＡＰＰＰＳ１－２１マウスにおけるＡＣ－２６４７１３の用量依存的な標的結合を示す図である。脳内のＡＣ－２６４７１３（パネルＡ）及び比較用抗体Ａｂ１（パネルＤ）を、抗ｈＩｇＧ免疫組織化学的検査を使用して検出した。隣接する区域上の総標的ＡβｐＥ３を、ＡＣ－２６４７１３（パネルＢ）又は比較用抗体Ａｂ１（パネルＥ）を使用して染色した。次いで、漸増用量でＡＣ－２６４７１３（パネルＣ）又は比較用抗体Ａｂ１（パネルＦ）によって占有された％総標的を算出し、ｙ軸上に示した。＊Ｐは０．０５未満（クラスカル・ワリス、その後、ダンの多重比較検定）。 ＡＰＰＰＳ１－２１マウスにおける、雌マウスにおける単回静脈内投薬の７２時間後の脳内のＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１曝露と用量依存的な標的結合の相関を示す図である。個々の動物の脳曝露とＡβｐＥ３占有の相関を示すデータ（符号）が非線形フィッティング（線）と共に示されている。 ＡＣ－２６４７１３マウス前駆抗体及び比較用抗体Ａｂ２を使用して試験した、ＡＰＰＰＳ１－２１マウスモデルにおける微小出血に対するＡＣ－２６４７１３の効果を示す図である。（パネルＡ）赤血球数量化についての画像。（パネルＢ）プルシアンブルー数量化についての画像。データを平均±ＳＥＭとして表した。染色画像は、微小出血誘導の陽性対照群からの所見を表す。パネルＡの白抜きの矢印は赤血球を示す。パネルＢの矢印はプルシアンブルー染色シグナルを示す。
本開示の原理の理解を促進するために、ここで、種々の実施形態を参照する。しかし、それによって本開示の範囲が限定されることは意図されておらず、本明細書に例示される本開示の変更及びさらなる改変は本開示が関する分野の当業者に通常想起されるものと考えられることが理解される。
「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という冠詞は、本明細書では、その冠詞の文法上の目的語の１つ又は１つよりも多く（即ち、少なくとも１つ）を指すように使用される。例として、「１つの（ａｎ）要素」は、少なくとも１つの要素を意味し、また、１つよりも多くの要素も含み得る。「及び／又は」という用語は、付随して列挙されている項目の１つ、又は多くのありとあらゆる組合せを包含し、「／」と省略され得る。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、本明細書で使用される場合、その通常の意味に加えて、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び／又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」という表現も包含し得、一部の実施形態では、それらを特に指し得る。したがって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という表現は、具体的に列挙されている要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」と特許請求されたものが、さらなる要素を含まない実施形態、並びに、具体的に列挙されている要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」と特許請求されたものが、さらなる要素を包含し得る及び／若しくは包含する、又は、特許請求されたものの基本的な及び新規の特徴に実質的に影響を及ぼさないさらなる要素を包含する実施形態も指し得る。例えば、具体的に列挙されている要素を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」特許請求されたもの、例えば、方法、キット、システムなどは、例えば、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」方法、キット、システムなども包含する、即ち、特許請求されたものが、さらなる要素を含まない場合及び、例えば、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」方法、キット、システムなど、即ち、特許請求されたものが、特許請求されたものの基本的な及び新規の特徴に実質的に影響を及ぼさないさらなる要素を含み得る場合も包含する。
「約」は、本明細書で使用される場合、それが修飾する数値を限定することが意図されており、そのような値が誤差限界の範囲内で変動することを示す。データのチャート又は表に示される平均値に対する標準偏差などの特定の誤差限界が記載されていない場合、「約」という用語は、包含され得る範囲、例えば、記載されている値の±２０％、±１５％、又は±１０％及び一部の実施形態では、±５％、±３％、又は±２％を意味し、その範囲が包含されると理解されるべきである。
特に定義されていなければ、本明細書で使用される技術用語は全て、本開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。
本開示の実施形態は、脳内の沈着形態のＡβに結合して、タンパク質の消去に役立つ免疫応答を刺激する抗体及び、例えば、ＡＤの治療における、これらの抗体の使用方法に関する。
ＡβｐＥ３は、特に急速に凝集すると思われるＡβの一形態である（Ｊａｗｈａｒ，Ｗｉｒｔｈｓら、２０１１）。ＡβｐＥ３を標的とするドナネマブにより、ヒトＡＤ脳からの斑の迅速な除去が実現され、また、ＡβｐＥ３が大脳脈管構造内に他の形態のＡβと比べて広く行き渡っていないこと（Ｋｕｏ，Ｅｍｍｅｒｌｉｎｇら、１９９７）を考慮して、ＡＲＩＡのリスクを低く迅速に斑を除去することを実現することを目的としたＡＣ－２６４７１３などの抗ＡβｐＥ３抗体が生成された。
ＡＣ－２６４７１３は、ＡβｐＥ３に結合する組換えヒト化ＩｇＧ１カッパｍＡｂである。ＡＣ－２６４７１３の起源は、ＡβｐＥ３に結合するマウスｍＡｂである。マウス抗体の可変ドメインをヒト化し、次いで、ヒトＩｇＧ１重鎖及びＩｇカッパ軽鎖定常領域と融合して、ＡＣ－２６４７１３を創出した。本開示の抗体などのヒト化ｍＡｂをもたらすための、例えばマウスｍＡｂのヒト化は、それだけに限定されないが当業者に公知の任意の方法によって実現され得ることが理解される。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、２本の可変鎖、重鎖１本及び軽鎖１本を含む。各可変鎖上に、抗体がＡβｐＥ３に結合することを可能にする３つのＣＤＲが存在する。可変重鎖及び可変軽鎖上に、組み合わさった合計６つの異なるＣＤＲが存在する。さらに、ある実施形態では、抗体は、免疫グロブリンクラスＧ１（ＩｇＧ１）のヒトＦｃを含むヒト重鎖定常領域を含有する。本明細書に記載の抗ＡβｐＥ３抗体は、フコシル化されたもの又はフコシル化されていないものであり得、インビトロにおける機能性、免疫安全性及び薬物様特性を示す。
本開示による抗体は、ヒトＡβｐＥ３－４２原線維を使用したハイブリドーマキャンペーンにおいて同定された抗体のヒト化及び不利な点の工学的操作によって生成された。ヒト化のための抗体に優先順位を付けるために、原線維ＡβｐＥ３－４２に結合する抗体の能力を評価した。抗ＡβｐＥ３抗体ＡＣ－２６４７１３は、ヒトＡβｐＥ３及びカニクイザルＡβｐＥ３とは交差反応するが、マウスＡβｐＥ３にもラットＡβｐＥ３にも結合しない。
本明細書で使用される場合、「抗体」（Ａｂ）という用語は、特定の抗原、例えば、ヒトＡβｐＥ３原線維に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。本発明の概念の抗ＡβｐＥ３抗体は、ＡβｐＥ３に結合し、それにより、免疫系をモジュレートする。本発明の概念の抗ＡβｐＥ３抗体は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方に超可変領域としても公知の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と称される。当技術分野で公知の通り、抗体の超可変領域を線引きするアミノ酸部分／境界は、状況及び当技術分野で公知の種々の定義に応じて変動し得る。可変ドメイン内のいくつかの部分は、これらの部分が、一連の基準のうちの１つの下では超可変領域内にあるとみなされ得るが、一方、異なる一連の基準の下では超可変領域の外側にあるとみなされるという点で、ハイブリッド超可変部分とみなされ得る。これらの部分の１つ以上は、延長された超可変領域内にも見いだされ得る。本発明の概念は、これらのハイブリッド超可変部分に改変を含む抗体を提供する。ネイティブな重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれが４つのＦＲ領域を含み、ＦＲ領域はβ－シート立体配置を主に取り、３つのＣＤＲと接続しており、ＣＤＲは、β－シート構造と接続し、一部の場合ではβ－シート構造の一部を形成するループを形成している。各鎖内のＣＤＲはＦＲ領域によって極めて近傍にまとめて保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与する。可変ドメイン内のＣＤＲ配列を同定し、番号付けするために使用され得るＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．１９８７）を参照されたい。
本開示の抗体は、これだけに限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体などを含めた、モノクローナルの、遺伝子操作された及び／又は他のやり方で性質が改変された抗体であり得る。種々の実施形態では、抗体は、抗体の定常領域の全部又は一部を含む。一部の実施形態では、定常領域は、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）及びＩｇＭから選択されるアイソタイプである。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＡβｐＥ３抗体は、ＩｇＧ１を含む。他の実施形態では、抗ＡβｐＥ３抗体は、ＩｇＧ２を含む。さらに他の実施形態では、抗ＡβｐＥ３抗体は、ＩｇＧ４を含む。本明細書で使用される場合、抗体の「定常領域」は、天然の定常領域、アロタイプ又はバリアントを包含する。
抗ＡβｐＥ３抗体の軽鎖定常領域は、カッパ（κ）軽鎖領域であってもラムダ（λ）領域であってもよい。λ軽鎖領域は、公知の亜型、例えば、λ１、λ２、λ３、又はλ４のうちの任意の１つであってよい。一部の実施形態では、抗ＡβｐＥ３抗体は、カッパ（κ）軽鎖領域を含む。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術によって産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、任意の真核生物クローン、原核生物クローン、又はファージクローンを含めた単一のクローンから、当技術分野で利用可能な又は公知の任意の手段によって引き出される。本発明の概念で有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマの使用、組換え及びファージディスプレイ技術、又はこれらの組合せを含めた、当技術分野で公知の多種多様な技法を使用して調製され得る。
