CN115989035A - 用于治疗肺动脉高压(pah)的actrii蛋白 - Google Patents

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P·林德
S·乔希
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Abstract

在一些方面，本公开文本涉及包含ActRII多肽的组合物和方法，所述组合物和方法用于治疗、预防肺动脉高压或降低肺动脉高压的进展率和/或严重性，特别是治疗、预防一种或多种肺动脉高压相关并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性。

Description

用于治疗肺动脉高压(PAH)的ACTRII蛋白
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年6月23日提交的美国临时申请序列号63/042,722；2020年9月28日提交的63/084,409；2020年11月11日提交的63/112,513；以及2021年5月13日提交的63/188,141的优先权权益。前述申请的公开内容通过引用以其整体特此并入。
背景技术
肺高血压(PH)是一种特征为肺血管系统(包括肺动脉、肺静脉和肺毛细血管)的高血压的疾病。通常，PH定义为静息时平均肺动脉压(mPAP)≧20mm Hg或运动时≧30mm Hg[Hill等人,Respiratory Care 54(7):958-68(2009)]。主要PH症状之一是呼吸困难或呼吸急促，并且其他症状包括疲劳、头晕、昏厥、外周性水肿(足部、腿部或踝部肿胀)、嘴唇和皮肤发青、胸痛、心绞痛、运动期间头晕目眩、无痰干咳、疾脉和心悸。PH可能是引起心力衰竭的严重疾病，心力衰竭是患有肺高血压者的最常见死因之一。术后肺高血压可能使许多类型的手术或程序变复杂，并且呈现与高死亡率相关的挑战。
可以将PH基于疾病的不同表现进行分组，所述表现在病理生理学机制、临床表现和治疗方法方面共有类似性[Simonneau等人,JACC 54(1):S44-54(2009)]。于1973年首次提出PH的临床分类，并且最近更新的临床分类被世界卫生组织(WHO)于2018年认可。根据更新的PH临床分类，有五个主要PH组：肺动脉高压(PAH)，特征为肺动脉楔压(PAWP)≦15mmHg；左心病所致的PH(也称为静脉型肺动脉高压或充血性心力衰竭)，特征为PAWP>15mm Hg；肺病和/或缺氧所致的PH；肺动脉阻塞所致的PH；以及具有不明确和/或多因子病因的PH[Simonneau等人,JACC 54(1):S44-54(2009)；Hill等人,Respiratory Care 54(7):958-68(2009)]。PAH被进一步分类为：特发性PAH(IPAH)，一种散发性疾病，其中既不存在PAH家族史，也没有鉴定出风险因子；可遗传PAH；药物和毒素诱导的PAH；与结缔组织疾病、HIV感染、门静脉高压、先天性心脏病、血吸虫病和慢性溶血性贫血相关的PAH；以及新生儿持久性PH[Simonneau等人,(2019)Eur Respir J:53:1801913]。各种类型的PH的诊断需要一系列测试。
通常，PH治疗取决于PH的病因或分类。在PH由已知的医学或医疗状况引起的情况下，其被称为继发性PH，并且其治疗通常针对潜在疾病。第2组肺高血压(例如，静脉型高压)通常涉及通过施用利尿剂、β阻断剂和ACE抑制剂优化左心室功能，或者修复或替代二尖瓣或主动脉瓣。PAH疗法包括肺血管扩张药、地高辛、利尿剂、抗凝剂和氧疗。肺血管扩张药靶向不同途径，包括前列环素途径(例如，前列环素，包括静脉内依前列醇、皮下或静脉内曲前列尼尔以及吸入式伊洛前列素)、一氧化氮途径(例如，磷酸二酯酶-5抑制剂，包括西地那非和他达拉非)以及内皮素-1途径(例如，内皮素受体拮抗剂，包括口服波生坦和口服安贝生坦)[Humbert,M.Am.J.Respir.Crit.Care Med.179:650-6(2009)；Hill等人,RespiratoryCare 54(7):958-68(2009)]。然而，当前疗法不提供PH的治愈，并且它们不直接治疗在许多PH患者中观察到的潜在的血管重塑和血管肌化。
对用于治疗肺高血压的有效疗法，存在未满足的高需求。因此，本公开文本的目标是提供用于治疗、预防PH或降低PH的进展率和/或严重性，特别是治疗、预防一种或多种PH相关并发症或降低一种或多种PH相关并发症的进展率和/或严重性的方法。
发明内容
在某些方面，本公开文本提供一种治疗肺动脉高压(PAH)的方法，所述方法包括将治疗有效量的ActRII多肽施用至患者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg的给药范围来施用，并且其中所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：肺血管阻力(PVR)的降低；6分钟步行距离(6MWD)的增加；N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展的预防或降低；如WHO所认可的肺高血压功能等级消退的促进或增加；右心室功能的改进；肺动脉压的改进；和/或平均右心房压的改进。
在某些方面，本公开文本提供一种治疗、预防肺动脉高压的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg的给药范围来施用，并且其中所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：肺血管阻力(PVR)的降低；6分钟步行距离(6MWD)的增加；N末端proB型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展的预防或降低；如WHO所认可的肺高血压功能等级消退的促进或增加；右心室功能的改进；肺动脉压的改进；和/或平均右心房压的改进。在一些实施方案中，所述肺动脉高压的一种或多种并发症选自：肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖、肺动脉中的血管生成、呼吸困难、胸痛、肺血管重塑、右心室肥大和肺纤维化。
在某些方面，本公开文本提供一种治疗肺动脉高压(PAH)的方法，所述方法包括将治疗有效量的ActRII多肽的给药方案施用至患者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，所述给药方案包括0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第一剂量持续第一时间段，随后施用0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第二剂量持续第二时间段。在一些实施方案中，所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：肺血管阻力(PVR)的降低；6分钟步行距离(6MWD)的增加；N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；预防或降低如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展；促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退；右心室功能的改进；肺动脉压的改进；以及平均右心房压的改进。在一些实施方案中，所述第一时间段为至少3周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少3周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少21周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少45周。在一些实施方案中，所述第二时间段超过所述第一时间段。在一些实施方案中，所述第二剂量超过所述第一剂量。在一些实施方案中，所述第一剂量在约0.2mg/kg至约0.4mg/kg的范围内，之后第二剂量在约0.5mg/kg至约0.8mg/kg的范围内。在一些实施方案中，所述第一剂量为约0.3mg/kg，之后第二剂量为约0.7mg/kg。
在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的PVR。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的PVR降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的PVR降低至少20％。在一些实施方案中，PVR的所述降低是平均肺动脉压降低的结果。在一些实施方案中，所述方法增加所述患者的6分钟步行距离。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的6分钟步行距离增加至少10米(例如，至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、250、300或超过400米)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的6分钟步行距离增加至少30米。在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的NT-proBNP水平。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的NT-proBNP水平降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或至少80％)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的NT-proBNP水平降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法将NT-proBNP水平降低至正常水平。在一些实施方案中，所述NT-proBNP的正常水平<100pg/ml。
在一些实施方案中，所述方法预防或降低如WHO所认可的肺高血压功能等级进展。在一些实施方案中，所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能I级肺高血压降低至II级。在一些实施方案中，所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能II级肺高血压降低至III级。在一些实施方案中，所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能III级肺高血压降低至IV级。在一些实施方案中，所述方法促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退。在一些实施方案中，所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从IV级肺高血压促进或增加至III级。在一些实施方案中，所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从III级肺高血压促进或增加至II级。在一些实施方案中，所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从II级肺高血压促进或增加至I级。
在一些实施方案中，所述方法改进所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于右心室面积变化分数的增加所致。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于右心室肥大的降低所致。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于射血分数的增加所致。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于右心室面积变化分数和射血分数的增加所致。
在一些实施方案中，所述方法改进所述患者的肺动脉压。在一些实施方案中，所述肺动脉压的改进是平均肺动脉压(mPAP)的降低。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的mPAP降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的mPAP降低至少3mmHg(例如，至少3、5、7、10、12、15、20或25mmHg)。在一些实施方案中，所述方法改进所述患者的平均右心房压(mRAP)。在一些实施方案中，所述mRAP的改进是mRAP的降低。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的mRAP降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的mRAP降低至少1mmHg(例如，至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mmHg)。
在一些实施方案中，所述患者的肺血管阻力(PVR)大于或等于3伍德单位。在一些实施方案中，所述患者的6分钟步行距离为150至550米。在一些实施方案中，所述患者具有如与健康患者相比升高的NT-proBNP水平。在一些实施方案中，所述患者的NT-proBNP水平为至少100pg/mL(例如，100、150、200、300、400、500、1000、3000、5000、10,000、15,000或20,000pg/mL)。在一些实施方案中，所述患者具有如与健康患者相比升高的脑利尿钠肽(BNP)水平。在一些实施方案中，所述患者的BNP水平为至少100pg/mL(例如，100、150、200、300、400、500、1000、3000、5000、10,000、15,000或20,000pg/mL)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的BNP水平降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或至少80％)。在一些实施方案中，所述方法将BNP水平降低至正常水平(即，<100pg/ml)。在一些实施方案中，所述患者的平均肺动脉压(mPAP)选自：至少20mmHg的mPAP；至少25mmHg的mPAP；至少30mmHg的mPAP；至少35mmHg的mPAP；至少40mmHg的mPAP；至少45mmHg的mPAP；和至少50mmHg的mPAP。在一些实施方案中，所述患者的平均右心房压(mRAP)选自：至少5mmHg的mRAP；至少6mmHg的mRAP；至少8mmHg的mRAP；至少10mmHg的mRAP；至少12mmHg的mRAP；至少14mmHg的mRAP；和至少16mmHg的mRAP。
在一些实施方案中，所述PAH是特发性肺动脉高压(PAH)。在一些实施方案中，所述PAH是可遗传PAH。在一些实施方案中，所述PAH是药物或毒素诱导的PAH。在一些实施方案中，所述PAH是在分流修复后至少1年与简单的先天体肺分流术相关的PAH。在一些实施方案中，根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能II级或III级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如世界卫生组织所认可的功能I级、II级、III级或IV级肺高血压。在一些实施方案中，根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能I级、II级、III级或IV级肺高血压。在一些实施方案中，根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述方法增加所述患者的无移植物存活。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的无移植物存活增加至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的右心室肥大。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的右心室肥大降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的平滑肌肥厚。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的平滑肌肥厚降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的肺小动脉肌肉度。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
在一些实施方案中，所述方法增强所述患者的运动能力。在一些实施方案中，所述方法降低所述患者的博格呼吸困难指数(BDI)。在一些实施方案中，所述方法将所述患者的BDI降低至少0.5个指数点(例如，至少0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10个指数点)。在一些实施方案中，所述患者具有降低的肾功能。在一些实施方案中，所述方法进一步改进肾功能。在一些实施方案中，所述方法延迟肺动脉高压的临床恶化。在一些实施方案中，根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述方法延迟肺动脉高压的临床恶化。在一些实施方案中，所述方法降低与肺动脉高压相关的一种或多种并发症的住院风险。在一些实施方案中，所述方法降低与肺动脉高压相关的一种或多种并发症的发病风险。在一些实施方案中，所述发病包括以下中的一种或多种的变化：对肺和/或心脏移植的需要增加；需要开始使用PAH的已知治疗进行挽救疗法；需要将前列环素增加至少10％；需要房间隔造口术；专门针对PAH住院至少24小时；以及PAH恶化。在一些实施方案中，所述PAH恶化包括至少15％的WHO功能等级的恶化和6MWD的降低。在一些实施方案中，所述方法降低与肺动脉高压相关的死亡风险。在一些实施方案中，所述方法将与肺动脉高压相关的死亡风险降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。在一些实施方案中，所述患者的血红蛋白水平>8g/dl且<15g/dl。在一些实施方案中，所述患者的血红蛋白水平<18g/dl。
在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽是进一步包含免疫球蛋白的Fc结构域的融合蛋白。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的Fc结构域是IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。在一些实施方案中，所述Fc融合蛋白还包含定位于所述ActRII多肽结构域与所述免疫球蛋白的Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG(SEQ ID NO:20)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:19)、GGGGS(SEQ ID NO:22)、GGG(SEQ ID NO:16)、GGGG(SEQ ID NO:17)和SGGG(SEQ ID NO:21)。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ IDNO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽是冻干的。在一些实施方案中，所述多肽是可溶的。在一些实施方案中，使用皮下注射将所述多肽施用至所述患者。在一些实施方案中，每3周将所述多肽施用至所述患者。在一些实施方案中，每4周将所述多肽施用至所述患者。在一些实施方案中，每周、每两周、每三周或每四周将所述ActRII多肽施用至所述患者。在一些实施方案中，每三周将所述ActRII多肽施用至所述患者。在一些实施方案中，所述多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。在一些实施方案中，所述多肽是糖基化的。在一些实施方案中，所述多肽的糖基化模式可通过在中国仓鼠卵巢细胞中表达而获得。在一些实施方案中，所述ActRII多肽与选自以下的一种或多种配体结合：激活素A、激活素B和GDF11。在一些实施方案中，所述ActRII多肽与激活素和/或GDF11结合。在一些实施方案中，所述ActRII多肽进一步与选自以下的一种或多种配体结合：BMP10、GDF8和BMP6。
在一些实施方案中，所述ActRII多肽是以0.1mg/kg与2.0mg/kg之间的剂量来施用。在一些实施方案中，所述ActRII多肽是以0.3mg/kg的剂量来施用。在一些实施方案中，所述ActRII多肽是以0.7mg/kg的剂量来施用。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述患者施用另外的活性剂和/或支持疗法。在一些实施方案中，所述另外的活性剂和/或支持疗法选自：β阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、利尿剂、降脂药、内皮素阻断剂、PDE5抑制剂、前列环素或左心室辅助装置(LVAD)。在一些实施方案中，所述另外的活性剂和/或支持疗法选自：前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列尼尔和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，西里帕格(selexipag))；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦(thelin)、安贝生坦、马西替坦(macitentan)和波生坦)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，西那西呱(cinaciguat)和利奥西呱(riociguat))；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰基齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的聚乙二醇化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS2)；3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇酸甲酯(DIOXOL)；ZCVI-2；3-脱羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄酯)；左心室辅助装置(LVAD)或肺和/或心脏移植。在一些实施方案中，所述患者已经用选自以下的一种或多种药剂治疗：5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素受体激动剂和内皮素受体拮抗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种药剂选自：波生坦、西地那非、贝前列素、马西替坦、舍来昔帕(西里帕格)、依前列醇、曲前列尼尔、伊洛前列素、安立生坦和他达拉非。在一些实施方案中，所述方法还包括施用选自以下的一种或多种药剂：5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素受体激动剂和内皮素受体拮抗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种药剂选自：波生坦、西地那非、贝前列素、马西替坦、舍来昔帕(西里帕格)、依前列醇、曲前列尼尔、伊洛前列素、安立生坦和他达拉非。在一些实施方案中，所述患者已经在施用所述多肽之前用一种或多种血管扩张药治疗。在一些实施方案中，所述方法还包括施用一种或多种血管扩张药。在一些实施方案中，所述一种或多种血管扩张药选自前列环素、依前列醇和西地那非。在一些实施方案中，所述血管扩张药是前列环素。
在一些实施方案中，所述患者已经接受一种或多种用于PAH的疗法。在一些实施方案中，所述一种或多种用于PAH的疗法选自：前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列尼尔和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，西里帕格)；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦、安贝生坦、马西替坦和波生坦)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，西那西呱和利奥西呱)；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰基齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的聚乙二醇化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS2)；3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇酸甲酯(DIOXOL)；ZCVI-2；3-脱羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄酯)；左心室辅助装置(LVAD)或者肺和/或心脏移植。
在某些方面，本公开文本提供一种治疗或预防患者的与肺动脉高压相关的心肺重塑的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽，其中所述方法减慢心脏重塑和/或逆转心脏重塑。在一些实施方案中，心脏重塑的所述逆转是持续逆转。在一些实施方案中，所述心肺重塑是心室重塑。在一些实施方案中，所述心室重塑是左心室重塑。在一些实施方案中，所述心室重塑是右心室重塑。在一些实施方案中，所述心肺重塑是心室扩张。
在某些方面，本公开文本提供一种包含冻干多肽和注射装置的试剂盒，其中所述多肽是ActRII多肽，所述ActRII多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是由对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列组成的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是由对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列组成的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQID NO:2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是由SEQID NO:2的氨基酸序列组成的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQID NO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是由SEQID NO:3的氨基酸序列组成的多肽。在一些实施方案中，所述多肽是还包含免疫球蛋白的Fc结构域的融合蛋白。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白的Fc结构域是IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。在一些实施方案中，所述融合蛋白还包含定位于所述多肽结构域与所述免疫球蛋白的Fc结构域之间的接头结构域。在一些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG(SEQID NO:20)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:19)、GGGGS(SEQ ID NO:22)、GGG(SEQID NO:16)、GGGG(SEQ ID NO:17)和SGGG(SEQ ID NO:21)。在一些实施方案中，所述接头结构域包含TGGG(SEQ ID NO:20)。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述ActRII多肽由SEQID NO:23的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，所述多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。在一些实施方案中，所述多肽是糖基化的。在一些实施方案中，所述多肽与选自以下的一种或多种配体结合：激活素A、激活素B和GDF11。在一些实施方案中，所述多肽还与选自以下的一种或多种配体结合：BMP10、GDF8和BMP6。在一些实施方案中，所述多肽与激活素和/或GDF11结合。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的一个或多个小瓶。在一些实施方案中，所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的至少两个小瓶。在一些实施方案中，所述两个小瓶可以含有相同或不同量的所述冻干多肽。在一些实施方案中，所述小瓶包含25mg至60mg之间的所述冻干多肽。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶含有45mg冻干多肽。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶含有30mg冻干多肽。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶含有25mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶含有45mg冻干多肽并且第二小瓶含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶含有30mg冻干多肽并且第二小瓶含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶含有45mg冻干多肽并且第二小瓶含有45mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶含有30mg冻干多肽，第二小瓶含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶含有25mg冻干多肽，第二小瓶含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，将所述小瓶在2-8℃下冷冻。
在一些实施方案中，所述注射装置包括预填充的注射器。在一些实施方案中，所述注射装置包含泵装置。在一些实施方案中，所述泵装置包含机电泵送组件。在一些实施方案中，所述泵装置是可穿戴泵装置。在一些实施方案中，所述预填充的注射器包含重构溶液。在一些实施方案中，所述重构溶液包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，所述药学上可接受的载体选自盐水溶液、纯化水或无菌注射用水。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂选自缓冲剂[例如，柠檬酸(一水合物)和/或柠檬酸三钠(脱水)]、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80)、稳定剂(例如，蔗糖)和冻干保护剂(例如，蔗糖)。在一些实施方案中，所述注射装置包含小瓶适配器。在一些实施方案中，所述小瓶适配器能够附接至小瓶。在一些实施方案中，所述小瓶适配器能够附接至预填充的注射器。在一些实施方案中，所述预填充的注射器和所述小瓶附接至所述小瓶适配器的相对两端。在一些实施方案中，将所述重构溶液从所述预填充的注射器转移至所述小瓶。在一些实施方案中，将所述冻干多肽重构为无菌可注射溶液。在一些实施方案中，将所述冻干多肽在使用前重构为无菌可注射溶液。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是无菌注射用水。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是肠胃外施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由皮下注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由皮内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由肌内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由静脉内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是自我施用的。在一些实施方案中，所述注射装置用于施用所述无菌可注射溶液。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液包含治疗有效剂量。在一些实施方案中，所述治疗有效剂量包含基于体重的剂量。在一些实施方案中，所述冻干多肽是每3周施用。在一些实施方案中，所述冻干多肽是每4周施用。在一些实施方案中，所述试剂盒用于治疗PAH。在一些实施方案中，所述冻干多肽的贮藏寿命为至少1、3、6、9或11个月。在一些实施方案中，所述冻干多肽的贮藏寿命为至少1、1.5、2、2.5或3年。在一些实施方案中，所述冻干多肽是重构的。在一些实施方案中，所述重构的多肽的贮藏寿命为至少2小时、3小时或4小时。
附图说明
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图1显示人ActRIIB(SEQ ID NO:31)与人ActRIIA(SEQ ID NO:2)的细胞外结构域的比对，其中本文基于对多种ActRIIB和ActRIIA晶体结构的综合分析推论为直接接触配体的残基用框来指示。
图2显示各种脊椎动物ActRIIA蛋白与人ActRIIA(SEQ ID NO:6-10和36-38)的的多序列比对。
图3显示使用Clustal 2.1对来自人IgG同种型的Fc结构域的多序列比对。铰链区由虚线下划线指示。双下划线指示IgG1 Fc(SEQ ID NO:32)中工程化以促进不对称链配对的位置和关于其他同种型IgG2(SEQ ID NO:33)、IgG3(SEQ ID NO:34)和IgG4(SEQ ID NO:35)的相应位置的例子。
图4A和图4B显示CHO细胞中表达的ActRIIA-hFc的纯化。所述蛋白质纯化为单一的界限清晰的峰，如通过粒度分级柱(图4A)和考马斯染色SDS-PAGE(图4B)所可视化(左泳道：分子量标准品；右泳道：ActRIIA-hFc)。
图5A和图5B显示ActRIIA-hFc与激活素(图5A)和GDF-11(图5B)的结合，如通过BiacoreTM测定所测量。
图6显示在肺动脉高压的野百合碱大鼠模型中，媒介物、西地那非和ActRIIA-mFc治疗对血管肌肉度的作用。
图7显示在肺动脉高压的Sugen缺氧大鼠模型中，媒介物、西地那非和ActRIIA-mFc治疗对血管肌肉度的作用。
图8A-图8D显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(sotatercept，一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验中，从基线至第24周，肺血管阻力的变化。图8A显示全分析集中的最小二乘均值±SE。肺血管阻力与安慰剂相比的最小二乘均值差对于0.3mg/kg索特西普为-145.8达因·s/cm5(95％ CI，-241.0至-50.6)，并且对于0.7mg/kg索特西普为-239.5达因·s/cm5(95％ CI，-329.3，-149.7)。图8B在索特西普0.3mg/kg和0.7mg/kg组的全分析集中，在基线与安慰剂对照的治疗期结束时(第24周)之间，肺血管阻力按照访视的变化±SE。图8C显示在患者亚组中，0.3mg/kg索特西普对肺血管阻力从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。图8D显示在患者亚组中，0.7mg/kg索特西普对肺血管阻力从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。
图9A和图9B显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验中，各个参数从基线至第24周的变化。将患者用安慰剂、0.3mg/kg索特西普或0.7mg/kg索特西普治疗。
图10A-图10C显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验中，6分钟步行距离从基线至第24周的变化。图10A显示全分析集中的最小二乘均值±SE。6-分钟步行距离与安慰剂相比的最小二乘均值差对于0.3mg/kg索特西普为29.4m(95％ CI，3.8至55.0)，并且对于0.7mg/kg索特西普为21.4m(95％ CI，-2.8至45.7)。图10B显示在患者亚组中，0.3mg/kg索特西普对6分钟步行距离从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。图10C显示在患者亚组中，0.7mg/kg索特西普对6分钟步行距离从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。
图11A-图11C显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验中，NT-proBNP从基线至第24周的变化。图11A显示全分析集中的最小二乘均值±SE。NT-ProBNP与安慰剂相比的最小二乘均值差对于0.3mg/kg索特西普为-931.5pg/mL(95％ CI，-1353.24至-5.0.70)，并且对于0.7mg/kg索特西普为-651.0pg/mL(95％ CI，-1043.28至-258.74)。图11B显示在患者亚组中，0.3mg/kg索特西普对NT-proBNP从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。图11C显示在患者亚组中，0.7mg/kg索特西普对NT-proBNP从基线至第24周的变化的作用。所有数据都来自全分析集并且使用以基线值作为协变量的协方差分析与安慰剂进行比较。
图12显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验期间测量的超声心动图参数从基线至第24周的平均变化。基线数据是来自可评价分析集的平均值(SD)并且变化是LS均值(SE)。所有超声心动图数据都是以2D获得。TAPSE：三尖瓣环平面收缩期偏移；RVFAC：右心室面积变化分数。如果受试者在第24周访视前中断，则第24周包括治疗结束访视。P值是基于使用基线WHO功能等级和基线结果作为协变量的ANCOVA分析。
图13A-图13F显示，在BMPR2缺陷的小鼠模型中，索特西普类似物RAP-011(一种ActRIIA-mFc多肽)预防PH并降低右心室肥大。用于测试RAP-011在患有Bmpr2单倍剂量不足的小鼠中的预防作用的实验策略。使Bmpr2+/R899X小鼠暴露于常压缺氧(FIO2＝0.10)并且每周两次用RAP-011(10mg/kg，s.c.)或媒介物(PBS)治疗持续5周(图13A)。图13B显示右心室收缩压(RVSP)并且图13C显示富尔顿指数(Fulton index)，计算为右心室重量(RV)与左心室和间隔的总重量(LV+S)的比率。数据为平均值±SEM(n＝7-10/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试(Tukey post hoc test)进行分析。(图13D显示，通过PCR进行的基因组DNA扩增和直接测序确认了Bmpr2+/R899X小鼠中杂合突变(箭头)的存在(野生型等位基因与突变体等位基因的峰高相等)。图13E显示来自野生型和Bmpr2+/R899X小鼠的肺匀浆物的免疫印迹，分析其以确定BMPR2的表达。图13F显示针对GADPH归一化的BMPR2蛋白表达的定量。数据为平均值±SEM(n＝5/组)。通过Students t检验进行分析。*P<0.05，***P<0.001，****P<0.0001。
图14A-图14E显示，RAP-011在组合疗法以及单一疗法中对于逆转严重实验性PAH中的肺血管重塑是有效的。图14A显示用于测试RAP-011在严重PAH的Sugen-缺氧-常氧(SuHxNx)大鼠模型中的治疗效果的实验策略。在第0天用单一剂量的SU5416(20mg/kg)对大鼠进行治疗，并使其暴露于常压缺氧(FIO2＝0.10)持续3周，之后6周常氧以允许疾病进展。另外用RAP-011(2.5mg/kg，s.c.，每周两次)、西地那非(30mg/kg，p.o.，每天两次)、具有RAP-011和西地那非的组合疗法或媒介物(PBS)治疗大鼠4周，在SU5416后第5周开始。图14B显示RVSP，并且图14C显示全肺阻力指数(TPRI)。数据为平均值±SEM(n＝7-14/组)。图14D显示用苏木素和伊红染色的代表性肺切片的图像。比例尺，200μm。图14E显示用针对α-平滑肌肌动蛋白的抗体进行免疫染色以说明肺组织病理学等级的肺切片的图像。比例尺，50μm。根据血管外径分组的归类为0级(正常，无阻塞)、1级(<50％阻塞)或2级(>50％阻塞)的肺动脉血管的百分比。数据为平均值±SEM(n＝4只大鼠/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试进行分析；为简单起见，仅指出0级血管的百分比的显著性(*P<0.05)。
图15A-图15G显示，对激活素、GDF8和GDF11的同时抑制在体外和体内有助于RAP-011在PH模型中的作用。图15A显示在严重PAH的SuHxNx模型中使用RAP-011的治疗性治疗对肺细胞增殖的作用，如通过对Ki67呈阳性的细胞的百分比所测量。数据为平均值±SEM(n＝4-5只大鼠/组)。图15B说明用于研究索特西普的抗增殖作用的细胞培养系统。在存在或不存在针对激活素A和激活素B的单独抗体(抗Act)、针对GDF8和GDF11的双重抗体(抗GDF)、组合的抗Act和抗GDF或索特西普(ACE-011)的情况下，将人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)用从人肺动脉内皮细胞PAEC收集的条件化培养基处理。在溴脱氧尿苷(BrdU)测定中对PASMC增殖进行定量，如图15C中所示。数据为平均值±SEM(n＝8/组)。图15D说明用于测试多配体抑制在PH的SuHx大鼠模型中的预防作用的实验策略。将大鼠用单一剂量的SU5416(20mg/kg，s.c.)治疗，使其暴露于常压缺氧(FIO2＝0.13)，并且每周两次用抗Act(10mg/kg+10mg/kg)、抗GDF(10mg/kg)、组合的抗Act和抗GDF或媒介物(PBS)s.c.治疗4周，在SU5416后1天开始。图15E显示根据图15D治疗的大鼠的肺动脉收缩压(sPAP)。图15F显示根据图15D治疗的大鼠的mPAP。图15G显示根据图15D治疗的大鼠的富尔顿指数。数据为平均值±SEM(n＝5-9只大鼠/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试进行分析(*P<0.05，**P<0.01，****P<0.0001)。
图16A-图16K显示，在严重实验性PAH中，使用RAP-011而不是西地那非的治疗性治疗降低心脏肥大，恢复间隔壁几何结构，并且改进右心室功能。图16A显示在正常或SuHxNx大鼠中随治疗而变化的富尔顿指数，并且图16B显示心脏指数(CI)。数据为平均值±SEM(n＝7-13只大鼠/组)。图16C显示在治疗前和治疗后以重复方式从单独SuHxNx大鼠获得的代表性超声心动图像。图16D显示根据实施例13治疗的动物的肺动脉加速时间(PAAT)。图16E显示根据实施例13治疗的动物的三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。图16F显示根据实施例13治疗的动物在心脏舒张期测量的右心室壁厚度(RVWT)。图16G显示根据实施例13治疗的动物的右心室面积变化分数(RVFAC)。数据为平均值±SEM(n＝7-11只大鼠/组)。图16H-图16K显示在正常或SuHxNx大鼠的右心室中随治疗而变化的肌球蛋白重链亚型表达的比率(Myh7:Myh6)(图16H)以及Nppb(图16I)、Inhba(图16J)和Inhbb(图16K)mRNA的水平。数据为平均值±SEM(n＝6-11只大鼠/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试进行分析(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001)。
图17A-图17I显示在压力超负荷引起的右心衰竭模型中，RAP-011发挥结构性和功能性心脏保护作用。图17A显示用于评估RAP-011在持续压力超负荷的小鼠模型中的潜在心脏保护作用的实验策略。使野生型小鼠经历肺动脉环束术，并且每周两次用RAP-011(10mg/kg，s.c.)或媒介物(PBS)治疗3周，在手术后1天开始。使用图17A中描述的实验策略测量的各个参数如下：富尔顿指数(图17B)、右心室游离壁厚度(RVFWT)(图17C)、TAPSE(图17D)、心肌工作能力指数(MPI)(图17E)、右心室形成压(RVDP)(图17F)以及右心室压升高(dP/dtmax)和下降(-dP/dtmin)的峰值速率(图17G)。数据为平均值±SEM(第21天，n＝10-15只小鼠/组)。图17H显示用马松三色蓝(Masson's trichrome blue)染色以检测纤维化的右心室切片的代表性图像(比例尺，20μm)，并且图17I显示对纤维化组织所占面积百分比的定量。数据为平均值±SEM(n＝10-15只小鼠/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试进行分析(*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001)。
