JP2024512784A

JP2024512784A - 組換えｌ－アスパラギナーゼの用法及び用量

Info

Publication number: JP2024512784A
Application number: JP2023560959A
Authority: JP
Inventors: ミリームチェ; トンリン; ジェフェリーシルバーマン
Original assignee: ジャズファーマシューティカルズアイルランドリミテッド
Priority date: 2021-03-30
Filing date: 2022-03-30
Publication date: 2024-03-19
Also published as: US20220313798A1; EP4313121A1; CL2023002914A1; WO2022212571A1; WO2022211829A1; KR20230163490A; AU2022246850A9; CA3213527A1; CN117355325A; AU2022246850A1; CO2023014650A2; US20220323556A1

Abstract

本発明は、ヒト対象にＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む、ヒト対象におけるアスパラギン枯渇により治療可能な疾患を治療するための組成物及び方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月３０日に出願された米国仮出願第６３／１６８，２２４号の優先権を主張し、その全ての内容は本出願に組み込まれる。

配列表
本出願はＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全ての内容は参照によって本出願に組み込まれる。２０２２年３月３０日に作成された該ＡＳＣＩＩのコピーは、名称が４８９２９－４００９＿ＳＬ．ｔｘｔで、サイズが６，５４３バイトである。

技術分野
本発明はＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンを提供する。

背景
Ｌ－アスパラギナーゼとして一般に公知である、Ｌ－アスパラギンアミノヒドロラーゼ活性を有するタンパク質は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及びリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を含む潜在的に致死的な様々な疾患の治療に成功して使用されており、これらの疾患に罹患した患者の大部分は、小児である。

細菌起源のＬ－アスパラギナーゼは高い潜在的免疫原性及び抗原性を有する。第１選択治療として現在市場に出回っているのは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来Ｌ－アスパラギナーゼ及びペガスパルガーゼである。これらの製品は、患者におけるアレルギー反応、無症候の不活性化、アナフィラキシーショックを含む有害な過敏反応を引き起こし得る。これらの製品に対する過敏反応を示す患者は、治療を中止せざるを得ない場合が多く、その結果、予後が不良になり生存率が低下する。過敏反応を発現したこれらの患者はＥｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）に移行している。Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）は、調製するのに９ヶ月がかかり得ると言われており、長い間、供給の問題に悩まされている（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｔａｔｎｅｗｓ．ｃｏｍ／２０１６／１０／３１／ｃａｎｃｅｒ－ｄｒｕｇ－ｓｈｏｒｔａｇｅ／及びｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｒｕｇｓ．ｃｏｍ／ｄｒｕｇ－ｓｈｏｒｔａｇｅｓ／ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ－ｅｒｗｉｎｉａ－ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ－４８２まで参照）。現在でもこの問題は続いており、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）不足は常態化している（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｓｃｒｉｐｔｓ／ｄｒｕｇｓｈｏｒｔａｇｅｓ／ｄｓｐ＿ＡｃｔｉｖｅＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔＤｅｔａｉｌｓ．ｃｆｍ？ＡＩ＝Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ％２０Ｅｒｗｉｎｉａ％２０Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ％２０（Ｅｒｗｉｎａｚｅ）＆ｓｔ＝ｃまで参照）。ＦＤＡは製造業者に対して「原料物質又は細胞株の変更は、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の同一性、有効性成分含量、品質、純度又は効力に悪影響を与える可能性が高い」との警告書を発行していた。

大腸菌由来アスパラギナーゼに対する免疫学的交差反応性を有さないＬ－アスパラギナーゼ（シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）において組換え的に産生される組換えＬ－アスパラギナーゼ等）の新規で改善された投与レジメンが求められている。該投与レジメンは、ヒト対象が過敏症を発現する場合に、第１選択療法として、又は天然大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼ及び／又は長時間作用型大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼの代替として用いられ得る。組換えＬ－アスパラギナーゼの新規な投与レジメンは（多剤併用化学療法レジメンの構成要素として）、ＡＬＬ／リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）患者のかなりの医療需要に対処するであろう。Ｌ－アスパラギナーゼの新規な投与レジメン（多剤併用化学療法レジメンの構成要素である投与レジメンを含むがこれに限定されない）は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、特にＷｎｔ陰性ＣＲＣ及びＲ／ＲＡＭＬ患者のかなりの医療需要にも対処するであろう。

そこで、本開示は大腸菌由来アスパラギナーゼに対する免疫学的交差反応性を有さない組換えＬ－アスパラギナーゼを提供する。

一態様において、本開示は、がんの治療を必要とするヒト対象のがんを治療する方法であって、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとして前記ヒト対象に投与することを含み、ここで、前記時間順用量セットが第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔が３日間であり、前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔が２日間であり、前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が３日間行われず、前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が２日間行われず、ここで、約２５ｍｇ／ｍ^２での用量が血管内投与され、かつ約５０ｍｇ／ｍ^２での用量が筋肉内投与される、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ここで前記ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は２日間である。いくつかの実施形態において、前記第１用量は金曜日に投与され、前記第２用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は金曜日に投与され、前記第２用量は月曜日に投与され、前記第３用量は水曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は３日間である。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与され、前記第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第１用量前の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量は前記第１用量の２日前に前記ヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与され、前記第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記方法は第３用量をさらに含み、ここで前記第１用量は月曜日に投与され、前記第２用量は水曜日に投与され、前記第３用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量は５０ｍｇ／ｍ^２である。いくつかの実施形態において、前記方法は、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスを前記ヒト対象に実施することをさらに含み、ここで前記時間順用量セットの組換えＬ－アスパラギナーゼの各インスタンスは前記時間順用量セットの複数のインスタンスにおける前記時間順用量セットの１つ前のインスタンスの完了をもって対象に実施される。いくつかの実施形態において、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１００の間である。いくつかの実施形態において、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１５の間である。いくつかの実施形態において、前記大腸菌由来アスパラギナーゼは天然のものである。いくつかの実施形態において、前記大腸菌由来アスパラギナーゼは長時間作用型である。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は成人である。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は小児である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは６％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは１％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

別の態様において、本開示は、がんの治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、ヒト対象にＬ－アスパラギナーゼを一連の６用量投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２である２用量間の投与間隔が７日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ２である用量と、次の用量との間の投与間隔が２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が３日間であり、ここで、約２５ｍｇ／ｍ^２での用量が血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での用量が筋肉内投与され、かつ前記Ｌ－アスパラギナーゼが長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼではない、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量は、別々に、前記一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼ療法を終了している。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は成人である。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は小児である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは６％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは１％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。いくつかの実施形態において、前記がんは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である。いくつかの実施形態において、前記がんは結腸直腸がん（ＣＲＣ）である。いくつかの実施形態において、前記ＣＲＣはＷｎｔ－陰性ＣＲＣ又はＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、前記がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、前記ＡＭＬはＲ／ＲＡＭＬである。いくつかの実施形態において、前記がんはＤＬＢＣＬである。

別の態様において、本開示は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、前記ヒト対象に組換えＬ－アスパラギナーゼを一連の７用量血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量が、約２５ｍｇ／ｍ^２の前記組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、かつ前記一連の用量の各用量間の投与間隔が２日間である、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量は、別々に、前記一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは前記Ｌ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは前記Ｌ－アスパラギナーゼの３％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは前記Ｌ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は、前記組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、前記組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

別の態様において、本開示は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、ヒト対象にＬ－アスパラギナーゼを一連の６用量血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２である２用量間の投与間隔が７日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が３日間であり、ここで、前記Ｌ－アスパラギナーゼが長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼではない、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量は、別々に、前記一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼ療法を終了している。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は成人である。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は小児である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは６％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは１％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

別の態様において、本発明は、がんの治療を必要とするヒト対象のがんを治療する方法であって、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとして前記ヒト対象に血管内投与することを含み、ここで、前記時間順用量セットが第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔が３日間であり、前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔が２日間であり、前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が３日間行われず、かつ、前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が２日間行われない、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ここで前記ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は２日間である。いくつかの実施形態において、前記第１用量は金曜日に投与され、前記第２用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は金曜日に投与され、前記第２用量は月曜日に投与され、前記第３用量は水曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は３日間である。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与され、前記第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、前記時間順用量セットは前記第１用量前の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量は前記第１用量の２日前に前記ヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は水曜日に投与され、前記第２用量は金曜日に投与され、前記第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記方法は第３用量をさらに含み、ここで前記第１用量は月曜日に投与され、前記第２用量は水曜日に投与され、前記第３用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、前記第１用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量は５０ｍｇ／ｍ^２である。いくつかの実施形態において、前記方法は、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスを前記ヒト対象に血管内に実施することをさらに含み、ここで前記時間順用量セットの組換えＬ－アスパラギナーゼの各インスタンスは前記時間順用量セットの複数のインスタンスにおける前記時間順用量セットの１つ前のインスタンスの完了をもって対象に実施される。いくつかの実施形態において、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１００の間である。いくつかの実施形態において、前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１５の間である。いくつかの実施形態において、前記大腸菌由来アスパラギナーゼは天然のものである。いくつかの実施形態において、前記大腸菌由来アスパラギナーゼは長時間作用型である。いくつかの実施形態において、前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は成人である。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象は小児である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは６％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは１％未満の凝集を示す。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、前記Ｌ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。いくつかの実施形態において、前記がんは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である。いくつかの実施形態において、前記がんは結腸直腸がん（ＣＲＣ）である。いくつかの実施形態において、前記ＣＲＣはＷｎｔ－陰性ＣＲＣ又はＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、前記がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、前記ＡＭＬはＲ／ＲＡＭＬである。いくつかの実施形態において、前記がんはＤＬＢＣＬである。

本発明は、添付図面と併せて以下の詳細な説明を読むことにより、最もよく理解されるであろう。図面には以下の図が含まれる。
実施例２における安全性試験の結果を示す。実施例５で概説されるＳＥＣ－ＨＰＬＣ法によって評価された組換えＬ－アスパラギナーゼ（Ｒ－ＣＲＩＳ）、大腸菌由来組換えクリサンタスパーゼ（大腸菌ＲＣ）、及びＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の純度を示す。実施例５で概説されるＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ法によって評価された組換えＬ－アスパラギナーゼ（Ｒ－ＣＲＩＳ）、大腸菌由来組換えクリサンタスパーゼ（大腸菌ＲＣ）、及びＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の純度を示す。実施例５で概説される沈降速度ＡＵＣデータの解析から得られた結果を示す。実施例６で概説されるリリース法に従ってＳＥ－ＵＨＰＬＣによって組換えＬ－アスパラギナーゼのサイズプロファイルを評価したものを示す。実施例６で概説されるＳＥＣ－ＭＡＬＬＳを使用して組換えＬ－アスパラギナーゼに存在する高分子量種を測定したものを示す。実施例６で概説される組換えＬ－アスパラギナーゼ（商業規模）の正規化された沈降係数分布を示す。実施例６で概説されるＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）（商業規模）の正規化された沈降係数分布を示す。実施例７に係る投与４８及び７２後にＳＡＡレベルを示した健常被験者の割合を示す。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）アスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。実施例７に記載の試験におけるＳＡＡに基づくＰＫの概要を示す。略語：ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}，時間０から無限時間まで外挿された曲線下面積。ＡＵＣ_０－ｔ，時間０からＳＡＡの定量が可能な最終時点までの曲線下面積。Ｃ_４８ｈ，４８時間時点のＳＡＡ。Ｃ_７２ｈ，７２時間時点のＳＡＡ。ＣＬ，クリアランス。Ｃ_ｍａｘ，ＳＡＡ最高値。ＣＶ，変動係数。ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＰＫ，薬物動態。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。ｔ_ｍａｘ，Ｃ_ｍａｘが観察される時点。ｔ_１／２，半減期。Ｖ，分布容積。^ａＩＭ治療の場合、ＣＬ＝ＣＬ／Ｆ（見かけのクリアランス）且つＶ＝Ｖｚ／Ｆ（見かけの分布容積）。ＩＶ治療の場合、ＣＬ＝ＣＬ且つＶ＝Ｖｓｓ（定常状態での分布容積の推定値）。^ｂｔ_１／２、ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}、ＣＬ及びＶについてｎ＝５。Ｎは曝露された健常被験者の数である。平均値（ＣＶ％）は、中央値及び範囲として報告される、ｔ_ｍａｘ値を除く全てのパラメータについて示される。実施例７に記載の治療後のＴＥＡＥを示す。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＴＥＡＥ，治療下で発現した有害事象。^ａＭｅｄＤＲＡ用語集バージョン２２．０を使用して基本語別に示す。治療関連ＴＥＡＥは頻度の降順で示す。個々のＳＡＡ－時間プロファイルを示す。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。更なる説明は実施例７に記載されている。実施例７にさらに記載のＳＡＡ平均値（９５％ＣＩ）－時間プロファイルを示す。略語：ＣＩ，信頼区間。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。Ａ）はＪＺＰ－４５８のＩＭ投与でのＳＡＡ平均値－時間プロファイルを示す。ＪＺＰ－４５８は大腸菌由来アスパラギナーゼに対する免疫学的交差反応性のない酵素を生成する新規なシュードモナス・フルオレッセンス発現プラットフォームを使用して産生された組換えエルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）アスパラギナーゼである。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。注：定量下限（ＬＬＯＱ）＝１．００ｎｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。Ｂ）はＪＺＰ－４５８のＩＶ注入でのＳＡＡ平均値－時間プロファイルを示す。ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＶ，静脈内。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。注：定量下限（ＬＬＯＱ）＝１．００ｎｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。Ｃ）は個々のアスパラギナーゼ濃度－時間プロファイルを示す。ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。Ｄ）はＪＺＰ－４５８のＩＭ及びＩＶ投与でのＳＡＣとＳＡＡとの間の相関を示す。略語：ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。注：回帰直線方程式：ＳＡＣ＝１４０７．９×ＳＡＡ。ピアソン相関係数＝０．９７７９。更なる説明は実施例７に記載されている。実施例７における試験にさらに記載のＳＡＡ平均値－時間プロファイル及び対応する血漿Ｌ－アスパラギンレベル平均値を示す。略語：ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。注：定量下限（ＬＬＯＱ）についてアスパラギナーゼ活性＝０．０２５０ＩＵ／ｍＬ、Ｌ－アスパラギン＝０．０２５０ｕｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。実施例７における試験でのベースライン人口統計を示す。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＤ，標準偏差。^ａ民族性は自己申告であった。健常被験者は１つより多くの民族性として自己認識できた。実施例７における試験にさらに記載のＳＡＡに基づくＪＺＰ－４５８の用量比例性の評価を示す。略語：ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}，時間０から無限時間まで外挿された曲線下面積。ＡＵＣ_０－ｔ，時間０からＳＡＡの定量が可能な最終時点までの曲線下面積。ＣＩ，信頼区間。Ｃ_ｍａｘ，ＳＡＡ最高値。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＰＫ，薬物動態。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。結果は、ｌｎ（パラメータ）＝切片＋傾き×ｌｎ（用量）というべき乗モデルに基づく。実施例７にさらに記載のＳＡＣに基づくＰＫの概要を示す。略語：ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}，時間０から無限時間まで外挿された曲線下面積。ＡＵＣ_０－ｔ，時間０からＳＡＡの定量が可能な最終時点までの曲線下面積。ＣＬ，クリアランス。Ｃ_ｍａｘ，ＳＡＡ最高値。ＣＶ，変動係数。ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＰＫ，薬物動態。ｔ_１／２，半減期。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。ｔ_ｍａｘ，Ｃ_ｍａｘが観察される時点。Ｖ，分布容積。^ａＩＭ治療の場合、ＣＬ＝ＣＬ／Ｆ（見かけのクリアランス）且つＶ＝Ｖｚ／Ｆ（見かけの分布容積）。ＩＶ治療の場合、ＣＬ＝ＣＬ且つＶ＝Ｖｓｓ（定常状態での分布容積の推定値）。^ｂＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}、ＣＬ及びＶについてｎ＝３。ｔ_１／２についてｎ＝５。Ｎは曝露された健常被験者の数である。平均値（ＣＶ％）は、中央値及び範囲として報告される、ｔ_ｍａｘ値を除く全てのパラメータについて示される。ＳＡＣに基づくＪＺＰ－４５８の用量比例性の評価を示す。略語：ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}，時間０から無限時間まで外挿された曲線下面積。ＡＵＣ_０－ｔ，時間０からＳＡＡの定量が可能な最終時点までの曲線下面積。ＣＩ，信頼区間。Ｃ_ｍａｘ，ＳＡＡ最高値。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＰＫ，薬物動態。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。ＳＡＣ，血清アスパラギナーゼ濃度。結果は、ｌｎ（パラメータ）＝切片＋傾き×ｌｎ（用量）というべき乗モデルに基づく。実施例７における試験の試験デザインを示す。略語：ＥＲＷ，エルウィニア・クリサンテミアスパラギナーゼ。ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＰＫ，薬物動態。実施例７における試験にさらに記載の全ての治療及び対応する血漿Ｌ－グルタミンレベル平均値についてのＳＡＡ平均値－時間プロファイルを示す。略語：ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。注：定量下限（ＬＬＯＱ）についてアスパラギナーゼ活性＝０．０２５０ＩＵ／ｍＬ、Ｌ－グルタミン＝０．２５０ｕｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。略語：ＩＭ，筋肉内。ＩＶ，静脈内。ＳＡＡ，血清アスパラギナーゼ活性。注：定量下限（ＬＬＯＱ）についてアスパラギナーゼ活性＝０．０２５０ＩＵ／ｍＬ、Ｌ－グルタミン＝０．２５０ｕｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。パートＡのＪＺＰ－４５８ＩＭ投与コホート（実施例８）を示す。ＳＤＲＣは、コホート１の参加者について安全性及び忍容性事項を評価して、異なる用量レベルでの追加の参加者が必要か否か、又は拡大コホート（コホート２）に進めるのに適切なＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベルが決定されたか否かを判定する。ＳＤＲＣは、各サブコホートにおいて６人及び１３人の評価可能な参加者が第１クールを完了した場合に、ＮＳＡＡ及び安全性／忍容性データをレビューする。登録はＳＤＲＣレビューのための特定の時点で中断されない。略語：ＩＭ＝筋肉内。ＩＵ＝国際単位。ＮＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性最低値。ＳＤＲＣ＝試験データレビュー委員会。パートＢのＪＺＰ－４５８投与コホート（実施例８）を示す。ＳＤＲＣは、コホート１の参加者について安全性及び忍容性事項を評価して、異なる用量レベルでの追加の参加者が必要か否かを判定する。ＳＤＲＣは、各サブコホートにおいて６人の評価可能な参加者が第１クールを完了した場合に、ＮＳＡＡ及び安全性／忍容性データをレビューする。略語：ＩＵ＝国際単位。ＩＶ＝静脈内。ＮＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性最低値。ＳＤＲＣ＝試験データレビュー委員会。第１クールにおけるＪＺＰ－４５８でのＳＡＡ結果（ＩＵ／ｍＬ）の概要を示す（評価可能な参加者）（実施例８）。第１クールにおける直近の４８及び７２時間時点の０．１ＩＵ／ｍＬ以上及び０．４ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを有する患者の割合を示す（評価可能な参加者）（実施例８）。シミュレートされたＪＺＰ－４５８のＳＡＡ中央値プロファイルを９５％予測区間－片対数スケールで示す（ＦＭＷ投与スケジュール）（実施例８のＩＭシミュレーションモデル）。略語：ＩＭ＝筋肉内。ＦＭＷ＝金曜日、月曜日、水曜日。ＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性。中心線は中央値である。バンド（９５％予測区間）は、第２．５百分位数（下）及び第９７．５百分位数（上）を表す。ｘ軸は追加オフセットと共に３３６時間まで示され、プロットされたデータは、クールの開始の５０４時間後までシミュレートされた観察を含む。標的ＳＡＡトラフレベルを達成すると予想されるＪＺＰ－４５８で治療された患者の割合を示す（ＦＭＷ投与スケジュール）（実施例８のＩＭシミュレーションモデル）。治療下で発現した有害事象の概要を示す（安全性解析対象集団）（実施例８）。グレード３又は４の治療下で発現した有害事象を示す（安全性解析対象集団コホート１ａ）（実施例８）。グレード３又は４の治療下で発現した有害事象を示す（安全性解析対象集団コホート１ａ）（実施例８）。パーセンテージは、安全性解析対象集団の参加者の数を分母として用いて算出された。有害事象は、ＭｅｄＤＲＡ２２．１を使用してＳＯＣ及びＰＴにコード化された。ＡＥの重症度は、ＣＴＣＡＥ５．０を使用して記録された。ＴＥＡＥは、試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で発症した任意の事象又は試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で重症度が悪化する任意の継続している事象として定義された。略語：ＡＥ＝有害事象。ＣＴＣＡＥ＝有害事象共通用語規準。ＩＭ＝筋肉内注射。ＰＴ＝基本語。ＳＯＣ＝器官別大分類。ＴＥＡＥ＝治療下で発現した有害事象。実施例９に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち治療下で発現した有害事象の概要（データカットオフ日：２０２１年１０月１４日）を示す。略語：ＣＴＣＡＥ＝有害事象共通用語規準。ＩＭ＝筋肉内。ＭｅｄＤＲＡ＝国際医薬用語集。ＭＷＦ＝月曜日、水曜日、金曜日。ＰＴ＝基本語。ＳＯＣ＝器官別大分類。ＴＥＡＥ＝治療下で発現した有害事象。（ａ）用量は月曜日、水曜日、金曜日のスケジュールで投与された。（ｂ）初期解析ではデーカットオフ日時点に死亡した参加者はなかった（２０２０年１０月１４日）。２０２０年１０月１５日から２０２１年１月１１日の間に３人の死亡例が報告された。パーセンテージは、安全性解析対象集団の参加者の数を分母として用いて算出された。有害事象は、ＭｅｄＤＲＡ２２．１を使用してＳＯＣ及びＰＴにコード化された。ＡＥの重症度は、ＣＴＣＡＥ５．０を使用して記録された。ＡＥの重症度は、ＣＴＣＡＥ５．０を使用して記録された。ＴＥＡＥは、試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で発症した任意の事象又は試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で重症度が悪化する任意の継続している事象として定義された。実施例１０及び１１で考察された試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ちコホート１ｃの治療下で発現した有害事象の概要（安全性解析対象集団。データカットオフ日：２０２１年１月１１日）を示す。略語：ＣＴＣＡＥ＝有害事象共通用語規準。ＩＭ＝筋肉内。ＭｅｄＤＲＡ＝国際医薬用語集。ＰＴ＝基本語。ＳＯＣ＝器官別大分類。ＴＥＡＥ＝治療下で発現した有害事象。パーセンテージは、安全性解析対象集団の参加者の数を分母として用いて算出された。有害事象は、ＭｅｄＤＲＡ２２．１を使用してＳＯＣ及びＰＴにコード化された。ＡＥの重症度は、ＣＴＣＡＥ５．０を使用して記録された。ＡＥの重症度は、ＣＴＣＡＥ５．０を使用して記録された。ＴＥＡＥは、試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で発症した任意の事象又は試験の終了時までの試験治療の初回投与以後の日付で重症度が悪化する任意の継続している事象として定義された。図３３Ａ、図３３Ｂ及び図３３Ｃは、実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち人口統計学的及びベースライン特性（２０２１年７月１９日時点の安全性解析対象集団）の最新情報を示す。略語：ＡＬＬ＝急性リンパ芽球性白血病。ＢＡＬＬ＝Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病。ＢＬＢＬ＝Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫。ＢＳＡ＝体表面積。ＩＭ＝筋肉内。ＬＢＬ＝リンパ芽球性リンパ腫。ＴＡＬＬ＝Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病。Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫。ＴＬＢＬ＝Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫。パーセンテージは、安全性解析対象集団の参加者の数を分母として用いて算出された。診断から月単位の時間は、’［（試験初日－診断日＋１）／３６５．２５］＊１２’の整数で計算する。ベースライン値は、開始日及び／又はＪＺＰ－４５８の初回投与の時点（試験初日）以前に取得された最新の非欠損値として定義する。試験初日はＪＺＰ－４５８の初回投与の日付として定義する。図３３Ａの説明を参照のこと。図３３Ａの説明を参照のこと。実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち第１クールにおける（筋肉内及び静脈内投与）ＪＺＰ－４５８での血清アスパラギナーゼ活性結果（ＩＵ／ｍＬ）の概要（２０２０年７月１９日時点の有効性解析対象集団）を示す。略語：ＣＩ＝信頼区間。ＩＭ＝筋肉内。ＩＶ＝静脈内。ＭＷ＝月曜日、水曜日。ＭＷＦ＝月曜日、水曜日、金曜日。Ｑ１＝第１四分位数。Ｑ３＝第３四分位数。ＮＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性最低値。ＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性。有効性解析対象集団は、第１クールのプロトコールに既定された試料採取枠内（±２時間）で収集された少なくとも１つの４８時間又は７２時間ＮＳＡＡ評価値を有する、ＪＺＰ－４５８を少なくとも１回投与された参加者を含む。実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち第１クールにおける筋肉内及び静脈内投与ＪＺＰ－４５８での血清アスパラギナーゼ濃度と血清アスパラギナーゼ活性との相関（２０２１年７月１９日時点の薬物動態解析対象集団）の最新情報を示す。略語：ＩＭ＝筋肉内。ＩＶ＝静脈内。ＰＫ＝薬物動態。ＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性。ＳＡＣ＝血清アスパラギナーゼ濃度。図３６Ａ及び図３６Ｂは、実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち線形及び片対数スケールでの、第１クールの筋肉内及び静脈内投与ＪＺＰ－４５８による対応する血漿Ｌ－アスパラギンレベル平均値での血清アスパラギナーゼ活性平均値対時間プロファイル（２０２１年７月１９日時点の薬力学的解析対象集団）の最新情報を示す。図３６Ａの説明を参照のこと。図３７Ａ、図３７Ｂ及び図３７Ｃは、試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち線形及び片対数スケールでの、第１クールの筋肉内及び静脈内投与ＪＺＰ－４５８による対応する血漿Ｌ－グルタミンレベル平均値についての血清アスパラギナーゼ活性平均値対時間プロファイル（２０２１年７月１９日時点の薬力学的解析対象集団）の最新情報を示す。略語：ＦＭＷ＝金曜日、月曜日、水曜日。ＩＭ＝筋肉内。ＩＶ＝静脈内。ＭＷＦ＝月曜日、水曜日、金曜日。ＰＤ＝薬力学。ＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性。ＷＦＭ＝水曜日、金曜日、月曜日。定量下限（ＬＬＯＱ）についてＳＡＡ０．０３５０ＩＵ／ｍＬ、Ｌ－グルタミン＝０．２５０μｇ／ｍＬ。ＬＬＯＱ未満の値は０に設定された。片対数プロットでは、ＳＡＡのみが片対数スケールである。平均値が０であると、片対数プロットでは、スケールが０に規定されていないため値に欠損が現れる。図３７Ａの説明を参照のこと。図３７Ａの説明を参照のこと。実施例１２に記載のＪＺＰ－４５８の用量比例性を示す。略語：ＡＵＣ＝濃度時間曲線下面積。Ｃｍａｘ＝ＳＡＡ最高値。Ｃｍａｘ，６＝第１クールの６回目投与後のＳＡＡ最高値。ＤＰ＝製剤。実施例１２に記載のＪＺＰ－４５８の蓄積を示す。略語：Ｃ_ｍａｘ＝ＳＡＡ最高値。Ｃ_{ｍａｘ，６}＝第１クールの６回目投与後のＳＡＡ最高値。実施例１２で概説される階層免疫原性検査戦略を示す。略語：ＡＤＡ＝抗薬物抗体。ＮＲ＝非反応性。実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち抗薬物抗体収集による最大クール数（データカットオフ日：２０２１年７月１９日）を示す。略語：ＡＤＡ＝抗薬物抗体。ＩＭ＝筋肉内。ＩＶ＝静脈内。ＭＷＦ＝月曜日、水曜日、金曜日。図４２Ａ及び図４２Ｂは、実施例１２に記載の試験ＪＺＰ４５８－２０１、即ち第１クールにおいて少なくとも１つの＜０．１ＩＵ／ｍＬのＳＡＡレベルを有する２０２１年７月１９日時点のＡＤＡ＋参加者のＳＡＡレベルの概要を示す。略語：ＡＤＡ＝抗薬物抗体。ＢＬＱ＝定量限界未満。ＦＭＷ＝金曜日、月曜日、水曜日。ｈ＝時間。ＭＷＦ＝月曜日、水曜日、金曜日。Ｎ／Ａ＝該当データなし。ＳＡＡ＝血清アスパラギナーゼ活性。図４２Ａの説明を参照のこと。実施例１２に記載の免疫原性結果の概要を示す。略語：ＡＤＡ＝抗薬物抗体。ＩＭ＝筋肉内。ＩＶ＝静脈内。ＮＡｂ＝中和抗体。