「キメラ」抗体という用語は、本明細書で使用される場合、ラット又はマウス抗体などの非ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列及び典型的にはヒト免疫グロブリン鋳型から選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体を指す。
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、少なくとも１つ及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものも含み得る。
本開示の抗ＡβｐＥ３抗体は、２本の全長軽鎖及び２本の全長重鎖を含む全長（インタクトな）抗体分子を包含する。
ヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗ＡβｐＥ３抗体は、Ｆａｂアーム交換を妨げることが報告されているＳ２２８Ｐ変異を含み得る。例えば、Ｓｉｌｖａ，ＪＰら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２９０（９）、５４６２－５４６９（２０１５）を参照されたい。
治療及び診断への使用のためには、ＡβｐＥ３に対して高い親和性を有する抗ＡβｐＥ３抗体が望ましい可能性がある。したがって、本発明の概念は、ＡβｐＥ３に対して高い結合親和性を有する抗体を意図している。特定の実施形態では、抗ＡβｐＥ３抗体は、ＡβｐＥ３に少なくとも約２５ｎＭの親和性で結合するが、より高い親和性、例えば、少なくとも約２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、又はさらに高い親和性を示し得る。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＡβｐＥ３に約１ｐＭ～約１０ｎＭの範囲、約１００ｐＭ～約１０ｎＭの範囲、約１００ｐＭ～約１ｎＭの範囲、約１００ｐＭ～約２ｎＭの範囲の親和性、又は前述の値のいずれかの間にわたる親和性で結合する。
一部の実施形態では、本開示は、２セットの２つの異なる可変領域内に２セットの６つの異なる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、２本の全長重鎖及び２本の全長軽鎖を有するモノクローナル抗ＡβｐＥ３抗体を提供する。
一部の実施形態では、抗体は、ＡβｐＥ３に結合する、組換え、脱フコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅ）、ヒト化、ＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体である。
ある実施形態では、抗体は、以下の配列を含む６つのＣＤＲを含む：
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＨ ＣＤＲ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＨ ＣＤＲ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＨ ＣＤＲ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＬ ＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＬ ＣＤＲ２；及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む又は有するｖＬ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列又は配列番号７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む若しくは有する重鎖可変領域を含む：
Figure 2024512855000002
 一部の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列又は配列番号８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む若しくは有する軽鎖可変領域を含む：
Figure 2024512855000003
一部の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列又は配列番号９に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む若しくは有する重鎖を含む（定常領域が太字になっており、可変重ドメインに下線が引かれており、ＣＤＲに下線が引かれ、太字のイタリック体になっている（出現順に、それぞれ配列番号１～３に記載の通り））：
Figure 2024512855000004
一部の実施形態では、本開示の抗体は、Ｃ末端リシンが短縮された重鎖、例えば、Ｃ末端リシンが短縮／除去された配列番号９に記載の重鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列又は配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む若しくは有する軽鎖を含む（定常領域が太字になっており、可変重ドメインに下線が引かれており、ＣＤＲに下線が引かれ、太字のイタリック体になっている（出現順に、それぞれ配列番号４～６に記載の通り））：
Figure 2024512855000005
本発明の概念の実施形態は、配列番号９の重鎖配列をコードする核酸及び配列番号１０の軽鎖配列をコードする核酸も包含する。一部の実施形態では、例えば、配列番号９に記載の成熟重鎖配列は、配列番号１３に記載の核酸配列によってコードされるものであり得る（定常領域は太字の配列によってコードされ、可変重ドメインは下線が引かれた配列によってコードされ、ＣＤＲは下線が引かれ、太字のイタリック体になっている配列によってコードされる）：
Figure 2024512855000006
Figure 2024512855000007
一部の実施形態では、例えば、配列番号１０に記載の成熟軽鎖配列は、配列番号１４に記載の核酸配列によってコードされるものであり得る（定常領域は太字の配列によってコードされ、可変軽ドメインは下線が引かれた配列によってコードされ、ＣＤＲは下線が引かれ、太字のイタリック体になっている配列によってコードされる）：
Figure 2024512855000008
Figure 2024512855000009
遺伝暗号のコドン縮重の結果として、それぞれ配列番号９の重鎖配列、配列番号１０の軽鎖配列、配列番号１１の重鎖配列及び配列番号１２の軽鎖配列をコードする配列番号１３、１４、１５及び１６に記載の配列とは異なる核酸配列が本発明の概念の範囲から逸脱することなく意図されることが当業者には理解される。
一部の実施形態では、抗体は、ヒトＣＨ１、ヒトヒンジ、ヒトＣＨ２及びヒトＣＨ３ドメインを含むヒト重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、コードされる重鎖定常領域は、Ｆｃ部分を含み、ここで、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭアイソタイプである。ある実施形態では、ＦｃはＩｇＧ１であり、アロタイプはｚ、非ａである。ある実施形態では、軽鎖は、カッパ軽鎖である。
抗ＡβｐＥ３抗体をコードするポリヌクレオチド、発現系及び抗体の作製方法
本発明の概念は、抗ＡβｐＥ３抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖遺伝子をコードするポリヌクレオチド分子、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター及び本開示の抗ＡβｐＥ３抗体を産生することが可能な宿主細胞を包含する。
本開示の抗ＡβｐＥ３抗体は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖及び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製され得る。抗体を組換えによって発現させるために、宿主細胞に、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡ断片を有する１つ以上の組換え発現ベクターをトランスフェクトし、その結果、軽鎖及び重鎖を宿主細胞において発現させ、任意選択的に、宿主細胞が培養されている培地中に分泌させ、培地から抗体が回収され得る。
そのような抗ＡβｐＥ３抗体をコードするポリヌクレオチドを生成するために、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡ断片がまず得られる。これらのＤＮＡは、生殖細胞系列ＤＮＡ又は軽鎖及び重鎖可変配列をコードするｃＤＮＡを、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して増幅し、改変することによって得られ得る。
抗ＡβｐＥ３抗体関連ＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られたら、これらのＤＮＡ断片は、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換するために、標準の組換えＤＮＡ技法によってさらに操作され得る。これらの操作では、ＶＬをコードするＤＮＡ断片又はＶＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域又は柔軟なリンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。「作動可能に連結」という用語は、これに関連して使用される場合、２つのＤＮＡ断片が、２つのＤＮＡ断片にコードされるアミノ酸配列がインフレームのままになるように接合していることを意味するものとする。
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡと重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及び任意選択的にＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準のＰＣＲ増幅によって得られ得る。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域であってよいが、ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関しては、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結され得る。
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって全長軽鎖遺伝子（並びにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準のＰＣＲ増幅によって得られ得る。軽鎖定常領域は、カッパ定常領域であってもラムダ定常領域であってもよいが、ある特定の実施形態では、カッパ定常領域である。
