CN117042764A - 组氨酸铜组合物和其用途 - Google Patents

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Abstract

门克斯病是一种由必须哺乳动物铜转运基因ATP7A中的突变引起的X连锁隐性脑铜代谢病症，其在美国影响大约200至400位个体。使用了铜替代疗法以治疗门克斯病。本公开示出了对门克斯病的治疗。本公开示出了用组氨酸铜对门克斯病患者的治疗增加了所述患者的生存期。

Description

组氨酸铜组合物和其用途
相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求于2021年3月18日提交的美国序列号63/162,975的优先权权益，所述申请的整个内容通过引用以其整体并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及提高血清铜水平的方法，并且更具体地涉及通过施用组氨酸铜对受试者的门克斯病(Menkes Disease)或铜缺乏症进行的治疗。
背景技术
门克斯病是一种由必须哺乳动物铜转运基因ATP7A中的突变引起的X连锁隐性脑铜代谢病症，其在美国影响大约200至400位个体。估计发病率为1/100,000例活产。未经治疗的受影响的个体会出现明显的神经系统症状，如癫痫、张力减退、发育不良和神经发育迟缓，这些神经系统症状通常开始于6周龄至8周龄。三岁前死亡是这种未经治疗的病症的典型结果。
在过去的25年内，对门克斯病的悲惨自然史进行了密切观察，所述门克斯病是一种由铜转运ATP酶ATP7A中的不同突变引起的X连锁隐性铜转运病症。出生时和生命的前两个月看起来健康的婴儿开始失去其早期发育里程碑(微笑、抬头、眼睛跟随)，出现癫痫，并且开始出现不可避免的体质下降，这通常导致在三岁之前过早死亡。
这种病状的临床和病理特征反映了通常需要铜作为辅助因子的酶的缺乏。这些酶包含多巴胺-β-羟化酶(DBH)、细胞色素c氧化酶(CCO)、超氧化物歧化酶(SOD)、赖氨酸氧化酶(LO)和酪氨酸酶。受影响的婴儿通常在出生时表现健康，并且正常进展3个月至4个月；然而，随后的神经发育被阻滞，并且失去早期里程碑(微笑、视觉跟踪、头部控制、翻滚)是很常见的。出现大脑和小脑萎缩以及髓鞘形成障碍，通常伴随有癫痫。另外的临床特征包含发育不良以及不寻常的结缔组织异常(归因于LO缺乏)：皮肤和关节松弛、泌尿膀胱憩室、漏斗胸、全身性血管曲折和多发肋骨骨折。通常存在皮肤和头发色素沉着减少，这与酪氨酸酶缺乏有关。另外，有症状的受影响的婴儿的头发具有钢丝绒状质地，并且在通过光显微术进行检查时，单独毛发轴显示出扭曲发(180°扭曲)。后一种特征的基础尚不确定，并且可能涉及角蛋白交联所需的尚未描述的铜酶。
门克斯病的生化表现包含由于肠道吸收受损导致的血浆中的铜浓度低，以及肝和脑铜低。然而，在这种病症中，某些其它组织(十二指肠粘膜、肾、脾、胰腺、骨骼肌、胎盘)往往会使铜积聚。铜积聚表型在所培养的纤维母细胞和淋巴母细胞中也很明显，在所培养的纤维母细胞和淋巴母细胞中，放射性标记的铜的过量保留可在脉冲追逐实验中得到证明。这种生化和细胞表型表示铜流出方面的主要缺陷，并且与门克斯蛋白在细胞内定位到反面高尔基体网络和质膜两者的证据一致。反面高尔基体定位有助于解释门克斯患者的某些铜酶缺乏症，例如，DBH、LO，并且酪氨酸酶是在内质网中合成的，并且通过反面高尔基体分泌通路进行加工。在此加工期间中，可能通过脱辅酶而掺入铜。在正常细胞装载铜之后ATP7A再定位到质膜上表明，这种基因产物也是如何正常介导铜排出的。更最近的数据表明，ATP7A通常对脑中N-甲基-D-天冬氨酸受体活化作出应答，并且受损的应答可能导致门克斯病的神经病理学。
在配置针对门克斯病的治疗策略时，必须解决几个问题：(a)必须鉴定受影响的婴儿，并且在生命早期在不可修复的神经变性发生之前开始治疗，(b)必须绕过铜的肠道吸收方面的障碍，(c)必须将循环的铜递送到脑部，以及(d)铜必须可用于细胞内需要其作为辅助因子的酶。最近对血浆儿茶酚水平提供了另外无症状的新生儿的门克斯病的可靠诊断标志物的认识显著有助于早期识别，并且可以通过施用铜注射剂来克服胃肠水平的主要转运障碍。然而，血-脑屏障构成了更具挑战性的阻碍，并且铜向脑部的递送与脑中的铜酶活性的恢复仍然是一个重大阻碍。由于门克斯同源物的表达已在啮齿动物星形胶质细胞，即(与脑毛细管内皮细胞一起)导致血-脑屏障的细胞，中得到证明，因此似乎很可能铜到脑部的转运会利用门克斯转运体。
发明内容
本发明是基于这样的开创性发现，即用组氨酸铜对门克斯病受试者的治疗会增加受试者的生存期。具体地，在出生的前四周内(“早期治疗”)或之后(“晚期治疗”)诊断出受试者的门克斯病或其它铜缺乏症并且用组氨酸铜治疗所述门克斯病或其它铜缺乏症会使受试者的生存期增加。组氨酸铜是一种恢复铜稳态的药物疗法，并且可以皮下注射(SC)以绕过门克斯病患者或患有铜缺乏症的患者通过胃肠道吸收铜的缺陷。
在一个实施例中，本发明提供了一种通过以约z的剂量向患有门克斯病的受试者施用组氨酸铜来增加所述受试者的生存期，例如增加至少约50％的方法。在一方面中，所述受试者在初始施用时为四周大或更小。在一方面中，所述受试者为四周大或更小、小于一岁或大于一岁。在另一方面中，所述施用为每天一次或每天两次。在一另外的方面中，所述组氨酸铜每天一次或每天两次以约1450施用。在一进一步方面中，所述受试者具有ATP7A基因中的突变。在各个方面中，所述ATP7A基因中的突变为无义变体(获得终止)、错义变体、内含子变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位或其组合。在一方面中，生存期增加了至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一另外的方面中，增加的生存期为增加至少约1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年或更多年。
在一另外的实施例中，本发明提供了一种通过以下来提高受试者的血清铜水平的方法：以约1000-8900μg/天的剂量向所述受试者施用组氨酸铜，由此提高血清铜水平，其中所述受试者在初始施用时为四周大或更小。在一方面中，所述受试者为四周大或更小、小于一岁或大于一岁。在另一方面中，所述施用为每天一次或每天两次。在一另外的方面中，对于每天一次给药，所述组氨酸铜以约1450μg/天施用，并且对于每天两次给药，所述组氨酸铜以2900μg/天施用。在一进一步方面中，所述施用为通过皮下注射。在一方面中，所述受试者患有门克斯病。在一进一步方面中，所述受试者具有ATP7A基因中的突变。在各个方面中，所述ATP7A基因中的突变为无义变体(获得终止)、错义变体、内含子变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位或其组合。在某些方面中，监测所述受试者的血清铜、血清铜蓝蛋白、血清碳酸氢盐、血清肌酐和/或尿β-2微球蛋白水平。在各个方面中，在施用所述组氨酸铜之前，所述受试者的所述血清铜水平小于约75ug/dl。在一方面中，在施用组氨酸铜之后，患者的血清铜水平将为至少约85μg/dl。
在一进一步实施例中，本发明提供了一种由经冻干的组氨酸铜和药学上可接受的载体构成的药物组合物。在一方面中，所述药学上可接受的载体为盐水。在一另外的方面中，所述经冻干的组氨酸铜是用盐水复原的。在一进一步方面中，经复原的组氨酸铜的浓度为约2900μg/ml。
在一个实施例中，本发明提供了一种由组氨酸铜构成的稳定的经冻干的药物调配物，其中所述调配物，其是通过以下制备的：将水溶液冻干，所述水溶液包括2摩尔L-组氨酸和1摩尔氯化铜，并且以水溶液的形式被调整至约7.0-7.5，例如7.35的pH，然后将所述溶液冻干。在一方面中，所述组氨酸铜以约2900μg/mL存在于所述水溶液中。在一另外的方面中，所述调配物在大于两个月并且优选地在至少约18个月内是稳定的。
在一另外的实施例中，本发明提供了一种小瓶，其包括由组氨酸铜和药学上可接受的载体构成的调配物，其中所述调配物是通过以下制备的：将水溶液冻干，所述水溶液包括2摩尔L-组氨酸和1摩尔氯化铜，并且以水溶液的形式被调整至约7.0至7.5的pH，然后将所述溶液冻干。在一方面中，所述pH为约7.35。在一方面中，所述药学上可接受的载体为盐水。在一另外的方面中，所述调配物在2ml盐水中被复原为约2900μg/ml的浓度。在一进一步方面中，所述调配物包括经冻干的组氨酸铜，所述经冻干的组氨酸铜是在所述小瓶中在盐水中以500μg元素铜/ml的浓度复原的。在某些方面中，所述小瓶进一步包括用于在盐水中复原所述经冻干的组氨酸铜并且以每次施用0.5ml(或cc)的剂量如下皮下施用于患有门克斯病的受试者的说明书：在所述受试者为一岁之前每天两次(1450μg)并且在所述受试者为一岁之后每天一次。在一方面中，所述经冻干的组氨酸铜在室温下在至少24小时内或在约2-8℃下在至少约7天、2周、一个月、两个月或大于两个月内是稳定的。在某些方面中，所述经冻干的组氨酸铜在室温下在至少24小时内或在约4℃下是稳定的。在某些方面中，所述经冻干的调配物在约-10℃至-20℃、2℃至8℃或室温(15℃至30℃)下在约18个月内是稳定的。在某些方面中，所述患有门克斯的受试者具有ATP7A突变，所述ATP7A突变选自无义变体、错义变体、内含子变体、同义变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位、典型剪接位点突变或其组合。