图18A-图18G显示RAP-011在严重实验性PAH中的疾病逆转作用在退出治疗后持续存在。图18A显示用于测试RAP-011在严重PAH的SuHxNx大鼠模型中的治疗效果的持久性的实验策略。在第0天用单一剂量的SU5416(20mg/kg，s.c.)对大鼠进行治疗，并使其暴露于3周的常压缺氧(FIO2＝0.10)和之后10周的常氧，以允许疾病进展。从SU5416后第5周至第9周，另外用RAP-011(2.5mg/kg，s.c.)或媒介物(PBS)每周两次治疗大鼠，此时在剩余的4周中退出治疗。确定随治疗而变化的以下参数：RVSP(图18B)、TPRI(图18C)、富尔顿指数(图18D)、CI(图18E)、PAAT(图18F)和TAPSE(图18G)。数据为平均值±SEM(n＝7-13只大鼠/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试进行分析(*P<0.05，**P<0.01，****P<0.0001)。
图19显示一种包含冻干多肽和注射装置的试剂盒的组件。小瓶(1)容纳冻干多肽、重构的无菌可注射溶液或无菌可注射溶液。预填充的注射器(2)含有用于将来自(1)冻干多肽重构为无菌可注射溶液的重构溶液。通过在一端附接至小瓶且在对端附接至预填充的注射器，小瓶适配器(3)将小瓶(1)连接至预填充的注射器(2)。提供注射器(4)和针(5)用于无菌可注射溶液的施用。提供擦拭物(Swab wipe)(6)用于单独试剂盒组件的灭菌。
图20A-图20C显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验期间测量的超声心动图参数从基线至第24周的平均变化。图20A显示右心室舒张末期面积(RVEDA)从基线至第24周的LS均值(SE)变化的改进。图20B显示右心室收缩末期面积(RVESA)从基线至第24周的LS均值(SE)变化的改进。图20C以表格形式显示来自图20A和图20B的LS均值和p值数据。基线数据是来自可评价分析集的平均值(SD)并且变化是LS均值(SE)。所有超声心动图数据都是以2D获得。棒图表示平均值±标准差。
Figure BDA0004086391950000121
EOP表示在安慰剂对照的治疗期(24周)结束时获得的数据。
Figure BDA0004086391950000122
所有LS均值的标准误差在括号中表示。CI：置信区间；EOP：安慰剂对照的治疗期的结束；LS：最小二乘；SOC：护理标准。
图21A和图21B显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验期间测量的肺动脉收缩压从基线至第24周的平均变化。图21A显示使用0.3mg/kg索特西普和护理标准(SOC)或者0.7mg/kg索特西普和SOC治疗的患者的肺动脉收缩压(PASP)的改进。图21B以表格形式显示来自图21A的LS均值和p值数据。基线数据是来自可评价分析集的平均值(SD)并且变化是LS均值(SE)。所有超声心动图数据都是以2D获得。棒图表示平均值±标准差。
Figure BDA0004086391950000123
EOP表示在安慰剂对照的治疗期(24周)结束时获得的数据。
Figure BDA0004086391950000124
所有LS均值的标准误差在括号中表示。CI：置信区间；LS：最小二乘。
图22A和图22B显示在患有肺动脉高压的患者中使用索特西普(一种ActRIIA-hFc多肽)治疗的安慰剂对照试验期间测量的右心室-肺动脉(RV-PA)耦合从基线至第24周的平均变化。图22A显示用0.3mg/kg索特西普和护理标准(SOC)或者0.7mg/kg索特西普和SOC治疗的患者的RV-PA耦合的改进。图22B以表格形式显示来自图22A的LS均值和p值数据。基线数据是来自可评价分析集的平均值(SD)并且变化是LS均值(SE)。所有超声心动图数据都是以2D获得。棒图表示平均值±标准差。
Figure BDA0004086391950000125
EOP表示在安慰剂对照的治疗期(24周)结束时获得的数据。
Figure BDA0004086391950000126
所有LS均值的标准误差在括号中表示。§RV-PA耦合的截止值尚未在大型队列中加以验证。CI：置信区间；LS：最小二乘；括号用于所有LS均值；RV-PA：右心室-肺动脉。
图23A-图23F显示，在BMPR2单倍剂量不足的小鼠模型中，用ActRIIA-mFc多肽治疗预防PH并降低右心室肥大。用于测试ActRIIA-mFc在Bmpr2单倍剂量不足的小鼠模型中的预防作用的实验策略显示于图23A中。将二十九只Bmpr2+/R899X小鼠随机化为三组：(i)将七只小鼠饲养在常氧条件中5周，“Nx”；(ii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并皮下注射媒介物对照(磷酸盐缓冲盐水(PBS))，每周两次持续5周，“Hx Veh”；以及(iii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并以10mg/kg剂量皮下注射ActRIIA-mFc，每周两次持续5周，“Hx ActRIIA-mFc”。图23B显示肺动脉加速时间(PAAT)，并且图23C显示右心室收缩压(RVSP)。图23D显示右心室游离壁厚度(RVWT)，并且图23E显示富尔顿指数，计算为右心室重量(RV)与左心室和间隔的总重量(LV+S)的比率(RV/(LV+S))。图23F显示三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。数据为平均值±SEM(n＝7-11/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试(Tukey post hoctest)进行分析。*P<0.05，***P<0.001，****P<0.0001。
图24A和图24B显示，用ActRIIA-mFc多肽治疗通过阻止肺中的巨噬细胞浸润来预防血管周围炎症。将二十九只Bmpr2+/R899X小鼠随机化为三组：(i)将七只小鼠饲养在常氧条件中5周，“Nx”；(ii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并皮下注射媒介物对照(磷酸盐缓冲盐水(PBS))，每周两次持续5周，“Hx Veh”；以及(iii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并以10mg/kg剂量皮下注射ActRIIA-mFc，每周两次持续5周，“Hx ActRIIA-mFc”。图24A显示通过对巨噬细胞标记物F4/80进行免疫组织化学染色对肺中巨噬细胞浸润的尸检分析。图24B显示基于每只动物40个高倍放大视野的评估对肺中F4/80阳性细胞的百分比的定量。数据为平均值±SEM(n＝7-11/组)。通过单因素ANOVA和图基事后测试(Tukey post hoc test)进行分析。*P<0.05，***P<0.001，****P<0.0001。
具体实施方式
1.概述
本公开文本涉及治疗肺动脉高压(例如，功能II级或功能III级)的组合物和方法，其包括向有需要的患者施用有效量的如本文所述的ActRII多肽。在某些实施方案中，本公开文本提供通过向有需要的个体施用治疗有效量的如本文所述的ActRII多肽来治疗或预防所述个体的肺动脉高压的方法。
肺动脉高压[世界卫生组织(WHO)第1组PH]是一种肺血管系统的严重的、进行性的且危及生命的疾病，其特征为深度血管收缩以及肺动脉壁中平滑肌细胞的异常增殖。肺血管的严重收缩导致肺动脉压极高。这些高压使得心脏难以将血液泵送通过肺进行充氧。PAH患者遭受极度的呼吸短促，因为心脏难以泵送血液对抗这些高压。患有PAH的患者通常出现PVR的显著增加和mPAP的持续升高，最终导致右心室衰竭和死亡。被诊断患有PAH的患者具有差的预后并且同样累及的生活质量，如果不治疗，则从诊断时起平均预期寿命为2至5年。
PAH可以基于静息时平均肺动脉压高于25mmHg(或根据更新的指南高于20mmHg)且肺动脉毛细血管楔压正常来诊断。PAH可能导致呼吸急促、头晕、昏厥和其他症状，这些症状都会因劳累而加重。PAH可能是伴随显著降低的运动耐力和心力衰竭的严重疾病。PAH的两个主要类型包括特发性PAH(例如，其中未鉴定出倾向因素的PAH)和可遗传PAH(例如，与BMPR2、ALK1、ENG、SMAD9、CAV1、KCNK3或EIF2AK4中的突变相关的PAH)。在70％的家族性PAH病例中，突变位于BMPR2基因中。患上PAH的风险因子包括PAH家族史、药物和毒素使用(例如，甲基苯丙胺或可卡因使用)、感染(例如，HIV感染或血吸虫病)、肝硬化、先天性心脏畸形、门静脉高压、肺静脉闭塞性疾病、肺毛细血管瘤或结缔组织/自身免疫障碍(例如，硬皮病或狼疮)。PAH可能与以下相关：对钙通道阻滞剂的长期反应者、静脉/毛细血管(PVOD/PCH)受累的明显特征以及新生儿综合征的持久性PH。
本说明书中使用的术语在本公开文本的上下文中以及在使用每个术语的特定上下文中通常具有它们在本领域中的普通含义。某些术语在下文或本说明书的其他地方进行讨论，以向从业者提供关于描述本公开文本的组合物和方法以及如何制备和使用它们的额外指导。术语的任何使用的范围或含义将从使用它的特定上下文中变得清楚。
术语“序列相似性”在其所有语法形式中是指核酸或氨基酸序列之间的同一性或对应性程度，所述核酸或氨基酸序列可以或可以不具有共同的进化起源。
关于参考多肽(或者核苷酸)序列的“序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列并引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比后，且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分，候选序列中与参考多肽(核苷酸)序列的氨基酸残基(或者核酸)相同的氨基酸残基(或者核酸)的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以本领域技术范围内的许多方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，如BLAST(基本局部比对搜索工具)、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2、Clustal Omega或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括对所比较序列的全长实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中，使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成氨基酸(核酸)序列同一性值％。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经以用户文档提交在美国版权局(U.S.Copyright Office)，华盛顿特区，20559中，其中它在美国版权登记号TXU510087下注册。ALIGN-2程序可以从加利福尼亚州南旧金山市(South SanFrancisco,Calif.)的Genentech,Inc.公开获得，或者可以从源代码编译。应编译ALIGN-2程序以在UNIX操作系统上使用，所述操作系统包括数字UNIX V4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置，并且不改变。用于确定序列同一性或同源性的其他算法包括：ClustalOmega(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/)、LALIGN(http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/lalign/和http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/lalign/nucleotide.html)、FASTA(http://www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta/)、SIM(http://web.expasy.org/sim/)以及EMBOSS Needle(https://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/)。在优选实施方案中，用于确定序列同一性的算法是Clustal Omega。
所有语法形式的“激动”是指激活蛋白质和/或基因(例如，通过激活或扩增该蛋白质的基因表达或通过诱导无活性蛋白质进入活性状态)或提高蛋白质和/或基因的活性的过程。
所有语法形式的“拮抗”是指抑制蛋白质和/或基因(例如，通过抑制或降低该蛋白质的基因表达或通过诱导活性蛋白质进入无活性状态)或降低蛋白质和/或基因活性的过程。
在整个说明书和权利要求书中结合数值使用的术语“约”和“大约”表示本领域技术人员熟悉并且可接受的精确度区间。通常，这种精确度区间为±10％。可替代地，并且特别是在生物系统中，术语“约”和“大约”可以意指在给定值的数量级内(优选地≤5倍且更优选地≤2倍)的值。
本文所公开的数字范围包括限定所述范围的数字。
除非使用术语的上下文另外明确规定，否则术语“一个/一种(a)”和“一个/一种(an)”包括复数指示物。术语“一个/一种(a)”(或“一个/一种(an)”)以及术语“一个或多个/一种或多种”和“至少一个/至少一种”可以在本文中互换使用。此外，当在本文中使用时，“和/或”被视为对两个或更多个指定特征或组分中的每一个与或不与其他特征或组分一起的具体公开。因此，在本文中诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，如在短语如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”意图包括以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独的)；B(单独的)；以及C(单独的)。
在整个本说明书中，词语“包含”应被理解为暗示包括所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。
2.ActRII多肽
在某些方面，本公开文本涉及ActRII多肽及其用途(例如，治疗、预防肺动脉高压或肺动脉高压的一种或多种并发症或降低其进展率和/或严重性)。如本文所用，术语“ActRII”是指II型激活素受体的家族。这个家族包括激活素受体IIA型(ActRIIA)和激活素受体IIB型(ActRIIB)。
在某些实施方案中，本公开文本涉及具有与如SEQ ID NO:1、2、3、23、27、30和41中任一个所示的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的ActRII多肽。在其他实施方案中，本公开文本涉及具有与如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的ActRII多肽。如本文所用，术语“ActRII”是指激活素受体IIA型(ActRIIA)蛋白家族、激活素受体IIB型(ActRIIB)蛋白家族或其组合和/或变体。所述ActRII多肽可以源自任何物种并且包括通过诱变或其他修饰源自这样的ActRII蛋白的变体。本文中提及ActRII时应理解为提及任一种当前鉴定的形式。ActRII家族的成员通常是跨膜蛋白，其由包含富半胱氨酸区的配体结合细胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域构成。
术语ActRII多肽包括包含ActRII家族成员的任何天然存在的多肽以及其保留有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。这样的变体ActRII多肽的例子提供于整个本公开文本中以及以下申请中：国际专利申请公开号WO 2006/012627、WO 2007/062188、WO 2008/097541、WO 2010/151426和WO 2011/020045，所述申请通过引用以其整体并入本文。本文所述的所有ActRII相关多肽的氨基酸的编号是基于下文提供的人ActRII前体蛋白序列(SEQ ID NO:1)的编号，除非另外明确指出。
典范人ActRII前体蛋白序列如下：
Figure BDA0004086391950000151
信号肽由单下划线指示；细胞外结构域以粗体字指示；并且潜在的内源N-连接的糖基化位点由
Figure BDA0004086391950000152
指示。
加工的(成熟)细胞外人ActRII多肽序列如下：
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPP(SEQ ID NO:2)
细胞外结构域的C末端“尾部”由单下划线指示。缺失“尾部”的序列(Δ15序列)如下：
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEM(SEQ ID NO:3)
编码人ActRII前体蛋白的核酸序列显示于下文中(SEQ ID NO:4)，如下Genbank参考序列NM_001616.4的核苷酸159-1700。信号序列加下划线。
Figure BDA0004086391950000153
Figure BDA0004086391950000161
编码加工的可溶(细胞外)人ActRII多肽的核酸序列如下：
Figure BDA0004086391950000162
ActRII在脊椎动物之间非常保守，其中大段的细胞外结构域完全保守。例如，图2描绘人ActRIIA细胞外结构域与各种ActRIIA直系同源物相比的多序列比对。与ActRIIA结合的许多配体也是高度保守的。因此，根据这些比对，可以预测配体结合结构域内对于正常的ActRII-配体结合活性重要的关键氨基酸位置，并且可以预测可能在不显著改变正常的ActRII-配体结合活性的情况下耐受取代的氨基酸位置。因此，根据本发明公开的方法有用的活性人ActRII变体多肽可以包括在来自另一种脊椎动物ActRII的序列的相应位置处的一个或多个氨基酸，或者可以包括与人或其他脊椎动物序列中的残基类似的残基。
人ActRIIA细胞外结构域和人ActRIIB细胞外结构域的氨基酸序列的比对显示于图1中。此比对指示两种受体内被认为直接接触ActRII配体的氨基酸残基。例如，复合ActRII结构表明，ActRIIA-配体结合袋部分由残基F31、N33、N35、K38至T41、E47、Y50、K53至K55、R57、H58、F60、T62、K74、W78至N83、Y85、R87、E92以及K94至F101定义。在这些位置处，预期保守突变会被耐受。
不意在是限制性的，以下例子说明了定义活性ActRII变体的这种方法。如图2中所示，人细胞外结构域中的F13是绵羊(Ovis aries)(SEQ ID NO:7)、原鸡(Gallus gallus)(SEQ ID NO:10)、欧洲牛(Bos Taurus)(SEQ ID NO:36)、仓鸮(Tyto alba)(SEQ ID NO:37)和小鼠耳蝠(Myotis davidii)(SEQ ID NO:38)ActRIIA中的Y，表明在这个位置耐受芳香族残基，包括F、W和Y。人细胞外结构域中的Q24是欧洲牛ActRIIA中的R，表明在这个位置将耐受带电荷残基，包括D、R、K、H和E。人细胞外结构域中的S95是原鸡和仓鸮ActRIIA中的F，表明这个位点可以耐受众多种变化，包括极性残基(如E、D、K、R、H、S、T、P、G、Y)和可能的疏水残基(如L、I或F)。人细胞外结构域中E52是绵羊ActRIIA中的D，表明在这个位置耐受酸性残基，包括D和E。人细胞外结构域中的P29的保守性相对较差，表现为绵羊ActRIIA中的S和小鼠耳蝠ActRIIA中的L，因此在这个位置应耐受基本上任何氨基酸。
此外，如上文所讨论，本领域中已经在结构/功能特征反面、特别是关于配体结合对ActRII蛋白进行表征[Attisano等人(1992)Cell 68(1):97-108；Greenwald等人(1999)Nature Structural Biology 6(1):18-22；Allendorph等人(2006)PNAS 103(20:7643-7648；Thompson等人(2003)The EMBO Journal 22(7):1555-1566；以及美国专利号：7,709,605、7,612,041和7,842,663]。例如，称为三指毒素折叠的限定结构基序对于I型和II型受体的配体结合是重要的，并且由位于每个单体受体的细胞外结构域内不同位置的保守半胱氨酸残基形成[Greenwald等人(1999)Nat Struct Biol 6:18-22；以及Hinck(2012)FEBSLett586:1860-1870]。除了本文的传授外，这些参考文献提供关于如何生成保留一种或多种所需活性(例如，配体结合活性)的ActRII变体的充分指导。
例如，称为三指毒素折叠的限定结构基序对于I型和II型受体的配体结合是重要的，并且由位于每个单体受体的细胞外结构域内不同位置的保守半胱氨酸残基形成[Greenwald等人(1999)Nat Struct Biol 6:18-22；以及Hinck(2012)FEBS Lett 586:1860-1870]。因此，如由这些保守半胱氨酸的最外侧划分的人ActRII的核心配体结合结构域对应于SEQ ID NO:1(ActRII前体)的位置30-110。因此，侧接这些半胱氨酸划分的核心序列的结构上较不有序的氨基酸可以在N末端被截短约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个残基，并且在C末端被截短约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个残基，而不必改变配体结合。示例性ActRII细胞外结构域截短物包括SEQ ID NO:2和3。
因此，ActRII的活性部分(例如，配体结合)的通式是包含SEQ ID NO:1的氨基酸30-110，基本上由其组成或由其组成的多肽。因此，ActRII多肽可以例如包含与在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸21-30中的任一个的残基处开始(例如，在氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)并且在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸110-135中的任一个的位置处结束(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)的ActRII的一部分至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。其他例子包括如下构建体，所述构建体在选自以下的位置处开始：SEQ ID NO:1的21-30(例如，在氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)、22-30(例如，在氨基酸22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)、23-30(例如，在氨基酸23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)、24-30(例如，在氨基酸24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)，并且在选自以下的位置处结束：SEQ ID NO:1的111-135(例如，在氨基酸111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)、112-135(例如，在氨基酸112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)、113-135(例如，在氨基酸113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)、120-135(例如，在氨基酸120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)、130-135(例如，在氨基酸130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)、111-134(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134中的任一个处结束)、111-133(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132或133中的任一个处结束)、111-132(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131或132中的任一个处结束)或111-131(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130或131中的任一个处结束)。还考虑了这些范围内的变体，特别是包含与SEQ IDNO:1的相应部分具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的那些。因此，在一些实施方案中，ActRII多肽可以包含与SEQ ID NO:1的氨基酸30-110至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽，基本上由其组成或者由其组成。任选地，ActRII多肽包含与SEQ ID NO:1的氨基酸30-110至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，并且包含配体结合袋中的不超过1、2、5、10或15个保守氨基酸变化的多肽。在一些实施方案中，所述ActRII多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。
在某些实施方案中，本公开文本涉及一种ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)，包括其片段、功能变体和修饰形式，以及涉及其用途(例如，治疗、预防或降低肺动脉高压)。优选地，ActRII多肽是可溶的(例如，ActRII的细胞外结构域)。在一些实施方案中，ActRII多肽抑制一种或多种GDF/BMP配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]的(例如，Smad信号传导)。在一些实施方案中，ActRII多肽与一种或多种GDF/BMP配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]结合。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽包含与在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸21-30的残基处开始(例如，在氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中任一个处开始)并且在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸110-135中任一个的位置处结束(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)的ActRII的一部分至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。在一些实施方案中，ActRII多肽包含与SEQ ID NO:1的氨基酸30-110至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在某些实施方案中，ActRII多肽包含与SEQ ID NO:1的氨基酸21-135至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在一些实施方案中，ActRII多肽包含与SEQ ID NO:1、2、3、23、27、30和41中任一个的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。
在一些实施方案中，ActRII多肽包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在一些替代性实施方案中，所述ActRII多肽(例如，SEQ ID NO:23)可能缺少C末端赖氨酸。在一些实施方案中，缺少C末端赖氨酸的ActRII多肽是SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在一些实施方案中，向患者施用ActRII多肽，所述ActRII多肽包含与SEQ IDNO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在一些实施方案中，向患者施用ActRII多肽，所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，由其组成或者基本上由其组成。在一些实施方案中，向患者施用SEQ ID NO:23与SEQ ID NO:41的组合。
在某些方面，本公开文本涉及ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII阱是变体ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)，其包含ActRII多肽(例如，“野生型”或未经修饰的ActRII多肽)的细胞外结构域(也称为配体结合结构域)中的一个或多个突变(例如，氨基酸添加、缺失、取代和其组合)，使得所述变体ActRII多肽与相应的野生型ActRII多肽相比具有一种或多种改变的配体结合活性。在优选实施方案中，本公开文本的变体ActRII多肽保留至少一种与相应野生型ActRII多肽类似的活性。例如，优选的ActRII多肽结合至并抑制(例如拮抗)GDF11和/或GDF8的功能。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽进一步结合至并抑制GDF/BMP的一种或多种配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]。因此，本公开文本提供ActRII多肽，其对一种或多种ActRII配体具有改变的结合特异性。
为了说明，可以选择一个或多个突变，所述突变相对于一种或多种ActRII结合配体(如激活素(激活素A或激活素B)，特别是激活素A)增加改变的配体结合结构域对GDF11和/或GDF8的选择性。任选地，所述改变的配体结合结构域针对激活素结合的Kd与针对GDF11和/或GDF8结合的Kd的比率相对于野生型配体结合结构域的所述比率高至少2、5、10、20、50、100或甚至1000倍。任选地，改变的配体结合结构域的抑制激活素的IC50与抑制GDF11和/或GDF8的IC50的比率相对于野生型配体结合结构域高至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或甚至1000倍。任选地，改变的配体结合结构域抑制GDF11和/或GDF8的IC50比抑制激活素的IC50低至少2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或甚至1000倍。
在某些实施方案中，本公开文本考虑ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)的特定突变以改变所述多肽的糖基化。可以选择这样的突变以引入或消除一个或多个糖基化位点，如O-连接的或N-连接的糖基化位点。天冬酰胺连接的糖基化识别位点通常包含三肽序列，即天冬酰胺-X-苏氨酸或天冬酰胺-X-丝氨酸(其中“X”是任何氨基酸)，所述三肽序列被适当的细胞糖基化酶特异性识别。也可以通过多肽序列中一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代来进行改变(对于O-连接的糖基化位点)。在糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置中的一个或两个处的多种氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置处的氨基酸缺失)导致在修饰的三肽序列处的非糖基化。增加多肽上的碳水化合物部分的数量的另一种手段是通过将糖苷化学或酶促偶联至所述多肽。根据所用的偶联模式，可以使一种或多种糖附接至(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基。多肽上存在的一个或多个碳水化合物部分的去除可以通过化学方式和/或酶促方式来完成。化学去糖基化可以涉及例如使多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物。此处理导致除了连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)外大部分或所有糖的切割，同时氨基酸序列保持完整。多肽上的碳水化合物部分的酶促切割可以通过使用多种内切糖苷酶和外切糖苷酶来实现，如Thotakura等人[Meth.Enzymol.(1987)138:350]所述。可以根据所用表达系统的类型适当地调节多肽的序列，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞都可以引入不同的糖基化模式，所述糖基化模式可能受肽的氨基酸序列的影响。通常，用于人的本公开文本的多肽可以在提供适当糖基化的哺乳动物细胞系(如HEK293或CHO细胞系)中表达，但是预期也可以使用其他哺乳动物表达细胞系。
本公开文本还考虑一种生成突变体、特别是ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)的组合突变体集合以及截短突变体的方法。组合突变体的库尤其可用于鉴定功能活性(例如，GDF/BMP配体结合)ActRII序列。筛选这样的组合文库的目的可以是产生例如具有改变的特性(如改变的药代动力学或改变的配体结合)的多肽变体。下文提供多种筛选测定，并且这样的测定可以用于评价变体。例如，可以针对以下能力筛选ActRII变体：与一种或多种GDF/BMP配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]结合，防止GDF/BMP配体与ActRII多肽以及其异多聚体结合，和/或干扰GDF/BMP配体引起的信号传导。
还可以在基于细胞的测定或体内测定中测试ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)或其变体的活性。例如，可以评估ActRII多肽对肺动脉高压发病机制中涉及的基因表达的作用。这可以视需要在一种或多种重组配体蛋白[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]的存在下进行，并且可以转染细胞以产生ActRII多肽以及任选地GDF/BMP配体。同样，可以将ActRII多肽施用至小鼠或其他动物，并且可以使用本领域公认的方法评估对肺动脉高压发病机制的作用。类似地，可以在血细胞前体细胞中针对对这些细胞的生长的任何作用测试ActRII多肽或其变体的活性，例如，通过如本文所述的测定以及本领域公知的那些测定。可以在这样的细胞系中使用SMAD反应性报告基因来监测对下游信号传导的作用。
可以生成组合衍生的变体，其具有相对于参考ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)增加的选择性或大体上增加的效力。这样的变体在从重组DNA构建体表达时可以用于基因疗法方案中。同样，诱变可以产生细胞内半衰期与相应未修饰的ActRII多肽明显不同的变体。例如，可以使改变的蛋白质对蛋白水解降解或导致未修饰多肽的破坏或以其他方式失活的其他细胞过程更稳定或更不稳定。这样的变体和编码它们的基因可以用于通过调节多肽的半衰期来改变多肽复合物水平。例如，短半衰期可以产生更短暂的生物学效应，并且在诱导性表达系统的一部分时，可以允许更严格地控制细胞内的重组多肽复合物水平。在Fc融合蛋白中，可以在接头(如果有的话)和/或Fc部分中进行突变以改变ActRII多肽的半衰期。
可以借助编码多肽文库的简并基因文库来产生组合文库，所述多肽各自包括潜在ActRII多肽序列的至少一部分。例如，可以将合成寡核苷酸混合物酶连接至基因序列中，使得潜在ActRII编码核苷酸序列的简并性集合可表达为单独多肽，或者可替代地，表达为更大融合蛋白的集合(例如，对于噬菌体展示)。
可以通过许多方式从简并性寡核苷酸序列生成潜在同源物的文库。简并基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，然后可以将合成基因连接至适当的载体中进行表达。简并寡核苷酸的合成是本领域中熟知的[Narang,SA(1983)Tetrahedron 39:3；Itakura等人(1981)Recombinant DNA,Proc.3rd Cleveland Sympos.Macromolecules,编辑AG Walton,Amsterdam:Elsevier pp273-289；Itakura等人(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura等人(1984)Science 198:1056；以及Ike等人(1983)Nucleic Acid Res.11:477]。这样的技术已经用于其他蛋白质的定向进化[Scott等人,(1990)Science 249:386-390；Roberts等人(1992)PNAS USA 89:2429-2433；Devlin等人(1990)Science 249:404-406；Cwirla等人,(1990)PNAS USA 87:6378-6382；以及美国专利号：5,223,409、5,198,346和5,096,815]。
可替代地，可以利用其他形式的诱变来生成组合文库。例如，本公开文本的ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)可以通过以下方式从文库生成并分离：使用例如丙氨酸扫描诱变进行筛选[Ruf等人(1994)Biochemistry 33:1565-1572；Wang等人(1994)J.Biol.Chem.269:3095-3099；Balint等人(1993)Gene 137:109-118；Grodberg等人(1993)Eur.J.Biochem.218:597-601；Nagashima等人(1993)J.Biol.Chem.268:2888-2892；Lowman等人(1991)Biochemistry 30:10832-10838；以及Cunningham等人(1989)Science244:1081-1085]，接头扫描诱变[Gustin等人(1993)Virology 193:653-660；以及Brown等人(1992)Mol.Cell Biol.12:2644-2652；McKnight等人(1982)Science232:316]，饱和诱变[Meyers等人,(1986)Science 232:613]；PCR诱变[Leung等人(1989)Method Cell MolBiol 1:11-19]；或者随机诱变，包括化学诱变[Miller等人(1992)A Short Course inBacterial Genetics,CSHL Press,Cold Spring Harbor,NY；以及Greener等人(1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34]。接头扫描诱变，特别是在组合条件下，是一种鉴定ActRII多肽的截短(生物活性)形式的有吸引力的方法。
本领域中已知多种技术用于筛选通过点突变和截短产生的组合文库的基因产物，并且就此而言，用于筛选具有某种特性的基因产物的cDNA文库。这样的技术将通常适用于对通过ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)的组合诱变生成的基因文库的快速筛选。用于筛选大基因文库的最广泛使用的技术通常包括将所述基因文库克隆至可复制的表达载体中，用所得载体文库转化适当的细胞以及在检测所需活性促进相对容易地分离编码基因(所述基因的产物被检测到)的载体的条件下表达所述组合基因。优选地测定包括配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]结合测定和/或配体介导的细胞信号传导测定。
如本领域技术人员将了解，大多数本文所述的突变、变体或修饰可以在核酸水平上进行，或者在一些情形中通过翻译后修饰或化学合成来进行。这样的技术是本领域中熟知的，并且其中一些描述于本文中。部分地，本公开文本鉴定ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)的可以用作指导用于在本文提供的公开文本的范围内生成和使用其他变体ActRII多肽的功能活性部分(片段)和变体。
在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽的功能活性片段可以通过筛选以重组方式从编码ActRII多肽的核酸的相应片段产生的多肽来获得。另外，片段可以使用本领域中已知的技术化学地合成，如常规Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学。可以产生(以重组方式或通过化学合成)并测试所述片段以鉴定可以用作ActRII受体和/或一种或多种配体[例如，GDF11、GDF8、激活素A、激活素B、GDF3、BMP4、BMP6、BMP10和/或BMP15]的拮抗剂(抑制剂)的那些肽基片段。
在某些实施方案中，除了ActRII多肽中天然存在的任何修饰外，本公开文本的ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)还可以包含翻译后修饰。这样的修饰包括但不限于乙酰化、羧化、糖基化、磷酸化、脂化和酰化。作为结果，ActRII多肽可以含有非氨基酸元件，如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖以及磷酸盐。这样的非氨基酸元件对配体阱多肽的功能性的作用可以如本文针对其他ActRII变体所述来测试。当在细胞中通过切割新生形式的多肽来产生本公开文本的多肽时，翻译后加工对于蛋白质的正确折叠和/或功能可能也是重要的。不同细胞(例如，CHO、HeLa、MDCK、293、WI38、NIH-3T3或HEK293)对于这样的翻译后活性具有特定的细胞机构和特征机制，并且可以进行选择以确保对ActRII多肽的正确修饰和加工。
在某些方面，本公开文本的ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)包括具有ActRII多肽的至少一部分(结构域)和一个或多个异源部分(结构域)的融合蛋白。这样的融合结构域的熟知的例子包括但不限于多组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白质A、蛋白质G、免疫球蛋白重链恒定区(Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以选择融合结构域以赋予所需特性。例如，一些融合结构域特别可用于通过亲和色谱分离融合蛋白。出于亲和纯化的目的，使用亲和色谱的相关基质，如谷胱甘肽、淀粉酶和镍或钴缀合的树脂。许多这样的基质可以“试剂盒”形式获得，如可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统和QIAexpressTM系统(Qiagen)。作为另一个例子，可以选择融合结构域以促进ActRII多肽的检测。这样的检测结构域的例子包括各种荧光蛋白(例如，GFP)以及“表位标签”，表位标签通常是短肽序列，可获得其特异性抗体。可容易获得特异性单克隆抗体的公知的表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在一些情况下，融合结构域具有如用于因子Xa或凝血酶的蛋白酶切割位点，其允许相关蛋白酶部分消化融合蛋白并且由此从中释放重组蛋白。然后可以通过后续色谱分离从融合结构域分离所释放的蛋白质。可以选择的其他类型的融合结构域包括多聚化(例如，二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(其赋予另一生物学功能)，包括例如来自免疫球蛋白的恒定结构域(例如，Fc结构域)。
在某些方面，本公开文本的ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)含有能够“稳定化”所述多肽的一个或多个修饰。“稳定化”意指增加体外半衰期、血清半衰期的任何物质，不管这是由于破坏减少、肾脏清除率降低还是药剂的其他药代动力学作用所致。例如，此类修饰延长多肽的保质期，延长多肽的循环半衰期，和/或降低多肽的蛋白水解降解。这样的稳定化修饰包括但不限于融合蛋白(包括例如包含ActRII多肽结构域和稳定结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如将糖基化位点添加至本公开文本的多肽)以及碳水化合物部分的修饰(包括例如从本公开文本的多肽去除碳水化合物部分)。如本文所用，术语“稳定剂结构域”不仅是指在融合蛋白情况下的融合结构域(例如，免疫球蛋白Fc结构域)，而且包括非蛋白质修饰如碳水化合物部分或非蛋白质部分如聚乙二醇。在某些优选实施方案中，ActRII多肽与稳定所述多肽的异源结构域(“稳定剂”结构域)融合，优选地与增加所述多肽的体内稳定性的异源结构域融合。已知具有免疫球蛋白的恒定结构域(例如，Fc结构域)的融合物赋予众多种蛋白质所需的药物代谢动力学特性。同样，与人血清白蛋白的融合物可以赋予期望的特性。
可以用于人IgG1的Fc部分(G1Fc)的天然氨基酸序列的例子示于下文(SEQ ID NO:11)。虚线下划线指示铰链区，并且实线下划线指示关于天然存在的变体的位置。部分地，本公开文本提供多肽，所述多肽包含具有与SEQ ID NO:11的70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。G1Fc中的天然存在的变体将包括根据SEQID NO:11中使用的编号系统的E134D和M136L(参见Uniprot P01857)。
Figure BDA0004086391950000221