抗ＡβｐＥ３抗体を発現させるために、上記の通り得られた部分的な又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡが、発現ベクターに、遺伝子が転写及び翻訳制御配列に作動可能に連結されるように挿入される。これに関連して、「作動可能に連結」という用語は、抗体遺伝子が、ベクターと、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写及び翻訳の調節というそれらの意図された機能を果たすようにライゲーションされていることを意味するものとする。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子は別々のベクターに挿入され得る、又は、より典型的には、両方の遺伝子が同じ発現ベクターに挿入される。
抗体遺伝子は、発現ベクターに、標準の方法（例えば、体遺伝子断片上の相補的な制限部位とベクターのライゲーション、又は制限部位が存在しない場合には平滑末端ライゲーション）によって挿入される。抗ＡβｐＥ３抗体関連軽鎖又は重鎖配列の挿入前に、発現ベクターが抗体定常領域配列をすでに有していてもよい。例えば、抗ＡβｐＥ３モノクローナル抗体関連ＶＨ及びＶＬ配列を全長抗体遺伝子に変換するための１つの手法は、抗ＡβｐＥ３モノクローナル抗体関連ＶＨ及びＶＬ配列を、それぞれ重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をすでにコードしている発現ベクターに挿入し、したがって、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントと作動可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントと作動可能に連結されることである。それに加えて、又はその代わりに、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるようにベクターにクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリン
タンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
本開示の組換え発現ベクターは、抗体鎖遺伝子に加えて、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。「調節配列」という用語は、抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を包含するものとする。
本開示の組換え発現ベクターは、抗体鎖遺伝子及び調節配列に加えて、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製開始点）及び選択マーカー遺伝子などの追加的な配列を有し得る。選択マーカー遺伝子により、ベクターに導入された宿主細胞の選択が容易になる。軽鎖及び重鎖を発現させるために、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターは標準の技法によって宿主細胞にトランスフェクトされる。様々な形態の「トランスフェクション」という用語は、外因性ＤＮＡを原核生物の又は真核生物宿主細胞に導入するために一般に使用される多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどを包含するものとする。
本開示の抗体を、原核生物宿主細胞又は真核生物宿主細胞のいずれにおいても発現させることが可能である。ある特定の実施形態では、抗体の発現は、適当にフォールディングされており、免疫学的に活性な抗体が最適に分泌される真核細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞において実施される。本開示の組換え抗体を発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＫａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、１９８２、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１～６２１に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるＵｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、１９８０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６～４２２０に記載されているＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞を、宿主細胞における抗体の発現又は宿主細胞が成長している培養培地中への抗体の分泌が可能になるのに十分な期間にわたって培養することによって産生される。抗体は、標準のタンパク質精製方法を使用して培養培地から回収され得る。宿主細胞はまた、インタクトな抗体の一部分、例えば、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子を産生させるためにも使用され得る。上記の手順の変動は本開示の範囲内に入ることが理解される。例えば、宿主細胞に、本開示の抗ＡβｐＥ３抗体の軽鎖又は重鎖のいずれか（両方ではない）をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが望ましい場合がある。
組換えＤＮＡ技術は、ＡβｐＥ３への結合に必要でない、軽鎖及び重鎖のいずれか又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するためにも使用され得る。そのような短縮されたＤＮＡ分子から発現される分子も本開示の抗体に包含される。
本開示の抗ＡβｐＥ３抗体の組換え発現のために、宿主細胞は、２つの本開示の発現ベクター、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターを同時トランスフェクトされ得る。２つのベクターは、同一の選択マーカーを含有してもよく、それぞれが別々の選択マーカーを含有してもよい。あるいは、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一のベクターが使用され得る。
抗ＡβｐＥ３抗体の１つ以上の部分をコードするポリヌクレオチドが得られたら、例えば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体、Ｆｃ受容体に対する親和性が低下した抗体、例えば、ＬＡＬＡ変異を有する抗体、又はサブクラスが異なる抗体をコードするポリヌクレオチドを生成するために、さらなる変更又は変異がコード配列に導入され得る。抗体をコードするポリヌクレオチドを生成するためにコード配列に導入することができるさらなる変更及び／又は変異は、それだけに限定されないが当業者に公知の任意の方法によって実現され得、生成されたポリヌクレオチドは、例えば、さらなる抗ＡβｐＥ３抗体、例えば、Ｆｃ受容体に対する親和性が低下した抗ＡβｐＥ３抗体及び／又はサブクラスが異なる抗ＡβｐＥ３抗体を産生させるために使用されることが理解される。
本開示の抗ＡβｐＥ３抗体は、化学合成によって又は無細胞プラットフォームを使用することによっても作出され得る。
抗ＡβｐＥ３抗体の精製
本開示のポリペプチドは、組換え発現によって産生されたら、タンパク質の精製のための当技術分野で公知の任意の方法によって精製され得る。
抗ＡβｐＥ３抗体は、一旦単離されてから、さらに精製され得る。
組成物
本開示の抗体は、対象への投与に適した組成物として提供され得る。一部の実施形態では、抗体組成物は、本開示の抗体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
主題の抗体の特性の要約
これだけに限定されないがＡＣ－２６４７１３によって例示される主題の抗体の特性として、以下が挙げられる：
ヒトＡβｐＥ３原線維に対する高親和性結合、例えば、例えば実施例１の直接結合ＥＬＩＳＡによって決定される、ヒトＡβｐＥ３－４２原線維に対するＥＣ５０が約２．５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、又は約０．０５ｎＭ以下、又は約０．０５ｎＭ～約２．５ｎＭのＥＣ５０の値の任意の範囲であること。
ヒトＡβｐＥ３原線維に対する高特異性結合、例えば、ヒトＡβｐＥ１１－４０原線維と有意に交差反応しないこと、並びにヒト、サル、イヌ、ウサギ、ラット及びマウスを含めた全ての種由来のＡβ１－４０と有意に交差反応しないこと。
サイトカイン放出アッセイによって決定される良好な免疫安全性。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、例えば、アミロイド斑を含有するＡＤ脳への０．４μｇ／ｍＬのＥＣ５０での結合を用量依存的に示し得るが、一方、アミロイド斑が存在しない非ＡＤヒト、ラット、又はカニクイザル脳組織には結合しない。
アミロイド前駆体タンパク質及びプレセニリン１のヒト導入遺伝子を発現するＡＰＰＰＳ１－２１マウスモデルを使用した試験のデータは、ＡＣ－２６４７１３が、単回注射後、脳に進入し、Ａβ斑に結合することを明らかにした。ＡＣ－２６４７１３は、ＡＤを有するドナー由来のヒト脳組織内のアミロイド斑にも結合する。さらに、インビトロデータは、ＡＣ－２６４７１３の断片結晶化可能（Ｆｃ）部分が、ｈｉＰＳＣ由来食細胞に媒介される斑の除去を誘発するために十分なエフェクター機能を有することを実証した。ＡＰＰＰＳ１－２１マウスを使用した急性微小出血モデルにおいて評価したところ、ＡＣ－２６４７１３は微小出血を誘導しなかった。総合すると、データは、十分なエフェクター機能を有するＡＣ－２６４７１３、即ち抗ヒトＡβｐＥ３原線維モノクローナル抗体がＡＤ脳からアミロイド斑を除去することを裏付けている。
使用方法
複数の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＤを有する患者を本開示の抗ＡβｐＥ３抗体を用いて治療することに関する。
「阻害すること（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」、「低減／低下させること（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）」又はこれらの用語の任意の変形形態は、例えば、ＡＤの治療及びＡＤに関連するＡβ斑の発生との関連では、所望の結果を実現するための任意の測定可能な減少又は完全な阻害を包含する。例えば、Ａβ斑の負荷量の、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約６５％以下、約７０％以下、約７５％以下、約８０％以下、約８５％以下、約９０％以下、約９５％以下、約９９％以下、若しくは少なくとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、若しくはそれよりも大きい、若しくはその中で導き出せる任意の範囲の減少（除去）、又はＡＤを有する患者におけるＡβ斑の発生の低減及びＡＤを有する患者の治療が存在し得る。
本明細書に記載されている本発明の概念の例示的な実施形態のある特定の特色及び特性を強調する以下の実施例は、例示目的で提供される。
［実施例１］ 組換えＡβタンパク質に結合する同定された組換えハイブリドーマｍＡｂのパネル