在另一实施例中，提供了一种通过经皮施用途径向受试者施用组氨酸铜来提高所述受试者的血清铜水平的方法。举例来说，将所述组氨酸铜掺入在乳膏、凝胶、粉末、洗液、软膏、搽剂、悬浮液、微乳剂、纳米乳剂和/或脂质体内。在一优选方面中，所述施用途径为通过经皮贴片。在一方面中，所述经皮贴片包含环糊精。
在一些方面中，所述经皮贴片包含一种或多种经皮渗透剂。在一方面中，经皮递送的铜的量相当于约100μg至3000μg元素铜。在一方面中，递送的铜的量选自约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜或3000μg元素铜。在一方面中，剂量为每天约1000μg至8900μg组氨酸铜；例如每天1450μg或2900μg组氨酸铜。
在另一实施例中，本发明提供了一种经皮剂型，其包括组氨酸铜和药学上可接受的载体。在一方面中，所述剂型包含以足以递送以下的浓度存在的组氨酸铜：约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜或3000μg元素铜。在一方面中，所述经皮剂型为经皮贴片。在一方面中，剂量为每天约1000μg至8900μg组氨酸铜；例如每天1450μg或2900μg组氨酸铜。
在又另一实施例中，本发明提供了一种容器，其具有两个室，以将粉末状药物，在此实例中为经冻干的组氨酸铜，与如盐水等稀释剂混合，之后通过粘附到所述容器上的针将经混合的成分注射到受试者体内。所述容器可以为注射器、小瓶、安瓿等。
在另一实施例中，本公开提供了一种提高受试者的血清组氨酸铜水平的方法，所述方法包含通过皮下施用途径将组氨酸铜施用于所述受试者，由此提高所述受试者的血清组氨酸铜水平，其中在施用后约1/2小时至1小时血清中的组氨酸铜达到峰值可检测水平。在一方面中，所述受试者患有铜缺乏症，如门克斯病。在一方面中，组氨酸铜分布阶段半衰期为约2-3小时。在一方面中，终末消除阶段半衰期t1/2为约30-150小时。在一方面中，终末消除阶段半衰期t1/2为约75小时。在一方面中，所述受试者在初始施用时为四周大或更小。在一方面中，施用为约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜、3000μg元素铜、3500μg元素铜、4000μg元素铜、4500μg元素铜或5000μg元素铜。在另一方面中，当所述受试者小于一岁时，组氨酸铜的施用为每天两次，每次约1450μg，并且当所述受试者大于一岁时，组氨酸铜的施用为每天一次，每次约1450μg。
附图说明
图1示出了在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-组氨酸铜的单次皮下团注给药之后的算术平均全血和血清总放射性以及血清[14C]-组氨酸铜浓度-时间谱(半对数尺度)(药代动力学群体)。
具体实施方式
本发明是基于这样的开创性发现，即用组氨酸铜对门克斯病受试者的早期治疗会增加受试者的生存期。在一方面中，用组氨酸铜治疗出生四周内的门克斯病患者使中位总生存期显著增加，但是出生4周后进行的治疗也使患有铜缺乏症的患者的生存期增加。
在描述本发明的组合物和方法之前，应理解本发明不限于所描述的特定组合物、方法和实验条件，因为此类组合物、方法和条件可以变化。还应理解，本文中所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，并且不旨在为限制性的，因为本发明的范围仅受所附权利要求限制。
如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个(a)”、“一种(an)”以及“所述(the)”包含复数指代物。因此，例如，对“所述方法”的提及包含本文所描述的类型的一种或多种方法和/或步骤，在阅读本公开等后，所述一种或多种方法和/或步骤对于本领域的技术人员而言将变得显而易见。
本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被专门地且单独地指示为通过引用并入。
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但应理解，修改和变化涵盖在本公开的精神和范围内。现在描述优选方法和材料。
门克斯病是一种伴有X连锁隐性遗传的神经退行性疾病。口服施用的铜积聚在肠中，从而导致铜吸收不足。导致铜积聚在肠中的原发性代谢缺陷存在于几乎所有肝外组织中。血液、肝脏和大脑都处于铜缺乏状态，所述铜缺乏是由于缺陷性铜吸收造成的。因此，在一方面中，通过静脉内施用或皮下施用来施用组氨酸铜。在一个实施例中，本发明提供了一种通过以约1450-8900μg的剂量向患有门克斯病的受试者施用组氨酸铜来使所述受试者的生存期增加至少约50％的方法，其中所述受试者在初始施用时为四周大或更小。在一方面中，所述受试者为四周大或更小、小于一岁或大于一岁。在另一方面中，所述施用为每天一次或每天两次。在一另外的方面中，当受试者小于12个月大时，组氨酸铜以约1450μg/每天两次施用，并且当受试者大于一岁时，组氨酸铜以1450μg/天施用。在一进一步方面中，所述受试者具有ATP7A基因中的突变。在各个方面中，所述ATP7A基因中的突变为无义变体(例如，获得终止)、错义变体、内含子变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位或其组合。在一方面中，生存期增加了至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一另外的方面中，增加的生存期为增加至少约1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年或更多年。
门克斯病为一种影响铜的代谢和/或转运的遗传性病症。患有此病的患者是身体上和/或精神上丧失能力的。门克斯病的发作通常发生在生命的前2-3个月。出生患有疾病的婴儿发育不良，经历低温，发育迟缓，并且出现癫痫。这些婴儿还具有特征性身体特征，如其头发和面部发生变化。女性患者的头发和皮肤颜色还可能发生变化。
在一方面中，对门克斯病的早期诊断和治疗提高了受试者存活的可能性。门克斯病通常是基于临床特征、医学检查和对ATP7A基因中的改变的基因测试诊断的。临床特征包含神经系统症状，如癫痫、腭形态异常、腹壁肌肉系统不发育/发育不全、发育消退、扩张和干皮。可能有帮助的其它类型的测试包含对血液中的儿茶酚胺和铜水平的分析。在一方面中，受试者在出生后至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、60天、70天、80天、90天或100天或更多天时被诊断出患有门克斯病。在另一方面中，受试者在出生后至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周或24周或更多周时被诊断出患有门克斯病。在一进一步方面中，受试者在至少约0.5月龄、1.0月龄、1.5月龄、2月龄、2.5月龄、3月龄、3.5月龄、4月龄、4.5月龄、5月龄、5.5月龄、6月龄、6.5月龄、7月龄、7.5月龄、8月龄、8.5月龄、9月龄、9.5月龄、10月龄、10.5月龄、11月龄、11.5月龄、12月龄、18月龄、24月龄、30月龄或36月龄或更多月龄时被诊断出患有门克斯病。
对门克斯病的适当治疗需要在早期诊断疾病，并且在发生不可逆的脑损伤之前开始治疗。生命的第一年对脑部发育尤为关键。治疗的目的是绕过通过胃肠道吸收铜的正常途径。然后，铜必须被递送到脑细胞中，并且可用于供酶使用。在一另外的方面中，在出生后约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、50天、60天、70天、80天、90天或100天或更多天时向受试者施用初始剂量的组氨酸铜。在一进一步方面中，在出生后约一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周、九周、十周、十一周、十二周向受试者施用初始剂量的组氨酸铜。在一进一步方面中，在约0.5月龄、1.0月龄、1.5月龄、2月龄、2.5月龄、3月龄、3.5月龄、4月龄、4.5月龄、5月龄、5.5月龄、6月龄、6.5月龄、7月龄、7.5月龄、8月龄、8.5月龄、9月龄、9.5月龄、10月龄、10.5月龄、11月龄、11.5月龄、12月龄、18月龄、24月龄、30月龄或36月龄或更多月龄时向受试者施用初始剂量的组氨酸铜。在一方面中，向受试者施用组氨酸铜，持续约至少0.1年、0.2年、0.3年、0.4年、0.5年、1年、1.5年、2年、2.5年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或多于10年。在一另外的方面中，每天向受试者施用两个剂量的组氨酸铜。在某些方面中，在年龄的前12个月每天向受试者施用两个剂量的组氨酸铜。在一进一步方面中，每天向受试者施用一个剂量的组氨酸铜。举例来说，在一岁之前，每天两次向受试者施用约1450μg组氨酸铜，或每天施用约2900μg，并且在受试者为约一岁时，施用为每天1450μg组氨酸铜。
组氨酸铜，即药物组合物中的活性物质，的pH为大约7.0-7.5。分子式为C12H18CuN6O4，其中分子量为373.86g/摩尔。相反，组氨酸铜可以直接注射到体内，以避免通过胃肠道吸收。然而，研究显示，导致门克斯病的基因异常不可以简单地通过铜替代注射剂来纠正。在本文所述的研究中，1450μg组氨酸铜相当于250μg元素铜；5800μg组氨酸铜相当于约1000μg元素铜；8850μg组氨酸铜相当于约1500μg元素铜。
