JP2024511315A - Ａｃｔｒｉｉ－ａｌｋ４アンタゴニスト及び心不全の治療方法 - Google Patents

Ａｃｔｒｉｉ－ａｌｋ４アンタゴニスト及び心不全の治療方法 Download PDF

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Abstract

いくつかの態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト、並びに心不全（ＨＦ）の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるためにＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを使用する方法、特に１又は複数のＨＦ関連併存症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関する。本開示はまた、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを使用して、加齢に関連する心不全を含むが、これに限定されない様々な状態に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１０日に出願された米国仮出願第６３／１５９，０５９号の優先権の利益を主張する。前述の出願の明細書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
心不全（ＨＦ）の有病率は適用される定義に依存するが、先進国の成人人口の約１～２％が罹患しており、７０歳の人々の間では１０％以上に上昇している。運動時に息切れを伴う一次診療を受けている６５歳の人々の中では、６人に１人が認識されないＨＦ（主にＨＦｐＥＦ）を有するであろう。５５歳でのＨＦの生涯リスクは、男性では３３％、女性では２８％である。ＨＦｐＥＦ患者の割合は、適用される定義、臨床状況（プライマリケア、病院診療所、及び入院）、試験集団の年齢及び性別、以前の心筋梗塞及び刊行年に応じて、２２～７３％の範囲である。
全心不全診断の５０％及び全心不全死亡の９０％が７０歳以上の成人に発生しており、心不全は加齢と否定できない関係にある。Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ Ｈｅａｒｔ Ｓｔｕｄｙは、５０歳～５９歳で１０００人当たり８人の男性におけるＨＦの有病率が、８０歳～８９歳で１０００人当たり６６人に増加することを見出し、同様の値（１０００当たり８及び７９）が女性において認められた。アフリカ系アメリカ人集団の有病率は、白人集団よりも２５％高いと報告されている。加齢自体は心不全の原因ではないが、加齢は疾患の発現の閾値を低下させる。虚血性及び弁膜症の治療選択肢が成功したことにより、ある程度の心臓損傷を有する高齢者の数が増加しており、これは正常な加齢に関連する心臓予備力の低下によってますます損なわれている。一般に、高齢患者の心不全は、駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）の範疇に入る。現在、ＨＦｐＥＦに特異的に承認された治療法はない。
したがって、加齢に関連する心不全を治療するための有効な治療法に対する満たされていないニーズが高い。したがって、本開示の目的は、心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法、特に１又は複数の心不全関連併存症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法を提供することである。
本明細書で実証されるように、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、心不全の治療に有効である。特に、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体タンパク質は、保たれた駆出率に関連する心不全（ＨＦｐＥＦ）の特徴を示した、加齢Ｃ５７ＢＬ６マウスを使用した生理学的心臓加齢のマウスモデルにおいて心臓保護効果を実証した。例えば、本明細書に提示されるデータは、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体による治療が、限定するものではないが、ＬＶ収縮性、肥大、ＬＶ壁厚、心臓重量、収縮機能、及び心臓損傷の血清バイオマーカー（例えば、ｃＴｎＩ血清レベル）を含むこの心不全モデルに関連する様々な合併症にプラスの効果を及ぼすことを示す。特定の機構に拘束されることを望まないが、心不全に対するＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体の効果は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及び／又はＢＭＰ１０（本明細書では「ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド」又は「ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド」と呼ばれる）を含むがこれらに限定されないＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体タンパク質に結合する１又は複数のリガンドによって媒介されるリガンドシグナル伝達の拮抗によって主に引き起こされると予想される。機序にかかわらず、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体は、心不全に関連する様々な合併症の改善に有意なプラスの効果を有することが本明細書に提示されるデータから明らかであり、他のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストもまた、加齢に関連する心不全の治療に有用であり得ることを更に示唆する。
本明細書に開示される場合、「ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト」という用語は、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及び／又はＢＭＰ１０）を阻害するアンタゴニスト；１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド関連受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及びＡＬＫ７）を阻害するアンタゴニスト；及び１又は複数の下流シグナル伝達成分（例えば、Ｓｍａｄ２及び３等のＳｍａｄタンパク質）を阻害するアンタゴニストを含む、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドによるシグナル伝達を阻害するために使用され得る様々な薬剤を指す。本開示の方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストには、様々な形態、例えばＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップ（例えば、可溶性ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（そのバリアント並びにヘテロ多量体及びホモ多量体を含む））、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害する抗体）、小分子アンタゴニスト（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害する小分子）及びヌクレオチドアンタゴニスト（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害するヌクレオチド配列）が含まれる。
特定の態様では、本開示は、一般に、加齢に関連する心不全に関連する任意のプロセスにおいて、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドのシグナル伝達に拮抗する可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを提供する。本開示のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ１０等のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４の１又は複数のリガンドに拮抗し得、したがって、加齢に関連する心不全、又は心不全の１又は複数の併存症（例えば、貧血、狭心症、動脈性高血圧、関節炎、心房細動、悪液質、がん、認知機能障害、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、糖尿病、勃起不全、痛風、高コレステロール血症、高カリウム血症、高カリウム血症、高脂血症、高血圧症、鉄欠乏、腎機能障害、メタボリックシンドローム、肥満、身体的デコンディショニング、カリウム障害、肺疾患（例えば、喘息、ＣＯＰＤ）、サルコペニア、睡眠時無呼吸、睡眠障害、及び心臓弁膜症（例えば、大動脈弁狭窄、大動脈弁逆流、僧帽弁逆流、三尖弁逆流））の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるのに有用であり得る。
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全、又は心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）は、そのバリアント並びにそのヘテロ二量体及びヘテロ多量体を含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドには、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合することができるＴＧＦ－βスーパーファミリー関連タンパク質（そのバリアントを含む）が含まれる。したがって、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、一般に、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に拮抗することができるポリペプチドを含む。本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩ」という用語は、ＩＩ型アクチビン受容体のファミリーを指す。このファミリーには、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）及びアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫリガンドトラップは、フォリスタチンポリペプチド及びそのバリアントを含むがこれらに限定されない可溶性リガンドトラップタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニストを含む。
部分的には、本開示は、有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、加齢に関連する心不全を治療する方法を提供する。本開示はまた、有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを、それを必要とする患者に投与することを含む、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症を治療、予防、又は進行速度及び／又は重症度を低下させる方法を提供する。
いくつかの実施形態では、患者は少なくとも４０歳である。いくつかの実施形態では、患者は、約４０歳～約１００歳である。
本開示のいくつかの実施形態では、心不全は、駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）である。いくつかの実施形態では、患者の左室駆出率（ＬＶＥＦ）は５０％以上である。いくつかの実施形態では、患者は正常な収縮機能を有する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は呼吸困難を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、呼吸困難を減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、血管内膜厚の増加、血管剛性の増加、左心室（ＬＶ）肥大の増加、及び左心房拡大の増加からなる群から選択される心血管構造リモデリングを有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、血管内膜厚の増加、血管剛性の増加、ＬＶ肥大の増加、及び左心房拡大の増加からなる群から選択される患者の心血管構造リモデリングを改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者はＬＶ肥大を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＬＶ肥大を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左室肥大を減少させ、患者のＬＶ肥大は少なくとも１％（例えば、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は少なくとも５０％）減少する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の心臓充満圧を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張早期心充満を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は左心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の心房拡大を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左心房拡大を減少させ、患者の左心房拡大は少なくとも１％（例えば、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、又は少なくとも５０％）減少する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の血管内膜厚を減少させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の血管剛性を低下させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＬＶ肥大、心筋細胞サイズの増加、心筋細胞の喪失、及びＬＶ拡張末期容積の減少からなる群から選択される、心臓の心室構造の変化を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＬＶ肥大、心筋細胞サイズの増加、心筋細胞の喪失、及びＬＶ拡張末期容積の減少からなる群から選択される、患者の心臓の心室構造の変化を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心筋細胞サイズを減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、心筋細胞の喪失が患者において悪化するのを防ぐ。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張末期容積を増加させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、左心房肥大、不整脈、心房拡張、大動脈基部拡張、及び心房細動からなる群から選択される心臓の心房構造の変化を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、左心房肥大、不整脈、心房拡張、大動脈基部拡張、及び心房細動からなる群から選択される患者の心臓の心房構造の変化を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、拡張期心機能の変化、収縮期心機能の変化、及び電気的心機能の変化からなる群から選択される心臓の機能的変化を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、拡張期心機能の変化、収縮期心機能の変化、及び電気的心機能の変化からなる群から選択される患者の心臓の機能的変化を改善する。
いくつかの実施形態では、患者は、拡張機能の変化を有する。いくつかの実施形態では、患者は拡張機能障害を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の拡張機能障害を改善する。いくつかの実施形態では、患者は、心室弛緩の減少及び充満圧の増加を有する。いくつかの実施形態では、方法は、心室弛緩を増加させ、患者の充満圧を減少させる。いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害は、拡張早期僧帽弁輪組織速度（Ｅ／ｅ’）に対する拡張早期伝達流量の比によって測定される。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して増加する。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は８未満である。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は８～１５である。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は１５より大きい。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＥ／ｅ’比を減少させ、患者のＥ／ｅ’比は少なくとも５％（例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）減少する。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は、少なくとも１（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３５、４０、４５、又は５０）低下する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＥ／ｅ’比を８未満に減少させる。
いくつかの実施形態では、患者は、正常の拡張機能障害グレードを有する。いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害の正常グレードは、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、１～２の拡張早期左心房流量に対する拡張早期伝達流量の比（Ｅ／Ａ）、＜８のＥ／ｅ’、正常な左心房容積指数（ＬＡＶＩ）、及び＜１ ６０ｍｓの減速時間（ＤＴ）を含む。いくつかの実施形態では、患者は、１の拡張機能障害グレードを有する。いくつかの実施形態では、患者のグレード１の拡張機能障害は、弛緩障害による１未満のＥ／Ａ比、８未満のＥ／ｅ’、正常又は増加したＬＡＶＩ、及び類似の年齢及び性別の健康な人と比較して増加した減速時間を含む。いくつかの実施形態では、患者は、２の拡張機能障害グレードを有する。いくつかの実施形態では、患者のグレード２の拡張機能障害は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、１～２のＥ／Ａ、８～１５のＥ／ｅ’、ＬＡＶＩの増加、及び減速時間の減少を含む。いくつかの実施形態では、患者は、３の拡張機能障害グレードを有する。いくつかの実施形態では、患者のグレード３の拡張機能障害は、Ｅ／Ａ＞２、１５を超えるＥ／ｅ’、増加したＬＡＶＩ、及び同様の年齢及び性別の健康な人と比較して重度に低下したＬＶコンプライアンス及び高いＬＶ充満圧による非常に短いＥ減速時間（＜１４０ｍｓ）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の拡張機能障害グレードを改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３からグレード２に改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３からグレード１に改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３から正常に改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード２からグレード１に改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード２から正常に改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード１から正常に改善する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＬＶ拡張機能を（例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）増加させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、少なくとも５０％（例えば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）の駆出率を有する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、心電図検査を使用して電気的機能変化について評価される。いくつかの実施形態では、心電図測定値の患者の変化は、Ｐ波持続時間、Ｐ－Ｒ間隔及びＱ－Ｔ間隔の増加、並びにＴ波電圧及びＱＲＳ軸の左方向のシフトからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、Ｐ波持続時間の減少、Ｐ－Ｒ間隔の減少、Ｑ－Ｔ間隔の減少、Ｔ波電圧の増加、及びＱＲＳ軸の正常位置へのシフトからなる群から選択される患者の心電図測定値を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、拡張ストレス試験を使用して拡張機能障害について評価される。いくつかの実施形態では、拡張期ストレス試験は、カテーテル留置テーブルに固定された自転車で行われる。いくつかの実施形態では、拡張期ストレス試験は、心エコー検査を使用して行われる。いくつかの実施形態では、患者は、運動を伴う中隔ｅ’速度＜７ｃｍ／ｓ又は横方向ｅ’速度＜静止時１０ｃｍ／ｓ、平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５、運動を伴うピーク三尖弁逆流（ＴＲ）速度＞２．８ｍ／ｓ、及び＞３４ｍＬ／ｍ２の左心房容積指数（ＬＡＶＩ）からなる群から選択されるパラメータを用いる異常拡張期ストレス試験を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、安静時に患者の中隔ｅ’速度を７ｃｍ／ｓ超まで、又は側方ｅ’速度を１０ｃｍ／ｓ超まで増加させ、運動により平均Ｅ／ｅ’を１４未満まで、又は中隔Ｅ／ｅ’比を１５未満まで減少させ、運動によりピーク三尖弁逆流（ＴＲ）速度を２．８ｍ／ｓ未満まで減少させ、左心房容積指数（ＬＡＶＩ）を３４ｍＬ／ｍ２未満まで減少させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９点）低下させる。いくつかの実施形態では、患者は、右心カテーテル法を用いて心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、安静時に１５ｍｍＨｇ以上の肺毛細血管楔入圧（ＰＣＷＰ）及び／又は運動中に２５ｍｍＨｇ以上のＰＣＷＰを有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、安静時の患者のＰＣＷＰを少なくとも１５ｍｍＨｇ未満に低下させ、及び／又は運動中のＰＣＷＰを少なくとも２５ｍｍＨｇ未満に低下させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、５点以上の欧州心不全協会（ＥＨＦＡ）スコアを有する。いくつかの実施形態では、５点以上のＥＨＦＡスコアは、ＨＦｐＥＦを示す。いくつかの実施形態では、患者は、２～４点のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、２～４点のＥＨＦＡスコアは、患者がＨＦｐＥＦを有することを示す。いくつかの実施形態では、患者は、１ポイント以下のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、１以下のＥＨＦＡスコアは、患者がＨＦｐＥＦを有していないことを示す。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１つ又はそれを超える主要な機能的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要な機能的基準は、運動による中隔のｅ’速度＜７ｃｍ／ｓ、横方向ｅ’速度＜静止時１０ｃｍ／ｓ、平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５及び運動による＞２．８ｍ／ｓのＴＲ速度からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、中隔のｅ’速度を７ｃｍ／ｓ超に増加させること、安静時に横方向のｅ’速度を１０ｃｍ／ｓ超に増加させること、運動によりＥ／ｅ’を１４未満又は中隔のＥ／ｅ’比を１５未満に減少させること、及び運動によりＴＲ速度を２．８ｍ／ｓ未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の主要な機能基準を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１つ又はそれを超える主要な形態学的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要な形態学的基準は、男性ではＬＡＶＩ＞３４ｍＬ／ｍ２及びＬＶＭＩ≧１４９ｇ／ｍ２及び女性では≧１２２ｇ／ｍ２及びＲＷＴ＞０．４２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＬＡＶＩを３４ｍＬ／ｍ２未満に減少させ、ＬＶＭＩを男性では１４９ｇ／ｍ２未満に減少させ、女性では１２２ｇ／ｍ２未満に減少させ、ＲＷＴを０．４２未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の主要な形態学的基準を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦの１又は複数の主要バイオマーカーＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要なバイオマーカー基準は洞調律であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ＞８０ｐｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、主要なバイオマーカー基準は心房細動であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞６６０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ＞２４０ｐｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜２２０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜８０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、洞調律を改善する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜６６０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜２４０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、心房細動を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１つ又はそれを超える軽微なＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の軽微な機能的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、副次的機能基準は、平均Ｅ／ｅ’９～１４及びＧＬＳ＜１６％からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、Ｅ／ｅ’を８以下に減少させること及びＧＬＳを＞１６％に増加させることを含む、軽微な機能的基準を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１つ又はそれを超える軽微な形態学的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、軽微な形態学的基準は、ＬＡＶＩ２９～３４ｍＬ／ｍ２、男性ではＬＶＭＩ＞１１５ｇ／ｍ２、女性ではＬＶＭＩ９５ｇ／ｍ２、ＲＷＴ＞０．４２、及びＬＶ壁厚≧１２ｍｍからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＬＡＶＩを３４ｍＬ／ｍ２未満に減少させること、ＬＶＭＩを男性では１１５ｇ／ｍ２未満に減少させること、ＬＶＭＩを女性では９５ｇ／ｍ２未満に減少させること、ＲＷＴを０．４２未満に減少させること、及びＬＶ壁厚を１２ｍｍ未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の軽微な形態学的基準を改善する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦの１又は複数の軽微なバイオマーカーＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、マイナーなバイオマーカー基準は、５－ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ１２５～２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ３５～８０ｐｇ／ｍＬを有する洞調律である。いくつかの実施形態では、マイナーなバイオマーカー基準は心房細動であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ３６５－６６０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ１０５－２４０ｐｇ／ｍＬを伴う。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、５－ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜２２０ｐｇ／ｍＬに低下させること、及び／又はＢＮＰを＜８０ｐｇ／ｍＬに低下させることを含む、洞調律を改善する。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜６６０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜２４０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、心房細動を改善する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＥＨＦＡスコアを（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８ポイント）低下させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）クラスＩのＨＦを有する。いくつかの実施形態では、患者はＮＹＨＡクラスＩＩＨＦを有する。いくつかの実施形態では、患者はＮＹＨＡクラスＩＩＩのＨＦを有する。いくつかの実施形態では、患者はＮＹＨＡクラスＩＶのＨＦを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＮＹＨＡクラスを減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩＩからクラスＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩＩからクラスＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩからクラスＩに減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ／Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＣＣＦ／ＡＨＡ）ステージＡ心不全を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＢ心不全を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＣ心不全を有する。いくつかの実施形態では、患者はＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＤ心不全を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡ段階を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＣに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＢに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＡに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＣからステージＢに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＣからステージＡに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージ又はステージＢからステージＡに減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＡＭＩクラスＩ心不全を悪化させるＨＦのＫｉｌｌｉｐ分類を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＡＭＩクラスＩＩ心不全を悪化させるＨＦのＫｉｌｌｉｐ分類を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＡＭＩクラスＩＩＩ心不全を悪化させるＨＦのＫｉｌｌｉｐ分類を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＡＭＩクラスＩＶ心不全を悪化させるＨＦのＫｉｌｌｉｐ分類を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＡＭＩクラスを複雑にするＨＦの患者のＫｉｌｌｉｐ分類を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＶからクラスＩＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＶからクラスＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のキルリップクラスをクラスＩＶからクラスＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のキルリップクラスをクラスＩＩＩからクラスＩＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のキルリップクラスをクラスＩＩＩからクラスＩに減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のキルリップクラス又はクラスＩＩからクラスＩに減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの診断のための１又は複数の主要なフラミンガム基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、発作性夜間呼吸困難又は起座呼吸、頸静脈拡張、ラ音、Ｘ線心拡大、急性肺水腫、Ｓ３ギャロップ、１６ｃｍを超える水の静脈圧上昇、２５秒以上の循環時間、肝頸静脈反射、及び治療に反応した５日間で４．５ｋｇ以上の体重減少からなる群から選択される１又は複数の状態を有する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの診断のための１又は複数の軽微なフラミンガム基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、両側性足首浮腫、夜間咳、通常の運動時の呼吸困難、肝腫大、胸水、記録された最大値から１／３の肺活量の減少、及び頻脈（心拍数が１２０／分を超える）からなる群から選択される１又は複数の状態を有する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、少なくとも２つのＦｒａｍｉｎｇｈａｍ主要基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１つの主要なＦｒａｍｉｎｇｈａｍ基準及び少なくとも２つの軽微なｆｒａｍｉｎｇｈａｍ基準を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者が有する心不全のためのフラミンガム基準の数を減らす。いくつかの実施形態では、本方法は、患者が有する心不全の主要なフラミンガム基準の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者が有する心不全の軽微なフラミンガム基準の数を減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、典型的な症状、あまり典型的でない症状、特定の徴候、及びＨＦのあまり特定的でない徴候からなる群から選択される１又は複数の状態を有する。いくつかの実施形態では、患者は、息切れ、起座呼吸、発作性夜間呼吸困難、運動耐性の低下、疲労、疲れ、運動後の回復時間の増加、及び足首の腫脹からなる群から選択される１又は複数の症状を有する。いくつかの実施形態では、患者は、夜間の咳、喘鳴、膨満感、食欲不振、錯乱（特に高齢者）、うつ、動悸、めまい、失神、及び呼吸屈曲からなる群から選択される１又は複数のあまり典型的でない症状を有する。
本開示のいくつかの実施形態では、患者はＨＦの１又は複数の徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、頸静脈圧上昇、肝頸静脈逆流、第３の心音（ギャロップ律動）、及び側方に変位した心尖インパルスからなる群から選択されるＨＦの１又は複数の徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの１又は複数の非特異的徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの１又は複数の非特異的徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、体重増加（＞２ｋｇ／週）、体重減少（進行したＨＦにおける）、組織消耗（悪液質）、心雑音、末梢浮腫（足首、仙骨、陰嚢）、肺クリーピング、肺底での知覚への空気進入及び鈍麻の減少（胸水）、頻脈、不規則な脈拍、頻呼吸、チェインストークス呼吸、肝腫大、腹水、四肢の冷感、乏尿症、及び狭い脈圧からなる群から選択されるＨＦの１又は複数のあまり特定されない徴候を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者が有する心不全の徴候及び／又は症状の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者が有する心不全の徴候の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者が有する心不全の症状の数を減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、健康な患者と比較して脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）レベルが上昇している。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも３５ｐｇ／ｍＬ（例えば、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、１０００、３０００、５０００、１０，０００、１５，０００、又は２０，０００ｐｇ／ｍＬ）のＢＮＰレベルを有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＢＮＰレベルを少なくとも５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又は少なくとも８０％）減少させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＢＮＰレベルを少なくとも５ｐｇ／ｍＬ（例えば、５、１０、５０、１００、２００、５００、１０００、又は５０００ｐｇ／ｍＬ）低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＢＮＰレベルを正常レベル（すなわち、＜１００ｐｇ／ｍｌ）まで低下させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、健康な患者と比較して、上昇したＮ末端プロＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）レベルを有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１０ｐｇ／ｍＬ（例えば、１０、２５、５０、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、１０００、３０００、５０００、１０，０００、１５，０００、又は２０，０００ｐｇ／ｍＬ）のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを少なくとも５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又は少なくとも８０％）減少させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法が、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを少なくとも１０ｐｇ／ｍＬ（例えば、１０、２５、５０、１００、２００、５００、１０００、５０００、１０，０００、１５，０００、２０，０００、又は２５，０００ｐｇ／ｍＬ）低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを正常レベル（すなわち、＜１００ｐｇ／ｍｌ）まで低下させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、健康な患者と比較してトロポニンレベルが上昇している。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも１％（例えば、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又は少なくとも８０％）低下させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の入院率を少なくとも１％（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％）低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも１％（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％）低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者が病院に留まる必要性を低減する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の総通院回数を減らす。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の最初の入院までの時間を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、来院間の時間を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、再発性来院の回数を減少させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の心拍出量を少なくとも５％（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又は少なくとも８０％）増加させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の運動能力を増加させる。いくつかの実施形態では、患者は、１５０～４００メートルの６分歩行距離を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の６分の歩行距離を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者の６分歩行距離を少なくとも１０メートル（例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００メートル、又は４００メートル超）増加させる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のボーグ呼吸困難指数（ＢＤＩ）を低下させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、患者のＢＤＩを少なくとも０．５指標点（例えば、少なくとも０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、又は１０個の指標点）減少させる。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、心臓磁気共鳴画像法（ＣＭＲ）を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、後期ガドリニウム増強（ＬＧＥ）を伴うＣＭＲを使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、限定するものではないが、ＬＶ壁厚（ＬＶＷＴ）、ＬＶ質量（ＬＶＭ）、ＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、ＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）、短縮率（ＦＳ）（式ＦＳ＝１００％ｘ［（ＥＤＤ－ＥＳＤ）／ＥＤＤ］を使用して計算される）、ＬＶ拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）、ＬＶ収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）、駆出率（式ＥＦ＝１００％ｘ［（ＥＤＶ－ＥＳＶ）／ＥＤＶ］を使用して計算される）、肥大指数（ＬＶＥＳＶに対するＬＶＭの比として計算される）、及び相対壁厚（ＬＶＥＳＤに対するＬＶＷＴの比として計算される）を含む、ＬＶ構造及び収縮機能（例えば、乳頭筋レベルで胸骨傍短軸視野でＭモードによって測定される）からなる群から選択される１又は複数の状態について評価される。いくつかの実施形態では、患者の心不全は、多ゲート収集（ＭＵＧＡ）、胸部Ｘ線、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び放射性ヌクレオチド脳室撮影法、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、冠動脈造影法、及び心臓コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）からなる群から選択される心臓イメージングを使用して評価される。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、追加の支持療法又は活性剤を患者に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の支持療法又は活性剤は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、β遮断薬、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、ミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）、グルココルチコイド、スタチン、ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤、植込み型除細動器（ＩＣＤ）、アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）、及び利尿薬からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、追加の活性剤及び／又は支持療法は、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル、トランドラプリル、ゾフェノプリル、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン、テルミサルタン、プロゲステロン、エプレレノン及びスピロノラクトン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デフラザコート、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、トリアムシノロン、フィネレノン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジン、エルツグリフロジン、バルサルタン及びサクビトリル（ネプリライシン阻害剤）、フロセミド、ブメタニド、トラセミド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、インダパミド、スピロノラクトン／エプレレノン、アミロリドトリアムテレン、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）及びＩｆチャネル阻害剤からなる群から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、患者は、貧血、狭心症、動脈性高血圧、関節炎、心房細動、悪液質、がん、認知機能障害、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、糖尿病、勃起不全、痛風、高コレステロール血症、高カリウム血症、高カリウム血症、高脂血症、高血圧症、鉄欠乏、腎機能障害、メタボリックシンドローム、肥満、身体的体調不良、カリウム障害、肺疾患（例えば、喘息、ＣＯＰＤ）、筋肉減少症、睡眠時無呼吸、睡眠障害、及び心臓弁膜症（例えば、大動脈弁狭窄、大動脈弁逆流、僧帽弁逆流、三尖弁逆流）からなる群から選択される併存症を有する。いくつかの実施形態では、ＨＦで考慮すべき１又は複数の併存症は、貧血、心房細動、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、及び睡眠時無呼吸からなる群から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストはヘテロ多量体である。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか１つで始まり、配列番号３６６のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、又は１３５のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドドメインとｉ）１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、リンカードメインは、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３７８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストはホモ二量体ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ヘテロ多量体ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ７ポリペプチドを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、及び４２２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３、及び１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、ＡＬＫ７ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチドドメインとｉ）１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＡＬＫ７ポリペプチドドメインとｉ）１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、リンカードメインは、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む；ｃ．）ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｄ．）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｅ．）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦＣドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む；ｃ．）ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｄ．）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｅ．）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦＣドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストはヘテロ多量体である。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～２９（例えば、アミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸１０９～１３４（例えば、アミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～１３４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３８８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３８９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインと１若しくは複数の異種ドメイン又はＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、リンカードメインは、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ａ２４Ｎ、Ｓ２６Ｔ、Ｎ３５Ｅ、Ｅ３７Ａ、Ｅ３７Ｄ、Ｌ３８Ｎ、Ｒ４０Ａ、Ｒ４０Ｋ、Ｓ４４Ｔ、Ｌ４６Ｖ、Ｌ４６Ｉ、Ｌ４６Ｆ、Ｌ４６Ａ、Ｅ５０Ｋ、Ｅ５０Ｐ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ａ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｇ、Ｅ５２Ｈ、Ｅ５２Ｋ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｐ、Ｅ５２Ｒ、Ｅ５２Ｓ、Ｅ５２Ｔ、Ｅ５２Ｙ、Ｑ５３Ｒ、Ｑ５３Ｋ、Ｑ５３Ｎ、Ｑ５３Ｈ、Ｄ５４Ａ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｒ、Ｒ５６Ａ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｙ６０Ｆ、Ｙ６０Ｋ、Ｙ６０Ｐ、Ｒ６４Ａ、Ｒ６４Ｈ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｎ６５Ａ、Ｓ６７Ｎ、Ｓ６７Ｔ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ａ、Ｋ７４Ｅ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｒ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｋ、Ｌ７９Ｐ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ、Ｆ８２Ａ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｗ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ａ、Ｎ８３Ｒ、Ｔ９３Ｄ、Ｔ９３Ｅ、Ｔ９３Ｇ、Ｔ９３Ｈ、Ｔ９３Ｋ、Ｔ９３Ｐ、Ｔ９３Ｒ、Ｔ９３Ｓ、Ｔ９３Ｙ、Ｅ９４Ｋ、Ｑ９８Ｄ、Ｑ９８Ｅ、Ｑ９８Ｋ、Ｑ９８Ｒ、Ｖ９９Ｅ、Ｖ９９Ｇ、Ｖ９９Ｋ、Ｅ１０５Ｎ、Ｆ１０８Ｉ、Ｆ１０８Ｌ、Ｆ１０８Ｖ、Ｆ１０８Ｙ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｈ、Ｅ１１１Ｋ、１１１Ｎ、Ｅ１１１Ｑ、Ｅ１１１Ｒ、Ｒ１１２Ｈ、Ｒ１１２Ｋ、Ｒ１１２Ｎ、Ｒ１１２Ｓ、Ｒ１１２Ｔ、Ａ１１９Ｐ、Ａ１１９Ｖ、Ｇ１２０Ｎ、Ｅ１２３Ｎ、Ｐ１２９Ｎ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、及びＡ１３２Ｎからなる群から選択される配列番号２のアミノ酸配列に関して１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｙ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ、及びＶ９９Ｇからなる群から選択される配列番号２のアミノ酸配列に関して１又は複数のアミノ酸置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＥ５０に対応する位置にＬ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にＮ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＶ９９に対応する位置にＧ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にＲ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にＴ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にＨ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２７６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２７８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にＩ置換及びＮ８３に対応する位置にＲ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２７９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にＫ置換及びＮ８３に対応する位置にＲ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にＴ置換及びＮ８３に対応する位置にＲ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にＴ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３３９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にＨ置換及びＦ８２に対応する位置にＩ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にＨ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にＨ置換及びＦ８２に対応する位置にＫ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３４８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ５０に対応する位置にＬ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にＮ置換を含み、Ｌ７９に対応する位置にＲ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＶ９９に対応する位置にＧ置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドはホモ二量体ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ二量体ポリペプチドである。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～２９（例えば、アミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸１０９～１３４（例えば、アミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列、並びにＬ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｎ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ及びＶ９９Ｇからなる群から選択される配列番号２の位置の１又は複数のアミノ酸置換と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～２９（例えば、アミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸１０９～１３４（例えば、アミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列、並びにＬ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｙ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ及びＶ９９Ｇからなる群から選択される配列番号２の位置の１又は複数のアミノ酸置換と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～１３４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３８８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３８９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｙ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ、及びＶ９９Ｇからなる群から選択される配列番号２のアミノ酸配列に関して１又は複数のアミノ酸置換を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、及び４２２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３及び１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、ＡＬＫ７ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインと１若しくは複数の異種ドメイン又はＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチドドメインと１若しくは複数の異種ドメイン又はＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＡＬＫ７ポリペプチドドメインと１若しくは複数の異種ドメイン又はＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む。いくつかの実施形態では、リンカードメインは、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む；ｃ．）ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｄ．）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｅ．）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦＣドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む；ｃ．）ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；ｄ．）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｅ．）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含むＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦＣドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ヘテロ多量体は、ａ）配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド；並びにｂ）配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドから選択されるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストはフォリスタチンポリペプチドである。いくつかの実施形態では、フォリスタチンポリペプチドは、配列番号３９０、３９１、３９２、３９３及び３９４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列である。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡｃｔＲＩＩＢからなる群から選択される１又は複数のリガンドを阻害する。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、抗体又は抗体の組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗体又は抗体の組み合わせは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡｃｔＲＩＩＢからなる群から選択される１又は複数のリガンドに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ガレトスマブ、トレボグマブ、スタムルマブ、ドマグロズマブ、ランドグロズマブ及びビマグルマブからなる群から選択される。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、小分子又は小分子の組み合わせである。いくつかの実施形態では、小分子又は小分子の組み合わせは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ、及びＡｃｔＲＩＩＢからなる群から選択される１又は複数のリガンドを阻害する。
本開示のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの組み合わせは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢからなる群から選択される１又は複数のリガンドを阻害する。
複数のＡｃｔＲＩＩＢ及びＡｃｔＲＩＩＡ結晶構造の複合分析に基づいて、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ（配列番号１）及びヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号３６７）の細胞外ドメインと本明細書で推定される残基との整列を示す図であり、ボックスで示されるリガンドに直接接触する。 ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチド（配列番号２）；ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１０９７．２）のアミノ酸配列を示す図である。シグナルペプチドには下線が引かれ、細胞外ドメインは太字（配列番号１とも呼ばれる）であり、潜在的なＮ結合型グリコシル化部位は四角で囲まれている。配列番号２は、本開示におけるヒトＡｃｔＲＩＩＢの野生型参照配列として使用され、本明細書に記載のバリアントの番号付けは、配列番号２の番号付けに基づく。 ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインポリペプチド（配列番号１）のアミノ酸配列を示す図である。 ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチドをコードする核酸配列を示す図である。配列番号４は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１０６．４のヌクレオチド４３４～１９７２からなる。 ヒトＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）細胞外ドメインポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を示す図である。 それらの細胞内ドメインを有しない種々の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチド（配列番号３５８～３６３）、その細胞内ドメインを有しないヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体ポリペプチド（配列番号３６４）、及びコンセンサスＡｃｔＲＩＩ前駆体ポリペプチド（配列番号３６５）の多重配列アラインメントを示す図である。コンセンサス配列中の大文字は、保存されている位置を示す。コンセンサス配列中の小文字は、優勢な形態であるがその位置でユニバーサルではないアミノ酸残基を示す。 Ｃｌｕｓｔａｌ２．１を使用したヒトＩｇＧアイソタイプ由来のＦｃドメインの複数の配列アラインメントを示す図である。ヒンジ領域は点線の下線で示されている。二重下線は、非対称鎖ペアリングを促進するためにＩｇＧ１（配列番号１３）Ｆｃにおいて操作された位置、並びに他のアイソタイプＩｇＧ４（配列番号１７）、ＩｇＧ２（配列番号１４）及びＩｇＧ３（配列番号１５）に関して対応する位置の例を示す。 バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（「Ｘ」と表示）及びＡＬＫ４ポリペプチド（「Ｙ」と表示）又はＡＬＫ７ポリペプチド（「Ｙ」と表示）のいずれかを含むヘテロマーポリペプチド複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドのいずれかは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図８Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図８Ｂを参照されたい。 バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（「Ｘ」と表示）及びＡＬＫ４ポリペプチド（「Ｙ」と表示）又はＡＬＫ７ポリペプチド（「Ｙ」と表示）のいずれかを含むヘテロマーポリペプチド複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドのいずれかは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図８Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図８Ｂを参照されたい。 様々な脊椎動物ＡＬＫ４タンパク質及びヒトＡＬＫ４（配列番号４１４～４２０）の多重配列アラインメントを示す図である。 様々な脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡタンパク質及びヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号３６７、３７１～３７７）の多重配列アラインメントを示す図である。 Ｉ型受容体及びＩＩ型受容体ポリペプチドを含むヘテロマータンパク質複合体の２つの概略的な例を示す図である。図１１Ａは、１つのＩ型受容体融合ポリペプチド及び１つのＩＩ型受容体融合ポリペプチドを含むヘテロ二量体タンパク質複合体を示し、これらは、各ポリペプチド鎖内に含まれる多量体化ドメインを介して共有結合的又は非共有結合的に組み立てることができる。２つの集合した多量体化ドメインは相互作用対を構成し、これはガイドされてもガイドされなくてもよい。図１１Ｂは、図１１Ａに示されるような２つのヘテロ二量体複合体を含むヘテロ四量体タンパク質複合体を示す。より高次の複合体が想定され得る。 Ｉ型受容体及びＩＩ型受容体ポリペプチドを含むヘテロマータンパク質複合体の２つの概略的な例を示す図である。図１１Ａは、１つのＩ型受容体融合ポリペプチド及び１つのＩＩ型受容体融合ポリペプチドを含むヘテロ二量体タンパク質複合体を示し、これらは、各ポリペプチド鎖内に含まれる多量体化ドメインを介して共有結合的又は非共有結合的に組み立てることができる。２つの集合した多量体化ドメインは相互作用対を構成し、これはガイドされてもガイドされなくてもよい。図１１Ｂは、図１１Ａに示されるような２つのヘテロ二量体複合体を含むヘテロ四量体タンパク質複合体を示す。より高次の複合体が想定され得る。 Ｉ型受容体ポリペプチド（「Ｉ」として示される）（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡＬＫ４タンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）及びＩＩ型受容体ポリペプチド（「ＩＩ」として示される）（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡｃｔＲＩＩＢタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）を含むヘテロマータンパク質複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、Ｉ型受容体ポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＩＩ型受容体ポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、Ｉ型又はＩＩ型受容体ポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーは、ガイドされた（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味し、又は相互作用対はガイドされなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合するか又は自己会合し得、同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。伝統的なＦｃ融合タンパク質及び抗体は、ガイドされない相互作用対の例であるが、様々な操作されたＦｃドメインは、ガイドされた（非対称）相互作用対として設計されている［例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。 ＡＬＫ４ポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡＬＫ４タンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）及びＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡｃｔＲＩＩＢタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）を含むヘテロマータンパク質複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図１３Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図１３Ｂを参照されたい。より高次の複合体が想定され得る。図１３Ｃ及び図１３Ｄを参照されたい。 ＡＬＫ４ポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡＬＫ４タンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）及びＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡｃｔＲＩＩＢタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）を含むヘテロマータンパク質複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図１３Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図１３Ｂを参照されたい。より高次の複合体が想定され得る。図１３Ｃ及び図１３Ｄを参照されたい。 ＡＬＫ４ポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡＬＫ４タンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）及びＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡｃｔＲＩＩＢタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）を含むヘテロマータンパク質複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図１３Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図１３Ｂを参照されたい。より高次の複合体が想定され得る。図１３Ｃ及び図１３Ｄを参照されたい。 ＡＬＫ４ポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡＬＫ４タンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）及びＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、ヒト又は本明細書に記載されるもの等の他の種由来のＡｃｔＲＩＩＢタンパク質の細胞外ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド）を含むヘテロマータンパク質複合体の概略例を示す図である。図示の実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、相互作用対の第１のメンバー（「Ｃ１」）を含む融合ポリペプチドの一部であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、相互作用対の第２のメンバー（「Ｃ２」）を含む融合ポリペプチドの一部である。適切な相互作用対としては、例えば、重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン相互作用対、切断、及び本明細書に記載されるもの等のそのバリアントが挙げられる［例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６］。各融合ポリペプチドにおいて、リンカーは、ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと相互作用対の対応するメンバーとの間に配置され得る。相互作用対の第１のメンバー及び第２のメンバーはガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、それらが同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する。図１３Ａを参照されたい。あるいは、相互作用対は、誘導（非対称）対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。図１３Ｂを参照されたい。より高次の複合体が想定され得る。図１３Ｃ及び図１３Ｄを参照されたい。 ＣＨＯ細胞で発現されたＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃの精製を示す。タンパク質は、サイジングカラム（上のパネル）及びクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（下のパネル）によって可視化されるような単一の明確に定義されたピークとして精製される（左レーン：分子量標準；右レーン：ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ）。 Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイによって測定した場合のアクチビン（上のパネル）及びＧＤＦ－１１（下のパネル）へのＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃの結合を示す図である。 Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイによって測定した場合のアクチビン（上のパネル）及びＧＤＦ－１１（下のパネル）へのＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃの結合を示す図である。 ３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定された、バリアント又は未修飾ＡｃｔＲＩＩＢドメインを含むホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドのリガンド結合速度論の値を示す図である。アミノ酸ナンバリングは配列番号２に基づく。ＮＤ＃は、値が試験した濃度範囲にわたって検出不能であることを示す。一過性＊は、相互作用の一過性な性質のために値が不確定であることを示す。対照試料はＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃ（配列番号５）である。 ３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定された、バリアント又は未修飾ＡｃｔＲＩＩＢドメインを含むホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドのリガンド結合速度論の値を示す図である。アミノ酸ナンバリングは配列番号２に基づく。ＮＤ＃は、値が試験した濃度範囲にわたって検出不能であることを示す。一過性＊は、相互作用の一過性な性質のために値が不確定であることを示す。対照試料はＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃ（配列番号５）である。 ３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定された、バリアント又は未修飾ＡｃｔＲＩＩＢドメインを含むホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドのリガンド結合速度論の値を示す図である。アミノ酸ナンバリングは配列番号２に基づく。ＮＤ＃は、値が試験した濃度範囲にわたって検出不能であることを示す。一過性結合＊は、相互作用の一過性の性質のために値が不確定であることを示す。対照試料はＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃ（配列番号５）である。 ２５℃での表面プラズモン共鳴によって決定された、バリアント又は未修飾ＡｃｔＲＩＩＢドメインを含むホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドのリガンド結合速度論の値を示す図である。ＮＤ＃は、値が試験した濃度範囲にわたって検出不能であることを示す。アミノ酸ナンバリングは配列番号２に基づく。 ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体及びＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体と比較した、ＡＬＫ４－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロ二量体タンパク質複合体の比較リガンド結合データを示す図である。各タンパク質複合体について、リガンドをｋｏｆｆ（リガンドシグナル伝達阻害とよく相関する速度定数）によってランク付けし、結合親和性の降順に列挙する（最も強く結合したリガンドを上に列挙する）。左において、黄色、赤色、緑色、及び青色の線は、オフ速度定数の大きさを示す。黒色実線は、ヘテロ二量体への結合がホモ二量体と比較して増強されているか又は変化していないリガンドを示し、一方、赤色破線はホモ二量体と比較して結合が実質的に減少していることを示す。示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体は、いずれかのホモ二量体と比較してアクチビンＢへの結合の増強を示し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体で観察されるようにアクチビンＡ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１への強い結合を保持し、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、及びＧＤＦ３への結合の実質的な減少を示す。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と同様に、ヘテロ二量体はＢＭＰ６への中間レベルの結合を保持する。 本明細書に記載のＡ－２０４レポーター遺伝子アッセイによって測定した比較ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体／ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体ＩＣ５０データを示す。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と同様に、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１シグナル伝達経路を阻害する。しかしながら、ＢＭＰ９及びＢＭＰ１０シグナル伝達経路のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体阻害は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較して有意に減少する。これらのデータは、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ二量体が、対応するＡｃｔＲＩＩＢ：ＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体と比較して、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１のより選択的なアンタゴニストであることを実証している。 ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体及びＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体と比較したＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体タンパク質複合体の比較リガンド結合データを示す図である。各タンパク質複合体について、リガンドをｋｏｆｆ（リガンドシグナル伝達阻害とよく相関する速度定数）によってランク付けし、結合親和性の降順に列挙する（最も強く結合したリガンドを上に列挙する）。左において、黄色、赤色、緑色、及び青色の線は、オフ速度定数の大きさを示す。黒色実線は、ヘテロ二量体への結合がホモ二量体と比較して増強されているか又は変化していないリガンドを示し、一方、赤色破線はホモ二量体と比較して結合が実質的に減少していることを示す。示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体への強い結合を有する５つのリガンドのうち４つ（アクチビンＡ、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１）は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体への結合の減少を示し、例外はヘテロ二量体への強固な結合を保持するアクチビンＢである。同様に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体への中間体結合を有する４つのリガンドのうち３つ（ＧＤＦ３、ＢＭＰ６、特にＢＭＰ９）は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体への結合の減少を示すが、アクチビンＡＣへの結合は増加して、ヘテロ二量体全体との２番目に強いリガンド相互作用になる。最後に、アクチビンＣ及びＢＭＰ５は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体に結合しない（アクチビンＣ）又は弱い結合（ＢＭＰ５）にもかかわらず、中間の強度でＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体に予想外に結合する。試験したリガンドは、ＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体に結合しない。 様々な脊椎動物種（配列番号４２５～４３０）に由来するＡＬＫ７細胞外ドメインの多重配列アラインメントを示す図である。 ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃは、高齢心臓におけるＬＶリモデリング中の心拡張機能障害をレスキューしたことを示す図である。２４月齢の１３匹の雄マウス（「高齢」）及び４月齢の１０匹のマウス（「若齢」）を試験した。「高齢」及び「若齢」マウスの群に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を１週間に２回、８週間皮下投与した（「若齢ビヒクル」又は「高齢ビヒクル」）。別の群の「高齢」マウスに、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）を週に２回、８週間皮下投与した（「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」）。ビヒクルの体積及び投与されたＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃの体積は同じであった。拡張機能障害の測定値であるＥ／ｅ’は、「Ｙｏｕｎｇ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスと比較して「Ｏｌｄ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウス（ｎ＝７）で増加した（ｎ＝１０、ｐ＜０．０１）。「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」マウスにおけるＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ処理は、Ｅ／ｅ’を有意に減少させた（ｎ＝６、ｐ＜０．０５）。
１．概要
特定の態様では、本開示は、心不全を治療するためにＴＧＦ－βスーパーファミリーリガンドアンタゴニスト、特にＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを使用する方法に関する。例えば、本明細書に記載のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを使用して、加齢に関連する心不全、又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減することができる。
心不全（ＨＦ）は、息切れ、足首の腫脹及び疲労を含む症状を特徴とする臨床症候群であり、頸静脈圧の上昇、肺亀裂及び構造的及び／又は機能的な心臓の異常によって引き起こされる末梢浮腫を含む徴候を伴い得る。ＨＦは、典型的には、安静時又はストレス中に心拍出量の減少及び／又は心内圧の上昇をもたらす。
臨床症状が明らかになる前に、患者は、ＨＦの前駆体である無症候性の構造的又は機能的な心臓異常（例えば、収縮期又は拡張期の左心室（ＬＶ）機能不全）を呈することがある。これらの前駆体は転帰不良に関連するため、これらの前駆体の認識は重要であり、前駆体段階で治療を開始すると、無症候性収縮期ＬＶ機能不全患者の死亡率を低下させる可能性がある。
根本的な心臓原因の実証は、ＨＦの診断の中心である。これには、通常、収縮期及び／又は拡張期心室機能不全を引き起こす心筋異常が含まれる。しかしながら、弁、心膜、心内膜、心調律及び伝導の異常もＨＦを引き起こす可能性がある（また、２つ以上の異常がしばしば存在する）。根本的な心臓の問題の特定は、正確な病態が使用される具体的な治療を決定するため、治療上の理由から重要である（例えば、弁疾患のための弁修復又は置換、ＥＦが低下したＨＦのための特定の薬理学的療法、頻拍性心筋症における心拍数の低下等）。
ＴＧＦ－βスーパーファミリーリガンドシグナルは、リガンド刺激時に下流のＳｍａｄタンパク質をリン酸化及び活性化するＩ型及びＩＩ型セリン／トレオニンキナーゼ受容体のヘテロマー複合体によって媒介される（Ｍａｓｓａｇｕｅ，２０００，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１：１６９－１７８）。これらのＩ型及びＩＩ型受容体は全て膜貫通ポリペプチドであり、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予測されるセリン／トレオニン特異性を有する細胞質ドメインから構成される。Ｉ型受容体はシグナル伝達に必須であり、ＩＩ型受容体はリガンドの結合に必要である。Ｉ型及びＩＩ型アクチビン受容体は、リガンド結合後に安定な複合体を形成し、ＩＩ型受容体によるＩ型受容体のリン酸化をもたらす。
２つの関連するＩＩ型受容体、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢは、アクチビンのＩＩ型受容体として同定されている（Ｍａｔｈｅｗｓ ａｎｄ Ｖａｌｅ，１９９１，Ｃｅｌｌ ６５：９７３－９８２；Ａｔｔｉｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：９７－１０８）。アクチビン以外に、ＡｃｔＲＩＩＡ及びＡｃｔＲＩＩＢは、ＢＭＰ７、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１を含むいくつかの他のＴＧＦ－βファミリータンパク質と生化学的に相互作用することができる（Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３０：２１７－２２６；Ｌｅｅ ａｎｄ ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９８：９３０６－９３１１；Ｙｅｏ ａｎｄ Ｗｈｉｔｍａｎ，２００１，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ７：９４９－９５７；Ｏｈ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１６：２７４９－５４）。本出願人らは、可溶性ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドがインビボで実質的に異なる効果を有し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃが骨に主な効果を有し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃが骨格筋に主な効果を有することを見出した。
ＴＧＦ－βスーパーファミリーのリガンドは、他のモノマーのベータ鎖によって形成された凹面に対して、１つのモノマーの中央の３－１／２ターンらせんを有する同じ二量体構造を共有する。ＴＧＦ－βファミリーメンバーの大部分は、分子間ジスルフィド結合によって更に安定化される。このジスルフィド結合は、２つの他のジスルフィド結合によって形成される環を横切って、「システインノット」モチーフと呼ばれるものを生成する［Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ １３２：１７９－１９０；ａｎｄ Ｈｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６：１８６０－１８７０］。
アクチビンはＴＧＦ－βスーパーファミリーのメンバーであり、卵胞刺激ホルモンの分泌の調節因子として最初に発見されたが、その後、様々な生殖及び非生殖の役割が特徴付けられている。密接に関連する２つのβサブユニット（それぞれβＡβＡ、βＢβＢ、及びβＡβＢ）のホモ／ヘテロ二量体である３つの主要なアクチビン形態（Ａ、Ｂ、及びＡＢ）が存在する。ヒトゲノムはまた、主に肝臓で発現されるアクチビンＣ及びアクチビンＥをコードし、βＣ又はβＥを含有するヘテロ二量体形態も知られている。ＴＧＦ－βスーパーファミリーでは、アクチビンは、卵巣細胞及び胎盤細胞におけるホルモン産生を刺激し、ニューロン細胞の生存を支援し、細胞型に応じて細胞周期の進行に正又は負の影響を及ぼし、少なくとも両生類の胚において中胚葉分化を誘導することができる独特かつ多機能な因子である［ＤｅＰａｏｌｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．１９８：５００－５１２；Ｄｙｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ．７：８１－８４；ａｎｄ Ｗｏｏｄｒｕｆｆ（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５：９５３－９６３］。いくつかの組織では、アクチビンシグナル伝達は、その関連するヘテロ二量体であるインヒビンによって拮抗される。例えば、下垂体からの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）分泌の調節では、アクチビンはＦＳＨの合成及び分泌を促進するが、インヒビンはＦＳＨの合成及び分泌を減少させる。アクチビンの生物活性を調節し、及び／又はアクチビンに結合し得る他のタンパク質としては、フォリスタチン（ＦＳ）及びα２－マクログロブリンが挙げられる。
本明細書に記載されるように、「アクチビンＡ」に結合する薬剤は、単離されたβＡサブユニットに関連してであろうと、二量体複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体又はβＡβＢヘテロ二量体）としてであろうと、βＡサブユニットに特異的に結合する薬剤である。ヘテロ二量体複合体（例えば、βＡβＢヘテロ二量体）の場合、「アクチビンＡ」に結合する薬剤は、βＡサブユニット内に存在するエピトープに特異的であるが、複合体の非βＡサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）内に存在するエピトープには結合しない。同様に、「アクチビンＡ」に拮抗する（阻害する）本明細書に開示される薬剤は、単離されたβＡサブユニットとの関連であろうと、二量体複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体又はβＡβＢヘテロ二量体）としてであろうと、βＡサブユニットによって媒介される１又は複数の活性を阻害する薬剤である。βＡβＢヘテロ二量体の場合、「アクチビンＡ」を阻害する薬剤は、βＡサブユニットの１又は複数の活性を特異的に阻害するが、複合体の非βＡサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）の活性を阻害しない薬剤である。この原理は、「アクチビンＢ」、「アクチビンＣ」及び「アクチビンＥ」に結合及び／又は阻害する薬剤にも適用される。「アクチビンＡＢ」に拮抗する本明細書に開示される薬剤は、βＡサブユニットによって媒介される１又は複数の活性及びβＢサブユニットによって媒介される１又は複数の活性を阻害する薬剤である。
ＢＭＰ及びＧＤＦは共に、ＴＧＦ－βスーパーファミリーの特徴的なフォールドを共有するシステインノットサイトカインファミリーを形成する［Ｒｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．，４２９（１）：１－１２］。このファミリーは、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ２ａ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ３ｂ（ＧＤＦ１０としても知られる）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９（ＧＤＦ２としても知られる）、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１（ＧＤＦ１１としても知られる）、ＢＭＰ１２（ＧＤＦ７としても知られる）、ＢＭＰ１３（ＧＤＦ６としても知られる）、ＢＭＰ１４（ＧＤＦ５としても知られる）、ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３（ＶＧＲ２としても知られる）、ＧＤＦ８（ミオスタチンとしても知られる）、ＧＤＦ９、ＧＤＦ１５、及びデカペンタプレジックを含む。ＢＭＰ／ＧＤＦは、その名称を与えた骨形成を誘導する能力に加えて、広範囲の組織の発達において形態形成活性を示す。ＢＭＰ／ＧＤＦホモ二量体及びヘテロ二量体は、Ｉ型及びＩＩ型受容体二量体の組み合わせと相互作用して複数の可能なシグナル伝達複合体を生成し、ＳＭＡＤ転写因子の２つの競合するセットのうちの１つの活性化をもたらす。ＢＭＰ／ＧＤＦは、高度に特異的かつ局所的な機能を有する。これらは、ＢＭＰ／ＧＤＦ発現の発達上の制限及びサイトカインに高い親和性で結合するいくつかの特異的ＢＭＰアンタゴニストタンパク質の分泌を含むいくつかの方法で調節される。興味深いことに、これらのアンタゴニストの多くは、ＴＧＦ－βスーパーファミリーリガンドに似ている。
成長分化因子－８（ＧＤＦ８）は、ミオスタチンとしても知られている。ＧＤＦ８は骨格筋量の負の調節因子である。ＧＤＦ８は、発達中及び成体骨格筋において高度に発現される。トランスジェニックマウスにおけるＧＤＦ８ヌル変異は、骨格筋の著しい肥大及び過形成を特徴とする（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８７：８３－９０）。骨格筋量の同様の増加は、ウシにおけるＧＤＦ８の天然に存在する突然変異（Ａｓｈｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９７４，Ｇｒｏｗｔｈ，３８：５０１－５０７；Ｓｗａｔｌａｎｄ ａｎｄ Ｋｉｅｆｆｅｒ，Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．，１９９４，３８：７５２－７５７；ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９７，９４：１２４５７－１２４６１；ａｎｄ Ｋａｍｂａｄｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７：９１０－９１５）及び驚くべきことにヒトにおけるＤＦ８の天然に存在する突然変異（Ｓｃｈｕｅｌｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；３５０：２６８２－８）において明らかである。研究はまた、ヒトにおけるＨＩＶ感染に関連する筋萎縮がＧＤＦ８ポリペプチド発現の増加を伴うことを示している（Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｃａｄａｖｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９８，９５：１４９３８－４３）。更に、ＧＤＦ８は、筋特異的酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）の産生を調節し、筋芽細胞の増殖を調節することができる（国際公開第００／４３７８１号）。ＧＤＦ８プロペプチドは、成熟ＧＤＦ８ドメイン二量体に非共有結合的に結合することができ、その生物学的活性を不活性化する（Ｍｉｙａｚｏｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３：６４０７－６４１５；Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３；７６４６－７６５４；ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，３：３５－４３）。ＧＤＦ８又は構造的に関連するポリペプチドに結合し、それらの生物学的活性を阻害する他のポリペプチドとしては、フォリスタチン、及び潜在的にはフォリスタチン関連ポリペプチドが挙げられる（Ｇａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２０８：２２２－２３２）。
ＢＭＰ１１としても知られる増殖分化因子－１１（ＧＤＦ１１）は、分泌タンパク質である（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：２６０－２６４）。ＧＤＦ１１は、マウス発達中に尾芽、肢芽、上下顎弓及び後根神経節で発現される（Ｎａｋａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖ．８０：１８５－１８９）。ＧＤＦ１１は、中胚葉及び神経組織の両方のパターン形成において独特の役割を果たす（Ｇａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ．，２０８：２２２－３２）。ＧＤＦ１１は、発達中の鶏肢における軟骨形成及び筋形成の負の調節因子であることが示された（Ｇａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ．２２９：４０７－２０）。筋肉におけるＧＤＦ１１の発現はまた、ＧＤＦ８と同様の方法で筋肉成長を調節する際のその役割を示唆する。更に、脳におけるＧＤＦ１１の発現は、ＧＤＦ１１が神経系の機能に関連する活性も有し得ることを示唆している。興味深いことに、ＧＤＦ１１は嗅上皮における神経発生を阻害することが見出された（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｕｒｏｎ．３７：１９７－２０７）。