任选地，IgG1 Fc结构域具有在诸如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434等残基处的一个或多个突变。在某些情形中，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asp-265突变)的突变体IgG1 Fc结构域与Fcγ受体结合的能力相对于野生型Fc结构域有所降低。在其他情形中，具有这些突变中的一个或多个(例如，Asn-434突变)的突变体Fc结构域与MHC I类相关Fc受体(FcRN)结合的能力相对于野生型IgG1 Fc结构域有所增加。
可以用于人IgG2的Fc部分(G2Fc)的天然氨基酸序列的例子显示于下文中(SEQ IDNO:12)。虚下划线指示铰链区，并且双下划线指示在所述序列中存在数据库冲突的位置(根据UniProt P01859)。部分地，本公开文本提供多肽，所述多肽包含具有与SEQ ID NO:12的70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。
Figure BDA0004086391950000222
可以用于人IgG3的Fc部分(G3Fc)的氨基酸序列的两个例子如下所示。G3Fc中的铰链区可以是其他Fc链中的最多四倍长，并且含有三个相同的15个残基的区段，其前面是相似的17个残基的区段。如下所示的第一G3Fc序列(SEQ ID NO:13)含有由15个残基的单一区段组成的短铰链区，而第二G3Fc序列(SEQ ID NO:14)含有全长铰链区。在每种情形中，虚线下划线指示铰链区，并且实线下划线指示根据UniProt P01859具有天然存在的变体的位置。部分地，本公开文本提供多肽，所述多肽包含具有与SEQ ID NO:13和14的70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。
Figure BDA0004086391950000223
Figure BDA0004086391950000231
当转换为SEQ ID NO:13中使用的编号系统时，G3Fc中天然存在的变体(例如，参见Uniprot P01860)包括E68Q、P76L、E79Q、Y81F、D97N、N100D、T124A、S169N、S169del、F221Y，并且本公开文本提供包含含有这些变异中的一个或多个的G3Fc结构域的融合蛋白。另外，人免疫球蛋白IgG3基因(IGHG3)显示特征为不同铰链长度的结构多态性[参见UniprotP01859]。具体而言，变体WIS缺少大部分V区和全部CH1区。除了铰链区中正常存在的位置11外，其在位置7处具有额外的链间二硫键。变体ZUC缺少大部分V区、全部CH1区和部分铰链。变体OMM可以表示等位基因形式或另一个γ链亚类。本公开文本提供另外的融合蛋白，其包含含有这些变体中的一种或多种的G3Fc结构域。
可以用于人IgG4的Fc部分(G4Fc)的天然氨基酸序列的例子显示于下文中(SEQ IDNO:15)。虚下划线指示铰链区。部分地，本公开文本提供多肽，所述多肽包含具有与SEQ IDNO:15的70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。
Figure BDA0004086391950000232
Fc结构域中的多个工程化突变关于G1Fc序列(SEQ ID NO:11)呈现于本文中，并且G2Fc、G3Fc和G4Fc中的类似突变可以从它们与图4中G1Fc的比对得到。由于铰链长度不等，在SEQ ID NO:11、12、13、14和15中基于同种型比对(图4)的类似Fc位置具有不同的氨基酸编号。还可以理解，由铰链、CH2和CH3区域组成的免疫球蛋白序列(例如，SEQ ID NO:11、12、13、14或15)中的给定氨基酸位置将通过与编号涵盖整个IgG1重链恒定结构域(由CH1、铰链、CH2和CH3区域组成)(如在Uniprot数据库中)时的相同位置不同的编号来标识。例如，人G1Fc序列(SEQ ID NO:11)、人IgG1重链恒定结构域(Uniprot P01857)和人IgG1重链中选择的CH3位置之间的对应性如下。
Figure BDA0004086391950000233
Figure BDA0004086391950000241
在单一细胞系中增加含Fc融合多肽链的所需配对以在可接受的产量下产生优选的不对称融合蛋白的多种方法是本领域中已知的[Klein等人(2012)mAbs 4:653-663；和Spiess等人(2015)Molecular Immunology 67(2A):95-106]。获得所需的含Fc链的配对的方法包括但不限于基于电荷的配对(静电转向)、“杵臼结构(knobs-into-holes)”空间配对、SEED体配对和基于亮氨酸拉链的配对[Ridgway等人(1996)Protein Eng 9:617-621；Merchant等人(1998)Nat Biotech 16:677-681；Davis等人(2010)Protein Eng Des Sel23:195-202；Gunasekaran等人(2010)；285:19637-19646；Wranik等人(2012)J Biol Chem287:43331-43339；US5932448；WO 1993/011162；WO 2009/089004和WO 2011/034605]。
应理解，融合蛋白(例如，免疫球蛋白Fc融合蛋白)的不同元件可以以符合所需功能性的任一方式排列。例如，可以将ActRII多肽结构域置于异源结构域的C末端，或者可替代地，可以将异源结构域置于ActRII多肽结构域的C末端。ActRII多肽结构域与异源结构域不需要在融合蛋白中相邻，并且可以在任一结构域的C端或N端或在所述结构域之间包括另外的结构域或氨基酸序列。
例如，ActRII受体融合蛋白可以包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列。B部分对应于ActRII多肽结构域(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)。A部分和C部分可以独立地为零个、一个或多于一个氨基酸，并且A部分和C部分二者在存在时对于B是异源的。A部分和/或C部分可以经由接头序列附接至B部分。接头可以富含甘氨酸(例如，2-10、2-5、2-4、2-3个甘氨酸残基)或甘氨酸和脯氨酸残基，并且可以例如含有苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸的单一序列或苏氨酸/丝氨酸和/或甘氨酸的重复序列，例如，GGG(SEQ ID NO:16)、GGGG(SEQ IDNO:17)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:19)、TGGG(SEQ ID NO:20)、SGGG(SEQ IDNO:21)或GGGGS(SEQ ID NO:22)单一序列或重复序列。在某些实施方案中，ActRII融合蛋白包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列，其中A是前导(信号)序列，B由ActRII多肽结构域组成，并且C是增强以下中的一种或多种的多肽部分：体内稳定性、体内半衰期、摄取/施用、组织定位或分布、蛋白复合物的形成和/或纯化。在某些实施方案中，ActRII融合蛋白包含如式A-B-C中所示的氨基酸序列，其中A是TPA前导序列，B由ActRII受体多肽结构域组成，并且C是免疫球蛋白Fc结构域。优选地融合蛋白包含如SEQ ID NO:23、27、30和41中任一个所示的氨基酸序列。
在优选实施方案中，要根据本文所述的方法使用的ActRII多肽是分离的多肽。如本文所用，分离的蛋白质或多肽是已经与其天然环境的组分分离者。在一些实施方案中，将本公开文本的多肽纯化至大于95％、96％、97％、98％或99％纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)所确定。用于评估纯度的方法是本领域中熟知的[参见例如，Flatman等人,(2007)J.Chromatogr.B 848:79-87]。在一些实施方案中，要根据本文所述的方法使用的ActRII多肽是重组多肽。
本公开文本的ActRII多肽可以通过多种本领域中已知的技术来产生。例如，本公开文本的多肽可以使用标准蛋白质化学技术来合成，如以下文献中所述的那些技术：Bodansky,M.Principles of Peptide Synthesis,Springer Verlag,柏林(1993)和GrantG.A.(编辑),Synthetic Peptides:A User's Guide,W.H.Freeman and Company,纽约(1992)。另外，自动化肽合成仪可商购获得(例如，Advanced ChemTech Model 396；Milligen/Biosearch 9600)。可替代地，本公开文本的多肽(包括其片段或变体)可以使用如本文领域中熟知的多种表达系统[例如，大肠杆菌(E.coli)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、COS细胞、杆状病毒]重组产生。在另一实施方案中，本公开文本的修饰的或未修饰的多肽可以通过使用例如蛋白酶(例如，胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶或配对碱性氨基酸转化酶(PACE))消化重组产生的全长ActRII多肽来产生。可以使用计算机分析(使用可商购软件，例如，MacVector、Omega、PCGene，Molecular Simulation,Inc.)来鉴定蛋白水解切割位点。可替代地，这样的多肽可以使用化学切割(例如，溴化氰、羟胺等)从重组生成的全长ActRII多肽产生。
3.编码ActRII多肽的核酸
在某些实施方案中，本公开文本提供编码ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)(包括其片段、功能变体和融合蛋白)的分离的和/或重组核酸。
如本文所用，一种或多种分离的核酸是指已经与其天然环境的组分分离的核酸分子。分离的核酸包括含于通常含有核酸分子的细胞中的核酸分子，但所述核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。
在某些实施方案中，编码本公开文本的ActRII多肽的核酸应理解为包括作为SEQID NO:4、5或28中的任一个的变体的核酸。变体核苷酸序列包括相差一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，包括等位基因变体，并且因此将包括与SEQ ID NO:4、5或28中的任一个中指定的核苷酸序列不同的编码序列。
在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽由与SEQ ID NO:4、5或28中的任一个至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的分离的和/或重组核酸序列编码。本领域技术人员将认识到，与互补于SEQ IDNO:4、5或28的序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的核酸序列及其变体也在本公开文本的范围内。在其他实施方案中，本公开文本的核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合，或者在DNA文库中。
在其他实施方案中，本公开文本的核酸还包括在高度严格条件下与SEQ ID NO:4、5或28中指定的核苷酸序列、SEQ ID NO:4、5或28的补体序列或其片段杂交的核苷酸序列。如上文所讨论，本领域技术人员将容易地理解，促进DNA杂交的适当严格度条件可以变化。本领域的普通技术人员应容易地理解，促进DNA杂交的适当严格度条件可以变化。例如，可以以6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)在约45℃下进行杂交，之后在50℃下进行2.0x SSC的洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可以从50℃下约2.0x SSC的低严格度至50℃下约0.2x SSC的高严格度进行选择。另外，洗涤步骤中的温度可以从约22℃室温的低严格度条件增加至约65℃的高严格度条件。温度和盐二者都可以变化，或者温度或盐浓度可以保持不变，同时改变另一变量。在一个实施方案中，本公开文本提供核酸，所述核酸以6x SSC在室温下的低严格度条件下杂交，之后在室温下以2x SSC进行洗涤。
由于遗传密码简并度而与如SEQ ID NO:4、5或28中所示的核酸不同的分离的核酸也在本公开文本的范围内。例如，多种氨基酸由多于一种三联体指定。指定同一种氨基酸的密码子或同义密码子(例如，CAU和CAC是组氨酸的同义密码子)可以产生“沉默”突变，所述突变不影响蛋白质的氨基酸序列。然而，预期在哺乳动物细胞中存在确实引起主题蛋白质的氨基酸序列变化的DNA序列多态性。本领域技术人员应理解，由于天然等位基因变异，编码特定蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(高达核苷酸的约3％-5％)的这些变异可以存在于给定物种的个体中。任何和所有此类核苷酸变异和所得氨基酸多态性都在本公开文本的范围内。
在某些实施方案中，本公开文本的重组核酸可以与表达构建体中的一个或多个调控核苷酸序列可操作地连接。调控核苷酸序列通常将适合于用于表达的宿主细胞。多种类型的适当表达载体和合适的调节序列是本领域中已知的并且可以用于多种宿主细胞中。通常，一个或多个调节核苷酸序列可以包括但不限于启动子序列、前导序列或信号序列、核糖体结合位点、转录起始序列和终止序列、翻译起始序列和终止序列以及增强子或激活子序列。如本领域中已知的组成型或诱导型启动子涵盖于本公开文本中。所述启动子可以是天然存在的启动子或组合超过一种启动子的元件的杂合启动子。表达构建体可以存在于细胞中的附加体如质粒上，或者可以将表达构建体插入染色体中。在一些实施方案中，表达载体含有可选择的标记物基因以允许选择转化的宿主细胞。可选择的标记物基因是本领域中熟知的，并且可以随所用宿主细胞而变化。
在某些方面，本文公开的主题核酸提供于表达载体中，所述表达载体包含与至少一个调节序列可操作地连接的编码ActRII多肽(例如，ActRIIA多肽、ActRIIB多肽或其组合)的核苷酸序列。调节序列是本领域中公认的并且进行选择以引导ActRII多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其他表达控制元件。示例性调节序列描述于Goeddel；Gene Expression Technology:Methods in Enzymology,Academic Press,SanDiego,CA(1990)中。例如，多种表达控制序列中的任一种可以用于这些载体中来表达编码ActRII多肽的DNA序列，所述表达控制序列在与DNA序列可操作地连接时控制所述DNA序列的表达。这样的有用的表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、表达由T7RNA聚合酶引导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵子和启动子区、fd外壳蛋白的控制区、3-磷酸甘油酸激酶或其他糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶(例如，Pho5)的启动子、酵母α-配对因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和已知控制原核细胞或真核细胞或其病毒的基因的表达的其他序列以及其各种组合。应理解，表达载体的设计可以取决于诸如以下的因素：要转化的宿主细胞的选择和/或期望表达的蛋白质的类型。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制该拷贝数的能力和由所述载体编码的任何其他蛋白质(如抗生素标记物)的表达。
本公开文本的重组核酸可以通过以下方式来产生：将克隆的基因或其部分连接至适合于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物)或二者中表达的载体中。用于产生重组ActRII多肽的表达媒介物包括质粒和其他载体。例如，适合的载体包括以下类型的质粒：用于在原核细胞(如大肠杆菌)中表达的pBR322衍生的质粒、pEMBL衍生的质粒、pEX衍生的质粒、pBTac衍生的质粒和pUC衍生的质粒。
一些哺乳动物表达载体既含有原核序列以促进载体在细菌中的增殖，又含有一个或多个在真核细胞中表达的真核转录单位。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo和pHyg衍生的载体是适合于转染真核细胞的哺乳动物表达载体的例子。将这些载体中的一些用来自细菌质粒(如pBR322)的序列修饰，以促进原核和真核细胞中的复制和药物抗性选择。可替代地，可以使用病毒的衍生物用于在真核细胞中瞬时表达蛋白质，这些病毒如牛乳头瘤病毒(BPV-1)或EB病毒(Epstein-Barr virus)(pHEBo、pREP来源的和p205)。其他病毒(包括逆转录病毒)表达系统的例子可以在以下基因疗法递送系统的描述中找到。在质粒的制备和宿主生物体的转化中采用的不同方法是本领域中熟知的。对于用于原核细胞和真核细胞的其他合适的表达系统，以及一般重组程序，例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第3版,Sambrook,Fritsch和Maniatis编辑(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001)。在一些情况下，可能希望通过使用杆状病毒表达系统来表达重组多肽。此类杆状病毒表达系统的例子包括pVL来源的载体(如pVL1392、pVL1393和pVL941)、pAcUW来源的载体(如pAcUW1)和pBlueBac来源的载体(如含有β-gal的pBlueBac III)。
在优选实施方案中，载体将被设计用于在CHO细胞中产生主题ActRII多肽，如Pcmv-Script载体(Stratagene，拉荷亚，加利福尼亚州)、pcDNA4载体(Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)和pCI-neo载体(Promega，麦迪逊，威斯康辛州)。显而易见，主题基因构建体可以用于在培养中繁殖的细胞中引起主题ActRII多肽的表达，例如，以产生蛋白质(包括融合蛋白或变体蛋白)以供纯化。
本公开文本还涉及用重组基因转染的宿主细胞，所述重组基因包括一种或多种主题ActRII多肽的编码序列。所述宿主细胞可以是任何原核细胞或真核细胞。例如，本公开文本的ActRII多肽可以在细菌细胞(如大肠杆菌)、昆虫细胞(例如，使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞[例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系]中表达。其他适合的宿主细胞是本领域技术人员已知的。
因此，本公开文本还涉及产生主题ActRII多肽的方法。例如，可以在适当的条件下培养用编码ActRII多肽的表达载体转染的宿主细胞，以允许发生ActRII多肽的表达。多肽可以分泌并从细胞和含有所述多肽的培养基的混合物中分离。可替代地，ActRII多肽可以保留在细胞质或膜部分中，并且收获细胞、裂解并分离蛋白质。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其他副产物。用于细胞培养的合适的培养基是本领域中熟知的。可以使用本领域已知的用于纯化蛋白质的技术从细胞培养基、宿主细胞或两者中分离主题多肽，所述技术包括离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法、超滤、电泳、用对ActRII多肽的特定表位具有特异性的抗体进行免疫亲和纯化以及用结合与ActRII多肽融合的结构域的试剂进行亲和纯化(例如，可以使用蛋白A柱来纯化ActRII-Fc融合蛋白)。在一些实施方案中，ActRII多肽是含有有利于其纯化的结构域的融合蛋白。
在一些实施方案中，纯化通过一系列柱色谱步骤来实现，所述柱色谱步骤包括例如按任何顺序的以下中的三个或更多个：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱和阳离子交换色谱。所述纯化可以用病毒过滤和缓冲液交换来完成。可以将ActRII蛋白纯化至如通过尺寸排阻色谱所确定>90％、>95％、>96％、>98％或>99％的纯度以及如通过SDS PAGE所确定>90％、>95％、>96％、>98％或>99％的纯度。目标纯度水平应是足以在哺乳动物系统(特别是在非人灵长类动物、啮齿动物(小鼠)和人类)中获得期望的结果的纯度水平。
在另一个实施方案中，编码纯化前导序列(如在重组ActRII多肽的所需部分的N末端处的聚(His)/肠激酶切割位点序列)的融合基因可以允许使用Ni2+金属树脂通过亲和色谱纯化表达的融合蛋白。然后可以随后通过用肠激酶处理来去除所述纯化前导序列，以提供纯化的ActRII多肽。参见例如，Hochuli等人(1987)J.Chromatography 411:177；和Janknecht等人(1991)PNAS USA 88:8972。
用于制备融合基因的技术是熟知的。基本上，根据常规技术采用以下来进行编码不同多肽序列的各种DNA片段的接合：用于连接的钝端或交错端末端、用于提供适当末端的限制性酶消化、视需要的粘性末端填入，用于避免不期望的接合的碱性磷酸酶处理以及酶连接。在另一个实施方案中，可以通过常规技术(包括自动化DNA合成仪)来合成融合基因。可替代地，可以使用锚定引物进行基因片段的PCR扩增，所述锚定引物在两个连续基因片段之间产生互补突出端，所述片段随后可以退火以产生嵌合基因序列。参见例如，CurrentProtocols in Molecular Biology,Ausubel等人编辑,John Wiley&Sons:1992。
4.使用方法
部分地，本公开文本涉及治疗肺动脉高压(PAH)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的如本文所述的ActRII多肽。在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗、预防肺动脉高压的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性的方法，所述方法向有需要的患者施用有效量的如本文所述的ActRII多肽。在一些实施方案中，所述ActRII多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg(例如，0.3mg/kg或0.7mg/kg)的给药范围来施用。在一些实施方案中，ActRII多肽的施用导致一个或多个血液动力学或功能参数的变化(例如，肺血管阻力(PVR)的降低；6分钟步行距离(6MWD)的增加；N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展的预防或延迟；如WHO所认可的肺高血压功能等级消退的促进或增加；右心室功能的改进；以及肺动脉压的改进)。
这些方法特别旨在对动物、更特别是人的治疗性和预防性治疗。术语“受试者”、“个体”或“患者”在整个说明书中是可互换的，并且是指人或非人动物。这些术语包括哺乳动物，如人、非人灵长类动物、实验室动物、牲畜(包括牛、猪、骆驼等)、伴侣动物(例如，犬、猫、其他家养动物等)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在特定实施方案中，所述患者、受试者或个体是人。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”、“减轻”等在本文中通常用于意指获得期望的药理学和/或生理学作用，并且还可以用于指代改进、减轻所治疗病症(例如，PAH)的一种或多种临床并发症和/或降低其严重性。就完全或部分延迟疾病、病症或其并发症的发作或复发而言，所述作用可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病或病症和/或可归因于所述疾病或病症的不利影响而言，所述作用可以是治疗性的。如本文所用的“治疗”涵盖对哺乳动物、特别是人的疾病或病症的任何治疗。如本文所用，“预防”障碍或病症的治疗剂是指如下化合物，其在统计样本中相对于未治疗的对照样品降低了治疗的样品中所述障碍或病症的发生率，或者相对于未治疗的对照样品延迟了疾病或病症的发作。
通常，如本公开文本中所述的疾病或病症的治疗或预防(例如，PAH)是通过以“有效量”施用本公开文本的一种或多种ActRII多肽来实现。药剂的有效量是指在所需剂量和时间段下，有效实现所需治疗或预防结果的量。本公开文本药剂的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药剂在个体中引发所需反应的能力的因素而变化。“预防有效量”是指在剂量和持续时间上有效实现所需预防结果所需要的量。
在某些方面，本公开文本考虑ActRII多肽与一种或多种另外的活性剂或其他支持疗法组合用于治疗或预防疾病或病症(例如，PAH)的用途。如本文所用，“与……组合(incombination with)”、“……的组合”、“与……组合(combined with)”或“联合”施用是指任何施用形式，使得另外的活性剂或支持疗法(例如，第二、第三、第四等)在体内仍有效(例如，多种化合物在患者体内同时有效持续一定时间段，这可以包括那些化合物的协同效应)。有效性可能与药剂在血液、血清或血浆中的可测量浓度无关。例如，不同的治疗化合物可以在同一配制品中或在单独配制品中，并行地或依序地，按不同时间表来施用。因此，接受这样的治疗的受试者可以受益于不同活性剂或疗法的组合作用。本公开文本的一种或多种ActRII多肽可以与一种或多种其他另外的药剂或支持疗法(如本文所公开的那些)并行施用，在其之前或之后施用。通常，每种活性剂或疗法将以针对该特定药剂确定的剂量和/或时间表来施用。用于方案的特定组合将考虑到本公开文本的ActRII多肽与另外的活性剂或疗法的相容性和/或期望效果。
WHO分类概述
通过本文所述方法治疗的肺动脉高压病症可以包括根据世界卫生组织(WHO)认可的任何一种或多种病症。参见例如，Simonneau(2019)Eur Respir J:53:1801913。
表1：肺动脉高压的临床分类
Figure BDA0004086391950000281
Figure BDA0004086391950000291
对PAH进行分类的临床目的是将与PAH相关的临床病症根据其病理生理学机制、临床表现、血液动力学特征和治疗策略分类为特定亚组。在可获得关于上文特征的新数据时或者在考虑另外的临床实体时，可以更新该临床分类。
如本文所用，术语“肺血液动力学参数”是指用于描述或评价经过心脏和肺血管系统的血流的任何参数。肺血液动力学参数的例子包括但不限于平均肺动脉压(mPAP)、肺动脉舒张压(diastolic pulmonary artery pressure，dPAP)[也称为肺动脉舒张压(pulmonary artery diastolic pressure，PADP)]、肺动脉收缩压(systolic pulmonaryartery pressure，sPAP)[也称为肺动脉收缩压(pulmonary artery systolic pressure，PASP)]、平均右心房压(mRAP)、肺毛细血管楔压(PCWP)[也称为肺动脉楔压(PAWP)]、肺血管阻力(PVR)和心排血量(CO)。
许多上述肺血液动力学参数是相互关联的。例如，PVR根据以下等式与mPAP、PCWP和CO相关：
PVR＝(mPAP-PCWP)/CO[伍德单位]
PVR测量在没有左侧充盈压的影响的情况下，肺血管系统对血流造成的阻力。还可以根据以下等式来测量PVR：
PVR＝TPG×80/CO[单位：达因-sec-cm-5]或者PVR＝(mPAP-PCWP)×80/CO[单位：达因-sec-cm-5]
在一些实施方案中，总外周阻力(TPR)可以使用以下等式来测量：
TPR＝mPAP/CO。
根据一些实施方案，对PH的毛细血管前肺动脉贡献可以通过升高的PVR来反映。在一些实施方案中，正常PVR为20-130达因-sec-cm-5或0.5-1.1伍德单位。根据一些实施方案，升高的PVR可以指代高于2伍德单位、高于2.5伍德单位、高于3伍德单位或高于3.5伍德单位的PVR。
作为另一例子，mPAP根据以下等式与dPAP和sPAP相关：mPAP＝(2/3)dPAP+(1/3)sPAP
此外，dPAP和sPAP可以用于使用以下等式计算脉压(mmHg)：脉压＝sPAP-dPAP
脉压可以用于使用以下等式计算肺动脉顺应性：肺动脉顺应性(mI.mmHg-1)＝每搏输出量/脉压
在一些实施方案中，直接测量肺血液动力学参数，如在右心导管检查期间。在其他实施方案中，通过其他技术如磁共振成像(MRI)或超声心动图来估计和/或评价肺血液动力学参数。
示例性肺血液动力学参数包括mPAP、PAWP和PVR。一个或多个肺血液动力学参数可以通过任何适当程序来测量，如通过利用右心导管检查或超声心动图。PH和PAH的各种血液动力学特征显示于表2中。
表2.肺高血压(PH)和PAH的血液动力学特征
Figure BDA0004086391950000292
基于数据的新来源或现有来源的可用性或者在考虑另外的临床实体时，可以更新或改变本文所述的PAH的临床分类或血液动力学特征和相关诊断参数。
PAH的特征
肺动脉高压(WHO第1组PH)是一种肺血管系统的严重的、进行性的且危及生命的疾病，其特征为深度血管收缩以及肺动脉壁中平滑肌细胞的异常增殖。肺血管的严重收缩导致肺动脉压极高。这些高压使得心脏难以将血液泵送通过肺进行充氧。PAH患者遭受极度的呼吸短促，因为心脏难以泵送血液对抗这些高压。患有PAH的患者通常出现PVR的显著增加和mPAP的持续升高，最终导致右心室衰竭和死亡。被诊断患有PAH的患者具有差的预后并且同样累及的生活质量，如果不治疗，则从诊断时起平均预期寿命为2至5年。
多种因素促成肺高血压的发病机理，包括可促成血管重构(即，增生)的肺细胞的增殖。例如，肺血管重塑主要因患有肺高血压的患者的动脉内皮细胞和平滑肌细胞的增殖而发生。多种细胞因子的过表达被认为促进肺高血压。此外，已经发现肺动脉高压可能起因于肺动脉平滑细胞和肺内皮细胞的过度增殖。更进一步地，晚期PAH的特征可在于远端肺小动脉的肌化、同心内膜增厚和增殖内皮细胞阻塞血管腔。Pietra等人,J.Am.Coll.Cardiol.,43:255-325(2004)。
PAH可以基于静息时平均肺动脉压高于25mmHg(或根据更新的指南高于20mmHg)且肺动脉毛细血管楔压正常来诊断。PAH可能导致呼吸急促、头晕、昏厥和其他症状，这些症状都会因劳累而加重。PAH可能是伴随显著降低的运动耐力和心力衰竭的严重疾病。PAH的两个主要类型包括特发性PAH(例如，其中未鉴定出倾向因素的PAH)和可遗传PAH(例如，与BMPR2、ALK1、ENG、SMAD9、CAV1、KCNK3或EIF2AK4中的突变相关的PAH)。在70％的家族性PAH病例中，突变位于BMPR2基因中。患上PAH的风险因子包括PAH家族史、药物和毒素使用(例如，甲基苯丙胺或可卡因使用)、感染(例如，HIV感染或血吸虫病)、肝硬化、先天性心脏畸形、门静脉高压、肺静脉闭塞性疾病、肺毛细血管瘤或结缔组织/自身免疫障碍(例如，硬皮病或狼疮)。PAH可能与以下相关：对钙通道阻滞剂的长期反应者、静脉/毛细血管(PVOD/PCH)受累的明显特征以及新生儿综合征的持久性PH。
PAH的诊断
使用对一套全面的参数的评审来确定是否符合血液动力学和其他标准，可以基于症状和身体检查来确定PAH(包括功能组)的诊断。可以考虑的一些标准包括患者的临床表现(例如，呼吸急促、疲劳、无力、心绞痛、晕厥、干咳、运动引发的恶心和呕吐)、心电图(ECG)结果、胸片结果、肺功能测试、动脉血气、超声心动图结果、通气/灌注肺扫描结果、高分辨率计算机体层成像结果、增强计算机体层成像结果、肺血管成像结果、心脏磁共振成像、验血(例如，生物标记物，如BNP或NT-proBNP)、免疫学、腹部超声扫描、右心导管检查(RHC)、血管反应性和遗传测定。参见例如，Galie N.等人Euro Heart J.(2016)37,67-119。
在一些实施方案中，生物标记物可以用于辅助PAH的诊断。例如，在一些实施方案中，所述生物标记物是血管功能障碍的标记物(例如，非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、内皮素-1、血管生成素或血管性假血友病因子(von Willebrand factor))。在一些实施方案中，所述生物标记物是炎症标记物(C反应蛋白、白介素6、趋化因子)。在一些实施方案中，所述生物标记物是心肌负荷的标记物[例如，心房钠尿肽、脑利尿钠肽(BNP)/NT-proBNP或肌钙蛋白]。在一些实施方案中，所述生物标记物是低CO和/或组织缺氧的标记物(例如，pCO2、尿酸、生长分化因子15(GDF15)或骨桥蛋白)。在一些实施方案中，所述生物标记物是二次器官损伤的标记物(例如，肌酐或胆红素)。参见例如，Galie N.等人Euro Heart J.(2016)37,67-119。
PH的测量
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有特发性PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有可遗传PAH(例如，由于BMPR2、ALK-1、ENG、SMAD9、CAV1和KCNK3内的一个或多个突变所致的PAH)的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有由于未知突变所致的可遗传PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有药物或毒素诱导的PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有与结缔组织疾病相关的PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有与HIV感染相关的PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有与门静脉高压相关的PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有与血吸虫病相关的PAH的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗归类为对钙通道阻滞剂的长期反应者的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗具有静脉/毛细血管(PVOD/PCH)受累的明显特征的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有新生儿综合征的持久性肺高血压(PH)的PAH患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有在分流修复后至少1年与简单的先天体肺分流术相关的PAH的PAH患者。
mPAP
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的静息平均肺动脉压(mPAP)为至少20mmHg(例如，20、25、30、35、40、45或50mmHg)。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少20mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少25mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少30mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少35mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少40mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少45mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mPAP为至少50mmHg的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进所述患者的肺动脉压。在一些实施方案中，所述肺动脉压的改进是平均肺动脉压(mPAP)的降低。在一些实施方案中，所述方法涉及降低mPAP。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少1mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少2mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少3mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少5mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少7mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少10mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少12mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少15mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少20mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少25mmHg。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mPAP降低至少100％。
mRAP
随着PAH进展，对血流的肺血管阻力增加导致右心房压(RAP)增加和右心衰竭。患有右心衰竭的患者通常具有增加的右心房压(RAP)与肺动脉楔压(PAWP)的比率。在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的静息平均右心房压(mRAP)为至少5mmHg(例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、18、20、21、22、23、24或25mmHg)。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少5mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少6mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少7mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少8mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少9mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少10mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少11mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少12mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少13mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少14mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少15mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少16mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少17mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少18mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少19mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少20mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少21mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少22mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少23mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少24mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及静息mRAP为至少25mmHg的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进所述患者的平均右心房压。在一些实施方案中，所述平均右心房压(mRAP)的改进是mRAP的降低。在一些实施方案中，所述方法涉及降低mRAP。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少1mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少2mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少3mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少4mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少5mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少6mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少7mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少8mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少9mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少10mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少11mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少12mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少13mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少14mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少15mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少16mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少17mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少18mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少19mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少20mmHg。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的mRAP降低至少100％。
PVR
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的肺血管阻力(PVR)为至少2.5伍德单位(例如，至少2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20伍德单位)。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少2.5伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少3伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少4伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少5伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少6伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少7伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少8伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少9伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少10伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少12伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少14伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少16伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少18伍德单位的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PVR为至少20伍德单位的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的PVR。在一些实施方案中，所述患者的PVR的降低是所述患者的平均肺动脉压(mPAP)降低的结果。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少0.5伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少1伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少2伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少4伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少6伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少8伍德单位。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少10伍德单位。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的PVR。在一些实施方案中，所述患者的PVR的降低是所述患者的平均肺动脉压(mPAP)降低的结果。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PVR降低至少100％。