直接結合ＥＬＩＳＡを使用して、同定し、組換えによって発現させたｍＡｂのパネルの、ヒトＡβｐＥ３－４２原線維に結合する能力及びそれらのヒトＡβ１－４０、ヒトＡβ１－４２又はヒトＡβｐＥ１１－４０に対する交差反応性を評定した。ヒト、サル、イヌ及びウサギの間で配列同一性が１００％であることから、結合試験を、ヒトＡβ１－４０及びＡβ１－４２をこれらの他の種の代表として用いて行った。組換えヒトＡβタンパク質を０．２Ｍの炭酸－炭酸水素塩緩衝剤中に希釈した。Ａβタンパク質を、０．１ｍＭ／０．２ｍＭのストック溶液から１μｇ／ｍＬの作用濃度まで希釈し、ウェル当たり５０μＬ（５０ｎｇ／ウェル）を９６ウェルハーフエリア高結合ＥＬＩＳＡプレートに添加した。プレートを、４℃、１００ｒｐｍで振とうしながら一晩インキュベートした。コーティング後、プレートを、１９０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳを用い、自動プレート洗浄器を使用して４回洗浄した。プレートを、１９０μＬ／ウェルのＤＰＢＳ中２％ＢＳＡを用いてブロッキングし、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡ用の試薬をＤＰＢＳ中０．２５％ＢＳＡに希釈した。
Figure 2024512855000010
Figure 2024512855000011
ｍＡｂのパネルの希釈物を、希釈プレート中、ストック溶液から６７ｎＭ又は１００ｎＭのいずれかの作用１×初濃度に調製し、各ｍＡｂについて８点５×希釈系列を実施した。ブロッキングのためにインキュベートした後、プレートを、１９０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳを用い、自動プレート洗浄器を使用して４回洗浄した。１：１０，０００希釈度の抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰを検出のために調製し、５０μＬを各ウェルに添加した。プレートを室温で３０分間インキュベートした。１×ＰＢＳを用いて４回洗浄した後、ＴＭＢ基質（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、００２０２３）５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを、発色するまで室温で約５～１０分間インキュベートした。反応を、２Ｎの硫酸をウェル当たり５０μＬ添加することによって停止させた。プレートをプレートリーダーで読み取って、４５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ４５０）を得た。ｍＡｂのＡβタンパク質に対する結合（ＥＣ５０）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．４．３において非線形回帰（４パラメータ用量反応曲線モデル：Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（ＴｏｐＢｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）＊Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ）））を使用して算出した。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＡＣ－２３３６６１は、ＡβｐＥ３－４２種に対して特異性及び選択性を示し、これをヒト化のために選択した。ＡＣ－２６４７１３は、ＡＣ－２３３６６１のヒト化バージョンである。
一部の場合では、ＡＣ－２６４７１３を、比較用抗体を使用して特徴付ける。比較のために実験に含めた抗体のアミノ酸配列を以下に記載する：
Figure 2024512855000012
［実施例２］ 結合特異性及びエピトープ同定
Ａ．ヒトＡβｐＥ３－４２原線維に対する結合特異性
ＡＣ－２６４７１３のヒトＡβｐＥ３－４２原線維に対する結合を、抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰの代わりに抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰを検出のために使用したこと以外は実施例１に記載されている通りの方法を使用して評定した。ＡＣ－２６４７１３のヒトＡβｐＥ３－４２原線維に対する結合のＥＣ５０値は、０．７ｎＭである。図１は、ＡＣ－２６４７１３のヒトＡβｐＥ３－４２原線維への代表的な結合を示す。
Ｂ．エピトープ同定
以下に列挙する、Ｃ末端にビオチンを伴う、アミノ酸３から出発して各アミノ酸がグリシン点位置変化で置換された、Ｎ末端３～１６アミノ酸長由来の１０種のビオチン化ペプチドを生成した。
Figure 2024512855000013
ＡＣ－２６４７１３のペプチドに結合する能力を、直接結合ＥＬＩＳＡによって評定した。結合が減少すれば、その残基が、ＡＣ－２６４７１３がＡβｐＥ３－４２原線維に結合するために必要であることが示される。組換えヒトＡβビオチン化ペプチドを蒸留水中に希釈した。Ａβペプチドを２μｇ／ｍＬの作用濃度まで希釈し、ウェル当たり５０μＬ（１００ｎｇ／ウェル）を９６ウェルハーフエリア高結合ＥＬＩＳＡプレートに添加した。プレートを４℃、１００ｒｐｍで振とうしながら一晩インキュベートした。コーティング後、プレートを、１９０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳを用い、自動プレート洗浄器を使用して４回洗浄した。プレートを、１９０μＬ／ウェルのＤＰＢＳ中２％ＢＳＡを用いてブロッキングし、室温で１時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡ用の試薬をＤＰＢＳ中０．２５％ＢＳＡに希釈した。
ＡＣ－２６４７１３の希釈物を、希釈プレート中、ストック溶液から、６７ｎＭ又は１００ｎＭのいずれかの作用１×初濃度まで調製し、ｍＡｂの８点５×希釈系列を実施した。ブロッキングのためにインキュベートした後、プレートを、１９０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳを用い、自動プレート洗浄器を使用して４回洗浄した。１：１０，０００希釈度の抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰをＡＣ－２６４７１３検出のために調製し、５０μＬを各ウェルに添加した。プレートを室温で３０分間インキュベートした。ＰＢＳを用いて４回洗浄した後、ＴＭＢ基質５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを、発色するまで室温で約５～１０分間インキュベートした。反応を、２Ｎの硫酸をウェル当たり５０μＬ添加することによって停止させた。プレートをＣｌａｒｉｏＳｔａｒプレートリーダーで読み取って、４５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ４５０）を得た。ＡＣ－２６４７１３のＡβタンパク質への結合（ＥＣ５０）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８．４．３で非線形回帰（４パラメータ用量反応曲線モデル：Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（ＴｏｐＢｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）＊Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ）））を使用して算出した。３回の独立した実験を実施した。
結果を下記の表に要約する。
Figure 2024512855000014
ＡＣ－２６４７１３のグリシン変異ペプチドへの結合の解析から、残基ｐｙｒｏ、３、４及び５が結合のために重要であることが示される。興味深いことに、ＡＣ－２６４７１３は、ｐＥ３－１６と比較して結合効力は３分の１に低減するが、Ｅ３－１６に結合し、これは、組換えＡβペプチド調製物におけるグルタミン酸のピログルタミン酸への自発的変換に起因し得る。
［実施例３］ ＡＣ－２６４７１３のＡＤ脳組織内のアミロイド斑への結合
固定されていない２０μｍの組織切片を、ヒト死体ＡＤ脳の大脳皮質からクリオスタットを使用して調製し、ガラススライドに解凍マウント（ｔｈａｗ－ｍｏｕｎｔ）した。次いで、組織切片を、０．３％Ｈ２Ｏ２を含有するトリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）中で１０分間インキュベートした。ＴＢＳで３回洗浄した後、切片を、３％乳を含有するＴＢＳ中で３０分間インキュベートした。次いで、ビオチン化ＡＣ－２６４７１３を試料に添加し、４℃で一晩インキュベートした。ＴＢＳで３回洗浄した後、免疫反応性を、１：４００のＡＢＣ Ｅｌｉｔｅ中で１時間、その後、ＤＡＢ中で５分間インキュベートすることによって可視化した。
画像を全ての試料からスライドスキャナーを使用して取得した。ＡＤ試料（ｎ＝６）中のビオチン化ＡＣ－２６４７１３のＩＲを、ＨＡＬＯＴＭ画像解析ソフトウェアｖ３．１．１０７６．４２３のＡｒｅａ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎモジュールを使用して数量化した。このソフトウェアを使用し、灰白質の輪郭を示し、「閾値」を、染色条件について盲検化された観察者が決定した。閾値は、ＤＡＢシグナルがソフトウェアによって認識され、バックグラウンド／非特異的染色が解析から除外されるように設定された。適切な閾値が設定されたら、ソフトウェアにより、陽性シグナルを含有する目的の面積パーセンテージを測定した。
非線形回帰分析を、Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．１．０（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して行った。可変勾配モデル、ＩＲ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｘ ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ）＊（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（Ｘ ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ＋ＥＣ５０ ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ）が占める％面積を使用し、ここで、Ｂｏｔｔｏｍはゼロに固定し、Ｔｏｐは斑が占める典型的な総面積として１０％に固定した。６体のドナー全てについてのデータを複合データフィッティングで解析した。
ＡＤ脳組織（ｎ＝６）において、ＡＣ－２６４７１３は、斑に、０．４μｇ／ｍｌ（信頼区間：０．１～０．７μｇ／ｍｌ）のＥＣ５０で、０．５～１００μｇ／ｍＬの範囲で濃度依存的に結合した（図２）。比較のために、ＡＤ脳組織に結合する比較用抗体Ａｂ１のＥＣ５０は、１２μｇ／ｍｌであると推定された（図２。信頼区間：８～１７μｇ／ｍｌ）。ＡＣ－２６４７１３及びＡｂ１のどちらのＨｉｌｌ係数も１に近かった（それぞれ１．５及び０．８）。