部分的には、本開示の実施例は、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ二量体が、Ｅ／ｅ’によって測定される拡張機能障害を改善するのに有効であることを実証している。若齢マウスと比較して高齢マウスでは駆出率は減少しなかったが、ＢＮＰレベルは増加し、ＨＦｐＥＦを示した。データは更に、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体に加えて、他のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストが加齢に関連する心不全の治療に有用であり得ることを示唆している。
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全、又は心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）は、そのバリアント並びにそのヘテロ二量体及びヘテロ多量体を含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドには、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及び／又はＢＭＰ１０）に結合することができるＴＧＦ－βスーパーファミリー関連タンパク質（そのバリアントを含む）が含まれる。したがって、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、一般に、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及び／又はＢＭＰ１０）に拮抗することができるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫリガンドトラップは、フォリスタチンポリペプチド及びそのバリアントを含むがこれらに限定されない可溶性リガンドトラップタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト（アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害する抗体）を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害する小分子）を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４及び／又はＡＬＫ７の１又は複数を阻害するヌクレオチド配列）を含む。
本明細書で使用される用語は、一般に、本開示の文脈内及び各用語が使用される特定の文脈内で、当技術分野における通常の意味を有する。特定の用語は、本開示の組成物及び方法並びにそれらを作製及び使用する方法を説明する際に実施者に追加のガイダンスを提供するために、以下又は本明細書の他の箇所で論じられる。用語の任意の使用の範囲又は意味は、それが使用される特定の文脈から明らかになるであろう。
「配列類似性」という用語は、その全ての文法的形態において、共通の進化的起源を共有してもしなくてもよい核酸又はアミノ酸配列間の同一性又は対応の程度を指す。
基準ポリペプチド（又はヌクレオチド）配列に関する「配列同一性パーセント（％）」は、最大パーセント配列同一性を達成するために配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、基準ポリペプチド（ヌクレオチド）配列中のアミノ酸残基（又は核酸）と同一である候補配列中のアミノ酸残基（又は核酸）のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技能の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、％アミノ酸（核酸）配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって書かれたものであり、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９にユーザ文書と共に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に入手可能であるか、又は、ソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ｄｉｇｉｔａｌ ＵＮＩＸＶ ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムで使用するためにコンパイルする必要がある。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変化しない。
「アゴナイズする」は、その全ての文法的形態において、タンパク質及び／又は遺伝子を活性化するか（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を活性化若しくは増幅することによって、又は不活性タンパク質を活性状態に入るように誘導することによって）、又はタンパク質及び／又は遺伝子の活性を増加させるプロセスを指す。
「アンタゴナイズする」は、その文法上の全ての形態において、タンパク質及び／又は遺伝子を阻害するプロセス（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を阻害若しくは減少させることによって、又は活性タンパク質を不活性状態に入るように誘導することによって）、又はタンパク質及び／又は遺伝子の活性を低下させるプロセスを指す。
本明細書及び特許請求の範囲を通して数値に関連して使用される「約」及び「およそ」という用語は、当業者によく知られており許容される精度の間隔を示す。一般に、このような精度の間隔は±１０％である。あるいは、特に生物系において、「約」及び「およそ」という用語は、所与の値の１桁以内、好ましくは５倍以下、より好ましくは２倍以下の値を意味し得る。
本明細書に開示される数値範囲は、範囲を定義する数を含む。
用語「ａ」及び「ａｎ」は、その用語が使用される文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。「ａ」（又は「ａｎ」）という用語、並びに「１又は複数の」及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。更に、「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、他のものの有無にかかわらず、２つ以上の指定された特徴又は構成要素の各々の具体的な開示として解釈されるべきである。したがって、本明細書において、「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される場合の用語「及び／又は」は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、並びに「Ｂ」（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図されている。
本明細書を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変形は、記載された整数又は整数群を含むが、任意の他の整数又は整数群を除外しないことを意味すると理解される。
２．ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド捕捉アンタゴニスト及びそのバリアント
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全、又は心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）は、そのバリアント、並びにそのヘテロ二量体及びヘテロ多量体を含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドには、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及びＢＭＰ１０）に結合することができるＴＧＦ－βスーパーファミリー関連タンパク質（そのバリアントを含む）が含まれる。したがって、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、一般に、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、及びＢＭＰ１０）に拮抗することができるポリペプチドを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド、そのバリアント、並びにそのホモ及びヘテロ多量体（例えば、それぞれホモ二量体及びヘテロ二量体）を含む。本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩ」という用語は、ＩＩ型アクチビン受容体のファミリーを指す。このファミリーには、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）及びアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド（そのバリアントを含む）、並びにホモ多量体（例えばＡｃｔＲＩＩＡホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体）を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫリガンドトラップは、フォリスタチンポリペプチド及びそのバリアントを含むがこれらに限定されない可溶性リガンドトラップタンパク質を含む。
Ａ）ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド
特定の態様では、本開示は、フラグメン、機能的バリアント、及びその修飾形態を含む、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト並びにその使用（例えば、心不全（ＨＦ）又はＨＦの１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）に関する。本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩＢ」という用語は、任意の種のアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）タンパク質のファミリー、及び突然変異誘発又は有用な活性を保持する他の修飾（例えば、変異体、断片、融合物及びペプチド模倣形態を含む）によってそのようなＡｃｔＲＩＩＢタンパク質に由来するバリアントポリペプチドを指す。そのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの例は、本開示を通して、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第２００６／０１２６２７号、国際公開第２００８／０９７５４１号、国際公開第２０１０／１５１４２６号、国際公開第２０１１／０２００４５号、国際公開第２０１８／００９６２４号及び国際公開第２０１８／０６７８７４号に提供されている。本明細書におけるＡｃｔＲＩＩＢへの言及は、現在特定されている形態のいずれか１つへの言及であると理解される。ＡｃｔＲＩＩＢファミリーのメンバーは、一般に全ての膜貫通ポリペプチドであり、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予測されるセリン／トレオニンキナーゼ特異性を有する細胞質ドメインで構成される。ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチドのアミノ酸配列を図２（配列番号２）及び以下に示す。好ましくは、本開示の方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは可溶性である。本明細書で使用される「可溶性ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド」という用語は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの任意の天然に存在する細胞外ドメイン、並びに有用な活性を保持するその任意のバリアント（変異体、断片及びペプチド模倣形態を含む）を含む。例えば、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの細胞外ドメインはリガンドに結合し、一般に可溶性である。可溶性ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの例としては、図３に示すＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１）及び配列番号５３が挙げられる。この切断型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号５３）は、配列番号２の番号付けに基づいてＡｃｔＲＩＩＢ（２５～１３１）と示される。可溶性ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの他の例は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの細胞外ドメインに加えてシグナル配列を含む（実施例４を参照）。シグナル配列は、ＡｃｔＲＩＩＢの天然のシグナル配列、又は組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）シグナル配列若しくは蜂の巣のメリチンシグナル配列等の別のポリペプチドからのシグナル配列であり得る。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する及び／又はその活性を阻害する能力を決定するための方法及びアッセイの様々な例は、本明細書に開示されているか、そうでなければ当技術分野で周知であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが所望の結合及び／又は拮抗活性を有するかどうかを決定するために容易に使用することができる。本明細書に記載の全てのＡｃｔＲＩＩＢ関連ポリペプチドのアミノ酸のナンバリングは、特に明記しない限り、以下に提供されるヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列（配列番号２）のナンバリングに基づく。
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000002
シグナルペプチドは、単一の下線で示されており、細胞外ドメインは太字で示されており、潜在的な内因性Ｎ結合型グリコシル化部位は二重下線で示されている。
プロセシングされた（成熟）細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000003
 。
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端に「ＳＧＲ．．．」配列を有して産生され得る。細胞外ドメインのＣ末端「尾部」は、単一の下線で示されている。「尾部」が欠失されたシーケンス（Δ１５シーケンス）は以下の通りである。
Figure 2024511315000004
配列番号２の位置６４にアラニン（Ａ６４）を有するＡｃｔＲＩＩＢの形態も文献に報告されている。例えば、Ｈｉｌｄｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｂｌｏｏｄ，８３（８）：２１６３－２１７０を参照のこと。本出願人らは、Ａ６４置換を有するＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質が、アクチビン及びＧＤＦ１１に対して比較的低い親和性を有することを確認した。対照的に、位置６４にアルギニン（Ｒ６４）を有する同じＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、低ナノモル～高ピコモル範囲のアクチビン及びＧＤＦ１１に対する親和性を有する。したがって、Ｒ６４を有する配列は、本開示におけるヒトＡｃｔＲＩＩＢの「野生型」参照配列として使用される。
位置６４にアラニンを有するＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列の形態は以下の通りである。
Figure 2024511315000005
シグナルペプチドを単一の下線で示し、細胞外ドメインを太字で示す。
代替Ａ６４形態のプロセシングされた（成熟）細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000006
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端に「ＳＧＲ．．．」配列を有して産生され得る。細胞外ドメインのＣ末端「尾部」は、単一の下線で示されている。「尾部」が欠失した代替Ａ６４形態のポリペプチド配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
Figure 2024511315000007
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質をコードする核酸配列を以下に示し（配列番号４）、ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体のアミノ酸１～５１３をコードするＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１１０６．３のヌクレオチド２５～１５６０を表す。示されるヌクレオチド配列は、位置６４にアルギニンを有するポリペプチドをコードし、代わりにアラニンを有するポリペプチドをコードするように修飾され得る。シグナル配列に下線を付す。
Figure 2024511315000008
プロセシングされた細胞外ヒトＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする核酸配列は以下の通りである（配列番号３）。示されるヌクレオチド配列は、位置６４にアルギニンを有するポリペプチドをコードし、代わりにアラニンを有するポリペプチドをコードするように修飾され得る（図５、配列番号３を参照されたい）。
Figure 2024511315000009
Ｂ）バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド
特定の具体的な実施形態では、本開示は、バリアント（又は変異体）ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが変化したリガンド結合活性（例えば、結合親和性又は結合選択性）を有するように、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの細胞外ドメイン（リガンド結合ドメインとも呼ばれる）に変異を作ることを企図する。ある特定の場合において、そのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、特異的リガンドに対する結合親和性が変化している（上昇している又は低下している）。他の場合では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、それらのリガンドに対する結合選択性が変化している。例えば、本開示は、非改変ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと比較して、ＢＭＰ９に対する結合親和性が低下しているが、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ１０の１又は複数に対する結合親和性を保持する多数の変異ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを提供する。場合により、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、それらの対応する野生型ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの類似又は同じ生物学的活性を有する。例えば、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１又はＢＭＰ１０）に結合し、その機能を阻害し得る。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、心不全又は心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減する。ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの例には、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチド（配列番号２及び配列番号３８７）、及び可溶性ヒトＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（例えば、配列番号１、５、６、１２、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８及び４０９）が含まれる。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ホモ多量体（例えば、ホモ二量体）のメンバーである。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体（例えば、ヘテロ二量体）のメンバーである。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるポリペプチドのいずれかと組み合わされてもよい（例えば、ヘテロ多量体化された及び／又は融合される）。
ＡｃｔＲＩＩＢはほぼ全ての脊椎動物にわたってよく保存されており、細胞外ドメインの大きなストレッチは完全に保存されている。例えば、図６を参照されたい。ＡｃｔＲＩＩＢに結合するリガンドの多くも高度に保存されている。したがって、様々な脊椎動物由来のＡｃｔＲＩＩＢ配列の比較は、変化し得る残基への洞察を提供する。したがって、活性なヒトＡｃｔＲＩＩＢバリアントは、別の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＢの配列からの対応する位置に１又は複数のアミノ酸を含み得るか、又はヒト若しくは他の脊椎動物の配列の残基と同様の残基を含み得る。
本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢの機能的に活性な部分及びバリアントを特定する。出願人は、配列番号２のアミノ酸６４に対応する位置にアラニンを有する（Ａ６４）、Ｈｉｌｄｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｂｌｏｏｄ．｛ｊ｝１９９４ Ａｐｒ １５；８３（８）：２１６３－７０によって開示された配列を有するＦｃ融合ポリペプチドが、アクチビン及びＧＤＦ１１に対して比較的低い親和性を有することを以前に確認している。対照的に、位置６４にアルギニンを有する（Ｒ６４）同じＦｃ融合ポリペプチドは、低ナノモルから高ピコモルの範囲のアクチビン及びＧＤＦ－１１に対する親和性を有する。したがって、Ｒ６４（配列番号２）を有する配列は、本開示におけるヒトＡｃｔＲＩＩＢの野生型参照配列として使用され、本明細書に記載のバリアントの番号付けは、配列番号２の番号付けに基づく。更に、当業者は、本明細書に記載のＡｃｔＲＩＩＢバリアントのいずれかをＡ６４バックグラウンドで作製することができる。
プロセシングされた細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列を配列番号１（例えば、図３を参照されたい）に示す。一部の実施形態では、プロセッシングされたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｎ末端に「ＳＧＲ．．．」配列を有する状態で産生され得る。一部の実施形態では、プロセッシングされたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｎ末端に「ＧＲＧ…」配列を有する状態で産生され得る。例えば、いくつかの構築物は、ＴＰＡリーダーで発現された場合、Ｎ末端セリンを欠くことが予想される。したがって、本明細書に記載の成熟ＡｃｔＲＩＩＢ配列は、Ｎ末端セリン又はＮ末端グリシン（Ｎ末端セリンを欠く）のいずれかで始まり得る。
Ａｔｔｉｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．（Ｃｅｌｌ．１９９２ Ｊａｎ １０；６８（１）：９７－１０８）は、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインのＣ末端のプロリン結び目の欠失が、アクチビンに対する受容体の親和性を低下させることを示した。国際公開第２００８０９７５４１号に開示されているデータは、配列番号２、「ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１１９）－Ｆｃ」のアミノ酸２０～１１９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドが、プロリン結び目領域及び完全な隣接膜ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｆｃと比較して、ＧＤＦ１１及びアクチビンへの結合が減少していることを示している。しかしながら、ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１２９）－Ｆｃポリペプチドは、プロリン結び目領域が破壊されていても、野生型と比較して同様であるがいくらか低下した活性を保持する。したがって、アミノ酸１３４、１３３、１３２、１３１、１３０及び１２９で停止するＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインは全て活性であると予想されるが、１３４又は１３３で停止する構築物が最も活性であり得る。同様に、残基１２９～１３４のいずれかにおける変異は、大きなマージンによってリガンド結合親和性を変化させることは予想されない。これを支持して、Ｐ１２９及びＰ１３０の突然変異は、リガンド結合を実質的に減少させない。したがって、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、アミノ酸１０９（最終システイン）ほど早く終了し得るが、１０９～１１９で終了する形態は、リガンド結合が減少すると予想される。アミノ酸１１９はあまり保存されておらず、したがって容易に変化又は切断される。１２８又はそれ以降で終わる形態は、リガンド結合活性を保持する。１１９又は１２７で終わる形態は、中間結合能力を有する。臨床的又は実験的設定に応じて、これらの形態のいずれかを使用することが望ましい場合がある。
ＡｃｔＲＩＩＢのＮ末端では、アミノ酸２９又はそれより前から始まるポリペプチドがリガンド結合活性を保持すると予想される。アミノ酸２９は初期システインを表す。２４位のアラニンからアスパラギンへの変異は、リガンド結合に実質的に影響を与えることなくＮ結合型グリコシル化配列を導入する。これにより、アミノ酸２０～２９に対応するシグナル切断ペプチドとシステイン架橋領域との間の領域の変異が十分に許容されることが確認される。特に、位置２０、２１、２２、２３及び２４で始まる構築物は活性を保持し、位置２５、２６、２７、２８及び２９で始まる構築物も活性を保持すると予想される。国際公開第２００８０９７５４１号に示されているデータは、驚くべきことに、２２、２３、２４又は２５で始まる構築物が最も高い活性を有することを実証している。
まとめると、ＡｃｔＲＩＩＢの活性部分は、配列番号２のアミノ酸２９～１０９を含み、構築物は、例えば、アミノ酸２０～２９に対応する残基で始まり、アミノ酸１０９～１３４に対応する位置で終わることができる。他の例としては、２０～２９又は２１～２９の位置で始まり、１１９～１３４、１１９～１３３又は１２９～１３４、１２９～１３３の位置で終わる構築物が挙げられる。他の例としては、２０～２４（又は２１～２４又は２２～２５）の位置で始まり、１０９～１３４（又は１０９～１３３）、１１９～１３４（又は１１９～１３３）又は１２９～１３４（又は１２９～１３３）の位置で終わる構築物が挙げられる。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号１の対応する部分に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するバリアントも企図される。
本明細書に記載の変形例は、様々な方法で組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢバリアントは、リガンド結合ポケット内に１、２、５、６、７、８、９、１０又は１５個以下の保存的アミノ酸変化を含み、リガンド結合ポケット内の４０、５３、５５、７４、７９及び／又は８２の位置に０、１又は複数の非保存的変化が含まれていてもよい。可変性が特に良好に許容され得る結合ポケットの外側の部位には、細胞外ドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端（上記のように）、並びに４２～４６位及び６５～７３位（配列番号２に関して）が含まれる。位置６５におけるアスパラギンからアラニンへの変化（Ｎ６５Ａ）は、Ｒ６４バックグラウンドにおけるリガンド結合を減少させないようである［米国特許第７，８４２，６６３号明細書］。この変化はおそらくＡ６４バックグラウンドのＮ６５でのグリコシル化を排除し、したがってこの領域の有意な変化が許容される可能性が高いことを実証する。Ｒ６４Ａの変化はあまり許容されないが、Ｒ６４Ｋは十分に許容され、したがって、Ｈ等の別の塩基性残基は、位置６４で許容され得る［米国特許第７，８４２，６６３号明細書］。更に、当技術分野に記載の突然変異誘発プログラムの結果は、保存に有益であることが多いＡｃｔＲＩＩＢ中のアミノ酸位置があることを示している。配列番号２に関して、これらには、位置８０（酸性又は疎水性アミノ酸）、位置７８（疎水性、特にトリプトファン）、位置３７（酸性、特にアスパラギン酸又はグルタミン酸）、位置５６（塩基性アミノ酸）、位置６０（疎水性アミノ酸、特にフェニルアラニン又はチロシン）が含まれる。したがって、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド中で保存され得るアミノ酸のフレームワークを提供する。保存することが望ましいであろう他の位置は以下の通りである：位置５２（酸性アミノ酸）、位置５５（塩基性アミノ酸）、位置８１（酸性）、位置９８（極性又は帯電、特にＥ、Ｄ、Ｒ又はＫ）、全て配列番号２に関する。
ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインへの更なるＮ結合型グリコシル化部位（Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ）の付加は忍容性が高いことが以前に実証されている（例えば、米国特許第７，８４２，６６３号明細書を参照されたい）。したがって、Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ配列は、一般に、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドの図１に定義されるリガンド結合ポケットの外側の位置に導入され得る。非内因性Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ配列の導入に特に適した部位としては、アミノ酸２０～２９、２０～２４、２２～２５、１０９～１３４、１２０～１３４又は１２９～１３４（配列番号２に関して）が挙げられる。Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ配列はまた、ＡｃｔＲＩＩＢ配列とＦｃドメイン又は他の融合成分との間のリンカー、並びに場合により融合成分自体に導入されていてもよい。そのような部位は、既存のＳ又はＴに対して正しい位置にＮを導入することによって、又は既存のＮに対応する位置にＳ又はＴを導入することによって、最小限の労力で導入することができる。したがって、Ｎ結合型グリコシル化部位を生成するであろう望ましい変化は、Ａ２４Ｎ、Ｒ６４Ｎ、Ｓ６７Ｎ（おそらくＮ６５Ａ変化と組み合わされる）、Ｅ１０５Ｎ、Ｒ１１２Ｎ、Ｇ１２０Ｎ、Ｅ１２３Ｎ、Ｐ１２９Ｎ、Ａ１３２Ｎ、Ｒ１１２Ｓ及びＲ１１２Ｔ（配列番号２に関して）である。グリコシル化されると予測される任意のＳは、グリコシル化によって与えられる保護のために、免疫原性部位を生成することなくＴに変化し得る。同様に、グリコシル化されると予測される任意のＴがＳに変化し得る。したがって、変化Ｓ６７Ｔ及びＳ４４Ｔ（配列番号２に関して）が企図される。同様に、Ａ２４Ｎバリアントでは、Ｓ２６Ｔ改変が使用され得る。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、上記の１又は複数の追加の非内因性Ｎ結合グリコシル化コンセンサス配列を有するバリアントであり得る。
一定の実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号１、２、及び５３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を有する。一定の場合、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１、２、及び５３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する。一定の場合、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する。一定の場合、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する。一定の場合、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１、２、５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５３、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８、及び４０９のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的になる。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号１を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号５を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号１２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。
配列番号３１を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３７を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４５を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号５０を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号５１を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号５２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号５３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号２７６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号２７８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号２７９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３５を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３３９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３３９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４１を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４４を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４５を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４７を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３４８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３４８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５０を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５１を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５４を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３５７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３５７を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３８５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３８５を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３８６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３８６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３８７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３８７を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３８８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３８８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３８９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３８９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３９６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３９６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号３９８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０２を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０３を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０６を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０８を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又はバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。配列番号４０９を含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号２のアミノ酸２０～２９（例えば、アミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸１０９～１３４（例えば、アミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関し、ポリペプチドは、Ｋ５５、Ｆ８２、Ｌ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２からなる群から選択される配列番号２の位置での１又は複数のアミノ酸置換、並びに１又は複数のそのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むヘテロ多量体複合体を含む。特定の態様では、本開示は、配列番号２のアミノ酸２０～２９（例えば、アミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９）のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸１０９～１３４（例えば、アミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関し、ポリペプチドは、配列番号２の位置に１又は複数のアミノ酸置換を含むが、配列番号２の７９に対応する位置のアミノ酸はロイシン、並びに１又は複数のそのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含むヘテロ多量体複合体を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０～１３４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＡ２４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＡ２４Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＳ２６に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＳ２６Ｔである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＮ３５に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＮ３５Ｅである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ３７に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ３７Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＥ３７Ｄである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ３８Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＲ４０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＲ４０Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＲ４０Ｋである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＳ４４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＳ４４Ｔである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ４６に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ４６Ａである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ４６Ｉである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ４６Ｆである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ４６Ｖである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ５０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ５０Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５０Ｌである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５０Ｐである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ５２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｇである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｈである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｎである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｐである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｒである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｓである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｔである。いくつかの実施形態では、置換はＥ５２Ｙである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＱ５３に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＱ５３Ｒである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＱ５３Ｋである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＱ５３Ｎである。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＱ５３Ｈである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＤ５４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＤ５４Ａである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＫ５５に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＫ５５Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＫ５５Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＫ５５Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＫ５５Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＲ５６に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＲ５６Ａである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ５７に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ５７Ｒである。いくつかの実施形態では、置換はＬ５７Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＬ５７Ｉである。いくつかの実施形態では、置換はＬ５７Ｔである。いくつかの実施形態では、置換はＬ５７Ｖである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＹ６０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＹ６０Ｆである。いくつかの実施形態では、置換はＹ６０Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＹ６０Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＹ６０Ｐである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＲ６４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＲ６４Ｋである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｒ６４Ｎである。いくつかの実施形態では、置換はＲ６４Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＲ６４Ｈである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＮ６５に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＮ６５Ａである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＳ６７に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＳ６７Ｎである。いくつかの実施形態では、置換はＳ６７Ｔである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＧ６８に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＧ６８Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＫ７４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ｆである。いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ｉである。いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ｙである。いくつかの実施形態では、置換はＫ７４Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＷ７８に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＷ７８Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＷ７８Ｙである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｄである。いくつかの実施形態では、置換は、配列番号２のＬ７９に対応する位置に酸性アミノ酸を含まない。いくつかの実施形態では、置換は配列番号２のＬ７９位にはない。いくつかの実施形態では、配列番号２のＬ７９位は置換されていない。いくつかの実施形態では、置換は、配列番号２のＬ７９に対応する位置にアスパラギン酸（Ｄ）を含まない。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｆである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｈである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｐである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｒである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｓである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｔである。いくつかの実施形態では、置換はＬ７９Ｗである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＤ８０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｆである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｇである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｍである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｉである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｎである。いくつかの実施形態では、置換はＤ８０Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｉである。いく
つかの実施形態では、置換はＦ８２Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｗである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｙである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｌである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｔである。いくつかの実施形態では、置換はＦ８２Ｓである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＮ８３Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＮ８３Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＴ９３に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｈである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｇである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｐである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｒである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｓである。いくつかの実施形態では、置換はＴ９３Ｙである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ９４に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ９４Ｋである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＱ９８に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＱ９８Ｄである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｑ９８Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＱ９８Ｋである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｑ９８Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＶ９９に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＶ９９Ｅである。いくつかの実施形態では、置換はＶ９９Ｇである。いくつかの実施形態では、置換はＶ９９Ｋである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ１０５に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ１０５Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ１０６に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ１０６Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＦ１０８に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＦ１０８Ｉである。いくつかの実施形態では、置換はＦ１０８Ｌである。いくつかの実施形態では、置換はＦ１０８Ｖである。いくつかの実施形態では、置換はＦ１０８Ｙである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ１１１に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｋである。いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｄである。いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｒである。いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｈである。いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｑである。いくつかの実施形態では、置換はＥ１１１Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＲ１１２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＲ１１２Ｈである。いくつかの実施形態では、置換はＲ１１２Ｋである。いくつかの実施形態では、置換は、Ｒ１１２Ｎである。いくつかの実施形態では、置換はＲ１１２Ｓである。いくつかの実施形態では、置換はＲ１１２Ｔである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＡ１１９に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＡ１１９Ｐである。いくつかの実施形態では、置換はＡ１１９Ｖである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＧ１２０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＧ１２０Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＥ１２３に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＥ１２３Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＰ１２９に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＰ１２９Ｓである。いくつかの実施形態では、置換はＰ１２９Ｎである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＰ１３０に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＰ１３０Ａである。いくつかの実施形態では、置換はＰ１３０Ｒである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のＡ１３２に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、置換はＡ１３２Ｎである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、Ａ２４、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｋ５５、Ｒ５６、Ｒ６４、Ｋ７４、Ｗ７８、Ｌ７９、Ｄ８０、Ｆ８２、Ｐ１２９及びＰ１３０からなる群から選択される配列番号２の位置に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＡ２４位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＥ３７位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＲ４０位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＤ５４位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＫ５５位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＲ５６位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＲ６４位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＫ７４位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＷ７８位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＬ７９位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に対してＤ８０位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＦ８２位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＰ１２９位に置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２に関してＰ１３０位に置換を含む。
特定の態様では、本開示は、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＫ５５に対応する位置にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＫ５５に対応する位置にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＫ５５に対応する位置にグルタミン酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＫ５５に対応する位置にグルタミン酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３７のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３９のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号４０のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号４２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にグルタミン酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にグルタミン酸を含む。いくつかの実施形態では、配列番号４５のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３８のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４４のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＥ５０に対応する位置にロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４８のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＥ５０に対応する位置にロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５０のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＶ９９に対応する位置にグリシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５４のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３５６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＶ９９に対応する位置にグリシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの２つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの３つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの４つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの５つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの６つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの７つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの８つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの９つを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかは、本明細書に開示されるアミノ酸置換のいずれかのうちの１０つを含む。
一定の態様では、本開示は、配列番号２の参照アミノ酸配列と比較して２つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。例えば、いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ａ２４Ｎ置換及びＫ７４Ａ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｐ置換及びＫ７４Ａ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｐ１２９Ｓ置換及びＰ１３０Ａ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ３８Ｎ置換及びＬ７９Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｉ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｋ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｔ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｈ置換及びＦ８２Ｋ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｈ置換及びＦ８２Ｉ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｄ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｅ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｆ置換及びＦ８２Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｆ置換及びＦ８２Ｔ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｄ置換及びＦ８２Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｄ置換及びＦ８２Ｔ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換及びＦ８２Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換及びＦ８２Ｔ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｉ置換及びＥ９４Ｋ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｓ置換及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換及びＦ８２Ｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｋ７４Ａ置換及びＬ７９Ｐ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｋ５５Ａ置換及びＦ８２Ｉ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ７９Ｋ置換及びＦ８２Ｋ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｆ８２Ｗ置換及びＮ８３Ａ置換を含む。
特定の態様では、本開示は、配列番号２７６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号２７６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号２７８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号２７８のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号２７９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号２７９のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にトレオニンを含み、配列番号２のＮ８３に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３５のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３３９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含み、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３３９のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含み、配列番号２のＦ８２に対応する位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含み、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４５のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３４７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にヒスチジンを含み、配列番号２のＦ８２に対応する位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３４７のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３５１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にアスパラギンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にアスパラギンを含み、配列番号２のＬ７９に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
特定の態様では、本開示は、配列番号３５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にアスパラギンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８に対応する位置にアスパラギンを含み、配列番号２のＬ７９に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、配列番号３５３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
一定の態様では、本開示は、配列番号２の参照アミノ酸配列と比較して３つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｇ６８Ｒ置換、Ｆ８２Ｓ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｇ６８Ｒ置換、Ｗ７８Ｙ置換、及びＦ８２Ｙ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｄ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｙ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｄ置換、Ｆ８２Ｅ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｄ置換、Ｆ８２Ｔ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｎ置換、Ｆ８２Ｉ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｎ置換、Ｆ８２Ｙ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５０Ｌ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｉ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｖ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換、Ｆ８２Ｄ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｅ置換、Ｆ８２Ｅ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換、Ｆ８２Ｅ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｉ置換、Ｆ８２Ｅ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｒ置換、Ｆ８２Ｌ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｔ置換、Ｆ８２Ｙ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｌ５７Ｖ置換、Ｆ８２Ｙ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、上記のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかに記載されているアミノ酸置換の少なくとも２つを含み得る。
一定の態様では、本開示は、配列番号２の参照アミノ酸配列と比較して４つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに関する。例えば、いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｇ６８Ｒ置換、Ｌ７９Ｅ置換、Ｆ８２Ｙ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｇ６８Ｒ置換、Ｌ７９Ｅ置換、Ｆ８２Ｔ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｇ６８Ｒ置換、Ｌ７９Ｔ置換、Ｆ８２Ｔ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、Ｅ５２Ｎ置換、Ｇ６８Ｒ置換、Ｆ８２Ｙ置換、及びＮ８３Ｒ置換を含む。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、上記のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかに記載されているアミノ酸置換の少なくとも２つを含み得る。いくつかの実施形態では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、上記のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのいずれかに記載されているアミノ酸置換の少なくとも３つを含み得る。
Ｃ）ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド
特定の実施形態では、本開示は、フラグメン、機能的バリアント、及びその修飾形態を含む、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト並びにその使用（例えば、心不全（ＨＦ）又はＨＦの１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）に関する。本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩＡ」という用語は、任意の種のアクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）タンパク質のファミリー、及び突然変異誘発又は有用な活性を保持する他の修飾（例えば、変異体、断片、融合物及びペプチド模倣形態を含む）によってそのようなＡｃｔＲＩＩＡタンパク質に由来するバリアントポリペプチドを指す。そのようなバリアントＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドの例は、本開示を通して、並びに国際特許出願公開第２００６／０１２６２７号及び国際特許出願公開第２００７／０６２１８８号に提供され、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書におけるＡｃｔＲＩＩＡへの言及は、現在特定されている形態のいずれか１つへの言及であると理解される。ＡｃｔＲＩＩＡファミリーのメンバーは、一般に、システインリッチ領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予測されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインで構成される膜貫通タンパク質である。好ましくは、本開示の方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは可溶性である（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメイン）。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する及び／又はその活性を阻害する能力を決定するための方法及びアッセイの様々な例は、本明細書に開示されているか、そうでなければ当技術分野で周知であり、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが所望の結合及び／又は拮抗活性を有するかどうかを決定するために容易に使用することができる。本明細書に記載の全てのＡｃｔＲＩＩＡ関連ポリペプチドのアミノ酸のナンバリングは、特に明記しない限り、以下に提供されるヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列（配列番号３６６）のナンバリングに基づく。
標準的なヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000010
シグナルペプチドは、単一の下線で示されており、細胞外ドメインは太字で示されており、潜在的な内因性Ｎ結合型グリコシル化部位は二重下線で示されている。
プロセシングされた（成熟）細胞外ヒトＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000011
細胞外ドメインのＣ末端「尾部」は、単一の下線で示されている。「尾部」が欠失されたシーケンス（Δ１５シーケンス）は以下の通りである。
Figure 2024511315000012
ヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質をコードする核酸配列を、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１６１６．４のヌクレオチド１５９～１７００に対応して以下に示す（配列番号３６９）。シグナル配列に下線を付す。
Figure 2024511315000013
Figure 2024511315000014
プロセシングされた可溶性（細胞外）ヒトＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドをコードする核酸配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000015
ＡｃｔＲＩＩＡは脊椎動物間でよく保存されており、細胞外ドメインの大きなストレッチは完全に保存されている。例えば、図１０は、様々なＡｃｔＲＩＩＡオルソログ（配列番号３７１～３７７）と比較したヒトＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメイン（配列番号３６７）の多重配列アラインメントを示す。ＡｃｔＲＩＩＡに結合するリガンドの多くも高度に保存されている。したがって、これらのアラインメントから、正常なＡｃｔＲＩＩＡ－リガンド結合活性に重要なリガンド結合ドメイン内の重要なアミノ酸位置を予測すること、並びに正常なＡｃｔＲＩＩＡ－リガンド結合活性を有意に変化させることなく、置換に耐性である可能性が高いアミノ酸位置を予測することが可能である。したがって、本開示の方法に従って有用な活性ヒトＡｃｔＲＩＩＡバリアントポリペプチドは、別の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡの配列からの対応する位置に１又は複数のアミノ酸を含み得るか、又はヒト若しくは他の脊椎動物の配列の残基と同様の残基を含み得る。
限定する意味はないが、以下の実施例は、活性ＡｃｔＲＩＩＡバリアントを定義するためのこのアプローチを説明する。図１０に示すように、ヒト細胞外ドメインのＦ１３は、オビス・アリエス（Ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ）（配列番号３７１）、ガルス・ガルス（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ）（配列番号３７４）、ボス・タウルス（Ｂｏｓ Ｔａｕｒｕｓ）（配列番号３７５）、ティト・アルバ（Ｔｙｔｏ ａｌｂａ）（配列番号３７６）、及びミオティス・ダビジイ（Ｍｙｏｔｉｓ ｄａｖｉｄｉｉ）（配列番号３７７）ＡｃｔＲＩＩＡのＹであり、Ｆ、Ｗ、及びＹを含む芳香族残基がこの位置で許容されることを示す。ヒト細胞外ドメインのＱ２４は、ボス・タウルスＡｃｔＲＩＩＡのＲであり、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、及びＥを含む荷電残基がこの位置で許容されることを示し、ヒト細胞外ドメインのＳ９５は、ガルス・ガルスのＦ及びティト・アルバＡｃｔＲＩＩＡのＦであり、この部位は、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙ等の極性残基、及びおそらくＬ、Ｉ、又はＦ等の疎水性残基を含む様々な変化が許容され得ることを示している。ヒト細胞外ドメインのＥ５２は、オビス・アリエスＡｃｔＲＩＩＡのＤであり、ヒト細胞外ドメイン中のＤ及びＥを含む酸性残基がこの位置で許容されることを示している。ヒト細胞外ドメインのＰ２９は、比較的保存されておらず、オビス・アリエスＡｃｔＲＩＩＡのＳ及びミオティス・ダビジイＡｃｔＲＩＩＡのＬとして現れ、したがって、本質的に任意のアミノ酸がこの位置で許容されるべきである。
更に、上記のように、ＡｃｔＲＩＩタンパク質は、特にリガンド結合に関して、構造的／機能的特性に関して当技術分野で特徴付けられている［Ａｔｔｉｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８（１）：９７－１０８；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６（１）：１８－２２；Ａｌｌｅｎｄｏｒｐｈ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ１０３（２０：７６４３－７６４８；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ ２２（７）：１５５５－１５６６；；並びに米国特許第７，７０９，６０５号、第７，６１２，０４１号、及び第７，８４２，６６３号］。本明細書における教示に加えて、これらの参考文献は、１つ又はそれを超える所望の活性（例えば、リガンド結合活性）を保持するＡｃｔＲＩＩバリアントをどのように作製するかについて十分な指針を提供する。
例えば、３フィンガー毒素フォールドとして公知の定義する構造モチーフは、Ｉ型及びＩＩ型受容体によるリガンド結合に重要であり、各単量体受容体の細胞外ドメイン内の様々な位置に位置する保存されたシステイン残基によって形成される［Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ ６：１８－２２；ａｎｄ Ｈｉｎｃｋ（２０１２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５８６：１８６０－１８７０］。したがって、これらの保存されたシステインの最も外側によって画定されるヒトＡｃｔＲＩＩＡのコアリガンド結合ドメインは、配列番号３６６（ＡｃｔＲＩＩＡ前駆体）の３０～１１０位に対応する。したがって、これらのシステイン境界コア配列に隣接する構造的に秩序のないアミノ酸は、リガンド結合を必ずしも改変することなく、Ｎ末端で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は２９残基、及びＣ末端で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５残基だけ短縮され得る。例示的なＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメイン切断には、配列番号３６７及び３６８が含まれる。
したがって、ＡｃｔＲＩＩＡの活性部分（例えば、リガンド結合）の一般式は、配列番号３６６のアミノ酸３０～１１０を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなるポリペプチドである。したがって、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、例えば、配列番号３６６のアミノ酸２１～３０のいずれか１つに対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）、配列番号３６６のいずれか１つのアミノ酸１１０～１３５に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）ＡｃｔＲＩＩＡの一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなることができる。他の例としては、配列番号３６６の２１～３０（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）、２２～３０（例えば、アミノ酸２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）、２３～３０（例えば、アミノ酸２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）、２４～３０（例えば、アミノ酸２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）から選択される位置で始まり、配列番号３６６の１１１～１３５（例えば、アミノ酸１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）、１１２～１３５（例えば、アミノ酸１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）、１１３～１３５（例えば、アミノ酸１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）、１２０～１３５（例えば、アミノ酸１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）、１３０～１３５（例えば、アミノ酸１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）、１１１～１３４（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４のいずれか一つで終わる）、１１１～１３３（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２又は１３３のいずれか一つで終わる）、１１１～１３２（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１又は１３２のいずれか一つで終わる）又は１１１～１３１（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０又は１３１のいずれか一つで終わる）から選択される位置で終わる構築物が挙げられる。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号３６６の対応する部分と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、本質的にそれからなるバリアント、又はそれからなるバリアントも企図される。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸３０～１１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり得る。ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸３０～１１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり、リガンド結合ポケットに１、２、５、１０又は１５個以下の保存的アミノ酸変化を含むポリペプチドを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸２１～３０に対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか一つから始まる）、配列番号３６６の任意の１つのアミノ酸１１０～１３５に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４又は１３５のいずれか一つで終わる）ＡｃｔＲＩＩＡの一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸３０～１１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸２１～１３５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６６のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３８１のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３８４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３７８のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になる。
Ｄ）ＡＬＫ４ポリペプチド
特定の態様では、本開示は、フラグメン、機能的バリアント、及びその修飾形態を含む、ＡＬＫ４ポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト並びにその使用（例えば、心不全（ＨＦ）又はＨＦの１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）に関する。本明細書で使用される場合、「ＡＬＫ４」という用語は、任意の種のアクチビン受容体様キナーゼ４（ＡＬＫ４）タンパク質のファミリー、及び突然変異誘発又は有用な活性を保持する他の修飾（例えば、変異体、断片、融合物及びペプチド模倣形態を含む）によってそのようなＡＬＫ４タンパク質から誘導されるバリアントポリペプチドを指す。そのようなバリアントＡＬＫ４ポリペプチドの例は、本開示を通して、並びに国際特許出願公開である、国際公開第２０１６／１６４０８９号、国際公開第２０１６／１６４４９７号及び国際公開第２０１８／０６７８７９号に提供されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書におけるＡＬＫ４への言及は、現在特定されている形態のいずれか１つへの言及であると理解される。ＡＬＫ４ファミリーのメンバーは、一般に、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予測されるセリン／トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインから構成される膜貫通タンパク質である。好ましくは、本開示の方法に従って使用されるＡＬＫ４ポリペプチドは可溶性である。本明細書で使用される「可溶性ＡＬＫ４ポリペプチド」という用語は、ＡＬＫ４ポリペプチドの任意の天然に存在する細胞外ドメイン、並びに有用な活性を保持するその任意のバリアント（変異体、断片及びペプチド模倣形態を含む）を含む。例えば、ＡＬＫ４ポリペプチドの細胞外ドメインはリガンドに結合し、一般に可溶性である。可溶性ＡＬＫ４ポリペプチドの例としては、以下に示すＡＬＫ４細胞外ドメイン（配列番号８６）が挙げられ、可溶性ＡＬＫ４ポリペプチドの他の例は、ＡＬＫ４ポリペプチドの細胞外ドメインに加えてシグナル配列を含む。シグナル配列は、ＡＬＫ４ポリペプチドの天然のシグナル配列、又は組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）シグナル配列若しくは蜂蜜ビーメリチンシグナル配列等の別のポリペプチドからのシグナル配列であり得る。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性を阻害する（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。ＡＬＫ４ポリペプチドが１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する及び／又はその活性を阻害する能力を決定するための方法及びアッセイの様々な例は、本明細書に開示されているか、そうでなければ当技術分野で周知であり、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが所望の結合及び／又は拮抗活性を有するかどうかを決定するために容易に使用することができる。本明細書に記載の全てのＡＬＫ４関連ポリペプチドのアミノ酸のナンバリングは、特に明記しない限り、以下に提供されるヒトＡＬＫ４前駆体タンパク質配列（配列番号８４）のナンバリングに基づく。
ヒトＡＬＫ４前駆体ポリペプチド配列（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００４２９３）は以下の通りである。
Figure 2024511315000016
シグナルペプチドを単一の下線で示し、細胞外ドメインを太字フォントで示す。
処理された細胞外ヒトＡＬＫ４ポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000017
ＡＬＫ４前駆体ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号２２１に示されており、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿００４３０２．４のヌクレオチド７８～１５９２に対応する。
シグナル配列に下線を付し、細胞外ドメインを太字で示す。
Figure 2024511315000018
Figure 2024511315000019
細胞外ＡＬＫ４ポリペプチドをコードする核酸配列を配列番号２２２に示す。
Figure 2024511315000020
ヒトＡＬＫ４前駆体タンパク質配列の代替的なアイソフォーム、アイソフォームＢ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０６４７３２．３）は以下の通りである。
Figure 2024511315000021
細胞外ドメインは太字フォントで示されている。
上記アイソフォームＢに対応するプロセシングされた細胞外ＡＬＫ４ポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000022
ＡＬＫ４前駆体タンパク質（アイソフォームＢ）をコードする核酸配列を、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿０２０３２７．３のヌクレオチド１８６～１５４７に対応して以下に示す（配列番号４２３）。細胞外ドメインをコードするヌクレオチドは太字フォントで示されている。
Figure 2024511315000023
細胞外ＡＬＫ４ポリペプチド（アイソフォームＢ）をコードする核酸配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000024
ヒトＡＬＫ４前駆体ポリペプチド配列の代替的なアイソフォーム、アイソフォームＣ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０６４７３３．３）は以下の通りである。
Figure 2024511315000025
シグナルペプチドを単一の下線で示し、細胞外ドメインを太字フォントで示す。
処理された細胞外ＡＬＫ４ポリペプチド配列（アイソフォームＣ）は以下の通りである。
Figure 2024511315000026
ＡＬＫ４前駆体ポリペプチド（アイソフォームＣ）をコードする核酸配列を、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿０２０３２８．３のヌクレオチド７８～１７１５に対応する配列番号２２３に示す。
Figure 2024511315000027
Figure 2024511315000028
細胞外ＡＬＫ４ポリペプチド（アイソフォームＣ）をコードする核酸配列を配列番号２２４に示す。
Figure 2024511315000029
ＡＬＫ４は脊椎動物間でよく保存されており、細胞外ドメインの大きなストレッチは完全に保存されている。例えば、図９は、様々なＡＬＫ４オルソログと比較したヒトＡＬＫ４細胞外ドメインの多重配列アラインメントを示す。ＡＬＫ４に結合するリガンドの多くも高度に保存されている。したがって、これらのアラインメントから、正常なＡＬＫ４－リガンド結合活性に重要なリガンド結合ドメイン内の重要なアミノ酸位置を予測すること、並びに正常なＡＬＫ４－リガンド結合活性を有意に変化させることなく、置換に耐性である可能性が高いアミノ酸位置を予測することが可能である。したがって、本開示の方法に従って有用な活性ヒトＡＬＫ４バリアントポリペプチドは、別の脊椎動物ＡＬＫ４の配列からの対応する位置に１又は複数のアミノ酸を含み得るか、又はヒト若しくは他の脊椎動物の配列の残基と同様の残基を含み得る。
限定する意味はないが、以下の実施例は、活性ＡＬＫ４バリアントを定義するためのこのアプローチを説明する。図９に示すように、ヒトＡＬＫ４細胞外ドメイン（配列番号４１４）中のＶ６は、ハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｃｕｌｕｓ）ＡＬＫ４（配列番号４１８）中のイソロイシンであるため、位置は変更されてもよく、ガルス・ガルスＡＬＫ４（配列番号４１７）で観察されるように、Ｌ、Ｉ、若しくはＦ等の別の疎水性残基、又はＡ等の非極性残基に任意に変更されていてもよい。ヒト細胞外ドメイン中のＥ４０は、ガルス・ガルスＡＬＫ４中のＫであり、この部位は、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙ等の極性残基、及びおそらくＡ等の非極性残基を含む多種多様な変化に耐性があり得ることを示している。ヒト細胞外ドメイン中のＳ１５は、ガルス・ガルスＡＬＫ４中のＤであり、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｅ、Ｋ、Ｈ、Ｇ、Ｐ、Ｇ及びＹ等の極性残基が優先され、この位置で広い構造変動が許容されることを示している。ヒト細胞外ドメイン中のＥ４０は、ガルス・ガルスＡＬＫ４中のＫであり、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ及びＱ及びＮを含む荷電残基がこの位置で許容されることを示している。ヒト細胞外ドメイン中のＲ８０は、ホシバナモグラ（Ｃｏｎｄｙｌｕｒａ ｃｒｉｓｔａｔａ）ＡＬＫ４（配列番号４１５）Ｋであり、Ｒ、Ｋ及びＨを含むこの位置での塩基性残基は許容されることを示している。ヒト細胞外ドメインのＹ７７は、イノシシ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ）ＡＬＫ４（配列番号４１９）中のＦであり、Ｆ、Ｗ及びＹを含む芳香族残基がこの位置で許容されることを示す。ヒト細胞外ドメイン中のＰ９３は比較的保存されておらず、ナミハリネズミ（Ｅｒｉｎａｃｅｕｓ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ）ＡＬＫ４（配列番号４１６）中のＳ及びガルス・ガルスＡＬＫ４中のＮとして現れ、したがって、本質的に任意のアミノ酸がこの位置で許容されるべきである。
更に、ＡＬＫ４タンパク質は、特にリガンド結合に関して、構造的及び機能的特徴に関して当技術分野で特徴付けられている［例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８（２３）：２１１２９－２１１３５；Ｒｏｍａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ Ｍｏｌ Ｍｏｄｅｌ １８（８）：３６１７－３６２５；ａｎｄ Ｃａｌｖａｎｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（２００９）１５（３）：１７５－１８３］。本明細書における教示に加えて、これらの参考文献は、１又は複数の通常の活性（例えば、リガンド結合活性）を保持するＡＬＫ４バリアントをどのように生成するかについて十分な指針を提供する。
例えば、３フィンガー毒素フォールドとして公知の定義する構造モチーフは、Ｉ型及びＩＩ型受容体によるリガンド結合に重要であり、各単量体受容体の細胞外ドメイン内の様々な位置に位置する保存されたシステイン残基によって形成される［Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ ６：１８－２２；ａｎｄ Ｈｉｎｃｋ（２０１２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５８６：１８６０－１８７０］。したがって、これらの保存されたシステインの最も外側によって画定されるヒトＡＬＫ４のコアリガンド結合ドメインは、配列番号８４（ＡＬＫ４前駆体）の３４～１０１位に対応する。これらのシステインに画定されたコア配列に隣接する構造的に秩序のないアミノ酸は、必ずしもリガンド結合を変更することなく、Ｎ末端で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３残基、及び／又はＣ末端で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５残基だけ短縮され得る。Ｎ末端及び／又はＣ末端切断のための例示的なＡＬＫ４細胞外ドメインには、配列番号８６、８７及び４２２が含まれる。
特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含むヘテロ多量体（その断片、機能的バリアント及び修飾形態を含む）に関する。好ましくは、本明細書に開示される使用のためのＡＬＫ４ポリペプチド（例えば、ＡＬＫ４ポリペプチドを含むヘテロ多量体及びその使用）は可溶性である（例えば、ＡＬＫ４の細胞外ドメイン）。他の実施形態では、本明細書に開示される使用のためのＡＬＫ４ポリペプチドは、１又は複数のＴＧＦ－βスーパーファミリーリガンドに結合し、及び／又はその活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達の誘導）を阻害する（拮抗する）。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、４２１、及び４２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、４２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドからなるか、又は本質的になる。
一定の態様では、本開示は、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むヘテロ多量体に関する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号８４、８５、又は４２１のアミノ酸２３～３４（例えば、アミノ酸残基２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４）のいずれか１つで始まり、配列番号８４、８５、又は４２１のアミノ酸１０１～１２６（例えば、アミノ酸残基１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５及び１２６）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ４ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号８４、８５、又は４２１のアミノ酸３４～１０１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ４ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号８４、８５、又は４２１のアミノ酸２３～１２６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ４ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、４２２のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ４ドメインを含む。
Ｅ）ＡＬＫ７ポリペプチド
