JP2024511999A - ヒスチジン酸銅組成物及びその使用 - Google Patents

Abstract

メンケス病は、必須の哺乳類銅トランスポーター遺伝子、ＡＴＰ７Ａにおける変異によって引き起こされる脳銅代謝のＸ連鎖劣性障害であり、米国でおおよそ２００～４００人に影響を及ぼしている。銅補充療法が、メンケス病を治療するために使用されている。本開示は、メンケス病のその治療を示す。本開示は、メンケス病患者をヒスチジン酸銅で治療すると、患者の生存期間が延長することを示している。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１８日に出願された米国通し番号第６３／１６２，９７５号の米国連邦法典第３５編第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張し、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本発明は、一般的に、血清銅レベルを増加させる方法に関し、より具体的には、ヒスチジン酸銅の投与による対象におけるメンケス病又は銅欠乏症の治療に関する。

背景情報
メンケス病は、必須の哺乳類銅トランスポーター遺伝子、ＡＴＰ７Ａの変異によって引き起こされる脳銅代謝のＸ連鎖劣性障害であり、米国でおおよそ２００～４００人に影響を及ぼしている。推定発生率は、生児１０万人に１人である。治療を受けていない罹患者は、発作、筋緊張低下、成長障害、及び通常６～８週齢で始まる神経発達遅延などの重大な神経学的症状に苦しんでいる。未治療の場合、３歳までに死亡するのが障害の通常の転帰である。

過去２５年間にわたり、銅輸送ＡＴＰａｓｅ、ＡＴＰ７Ａの多様な変異によって引き起こされる銅輸送のＸ連鎖劣性障害であるメンケス病の暗い自然史が間近に観察されてきた。出生時及び生後２ヶ月間健康に見える乳児は、初期の発達マイルストーン（笑顔、頭を持ち上げる、目で追う）を失い始め、発作を発症し、通常３歳までの夭逝につながる避けられない身体的な衰えが始まる。

この状態の臨床的及び病理学的特徴は、補因子として銅を通常必要とする酵素の欠乏を反映している。これらには、ドーパミンβ－ヒドロキシラーゼ（ＤＢＨ）、シトクロムｃオキシダーゼ（ＣＣＯ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、リシルオキシダーゼ（ＬＯ）、及びチロシナーゼが含まれる。影響を受けた乳児は、通常、出生時に健康に見え、３～４ヶ月間正常に進行するが、その後の神経発達は停止し、初期のマイルストーン（笑顔、視覚追跡、頭部制御、寝返り）の喪失が一般的である。大脳及び小脳の萎縮、髄鞘形成異常が起こり、しばしば発作を伴う。追加の臨床的特徴としては、成長障害、及び普通ではない結合組織異常（ＬＯ欠乏症に起因する）：皮膚及び関節の弛緩、尿路膀胱憩室、漏斗胸、全身血管蛇行、及び複数の肋骨骨折が含まれる。皮膚及び髪の色素沈着の減少は、チロシナーゼ欠乏症に関連して、しばしば存在する。加えて、症状を呈する罹患した乳児の髪の毛は、スチールウールのような質感を有し、個々の毛軸は、光学顕微鏡で検査すると、捻転毛（１８０°ねじれ）を示す。この後者の特徴の基礎は不明であり、ケラチン架橋に必要なまだ記載されていない銅酵素が関連している可能性がある。

メンケス病の生化学的現象としては、腸の吸収障害による血漿中の銅の低濃度、及び肝臓及び脳の銅の低濃度が挙げられる。しかし、特定の他の組織（十二指腸粘膜、腎臓、脾臓、膵臓、骨格筋、胎盤）は、この障害で銅を蓄積する傾向がある。銅の蓄積表現型は、培養された線維芽細胞及びリンパ芽細胞においても顕著であり、ここで、放射性標識された銅の過剰な保持は、パルスチェイス実験において実証可能である。この生化学的及び細胞的表現型は、銅の排出における主要な欠陥を示し、トランス・ゴルジ網及び形質膜の両方へのメンケスタンパク質の細胞内局在化に関する証拠と一致する。トランス・ゴルジ局在化は、メンケス病患者における銅酵素欠損のある特定の説明に役立ち、例えば、ＤＢＨ、ＬＯ、及びチロシナーゼは、小胞体において合成され、トランス・ゴルジ分泌経路を介して処理される。アポ酵素による銅の取り込みは、この処理中に起こる可能性が高い。正常細胞の銅装填後のＡＴＰ７Ａの形質膜への再局在化は、銅の脱出が通常この遺伝子産物によってどのように媒介されるかを示している。より最近のデータは、ＡＴＰ７Ａが、通常、脳内のＮ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体活性化に応答し、応答の障害がメンケス病の神経病理に寄与する可能性が高いことを示す。

メンケス病の治療戦略を構成する際には、いくつかの問題に対処する必要がある：（ａ）回復不能な神経変性が発生する前に、影響を受けた乳児を特定し、治療を非常に早期に開始する必要がある、（ｂ）銅の腸内吸収のブロックをバイパスする必要がある、（ｃ）循環銅を脳に送達する必要がある、（ｄ）銅は、それを補因子として必要とする細胞内の酵素に利用可能でなければならない。血漿カテコール濃度が、そうでなければ無症状の新生児におけるメンケス病の信頼できる診断マーカーとなることが最近認識され、早期発見に大いに役立っており、消化管レベルでの主要な輸送ブロックは、銅の注射投与によって克服することができる。しかしながら、血液脳関門はより困難な障害を提起し、脳内の銅酵素活性の回復を伴う脳への銅の送達は、依然として重要な障害である。メンケス同族体の発現は、血液脳関門に（脳毛細血管内皮細胞とともに）貢献している細胞である、げっ歯類のアストロサイトで証明されているので、脳内への銅の輸送は通常メンケス・トランスポーターを利用していると思われる。

本発明は、ヒスチジン酸銅を用いるメンケス病の対象の治療が対象の生存を増加させるという独創性に富んだ発見に基づいている。具体的には、ヒスチジン酸銅による、生後４週間以内の対象におけるメンケス病又は他の銅欠乏症の診断及び治療（「早期治療」）、又はその後治療（「後期治療」）は、対象の生存率を増加する。ヒスチジン酸銅は、銅の恒常性を回復させる薬学的療法であり、メンケス病患者又は銅欠乏症患者の胃腸管を介する銅吸収の欠陥をバイパスするために、皮下（ＳＣ）に注射することができる。

一実施形態において、本発明は、約ｚの用量でヒスチジン酸銅を対象に投与することによって、例えば、メンケス病を有する対象において、生存率を少なくとも約５０％増加させる方法を提供する。一態様において、対象は、初回投与時に４週齢以下である。一態様において、対象は、４週齢以下、１歳未満、又は１歳を超える。別の態様において、投与は１日１回又は２回である。更なる態様において、ヒスチジン酸銅は、約１４５０で、１日１回又は２回投与される。更なる態様において、対象は、ＡＴＰ７Ａ遺伝子に変異を有する。様々な態様において、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変異は、ナンセンスバリアント（ストップゲインド）、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、又はそれらの組み合わせである。一態様において、生存率は、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％増加する。追加の態様において、生存期間の増加は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９ １０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８年又はそれよりも長くなる。

追加の実施形態において、本発明は、対象に約１０００～８９００μｇ／日の用量でヒスチジン酸銅を投与することによって、対象における血清銅レベルを増加させる方法を提供し、対象は、初回投与時に４週齢以下であり、それによって血清銅レベルを増加させる。一態様において、対象は、４週齢以下、１歳未満、又は１歳を超える。別の態様において、投与は１日１回又は２回である。更なる態様において、ヒスチジン酸銅は、１日１回投与の場合には約１４５０μｇ／日、１日２回投与の場合には２９００μｇ／日で投与される。更なる態様において、投与は、皮下注射による。一態様において、対象は、メンケス疾患を有する。更なる態様において、対象は、ＡＴＰ７Ａ遺伝子に変異を有する。様々な態様において、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変異は、ナンセンスバリアント（ストップゲインド（ｓｔｏｐ ｇａｉｎｅｄ））、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、又はそれらの組み合わせである。ある特定の態様において、対象の血清銅、血清セルロプラスミン、血清重炭酸塩、血清クレアチニン及び／又は尿β－２ミクログロブリンレベルをモニターする。様々な態様において、ヒスチジン酸銅の投与前の対象の血清銅レベルは、約７５ｕｇ／ｄｌ未満である。一態様において、ヒスチジン酸銅の投与後、患者の血清銅レベルは、少なくとも約８５μｇ／ｄｌとなる。

更なる実施形態において、本発明は、凍結乾燥ヒスチジン酸銅及び薬学的に許容される担体の医薬組成物を提供する。一態様において、薬学的に許容される担体は、生理食塩水である。更なる態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅を生理食塩水で再構成する。更なる態様において、再構成されたヒスチジン酸銅は、約２９００μｇ／ｍｌの濃度を有する。

一実施形態において、本発明は、ヒスチジン酸銅の安定凍結乾燥医薬製剤を提供し、水溶液を凍結乾燥することによって作られる該製剤は、２モルのＬ－ヒスチジン及び１モルの塩化第二銅を含み、かつ水溶液において約７．０～７．５、例えば、７．３５のｐＨに調整され、続いて溶液は凍結乾燥される。一態様において、ヒスチジン酸銅は、水溶液中に約２９００μｇ／ｍＬで存在する。更なる態様において、製剤は、２カ月を超えて、好ましくは少なくとも約１８カ月間安定である。

追加の実施形態において、本発明は、ヒスチジン酸銅の製剤と、薬学的に許容される担体とを含むバイアルを提供し、製剤は水溶液を凍結乾燥することにより作られ、水溶液は２モルのＬ－ヒスチジン及び１モルの塩化第二銅を含み、かつ水溶液において約７．０～７．５のｐＨに調整され、続いて溶液を凍結乾燥される。一態様において、ｐＨは、約７．３５である。一態様において、薬学的に許容される担体は、生理食塩水である。更なる態様において、製剤は、２ｍｌの生理食塩水中で約２９００μｇ／ｍｌの濃度に再構成される。更なる態様において、製剤は、バイアル内に、５００μｇの元素銅／ｍｌの濃度で生理食塩水中に再構成された凍結乾燥ヒスチジン酸銅を含む。ある特定の態様において、バイアルは、凍結乾燥ヒスチジン酸銅を生理食塩水中で再構成し、メンケス病の対象に、対象が１歳になるまで１日２回（１４５０μｇ）、対象が１歳になった後は１日１回、１回の投与当たり０．５ｍｌ（又はｃｃ）の用量で皮下投与するための指示書を更に備える。一態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅は、室温で少なくとも２４時間、又は約２～８℃で少なくとも約７日間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、又は２ヶ月を超えて安定である。ある特定の態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅は、室温で少なくとも２４時間、又は約４℃で安定である。ある特定の態様において、凍結乾燥製剤は、約－１０～－２０℃、２～８℃、又は室温（１５～３０℃）で約１８カ月間安定である。ある特定の態様において、メンケス病を有する対象は、ナンセンスバリアント、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、同義バリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、カノニカルスプライス部位変異、又はそれらの組み合わせから選択されるＡＴＰ７Ａ変異を有する。