如本文所用，术语“生存期”或“总生存期”可互换使用，并且是指从出生日期、诊断日期开始或针对如门克斯病等疾病的治疗开始被诊断出患有疾病的患者仍活着的时间长度。在临床试验中，测量总生存期是一种了解新治疗如何很好起作用的方式。具体地，生存期增加是指相较于未接受组氨酸铜的门克斯患者，接受组氨酸铜治疗的患者活着的时间长度增加。中位生存期是队列中的50％的患者死亡并且50％存活之后的时间量。
在某些方面中，生存期增加至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在另外的方面中，增加的生存期为至少约1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18或更多年。
术语“…的施用”和或“施用”应被理解为意指向需要治疗的受试者提供治疗有效量的药物组合物。施用途径可以是肠内、局部或肠胃外。因此，施用途径包含但不限于皮内、皮下、静脉内、腹膜内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、经皮、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内、口服、舌下、经颊、直肠、阴道、鼻、眼施用以及输注、吸入和雾化。在一方面中，施用为通过皮下施用。
施用的组氨酸铜的剂量和频率取决于受试者的年龄。在一方面中，受试者低于一岁并且每天两次施用组氨酸铜。在一另外的方面中，受试者<12个月并且每天两次施用组氨酸铜。在一另外的方面中，受试者超过一岁并且每天一次施用组氨酸铜。在一进一步方面中，受试者>12个月并且每天一次施用组氨酸铜。在某些方面中，向患者施用1450-8900μg组氨酸铜。在特定方面中，每天向受试者施用1450μg组氨酸铜。在另一方面中，每天向受试者施用5800μg组氨酸铜。在一进一步方面中，每天向受试者施用8850μg组氨酸铜。在一些方面中，以相当于每天250μg元素铜、1000μg元素铜或1500μg元素铜的量向受试者施用组氨酸铜。
出于几种原因，经皮或跨黏膜药物递送是一种很有吸引力的药物递送途径。避免了胃肠药物降解和肝脏首过效应。另外，经皮或跨黏膜药物递送非常适合于受控的、持续的递送(参见例如Elias,于经皮吸收：机制-方法-药物递送(Percutaneous Absorption:Mechanisms-Methodology-Drug Delivery)中,Bronaugh和Maibach编辑,第1-12页,纽约的马塞尔·德克尔(Marcel Dekker,New York),1989)。对于许多应用，施用药物的传统方法不是最佳的，因为药物的初始浓度非常大。经皮递送可以使药物的递送的速率更均匀、更慢。此外，由于这种递送方法易于使用，舒适，方便并且无创，因此鼓励患者依从。
已经提出了几种方法来增强药物的经皮运送。例如，使用了化学增强剂(Burnette,R.R.于开发问题和研究倡议(Developmental Issues and ResearchInitiatives)中；Hadgraft J.编辑,马塞尔·德克尔:1989；第247-288页)离子电渗和其它方法。
典型地，离子电渗是通过将含有离子药物溶液的电极放置成在药物要运送的位置处与皮肤接触来实现的。将第二电极靠近第一电极放置在皮肤上，并且施加电压以便于使电流穿过皮肤，由此完成电极之间的电路。随着电流流动，离子药物分子在第二电极的影响下迁移穿过皮肤。电极设计的一个一般类别涉及使用与将药物溶液引入到其中的隔室或囊袋相关联的导电元件。囊袋的一个壁通常包括可渗透屏障，所述可渗透屏障起到遏制溶液的作用，但允许药物离子穿过。这种电极的实例可见于美国专利第4,250,878号、第4,419,092号和第4,477,971号等中。
电极设计的第二类别涉及使用与凝胶材料相关联的导电元件，所述凝胶材料用于在不使用囊袋的情况下遏制经电离的药物。这种生物电极的实例在美国专利第4,383,529号、第4,474,570号和第4,747,819号中找到。通常，这些凝胶型电极在制造时将经电离的药物掺入到凝胶中。
电极设计的第三类型通常利用与可水合元件相关联的导电元件。可水合元件通常是由干燥的交联的水凝胶，如交联的聚乙烯氧化物(PEO)的片的堆叠形成的。分配给阿尔扎公司(Alza)的美国专利第6,169,920号和第6,317,629号公开了离子电渗药物递送装置。分配给Iomed公司(Iomed)的美国专利第5,087,242号、第5,374,241号、第5,730,716号、第6,731,977号公开了用于药剂的离子电渗递送的电极和装置。分配给三星电机公司(SamsungElectro-Mechanics Co.)的美国专利第5,681,580号公开了一种用于胰岛素的离子电渗经皮用药的贴片型装置。在Avrahami公司(Avrahami)的美国专利第6,148,232号中公开了一种不同类型的经皮递送装置。所述装置包含多个电极和一个电源，所述多个电极施加在受试者的皮肤上的相应点处，所述电源在电极中的两个或更多个电极之间施加电能，以引起角质层的烧蚀，主要引起相应电极下方的角质层的烧蚀，并且产生微通道。描述了用于限制对角质层的烧蚀的各种技术，包含电极的间距和监测相邻电极之间的皮肤的电阻。Sintov等人(《受控释放杂志(J.Controlled Release)》89:311-320,2003)和Avrahami公司的美国专利第6,597,946号；第6,611,706号；第6,708,060号；以及第6,711,435号公开了改进之处和用于烧蚀角质层并且产生微通道以便于促进经皮传递物质穿过皮肤的额外装置。所述装置旨在减少微通道产生期间的感觉并且使对角质层下方的皮肤的损伤最小化。
在被动经皮递送期间，使用跨屏障的浓度梯度(例如，通过手动扩散穿过皮肤)将活性剂递送到哺乳动物体内。例如，含有高浓度的药物的贴片可以附着到患者的皮肤上。可以使用电以促进药物运送穿过皮肤屏障。在电辅助下，对膜施加电位(电压)以促进药物运送。在经皮离子渗透疗法中，通过所施加的电位梯度将经电离的药物转移到皮肤中。阴离子药物是在负电极(带负电的电极)下被递送到皮肤中的，而阳离子药物是在正电极(带正电的电极)下递送的。离子渗透疗法可以增强离子材料进入到皮肤中的渗透性，并且可以更好地控制。离子电渗装置的最常见设计包含电源(例如，电池)、电气控制机制和两个单独的导电电极。
根据本发明，组氨酸铜的经皮递送可以以多种形式中的任何形式来完成。在一些实施例中，将包括组氨酸铜的纳米颗粒或其它组合物掺入在乳膏、凝胶、粉末或洗液中，使得通过施涂于皮肤而将组氨酸铜施用于受试者。在一些实施例中，将包括组氨酸铜的组合物掺入在软膏和/或搽剂内，使得通过施涂于皮肤而将治疗剂施用于受试者。在一些实施例中，将包括组氨酸铜的组合物掺入在悬浮液、微乳剂、纳米乳剂和/或脂质体内，使得通过施涂于皮肤而将组氨酸铜施用于受试者。在一些实施例中，将组合物掺入在经皮贴片内，使得将组氨酸铜由贴片施用于受试者。本发明的实施例还提供了一种贴片，其用于经皮递送包括治疗有效量组氨酸铜的组合物。在一个实施例中，本发明提供了一种贴片，其用于经皮递送包括治疗有效量的组氨酸铜的组氨酸铜，其中所述组合物进一步包括环糊精。
在某些实施例中，本发明的贴片进一步包括含组氨酸铜的组合物，所述含组氨酸铜的组合物包括一种或多种经皮渗透剂。因此，在各个实施例中，本发明提供了一种贴片，其用于经皮递送本发明的药物组合物，所述药物组合物包括来自组氨酸铜的治疗有效量的铜。进一步地，在这些和相关实施例中，所述贴片可以被配置成用于各种药物组合物的离子电渗经皮递送，并且可包含电极和所述药物组合物的储器。在一些实施例中，经皮递送的铜的量相当于约100μg至3000μg元素铜；例如，100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜或3000μg元素铜。
门克斯病是由ATP7A基因的致病性突变引起的。ATP7A基因提供了用于制备铜转运蛋白的说明书，所述铜转运蛋白对于调节体内的铜水平很重要。铜是许多细胞功能所必需的，但在以过量存在时是有毒的。除了在肝细胞中，ATP7A蛋白存在于全身中。在小肠中，这种蛋白质有助于控制从食物中吸收铜。在其它细胞中，ATP7A蛋白具有双重作用，并且在两个细胞位置之间穿梭。所述蛋白质通常驻留在被称为高尔基体的细胞结构中，所述高尔基体修饰新产生的蛋白质，包含酶。在高尔基体中，ATP7A蛋白供应用于某些酶的铜，这些酶对于骨骼、皮肤、头发、血管和神经系统的结构和功能至关重要。然而，在细胞环境中的铜水平升高的情况下，ATP7A蛋白移动到细胞膜，并且从细胞中清除过量的铜。
基因突变是构成基因的DNA序列的永久性改变，使得序列与大多数人体内存在的序列不同。突变的大小变化；其可能影响任何地方，从单个DNA构建块(碱基对)到包含多个基因的大段染色体。基因突变的类型的实例包含错义变体、内含子变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、无义(获得终止)、框内缺失、大缺失、重复和染色体易位。
错义突变或变体是其中单个核苷酸变化产生编码蛋白质序列中的不同氨基酸残基的密码子的点突变。
内含子突变或变体是在基因的内含子的情况下发生的突变。内含子平均占基因的总长度的约40％，这意味着大多数随机发生的突变都会落入到内含子区中，并且不影响蛋白质序列和功能。