特定の態様では、本開示は、フラグメン、機能的バリアント、及びその修飾形態を含む、ＡＬＫ７ポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト並びにその使用（例えば、心不全（ＨＦ）又はＨＦの１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させること）に関する。本明細書で使用される場合、「ＡＬＫ７」という用語は、任意の種のアクチビン受容体様キナーゼ７（ＡＬＫ７）タンパク質のファミリー、及び突然変異誘発又は有用な活性を保持する他の修飾（例えば、変異体、断片、融合物及びペプチド模倣形態を含む）によってそのようなＡＬＫ７タンパク質から誘導されるバリアントポリペプチドを指す。そのようなバリアントＡＬＫ７ポリペプチドの例は、本開示全体を通して、並びに参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開の国際公開第２０１６／１６４０８９号及び国際公開第２０１６／１６４５０３号に提供されている。本明細書におけるＡＬＫ７への言及は、現在特定されている形態のいずれか１つへの言及であると理解される。ＡＬＫ７ファミリーのメンバーは、一般に全ての膜貫通ポリペプチドであり、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予測されるセリン／トレオニンキナーゼ特異性を有する細胞質ドメインで構成される。ヒトＡＬＫ７前駆体ポリペプチドのアミノ酸配列を以下の（配列番号１２０）に示す。好ましくは、本開示の方法に従って使用されるＡＬＫ７ポリペプチドは可溶性である。本明細書で使用される「可溶性ＡＬＫ７ポリペプチド」という用語は、ＡＬＫ７ポリペプチドの任意の天然に存在する細胞外ドメイン、並びに有用な活性を保持するその任意のバリアント（変異体、断片及びペプチド模倣形態を含む）を含む。例えば、ＡＬＫ７ポリペプチドの細胞外ドメインはリガンドに結合し、一般に可溶性である。可溶性ＡＬＫ７ポリペプチドの例としては、以下のＡＬＫ７細胞外ドメイン（配列番号１２３）が挙げられる。可溶性ＡＬＫ７ポリペプチドの他の例は、ＡＬＫ７ポリペプチドの細胞外ドメインに加えてシグナル配列を含む。シグナル配列は、ＡＬＫ７の天然のシグナル配列、又は組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）シグナル配列若しくは蜂の巣のメリチンシグナル配列等の別のポリペプチドからのシグナル配列であり得る。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。ＡＬＫ７ポリペプチドが１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する及び／又はその活性を阻害する能力を決定するための方法及びアッセイの様々な例は、本明細書に開示されているか、そうでなければ当技術分野で周知であり、ＡＬＫ７ポリペプチドが所望の結合及び／又は拮抗活性を有するかどうかを決定するために容易に使用することができる。本明細書に記載の全てのＡＬＫ７関連ポリペプチドのアミノ酸のナンバリングは、特に明記しない限り、以下に提供されるヒトＡＬＫ７前駆体タンパク質配列（配列番号１２０）のナンバリングに基づく。
ヒトＡＬＫ７の４つの天然に存在するアイソフォームが記載されている。ヒトＡＬＫ７アイソフォーム１前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿６６０３０２．２）の配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000030
シグナルペプチドを単一の下線で示し、細胞外ドメインを太字フォントで示す。
処理された細胞外ＡＬＫ７アイソフォーム１ポリペプチド配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000031
ヒトＡＬＫ７アイソフォーム１前駆体ポリペプチドをコードする核酸配列を、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列ＮＭ＿１４５２５９．２のヌクレオチド２４４～１７２２に対応する配列番号２３３に以下に示す。
Figure 2024511315000032
処理された細胞外ＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム１）をコードする核酸配列を配列番号２３４に示す。
Figure 2024511315000033
Figure 2024511315000034
ヒトＡＬＫ７の代替イソ型であるイソ型２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１０４５０１．１）のアミノ酸配列は、そのプロセシングされた形態で以下のように示され（配列番号１２４）、細胞外ドメインは太字で示される。
Figure 2024511315000035
細胞外ＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム２）のアミノ酸配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000036
プロセシングされたＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム２）をコードする核酸配列を、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１１１０３１．１のヌクレオチド２７９～１６０７に対応する配列番号２３５に以下に示す。
Figure 2024511315000037
Figure 2024511315000038
細胞外ＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム２）をコードする核酸配列を配列番号２３６に示す。
Figure 2024511315000039
別のヒトＡＬＫ７前駆体ポリペプチドであるアイソフォーム３（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１０４５０２．１）のアミノ酸配列を以下に示す（配列番号１２１）。シグナルペプチドは単一の下線で示されている。
Figure 2024511315000040
Figure 2024511315000041
プロセシングされたＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム３）のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１２６）。このイソ型は、膜貫通ドメインを欠き、したがって、その全体が可溶性であることが提案されている（Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ ６８：１７１９－１７２６）。配列番号１２６のＮ末端バリアントは、以下に記載されるように予測される。
Figure 2024511315000042
処理されていないＡＬＫ７ポリペプチド前駆体ポリペプチド（アイソフォーム３）をコードする核酸配列を配列番号２３７に示し、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１１１０３２．１のヌクレオチド２４４～１４８２に対応する。
Figure 2024511315000043
Figure 2024511315000044
プロセッシングされたＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム３）をコードする核酸配列を配列番号２３８に示す。
Figure 2024511315000045
Figure 2024511315000046
別のヒトＡＬＫ７前駆体ポリペプチドであるアイソフォーム４（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１０４５０３．１）のアミノ酸配列を以下に示す（配列番号１２２）。シグナルペプチドは単一の下線で示されている。
Figure 2024511315000047
プロセシングされたＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム４）のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１２７）。ＡＬＫ７アイソフォーム３と同様に、アイソフォーム４は、膜貫通ドメインを欠き、したがって、その全体が可溶性であることが提案されている（Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ ６８：１７１９－１７２６）。配列番号１２７のＮ末端バリアントは、以下に記載されるように予測される。
Figure 2024511315000048
Figure 2024511315000049
未処理のＡＬＫ７ポリペプチド前駆体ポリペプチド（アイソフォーム４）をコードする核酸配列を配列番号２３９に示し、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１１１０３３．１のヌクレオチド２４４～１２４４に対応する。
Figure 2024511315000050
プロセッシングされたＡＬＫ７ポリペプチド（アイソフォーム４）をコードする核酸配列を配列番号２４０に示す。
Figure 2024511315000051
Figure 2024511315000052
ラットの完全長ＡＬＫ７（アイソフォーム１）のシグナル配列（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿６２０７９０．１を参照のこと）及びヒトとラットのＡＬＫ７の高度の配列同一性に基づいて、ヒトＡＬＫ７アイソフォーム１の処理形態は以下の通りであると予測される（配列番号１２８）。
Figure 2024511315000053
配列番号１２３がＮ末端で１、２、３、４、５、６、又は７個のアミノ酸により切断され、配列番号１２８がＮ末端で１又は２個のアミノ酸により切断されている、プロセシングされたＡＬＫ７アイソフォーム１の活性バリアントを予測する。配列番号１２８と一致して、ロイシンはヒトＡＬＫ７アイソフォーム３（配列番号１２６）及びヒトＡＬＫ７アイソフォーム４（配列番号１２７）のプロセシングされた形態のＮ末端アミノ酸であることが更に予想される。
特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドを含むヘテロ多量体（その断片、機能的バリアント及び修飾形態を含む）に関する。好ましくは、本開示の発明に従って使用するためのＡＬＫ７ポリペプチド（例えば、ＡＬＫ７ポリペプチドを含むヘテロ多量体及びその使用）は可溶性である（例えば、ＡＬＫ７の細胞外ドメイン）。他の実施形態では、本開示に従って使用するためのＡＬＫ７ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する。したがって、いくつかの実施形態では、本開示に従って使用するためのＡＬＫ７ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドの活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達の誘導）を阻害する（拮抗する）。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、配列番号１２０、１２３、１２４、１２５、１２１、１２６、１２２、１２７、１２８、１２９、２５５、１３３及び１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、配列番号１２０、１２３、１２４、１２５、１２１、１２６、１２２、１２７、１２８、１２９、２５５、１３３及び１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドからなるか、又は本質的になる。
ＡＬＫ７は脊椎動物間でよく保存されており、細胞外ドメインの大きなストレッチは完全に保存されている。例えば、図２２は、様々なＡＬＫ７オルソログと比較したヒトＡＬＫ７細胞外ドメインの多重配列アラインメントを示す。したがって、これらのアラインメントから、正常なＡＬＫ７－リガンド結合活性に重要なリガンド結合ドメイン内の重要なアミノ酸位置を予測すること、並びに正常なＡＬＫ７－リガンド結合活性を有意に変化させることなく、置換に耐性である可能性が高いアミノ酸位置を予測することが可能である。したがって、本開示の方法に従って有用な活性ヒトＡＬＫ７バリアントポリペプチドは、別の脊椎動物ＡＬＫ７の配列からの対応する位置に１又は複数のアミノ酸を含み得るか、又はヒト若しくは他の脊椎動物の配列の残基と同様の残基を含み得る。限定する意味はないが、以下の実施例は、活性ＡＬＫ７バリアントを定義するためのこのアプローチを説明する。ヒトＡＬＫ７細胞外ドメイン（配列番号４２５）中のＶ６１は、コモンマーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ）ＡＬＫ７（配列番号４２８）中のイソロイシンであるので、位置は変更されていてもよく、場合により、Ｌ、Ｉ、若しくはＦ等の別の疎水性残基に変更されてもよく、又はＡ．等の非極性残基に変更されてもよい。ヒト細胞外ドメイン中のＬ３２は、フィリピンメガネザル（Ｔａｒｓｉｕｓ ｓｙｒｉｃｈｔａ）（配列番号４２９）ＡＬＫ７中のＲであり、この部位は、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙ等の極性残基及びＡ等の非極性基を含む多種多様な変化に耐性であり得ることを示し、ヒト細胞外ドメイン中のＫ３７は、チンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）ＡＬＫ７（配列番号４２６）中のＲであり、Ｒ、Ｋ及びＨを含む塩基性残基はこの位置で許容され、ヒト細胞外ドメインのＰ４は、比較的あまり保存されておらず、チンパンジーＡＬＫ７においてＡとして現れることから、多種多様なアミノ酸がこの位置で許容されるべきであることが示される。
更に、ＡＬＫ７タンパク質は、構造的及び機能的特徴に関して当技術分野で特徴付けられている［例えば、Ｒｏｍａｎｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ １８（８）：３６１７－３６２５］。例えば、３フィンガー毒素フォールドとして公知の定義する構造モチーフは、Ｉ型及びＩＩ型受容体によるリガンド結合に重要であり、各単量体受容体の細胞外ドメイン内の様々な位置に位置する保存されたシステイン残基によって形成される［Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ ６：１８－２２；ａｎｄ Ｈｉｎｃｋ（２０１２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５８６：１８６０－１８７０］。したがって、これらの保存されたシステインの最も外側によって画定されるヒトＡＬＫ７のコアリガンド結合ドメインは、配列番号１２０の２８～９２位に対応する。これらのシステインに画定されたコア配列に隣接する構造的に秩序のないアミノ酸は、必ずしもリガンド結合を変更することなく、Ｎ末端で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、又は２７残基、及びＣ末端で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１残基だけ短縮され得る。Ｎ末端及び／又はＣ末端切断のための例示的なＡＬＫ７細胞外ドメインには、配列番号１２３、１２５、１２６及び１２７が含まれる。
したがって、ＡＬＫ７の活性部分（例えば、リガンド結合部分）の一般式は、配列番号１２０のアミノ酸２８～９２を含む。したがって、ＡＬＫ７ポリペプチドは、例えば、配列番号１２０のアミノ酸２０～２８のいずれか１つに対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８のいずれか一つから始まる）、配列番号１２０のいずれか１つのアミノ酸９２～１１３に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、又は１１３のいずれか一つで終わる）ＡＬＫ７の一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなることができる。
他の例としては、配列番号１２０の２１～２８（例えば、位置２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８のいずれか）、２４～２８（例えば、位置２４、２５、２６、２７、又は２８のいずれか）又は２５～２８（例えば、位置２５、２６、２７、又は２８のいずれか）の位置で始まり、配列番号１２０の９３～１１２（例えば、位置９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、又は１１２のいずれか）、９３～１１０（例えば、位置９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、又は１１０のいずれか）、９３～１００（例えば、位置９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００のいずれか）又は９３～９５（例えば、位置９３、９４、又は９５のいずれか）の位置で終わる構築物が挙げられる。これらの範囲内のバリアント、特に、配列番号１２０の対応する部分と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するバリアントも企図される。
本明細書に記載の変形例は、様々な方法で組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７バリアントは、リガンド結合ポケットに１、２、５、６、７、８、９、１０又は１５個以下の保存的アミノ酸変化を含む。可変性が特に良好に許容され得る結合ポケットの外側の部位には、細胞外ドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端が含まれる（上記のように）。
Ｆ）フォリスタチンポリペプチド
他の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストはフォリスタチンポリペプチドである。本明細書に記載されるように、フォリスタチンポリペプチドは、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために、特に１又は複数の心不全関連合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために使用され得る。
「フォリスタチンポリペプチド」という用語は、フォリスタチンの任意の天然に存在するポリペプチド並びに有用な活性を保持するその任意のバリアント（変異体、断片、融合物、及びペプチド模倣形態を含む）を含むポリペプチドを含み、フォリスタチンの任意の機能性モノマー又は多量体を更に含む。一定の実施形態では、本開示のフォリスタチンポリペプチドは、アクチビン活性、特にアクチビンＡに結合及び／又は阻害する。アクチビン結合特性を保持するフォリスタチンポリペプチドのバリアントは、フォリスタチンとアクチビンとの相互作用を含む以前の研究に基づいて同定することができる。例えば、国際公開第２００８／０３０３６７号は、アクチビン結合に重要であることが示されている特異的フォリスタチンドメイン（「ＦＳＤ」）を開示している。以下の配列番号３９２～３９４に示されるように、フォリスタチンＮ末端ドメイン（「ＦＳＮＤ」配列番号３９２）、ＦＳＤ２（配列番号３９４）、及び程度は低いがＦＳＤ１（配列番号３９３）は、アクチビン結合に重要なフォリスタチン内の例示的なドメインを表す。更に、ポリペプチドのライブラリーを作製及び試験するための方法は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとの関連で上に記載されており、そのような方法は、フォリスタチンのバリアントの作製及び試験にも関する。フォリスタチンポリペプチドには、フォリスタチンポリペプチドの配列と少なくとも約８０％同一の配列を有し、場合により、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを超える同一性を有する任意の公知のフォリスタチンの配列に由来するポリペプチドが含まれる。フォリスタチンポリペプチドの例としては、例えば国際公開第２００５／０２５６０１号に記載されているような、成熟フォリスタチンポリペプチド又はヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチドのより短いアイソフォーム若しくは他のバリアント（配列番号３９０）が挙げられる。
ヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチドアイソフォームＦＳＴ３４４は以下の通りである。
Figure 2024511315000054
シグナルペプチドに下線が引かれている。また、上に下線が引かれているのは、このフォリスタチンアイソフォームを以下に示すより短いフォリスタチンアイソフォームＦＳＴ３１７と区別するＣ末端伸長を表す最後の２７残基である。
ヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチドアイソフォームＦＳＴ３１７は以下の通りである。
Figure 2024511315000055
シグナルペプチドに下線を付す。
フォリスタチンＮ末端ドメイン（ＦＳＮＤ）配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000056
ＦＳＤ１及びＦＳＤ２配列は以下の通りである。
Figure 2024511315000057
Figure 2024511315000058
Ｇ）融合ポリペプチド
特定の態様では、本開示は、融合ポリペプチドであるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを提供する。融合ポリペプチドは、本明細書に開示される方法又は当技術分野で公知の方法のいずれかに従って調製され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される融合ポリペプチドのいずれかは、以下の成分：ａ）本明細書に開示されるポリペプチドのいずれか（「Ａ」）（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）、ｂ）本明細書に開示されるリンカーのいずれか（「Ｂ」）、ｃ）本明細書に開示される異種部分のいずれか（「Ｃ」）（例えば、Ｆｃ免疫グロブリンドメイン）を含み、及びリーダー配列（「Ｘ」）（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子リーダー配列）が含まれていてもよい。そのような実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置され得る：Ａ－Ｂ－Ｃ又はＣ－Ｂ－Ａ。そのような実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置され得る：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃ又はＸ－Ｃ－Ｂ－Ａ。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、Ａ、Ｂ及びＣの各々を含み（及びリーダー配列が含まれていてもよく）、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２又は１個以下の追加のアミノ酸を含む（ただし、グリコシル化等の更なる翻訳後修飾を含み得る）。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＡとの間に１、２、３、４、又は５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ｃ－Ｂ－Ａを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＣとの間に１、２、３、４、又は５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＡとの間にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ｃ－Ｂ－Ａを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＣとの間にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＡとの間にグリシン及びアラニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ｃ－Ｂ－Ａを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＣとの間にグリシン及びアラニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＡとの間にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ｃ－Ｂ－Ａを含み、融合ポリペプチドは、ＸとＣとの間にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ａ－Ｂ－Ｃを含み、融合ポリペプチドは、ＡとＢとの間にトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、以下のように（Ｎ末端からＣ末端に）配置されたリーダー配列：Ｘ－Ｃ－Ｂ－Ａを含み、融合ポリペプチドは、ＣとＢとの間にトレオニンを含む。
特定の態様では、本開示の融合タンパク質は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の少なくとも一部及び１又は複数の異種部分（例えば、免疫グロブリンＦｃドメイン）を含み、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップドメインと１又は複数の異種部分との間に配置された１又は複数のリンカードメイン配列が含まれていてもよい。そのような異種部分の周知の例には、ポリヒスチジン、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）又はヒト血清アルブミンが含まれるが、これらに限定されない。
異種部分は、所望の特性を付与するように選択されてもよい。例えば、いくつかの異種部分は、アフィニティークロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離に特に有用である。アフィニティー精製の目的のために、グルタチオン－、アミラーゼ－、及びニッケル－又はコバルト－コンジュゲート樹脂等のアフィニティークロマトグラフィーに関連するマトリックスが使用される。そのようなマトリックスの多くは、（ＨＩＳ６）融合パートナーと共に有用なＰｈａｒｍａｃｉａ ＧＳＴ精製システム及びＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ（商標）システム（Ｑｉａｇｅｎ）等の「キット」形態で入手可能である。別の例として、異種部分は、融合ポリペプチドの検出を容易にするように選択され得る。そのような検出ドメインの例には、様々な蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）並びに通常は特異的抗体が利用可能な短いペプチド配列である「エピトープタグ」が含まれる。特異的モノクローナル抗体が容易に利用可能である周知のエピトープタグとしては、ＦＬＡＧ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）及びｃ－ｍｙｃタグが挙げられる。いくつかの場合、異種部分は、第Ｘａ因子又はトロンビン等のプロテアーゼ切断部位を有し、これにより、関連するプロテアーゼが融合タンパク質を部分的に消化し、それによって組換えタンパク質をそこから遊離させる。次いで、遊離したタンパク質を、その後のクロマトグラフィー分離によって異種部分から単離することができる。
特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、場合により介在リンカードメインと共に、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップドメインをインビボで安定化する異種ドメイン（「安定化剤」ドメイン）に融合される。一般に、「安定化する」という用語は、破壊の減少、腎臓によるクリアランスの減少、又は薬剤の他の薬物動態学的効果のためであるかどうかにかかわらず、血清半減期を増加させる任意のものを意味する。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合ポリペプチドは、広範囲のタンパク質に望ましい薬物動態特性を付与することが知られている。同様に、ヒト血清アルブミンへの融合は、望ましい特性を付与することができる。選択され得る他のタイプの異種部分としては、多量体化（例えば、二量化、四量化）ドメイン及び機能性ドメインが挙げられる。いくつかの実施形態では、安定化ドメインはまた、多量体化ドメインとして機能し得る。そのような多機能ドメインには、例えば、Ｆｃ免疫グロブリンドメインが含まれる。Ｆｃ免疫グロブリンドメイン及び１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップドメインを含むＦｃ融合タンパク質の様々な例が、本開示を通して記載される。
いくつかの実施形態では、本開示の融合タンパク質は、Ｎ末端に様々なリーダー配列のいずれかを更に含み得る。そのような配列は、ペプチドが発現され、真核生物系の分泌経路に標的化されることを可能にする。例えば、Ｅｒｎｓｔ ｅｔ ａｌ、第５，０８２，７８３号（１９９２）を参照されたい。あるいは、天然シグナル配列を使用して、細胞からの押出を行ってもよい。可能性のあるリーダー配列には、天然リーダー、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）及びミツバチメリチンが含まれる。ＴＰＡリーダー配列を組み込んだ融合タンパク質の例としては、配列番号６、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５１、８８、９２、１２９、１３３、２４７、２７６、２７９、３３３、３３６、３３９、３４２、３４５、３４８、３５１、３５４、３８１、３９６、４０２及び４０６が挙げられる。シグナルペプチドのプロセシングは、他の変数の中でも、選択されたリーダー配列、使用される細胞型及び培養条件に応じて異なり得、したがって、成熟（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）ポリペプチドの実際のＮ末端開始部位は、Ｎ末端方向又はＣ末端方向のいずれかに１、２、３、４又は５アミノ酸だけシフトし得る。
好ましい融合タンパク質は、配列番号５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５４、５５、８８、８９、９２、９３、１２９、１３０、１３３、１３４、２４７、２４９、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３７８、３８０、３８１、３８５、３９６、３９８、４０１、４０２、４０３、４０６、４０８及び４０９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。
Ｉ．多量体化ドメイン
ある特定の実施形態では、本開示のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、少なくとも１つの多量体化ドメインを含む。本明細書に開示される場合、「多量体化ドメイン」という用語は、少なくとも第１のポリペプチドと少なくとも第２のポリペプチドとの間の共有結合又は非共有結合相互作用を促進するアミノ酸又はアミノ酸の配列を指す。ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、多量体化ドメインに共有結合又は非共有結合で連結され得る。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、第１のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド）と第２のポリペプチド（例えば、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチド）との間の相互作用を促進してヘテロ多量体形成（例えば、ヘテロ二量体形成）を促進し、ホモ多量体形成（例えば、ホモ二量体形成）が妨害されるか、又はそうでなければ避けられていてもよく、それによって、所望のヘテロ多量体の収量を増加させる（例えば、図８Ｂを参照されたい）。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、共有結合相互作用によってヘテロ二量体を形成し得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、非共有結合相互作用によってヘテロ二量体を形成し得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、共有結合相互作用及び非共有結合相互作用の両方を介してヘテロ二量体を形成し得る。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の相互作用を促進してホモ多量体形成を促進し、ヘテロ多量体形成が妨害されていてもよく、そうでなければ不利にし、それにより所望のホモ多量体の収量を増加させる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）はホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、共有結合相互作用によってホモ二量体を形成し得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、非共有結合相互作用によってホモ二量体を形成し得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、共有結合相互作用及び非共有結合相互作用の両方を介してホモ二量体を形成し得る。
特定の態様では、多量体化ドメインは、相互作用対の１つの成分を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、第２のポリペプチドと共有結合的又は非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含むポリペプチド複合体を形成し得、第１のポリペプチドは、第１のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドのアミノ酸配列（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）及び相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列（例えば、第１の免疫グロブリンＦｃドメイン）を含み、第２のポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）のアミノ酸配列、及び相互作用対の第２のメンバー（例えば、第２の免疫グロブリンＦｃドメイン）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、第２のポリペプチドと共有結合的又は非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含むポリペプチド複合体を形成し得、第１のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドのアミノ酸配列及び相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドのアミノ酸配列、及び相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、第２のポリペプチドと共有結合的又は非共有結合的に会合した第１のポリペプチドを含むポリペプチド複合体を形成し得、第１のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列及び相互作用対の第１のメンバーのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドのアミノ酸配列、及び相互作用対の第２のメンバーのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、相互作用対は、相互作用してヘテロ二量体又はホモ二量体複合体のいずれかの二量体複合体を形成する任意の２つのポリペプチド配列であり得る。相互作用対は、改善された特性／活性（例えば、増加した血清半減期等）を付与するために、又は別の部分が付着して改善された特性／活性を提供するアダプターとして作用するために選択され得る。例えば、ポリエチレングリコール又はグリコシル化部分は、改善された特性／活性、例えば改善された血清半減期を提供するために、相互作用対の一方又は両方の成分に結合され得る。
相互作用対の第１及び第２のメンバーは、非対称対であってもよく、これは、対のメンバーが自己会合よりも優先的に互いに会合することを意味する。したがって、非対称相互作用対の第１及び第２のメンバーは会合してヘテロ二量体複合体を形成し得る（例えば、図８Ｂを参照されたい）。あるいは、相互作用対はガイドされていなくてもよく、これは、対のメンバーが実質的に優先することなく互いに会合又は自己会合することができ、したがって同じ又は異なるアミノ酸配列を有し得ることを意味する（例えば、図８Ａを参照されたい）。したがって、ガイドされない相互作用対の第１及び第２のメンバーは、会合してホモ二量体複合体又はヘテロ二量体複合体を形成し得る。相互作用対の第１のメンバー（例えば、非対称対又はガイドされない相互作用対）は、相互作用対の第２のメンバーと共有結合的に会合されていてもよい。相互作用対の第１のメンバー（例えば、非対称対又はガイドされない相互作用対）は、相互作用対の第２のメンバーと非共有結合的に会合されていてもよい。特定の実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドは、ヘテロ二量体又はホモ二量体複合体を形成するが、より高次のヘテロ多量体及びホモ多量体複合体、例えば限定されないが、ヘテロ三量体、ホモ三量体、ヘテロ四量体、ホモ四量体、及び更なるオリゴマー構造も含まれる（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４及びＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ７オリゴマー構造の両方に適用されてもよい図１１～１３を参照されたい）。
Ｉａ Ｆｃ融合タンパク質
多量体化ドメインを含む融合ポリペプチドの具体例として、本開示は、免疫グロブリンの定常ドメイン、例えば免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３ドメイン又は免疫グロブリンＦｃドメインを含むポリペプチドに融合したＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を含む融合ポリペプチドを提供する。本明細書で使用される場合、「免疫グロブリンＦｃドメイン」又は単に「Ｆｃ」という用語は、免疫グロブリン鎖定常領域、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常領域のカルボキシル末端部分、又はその一部を意味すると理解される。例えば、免疫グロブリンＦｃ領域は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、又は５）２つ以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域との組み合わせを含み得る。一実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域は、少なくとも免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、好ましくはＣＨ１ドメインを欠く。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域はヒト免疫グロブリンＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域が由来する免疫グロブリンのクラスはＩｇＧ（Ｉｇγ）（γサブクラス１、２、３、又は４）である。一定の実施形態では、定常領域がＩｇＧ１に由来する。他のクラスの免疫グロブリン、ＩｇＡ（Ｉｇα）、ＩｇＤ（Ｉｇδ）、ＩｇＥ（Ｉｇε）及びＩｇＭ（Ｉｇμ）を使用してもよい。適切な免疫グロブリン重鎖定常領域の選択は、その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５４１，０８７号明細書及び米国特許第５，７２６，０４４号明細書で詳細に論じられる。特定の結果を達成するための特定の免疫グロブリンクラス及びサブクラスからの特定の免疫グロブリン重鎖定常領域配列の選択は、当業者のレベル内であると考えられる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域をコードするＤＮＡ構築物の一部は、好ましくはヒンジドメインの少なくとも一部、好ましくはＦｃガンマのＣＨ３ドメイン又はＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ若しくはＩｇＭのいずれかの相同ドメインの少なくとも一部を含む。更に、免疫グロブリン重鎖定常領域内のアミノ酸の置換又は欠失は、本明細書に開示される方法及び組成物の実施に有用であり得ることが企図される。一例は、上部ＣＨ２領域にアミノ酸置換を導入して、Ｆｃ受容体に対する親和性が低下したＦｃバリアントを作製することである（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：３６１３）。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４に由来するＦｃドメインを本明細書中に提供する。
ヒトＩｇＧ１（Ｇ１Ｆｃ）のＦｃ部分に使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を以下に示す（配列番号１３）。点線の下線はヒンジ領域を示し、実線の下線は天然に存在するバリアントの位置を示す。一部において、本開示は、配列番号１３と７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。
Ｇ１Ｆｃ中の天然に存在するバリアントには、配列番号１３で使用されるナンバリングシステムによるＥ１３４Ｄ及びＭ１３６Ｌが含まれる（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１８５７参照）。
Figure 2024511315000059
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である１又は複数のＦｃポリペプチドドメインに融合された、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチドドメイン）を含むＦｃ融合ポリペプチド、並びにそのホモ多量体（例えば、ホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７、及びＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体を含むヘテロ二量体）を含むＦｃ融合ポリペプチドを提供する。
ヒトＩｇＧ２（Ｇ２Ｆｃ）のＦｃ部分に使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を以下に示す（配列番号１４）。点線の下線はヒンジ領域を示し、二重下線は配列内でデータベース競合がある位置を示す（ＵｎｉＰｒｏｔＰ０１８５９による）。一部において、本開示は、配列番号１４と７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。
Figure 2024511315000060
Figure 2024511315000061
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である１又は複数のＦｃポリペプチドドメインに融合された、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチドドメイン）を含むＦｃ融合ポリペプチド、並びにそのホモ多量体（例えば、ホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７、及びＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体を含むヘテロ二量体）を含むＦｃ融合ポリペプチドを提供する。
ヒトＩｇＧ３（Ｇ３Ｆｃ）のＦｃ部分に使用され得るアミノ酸配列の２つの例を以下に示す。Ｇ３Ｆｃのヒンジ領域は、他のＦｃ鎖の最大４倍の長さであり得、同様の１７残基セグメントが先行する３つの同一の１５残基セグメントを含む。以下に示す第一のＧ３Ｆｃ配列（配列番号１５）は、単一の１５残基セグメントからなる短いヒンジ領域を含有し、第二のＧ３Ｆｃ配列（配列番号１６）は全長ヒンジ領域を含有する。いずれの場合も、点線の下線はヒンジ領域を示し、実線の下線はＵｎｉＰｒｏｔＰ０１８５９による天然バリアントの位置を示す。一部において、本開示は、配列番号１５と７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。一部において、本開示は、配列番号１６と７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。
Figure 2024511315000062
Figure 2024511315000063
Ｇ３Ｆｃ（例えば、ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１８６０を参照のこと）中の天然に存在するバリアントとしては、配列番号１５で使用されるナンバリングシステムに変換した場合のＥ６８Ｑ、Ｐ７６Ｌ、Ｅ７９Ｑ、Ｙ８１Ｆ、Ｄ９７Ｎ、Ｎ１００Ｄ、Ｔ１２４Ａ、Ｓ１６９Ｎ、Ｓ１６９ｄｅｌ、Ｆ２２１Ｙが挙げられ、本開示は、これらのバリアントのうちの１又は複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む融合ポリペプチドを提供する。また、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ３遺伝子（ＩＧＨＧ３）は、異なるヒンジ長を特徴とする構造多型を示す［ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１８５９参照］。具体的には、変異型ＷＩＳは、Ｖ領域の大部分及びＣＨ１領域の全てを欠いている。これは、ヒンジ領域に通常存在する１１に加えて、７位に余分な鎖間ジスルフィド結合を有する。バリアントＺＵＣは、Ｖ領域の大部分、ＣＨ１領域の全て、及びヒンジの一部を欠く。バリアントＯＭＭは、対立遺伝子型又は別のガンマ鎖サブクラスを表し得る。本開示は、これらのバリアントの１又は複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む追加の融合ポリペプチドを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である１又は複数のＦｃポリペプチドドメインに融合された、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチドドメイン）を含むＦｃ融合ポリペプチド、並びにそのホモ多量体（例えば、ホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７、及びＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体を含むヘテロ二量体）を含むＦｃ融合ポリペプチドを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である１又は複数のＦｃポリペプチドドメインに融合された、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチドドメイン）を含むＦｃ融合ポリペプチド、並びにそのホモ多量体（例えば、ホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７、及びＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体を含むヘテロ二量体）を含むＦｃ融合ポリペプチドを提供する。
ヒトＩｇＧ４（Ｇ４Ｆｃ）のＦｃ部分に使用され得るネイティブアミノ酸配列の例を以下に示す（配列番号１７）。点線の下線はヒンジ領域を示す。一部において、本開示は、配列番号１７と７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。
Figure 2024511315000064
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である１又は複数のＦｃポリペプチドドメインに融合された、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチドドメイン（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチドドメイン）を含むＦｃ融合ポリペプチド、並びにそのホモ多量体（例えば、ホモ二量体）及びヘテロ多量体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７、及びＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体を含むヘテロ二量体）を含むＦｃ融合ポリペプチドを提供する。
Ｆｃドメイン中の様々な操作された突然変異は、Ｇ１Ｆｃ配列に関して本明細書に提示されている（配列番号１３）。Ｇ２Ｆｃ、Ｇ３Ｆｃ及びＧ４Ｆｃにおける類似の突然変異は、図７のＧ１Ｆｃとのアラインメントから誘導することができる。ヒンジ長が等しくないため、アイソタイプアラインメントに基づく類似のＦｃ位置（図７）は、配列番号１３、１４、１５及び１７において異なるアミノ酸番号を有する。ヒンジ領域、ＣＨ２領域及びＣＨ３領域（例えば、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１７）からなる免疫グロブリン配列における所与のアミノ酸位置は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースにおけるように、ナンバリングがＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域からなる）全体を包含する場合、同じ位置とは異なる番号によって特定されることも理解され得る。例えば、ヒトＧ１Ｆｃ配列（配列番号１３）、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１８５７）及びヒトＩｇＧ１重鎖における選択されたＣＨ３位間の対応は以下の通りである。
Figure 2024511315000065
いくつかの実施形態では、本開示は、操作された又はバリアントＦｃ領域を有する抗体及びＦｃ融合タンパク質を提供する。そのような抗体及びＦｃ融合タンパク質は、例えば、抗原依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）等のエフェクター機能の調節に有用であり得る。更に、修飾は、抗体及びＦｃ融合タンパク質の安定性を改善し得る。抗体及びＦｃ融合タンパク質のアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製される。そのようなバリアントには、例えば、本明細書中に開示される抗体及びＦｃ融合タンパク質のアミノ酸配列内の残基からの欠失及び／又は残基への挿入及び／又は残基の置換が含まれる。最終構築物が所望の特性を有する限り、最終構築物に到達するために、欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせが行われる。アミノ酸の変化はまた、グリコシル化部位の数又は位置を変化させる等、抗体及びＦｃ融合タンパク質の翻訳後プロセスを変化させ得る。
限定されないが、Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅら（国際公開第９４／２８０２７号及び国際公開第９８／４７５３１号を参照されたい。Ｘｕ ｅｔ ａｌ．２０００ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００；１６－２６も参照のこと）によって記載されたＡｌａ－Ａｌａ変異を含むアミノ酸配列の変化を導入することによって、エフェクター機能が低下した抗体及びＦｃ融合タンパク質を産生することができる。したがって、一定の実施形態では、Ａｌａ－Ａｌａ変異を含む定常領域内の変異を有する本開示のＦｃ融合タンパク質を使用して、エフェクター機能を低減又は消失させることができる。これらの実施形態によれば、抗体及びＦｃ融合タンパク質は、位置２３４におけるアラニンへの変異、又は位置２３５におけるアラニンへの変異、又はそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態では、抗体又はＦｃ融合タンパク質はＩｇＧ４フレームワークを含み、Ａｌａ－Ａｌａ変異は、位置２３４でのフェニルアラニンからアラニンへの変異及び／又は位置２３５でのロイシンからアラニンへの（１又は複数の）変異を表す。別の実施形態では、抗体又はＦｃ融合タンパク質はＩｇＧ１フレームワークを含み、Ａｌａ－Ａｌａ変異は、２３４位でのロイシンからアラニンへの変異及び／又は２３５位でのロイシンからアラニンへの（１又は複数の）変異を表す。これらの部位におけるアラニン置換は、ヒト抗体及びマウス抗体の両方においてＡＤＣＣを低下させるのに有効であるが、これらの置換は、ＣＤＣ活性を低下させるのにあまり有効ではない。ＦｃのＣｌｑ結合部位をマッピングするためのランダム突然変異誘発アプローチによって同定された別の単一バリアントＰ３２９Ａは、ＡＤＣＣ活性を保持しながらＣＤＣ活性を低下させるのに非常に有効である。Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（ＬＡＬＡ－ＰＧ、Ｋａｂａｔ位置）置換の組み合わせは、ヒトＩｇＧ１抗体のエフェクター機能を効果的にサイレンシングすることが示されている。ＬＡＬＡ、ＬＡＬＡ－ＰＧ及び他の突然変異の詳細な考察については、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７）１ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９２：３９００－３９０８に記載されている。いくつかの実施形態では、本開示のＦｃ融合タンパク質は、重鎖のＦｃ領域にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ変異（ＬＡＬＡ－ＰＧ；Ｋａｂａｔ位置）を含む。抗体又はＦｃ融合タンパク質は、代替的又は追加的に、ＣＨ２ドメイン中の点突然変異Ｋ３２２Ａを含む他の突然変異を有し得る（Ｈｅｚａｒｅｈ ｅｔ ａｌ．２００１ Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７５：１２１６１－８）。
特定の実施形態では、抗体又はＦｃ融合タンパク質は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強又は阻害するように改変され得る。調節されたＣＤＣ活性は、Ｆｃ領域に１又は複数のアミノ酸の置換、挿入又は欠失を導入することによって達成され得る（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい）。これに代えて、又はこれに加えて、（１又は複数の）システイン残基をＦｃ領域に導入して、この領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にしてもよい。このようにして生成されたホモ二量体抗体又はＦｃ融合タンパク質は、改善された若しくは低下した内在化能力及び／又は増加した若しくは低下した補体媒介性細胞死滅を有し得る。Ｃａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１７６：１１９１－１１９５（１９９２）及びＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８－２９２２（１９９２）、国際公開第９９／５１６４２号、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許。第５，６２４，８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号を参照されたい。
Ｉｂ ヘテロ多量体
当技術分野で公知の多くの方法を使用して、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体、及びＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体を生成することができる。例えば、天然に存在しないジスルフィド結合は、遊離チオールが第２のポリペプチド（例えば、ＡＬＫ４又はＡＬＫ７ポリペプチド）上の別の遊離チオール含有残基と相互作用して、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間にジスルフィド結合が形成されるように、第１のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド）上で天然に存在するアミノ酸をシステイン等の遊離チオール含有残基で置換することによって構築され得る。ヘテロ多量体形成を促進するための相互作用の更なる例としては、限定されないが、Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．、国際公開第２００７１４７９０１号に記載されているようなイオン性相互作用；Ｋａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第８，５９２，５６２号明細書に記載されているような静電ステアリング効果；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許出願公開第２０１２０３０２７３７号明細書に記載されているようなコイル－コイル相互作用；Ｐａｃｋ＆Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３１：１５７９－１５８４に記載されているようなロイシンジッパー；及びＰａｃｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １１：１２７１－１２７７に記載されているヘリックス－ターン－ヘリックスモチーフが挙げられる。様々なセグメントの連結は、例えば、化学的架橋、ペプチドリンカー、ジスルフィド架橋等による共有結合、又はアビジン－ビオチン若しくはロイシンジッパー技術等による親和性相互作用を介して得ることができる。
具体例として、本開示は、ヘテロ多量体形成を促進するように改変されたヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／又はＩｇＧ４に由来するＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３ドメイン等の免疫グロブリンの定常ドメインを含むポリペプチドに融合したＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、又はＡＬＫ７を含む融合タンパク質を提供する。単一細胞株からの非対称免疫グロブリン系タンパク質の大量生産において生じる問題は、「鎖会合問題」として知られている。二重特異性抗体の産生において顕著に直面したように、鎖会合の問題は、異なる重鎖及び／又は軽鎖が単一の細胞株において産生されるときに本質的に生じる複数の組み合わせの中から所望の多鎖タンパク質を効率的に産生するという課題に関する［例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ（２０１２）ｍＡｂｓ ４：６５３－６６３を参照のこと］。この問題は、２つの異なる重鎖及び２つの異なる軽鎖が同じ細胞内で産生される場合に最も深刻であり、この場合、典型的には一方のみが所望される場合、合計１６の可能な鎖の組み合わせがある（ただし、これらのうちのいくつかは同一である）。それにもかかわらず、同じ原理は、２つの異なる（非対称）重鎖のみを組み込む所望の多重鎖融合タンパク質の収量の減少を説明する。
許容可能な収率で好ましい非対称融合タンパク質を産生するために、単一細胞株におけるＦｃ含有融合ポリペプチド鎖の所望の対合を増加させる様々な方法が当技術分野で公知である［例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ（２０１２）ｍＡｂｓ ４：６５３－６６３；及びＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２Ａ）：９５－１０６を参照のこと］。Ｆｃ含有鎖の所望のペアリングを得るための方法としては、電荷に基づくペアリング（静電ステアリング）、「ノブス・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」立体的ペアリング、ＳＥＥＤ本体ペアリング、及びロイシンジッパーベースのペアリングが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９：６１７－６２１；Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １６：６７７－６８１；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２３：１９５－２０２；Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ（２０１０）；２８５：１９６３７－１９６４６；Ｗｒａｎｉｋ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７：４３３３１－４３３３９；米国特許第５９３２４４８号；国際公開第１９９３／０１１１６２号；国際公開第２００９／０８９００４号及び国際公開第２０１１／０３４６０５号を参照されたい。本明細書に記載されるように、これらの方法を使用して、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び別の、異なっていてもよいＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及び別の、異なっていてもよいＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及びＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及びＡＬＫ４ポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及びＡＬＫ７ポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ４ポリペプチド、又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド及びＡＬＫ７ポリペプチドを含むヘテロ二量体を生成することができる。
例えば、特定のポリペプチド間の相互作用が促進され得る１つの手段は、Ａｒａｔｈｏｏｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，１８３，０７６号及びＣａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されているような空洞内への隆起（ノブ－イントゥホール）相補的領域を操作することによるものである。「突起」は、第１のポリペプチド（例えば、第１の相互作用対）の界面からの小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突起と同一又は類似のサイズの相補的な「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニン又はトレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチド（例えば、第２の相互作用対）の界面に作成されていてもよい。適切に配置され寸法決めされた突起又は空洞が第１又は第２のポリペプチドのいずれかの界面に存在する場合、対応する空洞又は突起をそれぞれ隣接する界面で操作するだけでよい。
中性のｐＨ（７．０）では、アスパラギン酸及びグルタミン酸は負に帯電し、リジン、アルギニン及びヒスチジンは正に帯電する。これらの荷電残基は、ヘテロ二量体形成を促進するために使用することができ、同時にホモ二量体形成を妨げる。魅力的な相互作用は反対の電荷間で起こり、反発的な相互作用は同様の電荷間で起こる。部分的には、本明細書中に開示されるポリペプチド複合体は、ヘテロ多量体形成（例えば、ヘテロ二量体形成）を促進するための引力相互作用を利用し、及び帯電した界面残基の部位特異的突然変異誘発を行うことによってホモ二量体形成（例えば、ホモ二量体形成）を妨げるための反発する相互作用が利用されていてもよい。
例えば、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメイン界面は、ドメイン－ドメイン相互作用に関与する４つのユニークな電荷残基対：Ａｓｐ３５６－Ｌｙｓ４３９’、Ｇｌｕ３５７－Ｌｙｓ３７０’、Ｌｙｓ３９２－Ａｓｐ３９９’及びＡｓｐ３９９－Ｌｙｓ４０９’を含む［第２の鎖における残基番号は（’）によって示される］。ＩｇＧ１ＣＨ３ドメイン中の残基を指定するためにここで使用されるナンバリングスキームは、ＫａｂａｔのＥＵナンバリングスキームに従うことに留意すべきである。ＣＨ３－ＣＨ３ドメイン相互作用に存在する２倍対称性のために、それぞれの固有の相互作用は、構造において２回表される（例えば、Ａｓｐ－３９９－Ｌｙｓ４０９’及びＬｙｓ４０９－Ａｓｐ３９９’）。野生型配列では、Ｋ４０９－Ｄ３９９’は、ヘテロ二量体及びホモ二量体の両方の形成を促進する。第１の鎖の電荷極性（例えば、Ｋ４０９Ｅ；正－負電荷）を切り替える単一の突然変異は、第１の鎖ホモ二量体の形成に好ましくない相互作用をもたらす。好ましくない相互作用は、同じ電荷間に生じる反発相互作用に起因して生じる（負－負；Ｋ４０９Ｅ－Ｄ３９９’及びＤ３９９－Ｋ４０９Ｅ’）。第２の鎖の電荷極性（Ｄ３９９Ｋ’；陰性から陽性）を切り替える同様の突然変異は、第２の鎖ホモ二量体形成に好ましくない相互作用（Ｋ４０９’－Ｄ３９９Ｋ’及びＤ３９９Ｋ－Ｋ４０９’）をもたらす。しかし、同時に、これらの２つの突然変異（Ｋ４０９Ｅ及びＤ３９９Ｋ’）は、ヘテロ二量体形成のための好ましい相互作用（Ｋ４０９Ｅ－Ｄ３９９Ｋ’及びＤ３９９－Ｋ４０９’）をもたらす。
ヘテロ二量体形成及びホモ二量体抑制に対する静電ステアリング効果は、例えばＡｒｇ３５５及びＬｙｓ３６０を含む第２の鎖中の反対に荷電した残基と対になっていてもいなくてもよい追加の電荷残基の突然変異によって更に増強することができる。以下の表は、本明細書に開示されるヘテロ多量体のヘテロ多量体形成を増強するために単独で又は組み合わせて使用することができる可能な電荷変化変異を列挙する。
Figure 2024511315000066
いくつかの実施形態では、本出願の融合ポリペプチド中のＣＨ３－ＣＨ３界面を構成する１又は複数の残基は、相互作用が静電的に好ましくないように荷電アミノ酸で置き換えられる。例えば、界面の正電荷を帯びたアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン又はヒスチジン）は、負電荷を帯びたアミノ酸（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）で置き換えられる。代替的に、又は前述の置換と組み合わせて、界面の負に荷電したアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸で置換される。特定の実施形態では、アミノ酸は、所望の電荷特性を有する天然に存在しないアミノ酸で置き換えられる。負に帯電した残基（Ａｓｐ又はＧｌｕ）をＨｉｓに変異させると、側鎖体積が増加し、立体的な問題を引き起こす可能性があることに留意すべきである。更に、Ｈｉｓプロトン供与体及び受容体形態は、局所的な環境に依存する。これらの問題は、設計戦略とともに考慮されるべきである。界面残基はヒト及びマウスＩｇＧサブクラスにおいて高度に保存されているので、本明細書に開示される静電ステアリング効果は、ヒト及びマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に適用することができる。この戦略は、ＣＨ３ドメイン界面で非荷電残基を荷電残基に修飾することにも拡張することができる。
特定の態様では、本明細書に開示される方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップは、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ又はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）と共有結合又は非共有結合した少なくとも１つのＡＬＫポリペプチド（例えば、ＡＬＫ４又はＡＬＫ７ポリペプチド）を含むヘテロ多量体複合体である。好ましくは、本明細書中に開示されるポリペプチドはヘテロ二量体複合体を形成するが、より高次のヘテロ多量体複合体（ヘテロ多量体）、例えば、限定されないが、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体及び更なるオリゴマー構造も含まれる（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４及びＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ７オリゴマー構造の両方に適用されてもよい図１１～１３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ及び／又はＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、少なくとも１つの多量体化ドメインを含む。本明細書に開示されるポリペプチドは、多量体化ドメインに共有結合又は非共有結合していてもよい。好ましくは、多量体化ドメインは、第１のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド）と第２のポリペプチド（例えば、ＡＬＫ４又はＡＬＫ７ポリペプチド）との間の相互作用を促進してヘテロ多量体形成（例えば、ヘテロ二量体形成）を促進し、ホモ多量体形成（例えば、ホモ二量体形成）が妨害されていてもよく、又はそうでなければ不利にすることにより、所望のヘテロ多量体の収量を増加させる（例えば、図１２を参照されたい）。
部分的には、本開示は、電荷対形成（静電ステアリング）に基づいて相補的であるように操作されたＦｃ配列を使用した非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対形成を提供する。静電相補性を有するＦｃ配列対の一方を、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドに、任意のリンカーを用いて又は用いずに任意に融合して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ、ＡＬＫ４－Ｆｃ又はＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを生成することができる。この一本鎖は、所望の多重鎖構築物（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ－ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ多量体）の生成を促進するために、第１のＦｃ配列に相補的なＦｃ配列と共に選択した細胞で共発現させることができる。静電誘導に基づくこの例では、配列番号１８［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｅ１３４Ｋ／Ｄ１７７Ｋ）］及び配列番号１９［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｋ１７０Ｄ／Ｋ１８７Ｄ）］は、操作されたアミノ酸置換が二重下線で示されている相補的Ｆｃ配列の例であり、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号１８又は配列番号１９のいずれかに融合することができるが、両方に融合することはできない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃ間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃにおける対応する位置でのアミノ酸置換（図７参照）は、以下の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが理解され得る（配列番号１８及び１９）。
Figure 2024511315000067
Figure 2024511315000068
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
部分的には、本開示は、立体的相補性のために操作されたＦｃ配列を使用した非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望のペアリングを提供する。部分的には、本開示は、立体的相補性の一例としてノブス・イントゥ・ホールペアリングを提供する。立体的相補性を有するＦｃ配列対の一方を、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドに、任意のリンカーを用いて又は用いずに任意に融合して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ、ＡＬＫ４－Ｆｃ又はＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを生成することができる。この一本鎖は、所望の多重鎖構築物の生成を促進するために、第１のＦｃ配列に相補的なＦｃ配列と共に選択された細胞で共発現させることができる。この実施例では、ノブ・イントゥ・ホール対合に基づいて、配列番号２０［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｔ１４４Ｙ）］及び配列番号２１［ヒトＧ１Ｆｃ（Ｙ１８５Ｔ）］は、操作されたアミノ酸置換が二重下線で示されている相補的Ｆｃ配列の例であり、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２０又は配列番号２１のいずれかに融合することができるが、両方に融合することはできない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃ間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃにおける対応する位置でのアミノ酸置換（図７参照）は、以下の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが理解され得る（配列番号２０及び２１）。
Figure 2024511315000069
Figure 2024511315000070
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
操作されたジスルフィド結合と組み合わされたノブス・イントゥ・ホールペアリングに基づくＦｃ相補性の例は、配列番号２２［ｈＧ１Ｆｃ（Ｓ１３２Ｃ／Ｔ１４４Ｗ）］及び配列番号２３［ｈＧ１Ｆｃ（Ｙ１２７Ｃ／Ｔ１４４Ｓ／Ｌ１４６Ａ／Ｙ１８５Ｖ）］に開示されている。これらの配列における操作されたアミノ酸置換は二重下線であり、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２２又は配列番号２３のいずれかに融合することができるが、両方に融合することはできない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃ間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃにおける対応する位置でのアミノ酸置換（図７参照）は、以下の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが理解され得る（配列番号２２及び２３）。
Figure 2024511315000071
Figure 2024511315000072
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
部分的には、本開示は、ヒトＩｇＧ及びＩｇＡＣＨ３ドメインの嵌合β鎖セグメントを生成するように操作されたＦｃ配列を使用して、非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望のペアリングを提供する。そのような方法は、ＳＥＥＤｂｏｄｙ融合ポリペプチドの形成を可能にする鎖交換操作されたドメイン（ＳＥＥＤ）ＣＨ３ヘテロ二量体の使用を含む［例えば、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｅｌ ２３：１９５－２０２を参照されたい］。ＳＥＥＤｂｏｄｙ相補性を有するＦｃ配列の対の一方を、構築物の第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに、任意選択のリンカーを用いて又は用いずに任意に融合して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを生成することができる。この一本鎖は、所望の多重鎖構築物の生成を促進するために、第１のＦｃ配列に相補的なＦｃ配列と共に選択された細胞で共発現させることができる。このＳＥＥＤｂｏｄｙ（Ｓｂ）ペアリングに基づく例では、配列番号２４［ｈＧ１Ｆｃ（ＳｂＡＧ）］及び配列番号２５［ｈＧ１Ｆｃ（ＳｂＧＡ）］は、ＩｇＡＦｃからの操作されたアミノ酸置換が二重下線で示されている相補的ＩｇＧＦｃ配列の例であり、構築物の第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又は第２の変異ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２４又は配列番号２５のいずれかに融合することができるが、両方には融合することができない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、ｈＧ１Ｆｃ、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃの対応する位置でのアミノ酸置換（図７参照）は、以下の相補的ＩｇＧ－ＩｇＡ対で使用され得るＦｃモノマーを生成することが理解され得る（配列番号２４及び２５）。
Figure 2024511315000073
Figure 2024511315000074
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
一部において、本開示は、ＦｃＣＨ３ドメインのＣ末端に結合した切断可能なロイシンジッパードメインとの非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望のペアリングを提供する。ロイシンジッパーの付着は、ヘテロ二量体抗体重鎖の優先的集合を引き起こすのに十分である。例えば、Ｗｒａｎｉｋ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７：４３３３１－４３３３９を参照されたい。本明細書に開示されるように、ロイシンジッパー形成鎖に結合した一対のＦｃ配列の一方を、構築物の第１ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又は第２ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに、任意のリンカーを用いて又は用いずに任意に融合して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを生成することができる。この一本鎖は、所望の多重鎖構築物の生成を促進するために、相補的ロイシンジッパー形成鎖に結合したＦｃ配列と共に選択された細胞で共発現させることができる。精製後の細菌エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃによる構築物のタンパク質分解消化は、ロイシンジッパードメインを放出することができ、その構造が天然Ｆｃの構造と同一であるＦｃ構築物をもたらす。ロイシンジッパー対合に基づくこの例では、配列番号２６［ｈＧ１Ｆｃ－Ａｐ１（酸性）］及び配列番号２７［ｈＧ１Ｆｃ－Ｂｐ１（塩基性）］は、操作された相補的ロイシンジッパー配列に下線が引かれた相補的ＩｇＧＦｃ配列の例であり、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド又は第２のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２６又は配列番号２７のいずれかに融合され得るが、両方には融合され得ない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃ間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、任意選択のリンカーを用いて又は用いずに、ｈＧ１Ｆｃ、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃに結合したロイシンジッパー形成配列（図７参照）は、以下の相補的ロイシンジッパー形成対（配列番号２６及び２７）で使用され得るＦｃモノマーを生成することが理解され得る。
Figure 2024511315000075
Figure 2024511315000076
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
一部において、本開示は、所望のヘテロマー種の精製を容易にするＦｃドメイン中の更なる変異と組み合わせた上記の方法による非対称Ｆｃ含有ポリペプチド鎖の所望の対合を提供する。一例では、配列番号２２及び２３に開示されているように、操作されたジスルフィド結合と組み合わされたノブ・イン・ホール対合に基づくＦｃドメインの相補性、並びに一方のＦｃ含有ポリペプチド鎖中の二つの負に荷電したアミノ酸（アスパラギン酸又はグルタミン酸）及び相補的Ｆｃ含有ポリペプチド鎖中の二つの正に荷電したアミノ酸（例えば、アルギニン）の更なる置換（配列番号２８～２９）が使用される。これらの４つのアミノ酸置換は、等電点又は正味の分子電荷の差に基づいて、異種ポリペプチド混合物からの所望のヘテロマー融合ポリペプチドの選択的精製を容易にする。これらの配列における操作されたアミノ酸置換は、以下に二重下線が引かれており、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２８又は配列番号２９のいずれかに融合することができるが、両方に融合することはできない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃ間の高度のアミノ酸配列同一性を考慮すると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃにおける対応する位置でのアミノ酸置換（図７参照）は、以下の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが理解され得る（配列番号２８～２９）。
Figure 2024511315000077
Figure 2024511315000078
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
別の例は、配列番号２２～配列番号２３に開示されているように、操作されたジスルフィド結合と組み合わされたノブス・イントゥ・ホール対合に基づくＦｃドメインの相補性に加えて、一方のＦｃ含有ポリペプチド鎖（配列番号３０）の２１３位におけるヒスチジンからアルギニンへの置換を含む。この置換（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．のナンバリングシステムでＨ４３５Ｒと表記されている）は、タンパク質Ａに対する親和性の違いに基づいて望ましくないホモ二量体からの所望のヘテロ二量体の分離を容易にする。操作されたアミノ酸置換は二重下線で示され、構築物のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号３０又は配列番号２３のいずれかに融合することができるが、両方には融合できない。天然ｈＧ１Ｆｃ、天然ｈＧ２Ｆｃ、天然ｈＧ３Ｆｃ及び天然ｈＧ４Ｆｃの間の高度のアミノ酸配列同一性を考えると、ｈＧ２Ｆｃ、ｈＧ３Ｆｃ又はｈＧ４Ｆｃ（図７参照）における対応する位置でのアミノ酸置換は、配列番号３０（下記）及び配列番号２３の相補的ｈＧ１Ｆｃ対の代わりに使用され得る相補的Ｆｃ対を生成することが理解され得る。
Figure 2024511315000079
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１３８にグルタミン酸、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置２１７にアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、アミノ酸位置１６２にアルギニン、アミノ酸位置１７９にアルギニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドを含む、ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体ポリペプチドに関し、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含み、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１３２にシステイン、アミノ酸位置１４４にトリプトファン、及びアミノ酸位置４３５にアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドＦｃドメインは、アミノ酸位置１２７にシステイン、アミノ酸位置１４４にセリン、アミノ酸位置１４６にアラニン、及びアミノ酸位置１８５にバリンを含む。
特定の実施形態では、本開示は、第１のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及び第２のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むヘテロ多量体に関し、第１のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ｌ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｎ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ、及びＶ９９Ｇのいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ｌ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｎ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ及びＶ９９Ｇからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ｌ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｎ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ、及びＶ９９Ｇのいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ｌ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｎ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ及びＶ９９Ｇからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を促進する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を阻害する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとを含むヘテロ多量体に関し、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の５５に対応するアミノ酸位置にグルタミン酸を含む。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の５５に対応するアミノ酸位置にグルタミン酸を含まない。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の５５に対応するアミノ酸位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ｌ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、及びＤ８０のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ｌ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を促進する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を阻害する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとを含むヘテロ多量体に関し、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にイソロイシン酸を含まない。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、及びＤ８０のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、及びＤ８０Ｒからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、及びＤ８０のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、及びＤ８０Ｒからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を促進する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を阻害する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとを含むヘテロ多量体に関し、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にリジンを含む。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にリジン酸を含まない。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の８２に対応するアミノ酸位置にフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、及びＤ８０のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、及びＤ８０Ｒからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＬ７９、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、及びＤ８０のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、及びＤ８０Ｒからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を促進する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を阻害する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとを含むヘテロ多量体に関し、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応する酸性アミノ酸位置を含む。いくつかの実施形態では、酸性アミノ酸はアスパラギン酸である。いくつかの実施形態では、酸性アミノ酸はグルタミン酸である。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応するアミノ酸位置に酸性酸（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を含まない。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応するアミノ酸位置にロイシンを含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を促進する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又は第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ヘテロ多量体形成を阻害する１又は複数のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとを含むヘテロ多量体に関し、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応する酸性アミノ酸位置を含む。いくつかの実施形態では、酸性アミノ酸はアスパラギン酸である。いくつかの実施形態では、酸性アミノ酸はグルタミン酸である。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応するアミノ酸位置に酸性酸（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を含まない。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２の７９に対応するアミノ酸位置にロイシンを含む。いくつかの実施形態では、第１のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｌ７９Ｐ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のＦ８２、Ａ２４、Ｋ７４、Ｒ６４、Ｐ１２９、Ｐ１３０、Ｅ３７、Ｒ４０、Ｄ５４、Ｒ５６、Ｗ７８、Ｄ８０、及びＦ８２のいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ａ２４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｋ７４Ａ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、Ｅ３７Ａ、Ｒ４０Ａ、Ｄ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ及びＦ８２Ａからなる群から選択される。
特定の態様では、本開示は、１又は複数のＡＬＫ４受容体ポリペプチド（例えば、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、４２２及びそれらのバリアント）並びに１又は複数のＡｃｔＲＩＩＢ受容体ポリペプチド（例えば、配列番号１、２、５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５３、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８、４０９及びそれらのバリアント）を含むヘテロ多量体に関し、その使用（例えば、心不全の処置を必要とする患者における心不全の処置）を含み、本明細書では一般に「ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体」又は「ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体」と呼ばれ、その使用（例えば、心不全の処置を必要とする患者における心不全の処置）を含む。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は可溶性である［例えば、ヘテロ多量体複合体は、ＡＬＫ４受容体の可溶性部分（ドメイン）及びＡｃｔＲＩＩＢ受容体の可溶性部分（ドメイン）を含む］。一般に、ＡＬＫ４及びＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインは、これらの受容体の可溶性部分に対応する。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、ＡＬＫ４受容体の細胞外ドメイン及びＡｃｔＲＩＩＢ受容体の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、及び４２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体複合体は、配列番号８４のアミノ酸２４～３４、２５～３４又は２６～３４のいずれか１つに対応する残基から始まり、配列番号８４の１０１～１２６、１０２～１２６、１０１～１２５、１０１～１２４、１０１～１２１、１１１～１２６、１１１～１２５、１１１～１２４、１２１～１２６、１２１～１２５、１２１～１２４又は１２４～１２６の位置で終わるＡＬＫ４の一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である配列を含むか、本質的にそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号８４に関してアミノ酸３４～１０１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号２、５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５３、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８、及び４０９のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体複合体は、配列番号２のアミノ酸２０～２９、２０～２４、２１～２４、２２～２５、又は２１～２９のいずれか１つに対応する残基で始まり、１０９～１３４、１１９～１３４、１１９～１３３、１２９～１３４、又は１２９～１３３の位置で終わるＡｃｔＲＩＩＢの一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にそれからなるか、それらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。一定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体複合体は、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、配列番号２のＬ７９に対応する位置は酸性アミノ酸ではない（すなわち、天然に存在しないＤ若しくはＥアミノ酸残基又は人工酸性アミノ酸残基）。本開示のＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、例えば、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体及び更に高次のオリゴマー構造を含む。例えば、ＡｃｔＲＩＩ：ＡＬＫ７オリゴマー構造にも適用され得る図１１～１３を参照されたい。ある特定の実施形態では、本開示のヘテロ多量体複合体は、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体である。
一定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド及び少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むヘテロ多量体に関する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドを含むヘテロ多量体（その断片、機能的バリアント及び修飾形態を含む）に関する。好ましくは、本明細書に開示される使用のためのＡＬＫ７ポリペプチド（例えば、ＡＬＫ７ポリペプチドを含むヘテロ多量体及びその使用）は可溶性である（例えば、ＡＬＫ７の細胞外ドメイン）。他の実施形態では、本明細書に開示される使用のためのＡＬＫ７ポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）スーパーファミリーリガンドに結合し、及び／又はその活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達の誘導）を阻害する（拮抗する）。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１２０、１２１又は１２２のアミノ酸２１～２８（例えば、アミノ酸残基２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７及び２８）のいずれか１つで始まり、配列番号１２０、１２１又は１２２のアミノ酸９２～１１３（例えば、アミノ酸残基９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２及び１１３）のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ７ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１２０、１２１又は１２２のアミノ酸２８～９２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ７ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１２０、１２１又は１２２のアミノ酸２１～１１３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ７ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号１２０、１２３、１２４、１２５、１２１、１２６、１２２、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３又は１３４のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＡＬＫ７ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体は、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３又は１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドからなるか、又は本質的になる。
特定の態様では、本開示は、１又は複数のＡＬＫ７受容体ポリペプチド（例えば、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３、１３４及びそのバリアント）並びに１又は複数のＡｃｔＲＩＩＢ受容体ポリペプチド（例えば、配列番号１、２、５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５３、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８、４０９及びそれらのバリアント）を含むヘテロ多量体複合体に関し、これらは本明細書では一般に「ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体」又は「ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体」と呼ばれ、その使用（例えば、心不全の処置を必要とする患者における心不全の処置）を含む。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は可溶性である［例えば、ヘテロ多量体複合体は、ＡＬＫ７受容体の可溶性部分（ドメイン）及びＡｃｔＲＩＩＢ受容体の可溶性部分（ドメイン）を含む］。一般に、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインは、これらの受容体の可溶性部分に対応する。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、ＡＬＫ７受容体の細胞外ドメイン及びＡｃｔＲＩＩＢ受容体の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３及び１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号２、５、６、１２、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５３、２７６、２７８、２７９、３３２、３３３、３３５、３３６、３３８、３３９、３４１、３４２、３４４、３４５、３４７、３４８、３５０、３５１、３５３、３５４、３５６、３５７、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９６、３９８、４０２、４０３、４０６、４０８、及び４０９のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体複合体は、配列番号２のアミノ酸２０～２９、２０～２４、２１～２４、２２～２５、又は２１～２９のいずれか１つに対応する残基で始まり、１０９～１３４、１１９～１３４、１１９～１３３、１２９～１３４、又は１２９～１３３の位置で終わるＡｃｔＲＩＩＢの一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にそれからなるか、それらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む。一定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体複合体は、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含み、配列番号２のＬ７９に対応する位置は酸性アミノ酸ではない（すなわち、天然に存在しないＤ若しくはＥアミノ酸残基又は人工酸性アミノ酸残基）。本開示のＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、例えば、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体及び更に高次のオリゴマー構造を含む。例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４及びＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ７オリゴマー構造の両方に適用することもできる図１１～１３を参照されたい。ある特定の実施形態では、本開示のヘテロ多量体複合体は、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、１又は複数のＡＬＫ７受容体ポリペプチド（例えば、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３、１３４及びそのバリアント）並びに１又は複数のＡｃｔＲＩＩＡ受容体ポリペプチド（例えば、配列番号３６４、３６６、３６７、３６８、３６９、３７８、３８０、３８１、３８４及びそのバリアント）を含むヘテロ多量体複合体に関し、これらは本明細書では一般に「ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ７ヘテロ多量体」又は「ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体」と呼ばれ、その使用（例えば、心不全の処置を必要とする患者における心不全の処置）を含む。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は可溶性である［例えば、ヘテロ多量体複合体は、ＡＬＫ７受容体の可溶性部分（ドメイン）及びＡｃｔＲＩＩＡ受容体の可溶性部分（ドメイン）を含む］。一般に、ＡＬＫ７及びＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインは、これらの受容体の可溶性部分に対応する。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、ＡＬＫ７受容体の細胞外ドメイン及びＡｃｔＲＩＩＡ受容体の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３及び１３４のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ７ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、配列番号３６４、３６６、３６７、３６８、３６９、３７８、３８０、３８１、３８４のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、本開示のヘテロ多量体複合体は、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ二量体である。