発明の詳細な説明
細菌起源のＬ－アスパラギナーゼは、高い潜在的免疫原性及び抗原性を有する。これらの製品は、患者におけるアレルギー反応、無症候の不活性化、及びアナフィラキシーショックが含まれる有害な過敏反応を引き起こし得る。Ｌ－アスパラギナーゼは、Ｌ－アスパラギンアミノヒドロラーゼ活性を有する酵素である。Ｌ－アスパラギナーゼ酵素活性としては、アスパラギンのアスパラギン酸及びアンモニアへのアミド分解だけでなく、グルタミンのグルタミン酸及びアンモニアへのアミド分解も挙げられ得る。大腸菌及びエルウィニア・クリサンテミ由来のＬ－アスパラギナーゼは、一般的に、ＡＬＬ及びＬＢＬが含まれる、アスパラギン枯渇により治療される種々の疾患を治療するために使用される。健常な細胞はアスパラギンを産生することができるが、一部の病変細胞は、アスパラギン合成酵素を欠くためアスパラギンを産生することができない。Ｌ－アスパラギナーゼが疾患患者に投与される場合、Ｌ－アスパラギナーゼは、可溶性アスパラギンのレベルを低減し、これにより、病変細胞を飢えさせるが、健常な細胞を飢えさせず、選択的な病変細胞死をもたらす。大腸菌由来のＬ－アスパラギナーゼによる治療後に作られる抗体は、エルウィニア・クリサンテミ由来のＬ－アスパラギナーゼと交差反応しない。エルウィニア・クリサンテミにおいて産生されるＬ－アスパラギナーゼは、長い製造リードタイムを必要とする（例えば、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標））。本発明は、大腸菌由来のＬ－アスパラギナーゼと交差反応しないＬ－アスパラギナーゼのための新規で改良された投与レジメンを含み、大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼ及びエルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼを上回る改良を提供する。これらの改良は本明細書に記載される。

Ｉ．定義
明示的に定義されない限り、本明細書において使用される用語は、当該技術分野におけるそれらの通常の意味に従って理解される。

本明細書で使用されるように、用語「アスパラギン枯渇により治療可能な疾患」は、状態又は障害であって、前記状態又は障害に関与するか、又はその原因となる細胞が、Ｌ－アスパラギンを合成する能力の欠如又は低下のいずれかを示す、前記状態又は障害を指す。Ｌ－アスパラギンの枯渇又は欠乏は、部分的又は実質的に完全（例えば、当該技術分野において公知の方法及び装置を用いて検出不可能なレベル）であり得る。

本明細書で使用されるように、用語「治療上有効量」は、所望の治療効果をもたらすのに必要とされるタンパク質（例えば、アスパラギナーゼ又はその組換えＬ－アスパラギナーゼ）の量を指す。

用語「配列番号１の配列を含む」は、タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１に厳密に限定されなくてもよく、追加のアミノ酸を含有していてもよいことを意味する。

用語「対象」又は「患者」は、動物、哺乳動物、又はさらにはヒト患者を意図する。

用語「ベクターで形質転換された宿主細胞又は非ヒト宿主」は、本明細書に記載されるベクター又は核酸を含む宿主細胞又は非ヒト宿主を指す。ポリペプチドの発現のための宿主細胞は、当該技術分野において周知であり、これには原核細胞並びに真核細胞が含まれる。上記した宿主細胞の適切な培養培地及び条件は、当技術分野において公知である。

「宿主又は宿主細胞を培養すること」は、宿主又は宿主細胞における、本明細書で定義される融合タンパク質及び／又は本明細書で定義されるポリペプチドとしてのタンパク質の発現、及び／又はアスパラギナーゼの発現が含まれる、タンパク質の発現を含む。

本明細書で使用されるように、例えば、大きさ、容量、組成物中の成分の量、濃度、プロセス温度、プロセス時間、収量、流速、圧力、並びに同様の値、及びそれらの範囲を修飾する用語「約」は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、又は使用製剤の製造のために使用される典型的な測定手順及び処理手順によって、これらの手順における不注意による誤差によって、方法を実施するために使用される出発物質又は成分の製造、供給源、又は純度の差異によって、並びに同様の理由によって生じ得る数量の変動を指す。用語「約」は、特定の初期濃度又は配合を有する組成物、製剤、又は細胞培養物の経年劣化に起因して異なる量、及び特定の初期濃度又は配合を有する組成物又は配合物を混合もしくは処理することに起因して異なる量も包含する。用語「約」によって修飾されているか否かに関わらず、本明細書に添付される特許請求の範囲は、これらの量の同等量を含む。さらに、用語「約」は、明記した基準値と同程度の値の範囲を指し得る。ある特定の実施形態では、用語「約」は、明記した基準値の１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１パーセント、又はそれ以下の範囲内の値の範囲を指す。

本明細書で使用されるように、用語「共投与」、「共投与すること」、「と組み合わせて投与される」、「と組み合わせて投与すること」、「同時」、及び「同時的」は、２種以上の活性医薬成分を、両方の活性医薬成分及び／又はそれらの代謝産物が同時にヒト対象において存在するように、前記ヒト対象に投与することを包含する。共投与としては、別個の組成物での同時投与、別個の組成物での異なる時点での投与、又は２種以上の活性医薬成分が存在する組成物での投与が挙げられる。別個の組成物での同時投与及び両方の薬剤が存在する組成物での投与も本発明の方法に包含される。

本明細書で使用されるように、用語「治療上有効量」は、所望の治療効果をもたらすのに必要とされるタンパク質（例えば、組換えＬ－アスパラギナーゼ又はそのコンジュゲート）の量を示す。

用語「大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼ」、「Ｌ－アスパラギナーゼ由来の大腸菌」、「大腸菌アスパラギナーゼ」及び「大腸菌Ｌ－アスパラギナーゼ」は、大腸菌において天然に産生されるアスパラギナーゼを指すために互換的に使用される。

用語「エルウィニア属由来Ｌ－アスパラギナーゼ」、「エルウィニア属アスパラギナーゼ」、「エルウィニア属Ｌ－アスパラギナーゼ」、「エルウィニア属アスパラギナーゼ」、「エルウィニア属由来のＬ－アスパラギナーゼ」及び「エルウィニア属由来のアスパラギナーゼ」は、エルウィニア属において天然に産生されるアスパラギナーゼを指すために本明細書において互換的に使用される。

用語「エルウィニア・クリサンテミ由来のＬ－アスパラギナーゼ」、「エルウィニア・クリサンテミＬ－アスパラギナーゼ」及び「エルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼ」は、エルウィニア・クリサンテミにおいて天然に産生されるアスパラギナーゼを指すために互換的に使用される。エルウィニア・クリサンテミ（ペクトバクテリウム・クリサンテミ（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）としても公知）は、ディッケヤ・クリサンテミ（Ｄｉｃｋｅｙａｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）と新たに命名された。従って、エルウィニア・クリサンテミ、ペクトバクテリウム・クリサンテミ及びディッケヤ・クリサンテミという用語は、本明細書において互換的に使用される。

Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）（生物学的製剤承認申請番号１２５３５９）は、米国において患者のＡＬＬの治療用に商業的に承認されたエルウィニア・クリサンテミＩＩ型Ｌ－アスパラギナーゼ製品である。その活性成分は、エルウィニア・クリサンテミＩＩ型Ｌ－アスパラギナーゼである（参照により本明細書に組み込まれるＥｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）の添付文書を参照）。

用語「相同性」及び「配列同一性」は、本明細書で互換的に使用される。タンパク質配列に関するアミノ酸配列同一性パーセント（％）は、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、配列同一性の最大パーセントを達成するために必要に応じて配列を整列させてギャップを導入した後、特定の（親）配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的でのアライメントは、当分野の技術範囲内の様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することで、達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するのに適切なパラメータを決定することができる。具体的なプログラムの１つとしては、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２０１６０２４４５２５号の段落[０２７９]～[０２８０]に概説されているＡＬＩＧＮ－２プログラムがある。本発明のアミノ酸配列（「発明配列」）と親のアミノ酸配列との同一性の程度は、２つの配列のアラインメントにおける完全一致の数を前記「発明配列」の長さ又は前記親配列の長さのいずれか短い方で割ったものとして算出される。結果は同一性パーセントで表す。いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％同一である。いくつかの実施形態において、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、又は、ひいては１００％同一である。

投与の文脈で使用される「２日間」の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の月曜日に投与されると、前記第１用量の２日後に投与される第２用量は、該所定の週の水曜日に投与されることとなる。用語「２日間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の月曜日に投与され、第２用量が該週の水曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の月曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は「２日間」という用語の範囲を超えることなく該所定の週の水曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の月曜日の午後又は夕方に投与され得、前記第２用量は「２日間」という用語の範囲を超えることなく該所定の週の水曜日の午前中に投与され得る。

投与の文脈で使用される「３日間」の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の金曜日に投与されると、前記第１用量の３日後に投与される第２用量は、該所定の週の月曜日に投与されることとなる。用語「３日間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の金曜日に投与され、第２用量が該週の直後の週の月曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の金曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は「３日間」という用語の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の月曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の金曜日の午後又は夕方に投与され得、前記第２用量は「３日間」という用語の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の月曜日の午前中に投与され得る。

投与の文脈で使用される「７日間の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の金曜日に投与されると、前記第１用量の７日後に投与される第２用量は、該所定の週の直後の週の金曜日に投与されることとなる。用語「７日間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の金曜日に投与され、第２用量が該週の直後の週の金曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の金曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は７日間の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の金曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の金曜日の午後又は夕方に投与され得、前記第２用量は７日間の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の金曜日の午前中に投与され得る。

投与の文脈で使用される「約４８時間」の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の月曜日に投与されると、前記第１用量の約４８時間後に投与される第２用量は、所定の週の水曜日に投与されることとなる。用語「約４８時間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の月曜日に投与され、第２用量が該週の水曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の月曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は用語「約４８時間」の範囲を超えることなく該所定の週の水曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の月曜日の午後又は夕方に投与され得、前記第２用量は用語「約４８時間」の範囲を超えることなく該所定の週の水曜日の午前中に投与され得る。

投与の文脈で使用される「約７２時間」の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の金曜日に投与されると、前記第１用量の約７２時間後に投与される第２用量は、該所定の週の直後の週の月曜日に投与されることとなる。用語「約７２時間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の金曜日に投与され、第２用量が該週の直後の週の月曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の金曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は、用語「約７２時間」の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の月曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の金曜日の午後又は夕方に投与され得、前記第２用量は、用語「約７２時間」の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の月曜日の午前中に投与され得る。

投与の文脈で使用される「約１６８時間」の用語は、第１用量と、前記第１用量の後に投与される第２用量との間の時間をいう。例えば、前記第１用量が所定の週の金曜日に投与されると、前記第１用量の約１６８時間後に投与される第２用量は該所定の週の直後の週の金曜日に投与されることとなる。用語「約１６８時間」は、前記第１用量が前記第２用量と同じ時刻に投与される状況、及び前記第１用量が前記第２用量と異なる時刻に投与される状況を包含する。よって、第１用量が所定の週の金曜日に投与され、第２用量が該週の直後の週の金曜日に投与される上記例において、前記第１用量は該所定の週の金曜日の早朝に投与され得、前記第２用量は、用語「約１６８時間」の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の金曜日の午後又は夕方に投与され得る。逆に、前記第１用量は該所定の週の金曜日の午後夕方に投与され得、前記第２用量は、「約１６８時間」の範囲を超えることなく該所定の週の直後の週の金曜日の午前中に投与され得る。

ＩＩ．組換えＬ－アスパラギナーゼ
一態様において、本明細書において提供される本開示による組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－アスパラギナーゼである。更なる態様において、本明細書に記載される本発明による組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－アスパラギンアミノヒドロラーゼ活性を有する酵素である。このような組換えＬ－アスパラギナーゼの酵素活性としては、アスパラギンのアスパラギン酸及びアンモニアへのアミド分解だけでなく、グルタミンのグルタミン酸及びアンモニアへのアミド分解も挙げられる。

いくつかの実施形態において、本明細書において開示される組換えＬ－アスパラギナーゼは、多量体として活性である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、四量体としての活性酵素である。四量体は、４つのサブユニット（単量体としても公知）から構成される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、４つの同じ３５ｋＤサブユニットからなる四量体である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、非ジスルフィド結合四量体治療用タンパク質である。特定の実施形態において、多量体組換えＬ－アスパラギナーゼのサブユニット又は単量体の各々は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、四量体組換えＬ－アスパラギナーゼのサブユニット又は単量体の各々は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、Ｌ－アスパラギナーゼは、エルウィニア・クリサンテミＮＣＰＰＢ１０６６（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ３２８８４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））に由来し、シグナルペプチド及び／又はリーダー配列を有するか、又は有さない。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、複数のサブユニット、例えば、４つのサブユニット又は単量体（四量体）から構成される。その場合、対応する改変された組換えタンパク質は、例えば、その四量体の単量体の各々にコンジュゲートされた１～２０（又はそれ以上）個のペプチドからなり得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、単量体並びにＬ－アスパラギナーゼ単量体の各々にコンジュゲートされた１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、及び２０（又はそれ以上）個のペプチドを含む。特定の実施形態において、Ｌ－アスパラギナーゼは、複数のサブユニット又は単量体を含む多量体、例えば、四量体であり、その四量体における単量体の各々は、１つのペプチドにコンジュゲートされており、これにより、各単量体に１つずつの４つのコンジュゲートされたペプチドを含む四量体がもたらされる。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートされた１～４つのペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートされた４～２０個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートされた６～１８個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートされた６～１８個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートされた１０～１５個のペプチドを含む四量体である。

一態様において、本発明は、組換えＬ－アスパラギナーゼ及び複数の化学的に結合されたペプチド配列を有する改変されたタンパク質に関する。更なる態様において、ペプチド配列の長さは、約１０～約１００、約１５～約６０、又は約２０～約４０である。

組換えＬ－アスパラギナーゼの断片、好ましくは、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼの断片は、本明細書中に記載される発明に有用であり得る。用語「組換えＬ－アスパラギナーゼの断片」（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼの断片）は、組換えＬ－アスパラギナーゼの配列が、本明細書において例示される組換えＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼ）におけるより少ないアミノ酸を含み得るが、依然としてＬ－アミノヒドロラーゼ活性を付与するのに十分なアミノ酸を含み得ることを意味する。例えば、「組換えＬ－アスパラギナーゼの断片」は、本明細書において例示される組換えＬ－アスパラギナーゼのうちの１つ（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼ）の少なくとも約１５０又は２００連続アミノ酸（例えば、約１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６連続アミノ酸）である／からなる断片であり、及び／又はここで、該断片は、本明細書において例示される該組換えＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼ）のＮ末端からの５０アミノ酸まで（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０アミノ酸まで）の欠失を有し、及び／又は本明細書において例示される該組換えＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼ）のＣ末端からの７５もしくは１００アミノ酸まで（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００アミノ酸まで）の欠失を有し、及び／又は本明細書において例示される該組換えＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１の組換えＬ－アスパラギナーゼ）のＮ末端及びＣ末端の両方でのアミノ酸の欠失を有し、欠失したアミノ酸の総数は、１２５もしくは１５０アミノ酸までであり得る。

実際、当業者は、実質的にＬ－アスパラギナーゼ活性を保持する相同タンパク質をどのように選択及び設計するかを理解するであろう。典型的には、Ｍａｓｈｂｕｒｎ及びＷｒｉｓｔｏｎ（Ｍａｓｈｂｕｒｎ，Ｌ．，ａｎｄＷｒｉｓｔｏｎ，Ｊ．（１９６３） “ＴｕｍｏｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＥｆｆｅｃｔｏｆＬ－Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ，” ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ１２，５０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））により記載されている方法に従うＮｅｓｓｌｅｒアッセイがＬ－アスパラギナーゼ活性の決定に使用される。

ポリペプチドは、その酵素活性を保持したまま１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、及び／又は付加により改変され得ることが当技術分野において周知である。この文脈において、用語「１つ以上のアミノ酸」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上のアミノ酸を指し得る。例えば、タンパク質の機能特性に影響を及ぼさない、所与の位置での１つのアミノ酸の化学的に等価なアミノ酸による置換は一般的である。置換は、
非極性又はわずかに極性の小型脂肪族残基のＡｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙと、
極性の負に荷電した残基及びそれらのアミドのＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎと、
極性の正に荷電した残基のＨｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓと、
非極性の大型脂肪族残基のＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓと、
大型芳香族残基のＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐと
の群のうちの１つの群内での交換と定義され得る。

従って、１つの負に荷電した残基の別の残基（例えば、グルタミン酸からアスパラギン酸）への置換又は１つの正に荷電した残基の別の残基（リジンからアルギニン）への置換をもたらす変化は、機能的に同等な生成物をもたらすと予想され得る。

アミノ酸配列内のアミノ酸が改変される位置及び改変され得るアミノ酸の数は、特に限定されない。当業者は、タンパク質の活性に影響を及ぼさずに導入され得る改変を理解することができる。例えば、タンパク質のＮ又はＣ末端部分における改変は、特定の条件下では、タンパク質の活性を変化させないと予想され得る。特にアスパラギナーゼに関しては、多くの特徴付けが、特に配列、構造、及び活性触媒部位を形成する残基に関してなされている。これにより、酵素の活性に影響を及ぼすことなく改変され得る残基に関する示唆が得られる。全ての既知の細菌資源由来のＬ－アスパラギナーゼは、共通の構造的特徴を有する。それらは全てホモ四量体であり、２つの隣接する単量体のＮ末端ドメインとＣ末端ドメインとの間の４つの活性部位を有する（Ａｇｈａｉｐｏｕｒ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４０，５６５５－５６６４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。それらは全てそれらの三次構造及び四次構造において高度な類似性を有する（Ｐａｐａｇｅｏｒｇｉｏｕ（２００８）ＦＥＢＳＪ．２７５，４３０６－４３１６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。Ｌ－アスパラギナーゼの触媒部位の配列は、エルウィニア・クリサンテミ、エルウィニア・カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、及び大腸菌のＬ－アスパラギナーゼＩＩの間で高度に保存されている（同上）。活性部位のフレキシブルループは、アミノ酸残基１４～３３を含有し、構造解析により、Ｔｈｒ１５、Ｔｈｒ９５、Ｓｅｒ６２、Ｇｌｕ６３、Ａｓｐ９６、及びＡｌａ１２０がリガンドと接触することが示されている（同上）。Ａｇｈａｉｐｏｕｒらは、基質と複合体を形成した酵素の高分解能結晶構造解析により、エルウィニア・クリサンテミのＬ－アスパラギナーゼの４つの活性部位の詳細な解析を行った（Ａｇｈａｉｐｏｕｒ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ４０，５６５５－５６６４）。Ｋｏｔｚｉａらは、エルウィニア属のいくつかの種及び亜種由来のＬ－アスパラギナーゼの配列を提供しており、それらのタンパク質は、エルウィニア・クリサンテミとエルウィニア・カロトボラとの間で約７５～７７％の同一性しか有さないにも関わらず、それらは各々が依然としてＬ－アスパラギナーゼ活性を有する（Ｋｏｔｚｉａ（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２７，６５７－６６９）。Ｍｏｏｌａらは、エルウィニア・クリサンテミ３９３７のＬ－アスパラギナーゼのエピトープマッピング試験を実施し、アスパラギナーゼの免疫原性を低減するために様々な抗原性配列を変異させた後でさえ、酵素活性を保持することができた（Ｍｏｏｌａ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０２，９２１－９２７）。Ｌ－アスパラギナーゼで実施されてきた広範囲な特徴付けを考慮することにより、当業者は、酵素活性を保持したまま、どのように断片の作製及び／又は配列置換を行うかを決定し得る。より具体的には、配列番号１のタンパク質の断片も、本発明の組換えＬ－アスパラギナーゼにおいて使用されるタンパク質の定義の範囲内に含まれる。用語「配列番号１の断片」は、ポリペプチドの配列が全長の配列番号１より少ないアミノ酸を含み得るが、Ｌ－アミノヒドロラーゼ活性を付与するのに十分なタンパク質を保持し得ることを意味する。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、配列番号１を含むタンパク質との少なくとも約８０％の相同性又は同一性を有する。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、配列番号１のアミノ酸配列に対する少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性の配列同一性を含む。用語「相同性」及び「配列同一性」は、本明細書において互換的に使用される。用語「配列番号１の配列を含む」（例えば、Ｌ－アスパラギナーゼが配列番号１のアミノ酸配列に対する１００％の相同性又は配列同一性を有する場合）は、アスパラギナーゼのアミノ酸配列が配列番号１に厳密に限定されなくてもよく、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の追加のアミノ酸を含有していてもよいことを意味する。

配列番号１は以下のとおりである。

また本開示は、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼをコードする核酸、特に本明細書で定義される配列番号１をコードする核酸に関する。

Ａ．ペグ化
ある特定の態様において、本明細書に記載されるように本発明の組換えＬ－アスパラギナーゼは、さらにポリマーを含み、及び／又はポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分とコンジュゲートされる。他の実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。

ポリマーは、非毒性の水溶性ポリマー、例えば、多糖類、例えば、ヒドロキシエチルデンプン、ポリアミノ酸、例えば、ポリリジン、ポリエステル、例えば、ポリ乳酸、及びポリアルキレンオキシド、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の群から選択される。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）は、当技術分野において周知であり、これらには、直鎖及び分枝鎖ポリマーが含まれる。いくつかのポリマー（特にＰＥＧ）の例は、米国特許第５，６７２，６６２号、米国特許第４，１７９，３３７号、米国特許第５，２５２，７１４号、米国特許出願公開第２００３／０１１４６４７号、米国特許第６，１１３，９０６号、米国特許第７，４１９，６００号、米国特許第９，９２０，３１１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／１０９０１８号、及びＰＣＴ公開第Ｗ０２００４／０８３２５８号において提供される（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

かかるポリマーの質は、多分散性指数（ＰＤＩ）により特徴付けされる。ＰＤＩは、所与のポリマー試料の分子量分布を反映し、重量平均分子量を数平均分子量で除算することにより計算される。ＰＤＩは、ポリマーのバッチ内の個々の分子量の分布を示す。ＰＤＩは、常に１より大きい値をとるが、ポリマー鎖が理想的なガウス分布（＝単分散）に近づくにつれて、ＰＤＩは１に近づく。

一実施形態において、コンジュゲートは、Ａｓｐ－［ＮＨ－ＣＯ－（ＣＨ_２）ｘ－ＣＯ－ＮＨ－ＰＥＧ］ｎの式を有し、式中、Ａｓｐは、組換えＬ－アスパラギナーゼであり、ＮＨは、リジン残基及び／又はＡｓｐのＮ末端のＮＨ基のうちの１つ又は複数であり、ＰＥＧは、ポリエチレングリコール部分であり、ｎは、Ａｓｐ内のアクセス可能なアミノ基（例えば、リジン残基及び／又はＮ末端）のうちの少なくとも４０％～約１００％を表す数字であり、ｘは、約１～約８、より具体的には、約２～約５の範囲の整数である。特定の実施形態において、ＰＥＧは、モノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）である。

Ｂ．ＰＡＳ化
いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされる。他の実施形態において、組換えクリサンタスパーゼは、プロリン、アラニン、又はセリンを含有するペプチドとコンジュゲートされない。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列に対する少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する組換えＬ－アスパラギナーゼ及び（ｉｉ）１種又は複数種のポリペプチド（複数可）を含む融合タンパク質であり、ここで、前記ポリペプチドは、プロリン及びアラニンアミノ酸残基だけからなる。

かかる融合タンパク質では、プロリン及びアラニンアミノ酸残基だけからなるポリペプチドにおけるプロリン残基は、ポリペプチドの約１０％超且つ約７０％未満を構成し得る。従って、かかる融合タンパク質では、好ましくはポリペプチドにおけるアミノ酸残基の総数のうちの１０％～７０％がプロリン残基であり得、より好ましくは、ポリペプチドに含まれるアミノ酸残基の総数のうちの２０％～５０％がプロリン残基であり、さらにより好ましくは、ポリペプチドに含まれるアミノ酸残基の総数のうちの３０％～４０％（例えば、３０％、３５％、又は４０％）がプロリン残基である。ポリペプチドは、複数のアミノ酸リピートを含み得、ここで、該リピートはプロリン及びアラニン残基からなり、６つ以下の連続アミノ酸残基が同一である。特に、ポリペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＰＡＡＰＡＰＡＡＰＡＡＰＡＰＡＡＰＡ（配列番号２）、又は循環置換されたバージョン、又は配列の全体もしくは一部としての配列の多量体（複数可）を含み得るか、又はそれからなり得る。他の実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、このようなポリペプチドを特に欠いており、例えば、組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン残基の上記のパーセンテージ又はリピートを含有するポリペプチドにコンジュゲートされない。

本発明は、組換えＬ－アスパラギナーゼ、特に本明細書において定義される融合タンパク質をコードする核酸にも関する。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列は、配列番号１及びポリペプチドを含む組換えＬ－アスパラギナーゼのいずれかをコードする配列であり、ここで、前記ポリペプチドは、プロリン及びアラニンアミノ酸残基だけからなり、好ましくは、タンパク質は、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、挿入、又は置換されていることを除き、本明細書に記載される融合タンパク質であり、ただし、このアミノ酸配列を有する融合タンパク質は、Ｌ－アスパラギナーゼ活性を保持する。他の実施形態において、ヌクレオチド配列は、配列番号１を含む任意の組換えＬ－アスパラギナーゼをコードする配列であり、ここで、その配列は、プロリン及びアラニンアミノ酸残基だけからなるポリペプチドにコンジュゲートされていない（又はポリペプチドを含有する融合タンパク質をコードする配列の一部ではない）。

本開示による組換えＬ－アスパラギナーゼは、当技術分野において公知の方法、特に、代表的実施形態のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０，１７４，３０２号及びＰＣＴ出願第Ｗ０２０１９／１０９０１８号において開示される方法を使用して調製され得る。

Ｃ．組換えＬ－アスパラギナーゼを含む組成物
本開示は、組換えＬ－アスパラギナーゼを含む組成物も提供する。かかる組成物は、他の要素（限定されるものではないが、緩衝剤、塩、及び賦形剤が含まれる）と組み合わされた組換えＬ－アスパラギナーゼを含み得る。かかる組成物は、例えば、粒子、粉末、及びカプセル化が含まれる、Ｌ－アスパラギナーゼを対象に投与するためのビヒクルを含み得る。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼは、カプセル化され得る。アスパラギナーゼの赤血球へのカプセル化は、場合によっては、治療指数を改善するのに役立ち得る（Ｄ．Ｓｃｈｒｉｊｖｅｒｓｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．２００３，４２（９）：７７９－７９１）。例えば、カプセル化のための方法は、ＥＰ１７７３４５２に記載されており、これは、特にＬ－アスパラギナーゼのカプセル化に関連する全ての教示のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＩＩＩ．組換えＬ－アスパラギナーゼ及びその組成物の機能的側面及び他の特性
明らかなように、組換えＬ－アスパラギナーゼの機能的側面及び他の特性に関する本明細書における説明は、本開示発明の組換えＬ－アスパラギナーゼを含む組成物にも適用され得る。

いくつかの態様において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼは、野生型Ｌ－アスパラギナーゼと比較して患者におけるより弱い免疫原性反応を誘発し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼは、天然のＬ－アスパラギナーゼと比較して単回投与後のより高いＡＵＣ値を有し得る。本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼのこれらの特徴は、大腸菌のＬ－アスパラギナーゼ又はそのＰＥＧ化された形態に対する過敏症を以前に発症したと考えられる患者にとって有益である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼは、単回用量の投与後に特定の期間の間、例えば、約１週間超、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、又はより長期間、なんらの有意な抗体応答も起こさない。一例では、「なんらの有意な抗体応答も起こさない」とは、組換えＬ－アスパラギナーゼを投与されている対象が、抗体陰性と当技術分野において認められるパラメータの範囲内であると確認されること意味する。抗体レベルは、当技術分野において公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ又は表面プラズモン共鳴アッセイにより決定され得る（Ｚａｌｅｗｓｋａ－Ｓｚｅｗｃｚｙｋ（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．９，１１３－１１６；Ａｖｒａｍｉｓ（２００９）ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２９，２９９－３０２（これらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる））。

本発明の組換えＬ－アスパラギナーゼを含む組成物は、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）及び大腸菌で組換え的に発現されたエルウィニア・クリサンテミのＬ－アスパラギナーゼを含有するものと比較して低減された凝集を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組換えＬ－アスパラギナーゼを含む組成物は、他の形態のＬ－アスパラギナーゼを含有する組成物と比較して低減された凝集を示す。例えば、本発明の非コンジュゲート型組換えＬ－アスパラギナーゼを製造するためのプロセスは、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）及び大腸菌で組換え的に発現されたエルウィニア・クリサンテミのＬ－アスパラギナーゼと比べてより少ない凝集をもたらす。例えば、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）のバッチを製造するためのプロセスは、約６％の凝集を有する生成物をもたらす（実施例５及び実施例６を参照）。本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼのバッチは、通常、約１％未満の凝集を有する（実施例５及び実施例６を参照）。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、他のＬ－アスパラギナーゼより高い純度を有する。いくつかの実施形態において、純度は、アスパラギナーゼの所与の試料における凝集の量を実証することにより測定される。凝集の量は、限定されるものではないが、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）、サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー－多角度光散乱法（ＳＥＣＭＡＬＬＳ）、及び沈降速度解析超遠心分離（ｓｖＡＵＣ）が含まれる、当技術分野において説明されている各種の方法により実証され得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２５％、０．２％、０．１％、又は０．０１％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを含有する組成物において観察される凝集の量は、１～１０％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを含有する組成物において観察される凝集の量は、１０％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、９％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、８％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、７％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、６％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、５％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、４％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、３％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、２％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、１％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．５％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．２５％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．２％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．１％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．０１％未満である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、０．０１％～１０％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．０１％～約９％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．０１％～約８％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．０１％～約７％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．０１％～約６％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．１％～約５％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．２％～約４％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．２５％～約３％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約０．５％～約２％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、約１％である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの凝集の量は、１％である。