別の実施形態において、経皮投与経路を介してヒスチジン酸銅を対象に投与することによって、対象における血清銅レベルを増加させる方法が提供される。例として、ヒスチジン酸銅は、クリーム、ゲル、粉末、ローション、軟膏、リニメント、懸濁液、ミクロエマルション、ナノエマルション、及び／又はリポソーム内に組み込まれる。好ましい態様において、投与経路は、経皮パッチによる。一態様において、経皮パッチは、シクロデキストリンを含む。

いくつかの態様において、経皮パッチは、１種以上の経皮透過性剤を含む。一態様において、経皮的に送達される銅の量は、約１００μｇ～３０００μｇの元素銅に等しい。一態様において、送達される銅の量は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、又は３０００μｇの元素銅から選択される。一態様において、投与量は、１日当たり約１０００～８９００μｇのヒスチジン酸銅、例えば、１日当たり１４５０又は２９００μｇのヒスチジン酸銅である。

別の実施形態では、本発明は、ヒスチジン酸銅と、薬学的に許容される担体とを含む経皮剤形を提供する。一態様において、剤形は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、又は３０００μｇの元素銅を送達するのに十分な濃度で存在するヒスチジン酸銅を含む。一態様において、経皮剤形は、経皮パッチである。一態様において、投与量は、１日当たり約１０００～８９００μｇのヒスチジン酸銅、例えば、１日当たり１４５０又は２９００μｇのヒスチジン酸銅である。

更に別の実施形態において、本発明は、２つのチャンバを有する容器を提供し、この容器の外部に固定された針を通して、混合された成分を対象に注射する前に、粉末医薬品、この例では凍結乾燥させたヒスチジン酸銅と、生理食塩水などの希釈剤とを混合する。容器は、注射器、バイアル、アンプル等であり得る。

別の実施形態において、本開示は、対象における血清ヒスチジン酸銅レベルを増加させる方法を提供し、この方法は、投与後１／２時間～１時間の血清中のヒスチジン酸銅のピーク検出可能レベルで、皮下投与経路を介して対象にヒスチジン酸銅を投与し、それによって対象の血清ヒスチジン酸銅レベルを増加させることを含む。一態様において、対象は、メンケス病等の銅欠乏症を有する。一態様において、ヒスチジン酸銅分布相半減期は、約２～３時間である。一態様において、終末排出相半減期ｔ_１／２は、約３０～１５０時間である。一態様において、終末排出相半減期ｔ_１／２は、約７５時間である。一態様において、対象は、初回投与時に４週齢以下である。一態様において、投与は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、３０００μｇの元素銅、３５００μｇの元素銅、４０００μｇの元素銅、４５００μｇの元素銅、又は５０００μｇの元素銅である。別の態様において、ヒスチジン酸銅の投与は、対象が１歳未満の場合は１日に約１４５０μｇを２回であり、対象が１歳を超える場合は１日に約１４５０μｇを１回である。

健康な成人男性対象（薬物動態集団）において、３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）の［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅を単回皮下ボーラス投与した後の算術平均全血及び血清の総放射能プロファイル並びに血清［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅濃度－時間プロファイル（半対数目盛）を示す。

発明の詳細な説明
本発明は、ヒスチジン酸銅を用いてメンケス病の対象を早期治療することによって対象の生存が増加するという重要な発見に基づいている。一態様において、生後４週間以内のメンケス病患者のヒスチジン酸銅による治療は、全生存期間の中央値の顕著な増加をもたらすが、生後４週間後の治療は、銅欠乏症を有する患者の生存期間の増加ももたらす。

本発明の組成物及び方法が記載される前に、本発明は、記載される特定の組成物、方法、及び実験条件に限定されず、そのような組成物、方法、及び条件は変化し得ることを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲にのみ限定されるため、本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと指示されない限り、複数の参照を含む。したがって、例えば、「方法」への言及は、本明細書に記載されるタイプの１種以上の方法、及び／又はステップを含み、これらは本開示等を読むと当業者に明らかになるであろう。

本明細書に記載されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は均等の任意の方法及び材料は、本発明の実施又は試験で使用され得るが、変更及び変形は、本開示の趣旨及び範囲内に包含されることを理解されたい。ここで、好ましい方法及び材料を説明する。

メンケス病は、Ｘ連鎖劣性遺伝的形質を有する神経変性疾患である。経口投与された銅は腸内に蓄積し、銅を吸収できない。腸内の銅蓄積を引き起こす一次代謝欠損は、ほぼ全ての肝外組織に存在する。血液、肝臓、及び脳は、銅欠乏状態にあり、それは銅の吸収不良に起因する。したがって、一態様において、ヒスチジン酸銅は、静脈内投与又は皮下投与によって投与される。一実施形態において、本発明は、約１４５０～８９００μｇの用量でヒスチジン酸銅を対象に投与することによって、メンケス病を有する対象において生存率を少なくとも約５０％増加させる方法を提供し、対象は、初回投与時に４週齢以下である。一態様において、対象は、４週齢以下、１歳未満、又は１歳を超える。別の態様において、投与は１日１回又は２回である。追加の態様において、ヒスチジン酸銅は、対象が１２ヶ月未満の場合には約１４５０μｇ／１日２回、対象が１歳を超える場合には１４５０μｇ／１日で投与される。更なる態様において、該対象は、ＡＴＰ７Ａ遺伝子に変異を有する。様々な態様において、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変異は、ナンセンスバリアント（例えば、ストップゲインド）、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、又はそれらの組み合わせである。一態様において、生存率は、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％増加する。追加の態様において、生存期間の増加は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８年又はそれよりも長くなる。

メンケス病は、銅の代謝及び／又は輸送に影響を与える遺伝性障害である。この病気を有する患者は、身体的及び／又は精神的に障害がある。メンケス病の発症は、通常、生後２～３ヶ月で起こる。この病気を患って生まれた乳児は、成長障害があり、低体温を経験し、発達が遅れており、発作を経験している。これらの乳幼児には、髪や顔の変化などの特徴的な身体的特徴もある。女性患者は、髪及び肌の色にも変化があり得る。

一態様において、メンケス病の早期診断及び治療は、対象の生存の可能性を増加させる。メンケス病は、通常、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変化についての臨床的特徴、医学的検査、及び遺伝子検査に基づいて診断される。臨床的特徴には、発作などの神経学的症状、異常な口蓋形態、腹壁筋組織の形成不全／低形成、発達退行、膨張、及び乾燥肌が含まれる。有用であり得る他のタイプの試験としては、血液中のカテコールアミン及び銅レベルの分析が挙げられる。一態様において、対象は、出生後少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０，９０日若しくは１００日又はそれ以上後に、メンケス病と診断される。別の態様において、対象は、出生後少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、若しくは２４週又はそれ以後に、メンケス病と診断される。更なる態様において、対象は、少なくとも約０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１８、２４、３０、若しくは３６ヶ月又はそれ以上の年齢で、メンケス病と診断される。

メンケス病の適切な治療には、不可逆的な脳損傷が発生する前に、病気を早期に診断し、治療を開始する必要がある。生後１年は、脳の発達にとって特に重要である。治療の目的は、胃腸管を通る銅の正常な吸収経路をバイパスすることである。その後、銅は、脳細胞に送達され、酵素によって使用するために利用可能でなければならない。追加の態様において、対象は、出生後約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、５０、６０、７０、８０、９０若しくは１００日又はそれ以上後に、ヒスチジン酸銅の初回用量を投与される。更なる態様において、対象は、出生後約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、素敵な週、１０週間、１１週間、１２週間に、ヒスチジン酸銅の初回用量を投与される。更なる態様において、対象は、生後後約０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１８、２４、３０、又は３６ヶ月以上に、ヒスチジン酸銅の初回用量を投与される。一態様において、対象は、ヒスチジン酸銅を、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１０年間以上投与される。更なる態様において、対象は、毎日２用量のヒスチジン酸銅を投与される。ある特定の態様において、対象は、生後１２ヶ月間毎日２用量のヒスチジン酸銅を投与される。更なる態様において、対象は、毎日１回用量のヒスチジン酸銅を投与される。一例として、１歳になる前に、対象は、約１４５０μｇのヒスチジン酸銅を１日に２回、又は１日に約２９００μｇ投与され、対象が約１歳になると、１４５０μｇのヒスチジン酸銅を１日に投与される。

本明細書に記載の医薬組成物中の活性物質であるヒスチジン酸銅は、おおよそ７．０～７．５のｐＨを有する。分子式は、Ｃ_１２Ｈ_１８ＣｕＮ_６Ｏ_４であり、分子量は３７３．８６ｇ／ｍｏｌである。その一方、ヒスチジン酸銅は、胃腸管を通る吸収を回避するために、体内に直接注射することができる。しかしながら、研究は、メンケス病を引き起こす遺伝的異常は、銅置換注射によって単純に修正されないことを示している。本明細書に記載の研究において、１４５０μｇのヒスチジン酸銅は、２５０μｇの元素銅と同等であり、５８００μｇのヒスチジン酸銅は、約１０００μｇの元素銅と同等であり、８８５０μｇのヒスチジン酸銅は、約１５００μｇの元素銅と同等である。

本明細書で使用される場合、「生存」又は「全生存」という用語は交換可能に使用され、メンケス病などの疾患の生年月日、診断日、又は治療開始日のいずれかから、その疾患を患っていると診断された患者が生存している発症期間の長さを指す。臨床検査では、全生存期間を測定することは、新しい治療法がどれほどうまく機能するかを確認する１つの方法である。具体的には、生存の増加は、ヒスチジン酸銅を受けなかったメンケス患者と比較して、ヒスチジン酸銅治療を受けた患者が生存している時間の長さの増加を指す。生存中央値は、コホート内の患者の５０％が死亡し、５０％が生存した後の時間量である。

ある特定の態様において、生存率は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％増加する。追加の態様において、生存率の増加は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又はそれ以上の年である。

用語「の投与」及び／又は「投与すること」は、治療を必要とする対象に治療上有効な量の医薬組成物を提供することを意味すると理解されるべきである。投与経路は、経腸、局所、又は非経口であり得る。そのため、投与経路としては、皮内、皮下、静脈内、腹腔内、動脈内、髄腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、経皮、経気管、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内及び胸骨下内、経口 舌下、口腔、直腸、膣、鼻 眼投与、及び注入、吸入、及び噴霧が挙げられるが、これらに限定されない。一態様において、投与は、皮下投与による。

投与されるヒスチジン酸銅の用量及び頻度は、対象の年齢に依存する。一態様において、対象は、１歳未満であり、ヒスチジン酸銅を１日２回投与する。追加の態様において、対象は１２ヶ月齢未満であり、ヒスチジン酸銅を１日２回投与する。追加の態様において、対象は１歳を超えており、ヒスチジン酸銅を１日１回投与する。更なる態様において、対象は１２ヶ月齢を超えており、ヒスチジン酸銅を１日１回投与する。ある特定の態様において、患者は、１４５０～８９００μｇのヒスチジン酸銅を投与される。特定の態様において、対象は、１４５０μｇのヒスチジン酸銅を毎日投与される。別の態様において、対象は、５８００μｇのヒスチジン酸銅を毎日投与される。更なる態様において、対象は、８８５０μｇのヒスチジン酸銅を毎日投与される。いくつかの態様において、対象は、２５０μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、又は１５００μｇの元素銅に相当する量のヒスチジン酸銅を毎日投与される。