剪接区突变或变体是DNA序列中发生在外显子和内含子的边界(剪接位点)处的遗传改变。这种变化可能破坏信使RNA剪接，从而导致外显子的丢失或内含子的包含以及蛋白质编码序列的改变。
移码突变或变体，这是由DNA序列中不可被三整除的数量的核苷酸的插入缺失(插入或缺失)引起的基因突变。由于由密码子进行的基因表达的三重性质，插入或删除可能改变阅读框(密码子的分组)，从导致与原始翻译完全不同的翻译。序列中越早出现缺失或插入，蛋白质改变就越多。移码突变通常将导致突变后对密码子的读取，以编码不同的氨基酸。移码突变还将改变序列中遇到的第一个终止密码子(“UAA”、“UGA”或“UAG”)。产生的多肽可能短得不正常或长得不正常，并且将很可能不起作用。
5'UTR突变或变体是指5'非翻译区(5'UTR)(还被称为先导序列或先导RNA)是mRNA的直接位于起始密码子上游的区的突变。此区对于由病毒、原核细胞和真核细胞中的不同机制对转录物的翻译的调节来说很重要。已经发现5'UTR与和代谢相关的蛋白质相互作用，并且蛋白质翻译5'UTR内的序列。另外，此区参与转录调节。5'UTR内的调节元件也与mRNA输出有关。
剪接位点突变是在前体信使RNA加工为成熟信使RNA期间在剪接发生的特定位点中插入、缺失或改变一定数量的核苷酸的基因突变。驱动外显子识别的剪接位点共有序列位于内含子的最末端处。剪接位点的缺失导致一个或多个内含子保留在成熟mRNA中，并且可能导致异常蛋白质的产生。当剪接位点突变发生时，mRNA转录本具有来自这些内含子的信息，这些信息通常不应被包含在内。内含子应被去除，而外显子则进行表达。
无义(获得终止)是一种导致过早终止密码子(获得了终止)的突变，所述过早终止密码子是翻译结束的信号。这种中断导致蛋白质被异常缩短。丢失的氨基酸的数量决定了对蛋白质功能的影响以及无论如何其是否将起作用。
框内缺失涉及至少3个DNA碱基(其可以更多并且通常是3的倍数)，去除整个密码子并且因此可能导致从蛋白质中氨基酸的缺失，例如框内缺失。
进一步地，所述基因可能由于染色体易位而发生突变，所述染色体易位是一种类型的染色体异常，在染色体异常中，染色体断裂并且其一部分重新附接到不同染色体或其一部分。
在一另外的实施例中，本发明提供了一种通过以下来提高受试者的血清铜水平的方法：以每天约1450-8900μg的剂量向所述受试者施用组氨酸铜，由此提高血清铜水平，其中所述受试者在初始施用时为四周大或更小。在一方面中，所述受试者为四周大或更小、小于一岁或大于一岁。在另一方面中，所述施用为每天一次或每天两次。在一另外的方面中，所述组氨酸铜每天一次或每天两次以约1450μg施用。在一进一步方面中，所述施用为通过皮下注射。在一方面中，所述受试者患有门克斯病。在一进一步方面中，所述受试者具有ATP7A基因中的突变。在各个方面中，ATP7A基因中的突变为错义变体、内含子变体、同义变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、无义(获得终止)、复制变体、框内缺失、大缺失、染色体易位或其组合。在某些方面中，监测所述受试者的血清铜、血清铜蓝蛋白、血清碳酸氢盐、血清肌酐和/或尿β-2微球蛋白水平。在各个方面中，在施用所述组氨酸铜之前，所述受试者的所述血清铜水平小于75ug/dl。在一方面中，在向受试者施用组氨酸铜之后，受试者的血清铜水平将为至少约85μg/dl。
在一方面中，受试者具有正常水平的血清铜，并且组氨酸铜的施用将血清铜的水平提高到高于正常水平。在一另外的方面中，受试者具有低水平的血清铜，并且组氨酸铜的施用将血清铜的水平提高到正常水平或高于正常水平。在一方面中，正常血清铜水平为约85-180μg/dl。在一另外的方面中，具有<85μg/dl的低血清铜水平的受试者。在一具体方面中，受试者的血清铜水平<75μg/dl。在一进一步方面中，受试者患有导致或引起低血清铜水平的疾病或病症。在某些方面中，所述疾病或病症为门克斯病。
在施用组氨酸铜之后，监测血清铜、血清铜蓝蛋白、血清碳酸氢盐、血清肌酐的水平和/或尿β-2微球蛋白水平。在某些方面中，测量组氨酸铜的水平、血清铜、血清碳酸氢盐、血清铜蓝蛋白、血清肌酐的水平和/或尿β-2微球蛋白水平，以确定水平是高于还是低于正常水平。在一方面中，正常血清铜水平为约85-180μg/dl。在一另外的方面中，低血清铜水平为<85μg/dl。在一具体方面中，受试者的血清铜水平<75μg/dl。在一些方面中，正常血清碳酸氢盐水平为22-29毫摩尔/L。在某些方面中，低血清碳酸氢盐水平为<22毫摩尔/L，并且高血清碳酸氢盐水平为>29毫摩尔/L。在一方面中，低血清碳酸氢盐水平为<12毫摩尔/L。在一方面中，正常血清肌酐水平为0.2-0.4mg/dl。在各个方面中，低血清肌酐水平为<0.2mg/dl，并且高血清肌酐水平为>0.4mg/dl。在一些方面中，高血清肌酐水平为>0.5mg/dl。在某些方面中，正常尿β-2微球蛋白水平为约0-0.3mg/L。在各个方面中，正常血清铜蓝蛋白水平为20-35mg/dl。在一方面中，低血清铜蓝蛋白水平为<20mg/dl。在某些方面中，高血清铜蓝蛋白水平为>30mg/dl。在一些方面中，高尿β-2微球蛋白水平为>3mg/L。在一方面中，高尿β-2微球蛋白水平为>75mg/dl。
在一进一步实施例中，本发明提供了一种由经冻干的组氨酸铜和药学上可接受的载体构成的药物组合物。在一方面中，所述药学上可接受的载体为盐水。在一另外的方面中，所述经冻干的组氨酸铜是用盐水或其它载体复原的。盐水可以是缓冲的(例如，磷酸盐缓冲盐水(PBS))。在一进一步方面中，经复原的组氨酸铜的浓度为约500μg/ml至3000μg/ml，例如2900μg/ml。
如本文所使用的，短语“药学上可接受的载体”包含与药物施用相容的任何和所有溶剂、溶液、缓冲剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。因此，除了本发明的抗体和载体之外，此类组合物还可以含有各种稀释剂、填料、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域中熟知的其它材料。术语“药学上可接受的”意指不干扰活性成分的生物活性的有效性的无毒材料。载体特性将取决于施用途径。此类介质和药剂用于药学活性物质的用途是本领域熟知的。组合物还可以含有提供补充性、额外的或增强的治疗功能的其它活性化合物。药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包或分配器中。在一方面中，药学上可接受的载体为盐水，例如，0.9％盐水。
在又进一步实施例中，本发明提供了一种具有经冻干的组氨酸铜的试剂盒；和使用指南。在一方面中，所述经冻干的组氨酸铜是用盐水复原的。在一另外的方面中，所述经冻干的组氨酸铜是用0.2-2ml盐水复原的。在一进一步方面中，经复原的组氨酸铜储存在约2℃-37℃下。在一方面中，经冻干的产物储存在约-10℃至-20℃下。在某些方面中，所述试剂盒含有用于复原组氨酸铜的指南和说明书。在各个方面中，所述试剂盒含有用于复原组氨酸铜的设备。在具体方面中，所述用于复原组氨酸铜的设备为注射器、小瓶或具有皮下注射针的安剖。在一另外的方面中，所述组氨酸铜是用2.0ml盐水复原的。在一进一步方面中，经复原的组氨酸铜的浓度相当于约100μg/ml至3000μg/ml的元素铜浓度。在各个方面中，经复原的组氨酸铜的浓度相当于100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml、400μg/ml、450μg/ml、500μg/ml、550μg/ml、600μg/ml、650μg/ml、700μg/ml、750μg/ml、800μg/ml、850μg/ml、900μg/ml、950μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml、2500μg/ml或3000μg/ml的元素铜浓度。在某些方面中，经复原的组氨酸铜的浓度相当于约500μg/ml的元素铜浓度。在一方面中，试剂盒含有用于向受试者施用经复原的组氨酸铜的指南和说明书。在各个方面中，向受试者施用0.5ml经复原的组氨酸铜溶液。在一另外的方面中，向受试者施用250μg经复原的组氨酸铜溶液。在一进一步方面中，试剂盒含有用于储存经复原的组氨酸铜溶液的指南和说明书。
在一个实施例中，举例来说，本发明提供了一种由组氨酸铜构成的稳定的经冻干的药物调配物，其中所述调配物，其是通过以下制备的：将水溶液冻干，所述水溶液包括2摩尔L-组氨酸和1摩尔氯化铜(例如，氯化铜II二水合物)，并且以水溶液的形式被调整至约7.35的pH，然后将所述溶液冻干。在一方面中，所述组氨酸铜以约2900μg/mL存在于所述水溶液中。在一另外的方面中，所述调配物在至少约18个月内是稳定的。在一方面中，在18个月内稳定的调配物储存在约-10℃至-20℃、2℃至8℃或室温(15℃至30℃)下。在一另外的实施例中，本发明提供了一种小瓶，其包括由组氨酸铜和药学上可接受的载体构成的调配物，其中所述调配物是通过以下制备的：将水溶液冻干，所述水溶液包括2摩尔L-组氨酸和1摩尔氯化铜(例如，氯化铜II二水合物)，并且以水溶液的形式被调整至约7.35的pH，然后将所述溶液冻干。在一方面中，所述药学上可接受的载体为盐水。在一另外的方面中，所述调配物在2ml盐水中被复原为约2900μg/ml的浓度。在一进一步方面中，所述调配物包括经冻干的组氨酸铜，所述经冻干的组氨酸铜是在所述小瓶中在盐水中以500ug元素铜/ml的浓度复原的。在某些方面中，所述小瓶进一步包括用于在盐水中复原所述经冻干的组氨酸铜并且以每次施用0.5ml(或cc)的剂量如下皮下施用于患有门克斯病的受试者的说明书：在所述受试者为一岁之前每天两次并且在所述受试者为一岁之后每天一次。在一方面中，所述经冻干的组氨酸铜在约2-8℃，例如，4℃下在至少约7天、2周、一个月或大于2个月内是稳定的。在某些方面中，所述患有门克斯的受试者具有ATP7A突变，所述ATP7A突变选自无义变体、错义变体、内含子变体、同义变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位、典型剪接位点突变或其组合。