より少ない量の凝集が、一般的により低い免疫原性を有する生成物をもたらすことは当業者に公知である。免疫原性は、臨床において有害事象を引き起こす重要な要因であり、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）により規制されている（Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＧｕｉｄａｎｃｅｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｙ：ＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｆｏｒＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎＰｒｏｄｕｃｔｓ，２０１４，ＱｕａｔｅｒｎａｒｙＳｔｒｕｃｔｕｒｅ：ＰｒｏｄｕｃｔＡｇｇｒｅｇａｔｅｓａｎｄＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆＡｇｇｒｅｇａｔｅｓのｐ．１５－１７，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｍｅｄｉａ／８５０１７／ｄｏｗｎｌｏａｄを参照。Ｒａｔａｎｊｉｅｔａｌ；Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１４；１１（２）：９９－１０９；Ｗａｎｇｅｔａｌ；ＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＰｒｏｔｅｉｎＡｇｇｒｅｇａｔｅｓ－ＣｏｎｃｅｒｎｓａｎｄＲｅａｌｉｔｉｅｓ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１２，４３１（１－２）：１－１１；及びＭｏｕｓｓａｅｔａｌ，ＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎＡｇｇｒｅｇａｔｅｓ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１６；１０５（２）：４１７－４３０も参照）。

加えて、タンパク質凝集は、凝集が酵素の機能する能力に干渉するため、酵素活性と関連し、活性酵素の全収量の減少も引き起こし得る。タンパク質凝集は、製造及び開発に困難を生じさせ、これにより、治療薬を患者に提供するのにかかる時間を延ばし、コストを増加させる。本開示の組換えクリサンタスパーゼは、大腸菌で組換え的に発現された他のエルウィニア・クリサンテミのＬ－アスパラギナーゼ及びエルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼと比べてより少ない凝集を示す。組換えＬ－アスパラギナーゼのこれらの側面が、技術分野に対する改善である。

本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、上記のセクションにおける特性又は本明細書に記載される任意の他の特性の任意の組合せを有し得る。

ＩＶ．組換えＬ－アスパラギナーゼを製造する方法
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組換えクリサンタスパーゼは、シュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、シュードモナス・フルオレッセンスは、天然のＬ－アスパラギナーゼを欠損している。

いくつかの実施形態において、本開示は、可溶型の組換えＬ－アスパラギナーゼの高収量での細胞質産生のための方法を提供し、ここで、前記組換えタンパク質は、その天然宿主においてより低い収量でペリプラズムに産生される。その天然宿主であるエルウィニア・クリサンテミにおいて、Ｌ－アスパラギナーゼは、ペリプラズムに産生される。本発明は、高レベルの可溶及び／又は活性な組換えＬ－アスパラギナーゼの宿主細胞の細胞質での産生を可能にする方法を提供する。実施形態において、本明細書において提供される方法は、高レベルの可溶及び／又は活性な組換えＬ－アスパラギナーゼを、シュードモナス目（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ）、シュードモナス菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、又はシュードモナス・フルオレッセンス宿主細胞の細胞質に生じさせる。

組換えＬ－アスパラギナーゼを製造するために使用され得る方法は、例えば、米国公開第２０１９／０１２７７４２号に記載されており、これは全ての目的のために、及び特に組換えＬ－アスパラギナーゼのための製造方法に関連する全ての教示のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法で使用するためのＬ－アスパラギナーゼを単離及び開発するための更なる方法は、ＷＯ２０１１／００３８８６Ａ１、ＷＯ２０１８／２３４４９２Ａ１、ＷＯ２０１９／１０９０１８、ＷＯ２０２１／０７８９８８、及び２０２１年５月１４日に出願したＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０３２６２７を含み、これらは全ての目的のために、及び特にＬ－アスパラギナーゼのための製造及び開発方法に関連する全ての教示のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

Ｖ．治療方法及び組換えアスパラギナーゼタンパク質の使用方法
Ａ．疾患又は障害
本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、ヒト対象の疾患の治療に使用され得、ここで、その疾患は、アスパラギンの枯渇により治療可能である。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼはがんの治療に使用され得る。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与前に、大腸菌由来アスパラギナーゼの無症候の不活性化を経験している。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与前に、大腸菌由来アスパラギナーゼに対するアレルギー反応を経験している。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与前に、大腸菌由来アスパラギナーゼに対するアナフィラキシーを経験している。アレルギー又は過敏症の客観的兆候の非限定的な例としては、検査でアスパラギナーゼ酵素に対する「抗体陽性」を示すことが挙げられる。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼはがんの治療に使用され得る。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療又はＡＬＬの治療に使用するための薬剤の製造に有用である。Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後のＡＬＬ患者における再発率は依然として高く、小児ＡＬＬ患者の約１０～２５％が早期に再発する（例えば、導入の３０～３６ヶ月後の維持期間中に再発することもある）。大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼにより治療された患者で再発が起きる場合、大腸菌製剤によるその後の治療は、「ワクチン接種」効果を引き起こす可能性があり、これにより、その後の投与における大腸菌製剤の免疫原性が高くなる。一実施形態において、本発明の組換えＬ－アスパラギナーゼは、他のアスパラギナーゼ製剤で以前に治療された再発性ＡＬＬを有する患者、特に、大腸菌由来アスパラギナーゼで以前に治療された再発性ＡＬＬを有する患者を治療する方法に使用され得る。いくつかの実施形態において、再発性ＡＬＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、再発性ＡＬＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、再発性ＡＬＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、再発性ＡＬＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされない。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）の治療又はＬＢＬの治療に使用するための薬剤の製造に有用である。ＡＬＬを有する患者と同様に、いくつかの実施形態において、再発性ＬＢＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、再発性ＬＢＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、再発性ＬＢＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、再発性ＬＢＬを有する患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、プロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされない。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、結腸直腸がん（ＣＲＣ）の治療又はＣＲＣの治療に使用するための医薬品の製造に使用される。いくつかの実施形態において、ＣＲＣ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＣＲＣ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、ＣＲＣ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＣＲＣ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療又はＡＭＬの治療に使用するための医薬品の製造に有用である。いくつかの実施形態において、ＡＭＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＡＭＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、ＡＭＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＡＭＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドにコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、ＡＭＬは再発性／難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／ＲＡＭＬ）である。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療又はＤＬＢＣＬの治療に使用するための医薬品の製造に有用である。いくつかの実施形態において、ＤＬＢＣＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＤＬＢＣＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはＰＥＧ部分とコンジュゲートされない。いくつかの実施形態において、ＤＬＢＣＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ＤＬＢＣＬ患者に投与される組換えＬ－アスパラギナーゼはプロリン又はアラニンを含有するペプチドとコンジュゲートされない。

本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼが治療において有用である疾患又は障害としては、血液悪性腫瘍、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＮＫリンパ腫、膵臓がん、ホジキン病、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性Ｔ細胞性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、二形質性Ｂ細胞性骨髄単球性白血病、慢性リンパ球性白血病、リンパ肉腫、細網肉腫、及び黒色肉腫、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含むがこれらに限定されない悪性腫瘍又はがんが挙げられるが、これらに限定されない。組換えＬ－アスパラギナーゼが治療において有用である他の疾患又は障害としては、腎細胞がん、腎細胞腺がん、多形神経膠芽腫及び神経膠芽腫・星細胞腫を含む神経膠芽腫、髄芽腫、横紋筋肉腫、悪性黒色腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、大細胞肺がん及び小細胞肺がんを含む肺がん、子宮内膜がん、卵巣腺がん、卵巣奇形がん、子宮頸部腺がん、乳がん、乳腺がん、乳管がん、膵臓腺がん、膵臓腺管がん、結腸がん、結腸腺がん、結腸直腸腺がん、膀胱移行上皮がん、膀胱乳頭腫、前立腺がん、骨肉腫、骨の類上皮がん、前立腺がん、並びに甲状腺がんが挙げられるが、これらに限定されない。がんは、固形がん、例えば、肺がん又は乳がんであり得る。アスパラギン枯渇に反応する代表的な非悪性血液疾患としては、限定されるものではないが、ＨＩＶ感染により引き起こされるもの（即ち、ＡＩＤＳ）等の感染性疾患が含まれる、免疫系介在性血液疾患が挙げられる。アスパラギン依存性に関連する非血液疾患としては、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、膠原血管病、ＡＩＤＳ、変形性関節症、アイザックス症候群、乾癬、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、硬化性全脳炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ熱、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎、糸球体腎炎、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、及びグレーブス病が挙げられる。疾患を引き起こすと疑われる細胞は、任意の好適なインビトロ又はインビボアッセイで、例えば、増殖培地がアスパラギンを欠くインビトロアッセイで、アスパラギン依存性について検査され得る。

本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼが治療において有用である疾患又は障害としては、肉腫、乳がん、転移性乳がん、肝臓がん、胃がん、結腸直腸がん、及び頭頸部がんが挙げられる。

Ｂ．アスパラギン依存性を検査するための方法
疾患を引き起こすと疑われる細胞は、任意の好適なインビトロ又はインビボアッセイで、例えば、増殖培地がアスパラギンを欠くインビトロアッセイで、アスパラギン依存性について検査され得る。従って、いくつかの実施形態において、本開示は、患者における治療可能な疾患を治療する方法であって、有効量の本発明の組換えＬ－アスパラギナーゼを患者に投与することを含む、前記方法を対象とする。特定の実施形態において、疾患は、ＡＬＬである。特定の実施形態において、疾患は、ＬＢＬである。特定の実施形態において、アスパラギン枯渇により治療可能な疾患の治療に使用される組換えＬ－アスパラギナーゼは、配列番号１の配列を含む。更なる実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ等のポリマーにコンジュゲートされない。

Ｃ．血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）を評価するための方法
ヒト対象における血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）を測定するためのアッセイが、ヒト対象の評価のために実施され得る。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＡを評価するために、血清試料がヒト対象から取得される。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＡを評価するために、全血試料が対象から取得される。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＡの評価は、組換えＬ－アスパラギナーゼが患者に投与される前に行われる。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＡの評価は、組換えＬ－アスパラギナーゼが患者に投与された後に行われる。

Ｄ．治療ライン
第１選択治療は、疾患に対して施される最初の治療である。第１選択治療は、単独療法又は一連の標準治療であり得る。

第２選択治療は、単独療法又は一連の標準治療であり得る。第２選択治療は、最初の治療が失敗した後、その効果が（部分的に又は完全に）消失した後、最初の治療が許容されない副作用を起こした後、患者が何らかの理由で最初の治療の中止を決定した後、又は現在の治療法より良好な結果を出し得る新規の治療法が利用可能になった後に施される治療である。いくつかの実施形態において、有益な相加的又は相乗的結果のために、第１選択治療に加えて第２選択治療がヒト対象に施され得る。

第３、第４、第５、第６、及び任意の更なる選択治療が含まれる、追加の選択治療は、第２選択治療と同様に定義されるが、この場合、第１及び第２選択治療の両方がいずれも失敗するか、それらの効果が（部分的に又は完全に）消失するか、許容されない副作用を有するか、患者が何らかの理由で第１及び／又は第２選択治療の中止を決定するか、又は第１及び第２選択治療より良好な結果を出し得る新規の治療法が利用可能になるか、又はこれらの理由の任意の組合せが発生する。追加の選択治療は、単独療法又は一連の標準治療であり得る。いくつかの実施形態において、有益な相加的又は相乗的結果のために、第１選択治療及び／又は第２選択治療に加えて追加の選択治療がヒト対象に施され得る。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は、第１選択治療として施される。他の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は、患者において、特にＡＬＬ及びＬＢＬを有する患者で、他のアスパラギナーゼ製剤、特に、天然のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ由来Ｌ－アスパラギナーゼ又はそのＰＥＧ化されたバリアント（ペガスパルガーゼ）に対する、「無症候の不活性化」を含むアレルギー又は過敏症の客観的兆候が生じた患者において、第２選択治療として施される。アレルギー又は過敏症の客観的兆候の非限定的な例としては、検査でアスパラギナーゼ酵素に対する「抗体陽性」を示すことが挙げられる。患者は、少なくとも１種の大腸菌由来のＬ－アスパラギナーゼに対する過敏症を以前に発症していてもよく、及び／又は少なくとも１種のエルウィニア・クリサンテミ由来のＬ－アスパラギナーゼに対する過敏症を以前に発症していてもよい。過敏症は、アレルギー反応、アナフィラキシーショック、及び無症候の不活性化からなる群から選択され得る。特定の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、ペガスパルガーゼによる治療後の第２選択治療で使用される。より具体的な実施形態において、第２選択治療で使用される本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、シュードモナス・フルオレッセンス細胞で産生されたＬ－アスパラギナーゼ、より具体的には、四量体であるＬ－アスパラギナーゼを含み、ここで、各単量体又はサブユニットは、配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼに対して過敏性であり、及び／又はエルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼに対する過敏症を以前に発症していてもよい患者の第２選択治療で使用される。大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼは、天然又は長時間作用型の大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼであり得る。天然の大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼは、配列番号３、又はＣｒａｓｔｉｎｉｎ（Ｂａｙｅｒ）、Ｅｌｓｐａｒ（Ｍｅｒｃｋ）、Ｋｉｄｒｏｌａｓｅ（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ）及びＬｅｕｎａｓｅ（Ｋｙｏｗａ）を含むがそれらに限定されない例のいずれかによって同定できる（ＡＳＰＧ２＿ＥＣＯＬＩ，Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ００８０５，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ００８０５も参照）。

配列番号３は以下のとおりである。

いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼはＣＲＣ患者に第２選択治療として投与される。いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼはＷｎｔ－陰性ＣＲＣ患者に第２選択治療として投与される。いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼはＷｎｔ－変異ＣＲＣ患者に第２選択治療として投与される。いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼはＡＭＬ患者に第２選択治療として投与される。いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼは再発性／難治性ＡＭＬ患者に第２選択治療として投与される。いくつかの実施形態において、組換えアスパラギナーゼはＤＬＢＣＬ患者に第２選択治療として投与される。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、天然の大腸菌由来アスパラギナーゼを投与された患者に第２選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、１用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の天然の大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに患者に投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼを投与された患者に第２選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、６用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに患者に投与される。いくつかの実施形態において、７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに患者に投与される。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはペガスパルガーゼである。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはカラスパルガーゼである（Ｌｉｕ，Ｇ．，ＳｐａｃｅｆｏｒＣａｌａｓｐａｒｇａｓｅ？ＡＮｅｗＡｓｐａｒａｇｉｎａｓｅｆｏｒＡｃｕｔｅＬｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０２０；２６：３２５－７を参照）。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は第３選択治療として施される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は第４選択治療として施される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は第５選択治療として施される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は第６選択治療として施される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は維持治療として施される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに患者に投与することは、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼによる治療サイクル内の任意の時点で行われ得る。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは、１～１４回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは２～１２回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～１０回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～１０回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～８回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～６回投与とする。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに患者に投与することは、患者が過敏症を発現する時点に応じて、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼによる治療サイクル内の任意の時点で行われ得る。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は多剤併用化学療法レジメンと共に施される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は、多剤併用化学療法レジメンの一部として１種又は複数種の他の化学療法薬と共投与される。いくつかの実施形態において、他の薬剤に加えて本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼにより患者を治療することは、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症した患者がアスパラギナーゼを利用できるように保証する助けとなる。本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを用いる多剤併用化学療法レジメンの一部であり得る薬剤の例としては、シタラビン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、メトトレキサート、ロイコボリン、ドキソルビシン、アントラサイクリン、コルチコステロイド及び糖質コルチコイド（プレドニゾン、プレドニゾロン、及び／又はデキサメタゾンを含むが、これらに限定されない）、シクロホスファミド、６－メルカプトプリン、ベネトクラクス、並びにエトポシドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、多剤併用化学療法レジメンは、組換えＬ－アスパラギナーゼ及び１種の追加の化学療法薬である。いくつかの実施形態において、多剤併用化学療法レジメンは、組換えＬ－アスパラギナーゼ及び２種以上の追加の化学療法薬である。

一例として、ＡＬＬを有する患者には、導入期、地固め期又は強化期、及び維持期が含まれる３つの化学療法フェーズの間、多剤併用化学療法と共に本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼが共投与される。具体例としては、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、（例えば、ＷＯ２００７／１０３２９０（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように）アスパラギンシンテターゼ阻害剤と共投与される。別の具体例では、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、アスパラギンシンテターゼ阻害剤と共投与されないが、他の化学療法剤と共投与される。別の具体例では、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、アスパラギンシンテターゼ阻害剤及び他の化学療法剤と共投与される。本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、多剤併用化学療法レジメンの一部として他の化合物の前に、後に、又はそれと同時に共投与され得る。特定の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、シュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生されたタンパク質、より具体的には、配列番号１の配列を含む組換えＬ－アスパラギナーゼを含む。

ＶＩ．組成物、製剤、投与経路、及び投与
Ａ．組成物、製剤及び投与経路
本発明は、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを含む医薬組成物も含む。医薬組成物は、標準的な技術を使用して患者に投与され得る。技術及び製剤は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０１５（参照により本明細書に組み込まれる）において見出され得る。本明細書で開示される実施形態は、例えば２０２０年１０月２３日に出願したＷＯ２０２１／０７８９８８及び２０２１年５月１４日に出願したＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０３２６２７に記載されている他のレジメンと共に、又はそれに加えてさらに利用することができ、これらの書類は、それぞれ、全ての目的のために、特に組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及び使用に関連する全ての教示のために参照により本明細書に組み込まれる。

適切な剤形は、部分的には、使用法又は導入経路、例えば、注射（非経口）によって決定される。かかる剤形は、治療薬が標的細胞に到達するか、又はそうでなければ所望の治療効果を発揮することを可能にするものでなければならない。例えば、血流に注入される医薬組成物は、好ましくは、可溶性である。本開示による医薬組成物は、その薬学的に許容される塩及び錯体として製剤化され得る。薬学的に許容される塩は、投与される量及び濃度で存在する無毒性の塩である。かかる塩の製剤は、化合物がその生理学的効果を発揮するのを妨げることなく、その化合物の物理的特性を変化させることにより、医療での使用を促進し得る。物理的性質の有用な変化としては、融点の低下による経粘膜投与の促進、及び溶解性増加による薬物のより高濃度での投与の促進が挙げられる。本明細書に記載される改変されたタンパク質の薬学的に許容される塩は、当業者が理解するように、錯体として存在してもよい。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩、例えば、硫酸塩、塩酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、及びキナ酸塩を含有するものが挙げられる。薬学的に許容される塩は、塩酸、マレイン酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、フマル酸、及びキナ酸が含まれる、酸から得られ得る。酸性官能基、例えば、カルボン酸又はフェノールが存在する場合、薬学的に許容される塩としては、塩基付加塩、例えば、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、アルキルアミン、及び亜鉛を含有するものも挙げられる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（前出）を参照のこと。かかる塩は、適切な対応する塩基を使用して調製され得る。特定のアスパラギナーゼの投与を容易にするために、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤も本発明による医薬組成物に組み込まれ得る。本発明の実施に使用するのに好適な担体の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、例えば、ラクトース、グルコース、もしくはスクロース、又は各種デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール、及び生理的適合性の溶媒が挙げられる。生理的適合性の溶媒の例としては、注射用水（ＷＦＩ）、生理食塩水、及びデキストロースの無菌溶液が挙げられる。本発明による医薬組成物は、静脈内（ＩＶ）及び筋肉内（ＩＭ）投与を含む種々の経路で投与され得る。注射では、医薬組成物は、液体溶液、好ましくは、生理的適合性の緩衝液又は溶液、例えば、生理食塩水、ハンクス液、又はリンガー液に製剤化される。加えて、化合物は、固体形態に製剤化され得、使用直前に再溶解又は懸濁され得る。例えば、凍結乾燥形態の組換えＬ－アスパラギナーゼが製造され得る。特定の態様において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、筋肉内投与される。好ましい特定の態様において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、静脈内投与される。

好ましい実施形態において、医薬組成物は、凍結乾燥されない。更なる実施形態において、医薬組成物は、溶液である。いくつかの実施形態において、最終凍結乾燥ステップは、誘発ストレスを引き起こし得、化合物の分解を促進し得る。いくつかの実施形態において、凍結乾燥は、凝集を増加させ得る。いくつかの更なる好ましい実施形態において、組換えクリサンタスパーゼは、筋肉内投与される。いくつかの更なる好ましい実施形態において、組換えクリサンタスパーゼは、静脈内投与される。投与形態のこれらの好ましい実施形態の各々について、改変形態及び非改変形態が含まれる、任意の形態の組換えＬ－アスパラギナーゼが投与され得ることが理解されよう。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、特定の時点でヒト対象に静脈内投与され、他の特定の時点で同じヒト対象に筋肉内投与される。

Ｂ．投与
いくつかの実施形態において、用量は、一定時間にわたり、且つ一定頻度でヒト対象に投与される量である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの用量は、過敏症が鎮静化する場合にのみ過敏症を有するヒト対象に投与される。

例示的な実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１０ｍｇ／ｍ^２～１００ｍｇ／ｍ^２の量でヒト対象に投与される。

例示的な実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量でヒト対象に投与される。

例示的実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、連続５日間にわたり１日おきに筋肉内投与され、その後、２連続日の休薬期間が続き、ここで、量は約２５ｍｇ／ｍ^２である。

例示的実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、連続５日間にわたり１日おきに静脈内投与され、その後、２連続日の休薬期間が続き、ここで、量は約５０ｍｇ／ｍ^２である。

更なる例示的実施形態において、投与に関する本明細書における説明のいずれかに従って、かかる用量で投与される組換えＬ－アスパラギナーゼは、ＰＥＧ部分等のポリマーにコンジュゲートされず、及び／又はアラニン及び／又はプロリン残基のみを含むペプチドにコンジュゲートされない。

１．投与量
送達されるべき本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は、多数の因子、例えば、化合物のＩＣ５０、ＥＣ５０、生物学的半減期、患者の年齢、サイズ、体重、及び健康状態、並びに治療される疾患又は障害に依存する。考慮されるべきこれらの因子及び他の因子の重要性は、当業者に周知である。一般に、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は、患者の体表面積１平方メートル当たり約１ミリグラム（ｍｇ／ｍ^２）～１，０００／ｍ^２の範囲で投与され、限定されるものではないが、ＡＬＬ又はＬＢＬが含まれる疾患を治療するために約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の投与量範囲で投与される。当然、他の投与量及び／又は治療レジメンが主治医の判断に従って用いられ得る。

いくつかの実施形態において、本方法は、約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、１０ｍｇ／ｍ^２～１００ｍｇ／ｍ^２の量で本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９５、もしくは約９５ｍｇ／ｍ^２の量、又は（例えばタンパク質含有量に基づいて）その当量で投与される。より具体的な実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、及び約１００ｍｇ／ｍ^２からなる群から選択される量で投与される。別の特定の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１ｍｇ／ｍ^２以上、約１０ｍｇ／ｍ^２以上、約１５ｍｇ／ｍ^２以上、約２０ｍｇ／ｍ^２以上、約２５ｍｇ／ｍ^２以上、約３０ｍｇ／ｍ^２以上、約３５ｍｇ／ｍ^２以上、約４０ｍｇ／ｍ^２以上、約４５ｍｇ／ｍ^２以上、約５０ｍｇ／ｍ^２以上、約５５ｍｇ／ｍ^２以上、約６０ｍｇ／ｍ^２以上、約６５ｍｇ／ｍ^２以上、約７０ｍｇ／ｍ^２以上、約７５ｍｇ／ｍ^２以上、約８０ｍｇ／ｍ^２以上、約８５ｍｇ／ｍ^２以上、約９５ｍｇ／ｍ^２以上、約９５ｍｇ／ｍ^２以上、約１００ｍｇ／ｍ^２以上、約２００ｍｇ／ｍ^２以上、又は約３００ｍｇ／ｍ^２以上の用量で投与される。別の特定の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３００ｍｇ／ｍ^２以下、約２００ｍｇ／ｍ^２以下、約１００ｍｇ／ｍ^２以下、約９５ｍｇ／ｍ^２以下、約８０ｍｇ／ｍ^２以下、約７５ｍｇ／ｍ^２以下、約７０ｍｇ／ｍ^２以下、約６５ｍｇ／ｍ^２以下、約６０ｍｇ／ｍ^２以下、約５５ｍｇ／ｍ^２以下、約５０ｍｇ／ｍ^２以下、約４５ｍｇ／ｍ^２以下、約４０ｍｇ／ｍ^２以下、約３５ｍｇ／ｍ^２以下、約３０ｍｇ／ｍ^２以下、約２５ｍｇ／ｍ^２以下、約２０ｍｇ／ｍ^２以下、約１５ｍｇ／ｍ^２以下、約１０ｍｇ／ｍ^２以下、約５ｍｇ／ｍ^２以下、又は約１ｍｇ／ｍ^２以下の用量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１２ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。別の例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。別の例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、２５ｍｇ／ｍ^２～５０ｍｇ／ｍ^２の量で本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ｍｇ／ｍ^２の量又は（例えばタンパク質含有量に基づいて）その当量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２８．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２３ｍｇ／ｍ^２～約２７ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２４ｍｇ／ｍ^２～約２６ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２４．５ｍｇ／ｍ^２～約２５．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５８．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約４３ｍｇ／ｍ^２～約５７ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４４ｍｇ／ｍ^２～約５６ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４６ｍｇ／ｍ^２～約５４ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４８ｍｇ／ｍ^２～約５２ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４９ｍｇ／ｍ^２～約５１ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４９．５ｍｇ／ｍ^２～約５０．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約８５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約６０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１２．５ｍｇ／ｍ^２～約４７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１５ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍ^２～約４２．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約４０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２４ｍｇ／ｍ^２～約３９ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２７ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２７．５ｍｇ／ｍ^２～約４７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３２．５ｍｇ／ｍ^２～約４２．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２１．５ｍｇ／ｍ^２～約３８．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３６ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内又は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内又は筋肉内投与される。

例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約８５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約６０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。例示的実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内又は静脈内投与される。

別の実施形態において、本方法は、非組換えＬ－アスパラギナーゼと比較して患者におけるより弱い免疫原性反応を誘発する本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで前記一連の用量の各用量は約２０ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約２２．５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約２５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約２７．５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約３０ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は７日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、そして、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２であり、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は７日間であり、前記一連の用量のうち約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、そして、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。いくつかの実施形態において、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２での用量は血管内投与され、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２での用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２であり、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は７日間であり、前記一連の用量のうち約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、そして、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。いくつかの実施形態において、約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２での用量は血管内投与され、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２での用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとしてヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含む。ここで、前記時間順用量セットは第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は３日間であり、前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は２日間であり、前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は３日間行われず、前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は２日間行われない。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとしてヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含む。ここで、前記時間順用量セットは、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は３日間であり、前記第１用量が約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は２日間であり、前記第２用量が約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は３日間行われず、前記第２用量が約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は２日間行われない。いくつかの実施形態において、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２７．５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとしてヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含む。ここで、前記時間順用量セットは、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は３日間であり、前記第１用量が約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は２日間であり、前記第２用量が約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は３日間行われず、前記第２用量が約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は２日間行われない。いくつかの実施形態において、約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

２．投与頻度
特定の実施形態において、治療は、約１ｍｇ／ｍ^２～約１０００ｍｇ／ｍ^２、典型的には約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の範囲の用量で、約週３回～約月１回、典型的には週１回又は１週間おきに１回の範囲のスケジュールで、単一の薬剤（例えば、単独療法）として、又はメトトレキサート、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びアントラサイクリンを含むがこれらに限定されない糖質コルチコイド、コルチコステロイド、抗がん化合物、もしくは他の薬剤を含むがこれらに限定されない、化学療法剤の組合せの一部として施される。