経皮又は経粘膜薬物送達は、いくつかの理由から、薬物送達の魅力的な経路である。胃腸薬物分解及び肝臓初回通過効果が回避される。加えて、経皮及び経粘膜薬物送達は、制御された持続的送達に十分に適している（例えば、Ｅｌｉａｓ，Ｉｎ Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ－Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ－Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｒｏｎａｕｇｈ＆Ｍａｉｂａｃｈ，Ｅｄｓ．，ｐｐ １－１２，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９．）。多くの用途では、薬物の初期濃度が非常に高いため、薬物を投与する従来の方法は最適ではない。経皮送達は、薬物のより均一でより遅い送達速度を可能にすることができる。更に、そのような送達方法は、使いやすく、快適で、便利で、非侵襲的であるため、患者の薬剤服用順守が奨励される。

薬物の経皮輸送を増強するいくつかの方法が提案されている。例えば、化学エンハンサー（Ｂｕｒｎｅｔｔｅ，Ｒ．Ｒ．Ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅｓ；Ｈａｄｇｒａｆｔ Ｊ．，Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ：１９８９；ｐｐ．２４７－２８８）、イオン導入などが使用されている。

通常、イオン導入は、薬物が輸送される場所に、皮膚と接触する、イオン性薬物溶液を含む電極を配置することによって、実施される。第２の電極は、第１の電極の近くの皮膚上に配置され、電圧は、電流が皮膚を通過するように印加され、それによって電極間の電気回路を完成させる。電流が流れるにつれて、イオン性薬物分子は、第２の電極の影響下で、皮膚を通じて移動する。電極設計の１種の一般的な種類は、薬物溶液が導入される区画又は袋と関連する導電性要素の使用に関連する。袋の１方の壁は、通常、透過性バリアを含み、これは、溶液を収容するのに役立つが、薬物イオンがそこを通過することは可能にする。このような電極の例は、とりわけ、米国特許第４，２５０，８７８号、同第４，４１９，０９２号、及び同第４，４７７，９７１号に見ることができる。

電極設計の第２の種類は、袋を使用することなく、イオン化された薬物を含有するためのゲル材料に関連する導電性要素の使用に関連する。このような生体電極の例は、米国特許第４，３８３，５２９号、同第４，４７４，５７０号、及び同第４，７４７，８１９号に見出される。通常、これらのゲル型電極は、製造時にイオン化された薬物をゲルに組み込む。

電極設計の第３のタイプは、一般に、水和性要素に関連する導電性要素を利用する。水和性要素は、通常、架橋ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）などの乾燥架橋ヒドロゲルのシートの積層体から形成される。Ａｌｚａに割り当てられた米国特許第６，１６９，９２０号及び同第６，３１７，６２９号は、イオン導入薬物送達デバイスを開示している。Ｉｏｍｅｄに割り当てられた米国特許第５，０８７，２４２号、同第５，３７４，２４１号、同第５，７３０，７１６号、同第６，７３１，９７７号は、薬剤のイオン導入送達のための電極及びデバイスを開示する。Ｓａｍｓｕｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏ－Ｍｅｃｈａｎｉｃｓ Ｃｏ．に割り当てられた米国特許第５，６８１，５８０号は、インスリンのイオン導入経皮投薬のためのパッチ型デバイスを開示している。異なる種類の経皮送達デバイスが、Ａｖｒａｈａｍｉに対する米国特許第６，１４８，２３２号に開示されている。デバイスは、対象の皮膚上のそれぞれの点に適用される複数の電極と、電極のうちの２個以上の間に電気エネルギーを印加して、主にそれぞれの電極の下で角質層の焼灼を引き起こし、マイクロチャネルを生成する電源とを含む。電極の間隔及び隣接する電極間の皮膚の電気抵抗をモニターすることを含む、角質層への焼灼を制限するための様々な技術が記載されている。Ｓｉｎｔｏｖ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ８９：３１１－３２０，２００３）並びにＡｖｒａｈａｍｉに対する米国特許第６，５９７，９４６号、同第６，６１１，７０６号、同第６，７０８，０６０号、及び同第６，７１１，４３５号は、角質層を焼灼し、マイクロチャネルを生成して、皮膚を通過する物質の経皮通過を容易にするための改善及び追加のデバイスを開示している。このデバイスは、マイクロチャネル生成中に感覚を低減し、角質層の下にある皮膚への損傷を最小限に抑えることを目的としている。

受動的な経皮送達の間、活性剤は、バリアを横切る濃度勾配を使用して（例えば、皮膚を通る手動拡散によって）哺乳動物内に送達される。例えば、高濃度の薬物を含むパッチを患者の皮膚に付着させることができる。電気を使用して、皮膚バリアを通る薬物輸送を容易にすることができる。電気補助具において、薬物輸送を容易にするために、電位（電圧）が膜に印加される。経皮イオン浸透療法では、イオン化された薬物は、適用された電位差勾配によって皮膚に移される。アニオン性薬物は負極（負に帯電した電極）の下で皮膚に送達され、カチオン性薬物は正極（正に帯電した電極）の下で送達される。イオン浸透圧療法は、皮膚へのイオン物質の透過性を高めることができ、より良く制御できる。イオン導入デバイスの最も一般的な設計は、電源（例えば、電池）、電気制御機構、及び２個の別個の導電電極を含む。

本発明によれば、ヒスチジン酸銅の経皮送達は、様々な形態のいずれかで達成され得る。いくつかの実施形態において、ヒスチジン酸銅を含むナノ粒子又は他の組成物は、クリーム、ゲル、粉末、又はローション内に組み込まれ、ヒスチジン酸銅が皮膚に塗布されることによって対象に投与される。いくつかの実施形態では、ヒスチジン酸銅を含む組成物は、軟膏及び／又は塗布剤内に組み込まれ、治療剤が皮膚に塗布されることによって対象に投与される。いくつかの実施形態において、ヒスチジン酸銅を含む組成物は、懸濁液、ミクロエマルション、ナノエマルション、及び／又はリポソーム内に組み込まれ、ヒスチジン酸銅が皮膚に塗布されることによって対象に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、経皮パッチ内に組み込まれ、ヒスチジン酸銅がパッチから対象に投与される。本発明の実施形態は、治療有効量のヒスチジン酸銅を含む組成物の経皮送達のためのパッチも提供する。一実施形態では、本発明は、治療上有効な量のヒスチジン酸銅を含むヒスチジン酸銅の経皮送達のためのパッチを提供し、組成物はシクロデキストリンを更に含む。

ある特定の実施形態において、本発明のパッチは、１種以上の経皮透過性剤を含むヒスチジン酸銅含有組成物を更に含む。したがって、様々な実施形態において、本発明は、ヒスチジン酸銅からの銅を治療有効量含む、本発明の医薬組成物の経皮送達のためのパッチを提供する。更に、これら及び関連する実施形態において、パッチは、様々な医薬組成物のイオン導入経皮送達のために構成され得、電極及び医薬組成物のリザーバを含み得る。いくつかの実施形態において、経皮的に送達される銅の量は、約１００μｇ～３０００μｇの元素銅、例えば、１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、又は３０００μｇの元素銅に等しい。

メンケス病は、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の病原性変異によって引き起こされる。ＡＴＰ７Ａ遺伝子は、体内の銅レベルを調節するために重要な銅輸送タンパク質を作るための指示を提供する。銅は多くの細胞機能に必要であるが、過剰な量で存在すると毒性がある。ＡＴＰ７Ａタンパク質は、肝細胞を除いて全身で見出される。小腸において、このタンパク質は食物からの銅の吸収を制御するのに役立つ。他の細胞において、ＡＴＰ７Ａタンパク質は二重の役割を持ち、２つの細胞部位の間を往復する。このタンパク質は、通常、ゴルジ装置と呼ばれる細胞構造に存在し、ゴルジ装置は酵素を含む新しく生成されたタンパク質を修飾する。ゴルジ装置において、ＡＴＰ７Ａタンパク質は、骨、皮膚、髪、血管、神経系の構造と機能に重要な特定の酵素に銅を供給する。しかしながら、細胞環境中の銅レベルが上昇すると、ＡＴＰ７Ａタンパク質は細胞膜に移動して、細胞から過剰な銅を排出する。

遺伝子変異は、遺伝子を構成するＤＮＡ配列の永続的な変化であり、その配列はほとんどの人に見られるものとは異なる。変異の大きさは様々で、単一のＤＮＡビルディングブロック（塩基対）から複数の遺伝子を含む染色体の大きなセグメントまで、どこにでも影響を及ぼす可能性がある。遺伝子変異の種類の例としては、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、ナンセンス（ストップゲインド）、インフレーム欠失、全欠失、複製、及び染色体転座が挙げられる。

ミスセンス変異又はバリアントは、一塩基の変化により、タンパク質配列中の異なるアミノ酸残基をコードするコドンが生じる点変異である。

イントロン変異又はバリアントは、遺伝子のイントロン領域で生じる変異である。イントロンは、遺伝子の全長の平均で約４０％を占め、これは、ほとんどのランダムに発生する変異がイントロン領域に分類され、タンパク質配列及び機能に影響を与えないことを意味する。

スプライス領域変異又はバリアントは、エクソンとイントロンの境界（スプライス部位）で発生するＤＮＡ配列の遺伝的変化である。この変化によってメッセンジャーＲＮＡのスプライシングが破壊され、エクソンが失われたり、イントロンが組み込まれたりして、タンパク質をコードする配列が変化する。

フレームシフト変異又はバリアントは、ＤＮＡ配列中のヌクレオチドが３で割り切れない数のインデル（挿入又は欠失）によって引き起こされる遺伝子変異である。コドンによる遺伝子発現がトリプレットである性質のため、挿入又は欠失は、リーディングフレーム（コドンのグループ化）を変更することができ、元のものとは完全に異なる翻訳をもたらす。配列の欠失又は挿入が早期に起こるほど、タンパク質はより変化する。フレームシフト変異は、一般に、変異後にコドンの読み取りが異なるアミノ酸をコードするようになる。フレームシフト変異はまた、配列で出会う最初の終止コドン（「ＵＡＡ」、「ＵＧＡ」又は「ＵＡＧ」）を変化させる。作製されるポリペプチドは、異常に短い、又は異常に長い場合があり、おそらく機能しないであろう。

５’ＵＴＲ変異又はバリアントは、変異を指す５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）（リーダー配列又はリーダーＲＮＡとしても知られる）は、開始コドンから直接上流にあるｍＲＮＡの領域である。この領域は、ウイルス、原核生物、及び真核生物における異なるメカニズムによって、転写物の翻訳の制御のために重要である。５’ＵＴＲは、代謝に関連するタンパク質と相互作用することが見出されており、タンパク質は、５’ＵＴＲ内の配列を翻訳する。加えて、この領域は、転写調節に関与している。５’ＵＴＲ内の調節エレメントもｍＲＮＡの核外輸送に関係している。