特定の態様では、本開示は、１又は複数のＡＬＫ４受容体ポリペプチド（例えば、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、４２２及びそれらのバリアント）並びに１又は複数のＡｃｔＲＩＩＡ受容体ポリペプチド（例えば、配列番号３６４、３６６、３６７、３６８、３６９、３７８、３８０、３８１、３８４及びそのバリアント）を含むヘテロ多量体複合体に関し、これらは本明細書では一般に「ＡｃｔＲＩＩＡ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体」又は「ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体」と呼ばれ、その使用（例えば、心不全の処置を必要とする患者における心不全の処置）を含む。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は可溶性である［例えば、ヘテロ多量体複合体は、ＡＬＫ４受容体の可溶性部分（ドメイン）及びＡｃｔＲＩＩＡ受容体の可溶性部分（ドメイン）を含む］。一般に、ＡＬＫ４及びＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインは、これらの受容体の可溶性部分に対応する。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、ＡＬＫ４受容体の細胞外ドメイン及びＡｃｔＲＩＩＡ受容体の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の活性（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１、及び４２２のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体複合体は、配列番号８４のアミノ酸２４～３４、２５～３４又は２６～３４のいずれか１つに対応する残基から始まり、配列番号８４の１０１～１２６、１０２～１２６、１０１～１２５、１０１～１２４、１０１～１２１、１１１～１２６、１１１～１２５、１１１～１２４、１２１～１２６、１２１～１２５、１２１～１２４又は１２４～１２６の位置で終わるＡＬＫ４の一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である配列を含むか、本質的にそれからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号８４に関してアミノ酸３４～１０１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡＬＫ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、配列番号３６４、３６６、３６７、３６８、３６９、３７８、３８０、３８１、３８４のいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である配列を含むか、本質的にこれからなるか、これらからなる少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、本開示のヘテロ多量体複合体は、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体である。
特定の実施形態では、本開示は、第１のＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチド及び第２のＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドを含むヘテロ多量体に関し、第２のバリアントＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、第１のポリペプチドに存在するものとは異なる。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃヘテロ多量体はヘテロ二量体である。
ＩＩ．リンカー
本開示は、例えば、異種部分（例えば、Ｆｃ部分）に融合されたものを含む、本明細書に開示される追加のポリペプチドに融合され得るＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップポリペプチド（例えば、バリアントを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）を提供する。これらの実施形態では、ポリペプチド部分（例えば、バリアントを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）は、リンカーによって追加のポリペプチド（例えば、Ｆｃドメイン等の異種部分）に連結される。いくつかの実施形態では、リンカーはグリシン及びセリンリッチリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン（例えば、２～１０、２～５、２～４、２～３個のグリシン残基）又はグリシン及びプロリン残基が豊富であり得、例えば、トレオニン／セリン及びグリシンの単一配列又はトレオニン／セリン及び／若しくはグリシンの反復配列、例えばＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、又はＳＧＧＧ（配列番号２６６）シングレット又はリピートを含み得る。限定されないが、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ及びＡｌａ等の他の近中性アミノ酸もまた、リンカー配列に使用され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｇｌｙ及びＳｅｒを含有するアミノ酸配列の様々な置換を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸長を超える。更なる実施形態では、リンカーは、少なくとも１２、１５、２０、２１、２５、３０、３５、４０、４５又は５０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、４０、３５、３０、２５、２２又は２０アミノ酸未満である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２５、１０～２１、１０～１５、１０、１５～２５、１７～２２、２０又は２１アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ（ＧＧＧＧＳ）（配列番号２６７）又はその反復（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎ≧２である。特定の実施形態では、ｎ≧３、又はｎ＝３～１０である。いくつかの実施形態では、ｎ≧４、又はｎ＝４～１０である。いくつかの実施形態では、ｎは、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカーにおいて４以下である。いくつかの実施形態では、ｎ＝４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～８、５～７又は５～６である。いくつかの実施形態では、ｎ＝３、４、５、６又は７である。特定の実施形態では、ｎ＝４である。いくつかの実施形態では、（ＧＧＧＧＳ）ｎ配列を含むリンカーは、Ｎ末端トレオニンも含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、以下のいずれか１つである。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６８）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６９）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７０）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７１）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７２）
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７３）ｏｒ
ＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７４）．
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＴＧＧＧＰＫＳＣＤＫ（配列番号２７５）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｎ末端トレオニンを欠く配列番号２６８～２７５のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２７３又は２７４のアミノ酸配列を含まない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチン、それらのバリアントを含むポリペプチド）ポリペプチドは、リンカーによって部分に融合されたポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、部分は、ポリペプチドの安定性を増加させる。いくつかの実施形態では、その部分は、Ｆｃドメインモノマー、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換を有するＦｃドメイン（例えば、二量体化を減少させる１又は複数の置換）、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン及びヒト血清アルブミンからなる群から選択される。適切なペプチドリンカーは当技術分野で公知であり、例えば、グリシン、アラニン、及びセリン等の柔軟なアミノ酸残基を含有するペプチドリンカーが挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＡ、ＧＳ、ＧＧ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＡ（配列番号２８０）、ＧＧＧＳ（配列番号２８１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、ＧＧＧＧＡ（配列番号２８２）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧＧＧ（配列番号２８３）、ＧＧＡＧ（配列番号２８４）、ＧＧＳＧ（配列番号２８５）、ＡＧＧＧ（配列番号２８６）、又はＳＧＧＧ（配列番号２６６）のモチーフ、例えば複数又は反復モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＡ又はＧＳのモチーフ、例えばＧＡ、ＧＳ、ＧＡＧＡ（配列番号２８７）、ＧＳＧＳ（配列番号２８８）、ＧＡＧＡＧＡ（配列番号２８９）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号２９０）、ＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号２９１）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２９２）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号２９３）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２９４）、ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ（配列番号２９５）、及びＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号２９６）を含む２～１２個のアミノ酸を含有し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＡ又はＧＧＳのモチーフ、例えばＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡＧＧＡ（配列番号２９７）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号２９８）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号２９９）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号３００）、ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡ（配列番号３０１）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号３０２）を含む３～１２個のアミノ酸を含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＡＧ（配列番号３０３）、ＧＧＳＧ（配列番号３０４）、ＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号３０５）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号３０６）、ＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＧ（配列番号３０７）、及びＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号３０８）のモチーフを含む４～１２個のアミノ酸を含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＡ（配列番号３０９）又はＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、例えばＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡ（配列番号３１０）及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３１１）のモチーフを含むことができる。いくつかの実施形態では、部分（例えば、Ｆｃドメインモノマー、野生型Ｆｃドメイン、アミノ酸置換を有するＦｃドメイン（例えば、二量体化を減少させる１又は複数の置換）、アルブミン結合ペプチド、フィブロネクチンドメイン、又はヒト血清アルブミン）とポリペプチド（例えば、バリアントを含む、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、及びフォリスタチンポリペプチド）との間のアミノ酸リンカーは、ＧＧＧ、ＧＧＧＡ（配列番号２８０）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、ＧＧＧＡＧ（配列番号３１２）、ＧＧＧＡＧＧ（配列番号３１３）、又はＧＧＧＡＧＧＧ（配列番号３１４）であり得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン、アラニン、及びセリン以外のアミノ酸、例えばＡＡＡＬ（配列番号３１５）、ＡＡＡＫ（配列番号３１６）、ＡＡＡＲ（配列番号３１７）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号３１８）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号３１９）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号３２０）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号３２１）、ＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号３２２）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号３２３）、ＲＳＩＡＴ（配列番号３２４）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号３２５）、ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号３２６）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号３２７）、又はＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号３２８）も含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号３２９）のモチーフ、例えば複数又は反復モチーフを含有することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、（ＸＰ）ｎ等のプラリンリッチ配列のモチーフ、例えば複数又は反復モチーフを含むことができ、Ｘは任意のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｋ、又はＥ）であり得、ｎは１～５であり、ＰＡＰＡＰ（配列番号３３０）である。
ペプチドリンカー及び使用されるアミノ酸の長さは、関与する２つのポリペプチド及び最終ポリペプチド融合ポリペプチドに所望される柔軟性の程度に応じて調整することができる。リンカーの長さは、適切なポリペプチド折り畳みを確実にし、凝集体形成を回避するように調整することができる。
Ｈ）ポリペプチドバリアント及び修飾
部分的には、本開示は、バリアントポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）であるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストに関する。本開示のバリアントポリペプチドには、例えば、１又は複数のアミノ酸置換、欠失、付加又はそれらの組み合わせによって産生されるバリアントポリペプチド、並びに１又は複数の翻訳後修飾（例えば、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化が挙げられるが、これらに限定されない）のバリアントが含まれた。１又は複数のアミノ酸修飾を含むバリアントポリペプチドを作製するための方法、特に１又は複数の所望の特性を有するバリアントポリペプチドを作製するための方法は、本明細書に記載されているか、又は当技術分野で周知である。同様に、バリアントポリペプチドが１又は複数の所望の特性（例えば、リガンド結合及び／又はアンタゴニスト活性の変化）を保持又は発現しているかどうかを決定するための様々な方法が本明細書に記載されているか、又は当技術分野で周知である。これらの方法は、本明細書に記載されるように、バリアントポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を生成するため、並びにそれらの活性（又は他の特性）を検証するために使用することができる。
上記のように、本開示は、天然に存在するポリペプチドと特定の程度の配列同一性又は類似性を共有するポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を提供する。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントを決定するために、最適な比較目的のために配列を整列させる（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非相同配列を無視することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置のアミノ酸残基を比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基によって占められている場合、分子はその位置で同一である（本明細書で使用される場合、アミノ酸「アイデンティティ」はアミノ酸「相同性」と等価である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
配列の比較並びに２つの配列間の同一性及び類似性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）。
一実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定される。特定の実施形態では、以下のパラメータがＧＡＰプログラムで使用される：Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ重み及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重み。更に別の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２（１）：３８７（１９８４））（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して決定される。例示的なパラメータには、ＮＷＳｇａｐｄｎａを使用することが含まれる。ＣＭＰマトリックス及び４０、５０、６０、７０、又は８０のギャップ重み及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重み。別段の指定がない限り、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックス、１０のＧＡＰ重み及び３の長さ重みを使用するＧＡＰプログラムを使用して決定されるべきであり、そのようなアルゴリズムが所望の同一性パーセントを計算することができない場合、本明細書に開示される適切な代替物が選択されるべきである。
別の実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｙｅｒｓ 及び Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９））を使用して決定される。
２つのアミノ酸配列間の最良の全体的なアラインメントを決定するための別の実施形態は、Ｂｒｕｔｌａｇ ｅｔ ａｌ．（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．，６：２３７－２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを使用して決定することができる。配列アラインメントでは、クエリ及び対象配列は両方ともアミノ酸配列である。当該全体的配列アラインメントの結果は、同一性パーセントに関して提示される。一実施形態では、アミノ酸配列同一性は、Ｂｒｕｔｌａｇ ｅｔ ａｌ．（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．，６：２３７－２４５（１９９０））のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを使用して実施される。特定の実施形態では、アミノ酸アラインメントの同一性パーセント及び類似性パーセントを計算するために用いられるパラメータは、Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ１５０、ｋ－ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５及びＧａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ＝０．０５を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効性又は安定性（例えば、貯蔵寿命及びインビボでのタンパク質分解に対する耐性）を増強する等の目的のために、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の構造を修飾することによって機能的バリアントポリペプチドを作製することを企図している。バリアントは、アミノ酸置換、欠失、付加、又はそれらの組み合わせによって産生され得る。例えば、ロイシンのイソロイシン若しくはバリンによる単離された置換、アスパラギン酸のグルタミン酸による置換、トレオニンのセリンによる置換、又はアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸（例えば、保存的変異）による同様の置換は、得られる分子の生物学的活性に大きな影響を及ぼさないと予想することが合理的である。保存的置換は、それらの側鎖に関連するアミノ酸のファミリー内で起こる置換である。本開示のポリペプチドのアミノ酸配列の変化が機能的ホモログをもたらすかどうかは、野生型ポリペプチド、又は例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６及びＢＭＰ１０を含む１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合するのと同様の様式で、細胞における応答を生成するためにバリアントポリペプチドの能力を評価することによって容易に決定することができる。
一定の実施形態では、本開示は、ポリペプチドのグリコシル化を変化させるためのポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の特異的突然変異を企図する。そのような突然変異は、Ｏ結合型又はＮ結合型グリコシル化部位等の１又は複数のグリコシル化部位を導入又は排除するように選択され得る。アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は、一般に、適切な細胞グリコシル化酵素によって特異的に認識されるトリペプチド配列、アスパラギン－Ｘ－トレオニン又はアスパラギン－Ｘ－セリン（「Ｘ」は任意のアミノ酸である）を含む。変化はまた、ポリペプチドの配列（Ｏ結合型グリコシル化部位について）への１又は複数のセリン又はトレオニン残基の付加又は置換によって行われ得る。グリコシル化認識部位の第１又は第３のアミノ酸位置の一方又は両方における様々なアミノ酸置換又は欠失（及び／又は第２の位置におけるアミノ酸欠失）は、修飾されたトリペプチド配列において非グリコシル化をもたらす。ポリペプチド上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的カップリングによるものである。使用されるカップリングモードに応じて、（１又は複数の）糖は、（ａ）アルギニン及びヒスチジン；（ｂ）遊離カルボキシル基；（ｃ）システイン等の遊離スルフヒドリル基；（ｄ）セリン、トレオニン又はヒドロキシプロリン等の遊離ヒドロキシル基；（ｅ）例えばフェニルアラニン、チロシン又はトリプトファンの芳香族残基；又は（ｆ）グルタミンのアミド基に結合され得る。ポリペプチド上に存在する１又は複数の炭水化物部分の除去は、化学的及び／又は酵素的に達成され得る。化学的脱グリコシル化は、例えば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸又は等価な化合物へのポリペプチドの曝露を含み得る。この処理は、アミノ酸配列を無傷のままにしながら、連結糖（Ｎ－アセチルグルコサミン又はＮ－アセチルガラクトサミン）を除くほとんど又は全ての糖の切断をもたらす。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．［Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．（１９８７）１３８：３５０］によって記載されているような様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用によって達成することができる。ポリペプチドの配列は、哺乳動物、酵母、昆虫、及び植物細胞は全て、ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入し得るので、使用される発現系の種類に応じて、必要に応じて調整され得る。一般に、ヒトで使用するための本開示のポリペプチドは、適切なグリコシル化を提供する哺乳動物細胞株、例えばＨＥＫ２９３又はＣＨＯ細胞株で発現され得るが、他の哺乳動物発現細胞株も同様に有用であると予想される。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、グリコシル化されており、ＣＨＯ細胞中のポリペプチドから得ることができるグリコシル化パターンを有する。
本開示は更に、変異体、特にポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）のコンビナトリアル変異体のセット並びにトランケーション変異体を作製する方法を企図する。コンビナトリアル変異体のプールは、機能的に活性な（例えばＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド結合）配列を同定するのに特に有用である。そのようなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、変化した薬物動態又は変化したリガンド結合等の変化した特性を有するポリペプチドバリアントを生成することであり得る。様々なスクリーニングアッセイを以下に提供し、そのようなアッセイを使用してバリアントを評価することができる。例えば、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）バリアント、ホモ多量体、及びそれを含むヘテロ多量体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に結合する能力、ＡｃｔＲＩＩ及び／又はＡＬＫ４ポリペプチドへのＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドの結合を防ぐ能力、並びにそのヘテロ多量体のホモ多量体、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドによって引き起こされるシグナル伝達を妨害する能力についてスクリーニングされ得る。
そのホモ多量体及びヘテロ多量体、又はそのバリアントを含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の活性も、細胞ベース又はインビボアッセイで試験することができる。例えば、心不全の病因に関与する遺伝子の発現に対する、そのホモ多量体及びヘテロ多量体、又はそのバリアントを含むポリペプチドの効果を評価した。これは、必要に応じて、１又は複数の組換えリガンドタンパク質（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）の存在下で行われてもよく、細胞は、ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）ｒ、及び場合によりＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドを産生するようにトランスフェクトされてもよい。同様に、そのホモ多量体及びヘテロ多量体、又はそのバリアントを含むポリペプチドをマウス又は他の動物に投与することができ、心不全の病因に対する影響を、当技術分野で認識されている方法を使用して評価することができる。同様に、ポリペプチド（そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含む）又はそのバリアントの活性を、例えば、本明細書に記載のアッセイ及び当技術分野の一般知識のアッセイによって、これらの細胞の成長に対する任意の効果について、血球前駆細胞において試験することができる。ＳＭＡＤ応答性レポーター遺伝子が、下流のシグナル伝達に対する影響をモニターするためにそのような細胞株において使用される場合がある。
ある特定の態様において、本開示のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、そのヘテロ多量体又はホモ多量体を含めて、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体又はそのホモ多量体を含むポリペプチドは、少なくとも１ｘ１０－７ＭのＫＤで１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する。いくつかの実施形態では、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ１０からなる群から選択される。
特定の態様では、本開示の、そのヘテロ多量体又はホモ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ファミリーリガンドを阻害する。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体又はそのホモ多量体を含むポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドのシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体又はそのホモ多量体を含むポリペプチドは、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドのＳｍａｄシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体又はそのホモ多量体を含むポリペプチドは、細胞ベースのアッセイにおいて１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドのシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示のヘテロ多量体又はそのホモ多量体を含むポリペプチドは、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ１０からなる群から選択される１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドを阻害する。
そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含む、参照ポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）と比較して増加した選択性又は一般に増加した効力を有する組合せ由来バリアントを作製することができる。そのようなバリアントは、組換えＤＮＡ構築物から発現される場合、遺伝子治療プロトコルに使用することができる。同様に、突然変異誘発は、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含む、対応する未修飾ポリペプチドとは劇的に異なる細胞内半減期を有するバリアントを生じ得る。例えば、変化したタンパク質は、未修飾ポリペプチドの破壊又は他の不活性化をもたらすタンパク質分解又は他の細胞プロセスに対して、より安定又はより不安定にすることができる。そのようなバリアント、及びそれらをコードする遺伝子は、ポリペプチドの半減期を調節することによってポリペプチド複合体レベルを変化させるために利用することができる。例えば、短い半減期は、より一過性の生物学的効果を生じさせ得、誘導性発現系の一部である場合、細胞内の組換えポリペプチド複合体レベルのより厳密な制御を可能にし得る。Ｆｃ融合タンパク質では、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチドの半減期を変化させるために、リンカー（存在する場合）及び／又はＦｃ部分に変異を作製することができる。
コンビナトリアルライブラリーは、それぞれがそのホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の少なくとも一部を含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーによって産生され得る。例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、潜在的なＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンをコードするヌクレオチド配列の縮重セットが個々のポリペプチドとして、あるいはより大きな融合タンパク質（例えば、ファージディスプレイの場合）のセットとして発現可能であるように、遺伝子配列に酵素的に連結することができる。
潜在的なホモログのライブラリーを縮重オリゴヌクレオチド配列から作製することができる多くの方法がある。縮重遺伝子配列の化学合成は、自動ＤＮＡ合成装置で行うことができ、次いで、合成遺伝子を発現のための適切なベクターに連結することができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は当技術分野で周知である［Ｎａｒａｎｇ，ＳＡ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｐｒｏｃ．３ｒｄ Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｓｙｍｐｏｓ．Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｅｄ．ＡＧ Ｗａｌｔｏｎ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ｐｐ２７３－２８９；Ｉｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；ａｎｄ Ｉｋｅ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１１：４７７］。そのような技術は、他のタンパク質の指向性進化において使用されてきた［Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６－３９０；Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：２４２９－２４３３；Ｄｅｖｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４－４０６；Ｃｗｉｒｌａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：６３７８－６３８２；並びに米国特許第５，２２３，４０９号、第５，１９８，３４６号、及び第５，０９６，８１５号］。
あるいは、他の形態の突然変異誘発を利用して、コンビナトリアルライブラリーを生成することができる。例えば、本開示のホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発［Ｒｕｆ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：１５６５－１５７２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３０９５－３０９９；Ｂａｌｉｎｔ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｇｅｎｅ １３７：１０９－１１８；Ｇｒｏｄｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１８：５９７－６０１；Ｎａｇａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２８８８－２８９２；Ｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０８３２－１０８３８；ａｎｄ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５］を用いたスクリーニング、リンカースキャニング突然変異誘発［Ｇｕｓｔｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９３：６５３－６６０；ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２：２６４４－２６５２；ＭｃＫｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３１６］、飽和突然変異誘発［Ｍｅｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：６１３］；ＰＣＲ突然変異誘発［Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｅｔｈｏｄ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １：１１－１９］；又は、化学的突然変異誘発を含むランダム突然変異誘発［Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａ Ｓｈｏｒｔ Ｃｏｕｒｓｅ ｉｎ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ７：３２－３４］を使用するスクリーニングによってライブラリーから生成及び単離することができる。特にコンビナトリアル設定におけるリンカースキャニング突然変異誘発は、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含む切断型（生物活性）形態のポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を同定するための魅力的な方法である。
点突然変異及びトランケーションによって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするための、そして更に言えば、特定の特性を有する遺伝子産物についてｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための広範囲の技術が当技術分野で公知である。そのような技術は、一般に、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）のコンビナトリアル突然変異誘発によって生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに適合可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための最も広く使用されている技術は、典型的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニングし、適切な細胞を得られたベクターのライブラリーで形質転換し、所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的容易な単離を容易にする条件下でコンビナトリアル遺伝子を発現させることを含む。好ましいアッセイには、リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）結合アッセイ及び／又はリガンド媒介性細胞シグナル伝達アッセイが含まれる。
当業者によって認識されるように、本明細書中に記載されるほとんどの記載された突然変異、改変体又は改変は、核酸レベルで、又はいくつかの場合には翻訳後修飾又は化学合成によって行われ得る。そのような技術は当技術分野で周知であり、そのいくつかは本明細書に記載されている。部分的には、本開示は、本明細書に記載される方法及び使用の範囲内で他のバリアントポリペプチドを生成及び使用するための指針として使用することができる、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の機能的に活性な部分（断片）及びバリアントを同定する。
一定の実施形態では、本開示のホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の機能的に活性な断片は、本明細書に開示されるポリペプチドをコードする核酸の対応する断片から組換え生産されたポリペプチドをスクリーニングすることによって得ることができる。更に、断片は、従来のＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相ｆ－Ｍｏｃ又はｔ－Ｂｏｃ化学等の当技術分野で公知の技術を使用して化学的に合成することができる。断片は、ＡｃｔＲＩＩ及び／又はＡＬＫ４受容体及び／又は１又は複数のリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）のアンタゴニスト（阻害剤）として機能することができるペプチジル断片を同定するために（組換え又は化学合成によって）産生され、試験され得る。
一定の実施形態では、本開示のホモ多量体及びヘテロ多量体又はそのバリアントを含むポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、ポリペプチド中に天然に存在する任意のものに加えて、翻訳後修飾を更に含み得る。そのような修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化が含まれるが、これらに限定されない。結果として、そのホモ多量体及びヘテロ多量体を含むポリペプチドは、ポリエチレングリコール、脂質、多糖又は単糖、及びホスファート等の非アミノ酸要素を含み得る。ポリペプチドの機能性に対するそのような非アミノ酸要素の効果は、他のポリペプチドバリアントについて本明細書に記載されるように試験され得る。本開示のポリペプチドが、ポリペプチドの新生形態を切断することによって細胞内で産生される場合、翻訳後プロセシングもまた、タンパク質の正しい折り畳み及び／又は機能にとって重要であり得る。異なる細胞（例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、ＮＩＨ－３Ｔ３又はＨＥＫ２９３）は、そのような翻訳後活性のための特異的な細胞機構及び特徴的な機構を有し、ポリペプチドの正しい修飾及びプロセシングを確実にするように選択され得る。
Ｉ）核酸及び製造方法
特定の態様では、本開示は、例えばＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、若しくはＡＬＫ７ポリペプチド（例えば、可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、又はＡＬＫ７ポリペプチド）、又はフォリスタチンポリペプチド、並びに本明細書に開示されるバリアントのいずれかを含む、本明細書に開示されるポリペプチドのいずれかをコードする単離された及び／又は組換え核酸を提供する。例えば、配列番号４は天然に存在するＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチドをコードし、配列番号３は可溶性ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする。対象核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得る。そのような核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子であり得る。これらの核酸は、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、若しくはＡＬＫ７ポリペプチドを作製する方法で、又は直接治療薬（例えば、遺伝子治療アプローチにおいて）として使用され得る。
特定の態様では、本開示は、本明細書に記載のＡｃｔＲＩＩＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又は（１又は複数の）フォリスタチンポリペプチドの１又は複数のコード配列を含む単離及び／又は組換え核酸に関する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３、及び４２４のいずれか１つに対応する核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸に関する。いくつかの実施形態では、本開示の単離及び／又は組換えポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載のコード配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含む（例えば、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３及び４２４のいずれか１つに対応する核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である核酸）。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の単離された核酸及び／又は組換え核酸（例えば、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３及び４２４のいずれか１つに対応する核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である核酸）を含むベクターに関する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の単離された及び／又は組換えポリヌクレオチド配列（例えば、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３及び４２４のいずれか１つに対応する核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である核酸）を含む細胞に関する。いくつかの実施形態では、細胞はＣＨＯ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はＣＯＳ細胞である。
一定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）、ＡＬＫ４又はＡＬＫ７ポリペプチドをコードする核酸は、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３及び４２４のいずれか１つのバリアントである核酸を含むと理解される。バリアントヌクレオチド配列は、対立遺伝子バリアントを含む１又は複数のヌクレオチド置換、付加、又は欠失によって異なる配列を含み、したがって、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３、及び４２４のいずれか１つで指定されたヌクレオチド配列とは異なるコード配列を含む。
一定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）、ＡＬＫ４、又はＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号３、４、１０、３２、３５、３８、４１、４４、４７、２２１、２２２、２２３、２２４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４３、２４８、２５０、２５１、２５２、２５５、２７７、３３１、３３４、３３７、３４０、３４３、３４６、３４９、３５２、３５５、３６９、３７０、３８２、３９７、４０７、４２３、及び４２４のいずれか１つと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号１０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号４１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号４４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号４７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号２７７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３３４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３３７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３４３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３４６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３４９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３５５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３８２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３９７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号４０７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３６９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のバリアントＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド（又はそのホモ多量体若しくはヘテロ多量体）は、配列番号３７０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号２２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号２２２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号２２３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号２２４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号４２３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４ポリペプチドは、配列番号４２４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２３９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７ポリペプチドは、配列番号２４０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２４８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。特定の実施形態では、本開示のＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドは、配列番号２５５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である単離された及び／又は組換え核酸配列によってコードされる。
特定の態様では、バリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする対象核酸は、配列番号３のバリアントである核酸を含むと更に理解される。バリアントヌクレオチド配列は、対立遺伝子バリアント等の１又は複数のヌクレオチド置換、付加又は欠失によって異なる配列を含み、したがって、配列番号４で指定されたコード配列のヌクレオチド配列とは異なるコード配列を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である単離された核酸配列又は組換え核酸配列を提供する。当業者は、配列番号３に相補的な核酸配列、及び配列番号３のバリアントも本開示の範囲内であることを理解するであろう。更なる実施形態では、本開示の核酸配列は、単離され、組換えされ、及び／又は異種ヌクレオチド配列と融合され得るか、又はＤＮＡライブラリー中にあり得る。
他の実施形態では、本開示の核酸はまた、高度にストリンジェントな条件下で、本開示のホモマー若しくはヘテロマー形態のＡｃｔＲＩＩＢ若しくはＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡＬＫ４若しくはＡＬＫ７ポリペプチド、又は本開示のフォリスタチンポリペプチド、補体配列若しくはその断片をコードする核酸にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。上述のように、当業者は、ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変えることができることを容易に理解するであろう。当業者は、ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変えることができることを容易に理解するであろう。例えば、約４５℃で６．０ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）でハイブリダイゼーションを行った後、５０℃で２．０ｘＳＳＣの洗浄を行うことができる。例えば、洗浄工程における塩濃度は、５０℃で約２．０ｘＳＳＣの低ストリンジェンシーから５０℃で約０．２ｘＳＳＣの高ストリンジェンシーから選択することができる。更に、洗浄工程の温度は、室温の約２２℃の低ストリンジェンシー条件から約６５℃の高ストリンジェンシー条件に上昇させることができる。温度及び塩の両方を変化させてもよく、又は他の変数を変化させながら温度又は塩濃度を一定に保持してもよい。一実施形態では、本開示は、室温で６ｘＳＳＣの低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし、続いて室温で２ｘＳＳＣで洗浄する核酸を提供する。
遺伝暗号の縮重のために本開示に記載の核酸とは異なる単離された核酸も本開示の範囲内である。例えば、多数のアミノ酸は、２つ以上のトリプレットによって指定される。同じアミノ酸又は同義語（例えば、ＣＡＵ及びＣＡＣはヒスチジンの同義語である）を指定するコドンは、ポリペプチドのアミノ酸配列に影響を及ぼさない「サイレント」突然変異をもたらし得る。しかしながら、対象ポリペプチドのアミノ酸配列の変化をもたらすＤＮＡ配列多型が哺乳動物細胞の間に存在することが予想される。当業者は、特定のポリペプチドをコードする核酸の１又は複数のヌクレオチドにおけるこれらの変異（ヌクレオチドの約３～５％まで）が、天然の対立遺伝子変異に起因して所与の種の個体間に存在し得ることを理解するであろう。そのようなヌクレオチド変異及び結果として生じるアミノ酸多型のいずれか及び全ては、本開示の範囲内である。
ある特定の実施形態では、本開示の組換え核酸は、発現構築物中の１つ又はそれを超える調節ヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。調節ヌクレオチド配列は、一般に、発現に使用される宿主細胞に適している。様々な宿主細胞について、多数の種類の適切な発現ベクター及び適切な調節配列が当技術分野で公知である。典型的には、当該１又は複数の調節ヌクレオチド配列は、プロモーター配列、リーダー又はシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列、並びにエンハンサー又は活性化因子配列を含み得るが、これらに限定されない。当技術分野で公知の構成的プロモーター又は誘導性プロモーターが本開示によって企図される。プロモーターは、天然に存在するプロモーター、又は２つ以上のプロモーターの要素を組み合わせるハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。発現構築物は、プラスミド等のエピソーム上の細胞に存在してもよく、又は発現構築物は染色体に挿入されてもよい。一実施形態では、発現ベクターは、形質転換宿主細胞の選択を可能にする選択マーカー遺伝子を含む。選択マーカー遺伝子は当技術分野で周知であり、使用される宿主細胞によって異なる。
特定の態様では、主題の核酸は、少なくとも１つの調節配列に作動可能に連結された、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターで提供される。調節配列は当技術分野で認識されており、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の発現を指示するように選択される。したがって、調節配列という用語は、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメントを含む。例示的な調節配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）に記載される。例えば、ＤＮＡ配列に作動可能に連結された場合にＤＮＡ配列の発現を制御する多種多様な発現制御配列のいずれかをこれらのベクターにおいて使用して、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）をコードするＤＮＡ配列を発現させることができる。そのような有用な発現制御配列には、例えば、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルス又はサイトメガロウイルス前初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣ又はＴＲＣ系、発現がＴ７ ＲＮＡポリメラーゼによって指示されるＴ７プロモーター、ファージラムダの主要なオペレーター及びプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素のプロモーター、酸性ホスファターゼのプロモーター、例えば、Ｐｈｏ５、酵母α接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系のポリヘドロンプロモーター、及び原核細胞又は真核細胞又はそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御することが知られている他の配列、並びにそれらの様々な組み合わせが含まれる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択及び／又は発現されることが望まれるポリペプチドの種類等の要因に依存し得ることを理解されるべきである。更に、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び抗生物質マーカー等のベクターによってコードされる任意の他のポリペプチドの発現も考慮されるべきである。
本開示の組換え核酸は、クローン化遺伝子又はその一部を、原核細胞、真核細胞（酵母、鳥類、昆虫又は哺乳動物）又はその両方での発現に適したベクターに連結することによって産生することができる。組換えバリアントＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを産生するための発現ビヒクルには、プラスミド及び他のベクターが含まれる。例えば、適切なベクターには、大腸菌等の原核細胞での発現のためのｐＢＲ３２２由来プラスミド、ｐＥＭＢＬ由来プラスミド、ｐＥＸ由来プラスミド、ｐＢＴａｃ由来プラスミド及びｐＵＣ由来プラスミドのタイプのプラスミドが含まれる。
一部の哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの増殖を促進するための原核生物配列、及び真核細胞において発現される１又は複数の真核生物転写単位の両方を含有する。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ７、ｐｋｏ－ｎｅｏ及びｐＨｙｇ由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに適した哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのいくつかは、原核細胞及び真核細胞の両方における複製及び薬物耐性選択を促進するために、ｐＢＲ３２２等の細菌プラスミド由来の配列で改変される。あるいは、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ－１）又はエプスタイン・バー・ウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来及びｐ２０５）等のウイルスの誘導体を、真核細胞におけるポリペプチドの一過性発現のために使用することができる。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、遺伝子治療送達系の説明において以下に見出すことができる。プラスミドの調製及び宿主生物の形質転換に使用される様々な方法は、当技術分野で周知である。原核細胞及び真核細胞の両方のための他の適切な発現系、並びに一般的な組換え手順については、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，ｅｄ．ｂｙ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）Ｃｈａｐｔｅｒｓ １６ ａｎｄ １７を参照されたい。いくつかの例では、バキュロウイルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましい場合がある。そのようなバキュロウイルス発現系の例としては、ｐＶＬ由来ベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３及びｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来ベクター（ｐＡｃＵＷ１等）、及びｐＢｌｕｅＢａｃ由来ベクター（ｐＢｌｕｅＢａｃ ＩＩＩを含有するβ－ｇａｌ等）が挙げられる。
１つの実施形態では、ベクター、例えば、Ｐｃｍｖ－Ｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．）及びｐＣＩ－ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃ．）等が、ＣＨＯ細胞における本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の産生のために設計されるであろう。明らかなように、対象遺伝子構築物は、培養で増殖させた細胞において本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の発現を引き起こすために、例えば精製のための１又は複数の融合ポリペプチドを含むポリペプチドを産生するために使用することができる。
特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）並びにそれを含むホモ多量体及びヘテロ多量体を作製する方法に関する。そのような方法は、本明細書に開示される核酸のいずれかを適切な細胞（例えば、ＣＨＯ細胞又はＣＯＳ細胞）で発現させることを含み得る。そのような方法は、ａ）本開示の可溶性ポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の発現に適した条件下で細胞を培養することを含み得、当該細胞は、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の発現構築物を含む。いくつかの実施形態では、方法は、本開示の発現ポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を回収することを更に含む。本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、細胞培養物からタンパク質を得るための周知の技術のいずれかを使用して、粗、部分精製又は高度に精製された画分として回収することができる。
本開示はまた、本開示の１又は複数のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）のコード配列を含む組換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞に関する。宿主細胞は、任意の原核細胞又は真核細胞であり得る。例えば、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、大腸菌等の細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系の使用）、酵母又は哺乳動物細胞で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
したがって、本開示は更に、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を産生する方法に関する。例えば、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）をコードする発現ベクターでトランスフェクトした宿主細胞を、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の発現が起こることを可能にする適切な条件下で培養することができる。本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、細胞とポリペプチドを含有する培地との混合物から分泌及び単離され得る。あるいは、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を細胞質又は膜画分に保持し、細胞を回収し、溶解し、タンパク質を単離してもよい。細胞培養物は、宿主細胞、培地及び他の副生成物を含む。細胞培養に適した培地は、当技術分野で周知である。本開示の主題ポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、及び本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の特定のエピトープに特異的な抗体による免疫親和性精製を含む、ポリペプチドを精製するための当技術分野で公知の技術を使用して、細胞培養培地、宿主細胞、又はその両方から単離することができる。一実施形態では、本開示のポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）は、精製を容易にするドメインを含む融合ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド、ＡＬＫ７ポリペプチド、及びＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４、ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ７、ＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ４、及びＡｃｔＲＩＩＡ－ＡＬＫ７ヘテロ多量体は、単離されたポリペプチドである。本明細書で使用される場合、単離されたタンパク質又はポリペプチドは、その天然環境の成分から分離されたものである。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、例えば電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって決定される場合、純度９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％超まで精製される。純度を評価するための方法は、当技術分野で周知である［例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７を参照されたい］。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩポリペプチド、ＡＬＫ４ポリペプチド、及びＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体は、組換えポリペプチドである。
一定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを、当技術分野で公知の様々な技術によって産生することができる。例えば、そのようなＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，Ｍ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（１９９３）ａｎｄ Ｇｒａｎｔ Ｇ．Ａ．（ｅｄ．），Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２）に記載されているもの等の標準的なタンパク質化学技術を使用して合成することができる。更に、自動ペプチド合成装置が市販されている（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｍｏｄｅｌ ３９６；Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ ９６００）。あるいは、ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、その断片又はバリアントは、当技術分野で周知のように、様々な発現系（例えば、大腸菌、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＣＯＳ細胞、バキュロウイルス）を使用して組換え生産され得る（上記も参照）。更なる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、例えばプロテアーゼ、例えばトリプシン、サーモリシン、キモトリプシン、ペプシン、又は対の塩基性アミノ酸変換酵素（ＰＡＣＥ）を使用することによって、天然に存在する又は組換え生産された全長ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドの消化によって生産され得る。コンピュータ分析（市販のソフトウェアを使用して、例えばＭａｃＶｅｃｔｏｒ，Ｏｍｅｇａ，ＰＣＧｅｎｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．）を使用して、タンパク質分解切断部位を同定することができる。あるいは、そのようなＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、天然に存在するか、又は組換え生産された完全長ＡｃｔＲＩＩＢ又はＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、例えば当該技術分野で知られている標準的な技術から、例えば化学的切断（例えば、臭化シアン、ヒドロキシルアミン）によって生産され得る。
別の実施形態では、本開示の組換えポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）の所望の部分のＮ末端におけるポリ－（Ｈｉｓ）／エンテロキナーゼ切断部位配列等の精製リーダー配列をコードする融合遺伝子は、Ｎｉ２＋金属樹脂を使用したアフィニティークロマトグラフィーによる発現した融合ポリペプチドの精製を可能にすることができる。次いで、精製リーダー配列をその後、エンテロキナーゼでの処理によって除去して、本開示の精製ポリペプチド（例えば、バリアントＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ７、又はフォリスタチンポリペプチド）を得ることができる（例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ４１１：１７７；及びＪａｎｋｎｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８９７２を参照されたい）。
融合遺伝子を作製するための技術は周知である。本質的に、異なるポリペプチド配列をコードする様々なＤＮＡ断片の連結は、ライゲーションのための平滑末端又はジグザグ末端の末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて凝集末端の充填、望ましくない連結を回避するためのアルカリホスファターゼ処理、及び酵素的ライゲーションを使用して、従来の技術に従って行われる。別の実施形態では、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成機を含む従来の技術によって合成することができる。あるいは、遺伝子断片のＰＣＲ増幅は、アンカープライマーを使用して行うことができ、アンカープライマーは、２つの連続する遺伝子断片間に相補的なオーバーハングを生じさせ、その後アニールしてキメラ遺伝子配列（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：１９９２を参照されたい）を生成することができる。
３．抗体アンタゴニスト
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は軽減すること）は、抗体（ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体）、又は抗体の組み合わせである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合し得る。本明細書に記載されるように、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体は、単独で、又は１又は複数の支持療法若しくは活性薬剤と組み合わせて、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために、特に１又は複数の心不全関連合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために使用され得る。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ、及び／又はアクチビンＢＥ）を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンに結合する。本明細書で使用される場合、アクチビン抗体（又は抗アクチビン抗体）は、一般に、アクチビンを標的とする際の診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でアクチビンに結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非アクチビンタンパク質に対するアクチビン抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、アクチビンに対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満又は約１％未満である。一定の実施形態では、アクチビン抗体は、異なる種由来のアクチビン間で保存されているアクチビンのエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗アクチビン抗体がヒトアクチビンに結合する。いくつかの実施形態では、アクチビン抗体は、アクチビンがＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４、）に結合するのを阻害し、したがってアクチビン媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。アクチビンＡはアクチビンＢと類似の配列相同性を有し、したがって、アクチビンＡに結合する抗体は、場合によっては、抗アクチビンＢ抗体にも適用されるアクチビンＢに結合及び／又は阻害し得ることに留意すべきである。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビンに結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、１又は複数のＩ型受容体及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビンに結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、アクチビンに結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビン抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビン抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンＡを阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンＡに結合する。本明細書で使用される場合、アクチビンＡ抗体（又は抗アクチビンＡ抗体）は、一般に、抗体がアクチビンＡを標的とする際の診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でアクチビンＡに結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非アクチビンＡタンパク質へのアクチビンＡ抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイで測定した場合、アクチビンへの抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％未満である。一定の実施形態では、アクチビンＡ抗体は、異なる種由来のアクチビンＡ間で保存されているアクチビンＡのエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体はヒトアクチビンＡに結合する。一定の実施形態では、アクチビンＡ抗体は、アクチビンＡがＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４）に結合するのを阻害し、したがってアクチビンＡ媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、アクチビンＡ抗体は、アクチビンＡが共受容体に結合するのを阻害し、したがってアクチビンＡ媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。アクチビンＡはアクチビンＢと類似の配列相同性を有し、したがって、アクチビンＡに結合する抗体は、場合によってはアクチビンＢにも結合及び／又は阻害し得ることに留意されたい。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビンＡに結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビンＡに結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、アクチビンＡに結合する多重特異性抗体は、アクチビンＢに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＢに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビンＡ抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビンＡ抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、アクチビンＡ抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＢ抗体を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のアクチビンＡ抗体は、ＲＥＧＮ－２４７７を含む。いくつかの実施形態では、本開示のアクチビンＡ抗体はガレトスマブを含む。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンＢを阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンＢに結合する。本明細書で使用される場合、アクチビンＢ抗体（又は抗アクチビンＢ抗体）は、一般に、抗体がアクチビンＢを標的とする際の診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でアクチビンＢに結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非アクチビンＢタンパク質へのアクチビンＢ抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイで測定した場合、アクチビンへの抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％未満である。一定の実施形態では、アクチビンＢ抗体は、異なる種由来のアクチビンＢ間で保存されているアクチビンＢのエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗アクチビンＢ抗体はヒトアクチビンＢに結合する。一定の実施形態では、アクチビンＢ抗体は、アクチビンＢがＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４）に結合するのを阻害し、したがってアクチビンＢ媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、アクチビンＢ抗体は、アクチビンＢが共受容体に結合するのを阻害し、したがってアクチビンＢ媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。アクチビンＢはアクチビンＡと類似の配列相同性を有し、したがって、アクチビンＢに結合する抗体は、場合によってはアクチビンＡにも結合及び／又は阻害し得ることに留意されたい。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビンＢに結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビンＢに結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、アクチビンＢに結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、アクチビンＢ抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、アクチビンＢ抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、アクチビンＢ抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＡ抗体を含まない。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＧＤＦ８を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＧＤＦ８に結合する。本明細書で使用される場合、ＧＤＦ８抗体（又は抗ＧＤＦ８抗体）は、一般に、抗体がＧＤＦ８を標的とする際の診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でＧＤＦ８に結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非ＧＤＦ８タンパク質に対するＧＤＦ８抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＧＤＦ８に対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満又は約１％未満である。一定の実施形態では、ＧＤＦ８抗体は、異なる種由来のＧＤＦ８間で保存されているＧＤＦ８のエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体がヒトＧＤＦ８に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８抗体は、ＧＤＦ８がＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４、）に結合するのを阻害し、したがってＧＤＦ８媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８抗体は、ＧＤＦ８が共受容体に結合するのを阻害し、したがってＧＤＦ８媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。ＧＤＦ８はＧＤＦ１１に対して高い配列相同性を有し、したがって、ＧＤＦ８に結合する抗体は、場合によっては、ＧＤＦ１１にも結合し得る及び／又はＧＤＦ１１を阻害し得ることに留意すべきである。いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＤＦ８に結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８に結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８に結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＤＦ８抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ８抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＡ抗体を含まない。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ＲＥＧＮ－１０３３を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、トレボグマブを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ＭＹＯ－０２９を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、スタムルマブを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ＰＦ－０６２５２６１６を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ドマグロズマブを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ＬＹ－２４９５６５５を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ランドグロズマブを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧＤＦ８抗体は、ＳＲＫ－０１５を含む。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１に結合する。本明細書で使用される場合、ＧＤＦ１１抗体（又は抗ＧＤＦ１１抗体）は、一般に、抗体がＧＤＦ１１を標的とする際の診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でＧＤＦ１１に結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非ＧＤＦ１１タンパク質に対するＧＤＦ１１抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＧＤＦ１１に対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満又は約１％未満である。一定の実施形態では、ＧＤＦ１１抗体は、異なる種由来のＧＤＦ１１間で保存されているＧＤＦ１１のエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＧＤＦ１１抗体がヒトＧＤＦ１１に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１抗体は、ＧＤＦ１１がＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４、）に結合するのを阻害し、したがってＧＤＦ１１媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１抗体は、ＧＤＦ１１が共受容体に結合するのを阻害し、したがってＧＤＦ１１媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。ＧＤＦ１１はＧＤＦ８に対して高い配列相同性を有し、したがって、ＧＤＦ１１に結合する抗体は、場合によっては、ＧＤＦ８にも結合し得る及び／又はＧＤＦ８を阻害し得ることに留意すべきである。いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＤＦ１１に結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、１又は複数のＩ型受容体及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４）、及び／又は１又は複数の共受容体に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１に結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１に結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＧＤＦ１１抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＧＤＦ１１抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＡ抗体を含まない。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６に結合する。本明細書で使用される場合、ＢＭＰ６抗体（又は抗ＢＭＰ６抗体）は、一般に、抗体がＢＭＰ６を標的化する際の診断薬及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性でＢＭＰ６に結合することができる抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非ＢＭＰ６タンパク質に対するＢＭＰ６抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＢＭＰ６に対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満又は約１％未満である。一定の実施形態では、ＢＭＰ６抗体は、異なる種由来のＢＭＰ６間で保存されているＢＭＰ６のエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体がヒトＢＭＰ６に結合する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６抗体は、ＢＭＰ６がＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４、）に結合するのを阻害し、したがってＢＭＰ６媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６抗体は、ＢＭＰ６が共受容体に結合するのを阻害し、したがってＢＭＰ６媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、本開示は、ＢＭＰ６に結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６に結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６に結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＢＭＰ６抗体と、例えば１又は複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ６抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＡ抗体を含まない。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０に結合する。本明細書で使用される場合、ＢＭＰ１０抗体（又は抗ＢＭＰ１０抗体）は、一般に、抗体がＢＭＰ１０を標的化する際の診断薬及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性でＢＭＰ１０に結合することができる抗体を指す。特定の実施形態では、無関係な非ＢＭＰ１０タンパク質に対するＢＭＰ１０抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ又は他のタンパク質相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＢＭＰ１０に対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満又は約１％未満である。一定の実施形態では、ＢＭＰ１０抗体は、異なる種由来のＢＭＰ１０間で保存されているＢＭＰ１０のエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＢＭＰ１０抗体がヒトＢＭＰ１０に結合する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０抗体は、ＢＭＰ１０がＩ型及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び／又はＡＬＫ４、）に結合するのを阻害し、したがってＢＭＰ１０媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０抗体は、ＢＭＰ１０が共受容体に結合するのを阻害し、したがってＢＭＰ１０媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、本開示は、ＢＭＰ１０に結合し、例えば、１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に更に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０に結合する多重特異性抗体は、ＢＭＰ９に結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでＢＭＰ９に結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０に結合する多重特異性抗体は、アクチビンＡに結合しないか、又は実質的に結合しない（例えば、１ｘ１０－７Ｍを超えるＫＤでアクチビンＡに結合するか、又は比較的中程度の結合、例えば約１ｘ１０－８Ｍ若しくは約１ｘ１０－９Ｍを有する）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＢＭＰ１０抗体と、例えば１又は複数の追加のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む抗体の組み合わせ及びその使用に関する。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０抗体を含む抗体の組み合わせはＢＭＰ９抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＢＭＰ１０抗体を含む抗体の組み合わせは、アクチビンＡ抗体を含まない。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＢを阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＢに結合する。本明細書で使用される場合、ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）は、一般に、ＡｃｔＲＩＩＢを標的化する際の診断薬及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係の非ＡｃｔＲＩＩＢタンパク質への抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、又は他のタンパク質間相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＡｃｔＲＩＩＢに対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は約１％未満である。特定の実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、異なる種由来のＡｃｔＲＩＩＢ間で保存されているＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体がヒトＡｃｔＲＩＩＢに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）がＡｃｔＲＩＩＢに結合するのを阻害し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ並びに１又は複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（例えばＡｃｔＲＩＩＡ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体の組み合わせ及びその使用に関し、抗体の組み合わせは、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体と、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、及び／又は追加のＩＩ型受容体（例えばＡｃｔＲＩＩＡ）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む。ＡｃｔＲＩＩＢはＡｃｔＲＩＩＡと配列類似性を有し、したがってＡｃｔＲＩＩＢに結合する抗体は、場合によってはＡｃｔＲＩＩＡに結合及び／又は阻害することもできることに留意されるべきである。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ビマグルマブ（ＢＹＭ３３８）を含む。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＡを阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＡに結合する。本明細書で使用される場合、ＡｃｔＲＩＩＡ抗体（抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体）は、一般に、ＡｃｔＲＩＩＡを標的化する際の診断薬及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＡｃｔＲＩＩＡに結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係の非ＡｃｔＲＩＩＡタンパク質への抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、又は他のタンパク質間相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＡｃｔＲＩＩＡに対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は約１％未満である。特定の実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、異なる種由来のＡｃｔＲＩＩＡ間で保存されているＡｃｔＲＩＩＡのエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体がヒトＡｃｔＲＩＩＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）がＡｃｔＲＩＩＡに結合するのを阻害し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、ＡｃｔＲＩＩＡと、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、及び／又は追加のＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ）とに結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体の組み合わせ及びその使用に関し、抗体の組み合わせは、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体と、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、及び／又は追加のＩＩ型受容体（例えばＡｃｔＲＩＩＢ）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む。ＡｃｔＲＩＩＡはＡｃｔＲＩＩＢと配列類似性を有し、したがってＡｃｔＲＩＩＡに結合する抗体は、場合によってはＡｃｔＲＩＩＢに結合及び／又は阻害することもできることに留意されるべきである。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ビマグルマブ（ＢＹＭ３３８）を含む。
特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、少なくともＡＬＫ４を阻害する抗体である。したがって、いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体又は抗体の組み合わせは、少なくともＡＬＫ４に結合する。本明細書で使用される場合、ＡＬＫ４抗体（抗ＡＬＫ４抗体）は、一般に、抗体がＡＬＫ４を標的化する際の診断薬及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性でＡＬＫ４に結合する抗体を指す。特定の実施形態では、無関係の非ＡＬＫ４タンパク質への抗ＡＬＫ４抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、又は他のタンパク質間相互作用若しくは結合アフィニティーアッセイによって測定した場合に、ＡＬＫ４に対する抗体の結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は約１％未満である。特定の実施形態では、抗ＡＬＫ４抗体は、異なる種のＡＬＫ４間で保存されているＡＬＫ４のエピトープに結合する。一定の実施形態では、抗ＡＬＫ４抗体がヒトＡＬＫ４に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ４抗体は、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）がＡＬＫ４に結合するのを阻害し得る。いくつかの実施形態では、抗ＡＬＫ４抗体は、ＡＬＫ４と、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）と、に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。いくつかの実施形態では、本開示は、抗体の組み合わせ、及びその使用に関し、抗体の組み合わせは、抗ＡＬＫ４抗体と、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、及び／又はＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）に結合する１又は複数の追加の抗体とを含む。
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は軽減すること）は、抗体（ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体）、又は抗体の組み合わせである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体、又は抗体の組み合わせは、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）に結合し得る。本明細書に記載されるように、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体は、単独で、又は１又は複数の支持療法若しくは活性薬剤と組み合わせて、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために、特に１又は複数の心不全関連合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために使用され得る。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体は、ＲＥＧＮ－２４７７、ガレトスマブ、ＲＥＧＮ－１０３３、トレボグマブ、ＭＹＯ－０２９、スタムルマブ、ＰＦ－０６２５２６１６、ドマグロズマブ、ＬＹ－２４９５６５５、ランドグロズマブ、ＳＲＫ－０１５、ビマグルマブ及びＢＹＭ３３８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト抗体は、ガレトスマブ、トレボグマブ、スタムルマブ、ドマグロズマブ、ランドグロズマブ及びビマグルマブからなる群から選択される。