本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、多剤併用化学療法レジメンの一部として他の化合物の前に、後に、又はそれと同時に投与され得る。特定の実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、シュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生されたタンパク質、より具体的には、配列番号１に記載の配列を含む組換えＬ－アスパラギナーゼを含む。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、単回投与で約３日～約１０日間（例えば、３、４、５、６、７、８、９、又は１０日間）の間、当技術分野において公知の方法及び装置を使用して検出不可能なレベルにＬ－アスパラギンを枯渇させる用量で投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、週３回投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、少なくとも１～３週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１～３週間の間、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約１～３週間の間、１週間のうちの月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２週間の間、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約２週間の間、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、２週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、２週間の間、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、２週間の間、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、週３回投与され、これは患者のアスパラギン枯渇により治療可能な疾患がなくなるまで継続される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続き、これは患者のアスパラギン枯渇により治療可能な疾患がなくなるまで継続される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与され、これは患者のアスパラギン枯渇により治療可能な疾患がなくなるまで継続される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、週３回投与され、これは患者が治療を終了又は延期すると決定するまで継続される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、連続５日間にわたり１日おきに投与され、その後、２連続日の休薬期間が続き、これは患者が治療を終了又は延期すると決定するまで継続される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与され、これは患者が治療を終了又は延期すると決定するまで継続される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、約４８時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは４０～５８時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約４２～５６時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約４４～５２時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約４６～５０時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約７２時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは６４～８０時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約６６～７８時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約６８～７６時間毎に投与される。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは約７０～７４時間毎に投与される。

いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼに対して過敏性であり、及び／又はエルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼに対する過敏症を以前に発症していてもよい患者に対して第２選択治療として投与される。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは、大腸菌由来長時間作用型アスパラギナーゼの投与の代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、６用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の大腸菌由来長時間作用型アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは１用量の長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはペガスパルガーゼである。更なる実施形態において、６回に分けた投与は約２週間の期間にわたり行われ得る。別の更なる実施形態において、７回に分けた投与は約２週間の期間にわたり行われ得る。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは、初回投与、２回目投与、及び３回目投与を含み、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記初回投与、２回目投与、及び３回目投与は、約４８～７２時間間隔で投与される。

いくつかの実施形態において、投与量はサイクル内で異なり得る。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は５０ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、サイクルの初回投与は月曜日に投与し、サイクルの２回目投与は水曜日に投与し、サイクルの３回目投与は金曜日に投与する。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く連続２日間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は５０ｍｇ／ｍ^２であり、その後、連続２日間の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、サイクルの初回投与は月曜日に投与し、サイクルの２回目投与は水曜日に投与し、サイクルの３回目投与は金曜日に投与する。

いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療するためにヒト対象においてアスパラギナーゼを枯渇させるための方法であって、ヒト対象に２週間の期間にわたり合計７用量のＬ－アスパラギナーゼが投与されるように、月曜日、水曜日、及び金曜日に、約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内投与することを含む、前記方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含むがそれらに限定されないがんを治療するためにヒト対象においてアスパラギナーゼを枯渇させるための方法であって、ヒト対象に２週間の期間にわたり合計６用量のＬ－アスパラギナーゼが投与されるように、（ａ）月曜日及び水曜日に、約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与すること、及び（ｂ）金曜日に、約５０ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含む、前記方法を提供する。

投与レジメンは、任意の週間数の間の任意のサイクル数、又は本明細書に明記される任意のエンドポイントまでの任意のサイクル数を包含し得る。

３．投与時間
いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、筋肉内注射により送達される場合、短時間、例えば、即時又は１秒～５分間かかる。他の実施形態において、ヒト対象への投与時間は、例えば、静脈内注射により送達される場合、より長い時間である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与は、約５分間～約４時間続く。例示的実施形態において、ヒト対象への投与時間は、９０分間～約１５０分間続く。いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、約２時間続く。いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、２時間続く。いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、約４５分間～約７５分間続く。いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、約１時間続く。いくつかの実施形態において、ヒト対象への投与時間は、１時間続く。

４．好ましい投与レジメン
いくつかの実施形態において、本開示は、ヒト対象においてがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、再発性／難治性ＡＭＬ（Ｒ／ＲＡＭＬ）を有するヒト対象を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第１選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第２選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第３、第４、第５選択治療として使用され得る。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは天然の大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに使用され得る。いくつかの実施形態において、１用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは１用量の天然の大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりに使用され得る。いくつかの実施形態において、６用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼは、１用量の長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはペガスパルガーゼである。いくつかの実施形態において、本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼによる治療は維持治療として施される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与することは、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの治療サイクル内の任意の時点で行われ得る。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは１～１４回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは２～１２回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～１０回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～１０回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～８回投与とする。いくつかの実施形態において、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼのための治療サイクルは４～６回投与とする。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼを天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの代わりにヒト対象に投与することは、ヒト対象が過敏症を発現する時点に応じて、天然又は長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの治療サイクル内の任意の時点で行われ得る。当然、主治医の判断に応じて他の代替治療レジメンを採用してもよい。本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は混合用量の方式で投与してもよく、ここで投与量は投与レジメン内で異なる。一般に、混合投与方式での本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は、がんを含むがそれに限定されない疾患を治療するために、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲内で投与される。いくつかの実施形態において、２５ｍｇ／ｍ^２の用量は血管内投与され、５０ｍｇ／ｍ^２の用量は筋肉内投与される。本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は混合投与の方式で投与してもよく、ここで投与方法は投与レジメン内で異なる。いくつかの実施形態において、混合投与方式は静脈内及び筋肉内投与を含む。当然、主治医の判断に応じて他の投与量及び／又は治療レジメンを採用してもよい。

いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のがん治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、ヒト対象の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象の結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のＷｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のＷｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象の再発性／難治性ＡＭＬ（Ｒ／ＲＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第１選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第２選択治療として使用され得る。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは第３、第４、第５選択治療として使用され得る。

（ａ）用量レジメン１：２５ｍｇ／ｍ ^２での７用量
いくつかの実施形態において、本発明は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）治療を必要とするヒト対象の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象の結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はＷｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｗｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を必要とするヒト対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、再発性／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を必要とするヒト対象の再発性／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼを長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約２５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は２日間である。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼを長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記一連の用量の各用量は約２５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、前記一連の用量の各用量間の投与間隔は約４８時間である。

いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は、配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、切り替え前に大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

（ｂ）用量レジメン２：２５ｍｇ／ｍ ^２／２５ｍｇ／ｍ ^２／５０ｍｇ／ｍ ^２での６用量×２
本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は混合用量の方式で投与してもよく、ここで投与量は投与レジメン内で異なる。一般に、混合投与方式での本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼは、がんを含むがそれに限定されない疾患を治療するために約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲内で投与される。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＬＬ又はＬＢＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＭＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＲ／ＲＡＭＬである。当然、主治医の判断に応じて他の投与量及び／又は治療レジメンを採用してもよい。

いくつかの実施形態において、本開示は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）治療を必要とするヒト対象の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象の結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はヒト対象のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を必要とするヒト対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、再発性／難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／ＲＡＭＬ）治療を必要とするヒト対象の再発性／難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／ＲＡＭＬ）治療を切り替える方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は７日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、そして、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は７日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではなく、そして、２５ｍｇ／ｍ^２の用量は血管内投与され、５０ｍｇ／ｍ^２の用量は筋肉内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は約１６８時間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は約４８時間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は約７２時間であり、そして、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。

いくつかの実施形態において、本方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は約１６８時間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は約４８時間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は約７２時間であり、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではなく、そして、２５ｍｇ／ｍ^２の用量は血管内投与され、５０ｍｇ／ｍ^２の用量は筋肉内投与される。

いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

いくつかの実施形態において、本開示は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法を提供し、前記方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は６～８日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではない。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。いくつかの実施形態において、がんは急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。いくつかの実施形態において、がんはリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんはＷｎｔ陰性結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんは結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんはＷｎｔ変異結腸直腸がんである。いくつかの実施形態において、がんはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態において、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、急性骨髄性白血病は再発性／難治性ＡＭＬである。

いくつかの実施形態において、本開示は、がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法を提供し、前記方法は、一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼを大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりにヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含み、ここで、前記６用量のうちの４用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記６用量のうちの２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、約５０ｍｇ／ｍ^２での２用量間の投与間隔は６～８日間であり、前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は２日間であり、前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔は３日間であり、前記Ｌ－アスパラギナーゼは大腸菌由来アスパラギナーゼではなく、そして、２５ｍｇ／ｍ^２の用量は血管内投与され、５０ｍｇ／ｍ^２の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

（ｃ）投与レジメン３：３日間隔の５０／２５投与
本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は混合投与の方式で投与してもよく、ここで投与量及び投与時間は投与レジメン内で異なる。一般に、混合投与方式での本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は、ＡＬＬ又はＬＢＬ、ＣＲＣ、ＡＭＬ、又はＤＬＢＣＬを含むがそれらに限定されない疾患を治療するために約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲内で投与される。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、ＡＭＬはＲ／ＲＡＭＬである。当然、主治医の判断に応じて他の投与量及び／又は治療レジメンを採用してもよい。

いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）の治療を必要とするヒト対象の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本方法は、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとしてヒト対象に筋肉内投与することを含む。ここで、前記時間順用量セットは、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は３日間であり、前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は２日間であり、前記第２用量が５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は３日間行われず、前記第２用量が２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は２日間行われない。

いくつかの実施形態において、第１用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは、第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は２日間である。いくつかの実施形態において、第１用量は金曜日に投与され、第２用量は月曜日に投与される。いくつかの更なる実施形態において、第１用量は金曜日に投与され、第２用量は月曜日に投与され、第３用量は水曜日に投与される。

いくつかの実施形態において、第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は３日間である。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与され、第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは第１用量前の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第３用量は第１用量の２日前にヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与され、第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は第１用量、第２用量及び第３用量を含み、ここで前記第１用量は月曜日に投与され、前記第２用量は水曜日に投与され、前記第３用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、第３用量は５０ｍｇ／ｍ^２である。

いくつかの実施形態において、本方法は、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスをヒト対象に筋肉内又は血管内に実施することをさらに含み、ここで、前記時間順用量セットの組換えＬ－アスパラギナーゼの各インスタンスは前記時間順用量セットの複数のインスタンスにおける前記時間順用量セットの１つ前のインスタンスの完了をもって対象に実施される。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１００の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～８０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～６０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～５０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～４０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～３０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～２０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１５の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１４の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１３の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１２の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１１の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～１０の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～９の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～８の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～７の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～６の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～５の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは２～４の間である。いくつかの実施形態において、時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスは４～６の間である。

いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。

いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

（ｄ）投与レジメン３：約７２時間間隔の５０／２５投与
本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は混合投与の方式で投与してもよく、ここで投与量及び投与時間は投与レジメン内で異なる。一般に、混合投与方式での本開示の組換えＬ－アスパラギナーゼの量は、がんを含むがそれに限定されない疾患を治療するために約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲内で投与される。この投与レジメンを使用して治療される一部のがんは、ＡＬＬ又はＬＢＬ、ＣＲＣ、ＡＭＬ、又はＤＬＢＣＬを含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、ＣＲＣはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、ＡＭＬはＲ／ＲＡＭＬである。当然、主治医の判断に応じて他の投与量及び／又は治療レジメンを採用してもよい。

いくつかの実施形態において、本開示は、がんの治療を必要とするヒト対象のがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）の治療を必要とするヒト対象の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）の治療を必要とするヒト対象の結腸直腸がん（ＣＲＣ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）の治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ陰性結腸直腸がん（ＣＲＣ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｗｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）の治療を必要とするヒト対象のＷｎｔ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療を必要とするヒト対象の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、再発性／難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／ＲＡＭＬ）の治療を必要とするヒト対象の再発性／難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／ＲＡＭＬ）を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本方法は、大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとしてヒト対象に筋肉内又は血管内投与することを含む。ここで、前記時間順用量セットは、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、前記第１用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、前記第２用量は、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は約７２時間であり、前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記ヒト対象に対する第１用量と第２用量との間の投与間隔は約４８時間であり、前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は約７２時間行われず、前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与は約４８時間行われない。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、第１用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は約４８時間である。いくつかの実施形態において、第１用量は金曜日に投与され、第２用量は月曜日に投与される。いくつかの更なる実施形態において、第１用量は金曜日に投与され、第２用量は月曜日に投与され、第３用量は水曜日に投与される。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは第２用量後の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、ヒト対象に対する第２用量と第３用量との間の投与間隔は約７２時間である。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与され、第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、第１用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は約５０ｍｇ／ｍ^２であり、時間順用量セットは第１用量前の第３用量をさらに含み、前記第３用量は約２５ｍｇ／ｍ^２であり、第３用量は第１用量の約４８時間前にヒト対象に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は水曜日に投与され、第２用量は金曜日に投与され、第３用量は月曜日に投与される。いくつかの実施形態において、約２５ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は血管内投与され、約５０ｍｇ／ｍ^２での任意の用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は筋肉内投与される。いくつかの実施形態において、全ての用量は血管内投与される。

いくつかの実施形態において、本方法は、第１用量、第２用量及び第３用量を含み、ここで、前記第１用量は月曜日に投与され、前記第２用量は水曜日に投与され、前記第３用量は金曜日に投与される。いくつかの実施形態において、第１用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、第２用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、第３用量は５０ｍｇ／ｍ^２である。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。

いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼの投与レジメンはサイクルを含み、ここで、前記サイクルは任意に反復可能であり、前記サイクルは、連続５日間にわたる１日おきの組換えＬ－アスパラギナーゼの投与及びそれに続く約４８時間の休薬期間を含み、前記サイクルの初回投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの２回目投与は２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記サイクルの３回目投与は５０ｍｇ／ｍ^２であり、その後、約４８時間の休薬期間が続く。いくつかの実施形態において、サイクルの初回投与は月曜日に投与し、サイクルの２回目投与は水曜日に投与し、サイクルの３回目投与は金曜日に投与する。

（ｅ）別の好ましい投与レジメン
いくつかの実施形態において、本開示は、がんを治療するためにヒト対象においてアスパラギナーゼを枯渇させるための方法であって、ヒト対象に２週間の期間にわたり合計７用量のＬ－アスパラギナーゼが投与されるように、月曜日、水曜日、及び金曜日に、約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に血管内投与することを含む、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＬＬ又はＬＢＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＭＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＲ／ＲＡＭＬである。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

いくつかの実施形態において、本開示は、がんを治療するためにヒト対象においてアスパラギナーゼを枯渇させるための方法であって、ヒト対象に２週間の期間にわたり合計６用量のＬ－アスパラギナーゼが投与されるように、（ａ）月曜日及び水曜日に、約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に血管内投与すること、及び（ｂ）金曜日に、約５０ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼをヒト対象に筋肉内投与することを含む、前記方法を提供する。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＬＬ又はＬＢＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－陰性ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＷｎｔ－変異ＣＲＣである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＡＭＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはＲ／ＲＡＭＬである。いくつかの実施形態において、治療されるがんはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態において、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼはｐｅｇアスパラギナーゼである。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、ここで前記四量体の各単量体は配列番号１を含む。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは四量体であり、前記四量体の各単量体は配列番号１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ヒト対象は大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した。いくつかの実施形態において、ヒト対象は成人患者である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は小児患者である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはＬ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは凍結乾燥されない。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼはシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される。いくつかの実施形態において、ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）は組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である。いくつかの実施形態において、組換えＬ－アスパラギナーゼは多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される。

実施例１毒性及び毒物動態を評価するための試験
組換えＬ－アスパラギナーゼの毒性及び毒物動態（ＴＫ）を、ラットにおける優良試験所基準（ＧＬＰ）での２週間の連日静脈内注入試験で調査した。効果の可逆性もしくは持続性及び／又は遅延毒性を評価するために、２週間の回復期も含まれた。組換えＬ－アスパラギナーゼがバイオテクノロジー由来生成物であることを考慮して、研究成果の解釈に役立たせるために、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の発生が、全ての主試験動物においてプロスペクティブに評価された。

４つの群の雄及び雌性Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ラット（ｎ＝１０／性別／群）に、それぞれ０、４．６、１５．２、及び４５．６ｍｇ／ｋｇの用量の組換えＬ－アスパラギナーゼを投与した。回復動物は、対照及び高用量群に含まれた（ｎ＝５／性別／群）。毒物動態評価動物（対照群についてｎ＝３／性別、及びｎ＝９／性別／用量群）も含まれた。動物は、大腿静脈に挿入されたカテーテルによる５ｍＬ／ｋｇ／時間の投与速度で２時間の静脈内注入（±１０分間）により組換えＬ－アスパラギナーゼを投与された。ビヒクル及び対照物質は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び６．４％のトレハロースであり、ｐＨ７．０であった。

センチネル群も主試験の開始前に最高用量を投与され、２日間観察され、３日目に剖検されずに屠殺された。

死亡率、臨床所見、体重、体重の変化、摂食量、眼所見、並びに臨床病理及び解剖病理を、毒物動態（血清アスパラギナーゼ活性（ＳＡＡ）により評価される）及び抗薬物抗体の解析と共に記録した。

群１（対照）～群３（１５．２ｍｇ／ｋｇ）の毒性及び毒物動態評価動物は、１４日間投与され、それらの予定された剖検まで生存した。群４（４５．６ｍｇ／ｋｇ）における投与は、有害な臨床所見のために６日目に中止され、この時点で、動物は、割り当てられた群に従って剖検されたか、又は２週間の回復期間に移行されたかのいずれかである。群１の回復動物は、１４日間、１日１回ビヒクルを投与され、後に６日間の回復期間が続き、従って、群４の回復動物と同じ暦日に屠殺された。

ＳＡＡＣｍａｘ及びＡＵＣ０－２４により評価されるように、曝露は、１日目の４．６～４５．６ｍｇ／ｋｇ／日及び１４日目の４．６～１５．２ｍｇ／ｋｇ／日で、用量レベルの増加と共に増加した。Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０－２４値の増加は、１日目の４．６～１５．２及び１５．２～４５．６ｍｇ／ｋｇ／日並びに１４日目の４．６～１５．２ｍｇ／ｋｇ／日で、ほぼ用量比例性であったが、１日目の４．６～４５．６ｍｇ／ｋｇ／日では、用量の１０倍の増加に対してＡＵＣ０－２４が１８倍に増加した。ＳＡＡＣｍａｘ及びＡＵＣ０－２４値には有意な性差はなかった。ＳＡＡの蓄積は、反復投与後のラットにおいて観察されなかった。

早期に安楽死させた高用量群の動物において、臨床所見としては、立毛、被毛粗剛、足の皮膚の発赤、及び透明な口腔内分泌物が挙げられた。造血の減少を示す顕著な血液学的検査値の変化が認められ、これには網状赤血球、血小板、及び白血球数の減少が含まれた。これらの変化は回復動物において可逆的であることが分かった。血糖濃度及び血中尿素窒素濃度の増加、並びにタンパク質及び肝酵素の減少は、それぞれ脱水、腎前性高窒素血症、タンパク質の損失又はコンパートメント間移動、及び肝酵素活性の下方調節を示唆した。肉眼的所見は、１匹の雌の腺胃における粘膜の限局性の赤変に限られ、これは顕微鏡的相関を欠いていた。顕微鏡的所見としては、大腿骨の骨髄における細胞充実度の減少、心筋壊死及び心筋出血、非腺胃部／十二指腸部における粘膜下浮腫／膿瘍及び上皮過形成／びらん、脾臓における赤脾髄、髄外造血、及びリンパ球の減少、胸腺における皮質リンパ球の減少、並びに膵臓における分泌減少が挙げられた。これらの変化は有害とみなされた。雄及び雌における脾臓及び胸腺重量の増加が回復動物の屠殺時に認められたが、回復と一致するとみなされた。回復動物に対する顕微鏡評価は実施されなかった。

摂食量及び体重の用量相関性の減少が、１５．２ｍｇ／ｋｇ／日以下で投与された動物において認められ、立毛が１５．２ｍｇ／ｋｇ／日で認められた。血液学的検査値及び臨床化学検査値の用量相関性の変化は、一般に高用量群で観察されたものと一致したが、より小さい変化がほとんどの動物で観察された。これらの臨床病理学的変化は有害とみなされなかった。低用量及び中用量群動物における顕微鏡的所見は、赤血球前駆細胞の軽微ないし軽度の減少、及び骨髄系前駆細胞の増加からなり、これらは血液学的所見に一致していた。脾臓重量の減少は、髄外造血及び赤脾髄の減少と相関したが、胸腺重量の減少は、顕微鏡的相関を欠いていた。

結論として、雄及び雌性Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ラットは、１４日間、ビヒクル対照物質又は４．６、１５．２、もしくは４５．６ｍｇ／ｋｇ／日の組換えＬ－アスパラギナーゼを静脈内注入により１日１回投与された。瀕死状態での屠殺及び投与フェーズの６日目での投与の中止を必要とした有害な臨床所見、並びに大腿骨の骨髄における細胞充実度の減少、心臓における心筋壊死及び心筋出血、非腺胃部における粘膜下浮腫又は膿瘍及び上皮過形成、並びに胃又は十二指腸のびらん／潰瘍が、４５．６ｍｇ／ｋｇ／日で投与された動物で発生した。非有害な臨床所見、臨床病理学的変化、及び顕微鏡的所見が、１５．２ｍｇ／ｋｇ／日以下で投与された動物で発生した。従って、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、１５．２ｍｇ／ｋｇ／日である。

この試験の強調される部分としては、対照及び高用量における回復群（ｎ＝５／性別／群）有りの雄及び雌性Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）ラット（ｎ＝１０／性別／群）が挙げられる。組換えＬ－アスパラギナーゼ（０、４．６、１５．２、又は４５．６ｍｇ／ｋｇ／日）は、２時間の静脈内注入により最長１４日間、毎日投与された。高用量群において６日目に、有害な臨床所見により屠殺及び投与の中止が必要とされた。有害な、大腿骨の骨髄における細胞充実度の減少、心臓における壊死及び出血、並びに非腺胃部／十二指腸部におけるびらん、浮腫、過形成、膿瘍、及び／又は潰瘍が、高用量群で発生した。非有害であるが、質的に類似する臨床所見、臨床病理学的変化、及び顕微鏡的所見が、１５．２ｍｇ／ｋｇ／日以下で投与された動物で発生した。無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、１５．２ｍｇ／ｋｇ／日であると決定された。

実施例２安全を評価するための試験
対象は、１８～５５歳であり、治験担当医師による判定で良好な健康状態であった。投与コホート１において、対象は、２時間の静脈内（ＩＶ）注入（Ｎ＝６）又は筋肉内（ＩＭ）注入（Ｎ＝６）のいずれかにより組換えＬ－アスパラギナーゼ（２５ｍｇ／ｍ^２）を単回投与されるように無作為化（１：１）された。別の投与コホートの必要性を判定するために、組換えＬ－アスパラギナーゼの安全性、忍容性、及び薬物動態が評価された後、投与コホート２の対象が３７．５ｍｇ／ｍ^２のＩＶ（Ｎ＝６）又は１２．５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ（Ｎ＝６）のいずれかにより組換えＬ－アスパラギナーゼを単回投与されるように無作為化（１：１）された。組換えＬ－アスパラギナーゼは入院病棟で投与され、対象は５日目に退院し、６日目及び３０日目に電話による安全性経過観察が行われた。第１の目的は、各コホートでのＩＶ及びＩＭ投与により組換えＬ－アスパラギナーゼの安全性及び忍容性を評価することであった。第２の目的には、血清アスパラギナーゼ活性（ＳＡＡ）に基づくＩＶ及びＩＭ投与による組換えＬ－アスパラギナーゼ薬物動態の特徴付けが含まれた。

登録された２４人の対象の人口統計学的特性（平均±ＳＤ）には、年齢（３８．４±８．３０歳）、体重（７７．０４±１０．００ｋｇ）、及び体表面積（１．９１±０．１５ｍ^２）以下が含まれた。加えて、対象のうちの６３％が男性であり、９７％の民族性がヒスパニック系／ラテンアメリカ系であり、８３％が白人であり、１７％が黒人／アフリカ系アメリカ人であった。安全性及び薬物動態の両方がこの試験で評価された。安全性について、投与コホート１における８／１２（６７％）の対象が、１件以上の有害事象を有した（ＩＶ＝４対象、ＩＭ＝４対象）。投与コホート２では、１１／１２（９２％）の対象が、１件以上の有害事象を有した（ＩＶ＝６対象、ＩＭ＝５対象）。重篤な有害事象又はグレード３以上の有害事象は、いずれの投与コホートのどの対象についても報告されなかった。各投与コホートにおける２人以上の対象で発生した、最もよく見られた治療下で発現した有害事象は、悪心であった（図１、表１を参照）。消化不良は、１２．５ｍｇ／ｍ^２の組換えＬ－アスパラギナーゼをＩＭ投与された対象において最もよく見られた有害事象であった（図１、表１を参照）。薬物動態評価は、ＩＭ投与された場合、１２．５及び２５ｍｇ／ｍ^２の投与コホートにおいて６／６（１００％）の対象で、組換えＬ－アスパラギナーゼの血清アスパラギナーゼ活性レベルが、投与４８及び７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達したことを示した。ＩＶ投与後、２５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルでは、投与４８時間後での６／６（１００％）の対象及び７２時間後での４／６（６７％）の対象において、血清アスパラギナーゼ活性レベルが、０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達した一方で、３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルでは、投与４８及び７２時間後に６／６（１００％）の対象が、０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達した（図１、表２を参照）。

健常な成人において組換えＬ－アスパラギナーゼ投与は十分な忍容性を示し、予期しない有害事象は認められず、血清アスパラギナーゼ活性は報告されず、グレード３以上の有害事象は認められなかった。０．１ＩＵ／ｍＬ以上の血清アスパラギナーゼ活性レベル（アスパラギン枯渇の代替マーカー）が、組換えＬ－アスパラギナーゼをＩＭ及びＩＶ投与された全てのヒト対象において４８時間で達成された。組換えＬ－アスパラギナーゼの投与７２時間後での０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルも、２５ｍｇ／ｍ^２ＩＶ群における２人の対象を除いて全ての対象で達成された。この試験の薬物動態及び安全性データの全体に基づいて、第２／３相での推奨開始用量は、月曜日／水曜日／金曜日の投与スケジュールでＩＭ投与経路について２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶ投与経路について３７．５ｍｇ／ｍ^２である。

実施例３母集団薬物動態（ＰＫ）モデルの開発及びシミュレーション
健常成人対象（ｓｂｊ）での第１相単回投与試験の血清アスパラギナーゼ活性（ＳＡＡ）集約データを使用して組換えＬ－アスパラギナーゼの母集団ＰＫモデルを開発し、ＰＫパラメータに対する内因性共変量（体重、体表面積、年齢、性別、及び人種）の効果を評価した。この母集団ＰＫモデルは、組換えＬ－アスパラギナーゼの中枢的第２／３相試験のために選択される開始用量の情報を提供するために開発された。２５ｍｇ／ｍ^２［Ｎ＝６］及び３７．５ｍｇ／ｍ^２［Ｎ＝６］での静脈内（ＩＶ）注入データ、並びに１２．５ｍｇ／ｍ^２［Ｎ＝６］及び２５ｍｇ／ｍ^２［Ｎ＝６］での筋肉内（ＩＭ）注入データが含まれる、合計２４人の対象がモデルに含まれた。異なる用量、スケジュール、及び投与経路に基づいて０．１ＩＵ／ｍＬ以上の治療標的トラフＳＡＡレベルを達成する可能性を調査するために、開発されたモデルを使用して、成人及び小児ＳＡＡプロファイル（１０００ｓｂｊ／集団）をシミュレートした。

ＩＶ及びＩＭ経路の両方を記述する最終モデルは、ＳＡＡクリアランスに対する非比例的共変量として体重が含まれる、線形消失（ＩＶ）及び混合次数吸収過程（ｍｉｘｅｄｏｒｄｅｒａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）（ＩＭのみ）を伴う１コンパートメントモデルである。体サイズ評価尺度（即ち体重及びＢＳＡ（体表面積））が、統計的に有意な共変量として確認され、組換えＬ－アスパラギナーゼＰＫの２．８％及び３．４％の変動の原因とされた。第１相試験データ及び母集団ＰＫモデル化及びシミュレーションに基づいて、第２／３相での推奨開始用量は、月曜日／水曜日／金曜日の投与スケジュールでＩＭ投与経路について２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶ投与経路について３７．５ｍｇ／ｍ^２である。推奨用量及びスケジュールは、投与７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のトラフＳＡＡレベルを維持すると予想される。

実施例４安全性及び有効性を評価するための試験
この試験は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性（アレルギー反応又は無症候の不活性化）を示し、治療計画（表３）に大腸菌由来アスパラギナーゼの１回より多くの投与が残っている急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）患者における、組換えＬ－アスパラギナーゼの非盲検、多施設共同の第２／３相用量確認及び薬物動態試験である。この試験は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏症を発症する患者における、アスパラギナーゼ活性により測定される組換えＬ－アスパラギナーゼの忍容性及び有効性を評価するように設計されている。これらの患者では、６用量の組換えＬ－アスパラギナーゼが、大腸菌由来長時間作用型アスパラギナーゼの各用量の代わりに使用される。個々の患者治療期間は、患者の本来の治療計画に残っている大腸菌由来アスパラギナーゼの投与回数に応じて異なる。

この試験は、筋肉内（ＩＭ）投与について、組換えＬ－アスパラギナーゼの用量を決定し、安全性及び有効性を確認したパートＡと、組換えＬ－アスパラギナーゼ静脈内（ＩＶ）注入の最適な用量及びスケジュールを明らかにしたパートＢと、の連続した２パートからなる。

この試験のパートＡは、２つのＩＭコホートを有する。コホート１は、最終的なＩＭ用量レベルが選択される、反復投与／検証的コホートである。コホート２は、最終的なＩＭ用量レベル及びスケジュールの有効性及び安全性を確認するための拡張コホートである。