在一些实施方案中，在所述患者已经接受4周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受8周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受12周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受16周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受20周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受22周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受24周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受26周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受28周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。在一些实施方案中，在所述患者已经接受48周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试PVR。
BNP
BNP和NT-proBNP二者都是由于心内压增加所致的心房和心室扩张的标记物。纽约心脏协会(NYHA)开发出基于症状严重性的用于充血性心力衰竭(CHF)的4期功能分级系统。研究已证实，循环BNP和NT-proBNP的测量浓度随着基于NYHA分级的CHF严重性而增加。在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的脑利尿钠肽(BNP)水平为至少100pg/mL(例如，至少100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、3000、5000、10,000、15,000或20,000pg/mL)。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少100pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少150pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少200pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少300pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少400pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少500pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少600pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少700pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少800pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少900pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少1000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少3000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少5000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少10,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少15,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及BNP水平为至少20,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗具有如与健康患者相比升高的BNP水平的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少10pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少50pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少100pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少200pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少300pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少400pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少500pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少600pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少700pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少800pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少900pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少1000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至少5000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP水平降低至正常水平。在一些实施方案中，正常水平对应于<100pg/mL的水平。
在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BNP降低至少100％。
NT-proBNP
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的NT-proBNP水平为至少100pg/mL(例如，至少100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、3000、5000、10,000、15,000、20,000、25,000或30,000pg/mL)。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少100pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少150pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少200pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少300pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少400pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少500pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少600pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少700pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少800pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少900pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少1000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少3000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少5000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少10,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少15,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少20,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少25,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及NT-proBNP水平为至少30,000pg/mL的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗具有如与健康患者相比升高的NT-proBNP水平的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的NT-proBNP水平。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少10pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少50pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少100pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少200pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少300pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少400pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少500pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少600pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少700pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少800pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少900pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少1000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少5000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少10,000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少15,000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少20,000pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少25,000pg/mL。
在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平降低至正常水平并维持其正常NT-proBNP水平。在一些实施方案中，本公开文本涉及将所述PAH患者的一个或多个血液动力学参数维持在正常水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平维持在正常水平。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平维持在低于100pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平维持在低于200pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平维持在低于300pg/mL。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平维持在低于400pg/mL。
在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP降低至少100％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平降低至正常水平。在一些实施方案中，NT-proBNP的正常水平是<100pg/ml。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的NT-proBNP水平降低至低于300ng/L。
平滑肌肥厚
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有平滑肌肥厚。在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的平滑肌肥厚。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的平滑肌肥厚降低至少100％。
肺小动脉肌肉度
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者具有增加的肺小动脉肌肉度。在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的肺小动脉肌肉度。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少1％(例如，1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少100％。
住院率
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者的住院率降低至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的住院率降低至少100％。在一些实施方案中，所述方法降低与PAH相关的一种或多种并发症的住院风险。
生活质量
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者的生活质量增加至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的生活质量增加至少100％。
在一些实施方案中，使用剑桥肺高血压结局审查(CAMPHOR)测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用
Figure BDA0004086391950000401
测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用医疗结局调查简表-36(SF-36)测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用欧洲生活质量量表(EuroQol)测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用欧洲生活质量量表-5维度(EQ-5D)测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用欧洲生活质量量表-5维度5级(EQ-5D-5L)测量所述患者的生活质量。在一些实施方案中，使用堪萨斯城心肌病问卷(KCCQ)测量所述患者的生活质量。
射血分数
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的射血分数小于10％(例如，小于10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或55％)。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于10％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于15％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于20％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于25％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于30％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于35％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于40％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于45％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于50％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及射血分数小于55％的患者。在一些实施方案中，所述射血分数是右心室射血分数。在一些实施方案中，所述射血分数是左心室射血分数。在一些实施方案中，使用超声心动图测量所述射血分数。在一些实施方案中，所述患者具有保留的左心室射血分数。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，>50％射血分数)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的射血分数增加至少100％。
右心室功能
在某些方面，本公开文本涉及在PAH中改进或维持右心室功能的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。可以通过多次超声心动图测量来评估右心室功能的改进或维持。一种用于评估右心室功能的这样的定量方法是测量三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。TAPSE通过测量外侧三尖瓣环朝向心尖的收缩期偏移水平来估计RV收缩功能。可以用于评估右心室功能的维持和/或改进的其他超声心动图测量包括但不限于右心室面积变化分数(RVFAC)、右心室舒张末期面积(RVEDA)、右心室收缩末期面积(RVESA)、右心室射血分数(RVEF)、右心室-肺动脉(RV-PA)耦合、肺动脉收缩压(PASP)、三尖瓣反流速度(TRV)和右心室肥大。
TAPSE
三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)可以使用超声心动图来获得，并且表示RV纵向功能的量度。先前已经显示TAPSE与估计RV整体收缩功能的参数具有良好相关性。TAPSE<17mm高度提示RV收缩功能障碍。在一些实施方案中，PAH患者右心室功能的改进或维持被测量为TAPSE的增加。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE在20mm-28mm之间。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少20mm。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少22mm。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少24mm。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少26mm。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少28mm。在一些实施方案中，使用超声心动图来测量TAPSE。
在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE在16mm-30mm之间。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE在18mm-28mm之间。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE为至少18mm。在一些实施方案中，使用超声心动图测量TAPSE。
PASP
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的肺动脉收缩压(PASP)为至少30mmHg(例如，至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80mmHg)。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少30mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少35mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少40mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少45mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少50mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少55mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少60mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少65mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少70mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少75mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及PASP为至少80mmHg的患者。在一些实施方案中，所述PASP是静息PASP。在一些实施方案中，使用三尖瓣反流速度(TRV)和右动脉(RA)压来确定PASP。在一些实施方案中，使用下式来确定PASP：
PASP＝TRV2 x 4+RA压力
已经显示TRV与静息时和运动时的PASP相关。右心室与右心房之间的压力梯度可以使用修改的伯努利方程(Bernoulli equation)(Δp＝4V2)来计算。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进所述患者的肺动脉收缩压(PASP)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低PASP。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少1mmHg(例如，至少1、2、3、5、7、10、12、15、20、25、30或35mmHg)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少2mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少3mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少5mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少7mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少10mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少12mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少15mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少20mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少25mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少30mmHg。在某些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少35mmHg。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的PASP降低至少100％。
RV-PA耦合
右心室功能障碍是PAH的主要特征以及影响预后的主要因素。心室收缩性与动脉后负荷之间的能量转移被称为耦合。具体而言，右心室(RV)与肺动脉之间的能量转移被称为右心室-肺动脉(RV-PA)耦合。在一些实施方案中，右心室功能障碍是由于RV-PA耦合降低所致。RV-PA耦合可以作为TAPSE/PASP比值非侵入式地估计。在一些实施方案中，TAPSE/PASP比率≥0.31mm/mm Hg可能与更好的预后和降低的临床恶化风险相关。在一些实施方案中，RV-PA耦合的改进是由于PASP的改进所致。在一些实施方案中，RV-PA耦合的计算依赖于三个参数(例如，TRV、RAP和TAPSE)的配对结果。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的TAPSE/PASP比率小于0.31mm/mmHg(例如，小于0.3、0.25、0.2、0.15或0.1mm/mmHg)。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.31mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.3mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.25mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.2mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.15mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及TAPSE/PASP比率小于0.1mm/mmHg的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有如与正常TAPSE/PASP比率相比降低的TAPSE/PASP比率的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进或维持所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.3mm/mmHg(例如，大于0.31、0.32、0.33、0.34或0.35mm/mmHg)。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.31mm/mmHg。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.32mm/mmHg。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.33mm/mmHg。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.34mm/mmHg。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的TAPSE/PASP比率大于0.35mm/mmHg。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是TAPSE/PASP比率的增加。在一些实施方案中，所述方法涉及增加TAPSE/PASP比率。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.05mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.07mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.10mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.12mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.15mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.18mm/mmHg。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少0.20mm/mmHg。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的TAPSE/PASP比率增加至少100％。
RVFAC、RVEDA和RVESA
右心室面积变化分数(RVFAC)是右心室功能的非侵入式定量量度。RVFAC可以使用公式[(RVEDA-RVESA)/RVEDA]*100来计算。在一些实施方案中，使用超声心动图测量RVFAC。在一些实施方案中，正常RVFAC在男性中为大约47.5±8.6％，并且在女性中为大约50.9±8.0％。参见例如，Kou S等人European Heart Journal-Cardiovascular Imaging.2014年6月1日；15(6):680-90。在一些实施方案中，PAH患者的RVFAC降低。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的RVFAC小于20％(例如，小于20％、25％、30％、35％或40％)。在一些实施方案中，所述方法涉及RVFAC小于25％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVFAC小于30％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVFAC小于35％的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVFAC小于40％的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进或维持所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进或维持是由于右心室面积变化分数(RVFAC)增加所致。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC在32％-56％之间。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少32％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少34％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少35％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少36％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少38％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少40％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少42％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少44％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少46％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少48％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少50％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少52％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少54％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVFAC为至少56％。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个超声心动图参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％、16％、18％或20％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少6％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少7％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少8％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少9％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少12％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少14％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少16％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少18％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVFAC增加至少20％。
在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于射血分数的增加所致。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是由于射血分数的增加和所述患者的RVFAC的增加所致。
可以使用超声心动图来测量右心室舒张末期面积(RVEDA)。正常RVEDA在男性中为大约18.2±4.3cm2，并且在女性中为大约14.8±3.5cm2。参见例如，Kou S等人EuropeanHeart Journal-Cardiovascular Imaging.2014年6月1日；15(6):680-90。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的RVEDA为至少22cm2(例如，至少22、24、26、28、30、32或34cm2)。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少24cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少26cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少28cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少30cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少32cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVEDA为至少34cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有如与正常RVEDA相比增加的RVEDA的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进或维持所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEDA在14-22cm2之间。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是RVEDA的降低。在一些实施方案中，所述方法涉及降低RVEDA。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少1cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少2cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少3cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少4cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少5cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少6cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少7cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少8cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少9cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少10cm2。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个超声心动图参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEDA降低至少40％。
可以使用超声心动图来测量右心室收缩末期面积(RVESA)。正常RVESA在男性中为大约9.6±2.8cm2，并且在女性中为大约7.3±2.3cm2。参见例如，Kou S等人European HeartJournal-Cardiovascular Imaging.2014年6月1日；15(6):680-90。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防肺动脉高压(PAH)或降低肺动脉高压(PAH)的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的RVESA为至少12cm2(例如，至少12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或32cm2)。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少14cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少16cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少18cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少20cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少22cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少24cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少26cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少28cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少30cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及RVESA为至少32cm2的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及具有如与正常RVESA相比增加的RVESA的患者。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进或维持所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVESA为7-20cm2。在一些实施方案中，所述右心室功能的改进是RVESA的降低。在一些实施方案中，所述方法涉及降低RVESA。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少1cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少2cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少3cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少4cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少5cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少6cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少7cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少8cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少9cm2。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少10cm2。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个超声心动图参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将患者的RVESA降低至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVESA降低至少40％。
RVEF
右心室射血分数是RV收缩表现的整体量度。RVEF可以使用RV舒张末期容积(RVEDV)和RV收缩末期容积(RVESV)来计算。具体而言，RVEF可以使用下式来计算：RVEF(％)＝((RVEDV-RVESV)/RVEDV)*100。正常RVEF在男性中为大约56-65％，并且在女性中为大约60-71％。参见例如，Lang RM,J Am Soc Echocardiogr.2015；28(1):1-39.e14。在一些实施方案中，使用超声心动图测量RVEF。在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个血液动力学参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及改进或维持所述患者的右心室功能。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为45-71％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为45％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为50％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为55％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为60％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为65％。在一些实施方案中，改进或维持右心室功能的PAH患者的RVEF为70％。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个超声心动图参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少6％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少7％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少8％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少9％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少11％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少12％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少13％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少14％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的RVEF增加至正常值(例如，在男性中为56-65％之间，且在女性中为60-71％之间)。