抗体という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。抗体断片は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない［例えば、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）；国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４；５，５８７，４５８；及び５，８６９，０４６を参照されたい］。ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である［例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書：国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８を参照されたい］。トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４にも記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である［例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい］。本明細書に開示される抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり得る。特定の実施形態では、本開示の抗体は、それに付着され、検出され得る標識（例えば、標識は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、又は酵素補因子であり得る）を含む。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、単離された抗体である。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、組換え抗体である。
本明細書における抗体は、任意のクラスのものであり得る。抗体のクラスとは、その重鎖が有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分割され得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと呼ばれる。
一般に、本明細書に開示される方法で使用するための抗体は、好ましくは高い結合親和性で、その標的抗原に特異的に結合する。親和性はＫＤ値として表され得、固有の結合親和性（例えば、アビディティー効果を最小限に抑えて）を反映する。典型的には、結合親和性は、無細胞又は細胞関連の状況であろうと、インビトロで測定される。本明細書に開示されるものを含む、当技術分野で公知の多数のアッセイのいずれかを使用して、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）及びＥＬＩＳＡを含む結合親和性測定値を得ることができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、それらの標的抗原（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）に、少なくとも１ｘ１０－７以上、１ｘ１０－８以上、１ｘ１０－９以上、１ｘ１０－１０以上、１ｘ１０－１１以上、１ｘ１０－１２以上、１ｘ１０－１３以上、又は１ｘ１０－１４以上のＫＤで結合する。
ある特定の実施形態では、ＫＤは、下記のアッセイによって記載されるように、目的とする抗体のＦａｂバージョン及びその標的抗原を用いて行われるＲＩＡによって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定シリーズの存在下で最小濃度の放射性標識抗原（例えば、１２５Ｉ標識）でＦａｂを平衡化し、次いで結合抗原を抗Ｆａｂ抗体被覆プレートで捕捉することによって測定される［例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１を参照されたい］。アッセイの条件を確立するために、マルチウェルプレート（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標））を捕捉抗Ｆａｂ抗体（例えば、Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓから）でコーティングし（例えば、一晩）、続いて、好ましくは室温（約２３℃）でウシ血清アルブミンでブロックする。非吸着プレートにおいて、放射性標識抗原を目的のＦａｂの段階希釈液と混合する［例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９の抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する］。次いで、目的のＦａｂを好ましくは一晩インキュベートするが、平衡に達することを確実にするために、インキュベーションをより長期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、インキュベーションのために、好ましくは室温で約１時間、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートを数回、好ましくはポリソルベート２０及びＰＢＳ混合物で洗浄する。プレートが乾燥したら、シンチラント（例えば、ＰａｃｋａｒｄのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（登録商標））を添加し、プレートをガンマカウンター（例えば、ＰａｃｋａｒｄのＴＯＰＣＯＵＮＴ（登録商標））で計数する。
別の実施形態によれば、ＫＤは、例えば、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを有するＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給者の指示に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。例えば、抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流速で注入して、約１０応答単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を得ることができる。抗原の注入に続いて、１Ｍエタノールアミンを注入して未反応基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂの二倍連続希釈物（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ中に約２５μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、例えば、会合及び解離センサーグラムを同時に適合させることによって、単純な一対一Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（ＫＤ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される［例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１を参照されたい］。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによってオンレートが例えば１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オンレートは、撹拌キュベットを備えたストップフロー・アドバンスト分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定されるように、増加する濃度の抗原の存在下でＰＢＳ中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度（例えば、励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって決定することができる。
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。ヒトＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ及びアクチビンＥ）、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＢＭＰ１０、及びＢＭＰ６の核酸及びアミノ酸配列は当技術分野で公知である。更に、抗体を作製するための多数の方法が当技術分野で周知であり、それらのいくつかが本明細書に記載される。したがって、本開示に従って使用するための抗体アンタゴニストは、当技術分野における知識及び本明細書中に提供される教示に基づいて当業者によって日常的に作製され得る。
ある特定の実施形態では、本明細書中に提供される抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５に記載される。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、親抗体のクラス又はサブクラスから変更された「クラス切替」抗体である。一般に、キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
一定の実施形態では、本明細書において提供するキメラ抗体はヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ）由来のアミノ酸残基及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体には、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部が含まれていてもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３に記載されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３；米国特許５，８２１，３３７号；同第７，５２７，７９１号；同第６，９８２，３２１号；及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４ ［ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）ｇｒａｆｔｉｎｇ］；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２８：４８９－４９８（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（「ＦＲシャッフリング」を記載）；Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８；ａｎｄ Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（２０００）８３：２５２－２６０（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記載）に更に記載される。ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法［例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６］を使用して選択されるフレームワーク領域；軽鎖可変領域又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域［例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；ａｎｄ Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照されたい］；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域［例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３を参照されたい］；及びスクリーニングＦＲライブラリーから誘導されたフレームワーク領域［例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４；ａｎｄ Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８を参照されたい］が含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、本明細書中に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ（２００８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９に記載される。例えば、ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４））を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換する、又は染色体外に存在するか若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれたヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含む。そのようなトランスジェニック動物では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５；米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術について記載）；米国特許第．７，０４１，８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）；及び米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載）を参照されたい。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって更に改変され得る。
本明細書中に提供されるヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製され得る。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株が記載されている［例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９８４）１３３：３００１；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６を参照されたい］。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２に記載される。更なる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ（２００６）２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されている方法が含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ（２００５）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．，２０（３）：９２７－９３７（２００５）ａｎｄ Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７（３）：１８５－９１にも記載されている。本明細書中に提供されるヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって作製され得る。次いで、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は当技術分野で公知であり、本明細書に記載される。
例えば、本開示の抗体は、所望の１又は複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．（２００１）ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．ａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ，ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ，ｉｎ ｔｈｅ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ（２００３）ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５，Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２で概説される。
一定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリーでランダムに組み換えた後、抗原結合性ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原（例えば、ＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又はＩ型受容体（例えば、ＡＬＫ４））に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４に記載されているように、免疫化することなく、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒト由来）、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８によって記載されるように、幹細胞から再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再編成を達成することによって、ナイーブライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報には、例えば、米国特許出願公開第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
特定の実施形態では、本明細書中に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。１つ又はそれを超える（例えば、２、３、４、５、６以上）抗原上の少なくとも２つの異なるエピトープ（例えば、２、３、４、５、又は６以上）に対する結合特異性を有する多重特異性抗体（典型的にはモノクローナル抗体）。
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の組換え共発現が含まれるが、これらに限定されない［例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐａｔｅｎｔ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．ＷＯ ９３／０８８２９；ａｎｄ Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５；及び米国特許第５，７３１，１６８号（“ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ”ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を参照されたい］。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を調製すすること（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号を参照されたい）；２つ又はそれを超える抗体又は断片の架橋を調製すること［例えば、第４，６７６，９８０号；及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１を参照されたい］；ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること［例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３を参照されたい］；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術を使用すること［例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８を参照されたい］；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること［例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８を参照されたい］；三重特異性抗体を調製すること（例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０を参照されたい）のための静電ステアリング効果を操作することによって作製され得る。多重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる［例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号明細書を参照されたい。］。
ある特定の実施形態では、本明細書中に開示される抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、例えば天然に存在する変異を含有するか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、集団を含む個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合し、そのようなバリアントは一般に少量存在する。典型的には異なるエピトープに対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対するものである。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製され得、そのような方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
例えば、アクチビン由来の免疫原を使用することにより、抗タンパク質／抗ペプチド抗血清又はモノクローナル抗体を標準的なプロトコルによって作製することができる［例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｅｄ．ｂｙ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ：１９８８を参照されたい］。マウス、ハムスター、又はウサギ等の哺乳動物を、アクチビンポリペプチドの免疫原性形態、抗体応答を誘発することができる抗原性断片、又は融合タンパク質で免疫することができる。タンパク質又はペプチドに免疫原性を付与するための技術としては、担体へのコンジュゲーション又は当技術分野で周知の他の技術が挙げられる。アクチビンポリペプチドの免疫原性部分は、アジュバントの存在下で投与することができる。免疫化の進行は、血漿又は血清中の抗体力価の検出によって監視することができる。抗体産生のレベル及び／又は結合親和性のレベルを評価するために、標準的なＥＬＩＳＡ又は他のイムノアッセイを抗原として免疫原と共に使用することができる。
アクチビンの抗原性調製物で動物を免疫した後、抗血清を得ることができ、所望であればポリクローナル抗体を血清から単離することができる。モノクローナル抗体を産生するために、抗体産生細胞（リンパ球）を免疫化動物から採取し、標準的な体細胞融合手順によって骨髄腫細胞等の不死化細胞と融合してハイブリドーマ細胞を得ることができる。そのような技術は当技術分野で周知であり、例えば、ハイブリドーマ技術［例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－４９７を参照のこと］、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術［例えば、Ｋｏｚｂａｒ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，４：７２を参照のこと］、及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ－ハイブリドーマ技術［Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．ｐｐ．７７－９６］が挙げられる。ハイブリドーマ細胞は、アクチビンポリペプチドと特異的に反応する抗体、及びそのようなハイブリドーマ細胞を含む培養物から単離されたモノクローナル抗体の産生について免疫化学的にスクリーニングすることができる。
ある特定の実施形態では、１つ又はそれを超えるアミノ酸修飾が、本明細書中に提供される抗体のＦｃ領域に導入され得、それにより、Ｆｃ領域バリアントが作製される。Ｆｃ領域バリアントは、１又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換、欠失及び／又は付加）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
例えば、本開示は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体バリアントを企図し、これにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能［例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）］が不要又は有害である用途の望ましい候補となる。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために、インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３］；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２；米国特許第５，８２１，３３７号；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１に記載される。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）、フローサイトメトリーのための非放射性細胞傷害性アッセイ；ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．；ａｎｄ ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標） ｎｏｎ－ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６に開示されるような動物モデルにおいてインビボで評価され得る。抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを行うこともできる［例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと］。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる［例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ，ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ（２００４）Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３を参照されたい］。ＦｃＲｎ結合及びインビボでのクリアランス／半減期の決定もまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる［例えばＰｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９を参照されたい］。エフェクター機能が低下した本開示の抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１又は複数が置換されたものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体としては、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されたいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの二つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
一定の実施形態では、システイン操作抗体、例えば、抗体の１又は複数の残基がシステイン残基で置換された「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基はそれによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、抗体を薬物部分又はリンカー－薬物部分等の他の部分にコンジュゲートして免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。特定の実施形態では、以下の残基のいずれか１又は複数は、システインで置換されていてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）；Ａ１１８（ＥＵナンバリング）の重鎖；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように作製され得る。
更に、望ましい抗体を同定するために抗体をスクリーニングするために使用される技術は、得られる抗体の特性に影響を及ぼし得る。例えば、溶液中の抗原を結合させるために抗体を使用する場合、溶液結合を試験することが望ましい場合がある。特に望ましい抗体を同定するために、抗体と抗原との間の相互作用を試験するための様々な異なる技術が利用可能である。そのような技術には、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴結合アッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ結合アッセイ、ＢｉａｃｏｒｅＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、サンドイッチアッセイ（例えば、ＩＧＥＮ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄの常磁性ビーズ系）、ウエスタンブロット、免疫沈降アッセイ及び免疫組織化学が含まれる。
一定の実施形態では、本明細書で提供される抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体及び／又は結合ポリペプチドの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、抗体及び／又は結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾としては、例えば、抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は残基への挿入及び／又は残基の置換が挙げられる。最終構築物が所望の特徴、例えば標的結合（例えば、アクチビンＥ及び／又はアクチビンＣ結合等のアクチビン）を有する限り、最終構築物に到達するために、欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせを行うことができる。
例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲに改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基［ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ（２００８）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）］、及び／又はＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われ得、得られたバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーの構築及び二次ライブラリーからの再選択による親和性成熟は、当技術分野において記載されている［例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，（２００１）を参照のこと。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次に、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化するＨＶＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを使用して特異的に同定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３がしばしば標的とされる。
ある特定の実施形態では、置換、挿入又は欠失は、そのような変化が抗体が抗原に結合する能力を実質的に低下させない限り、１つ又はそれを超えるＨＶＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変化（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲにおいて行うことができる。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であり得る。上に提供されたバリアントＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＨＶＲは変化していないか、又は１、２若しくは３個以下のアミノ酸置換を含む。
突然変異誘発の標的となり得る抗体及び／又は結合ポリペプチドの残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載の「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体－抗原の相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ）の残基又は群が同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置き換えられる。更なる置換を、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入することができる。あるいは、又は更に、抗原－抗体複合体の結晶構造を決定して、抗体と抗原との間の接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的化又は排除され得る。バリアントをスクリーニングして、所望の特性を含むかどうかを決定することができる。
アミノ酸配列挿入には、１つの残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さのアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端又はＣ末端と、抗体の血清半減期を延長する酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）又はポリペプチドとの融合が含まれる。
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体及び／又は結合ポリペプチドは、当技術分野で公知であり容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含有するように更に修飾され得る。抗体及び／又は結合ポリペプチドの誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のために、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても分岐していなくてもよい。抗体及び／又は結合ポリペプチドに結合したポリマーの数は様々であり得、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ又は異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善される抗体及び／又は結合ポリペプチドの特定の特性又は機能、抗体誘導体及び／又は結合ポリペプチド誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかを含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。
４．低分子アンタゴニスト
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用（例えば、加齢に関連する心不全、又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる）に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、小分子（ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）、又は小分子アンタゴニストの組み合わせである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ及び／又はＡｃｔＲＩＩＡ）、及び／又は１又は複数のシグナル伝達因子を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、例えば、本明細書に記載されるもの等の細胞ベースのアッセイで決定されるように、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドによって媒介されるシグナル伝達を阻害する。本明細書に記載されるように、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストは、心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるために、特に１又は複数の心不全関連合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるために、単独で、又は１又は複数の支持療法又は活性剤と組み合わせて使用され得る。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ８を阻害し、ＧＤＦ１１、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともアクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）を阻害し、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともアクチビンＢを阻害し、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ６を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄタンパク質（例えば、Ｓｍａｄ２及び３）の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＡを阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＢを阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡＬＫ４を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９を阻害しないか、又は実質的に阻害しない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡを阻害しないか、又は実質的に阻害しない。
ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストは、直接的又は間接的な阻害剤であり得る。例えば、間接的な小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、少なくとも１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又は１又は複数の下流シグナル伝達成分（例えば、Ｓｍａｄ）の発現（例えば、転写、翻訳、細胞分泌、又はそれらの組み合わせ）を阻害し得る。あるいは、直接小分子アンタゴニスト、又は小分子アンタゴニストの組み合わせは、例えば、１又は複数の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又は１又は複数の下流シグナル伝達成分（例えば、Ｓｍａｄ）に直接結合し、阻害し得る。１又は複数の間接的なＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストと１又は複数の直接的なＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニストとの組み合わせを、本明細書に開示される方法に従って使用することができる。
本開示の結合性小分子アンタゴニストは、公知の方法論を使用して同定及び化学合成され得る（例えば、国際公開第００／００８２３号及び国際公開第００／３９５８５号を参照されたい）。一般に、本開示の小分子アンタゴニストは、通常、約２０００ダルトン未満のサイズ、あるいは約１５００、７５０、５００、２５０又は２００ダルトン未満のサイズであり、本明細書に記載のポリペプチドに、好ましくは特異的に結合することができるそのような有機小分子である。これらの小分子アンタゴニストは、周知の技術を使用して過度の実験なしに同定することができる。これに関して、ポリペプチド標的に結合することができる分子について有機小分子ライブラリーをスクリーニングするための技術は当技術分野で周知であることに留意されたい（例えば、国際公開第００／００８２３号及び国際公開第００／３９５８５号を参照されたい）。
本開示の結合有機小分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、Ｎ－置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、カーボネート、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、アリールスルホナート、ハロゲン化アルキル、アルキルスルホネート、芳香族化合物、複素環化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、塩化スルホニル、ジアゾ化合物及び酸塩化物であり得る。
５．ポリヌクレオチドアンタゴニスト
特定の態様では、本明細書に開示される方法及び使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、加齢に関連する心不全、又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は軽減すること）は、ポリヌクレオチド（ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト）、又はポリヌクレオチドの組み合わせである。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０）、Ｉ型受容体（例えば、ＡＬＫ４）、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）、及び／又は下流のシグナル伝達成分（例えば、Ｓｍａｄ）を阻害し得る。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、例えば、本明細書に記載されるもの等の細胞ベースのアッセイで決定されるように、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドによって媒介されるシグナル伝達を阻害する。本明細書に記載されるように、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニストは、単独で、又は１又は複数の支持療法若しくは活性薬剤と組み合わせて、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために、特に１又は複数の心不全関連合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は低減するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ８を阻害し、ＧＤＦ１１、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともアクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）を阻害し、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともアクチビンＢを阻害し、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ６を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄタンパク質シグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＡｃｔＲＩＩＡ ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＡを阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡｃｔＲＩＩＢを阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＡＬＫ４を阻害し、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、アクチビンＢＣ、アクチビンＡＥ及び／又はアクチビンＢＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ１１、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＢＭＰ１０、及び１又は複数のＳｍａｄシグナル伝達因子の１又は複数が更に阻害されていてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９を阻害しないか、実質的に阻害しない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、又はポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡを阻害しないか、実質的に阻害しない。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストは、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ分子［例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）］、アプタマー及び／又はリボザイムであり得る。ヒトＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ及びアクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４、及びＳｍａｄシグナル伝達因子の核酸及びアミノ酸配列は、当技術分野で公知である。更に、ポリヌクレオチドアンタゴニストを作製する多くの異なる方法が当技術分野で周知である。したがって、本開示に従って使用するためのポリヌクレオチドアンタゴニストは、当技術分野における知識及び本明細書中に提供される教示に基づいて当業者によって日常的に作製され得る。
アンチセンス技術は、アンチセンスＤＮＡ若しくはＲＮＡを介して、又は三重らせん形成を介して遺伝子発現を制御するために使用することができる。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ（１９９１）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９８８）で論じられる。三重らせん形成は、例えば、Ｃｏｏｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６；及びＤｅｒｖａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３００において論じられている。この方法は、相補的なＤＮＡ又はＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく。いくつかの実施形態では、アンチセンス核酸は、本明細書に開示される遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に相補的な一本鎖ＲＮＡ又はＤＮＡ配列を含む。しかしながら、絶対的な相補性は、好ましいが、必要ではない。
本明細書で言及される配列「ＲＮＡの少なくとも一部に相補的である」は、ＲＮＡとハイブリダイズすることができ、安定な二重鎖を形成するのに十分な相補性を有する配列を意味し、したがって、本明細書に開示される遺伝子の二本鎖アンチセンス核酸の場合、二重鎖ＤＮＡの一本鎖を試験してもよく、又は三重鎖形成をアッセイしてもよい。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度及びアンチセンス核酸の長さの両方に依存する。一般に、ハイブリダイズする核酸が大きいほど、それが含み得るＲＮＡとの塩基ミスマッチが多くなり、それでもなお安定な二重鎖（又は場合によっては三重鎖）を形成する。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を決定するための標準的な手順を使用することによって、許容可能な程度のミスマッチを確認することができる。
メッセージの５’末端に相補的なポリヌクレオチド、例えば、ＡＵＧ開始コドンまで及びＡＵＧ開始コドンを含む５’非翻訳配列は、翻訳を阻害するのに最も効率的に働くはずである。しかしながら、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的な配列は、ｍＲＮＡの翻訳も阻害するのに有効であることが示されている［例えば、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．，（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３－３３５を参照のこと］。したがって、本開示の遺伝子の５’非翻訳非コード領域又は３’非翻訳非コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチドを、内在性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するためのアンチセンスアプローチで使用することができる。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なポリヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補体を含むはずである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスポリヌクレオチドは、あまり効率的でない翻訳阻害剤であるが、本開示の方法に従って使用することができる。本開示のｍＲＮＡの５’－、３’－又はコード領域にハイブリダイズするように設計されているかどうかにかかわらず、アンチセンス核酸は少なくとも６ヌクレオチド長であるべきであり、好ましくは６～約５０ヌクレオチド長の範囲のオリゴヌクレオチドである。特定の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌクレオチド又は少なくとも５０ヌクレオチドである。
一実施形態では、本開示のアンチセンス核酸は、外因性配列からの転写によって細胞内で産生される。例えば、ベクター又はその一部が転写され、本開示の遺伝子のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）が産生される。そのようなベクターは、所望のアンチセンス核酸をコードする配列を含む。そのようなベクターは、転写されて所望のアンチセンスＲＮＡを産生することができる限り、エピソームのままであり得るか、又は染色体に組み込まれ得る。そのようなベクターは、当技術分野で標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築することができる。ベクターは、脊椎動物細胞における複製及び発現に使用されるプラスミド、ウイルス、又は当技術分野で公知の他のものであり得る。本開示の所望の遺伝子又はその断片をコードする配列の発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用することが当技術分野で公知の任意のプロモーターによるものであり得る。そのようなプロモーターは、誘導性又は構成的であり得る。そのようなプロモーターには、ＳＶ４０初期プロモーター領域［例えば、Ｂｅｎｏｉｓｔ ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏｎ（１９８１）Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４－３１０を参照されたい］、ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復配列に含まれるプロモーター［例えば、Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｃｅｌｌ ２２：７８７－７９７を参照されたい］、ヘルペスチミジンプロモーター［例えば、Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１－１４４５を参照されたい］、及びメタロチオネイン遺伝子の調節配列［例えば、Ｂｒｉｎｓｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９－４２を参照されたい］が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドアンタゴニストは、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ及びアクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＢＭＰ１０、ＡＬＫ４及びＳｍａｄシグナル伝達因子のうちの１又は複数の発現を標的とする干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）分子である。ＲＮＡｉは、標的ｍＲＮＡの発現を妨げるＲＮＡの発現を指す。具体的には、ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）を介して特定のｍＲＮＡと相互作用することによって標的遺伝子をサイレンシングする。次いで、ｄｓＲＮＡ複合体は、細胞による分解の標的となる。ｓｉＲＮＡ分子は、１０～５０ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ二本鎖であり、十分に相補的な（例えば、遺伝子に対する少なくとも８０％の同一性）標的遺伝子の発現を妨げる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、標的遺伝子のヌクレオチド配列と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。
更なるＲＮＡｉ分子には、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）；また、低分子干渉ヘアピン及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。ｓｈＲＮＡ分子は、ループによって接続された標的遺伝子からのセンス配列及びアンチセンス配列を含む。ｓｈＲＮＡは核から細胞質に輸送され、ｍＲＮＡとともに分解される。Ｐｏｌ ＩＩＩ又はＵ６プロモーターを使用して、ＲＮＡｉのＲＮＡを発現させることができる。Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．［Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．（２００２）１６：９４８－９５８，２００２］は、ＲＮＡｉに影響を及ぼす手段としてヘアピンに折り畳まれた低分子ＲＮＡ分子を使用した。したがって、そのような短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子もまた、本明細書中に記載される方法において有利に使用される。機能的ｓｈＲＮＡのステム及びループの長さは様々であり、ステム長は、約２５～約３０ｎｔのいずれかの範囲であり得、ループサイズは、サイレンシング活性に影響を及ぼすことなく４～約２５ｎｔの範囲であり得る。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、これらのｓｈＲＮＡは、ＤＩＣＥＲ ＲＮａｓｅの二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）産物に類似しており、いずれにせよ、特定の遺伝子の発現を阻害するための同じ能力を有すると考えられる。ｓｈＲＮＡは、レンチウイルスベクターから発現させることができる。ｍｉＲＮＡは、「ステムループ」構造によって特徴付けられるプレｍｉＲＮＡとして最初に転写され、その後、ＲＩＳＣによる更なるプロセシングの後に成熟ｍｉＲＮＡにプロセシングされる、長さが約１０ヌクレオチド～７０ヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡである。
ｓｉＲＮＡを含むがこれに限定されないＲＮＡｉを媒介する分子は、化学合成（Ｈｏｈｊｏｈ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５２１：１９５－１９９，２００２）、ｄｓＲＮＡの加水分解（Ｙａｎｇｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９９：９９４２－９９４７，２００２）、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼによるインビトロ転写（Ｄｏｎｚｅｅｔｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ３０：ｅ４６，２００２；Ｙｕｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９９：６０４７－６０５２，２００２）、及び大腸菌ＲＮアーゼＩＩＩ等のヌクレアーゼを使用した二本鎖ＲＮＡの加水分解（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：９９４２－９９４７，２００２）によってインビトロで生成することができる。
別の態様によれば、本開示は、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合体化ＤＮＡ、カプセル化ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、裸のＲＮＡ、カプセル化ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉を生成することができる分子、又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないポリヌクレオチドアンタゴニストを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストはアプタマーである。アプタマーは、二本鎖ＤＮＡ及び一本鎖ＲＮＡ分子を含む核酸分子であり、標的分子に特異的に結合する三次構造に結合し、三次構造から結合する。アプタマーの生成及び治療的使用は、当技術分野で十分に確立されている（例えば、米国特許第５，４７５，０９６号を参照されたい）。アプタマーに関する更なる情報は、米国特許出願公開第２００６０１４８７４８号に見出すことができる。核酸アプタマーは、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化（ＳＥＬＥＸ）プロセスを介して選択される。ＳＥＬＥＸは、例えば、米国特許第５，４７５，０９６；５，５８０，７３７；５，５６７，５８８；５，７０７，７９６；５，７６３，１７７；６，０１１，５７７；及び６，６９９，８４３号明細書に記載されているように、標的分子への非常に特異的な結合を有する核酸分子のインビトロ進化のための方法である。アプタマーを同定するための別のスクリーニング方法は、第５，２７０，１６３号に記載される。ＳＥＬＥＸプロセスは、様々な二次元及び三次元構造を形成するための核酸の能力、並びに他の核酸分子及びポリペプチドを含むモノマー又はポリマーを含む実質的に任意の化学化合物とのリガンドとして作用する（特異的結合対を形成する）ヌクレオチドモノマー内で利用可能な化学的汎用性に基づく。任意のサイズ又は組成の分子が標的として役立ち得る。ＳＥＬＥＸ法は、所望の結合親和性及び選択性を達成するために、候補オリゴヌクレオチドの混合物からの選択、並びに同じ一般的な選択スキームを使用した結合、分配及び増幅の段階的反復を含む。ランダム化配列のセグメントを含み得る核酸の混合物から出発して、ＳＥＬＥＸ法は、結合に有利な条件下で混合物を標的と接触させる工程と、標的分子に特異的に結合した核酸から非結合核酸を分割する工程と、核酸－標的複合体を解離させる工程と、核酸－標的複合体から解離した核酸を増幅して、核酸のリガンド濃縮混合物を得る工程と、を含む。結合、分配、解離及び増幅の工程は、標的分子に高い親和性及び特異性で結合する核酸リガンドを得るために所望の数のサイクルにわたって繰り返される。
典型的には、そのような結合分子は、動物に別々に投与されるが［例えば、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ（１９９１）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０を参照されたい］、そのような結合分子はまた、宿主細胞によって取り込まれ、インビボで発現されるポリヌクレオチドからインビボで発現され得る［例えば、Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９８８）を参照されたい］。
６．心不全
部分的には、本開示は、心不全を治療する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を、それを必要とする患者に投与することを含む、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、患者が駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）を有する、加齢に関連する心不全の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｐＥＦを治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、拡張機能障害を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、左室駆出率（ＬＶＥＦ）の減少なしに患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、左心室壁厚の増加を伴う患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、左心房サイズの増加を伴う患者の治療に関する。
これらの方法は、動物、より具体的にはヒトの治療的及び予防的処置を特に目的とする。「対象」、「個体」又は「患者」という用語は、本明細書全体を通して交換可能であり、ヒト又は非ヒト動物のいずれかを指す。これらの用語には、哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長類、実験動物、家畜動物（ウシ、ブタ、ラクダ等を含む）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、他の家畜等）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。特定の実施形態では、患者、対象又は個体はヒトである。
「治療」、「治療すること」、「緩和する」等の用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを一般に意味するために本明細書で使用され、治療されている状態（例えば、心不全）の１又は複数の臨床的合併症の重症度を改善、緩和、及び／又は減少させることを指すためにも使用され得る。効果は、疾患、状態又はその合併症の発症又は再発を完全に又は部分的に遅延させるという点で予防的であり得、及び／又は疾患若しくは状態の部分的若しくは完全な治癒及び／又は疾患若しくは状態に起因する有害作用の点で治療的であり得る。本明細書で使用される「処置」は、哺乳動物、特にヒトの疾患又は状態の任意の治療を包含する。本明細書で使用される場合、障害又は状態を「予防する」治療薬とは、統計的試料において、未処置対照試料と比較して処置試料における障害又は状態の発生を減少させるか、又は未処置対照試料と比較して疾患又は状態の発症を遅延させる化合物を指す。いくつかの実施形態では、本開示は、治療を必要とする患者（例えば、「それを必要とする患者」）にＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを投与する方法に関する。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストによる治療を必要とするそのような患者は、限定されないが、加齢に関連する心不全を含む、本出願に開示される障害又は状態を有する患者である。
一般に、本開示に記載される疾患又は状態（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）の治療又は予防は、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを「有効量」で投与することによって達成される。薬剤の有効量は、所望の治療的又は予防的結果を達成するために、必要な投与量及び期間で有効な量を指す。本開示の作用物質の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する作用物質の能力等の因子に従って変動し得る。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために、必要な投与量及び期間で有効な量を指す。
ＨＦを説明するために使用される主な用語は、左室駆出率（ＬＶＥＦ）の測定に基づく。ＨＦは広範囲の患者を含む（表１）。一部の患者は正常なＬＶＥＦを有し、これは典型的には５０％以上と考えられ、駆出率が保持されたＨＦ（ＨＦｐＥＦ）と呼ばれる。他の患者は、ＬＶＥＦが低下したＨＦ（ＨＦｒＥＦ）を有し、これは典型的には４０％未満であると考えられる。約４０％～約４９％の範囲のＬＶＥＦを有する患者は「灰色の領域」を表し、これは時には中程度の駆出率を伴うＨＦ（ＨＦｍｒＥＦ）として定義される。時には、「灰色領域」のこれらの患者は、臨床医に応じて、ＨＦｒＥＦを有すると識別される。ＬＶＥＦに基づくＨＦ患者の鑑別は、異なる根本的な病因、人口統計学、併存症及び治療に対する応答のために重要である。１９９０名の選択患者の後に公表されたほとんどの臨床試験はＬＶＥＦ（通常、心エコー検査、放射性核種技術又は心臓磁気共鳴（ＣＭＲ）を用いて測定される）に基づいており、我々の知る限りでは、治療が罹患率と死亡率の両方を減少させることが示されているのはＨＦｒＥＦ患者のみである。典型的には、加齢に関連する心不全の患者は、正常なＬＶＥＦ（例えば、ＨＦｐＥＦ）を有する。
Figure 2024511315000080
特定の態様では、本開示は、ＨＦｐＥＦの進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、正常なＬＶＥＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、正常なＬＶＥＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、正常なＬＶＥＦは、５０％以上のＬＶＥＦである。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｐＥＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｐＥＦ及び高レベルのナトリウム利尿ペプチドを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｐＥＦ、高レベルのナトリウム利尿ペプチド、並びに構造的心疾患及び／又は拡張機能障害を有する患者の処置に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、患者がＨＦｐＥＦを有する、加齢に関連する心不全を有する患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、患者が正常なＬＶＥＦを有する、加齢に関連する心不全を有する患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、患者が５０％以上のＬＶＥＦを有する、加齢に関連する心不全を有する患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全を有する患者を治療することに関し、患者は、ナトリウム利尿ペプチドのレベルが上昇している。特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者はＨＦｐＥＦを有する。
特定の態様では、本開示は、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＶＥＦが低下した患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＶＥＦが低下しており、ＬＶＥＦが４０％未満である患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、低下したＬＶＥＦ及び駆出率の低下に関連するＨＦ（ＨＦｒＥＦ）の患者を治療する方法に関する。
特定の態様では、本開示は、駆出率が中程度の心不全（ＨＦｍｒＥＦ）の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、中程度のＬＶＥＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、中程度のＬＶＥＦ及び約４０％～約４９％のＬＶＥＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、中程度のＬＶＥＦ及び中程度の駆出率に関連するＨＦ（ＨＦｍｒＥＦ）を有する患者を治療することに関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｍｒＥＦ及び高レベルのナトリウム利尿ペプチドを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦｍｒＥＦ及び高レベルのナトリウム利尿ペプチド、並びに構造的心疾患及び／又は拡張機能障害を有する患者を治療する方法に関する。
ＨＦｐＥＦの診断は、ＨＦｒＥＦの診断よりも困難であり得る。ＨＦｐＥＦ患者は、一般に、拡張したＬＶを有さず、代わりに、多くの場合、充満圧の上昇の徴候として、ＬＶ壁厚の増加及び／又は左心房（ＬＡ）サイズの増加を有する。ほとんどの患者は、拡張機能障害としても分類されるＬＶ充満又は吸引能力障害の更なる「証拠」を有し、これは一般に、これらの患者におけるＨＦの可能性のある原因として認められている（したがって、「拡張期ＨＦ」という用語）。しかしながら、ＨＦｒＥＦ患者のほとんど（以前は「収縮期ＨＦ」と呼ばれていた）も拡張機能障害を有し、収縮機能の微妙な異常がＨＦｐＥＦ患者で示されている。したがって、保存された又は減少した「収縮機能」よりも保存された又は減少したＬＶＥＦを述べることが好ましい。
以前のガイドラインでは、ＨＦｒＥＦとＨＦｐＥＦとの間に灰色領域が存在することが認められた。これらの患者は、４０～４９％の範囲のＬＶＥＦ、したがってＨＦｍｒＥＦという用語を有する。ＨＦｍｒＥＦ患者は、主に軽度の収縮機能不全を有する可能性が最も高いが、拡張機能障害の特徴を有する。
検出可能なＬＶ心筋疾患のない患者は、ＨＦの他の心血管原因（例えば、肺高血圧症、心臓弁膜症等）を有し得る。非心血管病態（例えば、貧血、肺、腎臓又は肝臓の疾患）を有する患者は、ＨＦの症状と類似又は同一の症状を有し得、それぞれがＨＦ症候群を複雑化又は悪化させ得る。
ＮＹＨＡ機能分類（表２）を使用して、症状の重症度及び運動不耐性を記載した。しかしながら、症状の重症度は、ＬＶ機能の多くの尺度とあまり相関しておらず、症状の重症度と生存との間には明確な関係があるが、軽度の症状を有する患者は依然として入院及び死亡のリスクが高い可能性がある。時には、「進行したＨＦ」という用語は、重度の症状、再発性代償不全及び重度の心機能不全を有する患者を特徴付けるために使用される。
Figure 2024511315000081
いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＹＨＡクラスＩ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩ ＨＦを有する患者は、身体活動に制限がない。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩのＨＦを有する患者は、過度の息切れ、疲労、及び／又は動悸を引き起こさない身体活動を経験する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＹＨＡクラスＩＩ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＩ ＨＦを有する患者は、身体活動がわずかに制限されている。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＩ ＨＦを有する患者は、過度の息切れ、疲労、又は動悸をもたらす通常の身体活動を経験する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＹＨＡクラスＩＩＩ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＩＩのＨＦを有する患者は、身体活動が著しく制限されている。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＩＩのＨＦを有する患者は、通常よりも少ない身体活動の経験により、過度の息切れ、疲労又は動悸をもたらす。いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＹＨＡクラスＩＶ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＶのＨＦを有する患者は、不快感なしに身体活動を行うことができない。いくつかの実施形態では、ＮＹＨＡクラスＩＶのＨＦを有する患者は、安静時に症状を経験し、並びに任意の身体活動が行われると、不快感が増加する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者のＮＹＨＡ機能的心不全クラスを改善する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＶからクラスＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩＩからクラスＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩＩからクラスＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＹＨＡクラスをクラスＩＩからクラスＩに減少させることに関する。
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ／Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＣＣＦ／ＡＨＡ）分類は、構造変化及び症状に基づくＨＦ発症の段階を記載している（表３）。ＡＣＣ／ＡＨＡ分類システムは、腫瘍学で一般的に使用されるアプローチと同様に、疾患の病期分類及び発症に重点を置いている。これらのＨＦ段階は、先行する危険因子（段階Ａ）から不顕性心機能障害の発症（段階Ｂ）、次いで症候性ＨＦ（段階Ｃ）、最後に末期難治性疾患（段階Ｄ）に進行する。ＡＣＣ／ＡＨＡ段階は段階Ａから段階Ｄに進行する。
Figure 2024511315000082
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＡ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＡ ＨＦを有する患者は、ＨＦのリスクが高いが、構造的心疾患又はＨＦの症状はない。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＢ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ステージＢのＨＦを有する患者は、構造的心疾患を有するが、ＨＦの既知の徴候又は症状はない。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＣ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＣのＨＦを有する患者は、ＨＦの以前の又は現在の症状を有する構造的心疾患を有する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＤ ＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣＦ／ＡＨＡステージＤ ＨＦを有する患者は、特殊な介入を必要とする難治性ＨＦを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者の心不全のＡＣＣＦ／ＡＨＡ段階を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＣに低減することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＢに低減することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＤからステージＡに低減することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＣからステージＡに低減することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＡＣＣＦ／ＡＨＡステージをステージＢからステージＡに低減することに関する。
キルリップ分類を使用して、心筋梗塞後の急性状況における患者の状態の重症度を記述することができる。急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を合併したＨＦ患者は、Ｋｉｌｌｉｐ及びＫｉｍｂａｌｌにより表４に示すクラスに分類することができる。
Figure 2024511315000083
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＭＩを合併するＫｉｌｌｉｐクラスＩのＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＡＭＩを合併するＫｉｌｌｉｐクラスＩのＨＦを有する患者は、ＨＦの臨床徴候を有さない。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＭＩを合併するＫｉｌｌｉｐクラスＩＩのＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＫｉｌｌｉｐクラスＩＩのＨＦを有するＡＭＩを合併する患者は、ラ音及びＳ３ギャロップを伴うＨＦを有する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＭＩを合併するＫｉｌｌｉｐクラスＩＩＩのＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＫｉｌｌｉｐクラスＩＩＩのＨＦを有するＡＭＩを合併する患者は、明らかな急性肺水腫を有する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＭＩを合併するＫｉｌｌｉｐクラスＩＶのＨＦを有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＫｉｌｌｉｐクラスＩＶのＨＦを有するＡＭＩを合併する患者は、心原性ショック、低血圧症（例えば、ＳＢＰ、９０ｍｍＨｇ）、並びに乏尿、チアノーゼ及び発汗等の末梢血管収縮の証拠を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐ ＨＦ分類を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＶからクラスＩＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＶからクラスＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＶからクラスＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＩＩからクラスＩＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＩＩからクラスＩに減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＫｉｌｌｉｐクラスをクラスＩＩからクラスＩに減少させることに関する。
心不全の診断のためのフラミンガム基準（表５）は、少なくとも２つの主要な基準、又は少なくとも１つの主要な基準及び２つの副次的な基準の存在を必要とする。これらの基準は数十年にわたってゴールドリファレンス基準として機能してきたが、大部分は安静時の輻輳の存在に基づいている。重要なことに、この臨床的特徴は、良好に代償されたＨＦを有する外来患者、又は運動中にのみ異常な血行動態を発症するＨＦを有する患者には存在しないことが多い。したがって、非常に特異的であるにもかかわらず、フラミンガム基準は、ＨＦの診断に対する感度が低い傾向がある。
Figure 2024511315000084
いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦの診断のための１又は複数の主要なフラミンガム基準を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者は、発作性夜間呼吸困難又は起座呼吸、頸静脈拡張、ラ音、Ｘ線心拡大、急性肺水腫、Ｓ３ギャロップ、１６ｃｍを超える水の静脈圧上昇、２５秒以上の循環時間、肝頸静脈反射、及び治療に反応した５日間で４．５ｋｇ以上の体重減少のうちの１又は複数を有する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦの診断のための１又は複数の軽微なフラミンガム基準を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者は、両側性足首浮腫、夜間咳、通常の運動時の呼吸困難、肝腫大、胸水、記録された最大値から１／３の肺活量の減少、及び頻脈（心拍数が１２０／分を超える）のうちの１又は複数を有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも２つのフラミンガム主要基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１つの主要なＦｒａｍｉｎｇｈａｍ基準及び少なくとも２つの軽微なｆｒａｍｉｎｇｈａｍ基準を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者が有する心不全のフラミンガム基準の数を減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者が有する心不全の主要なフラミンガム基準の数を減らすことに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者が有する心不全の軽微なフラミンガム基準の数を減らすことに関する。
心不全の診断に関して医療従事者が探すことができる心不全の多くの既知の症状及び徴候がある。いくつかの症状は非特異的であり得、したがって、ＨＦと他の問題との区別に役立たない。体液貯留によるＨＦの症状及び徴候は、利尿療法で迅速に解消され得る。頸静脈圧の上昇及び心尖インパルスの変位等の徴候は、より特異的であり得るが、検出するのが難しく、再現性が低い。ＨＦは、関連する病歴のない個体（例えば、心臓損傷の潜在的な原因）ではまれであるが、特定の特徴、特に心筋梗塞の既往は、適切な症状及び徴候を有する患者におけるＨＦの可能性を大幅に増加させる。症状及び徴候は、治療に対する患者の応答及び経時的な安定性を監視するのに重要である。治療にもかかわらず症状が持続することは、通常、追加の治療が必要であることを示し、症状の悪化は深刻な発症であり（患者を緊急の入院及び死亡のリスクにさらす）、迅速な医学的注意に値する。
Figure 2024511315000085
いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦの１又は複数の典型的な症状及び／又はあまり典型的でない症状を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦの１又は複数の特異的及び／又はより特異的でない徴候を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数の典型的な症状、あまり典型的でない症状、特定の徴候、及び／又はあまり特異的でないＨＦの徴候を有する患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＦの１又は複数の典型的な症状を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者は、息切れ、起座呼吸、発作性夜間呼吸困難、運動耐性の低下、疲労、疲れ、運動後の回復時間の増加、及び足首の腫脹からなる群から選択される１又は複数の症状を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの１又は複数の典型的でない症状を有する。いくつかの実施形態では、患者は、夜間の咳、喘鳴、膨満感、食欲不振、錯乱（特に高齢者）、うつ、動悸、めまい、失神、及び呼吸屈曲からなる群から選択される１又は複数のあまり典型的でない症状を有する。いくつかの実施形態では、患者はＨＦの１又は複数の徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、頸静脈圧上昇、肝頸静脈逆流、第３の心音（ギャロップ律動）、及び側方に変位した心尖インパルスからなる群から選択されるＨＦの１又は複数の徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦの１又は複数の非特異的徴候を有する。いくつかの実施形態では、患者は、体重増加（＞２ｋｇ／週）、体重減少（進行したＨＦにおける）、組織消耗（悪液質）、心雑音、末梢浮腫（足首、仙骨、陰嚢）、肺クリーピング、肺底での知覚への空気進入及び鈍麻の減少（胸水）、頻脈、不規則な脈拍、頻呼吸、チェインストークス呼吸、肝腫大、腹水、四肢の冷感、乏尿症、及び狭い脈圧からなる群から選択されるＨＦの１又は複数のあまり特定されない徴候を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者が有する心不全の徴候及び／又は症状の数を減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者が有する心不全の徴候の数を減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者が有する心不全の症状の数を減少させることに関する。
加齢に伴う心不全
年齢が心血管疾患の発症の主要な危険因子の１つであるため、患者の年齢が増加するにつれて有病率が劇的に増加する。先進国の成人集団における心不全の有病率は１～２％であり、７０歳以上の人では１０％超に上昇する（ＭｃＭｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ，２０１２，１４：８０３－８６９）。Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ Ｓｔｕｄｙは、心不全の発生率が、生涯の連続する１０年ごとにおよそ２倍になり、男性よりも女性の方が年齢と共に急激に上昇することを示した。男性の年間発生率は、３５歳～６４歳で１０００人当たり２人から６５歳～９４歳で１０００人当たり１２人に上昇した。年齢によるリスクの増加は、年齢が高いほど平均余命が短くなることと釣り合っているため、ＨＦを発症する生涯尤度は、４０歳を超える全ての年齢で約２０％である。この集団は、駆出率が保持された患者（ＨＦｐＥＦ）と駆出率が低下した患者（ＨＦｒＥＦ）とに分けることができる。これらの心不全患者のほぼ半分はＨＦｐＥＦを有する。心臓が加齢するにつれて、構造、機能、細胞、及び分子の多くの異なるレベルで変化が起こる可能性があり、これらは全て心不全につながる可能性がある。一般に、加齢に関連する心不全は、左室（ＬＶ）壁厚の増加（すなわち、ＬＶ肥大）及び拡張機能障害を特徴とし、左室駆出率（ＬＶＥＦ）の減少はない（すなわち、ＨＦｐＥＦ）。ＨＦｐＥＦ患者の定義による駆出率は正常であるが、ＬＶ収縮性は損なわれている。ＨＦｐＥＦを診断するときの低い特異度を回避するために、労作性呼吸困難及び正常なＬＶＥＦを、拡張期ＬＶ機能不全、ＬＶ肥大、左心房（ＬＡ）拡大、及び／又はナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）の血漿レベルの客観的尺度と組み合わせることができる。
ＨＦｐＥＦの診断は依然として困難である。ＨＦｐＥＦ患者では、ＬＶＥＦは正常であり、ＨＦの徴候及び症状はしばしば非特異的であり、ＨＦと他の臨床状態とを十分に区別しない。慢性ＨＦｐＥＦの診断は、特に併存症を有し、中枢性体液過剰の明らかな徴候がない典型的な高齢患者では面倒であり、検証されたゴールドスタンダードは困難である。ＨＦｐＥＦを診断する特異性を改善するために、臨床診断は、安静時又は運動中の心機能障害の客観的尺度によって支持されるべきである。ＨＦｐＥＦの診断には、典型的には以下が必要である：ＨＦの症状及び／又は徴候の存在；「保存された」ＥＦ（ＬＶＥＦ≧５０％、又はＨＦｍｒＥＦの場合は４０－４９％と定義されることもある）；ＮＰの上昇したレベル（ＢＮＰ＞３５ｐｇ／ｍＬ及び／又はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞１２５ｐｇ／ｍＬ）；ＨＦの根底にある他の心臓の機能的及び構造的変化の客観的証拠；不確実性の場合、ＨＦｐＥＦの診断を確認するために、ストレス試験又は侵襲的に測定されたＬＶ充満圧上昇が必要とされ得る。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも４０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも４５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも５０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも５５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも６０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも６５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも７０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも７５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも８０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも８５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも９０歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも９５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも１００歳である。いくつかの実施形態では、患者は、約４０歳～約１００歳である。いくつかの実施形態では、患者は、駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）を有する。いくつかの実施形態では、心不全は、保たれた駆出率に関連する心不全（ＨＦｐＥＦ）である。いくつかの実施形態では、患者は呼吸困難を有する。いくつかの実施形態では、患者は、労作性呼吸困難を有する。いくつかの実施形態では、患者は、増加した左心室壁厚を有する。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ肥大を有する。いくつかの実施形態では、患者は拡張機能障害を有する。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ拡張機能障害を有する。いくつかの実施形態では、患者は左心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、患者は、左心室駆出率の減少を有さない。いくつかの実施形態では、患者の左室駆出率は５０％以上である。いくつかの実施形態では、患者は、ナトリウム利尿ペプチドのレベルが上昇している。
構造変化
患者が加齢するにつれて、心臓及び血管系の有意な構造変化が起こる。このいくつかの例には、血管内膜厚の増加、血管硬化の増加、左心室壁厚の増加（正常範囲内）及び左心房サイズの増加が含まれるが、これらに限定されない（表７）。心臓の厚さ及び形状の全体的な変化は、心臓壁応力及び全体的な収縮効率にとって重要な意味を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全、又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者が心血管構造リモデリングを有する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者は、血管内膜厚の増加、血管剛性の増加、ＬＶ肥大（例えば、ＬＶ壁厚の増加）の増加、及び左心房拡大の増加（例えば、左心房壁サイズの増加）からなる群から選択される心血管構造リモデリングを有する。いくつかの実施形態では、患者は血管内膜厚の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は血管剛性の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ肥大の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ壁厚の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は収縮期高血圧を有する。いくつかの実施形態では、患者は、拡張早期心臓充満を遅延させている。いくつかの実施形態では、患者は心臓充満圧が上昇している。いくつかの実施形態では、患者は、呼吸困難についてのより低い閾値を有する。いくつかの実施形態では、患者は、比較的正常な収縮機能を有する心不全の可能性が高い。いくつかの実施形態では、患者は左心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、患者は左心房サイズの増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は、孤立性心房細動及び／又は他の心房性不整脈の有病率が増加している。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全、又は加齢に関連する心不全の１又は複数の合併症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者の心血管構造リモデリングを改善する方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、血管内膜厚の増加、血管剛性の増加、ＬＶ肥大（例えば、ＬＶ壁厚の増加）の増加、及び左心房拡大の増加（例えば、左心房壁サイズの増加）からなる群から選択される心血管構造リモデリングを改善する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の血管内膜厚を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の血管剛性を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ肥大を減少させる。いくつかの実施形態では、これにより、患者のＬＶ壁厚が減少する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の収縮期高血圧を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の拡張早期心充満を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心臓充満圧を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左心房拡大を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左心房サイズを減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者における孤立性心房細動及び／又は他の心房性不整脈の有病率を低下させる。
Figure 2024511315000086
心室構造
構造レベルでは、年齢と共に見られる最も顕著な現象の１つは、心筋細胞サイズの増加の結果としてのＬＶ壁の厚さの増加である（すなわち、ＬＶ肥大）。ＬＶ肥大は、主に、加齢に伴って生じる心筋細胞の喪失後の身体による代償反応として見られ、左心室をより強く働かせる。作業負荷が増加するにつれて、心腔壁内の筋肉組織が厚くなり、時には心腔自体のサイズも増加する。肥大した心筋は弾性を失い、最終的に必要なだけの力で圧送できないことがある。年齢によるＬＶ質量の進化に関して相反するデータがあり、最近の分析は質量にほとんど又は全く影響しない傾向があり（Ａｋａｓｈｅｖａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０：ｅ０１３５８８３）、又は男性のみにわずかな性別特異的減少があり得る（Ｓｔｒａｉｔ ａｎｄ Ｌａｋａｔｔａ，Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ Ｃｌｉｎ，２０１２，８：１４３－１６４）。ＬＶ寸法は年齢とともに減少し、これは質量／体積比の増加及びＬＶ拡張末期容積の減少によって反映される。したがって、加齢は、典型的にはＬＶ肥大に関連する。そのような肥大は、ＬＶに非対称的に影響を及ぼし、主に心室中隔に影響を及ぼし、心筋の再分布をもたらし、総心筋量に対する影響の欠如の可能性を説明する。ＬＶ肥大及びＬＶ腔容積の減少は、心不全を有する高齢患者で一般的なＨＦｐＥＦの特徴のいくつかである。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は心臓の心室構造の変化を有する。いくつかの実施形態では、心臓の心室構造の変化は、ＬＶ肥大、心筋細胞サイズの増加、心筋細胞の喪失、ＬＶ質量のほとんど又は全く変化なし、及びＬＶ拡張末期容積の減少からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ肥大を有する。いくつかの実施形態では、患者はＬＶ壁の厚さが増加している。いくつかの実施形態では、患者は、心筋細胞サイズが増加している。いくつかの実施形態では、患者は心筋細胞の喪失を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＬＶ拡張末期容積の減少を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は心臓の心室構造の１又は複数の変化を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＬＶ肥大、心筋細胞サイズの増加、心筋細胞の喪失、ＬＶ質量のほとんど又は全く変化なし、及びＬＶ拡張末期容積の減少からなる群から選択される心臓の心室構造を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＬＶ肥大を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、ＬＶ肥大の悪化を防ぐ。いくつかの実施形態では、本方法はＬＶ肥大を修復する。いくつかの実施形態では、方法はＬＶ壁の厚さを減少させる。いくつかの実施形態では、方法は心筋細胞サイズを減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は心筋細胞の喪失を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、心筋細胞の喪失の悪化を防ぐ。いくつかの実施形態では、方法はＬＶ拡張末期容積を増加させる。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は左室肥大を有する。いくつかの実施形態では、本開示は、心不全患者の１又は複数のパラメータをより正常なレベル（例えば、同程度の年齢及び性別の健康な人と比較して正常）に調整する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左室肥大を少なくとも１％（例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも１％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも１０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも１５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも２０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも２５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも３０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも３５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも４０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも４５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも５０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも５５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも６０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも６５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも７０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも７５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも８０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも８５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも９０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を少なくとも９５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左室肥大を１００％減少させることに関する。
心房構造
高齢者では、心房収縮は、若年集団よりも拡張期のＬＶ充満においてはるかに大きな役割を果たす。この機能の変化は、心房肥大（肥厚）及び拡張の発症に関連する。左心房の大きさは心房細動の存在と関連している。したがって、心臓の加齢性構造的リモデリングの２つの重要な側面、すなわちＬＶ肥大及び心房拡張は、高齢の２つの主な心臓病理、すなわちＨＦｐＥＦ及び心房細動に関連する。これらの２つの病態はしばしば一緒に起こり、ＨＦｐＥＦ患者の２／３がある時点で心房細動を示し、ほとんどの患者が最初に心房細動を発症し、次いで心不全を発症する。心エコー検査は、大動脈根が年齢とともに適度に拡張し、４０～８０年の間に６％に近いことを示している。しかし、正常な加齢では、近位大動脈内の血液量が多いと、加齢した心臓が圧送しなければならない慣性負荷が大きくなるため、そのような大動脈根拡張はＬＶ肥大の更なる刺激を提供する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は心臓の心房構造に変化を有する。いくつかの実施形態では、心臓の心房構造の変化は、左心房肥大、不整脈、心房拡張、大動脈基部拡張、及び心房細動からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は心房肥大を有する。いくつかの実施形態では、患者は左心房肥大を有する。いくつかの実施形態では、患者は左心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、患者は不整脈を有する。いくつかの実施形態では、患者は心房拡張を有する。いくつかの実施形態では、患者は大動脈基部拡張を有する。いくつかの実施形態では、患者は心房細動を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は心臓の心房構造の変化を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、左心房肥大、不整脈、心房拡張、大動脈基部拡張、及び心房細動からなる群から選択される心臓の心房構造の変化を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は心房肥大を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は左心房肥大を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は左心房拡大を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の不整脈を減少させる。いくつかの実施形態では、方法は心房拡張を改善する。いくつかの実施形態では、上記は大動脈基部拡張を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、心房細動を改善する