パートＢは、反復投与としてＡＬＬ／ＬＢＬ患者でさらに試験するための組換えＬ－アスパラギナーゼのＩＶ投与の最適用量を定めるために実施される。

患者が臨床効果を得られる限り、各患者の本来の治療計画に基づいて追加クールの組換えＬ－アスパラギナーゼが投与される。

血清アスパラギナーゼ活性レベルを決定するために、血液試料が、事前に決められた時点で採取される。患者は、有害事象についてモニタリングされた。組換えＬ－アスパラギナーゼ治療の免疫原性も評価された。

第１の目的は、（１）組換えＬ－アスパラギナーゼＩＭ投与の第１クールにおける奏効率（奏効率は、治療の第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上である直近の７２時間の血清アスパラギナーゼ活性最低値レベルを示す患者の割合と定義される）を決定すること、及び（２）治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生を評価することである。

第２の目的は、（１）２週間の時間枠内の組換えＬ－アスパラギナーゼのＩＭ投与の第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間の血清アスパラギナーゼ活性最低値レベルを示す患者の割合、（２）２週間の時間枠内の組換えＬ－アスパラギナーゼのＩＭ投与の第１クールにおける０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間の血清アスパラギナーゼ活性レベル最低値を示す患者の割合、（３）２週間の時間枠内の組換えＬ－アスパラギナーゼのＩＭ投与の第１クールにおける０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間の血清アスパラギナーゼレベル最低値を示す患者の割合、（４）最終投与の最長３０日後までの時間枠での、血清アスパラギナーゼ活性に基づく、母集団薬物動態アプローチ及び曝露に関連する相関を使用したＩＭ投与組換えＬ－アスパラギナーゼの薬物動態の特徴付け、（５）最終投与の最長３０日後までの時間枠での組換えＬ－アスパラギナーゼに対する抗薬物抗体形成の発生率、を決定することである。

適格基準では、男性及び女性の両方が認められる。組み入れ基準には、（１）ＡＬＬ又はＬＢＬの診断を有する小児及び成人患者、（２）大腸菌由来長時間作用型アスパラギナーゼに対するアレルギー反応を発症したか、又は無症候の不活性化を有する患者、（３）１クール以上の大腸菌由来アスパラギナーゼが治療計画に残っている患者、（４）治験担当医師の判断で、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する以前のアレルギー反応から完全に回復していなければならない患者が含まれる。除外基準には、（１）エルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼ又は組換えＬ－アスパラギナーゼを以前に投与された患者、（２）再発性ＡＬＬ又はＬＢＬを有する患者、（３）現在別の治験薬を投与されており、及び／又は１クールの組換えＬ－アスパラギナーゼの間に、組換えＬ－アスパラギナーゼと同時に（４８時間以内に）治験医療機器を用いて治療されている患者、（４）グレード３以上の膵臓炎の病歴を有する患者、（５）アスパラギナーゼに関連するグレード３以上の出血事象、又はカテーテルに関連する血栓事象を除く抗凝固治療を必要とするアスパラギナーゼに関連する血栓の既往歴を有する患者が含まれる。

更なる検査が、追加のサブコホートで３７．５ｍｇ／ｍ^２超のより高用量で行われ、各追加の用量レベル（複数可）は、以前の用量レベルからの５０％の増加を超過しない。

この試験では、ＩＶ製剤及びＩＭ製剤の評価のための登録が認められ、試験センターの関与は、スポンサーの裁量に委ねられる。

検出不可能なＳＡＡレベルは、ＣＬＩＡ下でこの試験を行うことが認可された認定検査機関により定義された定量下限値に基づき得る。ＣＬＩＡ認定検査機関は、それらのアッセイ方法に応じて異なる定量限界を利用し、検出不可能なＳＡＡレベルを決定するための結果は、検査機関の間で異なり得る。

血清アスパラギナーゼ濃度は、この試験でのＰＫの内容と同じである。ＳＡＰ（血清アスパラギナーゼ濃度を使用する）と検査機関のチューブ上のラベル（ＰＫの内容を使用する）との間の整合。

ある特定の好ましい実施形態において、検査の時間枠は、スクリーニング時の凝固検査及び臨床検査を含む全ての臨床検査について７日である。

実施例５タンパク質凝集を評価するための試験
品質試験が、研究室スケールで製造された小規模バッチの組換えＬ－アスパラギナーゼに対して実施された。この試験は、組換えＬ－アスパラギナーゼの品質、安全性、及び力価が、ディッケヤ・クリサンテミの自然発酵による天然のＬ－アスパラギナーゼ（現在臨床使用されている）と同等であり、代替的発現系及び精製プロセスを使用することによる悪影響を受けていないことを確認するための、商品であるＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）との同等性・同質性の解析的評価から構成された。

ＳＥＣ－ＨＰＬＣ法：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＢｉｏＳｅｐＳＥＣ－ｓ４０００カラムを使用したＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用して、サイズ排除クロマトグラフィーによる純度の決定を実行した。注入前にカラムを、移動相（５０ｍＭのホスフェート、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０）で１ｍＬ／分間にて１時間コンディショニングした。ＢｉｏＲａｄゲル濾過標準を移動相中に１ｍｇ／ｍＬまで希釈し、カラムを洗浄するための移動相ブランクの複数回の注入後に三重反復で注入した。組換えＬ－アスパラギナーゼ、大腸菌由来組換えクリサンタスパーゼ、及びＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の純度を評価した（図２）。

ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、四量体を表す主ピーク及び凝集体ピークを示す。全ての試料において異なるレベルのＨＭＷ凝集物が存在し、組換えＬ－アスパラギナーゼ（０．３％）と比較される場合に、ＥｒｗｉｎａｚｅＣＡＭＲ１７６（６％）においてより多量の凝集物が存在する。

サイズ排除クロマトグラフィー－多角度光散乱（ＳＥＣＭＡＬＬＳ）法：Ｃ．５２．Ｓ１６４０及びＳｏｌｖｉａｓの標準操作手順を使用して、全ての試料について試験溶液を二重反復で調製した。試料を配合緩衝液中に１０ｍｇ／ｍＬまで希釈し、混合した。少なくとも４ｍＬを調製した。試料溶液は、０．２μＭのシリンジフィルターを通して濾過し、直接ＨＰＬＣバイアルに入れた。最初の数滴は廃棄した。タンパク質濃度が１０ｍｇ／ｍＬより低い場合、７５０μｇを注入できるように注入量を調整することが必要とされた。ストレスを受けていない全てのバッチ、それぞれ５回及び１０回の－７５℃未満での一晩の凍結及び室温で３時間の解凍によりストレスを受けた全てのバッチという試料及び参照物質を、この技術により解析した。結果を図３に示す。

ＳＥＣＭＡＬＬＳの結果から、ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果が確認され、組換えＬ－アスパラギナーゼ（１％）と比較される場合、Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）ＣＡＭＲ１７６（６％）におけるＨＭＷ凝集物のレベルがより高い。

沈降速度ＡＵＣ（ｓｖＡＵＣ）法：組換えＬ－アスパラギナーゼ及びＥｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）試料を、２０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中に１０ｍｇ／ｍＬまで希釈し、同じ緩衝液に対して透析した。次いで、試料をＡＮ－６０Ｔｉ解析用ローターに入れ、解析用超遠心機であるＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂＸＬにロードした。データを、Ｎ．Ｉ．ＨのＰｅｔｅｒＳｃｈｕｃｋにより開発され、彼の解析プログラムであるＳＥＤＦＩＴ（バージョン１１．３）に実装されたｃ（ｓ）関数を使用して解析した。得られたサイズ分布をグラフ化し、ＯｒｉｇｉｎＬａｂＯｒｉｇｉｎ（登録商標）バージョン９．０を使用してピークを統合した。図４の結果は、組換えＬ－アスパラギナーゼが最も高い均一性を示し（最も低い凝集体含量である１％に基づく）、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）試料が最も均一でない（５％の凝集体）ことを実証する。結論として、検出原理が異なる複数の方法により測定されるように、組換えＬ－アスパラギナーゼは、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）と比べてより低い凝集体レベルを有する。

実施例６商業規模でのタンパク質凝集を評価するための試験
この品質試験は、１０００Ｌ（商業規模用）で製造された実生産規模バッチの組換えＬ－アスパラギナーゼに対して実施された。この試験は、実施例５における小規模（ＳＳ）での組換えＬ－アスパラギナーゼの同等性・同質性試験が実生産規模（１０００Ｌ）で裏付けられることを確認するための、商品であるＥｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）との同等性・同質性の解析的評価から構成された。この試験は、組換えＬ－アスパラギナーゼを特徴付けるために、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ法も使用した。

組換えＬ－アスパラギナーゼの１ｍＬのアリコートをピペットで５ｍＬのＰＥＴＧボトルに移し、－２０℃で保存した。配合物は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、５０ｍＭの塩化ナトリウム、６．４％のトレハロースであり、ｐＨは７．０であった。

ＳＥ－ＵＨＰＬＣ法：ＵＶ検出を備えたサイズ排除超高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）を使用して、分子サイズ、即ち流体力学半径に基づいて組換えＬ－アスパラギナーゼＤＳ試料の純度を決定する。試料及び標準物質を移動相（１０ｍＭのホスフェート、０．３Ｍのアルギニン、０．０５％のアジ化ナトリウム）中に２．５ｍｇ／ｍＬまで希釈し、ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣカラム（ＢＥＨ２００ＳＥＣ、１．７μｍ、４．６×３０ｍｍ）に注入する。組換えＬ－アスパラギナーゼＤＳを、０．４ｍＬ／分にて均一濃度で溶出させる。純度プロファイルを２８０ｎｍでのＵＶ検出により特徴付けする。純度として、％四量体（主ピーク）、％ＨＭＷ、及び％ＬＭＷが統合され、報告される。組換えＬ－アスパラギナーゼＤＳのＳＥ－ＵＰＬＣプロファイルは、四量体型の酵素として同定される主ピーク及び以下のＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ解析において八量体として同定されるＨＭＷピークからなる。非常に低レベルの低分子量（ＬＭＷ）バックショルダーピークも存在する。面積率を図５に示す。

実施例５の小規模でのデータと一致して、ＳＥＣ－ＵＰＬＣは、ＦＳバッチの組換えＬ－アスパラギナーゼ（０．２％）がＥｒｗｉｎａｓｅＣＡＭＲ－１７４（６％）と比べて顕著に低い凝集体の数値を有することを示した。

ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ法：組換えＬ－アスパラギナーゼの２つの試料（Ａ及びＢ）中に存在する高分子量種を、多角度光散乱検出器と組み合わせたＳＥＣ－ＭＡＬＬＳサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ）を使用して測定した。試料を配合緩衝液で希釈し、ＭｉｎｉｄａｗｎＴｒｅｏｓＭＡＬＬＳ検出器を備えたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００Ｉｎｃｒｅａｓｅカラムに注入した。図６はＵＶピーク面積率を記載している。結果は、組換えＬ－アスパラギナーゼが主に四量体型で存在し、低レベルの八量体及びより高次の凝集体が存在することを示す。より低レベルのＬＭＷ種も認められた。

組換えＬ－アスパラギナーゼ及びＥｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）試料を、２０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中に１０ｍｇ／ｍＬまで希釈し、同じ緩衝液に対して透析した。次いで、試料をＡＮ－６０Ｔｉ解析用ローターに入れ、解析用超遠心機であるＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂＸＬにロードした。データを、Ｎ．Ｉ．ＨのＰｅｔｅｒＳｃｈｕｃｋにより開発され、彼の解析プログラムであるＳＥＤＦＩＴ（バージョン１１．３）に実装されたｃ（ｓ）関数を使用して解析した。得られたサイズ分布をグラフ化し、ＯｒｉｇｉｎＬａｂＯｒｉｇｉｎ（登録商標）バージョン９．０を使用してピークを統合した。

図７及び図８に示されるように、組換えＬ－アスパラギナーゼは、非常に均一であり、９９．２％が四量体型の酵素で存在し、低レベルの八量体（０．６１％）及びより高次の凝集体（０．０７％）が存在する。これにより、ＳＥ－ＵＨＰＬＣ及びＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ法で観察された低い凝集体レベルが確認される。Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）のバッチは、より不均一であることが認められ、９３．６％が四量体として同定され、より高いレベルのＨＭＷ種（６．４％）が存在した。

実施例７健常成人被験者でのエルウィニア属組換えアスパラギナーゼ（ＪＺＰ－４５８）の安全性、忍容性、及び薬物動態の無作為化第１相試験
ＪＺＰ－４５８は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する免疫学的交差反応性を有さない酵素を産生する新規のシュードモナス・フルオレッセンス発現プラットフォームを使用して製造されたエルウィニア属組換えアスパラギナーゼである。ＪＺＰ－４５８の単回投与の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価するために、健常な成人被験者への筋肉内（ＩＭ）注射又は静脈内（ＩＶ）注入により投与されるＪＺＰ－４５８について、無作為化、単施設、非盲検第１相試験を実施した。アスパラギナーゼの有効性の判定に際して、血清アスパラギナーゼ活性（ＳＡＡ）レベルは、アスパラギン枯渇の代替マーカーとして役立ち、０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベル最低値（ＮＳＡＡ）が、医療現場における適切なアスパラギン枯渇を実証するとして認められた閾値である。

方法：無作為化、単施設、非盲検第１相試験は、米国において２０１８年１１月１９日～２０１９年５月２０日の間で実施された。試験は、テキサス州オースティンのＩｎｔｅｇＲｅｖｉｅｗＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＲｅｖｉｅｗＢｏａｒｄにより承認され、ヘルシンキ宣言及びＧＣＰガイドラインに従って、フロリダ州マイアミのＱＰＳＭｉａｍｉＲｅｓｅａｒｃｈＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ（ＭｉａｍｉＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ）で実施された。全ての健常被験者は、登録前に署名されたインフォームドコンセントを提出した。適格な被験者は、スクリーニング時及び－１日目に治験担当医師による判定で良好な健康状態であり、本試験特有の要件を理解し、遵守することができた、正常な体格指数（即ち、１９．０～３０．０ｋｇ／ｍ^２）を有する１８～５５歳の男性及び妊娠しておらず、授乳していない女性であった。試験からの主な除外基準には、スポンサー及び／又は治験担当医師の判断で、試験の結果又は実施に支障をきたし得るか、又は健常被験者にリスクをもたらし得る、任意の疾病の病歴もしくは存在、身体所見、臨床検査、又は心電図所見が含まれた。これには、薬物の分布、代謝、又は排泄に干渉し得る任意の状態が含まれた。

試験デザイン：この試験では、投与の２～２８日前に健常な成人被験者を適格性についてスクリーニングした（図２０）。適格な健常被験者は、ベースライン評価のために－１日目に試験センターに入院し、次いで、入院病棟に入院し、１日目に治験薬を単回投与された。全ての被験者は、５日目に退院するまで、薬物動態（ＰＫ）及び安全性評価のために入院病棟に滞在した。有害事象（ＡＥ）に関する電話による安全性経過観察は、６日目及び３０日目に行われた。

この試験は、合計３０人の健常な成人被験者が登録される非盲検試験であった。ＪＺＰ－４５８のこの試験では、コホート１の開始用量が２５ｍｇ／ｍ２であり、コホート２の用量選択がコホート１の安全性、忍容性、及びＰＫデータに基づく適応的デザインが使用された。ＪＺＰ－４５８のセンチネル投与アプローチは、ＪＺＰ－４５８投与コホート１のみに無作為化され試験で投与された最初の２人の被験者に対して適用された。これら２人の被験者は、ＪＺＰ－４５８のＩＭ又はＩＶ注入のいずれか（各投与経路に対して１人）に無作為化された。最初のコホート（ＪＺＰ－４５８投与コホート１及びＥｒｗｉｎａｚｅ投与コホート）の残りの被験者の投与を、センチネル投与被験者から１週間の間隔を空けた。残りの被験者の投与は、治験担当医師及びスポンサーにより最初の２人の被験者について安全性及び忍容性が許容できると判断されたため（グレード３以上の治験薬に関連するＡＥがない）、プロトコールにより許可された。

次の１６人の被験者は、ＪＺＰ－４５８及びＥｒｗｉｎａｚｅ投与コホートに無作為化され、１０人の被験者がＪＺＰ－４５８投与コホート１に無作為化され、６人の被験者がＥｒｗｉｎａｚｅ投与コホートに無作為化された。ＪＺＰ－４５８投与コホート１及びＥｒｗｉｎａｚｅ投与コホート内で、被験者は、１：１の比率でＩＭ又はＩＶ治療群に無作為化された。この無作為化スキームは、最初の２人の無作為化被験者がセンチネル投与アプローチに従ってＩＭＪＺＰ－４５８及びＩＶＪＺＰ－４５８を投与されるようにすると共に、全１８人の被験者を、２：２：１：１の比率でＩＭＪＺＰ－４５８、ＩＶＪＺＰ－４５８、ＩＭＥｒｗｉｎａｚｅ、又はＩＶＥｒｗｉｎａｚｅに無作為化することに等しい。

別のコホートであるＪＺＰ－４５８投与コホート２に被験者を登録する必要があるか否かを判定するために、治験担当医師及びスポンサーによりＪＺＰ－４５８投与コホート１の全ての被験者について、安全性、忍容性、及びＰＫデータが評価された。しかしながら、ＳＡＰ作成の間に、ＪＺＰ－４５８投与コホート２を実施し、以前に収集された安全性、忍容性、及びＰＫデータが、このコホートで使用される用量レベルを決定するために評価されることが決定された。ＪＺＰ－４５８投与コホート２では、１２人の追加の被験者が１：１の比率でＩＭ又はＩＶ治療群に無作為化された。

目的：第１の目的は、健常な成人被験者におけるＪＺＰ－４５８の単回投与（ＩＭ又はＩＶ）の安全性及び忍容性を評価することであった。安全性及び忍容性は、治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生並びに生命徴候及び臨床検査における臨床的に問題となる変化により評価される。第２の目的は、健常な成人被験者におけるＪＺＰ－４５８の単回投与（ＩＭ又はＩＶ）のＰＫをＳＡＡデータに基づいて特徴付けすることであった。追加の評価には、ＪＺＰ－４５８での血清アスパラギナーゼ濃度（ＳＡＣ）の測定、並びに健常成人のＪＺＰ－４５８の薬力学的（ＰＤ）効果を評価するためのＬ－アスパラギン及びＬ－グルタミンレベルの測定が含まれた。

薬物動態／薬力学的試料採取及び生化学分析法：ＰＫ／ＰＤ評価のための連続血液試料を、投与９６時間後までの事前に決められた時点で全ての健常被験者から採取した。ＩＭ投与では、試料は、投与前並びに投与の０．５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、２４、３６、４８、７２、及び９６時間後に採取された。ＩＶ投与では、試料は、投与前並びに注入開始の２、２．５、３、３．５、４、５、６、８、１０、１２、２４、３６、４８、７２、及び９６時間後に採取された。ＰＫ解析のための血液試料は、ラベル付けされた４ｍＬのＥＤＴＡチューブに採取され、試料が血清に遠心分離されるまで氷上で維持された。ＰＤ解析のための血液試料は、４ｍＬのＥＤＴＡチューブに採取され、試料が血漿に遠心分離されるまで氷上で維持された。

ＰＫ試料の生化学解析は、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｋｏｋｉｅ、ＩＬ）により実行された。ＰＫ試料は、ヒト血清でのバリデートされた酵素活性法を使用して０．０２５ＩＵ／ｍＬ～０．１５ＩＵ／ｍＬの範囲でＳＡＡレベルについて解析された。加えて、ＰＫ試料は、ヒト血清でのバリデートされたＥＣＬＩＡ酵素含量アッセイを使用して１．０ｎｇ／ｍＬ～１２８ｎｇ／ｍＬの範囲でＳＡＣについても解析された。ＰＤ試料は、ＳｙｎｅｏｓＨｅａｌｔｈ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）により、バリデートされた液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法を使用して、Ｌ－アスパラギンについて０．０２５μｇ／ｍＬ～１０．０μｇ／ｍＬ及びＬ－グルタミンについて０．２５０μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの範囲で、Ｌ－アスパラギン及びＬ－グルタミン濃度について解析された。

薬物動態及び統計解析：ＪＺＰ－４５８のＰＫは、主にＳＡＡデータに基づいて評価された。Ｃ_ｍａｘ＝ＳＡＡ最高値、Ｃ_４８ｈ＝４８時間時点のＳＡＡ値、Ｃ_７２ｈ＝７２時間時点のＳＡＡ値、ｔ_ｍａｘ＝Ｃ_ｍａｘ到達時間、ＡＵＣ_０－ｔ＝時間０からＳＡＡの定量が可能な最終時点までのＳＡＡ－時間曲線下の面積、ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}＝時間０から無限時間までのＳＡＡ－時間曲線下の面積、ＣＬ＝クリアランス、Ｖｓｓ＝ＩＶ投与後の定常状態での分布容積推定値、Ｖ_ｚ／Ｆ＝ＩＭ投与後の見かけの分布容積、及びｔ_１／２＝終末相の消失半減期というＰＫパラメータが、ＰｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン６．３でノンコンパートメント解析を使用して評価された。

記述統計量（ｎ、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値）を使用して、連続データを集計すると共に、カウント数及びパーセンテージを使用して、カテゴリーデータを集計した。ＳＡＡと血清アスパラギナーゼ濃度（ＳＡＣ）との間の関係を評価するために、事後解析を実行した。相関及び線形回帰解析を、治験薬毎且つ投与経路間で、及び投与経路毎で実行された。線形回帰モデル化において、ＳＡＣは従属変数であり、ＳＡＡは独立変数であった。最後に、正式な仮説検定は実行しなかった。

結果：各投与経路について試験された最高用量（即ち、ＩＭについて２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶについて３７．５ｍｇ／ｍ^２）で、ＪＺＰ－４５８により、投与７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上の血清アスパラギナーゼ活性（ＳＡＡ）レベルが健常被験者の１００％で達成された。ＪＺＰ－４５８の全ての用量レベルが十分な忍容性を示し、予期しない有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ、及びグレード３以上のＡＥは認められなかった。この試験の薬物動態及び安全性データに基づいて、中枢的第２／３相試験の推奨されるＪＺＰ－４５８開始用量は、月曜日／水曜日／金曜日の投与スケジュールでＩＭ投与について２５ｍｇ／ｍ_２及びＩＶ投与について３７．５ｍｇ／ｍ^２である。

ベースラインの人口統計：合計３０人の健常な成人被験者が試験に登録され、無作為化された。登録された３０被験者のうち、全３０人が３０日目の最後の予定された電話による安全性経過観察を含め、試験を完了した。ベースラインの全体の人口統計（平均±ＳＤ）には、３８．４±８．３０歳の平均±ＳＤ加齢、７７．０４±９．９９８ｋｇの体重、及び１．９１±０．１５０ｍ^２のＢＳＡが含まれた（図１６）。加えて、６３％が男性であり、９７％の民族性がヒスパニック系又はラテンアメリカ系であり、８３％が白人であり、１７％が黒人／アフリカ系アメリカ人であった。

薬物動態解析：ＰＫ解析対象集団は、試験に登録された全３０人の健常被験者（１００％）から構成された。

血清アスパラギナーゼ活性データ：この試験において、ＪＺＰ－４５８投与コホート１の開始用量は２５ｍｇ／ｍ^２であった。個々のＳＡＡ－時間プロファイルが全ての治療群について作成された（図１２）。投与前ＳＡＡ値は、全ての被験者及び全ての治療について定量限界未満であった。投与４８及び７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上及び０．４ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルであった被験者の人数及び割合を図９に示す。

コホート２の用量レベルは、コホート１の安全性、忍容性、及びＰＫＳＡＡデータに基づいて決定された。コホート１において予期しないＡＥは認められず、重篤なＡＥは報告されず、グレード３以上のＡＥは認められなかった。コホート１における２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８でのＰＫＳＡＡデータを図１２に示す。２５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ投与では、投与７２時間後のＳＡＡ値は、６／６人（１００％）の健常被験者で０．１ＩＵ／ｍＬ以上であった。コホート２では、ＩＭ用量レベルを１２．５ｍｇ／ｍ^２に５０％減少させて、用量比例性及びこの用量での安全プロファイルを試験した。また２５ｍｇ／ｍ^２のＩＶ投与では、投与７２時間後のＳＡＡ値は、４／６人（６７％）の健常被験者においてのみ０．１ＩＵ／ｍＬ以上であった。このことは、２５ｍｇ／ｍ^２のＩＶ投与が、ＳＡＡレベルを０．１ＩＵ／ｍＬ以上に７２時間維持するのに不十分であったことを示唆した。従って、コホート２では、ＩＶ用量レベルを３７．５ｍｇ／ｍ^２に５０％増加させた。

ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与後、ＳＡＡレベルは、１２．５ｍｇ／ｍ^２及び２５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルの両方で、６／６人（１００％）の健常被験者において、投与４８及び７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達した。ＪＺＰ－４５８のＩＶ投与後、ＳＡＡレベルは、２５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルで、投与４８時間後の６／６人（１００％）の健常被験者及び投与７２時間後の４／６人（６７％）の健常被験者において０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達した一方で、３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルでは、ＳＡＡレベルは、投与４８及び７２時間後の両方の６／６人（１００％）の健常被験者において０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達した。同じ用量レベルでは、ＩＭ投与経路が、ＩＶと比較される場合により高レベルのＳＡＡを維持することができた。ＥＲＷを投与された健常被験者のＳＡＡデータも図１２及び図９に示す。

ＪＺＰ－４５８の２５ｍｇ／ｍ^２でのＩＭ投与及び３７．５ｍｇ／ｍ^２でのＩＶ投与について、観察データに基づいてＳＡＡの平均及び９５％信頼区間（ＣＩ）曲線も作成した（各々Ｎ＝６、図１３）。データは、９５％ＣＩの下限値が、ＪＺＰ－４５８の２５ｍｇ／ｍ^２でのＩＭ投与及び３７．５ｍｇ／ｍ^２でのＩＶ投与の両方について投与７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上に達したことを示した（９５％ＣＩの下限値は、ＩＭ及びＩＶについて、それぞれ０．３１１０７ＩＵ／ｍＬ及び０．０９４７６ＩＵ／ｍＬであった）。これらのデータは、中枢的第２／３相試験での用量を推奨するのに役立った。

全ての治療群についてＳＡＡに基づいてＰＫパラメータを集計した（図１０）。ＩＭ投与される場合、ＪＺＰ－４５８は、ＳＡＡに基づいてゆっくりと吸収され、１２．５ｍｇ／ｍ^２及び２５ｍｇ／ｍ^２の用量の投与後のｔｍａｘ中央値は、それぞれ２４時間及び３６時間であった。１２．５ｍｇ／ｍ^２及び２５ｍｇ／ｍ^２の投与後のｔ_１／２平均値は、それぞれ２３．４時間及び１９．１時間と推定された。ＩＶ投与される場合、ＪＺＰ－４５８のＳＡＡレベルは、２５ｍｇ／ｍ^２及び３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量の投与後に、それぞれ１１．５時間及び１２．６時間のｔ_１／２平均値で減衰した。一般に、ＩＭ投与後のＪＺＰ－４５８のｔ_１／２は、ＩＶ注入より長かった。さらに、分布容積は、血漿量とほぼ同じであった。

ＳＡＡに基づく用量比例性の評価は、ＪＺＰ－４５８への曝露が、ＳＡＡに基づいて用量の増加と共に増加したことを示した（図１７）。ＩＭ及びＩＶ投与の両方について、ＪＺＰ－４５８ＳＡＡへの曝露（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ）の増加は、試験された用量範囲でほぼ用量比例性であった。ＩＭ投与経路でのＪＺＰ－４５８の生体利用効率も計算され、ＳＡＡデータに基づいてＪＺＰ－４５８について３４．５％～３６．８％と推定された。

血清アスパラギナーゼ濃度データ：歴史的に、アスパラギナーゼＰＫは、ＳＡＡデータに基づいて決定されてきた。しかしながら、酵素含量アッセイが、ヒト血清中のＪＺＰ－４５８アスパラギナーゼ濃度を測定するために開発された。

個々及び平均のＳＡＣ－時間プロファイルを全ての治療群について作成した（図１４Ａ～Ｃ）。ＳＡＣに基づくＰＫパラメータを図１８にまとめる。ＩＭ投与される場合、ＪＺＰ－４５８は、ＳＡＣに基づいて緩やかに吸収され、ｔｍａｘ中央値は、１２．５ｍｇ／ｍ^２及び２５ｍｇ／ｍ^２の用量の両方について３０時間であった。ｔ_１／２平均値は、１２．５ｍｇ／ｍ^２及び２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８でそれぞれ２８．９時間及び２５．４時間と推定された。ＪＺＰ－４５８のＩＶ投与後、ＳＡＣレベルは、２５ｍｇ／ｍ^２及び３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量の投与後にそれぞれ１２．０時間及び１２．７時間のｔ_１／２平均値で減衰した。