在一方面中，本发明的小瓶包含用于在盐水中复原所述经冻干的组氨酸铜并且以每次施用0.5ml的剂量如下皮下施用于患有门克斯病的受试者的说明书：在所述受试者为一岁之前每天两次并且在所述受试者为一岁之后每天一次。在一方面中，所述患有门克斯的受试者具有ATP7A突变，所述ATP7A突变选自无义变体、错义变体、内含子变体、同义变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位、典型剪接位点突变或其组合。在另一方面中，所述说明书包含进行基因测试，以鉴定受试者的ATP7A突变。
在又另一实施例中，本发明提供了一种容器，其具有两个室，以将粉末状药物，在此实例中为经冻干的组氨酸铜，与如盐水等稀释剂混合，之后通过粘附到所述容器上的针将经混合的成分注射到受试者体内。所述容器可以为注射器、小瓶、安瓿等。
Tmax(峰血浆浓度的时间)是在药物施用后在血浆中达到最大药物浓度所需的时间。Tmax为峰值血浆时间。简单地说，Tmax为达到Cmax的时间。Cmax为在口服施用药物之后获得的最大(峰值)血浆药物浓度。还有，在Tmax时，药物吸收速率恰好等于药物消除速率。
另一方面，t1/2(消除半衰期)是消除期间体内的药物浓度降低至一半所需的时间。换言之，t1/2(消除半衰期)是药物的量或浓度降低至一半所需的时间。在药代动力学消除半衰期中，t1/2是指从体内去除施用的药物剂量的一半所需的时间。Tmax取决于消除速率(k)和吸收速率常数(ka)。而t1/2取决于消除速率(k)和分布体积(Vd)。在Tmax时，药物浓度处于峰值。在t1/2时，药物的浓度可以处于峰值或可以不处于峰值。参见例如，https://pharmaeducation.net/difiference-between-tmax-and-t1-2/#:～:text＝On％20the％20other％20hand％2C％20t％201％2F2％20％28elimination％20half-life％29,of％20a％20drug％20to％20decrease％20by％20one-half％20％5B1％5D。
在本文的一说明性实例中，本公开提供了一种通过以下来提高受试者的血清组氨酸铜水平的方法：通过皮下施用途径将组氨酸铜施用于所述受试者，由此提高所述受试者的血清组氨酸铜水平，其中在施用后约1/2小时至1小时血清中的组氨酸铜达到峰值可检测水平。组氨酸铜的峰值可检测水平可以为施用后1/4小时至2小时。进一步地，组氨酸铜分布阶段半衰期为约1-5小时、约1-4小时、约1-3小时、约2-5小时、约2-4小时或约2-3小时。
在一方面中，终末消除阶段半衰期t1/2为约30-150小时。在其它方面中，终末消除阶段半衰期t1/2为约30-125小时、约30-100小时、约30-75小时或约75小时。提供以下实例以进一步展示本发明的实施例，但并不旨在限制本发明的范围。尽管以下实例是可能使用的典型实例，但也可以可替代地使用本领域的技术人员已知的其它程序、方法或技术。
实例
实例1
对门克斯患者的组氨酸铜治疗
本研究的目的是允许目前纳入的参与者完成先前的方案下的三年过程的皮下组氨酸铜治疗。据推测，相比于未经治疗的受影响的受试者，皮下注射此药物将提高所纳入的参与者的血清铜水平和铜蓝蛋白水平，改善神经发育和神经结果，并降低死亡率。此治疗研究的广泛总体假设是皮下组氨酸铜注射将使循环的铜水平正常化，并且为患有由于如经典门克斯病等遗传异常而引起的铜缺乏症或无法解释的铜缺乏症的个体提供了健康益处。试验表示开放标签设计，在所述开放标签设计中，所有纳入的受试者都接受组氨酸铜的皮下注射剂。组氨酸铜治疗在经典门克斯病中的直接潜在益处包含防止癫痫活动和以适合年龄的方式积累神经发育技能。长期潜在益处包含提高寿命和生活质量，正如用组氨酸铜治疗的患有经典门克斯病的其它受试者中所指示的。
组氨酸铜，即活性物质，为铜(II)与L-组氨酸的1:2复合物，其是在1摩尔氯化铜与2摩尔L-组氨酸在水溶液中反应并且被调整至大约pH 7.35时原位形成的。IUPAC化学名称为(2S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸，铜。分子式为C12H18CuN6O4(分子量：373.86g/摩尔)。在一特定实施例中，本发明提供了一种研究干预，在所述研究干预中以如下规定的剂量施用组氨酸铜：在至多12个月大的婴儿中，1450μg皮下每天两次(BID)，并且对于大于12个月的婴儿和儿童，1450μg皮下每天一次(QD)。在一个说明性实例中，组氨酸铜治疗的总持续时间不超过三年。举例来说，使用具有27号针的注射器以不超过0.5ml的体积通过皮下注射施用组氨酸铜。用于经典门克斯病的标准给药方案为：对于小于12个月的患者，组氨酸铜1450μg(0.5ml)皮下BID，并且对于大于12个月的患者，1450μg皮下QD。此方案通常将这些受试者的血清铜水平保持在正常范围内。
针对患者的纳入标准包含被诊断为患有经典门克斯病、枕角综合征(OHS)或不明原因的铜缺乏症；血清铜水平结果介于0mg/dl与75mg/dl之间(正常范围为80-180μg/dl)；以及能够坚持规定的皮下组氨酸铜注射方案。
针对患者的排除标准包含先前存在的肝病(例如，肝炎、胆道闭锁、肝硬化)或肾病(例如，血清肌酐>1.0mg/dL)；出血性糖尿病史；孕期或哺乳期；诊断出威尔森氏病(Wilsondisease)；有很大可能妨碍患者无法完成研究的疾病或病状或患者不能或不愿适当遵守研究要求的情况；参与在本研究的筛选前30天内接受研究药物或装置的任何其它研究性试验；在先前3年内有诊断出的药物或酒精依赖史；可能对胃肠吸收产生不利影响的任何疾病过程，例如乳糜泻；可能对参加临床试验产生体力要求的慢性/严重心脏病(仅适用于成年受试者)，包含但不限于心功能不全、心律失常、心动过缓或低血压，除非与家族性自主神经异常的其它特征，如OHS相关；以及可能使受试者难以参加临床试验的脑血管意外史(仅适用于成人受试者)。
对于血清铜水平进行跟踪，以允许做出铜水平是否异常地高的决定，并且相应地调整干预措施。另外，还对血清碳酸氢盐、血清肌酐和尿β-2微球蛋白(肾小管功能的标志物)进行跟踪(表1)，并且在必要时用于研究组氨酸铜剂量的变化。
表1
肾铜过载的直接风险涉及由于碳酸氢盐损失增加引起的酸-碱失衡。这将通过停止组氨酸铜施用一周并且在重新测量实验室值之前将剂量降低另外三周来解决。潜在长期风险将是永久性肾损伤，需要透析或肾移植。然而，有证据表明，由组氨酸铜引起的经典门克斯病患者的肾小管损伤是可逆的。
在这项研究结束时，将患者转移到长期研究，以确定患者的生存期、神经发育和生活质量。
实例2
对于针对门克斯病的组氨酸铜治疗的长期研究
本研究探讨了皮下组氨酸铜治疗对被诊断出患有经典门克斯病的患者和新诊断的门克斯病患者的临床疗效和安全性。
在研究期间，向患者施用组氨酸铜的剂量如下：在至多12个月大的婴儿中，1450μg皮下BID，并且对于大于12个月的婴儿和儿童，1450μg皮下QD。在一个实例中，针对新诊断的门克斯病患者的组氨酸铜治疗的总持续时间不超过三年。
基于临床、生化和分子标准，先前诊断的患者的诊断得到确认。临床标准包含头发颜色和/或质地异常、和/或癫痫、和/或张力减退和/或发育迟缓。生化标准包含低血清铜水平(<75μg/dl)和/或铜蓝蛋白和/或异常血浆儿茶酚胺水平。分子标准包含ATP7A基因中的突变(缺失/重复、无义、错义或典型或非典型剪接连接点突变)。新诊断的患者的血清铜水平<75μg/dl，并且对ATP7A基因突变进行测试。
患有先前存在的肝病(例如，肝炎、胆道闭锁、肝硬化)或肾病(例如，血清肌酐>1.0mg/dl)、具有出血性糖尿病史或诊断出威尔森氏病的任何患者被排除在研究之外。
前6个月每6周通过实验室分析监测新诊断的患者的铜毒性，所述实验室分析包含：基础代谢套组(BMP)、血清铜、铜蓝蛋白和尿β-2微球蛋白浓度。前3-4个月每月在临床中对患者进行评估，然后在之后每2-3个月对患者进行评估。大约每3个月通过电话联系和/或访视对患者进行评估以确定存活状态。BMP套组包含白蛋白、碱性磷酸酶、ALT、AST、碳酸氢盐、胆红素(总和直接)、BUN、钙、氯化物、肌酐、肌酐激酶、葡萄糖、LDH、镁、磷、钾、总蛋白和钠。
在最初被纳入时初始地并且然后每3-4个月通过实验室分析对先前诊断的患者的铜毒性进行监测，直到完成3年治疗为止，所述实验室分析包含：BMP、血清铜、铜蓝蛋白和尿β-2微球蛋白浓度。大约每3个月通过电话联系和/或访视对患者进行评估以确定存活状态。
组氨酸铜的剂量的任何变化均是通过表2中的安全参数确定的。
表2
实例3
对用组氨酸铜治疗的门克斯病患者的长期跟踪