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は左心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、本開示は、心不全患者の１又は複数のパラメータをより正常なレベル（例えば、同程度の年齢及び性別の健康な人と比較して正常）に調整する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左心房拡大を少なくとも１％（例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも１％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも１０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも１５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも２０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも２５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも３０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも３５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも４０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも４５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも５０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも５５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも６０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも６５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも７０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも７５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも８０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも８５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも９０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を少なくとも９５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の左心房拡大を１００％減少させることに関する。
機能的変化
加齢心臓が受ける多数の機能的変化及び代償性反応があり、それは、増加した仕事量に反応する能力を低下させ、またその予備能力を低下させる。加齢は、心臓の拡張期、収縮期、及び電気機能に影響を及ぼす。最大心拍数、収縮末期容積（ＥＳＶ）、拡張末期容積（ＥＤＶ）、収縮性、長期の収縮期収縮、長期の拡張期弛緩、及び交感神経シグナル伝達の変化は、対象が加齢するにつれての機能的変化の例である。高齢患者は、血管緊張の調節の変化、細胞Ｃａ２＋過負荷に対する閾値の低下、心血管予備能の増加、及び身体活動の低下を有し得る。そのような機能的変化は、血管硬化、高血圧、早期アテローム性動脈硬化症、心房性及び心室性不整脈に対するより低い閾値、筋細胞死の増加、線維症の増加、並びに心不全に対するより低い閾値及び心不全の重症度の増加をもたらし得る（表８）。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は心臓の機能的変化を有する。いくつかの実施形態では、心臓の機能的変化は、拡張期心機能の変化、収縮期心機能の変化、及び電気的心機能の変化からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は、拡張期心機能に変化を有する。いくつかの実施形態では、患者は収縮期心機能に変化を有する。いくつかの実施形態では、患者は電気的心機能に変化を有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は心臓の機能的変化を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、拡張期心機能の変化、収縮期心機能の変化、及び電気的心機能の変化からなる群から選択される心臓の機能的変化を改善する。いくつかの実施形態では、拡張期心機能の変化を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、収縮期心機能の変化を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、電気的心機能の変化を改善する。
Figure 2024511315000087
拡張機能
拡張機能とは、肺うっ血を防ぐのに十分低い圧力で、左心室（ＬＶ）が身体の現在のニーズに十分な血液で満たすことを可能にするいくつかの異なる生理学的過程を指す。正常なＬＶは吸引ポンプとして機能しており、拡張早期吸引の程度は、ＬＶ弛緩に加えて、前拍動の短縮の程度及び僧帽弁時の左心房内の圧力に関連する。心臓加齢の顕著な特徴は、心臓が心室弛緩障害及び充満圧上昇を経験するＬＶ拡張機能（例えば、拡張機能障害）の低下である。正常な拡張期充満は、２つの段階に分けることができる：拡張期初期の早期の受動的充満（「Ｅ」）（拡張早期伝達流量として知られる）、及び拡張期後期の能動的充満（「Ａ」）（拡張期後期透過流速として知られる）。拡張機能障害の初期段階では、血液で満たされる心臓の速度が低下し（例えば、より小さいＥ）、心室充満の大部分が拡張期の後期に移行し、収縮中に心房が排出する有意な心房拡大及びより大きな血液量がある（例えば、より大きいＡ）。したがって、心房は全拡張末期容積の大部分を占め、Ｅ／Ａ比は減少し、これはＨＦｐＥＦの初期段階における拡張機能障害の顕著な特徴である。健康な若年成人におけるＥ／Ａ比は、典型的には＞１である。拡張機能障害は、ＨＦｐＥＦ（駆出率が保たれた心不全）に関連している。拡張機能障害は、左室（ＬＶ）弛緩障害、回復力、筋細胞伸長負荷、及び心房機能の組み合わせを表し、これらは全てＬＶ充満圧の上昇をもたらす。拡張機能を評価するために、早期から後期の拡張期への経僧帽弁流速（Ｅ／Ａ）の比を使用することができる。
拡張機能障害を推定する方法としては、（Ｅ／Ａ）を測定する以外にも他の方法がある。使用する１つの測定値は、初期拡張期僧帽弁輪組織速度（Ｅ／ｅ’）に対する拡張早期伝達流量の比であり、これはＬＶ充満圧を推定する。正常値（Ｅ／ｅ’）は典型的には１５未満であり、１５を超える値はＬＶ充満圧及びＨＦｐＥＦの上昇を示唆する。したがって、比（Ｅ／ｅ’）はまた、拡張機能を評価するために使用することができ、拡張機能障害が心室弛緩障害に起因してより大きいＥ／ｅ’比、したがってより小さいｅ’測定値及びより大きいＥ測定値をもたらすので、臨床的に好ましい。拡張早期僧帽弁輪組織速度の拡張後期僧帽弁輪組織速度に対する比（ｅ’／ａ’）も測定することができる。
最後に、減速時間（ＤＴ、Ｅ減速時間とも呼ばれる）を使用して、拡張機能障害を推定することができる。ＤＴは、心エコー図におけるＥ波のピークからその予測ベースラインまでの時間間隔である。正常な患者におけるＥ波減速時間は、典型的には１５０ｍｓ～２４０ｍｓである。ＤＴは、左心房と左心室との間の圧力差を均等化するための持続時間を示す。
拡張機能障害のこれらの測定値は、重要な診断及び予後の意味を有するが、拡張機能を説明し、患者の管理を導くために、患者の年齢及び心エコー図の残りの部分に関連して解釈されるべきである。健康な心臓では、僧帽弁輪が頂部に向かって降下することにより、有意な量のＬＶ駆出及びＬＡ充満が生じる。この長手方向の動きは、通常、充填に先行する。この運動は、全体的な機能障害の状況（全ての運動が減少する）又はＬＶ肥大に関連する様々な状況（収縮が長手方向の短縮から半径方向の肥厚に移行する）のいずれかにおいて減少及び遅延の両方があり得る。
心内膜疾患又は心膜疾患がない場合、拡張期ＬＶ機能不全は、心筋剛性の増加に起因する。心筋内の２つの区画は、その拡張期剛性を調節する。これらの区画は、細胞外マトリックス及び心筋細胞である。一方の区画内の剛性変化は、マトリックス細胞タンパク質を介して他方の区画にも伝達される。細胞外マトリックスの剛性は、その総量、Ｉ型コラーゲンの相対的存在量、及びコラーゲン架橋度の調節を介してコラーゲンによって主に決定され、これらは全てＨＦｐＥＦにおいて役割を果たすと考えられている。コラーゲン沈着に加えて、固有の心筋細胞剛性もまた、ＨＦｐＥＦにおける拡張期ＬＶ機能障害に寄与する。
Figure 2024511315000088
Figure 2024511315000089
拡張機能障害を診断するために公開されているガイドラインは複数ある。パラメータは異なり得るが、全てのガイドラインは、ＨＦの徴候又は症状の存在、正常な収縮期ＬＶ機能の証拠、及び拡張機能障害の証拠、又はＬＶ肥大、ＬＡ拡大、心房細動、若しくは上昇したＢＮＰレベルを含む代用マーカーを必要とする。Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ及びＥｕｒｏｐｅａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇによれば、拡張機能障害は、とりわけ上記の測定値に基づいて４つのグレード又はステージに分けることができる。表１０は、異なるグレードの拡張機能障害について予想される所見の要約を提示する（Ｎａｇｕｅｈ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒ．，２０１６，２９：２７７－３１４）。重要なことに、Ｅ／ｅ’比を測定して、ＨＦｐＥＦが疑われる患者における拡張機能障害のグレードを決定することができる。グレード１の拡張機能障害を有する患者におけるＥ／ｅ’値は８未満である。グレード２の拡張機能障害を有する患者におけるＥ／ｅ’値は８～１５である。グレード３の拡張機能障害を有する患者におけるＥ／ｅ’値は１５を超える。
Figure 2024511315000090
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は拡張機能障害を有する。いくつかの実施形態では、患者は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、左心室拡張機能が低下している。いくつかの実施形態では、患者は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、左心室弛緩が減少している。いくつかの実施形態では、患者のＥ／Ａ比が測定される。いくつかの実施形態では、拡張期後期の経僧帽弁流速に対する拡張早期伝達流量の患者の比（Ｅ／Ａ）が測定される。いくつかの実施形態では、患者の心臓内の血液充填率は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して低下する。いくつかの実施形態では、患者は、収縮中に心臓の心房が排出する血液量が増加している。いくつかの実施形態では、患者は心房拡大を有する。いくつかの実施形態では、患者は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較してＥ／Ａ比の減少を有する。いくつかの実施形態では、患者は、同様の年齢及び性別の人々と比較して左心房圧が上昇している。いくつかの実施形態では、患者は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、ＬＶ充満圧が低下している。いくつかの実施形態では、拡張早期僧帽弁輪組織速度（Ｅ／ｅ’）に対する拡張早期伝達流量の患者の比が測定される。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して増加する。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は８未満である。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は８～１５である。いくつかの実施形態では、患者のＥ／ｅ’比は１５より大きい。いくつかの実施形態では、拡張早期僧帽弁輪組織速度と拡張後期僧帽弁輪組織速度との患者の比（ｅ’／ａ’）が測定される。いくつかの実施形態では、患者の減速時間（ＤＴ）が測定される。いくつかの実施形態では、患者の減速時間は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して短縮される。いくつかの実施形態では、患者の減速時間は１６０ｍｓ未満である。いくつかの実施形態では、患者の三尖弁逆流速度（ＴＲ速度）が測定される。いくつかの実施形態では、患者のＴＲ速度は一般に増加する。いくつかの実施形態では、患者のＴＲ速度は、一般に、２．８ｍ／秒を超える。いくつかの実施形態では、患者の左心房容積指数（ＬＡＶＩ）が測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＡＶＩは、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して増加する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は拡張機能障害を改善する。いくつかの実施形態では、方法は左室拡張機能を増大させる。いくつかの実施形態では、本方法は、左心室弛緩を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、拡張期後期の経腔的流速に対する拡張早期伝達流量の患者の比（Ｅ／Ａ）を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、一般に、患者のＥ／Ａ比を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、拡張早期僧帽弁輪組織速度と拡張後期僧帽弁輪組織速度との患者の比（ｅ’／ａ’）を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、一般に、患者のｅ’／ａ’比を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、心臓内の患者の減速時間（ＤＴ）を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、一般に、心臓における患者の減速時間（ＤＴ）を増加させる。いくつかの実施形態では、方法は、一般に、患者のＤＴを１６０ｍｓ未満に減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心臓への血液充填速度を増加させる。いくつかの実施形態では、本方法は、収縮中に心臓の心房が排出する患者の血液量を減少させる。いくつかの実施形態では、方法は左心室弛緩を増加させる。いくつかの実施形態では、方法は左心房圧を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は心房拡大を改善する。いくつかの実施形態では、方法はＬＶ充満圧を増加させる。いくつかの実施形態では、本方法は、一般に、患者のＴＲ速度を低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、一般に、患者のＴＲ速度を２．８ｍ／秒未満に低下させる。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の左心房容積指数（ＬＡＶＩ）測定値を減少させる。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、拡張期初期の僧帽弁輪組織速度に対する拡張早期伝達流量の患者の比（Ｅ／ｅ’）を（例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも２０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも２５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも３０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも３５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも４０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも４５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも５０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも５５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも６０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも６５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも７０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも７５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも８０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも８５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも９０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも９５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を１００％減少させることに関する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、拡張期早期僧帽弁輪組織速度に対する拡張早期伝達流量の患者の比（Ｅ／ｅ’）を（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３５、４０、４５、又は５０）減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１だけ減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも２だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも３だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも４だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも５だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも６だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも７だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも８だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも９だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１０だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１１だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１２だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１３だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１４だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１５だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１６だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１７だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１８だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも１９だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも２０だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも２５だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも３０だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも３５だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも４０だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも４５だけ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥ／ｅ’比を少なくとも５０だけ減少させることに関する。
いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害グレードは正常である。いくつかの実施形態では、正常なグレードの拡張機能障害は、１～２のＥ／Ａ、８未満のＥ／ｅ’、正常な左心房容積指数（ＬＡＶＩ）、及び１６０ｍｓ未満の減速時間（ＤＴ）を含み、正常とは、患者と同様の年齢及び性別の健康な人を指す。いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害段階はグレード１である。いくつかの実施形態では、グレード１の拡張機能障害は、弛緩障害によるＥ／Ａ＜１、８未満のＥ／ｅ’、正常又は増加したＬＡＶＩ、及び同様の年齢及び性別の健康な人と比較して増加した減速時間を含む。いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害段階はグレード２である。いくつかの実施形態では、グレード２の拡張機能障害は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して、１～２のＥ／Ａ、８～１５のＥ／ｅ’、ＬＡＶＩの増加、及び減速時間の減少を含む。いくつかの実施形態では、Ｅ／ｅ’の増加及び／又はＬＡサイズの増加は、グレード１からグレード２の診断を裏付ける。いくつかの実施形態では、患者の拡張機能障害段階はグレード３である。いくつかの実施形態では、グレード３の拡張機能障害は、Ｅ／Ａ＞２、１５を超えるＥ／ｅ’、増加したＬＡＶＩ、及び同様の年齢及び性別の健康な人と比較して重度に低下したＬＶコンプライアンス及び高いＬＶ充満圧による非常に短いＥ減速時間（＜１４０ｍｓ）を含む。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は患者の拡張機能障害グレードを改善する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３からグレード２に改善することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３からグレード１に改善することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード３から正常に改善することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード２からグレード１に改善することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード２から正常に改善することに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の拡張機能障害グレードをグレード１から正常に改善することに関する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者のＬＶ拡張機能を（例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）増加させるいくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも１０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも１５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも２０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも２５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも３０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも３５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも４０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも４５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも５０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも５５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも６０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも６５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも７０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも７５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも８０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも８５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも９０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を少なくとも９５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＬＶ拡張機能を１００％増加させることに関する。
収縮機能
心筋の全体的な安静時収縮機能は、典型的には健康な加齢とともに変化しない。一般にＬＶ収縮機能の最も一般的に使用される尺度であるＬＶ駆出率は、典型的には加齢中に保存される（すなわち、ＨＦｐＥＦ）。収縮機能への影響は、通常、運動中に観察可能な心予備力の加齢に伴う減少によって反映される。研究は、ＨＦｐＥＦにおける基底収縮性の軽度の制限でさえも運動ストレスの状況においてより問題になる可能性があり、収縮性を高めることができないことは、心拍出量予備能の障害、運動不耐性のより重度の症状、及び有酸素能力の低下に関連し得ることを示している。この減少に関与する因子には、心筋収縮性の減少、並びに運動中に達成される最大心拍数及び最大駆出率の減少が含まれる。心機能予備能の低下は、一般に心不全に関連する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は正常な収縮機能を有する。いくつかの実施形態では、患者は収縮機能に変化がない。いくつかの実施形態では、患者は、運動中に観察可能な心予備力の加齢に伴う減少を示す。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は収縮機能を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は、少なくとも５０％（例えば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）の駆出率を有する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも５０％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも５５％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも６０％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも６５％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも７０％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも７５％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも８０％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも８５％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも９０％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも９５％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、１００％の駆出率を有する患者に関する。いくつかの実施形態では、駆出率は右室駆出率である。いくつかの実施形態では、駆出率は左心室駆出率である。いくつかの実施形態では、駆出率は、心エコー図を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者は、保存された左心室駆出率を有する。
心拍出量
一般に、安静時の正常な心拍出量は約２．５～４．２Ｌ／分／ｍ２であり、心拍出量は正常な限界から逸脱することなくほぼ４０％減少し得る。約２．５Ｌ／分／ｍ２未満の低い心臓指数は、通常、心血管機能の障害を示す。特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者の心拍出量を（例えば、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）増加させるいくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも１０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも１５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも２０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも２５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも３０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも３５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも４０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも４５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも５０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも５５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも６０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも６５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも７０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも７５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも８０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも８５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも９０％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも９５％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を１００％増加させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の心拍出量を少なくとも４．２Ｌ／分／ｍ２まで増加させることに関する。いくつかの実施形態では、心拍出量は安静時に測定される。いくつかの実施形態では、心拍出量は、右心臓カテーテルを使用して測定される。
電気的機能
心臓伝導系では、加齢は洞房結節のペースメーカー細胞の生命維持に関わる。ペースメーカー細胞数の顕著な減少は、６０歳以降に起こる。７５歳までに、若年成人に見られるペースメーカー細胞の数の１０％未満が残っている。心臓骨格の左側の様々な石灰化の程度もまた、加齢と共に生じる。これらの伝導系の変化は、高齢者における副鼻腔機能不全の発生率の増加によって反映され、動悸、めまい、持続的な疲労及び錯乱を伴う失神によって現れる。更に、組織リモデリングは、房室結節、Ｈｉｓ束及び束枝の機能に影響を及ぼす。心房及び心室の脱分極及び再分極の結果として生じる変化は、心電図（ＥＣＧ）測定の加齢に伴う変化によって反映される。心エコー図測定値の変化には、Ｐ波持続時間、Ｐ－Ｒ間隔及びＱ－Ｔ間隔の増加、並びにＴ波電圧及びＱＲＳ軸の左方向のシフトが含まれる。房室伝導を表すＰ－Ｒ間隔は、一般に、２０歳～３５歳の１５９ｍｓから６０歳を超えて１７２ｍｓまで増加する。ＱＲＳ軸は左方にシフトし、これはおそらくＬＶ壁厚の増加によるものであり、健康な対象の２０％は１００歳までに左軸偏位を有する。興味深いことに、ＬＶ厚さの増加にもかかわらず、４０歳までに明らかな加齢に伴うＲ波及びＳ波振幅の減少がある。更に、心房及び心室の両方の異所性拍動の有病率が増加する。
Figure 2024511315000091
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は心電図検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、ペースメーカー細胞の数の減少を有する。いくつかの実施形態では、患者は、心電図上のＰ波持続時間の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は、心電図上のＰ－Ｒ間隔の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は、心電図上のＱ－Ｔ間隔の増加を有する。いくつかの実施形態では、患者は、心電図上のＴ波電圧の低下を有する。いくつかの実施形態では、患者は、心電図上でＱＲＳ軸の左方向のシフトを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は心電図測定を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者に存在するペースメーカー細胞の数を増加させる。いくつかの実施形態では、方法は心電図上のＰ波持続時間を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、心電図上のＰ－Ｒ間隔を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、心電図上のＱ－Ｔ間隔を減少させる。いくつかの実施形態では、本方法は、心電図上のＴ波電圧を増加させる。いくつかの実施形態では、本方法は、ＱＲＳ軸を心電図上の正常位置にシフトさせる。
ナトリウム利尿ペプチド
ＢＮＰ及びＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含むナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）の血漿濃度は、特に心エコー検査が直ちに利用できない非急性の状況で、初期診断試験として使用することができる。ＮＰの上昇は、初期の作業診断を確立し、更なる心臓検査を必要とする人を同定するのに役立つ。重要な心機能障害を除外するためのカットオフ点未満の値を有する患者は、典型的には心エコー検査を必要としない。特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は、１又は複数のナトリウム利尿ペプチドのレベルが上昇している。いくつかの実施形態では、本方法は、心不全を有する患者を治療することに関し、患者は、上昇したレベルのＢＮＰを有する。いくつかの実施形態では、本方法は、心不全を有する患者を治療することに関し、患者は、上昇したレベルのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを有する。いくつかの実施形態では、患者ＮＰ（例えば、ＢＮＰ及び／又はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）は、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して上昇している。
ＢＮＰ及びＮＴ－ｐｒｏＢＮＰはどちらも、心内圧上昇による心房及び心室の膨張のマーカーである。Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）は、症状の重症度に基づいて、うっ血性心不全（ＣＨＦ）の４段階機能分類システムを開発した。研究により、循環ＢＮＰ及びＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの測定濃度は、ＮＹＨＡ分類に基づいてＣＨＦの重症度とともに増加することが実証された。
正常な血漿ＮＰ濃度を有する患者はＨＦを有する可能性が低い。非急性設定における正常値の上限は、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）については３５ｐｇ／ｍＬであり、Ｎ末端ｐｒｏ－ＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）については１２５ｐｇ／ｍＬであり、急性設定では、より高い値を使用すべきである［例えば、ＢＮＰ、１００ｐｇ／ｍＬ；ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、３００ｐｇ／ｍＬ；中領域ｐｒｏ Ａ型ナトリウム利尿ペプチド（ＭＲ－ｐｒｏＡＮＰ）、１２０ｐｍｏｌ／Ｌ］。診断値は、ＨＦｒＥＦ及びＨＦｐＥＦと同様に適用される。平均して、値は、典型的には、ＨＦｒＥＦよりもＨＦｐＥＦの方が低い。
高ＮＰの多数の心血管及び非心血管の原因があり、ＨＦにおけるそれらの診断有用性を弱め得る。これらの中で、ＡＦ、年齢及び腎不全は、ＮＰ測定値の解釈を妨げる最も重要な要因である。一方、ＮＰレベルは、肥満患者において不釣り合いに低くなり得る。
ＢＮＰ
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は上昇したレベルのＢＮＰを有する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも３５ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも４０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも６０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも７０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも８０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも９０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１５０ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも２００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも３００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも４００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも５００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１０００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも５０００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１０，０００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１５，０００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも２０，０００ｐｇ／ｍＬのＢＮＰレベルを有する患者に関する。
いくつかの実施形態では、本開示は、心不全患者の１又は複数のナトリウム利尿ペプチドをより正常なレベル（例えば、同程度の年齢及び性別の健康な人と比較して正常）に調整する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも１０ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５０ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも１００ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも２００ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５００ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも１０００ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５０００ｐｇ／ｍＬ低下させることに関する。
いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５％（例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも１０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも１５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも２０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも２５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも３０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも３５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも４０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも４５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも５５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも６０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも６５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも７０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも７５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも８０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも８５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも９０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくとも９５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＢＮＰを少なくと１００％低下させることに関する。
ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は、少なくとも１００ｐｇ／ｍＬ（例えば、１００、１２５、１５０、２００、３００、４００、５００、１０００、３０００、５０００、１０，０００、１５，０００、２０，０００、２５，０００、又は３０，０００ｐｇ／ｍＬ）のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１２５ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１５０ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも２００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも３００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも４００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも５００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも５０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１０，０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１５，０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも２０，０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも２５，０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも３０，０００ｐｇ／ｍＬのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルを有する患者に関する。
いくつかの実施形態では、本開示は、心不全患者の１又は複数のナトリウム利尿ペプチドをより正常なレベル（例えば、同程度の年齢及び性別の健康な人と比較して正常）に調整する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１０ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２５ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５０ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１０，０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１５，０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２０，０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２５，０００ｐｇ／ｍＬ減少させることに関する。
いくつかの実施形態では、本方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５％（例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも１５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも２５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも３０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも３５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも４０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも４５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも５５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも６０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも６５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも７０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも７５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも８０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも８５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも９０％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを少なくとも９５％減少させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを１００％減少させることに関する。
トロポニンレベル
トロポニン又はトロポニン複合体は、平滑筋ではなく骨格筋及び心筋の筋収縮に不可欠な３つの調節タンパク質（トロポニンＣ、トロポニンＩ、トロポニンＴ）の複合体である。血液トロポニンレベルは、脳卒中の診断マーカーとして使用され得るが、この測定の感度は低い。心臓特異的トロポニンＩ及びＴの測定は、心筋梗塞及び急性冠動脈症候群の管理における診断及び予後の指標として広く使用されている。
トロポニンの特定のサブタイプ（心臓Ｉ及びＴ）は、心臓の筋肉（心筋）に対する損傷の感受性のある特異的な指標である。それらは、胸痛又は急性冠動脈症候群を有する人々において不安定狭心症と心筋梗塞（心臓発作）とを区別するために血液中で測定される。最近心筋梗塞を発症した人は、心筋の損傷領域を有し、血液中の心筋トロポニンレベルが上昇する。これは、心臓血管の重度の収縮を伴う心筋梗塞の一種である冠動脈攣縮を有する人にも起こり得る。心筋梗塞後、トロポニンは２週間まで高いままであり得る。
心筋トロポニンは心筋損傷のマーカーである。心筋梗塞を示すトロポニン上昇の診断基準は、現在、ＷＨＯによって２μｇ以上の閾値で設定されている。クレアチンキナーゼ等の他の心臓バイオマーカーの臨界レベルも関連する。心筋の損傷及び死に直接的又は間接的につながる他の状態も、腎不全等のトロポニンレベルを上昇させる可能性がある。正常な冠動脈を有する個体における重度の頻脈（例えば、上室性頻脈に起因する）もまた、例えば、トロポニンの増加をもたらし得、これは、酸素要求量の増加及び心筋への不十分な供給に起因すると推定される。
トロポニンは心不全患者において増加し、この場合、トロポニンは死亡率及び心室リズム異常も予測する。それらは、心筋炎及び心筋の関与を伴う心膜炎等の炎症状態（これはその後、心筋周囲炎と呼ばれる）を上昇させ得る。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は上昇したレベルのトロポニンを有する。いくつかの実施形態では、本開示は、心不全患者の１又は複数のパラメータをより正常なレベル（例えば、同程度の年齢及び性別の健康な人と比較して正常）に調整する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも１％（例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００％）低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも１％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも１０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも１５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも２０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも２５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも３０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも３５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも４０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも４５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも５０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも５５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも６０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも６５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも７０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも７５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも８０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも８５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも９０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを少なくとも９５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のトロポニンレベルを１００％低下させることに関する。
運動能力（６ＭＷＤ及びＢＤＩ）
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む。運動能力の任意の適切な尺度を使用することができる。例えば、患者が６分間にどれだけ遠くまで歩くことができるか、すなわち６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を測定する６分間歩行試験（６ＭＷＴ）における運動能力は、心不全の重症度及び疾患の進行を評価するために頻繁に使用される。Ｂｏｒｇ呼吸困難指数（ＢＤＩ）は、知覚された呼吸困難（呼吸不快感）を評価するための数値スケールである。これは、例えば、６ＭＷＴの完了後に、息切れの程度を測定し、ここで、０のＢＤＩは、息切れがないことを示し、１０は、最大の息切れを示す。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも１０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも３０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも４０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも６０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも７０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも８０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも９０メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、心不全（例えば、加齢に伴う心不全）を有する患者において６ＭＷＤを少なくとも１００メートル増加させることに関する。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を４週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を８週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を１２週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を１６週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を２０週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を２２週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を２４週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を２６週間受けた後に試験される。いくつかの実施形態では、６ＭＷＤは、患者が本明細書に開示されるものを利用する治療を２８週間受けた後に試験される。
いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも０．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも１の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも１．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも２の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも２．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも３の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも３．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも４の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも４．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも５．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも６の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも６．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも７の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも７．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも８の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも８．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも９の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも９．５の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において少なくとも３の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、加齢に関連する心不全を有する患者において１０の指数点だけＢＤＩを低下させることに関する。
応力拡張期試験
労作性呼吸困難の患者では、運動血行動態反応は、安静時のＬＶ拡張機能の評価よりも多くの生理学的及び診断的情報を提供する。したがって、呼吸困難が左室拡張機能障害の結果であることを確認するために、運動に対する血行動態応答を評価することが有用である。拡張期ストレス試験には、侵襲的及び心エコー検査の２種類がある。侵襲的拡張期ストレス試験は、患者がカテーテルテーブルに固定された自転車で運動している間に行われる。運動中の肺毛細血管楔入圧（ＬＶ充満圧の間接的パラメータ）の変化は、右内頸静脈を通る右心臓カテーテル法によって、又は橈骨動脈アクセス部位からＬＶ内にピグテールカテーテルを導入することによって評価される。ＬＶ収縮期圧、最小ＬＶ圧、ＬＶ拡張末期圧、及び平均ＬＶ拡張期圧を測定する。非侵襲的尺度は、典型的にはＬＶ充満圧を決定するために測定されるパルス及び組織ドップラーパラメータＥ／ｅ’の組み合わせを含む。とりわけ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙは、以下のパラメータの存在下で拡張期ストレス試験を異常とみなすべきであると提案している：（ｉ）中隔ｅ’速度＜７ｃｍ／ｓ又は横方向ｅ’速度＜静止時１０ｃｍ／ｓ；（ｉｉ）運動による平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５；（ｉｉｉ）運動によるピーク三尖弁逆流（ＴＲ）速度＞２．８ｍ／ｓ、及び（ｉｖ）＞３４ｍＬ／ｍ２の左心房体積指数（ＬＡＶＩ）。運動中のＥ／ｅ’とＴＲ＞２．８ｍ／ｓの組み合わせは、ＨＦｐＥＦの検出に対して感受性であることが示されている。Ｅ／ｅ’の上昇は酸素消費量の減少に関連するが、Ｅ／ｅ’及びＴＲ速度の増加の組み合わせは運動中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ値の上昇に関連することも示されている。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者はストレス拡張期試験を使用して拡張機能障害について評価される。いくつかの実施形態では、拡張期ストレス試験は、カテーテル留置テーブルに固定された自転車で行われる。いくつかの実施形態では、拡張期ストレス試験は、心エコー検査を使用して行われる。いくつかの実施形態では、異常な拡張期ストレス試験を有する患者は、中隔ｅ’速度＜７ｃｍ／ｓ又は横方向ｅ’速度＜静止時１０ｃｍ／ｓ、運動による平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５、運動によるピーク三尖弁逆流（ＴＲ）速度＞２．８ｍ／ｓ、及び＞３４ｍＬ／ｍ２の左心房容積指数（ＬＡＶＩ）を含むパラメータを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は患者のストレス拡張期検査結果を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、拡張期ストレス試験によって報告されるように患者の拡張機能を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、安静時に中隔ｅ’速度を７ｃｍ／ｓ超まで、又は側方ｅ’速度を１０ｃｍ／ｓ超まで増加させ、運動により平均Ｅ／ｅ’を１４未満まで、又は中隔Ｅ／ｅ’比を１５未満まで減少させ、運動によりピーク三尖弁逆流（ＴＲ）速度を２．８ｍ／ｓ未満まで減少させ、左心房容積指数（ＬＡＶＩ）を３４ｍＬ／ｍ２未満まで減少させる。
Ｈ２ＦＰＥＦスコア
加齢に関連する心不全を含むＨＦｐＥＦが疑われる患者では、Ｈ２ＦＰＥＦスコアを使用して、呼吸困難の非心臓性原因に対するＨＦｐＥＦの確率を推定することができる。呼吸困難は、高齢心不全患者における心不全の一般的な徴候である。Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃのグループは、以下の臨床変数に割り当てられた点の合計であるＨ２ＦＰＥＦスコアを開発し、臨床的に検証した：重度（例えば、＞３０ｋｇ／ｍ２のボディーマス指数＝２点）；高血圧（例えば、患者は２種類以上の降圧薬を服用している＝１点）；動脈細動（ＡＦ）（例えば、発作性又は持続性＝３点）；肺高血圧症（ＰＨ）（例えば、心エコー検査による＞３５ｍｍＨｇの肺動脈収縮期圧＝１点）；高齢者（例えば、患者の年齢は＞６０歳＝１点）；充満圧（例えば、９超のＥ／ｅ’を測定する心エコー検査＝１点）ＨＦｐＥＦが患者の症状の原因である確率は、総Ｈ２ＦＰＥＦスコアが増加するにつれて増加する（０の最低から９の最高までの範囲）。高齢（例えば、患者は６０歳以上である）のみの因子は、Ｈ２ＦＰＥＦスコアを構成する合計９点のうちの１点である。０又は１の低いＨ２ＦＰＥＦスコアは、患者におけるＨＦｐＥＦの低い（例えば、＜２５％）確率に関連する。低いスコアは、症状が非心臓性の原因に起因する可能性が最も高いことを示唆する。しかしながら、症状の原因が非心臓性の原因についての評価の後で不確かなままである場合、ＨＦｐＥＦが存在するかどうかを判定するために、心臓病学相談及び右心臓カテーテル検査が提案される。２～５の中間Ｈ２ＦＰＥＦスコアは、ＨＦｐＥＦの中間（例えば、４０～８０％）確率と関連付けられる。中間スコアリング患者では、ナトリウム利尿ペプチドレベルが高い（例えば、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）＞１００ｐｇ／ｍＬ又はＮ末端プロＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）＞３００ｐｇ／ｍＬ）かどうか、及び有意な肺疾患が存在しないかどうかを決定するための評価が行われる。両方の基準が満たされる場合、臨床所見はＨＦｐＥＦについて診断的である。基準の一方又は両方が満たされない場合、典型的には、より多くの情報を収集するために心臓病診察及び右心臓カテーテル検査が行われる。右心カテーテル法では、安静時に１５ｍｍＨｇ以上又は運動中に２５ｍｍＨｇ以上の肺毛細血管楔入圧（ＰＣＷＰ）がＨＦｐＥＦの診断となる。６以上のＨ２ＦＰＥＦスコアは、ＨＦｐＥＦの９０％超の確率に関連し、したがってＨＦｐＥＦの診断と考えられる。Ｈ２ＦＰＥＦスコアの２つの成分：推定肺動脈収縮期圧（ＰＡＳＰ）及びＥ／ｅ’比は、ドップラー心エコー検査から得られる。心エコー検査による推定ＰＡＳＰの上昇は、ＨＦｐＥＦ患者において非常に一般的であり、呼吸困難を伴う高齢患者における上昇したＰＡＳＰの同定は、ＨＦｐＥＦの診断の検討を開始すべきである。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者はＨ２ＦＰＥＦスコアを使用してＨＦｐＥＦについて評価される。いくつかの実施形態では、患者は、０のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、１のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、２のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、３のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、４のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、５のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、６のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、７のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、８のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、９のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、約０～約１のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、約２～約５のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、約６～約９のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９点）低下させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも１ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも２ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも３ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも４ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも５ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも６ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも７ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも８ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＨ２ＦＰＥＦスコアを少なくとも９ポイント低下させることに関する。
右心カテーテル法
右心カテーテル法（肺カテーテル法と呼ばれることもある）は、ＨＦｐＥＦの診断及び評価に普遍的に必要とされていない。しかしながら、中間のＨ２ＦＰＥＦスコアを有する選択された患者（及び症状の原因が決定されていない低Ｈ２ＦＰＥＦスコアを有する選択された患者）では、右心カテーテル法は、ＨＦｐＥＦの診断を行うか又は除外するのを助けるために、安静時及び運動中の心充満圧の評価に有用である。右心カテーテル法は、心臓がどの程度圧送しているか（例えば、毎分どれだけ圧送するか）を確認し、心臓及び肺の主血管の血圧を測定するために使用される試験である。右心カテーテル法は、動脈の閉塞を確認するために使用される左心カテーテル法（冠動脈造影法）とは異なる。右心カテーテル法では、肺動脈（ＰＡ）カテーテルが心臓の右側に、そして肺に血液を運ぶ主動脈である肺動脈に誘導される。心臓を通る血流を観察し、心臓及び肺の内部の圧力を測定することができる。カテーテルが肺動脈に向かって前進すると、右心房及び右心室を含む心臓の右側の心腔の内部で、圧力が途中で測定される。心臓の左側の圧力の間接測定も測定することができる。心拍出量（例えば、心臓が毎分送り出す血液の量）も決定される。安静時に１５ｍｍＨｇ以上又は運動中に２５ｍｍＨｇ以上の肺毛細血管楔入圧（ＰＣＷＰ）がＨＦｐＥＦの診断である。いくつかの実施形態では、患者は、右心カテーテル法を用いて心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、右心カテーテル法を使用してＨＦｐＥＦと診断される。いくつかの実施形態では、右心カテーテル法で測定した安静時のＰＣＷＰが１５ｍｍＨｇ以上の対象は、ＨＦｐＥＦを有する。いくつかの実施形態では、右心カテーテル法で測定された運動中に２５ｍｍＨｇ以上のＰＣＷＰを有する対象は、ＨＦｐＥＦを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は肺毛細血管楔入圧（ＰＣＷＰ）を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、静止時のＰＣＷＰを少なくとも１５ｍｍＨｇ未満に低下させる。いくつかの実施形態では、方法は、運動中のＰＣＷＰを少なくとも２５ｍｍＨｇ未満に低下させる。
ＨＦｐＥＦを診断するためのＨｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＨＦＡ）ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ（ＥＳＣ）基準
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎは最近、コンセンサスを公表し、ＨＦｐＥＦの診断基準を提案した（表１２）。このコンセンサスは、臨床評価からより具体的な検査まで段階的な診断アプローチを提供することを目的とした。基準を３つの群：機能的、形態学的及びバイオマーカーに分けた。主な機能基準には、ＬＶ拡張機能障害（中隔ｅ’の減少、Ｅ／ｅ’の増加及びＴＲの増加）の評価のためのガイドラインで提案された心エコーパラメータが含まれた（表１０も参照）。軽微な機能基準には、Ｅ／ｅ’の中間値及びＬＶ全体的な長手方向の歪みの減少（＜－１６％）が含まれた。主な形態学的基準には、拡張型左心房容積指数（洞調律ではＬＡＶＩ≧３４ｍｌ／ｍ２及び心房細動では≧４０ｍｌ／ｍ２）、又は男性ではＬＶ質量指数（ＬＶＭＩ）≧１４９ｇ／ｍ２又は女性では≧１２２ｇ／ｍ２として定義される左心室肥大、並びに相対壁厚≧０．４２の増加が含まれる。興味深いことに、軽微な形態学的基準は、ＬＡ体積指数の高い正常値（洞調律では２９～３４ｍｌ／ｍ２、心房細動では３４～４０ｍｌ／ｍ２）、現在の心エコーガイドラインによって定義されているＬＶ質量指数の増加（男性では１１５ｇ／ｍ２以上、女性では９５ｇ／ｍ２以上）、又は相対壁厚≧０．４２若しくはＬＶ壁厚≧１２ｍｍであった。主要及び副次バイオマーカー基準は、洞調律及び心房細動を有する患者の様々なカットオフ値（値は心房細動群では３倍高い）での異なるレベルのＢＮＰ及びｐｒｏ－ＢＮＰを指す。各グループからの１つの基準のみをスコアに含めることができる。５点以上のスコアはＨＦｐＥＦを示す。２～４点のスコアは、拡張期ストレス試験又は侵襲的血行動態測定を追求すべきであることを示す。１点以下のスコアは、ＨＦｐＥＦの診断の可能性が低いことを示す。（Ｐｉｅｓｋｅ Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ，２０１９，４０：３２９７－３３１７）ａｎｄ（Ｔａｄｉｃ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０２０，１０．１００７／ｓ１０７４１－０２０－０９９６６－４）。
Figure 2024511315000092
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者はＥｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＥＨＦＡ）基準を使用してＨＦｐＥＦについて評価される。
いくつかの実施形態では、患者は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＥＨＦＡ）スコアが０である。いくつかの実施形態では、患者は、１のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、２のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、３のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、４のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、５のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、６のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、７のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、患者は、８のＥＨＦＡスコアを有する。いくつかの実施形態では、５点以上のＥＨＦＡスコアを有する患者が、ＨＦｐＥＦと診断される。いくつかの実施形態では、２～４点のＥＨＦＡスコアを有する患者は、ＨＦｐＥＦを有し得、確認するために拡張期ストレス試験又は侵襲的血行動態測定を必要とする。いくつかの実施形態では、１ポイント以下のＥＨＦＡスコアを有する患者は、ＨＦｐＥＦを有する可能性が低い。
いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の主要なＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の主要な機能的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要な機能的基準は、運動による中隔のｅ’速度＜７ｃｍ／ｓ、横方向ｅ’速度＜静止時１０ｃｍ／ｓ、平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５及び運動による＞２．８ｍ／ｓのＴＲ速度からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は、７ｃｍ／ｓ未満の中隔ｅ’速度を有する。いくつかの実施形態では、患者は、静止時に１０ｃｍ／ｓ未満の横方向ｅ速度を有する。いくつかの実施形態では、患者は、運動により平均Ｅ／ｅ’＞１４又は中隔Ｅ／ｅ’比＞１５を有する。いくつかの実施形態では、患者は、運動により２．８ｍ／ｓを超えるＴＲ速度を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の主要な形態学的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要な形態学的基準は、男性ではＬＡＶＩ＞３４ｍＬ／ｍ２及びＬＶＭＩ≧１４９ｇ／ｍ２及び女性では≧１２２ｇ／ｍ２及びＲＷＴ＞０．４２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は、３４ｍＬ／ｍ２を超えるＬＡＶＩを有する。いくつかの実施形態では、男性患者は、１４９ｇ／ｍ２以上のＬＶＭＩを有する。いくつかの実施形態では、女性患者は、ＬＡＶＩ≧１２２ｇ／ｍ２を有する。いくつかの実施形態では、患者はＲＷＴ＞０．４２を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の主要なバイオマーカーＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、主要なバイオマーカー基準は洞調律であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ＞８０ｐｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、患者は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ＞８０ｐｇ／ｍＬを有する。いくつかの実施形態では、主要なバイオマーカー基準は心房細動であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞６６０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ＞２４０ｐｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、患者は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞６６０ｐｇ／ｍＬ又はＢＮＰ＞２４０ｐｇ／ｍＬを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の主要な機能的ＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、中隔のｅ’速度を７ｃｍ／ｓ超に増加させること、安静時に横方向のｅ’速度を１０ｃｍ／ｓ超に増加させること、運動によりＥ／ｅ’を１４未満又は中隔のＥ／ｅ’比を１５未満に減少させること、及び運動によりＴＲ速度を２．８ｍ／ｓ未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の主要な機能基準を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の主要な形態学的ＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、ＬＡＶＩを３４ｍＬ／ｍ２未満に減少させ、ＬＶＭＩを男性では１４９ｇ／ｍ２未満に減少させ、女性では１２２ｇ／ｍ２未満に減少させ、ＲＷＴを０．４２未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の主要な形態学的基準を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の主要なバイオマーカーＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜２２０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜８０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、洞調律を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜６６０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜２４０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、心房細動を改善する。
いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の軽微なＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の軽微な機能的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、副次的機能基準は、平均Ｅ／ｅ’９～１４及びＧＬＳ＜１６％からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は平均Ｅ／ｅ’９～１４を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＧＬＳ＜１６％を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の軽微な形態学的ＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、軽微な形態学的基準は、ＬＡＶＩ２９～３４ｍＬ／ｍ２、男性ではＬＶＭＩ＞１１５ｇ／ｍ２、女性ではＬＶＭＩ９５ｇ／ｍ２、ＲＷＴ＞０．４２、及びＬＶ壁厚≧１２ｍｍからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者はＬＡＶＩ２９～３４ｍＬ／ｍ２を有する。いくつかの実施形態では、男性患者は、１１５ｇ／ｍ２を超えるＬＶＭＩを有する。いくつかの実施形態では、女性患者は、９５ｇ／ｍ２のＬＶＭＩを有する。いくつかの実施形態では、患者はＲＷＴ＞０．４２を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＨＦｐＥＦについての１又は複数の軽微なバイオマーカーＥＨＦＡ基準を有する。いくつかの実施形態では、患者は、１２ｍｍ以上のＬＶ壁厚を有する。いくつかの実施形態では、マイナーなバイオマーカー基準は、５－ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ１２５～２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ３５～８０ｐｇ／ｍＬを有する洞調律である。いくつかの実施形態では、患者は、５－ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ１２５～２２０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ３５～８０ｐｇ／ｍＬを有する。いくつかの実施形態では、マイナーなバイオマーカー基準が心房細動であり、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ３６５～６６０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ１０５～２４０ｐｇ／ｍＬを有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ３６５～６６０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＢＮＰ１０５～２４０ｐｇ／ｍＬを有する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の軽微な機能的ＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｅ／ｅ’を８以下に減少させること及びＧＬＳを＞１６％に増加させることを含む、軽微な機能的基準を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の軽微な形態学的ＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、方法は、ＬＡＶＩを３４ｍＬ／ｍ２未満に減少させること、ＬＶＭＩを男性では１１５ｇ／ｍ２未満に減少させること、ＬＶＭＩを女性では９５ｇ／ｍ２未満に減少させること、ＲＷＴを０．４２未満に減少させること、及びＬＶ壁厚を１２ｍｍ未満に減少させることからなる群から選択される１又は複数の軽微な形態学的基準を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の軽微なバイオマーカーＥＨＦＡ基準を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、５－ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜２２０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜８０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、洞調律を改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを＜６６０ｐｇ／ｍＬに減少させること及び／又はＢＮＰを＜２４０ｐｇ／ｍＬに減少させることを含む、心房細動を改善する。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８ポイント）低下させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも１ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも２ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも３ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも４ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも５ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも６ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも７ポイント低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者のＥＨＦＡスコアを少なくとも８ポイント低下させることに関する。
入院率
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者の入院率を（例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％）低下させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも１％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも２％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも３％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも４％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも１０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも１５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも２０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも２５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも３０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも３５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも４０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも４５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも５０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも５５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも６０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも６５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも７０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも７５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも８０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも８５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも９０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を少なくとも９５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の入院率を１００％低下させることに関する。
いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、患者が病院に留まる必要性を低減することを含む。いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、患者の総通院回数を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、患者の最初の入院までの時間を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、患者の寿命を延ばすことを含む。いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、患者の来院間の時間を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、患者の入院率を低下させることは、再発患者の通院回数を減少させることを含む。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者の入院率を低下させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者が病院に留まる必要性を低減する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の総通院回数を減らす。いくつかの実施形態では、方法は、患者の最初の入院までの時間を増加させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、方法は、来院間の時間を増加させる。いくつかの実施形態では、方法は、再発性来院の回数を減少させる。
心不全の悪化率
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は、患者の心不全の悪化速度を（例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％）減少させる。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも１％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも２％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも３％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも４％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも１０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも１５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも２０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも２５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも３０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも３５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも４０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも４５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも５０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも５５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも６０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも６５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも７０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも７５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも８０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも８５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも９０％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を少なくとも９５％低下させることに関する。いくつかの実施形態では、方法は、患者の心不全の悪化率を１００％低下させることに関する。
心臓イメージング
心エコー図
本明細書で使用される「心エコー検査」という用語は、二次元／三次元心エコー検査、パルス波ドップラー及び連続波ドップラー、カラードップラー、組織ドップラー撮像（ＴＤＩ）コントラスト心エコー検査、変形撮像（歪み速度及び歪み速度）、並びに経胸壁心エコー検査（ＴＴＥ、又は二次元心エコー検査）を指す。ＴＴＥは、典型的には、左右両心室の心筋の収縮機能及び拡張機能を評価するために選択される方法である。いくつかの実施形態では、患者は、心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、二次元心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、三次元心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、パルス波及び連続波ドップラー心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、カラードップラー心エコー検査を使用して、患者が心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、組織ドップラー撮像（ＴＤＩ）造影心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、変形イメージング（歪み及び歪み速度）心エコー検査を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、経胸壁心エコー検査（ＴＴＥ）を使用して心不全について評価される。
心エコー検査は、診断を確立するためにＨＦが疑われる患者において有用で広く利用可能な検査である。心エコー検査は、限定するものではないが、ＬＶ壁厚（ＬＶＷＴ）、ＬＶ質量（ＬＶＭ）、ＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、ＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）、短縮率（ＦＳ）（式ＦＳ＝１００％ｘ［（ＥＤＤ－ＥＳＤ）／ＥＤＤ］を使用して計算される）、ＬＶ拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）、ＬＶ収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）、駆出率（式ＥＦ＝１００％ｘ［（ＥＤＶ－ＥＳＶ）／ＥＤＶ］を使用して計算される）、肥大指数（ＬＶＥＳＶに対するＬＶＭの比として計算される）、及び相対壁厚（ＬＶＥＳＤに対するＬＶＷＴの比として計算される）を含む、ＬＶ構造及び収縮機能（例えば、乳頭筋レベルで胸骨傍短軸視野でＭモードによって測定される）に対する情報を提供する。この情報は、診断の確立及び適切な治療の決定において重要である。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ壁厚（ＬＶＷＴ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ質量（ＬＶＭ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の短縮率（ＦＳ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の駆出率は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の肥大指数は、心エコー検査を使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の相対的な壁厚は、心エコー検査を使用して測定される。加齢に関連する心不全を示す可能性がある多数の臨床症状因子、心エコー検査特徴、及び他の特徴がある。いくつかの実施形態では、患者に対して実施された心エコー図は、構造的左心異常を示す。いくつかの実施形態では、構造的左心異常は、左心臓弁の疾患である。いくつかの実施形態では、構造的左心異常は、左心房拡大（例えば、＞４．２ｃｍ）である。
左心不全の症状を有する患者では、心エコー図を実施して様々なパラメータを評価することができる。例えば、いくつかの実施形態では、患者に対して実施されるドップラーを使用する心エコー図は、充満圧の上昇及び／又は拡張機能障害（例えば、増加したＥ／ｅ’又は＞２～３型僧帽弁流動異常、表９、１０、１２を参照のこと）の指標を示すことができる。いくつかの実施形態では、患者に対して行われる撮像（例えば、心エコー図、ＣＴスキャン、胸部Ｘ線、又は心臓ＭＲＩ）は、Ｋｅｒｌｅｙ Ｂ線を示す。いくつかの実施形態では、患者に対して行われるイメージング（例えば、心エコー図、ＣＴスキャン、胸部Ｘ線、又は心臓ＭＲＩ）は、胸水を示す。いくつかの実施形態では、患者に対して行われるイメージング（例えば、心エコー図、ＣＴスキャン、胸部Ｘ線、又は心臓ＭＲＩ）は、肺水腫を示す。いくつかの実施形態では、患者に対して行われる撮像（例えば、心エコー図、ＣＴスキャン、胸部Ｘ線、又は心臓ＭＲＩ）は、左心房拡大を示す。Ｉｄ．
ＨＦｐＥＦ／ＨＦｍｒＥＦ心不全の重要な機能的変化は、Ｅ／ｅ’≧１３並びに平均ｅ’中隔及び側壁＜９ｃｍ／ｓを含む。他の（間接的な）心エコー法に由来する測定値は、縦歪み又は三尖弁逆流速度（ＴＲＶ）である。ＨＦｐＥＦが疑われる患者を同定する際に、心エコー検査は、ＬＶＥＦが保存されている（例えば、５０％以上）こと、及びＬＶ容積が正常であることを実証するのに役立つ。心エコー検査はまた、弁膜症及び心膜症を含む、ＨＦｐＥＦ以外のＬＶＥＦが５０％以上のＨＦの原因を特定するのに役立つ。心エコー検査によって測定されるＨＦｐＥＦで定義されるパラメータについては、表９、１０、及び１１を参照されたい。心エコー検査はまた、右心室（ＲＶ）及び右心房（ＲＡ）の寸法を含むがこれらに限定されない、ＲＶの構造及び機能の評価、並びにＲＶ収縮機能及び／又は肺動脈圧の推定を含み得る。ＲＶ収縮機能を反映するパラメータの中で、以下の測定値が特に重要である：三尖弁輪平面収縮可動域（ＴＡＰＳＥ；異常なＴＡＰＳＥ＜１７ｍｍはＲＶ収縮機能不全を示す）及び組織ドップラー由来の三尖弁の外側環状収縮速度（ｓ’）（ｓ’速度＜９．５ｃｍ／ｓはＲＶ収縮機能不全を示す）。収縮期肺動脈圧は、下大静脈（ＩＶＣ）サイズ及びその呼吸関連虚脱に基づくＲＡ圧の推定値と共に、最大三尖逆流ジェット及び三尖収縮勾配の最適な記録から導出される。運動又は薬理学的ストレス心エコー検査は、誘導性虚血及び／又は心筋バイアビリティの評価のために、及び弁疾患（例えば、動的僧帽弁逆流、低流量－低勾配大動脈弁狭窄症）を有する患者のいくつかの臨床シナリオで使用され得る。また、ストレス心エコー検査により、安静時に労作性呼吸困難、ＬＶＥＦの保存、及び不確定な拡張期パラメータを有する患者における運動曝露に関連する拡張機能障害の検出が可能になり得るという示唆もある。
経胸壁心エコー検査（ＴＴＥ）は、ＨＦｒＥＦ、ＨＦｍｒＥＦ又はＨＦｐＥＦのいずれかの診断を確立するために、ＨＦが疑われる患者の心筋の構造及び機能の評価に推奨される。更に、ＨＦｒＥＦに推奨される根拠に基づく薬理学的及び装置（ＩＣＤ、ＣＲＴ）治療に適しているＨＦ患者を特定するために、ＬＶＥＦを評価するためにＴＴＥが推奨される。弁疾患の矯正に適したものを同定するために、ＨＦｒＥＦ、ＨＦｍｒＥＦ又はＨＦｐＥＦのいずれかの診断が既に確立されている患者の弁疾患、右室機能及び肺動脈圧を評価するために、及び／又は心筋に損傷を与える可能性がある治療（例えば、化学療法）に曝露される患者の心筋の構造及び機能の評価のために提供される。前臨床段階で心筋機能障害を同定するために、ＨＦを発症するリスクがある患者のＴＴＥプロトコルでは他の技術（収縮組織ドップラー速度及び変形指数、すなわち歪み及び歪み速度を含む）を考慮すべきである。
ＨＦｐＥＦでは、ＥＦは正常であり、主な血行動態障害は充満圧の上昇である。圧力が高く、うっ血が安静時に存在する場合、ＨＦｐＥＦは、病歴、身体検査、Ｘ線撮影、ＮＰレベル、及び心エコー検査に基づいて容易に診断される。しかしながら、初期段階のＨＦｐＥＦを有する多くの患者は、明らかな容積過負荷がない場合に運動不耐性の有意な症状を有する。一部の患者における侵襲的評価は、以前には疑われていなかった充満圧の病理学的上昇を明らかにすることがあり、最近の研究は、正常検査、心エコー検査、ＮＰ、及び正常な静止時血行動態を有する患者の中でも、多くの患者が運動のストレス中にＨＦｐＥＦに特徴的な充満圧の病理学的上昇を依然として発症し得ることを見出した。肺動脈圧は初期段階のＨＦｐＥＦにおける左心充満圧と非常に密接に追跡し、前者が運動中の心エコー検査によって正確に推定され得る場合、これは正常なＥＦ及び労作性呼吸困難を有する患者の有用な非侵襲的スクリーニングとして役立ち得ることを示唆している。いくつかの実施形態では、患者は、運動中に心エコー検査を使用して心不全について検査される。いくつかの実施形態では、患者は、運動中に心エコー検査を使用してＨＦｐＥＦについて検査される。
心臓磁気共鳴（ＣＭＲ）
ＣＭＲは、左心室及び右心室の両方の容積、質量、及びＥＦの測定のためのゴールドスタンダードとして認められている。これは、非診断的心エコー検査（特に右心臓のイメージング）を受けた患者にとって最良の代替心臓イメージングモダリティであり、複雑な先天性心疾患を有する患者において選択される方法である。心臓磁気共鳴（ＣＭＲ）は、心エコー検査を十分に補完する非侵襲性組織の特徴付けの独自の能力を用いて、心臓の解剖学的及び機能的定量化の両方を測定する。心尖部から基部までの短軸のＬＶをカバーするＣＭＲイメージングは、左心室（ＬＶ）容積、駆出率（ＥＦ）及び領域機能を測定するために使用される。３Ｄデータセットは、幾何学的仮定の影響を受けず、したがって、特に再構築された心室において、二次元（２Ｄ）心エコー検査と比較して誤差が生じにくい。新規ＣＭＲ組織特性評価技術は、ＣＭＲリラクソメトリー（Ｔ１及びＴ２マッピング及び細胞外体積分率（ＥＣＶ））と呼ばれ、組織特性評価に対するより詳細で定量的なアプローチ及び腔内流れに関する定量的情報を提供する４Ｄ－Ｆｌｏｗを可能にする。現在の用途は、拡張機能障害の検出に特に有用であるようであるが、臨床診療における適用性を確認するために、従来のドップラー及び組織ドップラー（例えば、心エコー検査）分析との特定の比較に値する。血行再建を決定する前に、ＨＦ及びＣＡＤを有する患者（冠動脈血行再建に適していると考えられる）における心筋虚血及び生存率の評価のために、非侵襲的ストレスイメージング（ＣＭＲ、ストレス心エコー検査、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ）が考慮され得る。いくつかの実施形態では、患者は、ＣＭＲを使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、ＣＭＲ弛緩法（Ｔ１及びＴ２マッピング及び細胞外体積分率（ＥＣＶ））を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、ＣＭＲ及び４Ｄ－Ｆｌｏｗを使用して心不全について評価される。
ＣＭＲは、限定するものではないが、ＬＶ壁厚（ＬＶＷＴ）、ＬＶ質量（ＬＶＭ）、ＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、ＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）、短縮率（ＦＳ）（式ＦＳ＝１００％ｘ［（ＥＤＤ－ＥＳＤ）／ＥＤＤ］を使用して計算される）、ＬＶ拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）、ＬＶ収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）、駆出率（式ＥＦ＝１００％ｘ［（ＥＤＶ－ＥＳＶ）／ＥＤＶ］を使用して計算される）、肥大指数（ＬＶＥＳＶに対するＬＶＭの比として計算される）、及び相対壁厚（ＬＶＥＳＤに対するＬＶＷＴの比として計算される）を含む、ＬＶ構造及び収縮機能に対する情報を提供する。この情報は、診断の確立及び適切な治療の決定において重要である。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ壁厚（ＬＶＷＴ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ質量（ＬＶＭ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の短縮率（ＦＳ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ拡張末期容積（ＬＶＥＤＶ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者のＬＶ収縮末期容積（ＬＶＥＳＶ）は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の駆出率は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の肥大指数は、ＣＭＲを使用して測定される。いくつかの実施形態では、患者の相対的な壁厚は、ＣＭＲを使用して測定される。
ＣＭＲは、Ｔ１マッピングと共に遅延ガドリニウム増強（ＬＧＥ）を使用して心筋線維症を評価するための好ましい撮像方法であり、ＨＦ病因の確立に有用であり得る。例えば、ＬＧＥを伴うＣＭＲは、ＨＦの虚血性起源と非虚血性起源との間の区別を可能にし、心筋線維症／瘢痕を可視化することができる。更に、ＣＭＲは、心筋炎、アミロイドーシス、サルコイドーシス、シャーガス病、ファブリー病非圧縮心筋症及びヘモクロマトーシスの心筋組織の特徴付けを可能にする。ＣＭＲはまた、ＨＦ及び冠動脈疾患（ＣＡＤ）を有する患者における心筋虚血及び生存率の評価に使用され得る（冠動脈血行再建に適していると考えられる）。いくつかの実施形態では、患者は、後期ガドリニウム増強（ＬＧＥ）及び／又はＴ１マッピングを伴うＣＭＲを使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者の心臓の線維症及び／又は瘢痕は、ＣＭＲを使用して測定される。