ＪＺＰ－４５８の用量比例性及び生体利用効率もＳＡＣに基づいて評価した（図１９）。ＪＺＰ－４５８への曝露は、ＳＡＣに基づいて用量の増加と共に増加した。ＩＭ及びＩＶ投与の両方について、ＳＡＣ（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ）に基づいてＪＺＰ－４５８への曝露の増加は、試験された用量範囲でほぼ用量比例性であった。ＩＭ投与経路では、ＪＺＰ－４５８の生体利用効率は、ＳＡＣデータに基づいて３７．７％～４３．９％と推定された。

ＪＺＰ－４５８のＳＡＡとＳＡＣとの間の関係をさらに調査した（図１４Ｄ）。ＪＺＰ－４５８の全ての投与経路で評価される場合、ＳＡＡとＳＡＣとの間で強い正の関連性が観察され、相関係数は０．９５超であった。加えて、線形回帰モデルによる方程式は、ＳＡＣ＝１４０７．９×ＳＡＡであった。これらのデータは、ＳＡＡレベルが０．１ＩＵ／ｍＬである場合、対応するＳＡＣは、この健常な成人集団において約１４１ｎｇ／ｍＬであることを示唆する。

薬力学的データ：アスパラギナーゼは、アミノ酸であるアスパラギンをアスパラギン酸及びアンモニアに加水分解する。アスパラギンの血漿レベルを治療期間を通じてモニタリングした。ＳＡＡ平均値対血漿アスパラギン濃度平均値の経時的推移を図１５に示す。ベースライン（投与前）血漿アスパラギン濃度平均値は、ＩＭ及びＩＶ群で同程度であった。個々のアスパラギン濃度は、全ての被験者で５．０９μｇ／ｍＬ～１３．８μｇ／ｍＬの範囲であった。この値は文献で報告された値と一致する。ＪＺＰ－４５８の（ＩＭ及びＩＶ）投与後、血漿アスパラギンレベル平均値は、両方の経路で投与前濃度（コホート１では、ＩＭ及びＩＶについて、それぞれ８．６２μｇ／ｍＬ及び８．９６μｇ／ｍＬであり、コホート２では、ＩＭ及びＩＶについて、それぞれ６．４２μｇ／ｍＬ及び５．８９μｇ／ｍＬであった）からアッセイ定量下限（ＬＬＯＱ、０．０２５μｇ／ｍＬ）未満のレベルに急速に減少し、９６時間後の最終試料採取時点まで検出不可能なままであった。データは、ＳＡＡと血漿アスパラギンレベルの減少との間に直接的相関が存在したことを示した。全てのＪＺＰ－４５８用量レベルで、血漿アスパラギンレベルは、ＪＺＰ－４５８投与により完全に枯渇した。この健常被験者による第１相試験で試験された最高用量のＪＺＰ－４５８（即ち、ＩＭについて２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶについて３７．５ｍｇ／ｍ^２）では、ＪＺＰ－４５８は、各経路の健常被験者のうちの１００％で、投与７２時間後での０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを達成しただけでなく、投与９６時間後までの血漿アスパラギンレベルの完全な枯渇をもたらした。

アスパラギナーゼは、アスパラギンに加えて、効率は非常に低いがグルタミンをグルタミン酸及びアンモニアに加水分解することもできる。グルタミンの血漿レベルを、全ての治療についてモニタリングした（図１７）。ベースライン（投与前）血漿グルタミン濃度平均値は、ＩＭ及びＩＶ群で同程度であった。個々のグルタミン投与前濃度は、全ての被験者で６０．４μｇ／ｍＬ～１４６μｇ／ｍＬの範囲であった。この値も文献で報告された値と一致する。データは、血漿グルタミンレベル平均値が、ＪＺＰ－４５８のＩＶ投与後に、約１２時間の間、コホート１及びコホート２について、それぞれ１０６．５及び７４．０μｇ／ｍＬの投与前濃度からアッセイＬＬＯＱ（０．２５μｇ／ｍＬ）未満のレベルに急速に低下し、その後、グルタミンレベルは、投与９６時間後の最終試料採取時点でほぼ投与前のレベルに回復することを示した。ＩＭ経路では、血漿グルタミンレベル平均値は、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与後に減衰し、最も低いグルタミンレベルは、投与３６時間後で観察される２５ｍｇ／ｍ^２及び１２．５ｍｇ／ｍ^２でのそれぞれ７９％及び４７％のグルタミン減少であり、その後、グルタミンレベルは、投与９６時間後の最終試料採取時点で投与前と同程度のレベルに回復した。Ｌ－グルタミンの完全な枯渇は観察されなかった。グルタミンレベルは、中程度に影響を受けて、部分的に減少するのみであり、データは、Ｌ－アスパラギンで観察されたものより変動的であった。

安全性及び忍容性：この第１相試験でＪＺＰ－４５８について観察された安全性プロファイルは、他のアスパラギナーゼのプロファイルと一致していた。全ての用量レベルのＪＺＰ－４５８は、十分な忍容性を示し、予期しないＡＥ、重篤なＡＥ、及びグレード３以上のＡＥは認められなかった。各投与コホートの２人以上の健常被験者で発生する最もよく見られるＴＥＡＥは、悪心であった（図１１）。

考察：大腸菌由来アスパラギナーゼに対する免疫性交差反応性を有さないと予想される、エルウィニア属組換えアスパラギナーゼであるＪＺＰ－４５８は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症したＡＬＬ又はＬＢＬ患者がアスパラギナーゼ療法を利用できるようにするために開発されている。この無作為化、単施設、非盲検第１相試験において、ＪＺＰ－４５８は、各投与経路で試験された最高用量（即ち、ＩＭについて２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶについて３７．５ｍｇ／ｍ^２）の投与７２時間後で、各経路の健常な成人被験者のうちの１００％での０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを達成した。この試験で観察されたＳＡＡレベルは、ＪＺＰ－４５８が血漿アスパラギンレベルを完全に枯渇させることができることも示した。このことは、この試験で測定されたアスパラギン濃度により確認された。全てのＪＺＰ－４５８用量レベルで、血漿アスパラギンレベルは、ＩＭ及びＩＶ投与経路の両方でＪＺＰ－４５８治療により完全に枯渇した。加えて、この試験におけるＪＺＰ－４５８の安全性プロファイルは、他のアスパラギナーゼのプロファイルと一致していた。全ての用量レベルのＪＺＰ－４５８は、十分な忍容性を示し、予期しないＡＥは認められず、重篤なＡＥは報告されず、グレード３以上のＡＥは認められなかった。

ＰＫ及び安全性の蓄積データに基づいて、中枢的第２／３相でのＪＺＰ－４５８の推奨開始用量は、月曜日／水曜日／金曜日の投与スケジュールでＩＭ投与経路について２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶ投与経路について３７．５ｍｇ／ｍ^２である。健常な成人被験者でのこの第１相試験において、これらの用量は、投与７２時間後に６／６人（１００％）の健常被験者で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを達成した。またこれらの用量は、中枢的第２／３相試験における治療期間を通じて０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを維持すると予想される。

アスパラギナーゼ療法を完了することは、以前の研究において示されているように、患者の転帰の改善に重要である。Ｄａｎａ－ＦａｒｂｅｒＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅＡＬＬＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍＰｒｏｔｏｃｏｌ９１－０１試験では、計画された合計３０週間のアスパラギナーゼ療法のうちの２５週間以下の完了として定義される、アスパラギナーゼ不耐性を有する患者は、２６週間以上のアスパラギナーゼ療法を受けた患者と比較された場合に、有意に低い５年ＥＦＳを有していた（それぞれ７３％対９０％、Ｐ＜０．０１）。最近のＣｈｉｌｄｒｅｎ’ｓＯｎｃｏｌｏｇｙＧｒｏｕｐの研究は、処方されたアスパラギナーゼ用量を終えなかった高リスク及び遅い早期反応のある標準リスクのＡＬＬ患者が、処方された全てのアスパラギナーゼ用量を投与された患者と比較して有意に劣るＥＦＳを有していたことを実証した。注目すべきことに、エルウィニア属アスパラギナーゼ代替品での治療コースを完了した、過敏反応を起こした患者は、第１選択のアスパラギナーゼ療法のクールを完了した患者と同程度のＥＦＳを示した。これらの試験は、第１選択のアスパラギナーゼであるか第２選択のアスパラギナーゼであるかに関わらず、処方されたアスパラギナーゼ用量を終えた患者が、早期に中止する患者より転帰が良好であることを示唆する。これらの結果は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症する患者がそれらの全治療クールを完了することができるようにするための代替的アスパラギナーゼ製剤の必要性を強調する。

結論：この第１相試験において、ＪＺＰ－４５８は、各投与経路で試験された最高用量（即ち、ＩＭについて２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶについて３７．５ｍｇ／ｍ^２）の投与７２時間後で、各経路の健常な成人被験者のうちの１００％での０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを達成し、予期しないＡＥ、ＳＡＥ、又はグレード３以上のＡＥを伴うことなく完全なアスパラギン枯渇をもたらした。この試験により蓄積したＰＫ及び安全性データに基づいて、第２／３相でのＪＺＰ－４５８の推奨開始用量は、月曜日／水曜日／金曜日の投与スケジュールでＩＭ投与経路について２５ｍｇ／ｍ^２及びＩＶ投与経路について３７．５ｍｇ／ｍ^２である。ＪＺＰ－４５８は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症するＡＬＬ／ＬＢＬ患者のための代替的治療法として使用され得る。

実施例８大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性を示すＡＬＬ／ＬＢＬ患者でのＪＺＰ－４５８の第２／３相試験（コホート１ａ及び１ｂ）
大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性（アレルギー反応又は無症候の不活性化）を示す、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する（任意の年齢の）参加者でのＪＺＰ－４５８の非盲検、多施設共同、用量確認、ＰＫ試験を計画した。この試験は、血清アスパラギナーゼ活性により測定される、ＪＺＰ－４５８の忍容性及び有効性を評価するように計画され、アスパラギン枯渇及び抗薬物抗体（ＡＤＡ）レベルについては、追加の裏付けとなる解析が行われた。６用量のＪＺＰ－４５８が、大腸菌由来長時間作用型アスパラギナーゼの各用量の代わりに使用される。ＪＺＰ－４５８による２週間連続の治療が１クールとして定義される。

試験デザイン：この試験は、ＩＭ投与でのＪＺＰ－４５８の用量を決定し、並びに安全性及び有効性を確認するためのパートＡと、ＪＺＰ－４５８のＩＶ注入の最適用量及びスケジュールを定義するためのパートＢと、の２パートからなる（図２２及び図２３を参照）。パートＡ及びパートＢは並行して検討され得る。パートＡ（ＩＭ）は複数のコホートを検討しており、コホート１で、最適用量が決定され、コホート２で、最適用量で治療される参加者の数が増やされる予定である。パートＢ（ＩＶ）はパートＡを反映し、両方のパートにおいて、ＪＺＰ－４５８のクール（２週間にわたる６回の投与）は、月曜日、水曜日、又は金曜日のいずれかで開始され得、参加者毎のクール数はそれらの個々の治療計画に依存する。各パートにおいて、ＪＺＰ－４５８のクール（２週間にわたる６回の投与）は、月曜日、水曜日、又は金曜日のいずれかで開始され得、参加者毎のクール数はそれらの個々の治療計画に依存する。開始用量は、ＩＭ投与経路（コホート１ａ）で２５ｍｇ／ｍ^２であった。開始用量は、第１相試験の結果に基づいて選択された。

目的：試験の第１の目的は、コホート１及びコホート２における奏効（第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡレベルと定義される）により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与の有効性を判定すること、並びに大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性を示す、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者におけるＩＭ投与ＪＺＰ－４５８の安全性及び忍容性を評価することであった。追加の目的は以下を含んだ。

主要な第２の目的：コホート１及びコホート２における奏効（第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間のＮＳＡＡレベルと定義される）により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与の有効性を判定すること。

第２の目的：１）コホート１及びコホート２における奏効（第１クールにおける０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間及び直近の７２時間のＮＳＡＡレベルと定義される）により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与の有効性を判定すること、２）ＰＰＫアプローチを使用してＩＭ投与ＪＺＰ－４５８のＰＫを特徴付けし、及び全ての用量レベルの全ての参加者及び全ての時点の試料からのデータを使用してＥ－Ｒ相関を調査すること、並びに３）ＪＺＰ－４５８の反復投与後のＩＭ投与ＪＺＰ－４５８の免疫原性を評価すること。

探索的目的（試験のパートＢ）：１）第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間のＮＳＡＡ及び０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡと定義される奏効により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＶ投与の有効性を判定すること、２）第１クールにおける０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間のＮＳＡＡ及び０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡと定義される奏効により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＶ投与の有効性を判定すること、３）大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性を示す、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者におけるＩＶ投与ＪＺＰ－４５８の安全性及び忍容性を評価すること、４）母集団ＰＫアプローチを使用してＩＶ投与ＪＺＰ－４５８のＰＫを特徴付けすること、並びに５）ＪＺＰ－４５８の反復投与後のＩＶ投与ＪＺＰ－４５８の免疫原性を評価すること。

予備的な結果：２０２０年１０月７日時点で、中枢的第２／３相試験（ＪＺＰ４５８－２０１）のコホート１ａに３１人の参加者及びコホート１ｂに５６人の参加者が登録された。１回目のプロトコールに既定されたＳＤＲＣによるコホート１ａの評価には６人の評価可能な参加者からのデータが含まれ、２回目のＳＤＲＣによるコホート１ａの評価には１６人の評価可能な参加者からの累積データが含まれた。ＳＤＲＣによる各推奨は、その時点で利用可能な全てのデータのレビューに基づく。利用可能な有効性データの評価後、２５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ用量レベルで予期しない安全性事象が観察されなかったため、３７．５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ用量レベルの評価が開始された（コホート１ｂ）。コホート１ｂにおける最初の参加者は、２０２０年６月２９日に登録された。コホート１ｂデータのＳＤＲＣによる評価は、コホート１ｂに登録された最初の７人の参加者までのデータの予備的レビューとして２０２０年９月１日に行われた。このレビューには、試験の利用可能な全てのＳＡＡデータ、ＰＰＫモデル化及びシミュレーションデータ、並びに安全性データが含まれた。予備的な結果は、変更することなく登録を続けること、及び後続で、ＳＤＲＣ方針に基づき、少なくとも１３人の評価可能なコホート１ｂの参加者のデータが利用可能である場合に、再び試験をレビューすることを支持した。コホート１ａ（Ｎ＝３１）及び１ｂ（Ｎ＝１７）の利用可能な予備的データを以下にまとめる。

血清アスパラギナーゼ活性レベル：血清試料をＳＡＡについて解析した。ＳＡＡレベルは、有効性及び奏効の代替マーカーとして役立つ。ＳＡＡの生化学解析は、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓｋｏｋｉｅ、ＩＬ）により、ヒト血清及びＪＺＰ－４５８参照標準（ロット＃ＲＭ－Ｍ－００９、６９３Ｕ／ｍｇの特異的活性）でのバリデートされた酵素活性法を使用して０．０３５ＩＵ／ｍＬ～０．２１０ＩＵ／ｍＬの範囲で実行された。

コホート１の評価可能な参加者は、ＪＺＰ－４５８を少なくとも３回ＩＭ投与され、第１クールの後半の間の、プロトコールに既定された試料採取枠内（±２時間）で収集された７２時間のＮＳＡＡレベルを示した参加者と定義された。２５ｍｇ／ｍ２で登録された３１人の参加者のうち、２６人の参加者がプロトコールに従ってコホート１の主要有効性目的で評価可能であるとみなされた。評価不可能とみなされている参加者の理由は、以下のとおりであった。１）２人の参加者が既定された試料採取時間枠外で採取された７２時間のＰＫ試料を有していた。２）１人の参加者が７２時間のＰＫ試料を採取されていなかった。３）１人の参加者がインフォームドコンセントを撤回し、ＰＫ試料が採取されていなかった。４）１人の参加者が脂質の増加によるアッセイへの干渉に起因して評価不可能であったＳＡＡ値（生化学解析検査機関であるＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙにより評価された）を有していた。この参加者は、ベースライン時にグレード２の高トリグリセリド血症（３１８ｍｇ／ｄＬ）及び第１クールの間にグレード４の高トリグリセリド血症（２６７９ｍｇ／ｄＬ）（ＴＥＡＥとして報告された。詳細は以下の安全性の概要を参照）を有していた。この参加者のトリグリセリドは、ＪＺＰ－４５８の後続のクールでベースライン又はベースライン未満に減少し続け、ごく最近、参加者は第５クールを完了し、トリグリセリドレベルは２３４ｍｇ／ｄＬ（グレード１）に減少した。

コホート１ｂ（３７．５ｍｇ／ｍ２）の予備的解析に含まれた１７人の参加者のうち、１６人の参加者がコホート１の主要有効性目的のために評価可能であった（１人の参加者が既定された採取枠外で採取された７２時間のＰＫ試料を有していたため、主要エンドポイントでは除外されたが、他のエンドポイントでは含まれた）。主要な時点での個々の予備的ＳＡＡ結果を図２４にまとめる。観察された予備的ＳＡＡ結果は、２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベル（Ｎ＝２６人の評価可能な参加者）で、直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル平均値（９５％ＣＩ）がそれぞれ０．１５６０（０．１１４４～０．１９７６）及び０．４５０４（０．３６３７～０．５３７０）であったことを示す（直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル中央値［第１四分位数，Ｑ１。第３四分位数，Ｑ３］は、それぞれ０．１３４５［０．０８８６、０．２１７８］及び０．４０９１［０．２８１３、０．６５７７］であった）。３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベル（Ｎ＝１６人の評価可能な参加者）では、直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル平均値（９５％ＣＩ）は、それぞれ０．２６０５（０．１３２６～０．３８８４）及び０．７１４６（０．３９７６～１．０３１６）であった（直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル中央値［Ｑ１、Ｑ３］は、それぞれ、０．１７３２［０．１１５７、０．２８４９］及び０．６５０３［０．３２４８、０．８７３６］であった）。

０．１ＩＵ／ｍＬ以上及び０．４ＩＵ／ｍＬ以上の直近の投与７２及び４８時間後のＮＳＡＡレベルを示した参加者の割合を図２５に示す。２５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝２６人の評価可能な参加者）及び３７．５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝１６人の評価可能な参加者）のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベルでは、それぞれ参加者の６５．４％及び８１．３％が直近の７２時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成し（主要エンドポイント）、それぞれ参加者の９６．２％及び９３．８％が直近の４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した（主要な副次エンドポイント）。

母集団薬物動態モデル化及びシミュレーション：予備的ＰＰＫ解析（副次エンドポイント）を、ＳＡＡデータ（２０２０年９月２８日に受け取ったデータ）を使用して実行した。ＪＺＰ－４５８をＩＭ投与されたＪＺＰ４５８－２０１試験の４７人の参加者（２５ｍｇ／ｍ^２の３０人の参加者及び３７．５ｍｇ／ｍ^２の１７人の参加者）からの合計３１９の定量が可能なＳＡＡデータポイント（第１クールのみ）がＰＰＫモデルの開発に含まれた。モデルをＳＡＡデータにフィッティングして、構造モデルを同定した。体重、身長、体表面積、年齢、性別、人種、民族性、疾患、及び疾患サブタイプを、ＪＺＰ－４５８ＳＡＡクリアランス及び容積に対する潜在的共変量として検定した。体重のみが統計的に有意であると発見され、モデルに含まれた。

ＪＺＰ－４５８について開発された共変量モデルは、ＪＺＰ－４５８ＳＡＡクリアランス及び容積に対する非比例的共変量として体重が含まれる、線形消失及び一次吸収を伴う１コンパートメントＩＭ専用モデル及び比例残余誤差モデルであった。モデル診断は、予測データ対観測データ及び予測モデリング法に基づいて良好なフィッティングを示した。

０．１ＩＵ／ｍＬ以上の治療的ＮＳＡＡレベルを達成する可能性を調べるために、共変量モデルを使用して、患者のＳＡＡプロファイル（Ｎ＝用量レベル当たり２０００対象）をシミュレートした。模擬仮想母集団を、ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌのＮａｔｉｏｎａｌＨｅａｌｔｈａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎＳｕｒｖｅｙＤａｔａの人口統計からの置換により対象を再抽出することにより作成した。模擬母集団は２～８５歳の範囲であり、体重は８．９～１７４．６ｋｇの範囲であった（中央値６２．７ｋｇ）。

金曜日、月曜日、水曜日（ＦＭＷ）及びＭＷＦ投与スケジュールの両方を、１治療クール当たり６回の投与としてシミュレートした。ここで、ＦＭＷスケジュールは、１回のみの投与後の最初の７２時間のＮＳＡＡを有する最も保守的シナリオであったため、着目点となった。シミュレーションデータは、開始日が、直近の４８又は７２時間の時点での０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを示す患者のシミュレートされたパーセンテージに影響を及ぼさないことを示した。ＦＭＷ投与スケジュールでシミュレートされたプロファイルを、中央値及び９５％の予測区間と共に図２６に示す。２５～８０ｍｇ／ｍ^２の範囲のＩＭ用量で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡを達成する患者のシミュレートされたパーセンテージ及び予測されるＳＡＡレベル平均値の要約表を図２７に示す。

ＰＰＫモデル化及びシミュレーションに基づいて、ＦＭＷスケジュールでの３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ投与で、ＪＺＰ－４５８は、８７％の患者（９５％ＣＩ：８５．５％～８８．５％）において０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡレベルを達成し、９９．９％の患者（９５％ＣＩ：９９．７％～１００％）において０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間のＮＳＡＡレベルを達成すると予想される。シミュレートされたＮＳＡＡレベル平均値は、直近の７２及び４８時間でそれぞれ０．２９（９５％の予測区間：０．０６～０．８８）及び０．５８（９５％の予測区間：０．２～１．３２）であった。ＰＰＫモデルにより、５０ｍｇ／ｍ^２の用量で、９４．２％の患者が投与７２時間後で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成すると予測される。

アスパラギン枯渇の予備的結果：薬力学検査試料が、ＳｙｎｅｏｓＨｅａｌｔｈ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）により、バリデートされた液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＢｉｏｍａｒｋｅｒＰａｒｔｉａｌＶａｌｉｄａｔｉｏｎＲｅｐｏｒｔＡｍｅｎｄｍｅｎｔ１，ＳＮ００４４）を使用して０．０２５～１０．０μｇ／ｍＬの範囲でアスパラギン濃度について解析された。解析測定がインビボでのアスパラギンレベルを示すようにするために、アスパラギンアッセイのための血液試料は採取直後に氷浴に置かれ、処理された血漿は３０分間以内に－８０℃で保存された。アスパラギンレベルは、投与期間中のＪＺＰ－４５８の有効性を裏付けるために測定された。ベースラインアスパラギンレベル平均値は、コホート１ａ（２５ｍｇ／ｍ^２）で治療された３０人の参加者で１０．２５５７μｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ：９．２１７５～１１．２９３８）及びコホート１ｂ（３７．５ｍｇ／ｍ^２）で治療された１７人の参加者で１０．２２８２μｇ／ｍＬ（９５％ＣＩ：７．１８５２～１３．２７１２）であった。これらの値は文献で報告された値と一致する（Ｔｏｎｇ２０１４）。ほとんどの参加者において、血漿アスパラギンの完全な枯渇が大部分の試料で観察され、即ち、血漿アスパラギンレベルは、投与前レベルからアッセイ定量下限（０．０２５μｇ／ｍＬ）未満又はその付近のレベルまで急速に減少し、最後の試料が採取された６回目の投与前までの第１クールの治療期間を通じて持続した。４人の参加者が一過性の低レベルのアスパラギン増加を示した（コホート１ａの３人及びコホート１ｂの１人）。

安全性の予備的結果：コホート１ａにおいて、合計３１人の参加者が２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８をＩＭ投与された。コホート１ｂにおいて、データは、３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８をＩＭ投与された１７人の参加者で利用可能である。

投与コホートにおけるＴＥＡＥの概要を図２８に示す。大多数の参加者が少なくとも１つのＴＥＡＥを発現した。ＪＺＰ－４５８ＩＭ２５ｍｇ／ｍ^２コホートでは、最も高頻度なＴＥＡＥは、好中球数の減少（参加者の３２．３％、１０／３１）、白血球数の減少（参加者の２５．８％、８／３１）、及び貧血（参加者の２２．６％、７／３１）であった（表４、コホート１ａ）。ＪＺＰ－４５８ＩＭ３７．５ｍｇ／ｍ^２コホートでは、最も高頻度なＴＥＡＥは、嘔吐（参加者の３５．３％、６／１７）及び悪心（参加者の２３．５％、４／１７）であった（図２７、コホート１ｂ）。

ＪＺＰ－４５８ＩＭ２５ｍｇ／ｍ^２コホート（Ｎ＝３１）において、グレード３又は４のＴＥＡＥが１８人の参加者（５８．１％）で報告され、好中球数の減少（２９．０％）、白血球数の減少（１６．１％）、及び発熱性好中球減少症（１９．４％）のグレード３又は４のＴＥＡＥが最も一般的であった（表６）。全体として、グレード３以上の治療下で発現した予期しない臨床的に問題となる非血液学的毒性が１人の参加者で報告された（治験薬に関連するとみなされたグレード４の高トリグリセリド血症）（表６及び一覧表１、コホート１ａ）。ＪＺＰ－４５８ＩＭ２５ｍｇ／ｍ^２コホートにおいて、重篤なＴＥＡＥが９人の参加者（２９．０％）で報告された（表５）。重篤なＴＥＡＥには、１人の参加者における失神寸前状態、１人の参加者における鼻漏及び発熱性好中球減少症、１人の参加者における発熱性好中球減少症、脱水、及び発熱、１人の参加者における薬剤過敏症及び発熱性好中球減少症、１人の参加者における発熱性好中球減少症、１人の参加者における発熱性好中球減少症及び口内炎、１人の参加者における口腔粘膜炎の悪化、１人の参加者における発熱、並びに１人の参加者におけるメトヘモグロビン血症が含まれた。これら全ての重篤なＴＥＡＥは、１人の参加者における薬剤過敏症及び発熱性好中球減少症の事象を除き、治験薬に関連するとみなされなかった。

全体として、１人の参加者（ＪＺＰ－４５８２５ｍｇ／ｍ^２）が治験薬の中止に至ったＴＥＡＥを発現した。この参加者（４歳）は、第１クールの５回目投与の日にセフェピム及びスルファメトキサゾール／トリメトプリムに対するグレード２のアレルギー反応（非重篤）を示した。

これらの薬物の両方が中止された。その後に、ＪＺＰ－４５８の第２クールの３回目投与の１日後に、参加者は、薬剤過敏症の重篤なＴＥＡＥ（グレード３）を発現した。その翌日、事象は消退し、参加者は退院した。この事象は治験薬に関連するとみなされ、治験薬の中止に至った（一覧表１、コホート１ａ）。ＪＺＰ－４５８ＩＭ３７．５ｍｇ／ｍ^２コホート（Ｎ＝１７）では、６人の参加者が、グレード３又は４のＴＥＡＥを発現し、発熱性好中球減少症（１７．６％、３／１７）が最も一般的であった（図３０及び一覧表１、コホート１ｂ）。ＪＺＰ－４５８ＩＭ３７．５ｍｇ／ｍ^２コホートにおける３人の参加者が、重篤なＴＥＡＥ（１人の参加者における嘔吐及び腹痛［治験薬に関連しない］、１人の参加者における薬剤過敏症［報告者の用語：ＪＺＰ－４５８に対するアレルギー反応。治験薬に関連する］及び発熱性好中球減少症［治験薬に関連する］、並びに１人の参加者における発熱性好中球減少症［治験薬に関連する。２回の事象］）を発現した（図２８）。グレード３以上の治療下で発現した予期しない臨床的に問題となる非血液学的毒性事象は、これらの参加者において報告されず、試験中止に至ったＴＥＡＥはなかった（図２９、コホート１ｂ）。

アスパラギナーゼに関する関心対象の有害事象としては、アレルギー反応、膵臓炎、及び血栓症が挙げられる（Ｓｔｏｃｋ２０１１；Ｋｅａｒｎｅｙ２００９；Ｐｉｅｔｅｒｓ２０１１；Ｐｌｏｕｒｄｅ２０１４；Ｋｌｏｏｓ２０２０；Ａｓｐａｒｌａｓ，ＳｕｍｍａｒｙＢａｓｉｓｏｆＡｐｐｒｏｖａｌ２０１８）。この予備的安全性解析のデータカットオフの時点では、１人の参加者（コホート１ａ）のみが（上述の）グレード３以上のアレルギー反応／過敏症を発現し、グレード３以上の膵臓炎又は血栓症の事象を発現した参加者はいなかった。死亡例の報告はなかった。

要約すると、観察されたＴＥＡＥプロファイルは、他のアスパラギナーゼと一致し、ＪＺＰ－４５８の両方の用量レベル（２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２）が参加者において十分な忍容性を示したことを示した。

ＳＤＲＣの内外の専門家による利用可能な試験データの詳細なレビューに基づいて、３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量が、好ましいベネフィット・リスクプロファイルを有し、ＪＺＰ－４５８の承認申請に適切な用量である。この用量は、患者がアスパラギナーゼの治療レジメンを完了するのを確保し得、ベネフィット・リスク及び最小限の有効な投与に関するＦＤＡ指針に一致する。