図２は、前頭皮質由来の新鮮凍結ヒトＡＤ組織内のＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１が結合した斑の面積を示す。
［実施例４］ ｈｉＰＳＣ由来食細胞による固定されていないＡＰＰＰＳ１－２１脳組織からの刺激されたアミロイド斑除去
アッセイプロトコール
固定されていない、２０μｍの冠状脳組織切片を、クリオスタットにおいて２１カ月齢のＡＰＰＰＳ１－２１マウスから調製し、１２ｍｍのポリ－Ｄ－リシンがコーティングされたカバーガラスに解凍マウントした。乾燥した組織切片をＰＢＳで簡単に洗浄し、０μｇ／ｍｌ、又は用量ａ、用量ｂ若しくは用量ｃ（０μｇ／ｍｌ＜用量ａ＜用量ｂ＜用量ｃ）のＡＣ－２６４７１３と一緒に、ＰＢＳ中、４℃で一晩インキュベートした。ヒト人工多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）由来食細胞を添加する直前に、組織切片をＰＢＳで３回洗浄した。
ｈｉＰＳＣ由来食細胞を以前に記載されている通り生成した（ｖａｎ Ｗｉｌｇｅｎｂｕｒｇ、Ｂｒｏｗｎｅら、２０１３、Ｈａｅｎｓｅｌｅｒ、Ｓａｎｓｏｍら、２０１７）。簡単に述べると、解離したｈｉＰＳＣをＥＢ分化培地［Ｒｅｖｉｔａｃｅｌｌ、５０ｎｇ／ｍｌのヒトＶＥＧＦ、５０ｎｇ／ｍｌのヒトＢＭＰ－４（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）及び２０ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充したｍＴｅＳＲ－１］中、血球系胚様体（ＥＢ）に凝集させた。ＥＢを、ＥＢ維持培地［１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ、５５μＭの２－メルカプトエタノール、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＭ－ＣＳＦ及び２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－３を補充したＸ－ＶＩＶＯ １５］を含有するＴ７５培養フラスコ中で維持した。食細胞懸濁液をＥＢフラスコから収集し、直接、抗体で処理したＡＰＰＰＳ１－２１組織切片上、食細胞培養培地［１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ、５５μＭの２－メルカプトエタノール、Ｎ－２ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）及び１００ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＭ－ＣＳＦを補充したＡｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ／Ｆ１２］中、０．５ｍｌ当たり細胞０．４×１０６個の密度で、３７℃／５％ＣＯ２で７２時間培養した。
ｉＰＳＣ由来食細胞と共培養した後、組織切片を４％パラホルムアルデヒド中に固定し、０．０２５％チオフラビンＳを用いて線維状の斑を標識付けした。蛍光画像を、スライドスキャナーを使用して取得し、ＨＡＬＯ Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ３．１．１０７６．４２３を使用して解析した。線維状の斑の面積を測定するために、対照で処理した組織切片からの蛍光画像を閾値処理して高密度の斑を強調し、続いて、組織切片を同一のパラメータを用いて閾値処理した。データは、高密度の斑によって占有された測定面積（閾値処理された面積）を切片当たりの総組織面積に対するパーセンテージとして表わしたものとして報告されている。
統計解析を、Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ８．４．３（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して行った。高密度の斑の面積測定値を、一元配置ＡＮＯＶＡ、その後、ダネットの多重比較検定によって解析し、各ＡＣ－２６４７１３処置群（用量ａ、用量ｂ及び用量ｃ）の平均値と対照群（０μｇ／ｍｌ）の平均値を比較した。群当たり組織切片のｎ＝６。図３に示されている通り、用量ａ、用量ｂ、又は用量ｃでｈｉＰＳＣ由来食細胞と共培養した後、ＡＣ－２６４７１３により、アミロイド斑のパーセント面積の統計的に有意な低下が導かれた（ｎ＝６、濃度ａ～ｃと０μｇ／ｍｌの比較について、調整済ｐ値は０．０００１未満）。
［実施例５］ ＡＰＰＰＳ１－２１マウスにおけるインビボＡＣ－２６４７１３曝露及び標的結合（ＰＫ／ＴＢ）
ＡＰＰＰＳ１－２１動物における抗体曝露及び標的結合のインビボ試験を行って、ＡＣ－２６４７１３投与後の脳及び血清分布並びにインビボ斑結合潜在性を決定した。
動物
８．５～１２．５カ月齢のＡＰＰＰＳ１－２１（Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（Ｔｈｙ１－ＡＰＰＳｗ，Ｔｈｙ１－ＰＳＥＮ１＊Ｌ１６６Ｐ）２１Ｊｃｋｒ））（Ｒａｄｄｅ，Ｂｏｌｍｏｎｔら、２００６）をＰＫ／ＴＢ試験に使用した。元の繁殖用マウスをＭａｔｈｉａｓ Ｊｕｃｋｅｒの研究室からＦａ．Ｋｏｅｓｌｅｒ（Ｇｅｒｍａｎｙ）とのライセンス契約の下で入手した。マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において繁殖させ、ＡｂｂＶｉｅ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨの動物施設に送り、実験の実行のために加齢させた。動物の健康及び安楽を獣医が管理した。マウスを温度制御及び湿度制御された部屋に１２時間：１２時間の暗／明サイクルで入れ、水及び食物を自由に摂取させた。
インビボ方法
本試験に関しては、ＡＣ－２６４７１３並びに比較用抗体Ａｂ１を、用量１～４の範囲で試験し、尾静脈を介して静脈内投薬した。雌動物３匹を各用量に使用した。調査時点は７２時間ｐ．ａであった。試験終了時に、７２時間時点で心臓穿刺によって血液を抜き取り、血清を単離した。続いて、動物に１０００Ｕ／Ｌのヘパリンを伴う低温ＰＢＳを１０分間灌流し、脳を切開し、正中矢状に半分に切り、右脳半球を免疫組織化学的検査のために調製した。左皮質、前脳の残り及び小脳を単離し、液体窒素中で別々に急速冷凍し、左皮質を、ＥＬＩＳＡを用いたＡＣ－２６４７１３の数量化のために使用した。
組織処理、免疫組織化学的検査及び標的結合の解析
免疫組織化学的検査に使用する右半球を、１０％ホルマリンで２４時間にわたって滴下固定し、次いで、７０％エタノールに切り換えた。組織をトリミングし、試料を標準のエタノール系、その後、キシレンを使用して脱水し、パラフィン包埋した（ＡＳＰ３００、Ｌｅｉｃａ）。脳半球を、試験物及び用量に基づいてランダム化し、ランダム化された半球を含有するパラフィンブロックを４つ生成した。４μｍのパラフィン切片を調製し、自動染色器において、クエン酸緩衝剤に基づく熱誘導性抗原回復溶液及び３，３’－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）に基づく検出を使用して処理した。インビボ投薬されたＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１を検出するために、ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を検出するビオチン化ロバ抗ヒトＦ（ａｂ’）２断片（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ）を３．７μｇ／ｍＬの濃度で使用した。ＡβｐＥ３標的面積を、０．３５μｇ／ｍＬのＡＣ－２６４７１３又は０．２６μｇ／ｍＬの濃度の比較用抗体Ａｂ１を免疫染色のために適用することによって決定した。
画像をＰ１０００スキャナーで収集した。各分子についてＡβｐＥ３への結合を数量化するために、ＡＣ－２６４７１３又は比較用抗体Ａｂ１によって占有された面積を、隣接する区域からの斑におけるそれぞれＡＣ－２６４７１３又は比較用抗体Ａｂ１のＩＲに基づいてＡβｐＥ３の総標的面積を規定することによって正規化した。そのために、脳当たり３つの対応する切片を、ＨＡＬＯＴＭ画像解析ソフトウェアのＡｒｅａ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎモジュールを使用して解析した。各切片について、皮質の輪郭を示した。このソフトウェアを使用し、「閾値」を、動物の処置について盲検化された観察者が決定した。閾値は、ｈＩｇＧ又はＡＣ－２６４７１３又は比較用抗体Ａｂ１免疫反応性の陽性褐色ＤＡＢ染色がソフトウェアによって認識され、バックグラウンド／非特異的染色が解析から除外されるように設定された。適切な閾値が設定されたら、ソフトウェアにより、ｈＩｇＧ又はＡＣ－２６４７１３又は比較用抗体Ａｂ１についての陽性免疫反応性を含有する目的（皮質）の面積のパーセンテージを測定した。次いで、皮質におけるｈＩｇＧ ＩＲ面積をＡＣ－２６４７１３ ＩＲ又はＡｂ１ ＩＲに対して正規化し、値をプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（バージョン８、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）で解析した。データを平均±ＳＥＭとして表し、一元配置ＡＮＯＶＡ、その後、クラスカル・ワリス多重比較検定）によって解析した。
血清及び脳におけるＡＣ－２６４７１３レベルの評価
血清試料及び脳試料を、ＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１について、ヒトＩｇＧ１を検出する電気化学発光イムノアッセイを使用して分析した。簡単に述べると、血清を、ＰＢＳ又は適切な濃度の試料マトリックスを含有するＰＢＳを用いて希釈して、全試料中１％の血清という最終濃度を実現した。希釈係数を予測される分析物レベルに従って選択した。試料を、３つの希釈度で測定し、そのうち少なくとも２つの希釈度は、許容される測定範囲内に入った。希釈した試料を、ヒトＩｇＧ１を捕捉するビオチン化抗体ａｂ９９７５７（０．５μｇ／ｍＬ）で予めコーティングしたストレプトアビジンプレートにローディングした。プレートを１時間インキュベートし、ＴＴＢＳ（Ｔｒｉｓ Ｔｗｅｅｎ緩衝生理食塩水）で洗浄し、ヒトＩｇＧ１をスルホタグ付けしたＥＢ８９抗体（１μｇ／ｍＬ））を用いて検出した。
脳試料の分析に関しては、一般的なアッセイ手順を同じままにした。実験の前に、脳組織をホモジナイゼーション緩衝剤（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＮａ２ＶＯ４、１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．５）、０．２５％Ｎａデオキシコール酸、１％ＮＰ－４０及び１×プロテアーゼ阻害剤錠）中、１：５にホモジナイズした。分析のために、希釈係数を適切に調整し、ＣＳＦ試料については１：４０及び脳ホモジネートについては１：４とした。