ＣＭＲの臨床的限界には、局所的な専門知識、心エコー検査と比較して低い可用性及び高いコスト、金属インプラント（心臓装置を含む）を有する患者における安全性に関する不確実性、及び頻脈性不整脈を有する患者における信頼性の低い測定が含まれる。閉所恐怖症は、ＣＭＲの重大な制限である。線状ガドリニウム主体型造影剤は、腎性全身性線維症を引き起こす可能性があるため（これは、より新しい環状ガドリニウム主体型造影剤ではそれほど懸念されない可能性がある）、糸球体濾過量（ＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２の個人では禁忌である。
ＣＭＲは、音響窓が悪い患者及び複雑な先天性心疾患を有する患者における心筋の構造及び機能（右心臓を含む）の評価に推奨される（ＣＭＲに対する注意／禁忌を考慮する）。ＣＭＲは、心筋炎、アミロイドーシス、サルコイドーシス、シャーガス病、ファブリー病非圧縮心筋症、及びヘモクロマトーシスが疑われる場合の心筋組織の特徴付けに推奨される（ＣＭＲに対する注意／禁忌を考慮する）。
マルチゲート取得（ＭＵＧＡ）
放射性核種血管造影法は、心臓の右心室及び左心室の機能を示すためのイメージングを専門とする核医学の一分野であり、したがって、心不全における情報に基づく診断介入を可能にする。それは、患者に注射された放射性医薬品、及び取得のためのガンマカメラの使用を含む。ＭＵＧＡスキャン（マルチゲート取得）は、心周期の異なる時点でトリガされる（ゲートされる）取得を含む。ＭＵＧＡスキャンは、平衡放射性核種心血管造影、放射性核種脳室造影（ＲＮＶＧ）、又はゲート血液プール撮像、並びにＳＹＭＡスキャン（同期マルチゲート取得スキャン）と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、患者は、ＭＵＧＡを使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、平衡放射性核種心血管造影法を使用して、患者が心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、放射性核種心室造影（ＲＮＶＧ）を使用して心不全について評価される。いくつかの実施形態では、患者は、ゲート血液プール撮像を使用して心不全について評価される）。いくつかの実施形態では、患者は、ＳＹＭＡスキャン（同期マルチゲート取得スキャン）を使用して心不全について評価される。
ＭＵＧＡは、拍動している心臓のシネタイプの画像（例えば、心周期全体の心臓の動きを示すことができる短い動画）を独自に提供し、解釈者が個々の心臓弁及び心腔の効率を決定することを可能にする。ＭＵＧＡ／シネスキャンは、心エコー図に対するロバストな補助を表す。心拍出量（Ｑ）の取得に関する数学は、これらの方法の両方、並びに収縮期の心臓／心筋の生成物としての駆出率をサポートする他の安価なモデルによってうまく機能する。心エコー図又は血管造影図に対するＭＵＧＡスキャンの１つの主な利点は、その精度である。心エコー図は心室の短縮率を測定し、ユーザの能力によって制限される。更に、血管造影図は侵襲的であり、多くの場合、より高価である。ＭＵＧＡスキャンは、心臓駆出率のより正確な表現を提供する。
胸部Ｘ線
胸部Ｘ線は、ＨＦが疑われる患者の診断的後処理に使用が限られている。胸部のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）は、現在、これらのタイプの肺疾患の標準的なケアであるが、（例えば、肺悪性腫瘍及び／又は間質性肺疾患）患者の症状及び徴候の代替的な肺の説明を特定するのに最も有用である。喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の診断には、肺活量測定による肺機能検査が必要である。しかしながら、胸部Ｘ線は、ＨＦを有する患者において肺静脈うっ血又は浮腫を示し得、非急性の状況よりも急性の状況においてより有用である。いくつかの実施形態では、患者は、胸部Ｘ線を使用して心不全について評価される。
肺水腫の徴候を評価し、呼吸困難の他の原因を同定するために、ＨＦを有する患者において胸部Ｘ線が一般に得られる。胸部Ｘ線は、心臓肥大及び／又は肺水腫のＸ線所見を示し得る。ＨＦｐＥＦを有するほとんどの患者は、正常な胸部Ｘ線を有するであろう。いくつかの実施形態では、ＨＦｐＥＦを有する患者は、正常な胸部Ｘ線を有する。
単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）及び放射性ヌクレオチド脳室造影法
単一光子放射型ＣＴ（ＳＰＥＣＴ）は、虚血及び心筋のバイアビリティの評価に有用であり得る。ゲートＳＰＥＣＴはまた、心室容積及び機能に関する情報をもたらすことができるが、患者を電離放射線に曝露する。３，３－ジホスホノ－１，２－プロパノジカルボン酸（ＤＰＤ）シンチグラフィは、トランスサイレチン心アミロイドーシスの検出に有用であり得る。いくつかの実施形態では、患者は、ＳＰＥＣＴを使用して心不全について評価される。
陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）（単独又はＣＴを伴う）を使用して虚血及び生存率を評価することができるが、フロートレーサ（Ｎ－１３アンモニア又はＯ－１５水）は現場のサイクロトロンを必要とする。ルビジウムは、比較的低コストで局所的に製造することができるＰＥＴによる虚血試験のための代替トレーサである。利用可能性、放射線被曝及びコストの制限が主な制限である。いくつかの実施形態では、患者は、ＰＥＴを使用して心不全について評価される。
冠動脈造影
冠動脈血管造影は、患者が冠動脈血行再建に適しているならば、薬物療法に抵抗性の狭心症に罹患しているＨＦ患者において推奨される。冠動脈造影はまた、症候性心室性不整脈又は心停止の中止の病歴を有する患者にも推奨される。冠動脈造影は、虚血性病因及びＣＡＤ重症度を確立するために、ＨＦ及び冠動脈疾患（ＣＡＤ）の中間から高い検査前確率並びに非侵襲的ストレス試験における虚血の存在を有する患者において考慮されるべきである。いくつかの実施形態では、患者は、冠動脈造影を使用して心不全について評価される。
ＣＡＤの診断及びその重症度を確立するために、薬理学的療法又は症候性心室性不整脈又は心停止不全に抵抗性のＨＦ及び狭心症を有する患者（潜在的な冠動脈血行再建に適していると考えられる）に侵襲的冠動脈造影法が推奨される。ＣＡＤの診断及びその重症度を確立するために、ＨＦを有し、ＣＡＤの検査前確率が中～高であり、非侵襲的ストレス試験において虚血が存在する患者（潜在的な冠動脈血行再建に適していると考えられる）では、侵襲的冠動脈造影法を考慮すべきである。
心臓コンピュータ断層撮影（ＣＴ）
ＨＦ患者における心臓ＣＴの主な使用は、冠動脈疾患（ＣＡＤ）の中間検査前確率が低いＨＦ患者又は相対的禁忌がない場合にＣＡＤの診断を除外するための明確な非侵襲的ストレス試験を有する患者において冠動脈の解剖学的構造を視覚化するための非侵襲的手段としてである。しかしながら、試験は、その結果が治療決定に影響を及ぼし得る場合にのみ必要とされる。心臓ＣＴは、冠動脈狭窄を除外するために、ＨＦを有し、ＣＡＤの検査前確率が低いか中程度である患者、又は明確な非侵襲的ストレス試験を有する患者において考慮され得る。いくつかの実施形態では、患者は、心臓コンピュータ断層撮影法を使用して心不全について評価される。
心電図（ＥＣＧ又はＥＫＧ）
心電図（ＥＣＧ又はＥＫＧ）は、心臓内の電気信号を記録する。各拍動で、電気インパルス（又は「波」）が心臓を通って移動する。この波は、筋肉に心臓から血液を圧迫及び圧送させる。ＥＣＧ上の正常な心拍は、上部チャンバー及び下部チャンバーのタイミングを示す。左右の心房又は上部チャンバーは、電気インパルスが底部チャンバーに向かうときに平坦線に続いて「Ｐ波」と呼ばれる第１の波を作る。左右の底部チャンバー又は心室は、「ＱＲＳ群」と呼ばれる次の波を作る。最終波又は「Ｔ波」は、心室の電気的回復又は静止状態への復帰を表す。ＥＣＧは、２つの主要な種類の情報を与える。まず、ＥＣＧの時間間隔を測定することにより、医師は、電波が心臓を通過するのにかかる時間を決定することができる。心臓のある部分から次の部分まで波が移動するのにかかる時間を知ることは、電気的活動が正常であるか遅いか、速いか不規則であるかを示す。第２に、心筋を通過する電気的活動の量を測定することによって、心臓専門医は、心臓の部分が大きすぎるか又は過負荷であるかどうかを見出すことができる。表１１は、ＨＦｐＥＦ患者の心電図検査の典型的な傾向を示す。いくつかの実施形態では、患者は、心電図を使用して心不全について評価される。
心内膜生検
心内膜心筋生検（ＥＭＢ）は、診断、治療、及び研究の目的で少量の心筋組織を経皮的に得る手順である。それは主に、（１）心筋拒絶のために移植された心臓を追跡するため；（２）特異的な炎症性、浸潤性又は家族性心筋障害を診断するため；（３）未知の心筋塊のサンプリングのために使用される。ＥＭＢは、心筋を検査するための決定的な手順であるが、その侵襲性、サンプリング誤差、及びその性能における一般化された専門知識の欠如によって制限される。いくつかの実施形態では、患者は、心内膜心筋生検を使用して心不全について評価される。
患者における血液学的パラメータの測定
特定の実施形態では、本開示は、患者の１又は複数の血液学的パラメータを測定することによって、本開示の１又は複数の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）で治療されているか、又は治療される候補である患者を管理する方法を提供する。血液学的パラメータは、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療される候補である患者に対する適切な投与量を評価するため、治療中の血液学的パラメータを監視するため、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療中に投与量を調整するかどうかを評価するため、及び／又は本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの適切な維持用量を評価するために使用され得る。１つ又はそれを超える血液学的パラメータが正常レベル外である場合、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与を減少させるか、遅延させるか、又は終了させることができる。
本明細書で提供される方法に従って測定され得る血液学的パラメータには、例えば、当技術分野で認識されている方法を使用して、赤血球レベル、血圧、鉄貯蔵、及び赤血球レベルの増加と相関する体液中に見られる他の薬剤が含まれる。そのようなパラメータは、患者からの血液試料を使用して決定することができる。赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、及び／又はヘマトクリットレベルの上昇は、血圧の上昇を引き起こす可能性がある。
一実施形態では、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療される候補である患者において、１又は複数の血液学的パラメータが正常範囲外又は正常の高い側にある場合、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与開始は、血液学的パラメータが自然に又は治療的介入を介して正常又は許容可能なレベルに戻るまで遅延され得る。例えば、候補患者が高血圧症又は高血圧前症である場合、患者の血圧を低下させるために、患者を血圧降下剤で治療することができる。例えば、利尿薬、アドレナリン作動性阻害薬（α遮断薬及びβ遮断薬を含む）、血管拡張薬、カルシウムチャネル遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、又はアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬を含む、個々の患者の状態に適した任意の血圧降下剤を使用してもよい。あるいは、食事療法及び運動療法を用いて血圧を治療してもよい。同様に、候補患者が正常よりも低い、又は正常よりも低い鉄貯蔵量を有する場合、患者の鉄貯蔵量が正常又は許容可能なレベルに戻るまで、患者は食事及び／又は鉄サプリメントの適切なレジメンで治療され得る。正常な赤血球レベル及び／又はヘモグロビンレベルよりも高い赤血球レベル及び／又はヘモグロビンレベルを有する患者については、レベルが正常又は許容可能なレベルに戻るまで、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与を遅延させることができる。
特定の実施形態では、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療される候補である患者において、１つ又はそれを超える血液学的パラメータが正常範囲外又は正常の高い側にある場合、投与の開始を遅らせなくてもよい。しかしながら、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与量又は投与頻度は、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与時に生じる血液学的パラメータの許容できない増加のリスクを低減する量に設定されてもよい。あるいは、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを、望ましくないレベルの血液学的パラメータに対処する治療薬と組み合わせる治療レジメンを患者のために開発することができる。例えば、患者が血圧上昇を有する場合、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト及び血圧降下剤の投与を含む治療レジメンを設計することができる。所望よりも低い鉄貯蔵量を有する患者については、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト及び鉄補充を含む治療レジメンを開発することができる。
一実施形態では、１又は複数の血液学的パラメータの（１又は複数の）ベースラインパラメータを、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療される候補である患者に対して確立し、（１又は複数の）ベースライン値に基づいてその患者に対して確立された適切な投薬レジメンを確立することができる。あるいは、患者の病歴に基づく確立されたベースラインパラメータを使用して、患者の適切なＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト投与レジメンを知らせることができる。例えば、健康な患者が、定義された正常範囲を上回る確立されたベースライン血圧測定値を有する場合、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストによる治療の前に、患者の血圧を一般集団にとって正常と考えられる範囲にする必要はない可能性がある。本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストによる治療前の１又は複数の血液学的パラメータに対する患者のベースライン値はまた、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストによる治療中の血液学的パラメータに対する任意の変化を監視するための関連する比較値として使用することができる。
ある特定の実施形態では、１つ又はそれを超える血液学的パラメータが、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで処置されている患者において測定される。血液学的パラメータを使用して、治療中に患者を監視し、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを用いた投与の調整又は終了、又は別の治療薬を用いた追加の投与を可能にすることができる。例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与が、血圧、赤血球レベル、若しくはヘモグロビンレベルの増加、又は鉄貯蔵の減少をもたらす場合、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの用量は、１又は複数の血液学的パラメータに対する本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの効果を減少させるために、量又は頻度を減少させることができる。１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与が、患者に有害な１又は複数の血液学的パラメータの変化をもたらす場合、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与は、（１又は複数の）血液学的パラメータが許容可能なレベルに戻るまで、又は永続的に終了することができる。同様に、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与量又は投与頻度を減少させた後に、１又は複数の血液学的パラメータが許容範囲内に入らない場合、投与を終了してもよい。本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストによる投与を減らすか又は終了する代替として、又はそれに加えて、患者に、例えば血圧降下剤又は鉄サプリメント等の（１又は複数の）血液学的パラメータの望ましくないレベルに対処する追加の治療剤を投与することができる。例えば、１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストで治療されている患者が血圧上昇を有する場合、本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの投与を同じレベルで継続してもよく、血圧降下剤を治療レジメンに追加するか、本開示の１又は複数のアンタゴニストの投与を減少させてもよく（例えば、量及び／又は頻度で）、血圧降下剤を治療レジメンに追加するか、又は本開示の１又は複数のアンタゴニストの投与を終了してもよく、患者を血圧降下剤で治療してもよい。
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、方法は１又は複数の血液学的パラメータを改善する。いくつかの実施形態では、本方法は、１又は複数の血液学的パラメータを、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して正常レベルに改善する。
７．心不全及び併用療法のための更なる処置
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるための１又は複数の追加の活性剤又は他の支持療法と組み合わせたＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの使用を企図する。本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」、「の組み合わせ」、「と組み合わせて」、又は「共同」投与は、追加の活性剤又は支持療法（例えば、第２、第３、第４等）が依然として体内で有効であるような任意の投与形態を指す（例えば、複数の化合物が、それらの化合物の相乗効果を含み得る、ある期間、患者において同時に有効である）。有効性は、血液、血清又は血漿中の薬剤の測定可能な濃度と相関しない場合がある。例えば、異なる治療化合物は、同じ製剤又は別個の製剤のいずれかで、同時に又は連続的に、及び異なるスケジュールで投与することができる。したがって、このような処置を受ける対象は、異なる活性薬剤又は療法の併用効果から利益を得ることができる。本開示の１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストは、本明細書に開示されるもの等の１又は複数の他の追加の薬剤又は支持療法と同時、前又は後に投与することができる。一般に、各活性薬剤又は治療は、その特定の薬剤について決定された用量及び／又は時間スケジュールで投与される。レジメンで使用する特定の組み合わせは、本開示のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストと追加の活性薬剤若しくは治療及び／又は所望の効果との適合性を考慮に入れる。
ＨＦ患者の治療のいくつかの目標は、臨床状態、機能的能力及び生活の質を改善すること、並びに／あるいは入院を防ぎ、死亡率を低下させることである。神経ホルモンアンタゴニスト（例えば、ＡＣＥＩ、ＭＲＡ及びβ遮断薬）は、ＨＦｒＥＦ患者の生存率を改善することが示されており、禁忌又は非認容でない限り、ＨＦｒＥＦ患者の治療に推奨されている。特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全を治療、予防、又は進行速度及び／又は重症度を低下させる方法に関し、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含み、患者は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、β遮断薬、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、ミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）又は植込み型除細動器（ＩＣＤ）の１又は複数も投与される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及びアンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及びβ遮断薬をそれを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及びアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及びミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及び植込み型除細動器（ＩＣＤ）を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及びアンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）及び利尿薬を、それを必要とする患者に投与することに関する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）並びにヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、及びＩｆチャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数を、それを必要とする患者に投与することに関する。
心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる、特に心不全の１又は複数の併存症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるための本明細書に開示される方法には、心不全を治療するための１又は複数の支持療法又は追加の活性剤を患者に投与することが更に含まれていてもよい。例えば、患者はまた、以下からなる群から選択される１又は複数の支持療法又は活性剤を投与され得る：ＡＣＥ阻害剤（例えば、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル（例えば、ラミペン）、トランドラプリル、及びゾフェノプリル）；β遮断薬（例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール及びチモロール）；ＡＲＢ（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン及びテルミサルタン）；ミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）（例えば、プロゲステロン、エプレレノン及びスピロノラクトン）；糖質コルチコイド（例えば、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デフラザコート、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、トリアムシノロン及びフィネレノン）；スタチン（例えば、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ）、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ）、ロバスタチン（メバコール（Ｍｅｖａｃｏｒ）、アルトコール（Ａｌｔｏｃｏｒ））、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ）、ピタバスタチン（Ｌｉｖａｌｏ）、シンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ）及びロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ））；ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、カナグリフロジン、ダパグリフロジン（例えば、Ｆａｒｘｉｇａ）及びエンパグリフロジン）；植込み型除細動器（ＩＣＤ）；アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）（例えば、バルサルタン及びサクビトリル（ネプリライシン阻害剤））；利尿剤（例えば、フロセミド、ブメタニド、トラセミド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、インダパミド、スピロノラクトン／エプレレノン、アミロリド及びトリアムテレン）；並びにヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、及びＩｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）を含む他の療法。
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤
無症候性ＬＶ収縮機能不全及び心筋梗塞の既往歴を有する患者では、ＨＦの発症を予防若しくは遅延させ、寿命を延ばすために、又は心筋梗塞の既往歴のない無症候性ＬＶ収縮機能不全を有する患者では、ＨＦの発症を予防若しくは遅延させるために、ＡＣＥ阻害薬が推奨される。ＨＦの発症を予防又は遅延させるために、たとえＬＶ収縮機能不全を有していなくても、安定したＣＡＤを有する患者ではＡＣＥ阻害薬を考慮すべきである。ＡＣＥ阻害剤は、ＨＦｒＥＦ患者の死亡率及び罹患率を低下させることが示されており、全ての症候性患者において禁忌又は忍容されない場合を除いて推奨される。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＥ阻害剤を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、ラミプリル（例えば、ラミペン）、トランドラプリル及びゾフェノプリルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者にベナゼプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にカプトプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にエナラプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にリシノプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にペリンドプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にラミプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にトランドラプリルを投与する。いくつかの実施形態では、患者にゾフェノプリルを投与する。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与である。
いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、患者における心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、患者における心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤の投与は患者の入院を予防する。
β遮断薬
β遮断薬は、無症候性ＬＶ収縮機能不全及び心筋梗塞の病歴を有する患者において、ＨＦの発症を予防又は遅延させるため、又は寿命を延ばすために推奨される。β遮断薬は、ＡＣＥＩ及びほとんどの場合、利尿薬による治療にもかかわらず、ＨＦｒＥＦを有する症候性患者の死亡率及び罹患率を低下させることができるが、うっ血患者又は非代償患者では試験されていない。β遮断薬及びＡＣＥＩは相補的であり、ＨＦｒＥＦの診断がなされるとすぐに一緒に開始することができるというコンセンサスがある。
いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数のβ遮断薬を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、１又は複数のβ遮断薬は、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、及びチモロールからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者にアセブトロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にアテノロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にベタキソロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にビソプロロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にカルテオロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にカルベジロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にラベタロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にメトプロロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、ナドロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、ネビボロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にペンブトロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にピンドロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にプロプラノロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にソタロールを投与する。いくつかの実施形態では、患者にチモロールを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にβ遮断薬を投与する。いくつかの実施形態では、患者がＡＣＥ阻害薬に不耐性である場合、患者にβ遮断薬を投与する。いくつかの実施形態では、β遮断薬は、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、β遮断薬は、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、β遮断薬の投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、β遮断薬の投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、β遮断薬の投与は患者の入院を防ぐ。
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）
アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、ＡＣＥ阻害薬に不耐性であり得る患者における代替薬である。カンデサルタンは心血管死亡率を低下させることが示されている。バルサルタンは、バックグラウンドＡＣＥＩを受けているＨＦｒＥＦ患者のＨＦによる入院に効果を示した（しかし、全原因入院には効果を示さなかった）。
いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数のＡＲＢを投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、１又は複数のＡＲＢは、ロサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、フィマサルタン、アジルサルタン、サルプリサルタン及びテルミサルタンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者にロサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にイルベサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にオルメサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にカンデサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にバルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にフィマサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にアジルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、サルプリサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にテルミサルタンを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にアンジオテンシンアンタゴニスト（例えば、アンジオテンシン受容体遮断薬、ＡＲＢ）を投与する。いくつかの実施形態では、患者がＡＣＥ阻害薬に不耐性である場合、患者にＡＲＢを投与する。いくつかの実施形態では、ＡＲＢは、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＡＲＢは、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＡＲＢの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＡＲＢの投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＡＲＢの投与は、患者の入院を防ぐ。
コルチコステロイド
ミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）は、アルドステロンに結合する受容体、及び異なる親和性で他のステロイドホルモン受容体（例えば、コルチコステロイド、アンドロゲン）を遮断する。スピロノラクトン又はエプレレノンは、ＨＦｒＥＦ及びＬＶＥＦが３５％以下の症候性心不全患者（ＡＣＥ阻害剤及び／又はβ遮断薬による治療にもかかわらず）において、死亡率及びＨＦ入院を減少させるために推奨される。
いくつかの実施形態では、本開示は、コルチコステロイドを投与することによって心不全患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者にミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）を投与する。いくつかの実施形態では、患者に、糖質コルチコイドを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、プロゲステロン、エプレレノン及びスピロノラクトンからなる群から選択される１又は複数のミネラルコルチコイド／アルドステロン受容体アンタゴニスト（ＭＲＡ）を投与する。いくつかの実施形態では、患者にエプレレノンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にスピロノラクトンを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にＭＲＡが投与される。いくつかの実施形態では、ＭＲＡは、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＭＲＡは、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＭＲＡの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＭＲＡの投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＭＲＡの投与は患者の入院を予防する。
いくつかの実施形態では、心不全を有する患者には、１つ又はそれを超える糖質コルチコイドが投与される。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドの投与は、初期療法である。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドは、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デフラザコート、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、トリアムシノロン及びフィネレノンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、心不全の患者にプレドニゾンを投与する。いくつかの実施形態では、心不全の患者にプレドニゾロンを投与する。いくつかの実施形態では、心不全の患者にフィネレノンを投与する。いくつかの実施形態では、心不全の患者にデフラザコートを投与する。
いくつかの実施形態では、患者は、その患者が心不全の徴候を示すとき、糖質コルチコイドを投与される。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドは、患者における心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドは、患者における心不全の発症を防止する。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドの投与は、患者における入院期間の長さを減少させる。いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドの投与は、患者の入院を妨げる。
スタチン
スタチンによる治療は、ＨＦの発症を予防又は遅延させ、寿命を延ばすために、ＬＶ収縮機能不全を有するか否かにかかわらず、ＣＡＤを有する又はＣＡＤの高リスクの患者に推奨される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数のスタチンを投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、１又は複数のスタチンは、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ）、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ、Ａｌｔｏｃｏｒ）、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ）、ピタバスタチン（Ｌｉｖａｌｏ）、シンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ）及びロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者にアトルバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にフルバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にロバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にプラバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にピタバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にシンバスタチンを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、ロスバスタチンを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にスタチンが投与される。いくつかの実施形態では、患者が冠動脈疾患（ＣＡＤ）のリスクが高い場合、患者にスタチンが投与される。いくつかの実施形態では、患者が冠動脈疾患（ＣＡＤ）を有する場合、患者にスタチンが投与される。いくつかの実施形態では、スタチンは、患者における心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、スタチンは、患者における心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、スタチンの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、スタチンの投与は、患者における入院期間の長さを減少させる。いくつかの実施形態では、スタチンの投与は、患者の入院を妨げる。
ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤
ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤は、典型的には、２型糖尿病の成人において血糖を低下させるために食事及び運動と共に投与される。ＳＧＬＴ２阻害剤は、腎臓が尿を介して体内から糖を除去することによって血糖を低下させる。ＳＧＣＴ２阻害剤による治療は、心血管死亡及び心不全による入院のリスクを低下させるために、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）の患者に推奨される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数のＳＧＬＴ２阻害剤を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤はグリフロジンである。いくつかの実施形態では、患者に、カナグリフロジン、ダパグリフロジン（例えば、Ｆａｒｘｉｇａ）及びエンパグリフロジンからなる群から選択される１又は複数のＳＧＬＴ２阻害剤を投与する。いくつかの実施形態では、患者にカナグリフロジンを投与する。いくつかの実施形態では、患者にダパグリフロジン（例えば、Ｆａｒｘｉｇａ）を投与する。いくつかの実施形態では、患者にエンパグリフロジンを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にＳＧＬＴ２阻害剤を投与する。いくつかの実施形態では、患者が２型糖尿病を有さない場合、患者にＳＧＬＴ２阻害剤を投与する。いくつかの実施形態では、患者が２型糖尿病を有する場合、患者にＳＧＬＴ２阻害剤を投与する。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤は、患者における心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤は、患者における心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤の投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤の投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤の投与は、患者の入院を予防する。いくつかの実施形態では、ＳＧＬＴ２阻害剤は、患者の死亡リスクを低下させる。
植込み型除細動器（ＩＣＤ）
植込み型除細動器（ＩＣＤ）は、突然死を予防し、延命するために、ａ）無症候性ＬＶ収縮機能不全（急性心筋梗塞の少なくとも４０日後である虚血性起源（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％））、及びｂ）無症候性非虚血性拡張型心筋症（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％）の１又は複数を有する患者であって、骨障害マニピュレーティブ治療（ＯＭＴ）を受けている患者に推奨される。いくつかの実施形態では、本開示は、植込み型除細動器（ＩＣＤ）を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、急性心筋梗塞の少なくとも４０日後である、虚血由来の無症候性ＬＶ収縮機能不全（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％）を有する患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、虚血性起源の無症候性ＬＶ収縮機能不全（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％）を有する患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、急性心筋梗塞の少なくとも４０日後の患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、最適な医学的治療（ＯＭＴ）を受ける無症候性非虚血性拡張型心筋症（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％）の患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、無症候性非虚血性拡張型心筋症（例えば、ＬＶＥＦ≦３０％）の患者にＩＣＤを投与する。いくつかの実施形態では、最適な医学的療法を受ける患者にはＩＣＤが投与される。いくつかの実施形態では、ＩＣＤは、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＩＣＤは、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＩＣＤの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＩＣＤの投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＩＣＤの投与は患者の入院を予防する。
アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤
レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）及び中性エンドペプチダーゼ系に作用する比較的新しい治療クラスの薬剤が、アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）と呼ばれて開発されている。クラスの第１位はＬＣＺ６９６であり、これはバルサルタン及びサクビトリル（ネプリライシン阻害剤）の部分を単一の物質に組み合わせる分子である。ネプリライシンを阻害することによって、ナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）、ブラジキニン及び他のペプチドの分解が遅くなる。
高循環性Ａ型ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）及びＢＮＰは、ＮＰ受容体への結合及びｃＧＭＰの産生増強を介して生理学的効果を発揮し、それにより、利尿、ナトリウム利尿並びに心筋弛緩及び抗リモデリングを増強する。ＡＮＰ及びＢＮＰはまた、レニン及びアルドステロンの分泌を阻害する。選択的ＡＴ１受容体遮断は、血管収縮、ナトリウム及び水分保持並びに心筋肥大を減少させる。
いくつかの実施形態では、本開示は、アンジオテンシン受容体ネプリライシン阻害剤を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者にサクビトリル／バルサルタン（例えば、ＬＣＺ６９６、Ｅｎｔｒｅｓｔｏ）を投与する。いくつかの実施形態では、ＬＶＥＦが３５％以下の外来性の症候性ＨＦｒＥＦを有する患者に、サクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、血漿ＮＰレベルが上昇した（ＢＮＰ≧１５０ｐｇ／ｍＬ及び／又はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧６００ｐｇ／ｍＬ（又は、過去１２ヶ月以内にＨＦのために入院していた場合、ＢＮＰ≧１００ｐｇ／ｍＬ及び／又はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧４００ｐｇ／ｍＬ）患者に、サクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、ＬＶＥＦが３５％以下の外来性の症候性ＨＦｒＥＦを有する患者に、サクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、推定ＧＦＲ（ｅＧＦＲ）≧３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２の体表面積を有する患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者がＡＣＥ阻害薬に不耐性である場合、患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者がβ遮断薬に忍容性でない場合、患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者がＭＲＡに忍容性でない場合、患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、患者がＨＦｒＥＦを有し、ＡＣＥ阻害剤、β遮断薬及びＭＲＡの１又は複数による治療にもかかわらず症候性のままである場合、患者にサクビトリル／バルサルタンを投与する。いくつかの実施形態では、サクビトリル／バルサルタンは、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、サクビトリル／バルサルタンが患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、サクビトリル／バルサルタンの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、サクビトリル／バルサルタンの投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、サクビトリル／バルサルタンの投与は、患者の入院を予防する。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者にＡＲＮＩが投与される。いくつかの実施形態では、患者がＡＣＥ阻害薬に不耐性である場合、患者にＡＲＮＩを投与する。いくつかの実施形態では、患者がβ遮断薬に忍容性でない場合、患者にＡＲＮＩを投与する。いくつかの実施形態では、患者がＭＲＡに不耐性である場合、患者にＡＲＮＩが投与される。いくつかの実施形態では、患者がＨＦｒＥＦを有し、ＡＣＥ阻害剤、β遮断薬及びＭＲＡの１又は複数による治療にもかかわらず症候性のままである場合、患者にＡＲＮＩを投与する。いくつかの実施形態では、ＡＲＮＩは、患者における心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、ＡＲＮＩは、患者における心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ＡＲＮＩの投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ＡＲＮＩの投与は、患者における入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ＡＲＮＩの投与は、患者の入院を妨げる。
利尿剤
利尿剤は、ＨＦｒＥＦ患者のうっ血の徴候及び症状を軽減するために推奨される。慢性ＨＦを有する患者では、ループ及びチアジド系利尿薬は、死亡及びＨＦの悪化のリスクを低下させ、またおそらく運動能力を改善し得る。典型的には、ループ利尿薬はチアジドよりも強力で短い利尿をもたらすが、それらは相乗的に作用し、その組み合わせは抵抗性浮腫を治療するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、１又は複数の利尿剤を投与することによって心不全を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、患者は、フロセミド、ブメタニド、トラセミド、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、インダパミド、スピロノラクトン／エプレレノン、アミロリド及びトリアムテレンからなる群から選択される１又は複数の利尿薬を投与される。
いくつかの実施形態では、患者は、フロセミド、ブメタニド及びトラセミドからなる群から選択される１又は複数のループ利尿薬を投与される。いくつかの実施形態では、患者にフロセミドが投与される。いくつかの実施形態では、患者にブメタニドを投与する。いくつかの実施形態では、患者に、トラセミドが投与される。
いくつかの実施形態では、患者に、ベンドロフルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、及びインダパミドからなる群から選択される１又は複数のチアジド系利尿薬を投与する。いくつかの実施形態では、患者にベンドロフルメチアジドが投与される。いくつかの実施形態では、患者に、ヒドロクロロチアジドが投与される。いくつかの実施形態では、患者に、メトラゾンが投与される。いくつかの実施形態では、患者にインダパミドが投与される。
いくつかの実施形態では、患者に、スピロノラクトン／エプレレノン、アミロライド及びトリアムテレンからなる群から選択される１又は複数のカリウム保持性利尿薬が投与される。いくつかの実施形態では、患者にスピロノラクトン／エプレレノンが投与される。いくつかの実施形態では、患者に、アミロライドが投与される。いくつかの実施形態では、患者にトリアムテレンが投与される。
いくつかの実施形態では、患者が心不全の徴候を示す場合、患者に利尿薬を投与する。いくつかの実施形態では、患者がうっ血の徴候を示す場合、患者に利尿薬を投与する。いくつかの実施形態では、患者が冠動脈疾患（ＣＡＤ）のリスクが高い場合、患者に利尿薬を投与する。いくつかの実施形態では、患者が冠動脈疾患（ＣＡＤ）を有する場合、患者に利尿薬を投与する。いくつかの実施形態では、利尿薬は、患者の心不全の発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、利尿薬は、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、利尿薬の投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、利尿薬の投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、利尿薬の投与は、患者の入院を防ぐ。いくつかの実施形態では、利尿薬の投与は、患者の６分歩行試験を改善する。
その他
いくつかの実施形態では、患者に、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、及びＩｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）からなる群から選択される１又は複数の治療を投与する。いくつかの実施形態では、患者に、ヒドララジン及び二硝酸イソソルビドが投与される。いくつかの実施形態では、患者にジゴキシンが投与される。いくつかの実施形態では、患者にジギタリスが投与される。いくつかの実施形態では、患者に、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）が投与される。いくつかの実施形態では、患者に、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）が投与される。
いくつかの実施形態では、患者は、患者が心不全の徴候を示す場合、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数を投与される。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数は、患者の心不全の発症を遅らせる。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数は、患者の心不全の発症を予防する。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数の投与は、患者の寿命を延ばす。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数の投与は、患者の入院期間を短縮する。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数の投与は、患者の入院を予防する。いくつかの実施形態では、ヒドララジン及び硝酸イソソルビド、ジゴキシン、ジギタリス、Ｎ－３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、Ｉｆ－チャネル阻害剤（例えば、イバブラジン）の１又は複数の投与は、患者の６分歩行試験を改善する。
８．併存症
併存症はＨＦにおいて重要であり、ＨＦの治療の使用に影響を及ぼし得る（例えば、重度の腎機能障害を有する一部の患者にレニン－アンジオテンシン系阻害剤を使用することは不可能であり得る）。更に、併存症を治療するために使用される薬物は、ＨＦの悪化を引き起こし得る（例えば、関節炎のために投与されるＮＳＡＩＤ、いくつかの抗がん薬等）。したがって、併存症の管理は、ＨＦを有する患者の包括的ケアの重要な構成要素である。いくつかの実施形態では、ＨＦで考慮すべき１又は複数の併存症は、貧血、狭心症、動脈性高血圧、関節炎、心房細動、悪液質、がん、認知機能障害、及び冠動脈疾患（ＣＡＤ）、糖尿病、勃起不全、痛風、高コレステロール血症、高カリウム血症、高カリウム血症、高脂血症、高血圧症、鉄欠乏、腎機能障害、メタボリックシンドローム、肥満、身体的体調不良、カリウム障害、肺疾患（例えば、喘息、ＣＯＰＤ）、筋肉減少症、睡眠時無呼吸、睡眠障害、及び心臓弁膜症（例えば、大動脈弁狭窄、大動脈弁逆流、僧帽弁逆流、三尖弁逆流）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＨＦで考慮すべき１又は複数の併存症は、貧血、心房細動、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、及び睡眠時無呼吸からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症を治療する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、本開示は、心不全の１又は複数の併存症（例えば、動脈性高血圧、心房細動、認知機能障害、糖尿病、高コレステロール血症、鉄欠乏、腎機能障害、メタボリックシンドローム、肥満、身体的デコンディショニング、カリウム障害、肺疾患（例えば、ＣＯＰＤ）、及び睡眠時無呼吸）を治療する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症が間接的に改善される。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症を予防する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度を低下させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症の進行速度を低下させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の重症度を低下させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。いくつかの実施形態では、本開示は、加齢に関連する心不全の１又は複数の併存症の重症度を低下させる方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）を投与することを含む方法を企図する。
９．スクリーニングアッセイ
特定の態様では、本開示は、加齢に関連する心不全の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させる、特に１又は複数の心不全関連併存症の進行速度及び／又は重症度を治療、予防、又は減少させるために使用され得る化合物（薬剤）を同定するためのＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドトラップアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４抗体アンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ポリヌクレオチドアンタゴニスト、及び／又はＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４小分子アンタゴニスト）の使用に関する。
１又は複数のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドのシグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄシグナル伝達）を標的化することによって、心不全を治療するための治療薬をスクリーニングするための多くのアプローチがある。特定の実施形態では、選択された細胞株に対するＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド媒介効果を乱す薬剤を同定するために、化合物のハイスループットスクリーニングを実施することができる。一定の実施形態では、アッセイを実施して、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＧＤＦ３、ＢＭＰ６、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ１１又はＢＭＰ１０）のその結合パートナー、例えばＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）への結合を特異的に阻害又は低減する化合物をスクリーニング及び同定する。あるいは、アッセイを使用して、ＩＩ型受容体等のその結合パートナーへのＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドの結合を増強する化合物を同定することができる。更なる実施形態では、化合物は、ＩＩ型受容体と相互作用するそれらの能力によって同定することができる。
様々なアッセイ形式で十分であり、本開示に照らして、本明細書に明示的に記載されていないものも、当業者によって理解されるであろう。本明細書に記載されるように、本発明の試験化合物（薬剤）は、任意の組み合わせ化学的方法によって作製され得る。あるいは、主題化合物は、インビボ又はインビトロで合成された天然に存在する生体分子であり得る。組織成長のモジュレーターとして作用する能力について試験される化合物（薬剤）は、例えば、細菌、酵母、植物又は他の生物（例えば、天然産物）によって産生され得るか、化学的に産生され得るか（例えば、ペプチド模倣薬を含む小分子）、又は組換え生産され得る。本発明によって企図される試験化合物には、非ペプチジル有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、糖、ホルモン、及び核酸分子が含まれる。特定の実施形態では、試験剤は、約２，０００ダルトン未満の分子量を有する有機小分子である。
本開示の試験化合物は、単一の別個の実体として提供され得るか、又はコンビナトリアル化学によって作製される等、より複雑なライブラリーで提供され得る。これらのライブラリーは、例えば、アルコール、ハロゲン化アルキル、アミン、アミド、エステル、アルデヒド、エーテル及び他のクラスの有機化合物を含むことができる。試験システムへの試験化合物の提示は、特に初期スクリーニング工程において、単離された形態又は化合物の混合物のいずれかであり得る。場合により、化合物は、場合により他の化合物で誘導体化されていてもよく、化合物の単離を容易にする誘導体化基を有していてもよい。誘導体化基の非限定的な例としては、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁気ビーズ、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、光活性化可能な架橋剤又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
化合物及び天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムでは、所与の期間に調査される化合物の数を最大化するために、ハイスループットアッセイが望ましい。精製又は半精製タンパク質で誘導され得るような無細胞系で行われるアッセイは、試験化合物によって媒介される分子標的の変化の迅速な発生及び比較的容易な検出を可能にするために生成することができるという点で、「一次」スクリーニングとしてしばしば好ましい。更に、試験化合物の細胞毒性又は生物学的利用能の影響は、インビトロシステムでは一般に無視することができ、代わりに、アッセイは、ＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ及び／又はＡｃｔＲＩＩＢ）等のその結合パートナーに対するＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ３、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ１０）間の結合親和性の変化で明らかになり得るように、分子標的に対する薬物の影響に主に焦点を合わせている。
単に説明するために、本開示の例示的なスクリーニングアッセイでは、目的の化合物を、アッセイの意図に応じて、通常はＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合することができる単離及び精製ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと接触させる。次いで、化合物とＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとの混合物を、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、ＧＤＦ１１）を含有する組成物に添加する。ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の検出及び定量化は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとその結合タンパク質との間の複合体形成を阻害する（又は増強する）際の化合物の有効性を決定する手段を提供する。化合物の有効性は、様々な濃度の試験化合物を使用して得られたデータから用量反応曲線を作成することによって評価することができる。更に、対照アッセイを実施して、比較のためのベースラインを提供することもできる。例えば、対照アッセイでは、単離及び精製したＡｃｔＲＩＩＢリガンドをＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む組成物に添加し、ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の形成を試験化合物の非存在下で定量する。一般に、反応物を混合することができる順序は変えることができ、同時に混合することができることが理解されよう。更に、精製されたタンパク質の代わりに、細胞抽出物及び溶解物を使用して、適切な無細胞アッセイ系を得ることができる。
ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドとその結合タンパク質との間の複合体形成は、様々な技術によって検出することができる。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、検出可能に標識されたタンパク質、例えば放射標識された（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ又は３Ｈ）、蛍光標識された（例えば、ＦＩＴＣ）、又は酵素標識されたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及び／又はその結合タンパク質を使用して、イムノアッセイによって、又はクロマトグラフィー検出によって定量することができる。
特定の実施形態では、本開示は、ＧＤＦ／ＢＭＰリガンドとその結合タンパク質との間の相互作用の程度を直接的又は間接的に測定する際の蛍光偏光アッセイ及び蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）アッセイの使用を企図する。更に、光導波路（例えば、ＰＣＴ公開国際公開第９６／２６４３２号及び米国特許出願公開第５，６７７，１９６号）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、表面電荷センサ、及び表面力センサに基づくもの等の他の検出モードは、本開示の多くの実施形態と互換性がある。
更に、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドとその結合パートナーとの間の相互作用を破壊又は増強する薬剤を同定するための、「２ハイブリッドアッセイ」としても知られる相互作用トラップアッセイの使用を企図している。例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３－２３２；Ｍａｄｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６８：１２０４６－１２０５４；Ｂａｒｔｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０－９２４；及びＩｗａｂｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３－１６９６）を参照されたい。特定の実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドとその結合タンパク質との間の相互作用を解離させる化合物（例えば、小分子又はペプチド）を同定するための逆２ハイブリッド系の使用を企図する［例えばＶｉｄａｌ ａｎｄ Ｌｅｇｒａｉｎ，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：９１９－２９；Ｖｉｄａｌ ａｎｄ Ｌｅｇｒａｉｎ，（１９９９）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７：３７４－８１；並びに米国特許第 ５，５２５，４９０号；同第５，９５５，２８０号；及び同第５，９６５，３６８号を参照されたい］。
特定の実施形態では、対象化合物は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドと相互作用する能力によって同定される。化合物とＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドとの間の相互作用は、共有結合又は非共有結合であり得る。例えば、そのような相互作用は、光架橋、放射性標識リガンド結合、及びアフィニティークロマトグラフィーを含むインビトロ生化学的方法を使用してタンパク質レベルで同定することができる［例えば、Ｊａｋｏｂｙ ＷＢ ｅｔ ａｌ．（１９７４）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４６：１を参照されたい］。特定の場合には、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドに結合する化合物を検出するアッセイ等の機構に基づくアッセイで化合物をスクリーニングすることができる。これは、固相又は液相結合事象を含み得る。あるいは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４リガンドをコードする遺伝子をレポーター系（例えば、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ又は緑色蛍光タンパク質）で細胞にトランスフェクトし、好ましくはハイスループットスクリーニング又はライブラリーの個々のメンバーでライブラリーに対してスクリーニングすることができる。他の機構に基づく結合アッセイ、例えば、自由エネルギーの変化を検出する結合アッセイを使用してもよい。結合アッセイは、標的をウェル、ビーズ若しくはチップに固定して、又は固定化抗体によって捕捉するか、又はキャピラリー電気泳動によって分離して行うことができる。結合化合物は、通常、比色エンドポイント又は蛍光若しくは表面プラズモン共鳴を使用して検出され得る。
１０．医薬組成物
本明細書に記載の治療薬（例えばＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト）は、医薬組成物に製剤化され得る。本開示に従って使用するための医薬組成物は、１又は複数の生理学的に許容される担体又は賦形剤を使用して従来の方法で製剤化され得る。そのような製剤は、一般に、ほとんどの規制要件に従って、実質的に発熱物質を含まない。
特定の実施形態では、本開示の治療方法は、組成物をインプラント又は装置として全身又は局所に投与することを含む。投与される場合、本開示で使用するための治療用組成物は、実質的に発熱物質を含まないか、又は発熱物質を含まない生理学的に許容される形態である。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト以外の治療的に有用な薬剤（上記の組成物に含まれていてもよい）は、本明細書に開示される方法の対象化合物と同時に又は連続的に投与されてもよい。
典型的には、本明細書に開示されるタンパク質治療剤は、非経口的に、特に静脈内又は皮下に投与される。非経口投与に適した医薬組成物は、１つ又はそれを超えるＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを、１つ又はそれを超える薬学的に許容され得る滅菌等張水溶液若しくは非水溶液、分散液、懸濁液若しくはエマルジョン、又は使用直前に滅菌注射液若しくは分散液に再構成され得る滅菌粉末と組み合わせて含み得、これは、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁剤若しくは増粘剤を含み得る。本開示の医薬組成物に使用され得る適切な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）及びそれらの適切な混合物、オリーブ油等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング材料の使用、分散液の場合には必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。いくつかの実施形態では、非経口投与経路は、筋肉内、腹腔内、皮内、硝子体内、硬膜外、脳内、動脈内、関節内、空洞内、病変内、骨内、眼内、髄腔内、静脈内、経皮、経粘膜、羊膜外投与、皮下、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、非経口投与経路は皮下である。いくつかの実施形態では、非経口投与経路は皮下注射である。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、皮下注射によって投与される。
組成物及び製剤は、所望であれば、活性成分を含有する１又は複数の単位剤形を含有し得るパック又はディスペンサー装置で提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパック等の金属又はプラスチック箔を含むことができる。パック又はディスペンサーデバイスは、投与のための指示書を伴い得る。
更に、組成物は、標的組織部位への送達のための形態でカプセル化又は注射され得る。特定の実施形態では、本発明の組成物は、１又は複数の治療化合物（例えばＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト）を標的組織部位に送達することができ、発生中の組織のための構造を提供し、最適には体内に再吸収することができるマトリックスを含み得る。例えば、マトリックスは、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストの徐放を提供し得る。そのようなマトリックスは、他の移植医療用途に現在使用されている材料で形成されてもよい。
マトリックス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、化粧品の外観及び界面特性に基づく。主題組成物の特定の用途は、適切な製剤を定義する。組成物の潜在的なマトリックスは、生分解性であり、化学的に定義された硫酸カルシウム、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸及びポリ無水物であり得る。他の可能性のある材料は、生分解性であり、骨又は皮膚コラーゲン等の生物学的に十分に定義されている。更なるマトリックスは、純粋なタンパク質又は細胞外マトリックス成分からなる。他の可能性のあるマトリックスは、非生分解性であり、化学的に規定されており、例えば、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミナート又は他のセラミックである。マトリックスは、ポリ乳酸及びヒドロキシアパタイト又はコラーゲン及びリン酸三カルシウム等の上記の種類の材料のいずれかの組み合わせから構成されてもよい。バイオセラミックは、リン酸カルシウム－アルミン酸塩等の組成を変更し、細孔径、粒径、粒子形状、及び生分解性を変更するための処理を変更することができる。
特定の実施形態では、本発明の方法は、経口的に、例えばカプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ（フレーバーベース、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカントを使用する）、粉末、顆粒の形態で、又は水性若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油型若しくは油中水型液体エマルジョンとして、又はエリキシル剤若しくはシロップとして、又はトローチ剤（ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシア等の不活性塩基を使用する）として、及び／又は洗口剤等として投与することができ、それぞれが活性成分として所定量の薬剤を含有する。薬剤はまた、ボーラス、舐剤又はペーストとして投与されてもよい。
経口投与用の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、粉末、顆粒剤等）では、１又は複数の本発明の治療化合物を、１又は複数の薬学的に許容される担体、例えばクエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウム、及び／又は以下のいずれかと混合することができる：（１）充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／又はケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及び／又はアカシア；（３）グリセロール等の保水剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、及び炭酸ナトリウム等の崩壊剤；（５）パラフィン等の溶液遅延剤；（６）４級アンモニウム化合物等の吸収促進剤；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール；（８）カオリン、ベントナイトクレー等の吸収剤；（９）滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物；並びに（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、医薬組成物は緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物はまた、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコール等の賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用され得る。
経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにそれらの混合物を含有し得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤及び保存剤等のアジュバントも含むことができる。
懸濁液は、活性化合物に加えて、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天及びトラガカント、並びにそれらの混合物等の懸濁剤を含有し得る。
本発明の組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含有し得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることによって確実にすることができる。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム等を組成物に含めることも望ましい場合がある。更に、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅延させる薬剤を含めることによって、注射用医薬形態の長期吸収がもたらされ得る。
投与レジメンは、本開示の主題化合物（例えばＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニスト）の作用を改変する様々な要因を考慮して主治医によって決定されることが理解される。様々な因子には、患者の年齢、性別及び食事、重症度疾患、投与時間、並びに他の臨床的因子が含まれるが、これらに限定されない。投与量は、再構成に使用されるマトリックスの種類及び組成物中の化合物の種類によって異なっていてもよい。最終組成物への他の既知の成長因子の添加も、投与量に影響を及ぼし得る。進行は、骨成長及び／又は修復の定期的な評価、例えばＸ線（ＤＥＸＡを含む）、組織形態計測的決定、及びテトラサイクリン標識によって監視することができる。
特定の実施形態では、本発明はまた、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストのインビボ産生のための遺伝子療法を提供する。そのような治療は、上記の障害を有する細胞又は組織へのＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストポリヌクレオチド配列の導入によってその治療効果を達成するであろう。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストポリヌクレオチド配列の送達は、組換え発現ベクター、例えばキメラウイルス又はコロイド分散系を使用して達成することができる。ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストポリヌクレオチド配列の治療的送達に好ましいのは、標的化リポソームの使用である。
本明細書で教示される遺伝子治療に利用することができる様々なウイルスベクターには、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニア、又は好ましくはレトロウイルス等のＲＮＡウイルスが含まれる。好ましくは、レトロウイルスベクターは、マウス又は鳥類レトロウイルスの誘導体である。単一の外来遺伝子を挿入することができるレトロウイルスベクターの例には、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳がんウイルス（ＭｕＭＴＶ）及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が含まれるが、これらに限定されない。多数の更なるレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらのベクターは全て、形質導入された細胞を同定及び生成することができるように、選択マーカーに対する遺伝子を移入又は組み込むことができる。レトロウイルスベクターは、例えば、糖、糖脂質、又はタンパク質を結合させることによって標的特異的にすることができる。好ましい標的化は、抗体を使用することによって達成される。当業者は、ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを含むレトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にするために、特定のポリヌクレオチド配列をレトロウイルスゲノムに挿入するか、又はウイルスエンベロープに付着させることができることを認識するであろう。一実施形態では、ベクターは骨又は軟骨を標的とする。
あるいは、組織培養細胞を、従来のリン酸カルシウムトランスフェクションによってレトロウイルス構造遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖをコードするプラスミドで直接トランスフェクトすることができる。次いで、これらの細胞に、目的の遺伝子を含むベクタープラスミドをトランスフェクトする。得られた細胞は、培養培地中にレトロウイルスベクターを放出する。
ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストポリヌクレオチドのための別の標的化送達系は、コロイド分散系である。コロイド分散系には、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、インビトロ及びインビボでの送達ビヒクルとして有用な人工膜小胞である。ＲＮＡ、ＤＮＡ及び無傷のビリオンを水性内部に封入し、生物学的に活性な形態で細胞に送達することができる（例えば、Ｆｒａｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，６：７７，１９８１を参照されたい）。リポソームビヒクルを使用する効率的な遺伝子導入のための方法は、当技術分野で公知であり、例えば、Ｍａｎｎｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，６：６８２，１９８８を参照されたい。リポソームの組成は、通常、リン脂質の組み合わせであり、通常、ステロイド、特にコレステロールと組み合わせられる。他のリン脂質又は他の脂質も使用され得る。リポソームの物理的特性は、ｐＨ、イオン強度、及び二価カチオンの存在に依存する。
リポソーム製造に有用な脂質の例としては、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド及びガングリオシド等のホスファチジル化合物が挙げられる。例示的なリン脂質としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンが挙げられる。リポソームの標的化はまた、例えば、器官特異性、細胞特異性及びオルガネラ特異性に基づいて可能であり、当該分野で公知である。
本開示は、ｐＨを調整するために酸及び塩基；及びｐＨを狭い範囲内に維持するための緩衝剤を含むように変化させることができる製剤を提供する。
［実施例］
本発明は、ここで一般的に説明されているが、本発明の特定の実施形態の例示の目的のためだけに含まれ、本発明を限定することを意図するものではない以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。
［実施例１］
ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合タンパク質
最小リンカーを間に挟んでヒト又はマウスＦｃドメインに融合されたヒトＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインを有する可溶性ＡｃｔＲＩＩＡ融合タンパク質を構築した。構築物は、それぞれＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃと呼ばれる。
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃは、ＣＨＯ細胞株（配列番号３８０）から精製されたものとして以下に示される。
Figure 2024511315000093
Ｃ末端リジンを欠く更なるＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃを、ＣＨＯ細胞株から精製したものとして以下に示す（配列番号３７８）：
Figure 2024511315000094
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃタンパク質をＣＨＯ細胞株で発現させた。３つの異なるリーダー配列を検討した：
（ｉ）蜂蜜蜂メリチン（ＨＢＭＬ）：ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号７）
（ｉｉ）組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号８）
（ｉｉｉ）ネイティブ：ＭＧＡＡＡＫＬＡＦＡＶＦＬＩＳＣＳＳＧＡ（配列番号３７９）。
選択された形態は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下の未処理アミノ酸配列を有する。
Figure 2024511315000095
このポリペプチドは、以下の核酸配列によってコードされる。
Figure 2024511315000096
Figure 2024511315000097
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃの両方が、組換え発現に著しく適していた。図１４に示すように、タンパク質は、タンパク質の単一の明確に定義されたピークとして精製された。Ｎ末端配列決定により、－ＩＬＧＲＳＥＴＱＥの単一配列が明らかになった（配列番号３８３）。精製は、例えば、任意の順序の以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィー。ウイルス濾過及び緩衝液交換を用いて精製を完了することができた。ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃタンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して９８％超、ＳＤＳＰＡＧＥによって測定して９５％超の純度に精製した。
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃは、リガンドに対して高い親和性を示した。ＧＤＦ１１又はアクチビンＡを、標準的なアミンカップリング手順を用いてＢｉａｃｏｒｅ（商標）ＣＭ５チップに固定化した。ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ及びＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃタンパク質をシステムにロードし、結合を測定した。ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃは、５ｘ１０－１２の解離定数（ＫＤ）でアクチビンに結合し、９．９６ｘ１０－９のＫＤでＧＤＦ１１に結合した。図１５Ａ～図１５Ｂを参照されたい。同様の結合アッセイを使用して、ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃは、例えばアクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＢＭＰ６、及びＢＭＰ１０を含む他のＴＧＦ－βスーパーファミリーリガンドに対して高～中程度の親和性を有すると決定された。ＡｃｔＲＩＩＡ－ｍＦｃも同様に挙動した。
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃは、薬物動態試験において非常に安定していた。ラットに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇのＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃタンパク質を投与し、タンパク質の血漿レベルを２４、４８、７２，１４４、及び１６８時間で測定した。別の研究では、ラットに１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇを投与した。ラットでは、ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃは１１～１４日の血清半減期を有し、薬物の循環レベルは２週間後に非常に高かった（１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇの初期投与の場合、それぞれ１１μｇ／ｍｌ、１１０μｇ／ｍｌ、又は３０４μｇ／ｍｌ）。カニクイザルでは、血漿半減期は実質的に１４日を超え、薬物の循環レベルは、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇの初期投与でそれぞれ２５μｇ／ｍｌ、３０４μｇ／ｍｌ、又は１４４０μｇ／ｍｌであった。
［実施例２］
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃタンパク質の特性評価
ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ融合タンパク質を、配列番号８の組織プラスミノゲンリーダー配列を使用して、ｐＡＩＤ４ベクター（ＳＶ４０ｏｒｉ／エンハンサー、ＣＭＶプロモーター）からの安定にトランスフェクトされたＣＨＯ－ＤＵＫＸＢ１１細胞で発現させた。実施例１で上記のように精製したタンパク質は、配列番号３８０の配列を有していた。Ｆｃ部分は、配列番号３８０に示されるように、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ配列である。タンパク質分析は、ＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ融合タンパク質がジスルフィド結合を有するホモ二量体として形成されることを明らかにする。
ＣＨＯ細胞発現材料は、ヒト２９３細胞で発現されるＡｃｔＲＩＩＡ－ｈＦｃ融合タンパク質について報告されたものよりも高いアクチビンＢリガンドに対する親和性を有する［ｄｅｌ Ｒｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７９（５１）：５３１２６－５３１３５を参照されたい］。更に、ＴＰＡリーダー配列の使用は、他のリーダー配列よりも大きな産生を提供し、天然のリーダーで発現されるＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃとは異なり、高純度のＮ末端配列を提供した。天然のリーダー配列を使用すると、ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃの２つの主要な種が得られ、それぞれ異なるＮ末端配列を有する。
［実施例３］
代替ＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃタンパク質
本明細書に記載の方法に従って使用され得る様々なＡｃｔＲＩＩＡバリアントは、国際公開第２００６／０１２６２７号（例えば、５５～５８頁を参照のこと）として公開された国際特許出願に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。代替構築物は、Ｃ末端尾部（ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインの最後の１５アミノ酸）の欠失を有し得る。そのような構築物の配列を以下に示す（Ｆｃ部分に下線を引く）（配列番号３８４）：
Figure 2024511315000098
［実施例４］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドの作製
本出願人らは、間にリンカー（３つのグリシンアミノ酸）を有するヒトＧ１Ｆｃドメインに融合されたヒトＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを有する可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドを構築した。構築物はＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｇ１Ｆｃと呼ばれる。
ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｇ１Ｆｃは、ＣＨＯ細胞株から精製された配列番号５（リンカーに下線が引かれている）に以下に示されている。
Figure 2024511315000099
Ｃ末端リジンを欠く更なるＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｇ１Ｆｃを、ＣＨＯ細胞株（配列番号３８５）から精製したものとして以下に示す：
Figure 2024511315000100
ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｇ１ＦｃポリペプチドをＣＨＯ細胞株で発現させた。３つの異なるリーダー配列を検討した：
（ｉ）蜂蜜蜂メリチン（ＨＢＭＬ）：ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号７）
（ｉｉ）組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号８）
（ｉｉｉ）ネイティブ：ＭＴＡＰＷＶＡＬＡＬＬＷＧＳＬＣＡＧ（配列番号９）。
選択された形態は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下の未処理アミノ酸配列を有する。
Figure 2024511315000101
このポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号１０）によってコードされる。
Figure 2024511315000102
Figure 2024511315000103
ＣＨＯ細胞産生材料のＮ末端配列決定により、－ＧＲＧＥＡＥ（配列番号１１）の主要配列が明らかになった。特に、文献に報告されている他の構築物は、－ＳＧＲ．．．配列から始まる。
精製は、例えば、任意の順序の以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィー。ウイルス濾過及び緩衝液交換を用いて精製を完了することができた。
ＡｃｔＲＩＩＢ（２０－１３４）－Ｆｃ融合ポリペプチドも、ＨＥＫ２９３細胞及びＣＯＳ細胞で発現した。全ての細胞株からの材料及び合理的な培養条件は、インビボで筋肉構築活性を有するポリペプチドを提供したが、おそらく細胞株選択及び／又は培養条件に関連して、効力の変動が観察された。
［実施例５］
計算方法
アクチビンＩＩＢ受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）は、Ｓｍａｄ２／３活性化を刺激するアクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１、並びにＳｍａｄ１／５／８活性化を刺激するＢＭＰ９及びＢＭＰ１０等の骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）を含む複数のＴＧＦβスーパーファミリーリガンドに結合する。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、可溶性リガンドに結合し、リガンドが細胞表面受容体に結合するのを防ぐことによってＳｍａｄ活性化を遮断するリガンドトラップとして機能することができる。ＢＭＰ９媒介Ｓｍａｄ１／５／８活性化のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ拮抗作用は、鼻出血及び毛細血管拡張症を含む望ましくない副作用をもたらすことが知られている（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｍｕｓｃｌｅ Ｎｅｒｖｅ ５５：４５８－４６４，２０１７）。Ｓｍａｄ２／３活性化を刺激するリガンドへの結合を保持しながら、ＢＭＰ９結合を減少させるＡｃｔＲＩＩＢの変異を設計するために、３つのＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体：（１）ＢＭＰ９：ＡｃｔＲＩＩＢ：Ａｌｋ１、ＰＤＢ ＩＤ＝４ｆａｏ、（２）ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡｃｔｉｖｉｎＡ、ＰＤＢ ＩＤ：１ｓ４ｙ、及び（３）ＧＤＦ１１：ＡｃｔＲＩＩＢ：Ａｌｋ５、ＰＤＢ ＩＤ：６ ｍａｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／から入手可能）の結晶構造を比較した。結晶構造に基づくＡｃｔＲＩＩＢと３つのリガンドとの間の接触の比較により、同じ対応するＡｃｔＲＩＩＢ残基と接触したリガンド残基の電荷、極性、及び疎水性の違いに基づく突然変異焦点のための残基が明らかになった。変異の標的となる残基を同定した後、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ Ｂｉｏｌｕｍｉｎａｔｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ（ｖｅｒｓｉｏｎ ２０１７－４：Ｂｉｏｌｕｍｉｎａｔｅ，Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）を用いて、他のリガンド結合活性を維持しながらＢＭＰ９への結合を減少させるＡｃｔＲＩＩＢ中の変異を計算的に予測した。
結晶構造の比較から同定された全ての残基を変異とみなした。構造複合体中の分子の安定性及び親和性の両方を考慮して残基走査計算を行い、各分子（リガンド及び受容体）及び複合体構造の潜在的な突然変異及びエネルギー、並びに野生型と突然変異型の両方のエネルギー差の特定のリストを作成した。親和性／安定性／プライムエネルギー等のパラメータを分析した後、単一突然変異の上位５％～１０％が特定された。この分析に続いて、これらの突然変異の潜在的な組み合わせを行った。構造的差異及び形成／喪失した接触を理解するために、選択された単一突然変異及び突然変異の組み合わせを構造的に分析した。最終的に、各複合体（ＡｃｔＲＩＩＢ：リガンド）について８１７個の単一突然変異をスクリーニングし、Δ親和性に基づいて、またΔ安定性（溶媒和）及びΔプライムエネルギーを選択的に考慮して、トップヒットを選択した。外れ値の打撃に関しては、他の特性も考慮した。
［実施例６］
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの作製
実施例４に記載の知見に基づいて、本出願人らは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインに一連の変異（配列変異）を生成し、これらのバリアントポリペプチドを、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインと、任意選択のリンカーによって連結されたＦｃドメインとを含む可溶性ホモ二量体融合ポリペプチドとして作製した。バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの生成に使用したバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合物はＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃであり、上記の実施例４に配列番号５として示されている。
様々な置換変異をバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃポリペプチドに導入した。実施例４に示されるデータに基づいて、これらの構築物は、ＴＰＡリーダーで発現された場合、Ｎ末端セリンを欠くことが予想される。したがって、成熟配列の大部分はグリシン（Ｎ末端セリンを欠く）から始まり得るが、いくつかの種はＮ末端セリンと共に存在し得る。ＰＣＲ突然変異誘発によってＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインに突然変異を生成した。ＰＣＲ後、断片をＱｉａｇｅｎカラムを通して精製し、ＳｆｏＩ及びＡｇｅＩで消化し、ゲル精製した。これらの断片を発現ベクターｐＡＩＤ４（国際公開第２００６／０１２６２７号参照）にライゲートして、ライゲーション時にヒトＩｇＧ１との融合キメラを作製した。大腸菌ＤＨ５αに形質転換したら、コロニーを採取し、ＤＮＡを単離した。マウス構築物（ｍＦｃ）の場合、マウスＩｇＧ２ａをヒトＩｇＧ１の代わりに使用した。全ての変異体を配列検証した。
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号２７６）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｉ及びＮ８３Ｒ置換を二重の下線で示す。配列番号２７６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000104
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号２７７）によってコードされる。
Figure 2024511315000105
Figure 2024511315000106
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号２７８）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000107
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号２７９）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｋ及びＮ８３Ｒ置換を二重の下線で示す。配列番号２７９のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000108
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３３１）によってコードされる。
Figure 2024511315000109
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３３２）は以下の通りであり、Ｃ末端から除去されたリジンが提供されていてもよい。
Figure 2024511315000110
Figure 2024511315000111
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３３３）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｔ及びＮ８３Ｒ置換を二重の下線で示す。配列番号３３３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000112
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３３４）によってコードされる。