本研究被设计为对先前鉴定和/或纳入在用于用组氨酸铜治疗门克斯病的先前研究中的患者和未经治疗的患者的长期随访，以确定生存期、神经发育、生活质量状态和不良事件。本研究跟踪了来自先前实例的患者以进行了长期随访。
评估先前纳入在用于用组氨酸铜治疗门克斯病的临床试验中的患者的生存状态、神经发育状态和生活质量。本研究期间未施用任何药物。
结果表明，相比于未经治疗的历史对照，早期接受用组氨酸铜进行的治疗的门克斯病受试者的死亡风险降低了几乎80％(危害比＝0.21，p<0.00001)。中位生存期或早期治疗队列为14.8年(177.1个月)，相比之下对于未经治疗的历史对照组，中位生存期为1.3年(15.9个月)。
实例4
药代动力学研究
本研究为一项I期开放标签单剂量研究，其用于评估组氨酸铜在皮下施用于健康男性志愿者后的药代动力学、安全性和耐受性。
在先前对门克斯患者的研究中，小于1岁的儿童每天两次接受1450μg组氨酸铜(相当于250μg元素铜)，而大于1岁的儿童每天一次接受1450μg组氨酸铜(相当于250μg元素铜)。选择这一剂量以将门克斯儿童的充分血清铜暴露作为模板。
预期处于铜替代疗法的门克斯儿童的体重为或低于正常儿童的最低第3百分位。由于皮下组氨酸铜在未患有铜缺乏症的健康志愿者体内的安全性尚不清楚，因此以3岁大门克斯儿童的较低体重调整剂量为目标。预期处于体重的第3百分位的3岁男性的体重为11.8kg，而典型的男性体重为70公斤。
使用指数为0.75的异速缩放，等效成人剂量为约5800μg组氨酸铜(相当于1000μg元素铜)，这也恰好是正常状况下可以通过肠道吸收的铜的最大量。因此，将研究5800μg组氨酸铜(相当于1000μg元素铜)的单次皮下剂量。假设异速生长指数为1，则等效成人剂量为8850μg组氨酸铜(相当于1500μg元素铜)。因此，8850μg组氨酸铜(相当于1500μg元素铜)将是本研究考虑的最大剂量。
所述研究由28天筛选阶段、大约96小时的临床研究单元(CRU)停留以及CRU出院后4(±1)天的电话随访组成。总共9名健康男性将在第2天接受单剂量5800μg组氨酸铜(相当于1000μg元素铜)，皮下施用，分2次单独注射，每次在不同的手臂上。每1mL注射剂将含有2900μg组氨酸铜(相当于500μg元素铜)。
将在进入CRU前28天(第-29天至第-2天)内对受试者进行筛选。受试者将于第-1天近傍晚进入CRU，并提供晚餐，然后过夜禁食。受试者将遵循已知且一致铜含量的标准化膳食时间表，并坚持固定睡眠-觉醒时间表，在第-1天开始，并且持续到第4天CRU出院。第一次皮下组氨酸铜注射的开始将被定义为第2天的时间0。
基线评估将在第1天开始，并且将包含与第2天时间表相对应的用于评估血清铜、铜蓝蛋白和组氨酸铜水平的基线昼间变化的血液采样。将在醒来后1小时在大约上午7点收集用于第1天的药代动力学分析的血液，然后在第一第1天药代动力学样品后0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时和24小时(给药前第2天)收集血液。在第2天，将在皮下组氨酸铜注射前15分钟内收集样品(在与第一第1天药代动力学样品后24小时使用的管不同管中)，然后在皮下组氨酸铜注射后0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、24小时、28小时、32小时、36小时和48小时收集样品。第2天的时间0小时将对应于大约于上午8点；在收集给药前样品后，应尽快(15分钟内)开始给药。
在第1天至第4天，以限定时间间隔收集尿样品以用于药代动力学分析。将在第1天的第一次药代动力学血液样品(皮下组氨酸铜注射之前)后0小时至6小时、6小时至12和小时12小时至24小时收集尿。皮下组氨酸铜注射后，将在药物施用后0小时至6小时、6小时至12小时、12小时至24小时和24小时至48小时收集尿。
将在整个研究中收集安全性参数，包含严重不良事件/不良事件(AE/SAE)、静息生命体征、ECG、实验室评估、身体检查和伴随用药。AE将仅仅在整个研究中在其发生的任何时间报告。在组氨酸铜的皮下注射之前和每次血液样品收集时，将评估受试者的注射部位反应。生命体征将在筛选时、第1天的基线评估前、第2天的给药前以及皮下组氨酸铜注射后0.5小时、1小时、2小时、4小时、12小时、24小时和48小时测量。ECG将在筛选时、第2天的给药前以及给药后1小时、2小时、4小时和24小时测量。临床实验室套组将在筛选时、在CRU入住登记时以及在皮下组氨酸铜给药后24小时(第3天)和48小时(第4天)进行。全面身体检查将在筛选时、在CRU入住登记时以及在皮下组氨酸铜给药后24小时(第3天)和48小时(第4天)进行，其中在第2天的给药后2小时进行一次简单的身体检查。
组氨酸铜，即活性物质，的pH为大约7.0-7.5，例如7.35，并且属于铜替代疗法的药物类别。分子式为C12H18CuN6O4，其中分子量为373.86g/摩尔。将药物产物，即用于皮下注射的组氨酸铜，冻干。用生理盐水将经冻干的粉末产物复原以供皮下注射。对每位受试者将使用两小瓶组氨酸铜经冻干的粉末。给药前，将每5mL小瓶用2mL 0.9％注射用盐水复原。
将通过2次在不同手臂上的皮下注射来施用5800μg组氨酸铜(相当于1000μg元素铜)的单个剂量。药物产物的两小瓶将各自用2mL 0.9％盐水进行复原。从每个小瓶中，然后将施用1mL经复原的药物产物作为单独的皮下注射剂，进行总共2次注射。2次注射应在每个受试者在不同的手臂上在约5分钟内给予。
在另外的队列中通过2次在不同手臂上的皮下注射可以施用至多8850μg组氨酸铜(相当于1500μg元素铜)的另外单个剂量。药物产物的两小瓶将各自用2mL 0.9％盐水进行复原。从每个小瓶中，然后将施用1.5mL经复原的药物产物作为单独的皮下注射剂，进行总共2次注射。2次注射应在每个受试者在不同的手臂上在5分钟内给予。
药代动力学评估：将在第1天在醒来后1小时(第1天的时间0小时)收集用于血清铜、铜蓝蛋白和组氨酸铜的药代动力学分析的血液样品，并且在第一第1天药代动力学样品后0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时和24小时(给药前第2天)收集血液样品。在第2天，将在皮下组氨酸铜注射前15分钟内收集样品(在与第一第1天药代动力学样品后24小时使用的管不同管中)，并且在皮下组氨酸铜注射后0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、24小时、28小时、32小时、36小时和48小时收集样品。
在第1天至第4天，以限定时间间隔收集尿样品以用于铜的药代动力学分析。受试者应在第1天时间0小时开始基线评估前大约30分钟排空其膀胱(样品可丢弃)。将在时间0小时(皮下组氨酸铜注射之前)后0小时至6小时、6小时至12和小时12小时至24小时收集尿。皮下组氨酸铜注射后，将在药物施用后0小时至6小时、6小时至12小时、12小时至24小时和24小时至48小时收集尿。
全面身体检查将在筛选时、在CRU入住登记时以及在皮下组氨酸铜给药后24小时(第3天)和48小时(第4天)进行，其中在第2天的给药后2小时进行一次简单的身体检查。
皮下组氨酸铜的单个剂量后从使用标准非隔室分析(NCA)方法观察到的血清和尿浓度数据中得出的经昼间变化调整的血清铜、铜蓝蛋白和血清组氨酸铜的药代动力学参数将包含以下：峰值浓度(Cmax)；达到峰值浓度的时间(Tmax)；从时间零到最后可量化浓度的浓度-时间曲线下面积(AUC)(AUClast)；从时间零到无限的AUC(AUCinf)；表观全身清除率(CL)；表观肾清除率(CLr)；消除半衰期(t1/2)；在皮下注射后从时间零至6小时(Ae0-6)、14小时(Ae0-14)、24小时(Ae0-24)和48小时(Ae0-48)以及从时间零到无限(Aeinf)排泄到尿中的铜的累积量(以μg为单位并且占剂量的百分比)(Ae)。
还将分析经昼间变化调整的血清铜、铜蓝蛋白和组氨酸铜在稳态给药下的所预测的峰值暴露和总暴露(Cmax和AUCtau)。
实例5
对成年人的药代动力学研究
下面的实例描述了如通过如下研究确定的组氨酸铜的药代动力学：每天一次将3000μg(3.0mg)(约500nCi)[14C]-CuHis溶液皮下注射剂施用于六名健康的成年男性志愿者。
本研究的主要目的是在健康成年男性受试者体内单次皮下(SC)施用[14C]CuHis后，对全血、血清和来自尺寸排阻-高效液相色谱(SEC-HPLC)柱的加标有未标记的组氨酸铜(CuHis)的血清的洗脱级分的总放射性(TRA)进行定量。进一步地，研究被设计成确定全血中与细胞组分相关的14C放射性随时间推移的百分比(例如，全血:血清分配浓度比)。
为了评估在健康成年男性受试者中在单次SC施用[14C]CuHis之后的安全性和耐受性。这是一项开放标签单剂量1期PK研究，其是在美国的1个研究中心进行的。纳入了六(6)名健康成年男性受试者。对受试者的筛选发生在给药前28天内。
在第1天，施用单次SC 3.0mg(约500nCi)剂量的[14C]-CuHis。在给药前和给药后至多168小时(受试者1至5)或给药后504小时(受试者6)收集用于确定全血和血清中的TRA以及来自SEC-HPLC柱的加标有未标记的CuHis的血清的洗脱级分中的[14C]CuHis的药代动力学(PK)样品。
使受试者在第-1天，在临床研究单位(CRU)指定的时间入住，直至168小时抽血和/或研究程序后为止，并且如果可能的话，返回以进行504小时抽血。在整个研究中，通过反复临床和实验室评估来监测安全性。CRU试图在给药后大约14天联系使用其标准程序接受研究药物的所有受试者，以确定自上次研究访视以来是否发生任何不良事件(AE)。