スプライス部位変異は、前駆体メッセンジャーＲＮＡから成熟メッセンジャーＲＮＡへの処理中にスプライシングが行われる特定の部位において、いくつかのヌクレオチドを挿入、欠失、又は変化させる遺伝子変異である。エクソン認識を駆動するスプライス部位コンセンサス配列は、イントロンの末端に位置する。スプライシング部位の欠失は、成熟ｍＲＮＡに１個以上のイントロンが残り、異常なタンパク質の産生につながり得る。スプライス部位変異が生じると、ｍＲＮＡ転写物は、通常は含まれるべきではないこれらのイントロンからの情報を有する。エクソンが発現されている間、イントロンは除去されることになっている。

ナンセンス（ストップゲイン）は、翻訳の終了を知らせる、早期終了コドン（停止が得られた）をもたらす変異である。この中断により、タンパク質が異常に短縮される。失われたアミノ酸の数は、タンパク質の機能性への影響と、それが何らかの機能を果たすかどうかを決める。

インフレーム欠失は、少なくとも３つのＤＮＡ塩基（それはより多くなり得、通常は３の倍数である）のコドン全体を除去を伴い、タンパク質からアミノ酸の欠失、例えばインフレーム欠失をもたらし得る。

更に、遺伝子は、染色体転座により変異し得、染色体転座は染色体異常の一種であり、そこでは、染色体が破断し、その一部が異なる染色体又はその一部に再結合する。

追加の実施形態において、本発明は、対象に毎日約１４５０～８９００μｇの用量でヒスチジン酸銅を投与することによって、対象における血清銅レベルを増加させる方法を提供し、対象は、初回投与時に４週齢以下であり、それによって血清銅レベルを増加させる。一態様において、対象は、４週齢以下、１歳未満、又は１歳を超える。別の態様において、投与は１日１回又は２回である。更なる態様において、ヒスチジン酸銅は、約１４５０μｇで１日１回又は２回投与される。更なる態様において、投与は、皮下注射によるものである。一態様において、対象は、メンケス病を有する。更なる態様において、該対象は、ＡＴＰ７Ａ遺伝子に変異を有する。様々な態様において、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変異は、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、同義バリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、ナンセンス（ストップゲインド）、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、又はそれらの組み合わせである。ある特定の態様において、対象の血清銅、血清セルロプラスミン、血清重炭酸塩、血清クレアチニン及び／又は尿β－２ミクログロブリンレベルをモニターする。様々な態様において、ヒスチジン酸銅の投与前の対象の血清銅レベルは、７５ｕｇ／ｄｌ未満である。一態様において、対象にヒスチジン酸銅を投与した後、対象の血清銅レベルは、少なくとも約８５μｇ／ｄｌとなる。

一態様において、対象は、正常レベルの血清銅を有し、ヒスチジン酸銅の投与は、血清銅のレベルを正常レベルを上回るまで増加させる。追加の態様において、対象は、低レベルの血清銅を有し、ヒスチジン酸銅の投与は、血清銅のレベルを正常レベルまで、又は正常レベルを上回るまで増加させる。一態様において、正常な血清銅レベルは、約８５～１８０μｇ／ｄｌである。追加の態様において、対象は、８５μｇ／ｄｌ未満の低レベルの血清銅を有する。特定の態様において、対象は、７５μｇ／ｄｌ未満の血清銅レベルを有する。更なる態様において、対象は、低血清銅レベルを引き起こす、又はその結果として生じる疾患又は障害を有する。ある特定の態様において、疾患又は障害は、メンケス病である。

ヒスチジン酸銅の投与後、血清銅、血清セルロプラスミン、血清重炭酸塩、血清クレアチニン及び／又は尿β－２ミクログロブリンレベルのレベルをモニターする。ある特定の態様において、ヒスチジン酸銅のレベル、血清銅のレベル、血清重炭酸塩、血清セルロプラスミン、血清クレアチニン及び／又は尿β－２ミクログロブリンレベルを測定して、レベルが正常レベルよりも高い又は低いことを決定する。一態様において、正常な血清銅レベルは、約８５～１８０μｇ／ｄｌである。更なる態様において、低レベルの血清銅は、８５μｇ／ｄｌ未満である。特定の態様において、対象は、７５μｇ／ｄｌ未満の血清銅レベルを有する。いくつかの態様において、血清重炭酸塩の正常レベルは２２～２９ｍｍｏｌ／Ｌである。特定の態様において、血清重炭酸塩の低レベルは２２ｍｍｏｌ／Ｌ未満であり、血清重炭酸塩の高レベルは２９ｍｍｏｌ／Ｌ超である。一態様において、血清重炭酸塩の低レベルは１２ｍｍｏｌ／Ｌ未満である。一態様において、血清クレアチニンの正常レベルは０．２～０．４ｍｇ／ｄｌである。様々な態様において、低レベルの血清クレアチニンは０．２ｍｇ／ｄｌ未満であり、高レベルの血清クレアチニンは０．４ｍｇ／ｄｌ超である。いくつかの態様において、高レベルの血清クレアチニンは、０．５ｍｇ／ｄｌ超である。ある特定の態様において、尿β－２ミクログロブリンの正常レベルは、約０～０．３ｍｇ／Ｌである。様々な態様において、血清セルロプラスミンの正常レベルは、２０～３５ｍｇ／ｄｌである。一態様において、低レベルのセルロプラスミンは、２０ｍｇ／ｄｌ未満である。ある特定の態様において、高レベルの血清セルロプラスミンは、３０ｍｇ／ｄｌ超である。いくつかの態様において、高レベルの尿β－２ミクログロブリンは、３ｍｇ／Ｌ超である。一態様において、高レベルの尿β－２ミクログロブリンは、７５ｍｇ／ｄｌ超である。

更なる実施形態において、本発明は、凍結乾燥ヒスチジン酸銅及び薬学的に許容される担体の医薬組成物を提供する。一態様において、薬学的に許容される担体は、生理食塩水である。追加の態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅を生理食塩水又は他の担体で再構成する。生理食塩水は緩衝できる（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））。更なる態様において、再構成された銅ヒスチジンは、約５００μｇ／ｍｌ～３０００μｇ／ｍｌ、例えば、２９００μｇ／ｍｌの濃度を有する。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という語句は、薬学的投与と適合性のある任意の及び全ての溶媒、溶液、緩衝液、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。かかる組成物は、本発明の抗体及び担体に加えて、様々な希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、及び当該技術分野で周知の他の材料を含有し得る。「薬学的に許容される」という用語は、活性成分の生物活性の有効性を妨げない非毒性材料を意味する。担体の特性は、投与経路に依存することになる。そのような媒体及び薬学的に活性な物質のための薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。組成物はまた、補完的、追加的、又は強化された治療機能を提供する他の活性化合物を含有してもよい。医薬組成物はまた、容器、パック、又はディスペンサーに、投与のための指示書とともに含まれてもよい。一態様において、薬学的に許容される担体は、生理食塩水、例えば、０．９％の生理食塩水である。

更に別の実施形態において、本発明は、凍結乾燥ヒスチジン酸銅を伴うキット、及び指図書を提供する。一態様において、凍結乾燥させたヒスチジン酸銅は、生理食塩水で再構成される。追加の態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅を、０．２～２ｍｌの生理食塩水で再構成する。更なる態様において、再構成されたヒスチジン酸銅は、約２℃～３７℃で保存される。一態様において、凍結乾燥生成物は、約－１０～－２０℃で保存される。ある特定の態様において、キットは、ヒスチジン酸銅を再構成するための指図書又は指示書を含む。様々な態様において、キットは、ヒスチジン酸銅を再構成する装置を含む。特定の態様において、ヒスチジン酸銅を再構成する装置は、皮下注射針を備えた、注射器、バイアル、又はアンプルである。更なる態様において、ヒスチジン酸銅を２．０ｍｌの生理食塩水で再構成する。更なる態様において、再構成されたヒスチジン酸銅の濃度は、約１００～３０００μｇ／ｍｌの元素銅濃度に等しい。様々な態様において、再構成されたヒスチジン酸銅の濃度は、１００μｇ／ｍｌ、１５０μｇ／ｍｌ、２００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、３００μｇ／ｍｌ、３５０μｇ／ｍｌ、４００μｇ／ｍｌ、４５０μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、５５０μｇ／ｍｌ、６００μｇ／ｍｌ、６５０μｇ／ｍｌ、７００μｇ／ｍｌ、７５０μｇ／ｍｌ、８００μｇ／ｍｌ、８５０μｇ／ｍｌ、９００μｇ／ｍｌ、９５０μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌ、１５００μｇ／ｍｌ、２０００μｇ／ｍｌ、２５００μｇ／ｍｌ、又は３０００μｇ／ｍｌの元素銅濃度に等しい。ある特定の態様において、再構成されたヒスチジン酸銅の濃度は、５００μｇ／ｍｌの元素銅協調に等しい。一態様において、キットは、再構成されたヒスチジン酸銅を対象に投与するための指図書又は指示書を含有する。様々な態様において、０．５ｍｌの再構成されたヒスチジン酸銅溶液を対象に投与する。追加の態様において、２５０μｇの再構成されたヒスチジン酸銅溶液を対象に投与する。更なる態様において、キットは、再構成されたヒスチジン酸銅溶液を保存するための指図書又は指示書を含有する。

一実施形態において、例として、本発明は、ヒスチジン酸銅の安定凍結乾燥医薬製剤を提供し、水溶液を凍結乾燥することにより作られる該製剤は、２モルのＬ－ヒスチジン及び１モルの塩化第二銅（例えば、塩化銅（ＩＩ）二水和物）を含み、かつ水溶液において約７．３５のｐＨに調整され、続いて溶液を凍結乾燥させられる。一態様において、ヒスチジン酸銅は、水溶液中に約２９００μｇ／ｍＬで存在する。追加の態様において、製剤は、少なくとも約１８カ月間安定である。一態様において、１８ヶ月安定した製剤は、約－１０～－２０℃、２～８℃、又は室温（１５～３０℃）で保管される。追加の実施形態において、本発明は、ヒスチジン酸銅及び薬学的に許容される担体の製剤を含むバイアルを提供し、製剤は、２モルのＬ－ヒスチジン及び１モルの塩化第二銅（例えば、塩化第二銅二水和物）を含む水溶液を凍結乾燥させ、かつ水溶液において約７．３５のｐＨに調整し、続いて溶液を凍結乾燥させることによって作られる。一態様において、薬学的に許容される担体は、生理食塩水である。更なる態様において、製剤は、２ｍｌの生理食塩水中で約２９００μｇ／ｍｌの濃度に再構成される。更なる態様において、製剤は、バイアル内に、５００ｕｇ元素銅／ｍｌの濃度で生理食塩水中に再構成された凍結乾燥ヒスチジン酸銅を含む。ある特定の態様において、バイアルは、凍結乾燥したヒスチジン酸銅を生理食塩水中で再構成し、メンケス病を有する対象に、対象が１歳になるまでは１日２回、対象が１歳になった後は１日１回、投与当たり０．５ｍｌ（又はｃｃ）の用量で皮下投与するための指示書を更に備える。一態様において、凍結乾燥ヒスチジン酸銅は、約２～８℃、例えば、４℃で、少なくとも約７日間、２週間、１ヶ月、又は２ヶ月を超える間、安定である。ある特定の態様において、メンケス病を有する対象は、ナンセンスバリアント、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、同義バリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、カノニカルスプライス部位変異、又はそれらの組み合わせから選択されるＡＴＰ７Ａ変異を有する。