Figure 2024511315000113
Figure 2024511315000114
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ－Ｎ８３Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３３５）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000115
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３３６）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｔ置換を二重の下線で示す。配列番号３３６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000116
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３３７）によってコードされる。
Figure 2024511315000117
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３３８）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000118
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３３９）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｌ７９Ｈ及びＦ８２Ｉ置換を二重の下線で示す。配列番号３３９のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000119
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３４０）によってコードされる。
Figure 2024511315000120
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３４１）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000121
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３４２）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｌ７９Ｈ置換を二重の下線で示す。配列番号３４２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000122
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３４３）によってコードされる。
Figure 2024511315000123
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３４４）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000124
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３４５）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｌ７９Ｈ及びＦ８２Ｋ置換を二重の下線で示す。配列番号３４５のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000125
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３４６）によってコードされる。
Figure 2024511315000126
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３４７）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000127
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｅ５０Ｌ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３４８）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｅ５０Ｌ置換を二重の下線で示す。配列番号３４８のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000128
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｅ５０Ｌ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（コドン最適化）（配列番号３４９）によってコードされる：
Figure 2024511315000129
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｅ５０Ｌ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３５０）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000130
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ３８Ｎ－Ｌ７９Ｒ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３５１）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｌ３８Ｎ及びＬ７９Ｒ置換を二重の下線で示す。配列番号３５１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000131
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ３８Ｎ－Ｌ７９Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３５２）によってコードされる。
Figure 2024511315000132
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ３８Ｎ－Ｌ７９Ｒ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３５３）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000133
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｖ９９Ｇ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３５４）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｖ９９Ｇ置換を二重の下線で示す。配列番号３５４のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000134
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｖ９９Ｇ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（コドン最適化）（配列番号３５５）によってコードされる：
Figure 2024511315000135
Figure 2024511315000136
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｖ９９Ｇ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３５６）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000137
構築物を一過性感染によってＣＯＳ又はＣＨＯ細胞で発現させ、濾過及びプロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。いくつかの例において、アッセイは、精製ポリペプチドではなく馴化培地を用いて行った。レポーター遺伝子アッセイのための試料の純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析的サイズ排除クロマトグラフィーによって評価した。
変異体を、以下に記載される結合アッセイ及び／又はバイオアッセイにおいて試験した。
あるいは、以下に示すように、５アミノ酸のＮ末端短縮及び３アミノ酸のＣ末端短縮を有するＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインに同様の突然変異を導入することができる（配列番号３５７）。この切断型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインは、配列番号２の番号付けに基づいてＡｃｔＲＩＩＢ（２５～１３１）と示される。
Figure 2024511315000138
対応するバックグラウンド融合ポリペプチドＡｃｔＲＩＩＢ（２５－１３１）－Ｇ１Ｆｃを以下に示す（配列番号１２）。
Figure 2024511315000139
［実施例７］
変異ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの活性及びリガンド結合プロファイル
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体のリガンド結合プロファイルを決定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ベースの結合アッセイを使用して、特定のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドのリガンド結合動態を比較した。試験するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドを、抗Ｆｃ抗体を使用してシステムに独立して捕捉した。次いで、リガンドを注射し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。３７℃で分析したバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの結果を図１６Ａ及び１６Ｂに示す。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃを対照ポリペプチドとして使用した。
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの活性を決定するために、Ａ２０４細胞ベースのアッセイを使用して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃと比較して、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、及びＢＭＰ１０によるシグナル伝達に対するバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド間の効果を比較した。簡単に記載すると、このアッセイでは、筋肉に由来するヒトＡ２０４横紋筋肉腫細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）：ＨＴＢ－８２ＴＭ）及びレポーターベクターｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＥＭＢＯ １７：３０９１－３１００）、同様にまた、ウミシイタレポータープラスミド（ｐＲＬＣＭＶ）をトランスフェクション効率についての対照のために使用する。ＣＡＧＡ１２モチーフはＴＧＦ－β応答遺伝子（例えば、ＰＡＩ－１遺伝子）に存在するので、このベクターは、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ９を含む、Ｓｍａｄ２／３を介してシグナル伝達することができるリガンドに一般的に使用される。
１日目に、Ａ２０４細胞を１又は複数の４８ウェルプレートに移した。２日目に、これらの細胞に１０μｇのｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２又はｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（１０μｇ）＋ｐＲＬＣＭＶ（１μｇ）及びＦｕｇｅｎｅをトランスフェクトした。３日目に、０．１％ＢＳＡを含有する培地に希釈したリガンドをＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドと１時間プレインキュベートした後、細胞に添加した。およそ６時間後、細胞をＰＢＳですすぎ、溶解した。細胞溶解物をルシフェラーゼアッセイで分析して、Ｓｍａｄ活性化の程度を決定した。
このアッセイを使用して、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９及びＢＭＰ１０による細胞シグナル伝達に対する阻害効果についてバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドをスクリーニングした。ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインにアミノ酸置換を組み込んだホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドの効力を、未修飾ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃを含むＦｃ融合ポリペプチドの効力と比較した。試験したいくつかのバリアントについて、正確なＩＣ５０を計算することは不可能であったが、曲線の傾きにおける阻害の徴候は検出可能であった。これらのバリアントについては、相対ＩＣ５０の大きさの程度、すなわち、一定の数の代わりに＞１０ｎＭ又は＞１００ｎＭの推定値を含めた。そのようなデータ点は、以下の表１３においてａ（＊）によって示される。試験したいくつかのバリアントでは、試験した濃度範囲にわたって曲線の傾きに検出可能な阻害はなく、これは表１３の「ＮＤ」で示されている。
Figure 2024511315000140
上記の表１３並びに図１６Ａ及び図１６Ｂに示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインにおけるアミノ酸置換は、様々なインビトロアッセイにおいてＡｃｔＲＩＩＢ：リガンド結合と下流のシグナル伝達活性との間のバランスを変化させることができる。一般に、本出願人は、他のリガンド結合特性を保持しながら、改変されていないＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃ）を含有する融合ポリペプチドと比較して、ＢＭＰ９に対する結合の減少又は検出不能を示したＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン中のバリアントを生成するという目標を達成した。
更に、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｉ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ）、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）もまた、ＢＭＰ９への結合の減少を示しながら、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃと比較して、アクチビンＢに対する比較的高い親和性を保持しながら、アクチビンＡ結合の有意な減少を示した。表１３における阻害効力を示すＩＣ５０値は、このリガンド結合傾向と一致する。同様に、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ－Ｎ８３Ｒ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ－Ｎ８３Ｒ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ－Ｎ８３Ｒ）も同様の傾向を示す。
更に、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ－Ｎ８３Ｒ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ－Ｎ８３Ｒ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｔ－Ｎ８３Ｒ）、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）も、ＢＭＰ９への結合の減少を示し、アクチビンＢに対する比較的高い親和性を保持しながら、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃと比較して、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１結合の有意な減少を示した。表１３における阻害効力を示すＩＣ５０値は、このリガンド結合傾向と一致する。
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｉ）、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ）、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｈ－Ｆ８２Ｋ）は、ＢＭＰ９への結合の減少を示し、アクチビンＢに対する比較的高い親和性を保持しながら、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃと比較してＢＭＰ１０結合の減少も示したことが更に注目された。表１３における阻害効力を示すＩＣ５０値は、このリガンド結合傾向と一致する。
したがって、ＢＭＰ９への検出不可能な結合に減少したＡｃｔＲＩＩＢバリアントを生成するという目標を達成することに加えて、出願人は、その多くが特有のリガンド結合／阻害プロファイルによって部分的に特徴付けられる多様な一連の新規バリアントポリペプチドを生成した。したがって、これらのバリアントは、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途においてＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃよりも有用であり得る。例としては、ＢＭＰ９並びに場合によりアクチビンＡ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１及びＢＭＰ１０の１又は複数の拮抗作用を減少させながら、アクチビンＢの拮抗作用を保持することが望ましい治療用途が挙げられる。
［実施例８］
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの作製
本出願人らは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインに一連の変異（配列変異）を生成し、これらのバリアントポリペプチドを、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインと、任意選択のリンカーによって連結されたＦｃドメインとを含む可溶性ホモ二量体融合ポリペプチドとして作製した。バックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合物は、配列番号５に示すＡｃｔＲＩＩＢ－Ｇ１Ｆｃであった。
様々な置換変異をバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドに導入した。実施例４に示されるデータに基づいて、これらの構築物は、ＴＰＡリーダーで発現された場合、Ｎ末端セリンを欠くことが予想される。ＰＣＲ突然変異誘発によってＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインに突然変異を生成した。ＰＣＲ後、断片をＱｉａｇｅｎカラムを通して精製し、ＳｆｏＩ及びＡｇｅＩで消化し、ゲル精製した。これらの断片を発現ベクターｐＡＩＤ４（国際公開第２００６／０１２６２７号参照）にライゲートして、ライゲーション時にヒトＩｇＧ１との融合キメラを作製した。大腸菌ＤＨ５αに形質転換したら、コロニーを採取し、ＤＮＡを単離した。マウス構築物（ｍＦｃ）の場合、マウスＩｇＧ２ａをヒトＩｇＧ１の代わりに使用した。全ての変異体を配列検証した。
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３１）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｋ５５Ａ置換を二重の下線で示す。配列番号３１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000141
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３２）によってコードされる。
Figure 2024511315000142
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３３）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000143
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３４）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｋ５５Ｅ置換を二重の下線で示す。配列番号３４のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000144
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３５）によってコードされる。
Figure 2024511315000145
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３６）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000146
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号３７）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｉ置換を二重の下線で示す。配列番号３７のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000147
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号３８）によってコードされる。
Figure 2024511315000148
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３９）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000149
未処理のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃのアミノ酸配列を以下に示す（配列番号４０）。シグナル配列及びリンカー配列を実線の下線で示し、Ｆ８２Ｋ置換を二重の下線で示す。配列番号４０のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000150
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号４１）によってコードされる。
Figure 2024511315000151
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｇ１Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号４２）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000152
構築物をＣＯＳ又はＣＨＯ細胞で発現させ、濾過及びプロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。いくつかの例では、アッセイを精製タンパク質ではなく馴化培地で行った。レポーター遺伝子アッセイのための試料の純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット分析によって評価した。
変異体を、以下に記載される結合アッセイ及び／又はバイオアッセイにおいて試験した。
あるいは、以下に示すように、５アミノ酸のＮ末端短縮及び３アミノ酸のＣ末端短縮を有するＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインに同様の突然変異を導入することができる（配列番号５３）。この切断型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインは、配列番号２の番号付けに基づいてＡｃｔＲＩＩＢ（２５～１３１）と示される。
Figure 2024511315000153
対応するバックグラウンド融合ポリペプチドＡｃｔＲＩＩＢ（２５－１３１）－Ｇ１Ｆｃを以下に示す（配列番号１２）。
Figure 2024511315000154
［実施例９］
細胞ベースのアッセイにおけるバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体のリガンド結合プロファイル及びバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの活性
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体のリガンド結合プロファイルを決定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ベースの結合アッセイを使用して、特定のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドのリガンド結合動態を比較した。試験するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドを、抗Ｆｃ抗体を使用してシステムに独立して捕捉した。次いで、リガンドを注射し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。３７℃で分析したバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの結果を図１７に示す。改変されていないＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを含むＦｃ融合ポリペプチドと比較して、バリアントポリペプチドＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｆｃ、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｆｃは、ＧＤＦ１１よりもＢＭＰ９に対する親和性のより大きな低下を示した。２５℃で分析した更なるバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの結果を図１８に示す。
これらの結果から、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｅ、Ｆ８２Ｉ及びＦ８２Ｋは、アクチビンＡ又はＧＤＦ１１に対するＡｃｔＲＩＩＢ親和性を低下させるよりも、ＢＭＰ９に対するＡｃｔＲＩＩＢ結合親和性を低下させる置換として確認される。したがって、これらのバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドは、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途において、非修飾ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドよりも有用であり得る。例としては、ＢＭＰ９の拮抗作用を低下させながらアクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１の１又は複数の拮抗作用を保持することが望ましい治療用途が挙げられる。
バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドの活性を決定するために、Ａ２０４細胞ベースのアッセイを使用して、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ９によるシグナル伝達に対するバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド間の効果を比較した。簡単に記載すると、このアッセイでは、筋肉に由来するヒトＡ２０４横紋筋肉腫細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）：ＨＴＢ－８２ＴＭ）及びレポーターベクターｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＥＭＢＯ １７：３０９１－３１００）、同様にまた、ウミシイタレポータープラスミド（ｐＲＬＣＭＶ）をトランスフェクション効率についての対照のために使用する。ＣＡＧＡ１２モチーフはＴＧＦ－β応答遺伝子（例えば、ＰＡＩ－１遺伝子）に存在するので、このベクターは、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ９を含む、Ｓｍａｄ２／３を介してシグナル伝達することができるリガンドに一般的に使用される。
１日目に、Ａ－２０４細胞を１又は複数の４８ウェルプレートに移した。２日目に、これらの細胞に１０μｇのｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２又はｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（１０μｇ）＋ｐＲＬＣＭＶ（１μｇ）及びＦｕｇｅｎｅをトランスフェクトした。３日目に、０．１％ＢＳＡを含有する培地に希釈したリガンドをＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドと１時間プレインキュベートした後、細胞に添加した。およそ６時間後、細胞をＰＢＳですすぎ、溶解した。細胞溶解物をルシフェラーゼアッセイで分析して、Ｓｍａｄ活性化の程度を決定した。
このアッセイを使用して、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ９による細胞シグナル伝達に対する阻害効果についてバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドをスクリーニングした。ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインにアミノ酸置換を組み込んだホモ二量体Ｆｃ融合ポリペプチドの効力を、未修飾ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを含むＦｃ融合ポリペプチドの効力と比較した。
Figure 2024511315000155
上記の表に示されるように、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインにおける単一のアミノ酸置換は、細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイにおけるアクチビンＡ又はＧＤＦ１１阻害とＢＭＰ９阻害との間のバランスを変化させることができる。改変されていないＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを含有する融合ポリペプチドと比較して、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｆｃ、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｆｃは、アクチビンＡ及びＧＤＦ１１の本質的に減少しない阻害を維持しながら、ＢＭＰ９の強力な阻害をあまり示さなかった（ＩＣ５０値の増加）。
これらの結果は、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ａ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｋ５５Ｅ）－Ｆｃ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｉ）－Ｆｃ、及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｆ８２Ｋ）－Ｆｃ等のバリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドが、非修飾ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを含むＦｃ融合ポリペプチドと比較して、アクチビンＡ及びＧＤＦ１１のより選択的なアンタゴニストであることを示している。したがって、これらのバリアントは、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途においてＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃよりも有用であり得る。例としては、ＢＭＰ９及び潜在的にＢＭＰ１０の拮抗作用を減少させながら、アクチビンＡ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１の１又は複数の拮抗作用を保持することが望ましい治療用途が挙げられる。
［実施例１０］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの生成：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロ二量体
本出願人らは、位置７９にロイシンからグルタメートへの置換を有する未改変ヒトＡｃｔＲＩＩＢ及びヒトＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含む可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロマー複合体の生成を想定しており、これらはそれぞれ、細胞外ドメインとＧ１Ｆｃドメインとの間に位置するリンカーを有するＧ１Ｆｃドメインに別々に融合されている。個々の構築物は、それぞれＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチドと呼ばれ、それぞれの配列を以下に提供する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ又はＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃホモ二量体複合体とは対照的に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロマー複合体の形成を促進するための方法論は、非対称ヘテロマー複合体の形成をガイドするためにＦｃドメインのアミノ酸配列に変化を導入することである。Ｆｃドメインを使用して非対称相互作用対を作製するための多くの異なるアプローチが本開示に記載されている。
それぞれ配列番号４３～４５及び４６～４８のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列に示される１つのアプローチでは、一方のＦｃドメインを変化させて、相互作用面にカチオン性アミノ酸を導入することができ、他方のＦｃドメインを変化させて、相互作用面にアニオン性アミノ酸を導入することができる。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、それぞれＴＰＡリーダー（配列番号８）を使用することができる。
ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号４３）を以下に示す：
Figure 2024511315000156
リーダー（シグナル）配列及びリンカーに下線を付し、Ｌ７９Ｅ置換を二重下線で示す。可能なホモ二量体複合体のいずれかではなくＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（リジンを酸性アミノ酸で置換）をＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号４３のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
このＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号４４）によってコードされ得る。
Figure 2024511315000157
Figure 2024511315000158
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号４５）は以下の通りであり、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000159
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号４６）の相補的形態は以下の通りである。
Figure 2024511315000160
リーダー配列及びリンカー配列に下線を引く。上記の配列番号４３及び４５のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線によって示されるように、２つのアミノ酸置換（グルタメート及びアスパルテートをリジンで置き換える）をＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号４６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
このＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号４７）によってコードされ得る。
Figure 2024511315000161
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド配列（配列番号４８）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000162
それぞれ配列番号４５及び配列番号４８のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃを含むヘテロマーポリペプチド複合体を得ることができる。
非対称Ｆｃ融合ポリペプチドを使用してヘテロ多量体複合体の形成を促進する別のアプローチでは、配列番号４９～５０及び５１～５２のそれぞれのＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列に示すように、Ｆｃドメインを変更して相補的疎水性相互作用及び追加の分子間ジスルフィド結合を導入することができる。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、それぞれＴＰＡリーダー（配列番号８）を使用することができる。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号４９）を以下に示す：
Figure 2024511315000163
シグナル配列及びリンカー配列に下線を付し、Ｌ７９Ｅ置換を二重下線で示す。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなくＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインに、トレオニンをトリプトファンに置き換える）を融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号４９のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。成熟ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号５０）は以下の通りである。
Figure 2024511315000164
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号５１）の相補型は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000165
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。上記の配列番号４９～５０のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線によって示されるように、４つのアミノ酸置換（チロシンのシステインへの置換、トレオニンのセリンへの置換、ロイシンのアラニンへの置換及びチロシンのバリンへの置換）をＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号５１のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド配列は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000166
それぞれ配列番号５０及び配列番号５２のＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドを、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃを含むヘテロマーポリペプチド複合体を得ることができる。
様々なＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃ複合体の精製は、例えば、任意の順序で以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができる：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー（例えば、静電配位子及び疎水性配位子の両方を含有する樹脂による）、及びエピトープベースのアフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに対する抗体又は機能的に等価なリガンドによる）。精製は、ウイルス濾過及び緩衝液交換によって完了することができる。
［実施例１１］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃのリガンド結合プロファイル：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロマー
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ベースの結合アッセイを使用して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロ二量体のリガンド結合動態を未修飾ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体のリガンド結合動態と比較した。融合タンパク質を、抗Ｆｃ抗体を使用して系に捕捉した。次いで、リガンドを注射し、捕捉された受容体タンパク質上に３７℃で流した。結果を以下の表に要約し、有効なリガンドトラップを最も示すリガンドオフレート（ｋｄ）を太字で示す。
Figure 2024511315000167
この実施例では、２つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド鎖のうちの１つの単一アミノ酸置換が、未修飾ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較してＦｃ融合ポリペプチドのリガンド結合選択性を変化させた。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較して、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｅ）－Ｆｃヘテロ二量体は、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、及びＢＭＰ６への高親和性結合を大部分保持したが、アクチビンＡ及びＢＭＰ１０については約１０倍速いオフ速度を示し、ＢＭＰ９への結合強度の更に大きな低下を示した。したがって、バリアントＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロマーは、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途において、非修飾ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体よりも有用であり得る。例としては、アクチビンＡ、ＢＭＰ９又はＢＭＰ１０．９の拮抗作用を減少させながら、アクチビンＢ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１及びＢＭＰ６の１又は複数の拮抗作用を保持することが望ましい治療用途が挙げられる。ＡｃｔＲＩＩＢ変異体の作製：
ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインにおける一連の変異を生成し、これらの変異ポリペプチドを細胞外ＡｃｔＲＩＩＢとＦｃドメインとの可溶性融合ポリペプチドとして生成した。アクチビン及び細胞外ＡｃｔＲＩＩＢの共結晶構造は、リガンド結合における細胞外ドメインの最終（Ｃ末端）１５アミノ酸（本明細書では「テール」と呼ばれる）に対していかなる役割も示さなかった。この配列は結晶構造上で分解することができず、これらの残基が結晶中に均一に充填されていない柔軟なループ中に存在することを示唆した。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＥＭＢＯ Ｊ．２００３ Ａｐｒ １；２２（７）：１５５５－６６．この配列はまた、ＡｃｔＲＩＩＢとＡｃｔＲＩＩＡとの間であまり保存されていない。したがって、これらの残基は、塩基性又はバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合構築物では省略された。更に、この例では、バックグラウンド形態の位置６４はアラニンによって占められている。したがって、この例におけるバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合物は、配列（Ｆｃ部分に下線が引かれている）を有する（配列番号５４）：
Figure 2024511315000168
Figure 2024511315000169
驚くべきことに、以下に論じられるように、Ｃ末端尾部はアクチビン及びＧＤＦ－１１結合を増強することが見出され、したがってＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃの好ましいバージョンは配列（Ｆｃ部分に下線が引かれている）を有する（配列番号５５）：
Figure 2024511315000170
様々な変異をバックグラウンドＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチドに導入した。ＰＣＲ突然変異誘発によってＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインに突然変異を生成した。ＰＣＲ後、断片をＱｉａｇｅｎカラムを通して精製し、ＳｆｏＩ及びＡｇｅＩで消化し、ゲル精製した。これらの断片を発現ベクターｐＡＩＤ４にライゲートして、ライゲーション時にヒトＩｇＧ１との融合キメラを作製した。ＤＮＡを単離した。全ての変異体は、一過性トランスフェクションによってＨＥＫ２９３Ｔ細胞で産生された。要約すると、５００ｍｌスピナで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をＦｒｅｅｓｔｙｌｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）培地中２５０ｍｌ容量で６ｘ１０５細胞／ｍｌにセットアップし、一晩成長させた。翌日、これらの細胞を０．５ｕｇ／ｍｌの最終ＤＮＡ濃度でＤＮＡ：ＰＥＩ（１：１）複合体で処理した。４時間後、２５０ｍｌの培地を添加し、細胞を７日間成長させた。馴化培地を、細胞をスピンダウンすることによって回収し、濃縮した。
全ての変異体をプロテインＡカラムで精製し、低ｐＨ（３．０）グリシン緩衝液で溶出した。中和後、これらをＰＢＳに対して透析した。
変異体も同様の方法によってＣＨＯ細胞中で産生させた。
変異体を、以下に記載される結合アッセイ及びバイオアッセイにおいて試験した。ＣＨＯ細胞及びＨＥＫ２９３細胞において発現されたタンパク質は、結合アッセイ及びバイオアッセイにおいて区別できなかった。
［実施例１２］
ＡｃｔＲＩＩＢ－ＡＬＫ４ヘテロ二量体の生成
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ及びヒトＡＬＫ４の細胞外ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロマー複合体を構築し、これらはそれぞれ、細胞外ドメインとＦｃドメインとの間に配置されたリンカーでＦｃドメインに別々に融合されている。個々の構築物は、それぞれＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドと呼ばれ、それぞれの配列を以下に提供する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ又はＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体複合体とは対照的に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロマー複合体の形成を促進するための方法論は、非対称ヘテロマー複合体の形成をガイドするためにＦｃドメインのアミノ酸配列に変化を導入することである。Ｆｃドメインを使用して非対称相互作用対を作製するための多くの異なるアプローチが本開示に記載されている。
それぞれ配列番号３９６及び３９８並びに配列番号８８及び８９のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃポリペプチド配列に示される一アプローチでは、一方のＦｃドメインは、相互作用面にカチオン性アミノ酸を導入するように変更され、他方のＦｃドメインは、相互作用面にアニオン性アミノ酸を導入するように変更される。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドはそれぞれ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）リーダーを使用する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号３９６）を以下に示す：
Figure 2024511315000171
リーダー（シグナル）配列及びリンカーに下線を引く。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなく、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（酸性アミノ酸をリジンで置き換える）を、上記の二重下線で示すように、ＡｃｔＲＩＩＢ融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号３９６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
このＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、以下の核酸配列（配列番号３９７）によってコードされる。
Figure 2024511315000172
Figure 2024511315000173
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３９８）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000174
ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号８８）の相補的形態は以下の通りである。
Figure 2024511315000175
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。上記の配列番号３９６及び３９８のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（リジンをアスパラギン酸で置き換える）をＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。配列番号８８のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジン（Ｋ）が付加されて提供されていてもよい。
このＡＬＫ４－Ｆｃ融合タンパク質は、以下の核酸（配列番号２４３）によってコードされる。
Figure 2024511315000176
Figure 2024511315000177
成熟ＡＬＫ４－Ｆｃ融合タンパク質配列（配列番号８９）は以下の通りであり、Ｃ末端にリジン（Ｋ）が付加されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000178
それぞれ配列番号３９８及び配列番号８９のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃタンパク質を、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃを含むヘテロマー複合体を生じさせることができる。
非対称Ｆｃ融合タンパク質を使用してヘテロ多量体複合体の形成を促進するための別のアプローチでは、それぞれ配列番号４０２及び４０３並びに配列番号９２及び９３のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃポリペプチド配列に示すように、Ｆｃドメインを変更して相補的疎水性相互作用及び追加の分子間ジスルフィド結合を導入する。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドはそれぞれ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）リーダー：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号８）を使用する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号４０２）を以下に示す：
Figure 2024511315000179
リーダー（シグナル）配列及びリンカーに下線を引く。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなくＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインに、トレオニンをトリプトファンに置き換える）を融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号４０２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは以下の通りである。
Figure 2024511315000180
ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号９２）の相補型は以下の通りであり、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000181
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。上記の配列番号４０２及び４０３のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線によって示されるように、ＡＬＫ４融合ポリペプチドのＦｃドメインに４つのアミノ酸置換を導入することができる。配列番号９２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
成熟ＡＬＫ４－Ｆｃ融合タンパク質配列は以下の通りであり、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000182
それぞれ配列番号４０３及び配列番号９３のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃタンパク質を、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃを含むヘテロマー複合体を生じさせることができる。
様々なＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ複合体の精製は、例えば、任意の順序の以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィー。ウイルス濾過及び緩衝液交換を用いて精製を完了することができた。
非対称Ｆｃ融合タンパク質を使用してヘテロ多量体複合体の形成を促進する別のアプローチでは、配列番号１１８～１２１及び１２２～１２５のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃポリペプチド配列にそれぞれ示されるように、Ｆｃドメインを変更して、相補的疎水性相互作用、追加の分子間ジスルフィド結合、及び正味の分子電荷に基づく精製を促進するための２つのＦｃドメイン間の静電的差異を導入する。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドはそれぞれ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）リーダーを使用する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号４０６）を以下に示す：
Figure 2024511315000183
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなくＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインに、トレオニンをトリプトファンに置き換える）を融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒの精製を容易にするために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（リジンを酸性アミノ酸で置き換える）を融合タンパク質のＦｃドメインに導入することもできる。配列番号１１８のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
このＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、以下の核酸（配列番号４０７）によってコードされる。
Figure 2024511315000184
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の通り（配列番号４０８）であり、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000185
このＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号４０９）によってコードされる。
Figure 2024511315000186
ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号２４７）の相補的形態は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000187
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。上記の配列番号４０６及び４０８のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線によって示されるように、４つのアミノ酸置換（チロシンをシステインで置換し、トレオニンをセリンで置換し、ロイシンをアラニンで置換し、チロシンをバリンで置換）をＡＬＫ４融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することができる。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体の精製を容易にするために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（アスパラギンをアルギニンで置換及びアスパルタートをアルギニンで置換）をＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドのＦｃドメインに導入することもできる。配列番号２４７のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
このＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号２４８）によってコードされる。
Figure 2024511315000188
成熟ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド配列は以下の通りであり（配列番号２４９）、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000189
このＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号２５０）によってコードされる。
Figure 2024511315000190
それぞれ配列番号１２０及び配列番号２４９のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃタンパク質を、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡＬＫ４－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃを含むヘテロマー複合体を生じさせることができる。
特定の実施形態では、ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、本明細書に開示される特定のＦｃ融合ポリペプチドのヘテロ二量体形成をガイドするための４つのアミノ酸置換を含む配列番号９２（上に示す）であり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
このＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号２５１）によってコードされる。
Figure 2024511315000191
成熟ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチド配列は、配列番号９３（上記に示す）であり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
このＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドは、以下の核酸（配列番号２５２）によってコードされる。
Figure 2024511315000192
様々なＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ複合体の精製は、例えば、任意の順序の以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、エピトープベースのアフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＡＬＫ４又はＡｃｔＲＩＩＢ上のエピトープに対する抗体又は機能的に等価なリガンドによる）、及びマルチモーダルクロマトグラフィー（例えば、静電配位子及び疎水性配位子の両方を含有する樹脂による）。ウイルス濾過及び緩衝液交換を用いて精製を完了することができた。
［実施例１３］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体及びＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体と比較したＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体のリガンド結合プロファイル
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ベースの結合アッセイを使用して、上記のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体複合体のリガンド結合選択性をＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体複合体のリガンド結合選択性と比較した。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体、及びＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体は、抗Ｆｃ抗体を使用してシステムに独立して捕捉された。リガンドを注射し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。結果を以下の表に要約し、有効なリガンドトラップを最も示すリガンドオフレート（ｋｄ）を太字のフォントの灰色の影で示す。
Figure 2024511315000193
これらの比較結合データは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体が、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体又はＡＬＫ４－Ｆｃホモ二量体のいずれかと比較して変化した結合プロファイル／選択性を有することを実証している。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体は、いずれかのホモ二量体と比較してアクチビンＢへの結合の増強を示し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体で観察されるようにアクチビンＡ、ＧＤＦ８、及びＧＤＦ１１への強い結合を保持し、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、及びＧＤＦ３への結合の実質的な減少を示す。特に、ＢＭＰ９は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体に対して低い又は観察可能な親和性を示さないが、このリガンドはＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体に強く結合する。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と同様に、ヘテロ二量体はＢＭＰ６への中間レベルの結合を保持する。図１９を参照されたい。
更に、Ａ－２０４レポーター遺伝子アッセイを使用して、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＢＭＰ１０及びＢＭＰ９によるシグナル伝達に対するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体の効果を評価した。細胞株：ヒト横紋筋肉腫（筋肉由来）。レポーターベクター：ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９８，ＥＭＢＯ １７：３０９１－３１００に記載されているように）。ＣＡＧＡ１２モチーフは、ＴＧＦβ応答遺伝子（ＰＡＩ－１遺伝子）に存在するので、このベクターは、Ｓｍａｄ２及び３を介した因子シグナル伝達に一般的に使用される。例示的なＡ－２０４レポーター遺伝子アッセイを以下に概説する。
１日目：Ａ－２０４細胞を４８ウェルプレートに分割する。
２日目：１０ｕｇのｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２又はｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（１０ｕｇ）＋ｐＲＬＣＭＶ（１ｕｇ）及びＦｕｇｅｎｅでＡ－２０４細胞をトランスフェクトした。
３日目：因子を添加する（培地＋０．１％ＢＳＡに希釈）。阻害剤は、細胞に添加する前に、因子と共に約１時間プレインキュベートする必要がある。約６時間後、細胞をＰＢＳですすぎ、次いで溶解する。
上記工程に続いて、ルシフェラーゼアッセイを行った。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体の両方が、このアッセイにおいてアクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１及びＧＤＦ８の強力な阻害剤であると決定された。特に、図２０に示される比較ホモ二量体／ヘテロ二量体ＩＣ５０データにおいて見られ得るように、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と同様に、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１シグナル伝達経路を阻害する。しかしながら、ＢＭＰ９及びＢＭＰ１０シグナル伝達経路のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体阻害は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較して有意に減少する。このデータは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体及びＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体の両方が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１に対する強い結合を示すが、ＢＭＰ１０及びＢＭＰ９は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較して、ＡＬＫ４－Ｆｃ：ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃヘテロ二量体に対する親和性が有意に低下していることが観察された上記の結合データと一致する。
したがって、まとめると、これらのデータは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体がＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較してアクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１のより選択的なアンタゴニストであることを実証している。したがって、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃヘテロ二量体は、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途においてＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体よりも有用であろう。例としては、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＣ、ＧＤＦ８及びＧＤＦ１１の１又は複数の拮抗作用を保持するが、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３及びＢＭＰ６の１又は複数の拮抗作用を最小限に抑えることが望ましい治療用途が挙げられる。
［実施例１４］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体の生成
本出願人らは、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ及びヒトＡＬＫ７の細胞外ドメインを含む可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロマー複合体を構築し、これらはそれぞれ、細胞外ドメインとＦｃドメインとの間に位置するリンカーを有するＦｃドメインに融合されている。個々の構築物は、それぞれＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃと呼ばれる。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ又はＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体複合体とは対照的に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロマー複合体の形成を促進するための方法論は、非対称ヘテロマー複合体の形成をガイドするためにＦｃドメインのアミノ酸配列に変化を導入することである。Ｆｃドメインを使用して非対称相互作用対を作製するための多くの異なるアプローチが本開示に記載されている。
以下にそれぞれ開示されるＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃポリペプチド配列に示される１つのアプローチでは、一方のＦｃドメインは、相互作用面にカチオン性アミノ酸を導入するように変更され、他方のＦｃドメインは、相互作用面にアニオン性アミノ酸を導入するように変更される。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドはそれぞれ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）リーダー：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号８）を使用する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号３９６）を以下に示す：
Figure 2024511315000194
リーダー（シグナル）配列及びリンカーに下線を引く。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなく、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（酸性アミノ酸をリジンで置き換える）を、上記の二重下線で示すように、ＡｃｔＲＩＩＢ融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号３９６のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジン（Ｋ）が除去されて提供されていてもよい。
このＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合タンパク質は、以下の核酸配列（配列番号３９７）によってコードされる。
Figure 2024511315000195
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号３９８）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000196
ＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質（配列番号１２９）の相補的形態は以下の通りである。
Figure 2024511315000197
シグナル配列及びリンカー配列に下線を付す。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなく、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、２つのアミノ酸置換（リジンをアスパラギン酸で置き換える）を、上記の二重下線で示されるように、融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号１２９のアミノ酸配列は、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
このＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質は、以下の核酸（配列番号２５５）によってコードされる。
Figure 2024511315000198
成熟ＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質配列（配列番号１３０）は、以下の通りであると予想され、Ｃ末端にリジンが付加されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000199
それぞれ配列番号３９６及び配列番号１２９のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質を、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃを含むヘテロマー複合体を生じさせることができる。
非対称Ｆｃ融合タンパク質を使用してヘテロ多量体複合体の形成を促進する別のアプローチでは、以下に開示されるＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃポリペプチド配列に示されるように、相補的疎水性相互作用及び追加の分子間ジスルフィド結合を導入するようにＦｃドメインを変更する。
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃポリペプチド配列（配列番号４０２）を以下に示す：
Figure 2024511315000200
リーダー配列及びリンカーに下線を引く。可能性のあるホモ二量体複合体のいずれかではなくＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進するために、上記の二重下線で示されるように、２つのアミノ酸置換（セリンをシステインに、トレオニンをトリプトファンに置き換える）を融合タンパク質のＦｃドメインに導入することができる。配列番号４０２のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
成熟ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号４０３）は以下の通りであり、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000201
ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチド（配列番号１３３）の相補的形態は以下の通りである。
Figure 2024511315000202
リーダー配列及びリンカー配列に下線を引く。上記の配列番号１３０及び４０３のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドを用いたヘテロ二量体形成をガイドするために、上記の二重下線によって示されるように、ＡＬＫ７融合ポリペプチドのＦｃドメインに４つのアミノ酸置換を導入することができる。配列番号１３３のアミノ酸配列は、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
成熟ＡＬＫ７－Ｆｃ融合タンパク質配列（配列番号１３４）は、以下の通りであると予想され、Ｃ末端からリジンが除去されて提供されていてもよい。
Figure 2024511315000203
それぞれ配列番号４０２及び配列番号１３３のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃタンパク質を、ＣＨＯ細胞株から共発現及び精製して、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃを含むヘテロマー複合体を生じさせることができる。
様々なＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃ複合体の精製は、例えば、任意の順序の以下の３つ以上を含む一連のカラムクロマトグラフィー工程によって達成することができた：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィー。ウイルス濾過及び緩衝液交換を用いて精製を完了することができた。
［実施例１５］
ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体及びＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体と比較したＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体のリガンド結合プロファイル
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ベースの結合アッセイを使用して、上記のＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体複合体のリガンド結合選択性をＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ及びＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体複合体のリガンド結合選択性と比較した。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体、及びＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体は、抗Ｆｃ抗体を使用してシステムに独立して捕捉された。リガンドを注射し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。結果を以下の表に要約し、有効なリガンドトラップを最も示すリガンドオフレート（ｋｄ）を太字のフォントで示す。
Figure 2024511315000204
これらの比較結合データは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体が、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体又はＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体のいずれかと比較して変化した結合プロファイル／選択性を有することを実証している。興味深いことに、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体への最も強い結合を有する５つのリガンドのうち４つ（アクチビンＡ、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１）は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体への結合の減少を示し、例外はヘテロ二量体への強固な結合を保持するアクチビンＢである。同様に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体への中間体結合を有する４つのリガンドのうち３つ（ＧＤＦ３、ＢＭＰ６、特にＢＭＰ９）は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体への結合の減少を示すが、アクチビンＡＣへの結合は増加して、ヘテロ二量体全体との２番目に強いリガンド相互作用になる。最後に、アクチビンＣ及びＢＭＰ５は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体に結合しない（アクチビンＣ）又は弱い結合（ＢＭＰ５）にもかかわらず、中間の強度でＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７ヘテロ二量体に予想外に結合する。正味の結果は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体が、前述のリガンドのいずれにも結合しないＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体又はＡＬＫ７－Ｆｃホモ二量体のいずれかとは明確に異なるリガンド結合プロファイルを有することである。図２１を参照されたい。
したがって、これらの結果は、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体がＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体と比較してアクチビンＢ及びアクチビンＡＣのより選択的なアンタゴニストであることを実証している。更に、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体は、アクチビンＣへの強い結合という珍しい特性を示す。したがって、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ７－Ｆｃヘテロ二量体は、そのような選択的拮抗作用が有利である特定の用途においてＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃホモ二量体よりも有用であろう。例としては、アクチビンＢ又はアクチビンＡＣの拮抗作用を保持するが、アクチビンＡ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９又はＢＭＰ１０の１又は複数の拮抗作用を減少させることが望ましい治療用途が挙げられる。アクチビンＣ又はアクチビンＣとアクチビンＥとの類似性に基づいてアクチビンＥを拮抗させることが望ましい治療、診断又は分析用途も含まれる。
［実施例１６］
加齢マウスにおける駆出率が保たれた心不全（ＨＦｐＥＦ）における心臓保護に対するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃの役割
心臓保護に対するＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃの効果を、高齢Ｃ５７ＢＬ６マウス（「高齢」）を使用した生理学的心臓加齢のマウスモデルで調べた。「高齢」マウスは、加齢したヒト心臓（例えば、ＨＦｐＥＦの表現型）で観察されるものと同様の構造的及び機能的変化を示し、これにはＬＶ拡張機能障害が含まれ、駆出率の低下はない（Ｍｅｒｅｎｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｌｕｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１８；Ｒｏｈ ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ｍｅｓｑｕｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０２０を参照されたい）。高齢Ｃ５７ＢＬ６マウスを用いた研究を行って、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃがリモデリング下で心臓機能変化を回復できるかどうかを評価した。
２４月齢の１３匹の雄マウス（「高齢」）及び４月齢の１０匹のマウス（「若齢」）を試験した。「高齢」及び「若齢」マウスの群に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を１週間に２回、８週間皮下投与した（それぞれ、「若齢ビヒクル」又は「高齢ビヒクル」）。別の群の「高齢」マウスに、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）を週に２回、８週間皮下投与した（「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」）。ビヒクルの体積及び投与されたＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃの体積は同じであった。
研究の最後に、動物を安楽死させる前に、マウスを麻酔している間に、経胸壁心エコー検査（ＶｉｓｕａｌＳｏｎｉｃｓ Ｖｅｖｏ３１００，３０ ＭＨｚ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ；Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）によってインビボ心臓構造及び機能を評価した。拡張機能を、心尖部４腔像における最大早期（Ｅ）拡張期伝達弁流速のパルス波ドップラー記録及びピーク早期（ｅ’）伝達弁輪速度のドップラー組織イメージング記録によって評価した。ピーク透過流速とピーク透過弁輪速度との比（Ｅ／ｅ’）の変化を使用して、拡張機能を推定した。（図２３）。データは、平均±平均の標準誤差として提示している。統計学的検定（多重比較のためのテューキー検定を使用した事後分析による一元配置ＡＮＯＶＡ）を実施し、有意水準をｐ＜０．０５として設定した。特に、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１であった。
研究の終わりまでに、「Ｏｌｄ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスは、「Ｙｏｕｎｇ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスと比較して、駆出率（ＥＦ）の減少がないこと、及びＢＮＰレベルの増加等のＨＦｐＥＦの特徴的な特性を示した。ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ処理は、ＥＦの減少がない傾向、及びＢＮＰ発現の減少の傾向も示した（「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」）。「高齢ビヒクル」マウスは、「若齢－ビヒクル」マウスと比較して肺重量が増加する傾向を示し、これは高齢マウスにおけるうっ血性肺の徴候である。「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」マウスの肺重量は、「Ｏｌｄ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスと比較して肺重量が減少する傾向を示した。
高齢マウスにおける心臓リモデリング（すなわち、ＬＶ肥大）は、心機能、特にＥ／ｅ’によって測定される拡張機能を変化させた（図２３）。「Ｏｌｄ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスは、「Ｙｏｕｎｇ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスと比較してＥ／ｅ’の増加を示し、これは臨床診療における充満圧及び拡張機能障害の指標である（図２３）。驚くべきことに、特徴的な拡張機能測定値であるＥ／ｅ’比は、「Ｏｌｄ－Ｖｅｈｉｃｌｅ」マウスと比較して「Ｏｌｄ－ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ」マウスにおいて有意に減少した。
これらのデータは、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃが、生理学的心臓加齢モデルにおいて駆出率も低下させずに、拡張機能障害の傾向を逆転させるのに有効であることを実証している。特に、Ｅ／ｅ’は、未処置の高齢マウスと比較してＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃ処置マウスにおいて有意に減少し、ＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ：ＡＬＫ４－Ｆｃが拡張機能障害の徴候であるＬＶ弛緩の改善に役立ったことを示している。データは更に、ＡｃｔＲＩＩＢ：ＡＬＫ４ヘテロ多量体に加えて、他のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストが心不全の治療に有用であり得ることを示唆している。
参照による組込み
本明細書で言及される全ての刊行物及び特許は、あたかも各個々の刊行物又は特許が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
主題の特定の実施形態について説明したが、上記の明細書は例示的なものであり、限定的なものではない。本明細書及び以下の特許請求の範囲を検討すると、多くの変形形態が当業者に明らかになるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲、その均等物の全範囲、及び明細書、並びにそのような変形を参照することによって決定されるべきである。

Claims (51)

  1. 加齢に関連する心不全を治療する方法であって、それを必要とする患者に有効量のＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストを投与することを含む、加齢に関連する心不全を治療する方法。
  2. 前記心不全が、保たれた駆出率に関連する心不全（ＨＦｐＥＦ）である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記患者が左室（ＬＶ）肥大を有する、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記方法が、前記患者のＬＶ肥大を減少させる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記方法が、前記患者の心室弛緩を増加させ、充満圧を減少させる、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記患者の拡張早期僧帽弁輪組織速度に対する拡張早期伝達流量の比（Ｅ／ｅ’比）が、同様の年齢及び性別の健康な人と比較して増加している、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記患者が拡張機能障害を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記方法が、前記患者の拡張機能障害を改善する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記患者が、健康な患者と比較して、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）レベルが上昇している、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記患者のＢＮＰレベルを低下させる、請求項９に記載の方法。
  11. 前記ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストがＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが、配列番号３６６のアミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のいずれか１つで始まり、配列番号３６６のアミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、又は１３５のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが、配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。
  14. 前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが、配列番号３６８のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の方法。
  15. 前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記融合ポリペプチドがＡｃｔＲＩＩＡ－Ｆｃ融合ポリペプチドである、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記融合ポリペプチドが、前記ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドドメインとｉ）前記１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む、請求項１５又は１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記リンカードメインが、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記ポリペプチドが、配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記ポリペプチドが、配列番号３８０のアミノ酸配列を含む、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記ポリペプチドが、配列番号３７８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記ポリペプチドが、配列番号３７８のアミノ酸配列を含む、請求項１６～１８及び２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストがヘテロ多量体ポリペプチドである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記ヘテロ多量体ポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及びＡＬＫ４ポリペプチドを含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記ヘテロ多量体ポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド及びＡＬＫ７ポリペプチドを含む、請求項２３に記載の方法。
  26. 前記ＡＬＫ４ポリペプチドが、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９２、９３、２４７、２４９、４２１及び４２２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記ＡＬＫ７ポリペプチドが、配列番号１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３３及び１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の方法。
  28. 前記ＡＬＫ４ポリペプチドが、ＡＬＫ４ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである、請求項２４又は２６のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記ＡＬＫ７ポリペプチドが、ＡＬＫ７ポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである、請求項２５又は２７のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記融合ポリペプチドがＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドである、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記融合ポリペプチドがＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドである、請求項２９に記載の方法。
  32. 前記ＡＬＫ４－Ｆｃ融合ポリペプチドが、前記ＡＬＫ４ポリペプチドドメインとｉ）前記１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に位置するリンカードメインを更に含む、請求項３０に記載の方法。
  33. 前記ＡＬＫ７－Ｆｃ融合ポリペプチドが、前記ＡＬＫ７ポリペプチドドメインと、前記ｉ）１若しくは複数の異種ドメイン又はｉｉ）Ｆｃドメインとの間に位置するリンカードメインを更に含む、請求項３１に記載の方法。
  34. 前記リンカードメインが、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される、請求項３２又は３３に記載の方法。
  35. 前記ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４アンタゴニストがＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記ＡｃｔＲＩＩ－ＡＬＫ４ヘテロ多量体がＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸残基２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は２９のいずれか１つで始まり、配列番号２のアミノ酸残基１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、又は１３４のいずれか１つで終わるアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  38. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２９～１０９と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  39. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２５～１３１と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  40. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２０～１３４と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  41. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  42. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号３８８のアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  43. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、配列番号３８９のアミノ酸配列と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項３５又は３６に記載の方法。
  44. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメイン及び１又は複数の異種ドメインを含む融合ポリペプチドである、請求項３５～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記融合ポリペプチドがＡｃｔＲＩＩＢ－Ｆｃ融合ポリペプチドである、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記融合ポリペプチドが、前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドドメインと前記１若しくは複数の異種ドメイン又はＦｃドメインとの間に配置されたリンカードメインを更に含む、請求項４４又は４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記リンカードメインが、ＴＧＧＧ（配列番号２６５）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２６３）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２６４）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２６７）、ＧＧＧ（配列番号２６１）、ＧＧＧＧ（配列番号２６２）、及びＳＧＧＧ（配列番号２６６）から選択される、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記融合ポリペプチドが、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、Ａ２４Ｎ、Ｓ２６Ｔ、Ｎ３５Ｅ、Ｅ３７Ａ、Ｅ３７Ｄ、Ｌ３８Ｎ、Ｒ４０Ａ、Ｒ４０Ｋ、Ｓ４４Ｔ、Ｌ４６Ｖ、Ｌ４６Ｉ、Ｌ４６Ｆ、Ｌ４６Ａ、Ｅ５０Ｋ、Ｅ５０Ｐ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ａ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｇ、Ｅ５２Ｈ、Ｅ５２Ｋ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｐ、Ｅ５２Ｒ、Ｅ５２Ｓ、Ｅ５２Ｔ、Ｅ５２Ｙ、Ｑ５３Ｒ、Ｑ５３Ｋ、Ｑ５３Ｎ、Ｑ５３Ｈ、Ｄ５４Ａ、Ｋ５５Ａ、Ｋ５５Ｄ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ５５Ｒ、Ｒ５６Ａ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｙ６０Ｆ、Ｙ６０Ｋ、Ｙ６０Ｐ、Ｒ６４Ａ、Ｒ６４Ｈ、Ｒ６４Ｋ、Ｒ６４Ｎ、Ｎ６５Ａ、Ｓ６７Ｎ、Ｓ６７Ｔ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ａ、Ｋ７４Ｅ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｋ７４Ｒ、Ｋ７４Ｙ、Ｗ７８Ａ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ａ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｋ、Ｌ７９Ｐ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｉ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｍ、Ｄ８０Ｎ、Ｄ８０Ｒ、Ｆ８２Ａ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｗ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ａ、Ｎ８３Ｒ、Ｔ９３Ｄ、Ｔ９３Ｅ、Ｔ９３Ｇ、Ｔ９３Ｈ、Ｔ９３Ｋ、Ｔ９３Ｐ、Ｔ９３Ｒ、Ｔ９３Ｓ、Ｔ９３Ｙ、Ｅ９４Ｋ、Ｑ９８Ｄ、Ｑ９８Ｅ、Ｑ９８Ｋ、Ｑ９８Ｒ、Ｖ９９Ｅ、Ｖ９９Ｇ、Ｖ９９Ｋ、Ｅ１０５Ｎ、Ｆ１０８Ｉ、Ｆ１０８Ｌ、Ｆ１０８Ｖ、Ｆ１０８Ｙ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｈ、Ｅ１１１Ｋ、１１１Ｎ、Ｅ１１１Ｑ、Ｅ１１１Ｒ、Ｒ１１２Ｈ、Ｒ１１２Ｋ、Ｒ１１２Ｎ、Ｒ１１２Ｓ、Ｒ１１２Ｔ、Ａ１１９Ｐ、Ａ１１９Ｖ、Ｇ１２０Ｎ、Ｅ１２３Ｎ、Ｐ１２９Ｎ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１３０Ａ、Ｐ１３０Ｒ、及びＡ１３２Ｎからなる群から選択される配列番号２のアミノ酸配列に関して１又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項３５及び３７～４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドが、Ｌ３８Ｎ、Ｅ５０Ｌ、Ｅ５２Ｄ、Ｅ５２Ｎ、Ｅ５２Ｙ、Ｌ５７Ｅ、Ｌ５７Ｉ、Ｌ５７Ｒ、Ｌ５７Ｔ、Ｌ５７Ｖ、Ｙ６０Ｄ、Ｇ６８Ｒ、Ｋ７４Ｅ、Ｗ７８Ｙ、Ｌ７９Ｅ、Ｌ７９Ｆ、Ｌ７９Ｈ、Ｌ７９Ｒ、Ｌ７９Ｓ、Ｌ７９Ｔ、Ｌ７９Ｗ、Ｆ８２Ｄ、Ｆ８２Ｅ、Ｆ８２Ｉ、Ｆ８２Ｋ、Ｆ８２Ｌ、Ｆ８２Ｓ、Ｆ８２Ｔ、Ｆ８２Ｙ、Ｎ８３Ｒ、Ｅ９４Ｋ、及びＶ９９Ｇからなる群から選択される配列番号２のアミノ酸配列に関して１又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項３５及び３７～４９のいずれか一項に記載の方法。
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