14C组氨酸铜的初始药代动力学结果如下：
·AUC0-24(ng·hr/mL)＝185.6(20.6)*
·AUC0-last(ng·hr/mL)＝249.3(10.6)*
·AUC0-∞(ng·hr/mL)＝296.0(15.3)*
·Cmax(ng/mL)＝67.14(35.9)*
·Tmax(小时)＝0.747(0.50、0.76)**
*AUC0-24、AUC0-last、AUC0-∞和Cmax值呈现为几何平均值(几何变异系数百分比)。
**Tmax值呈现为中值(最小值、最大值)。
在给药后0.75小时达到峰值后，血清[14C]-CuHis浓度表现出初始快速降低(分布阶段；t1/2＝约2-3小时)，之后是较慢的平衡和/或终末消除阶段(t1/2＝约75小时)。
在第1天的第0小时，将用于SC团注注射的3.0mg(约500nCi)[14C]-CuHis(相当于大约500μg元素铜)的单个剂量施用于每个受试者的上臂。第0小时对应于第1天时团注SC施用的开始。指示受试者不要摩擦注射部位。施用于每个受试者的CuHis的实际剂量和放射性呈现于下表3中。
药代动力学：
在给药前和给药后至多168小时(受试者1至5)或给药后至多504小时(受试者6)收集用于确定全血和血清中的TRA以及来自SEC-HPLC柱的加标有未标记的CuHis的血清的洗脱级分中的[14C]CuHis的血液样品。
全血和血清中的TRACuHis浓度当量是在康龙化成公司(Pharmaron ABS,Inc.)(美国马里兰州的日耳曼敦(Germantown,Maryland,USA))使用加速器质谱法(AMS)确定的。在不同受试者中，全血和血清中的TRA CuHis浓度当量的定量下限(LLOQ)的范围分别为0.711ng当量CuHis/mL至0.770ng当量CuHis/mL和0.239ng当量CuHis/mL至0.284ng当量CuHis/mL。
来自SEC-HPLC柱的血清级分中的[14C]-CuHis浓度是在康龙化成公司(美国马里兰州的日耳曼敦)使用AMS确定的。血清中的[14C]-CuHis浓度的LLOQ为0.270ng/mL。
每个受试者的全血:血清TRA分配比是在每个给药后时间点作为全血TRA CuHis浓度当量与血清TRA CuHis浓度当量之间的比率计算的。在可能时，计算用于全血和血清TRA以及血清[14C]-CuHis的以下参数：AUC0-24、AUC0-last、AUC0-∞、AUCextrap％、Cmax、tmax、tlag,Kel和t1/2。AUC0-24比是针对血清[14C]-CuHis相对于血清TRA计算的。CL/F和Vz/F是针对血清[14C]-CuHis计算的。
统计方法：
所有PK浓度和PK参数描述性统计是使用9.4版生成的。
列出了PK群体中的所有受试者的全血和血清TRA CuHis浓度当量、血清[14C]-CuHis浓度和全血:血清TRA分配比，并且按时间点进行了汇总。计算在每个标称时间点以上数据的汇总统计，包含样品大小(n)、算术平均值(平均值)、标准偏差(SD)、变异系数(CV％)、平均值标准误差(SEM)、最小值、中值和最大值。
列出每个受试者的全血和血清TRA PK参数以及血清[14C]-CuHis PK参数，并且针对PK群体中的所有受试者进行汇总。计算所有PK参数的汇总统计(n、平均值、SD、CV％、SEM、最小值、中值、最大值、几何平均值[Geom平均值]和几何CV％[Geom CV％])。
算术平均和个体全血和血清TRA CuHis浓度当量对时间以及血清[14C]-CuHis浓度对时间的谱以线性和半对数尺度呈现。算术平均和个体全血:血清TRA分配比对时间的谱以线性尺度呈现。线性平均值图呈现出有和没有SD。
药代动力学结果
全血和血清总放射性组氨酸铜浓度当量、血清[14C]-组氨酸铜浓度和全血:血清总 放射性分配比
在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-CuHis的单次SC团注给药之后的算术平均全血和血清TRA CuHis浓度当量对时间以及血清[14C]-CuHis浓度对时间谱以半对数尺度呈现(图1)。
在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-CuHis的单次SC团注给药之后的算术平均全血和血清TRA CuHis浓度当量对时间以及血清[14C]-CuHis浓度对时间谱以半对数尺度呈现(图1)。
数据例示于图1中，所述图示出了在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-组氨酸铜的单次皮下团注给药之后的算术平均全血和血清总放射性以及血清[14C]-组氨酸铜浓度-时间谱(半对数尺度)(药代动力学群体)。
全血TRA CuHis浓度当量在所有受试者中到给药后0.25小时可量化(即，第一次计划的给药后样品)，并且在所有受试者中直至最后采样时间点，即对于受试者1至5，给药后168小时，并且对于受试者6，给药后504小时之前保持可量化。算术平均全血TRA CuHis浓度当量直至给药后4小时上升，此时其保持处于56.33ng当量CuHis/mL至63.90ng当量CuHis/mL范围内，直至给药后48小时，之后从给药后72小时开始再次上升，直至给药后168小时上升至其最高水平100.9ng当量CuHis/mL。给药后504小时66.3ng当量CuHis/mL的全血TRACuHis浓度当量是针对受试者6获得的浓度当量。
血清TRA CuHis浓度当量在所有受试者中到给药后0.25小时可量化，并且在所有受试者中直至最后采样时间点，即对于受试者1至5，给药后168小时，并且对于受试者6，给药后504小时之前保持可量化。算术平均血清TRA CuHis浓度当量-时间谱在给药后8小时达到峰值，为97.43ng当量CuHis/mL，之后其以多阶段方式下降。给药后504小时30.7ng当量CuHis/mL的血清TRACuHis浓度当量是针对受试者6获得的浓度当量。
血清[14C]-CuHis浓度在所有受试者中到给药后0.25小时可量化，并且在所有受试者中直至给药后24小时保持可量化，并且在至少一半的受试者中直至给药后168小时保持可量化。算术平均血清[14C]-CuHis浓度-时间谱在给药后0.75小时达到峰值，为63.47ng/mL，之后其以多阶段方式下降。如所展示的，多阶段下降由最初的快速下降(分布阶段)以及之后的较慢的表观终末消除阶段组成，在最初的快速下降中估计的半衰期为大约2小时至3小时，在较慢的表观终末消除阶段中，t1/2为大约75小时。
在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-CuHis的单次SC团注给药之后的算术平均全血:血清TRA分配比对时间谱在下面的图中以线性尺度呈现，并且每个给药后时间点的算术平均值(SD)比呈现在下面表4中。
表4：在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-组氨酸铜的单次皮下团注给药之后的全血:血清总放射性分配比的汇总(药代动力学群体)。
TRA CuHis浓度当量在针对所有受试者提取的全血和血清两者中在所有给药后样品时间时，即给药后0.25小时至168小时均可量化，并且算术平均全血:血清TRA分配比的范围为0.5856至2.392。分配比在给药后0.25小时至36小时在0.5856至0.7498的范围内，然后从给药后36小时的0.7498增加到给药后168小时的2.392。样品是仅针对受试者6在给药后504小时收集的。此时间点的分配比对于受试者6来说为2.16。
全血和血清总放射性以及血清[14C]-组氨酸铜的药代动力学参数
在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-CuHis的单次SC团注给药之后的全血和血清TRA以及血清[14C]-CuHis的PK参数的汇总呈现于下面的表5中。
表5：在健康成年男性受试者中在3.0mg(约500nCi)[14C]-组氨酸铜的单次皮下团注给药之后的全血:血清总放射性以及血清[14C]-组氨酸铜的药代动力学参数的汇总(药代动力学群体)
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给药后前24小时于TRA的暴露(AUC0-24)在全血中比在血清中低34％。截止给药后168小时，于TRA的暴露(AUC0-1ast)现在在全血中比在血清中高大约29％。于TRA的峰值暴露(Cmax)在全血中和在血清中是相似的，但是tmax值是不同的，在全血中(中值＝约168小时)比在血清中(中值＝约8小时)出现地晚得多。
在给药后前24小时在血清中于TRA的大约9％暴露与[14C]-CuHis相关(Geom平均值AUC0-24比＝0.09317)。血清[14C]-CuHis的算术平均表观终末t1/2(约75小时)比血清TRA的算术平均表观终末t1/2(约253小时)短。
实例6
幼年大鼠毒代动力学研究
本研究的目的是确定在出生后第7天至第21天(PND)通过向幼年Crl:CD(SD)斯泼累格·多雷大鼠每天两次皮下注射给予时组氨酸铜的耐受性，并且提供用于选择要在随后的幼年毒性研究中使用的剂量水平的信息。另外，确定组氨酸铜的毒代动力学特性。
本研究的测试物品为组氨酸铜，并且在下文描述于表6中。