一態様において、本発明のバイアルは、凍結乾燥したヒスチジン酸銅を生理食塩水中で再構成し、メンケス病を有する対象に、対象が１歳になるまでは１日２回、対象が１歳になった後は１日１回、投与当たり０．５ｍｌの用量で皮下投与するための指示書を備える。一態様において、メンケス病を有する対象は、ナンセンスバリアント、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、同義バリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、カノニカルスプライス部位変異、又はそれらの組み合わせから選択されるＡＴＰ７Ａ変異を有する。別の態様において、指示書は、対象におけるＡＴＰ７Ａ変異を同定するために遺伝子検査を実施することを含む。

更に別の実施形態において、本発明は、２つのチャンバを有する容器を提供し、この容器の外部に固定された針を通して、混合された成分を対象に注射する前に、粉末医薬品、この例では凍結乾燥させたヒスチジン酸銅と、生理食塩水などの希釈剤とを混合する。容器は、注射器、バイアル、アンプル等であり得る。

Ｔ_ｍａｘ（ピーク血漿濃度時間）は、薬物投与後、血漿中の薬物濃度が最大に達するまでに必要な時間である。Ｔ_ｍａｘは、ピーク血漿時間である。簡単に言えば、Ｔ_ｍａｘはＣ_ｍａｘに達するまでの時間である。Ｃ_ｍａｘは、薬物の経口投与後に得られる最大（ピーク）血漿薬物濃度である。また、Ｔ_ｍａｘでは、薬物吸収速度は薬物排出速度と完全に等しくなる。

他方では、ｔ_１／２（排出半減期）は、排出中に体内の薬物濃度を半減させるのに必要な時間である。すなわち、ｔ_１／２（排出半減期）は、薬物の量又は濃度が半減するのに必要な時間である。薬物動態学では、排出半減期、ｔ_１／２は、投与された薬物の投与量の半分が体から排出されるのに必要な時間を指す。Ｔ_ｍａｘは、排出速度（ｋ）及び吸収速度定数（ｋａ）に依存する。一方、ｔ_１／２は、排出速度（ｋ）及び分布体積（Ｖｄ）に依存する。Ｔ_ｍａｘでは、薬物の濃度はピークである。ｔ_１／２である間、薬物の濃度はピークであってもピークでなくてもよい。例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｐｈａｒｍａｅｄｕｃａｔｉｏｎ．ｎｅｔ／ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ－ｂｅｔｗｅｅｎ－ｔｍａｘ－ａｎｄ－ｔ１－２／＃：～：ｔｅｘｔ＝Ｏｎ％２０ｔｈｅ％２０ｏｔｈｅｒ％２０ｈａｎｄ％２Ｃ％２０ｔ％２０１％２Ｆ２％２０％２８ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ％２０ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ％２９，ｏｆ％２０ａ％２０ｄｒｕｇ％２０ｔｏ％２０ｄｅｃｒｅａｓｅ％２０ｂｙ％２０ｏｎｅ－ｈａｌｆ％２０％５Ｂ１％５Ｄを参照。

本明細書の例示的な例において、本開示は、対象の血清ヒスチジン酸銅のレベルを増加させる方法を提供し、この方法は、投与後約１／２時間～１時間の血清中のヒスチジン酸銅のピーク検出可能レベルで、皮下投与経路を介して対象にヒスチジン酸銅を投与し、それによって対象の血清ヒスチジン酸銅のレベルを増加させる。ヒスチジン酸銅の検出可能なレベルのピークは、投与後１／４時間～２時間であり得る。更に、ヒスチジン酸銅分布相半減期は、約１～５時間、約１～４時間、約１～３時間、約２～５時間、約２～４時間、又は約２～３時間である。

一態様において、終末排出相半減期ｔ_１／２は、約３０～１５０時間である。他の態様において、終末排出相半減期ｔ_１／２は、約３０～１２５時間、約３０～１００時間、約３０～７５時間、又は約７５時間である。以下の実施例は、本発明の実施形態を更に例示するために示されるが、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。これらは使用される可能性のあるものの典型であるが、当業者に公知の他の手順、方法論、又は技術を代替的に使用することもできる。

実施例１
メンケス患者のヒスチジン酸銅治療
この研究の目的は、現在登録されている参加者が、以前のプロトコルの下で皮下ヒスチジン酸銅治療の３年間のコースを完了できるようにすることであった。この薬物の皮下注射は、登録された参加者の血清銅レベル及びセルロプラスミンレベルを上昇させ、神経発達及び神経学的転帰を改善し、未治療の罹患対象と比較して死亡率を低減すると仮定された。この治療研究の広範な全体的な仮説は、皮下ヒスチジン酸銅注射が循環銅レベルを正常化し、古典的なメンケス病などの遺伝的異常又は原因不明の銅欠乏症を有する個人に健康上の利点を提供することである。この試験は、非盲検デザインを表し、登録された全ての対象がヒスチジン酸銅の皮下注射を受ける。古典的なメンケス病におけるヒスチジン酸銅治療の即時の潜在的な利点としては、発作活動に対する保護及び年齢に適した方法での神経発達能力の獲得が挙げられる。ヒスチジン酸銅で治療された古典的なメンケス病を有する他の対象で指摘されたように、長期的な潜在的利益には、寿命と生活の質の向上が含まれる。

活性物質であるヒスチジン酸銅は、銅（ＩＩ）とＬ－ヒスチジンとの１：２の複合体であり、１モルの塩化第二銅を２モルのＬ－ヒスチジンと水溶液中で反応させ、かつおおよそｐＨ７．３５に調整した場合にインサイチューで形成される。ＩＵＰＡＣの化学名は、（２Ｓ）－２－アミノ－３－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）プロパン酸、銅である。分子式は、Ｃ_１２Ｈ_１８ＣｕＮ_６Ｏ_４（分子量：３７３．８６ｇ／ｍｏｌ）である。特定の実施形態において、本発明は、以下のように処方される用量のヒスチジン酸銅の投与による研究介入を提供する：生後１２ヶ月までの乳児には１４５０μｇを皮下に１日２回（ＢＩＤ）、及び１２ヶ月以上の乳児及び小児には１４５０μｇを皮下に１日１回（ＱＤ）。例示的な一例において、ヒスチジン酸銅治療の総持続時間は、３年を超えない。ヒスチジン酸銅は、例として、＃２７ゲージ針を備える注射器を使用して、０．５ｍｌを超えない体積で皮下注射によって投与される。古典的メンケス病に対する標準的な投与レジメンは、生後１２ヵ月未満の患者にはヒスチジン酸銅１４５０μｇ（０．５ｍｌ）を皮下ＢＩＤ、及び生後１２ヵ月を超える患者には１４５０μｇを皮下ＱＤである。このレジメンは、通常、血清銅レベルをそのような対象についての正常範囲に維持する。

患者の参加基準には、古典的メンケス病、後角症候群（ＯＨＳ）、又は原因不明の銅欠乏症と診断されていること、血清銅レベルが０～７５ｍｇ／ｄｌ（正常範囲は８０～１８０μｇ／ｄｌ）であること、及び所定のヒスチジン酸銅皮下注射レジメンを遵守できることが含まれた。

患者の除外基準には、肝臓病（例えば、肝炎、胆道閉鎖症、肝硬変）又は腎臓病（例えば、血清クレアチニン＞１．０ｍｇ／ｄＬ）の既往症；出血体質の既往歴；妊娠又は授乳；ウィルソン病の診断；患者が本試験を完了できない可能性が高い、又は本試験の要件を適切に遵守できない、若しくは遵守する意志のない、疾患又は状態；本試験のスクリーニング前３０日以内に治験薬又はデバイスを受けた他の治験への参加；過去３年以内に診断された薬物又はアルコール依存症の病歴；消化管吸収に悪影響を及ぼす可能性のある任意の疾病過程；心不全、不整脈、徐脈、低血圧を含むがこれらに限定されない、臨床検査に参加することが身体的に負担となる可能性のある慢性／重度の心疾患（成人被験者にのみ適用される）、ただし、ＯＨＳのように他の自律神経失調症を伴う場合はこの限りではない；対象の臨床検査への参加を困難にする可能性のある脳血管障害の既往歴（成人対象のみに適用される）が含まれた。

血清銅レベルを追跡して、銅レベルが異常に高いかどうかを判断し、それに応じて介入を調整した。加えて、血清重炭酸塩、血清クレアチニン、及び尿β－２－ミクログロブリン（尿細管機能のマーカー）も追跡し（表１）、必要に応じて、ヒスチジン酸銅用量の変化を研究するために使用した。

（表１）

腎銅過負荷の差し迫った危険は、重炭酸塩の損失の増加による酸塩基不均衡を引き起こす。これは、ヒスチジン酸銅投与を１週間停止し、更に３週間用量を低下させてから、検査値を再測定することによって対処される。潜在的な長期危険は、透析又は腎移植を必要とする永久的な腎障害である。しかしながら、ヒスチジン酸銅によって引き起こされる古典的なメンケス病患者における腎管損傷が可逆的であるという証拠は存在する。

この研究の最後に、患者は、生存、神経学的発達、及び患者の生活の質を決定するために、長期研究に移された。

実施例２
メンケス病のヒスチジン酸銅治療の長期研究
この研究は、古典的なメンケス病と診断された患者及び新たに診断されたメンケス病患者に対する皮下ヒスチジン酸銅治療の臨床効果及び安全性を調査した。

研究中、患者は以下のようにヒスチジン酸銅の用量を投与された：１２カ月齢までの乳児において１４５０μｇの皮下ＢＩＤ、及び１２カ月齢以上の乳児及び小児において１４５０μｇの皮下ＱＤ。一実施例において、新たに診断されたメンケス病患者に対するヒスチジン酸銅治療の総持続時間は、３年を超えなかった。

以前に診断された患者は、臨床的、生化学的及び分子基準に基づいて診断が確認されていた。臨床基準には、髪の色及び／又は質感の異常、及び／又は発作、及び／又は筋緊張低下、及び／又は発達遅滞が含まれた。生化学的基準には、低血清銅レベル（７５μｇ／ｄｌ未満）及び／又はセルロプラスミン及び／又は異常な血漿カテコールアミンレベルが含まれた。分子基準には、ＡＴＰ７Ａ遺伝子の変異（欠失／重複、ナンセンス、ミスセンス、又はカノニカル若しくはノンカノニカルスプライス接合部変異）が含まれた。新たに診断された患者は、血清銅レベルが７５μｇ／ｄｌ未満であり、ＡＴＰ７Ａ遺伝子変異について検査した。

肝臓（例えば、肝炎、胆道閉鎖症、肝硬変）又は腎臓病（例えば、血清クレアチニンが１．０ｍｇ／ｄｌ超）の既往歴、出血体質の病歴、又はウィルソン病の診断を受けた任意の患者は、研究から除外された。

新たに診断された患者は、最初の６ヵ月間は６週間ごとに、基礎代謝パネル（ＢＭＰ）、血清銅、セルロプラスミン、及び尿中β－２ミクログロブリン濃度を含む実験室分析によって、銅毒性についてモニターされた。患者は、最初の３～４ヶ月間は毎月診療所で評価され、その後２～３ヶ月ごとに評価された。患者は、電話接触及び／又は訪問のいずれかによって、おおよそ３ヶ月ごとに生存状態を決定するために評価された。ＢＭＰパネルには、アルブミン、アルカリホスファターゼ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、重炭酸塩、ビリルビン（総及び直接）、ＢＵＮ、カルシウム、塩化物、クレアチニン、クレアチニンキナーゼ、グルコース、ＬＤＨ、マグネシウム、リン、カリウム、総タンパク質、及びナトリウムが含まれる。