安全性：更なる安全性試験が、安全性評価に利用可能であるコホート１ａ（２５ｍｇ／ｍ^２）の３１人及びコホート１ｂ（３７．５ｍｇ／ｍ^２）の５１人を含む最低８２人の参加者で実施される予定である。４７人の参加者（２５ｍｇ／ｍ^２での３１人の参加者及び３７．５ｍｇ／ｍ^２での１７人の参加者）での予備的データは、３７．５ｍｇ／ｍ^２の提案された用量が安全であり、十分な忍容性を示すことを実証した。予備的安全性解析では、１人の参加者（コホート１ａ、２５ｍｇ／ｍ^２）のみがグレード３以上のアレルギー反応／過敏症を発現し、グレード３以上の膵臓炎又は血栓症の事象を発現した参加者はいなかった。薬剤過敏症のグレード３の重篤な有害事象（ＳＡＥ）（治験薬に関連する）は、治験薬の中止に至った。ＴＥＡＥにより試験の中止に至った他の参加者はいなかった。

有効性データ：早期有効性評価の基準は、０．１ＩＵ／ｍＬの標的ＳＡＡ値、並びにアスパラギン枯渇の確認及び以前にアスパラギナーゼに曝露された患者での臨床的に適切な奏効率の考慮に基づいていた。観察された予備的ＳＡＡ結果は、２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベル（Ｎ＝２６人の評価可能な参加者）で、直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル平均値（９５％ＣＩ）がそれぞれ０．１５６０（０．１１４４～０．１９７６）及び０．４５０４（０．３６３７～０．５３７０）であったことを示す（直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル中央値［Ｑ１、Ｑ３］は、それぞれ０．１３４５［０．０８８６、０．２１７８］及び０．４０９１［０．２８１３、０．６５７７］であった）。３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベル（Ｎ＝１６人の評価可能な参加者）では、直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル平均値（９５％ＣＩ）は、それぞれ０．２６０５（０．１３２６～０．３８８４）及び０．７１４６（０．３９７６～１．０３１６）であった（直近の投与７２及び４８時間後のＳＡＡレベル中央値［Ｑ１、Ｑ３］は、それぞれ、０．１７３２［０．１１５７、０．２８４９］及び０．６５０３［０．３２４８、０．８７３６］であった）。

２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベルでは、それぞれ参加者の６５．４％及び８１．３％が直近の７２時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成し（主要エンドポイント）、それぞれ参加者の９６．２％及び９３．８％が直近の４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した（主要な副次エンドポイント）。３７．５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝１６）では、直近の７２時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した参加者のパーセンテージは、主要エンドポイント基準（統計解析計画［ＳＡＰ］に規定）を満たさなかったが、この結果は、過敏反応後に治療のために非大腸菌ベースのアスパラギナーゼを投与された患者について公開された観測値又は予測値（８０％～８８％）と一致する臨床的に適切な奏効率を実証する（Ｖｒｏｏｍａｎ２０１０；Ｐａｎｅｔｔａ２０２０；Ｓａｌｚｅｒ２０１３）。３７．５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝１６）では、直近の４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベル（主要な副次的エンドポイント）を達成した参加者のパーセンテージは、９３．８％であった。このパーセンテージは、ＩＡ（Ｎ＝５１人の参加者が計画されている）のＳＡＰに概略が示される事前に決められた成功基準を満たすと予想される。

ＰＰＫの予備的結果においてＪＺＰ－４５８の有効性がさらに確認される。予備的ＰＰＫは、観察されたデータに一致し、提案された３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量選択をさらに支持した。ＰＰＫモデル化及びシミュレーション（副次エンドポイント）に基づいて、ＦＭＷスケジュールでの３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ投与で、ＪＺＰ－４５８は、８７％の患者（９５％ＣＩ：８５．５％～８８．５％）において０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡレベルを達成し、９９．９％の患者（９５％ＣＩ：９９．７％～１００％）において０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の４８時間のＮＳＡＡレベルを達成すると予想される。シミュレートされたＮＳＡＡレベル平均値は、直近の７２及び４８時間でそれぞれ０．２９（９５％の予測区間：０．０６～０．８８）及び０．５８（９５％の予測区間：０．２～１．３２）であった。シミュレーション結果は、開始日が、直近の７２又は４８時間の時点で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを示す患者のパーセンテージに影響を及ぼさないことを示した。

ＰＰＫ解析は、観察されたデータを頑健に支持し、このモデルが全ての患者、時点、及び用量レベルの利用可能なデータを使用するため、ＢＬＡのための完全なデータパッケージを提供する。ＰＰＫモデルの結果は、利用可能な全ての臨床データ及びＰＫデータに基づくＪＺＰ－４５８の曝露量－応答特性を示し得る。このモデルは、分類されたデータに依存しないため、関連する時点でのＮＳＡＡレベルの信頼性の高い予測を提供する。このモデルは、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与の７２時間後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを示す患者のパーセンテージが、大腸菌ベースのアスパラギナーゼ製品に対する過敏症を有する患者集団において予想される応答と一致することを実証する。モデル化されたＳＡＡ値は、３７．５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ投与がＭＷＦ投与スケジュールでの適切な用量であることを示唆する。

ＪＺＰ－４５８の３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量確認の更なる手段として、バリデートされた方法（ＢｉｏｍａｒｋｅｒＰａｒｔｉａｌＶａｌｉｄａｔｉｏｎＲｅｐｏｒｔＡｍｅｎｄｍｅｎｔ１，ＳＮ００４４）により測定される完全なアスパラギン枯渇の目標が達成された。２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２での投与期間を通じたベースラインアスパラギンレベル対トラフ時に測定されたアスパラギンレベルの比較は、アスパラギンのほぼ完全な枯渇を一貫して実証した。このパターンからの偏差は小さく、一過性であった。用量候補の効果、毒性試験、注射回数の効果、バイアル数の効果、及び他の因子の効果が評価された。かかる試験により、より高用量とより高度な有害事象のリスク増加の潜在的効果とが比較考量された。

実施例９ＪＺＰ－４５８の包括的な臨床データパッケージ：コホート１ａ及び１ｂの観察された有効性データ、ＰＤデータ、安全性データ、及び免疫原性データ
以下は、ＭＷＦにＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８の有効性及び安全性を裏付けるデータの４つの重要要素である。

１．コホート１ａ及び１ｂからの観察された有効性データ：ＭＷＦ／ＷＦＭ／ＦＭＷにＩＭ投与された２５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝２９）及び３７．５ｍｇ／ｍ２（Ｎ＝５１）のＪＺＰ－４５８では、第１クールにおける直近の７２時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した参加者のパーセンテージは、それぞれ、６５．５％（９５％ＣＩ：４８．２％、８２．８％）及び８０．４％（９５％ＣＩ：６９．５％、９１．３％）であった（初期解析表９．２．１．１）。ＭＷＦ／ＷＦＭ／ＦＭＷにＩＭ投与された２５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝３２）及び３７．５ｍｇ／ｍ^２（Ｎ＝５３）のＪＺＰ－４５８では、第１クールにおける直近の４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した参加者のパーセンテージは、それぞれ、９６．９％（９５％ＣＩ：９０．８％、１００％）及び９８．１％（９５％ＣＩ：９４．５％、１００．０％）であった。９５％ＣＩの下限は９０％を超えており、これは２５ｍｇ／ｍ２及び３７．５ｍｇ／ｍ２のＪＺＰ－４５８の４８時間毎の投与の有効性を裏付ける。

２．コホート１ａ（Ｎ＝３２）及び１ｂ（Ｎ＝５３）からのＰＤデータ：２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量の投与により、血漿アスパラギンレベルが完全に枯渇した。血漿アスパラギンレベルは、投与前レベルからアッセイ定量下限（０．０２５μｇ／ｍＬ）未満又はその近くのレベルまで急速に低下し、最後の試料が採取された６回目投与までの第１クールの治療期間を通じて維持した。４人の参加者が一過性の低レベルの血漿アスパラギン増加を示した（コホート１ａの３人及びコホート１ｂの１人）。

３．コホート１ａ及び１ｂからの安全性データ（コホート別及び全体として）：コホート１ａ及び１ｂ（Ｎ＝８６）からの組合せ安全性データに基づくＡＬＬ／ＬＢＬ参加者におけるＪＺＰ－４５８の全体的な安全性プロファイルは、ＪＺＰ－４５８が十分な忍容性を示し、ＪＺＰ－４５８の安全性プロファイルが予測可能で且つアスパラギナーゼの確立された安全性プロファイルと一致することを示した。

４．有害事象：全体として、参加者の９６．５％（８３／８６）は試験中に１つ又は複数の治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）を発現した（図３１）。全体として、最も高頻度なＴＥＡＥは貧血（参加者の３７．２％［３２／８６］）、好中球数の減少（参加者の３４．９％［３０／８６］）、及び血小板数の減少（参加者の２９．１％［２５／８６］）であった。最も高頻度な治療関連ＴＥＡＥは、好中球数の減少（参加者の１８．６％［１６／８６］）、貧血（参加者の１５．１％［１３／８６］）、及び悪心（参加者の１５．１％［１３／８６］）であった。

実施例１０コホート１ｃの安全性試験
コホート１ｃ（ＭＷＦにＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２）の安全性（ＴＥＡＥ）の予備的データは、ＪＺＰ－４５８のこの用量及びレジメンが十分な忍容性を有し且つアスパラギナーゼ製品の十分に確立された安全性プロファイルと一致することを示す。予備的データは、コホート１ｃにおいて、参加者の８１．３％（１３／１６）が１つ又は複数のＴＥＡＥを発現したことを示す（図３２）。全体として、最も高頻度なＴＥＡＥは、貧血（参加者の２５．０％［４／１６］）、血小板数の減少（参加者の２５．０％［４／１６］）、及びリンパ球数の減少、好中球数の減少及び白血球数の減少（それぞれ参加者の１８．８％［３／１６］）であった。

予備的データは、コホート１ｃにおいて死亡した参加者がなかったことも示す。参加者１６人中４人（２５．０％）がＳＡＥを発現した。１人の参加者が、治験薬の中止に至った急性膵炎（グレード３）の治療関連ＳＡＥを発現した。この事象は試験１３日目に開始し試験２４日目に解決された。予備的データでは、コホート１ｃにおいてＴＥＡＥにより治験薬を中止した他の参加者はなかった。また、コホート１ｃ（Ｎ＝１６）の予備的データでは、アレルギー反応（過敏症及びアナフィラキシーを含む）又は血栓症のＴＥＡＥは発生していなかった。

データカットオフ日時点では、コホート１ｃの参加者１６人中２人（１２．５％）が膵炎のＴＥＡＥを発現し、２人とも治験担当医師によりＪＺＰ－４５８に関連していると評価された。１人目の参加者は、第１クールの６回目投与の４日後にグレード２の膵炎を発症した。この参加者は開始時にグレード２の心窩部痛があり、他の症状がなく、８７１Ｕ／Ｌのリパーゼ増加を示した（基準範囲７３～３９３Ｕ／Ｌ）。そのアミラーゼは治験担当医師により正常範囲内であると報告された（値は提供されなかった）。治験担当医師は、症状が治療なしで治まり、８日後にリパーゼが３００Ｕ／Ｌに減少したと報告した。治験担当医師は、前記事象がグレード２の膵炎であり、ＪＺＰ－４５８に関連していると評価した。ＪＺＰ－４５８に関しては何の措置も取られず、参加者はこの事象の発症から１４日後に更なる問題なくＪＺＰ－４５８の第２クールを開始した。第２クール開始時の検査結果は、リパーゼが２１８Ｕ／Ｌ、アミラーゼが６４であった（基準範囲２５～１１５Ｕ／Ｌ）。

２人目の参加者は第１クールの６回目投与完了の１日後にグレード３の膵炎を発現した。この参加者は、左上腹部、中腹部、左下腹部に広がる中程度の腹痛（８／１０）により救急室で受診した。モルヒネのＩＶ注射が行われ、痛みが７／１０に軽減された。関連する検査結果には、リパーゼ５４９Ｕ／Ｌ（基準範囲７３～３９３）及びアミラーゼ４７Ｕ／Ｌ（範囲２５～１１５Ｕ／Ｌ）が含まれた。Ｘ線検査では中等度の便秘が認められた。ＣＯＶＩＤ検査及び尿培養は陰性であった。この参加者は膵炎の精密検査及び治療のために入院した。その事象が約１０日後に解決され、当日にそのリパーゼ結果が範囲内に戻った（リパーゼ３５５Ｕ／Ｌ）。治験担当医師はその事象がＪＺＰ－４５８に関連していると評価し、参加者はグレード３の膵炎のため試験１３日目に治療を終了した。

ＪＺＰ４５８－２０１における膵炎の報告について臨床データベースの予備的なレビューが実施された。コホート１ｃからの参加者４４人を含む現在登録されていた１６１人の参加者のうち、コホート全体にわたって膵炎の発症を報告した症例は７人であった。コホート１ｃの参加者２人に加えて、コホート１ｂに登録された参加者も５例報告された。７例の報告のうち６例は重篤、１例は非重篤と考えられた。上述したように、膵炎の重篤報告６例中２例はコホート１ｂの参加者に発生し、これらの参加者はその後死亡した（１人の参加者は敗血症を発症して死亡し、もう１人は食道気管瘻に伴う誤嚥性肺炎を発症して死亡した）。膵炎の全体的な発生率はアスパラギナーゼでの予想の範囲内である。

要約：この試験ＪＺＰ４５８－２０１では、３用量レジメンが良好なベネフィット・リスクプロファイルを有すると評価された。データ全体は、長時間作用型大腸菌アスパラギナーゼの１クールを代替するためにＭＷＦスケジュールで６回に分けてＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８の有効性を裏付ける。ＪＺＰ－４５８の安全性プロファイル（コホート１ａ、１ｂ及びコホート１ｃの予備的データ）は、アスパラギナーゼ製品の確立された安全性プロファイルと同等である。

実施例１１６０日更新：コホート１ａ、１ｂ及び１ｃからの有効性ＰＫ及びＰＤデータ
コホート１ａ（Ｎ＝３２）及び１ｂ（Ｎ＝５３）からの利用可能な有効性、ＰＫ（ＳＡＡ）、及びＰＤデータ：利用可能なデータは、データカットオフ日までにコホート１ａ（Ｎ＝３３）及び１ｂ（Ｎ＝５３）について収集され、データ抽出日前に生化学分析検査機関により解析されていたデータを含む。

コホート１ｃ（Ｎ＝１６）からの有効性、ＰＫ（ＳＡＡ）及びＰＤデータ：データカットオフ日時点では、合計１７人の参加者（投与を受けなかった参加者１人を含む）がコホート１ｃに登録されていた（ＭＷＦにＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２）。治験薬を少なくとも１回投与された１６人の参加者について、試験期間の中央値（範囲）は４．７５（１．９～７．１）週間であり、そのうち、２人の試験参加者は＜２週間であり、３人の試験参加者は２～＜４週間であり、９人の試験参加者は４～＜６週間であり、２人の試験参加者は６～＜８週間であった。１６人の参加者のうち、７人は１クールの治療を受け、９人は２クールの治療を受けていた。

予備的な結果に基づくと、ＭＷＦにＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８（Ｎ＝１３）では、第１クールにおける直近の７２及び４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した参加者のパーセンテージは、それぞれ、９２．３％（参加者の１２／１３）及び９２．３％（参加者の１２／１３）であった。これらの結果は、ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与された２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８の有効性を裏付ける。第１クールにおける直近の７２及び４８時間の評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成しなかった１人の参加者（１２～＜１８歳）は、Ｏｎｃａｓｐａｒ対してグレード３のアレルギー反応を示し、症状が現れ始めた時に約５％の注入を受けた。ＪＺＰ－４５８は７日後に初回投与された。スクリーニング時及び初日の参加者の検査値（ヘモグロビン、ビリルビン、トリグリセリド、コレステロールを含む）は上昇しなかった。この参加者については、これまでに、第１クールの最後の投与（６回目投与）後に発生した喉痛（関連なし）及び軽度（グレード１）の注射部位反応（ＪＺＰ－４５８に関連）という、２つのＡＥが報告されている。第１クールにおいて、この参加者は＞０．１ＩＵ／ｍＬのＮＳＡＡレベルを示し（初回投与２．５及び４８時間後及び２回目投与４８時間後）、このレベルは３回目投与７２時間後に０．０４５３ＩＵ／ｍＬに低下し（直近の７２時間評価）、４回目投与２．５時間後に０．１３６９ＩＵ／ｍＬに低下し、４回目投与４８時間後にＢＬＱとなり、５回目投与４８時間後に０．０５１０ＩＵ／ｍＬに低下した（直近の４８時間評価）。この参加者のＡＤＡデータは保留中である。

実施例１２大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示すＡＬＬ／ＬＢＬ患者でのＪＺＰ－４５８の第２／３試験
この試験は、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性を示す（アレルギー反応又は無症候の不活性化）、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する（任意の年齢の）参加者におけるＪＺＰ－４５８の非盲検、多施設共同、用量確認、ＰＫ試験である。この試験は、ＳＡＡにより測定されるＪＺＰ－４５８の忍容性及び有効性を評価するように計画され、アスパラギン枯渇及びＡＤＡレベルについては、追加の裏付けとなる解析が行われた。６用量のＪＺＰ４５８は、長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに使用される。ＪＺＰ－４５８による連続２週間の治療は１クールとして定義される。ＪＺＰ－４５８のクール（２週間にわたる６回投与）は月曜日、水曜日、又は金曜日にいずれかに開始し、参加者当たりのクール数は個々の治療計画によって決定される。

この試験は、ＩＭ投与についてＪＺＰ－４５８の用量を決定し安全性及び有効性を確認するパートＡと、ＩＶ投与ＪＺＰ－４５８の最適な用量及びスケジュールを明らかにするパートＢと、の２パートからなる。

パートＡ：コホート１ａが２週間にわたるＭＷＦスケジュールで２５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ投与で開始された。コホート１ａからのデータは、評価可能な参加者６人がＭＷＦスケジュールでの２５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ投与に登録された後に評価され、評価可能な参加者１６人からの累積データで再度評価された。投与直近の７２時間後のＮＳＡＡレベルを示す参加者のパーセンテージがプロトコールに既定された閾値未満であるため、２５ｍｇ／ｍ２のＩＭ用量レベルでの許容可能な安全性プロファイルにより、Ｊａｚｚは、ＭＷＦスケジュールでの３７．５ｍｇ／ｍ^２のＩＭ用量に段階的に増やすと決定した（コホート１ｂ）。

安全性データ、ＳＡＡデータ、ＰＰＫモデリング及びシミュレーション結果は、最初の７人の参加者がコホート１ｂに登録された後に評価され、そして１７人の評価可能な参加者がコホート１ｂに登録された後に累積的に再度評価された。そこで、Ｊａｚｚは、コホート１ｂにおいて変更することなくＭＷＦスケジュールでの３７．５ｍｇ／ｍ^２投与で登録を続けると決定した。

ＰＰＫモデリング及びＦＤＡとの議論に基づき、コホート１ｃは、月曜日及び水曜日に投与される２５ｍｇ／ｍ^２用量及び金曜日に投与される５０ｍｇ／ｍ^２用量を評価するために開始された。コホート１ａ（Ｎ＝３０）及び１ｂ（Ｎ＝３２）の第１クールからの参加者データを使用した予備的なＰＰＫモデルは、長時間作用型大腸菌アスパラギナーゼの各用量を代替するための合計６用量について、ＭＷＦ投与スケジュールを支持する最適な用量が、ＭＷＦに投与される２５／２５／５０ｍｇ／ｍ^２の用量であると予測した。２０２１年７月１９日時点で、合計５１人の参加者がコホート１ｃに登録された。

パートＢ
パートＢコホート１ａ（ＩＶ用量確認）：このコホートにおける参加者には６用量のＪＺＰ４５８がＩＶ投与される。少なくとも６人の評価可能な参加者が標的として登録された。評価可能な参加者は、少なくとも３用量のＪＺＰ４５８をＩＶ投与された、第１クールの後半に７２時間ＮＳＡＡレベル（±２時間の範囲内で取得）を示す者と定義される。ＳＡＡレベル測定及び他のＰＫ／ＰＤ検査評価のために血液試料が採取された。ＩＶ投与ＪＺＰ４５８の追加クールは、参加者が臨床効果を得られる限り、参加者の本来の治療計画に基づいて実施される。参加者の治療計画において予定された長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの未実施分の後続の投与は、参加者のアスパラギナーゼが完了するまで、１クールに相当する６回のＪＺＰ４５８のＩＶ投与で代替される。

１コホートにおける全ての必要な参加者が登録され、６用量のＪＺＰ４５８で治療された後、用量レベルを評価し、ＳＤＲＣによって追加の参加者／コホートの必要性を判定する。

パートＢ（可能な追加コホートについてのＪＺＰ４５８のＩＶ決定）：最初のＩＶ投与コホートにおける評価可能な参加者６人中６人が０．１ＩＵ／ｍＬ以上の７２時間ＮＳＡＡレベルを示し、ＳＤＲＣによるレビューに基づいて安全性及び忍容性が許容できる場合、その用量は更なる評価のための用量として確認され得る。前記用量が確認できない場合、追加の投与コホートを、（セクション８．１／プロトコール補正０２／セクション３．１．３）に記載のように検査してもよい。

この要約は、２０２１年７月１９日をデータカットオフ日とした副次解析対象集団の結果を示し、該副次解析対象集団は、パートＡ（コホート１ａ［ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与される２５ｍｇ／ｍ^２、Ｎ＝３３］、コホート１ｂ［ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与される３７．５ｍｇ／ｍ^２、Ｎ＝８３］、及びコホート１ｃ［月曜日及び水曜日にＩＭ投与される２５ｍｇ／ｍ^２と金曜日にＩＭ投与される５０ｍｇ／ｍ２、Ｎ＝５１］）、及びパートＢ（月曜日及び水曜日にＩＶ投与される２５ｍｇ／ｍ^２と金曜日にＩＶ投与される５０ｍｇ／ｍ^２、Ｎ＝６２）からの参加者を含む。

試験の第１の目的は、コホート１及びコホート２における奏効（第１クールにおける０．１ＩＵ／ｍＬ以上の直近の７２時間のＮＳＡＡレベルと定義される）により測定される、ＪＺＰ－４５８のＩＭ投与の有効性を判定すること、及び大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏性を示す、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者におけるＩＭ投与ＪＺＰ－４５８の安全性及び忍容性を評価することである。

データカットオフ日の２０２１年７月１９日時点で、合計２２８人の参加者（パートＡ：コホート１ａの３３人［ＭＷＦにＩＭ投与される２５ｍｇ／ｍ^２］、コホート１ｂの８３人［ＭＷＦにＩＭ投与される３７．５ｍｇ／ｍ^２］、及びコホート１ｃの５１人［ＩＭ投与される２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２］。パートＢ：コホート１ａの６２人［ＩＶ投与される２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２］）が試験に登録された。２０２１年７月１９日時点で、パートＡにおける２８人（１６．８％）の参加者及びパートＢにおける３９人（６２．９％）の参加者は、試験においてＪＺＰ－４５８治療を続けている。

パートＡ（ＩＭ）では、１６７人の参加者のうち、合計３５人（２１．０％）がＪＺＰ－４５８治療を中止した（１６７人中２１人［１２．６％］がＴＥＡＥにより中止され、１６７人中８人［４．８％］が医師の判断で中止され、１６７人中３人［１．８％］が進行性疾患により中止され、１６７中１人［０．６％］が親又は保護者によって中止され、１６７人中１人［０．６％］が参加者退出により中止され、１６７人中１人［０．６％］が「他」により中止された）。データカットオフ日の２０２１年７月１９日時点で、パートＡにおける１６７人の参加者のうち、合計３人［１．８％］が死亡した。

パートＢ（ＩＶ）では、６２人の参加者のうち、合計２２人（３５．５％）がＪＺＰ－４５８治療を中止した（６２人中１５人［２４．２％］がＴＥＡＥにより中止され、６２人中４人［６．５％］が医師の判断で中止され、６２人中１人［１．６％］が再発性疾患により中止され、６２人中１人［１．６％］が参加者退出により中止され、６２人中１人［１．６％］が「他」により中止された）。データカットオフ日の２０２１年７月１９日時点で、パートＢにおいて死亡した参加者はなかった。

全体として、パートＡ（ＩＭ）では、参加者の大多数が白人であった（１６７人中１１５人［６８．９％］）。登録時の年齢の中央値が１０歳であった（範囲：１～２５歳）。安全性解析対象集団における１６７人の参加者のうち、４４人（２６．３％）が＜６歳であり、５７人（３４．１％）が６～＜１２歳であり、４５人（２６．９％）が１２～＜１８歳であり、２１人（１２．６％）が１８歳以上であった。前記安全性解析対象集団に含まれる参加者のパーセンテージは、男性（１６７人中１０３人［６１．７％］）が女性（１６７人中６４人［３８．３％］）よりも高い。

パートＢ（ＩＶ）では、参加者の大多数が白人であった（６１人中４３人［７０．５％］）。登録時の年齢の中央値が１０歳であった（範囲：１～２４歳）。安全性解析対象集団における６１人の参加者のうち、２０人（３２．８％）が＜６歳であり、１４人（２３．０％）が６～＜１２歳であり、１７人（２７．９％）が１２～＜１８歳であり、１０人（１６．４％）が１８歳以上であった。前記安全性解析対象集団に含まれる参加者のパーセンテージは、男性（６１人中３６［５９．０％］）が女性（６１人中２５人［４１．０％］）よりも高い。

全体として、パートＡ（ＩＭ）では、一次疾患状態として、１６７人中１２４人の参加者［７４．３％］でＢ細胞ＡＬＬが報告され、１６７人中２６人の参加者［１５．６％］でＴ細胞ＡＬＬが報告され、１６７人中１６人の参加者［９．６％］でＴ細胞ＬＢＬが報告され、１６７人中１人の参加者（０．６％）でＢ細胞ＬＢＬが報告された。全体として、一次診断からの時間は、参加者の大多数（１６７人中１２２人［７３．１％］）で、試験初日に対する０～３ヶ月の範囲であった。全ての参加者（１６７人中１６７人）で以前のアスパラギナーゼ治療はＯｎｃａｓｐａｒであり、最後のアスパラギナーゼ治療からの平均時間は、試験初日に対する２４．３日間であった（２～１５８日間範囲）。

全体として、パートＢ（ＩＶ）では、一次疾患状態として、６１人中５１人の参加者［８３．６％］でＢ細胞ＡＬＬが報告され、６１人中７人の参加者［１１．５％］でＴ細胞ＡＬＬが報告され、６１人中２人の参加者（３．３％）でＢ細胞ＬＢＬが報告され、６１人中１人の参加者［１．６％］でＴ細胞ＬＢＬが報告された。全体として、一次診断からの時間は、参加者の大多数（６１人中４７人［７７．０％］）で、試験初日に対する０～３ヶ月の範囲であった。大部分の参加者（６１人中６０人［９８．４％］）で以前のアスパラギナーゼ治療はＯｎｃａｓｐａｒであり、最後のアスパラギナーゼ治療からの平均期間は、試験初日に対する２４．９日間であった（２～１３８日間範囲）。人口統計学的及びベースライン特性を図３３に示す。

血清アスパラギナーゼ活性に基づく薬物動態：パートＡ（ＩＭ）では、ＰＫ解析対象集団が、前記２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦコホートの参加者３２人（９７．０％）、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦコホートの参加者８３人（１００％）、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２コホートの参加者５１人（１００％）からなる。パートＢ（ＩＶ）では、ＰＫ解析対象集団が、２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量でＪＺＰ４５８をＩＶ投与された参加者６０人（９６．８％）からなる。

観察されたＳＡＡ結果は、２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍｇ^２のＪＺＰ－４５８のＩＭ用量レベルで、投与直近の７２及び４８時間後のＳＡＡレベル平均値及び中央値が０．１ＩＵ／ｍＬ以上であったことを示す（図３４）。

パートＡ（ＩＭ）
ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与されたＪＺＰ－４５８の２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルで、参加者の６４．３％（９５％ＣＩ：４６．５％、８２．０％）及び９０．８％（９５％ＣＩ：８４．３％、９７．３％）は、それぞれ、治療の第１クールにおいて直近の７２時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。ＪＺＰ４５８が２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量でＩＭ投与された場合、参加者の８９．８％（９５％ＣＩ：８１．３％、９８．３％）は、治療の第１クールにおいて直近の７２時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。

ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与されたＪＺＰ－４５８の２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量レベルで、参加者の９６．９％（９５％ＣＩ：９０．８％、１００．０％）及び９８．８％（９５％ＣＩ：９６．４％、１００．０％）は、それぞれ、治療の第１クールにおいて直近の４８時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。ＪＺＰ４５８が２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量でＩＭ投与された場合、参加者の９５．９％（９５％ＣＩ：９０．４％、１００．０％）は、治療の第１クールにおいて直近の４８時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。