右心室肥大
在某些方面，将右心室功能的改进测量为右心室肥大的降低。在一些实施方案中，使用富尔顿指数(RV/(LV+S))测量右心室肥大。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有右心室肥大。在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的一个或多个参数向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的右心室肥大。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少1％(例如，至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的右心室肥大降低至少100％。
心排血量
心排血量使心脏每分钟泵送的血液的体积。心排血量通过将每搏输出量乘以心率来计算。通常，正常静息时心排血量为约4至8L/min。心脏指数是基于患者的体型对心排血量值的评估。为了发现心脏指数，将心排血量除以个人的体表面积(BSA)。CI的正常范围为2.5至4L/min/m2。在不偏离正常限值的情况下，心脏指数可能下降接近40％。低于约2.5L/min/m2的低心脏指数通常指示心血管表现的扰动。心排血量可以用于计算心脏指数(例如，心脏指数＝心排血量/体表面积)。心排血量还可以用于计算每搏输出量(例如，每搏输出量＝CO/心率)。在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者的心排血量增加至少5％(例如，至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至少100％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心脏指数增加至至少4.2L/min/m2。在一些实施方案中，所述心脏指数是在静息时测量。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的心排血量增加至至少4L/min。在一些实施方案中，所述心排血量是在静息时测量。在一些实施方案中，使用右心导管测量心排血量。在一些实施方案中，通过热稀释法测量心排血量。在一些实施方案中，使用菲克法(Fick method)测量心排血量。
运动能力(6MWD和BDI)
在某些方面，本公开文本涉及增加患有PAH的患者的运动能力的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。可以使用运动能力的任何合适的量度。例如，6分钟步行测试(6MWT)(其测量受试者在6分钟内可以行走多远，即6分钟步行距离(6MWD))中的运动能力经常用于评估肺高血压严重性和疾病进展。在某些方面，可以使用博格呼吸困难指数(BDI)测量运动能力。BDI是用于评估感知呼吸困难(呼吸不适)的数值标度。它测量呼吸急促的程度，例如在完成6MWT后，其中BDI为0表示无呼吸急促，且10表示最大呼吸急促。在一些实施方案中，使用BORG CR10量表测量BDI。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者的6MWD小于550米(例如，6MWD小于550、500、450、440、400、380、350、300、250、200或150米)。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD在150至550米之间的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD在100至500米之间的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD在150至500米之间的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD为至少100米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD为至少150米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于550米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于500米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于450米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于440米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于400米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于380米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于350米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于300米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于250米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于200米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及6MWD小于150米的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至>380米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至>440米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至>500米。参见例如，Galie N.等人EuroHeart J.(2016)37,67-119。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的运动能力的一种或多种测量向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少10米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少20米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少25米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少30米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少40米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少50米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少60米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少70米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少80米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少90米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少100米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少125米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少150米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少175米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少200米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少250米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少300米。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的6MWD增加至少400米。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受4周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受8周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受12周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受16周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受20周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受22周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受24周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受26周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受28周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。在一些实施方案中，所述6MWD是在所述患者已经接受48周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试。
在一些实施方案中，本公开文本涉及将PAH患者的运动能力的一种或多种测量(例如，BDI)向更正常的水平(例如，如与类似年龄和性别的健康人相比正常)调整的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及降低所述患者的BDI。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少0.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少1个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少1.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少2个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少2.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少3个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少3.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少4个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少4.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少5.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少6个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少6.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少7个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少7.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少8个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少8.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少9个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少9.5个指数点。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的BDI降低至少10个指数点。
超声心动图
有多种临床表现因素、超声心动图特征以及其他特征可以指示PAH。在怀疑患有PAH的患者中，可以使用超声心动图测量室大小，特别是右心房和右心室面积、三尖瓣反流的量值、左心室偏心指数和右心室收缩性。右心室收缩性可以使用几种变量来确定，如右心室纵向收缩应变/应变率和右心室面积变化分数、Tei指数和三尖瓣环平面收缩期偏移。参见例如，Galie N.等人Euro Heart J.(2016)37,67-119。
在具有PAH的症状的患者中，可以进行超声心动图以评价各种参数。例如，在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量肺动脉收缩压(PASP)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量三尖瓣反流速度(TRV)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量右心室面积变化分数(RVFAC)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量右心室收缩末期面积(RVESA)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量右心室舒张末期面积(RVEDA)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量右心室射血分数(RVEF)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量右心室每搏输出量(RVSV)。在一些实施方案中，可以利用超声心动图来测量左心室射血分数(LVEF)。
PAH的并发症
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者肺动脉中的细胞增殖或降低所述增殖的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖或降低所述增殖的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者肺动脉中的血管生成或降低所述血管生成的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及增加患有PAH的患者的体力活动。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的呼吸困难或降低所述呼吸困难的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的胸痛或降低所述胸痛的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的疲劳或降低所述疲劳的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的肺纤维化或降低所述肺纤维化的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的纤维化或降低所述纤维化的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的肺血管重塑或降低所述肺血管重塑的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的心脏重塑或降低所述心脏重塑的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的右心室肥大或降低所述右心室肥大的进展率和/或严重性。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗、预防PAH患者的代谢综合征或降低所述代谢综合征的进展率和/或严重性。
并发症或共病
在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗PAH的一种或多种并发症(例如，肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖、肺动脉中的血管生成、呼吸困难、胸痛、肺血管重塑、心脏重塑、右心室肥大、肺纤维化、需要肺和/或心脏移植以及需要房间隔造口术)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑预防PAH的一种或多种并发症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低PAH的一种或多种并发症的进展率的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低PAH的一种或多种并发症的严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，本公开文本考虑治疗PAH的一种或多种共病(例如，全身性高血压、肾功能下降、糖尿病、肥胖症、冠心病(CAD)、心力衰竭和贫血)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述方法导致PAH的一种或多种共病(例如，全身性高血压、肾功能下降、糖尿病、肥胖症、冠心病(CAD)、心力衰竭和贫血)的改进。在一些实施方案中，PAH的一种或多种共病被间接改进(例如，由于患者的PH的改进所致)。
在一些实施方案中，本公开文本考虑降低PAH的进展率的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低PAH的严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低对开始使用用于PAH的已知治疗的治疗的需要的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低对增加患者的前列环素剂量(例如，将所述剂量增加至少10％)的需要的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低对专门针对PAH住院的需要的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，专门针对PAH住院是患者住院至少24小时。在一些实施方案中，本公开文本考虑降低PAH恶化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，PAH恶化包括所述患者的WHO功能等级的恶化和/或至少15％的6MWD降低。
在一些实施方案中，接受本文公开的一种或多种ActRII多肽(例如，与对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)的患者将需要与所述一种或多种ActRII多肽共施用的一种或多种PAH疗法的较低剂量或终止。例如，如果患者正在接受一种或多种ActRII多肽与一种或多种用于PAH的疗法(例如，前列环素)的组合，如果所述患者展现所述一种或多种用于PAH的疗法(例如，前列环素)过量的体征，则所述患者可能需要降低所述一种或多种用于PAH的疗法(例如，前列环素)的剂量。例如，前列环素扩张体循环以及肺循环，并且不需要的血管舒张可能对所述患者是有害的。服用前列环素过量的患者通常显示过高的静息心排血量。在一些实施方案中，将基于重复的心排血量和血液动力学测量降低一种或多种用于PAH的疗法(例如，前列环素)的剂量，直至患者达到低于4L/m/m2的静息心脏指数。例如，如果正在用一种或多种ActRII多肽和一种或多种用于PAH的疗法(例如，前列环素)治疗的患者显示过量的症状(例如，过高的静息心排血量)，则可以减少(例如，在数量和/或频率上)用所述一种或多种用于PAH的疗法给药，或者可以终止用所述一种或多种用于PAH的疗法给药。
在一些实施方案中，本公开文本考虑一种减少患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量(例如，将所述患者的剂量减少至少10％)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，本公开文本考虑减少患者中前列环素的必需剂量(例如，将所述患者的剂量减少至少10％)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少10％(例如，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％)。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少20％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少30％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少40％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少50％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少60％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少70％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少80％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少至少90％。在一些实施方案中，接受有效量的ActRII多肽的患者中一种或多种用于PAH的疗法的必需剂量被减少100％。
在一些实施方案中，所述一种或多种用于PAH的疗法是本文公开的一种或多种用于PAH的疗法。在一些实施方案中，所述一种或多种用于PAH的疗法选自：5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素受体激动剂和内皮素受体拮抗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种用于PAH的疗法选自：波生坦、西地那非、贝前列素、马西替坦、西里帕格、依前列醇、曲前列尼尔、伊洛前列素、安贝生坦和他达拉非。
无移植物存活
肺和/或心脏移植是用于患有PAH的患者的手术治疗选择，并且通常被推荐用于对微创疗法(例如，血管扩张疗法)无反应的患者。通常，根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，接受肺和/或心脏移植的PAH患者患有功能III级或IV级肺高血压。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者的无移植物存活增加至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的无移植物存活增加至少100％。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过1年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过2年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过3年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过4年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过5年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过6年。在一些实施方案中，所述方法涉及如与对照相比将所述患者的无移植物存活增加超过7年。
死亡
在某些方面，本公开文本涉及降低患有PAH的患者的死亡风险的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者的死亡风险降低至少1％(例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少1％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少2％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少3％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少4％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少5％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少10％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少15％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少20％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少25％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少30％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少35％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少40％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少45％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少50％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少55％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少60％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少65％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少70％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少75％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少80％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少85％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少90％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少95％。在一些实施方案中，所述方法涉及将所述患者的死亡风险降低至少100％。在一些实施方案中，所述方法降低与PAH相关的一种或多种并发症的住院风险。
组合疗法
任选地，本文公开的用于治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性，特别是治疗、预防PAH的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性的方法还可以包括向所述患者施用用于治疗PAH的一种或多种支持疗法或另外的活性剂。例如，还可以向所述患者施用选自以下的一种或多种支持疗法或活性剂：硝酸盐、肼屈嗪、前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列尼尔和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，西里帕格)；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦、安贝生坦、马西替坦、达卢生坦和波生坦)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，西那西呱、维利西呱(vericiguat)和利奥西呱)；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰基齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的聚乙二醇化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS2)；3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇酸甲酯(DIOXOL)；ZCVI-2；3-脱羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄酯)、肺和/或心脏移植。在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用亲本前列环素。在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用用于治疗PAH的一种另外的支持疗法或另外的活性剂(即，双重疗法)。在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用用于治疗PAH的两种另外的支持疗法或另外的活性剂(即，三重疗法)。在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用用于治疗PAH的三种另外的支持疗法或另外的活性剂(即，四重疗法)。
在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用血管紧张素拮抗剂(例如，血管紧张素受体阻断剂，ARB)。在一些实施方案中，向患者进一步施用选自以下的一种或多种ARB：氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、非马沙坦、阿齐沙坦、沙普利沙坦和替米沙坦。在一些实施方案中，向患者施用氯沙坦。在一些实施方案中，向患者施用厄贝沙坦。在一些实施方案中，向患者施用奥美沙坦。在一些实施方案中，向患者施用坎地沙坦。在一些实施方案中，向患者施用缬沙坦。在一些实施方案中，向患者施用非马沙坦。在一些实施方案中，向患者施用阿齐沙坦。在一些实施方案中，向患者施用沙普利沙坦。在一些实施方案中，向患者施用替米沙坦。
在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用一种或多种ACE抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种ACE抑制剂选自贝那普利、卡托普利、依那普利、赖诺普利、培哚普利、雷米普利(例如，雷米平)、群多普利和佐芬普利。在一些实施方案中，向患者施用贝那普利。在一些实施方案中，向患者施用卡托普利。在一些实施方案中，向患者施用依那普利。在一些实施方案中，向患者施用赖诺普利。在一些实施方案中，向患者施用培哚普利。在一些实施方案中，向患者施用雷米普利。在一些实施方案中，向患者施用群多普利。在一些实施方案中，向患者施用佐芬普利。在一些实施方案中，本文所述的方法还可以包括向所述患者施用ARB和ACE抑制剂。在一些实施方案中，血管紧张素拮抗作用的替代性方法是将ACE抑制剂和/或ARB与醛固酮拮抗剂组合。
在一些实施方案中，用于治疗PAH的一种或多种支持疗法或另外的活性剂是在施用ActRII多肽之前施用。在一些实施方案中，用于治疗PAH的一种或多种支持疗法或另外的活性剂是与ActRII多肽组合施用。在一些实施方案中，用于治疗PAH的一种或多种支持疗法或另外的活性剂是在施用ActRII多肽之后施用。如本文所用，“预防”障碍或病症的治疗剂是指化合物，其在统计学样品中，相对于未治疗的对照样品降低所治疗样品中的障碍或病症的发生率，或者相对于未治疗的对照样品延迟障碍或病症的一种或多种症状的发作或降低其严重程度。
功能等级
基线处的PAH可以是轻度、中度或重度的，如例如按照世界卫生组织(WHO)功能等级所测量，所述功能等级是患有肺高血压的患者的疾病严重性的量度。WHO功能分级是纽约心脏协会(New York Heart Association，NYHA)系统的改编，并且常用于定性地评估活动耐受性，例如用于监测疾病进展和对治疗的反应(Rubin(2004)Chest 126:7-10)。所述WHO系统中认可四个功能等级：功能I级：不会导致体力活动受限的肺高血压；普通的体力活动不会引起过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近乎晕厥；功能II级：导致体力活动轻微受限的肺高血压；患者在静息时舒适；普通的体力活动引起过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近乎晕厥；功能III级：导致体力活动明显受限的肺高血压；患者在静息时舒适；低于普通的活动引起过度的呼吸困难或疲劳、胸痛或近乎晕厥；功能IV级：导致无法在没有症状的情况下从事任何体力活动的肺高血压；患者表现右心衰竭的体征；可能即使在静息时也存在呼吸困难和/或疲劳；任何体力活动都会增加不适感。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性(例如，治疗、预防WHO第1组中PH的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有如WHO所认可的功能I级、功能II级、功能III级或功能IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能II级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能III级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能II级或III级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能II级、III级或IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述患者患有如WHO所认可的功能I级、II级、III级或IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述方法延迟PAH的临床恶化。在一些实施方案中，根据WHO的肺高血压功能分级系统，所述方法延迟PAH的临床恶化。
在一些实施方案中，本公开文本涉及预防或降低肺高血压功能等级进展的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述功能等级进展的降低是功能等级进展的延迟。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或降低如WHO所认可的肺高血压功能等级进展。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能I级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或降低从如WHO所认可的功能I级肺高血压至功能II级肺高血压的患者进展。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能II级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或降低从如WHO所认可的功能II级肺高血压至功能III级肺高血压的患者进展。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能III级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或降低从如WHO所认可的功能III级肺高血压至功能IV级肺高血压的患者进展。
在某些方面，本公开文本涉及促进或增加PAH患者的肺高血压功能等级消退的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有如WHO所认可的功能I级、功能II级、功能III级或功能IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能II级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能II级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能III级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能III级肺高血压至功能II级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能III级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如WHO所认可的功能IV级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能IV级肺高血压至功能III级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能IV级肺高血压至功能II级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如WHO所认可的功能IV级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。
纽约心脏协会(NYHA)功能分级(表9)已经用于描述患有肺高血压的患者的症状严重性和运动不耐受。NYHA功能分级系统提供对患者在日常临床实践中的功能状态的快速评估，并且是充分确立的预测预后的手段。NYHA功能分级系统认可的四个功能等级显示于表9中。
表9.基于症状严重性和体力活动的肺高血压的纽约心脏协会(NYHA)功能分级
Figure BDA0004086391950000581
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性(例如，治疗、预防WHO第1组中PH的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有如NYHA所认可的功能I级、功能II级、功能III级或功能IV级肺高血压。
在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能I级肺高血压的患者。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能I级肺高血压的患者的体力活动不受限。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能I级肺高血压的患者经历体力活动而不会引起过度的呼吸急促、疲劳和/或心悸。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能II级肺高血压的患者。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能II级肺高血压的患者的体力活动轻微受限。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能II级肺高血压的患者经历普通的体力活动引起过度的呼吸急促、疲劳或心悸。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能III级肺高血压的患者。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能III级肺高血压的患者的体力活动明显受限。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能III级肺高血压的患者经历低于普通的体力活动引起过度的呼吸急促、疲劳或心悸。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能IV级肺高血压的患者。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能IV级肺高血压的患者无法在没有不适感的情况下从事任何体力活动。在一些实施方案中，患有如NYHA所认可的功能IV级肺高血压的患者经历静息时的症状，并且在进行任何体力活动时，不适感增加。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能II级或III级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能II级、III级或IV级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法涉及患有如NYHA所认可的功能I级、II级、III级或IV级肺高血压的患者。在一些实施方案中，所述方法延迟PAH的临床恶化。在一些实施方案中，根据NYHA的肺高血压功能分级系统，所述方法延迟PAH的临床恶化。
在一些实施方案中，本公开文本涉及预防或降低肺高血压功能等级进展的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述功能等级进展的降低是功能等级进展的延迟。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或降低如NYHA所认可的肺高血压功能等级进展。在一些实施方案中，本公开文本涉及促进或增加PAH患者的肺高血压功能等级消退的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述患者患有如NYHA所认可的功能I级、功能II级、功能III级或功能IV级肺高血压。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟从如NYHA所认可的功能I级肺高血压至功能II级肺高血压的患者进展。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能II级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟从如NYHA所认可的功能II级肺高血压至功能III级肺高血压的患者进展。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能III级肺高血压至功能II级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能III级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及预防或延迟从如NYHA所认可的功能III级肺高血压至功能IV级肺高血压的患者进展。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能IV级肺高血压至功能III级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能IV级肺高血压至功能II级肺高血压的患者消退。在一些实施方案中，所述方法涉及促进从如NYHA所认可的功能IV级肺高血压至功能I级肺高血压的患者消退。
在一些实施方案中，在所述患者已经接受4周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受8周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受12周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受16周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受20周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受22周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受24周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受26周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受28周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。在一些实施方案中，在所述患者已经接受48周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后测试功能等级消退。
免疫细胞浸润
在一些实施方案中，患有PAH的患者显示慢性炎症和适应不良性纤维化的体征。在一些实施方案中，对患者肺组织的组织学检查显示免疫细胞浸润的存在，其由肺血管病变中的淋巴细胞、巨噬细胞、树突细胞和肥大细胞构成。这些免疫细胞浸润的存在表明，PAH部分为炎性疾病。