以前に診断された患者は、最初に登録したとき最初に、及びその後３年の治療を完了するまで３～４ヶ月ごとに、ＢＭＰ、血清銅、セルロプラスミン、及び尿β－２ミクログルブリン濃度を含む実験室分析によって、銅毒性についてモニターされた。患者は、電話による接触及び／又は訪問のいずれかによっておおよそ３ヶ月ごとに生存状態を決定するために評価された。

ヒスチジン酸銅の用量に対するいかなる変化も、表２に示す安全性パラメータによって決定した。

（表２）

実施例３
ヒスチジン酸銅で治療されたメンケス病患者の長期フォローアップ
この研究は、ヒスチジン酸銅によるメンケス病治療に関する先行研究で同定及び／又は登録された患者、及び未治療患者に対する長期追跡調査として計画され、生存期間、神経学的発達、生活の質の状態、有害事象を決定した。この研究は、長期フォローアップのために、以前の実施例からの患者を追跡した。

ヒスチジン酸銅によるメンケス病の治療のための臨床試験に以前登録した患者を、生存状態、神経学的発達状態、及び生活の質について評価した。この研究中に薬物は投与されなかった。

その結果、ヒスチジン酸銅による早期治療を受けたメンケス病の対象は、未治療の履歴対照と比較して、死亡の危険（ハザード比＝０．２１、ｐ＜０．００００１）が８０％近く低減したことが示された。早期治療コホートの生存期間の中央値は、１４．８年（１７７．１ヵ月であったのに対し、未治療の履歴対照群では１．３年（１５．９ヵ月）であった。

実施例４
薬物動態研究
本試験は、第Ｉ相非盲検単回投与研究であり、健康な男性ボランティアにおける皮下投与後のヒスチジン酸銅の薬物動態、安全性及び忍容性を評価する。

メンケス患者を対象とした以前の研究では、１歳未満の小児は１４５０μｇのヒスチジン酸銅（２５０μｇの元素銅に相当）を１日２回受け、一方、１歳以上の小児は１４５０μｇのヒスチジン酸銅（２５０μｇの元素銅に相当）を１日１回受けた。この用量は、メンケス小児における適切な血清銅曝露を目標にするために選択されている。

銅補充療法を受けているメンケス小児は、正常小児の最低３パーセンタイル以下の体重であると予想される。銅欠乏症のない健康なボランティアにおける皮下ヒスチジン酸銅の安全性は不明であるため、３歳のメンケス小児からのより低い体重調整用量が目標とされる。体重が３パーセンタイルの３歳の男性は１１．８ｋｇの重さがあると予想され、一方で通常の男性は７０ｋｇの重さがある。

指数０．７５の相対成長率を使用すると、等価成人用量はヒスチジン酸銅約５８００μｇ（１０００μｇの元素銅に相当であり、これはたまたま正常な状態下で腸を通って吸収できる銅の最大量でもある。したがって、５８００μｇのヒスチジン酸銅（１０００μｇの元素銅に相当）の単回皮下投与を検討する。相対成長指数を１と仮定すると、等価成人用量は、８８５０μｇのヒスチジン酸銅（１５００μｇの元素銅に相当）である。したがって、８８５０μｇのヒスチジン酸銅（１５００μｇの元素銅に相当）が、この研究において考慮される最大用量となる。

この研究は、２８日間のスクリーニングフェーズ、臨床研究ユニット（ＣＲＵ）でのおおよそ９６時間の滞在、及びＣＲＵ退院後４（±１）日後のフォローアップ電話で、構成されている。合計９人の健康な男性に、５８００μｇのヒスチジン酸銅（１０００μｇの元素銅に相当）を、皮下投与で、二回の別々の注射で、それぞれ異なる腕に、２日目に、単回投与する。各１ｍＬの注射には、２９００μｇのヒスチジン酸銅（５００μｇの元素銅に相当）が含まれる。

対象は、ＣＲＵへの入院前２８日以内（－２９日目から－２日目）にスクリーニングを受ける。対象は、－１日目の午後遅くにＣＲＵに入院し、夕食を提供され、その後一晩断食する。対象は、既知の一貫した銅含有量を伴う標準化された食事スケジュールに従い、－１日目から４日目のＣＲＵ退院まで固定された睡眠－覚醒スケジュールに従う。第１の皮下ヒスチジン酸銅注射の開始は、２日目の時間０として定義される。

ベースライン評価は、１日目に開始し、２日目のスケジュールに対応して採血を含み、血清銅、セルロプラスミン、及びヒスチジン酸銅レベルのベースライン日周変動を評価する。１日目の薬物動態分析のための血液は、おおよそ午前７時に目覚めてから１時間後に採取し、次に、最初の１日目の薬物動態試料後、０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１４、１６、及び２４時間（投与前２日目）に採取する。２日目に、ヒスチジン酸銅皮下注射前１５分以内（最初の１日目の薬物動態試料の２４時間後に使用されたものとは異なるチューブ内）、次いで、ヒスチジン酸銅皮下注射後、０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１４、１６、２４、２８、３２、３６、及び４８時間に、試料を採取する。２日目の時間０時は、おおよそ午前８時に対応する。投与は、投与前試料を収集した後、できるだけ早く（１５分以内）開始する必要がある。

尿試料は、薬物動態分析のために、１日目から４日目まで所定の時間間隔で収集される。尿は、１日目（ヒスチジン酸銅皮下注射前）の最初の薬物動態血液試料の０～６、６～１２、及び１２～２４時間後に採取する。皮下ヒスチジン酸銅を注射した後、尿は、薬物投与後０～６時間、６～１２時間、１２～２４時間、及び２４～４８時間に採取する。

重篤な有害事象／有害事象（ＡＥ／ＳＡＥ）、安静時バイタルサイン、ＥＣＧ、検査室評価、身体検査、及び併用薬物を含む安全性パラメータは、研究を通して収集される。ＡＥは、それらが発生したときに、研究を通していつでも単純に報告される。ヒスチジン酸銅の皮下注射前及び各血液試料採取時に、対象は、注射部位の反応について評価される。バイタルサインは、スクリーニング時、１日目のベースライン評価前、２日目の投与前、及び皮下ヒスチジン酸銅注射後０．５、１、２、４、１２、２４、及び４８時間に測定する。ＥＣＧは、スクリーニング時、２日目の投与前、及び投与後１、２、４、及び２４時間に測定する。臨床検査パネルは、スクリーニング時、ＣＲＵチェックイン時、及び皮下ヒスチジン酸銅投与の２４時間（３日目）及び４８時間（４日目）後に採取する。完全な身体検査は、スクリーニング時、ＣＲＵチェックイン時、及び皮下ヒスチジン酸銅投与の２４時間（３日目）及び４８時間（４日目）後に実施し、２日目の投与２時間後に簡単な身体検査を実施する。

活性物質であるヒスチジン酸銅は、おおよそ７．０～７．５、例えば、７．３５のｐＨを有し、銅補充療法のための薬物の分類に属する。分子式は、Ｃ_１２Ｈ_１８ＣｕＮ_６Ｏ_４であり、分子量は３７３．８６ｇ／ｍｏｌである。皮下注射用の薬物製品であるヒスチジン酸銅を凍結乾燥する 凍結乾燥粉末製品を皮下注射用の生理食塩水で再構成する。各対象について、ヒスチジン酸銅凍結乾燥粉末の２つのバイアルを使用する。投与前に、各５ｍＬバイアルを２ｍＬの注射用０．９％生理食塩水で再構成する。

５８００μｇのヒスチジン酸銅（１０００μｇの元素銅に相当）の単回投与は、異なる腕で２回の皮下注射を介して投与される。医薬品の２つのバイアルを、それぞれ２ｍＬの０．９％生理食塩水で再構成する。各バイアルから、再構成された医薬品の１ｍＬを別々の皮下注射として投与し、合計２回の注射を行う。２回の注射は、各対象に対して、異なる腕に約５分以内に行う必要がある。

最大８８５０μｇのヒスチジン酸銅（１５００μｇの元素銅に相当）の追加の単回投与は、異なる腕で２回の皮下注射を介して追加のコホートにおいて投与してもよい。医薬品の２つのバイアルを、それぞれ２ｍＬの０．９％生理食塩水で再構成する。各バイアルから、１．５ｍＬの再構成された医薬品を別々の皮下注射として投与し、合計２回の注射を行う。２回の注射は、対象に対して、異なる腕に５分以内に行う必要がある。

薬物動態評価：血清銅、セルロプラスミン、及びヒスチジン酸銅の薬物動態分析のための血液試料を、１日目の覚醒後１時間（１日目の時間０時）、及び最初の１日目の薬物動態試料後０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１４、１６、及び２４時間（投与前２日目）に収集する。２日目に、試料を、ヒスチジン酸銅皮下注射前１５分以内（最初の１日目の薬物動態試料の２４時間後に使用されたチューブとは異なるチューブ内）、及びヒスチジン酸銅皮下注射後０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１４、１６、２４、２８、３２、３６、及び４８時間に収集する。

尿試料を、銅の薬物動態分析のために、１日目から４日目まで所定の時間間隔で収集する。対象は、１日目の０時のベースライン評価の開始のおおよそ３０分前に、膀胱を空にするべきである（試料は捨てることができる）。尿は、０時（ヒスチジン酸銅皮下注射前）の後、０～６時間、６～１２時間、及び１２～２４時間に採取する。皮下ヒスチジン酸銅を注射した後、尿は、薬物投与後０～６時間、６～１２時間、１２～２４時間、及び２４～４８時間に採取する。

完全な身体検査は、スクリーニング時、ＣＲＵチェックイン時、及び皮下ヒスチジン酸銅投与の２４時間（３日目）及び４８時間（４日目）後に実施し、２日目の投与２時間後に簡単な身体検査を実施する。

標準的なノンコンパートメント分析（ＮＣＡ）法を使用して、観察された血清及び尿の濃度データから導出された、皮下ヒスチジン酸銅の単回投与後の、日内変動調整後の血清銅、セルロプラスミン、及び血清ヒスチジン酸銅についての薬物動態パラメータには、以下が含まれる：ピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）；ピーク濃度までの時間（Ｔ_ｍａｘ）；時間０から最後の定量化可能な濃度まで（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）の濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）；時間０から無限大までのＡＵＣ（ＡＵＣ_ｉｎｆ）；見かけの全身クリアランス（ＣＬ）；見かけの腎クリアランス（ＣＬｒ）；排出半減期（ｔ_１／２）；皮下注射後の時間０から６時間（Ａｅ_０－６）、１４時間（Ａｅ_０－１４）、２４時間（Ａｅ_０－２４）、及び４８時間（Ａｅ_０－４８）まで、並びに時間０から無限大（Ａｅ_ｉｎｆ）で、尿中に排出される銅の累積量（μｇ及び用量の百分率として）（Ａｅ）。