ＡＣ－２６４７１３又はＡｂ１を、それぞれの検量線を構築するために使用し、試験試料と同じ濃度の生物学的マトリックスを含む対照試料を使用した。血清試料の分析に関しては、検量線は、３１～７５００ｎｇ／ｍＬの濃度範囲を包含する７個の標準点に基づくものであった。ＣＳＦ及び脳に関しては、１１個の標準点を使用して、０．０２３～１３３０ｎｇ／ｍＬの濃度範囲を包含する検量線を生成した。それぞれ両方の分析物について、ＬＬＯＱは血清については３１ｎｇ／ｍＬであり、脳については０．１５２ｎｇ／ｇであった。
標的結合のインビボ効力についてのデータ解析
皮質抗体濃度に応じた正規化されたＩＲシグナルの非線形回帰分析を、Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．１．０（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して行った。可変勾配モデル、免疫反応性が占める％面積［ｎｏｒｍ．］＝Ｂｏｔｔｏｍ＋Ｘ＊（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（Ｘ＋ＥＣ５０）を使用し、ここで、Ｔｏｐを１００％に固定した。
ｈＩｇＧ染色された切片の画像解析により、皮質における試験物ＡＣ－２６４７１３及び比較用抗体Ａｂ１の用量依存的な増加及び斑への局在化が明らかになった。皮質におけるＡβｐＥ３免疫反応性斑の分析及びｈＩｇＧ ＩＲのＡｂ１ ＩＲ又はＡＣ－２６４７１３ ＩＲに対する正規化でも、ＡＣ－２６４７１３並びに比較用抗体Ａｂ１によって占められる斑の範囲の用量依存的な増加が示された（図４）。
測定した全ての濃度が数量化の限界の範囲内に入った。濃度は、皮質及び血清のどちらにおいても、試験した全ての用量で用量依存的に上昇し、ＡＣ－２６４７１３の平均濃度は皮質では０．００１６～０．２９μｇ／ｇの範囲であり、血清では４．５～３５２μｇ／ｍＬの範囲であった。組織の血清に対する比（Ｔ／Ｓ）は０．０３％～０．０８％であった。
観察された個々の動物の脳内濃度とＩＲによって数量化される標的結合を相関付けると（図５）、ＡＣ－２６４７１３は、ＡβｐＥ３に０．０３１μｇ／ｇ（信頼区間：０．０１６～０．０６５μｇ／ｇ）のＥＣ５０で結合し、それと比較して、比較用抗体Ａｂ１は、より低い効力で結合し、ＥＣ５０は０．２８μｇ／ｇ（信頼区間：０．１３～１．２μｇ／ｇ）である。
［実施例６］ ＡＰＰＰＳ１－２１マウスを使用した、急性微小出血モデルにおけるＡＣ－２６４７１３の評価
インビボ試験を行って、ＡＰＰＰＳ１－２１マウスを使用した急性微小出血モデルにおいて、ＡＣ－２６４７１３マウス前駆抗体により微小出血が誘導されるかどうかを決定した。
動物
１５～１７カ月齢のＡＰＰＰＳ１－２１マウスを微小出血試験に使用した。マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）で繁殖させ、ＡｂｂＶｉｅ Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒの動物施設に送り、加齢させ、実験を実行するためにＣａｍｂｒｉｄｇｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ＣＲＣ）動物施設に移した。マウスを温度制御及び湿度制御された部屋に１２時間：１２時間の暗／明サイクルで入れ、水及び食物を自由に摂取させた。ＣＲＣ動物施設内の動物を、個別に換気されるケージ内、１２ｈ：１２ｈ明－暗サイクルで集団飼育し、食物及び水を自由に摂取させた。マウスを少なくとも７２時間にわたって気候順化させた後に投薬を行った。
インビボ方法
以前に記載されている（Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｈｅｒｍａｎｓら、２０２１）モデルにおいて、いくつかの改変を伴って微小出血試験を実施した。１５カ月齢の時点で、ＡβｐＥ３は大脳脈管構造において検出可能であったが、ＡＰＰＰＳ１－２１マウスにおける他のＮ末端Ａβ種ほど豊富ではなかった。マウス（ｎ＝４、性別混在）にＡＣ－２３３６６１の単回投薬を腹腔内注射によって行った。マウスＩｇＧを陰性対照として使用し（ｎ＝４、性別混在）、ＡＤを有する患者においてＡＲＩＡを引き起こすｍｕ ＩｇＧ２ａ／ｋを有する比較用抗体Ａｂ２を陽性対照として使用した（ｎ＝５）。陰性対照及び陽性対照の両方を腹腔内注射によって投与した。注射の３日後、又は重度の有害作用が観察されたらすぐに（いずれか先に生じた方）、マウスを、ペントバルビタールナトリウムを用いて安楽死させ、ＰＢＳを灌流し、脳を迅速に取り出した。
微小出血についての組織学的分析
次いで、脳の右半球を２４時間にわたって１０％ホルマリンに滴下固定し、次いで、３０％スクロースを含有するＰＢＳに切り換えた。凍結滑走式ミクロトームを使用して各脳半球の吻側から尾側末端まで厚さ５０μｍの連続した冠状切片を採取した。
赤血球数量化のために、１２枚に１枚の切片をガラススライドにマウントし、ヘマトキシリンを用いて対比染色を行った。
ヘモジデリン沈着物をプルシアンブルー染色によって染色した。１２枚に１枚の切片をガラススライドにマウントした。次いで、切片をＰＢＳ中で水分を戻し、０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を含有するＰＢＳ中で透過処理した。飽和ＮａＣｌ及び０．０１ＭのＮａＯＨを含有する８０％エタノール中でインキュベートした後、切片を、飽和ＮａＣｌ、０．０１ＭのＮａＯＨ及び０．５％Ｃｏｎｇｏ Ｒｅｄを含有する８０％エタノール中でインキュベートした。次いで、スライドを８０％エタノール及び通常の生理食塩水で洗浄し、その後、０．１２ＭのＨＣｌ中２％フェロシアン化カリウム中でインキュベートした。ＰＢＳで洗浄後、スライドを脱水し、カバーガラスを乗せ、スキャンした。
スライドスキャナーをしてスキャンしたら、脳切片を、ＨＡＬＯＴＭ画像解析ソフトウェアのＡｒｅａ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎモジュールを使用して解析した。このソフトウェアを使用し、切片全体の輪郭を示し、「閾値」を、動物の処置について盲検化された観察者が決定した。閾値は、赤血球又はプルシアンブルーシグナルがソフトウェアによって認識され、バックグラウンド／非特異的染色が解析から除外されるように設定された。適切な閾値が設定されたら、ソフトウェアにより、陽性シグナルを含有する目的（切片全体）の面積のパーセンテージを測定した。各動物について、６００μｍ間隔の一連の連続切片の平均値を算出した。
比較用抗体Ａｂ２では、３日以内に有意な微小出血が誘導された。対照的に、ＡＣ－２６４７１３のマウス前駆抗体で処置したＡＰＰＰＳ１－２１マウスはこの期間中、健康なままであり、赤血球及びヘモジデリン沈着物は陰性対照ｍＩｇＧ２ａ／ｋ抗体と同等であった（図６）。
実施例の要約
直接結合ＥＬＩＳＡにおいて、ＡＣ－２６４７１３は、ヒトＡβｐＥ３－４２原線維に０．７ｎＭのＥＣ５０で結合する。ＡＣ－２６４７１３は別のヒトピログルタミン酸修飾Ａβ種であるＡβｐＥ１１－４０とは交差反応しなかった。ＡＣ－２６４７１３はまた、ヒト、サル、イヌ、ウサギ、ラット及びマウスを含めた全ての種由来のＡβ１－４０とも交差反応しなかった。さらに、アミノ酸残基ｐｙｒｏ、３、４及び５がＡＣ－２６４７１３のＡｂｐＥ３－４２への結合に極めて重要であり得る。固定されていない脳組織に対する免疫染色により、ＡＣ－２６４７１３が、アミロイド斑を含有するＡＤ脳に用量依存的に０．４μｇ／ｍｌのＥＣ５０で結合するが、一方、アミロイド斑が存在しない非ＡＤヒト、ラット又はカニクイザル脳組織には結合しないことが実証された。ＡＣ－２６４７１３をｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシスアッセイにおいて濃度ａ～ｃで試験したところ、ＡＣ－２６４７１３はｈｉＰＳＣ由来食細胞を活性化して、斑を除去した。ＡＣ－２６４７１３をＡＰＰＰＳ１－２１マウスに単回ＩＶ注射後に全身注射した３日後、ＡＣ－２６４７１３は脳及び血清において検出され、曝露が用量依存的に増加し、斑に用量依存的に結合した。ＡＰＰＰＳ１－２１マウスを使用した急性微小出血モデルでは、ＡＣ－２６４７１３マウス前駆抗体では、単回ＩＰ注射後３日以内に微小出血は引き起こされなかった。総合すると、インビトロ及びインビボデータから、ＡＣ－２６４７１３、即ち、末梢投与後に脳内のアミロイド斑に結合し、ミクログリアファゴサイトーシスを活性化することができる十分なエフェクター機能を有する抗ＡβｐＥ３モノクローナル抗体の提唱される作用様式が例示される。前述のことから、アミロイド斑をＡＤ脳から除去することによってアルツハイマー病を治療するための使用に関するＡＣ－２６４７１３の適合性が示される。
例示的な実施形態
種々の特定の実施形態を例示し、記載してきたが、一部は以下に表される。種々の変化が本発明の概念の主旨及び範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解される。
１．（ｉ）３つのＣＤＲを含む可変重鎖（ｖＨ）；及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含む可変軽鎖（ｖＬ）を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
２．配列番号７として記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８として記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
３．配列番号９として記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
４．ＩｇＧ定常領域を含む、実施形態１の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
５．Ｆｃ部分を含むヒト重鎖定常領域を含み、Ｆｃ部分が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭアイソタイプである、実施形態４の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
６．カッパ軽鎖定常領域を含む、実施形態５の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
７．実施形態１の抗ヒトＡβｐＥ３抗体を含む組成物。
８．神経変性障害を治療するための方法であって、実施形態１の抗ヒトＡβｐＥ３抗体を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
９．神経変性障害が、アルツハイマー病（ＡＤ）である、実施形態８の方法。
１０．抗ヒトＡβｐＥ３抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗体が、（ｉ）３つのＣＤＲを含むｖＨ鎖；及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含むｖＬ鎖を含み、
ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
ポリヌクレオチド。
１１．実施形態１０のポリヌクレオチドを含むベクター。
１２．実施形態１１のベクターを用いて形質転換された真核生物宿主細胞。
１３．哺乳動物宿主細胞である、実施形態１２の真核生物宿主細胞。