在某些方面，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者肺中的巨噬细胞浸润减少至少10％(例如，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及减少所述患者肺中的巨噬细胞浸润。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者肺中的淋巴细胞浸润减少至少10％(例如，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及减少所述患者肺中的淋巴细胞浸润。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者肺中的树突细胞浸润减少至少10％(例如，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及减少所述患者肺中的树突细胞浸润。
在一些实施方案中，本公开文本涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法将所述患者肺中的肥大细胞浸润减少至少10％(例如，至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％)。在一些实施方案中，所述方法涉及减少所述患者肺中的肥大细胞浸润。
持续的治疗效果
在某些方面，本公开文本涉及以持续方式治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述持续方式包括在减少本文所述的ActRII多肽的施用后持久的治疗效果。在一些实施方案中，所述持续方式包括在退出本文所述的ActRII多肽的施用后持久的治疗效果。在一些实施方案中，所述持久治疗效果涉及随时间维持功能或血液学测量。在一些实施方案中，所述持久治疗效果测量为PVR的持续降低。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少1周至至少12周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少1周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少2周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少3周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少4周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少5周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少6周不增加。在一些实施方案中，所述患者的PVR水平在退出本文所述的ActRII多肽治疗后至少1个月至至少6个月不增加。
在某些方面，本公开文本涉及治疗或预防患者的与肺动脉高压相关的心肺重塑的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)，其中所述方法减慢心脏重塑和/或逆转心脏重塑。在一些实施方案中，所述逆转是持续的逆转。在一些实施方案中，所述心脏重塑是心室重塑。在一些实施方案中，所述心室重塑是左心室重塑。在一些实施方案中，所述心室重塑是右心室重塑。在一些实施方案中，所述心脏重塑是心室扩张。在一些实施方案中，所述方法减少舒张末期室间隔。在一些实施方案中，所述方法减少舒张末期后壁。
在一些实施方案中，可以使用超声心动图测量来评估所述持久治疗效果。在一些实施方案中，所述超声心动图测量包括但不限于RV面积变化分数(RVFAC)、sPAP、三尖瓣环收缩速度(TASV)和Tei指数。在一些实施方案中，用本文公开的ActRII多肽治疗的患者显示持久治疗效果。在一些实施方案中，所述持久治疗效果导致减少的腹壁侵入左心室中。在一些实施方案中，所述持久治疗效果导致右心室面积变化分数(RVFAC)增加。
用于PAH的已知治疗
没有已知的治愈PAH的方法；当前方法集中在延长患者寿命和提高患者生活质量方面。这通常与良好的运动能力、良好的右心室功能以及低死亡风险(例如，使患者达到和/或保持WHO功能I级或功能II级)。PAH的当前治疗方法可以包括以下的施用：血管扩张药，如前列环素、依前列醇和西地那非；内皮素受体拮抗剂，如波生坦；钙通道阻滞剂，如氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂，如华法林；以及利尿剂。PAH的治疗还使用氧疗、房间隔造口术、肺动脉内膜血栓切除术以及肺和/或心脏移植来进行。然而，这些方法中的每一种都存在一个或多个缺点，其可能包括缺乏有效性、严重的副作用、患者依从性低和成本高。在某些方面，所述方法涉及治疗、预防PAH或降低PAH的进展率和/或严重性，所述方法包括向有需要的患者施用与以下组合的有效量的ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)：用于治疗PAH的一种或多种另外的活性剂和/或支持疗法(例如，血管扩张药，如前列环素、依前列醇和西地那非；内皮素受体拮抗剂，如波生坦；钙通道阻滞剂，如氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂，如华法林；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术：以及肺和/或心脏移植)；甲基巴多索隆或其衍生物；齐墩果酸或其衍生物。
测量患者的血液学参数
在某些实施方案中，本公开文本提供通过测量患者的一个或多个血液学参数来管理所述患者的方法，所述患者已经用本公开文本的一种或多种ActRII多肽(例如，与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列)治疗或者是要用其治疗的候选者。所述血液学参数可以用于：评价用于作为要用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗的候选者的患者的适当给药，在治疗期间监测所述血液学参数，评价是否要在用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗期间调整剂量，和/或评价本公开文本的一种或多种ActRII多肽的适当维持剂量。如果所述血液学参数中的一个或多个在正常水平以外，则可以减少、延迟或终止用一种或多种ActRII多肽给药。
可以根据本文所提供的方法测量的血液学参数包括例如红细胞水平、血压、铁储备和使用本领域公认的方法在体液中发现的与增加的红细胞水平相关的其他因素。在其他实施方案中，可以使用本领域公认的方法来测量血液学参数，如白细胞水平、血小板水平和嗜中性粒细胞水平。可以使用来自患者的血液样品来确定此类参数。红细胞水平、血红蛋白水平和/或血细胞比容水平的增加可能导致血压升高。白细胞水平、血小板水平和/或嗜中性粒细胞水平的降低可以指示需要减少、延迟或中断施用本公开文本的一种或多种ActRII多肽的治疗。
在一个实施方案中，如果在作为要用一种或多种ActRII多肽治疗的候选者的患者中一个或多个血液学参数在正常范围以外或者在正常范围的高侧，则可以延迟本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用的开始，直至所述血液学参数已经自然地或通过治疗干预恢复到正常或可接受的水平。例如，如果候选患者是高血压或高血压前期，则可以用降血压剂治疗患者以降低患者的血压。可以使用适用于单独患者的病症的任何降血压剂，包括例如利尿剂、肾上腺素能抑制剂(包括α阻断剂和β阻断剂)、血管扩张药、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体阻断剂。可替代地，可以使用饮食和锻炼方案来治疗血压。类似地，如果候选患者的铁储备低于正常范围或在正常范围的低侧，则可以用适当的饮食和/或铁补充剂方案治疗患者，直到患者的铁储备恢复到正常水平或可接受的水平。对于具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平(例如，血红蛋白水平>16.0g/dL或血红蛋白水平>18.0g/dL)的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。在一些实施方案中，血红蛋白的正常或可接受的水平包括血红蛋白水平在8-15g/dl之间的患者。在一些实施方案中，血红蛋白的正常或可接受的水平包括血红蛋白水平<18g/dl的患者。在一些实施方案中，血红蛋白的正常或可接受的水平随时间增加包括在治疗的第一时间段中血红蛋白水平增加小于2g/dL的患者。在一些实施方案中，所述第一时间段为3周。对于具有低于正常的白细胞计数(例如，白细胞减少；白细胞计数<3000/mm3或<3.0x109/L(2级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。对于具有低于正常的白细胞计数(例如，白细胞减少；白细胞计数<2000/mm3或<2.0x109/L(3级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。对于具有低于正常的血小板计数(例如，血小板减少；血小板计数<75,000/mm3或<75.0x109/L(2级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。对于具有低于正常的血小板计数(例如，血小板减少；血小板计数<50,000/mm3或<50.0x109/L(3级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。对于具有低于正常的嗜中性粒细胞计数(例如，嗜中性粒细胞减少；嗜中性粒细胞计数<1500/mm3或<1.5x109/L(2级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。对于具有低于正常的嗜中性粒细胞计数(例如，嗜中性粒细胞减少；嗜中性粒细胞计数<1000/mm3或<1.0x109/L(3级))的患者，则可以延迟或减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的施用，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。
在某些实施方案中，如果在作为要用一种或多种ActRII多肽治疗的候选者的患者中一个或多个血液学参数在正常范围以外或者在正常范围的高侧，可以不延迟施用的开始。然而，可以将本公开文本的一种或多种ActRII多肽的给药的剂量的量或频率设定为会降低在施用本公开文本的一种或多种ActRII多肽时出现的血液学参数的不可接受的增加的风险的量。可替代地，可以开发用于所述患者的治疗方案，所述治疗方案将一种或多种ActRII多肽与解决不期望的血液学参数水平的治疗剂组合。例如，如果患者的血压升高，则可以设计包括施用一种或多种ActRII多肽和降血压剂的治疗方案。对于具有低于期望的铁储备的患者，可以开发包括本公开文本的一种或多种ActRII多肽和铁补充的治疗方案。
在一个实施方案中，可以针对作为要用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗的候选者的患者确立一个或多个血液学参数的一个或多个基线参数，并且可以基于一个或多个基线值针对该患者确立适当给药方案。可替代地，基于患者的病史确立的基线参数可以用于通知用于患者的适当的ActRII多肽给药方案。例如，如果健康患者已确立的基线血压读数高于限定的正常范围，则可能不需要在用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗之前，使所述患者的血压落在被认为对于一般人群正常的范围内。患者的一个或多个血液学参数在用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗之前的基线值还可以用作相关比较值，用于监测所述血液学参数在用本公开文本的一种或多种ActRII多肽治疗期间的任何变化。
在某些实施方案中，在正在用一种或多种ActRII多肽治疗的患者中测量一个或多个血液学参数。所述血液学参数可以用于在治疗期间监测所述患者，并且允许调整或终止使用本公开文本的一种或多种ActRII多肽的给药或使用另一种治疗剂的另外的给药。例如，如果一种或多种ActRII多肽的施用导致血压、红细胞水平或血红蛋白水平的增加，或者铁储备、白细胞计数、血小板计数或绝对嗜中性粒细胞计数的减少，则可以减少本公开文本的一种或多种ActRII多肽的剂量的量或频率，以降低本公开文本的一种或多种ActRII多肽对所述一个或多个血液学参数的影响。如果一种或多种ActRII多肽的施用导致对所述患者不利的一个或多个血液学参数的变化，则可以将本公开文本的一种或多种ActRII多肽的给药暂时终止(直至所述一个或多个血液学参数恢复到可接受的水平)，或永久终止。类似地，如果在降低施用本公开文本的一种或多种ActRII多肽的剂量或频率后未使一个或多个血液学参数位于可接受的范围内，则可以终止所述给药。作为替代方案，或者除了减少或终止使用本公开文本的一种或多种ActRII多肽的给药以外，可以用解决一个或多个血液学参数的不期望水平的另外的治疗剂(如例如，降血压剂或铁补充剂)对所述患者进行给药。例如，如果正在用一种或多种ActRII多肽治疗的患者的血压升高，则使用本公开文本的一种或多种ActRII多肽的给药可以以相同水平继续进行，并且将降血压剂添加到治疗方案中；可以减少施用本公开文本的一种或多种拮抗剂的给药(例如，降低量和/或频率)，并且将降血压剂添加到治疗方案；或者可以终止使用本公开文本的一种或多种拮抗剂的给药，并且可以用降血压剂治疗所述患者。
随时间测量各个参数
在某些实施方案中，可以在治疗时间的不同阶段测量本文所述的肺高血压(例如，肺动脉高压)的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受4周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受8周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受12周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受16周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受20周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受22周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受24周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受26周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受28周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。在一些实施方案中，在所述患者已经接受48周利用本文公开的ActRII多肽的治疗后，测量本文所述的肺高血压的一个或多个测量。
5.药物组合物和施用方式
在某些实施方案中，本公开文本的治疗方法包括全身地或作为植入物或装置局部地施用组合物。在施用时，用于本公开文本中使用的治疗组合物呈基本上无热原或无热原的生理上可接受的形式。也可以任选地包括在如上所述的组合物中的除了ActRII多肽以外的治疗上有用的药剂可以在本文公开的方法中与主题化合物同时或依序施用。
通常，本文公开的蛋白质治疗剂将肠胃外施用，特别是静脉内或皮下施用。适合于肠胃外施用的药物组合物可以包含一种或多种ActRII多肽与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液或者可在即将使用前重构为无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末组合，所述组合可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质或者助悬或增稠剂。可以用于本公开文本的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯，如油酸乙酯。可以例如通过使用如卵磷脂的包衣材料、在分散液的情况下通过维持所要求的粒度、以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。配制品可以存在于单位剂量或多剂量密封容器(如安瓿和小瓶)中，并且可以储存于冷冻干燥(冻干)条件中，其仅需要在即将使用前添加用于注射的无菌液体赋形剂(例如，水)。临时注射溶液和悬浮液可以由本文所述的种类的无菌粉末、颗粒和片剂来制备。
如果需要，可以在包装或分配器装置中提供组合物和配制品，所述包装或分配器装置可以含有一种或多种含有活性成分的单位剂型。包装可以例如包含金属或塑料箔，诸如泡罩包装。包装或分配器装置可以附有施用说明书。
此外，所述组合物可以以用于递送至靶组织部位的形式来包封或注射。在某些实施方案中，本发明的组合物可以包括能够将一种或多种治疗性化合物(例如，ActRII多肽)递送至靶组织部位的基质，从而提供用于发育中的组织并且最佳地能够被再吸收到体内的结构。例如，所述基质可以提供ActRII多肽的缓释。这样的基质可以由当前用于其他植入医学应用的材料来形成。
基质材料的选择基于生物相容性、生物可降解性、机械特性、装饰性外观和界面特性。主题组合物的特定应用将限定适当的配制品。所述组合物的潜在基质可以是可生物降解的且在化学上定义的硫酸钙、磷酸三钙、羟基磷灰石、聚乳酸和聚酸酐。其他潜在的材料是生物可降解的和生物学上明确限定的，如骨或真皮胶原。其他基质由纯蛋白质或细胞外基质组分组成。其他潜在基质是不可生物降解的和化学成分确定的，如烧结的羟基磷灰石、生物玻璃、铝酸盐或其他陶瓷。基质可以由任何上述类型的材料的组合组成，所述材料诸如聚乳酸和羟基磷灰石或胶原和磷酸三钙。生物陶瓷的组成可以改变，如在铝酸钙-磷酸盐中，并且经加工以改变孔径、粒度、颗粒形状和生物降解性。
在某些实施方案中，本发明的方法可以例如以如下形式口服施用：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用经调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)、粉末、颗粒，或水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液，或水包油或油包水液体乳液，或酏剂或糖浆，或含片(使用惰性基质，如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)和/或漱口剂等，其各自均含有预定量的药剂作为活性成分。还可以大丸剂、舐剂或糊剂形式施用药剂。
在用于口服的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉末、颗粒等)中，可以将一种或多种本发明的治疗性化合物与一种或多种药学上可接受的载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下中的任一种混合：(1)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，如像鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述药物组合物还可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可作为填充剂用于使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性成分之外，液体剂型可以含有在本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具体地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除活性化合物以外，悬浮液还可以含有助悬剂，诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶以及其混合物。
本发明的组合物还可以含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保微生物作用的阻止。还可能合乎需要的是在组合物中包含等渗剂，诸如糖、氯化钠等。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。
应理解，剂量方案将由主治医师在考虑改变本公开文本的主题化合物(例如，ActRII多肽)的作用的各种因素后确定。所述各种因素包括但不限于患者的年龄、性别和饮食、疾病的严重性、给药时间和其他临床因素。任选地，剂量可以随重构中使用的基质类型和组合物中化合物的类型而变化。在一些实施方案中，可以通过定期评估来监测患者的血液学参数，以确定他们是否具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平(例如，血红蛋白水平>16.0g/dL或血红蛋白水平>18.0g/dL)。在一些实施方案中，具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平的患者可以接受延迟或减少的剂量，直至所述水平已经恢复到正常或可接受的水平。
患者具有大于18g/dL的血红蛋白水平或大于2g/dL的血红蛋白增加的概率在使用ActRII多肽的初始治疗期间可能较高。在某些实施方案中，可以使用给药方案来预防、改善或减少血红蛋白水平的不利变化。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是使用给药方案来施用。在一些实施方案中，所述方法包括将治疗有效量的如本文所公开的ActRII多肽的给药方案施用至患者，所述给药方案包括0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第一剂量持续第一时间段，随后施用0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第二剂量持续第二时间段。在一些实施方案中，所述方法包括将治疗有效量的如本文所公开的ActRII多肽的给药方案施用至患者，所述给药方案包括0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第一剂量持续第一时间段，施用0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第二剂量持续第二时间段，随后施用0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第三剂量持续第三时间段。在一些实施方案中，将所述第一剂量的ActRII多肽以约0.2mg/kg至约0.4mg/kg的量施用至患者。在一些实施方案中，将所述第一剂量的ActRII多肽以0.3mg/kg的剂量施用至患者。在一些实施方案中，将所述第二剂量的ActRII多肽以约0.5mg/kg至约0.8mg/kg的量施用至患者。在一些实施方案中，将所述第二剂量的ActRII多肽以0.7mg/kg的剂量施用至患者。在一些实施方案中，将所述第三剂量的ActRII多肽以约0.2mg/kg至约0.4mg/kg的量施用至患者。在一些实施方案中，将所述第三剂量的ActRII多肽以0.3mg/kg的剂量施用至患者。
在一些实施方案中，所述给药方案包括将第一剂量的ActRII多肽以0.3mg/kg的量施用至患者，之后将第二剂量的ActRII多肽以0.7mg/kg的量施用至所述患者。在一些实施方案中，所述给药方案包括将第一剂量的ActRII多肽以0.3mg/kg的量施用至患者，将第二剂量的ActRII多肽以0.7mg/kg的量施用至所述患者，以及将第三剂量的ActRII多肽以0.3mg/kg的量施用至所述患者。在一些实施方案中，所述第二剂量超过所述第一剂量。在一些实施方案中，所述第一剂量超过所述第二剂量。在一些实施方案中，所述第三剂量超过所述第二剂量。在一些实施方案中，所述第二剂量超过所述第三剂量。在一些实施方案中，所述第一时间段为至少3周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少3周。在一些实施方案中，所述第三时间段为至少3周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少21周。在一些实施方案中，所述第二时间段为至少45周。在一些实施方案中，所述第二时间段超过所述第一时间段。在一些实施方案中，所述第三时间段超过所述第一时间段。在一些实施方案中，所述第三时间段超过所述第二时间段。
在一些实施方案中，在所述第一剂量与所述第二剂量之间给药的变化由主治医师考虑各种因素(例如，血红蛋白水平)后决定。在一些实施方案中，在所述第二剂量与所述第三剂量之间给药的变化由主治医师考虑各种因素(例如，血红蛋白水平)后决定。在一些实施方案中，所述各种因素包括但不限于患者的血液学参数在一段时间中的变化。在一些实施方案中，监测患者的血液学参数以确定他们是否具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平(例如，血红蛋白水平>16.0g/dL或血红蛋白水平>18.0g/dL)。在一些实施方案中，监测患者的血液学参数以确定他们是否在一段时间中具有高于正常的血红蛋白水平的增加(例如，在小于3周内血红蛋白水平增加>2g/dL)。在一些实施方案中，如果患者的一个或多个血液学参数在治疗前或治疗期间是异常的，则将减少所述患者的如本文所公开的ActRII多肽的剂量(例如，剂量从0.7mg/kg减少至0.3mg/kg)。在一些实施方案中，如果患者的一个或多个血液学参数在治疗前或治疗期间是异常的，则将维持所述患者的如本文所公开的ActRII多肽的剂量(例如，维持在0.3mg/kg或0.7mg/kg)。
在一些实施方案中，所述给药方案预防、改善或减少ActRII多肽的不利影响。在一些实施方案中，根据如本文所提供的剂量方案施用ActRII多肽导致减少不良副作用。在一些实施方案中，根据如本文所提供的剂量方案施用ActRII多肽减小在第一时间段期间血红蛋白水平大于18g/dL的概率。在一些实施方案中，根据如本文所提供的剂量方案施用ActRII多肽减小在治疗的最初3周中血红蛋白水平大于18g/dL的概率。在一些实施方案中，根据如本文所提供的剂量方案施用ActRII多肽减小在第一时间段期间将血红蛋白水平增加大于2g/dL的概率。在一些实施方案中，根据如本文所提供的剂量方案施用ActRII多肽减小在治疗的最初3周中将血红蛋白水平增加大于2g/dL的概率。
在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg的给药范围来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.1mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.2mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.3mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.4mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.5mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.6mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.7mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.8mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以0.9mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.0mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.1mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.2mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.3mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.4mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.5mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.6mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.7mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.8mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以1.9mg/kg来施用。在一些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是以2.0mg/kg来施用。
在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是一天施用一次。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是一天施用两次。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是一周施用一次。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是一周施用两次。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是一周施用三次。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是每两周施用。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是每三周施用。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是每四周施用。在某些实施方案中，本公开文本的ActRII多肽是每个月施用。
在某些实施方案中，本发明还提供用于体内产生ActRII多肽的基因疗法。这样的疗法将通过将ActRII多肽多核苷酸序列引入具有如上文列出的障碍的细胞或组织中来实现其治疗效果。ActRII多肽多核苷酸序列的递送可以使用重组表达载体(如嵌合病毒)或胶体分散系统来实现。对于ActRII多肽多核苷酸序列的治疗性递送，优选地使用靶向脂质体。
可以用于如本文所传授的基因疗法的各种病毒载体包括腺病毒、疱疹病毒、牛痘或者优选地RNA病毒，如逆转录病毒。优选地，逆转录病毒载体是鼠或禽逆转录病毒的衍生物。可以插入单一外源基因的逆转录病毒载体的例子包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV)、哈维鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺瘤病毒(MuMTV)和劳斯肉瘤病毒(RSV)。多种另外的逆转录病毒载体可以掺入多个基因。所有这些载体都可以转移或掺入可选择标记的基因，使得可以鉴别并生成转导的细胞。可以通过附接例如糖、糖脂或蛋白质而使逆转录病毒载体成为靶标特异性的。优选的靶向通过使用抗体来实现。本领域技术人员将认识到，可以将特定多核苷酸序列插入逆转录病毒基因组中或附着至病毒包膜，以允许含有ActRII多肽的逆转录病毒载体的靶标特异性递送。在一个优选的实施方案中，载体靶向骨或软骨。
可替代地，可以通过常规的磷酸钙转染，用编码逆转录病毒结构基因gag、pol和env的质粒直接转染组织培养细胞。然后用含有目的基因的载体质粒转染这些细胞。所得细胞将逆转录病毒载体释放到培养基中。
用于ActRII多肽多核苷酸的另一种靶向递送系统是胶体分散系统。胶体分散系统包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的系统，所述系统包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。本发明的优选胶体系统是脂质体。脂质体是人工膜囊泡，其在体外和体内可用作递送媒介物。RNA、DNA和完整病毒粒子可以包封在水性内部并且以生物活性形式递送至细胞(参见例如，Fraley等人,Trends Biochem.Sci.,6:77,1981)。使用脂质体媒介物进行有效基因转移的方法是本领域中已知的，参见例如，Mannino等人,Biotechniques,6:682,1988。脂质体的组成通常是磷脂的组合，通常与类固醇、尤其是胆固醇的组合。也可以使用其他磷脂或其他脂质。脂质体的物理特征取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。
可用于脂质体产生的脂质的例子包括磷脂酰基化合物，如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、脑苷脂和神经节苷脂。说明性磷脂包括卵磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。基于例如器官特异性、细胞特异性和细胞器特异性，脂质体的靶向也是可能的，并且是本领域中已知的。
本公开文本提供如下配制品，其可以经改变以包括酸和碱来调节pH；并且包括缓冲剂以将pH值保持在狭窄范围内。
6.试剂盒
本公开文本提供一种包含冻干多肽和注射装置的试剂盒。在某些实施方案中，所述冻干多肽包含ActRII多肽(例如，与SEQ ID NO:1的氨基酸30-110至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的多肽)或其片段、功能变体或修饰形式。在某些实施方案中，所述冻干多肽能够与选自激活素A、激活素B和GDF11的一种或多种配体结合。在某些这样的实施方案中，所述冻干多肽能够与选自BMP10、GDF8和BMP6的一种或多种配体结合。在某些实施方案中，所述冻干多肽能够与激活素和/或GDF11结合。
在一些实施方案中，所述冻干多肽包含如下多肽，所述多肽包含与在对应于SEQID NO:1的氨基酸21-30中的任一个的残基处开始(例如，在氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始)并且在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸110-135中的任一个的位置处结束(例如，在氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束)的多肽的一部分至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，基本上由其组成或者由其组成。在某些这样的实施方案中，所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％、95％或99％相同的氨基酸序列，其中所述多肽与激活素和/或GDF11结合。在某些实施方案中，所述多肽包含对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述多肽由对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列组成。在某些实施方案中，所述多肽是如下多肽，所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少90％、95％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽包含对应于SEQ IDNO:1的残基21-135的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述多肽由对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列组成。
在一些实施方案中，所述冻干多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽基本上由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。在其他实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。
在一些实施方案中，所述冻干多肽包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。在其他实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。
在前文的某些实施方案中，所述冻干多肽包含还包含免疫球蛋白的Fc结构域的融合蛋白。在某些这样的实施方案中，所述免疫球蛋白的Fc结构域是IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。在其他实施方案中，所述融合蛋白还包含定位于所述多肽结构域与所述免疫球蛋白的Fc结构域之间的接头结构域。在某些实施方案中，所述接头结构域选自：TGGG(SEQ IDNO:20)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:19)、GGGGS(SEQ ID NO:22)、GGG(SEQ IDNO:16)、GGGG(SEQ ID NO:17)和SGGG(SEQ ID NO:21)。在某些实施方案中，所述接头结构域包含TGGG(SEQ ID NO:20)。
在某些实施方案中，所述冻干多肽包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:23的氨基酸序列组成。在其他实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:23的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，所述冻干多肽包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:30的氨基酸序列组成。在其他实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:30的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，所述冻干多肽包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:41的氨基酸序列组成。在其他实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO:41的氨基酸序列组成。
在某些实施方案中，所述冻干多肽包含一种或多种ActRII多肽，如本文公开的那些。在某些实施方案中，所述冻干多肽包含本文公开的ActRII多肽。
在某些实施方案中，所述冻干多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。在某些实施方案中，所述多肽是糖基化的。
本公开文本提供一种试剂盒，其包含含有如本文所公开的冻干多肽的无菌粉末和注射装置。在本文公开的试剂盒的一些实施方案中，将包含冻干多肽的所述无菌粉末预填充于一个或多个容器(如一个或多个小瓶)[图19(1)]中。
在某些实施方案中，包含冻干多肽的所述无菌粉末的pH范围为7至8。在一些实施方案中，包含冻干多肽的所述无菌粉末还包含缓冲剂。在一些实施方案中，所述缓冲剂可以以至少10mM的量来添加。在一些实施方案中，所述缓冲剂可以以在约10mM至约200mM之间的范围内的量来添加。在一些实施方案中，所述缓冲剂包含柠檬酸一水合物和/或脱水柠檬酸三钠。
在一些实施方案中，包含冻干多肽的所述无菌粉末还包含表面活性剂。在一些实施方案中，所述表面活性剂包含聚山梨醇酯。在一些实施方案中，所述表面活性剂包含聚山梨醇酯80。
在一些实施方案中，包含冻干多肽的所述无菌粉末还包含冻干保护剂。在一些实施方案中，所述冻干保护剂包含糖，如二糖(例如，蔗糖)。在一些实施方案中，所述冻干保护剂包含蔗糖,海藻糖,甘露醇,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖和/或甘氨酸。在一些实施方案中，所述冻干保护剂包含蔗糖。在一些实施方案中，所述无菌粉末以至少1:1的冻干多肽与冻干保护剂的重量比包含所述冻干保护剂和所述冻干多肽。在一些实施方案中，所述无菌粉末以1:1至1:10的冻干多肽与冻干保护剂的重量比包含所述冻干保护剂和所述冻干多肽。在一些实施方案中，所述无菌粉末以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10的冻干多肽与冻干保护剂的重量比包含所述冻干保护剂和所述冻干多肽。在一些实施方案中，所述无菌粉末以1:6的冻干多肽与冻干保护剂的重量比包含所述冻干保护剂和所述冻干多肽。在前文的某些实施方案中，所述无菌粉末以足以稳定所述冻干多肽的量包含冻干保护剂。
在本文公开的试剂盒的某些实施方案中，所述注射装置包含注射器[图19(2)]。在一些实施方案中，所述注射器是2mL注射器。在一些实施方案中，所述注射器是3mL注射器。在某些这样的实施方案中，所述注射器预填充有重构溶液。在一些实施方案中，所述重构溶液包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，所述药学上可接受的载体包含水溶液，如水、生理缓冲盐水或其他溶剂，或者媒介物，如二醇、甘油、油或可注射有机酯。在一些实施方案中，所述药学上可接受的赋形剂包含选自以下的药学上可接受的赋形剂：磷酸钙、碳酸钙、硫酸钙、石盐、金属氧化物、糖、糖醇、淀粉、二醇、聚维酮、矿物碳氢化合物、丙烯酸类聚合物、脂肪醇、矿物硬脂酸盐、丙三醇和/或脂质。在某些实施方案中，所述重构溶液包含药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液。在某些这样的实施方案中，所述重构溶液包含使配制品与预期接受者的血液等渗的抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和/或溶质。在其他实施方案中，所述重构溶液包含悬浮或增稠剂。
在本文公开的试剂盒的某些实施方案中，所述试剂盒还包含小瓶适配器[图19(3)]。在一些实施方案中，预填充有包含冻干多肽的无菌粉末的小瓶附接至所述小瓶适配器的一端。在一些实施方案中，预填充有如本文所公开的重构溶液的注射器附接至所述小瓶适配器的一端。在一些实施方案中，预填充有如本文所公开的重构溶液的注射器和预填充有包含冻干多肽的无菌粉末的小瓶附接至所述小瓶适配器的相对两端。在一些实施方案中，将所述重构溶液从所述预填充的注射器转移至所述小瓶。在一些实施方案中，将所述重构溶液转移至预填充有包含冻干多肽的无菌粉末的小瓶将所述冻干多肽重构为无菌可注射溶液。在一些实施方案中，将所述冻干多肽重构为无菌可注射溶液。在一些实施方案中，将所述冻干多肽在使用前重构为无菌可注射溶液。
在本文公开的试剂盒的其他实施方案中，所述试剂盒还包含泵装置。在某些实施方案中，所述泵装置包含机电泵送组件。在某些实施方案中，所述泵装置包含用于容纳无菌可注射溶液的储器。在某些实施方案中，所述储器容纳1mL无菌可注射溶液。在某些实施方案中，所述泵装置包含含有无菌可注射溶液的一个或多个小瓶或药盒。在某些实施方案中，所述小瓶或药盒预填充有无菌可注射溶液。在某些实施方案中，所述小瓶或药盒包含从冻干多肽重构的无菌可注射溶液。在某些实施方案中，所述储器连接至所述小瓶或药盒。在某些实施方案中，所述小瓶或药盒容纳1-20mL无菌可注射溶液。在某些实施方案中，所述机电泵送组件包含泵室。在某些实施方案中，所述机电泵送组件连接至所述储器。在某些实施方案中，所述无菌可注射溶液是从所述储器接收至所述泵室。在一些实施方案中，所述机电泵送组件包含活塞，所述活塞的布置使得所述泵室中的无菌可注射溶液与所述活塞直接接触。在某些实施方案中，无菌可注射溶液是在第一泵送期期间从所述储器接收至所述泵室中，并且是在第二泵送期期间从所述泵室递送至受试者。在某些实施方案中，所述机电泵送组件包含控制回路。在某些实施方案中，控制回路驱动所述活塞：(a)在所述第一泵送期期间将所述无菌可注射溶液抽取至所述泵室中，以及(b)在所述第二泵送期期间在所述活塞的多个不连续运动中从所述泵室递送所述无菌可注射溶液，从而在整个所述第二泵送期期间将治疗物质以多个受控的离散剂量递送至受试者。在某些实施方案中，可以重复第一与第二泵送期交替的循环直至施用所需剂量。在某些实施方案中，所述泵装置连接至可穿戴贴片。在某些实施方案中，所述泵装置是可穿戴泵装置。在一些实施方案中，所述泵装置每3周施用一剂。在一些实施方案中，所述泵装置经由皮下注射施用所述剂量。
本公开文本提供用于将冻干多肽重构为无菌可注射溶液的试剂盒。在某些实施方案中，所得无菌可注射溶液可用于本文公开的方法中。
在本文公开的试剂盒的某些实施方案中，所述试剂盒还包含用于肠胃外施用所述无菌可注射溶液的可注射装置[图19(1、2、3、4和5)]。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由皮下注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由皮内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由肌内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是经由静脉内注射施用。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液是自我施用的。在一些实施方案中，所述无菌可注射溶液包含治疗有效剂量。在一些实施方案中，所述治疗有效剂量包含基于体重的剂量。在一些实施方案中，所述基于体重的剂量为0.3mg/kg。在一些实施方案中，所述基于体重的剂量为0.7mg/kg。