表6
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媒剂对照物品为氯化钠，并且在下文描述于表7中。
表7
本研究的动物为Crl:CD(SD)斯泼累格·多雷大鼠。研究阶段A需要6只母畜(5只幼崽/性别/窝)，并且研究阶段B需要28只母畜(6只幼崽/性别/窝)。
分配到研究-阶段A和阶段B的动物的数量在下面示出在表8和9中。
表8
分配到研究-阶段A的动物的数量
表9
分配到研究-阶段B的动物的数量
针对阶段A的实验设计在下面示出在表10中。
表10
TBA＝要通过修正添加到方案中。
a剂量水平未超过25mg/kg/天。
b第3组至第5组的剂量水平是基于来自先前剂量水平的结果确定的。
c基于最近的体重测量。
d基于元素铜(Cu)的剂量水平和浓度(1000μg铜相当于5800μg组氨酸铜)。
针对阶段B(14天)实验设计在下面示出在表11中。
表11
TBA＝基于研究阶段A的结果要通过修正添加到方案中。
A基于最近的体重测量。
b毒代动力学动物仅用于毒代动力学评估。
c基于元素Cu的剂量水平和浓度(1000mcg Cu相当于5800mcg CuHis)。
d在PND 17，剂量水平被减少至10mg/kg/天(5mg/kg/剂量)。
给药途径：皮下注射。旋转注射部位以使刺激最小化；此程序的文件记录在原始数据中。在背部上的两个大约同等区域(区域1和2；区域1最靠近肩膀，区域2最靠近尾部)进行注射。对每只动物，在这些区域中按顺序注射每个剂量(即，第一剂量在区域1，第二剂量在区域2，第三剂量在区域1，等等)。
频率：阶段A：第1组合第3组至第5组：每天两次(间隔大约8小时)，第2组：每天一次。阶段B：所有组：每天两次(间隔大约8小时)。
持续时间：阶段A：仅PND 7。阶段B：PND 10至24。
特殊程序：研究阶段A的剂量施用对每个剂量组错开至少5天，其中第1组和第2组剂量施用开始于同一天。
生活中程序、观察和测量。对于F0代母畜，每天至少两次记录活力观测结果。每周至少一次记录临床观察。从到达测试设施当天或之后第二天开始每天记录母体行为(例如，筑巢，哺乳)。至少每周以及处死之前记录母体体重(终末体重)。不测量食物消耗；然而，监测食物，并在必要时补充，以监测动物的健康和幸福。F0代数据未报告。
根据表8和9，对F1代幼崽/大鼠进行了下文列出的生命中程序、观察和测量。不记录分配到研究阶段B的动物的食物消耗；然而，将监测食物，并在必要时补充，以监测动物的健康和幸福。
阶段A-一般生命中评估
表12
阶段B-一般生命中评估
表13
生物分析样品分析：将使用合格的分析程序分析血清样品的总铜和铜蓝蛋白的浓度。
毒代动力学评估：将使用与皮下施用途径一致的非隔室方法进行参数估计。在可行的情况下，将根据PND 10和24的总铜和铜蓝蛋白平均浓度生成所有参数。
表14
要估计的参数
可以得出并报告部分AUC(在两个限定的样品时间之间)和对应剂量归一化值，以帮助解释。描述性统计(例如，数量、算术平均值、中值、标准偏差、标准误差、变异系数)将在适当时报告。还将生成TK表和图。
尽管已经参考以上实例描述了本发明，但应当理解，修改和变化均涵盖在本发明的精神和范围之内。因此，本发明仅由以下权利要求限制。

Claims (40)

1.一种药物组合物，其包括经冻干的组氨酸铜和药学上可接受的载体。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体为盐水。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述经冻干的组氨酸铜被复原为约2900μg/ml的浓度。
4.一种皮下剂型，其包括组氨酸铜和药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的剂型，其中所述组氨酸铜被复原为约2900μg/ml的浓度。
6.一种由组氨酸铜构成的稳定的经冻干的药物调配物，其中所述调配物，其是通过以下制备的：将水溶液冻干，所述水溶液包括：
2摩尔L-组氨酸和1摩尔氯化铜，并且以水溶液的形式被调整至约7.0至7.5的pH，然后将所述溶液冻干。
7.根据权利要求6所述的稳定的经冻干的药物调配物，其中所述组氨酸铜以约2900μg/mL存在于所述水溶液中。
8.根据权利要求6所述的稳定的经冻干的药物调配物，其中所述调配物在约-10℃至-20℃、2℃至8℃或室温(15℃至30℃)下在约18个月内是稳定的。
9.一种小瓶，其包括根据权利要求6所述的调配物和药学上可接受的载体。
10.根据权利要求9所述的小瓶，其中所述药学上可接受的载体为盐水。
11.根据权利要求10所述的小瓶，其中所述调配物在2ml盐水中被复原为约2900μg/ml的浓度。
12.根据权利要求10所述的小瓶，其中所述调配物包括经冻干的组氨酸铜，所述经冻干的组氨酸铜是在所述小瓶中在盐水中以500ug元素铜/ml的浓度复原的。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的小瓶，其进一步包括用于在盐水中复原所述经冻干的组氨酸铜并且以每次施用0.5ml的剂量如下皮下施用于患有门克斯病或铜缺乏症的受试者的说明书或标签：在所述受试者为一岁之前每天两次并且在所述受试者为一岁之后每天一次。
14.根据权利要求9至13中任一项所述的小瓶，其中经复原的经冻干的组氨酸铜在室温下在至少24小时内或在2℃至8℃下在至少约7天内是稳定的。
15.根据权利要求13所述的小瓶，其中所述患有门克斯的受试者具有ATP7A突变，所述ATP7A突变选自无义变体、错义变体、内含子变体、同义变体、剪接区变体、移码变体、剪接受体变体、5'UTR变体、剪接供体变体、重复变体、框内缺失、大缺失、染色体易位、典型剪接位点突变或其组合。
16.根据权利要求13所述的小瓶，其中所述说明书包含进行基因测试，以鉴定所述受试者的ATP7A突变。
17.一种容器，其包括根据权利要求6所述的调配物和药学上可接受的载体。
18.根据权利要求17所述的容器，其中所述载体为盐水。
19.根据权利要求17所述的容器，其中所述经冻干的调配物和所述盐水在所述容器中是分开的。
20.根据权利要求17所述的容器，其中所述容器包括两个室，以将所述调配物与所述载体混合以形成经混合的调配物，之后将所述经混合的调配物注射到受试者体内。
21.根据权利要求20所述的容器，其中所述容器为注射器、安剖或小瓶。
22.一种提高受试者的血清铜水平的方法，所述方法包括通过皮下或经皮施用途径向所述受试者施用组氨酸铜，由此提高血清铜水平，其中所述受试者在初始施用时为四周大或更小。
23.根据权利要求22所述的方法，其中组氨酸铜是皮下注射的或掺入在乳膏、凝胶、粉末、洗液、软膏、搽剂、悬浮液、微乳剂、纳米乳剂和/或脂质体内，以供经皮施用。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述施用途径为通过经皮贴片。
25.根据权利要求22所述的方法，其进一步包括环糊精。
26.根据权利要求22所述的方法，其进一步包括一种或多种经皮渗透剂。
27.根据权利要求22所述的方法，其中皮下或经皮递送的铜的量相当于约100μg至3000μg元素铜。
28.根据权利要求27所述的方法，其中递送的铜的量选自约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜、3000μg元素铜、3500μg元素铜、4000μg元素铜、4500μg元素铜或5000μg元素铜。
29.一种经皮剂型，其包括组氨酸铜和药学上可接受的载体。
30.根据权利要求29所述的剂型，其中所述组氨酸铜以足以递送以下的浓度存在：约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜、3000μg元素铜、3500μg元素铜、4000μg元素铜、4500μg元素铜或5000μg元素铜。
31.根据权利要求29所述的经皮剂型，其中所述剂型为经皮贴片。
32.根据权利要求29所述的经皮剂型，其中所述剂型是利用电刺激或离子电渗施用的。
33.一种提高受试者的血清组氨酸铜水平的方法，所述方法包括通过皮下施用途径将组氨酸铜施用于所述受试者，由此提高所述受试者的血清组氨酸铜水平，其中在施用后约1/2小时至1小时血清中的组氨酸铜达到峰值可检测水平。
34.根据权利要求33所述的方法，其中组氨酸铜分布阶段半衰期为约2-3小时。
35.根据权利要求33所述的方法，其中终末消除阶段半衰期t1/2为约30-150小时。
36.根据权利要求35所述的方法，其中终末消除阶段半衰期t1/2为约75小时。
37.根据权利要求33所述的方法，其中所述受试者在初始施用时为四周大或更小。
38.根据权利要求33所述的方法，其中施用为约100μg元素铜、250μg元素铜、500μg元素铜、1000μg元素铜、1500μg元素铜、2000μg元素铜、2500μg元素铜、3000μg元素铜、3500μg元素铜、4000μg元素铜、4500μg元素铜或5000μg元素铜。
39.根据权利要求33所述的方法，其中当所述受试者小于一岁时，组氨酸铜的施用为每天两次，每次约1450μg，并且当所述受试者大于一岁时，组氨酸铜的施用为每天一次，每次约1450μg。
40.根据权利要求33所述的方法，其中所述受试者患有门克斯病或其它铜缺乏症。
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