１４．抗ヒトＡβｐＥ３抗体を産生する方法であって、（ａ）実施形態１３の真核生物宿主細胞を培養するステップ及び（ｂ）抗ヒトＡβｐＥ３抗体を回収するステップを含む、方法。
１５．２本の重鎖及び２本の軽鎖を含み、各重鎖が、配列番号３７として記載されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖が、配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む、抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
当業者は、本発明の概念が、目的を遂行し、言及されている並びにそれらの固有の結末及び利点を得るために十分に適合することを容易に理解する。本明細書に記載されている特定の実施形態は、代表的及び例示的なものであることが意図されており、本発明の範囲を限定するものではない。特許請求の範囲によって定義される本発明の主旨に包含されるその中及び他の使用における変化は、当業者には明らかになる。
参考文献
Ａｉｓｅｎ，Ｐ．Ｓ．、Ｊ．Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｒ．Ｄｏｏｄｙ，Ｌ．Ｋｒａｍｅｒ，Ｓ．Ｓａｌｌｏｗａｙ，Ｄ．Ｊ．Ｓｅｌｋｏｅ，Ｊ．Ｓｉｍｓ，Ｒ．Ａ．Ｓｐｅｒｌｉｎｇ及びＢ．Ｖｅｌｌａｓ（２０２０）。「Ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｔｉ－Ａｍｙｌｏｉｄ Ｔｒｉａｌｓ．」、Ｊ Ｐｒｅｖ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ ７（３）：１４６～１５１。
Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ｍ．、Ｂ．Ｊ．Ｂａｃｓｋａｉ，Ｍ．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｇｕｉｌｌａｍｏｎ，Ｊ．Ｐｒｕｚｉｎ，Ｒ．Ｓｐｅｒｌｉｎｇ及びＳ．Ｊ．ｖａｎ Ｖｅｌｕｗ（２０２０）。「Ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ－ｏｎｅ ｐｅｐｔｉｄｅ、ｔｗｏ ｐａｔｈｗａｙｓ．」、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ １６（１）：３０～４２。
Ｈａｅｎｓｅｌｅｒ，Ｗ．、Ｓ．Ｎ．Ｓａｎｓｏｍ，Ｊ．Ｂｕｃｈｒｉｅｓｅｒ，Ｓ．Ｅ．Ｎｅｗｅｙ，Ｃ．Ｓ．Ｍｏｏｒｅ，Ｆ．Ｊ．Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｓ．Ｃｈｉｎｔａｗａｒ，Ｃ．Ｓｃｈｎｅｌｌ，Ｊ．Ｐ．Ａｎｔｅｌ，Ｎ．Ｄ．Ａｌｌｅｎ，Ｍ．Ｚ．Ｃａｄｅｒ，Ｒ．Ｗａｄｅ－Ｍａｒｔｉｎｓ，Ｗ．Ｓ．Ｊａｍｅｓ及びＳ．Ａ．Ｃｏｗｌｅｙ（２０１７）。「Ａ Ｈｉｇｈｌｙ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ Ｍｏｄｅｌ Ｄｉｓｐｌａｙｓ ａ Ｎｅｕｒｏｎａｌ－Ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｆｉｌｅ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ．」、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８（６）：１７２７～１７４２。
Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｊ．、Ｂ．Ｈｅｒｍａｎｓ，Ｍ．Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ，Ｅ．Ｂａｒａｌｅ－Ｔｈｏｍａｓ，Ｍ．Ｂｏｒｇｅｒｓ，Ｒ．Ｗｉｌｌｅｍｓ，Ｇ．Ｍｅｕｌｄｅｒｓ，Ｃ．Ｗｉｎｔｍｏｌｄｅｒｓ，Ｄ．Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｕｌｃｋ，Ａ．Ｂｏｔｔｅｌｂｅｒｇｓ，Ｌ．Ｖｅｒ Ｄｏｎｃｋ，Ｐ．Ｌａｒｓｅｎ，Ｄ．Ｍｏｅｃｈａｒｓ，Ｗ．Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｍ．Ｍｅｒｃｋｅｎ及びＢ．Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋ（２０２１）。「Ｐａｓｓｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ３ｐＥ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｂｅｔａ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｆａｖｏｒａｂｌｅ ｓａｆｅｔｙ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＢＡＣＥ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｐｌａｑｕｅ－ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｍｉｃｅ．」、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ １５４： １０５３６５。
Ｊａｗｈａｒ，Ｓ．、Ｏ．Ｗｉｒｔｈｓ及びＴ．Ａ．Ｂａｙｅｒ（２０１１）。「Ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍａｔｅ ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ（Ａｂｅｔａ）： ａ ｈａｔｃｈｅｔ ｍａｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．」、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８６（４５）：３８８２５～３８８３２。
Ｋｕｏ，Ｙ．Ｍ．、Ｍ．Ｒ．Ｅｍｍｅｒｌｉｎｇ，Ａ．Ｓ．Ｗｏｏｄｓ，Ｒ．Ｊ．Ｃｏｔｔｅｒ及びＡ．Ｅ．Ｒｏｈｅｒ（１９９７）。「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａ ｂｅｔａ ３－ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｙｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ ｎｅｕｒｉｔｉｃ ｐｌａｑｕｅｓ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｓ．」、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２３７（１）：１８８～１９１。
Ｐｅｎｎｉｎｋｉｌａｍｐｉ，Ｒ．、Ｈ．Ｍ．Ｂｒｏｔｈｅｒｓ及びＧ．Ｄ．Ｅｓｌｉｃｋ（２０１７）。「Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｎｔｉ－Ａｍｙｌｏｉｄ－β Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ａ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ Ｍｅｔａ－Ａｎａｌｙｓｉｓ．」Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １２（１）：１９４～２０３。
Ｒａｄｄｅ，Ｒ．、Ｔ．Ｂｏｌｍｏｎｔ，Ｓ．Ａ．Ｋａｅｓｅｒ，Ｊ．Ｃｏｏｍａｒａｓｗａｍｙ，Ｄ．Ｌｉｎｄａｕ，Ｌ．Ｓｔｏｌｔｚｅ，Ｍ．Ｅ．Ｃａｌｈｏｕｎ，Ｆ．Ｊａｇｇｉ，Ｈ．Ｗｏｌｂｕｒｇ，Ｓ．Ｇｅｎｇｌｅｒ，Ｃ．Ｈａａｓｓ，Ｂ．Ｇｈｅｔｔｉ，Ｃ．Ｃｚｅｃｈ，Ｃ．Ｈｏｌｓｃｈｅｒ，Ｐ．Ｍ．Ｍａｔｈｅｗｓ及びＭ．Ｊｕｃｋｅｒ（２００６）。「Ａｂｅｔａ４２－ｄｒｉｖｅｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｅａｒｌｙ ａｎｄ ｒｏｂｕｓｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．」、ＥＭＢＯ Ｒｅｐ ７（９）：９４０～９４６。
Ｓｅｌｋｏｅ，Ｄ．Ｊ．及びＪ．Ｈａｒｄｙ（２０１６）。「Ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｔ ２５ ｙｅａｒｓ．」ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８（６）：５９５～６０８。
Ｓｐｅｒｌｉｎｇ，Ｒ．Ａ．、Ｃ．Ｒ．Ｊａｃｋ，Ｊｒ．、Ｓ．Ｅ．Ｂｌａｃｋ，Ｍ．Ｐ．Ｆｒｏｓｃｈ，Ｓ．Ｍ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｂ．Ｔ．Ｈｙｍａｎ，Ｐ．Ｓｃｈｅｌｔｅｎｓ，Ｍ．Ｃ．Ｃａｒｒｉｌｌｏ，Ｗ．Ｔｈｉｅｓ，Ｍ．Ｍ．Ｂｅｄｎａｒ，Ｒ．Ｓ．Ｂｌａｃｋ，Ｈ．Ｒ．Ｂｒａｓｈｅａｒ，Ｍ．Ｇｒｕｎｄｍａｎ，Ｅ．Ｒ．Ｓｉｅｍｅｒｓ，Ｈ．Ｈ．Ｆｅｌｄｍａｎ及びＲ．Ｊ．Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ（２０１１）。「Ａｍｙｌｏｉｄ－ｒｅｌａｔｅｄ ｉｍａｇｉｎｇ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ａｍｙｌｏｉｄ－ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｉａｌｓ： ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｏｕｎｄｔａｂｌｅ Ｗｏｒｋｇｒｏｕｐ．」、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｅｍｅｎｔ ７（４）：３６７～３８５。
ｖａｎ Ｄｙｃｋ，Ｃ．Ｈ．（２０１８）。「Ａｎｔｉ－Ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ｐｉｔｆａｌｌｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｉｓｅ．」、Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ８３（４）：３１１～３１９。
ｖａｎ Ｄｙｃｋ，Ｃ．Ｈ．（２０１８）。「Ａｎｔｉ－ａｍｙｌｏｉｄ－β ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ｐｉｔｆａｌｌｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｉｓｅ．」、Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ８３（４）：３１１～３１９。
ｖａｎ Ｗｉｌｇｅｎｂｕｒｇ，Ｂ．、Ｃ．Ｂｒｏｗｎｅ，Ｊ．Ｖｏｗｌｅｓ及びＳ．Ａ．Ｃｏｗｌｅｙ（２０１３）。「Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｐａｒｔｌｙ－ｄｅｆｉｎｅｄ ａｎｄ ｆｕｌｌｙ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．」、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８（８）：ｅ７１０９８．