在本文公开的试剂盒的一些实施方案中，所述试剂盒还包含含有所述冻干多肽的一个或多个小瓶或药盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的至少两个小瓶或药盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的至少三个小瓶或药盒。在一些实施方案中，所述两个小瓶可以含有相同或不同量的所述冻干多肽。在一些实施方案中，所述小瓶或药盒包含含有25mg至60mg之间的冻干多肽的小瓶或药盒。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶或药盒包括含有60mg冻干多肽的小瓶或药盒。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶或药盒包括含有45mg冻干多肽的小瓶或药盒。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶或药盒包括含有30mg冻干多肽的小瓶或药盒。在一些实施方案中，至少一个所述小瓶或药盒包括含有25mg冻干多肽的小瓶或药盒。在一些实施方案中，第一小瓶或药盒含有45mg冻干多肽并且第二小瓶或药盒含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶或药盒含有30mg冻干多肽并且第二小瓶或药盒含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶或药盒含有30mg冻干多肽，第二小瓶或药盒含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶或药盒含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，第一小瓶或药盒含有25mg冻干多肽，第二小瓶或药盒含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶或药盒含有60mg冻干多肽。在一些实施方案中，将所述一个或多个小瓶或药盒在2-8℃下冷冻。
7.实施例
通过参考以下实施例将更容易地理解上文的公开文本，所述实施例仅出于说明本发明的某些实施方案的目的而被包括在内，并不意图具有限制性。
实施例1：ActRIIA-Fc融合蛋白
构建可溶性ActRIIA融合蛋白，其具有与人或小鼠Fc结构域融合的人ActRIIa的细胞外结构域，其间具有最小接头。将所述构建体分别称为ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc。
ActRIIA-hFc在下文中显示为从CHO细胞系纯化(SEQ ID NO:23)：
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
缺少C末端赖氨酸的另外的ActRIIA-hFc在下文中显示为从CHO细胞系纯化(SEQID NO:41)：
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
所述ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc蛋白在CHO细胞系中表达。考虑了三种不同的前导序列：
(i)蜜蜂蜂毒素(HBML)：MKFLVNVALVFMVVYISYIYA(SEQ ID NO:24)
(ii)组织纤溶酶原激活物(TPA)：MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSP(SEQ ID NO:25)
(iii)天然的：MGAAAKLAFAVFLISCSSGA(SEQ ID NO:26)
所选形式采用TPA前导序列并且具有以下未加工的氨基酸序列：
MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVSPGAAILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPPTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:27)
这种多肽是由以下核酸序列编码：
ATGGATGCAATGAAGAGAGGGCTCTGCTGTGTGCTGCTGCTGTGTGGAGCAGTCTTCGTTTCGCCCGGCGCCGCTATACTTGGTAGATCAGAAACTCAGGAGTGTCTTTTTTTAATGCTAATTGGGAAAAAGACAGAACCAATCAAACTGGTGTTGAACCGTGTTATGGTGACAAAGATAAACGGCGGCATTGTTTTGCTACCTGGAAGAATATTTCTGGTTCCATTGAATAGTGAAACAAGGTTGTTGGCTGGATGATATCAACTGCTATGACAGGACTGATTGTGTAGAAAAAAAAGACAGCCCTGAAGTATATTTCTGTTGCTGTGAGGGCAATATGTGTAATGAAAAGTTTTCTTATTTTCCGGAGATGGAAGTCACACAGCCCACTTCAAATCCAGTTACACCTAAGCCACCCACCGGTGGTGGAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGTCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGAATTC(SEQ ID NO:28)
ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc二者都非常适合于重组表达。如图5中所示，所述蛋白质被纯化为单一的界限清晰的蛋白质峰。N末端测序揭示了-ILGRSETQE的单一序列(SEQ IDNO:29)。可以通过一系列柱色谱步骤实现纯化，包括例如以下中按任何顺序的三种或更多种：蛋白A色谱、Q琼脂糖色谱、苯基琼脂糖色谱、尺寸排阻色谱和阳离子交换色谱。所述纯化可以用病毒过滤和缓冲液交换来完成。将ActRIIA-hFc蛋白纯化至纯度>98％(如通过尺寸排阻色谱所测定的)和>95％(如通过SDS PAGE所测定的)。
ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc显示对配体的高亲和力。使用标准的胺偶联程序将GDF11或激活素A固定化于BiacoreTMCM5芯片上。将ActRIIA-hFc和ActRIIA-mFc蛋白加载至系统上，并测量结合。ActRIIA-hFc以5x10-12的解离常数(KD)与激活素结合，并以9.96x10-9的KD与GDF11结合。参见图5A和图5B。使用类似的结合测定，确定ActRIIA-hFc对其他TGF-β超家族配体(包括例如激活素B、GDF8、BMP6和BMP10)具有高至中亲和力。ActRIIA-mFc的行为类似。
ActRIIA-hFc在药代动力学研究中极为稳定。用1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的ActRIIA-hFc蛋白对大鼠给药，并在24、48、72、144和168小时测量蛋白质的血浆水平。在单独研究中，以1mg/kg、10mg/kg或30mg/kg对大鼠给药。在大鼠体内，ActRIIA-hFc具有11-14天的血清半衰期，并且在两周后药物的循环水平极高(对于1mg/kg、10mg/kg或30mg/kg的初始施用，分别为11μg/ml、110μg/ml或304μg/ml)。在食蟹猴体内，血浆半衰期显著大于14天，并且对于1mg/kg、10mg/kg或30mg/kg的初始施用，药物的循环水平分别为25μg/ml、304μg/ml或1440μg/ml。
实施例2：ActRIIA-hFc蛋白的表征
使用SEQ ID NO:25的组织血纤蛋白溶解酶原前导序列，使ActRIIA-hFc融合蛋白在稳定转染的CHO-DUKX B11细胞中从pAID4载体(SV40 ori/增强子、CMV启动子)表达。所述蛋白质，如上文在实施例1中所述纯化，具有SEQ ID NO:23的序列。Fc部分是人IgG1 Fc序列，如SEQ ID NO:23中所示。蛋白质分析揭示，ActRIIA-hFc融合蛋白通过二硫键合形成为同二聚体。
CHO细胞表达的物质对激活素B配体具有比针对在人293细胞中表达的ActRIIA-hFc融合蛋白所报告者更高的亲和力[参见，del Re等人(2004)J Biol Chem.279(51):53126-53135]。另外，TPA前导序列的使用提供比其他前导序列更高的产量，并且与用天然前导序列表达的ActRIIA-Fc不同，提供高纯度N末端序列。天然前导序列的使用得到两个主要种类的ActRIIA-Fc，各自具有不同的N末端序列。
实施例3：替代性ActRIIA-Fc蛋白
可以根据本文所述的方法使用的多种ActRIIA变体描述于作为WO2006/012627公开的国际专利申请中(参见例如，第55-58页)，所述申请通过引用以其整体并入本文。替代性构建体可以具有C末端尾(ActRIIA的细胞外结构域的最后15个氨基酸)的缺失。这种构建体的序列呈现于下文中(Fc部分加下划线)(SEQ ID NO:30)：
ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYFPEMTGGGTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
实施例4：在野百合碱大鼠模型中ActRIIA多肽对肺高血压的作用
在肺动脉高压(PAH)的大鼠模型中检查ActRIIA-mFc融合蛋白(如实施例1中所述的ActRIIA-mFc同二聚体)和西地那非(批准用于PAH治疗的磷酸二酯酶-5抑制剂)的作用。在此模型中，Sprague Dawley大鼠在治疗开始前24小时接受野百合碱(MCT)的皮下注射以诱导PAH。
将大鼠分为不同的治疗组(10只小鼠/组)：1)用MCT(在研究第1天作为单一剂量i.p.施用60mg/kg)和Tris缓冲盐水(i.p.施用1ml/kg，每三天)治疗(媒介物治疗组)，2)用ActRIIA-mFc多肽(每三天i.p.施用10mg/kg)和MCT(在研究第1天作为单一剂量i.p.施用60mg/kg)治疗，3)用西地那非(每天两次口服施用30mg/kg)和MCT(在研究第1天作为单一剂量i.p.施用60mg/kg)治疗，以及4)对照大鼠(i.p.施用1ml/kg的Tris缓冲盐水，每三天)。将大鼠治疗28天。在第1天的第一剂量之前记录体重，然后在整个研究期间每周记录体重。
在第28天，通过腹膜内注射氯胺酮/赛拉嗪(80/10mg/kg)来麻醉大鼠。在颈部切开切口，并且将颈静脉分离且在前部结扎。将充液压力导管引入右颈静脉中以测量肺动脉压(PAP)。在腹股沟区切开另一个切口，并且将股动脉分离且在前部结扎。将米勒压力导管引入股动脉中以测量动脉收缩压、舒张压和心率。使用Notocord HEM(Croissy sur Seine，法国)v3.5数据采集系统监测平均动脉压和右PAP大约5-10分钟，直至获得稳定的测量结果。在所述测量期间，将大鼠在加热垫上维持在大约37℃，并且在整个程序期间用直肠温度探头监测体温。在程序结束时，将大鼠安乐死，并取出心脏和肺。将整个心脏称重。接下来，去除心房并且将左心室和间隔(LV+S)与右心室(RV)分离。将心室单独称重。部分通过计算RV/LV+S来评估肥大。也将肺称重。
与对照动物相比，观察到野百合碱治疗的大鼠(媒介物治疗组)具有降低的体重、升高的PAP、右心肥大和增加的肺重量，表明PAH的建立。与野百合碱治疗的大鼠相比，西地那非治疗的大鼠的体重没有任何改进。然而，与野百合碱治疗的大鼠相比，西地那非治疗确实将升高的PAP降低30％，将右心肥大减小18.5％，并且将肺重量减少10％。令人惊讶地，发现与西地那非相比，在此模型中，ActRIIA-mFc在治疗PAH方面具有显著更大的作用。具体而言，尽管ActRIIA-mFc治疗没有显示体重的改进，但是它在治疗PAH的其他并发症方面具有显著作用。例如，ActRIIA-Fc治疗导致升高的PAP降低68％，右心肥大减小47.1％，并且肺重量减少18.4％。
基于组织病理学评分，对于血管肌肉度观察到类似的趋势。在对组织样品进行染色以检测αSMA/弹性蛋白后，将每只动物的大小在10μm与50μm之间的100根肺小动脉分类为未肌化的、部分肌化的或完全肌化的。确定来自媒介物治疗的大鼠的肺小动脉是62.3％完全肌化的、36.4％部分肌化的和1.4％未肌化的(图6)。西地那非治疗对降低血管肌肉度仅具有不大的作用(例如，肺小动脉是57.9％完全肌化的、41.6％部分肌化的和0.9％未肌化的)(图6)。相比之下，与西地那非治疗的动物相比，ActRIIA-mFc治疗导致血管肌肉度显著降低(例如，与媒介物治疗的动物相比，肺小动脉是25.8％完全肌化的、66.9％部分肌化的和7.3％未肌化的)(图6)。还记录肺小动脉的平滑肌肥厚的组织病理学评分如下：0(正常)、1(最低)、2(轻度)、3(中度)或4(显著)。媒介物治疗的大鼠的平均平滑肌肥厚为中度至显著(3.8得分)。同样，观察到西地那非治疗对肥大的作用不大，平均得分为3(中度)。同时观察到与媒介物和西地那非治疗的动物二者相比，ActRIIA-mFc治疗的动物的平滑肌肥厚显著降低(平均得分为1.6)。总之，在此PAH模型中，ActRIIA-mFc治疗显著降低血管肌肉度和肥大。
综上所述，这些数据表明，在此野百合碱诱导的模型中，ActRIIA-mFc在改善PAH的各种并发症方面是有效的。特别地，ActRIIA-mFc在降低动脉压、右心肥大和血管肌化方面具有比针对西地那非(其为批准用于PAH治疗的药物)所观察到者更大的作用。
实施例5：在Sugen缺氧大鼠模型中ActRII多肽对肺高血压的作用
在PAH的Sugen缺氧模型中进一步检查ActRIIA-mFc融合蛋白(如实施例1中所述的ActRIIA-mFc同二聚体)和西地那非(批准用于PAH治疗的磷酸二酯酶-5抑制剂)的作用。在此模型中，大鼠在治疗开始前24小时接受司马沙尼的每日剂量并将其置于低氧环境(大约13％氧)中以诱导PAH。
将大鼠分为不同的治疗组(10只小鼠/组)：1)用司马沙尼(每天作为单一剂量s.c.施用200mg/kg)/缺氧和Tris缓冲盐水(i.p.施用1ml/kg，每三天)治疗(媒介物治疗组)，2)用ActRIIA-mFc多肽(每三天i.p.施用10mg/kg)和司马沙尼(每天作为单一剂量s.c.施用200mg/kg)/缺氧治疗，3)用西地那非(每天两次口服施用30mg/kg)和司马沙尼(每天作为单一剂量s.c.施用200mg/kg)/缺氧治疗，以及4)对照大鼠(i.p.施用1ml/kg的Tris缓冲盐水，每三天)。将大鼠治疗28天。在第1天的第一剂量之前记录体重，然后在整个研究期间每周记录体重。
在第28天，通过腹膜内注射氯胺酮/赛拉嗪(80/10mg/kg)来麻醉大鼠。在颈部切开切口，并且将颈静脉分离且在前部结扎。将充液压力导管引入右颈静脉中以测量肺动脉压(PAP)。在腹股沟区切开另一个切口，并且将股动脉分离且在前部结扎。将米勒压力导管引入股动脉中以测量动脉收缩压、舒张压和心率。使用Notocord HEM(Croissy sur Seine，法国)v3.5数据采集系统监测平均动脉压和右PAP大约5-10分钟，直至获得稳定的测量结果。在所述测量期间，将大鼠在加热垫上维持在大约37℃，并且在整个程序期间用直肠温度探头监测体温。在程序结束时，将大鼠安乐死，并取出心脏和肺。将整个心脏称重。接下来，去除心房并且将左心室和间隔(LV+S)与右心室(RV)分离。将心室单独称重。部分通过计算RV/LV+S来评估肥大。也将肺称重。
与对照动物相比，观察到司马沙尼/缺氧治疗的大鼠(媒介物治疗组)具有降低的体重、升高的PAP、右心肥大和增加的肺重量，表明PAH的建立。与媒介物治疗的动物相比，西地那非治疗将平均肺动脉压降低22.4％并且将右心肥大减小10％。同样，发现与西地那非相比，在此模型中，ActRIIA-mFc治疗在治疗PAH方面具有显著更大的作用。例如，与媒介物治疗的动物相比，ActRIIA-mFc治疗导致平均肺动脉压降低51.3％并且右心肥大减小53.5％。
基于组织病理学评分，对于血管肌肉度观察到类似的趋势。在对组织样品进行染色以检测αSMA/弹性蛋白后，将每只动物的大小在10μm与50μm之间的100根肺小动脉分类为未肌化的、部分肌化的或完全肌化的。确定来自媒介物治疗的大鼠的肺小动脉是72.5％完全肌化的、27.4％部分肌化的和0.1％未肌化的(图7)。与媒介物治疗的动物相比，西地那非治疗对降低血管肌肉度仅具有不大的作用(例如，肺小动脉是67.4％完全肌化的、31.6％部分肌化的和1.0％未肌化的)(图7)。相比之下，与西地那非治疗的动物相比，ActRIIA-mFc治疗导致血管肌肉度显著降低(例如，与媒介物治疗的动物相比，肺小动脉是29.3％完全肌化的、69.3％部分肌化的和1.4％未肌化的)(图7)。还记录肺小动脉的平滑肌肥厚的组织病理学评分如下：0(正常)、1(最低)、2(轻度)、3(中度)或4(显著)。媒介物治疗的大鼠的平均平滑肌肥厚为中度至显著(3.6得分)。同样，观察到西地那非治疗对肥大的作用不大，平均得分为3(中度)。同时观察到与西地那非治疗的动物相比，ActRIIA-mFc治疗的动物的平滑肌肥厚显著降低(平均得分为1.4)。总之，在此PAH模型中，ActRIIA-mFc治疗显著降低血管肌肉度和肥大。
综上所述，这些数据表明，在Sugen缺氧模型中，ActRIIA-mFc在改善PAH的各种并发症方面是有效的。特别地，ActRIIA-mFc在降低动脉压、右心肥大和血管肌化方面具有比针对西地那非(其为批准用于PAH治疗的药物)所观察到者更大的作用。
实施例6：在患有肺动脉高压的患者中使用ActRII多肽治疗进行的24周安慰剂对照试验中使用的方法
在24周安慰剂对照试验中检查索特西普(如实施例1中所述的ActRIIA-hFc融合蛋白)作为伴随治疗在患有肺动脉高压的患者中对背景肺高血压疗法的功效和安全性。将接受背景疗法的成人随机化至以下三组中的一组中：每3周(1)皮下0.3mg/kg索特西普；(2)皮下0.7mg/kg索特西普；或者(3)皮下安慰剂。主要重点是肺血管阻力的变化。
患者
合格的患者患有呈世界卫生组织(WHO)功能II级或III级的确认的肺动脉高压(更新的肺高血压分类的第1组)，不包括门肺、血吸虫病和人免疫缺陷病毒相关亚型。患者在研究前和整个研究期间接受稳定的肺动脉高压护理标准疗法持续至少90天(护理标准由治疗医师决定并且并非按方案标准化的；用具有内皮素-受体拮抗剂、磷酸二酯酶5抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素类似物或前列环素受体激动剂的组合的单一疗法、双重疗法或三重疗法治疗患者)。进行敏感性分析以说明背景疗法中的这些差异。所有患者都提供知情同意书。
试验设计和监督
所述试验是2期、双盲、随机化、多中心试验，其具有24周安慰剂对照的治疗期，之后是18个月的活性药物扩展。此处，报告24周安慰剂对照期的顶线(topline)结果。
在八个国家的43个中心将患者随机化。指导委员会与申办者合作设计所述研究。机构审查委员会或独立伦理委员会批准了每个地点的方案。独立的数据监测委员会在第一研究剂量后6周评审揭盲的安全性数据。
最初，将合格患者根据基线WHO功能等级分层，并且使用计算机化的交互式响应技术以1:1:1的比率随机化至也使用护理标准的三个治疗组中的一组中：安慰剂、0.3mg/kg索特西普或0.7mg/kg索特西普。在所述研究期间，此比率变为3:3:4以增加0.7mg/kg索特西普组的权重；七名患者在此变化时入组。每21天通过皮下注射给予索特西普或安慰剂(盐水)(累积药物暴露详述于表3中)。在筛选时以及每3周评估安全性和功效持续24周。从筛选直至主要治疗研究访视结束时(最后一剂研究药物后8周)记录不良事件。遵循欧洲卫生局的指南，针对白细胞减少、血小板减少、嗜中性粒细胞减少以及血压和血红蛋白水平的变化来计划剂量改变。在先前的索特西普试验中已经报告过这些不良事件(表4)。要求中断或退出的患者返回进行研究结束访视。另外，在基线和24周进行2D多普勒超声心动图并且在中央核心实验室进行读取。
表3：剂量改变标准—延迟、降低和中断。
Figure BDA0004086391950000741
Figure BDA0004086391950000751
Figure BDA0004086391950000761
*申办者可以在任何时间因安全性或行政原因与研究者和数据监测委员会磋商后终止研究治疗或剂量水平。
Figure BDA0004086391950000762
如果严重不良事件或其他发现的发生提示对参与者健康的不可接受的风险，则申办者会终止研究。
Figure BDA0004086391950000763
血红蛋白对0.7mg/kg索特西普的反应的药物代谢动力学建模预测，患者最有可能在第2周期与第3周期之间逐步减少剂量，从而导致可评价集合中患者的定义需要相同剂量的六次施用。
DBP：舒张压；Hgb：血红蛋白；RBC：红细胞；SBP：收缩压
表4：研究终点。
Figure BDA0004086391950000764
BMPR2：骨形态发生蛋白受体2；CAMPHOR：剑桥肺高血压结局审查；NT-pro-BNP：N-末端前-脑利尿钠肽；SF-36：健康调查量表36；TGF-β：转化生长因子β；WHO：世界卫生组织
终点
主要终点是肺血管阻力从基线至24周的变化。关键次要终点是6分钟步行距离从基线至24周的变化。其他次要终点包括：N末端前脑利尿钠肽(NT proBNP)、超声心动图量度(三尖瓣环平面收缩期偏移、右心室面积变化分数)、WHO功能等级和安全性(表5中提供的终点的完整列表)从基线至24周的变化。
使用平均肺动脉压、肺动脉楔压和心排血量计算肺血管阻力，它们都在筛选时和在治疗期的第24周通过右心导管检查来测量。根据预定义的方案获取超声心动图(2维；2D)并且由设盲的中央实验室(BioTel Research，罗克维尔，马里兰州，美国)批准、评审和分析。在基线以及所选研究访视时评估终点。使用国家癌症研究所不良事件通用毒性标准(CTCAE)系统(定义于补充附录中)对不良事件进行评级。
表5：用于全分析集的安慰剂对照期中的研究药物暴露
Figure BDA0004086391950000771
*平均暴露持续时间以天给出
统计分析
每个治疗组26个的最低要求样本量是基于以下来确定：800达因·s/cm5的预期基线肺血管阻力(400达因·s/cm5的标准差)、索特西普治疗组在24周的30％降低(240达因·s/cm5)和安慰剂组的无变化，使用0.10的双侧α和80％权重。然而，此处报告的结果表示0.05的双侧α和95％权重。置信区间尚未针对多重性加以调整并且无法用于推断确定的治疗效果。
使用协方差分析(ANCOVA)来分析肺血管阻力和6分钟步行距离从基线至24周的变化，其中以随机化因子和基线值作为协变量。使用Shapiro-Wilk检验来检验数据正态性，之后在显著性P值的事件中进行对齐Wilcoxon秩和检验，使用所分析终点的基线WHO功能等级和基线值的相同协变量。对于具有异常分布或临界异常分布的数据，将中值与平均值一起报告作为更有代表性的值。将其他终点用描述性统计学进行归纳并在适当情况下使用ANCOVA进行检验。对主要终点和关键次要终点进行敏感性分析(表6)。安全性分析包括全分析集。
表6：对全分析集的敏感性分析
Figure BDA0004086391950000772
实施例7：在患有肺动脉高压的患者中使用ActRII多肽治疗的24周安慰剂对照试验的结果
基线特征
将总计106名患者随机化以接受安慰剂(n＝32)、0.3mg/kg索特西普(n＝32)或0.7mg/kg索特西普(n＝42)以及护理标准。基线数据在各组中类似，显示患有中度至重度肺动脉高压的相对年轻的患者群体(平均年龄±SD；48.3±14.3岁)。大多数患者进行三重疗法(55.7％)，其中接近三分之一接受肠胃外(静脉内或皮下)前列环素类似物。
主要终点
在第24周的全分析集中，与安慰剂降低16.4达因·s/cm5相比，肺血管阻力相对于基线的最小二乘均值变化在0.3mg/kg索特西普组中为降低162.2达因·s/cm5且在0.7mg/kg索特西普组中为降低255.9达因·s/cm5(最小二乘均值差，95％置信区间[CI]：0.3mg/kg索特西普，145.8达因·s/cm5，241.0至50.6，P＝0.003；0.7mg/kg索特西普，239.5达因·s/cm5，-329.3至-149.7，P<0.001；图8A-图8D、图9A和图9B)。此治疗效果在接受单一疗法、双重疗法或三重疗法(包括肠胃外前列环素)的患者之间保持不变。肺血管阻力的降低由以下驱动：平均肺动脉压相比于安慰剂降低的最小二乘均值差对于0.3mg/kg索特西普组为8.3mmHg(-12.7至-4.0)，且对于0.7mg/kg索特西普组为13.4mmHg(-17.5至-9.3)(图9A和图9B)。相比之下，肺动脉楔压和心排血量在所有治疗组之间显示最小变化。
次要功效终点
在全分析集中，与安慰剂组中的28.7m增加相比，6分钟步行距离在第24周相对于基线的最小二乘均值变化是0.3mg/kg索特西普组中58.1m的增加和0.7mg/kg索特西普组中50.1m的类似增加(图9A、图9B和图10A-图10C)。在预先指定的分析中，将两个索特西普剂量组组合并与安慰剂相比较，产生24.9m的最小二乘均值差(95％ CI：3.1至46.6)。
在第24周，与使用安慰剂增加310.4±151.3pg/mL相比，NT-proBNP的最小二乘均值水平在0.3mg/kg索特西普组中从基线降低621.1±150.5pg/mL，并且在0.7mg/kg索特西普组中降低340.6±139.4pg/mL(最小二乘均值差，95％ CI：0.3mg/kg索特西普为-931.6，1353.2至509.7；0.7mg/kg索特西普为651.0，1043.3至258.7；图9A、图9B和图11A-图11C)。在使用安慰剂的四名患者(13.3％)、使用0.3mg/kg索特西普的十名患者(32.3％)和使用0.7mg/kg索特西普的七名患者(19.5％)中，WHO功能等级从基线改进至少一级(图9A和图9B)。
与安慰剂组中增加1.8±1.2％相比，超声心动图量度在第24周显示右心室面积变化分数的最小二乘均值水平0.3mg/kg索特西普组中从基线增加在5.0±1.1％，并且在0.7mg/kg索特西普组中增加5.9±1.0％(最小二乘均值差，95％ CI：0.3mg/kg索特西普为3.2，-0.02至6.4；0.7mg/kg索特西普为4.1，1.1至7.2)。三尖瓣环平面收缩期偏移的平均变化在索特西普与安慰剂之间没有不同(图12)。
安全性
在整个研究期间最常报告的不良事件以类似的程度在所有治疗组中发生(表7)。严重不良事件和剂量改变标准详述于表3和表8中。
血小板减少是所选项并且事件不一定表示所关注的临床定义。血小板减少是特别关注的最常见的不良事件，在0.7mg/kg索特西普组的五名患者(11.9％)中发生。其中，四名患者在基线时具有CTCAE 1级血小板计数(<150×109/L)并且在治疗后转变为2级(50-75×109/L)。根据方案管理三名保持2级的患者，其中中断剂量(n＝2)，之后降低剂量(n＝1)直至其血小板计数恢复到1级水平。剩余患者的血小板计数在基线时在正常范围内，随后在最后一次研究访视时降低至1级。在0.3mg/kg索特西普组中，两名患者(9.3％)报告血小板减少。一名患者开始研究时血小板计数低，在治疗期间进一步下降，但是在两次剂量中断后增加。第二名患者在基线时具有正常的血小板计数，在治疗期间降低至1级，并且在剂量降低后再次升高。在研究期间未报告血小板减少相关的出血事件，并且没有患者需要血小板输注。
在0.3mg/kg索特西普组(0.9±0.7g/dL)和0.7mg/kg索特西普组(1.1±0.6g/dL)二者中，在第一研究剂量后8天，平均血红蛋白水平相对于基线增加，而安慰剂组中的水平降低(0.3±0.7g/dL)。截至第24周，安慰剂组中的血红蛋白水平相对于基线无变化(0.0±1.1g/dL)，但是在0.3mg/kg索特西普组(1.2±1.2g/dL)和0.7mg/kg索特西普组(1.5±1.1g/dL)中增加(表7)。0.3mg/kg索特西普组中的一名患者(3.1％)和0.7mg/kg索特西普组中的六名患者(14.3％)将血红蛋白增加报告为不良事件。安慰剂组、0.3mg/kg索特西普组和0.7mg/kg索特西普组中分别有5名、3名和11名患者(15.6％、9.4％和26.2％)报告3级不良事件。
总之，三名患者由于血红蛋白水平上升高于18g/dL而根据方案退出，并且经历方案规定的静脉切开术，其中一名在0.3mg/kg索特西普组中，两名在0.7mg/kg组中。一名患者由于血小板减少而中断并且一名撤回同意，所述两名患者都在0.7mg/kg索特西普组中。0.7mg/kg索特西普组中的一名患者在研究期间死亡，由于心脏停搏所致。基于所述个体的其他当前健康状况，研究者认为这与研究治疗无关。
表7：至安慰剂对照的治疗期结束时的不良事件和血液学变量
Figure BDA0004086391950000791
*不良事件数据是安全性集中发生事件的患者的数量(％)。加-减值是平均值±SD。
Figure BDA0004086391950000792
安慰剂组血小板计数分析中包括29名患者。
Figure BDA0004086391950000793
该患者由于被认为与研究治疗无关心脏停搏而死亡。预先-存在的风险因子包括高血压、2型糖尿病、慢性阻塞性肺病、高脂血症、心房颤动、充血性心脏病和缺血性心脏病，并且合并用药包括呋塞米、螺内酯、安贝生坦、他达拉非、阿哌沙班(apixaban)、比索洛尔、地高辛、格列齐特、利格列汀、普伐他汀和噻托溴铵
表8：依据系统器官分类的严重的治疗中出现的不良事件
Figure BDA0004086391950000794
Figure BDA0004086391950000801
实施例8：在患有肺动脉高压的患者中使用ActRII多肽治疗的24周安慰剂对照试验的其他超声心动图结果
在24周安慰剂对照试验中在患者中评价索特西普(如实施例1中所述的ActRIIA-hFc融合蛋白)对右心室-肺动脉(RV-PA)耦合和右心室功能的作用。使用如实施例6和实施例7中所述相同的方法和患者。在PAH中，右心室(RV)和肺动脉(PA)随着RV功能恶化而解耦合，这是肺血管重塑的后果，其最终是致命的。在临床前，已经显示索特西普逆转右心重塑并改进右心结构和功能，并且通过抑制ActRIIA信号传导且因此使BMPR2信号传导再平衡来发挥作用。
RV-PA耦合和RV功能的恢复是PAH治疗的关键目标。RV-PA耦合可以作为TAPSE/PASP比值非侵入式地估计。TAPSE/PASP比率≥0.31mm/mm Hg与更好的预后和降低的临床恶化风险相关。因此，通过TAPSE/PASP使用实施例7中所示的TAPSE测量来评估RV-PA耦合。参见图12。与安慰剂相比，在两个索特西普剂量水平组中，在RV-PA耦合、RVEDA、RVESA、PASP和RAP从基线至第24周的LS均值(SE)变化方面见到显著改进。参见图20A、图20B、图20C、图21A和图21B。在CO方面未见到任何变化。对于RV-PA耦合，所有患者以低于0.31mm/mmHg预后阈值开始；两个治疗组截至24周改进为高于该阈值，而安慰剂组仍低于该阈值。参见图22A和图22B。
在24周安慰剂对照试验中，与安慰剂相比，用索特西普治疗与RV-PA耦合和RV功能的统计学上显著的改进相关。
实施例9：实施例10-14中使用的方法
融合蛋白和中和抗体
RAP-011是一种ActRIIA-mFc融合蛋白并且如实施例1中所述来构建。通过取代鼠IgG2a Fc对抗激活素A抗体和对肌生成抑制蛋白和GDF11具有双重特异性的抗体(RK35)进行内部修饰以用于小鼠中。在内部生成抗激活素B抗体。
动物模型
成年雄性Sprague-Dawley(SD)和Wistar(WI)大鼠(150-180gm)购自Envigo(印第安纳波利斯，印第安纳州)，分别用作SU/Hx/Nx和MCT大鼠模型。所有试验程序都由研究所实验动物使用与管理委员会批准。通过血管内皮生长因子受体拮抗剂Sugen5416(20mg/kg；Cayman)的单一皮下注射且同时暴露于常压缺氧(10％ O2)3周，之后暴露于常氧(21％ O2)7周来建立SU/Nx/Nx模型。通过MCT(60mg/kg，Torris)的单一皮下注射，之后4周暴露于常氧(10％ O2)来建立MCT模型。通过肺高血压的肺动脉环束术(PAB)模型中的压力超负荷来诱导右心室肥大。简言之，将10周龄雄性C57BL/6小鼠用氯胺酮(100mg/kg)和赛拉嗪(10mg/kg)麻醉。进行气管插管术，并且以100次呼吸/min和0.2ml的潮气量将气管导管与小动物呼吸机连接。将小鼠置于仰卧位，进行中线切口，并且在第二肋间隙处进入胸腔以暴露肺动脉。将25号钝针绑在肺动脉上，迅速去除针，并在两层中闭合伤口。
血液动力学测量
将大鼠用3-4％异氟醚麻醉并置于受控加热垫上。通过在1.5-2％异氟醚麻醉下将2F弯曲尖端压力传感器导管(SPR-513，Millar Instruments)经由右颈静脉送入右心室中来测量右心室收缩压(RVSP)。通过在1.5-2％异氟醚麻醉下将2Fr微尖PV导管(SPR 838，Millar Instruments)经由右颈动脉送入左心室中来评估心排血量。通过将心排血量除以体重来计算心脏指数。通过将RVSP除以心脏指数来估计全肺血管阻力指数(TPRI)。收集En-bloc心脏和肺并且经由右心室流出道用生理盐水灌注肺，以从肺循环冲洗出血细胞。通过计算右心室游离壁与组合的左心室和间隔的重量比(富尔顿指数)来确定右心室肥大。
超声心动图
用具有MX201扫描头的Vevo 3100成像系统(VisualSonics，多伦多，安大略省，加拿大)对用3-4％异氟醚麻醉且用1.5-2％异氟醚维持的大鼠进行超声心动图。在第5周和第9周结束时在每只大鼠中进行B模式、M模式和脉冲波多普勒流动成像。简言之，将大鼠仰卧置于加热平台上并允许其自然呼吸。使用修改的胸骨旁长轴观使右心室流出道可视化。将肺动脉加速时间(PAAT)测量为从开始到肺动脉瓣远端的主肺动脉腔中的血流峰值速度的时间，如从脉冲波多普勒记录所获得。在乳头肌的水平使心脏中心室横截面的B模式胸骨旁短轴观可视化。以修改的胸骨旁长轴观经由主动脉瓣使用M模式来测量右心室壁厚度(RVWT)。使用B模式心尖四腔观来测量RV面积变化分数(RV-FAC)。从引导M模式多普勒波束经过三尖瓣平面的外侧环的心尖四腔观获得三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。对于每个参数，取每只动物三次单独心跳的测量值并取其平均值。
细胞培养
从Lonza获得人肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASMC)。将PAEC维持在补充有内皮细胞生长套装(PCS-100-041TM，
Figure BDA0004086391950000811
)、酚红(PCS-999-001TM，
Figure BDA0004086391950000812
)和青霉素-链霉素-两性霉素B溶液(PCS-999-002TM，
Figure BDA0004086391950000813
)的血管细胞基础培养基(PCS100-030TM，
Figure BDA0004086391950000814
)中。将PASMC维持在补充有血管平滑肌细胞生长套装(PCS-100-0421TM，
Figure BDA0004086391950000821
)、酚红和青霉素-链霉素-两性霉素B溶液的血管细胞基础培养基中。在处理前，将两种细胞类型在低血清培养基(补充有0.1％胎牛血清、酚红和青霉素-链霉素-两性霉素B溶液的血管细胞基础培养基)中同步化过夜。通过在ProOx C21缺氧装置(Biosheperix)中使PAEC在大约80-90％汇合下在低血清培养基(0.1％胎牛血清)中暴露于3％缺氧24小时来生成PAEC条件化培养基(PAEC-CM)。为了确定激活素或GDF是否介导来自缺氧暴露的PAEC的条件化培养基对PASMC增殖的作用，在96孔板的每孔中用大约6000个PASMC铺板。将同步化过夜的PASMC用具有或不具有索特西普(ACE-011)或配体-中和抗体的低血清培养基或PAEC-CM处理。在PASMC处理前，将ACE-011和抗体与PAEC条件化培养基在室温下一起预孵育30min。在48小时处理后，根据制造商的说明书用基于溴脱氧尿苷的测定试剂盒(6813，Cell Signaling Technology)评估细胞增殖。
实施例10：在获得性和遗传性PH的模型中预防性RAP-011治疗的作用
在由Bmpr2单倍剂量不足引起的PH的小鼠模型中测试RAP-011，因为在肺血管内稳态和家族性PAH中深度牵涉到BMPR2途径。在Bmpr2+/R899X小鼠中，在4个月龄开始暴露于缺氧5周(图13A)显著升高右心室收缩压并诱导右心室肥大，而使用RAP-011的预防性治疗使这些参数完全正常化(图13B和图13C)。对基因组DNA的分析确认，这些小鼠在预期位置处具有杂合核苷酸取代，并且免疫印迹确认肺中降低的BMPR2蛋白水平(图13D-图13F)。综上所述，这些结果表明，使用RAP-011的预防性治疗不仅在广泛使用的获得性PH模型中而且在由Bmpr2单倍剂量不足引起的可遗传PH模型中产生强有益作用。
实施例11：在严重实验性PAH中治疗性RAP-011治疗逆转血管重塑
接下来研究当在严重血管闭塞性PAH的Sugen-缺氧-常氧(SuHxNx)大鼠模型中出现病状后施用时，RAP-011是否有效(图14A)。此模型模拟人PAH的重要特征，包括肺血管重塑、血管周围肺部炎症、明显的右心室功能障碍和以严重的阻塞性动脉病告终的进展性过程。已经观察到，此模型(包括进展的常氧期)在很大程度上对当前PAH治疗无反应，因此与患者的治疗功效大概一致。此处，我们确认，血液动力学参数(包括右心室收缩压和全肺阻力指数)在未治疗的SuHxNx大鼠中在治疗性治疗开始时(第5周)严重受损，并且在第9周仍未减小(图14B和图14C)。与同一时间点的未治疗的SuHxNx大鼠相比，在第5周开始的使用RAP-011的治疗性治疗截至第9周显著改进血液动力学缺陷(图14B和图14C)。RAP-011发挥的作用优于血管扩张药西地那非(此处用作标准疗法的代表)的作用。最重要的，与西地那非组合的RAP-011产生比单独的西地那非显著更大的血液动力学参数的改进(图14B和图14C)。
对SuHxNx大鼠肺组织的组织学检查揭示与前述血液动力学结果一致的变化。截至第5周，肺血管重塑在未治疗的SuHxNx大鼠中显而易见，其具有丛状病变，导致不同程度的血管阻塞(图14D和图14E)。在第9周，与更早时间点相比，最严重等级的血管阻塞显著更广泛地存在，与此间隔期间的疾病进展一致(图14D和图14E)。与同一时间点的未治疗的SuHxNx大鼠相比，在第5周开始的使用RAP-011的治疗性治疗截至第9周几乎完全逆转血管重塑(图14D和图14E)。如通过设盲组织学评估所确定，RAP-011比西地那非更有效地逆转血管阻塞，并且与西地那非组合的RAP-011产生比单独的西地那非显著更大的血管阻塞的改进。综上所述，这些发现表明，在严重血管闭塞性PAH的此大鼠模型中，对于血液动力学损伤和肺血管重塑的逆转，RAP-011单一疗法优于西地那非单一疗法，并且呈组合疗法的RAP-011比护理标准更有效。
实施例12：RAP-011通过螯合激活素-GDF家族中的多种配体而发挥抗增殖和其他作用
接下来检查RAP-011对肺中血管细胞增殖的作用。在严重PAH的SuHxNx大鼠模型中，与正常水平和通过使用RAP-011(作为单一疗法或与西地那非组合)的治疗性治疗正常化，但用单独的西地那非仅部分正常化的水平相比，如通过针对Ki67进行免疫染色所确定的肺血管细胞的增殖在媒介物治疗的条件下显著增加(图15A)。这些结果表明，在严重PAH的此SuHxNx模型中，对于肺血管细胞增殖的逆转，使用RAP-011的治疗性治疗优于西地那非，并且在与标准疗法组合时比单独的标准疗法更有效。
然后研究某些TGF-β超家族配体对索特西普(或RAP-011)的抗增殖作用的贡献，索特西普以高亲和力结合激活素和GDF并且减慢对配体螯合有利的解离速率。我们使用针对这些配体的抗体在基于人细胞的血管损伤模型中基于溴脱氧尿苷标记研究对索特西普的抗增殖作用的潜在配体贡献。在此测定中，使原代肺动脉平滑肌细胞暴露于来自在体外缺氧条件下生长的原代肺动脉内皮细胞的条件化培养基(图15B)。用索特西普处理条件化培养基产生的抗增殖作用的量值与用针对激活素的抗体(针对激活素A和激活素B的单独抗体)和针对GDF的抗体(具有针对GDF8和GDF11的双重特异性的抗体)的组合处理条件化培养基相等，但是与单独的抗体处理不相等(图15B)。这些数据表明，在此血管损伤体外模型中，多种Smad2/3途径配体的螯合在索特西普(或RAP-011)的抗增殖作用中起作用。
我们在预防性SuHxNx大鼠模型中使用类似的方法来探查哪种配体负责RAP-011对心肺参数的有益作用(图15C)。在此体内模型中，通过使用针对激活素、GDF8和GDF11的抗体的组合治疗比单独的抗体治疗更有效地将升高的血液动力学参数(如肺动脉收缩压和平均肺动脉压)正常化(图15D和图15E)。使用这些抗体的组合治疗还比单独的抗体治疗更有效地将右心室肥大(富尔顿指数)正常化(图15F)。综上所述，这些结果表明，在实验性PH中，多种Smad2/3途径配体(可能是激活素、GDF8和GDF11的组合)的螯合在RAP-011诱导的血管重塑的逆转以及血液动力学和心脏结构参数的改进中起作用。
实施例13：在严重实验性PAH中治疗性RAP-011治疗逆转心脏重塑
我们然后在严重PAH的治疗性SuHxNx模型中研究RAP-011是否逆转已建立的心脏重塑(图16A)。在未治疗的SuHxNx大鼠中，确认在治疗性治疗开始时(第5周)的右心室肥大和受损的心脏指数，其直至第9周持续未减小(图16A和图16B)。与同一时间点的未治疗的SuHxNx大鼠相比，在疾病开始后5周开始的使用RAP-011的治疗性治疗截至第9周显著改进这些参数(图16A和图16B)。RAP-011治疗产生的改进优于西地那非的改进，并且重要的是，在与西地那非组合时比单独的西地那非更有效地使这些参数正常化(图16A和图16B)。
接下来使用超声心动图在此严重PAH模型中研究使用RAP-011的治疗性治疗对心脏参数的作用。在每只大鼠中在第5周(治疗前)和第9周(治疗后)进行的超声心动图评估证实，RAP-011治疗(单独的或与西地那非组合)逆转右心室扩张和间隔壁变平，而单独的西地那非没有逆转(图16C)。如通过超声心动图所确定，截至治疗性治疗开始时(第5周)，未治疗的SuHxNx大鼠在肺动脉加速时间(PAAT)、TAPSE、右心室壁厚度(RVWT)和右心室分数变化(RVFC)方面出现异常，所述异常维持至第9周(图16D、图16E、图16F和图16G)。与同一时间点的未治疗的SuHxNx大鼠相比，在疾病开始后5周开始的使用RAP-011的治疗性治疗截至9周时显著改进这些参数(图16D、图16E、图16F和图16G)。除了TAPSE的情形，RAP-011治疗产生的改进优于西地那非的改进，并且在与西地那非组合时比单独的西地那非更有效地使每个参数正常化(图16D、图16E、图16F和图16G)。
我们还在严重PAH的SuHxNx模型中检查使用RAP-011的治疗性治疗对心脏功能障碍的所选标记物的作用。心脏重塑和心力衰竭与肌球蛋白重链亚型从α转变为β(增加的Myh7:Myh6比率)、增加的利尿钠肽B水平(Nppb)以及增加的激活素-ActRII信号传导(33-35)相关(Krenz 2004、
Figure BDA0004086391950000831
2015；Roh 2019)。如与正常相比，在第9周来自媒介物治疗的SuHxNx大鼠的右心室组织展示增加的Myh7:Myh6表达的比率、增加的Nppb表达以及增加的激活素A(Inhba)和激活素B(Inhbb)的β亚基的表达(图16H、图16I、图16J和图16K)。在每种情形中，与媒介物相比，使用RAP-011的治疗性治疗使这些标记物的表达部分或完全正常化，而使用西地那非的治疗性治疗没有使其正常化(图16H、图16I、图16J和图16K)。重要的是，RAP-011与西地那非的组合还比单独的西地那非更有效地使这些标记物的表达正常化(图16H、图16I、图16J和图16K)。综上所述，这些结果证实，在严重实验性PAH中，RAP-011单一疗法和掺入RAP-011的组合疗法逆转心脏重塑。
实施例14：在压力超负荷的模型中RAP-011发挥心脏保护作用
为了确定RAP-011的前述心脏保护作用是否可能是由于对心脏的直接作用所致，我们接下来在经历肺动脉环束术(PAB)以模拟肺血管阻力的慢性升高的小鼠中在连续压力超负荷的条件下研究RAP-011治疗的心脏作用(图17A)。与假程序相比，PAB截至第21天研究结束时产生右心室肥大和功能障碍，而用RAP-011治疗显著减少这些PAB诱导的变化(图17B、图17C、图17D和图17E)。如在研究结束时通过右心室导管检查所确定，右心室中的形成压和压力变化的峰值速率的绝对值通过PAB增加并且通过RAP-011治疗完全或部分正常化(图17F和图17G)。与媒介物相比，在RAP-011治疗的小鼠的右心室中，这些功能改进伴随显著减少的纤维化(图17H和图17I)。综上所述，这些结果表明，在连续压力负荷的条件下，RAP-011赋予右心室结构、功能和组织学益处，从而将RAP-011的直接心脏保护作用表示为其在严重实验性PAH中的治疗效果的重要组分。
实施例15：在严重实验性PAH中RAP-011诱导的心肺益处的持久性
最后，我们研究在严重实验性PAH中治疗性RAP-011治疗的心肺益处在治疗停止后是否持续(图18A)。在未治疗的SuHxNx大鼠中确认，截至第5周存在的结构和功能异常至第13周大部分仍未减少(图18B、图18C、图18D、图18E、图18F和图18G)。这些终点包括右心室收缩压、全肺血管阻力、右心室肥大、心脏指数、肺动脉加速时间和三尖瓣环平面收缩期偏移。与同一时间点的未治疗的SuHxNx大鼠相比，在第5周开始的使用RAP-011的治疗性治疗截至第9周在这些参数中产生显著改进(图18B、图18C、图18D、图18E、图18F和图18G)。重要的是，在退出治疗后4周，从第5周至第9周用RAP-011治疗性治疗的SuHxNx大鼠展示这些终点中每一个的显著改进的持久性(图18B、图18C、图18D、图18E、图18F和图18G)。截至退出治疗后2周，RAP-011的循环水平是无法检测的(数据未显示)。这些结果表明，在治疗停止后，在严重实验性PAH中RAP-011诱导的心肺重塑的逆转持续至少一个月。
实施例16：在获得性和遗传性PH的模型中预防性ActRIIA-mFc治疗的作用
在由Bmpr2单倍剂量不足引起的PH的小鼠模型中检查ActRIIA-mFc融合蛋白(如实施例1中所述的ActRIIA-mFc同二聚体)的作用，因为在肺血管内稳态和家族性PAH中深度牵涉到BMPR2途径。在此模型中，在4个月龄开始使Bmpr2+/R899X小鼠暴露于缺氧条件5周(图23A)。参见例如，Long L等人Nat Med.2015；21(7):777-785。
将二十九只Bmpr2+/R899X小鼠随机化为三组：(i)将七只小鼠饲养在常氧条件中5周，“Nx”；(ii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并皮下注射媒介物对照(磷酸盐缓冲盐水(PBS))，每周两次持续5周，“Hx Veh”；以及(iii)将十一只小鼠饲养在缺氧条件中并以10mg/kg剂量皮下注射ActRIIA-mFc，每周两次持续5周，“Hx ActRIIA-mFc”。在研究结束时，在将动物安乐死以收集心脏和肺之前，进行超声心动图和压力-容积导管以测量左心室和右心室重塑和功能变化。将每只小鼠的心脏和肺称重。