定常投与時の日内変動調整をした血清銅、セルロプラスミン、ヒスチジン酸銅の予測ピーク曝露量及び総曝露量（Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ_ｔａｕ）も分析する。

実施例５
成人ヒトにおける薬物動態研究
以下の実施例は、健康な成人男性ボランティア６人に３０００μｇ（３．０ｍｇ）（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ溶液を１日１回皮下注射した研究によって決定されたヒスチジン酸銅の薬物動態を説明する。

この研究の主な目的は、健康な成人男性対象における［^１４Ｃ］ＣｕＨｉｓの単回皮下（ＳＣ）投与後の、全血、血清、及びサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）カラムからの非標識ヒスチジン酸銅（ＣｕＨｉｓ）が混ぜられた血清の溶出画分における、総放射能（ＴＲＡ）を定量することであった。更に、この研究は、経時的に全血中の細胞成分に関連する^１４Ｃ放射能の割合（例えば、全血：血清の分配濃度比）を決定するように設計された。

健康な成人男性対象における［^１４Ｃ］ＣｕＨｉｓの単回ＳＣ投与後の安全性及び忍容性を評価するため。これは、米国の１つの試験施設で実施された非盲検、単回投与、１期間、ＰＫ試験であった。６人の健康な成人男性対象が登録された。対象のスクリーニングは、投与前２８日以内に行われた。

１日目に、単回ＳＣ３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）の［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓを投与した。全血及び血清中のＴＲＡを決定するための薬物動態（ＰＫ）試料、並びにＳＥＣ－ＨＰＬＣカラムからの非標識ＣｕＨｉｓが混ぜられた血清の溶出画分中の［^１４Ｃ］ＣｕＨｉｓを、投与前及び投与後最大１６８時間（対象１～５）又は投与後５０４時間（対象６）まで収集した。

対象は、－１日目の臨床研究ユニット（ＣＲＵ）によって示された時刻から、１６８時間の採血及び／又は試験手順の後まで収容され、可能であれば５０４時間の採血のために戻された。安全性は、臨床及び検査室での繰り返しの評価によって試験を通してモニターされた。ＣＲＵは、投与からおおよそ１４日後に、試験薬を投与された全対象者に標準的な手順で連絡を取り、最後の来院時以降に有害事象（ＡＥ）が発生したかどうかを確認した。

^１４Ｃヒスチジン酸銅の初期薬物動態結果は以下の通りであった：
●ＡＵＣ_０－２４（ｎｇ・ｈｒ／ｍＬ）＝１８５．６（２０．６）^＊
●ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}（ｎｇ・ｈｒ／ｍＬ）＝２４９．３（１０．６）^＊
●ＡＵＣ_０－∞（ｎｇ・ｈｒ／ｍＬ）＝２９６．０（１５．３）^＊
●Ｃ_ｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ）＝６７．１４（３５．９）^＊
●Ｔ_ｍａｘ（ｈｒ）＝０．７４７（０．５０，０．７６）^＊＊
＊ＡＵＣ_０－２４、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}、ＡＵＣ_０－∞、及びＣ_ｍａｘ値を幾何平均（幾何パーセント変動係数）として提示する。
^＊＊Ｔ_ｍａｘ値は、中央値（最小値、最大値）として提示される。
投与後０．７５時間でピークに達した後、血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度は、初期の急速な減少（分布相；ｔ_１／２＝約２～３時間）を示し、その後、より遅い平衡期及び／又は終末排出相（ｔ_１／２＝約７５時間）を示した。

ＳＣボーラス注射のための３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ（約５００μｇの元素銅に相当）の単回投与を、１日目の時間０に各対象の上腕に投与した。時間０は、１日目のボーラスＳＣ投与の開始に対応した。対象は、注射部位をこすらないように指示された。各対象に投与されるＣｕＨｉｓの実際の用量及び放射能を以下の表３に提示する。

（表３）投与されたヒスチジン酸銅及び放射能の実際の用量（目標用量：３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅）（安全集団）

薬物動態：
全血及び血清中のＴＲＡを決定するための血液試料、並びにＳＥＣ－ＨＰＬＣカラムからの非標識ＣｕＨｉｓが混ぜられた血清の溶出画分中の［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓを、投与前及び投与後最大１６８時間（対象１～５）、又は投与後最大５０４時間（対象６）まで収集した。

全血及び血清中のＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ ＡＢＳ，Ｉｎｃ．（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）でアクセラレータ質量分析（ＡＭＳ）を使用して決定した。全血及び血清中のＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量の定量下限（ＬＬＯＱ）は、異なる対象において、それぞれ０．７１１～０．７７０ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬ及び０．２３９～０．２８４ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬの範囲であった。

ＳＥＣ－ＨＰＬＣカラムからの血清画分中の［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ ＡＢＳ，Ｉｎｃ．（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）のＡＭＳを使用して測定した。血清中の［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度のＬＬＯＱは、０．２７０ｎｇ／ｍＬであった。

全血：血清のＴＲＡ分配比を、全血ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量と血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量との間の比として、各対象の各投与後時点で計算した。可能であれば、全血及び血清ＴＲＡ、並びに血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓについて、以下のパラメータを計算した：ＡＵＣ_０－２４、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}、ＡＵＣ_０－∞、ＡＵＣ_{％ｅｘｔｒａｐ}、Ｃ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、ｔ_ｌａｇ、Ｋ_ｅｌ、及びｔ_１／２。血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ対血清ＴＲＡについて、ＡＵＣ_０－２４比を算出した。血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓについて、ＣＬ／Ｆ及びＶ_ｚ／Ｆを算出した。

統計方法：
全てのＰＫ濃度及びＰＫパラメータ記述統計量は、ＳＡＳ（登録商標）バージョン９．４を使用して生成した。

全血及び血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量、血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度、及び全血：血清のＴＲＡ分配比を、ＰＫ集団における全ての対象について、時点別に列挙し、要約した。各公称時点における上記データについて、試料サイズ（ｎ）、算術平均値（Ｍｅａｎ）、標準偏差（ＳＤ）、変動係数（ＣＶ％）、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）、最小値、中央値、及び最大値を含む要約統計を計算した。

全血及び血清ＴＲＡ ＰＫパラメータ、並びに血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ ＰＫパラメータを、各対象について列挙し、ＰＫ集団の全ての対象について要約した。要約統計量（ｎ、平均値、ＳＤ、ＣＶ％、ＳＥＭ、最小値、中央値、最大値、幾何平均［ジオム（Ｇｅｏｍ）平均］、及び幾何ＣＶ％ ［ジオムＣＶ％］）を、全てのＰＫパラメータについて計算した。

算術平均値及び個々の全血及び血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量対時間及び血清［１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度対時間のプロファイルを、線形及び半対数目盛で提示した。算術平均及び個々の全血：血清のＴＲＡ分配比対時間のプロファイルを線形スケールで提示した。線形平均プロットは、ＳＤの有無にかかわらず提示した。

薬物動態結果
全血及び血清の総放射能ヒスチジン酸銅濃度当量、血清［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅濃度、及び全血：血清の総放射能分配比
健康な成人男性対象における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓの単回ＳＣボーラス投与後の算術平均全血及び血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量対時間プロファイル並びに血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度対時間プロファイルを半対数目盛で示す（図１）。

健康な成人男性対象における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ）の単回ＳＣボーラス投与後の算術平均全血及び血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量対時間プロファイル並びに血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度対時間プロファイルを半対数目盛で示す（図１）。

データは、図１に例示され、図１は、健康な成人男性対象（薬物動態集団）における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅の単回皮下ボーラス投与後の算術平均全血及び血清の総放射能プロファイル並びに血清［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅濃度－時間プロファイル（半対数目盛）を示す。

全血ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量は、全ての対象において、投与後０．２５時間（すなわち、最初のスケジュールされた投与後試料）まで定量化可能であり、全ての対象において、それらの最後の採取時点、すなわち、対象１～５の投与後１６８時間、及び対象６の投与後５０４時間まで定量化可能であり続けた。算術平均全血ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量は、投与後４時間まで上昇し、投与後４８時間まで５６．３３～６３．９０ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬの範囲に留まり、その後、投与後７２時間から投与後１６８時間での１００．９ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬの最高レベルまで再び上昇した。投与後５０４時間における６６．３ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬに相当する全血ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度は、対象６について得られたものである。

血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量は、全ての対象において、投与後０．２５時間まで定量化可能であり、全ての対象において、最後の採取時点、すなわち、対象１～５の場合は投与後１６８時間、対象６の場合は投与後５０４時間まで定量化可能であり続けた。算術平均血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量－時間プロファイルは、投与後８時間で９７．４３ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬでピークに達し、その後、多面的な仕方で低下した。投与後５０４時間での３０．７ｎｇ当量ＣｕＨｉｓ／ｍＬに相当する血清ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量は、対象６について得られたものである。

血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度は、全ての対象において、投与後０．２５時間までに定量化可能であり、投与後２４時間までは全ての対象において定量化可能であり、投与後１６８時間までは対象の少なくとも半数において定量化可能であり続けた。算術平均血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ濃度－時間プロファイルは、投与後０．７５時間で６３．４７ｎｇ／ｍＬでピークに達し、その後、多面的な仕方で低下した。表示されたように、多面的な減少は、半減期がおおよそ２～３時間と推定される最初の急速な減少（分布相）と、それに続く、ｔ１／２がおおよそ７５時間と推定される、より緩慢な見かけ上の終末排出相からなる。

健康な成人男性対象における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓの単回ＳＣボーラス投与後の算術平均全血：血清のＴＲＡ分配比率対時間プロファイルを以下の図に線形スケールで提示し、各投与後時点における算術平均（ＳＤ）比を以下の表４に提示する。

（表４）健康な成人男性対象（薬物動態集団）における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅の単回皮下ボーラス投与後の全血：血清の総放射能分配比の要約。

ＴＲＡ ＣｕＨｉｓ濃度当量は、全ての対象者について、投与後０．２５～１６８時間の全ての試料採取時刻において、全血及び血清の両方で定量化可能であり、算術平均全血：血清のＴＲＡ分配比は０．５８５６～２．３９２の範囲であった。分配比は、投与後０．２５～３６時間の０．５８５６～０．７４９８の範囲であり、次いで、投与後３６時間の０．７４９８から、投与後１６８時間の２．３９２まで増加した。対象６についてのみ、投与後５０４時間で試料を採取した。この時点での対象６の分配比は、２．１６であった。

全血及び血清の総放射能、並びに血清［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅の薬物動態パラメータ
健康な成人男性対象における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）の［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓの単回ＳＣボーラス投与後の全血及び血清のＴＲＡ及び血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓのＰＫパラメータの要約を以下の表５に提示する。

（表５）健康な成人男性対象（薬物動態集団）における３．０ｍｇ（約５００ｎＣｉ）［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅の単回皮下ボーラス投与後の、全血及び血清の総放射能並びに血清［^１４Ｃ］－ヒスチジン酸銅の薬物動態パラメータの要約

投与後最初の２４時間におけるＴＲＡへの曝露（ＡＵＣ_０－２４）は、全血中が血清中よりもおおよそ３４％低かった。投与後１６８時間まで、ＴＲＡへの曝露（ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}）は、全血中が血清中よりおおよそ２９％高かった。ＴＲＡ（Ｃ_ｍａｘ）へのピーク曝露は、全血及び血清において類似していたが、ｔ_ｍａｘ値は異なり、血清（中央値＝約８時間）よりも全血（中央値＝約１６８時間）においてはるかに遅く生じた。