Claims (15)

  1. （ｉ）３つのＣＤＲを含む可変重鎖（ｖＨ）及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含む可変軽鎖（ｖＬ）を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、
    ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
    ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
    ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
    抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  2. 配列番号７として記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８として記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  3. ２本の重鎖及び２本の軽鎖を含み、各重鎖が、配列番号９として記載されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖が、配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  4. ＩｇＧ定常領域を含む、請求項１に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  5. Ｆｃ部分を含むヒト重鎖定常領域を含み、Ｆｃ部分が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭアイソタイプである、請求項４に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  6. カッパ軽鎖定常領域を含む、請求項５に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
  7. 請求項１に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体を含む組成物。
  8. 神経変性障害を治療するための方法であって、請求項１に記載の抗ヒトＡβｐＥ３抗体を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
  9. 神経変性障害が、アルツハイマー病（ＡＤ）である、請求項８に記載の方法。
  10. 抗ヒトＡβｐＥ３抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗体が、（ｉ）３つのＣＤＲを含むｖＨ鎖；及び（ｉｉ）３つのＣＤＲを含むｖＬ鎖を含み、
    ｖＨ ＣＤＲ１が、ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号１）であり、
    ｖＨ ＣＤＲ２が、ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＹＭＫＲ（配列番号２）であり、
    ｖＨ ＣＤＲ３が、ＲＡＤＤＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号３）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ１が、ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（配列番号４）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ２が、ＡＡＴＳＬＡＤ（配列番号５）であり、
    ｖＬ ＣＤＲ３が、ＱＱＬＹＳＳＰＦＴ（配列番号６）である、
    ポリヌクレオチド。
  11. 請求項１０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  12. 請求項１１に記載のベクターを用いて形質転換された真核生物宿主細胞。
  13. 哺乳動物宿主細胞である、請求項１２に記載の真核生物宿主細胞。
  14. 抗ヒトＡβｐＥ３抗体を産生する方法であって、（ａ）請求項１３に記載の哺乳動物宿主細胞を培養するステップ及び（ｂ）抗ヒトＡβｐＥ３抗体を回収するステップを含む、方法。
  15. ２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む抗ヒトＡβｐＥ３抗体であって、各重鎖が、配列番号３７として記載されるアミノ酸配列を含み、各軽鎖が、配列番号１０として記載されるアミノ酸配列を含む、抗ヒトＡβｐＥ３抗体。
JP2023538973A 2021-10-28 2022-10-28 抗アミロイドベータ抗体及びその使用方法 Pending JP2024512855A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163263204P 2021-10-28 2021-10-28
US63/263,204 2021-10-28
PCT/US2022/078913 WO2023077091A1 (en) 2021-10-28 2022-10-28 Anti-amyloid beta antibodies and methods of using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024512855A true JP2024512855A (ja) 2024-03-21

Family

ID=86158849

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023538973A Pending JP2024512855A (ja) 2021-10-28 2022-10-28 抗アミロイドベータ抗体及びその使用方法

Country Status (9)

Country Link
US (1) US11802149B2 (ja)
EP (1) EP4259657A1 (ja)
JP (1) JP2024512855A (ja)
KR (1) KR102655944B1 (ja)
AR (1) AR127498A1 (ja)
AU (1) AU2022377057A1 (ja)
CA (1) CA3236199A1 (ja)
TW (1) TW202334200A (ja)
WO (1) WO2023077091A1 (ja)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120057563A (ko) * 2009-03-31 2012-06-05 노파르티스 아게 Ｉｌ-１２ 수용체 베타ｌ 서부유닛에 대해 특이적인 치료용 항체를 사용하는 조성물 및 방법
US9499610B2 (en) * 2011-04-08 2016-11-22 H. Lundbeck A/S Antibodies specific to pyroglutamated Aβ
KR20200110476A (ko) * 2011-11-16 2020-09-23 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항 ｉｌ-36ｒ 항체
AU2016293104B2 (en) * 2015-07-16 2022-08-11 Vivoryon Therapeutics N.V. Anti-pyroglutamated amyloid beta humanized antibodies
KR20210143858A (ko) 2019-03-26 2021-11-29 얀센 파마슈티카 엔.브이. 피로글루타메이트 아밀로이드-β에 대한 항체 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023077091A1 (en) 2023-05-04
AU2022377057A1 (en) 2024-05-09
KR102655944B1 (ko) 2024-04-12
US20230203143A1 (en) 2023-06-29
KR20230171425A (ko) 2023-12-20
CA3236199A1 (en) 2023-05-04
AR127498A1 (es) 2024-01-31
TW202334200A (zh) 2023-09-01
EP4259657A1 (en) 2023-10-18
US11802149B2 (en) 2023-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10208111B2 (en) Alpha-synuclein antibodies and uses thereof
CA2690435C (en) Humanized antibodies to amyloid beta
EP2074145B1 (en) Humanized antibody against amyloid beta
AU2007275467B2 (en) Humanized antibody against amyloid beta
CN109415434B (zh) 识别tau的抗体
TW201400505A (zh) 人類化ｔａｕ抗體
US20210032329A1 (en) Human anti-semaphorin 4d antibody
US20220265819A1 (en) Tau epitope and binding molecules
CN106831983B (zh) 针对淀粉状蛋白β的人源化抗体
US11802149B2 (en) Anti-amyloid beta antibodies and methods of using the same
KR20230039734A (ko) 항-Aβ 항체
AU2013202799C1 (en) Humanized antibody against amyloid beta
NZ720141B2 (en) Anti-phf-tau antibodies and their uses
NZ720141A (en) Anti-phf-tau antibodies and their uses

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230929

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230929

A871 Explanation of circumstances concerning accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871

Effective date: 20230929

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240326