在安乐死之前，在清醒的小鼠中通过经胸超声心动图(Vevo 3100，VisualSonics，多伦多，安大略省，加拿大)评估体内心脏功能。通过将弯曲尖端压力传感器导管(SPR-1000，Millar Instruments)经由右颈静脉送入RV中来测量RV收缩压(RVSP)。以修改的胸骨旁长轴观经由主动脉瓣使用M模式测量右心室游离壁厚度(RVWT)。从引导M模式多普勒波束经过三尖瓣平面的外侧环的心尖四腔观获得三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)。将肺动脉加速时间(PAAT)测量为从开始到肺动脉瓣远端的主肺动脉腔中的血流峰值速度的时间，如从脉冲波多普勒记录所获得。通过计算RV游离壁与组合的左心室和间隔的重量比(富尔顿指数)来确定RV肥大。通过针对巨噬细胞标记物F4/80进行免疫组织化学染色来评估巨噬细胞浸润。肺中F4/80阳性细胞的百分比基于每只动物40个高倍放大视野的评估。
与常氧对照相比，暴露于缺氧条件的小鼠具有显著缩短的肺动脉加速时间(图23B)、升高的右心室收缩压(图23C)、增加的右心室游离壁厚度(图23D)、诱导的右心室肥大(图23E)和降低的三尖瓣环平面收缩期偏移(图23F)。通过使用ActRIIA-mFc的预防性治疗(每周两次10mpk，作为皮下注射)使这些参数中的每一个正常化。
肺中的巨噬细胞浸润的尸检分析显示，使用ActRIIA-mFc融合蛋白的治疗通过预防肺中的巨噬细胞浸润来预防血管周围炎症(图24A和图24B)。综上所述，这些结果表明，使用ActRIIA-mFc的预防性治疗不仅在广泛使用的获得性PH模型中而且在由Bmpr2单倍剂量不足引起的可遗传PH的模型中产生强有益作用。

Claims (212)

1.一种治疗肺动脉高压(PAH)的方法，所述方法包括将治疗有效量的ActRII多肽施用至患者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg的给药范围来施用，并且其中所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：
a.肺血管阻力(PVR)的降低；
b.6分钟步行距离(6MWD)的增加；
c.N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；
d.预防或降低如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展；
e.促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退；
f.右心室功能的改进；
g.肺动脉压的改进；以及
h.平均右心房压的改进。
2.一种治疗、预防肺动脉高压的一种或多种并发症或降低所述一种或多种并发症的进展率和/或严重性的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，其中所述多肽是以0.1mg/kg至2.0mg/kg的给药范围来施用，并且其中所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：
a.肺血管阻力(PVR)的降低；
b.6分钟步行距离(6MWD)的增加；
c.N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；
d.预防或降低如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展；
e.促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退；
f.右心室功能的改进；
g.肺动脉压的改进；以及
h.平均右心房压的改进。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述肺动脉高压的一种或多种并发症选自：肺动脉中的平滑肌和/或内皮细胞增殖、肺动脉中的血管生成、呼吸困难、胸痛、肺血管重塑、右心室肥大和肺纤维化。
4.一种治疗肺动脉高压(PAH)的方法，所述方法包括将治疗有效量的ActRII多肽的给药方案施用至患者，其中所述多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，所述给药方案包括0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第一剂量持续第一时间段，随后施用0.1mg/kg与1.0mg/kg之间的所述多肽的第二剂量持续第二时间段。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述多肽的施用导致以下血液动力学或功能参数中的一个或多个的变化：
a.肺血管阻力(PVR)的降低；
b.6分钟步行距离(6MWD)的增加；
c.N末端pro B型利尿钠肽(NT-proBNP)水平的降低；
d.预防或降低如世界卫生组织(WHO)所认可的肺高血压功能等级进展；
e.促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退；
f.右心室功能的改进；
g.肺动脉压的改进；以及
h.平均右心房压的改进。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的PVR。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的PVR降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的PVR降低至少20％。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的方法，其中PVR的所述降低是平均肺动脉压降低的结果。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述患者的6分钟步行距离。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的6分钟步行距离增加至少10米(例如，至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、250、300或超过400米)。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的6分钟步行距离增加至少30米。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的NT-proBNP水平。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的NT-proBNP水平降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或至少80％)。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述方法将所述患者的NT-proBNP水平降低至少30％。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述方法将NT-proBNP水平降低至正常水平。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述NT-proBNP的正常水平<100pg/ml。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述方法预防或降低如WHO所认可的肺高血压功能等级进展。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能I级肺高血压降低至II级。
20.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能II级肺高血压降低至III级。
21.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述方法预防如WHO所认可的肺高血压功能等级进展或将其从功能III级肺高血压降低至IV级。
22.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述方法促进或增加如WHO所认可的肺高血压功能等级消退。
23.根据权利要求1-17和22中任一项所述的方法，其中所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从IV级肺高血压促进或增加至III级。
24.根据权利要求1-17和22中任一项所述的方法，其中所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从III级肺高血压促进或增加至II级。
25.根据权利要求1-17和22中任一项所述的方法，其中所述方法将如WHO所认可的肺高血压功能等级消退从II级肺高血压促进或增加至I级。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述方法改进所述患者的右心室功能。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述右心室功能的改进是由于右心室面积变化分数的增加所致。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述右心室功能的改进是由于右心室肥大的降低所致。
29.根据权利要求26所述的方法，其中所述右心室功能的改进是由于射血分数的增加所致。
30.根据权利要求26所述的方法，其中所述右心室功能的改进是由于右心室面积变化分数和射血分数的增加所致。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述方法改进所述患者的肺动脉压。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述肺动脉压的改进是平均肺动脉压(mPAP)的降低。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述方法将所述患者的mPAP降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
34.根据权利要求32所述的方法，其中所述方法将所述患者的mPAP降低至少3mmHg(例如，至少3、5、7、10、12、15、20或25mmHg)。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述方法改进所述患者的平均右心房压(mRAP)。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述mRAP的改进是mRAP的降低。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述方法将所述患者的mRAP降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述方法将所述患者的mRAP降低至少1mmHg(例如，至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mmHg)。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述患者的肺血管阻力(PVR)大于或等于3伍德单位。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述患者的6分钟步行距离为150至500米。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述患者具有如与健康患者相比升高的NT-proBNP水平。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述患者的NT-proBNP水平为至少100pg/mL(例如，100、150、200、300、400、500、1000、3000、5000、10,000、15,000或20,000pg/mL)。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述患者具有如与健康患者相比升高的脑利尿钠肽(BNP)水平。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述患者的BNP水平为至少100pg/mL(例如，100、150、200、300、400、500、1000、3000、5000、10,000、15,000或20,000pg/mL)。
45.根据权利要求43或权利要求44所述的方法，其中所述方法将所述患者的BNP水平降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或至少80％)。
46.根据权利要求43-45中任一项所述的方法，其中所述方法将BNP水平降低至正常水平(即，<100pg/ml)。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述患者的平均肺动脉压(mPAP)选自：
a.至少20mmHg的mPAP；
b.至少25mmHg的mPAP；
c.至少30mmHg的mPAP；
d.至少35mmHg的mPAP；
e.至少40mmHg的mPAP；
f.至少45mmHg的mPAP；以及
g.至少50mmHg的mPAP。
48.根据权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述患者的平均右心房压(mRAP)选自：
a.至少5mmHg的mRAP；
b.至少6mmHg的mRAP；
c.至少8mmHg的mRAP；
d.至少10mmHg的mRAP；
e.至少12mmHg的mRAP；
f.至少14mmHg的mRAP；以及
g.至少16mmHg的mRAP。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述PAH是特发性肺动脉高压(PAH)。
50.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述PAH是可遗传PAH。
51.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述PAH是药物或毒素诱导的PAH。
52.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述PAH是在分流修复后至少1年与简单的先天体肺分流术相关的PAH。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能II级或III级肺高血压。
54.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能I级、II级、III级或IV级肺高血压。
55.根据权利要求1-52中任一项所述的方法，其中根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述患者患有功能IV级肺高血压。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述患者的无移植物存活。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述方法将所述患者的无移植物存活增加至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
58.根据权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的右心室肥大。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述方法将所述患者的右心室肥大降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的平滑肌肥厚。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述方法将所述患者的平滑肌肥厚降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的肺小动脉肌肉度。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述方法将所述患者的肺小动脉肌肉度降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
64.根据权利要求1-63中任一项所述的方法，其中所述方法增强所述患者的运动能力。
65.根据权利要求1-64中任一项所述的方法，其中所述方法降低所述患者的博格呼吸困难指数(BDI)。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述方法将所述患者的BDI降低至少0.5个指数点(例如，至少0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10个指数点)。
67.根据权利要求1-66中任一项所述的方法，其中所述患者具有降低的肾功能。
68.根据权利要求1-67中任一项所述的方法，其中所述方法进一步改进肾功能。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的方法，其中所述方法延迟肺动脉高压的临床恶化。
70.根据权利要求69所述的方法，其中根据世界卫生组织的肺高血压功能分级系统，所述方法延迟肺动脉高压的临床恶化。
71.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述方法降低与肺动脉高压相关的一种或多种并发症的住院风险。
72.根据权利要求1-71中任一项所述的方法，其中所述方法降低与肺动脉高压相关的一种或多种并发症的发病风险。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述发病包括以下中的一种或多种的变化：
a.对肺和/或心脏移植的需要增加；
b.需要开始使用PAH的已知治疗进行挽救疗法；
c.需要将前列环素增加至少10％；
d.需要房间隔造口术；
e.专门针对PAH住院至少24小时；以及
f.PAH恶化。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述PAH恶化包括至少15％的WHO功能等级的恶化和6MWD的降低。
75.根据权利要求1-75中任一项所述的方法，其中所述方法降低与肺动脉高压相关的死亡风险。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述方法将与肺动脉高压相关的死亡风险降低至少10％(例如，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或至少50％)。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其中所述患者的血红蛋白水平>8g/dl且<15g/dl。
78.根据权利要求1-76中任一项所述的方法，其中所述患者的血红蛋白水平<18g/dl。
79.根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽包含与对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
80.根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
81.根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
82.根据权利要求79-81中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽是还包含免疫球蛋白的Fc结构域的融合蛋白。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述免疫球蛋白的Fc结构域是IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。
84.根据权利要求82或83所述的方法，其中所述Fc融合蛋白还包含定位于所述ActRII多肽结构域与所述免疫球蛋白的Fc结构域之间的接头结构域。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述接头结构域选自：TGGG(SEQ ID NO:20)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:22)、GGGGS(SEQ ID NO:22)、GGG(SEQ ID NO:16)、GGGG(SEQ ID NO:17)和SGGG(SEQ ID NO:21)。
86.根据权利要求1-85中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
87.根据权利要求1-87中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
88.根据权利要求1-79中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
89.根据权利要求1-79中任一项所述的方法，其中所述多肽包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
90.根据权利要求1-89中任一项所述的方法，其中所述多肽是冻干的。
91.权利要求1-90中任一项的方法，其中所述多肽是可溶的。
92.根据权利要求1-91中任一项所述的方法，其中使用皮下注射将所述多肽施用至所述患者。
93.根据权利要求1-92中任一项所述的方法，其中每3周将所述多肽施用至所述患者。
94.根据权利要求1-92中任一项所述的方法，其中每4周将所述多肽施用至所述患者。
95.根据权利要求1-94中任一项所述的方法，其中所述多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。
96.根据权利要求1-95中任一项所述的方法，其中所述多肽是糖基化的。
97.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述多肽的糖基化模式可通过在中国仓鼠卵巢细胞中表达而获得。
98.根据权利要求1-97中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽与选自以下的一种或多种配体结合：激活素A、激活素B和GDF11。
99.根据权利要求1-97中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽与激活素和/或GDF11结合。
100.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述ActRII多肽进一步与选自以下的一种或多种配体结合：BMP10、GDF8和BMP6。
101.根据权利要求1-100中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽是以0.1mg/kg与2.0mg/kg之间的剂量来施用。
102.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽是以0.3mg/kg的剂量来施用。
103.根据权利要求1-101中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽是以0.7mg/kg的剂量来施用。
104.根据权利要求1-103中任一项所述的方法，所述方法包括进一步向所述患者施用另外的活性剂和/或支持疗法。
105.根据权利要求104所述的方法，其中所述另外的活性剂和/或支持疗法选自：β阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧张素受体阻断剂(ARB)、利尿剂、降脂药、内皮素阻断剂、PDE5抑制剂、前列环素或左心室辅助装置(LVAD)。
106.根据权利要求104所述的方法，其中所述另外的活性剂和/或支持疗法选自：前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列尼尔和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，西里帕格)；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦、安贝生坦、马西替坦和波生坦)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，西那西呱和利奥西呱)；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰基齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的聚乙二醇化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS2)；3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇酸甲酯(DIOXOL)；ZCVI-2；3-脱羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄酯)；左心室辅助装置(LVAD)或者肺和/或心脏移植。
107.根据权利要求1-103中任一项所述的方法，其中所述患者已经用选自以下的一种或多种药剂治疗：5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素受体激动剂和内皮素受体拮抗剂。
108.根据权利要求107所述的方法，其中所述一种或多种药剂选自：波生坦、西地那非、贝前列素、马西替坦、西里帕格、依前列醇、曲前列尼尔、伊洛前列素、安贝生坦和他达拉非。
109.根据权利要求1-108中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用选自以下的一种或多种药剂：5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂、前列环素受体激动剂和内皮素受体拮抗剂。
110.根据权利要求109所述的方法，其中所述一种或多种药剂选自：波生坦、西地那非、贝前列素、马西替坦、西里帕格、依前列醇、曲前列尼尔、伊洛前列素、安贝生坦和他达拉非。
111.根据权利要求1-110中任一项所述的方法，其中所述患者已经在施用所述多肽之前用一种或多种血管扩张药治疗。
112.根据权利要求1-111中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用一种或多种血管扩张药。
113.根据权利要求111或112所述的方法，其中所述一种或多种血管扩张药选自前列环素、依前列醇和西地那非。
114.根据权利要求113所述的方法，其中所述血管扩张药是前列环素。
115.根据权利要求1-114中任一项所述的方法，其中所述患者已经接受一种或多种用于PAH的疗法。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述一种或多种用于PAH的疗法选自：前列环素及其衍生物(例如，依前列醇、曲前列尼尔和伊洛前列素)；前列环素受体激动剂(例如，西里帕格)；内皮素受体拮抗剂(例如，西他生坦、安贝生坦、马西替坦和波生坦)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓和硝苯地平；抗凝剂(例如，华法林)；利尿剂；氧疗；房间隔造口术；肺动脉内膜血栓切除术；5型磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非和他达拉非)；可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，西那西呱和利奥西呱)；ASK-1抑制剂(例如，CIIA；SCH79797；GS-4997；MSC2032964A；3H-萘并[1,2,3-de]喹啉-2,7-二酮、NQDI-1；2-硫代-噻唑烷、5-溴-3-(4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-亚基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮)；NF-κB拮抗剂(例如，dh404、CDDO-环氧化物；2.2-二氟丙酰胺；C28咪唑(CDDO-Im)；2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-28-酸(CDDO)；3-乙酰基齐墩果酸；3-三氟乙酰基齐墩果酸；28-甲基-3-乙酰基齐墩果烷；28-甲基-3-三氟乙酰基齐墩果烷；28-甲氧基齐墩果酸；SZC014；SCZ015；SZC017；齐墩果酸的聚乙二醇化衍生物；3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->3)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1-->2)-β-D-吡喃葡萄糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；3-O-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸；3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1-->3)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖基]齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯；28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸；3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS1)；齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基艾杜糖醛酸(CS2)；3,11-二氧代齐墩果-12-烯-28-醇酸甲酯(DIOXOL)；ZCVI-2；3-脱羟基-1,2,5-噁二唑并[3',4':2,3]齐墩果酸苄酯)；左心室辅助装置(LVAD)或者肺和/或心脏移植。
117.根据权利要求1-116中任一项所述的方法，其中所述ActRII多肽是按选自以下的时间表施用至所述患者：每周、每两周、每三周和每四周。
118.根据权利要求102或权利要求103所述的方法，其中每三周将所述ActRII多肽施用至所述患者。
119.一种治疗或预防患者的与肺动脉高压相关的心肺重塑的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的ActRII多肽，其中所述方法减慢心脏重塑和/或逆转心脏重塑。
120.根据权利要求119所述的方法，其中心脏重塑的所述逆转是持续逆转。
121.根据权利要求119或权利要求120所述的方法，其中所述心肺重塑是心室重塑。
122.根据权利要求121所述的方法，其中所述心室重塑是左心室重塑。
123.根据权利要求121所述的方法，其中所述心室重塑是右心室重塑。
124.根据权利要求119-123中任一项所述的方法，其中所述心肺重塑是心室扩张。
125.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一时间段为至少3周。
126.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二时间段为至少3周。
127.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二时间段为至少21周。
128.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二时间段为至少45周。
129.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二时间段超过所述第一时间段。
130.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二剂量超过所述第一剂量。
131.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一剂量在约0.2mg/kg至约0.4mg/kg的范围内，之后第二剂量在约0.5mg/kg至约0.8mg/kg的范围内。
132.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一剂量为约0.3mg/kg，之后第二剂量为约0.7mg/kg。
133.一种包含冻干多肽和注射装置的试剂盒，其中所述多肽是ActRII多肽，所述ActRII多肽包含与在SEQ ID NO:1的氨基酸21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中的任一个处开始并且在SEQ ID NO:1的氨基酸110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135中的任一个处结束的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
134.根据权利要求133所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。
135.根据权利要求133或134所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
136.根据权利要求133-135中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。
137.根据权利要求133-136中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含对应于SEQID NO:1的残基30-110的氨基酸序列的多肽。
138.根据权利要求133-137中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是由对应于SEQ IDNO:1的残基30-110的氨基酸序列组成的多肽。
139.根据权利要求133所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。
140.根据权利要求133或权利要求139所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
141.根据权利要求133、139或140中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。
142.根据权利要求133或139-141中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列的多肽。
143.根据权利要求133或139-142中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是由对应于SEQ ID NO:1的残基21-135的氨基酸序列组成的多肽。
144.根据权利要求133所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。
145.根据权利要求133或权利要求144所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQ IDNO:2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
146.根据权利要求133、144或145中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQID NO:2的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。
147.根据权利要求133或144-146中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列的多肽。
148.根据权利要求133或144-147中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是由SEQ IDNO:2的氨基酸序列组成的多肽。
149.根据权利要求133所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列的多肽。
150.根据权利要求133或权利要求149所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQ IDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
151.根据权利要求133、149或150中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含与SEQID NO:3的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列的多肽。
152.根据权利要求133或149-151中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列的多肽。
153.根据权利要求133或149-152中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是由SEQ IDNO:3的氨基酸序列组成的多肽。
154.根据权利要求133-153中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是还包含免疫球蛋白的Fc结构域的融合蛋白。
155.根据权利要求154所述的试剂盒，其中所述免疫球蛋白的Fc结构域是IgG1免疫球蛋白的Fc结构域。
156.根据权利要求154或权利要求155所述的试剂盒，其中所述融合蛋白还包含定位于所述多肽结构域与所述免疫球蛋白的Fc结构域之间的接头结构域。
157.根据权利要求156所述的试剂盒，其中所述接头结构域选自：TGGG(SEQ ID NO:20)、TGGGG(SEQ ID NO:18)、SGGGG(SEQ ID NO:19)、GGGGS(SEQ ID NO:22)、GGG(SEQ IDNO:16)、GGGG(SEQ ID NO:17)和SGGG(SEQ ID NO:21)。
158.根据权利要求156或权利要求157所述的试剂盒，其中所述接头结构域包含TGGG(SEQ ID NO:20)。
159.根据权利要求133-158中任一项所述的试剂盒，其中所述ActRII多肽包含与SEQID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
160.根据权利要求133-159中任一项所述的试剂盒，其中所述ActRII多肽包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列。
161.根据权利要求133-160中任一项所述的试剂盒，其中所述ActRII多肽由SEQ IDNO:23的氨基酸序列组成。
162.根据权利要求133-161中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是同二聚体蛋白复合物的部分。
163.根据权利要求133-162中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽是糖基化的。
164.根据权利要求133-163中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽与选自以下的一种或多种配体结合：激活素A、激活素B和GDF11。
165.根据权利要求164所述的试剂盒，其中所述多肽还与选自以下的一种或多种配体结合：BMP10、GDF8和BMP6。
166.根据权利要求133-163中任一项所述的试剂盒，其中所述多肽与激活素和/或GDF11结合。
167.根据权利要求133-166中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的一个或多个小瓶。
168.根据权利要求133-167中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含含有所述冻干多肽的至少两个小瓶。
169.根据权利要求133-168中任一项所述的试剂盒，其中所述两个小瓶可以含有相同或不同量的所述冻干多肽。
170.根据权利要求167所述的试剂盒，其中所述小瓶包含25mg至60mg之间的所述冻干多肽。
171.根据权利要求167所述的试剂盒，其中至少一个所述小瓶含有60mg冻干多肽。
172.根据权利要求167所述的试剂盒，其中至少一个所述小瓶含有45mg冻干多肽。
173.根据权利要求167所述的试剂盒，其中至少一个所述小瓶含有30mg冻干多肽。
174.根据权利要求167所述的试剂盒，其中至少一个所述小瓶含有25mg冻干多肽。
175.根据权利要求167所述的试剂盒，其中第一小瓶含有45mg冻干多肽并且第二小瓶含有60mg冻干多肽。
176.根据权利要求167所述的试剂盒，其中第一小瓶含有30mg冻干多肽并且第二小瓶含有60mg冻干多肽。
177.根据权利要求167所述的试剂盒，其中第一小瓶含有45mg冻干多肽并且第二小瓶含有45mg冻干多肽。
178.根据权利要求167所述的试剂盒，其中第一小瓶含有30mg冻干多肽，第二小瓶含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶含有60mg冻干多肽。
179.根据权利要求167所述的试剂盒，其中第一小瓶含有25mg冻干多肽，第二小瓶含有45mg冻干多肽，并且第三小瓶含有60mg冻干多肽。
180.根据权利要求135-179中任一项所述的试剂盒，其中将所述小瓶在2-8℃下冷冻。
181.根据权利要求133-180中任一项所述的试剂盒，其中所述注射装置包括预填充的注射器。
182.根据权利要求133-181中任一项所述的试剂盒，其中所述注射装置包含泵装置。
183.根据权利要求182所述的试剂盒，其中所述泵装置包含机电泵送组件。
184.根据权利要求182或183所述的试剂盒，其中所述泵装置是可穿戴泵装置。
185.根据权利要求181所述的试剂盒，其中所述预填充的注射器包含重构溶液。
186.根据权利要求185所述的试剂盒，其中所述重构溶液包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。
187.根据权利要求186所述的试剂盒，其中所述药学上可接受的载体选自：盐水溶液、纯化水和无菌注射用水。
188.根据权利要求186所述的试剂盒，其中所述药学上可接受的赋形剂选自缓冲剂[例如，柠檬酸(一水合物)和/或柠檬酸三钠(脱水)]、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80)、稳定剂(例如，蔗糖)和冻干保护剂(例如，蔗糖)。
189.根据权利要求133-188中任一项所述的试剂盒，其中所述注射装置包含小瓶适配器。
190.根据权利要求189所述的试剂盒，其中所述小瓶适配器能够附接至小瓶。
191.根据权利要求189或权利要求190所述的试剂盒，其中所述小瓶适配器能够附接至预填充的注射器。
192.根据权利要求191所述的试剂盒，其中所述预填充的注射器和所述小瓶附接至所述小瓶适配器的相对两端。
193.根据权利要求192所述的试剂盒，其中将所述重构溶液从所述预填充的注射器转移至所述小瓶。
194.所述的试剂盒根据权利要求133-193，其中将所述冻干多肽重构为无菌可注射溶液。
195.根据权利要求133-194所述的试剂盒，其中将所述冻干多肽在使用前重构为无菌可注射溶液。
196.根据权利要求194或权利要求195所述的试剂盒，其中所述重构溶液包含无菌注射用水。
197.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是肠胃外施用。
198.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是经由皮下注射施用。
199.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是经由皮内注射施用。
200.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是经由肌内注射施用。
201.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是经由静脉内注射施用。
202.根据权利要求194-196中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是自我施用的。
203.根据权利要求194-201中任一项所述的试剂盒，其中所述注射装置用于施用所述无菌可注射溶液。
204.根据权利要求194-203中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液包含治疗有效剂量。
205.根据权利要求204所述的试剂盒，其中所述治疗有效剂量包含基于体重的剂量。
206.根据权利要求133-205中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是每3周施用。
207.根据权利要求133-205中任一项所述的试剂盒，其中所述无菌可注射溶液是每4周施用。
208.根据权利要求133-207中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于治疗PAH。
209.根据权利要求133-208中任一项所述的试剂盒，其中所述冻干多肽的贮藏寿命为至少1、3、6、9或11个月。
210.根据权利要求133-208中任一项所述的试剂盒，其中所述冻干多肽的贮藏寿命为至少1、1.5、2、2.5或3年。
211.根据权利要求133-210中任一项所述的试剂盒，其中所述冻干多肽是重构的。
212.根据权利要求211所述的试剂盒，其中所述重构的多肽的贮藏寿命选自：至少2小时、至少3小时和至少4小时。
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