パートＢ（ＩＶ）
ＭＷＦスケジュールでＩＶ投与されたＪＺＰ－４５８の２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量レベルで、参加者の４０．０％（９５％ＣＩ：２６．４％、５３．６％）は、それぞれ、治療の第１クールにおいて直近の７２時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。

２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量でＩＶ投与されたＪＺＰ－４５８のＩＶ用量レベルで、参加者の８９．８％（９５％ＣＩ：８２．１％、９７．５％）は、治療の第１クールにおいて直近の４８時間評価で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＮＳＡＡレベルを達成した。

血清アスパラギナーゼ濃度に基づく薬物動態：ＪＺＰ－４５８のＳＡＡとＳＡＣとの間の関係をＪＺＰ４５８－２０１試験で調査した。

パートＡ（ＩＭ）：
ＪＺＰ－４５８がＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者にＩＭ投与された場合、ＳＡＡとＳＡＣとの間で強い正の関連性が観察され、第１クールからのプールされたＪＺＰ４５８ＩＭ２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、ＩＭ３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及びＩＭ２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の相関係数は０．９６４０（ピアソン相関係数）であった（図３５）。さらに、線形回帰モデルからの方程式はＳＡＣ＝１２５４．７×ＳＡＡであった（図３５）。これらのデータは、ＳＡＡレベルが０．１ＩＵ／ｍＬの場合、この患者集団において対応する血清アスパラギナーゼ濃度が約１２５ｎｇ／ｍＬになることを示唆した。

パートＢ（ＩＶ）
ＪＺＰ－４５８がＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者にＩＶ投与された場合、ＳＡＡとＳＡＣとの間で強い正の関連性が観察され、第１クールからのＪＺＰ４５８ＩＶ２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の相関係数は０．９２６３（ピアソン相関係数）であった（図３５）。さらに、線形回帰モデルからの方程式はＳＡＣ＝１０８０．８×ＳＡＡであった（図３５）。これらのデータは、ＳＡＡレベルが０．１ＩＵ／ｍＬの場合、この患者集団において対応する血清アスパラギナーゼ濃度が１０８ｎｇ／ｍＬになることを示唆した。

薬力学的結果：ＰＤ解析対象集団は、試験のパートＡ（ＩＭ）に登録された参加者１６６人（９９．４％）及び試験のパートＢ（ＩＶ）に登録された参加者６０人（９６．８％）からなる。ＰＤ試料のヒト血漿中のＬ－アスパラギン及びＬ－グルタミン濃度について、バリデートされた液体クロマトグラフィータンデム質量分析法を使用して、Ｌ－アスパラギンを０．０２５～１０．０μｇ／ｍＬの範囲で、Ｌ－グルタミンを０．２５０～１００μｇ／ｍＬの範囲で、分析した。

血漿Ｌ－アスパラギン枯渇：
パートＡ（ＩＭ）：血漿アスパラギンの完全な枯渇はＪＺＰ－４５８の２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でのＩＭ投与後に観察された。第１クールにおいて、投与前Ｌ－アスパラギン濃度平均値は全てのレベル及び全てのスケジュールで７．５８６５～１１．３２１５μｇ／ｍＬの範囲であった。大多数の参加者において、血漿アスパラギンの完全な枯渇が観察された。図３６Ａ、３６Ｂ及び３６Ｃは、ＪＺＰ－４５８を２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でＩＭ投与した後、血漿アスパラギンレベル平均値が投与前レベルからアッセイＬＬＯＱ（０．０２５μｇ／ｍＬ）未満又はその近くのレベルに急速に低下したことを示す。低下した血漿アスパラギンレベルは、最後の試料が採取された６回目の投与前までの第１クールの治療期間を通じて持続した。４人の参加者が一過性の低レベルの血漿アスパラギン増加を示した（コホート１ａの３人及びコホート１ｂの１人）。

パートＢ（ＩＶ）：血漿アスパラギンの完全な枯渇は、ＪＺＰ－４５８を２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でＩＶ投与した後に観察された。第１クールにおいて、投与前Ｌ－アスパラギン濃度平均値は、全ての投与スケジュールで８．２２１８～８．９３４８μｇ／ｍＬの範囲であった。大多数の参加者において、血漿アスパラギンの完全な枯渇が観察された。図３６Ａ～３６Ｃは、ＪＺＰ－４５８を２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でＩＶ投与した後、血漿アスパラギンレベル平均値が投与前レベルからアッセイＬＬＯＱ（０．０２５μｇ／ｍＬ）未満又はその近くのレベルに急速に低下したことを示す。低下した血漿アスパラギンレベルは、最後の試料が採取された６回目の投与前までの第１クールの治療期間を通じて持続した。２人の参加者が血漿アスパラギンの低レベルから中レベルの増加を示した。

血漿Ｌ－グルタミン枯渇：
パートＡ（ＩＭ）：血漿グルタミンの枯渇も、ＪＺＰ－４５８の２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でのＩＭ投与後に観察された。第１クールにおいて、投与前Ｌ－グルタミン濃度平均値は、全てのレベル及び全てのスケジュールで８８．３０００～１１２．７８７５μｇ／ｍＬの範囲であった。図３７Ａ～３７Ｃは、Ｌグルタミンレベル平均値が、ＪＺＰ－４５８を２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及び２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２の用量でＩＭ投与した後に低下したことを示す。しかし、Ｌグルタミンの完全な枯渇はプロファイル平均値に基づいて観察されず、グルタミンレベルは中程度の影響しか受けなかった。

パートＢ（ＩＶ）：血漿グルタミンの枯渇も、ＪＺＰ－４５８の２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でのＩＶ投与後に観察された。第１クールにおいて、投与前Ｌ－グルタミン濃度平均値は、全ての投与スケジュールで９９．３７２７～１１１．００４８μｇ／ｍＬの範囲であった。図３７Ａ～３７Ｃは、Ｌ－グルタミンレベル平均値が、ＪＺＰ－４５８を２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２でＩＶ投与した後に低下したことを示す。Ｌ－グルタミンの完全な枯渇は、注入終了時の投与直後にのみ観察された。第１クールの治療期間全体にわたる他の時点で、グルタミンレベルは中程度の影響しか受けなかった。

ＪＺＰ－４５８の臨床薬理はＰＰＫ解析によって特徴付けされている。健常な参加者における試験ＪＺＰ４５８－１０１からのデータのＰＰＫ解析は、中枢的第２／３相試験における開始用量及び投与スケジュールの選択に役立った。第２／３相試験ＪＺＰ４５８－２０１において、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者からまばらなＳＡＡ試料を採取した。試験ＪＺＰ４５８－２０１（パートＡ：コホート１ａ［Ｎ＝３３、ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与された２５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ４５８］、コホート１ｂ［Ｎ＝８３、ＭＷＦスケジュールでＩＭ投与された３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ４５８］、及びコホート１ｃ［Ｎ＝５１、ＩＭ投与された２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ４５８］。パートＢ：Ｎ＝６１、ＩＶ投与された２５［ＭＷ］／５０［Ｆ］ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ４５８）における２２８人のＡＬＬ／ＬＢＬ参加者からのデータ（２０２１年７月１９日時点）による母集団ＰＫ及びＥ－Ｒ解析を、ＰＰＫパラメータの推定及びＪＺＰ－４５８の最適な有効用量の確立のために行った。

吸収：ＪＺＰ－４５８はＩＭ投与後に緩徐に吸収される。試験ＪＺＰ４５８－２０１のコホート１ａ及び１ｂ（Ｎ＝８５）からのデータを使用したＰＰＫ解析に基づき、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者においてＪＺＰ－４５８の６回目投与後のＪＺＰ－４５８の個々の予測Ｔｍａｘの中央値（範囲）は、１３．１（５．８５～２０．２）時間である。

分布：試験ＪＺＰ４５８－２０１のコホート１ａ及び１ｂにおける８５人のＡＬＬ／ＬＢＬ参加者からのデータのＰＰＫ解析に基づき、４０ｋｇ患者におけるＪＺＰ－４５８のＶ／Ｆの母集団推定値は、３．３５（標準誤差：０．４６）Ｌである。

代謝：ＪＺＰ－４５８はタンパク質分解によって代謝され得る酵素である。

消失：ＪＺＰ－４５８ＰＫは、ＪＺＰ－４５８ＣＬ／Ｆ及びＶ／Ｆに対する非比例的共変量として体重が含まれる、線形消失及び混合次数連続吸収過程を伴う１コンパートメントＩＭモデルによって、記述される。第１クールの初回投与のシミュレーション後の、ＪＺＰ－４５８の個々の予測ｔ１／２平均値（ＳＤ）は、１６．１（１．３８）時間である。試験ＪＺＰ４５８－２０１のコホート１ａ及び１ｂにおける８５人のＡＬＬ／ＬＢＬ参加者からのデータのＰＰＫ解析に基づき、４０ｋｇ患者におけるＪＺＰ－４５８のＣＬ／Ｆの母集団推定値は、０．４１６（標準誤差：０．０１９３）Ｌ／ｈである。

用量比例性：ＪＺＰ－４５８の用量比例性を、健常被験者の第１相単回投与試験ＪＺＰ４５８－１０１及びＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者の第２／３相試験ＪＺＰ４５８－２０１で評価した。試験ＪＺＰ４５８－１０１において、ＪＺＰ－４５８への曝露（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ）はＳＡＡに基づいて用量の増加と共に増加し、ＪＺＰ－４５８ＳＡＡへの曝露は、ＩＭ投与の１２．５～２５ｍｇ／ｍ^２の用量範囲内でほぼ用量比例性であった。試験ＪＺＰ４５８－２０１において、ＰＰＫ解析に基づき、ＪＺＰ－４５８の初回及び６回目投与後のモデル予測Ｃ_ｍａｘ（それぞれＣ_{ｍａｘ，１}及びＣ_{ｍａｘ，６}）及びＡＵＣ値を図３８に示す。２５～３７．５ｍｇ／ｍ^２の１．５倍の用量増加によって、Ｃ_ｍａｘ３７．５ｍｇ／ｍ^２／Ｃ_ｍａｘ２５ｍｇ／ｍ^２の比率は、Ｃ_{ｍａｘ，１}及びＣ_{ｍａｘ，６}平均値でそれぞれ１．６３及び１．６２となり、ＡＵＣ３７．５ｍｇ／ｍ^２／ＡＵＣ２５ｍｇ／ｍ^２の比率は１．６９となった。これらの結果は、ＪＺＰ－４５８ＳＡＡへの曝露の増加（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ）がＩＭ投与の２５～３７．５ｍｇ／ｍ^２の用量範囲内でほぼ用量比例性であったことを示唆する。

蓄積：ＪＺＰ－４５８の蓄積を、ＡＬＬ／ＬＢＬを有する参加者の第２／３相試験ＪＺＰ４５８－２０１で評価した。試験ＪＺＰ４５８－２０１において、投与頻度及びｔ_１／２（１６．１時間）に基づき、投与間隔を４８時間と仮定すると、ＩＭＪＺＰ－４５８の蓄積比は１．１５となる。試験ＪＺＰ４５８－２０１におけるＪＺＰ－４５８の初回及び６回目投与後のＰＰＫモデル予測Ｃ_ｍａｘ値を、図３９に示す。蓄積比（Ｃ_{ｍａｘ，６}／Ｃ_{ｍａｘ，１}として算出）は２５及び３７．５ｍｇ／ｍ^２のＪＺＰ－４５８でそれぞれ１．１８及び１．１７であり、これは蓄積が非常に少ないことを示唆した。

ＪＺＰ－４５８の免疫原性の総合要約はモジュール５．３．５．３／ＩＳＩに記載されている。全体として、他のアスパラギナーゼと比較して、ＪＺＰ－４５８には追加のリスクは予想されない。

臨床試験ＪＺＰ４５８－２０１において多段階アプローチを、ＪＺＰ－４５８の免疫原性を評価するためにＡＤＡ及びＮＡｂの測定に用いた（図４０）。第１段階で、ＪＺＰ－４５８に結合するＡＤＡを検出するために血清試料をスクリーニングする。結合の特異性を確認するために、スクリーニングアッセイからの潜在的にＡＤＡ陽性の試料を含む血清試料を再試験する。ＡＤＡ反応の大きさを測定するために、抗体が確認された試料をさらに滴定する。また、ＪＺＰ４５８の活性を中和するために、抗体が確認された試料をさらに評価する。

試験ＪＺＰ４５８－２０１において、免疫原性試料は全ての参加者から、各クールの初回投与前、第１クールの６回目投与前、及び試験訪問の終わり（最後のクールにおける最後の投与後の３０日間［±３］）に、採取される。参加者がアレルギー反応を発現する場合、ＡＤＡを試験するための追加の試料を取得してもよい。参加者のＮＳＡＡレベルが治療量以下（＜０．１ＩＵ／ｍＬ）であると判断された場合、利用可能な血液試料があればＡＤＡ試験を行ってもよい。試験終了前に取得された試料からＡＤＡ陽性を示す参加者について、参加者の最後のＪＺＰ－４５８クールの最終投与から最長約６ヶ月後に経過観察するためにＡＤＡ試料を採取した。これらのＡＤＡ陽性参加者について、経過観察用のＡＤＡ試料は採取する最後の試料となる。全ての免疫原性試料は図４０に記載のようにバリデートされた方法を使用して評価される。

パートＡ（ＩＭ）では、ＩＭ２５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、ＩＭ３７．５ｍｇ／ｍ^２ＭＷＦ、及びＩＭ２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２投与コホートの参加者から、それぞれ、合計２１７、５００及び２４５個の試料を採取した。データカットオフ日時点で、ＡＤＡデータは、コホート１ａの参加者３３人からの５．０（１～１４）クール、コホート１ｂの参加者８３人からの４．０（１～１５）クール、及びコホート１ｃの参加者５１人からの４．０（１～１１）クールの中央値（範囲）から入手できた。パートＢ（ＩＶ）では、２５（ＭＷ）／５０（Ｆ）ｍｇ／ｍ^２のＩＶ投与後に参加者から合計１７４個の試料を採取した。データカットオフ日時点で、ＡＤＡデータは、１．０（１～１０）クールの中央値（範囲）から入手できた。ＡＤＡ採取を伴うクールの最大数を図４１に分類的にまとめる。

パートＡ（ＩＭ）：データカットオフ日時点で、ＪＺＰ４５８をＩＭ投与された参加者の１６７人中８３人（４９．７％）はＪＺＰ４５８に対してＡＤＡ陽性であると確認された。これら８３人のＡＤＡ陽性参加者のうち、１１人の参加者は、試験中に治療関連過敏反応を発現し、４人の参加者はＮａｂを持っていた。１６７人の参加者のうち合計８４人（５０．３％）はＪＺＰ－４５８に対してＡＤＡ陽性であり、この８４人の参加者中５人は試験中に治療関連過敏反応を発現した。

前記８３人のＡＤＡ陽性参加者のうち、７人の参加者は初回投与前にＡＤＡ陽性であったが、いずれも試験中に少なくとも１回ＡＤＡ陰性になった。これらの参加者において初回投与前のＡＤＡ陽性状態は第１クールのＳＡＡレベルに影響を及ぼさなかった。参加者７人の全員は第１クール中に全ての評価可能な４８及び７２時点で０．１ＩＵ／ｍＬ以上のＳＡＡレベルを示した。７６人の参加者はＪＺＰ－４５８の投与後にＡＤＡ陽性を発現した。その後、これら７６人の参加者中５１人は試験中に少なくとも１回ＡＤＡ陰性になった。

抗薬物抗体状態はＰＰＫ解析中のＪＺＰ４５８のＰＫの潜在的な共変量として評価され、重要な共変量ではないと判定された。観察されたデータに基づき、図４２Ａ及び図４２Ｂでは、第１クールの一致する時点でより低いＳＡＡレベル（＜０．１ＩＵ／ｍＬ）を示す４人のＡＤＡ陽性参加者が観察された。これら４人の参加者のＳＡＡとＳＡＣデータは高度に相関しており、これは観察された低いＳＡＡが低いＳＡＣによるものである可能性があることを示唆する。第１クールの一致する時点で高いＳＡＡレベル（０．１ＩＵ／ｍＬ以上）を示す１７人のＡＤＡ陽性参加者が観察され、これは低いＳＡＡがＡＤＡ陽性によるものではない可能性があることを示唆する。

パートＢ（ＩＶ）：データカットオフ日時点で、ＪＺＰ４５８をＩＶ投与された参加者の解析では、６１人の参加者中２０人（３２．８％）がＪＺＰ－４５８に対してＡＤＡ陽性であると確認された。これら２０人のＡＤＡ陽性参加者のうち、９人の参加者は試験中に治療関連過敏反応を発現した。合計４１人の参加者はＪＺＰ－４５８に対してＡＤＡ陰性であり、これらの参加者のうち５人は試験中に治療関連過敏反応を発現した。観察されたデータに基づき、第１クールの一致する時点でより低いＳＡＡレベル（＜０．１ＩＵ／ｍＬ）を示す３人のＡＤＡ陽性参加者が観察された（図４２Ａ及び図４２Ｂ）。これら３人の参加者のＳＡＡとＳＡＣデータは高度に相関しており、これは観察された低いＳＡＡが低いＳＡＣによるものである可能性があることを示唆する。

免疫原性結果の概要は図４３を参照されたい。

本発明の実施形態及び用途が図及び例を挙げて若干詳細に記載されたが、本明細書に含まれる発明概念を逸脱しない範囲で多数の更なる変更が可能であることが当業者には明らかであろう。本明細書において引用された全ての参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。

Claims

がんの治療を必要とするヒト対象のがんを治療する方法であって、
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとして前記ヒト対象に投与することを含み、ここで、
前記時間順用量セットが、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、
前記第１用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、
前記第２用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、
前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記ヒト対象に対する前記第１用量と前記第２用量との間の投与間隔が３日間であり、
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記ヒト対象に対する前記第１用量と前記第２用量との間の投与間隔が２日間であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が３日間行われず、
前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が２日間行われず、
ここで、約２５ｍｇ／ｍ^２での用量が血管内投与され、かつ
約５０ｍｇ／ｍ^２での用量が筋肉内投与される、
前記方法。
前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第２用量後の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記ヒト対象に対する前記第２用量と前記第３用量との間の投与間隔が２日間である、
請求項１に記載の方法。
前記第１用量が金曜日に投与され、前記第２用量が月曜日に投与される、請求項２に記載の方法。
前記第１用量が金曜日に投与され、前記第２用量が月曜日に投与され、前記第３用量が水曜日に投与される、請求項２に記載の方法。
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第２用量後の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記ヒト対象に対する前記第２用量と前記第３用量との間の投与間隔が３日間である、
請求項１に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与される、請求項５に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与され、前記第３用量が月曜日に投与される、請求項５に記載の方法。
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第１用量前の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第３用量が前記第１用量の２日前に前記ヒト対象に投与される、
請求項１に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与される、請求項８に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与され、前記第３用量が月曜日に投与される、請求項８に記載の方法。
第３用量をさらに含み、前記第１用量が月曜日に投与され、前記第２用量が水曜日に投与され、前記第３用量が金曜日に投与される、請求項１に記載の方法。
前記第１用量が２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量が２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量が５０ｍｇ／ｍ^２である、請求項１１に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスを前記ヒト対象に実施することをさらに含み、前記時間順用量セットの組換えＬ－アスパラギナーゼの各インスタンスが、前記時間順用量セットの複数のインスタンスにおける前記時間順用量セットの１つ前のインスタンスの完了をもって前記対象に実施される、請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスが２～１００の間である、請求項１３に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスが２～１５の間である、請求項１３に記載の方法。
前記大腸菌由来アスパラギナーゼが天然のものである、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
前記大腸菌由来アスパラギナーゼが長時間作用型である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼがｐｅｇアスパラギナーゼである、請求項１７に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１を含む、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が前記大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した、請求項１から２０のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が成人である、請求項１から２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が小児である、請求項１から２１のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが６％未満の凝集を示す、請求項１から２３のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが１％未満の凝集を示す、請求項１から２３のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが凍結乾燥されていない、請求項１から２５のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼがシュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）において組換え的に産生される、請求項１から２６のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）が、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である、請求項１から２７のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される、請求項１から２８のいずれか１項に記載の方法。
がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、
長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、前記ヒト対象にＬ－アスパラギナーゼを一連の６用量投与することを含み、ここで、
前記６用量のうちの４用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記６用量のうちの２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
約５０ｍｇ／ｍ^２である２用量間の投与間隔が７日間であり、
前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が２日間であり、
前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が３日間であり、
ここで、約２５ｍｇ／ｍ^２での用量が血管内投与され、
約５０ｍｇ／ｍ^２での用量が筋肉内投与され、かつ
前記Ｌ－アスパラギナーゼが長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼではない、
前記方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量が、別々に、前記一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される、請求項３０に記載の方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼがｐｅｇアスパラギナーゼである、請求項３１に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１を含む、請求項３０から３２のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項３０から３２のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が前記大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した、請求項３０から３４のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が大腸菌由来アスパラギナーゼ療法を終了している、請求項３０から３５のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が成人である、請求項３０から３６のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が小児である、請求項３０から３６のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが６％未満の凝集を示す、請求項３０から３８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが１％未満の凝集を示す、請求項３０から３８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが凍結乾燥されていない、請求項３０から４０のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼがシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される、請求項３０から４１のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）が、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である、３０から４２のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される、請求項３０から４２のいずれか１項に記載の方法。
前記がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、請求項１から４４のいずれか１項に記載の方法。
前記がんが結腸直腸がん（ＣＲＣ）である、請求項１から４４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＲＣがＷｎｔ－陰性ＣＲＣ又はＷｎｔ－変異ＣＲＣである、請求項４６に記載の方法。
前記がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１から４４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＡＭＬがＲ／ＲＡＭＬである、請求項４８に記載の方法。
前記がんがＤＬＢＣＬである、請求項１から４９のいずれか１項に記載の方法。
がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、
長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、前記ヒト対象に組換えＬ－アスパラギナーゼを一連の７用量血管内投与することを含み、ここで、
前記一連の用量の各用量が、約２５ｍｇ／ｍ^２の前記組換えＬ－アスパラギナーゼの量であり、かつ
前記一連の用量の各用量間の投与間隔が２日間である、
前記方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量が、別々に、前記一連の７用量の組換えＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される、請求項５１に記載の方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼがｐｅｇアスパラギナーゼである、請求項５２に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１を含む、請求項５１から５３のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項５１から５３のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が前記大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した、請求項５１から５５のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が成人患者である、請求項５１から５６のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が小児患者である、請求項５１から５６のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが、前記Ｌ－アスパラギナーゼの６％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される、請求項５１から５８のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが、前記Ｌ－アスパラギナーゼの３％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される、請求項５１から５８のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが、前記Ｌ－アスパラギナーゼの１％未満の凝集を示す組成物の状態で投与される、請求項５１から５８のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが凍結乾燥されていない、請求項５１から６１のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼがシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される、請求項５１から６２のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）が、前記組換えＬ－アスパラギナーゼによる投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である、５１から６３のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えＬ－アスパラギナーゼが多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される、請求項５１から６４のいずれか１項に記載の方法。
がん治療を必要とするヒト対象のがん治療を切り替える方法であって、
長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量の代わりに、前記ヒト対象にＬ－アスパラギナーゼを一連の６用量血管内投与することを含み、ここで、
前記６用量のうちの４用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記６用量のうちの２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
約５０ｍｇ／ｍ^２である２用量間の投与間隔が７日間であり、
前記一連の用量のうち約２５ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が２日間であり、
前記一連の用量のうち約５０ｍｇ／ｍ^２である用量と、次の用量との間の投与間隔が３日間であり、
ここで、前記Ｌ－アスパラギナーゼが長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼではない、
前記方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの複数用量における前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼの各用量が、別々に、前記一連の６用量のＬ－アスパラギナーゼのインスタンスと置換される、請求項６６に記載の方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼがｐｅｇアスパラギナーゼである、請求項６７に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１を含む、請求項６６から６８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項６６から６８のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が前記大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した、請求項６６から７０のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が大腸菌由来アスパラギナーゼ療法を終了している、請求項６６から７１のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が成人である、請求項６６から７２のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が小児である、請求項６６から７２のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが６％未満の凝集を示す、請求項６６から７４のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが１％未満の凝集を示す、請求項６６から７４のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが凍結乾燥されていない、請求項６６から７６のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼがシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される、請求項６６から７７のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）が、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である、６６から７８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される、請求項６６から７９のいずれか１項に記載の方法。
がんの治療を必要とするヒト対象のがんを治療する方法であって、
大腸菌由来アスパラギナーゼ以外のＬ－アスパラギナーゼを時間順用量セットとして前記ヒト対象に血管内投与することを含み、ここで、
前記時間順用量セットが、第１用量及びそれに続く第２用量を含み、
前記第１用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの一方であり、
前記第２用量が、Ｌ－アスパラギナーゼの（ｉ）約５０ｍｇ／ｍ^２及び（ｉｉ）約２５ｍｇ／ｍ^２のうちの他方であり、
前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記ヒト対象に対する前記第１用量と前記第２用量との間の投与間隔が３日間であり、
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記ヒト対象に対する前記第１用量と前記第２用量との間の投与間隔が２日間であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が３日間行われず、かつ
前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２である場合に、前記対象へのＬ－アスパラギナーゼの更なる投与が２日間行われない、
前記方法。
前記第１用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第２用量後の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記ヒト対象に対する前記第２用量と前記第３用量との間の投与間隔が２日間である、
請求項８１に記載の方法。
前記第１用量が金曜日に投与され、前記第２用量が月曜日に投与される、請求項８２に記載の方法。
前記第１用量が金曜日に投与され、前記第２用量が月曜日に投与され、前記第３用量が水曜日に投与される、請求項８２に記載の方法。
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第２用量後の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記ヒト対象に対する前記第２用量と前記第３用量との間の投与間隔が３日間である、請求項８１に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与される、請求項８５に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与され、前記第３用量が月曜日に投与される、請求項８５に記載の方法。
前記第１用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第２用量が約５０ｍｇ／ｍ^２であり、
前記時間順用量セットが前記第１用量前の第３用量をさらに含み、
前記第３用量が約２５ｍｇ／ｍ^２であり、
前記第３用量が前記第１用量の２日前に前記ヒト対象に投与される、
請求項８１に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与される、請求項８８に記載の方法。
前記第１用量が水曜日に投与され、前記第２用量が金曜日に投与され、前記第３用量が月曜日に投与される、請求項８８に記載の方法。
第３用量をさらに含み、前記第１用量が月曜日に投与され、前記第２用量が水曜日に投与され、前記第３用量が金曜日に投与される、請求項８１に記載の方法。
前記第１用量が２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第２用量が２５ｍｇ／ｍ^２であり、前記第３用量が５０ｍｇ／ｍ^２である、請求項９１に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスを前記ヒト対象に血管内に実施することをさらに含み、前記時間順用量セットの組換えＬ－アスパラギナーゼの各インスタンスが、前記時間順用量セットの複数のインスタンスにおける前記時間順用量セットの１つ前のインスタンスの完了をもって前記対象に実施される、請求項８１から９２のいずれか１項に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスが２～１００の間である、請求項９３に記載の方法。
前記時間順用量セットのＬ－アスパラギナーゼの複数のインスタンスが２～１５の間である、請求項９３に記載の方法。
前記大腸菌由来アスパラギナーゼが天然のものである、請求項８１から９５のいずれか１項に記載の方法。
前記大腸菌由来アスパラギナーゼが長時間作用型である、請求項８１から９５のいずれか１項に記載の方法。
前記長時間作用型大腸菌由来アスパラギナーゼがｐｅｇアスパラギナーゼである、請求項９７に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１を含む、請求項８１から９８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが四量体であり、前記四量体の各単量体が配列番号１と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項８１から９８のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が前記大腸菌由来アスパラギナーゼに対して過敏性を示した、請求項８１から１００のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が成人である、請求項８１から１０１のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象が小児である、請求項８１から１０１のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが６％未満の凝集を示す、請求項８１から１０３のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが１％未満の凝集を示す、請求項８１から１０３のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが凍結乾燥されていない、請求項８１から１０５のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼがシュードモナス・フルオレッセンスにおいて組換え的に産生される、請求項８１から１０６のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト対象からの血清試料から測定する場合のアッセイでの血清アスパラギナーゼ活性最低値（ＮＳＡＡ）が、前記Ｌ－アスパラギナーゼによる治療後の投与後に０．１ＩＵ／ｍＬ以上である、請求項８１から１０７のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｌ－アスパラギナーゼが多剤併用化学療法レジメンの一部として１つ又は複数の他の化学療法薬と共投与される、請求項８１から１０８のいずれか１項に記載の方法。
前記がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、請求項５１から１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記がんが結腸直腸がん（ＣＲＣ）である、請求項５１から１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＲＣがＷｎｔ－陰性ＣＲＣ又はＷｎｔ－変異ＣＲＣである、請求項１１１に記載の方法。
前記がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項５１から１０９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＡＭＬがＲ／ＲＡＭＬである、請求項１１３に記載の方法。
前記がんがＤＬＢＣＬである、請求項５１から１０９のいずれか１項に記載の方法。