投与後最初の２４時間における血清中のＴＲＡへの曝露のおおよそ９％は、［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓと関連していた（ジオム平均ＡＵＣ_０－２４比＝０．０９３１７）。血清［^１４Ｃ］－ＣｕＨｉｓ（約７５時間）の算術平均見かけ終端ｔ_１／２は、血清ＴＲＡ（約２５３時間）よりも短かった。

実施例６
幼若ラット毒物動態試験
この研究の目的は、出生後日数（ＰＮＤ）７から２１までの幼若Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットに１日２回皮下注射を行った場合のヒスチジン酸銅の忍容性を決定すること、及びその後の幼若毒性試験で使用する用量レベルの選択に関する情報を提供することであった。加えて、ヒスチジン酸銅の毒性動態特性を決定した。

この研究のための試験品は、ヒスチジン酸銅であり、以下の表６に記載される。
（表６）

ビヒクル対照品は、塩化ナトリウムであり、以下の表７に記載される。
（表７）

この研究のための動物は、Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ）Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットである。研究のＡ相には６匹の母獣（５匹の幼獣／性別／同腹の子）が必要であり、研究のＢ相には２８匹の母獣（６匹の幼獣／性別／同腹の子）が必要であった。

表８及び９で以下に示すように、研究－Ａ相及びＢ相に割り当てられた動物の数。
（表８）研究－Ａ相に割り当てられた動物の数

（表９）研究－Ｂ相に割り当てられた動物の数

Ａ相の実験設計を以下の表１０に示す。
（表１０）

Ｂ相（１４日）の実験設計を以下の表１１に示す。
（表１１）

投薬経路：皮下注射。刺激を最小限に抑えるために注射部位を回転させ、この手順の文書化を生データに記録した。背中の２つのおおよそ等しい領域に注射を行った（領域１と２；領域１は肩に最も近い、領域２は尾に最も近い）。各用量を、各動物について順番にこれらの領域に注射した（すなわち、第１の用量を領域１、第２の用量を領域２、第３の用量を領域１など）。

頻度：Ａ相：グループ１とグループ３～５：１日２回（おおよそ８時間間隔）グループ２：１日１回。Ｂ相：全てのグループ：１日２回（おおよそ８時間間隔）。

所要時間：Ａ相：ＰＮＤ７のみ。Ｂ相：ＰＮＤ１０から２４。

特別な手順：本研究のＡ相における用量投与は、各投与群について少なくとも５日間ずらして行われ、第１群と第２群の用量投与は同日に開始された。

実生活での手順、観察、測定。Ｆ０世代の母獣については、生存能力観察を少なくとも１日２回記録した。臨床観察は、少なくとも週に１回記録した。母性行動（例えば、巣作り、看護）は、検査施設に到着した当日又は翌日から毎日記録した。母親の体重は、少なくとも毎週及び安楽死の前（末期体重）に記録した。食物摂取量は測定されなかったが、食物をモニターして必要に応じて補充し、動物の健康と幸福をモニターした。Ｆ０世代のデータは報告されなかった。

以下に列挙する実生活での手順、観察、及び測定を、表８及び９に従って、Ｆ１世代の幼獣／ラットについて行った。本研究のＢ相に割り当てられた動物の食物摂取量は記録されなかったが、食物をモニターして必要に応じて補充し、動物の健康と幸福をモニターした。

Ａ相－一般実生活での評価
（表１２）

Ｂ相－一般実生活での評価
（表１３）

生物分析的試料解析：血清試料は、認定された分析手順を使用して、総銅及びセルロプラスミンの濃度について分析される。

毒物動態評価：パラメータ推定には、皮下投与経路に合致した非区画的アプローチを使用する。全てのパラメータは、実用的な限りＰＮＤ１０及び２４の総銅及びセルロプラスミン平均濃度から生成される。

（表１４）推定されるパラメータ

解釈を助けるために、部分的なＡＵＣ（定義された２つのサンプル時間の間）、及び対応する用量正規化値を導き出し、報告することができる。記述統計（例えば、数、算術平均、中央値、標準偏差、標準誤差、変動係数）は、適切とみなされるように報告される。ＴＫテーブル及びグラフも生成される。

本発明は、上記の実施例を参照して記載されているが、変更及び変形は、本発明の趣旨及び範囲内に包含されることを理解されたい。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。

Claims (40)

1. 凍結乾燥ヒスチジン酸銅と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
2. 前記薬学的に許容される担体は、生理食塩水である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記凍結乾燥ヒスチジン酸銅は、約２９００μｇ／ｍｌの濃度に再構成される、請求項２に記載の医薬組成物。
4. ヒスチジン酸銅と、薬学的に許容される担体とを含む、皮下剤形。
5. 前記ヒスチジン酸銅は、約２９００μｇ／ｍｌの濃度に再構成される、請求項４に記載の剤形。
6. ヒスチジン酸銅の安定凍結乾燥医薬製剤であって、
   水溶液を凍結乾燥することにより作られる前記製剤は、２モルのＬ－ヒスチジン及び１モルの塩化第二銅を含み、かつ水溶液において約７．０～７．５のｐＨに調整され、続いて前記溶液が凍結乾燥される、
   安定凍結乾燥医薬製剤。
7. 前記ヒスチジン酸銅は、前記水溶液中に約２９００μｇ／ｍＬで存在する、請求項６に記載の安定凍結乾燥医薬製剤。
8. 前記製剤は、約－１０～－２０℃、２～８℃、又は室温（１５～３０℃）で約１８カ月間安定である、請求項６に記載の安定凍結乾燥医薬製剤。
9. 請求項６に記載の製剤と、薬学的に許容される担体とを含む、バイアル。
10. 前記薬学的に許容される担体は、生理食塩水である、請求項９に記載のバイアル。
11. 前記製剤は、２ｍｌの生理食塩水中で約２９００μｇ／ｍｌの濃度に再構成される、請求項１０に記載のバイアル。
12. 前記製剤は、前記バイアル内に、５００ｕｇ元素銅／ｍｌの濃度で生理食塩水中に再構成された凍結乾燥ヒスチジン酸銅を含む、請求項１０に記載のバイアル。
13. 前記凍結乾燥ヒスチジン酸銅を生理食塩水中で再構成し、かつメンケス病又は銅欠乏症を有する対象に、前記対象が１歳になるまでは１日２回、前記対象が１歳になった後は１日１回、投与当たり０．５ｍｌの用量で皮下投与するための、指示書又はラベル
    を更に備える、請求項９～１２のいずれか一項に記載のバイアル。
14. 前記再構成された凍結乾燥ヒスチジン酸銅は、室温で少なくとも２４時間、又は２～８℃で少なくとも約７日間安定である、請求項９～１３のいずれか一項に記載のバイアル。
15. 前記メンケス病を有する対象は、ナンセンスバリアント、ミスセンスバリアント、イントロンバリアント、同義バリアント、スプライス領域バリアント、フレームシフトバリアント、スプライスアクセプターバリアント、５’ＵＴＲバリアント、スプライスドナーバリアント、重複バリアント、インフレーム欠失、全欠失、染色体転座、カノニカルスプライス部位変異、又はそれらの組み合わせから選択されるＡＴＰ７Ａ変異を有する、請求項１３に記載のバイアル。
16. 前記指示書は、前記対象におけるＡＴＰ７Ａ変異を同定するための遺伝子検査を実施することを含む、請求項１３に記載のバイアル。
17. 請求項６に記載の製剤と、薬学的に許容される担体とを含む、容器。
18. 前記担体は、生理食塩水である、請求項１７に記載の容器。
19. 前記凍結乾燥製剤及び前記生理食塩水は、前記容器内で分離されている、請求項１７に記載の容器。
20. 前記容器は、混合製剤を対象に注射する前に、前記製剤と、前記担体とを混合して前記混合製剤を形成するための２つのチャンバを備える、請求項１７に記載の容器。
21. 前記容器は、注射器、アンプル、又はバイアルである、請求項２０に記載の容器。
22. 対象における血清銅レベルを上昇させる方法であって、皮下又は経皮投与経路を介して前記対象にヒスチジン酸銅を投与することを含み、前記対象は、初回投与時に４週齢以下であり、それによって血清銅レベルを上昇させる、方法。
23. ヒスチジン酸銅は、皮下注射されるか、又は経皮投与のためにクリーム、ゲル、粉末、ローション、軟膏、リニメント、懸濁液、ミクロエマルション、ナノエマルション、及び／若しくはリポソーム内に組み込まれる、請求項２２に記載の方法。
24. 前記投与経路は、経皮パッチによる、請求項２２に記載の方法。
25. シクロデキストリンを更に含む、請求項２２に記載の方法。
26. １種以上の経皮透過性剤を更に含む、請求項２２に記載の方法。
27. 皮下的又は経皮的に送達される前記銅の量は、約１００μｇ～３０００μｇの元素銅に等しい、請求項２２に記載の方法。
28. 前記送達される銅の量は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、３０００μｇの元素銅、３５００μｇの元素銅、４０００μｇの元素銅、４５００μｇの元素銅、又は５０００μｇの元素銅から選択される、請求項２７に記載の方法。
29. ヒスチジン酸銅と、薬学的に許容される担体とを含む、経皮剤形。
30. 前記ヒスチジン酸銅は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、３０００μｇの元素銅、３５００μｇの元素銅、４０００μｇの元素銅、４５００μｇの元素銅、又は５０００μｇの元素銅から送達するのに十分な濃度で存在する、請求項２９に記載の剤形。
31. 前記剤形は、経皮パッチである、請求項２９に記載の経皮剤形。
32. 前記剤形は、電気刺激又はイオン導入とともに投与される、請求項２９に記載の経皮剤形。
33. 対象の血清ヒスチジン酸銅レベルを増加させる方法であって、投与後約１／２時間～１時間の血清中のヒスチジン酸銅のピーク検出可能レベルで、皮下投与経路を介して前記対象にヒスチジン酸銅を投与し、それによって前記対象の血清ヒスチジン酸銅レベルを増加させることを含む、方法。
34. 前記ヒスチジン酸銅分布相半減期は、約２～３時間である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記終末排出相半減期ｔ_１／２は、約３０～１５０時間である、請求項３３に記載の方法。
36. 前記終末排出相半減期ｔ_１／２は、約７５時間である、請求項３５に記載の方法。
37. 前記対象は、初回投与時に４週齢以下である、請求項３３に記載の方法。
38. 投与は、約１００μｇの元素銅、２５０μｇの元素銅、５００μｇの元素銅、１０００μｇの元素銅、１５００μｇの元素銅、２０００μｇの元素銅、２５００μｇの元素銅、３０００μｇの元素銅、３５００μｇの元素銅、４０００μｇの元素銅、４５００μｇの元素銅、又は５０００μｇの元素銅である、請求項３３に記載の方法。
39. ヒスチジン酸銅の投与は、前記対象が１歳未満の場合は１日に約１４５０μｇが２回であり、前記対象が１歳を超える場合は１日に約１４５０μｇが１回である、請求項３３に記載の方法。
40. 前記対象は、メンケス病又は他の銅欠乏症を有する、請求項３３に記載の方法。

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