JP2024507187A - ビフィドバクテリウム・ラクティス及びその使用 - Google Patents

Abstract

ビフィドバクテリウム・ラクティスを提供する。当該ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、受託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２０８４７である。提供されたビフィドバクテリウム・ラクティスは、腸内代謝異常を改善しかつ腸内微生物叢の組成を正常化させることによって、身長を効果的に改善し、肥満を防止し、子供や青少年の成長発育及び知的発展を促進し、精神障害を予防及び治療する作用を奏することができる。前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む。【選択図】図１１

Description

本願は、微生物技術分野に関し、具体的には、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）及びその使用に関する。

研究により、腸内細菌が宿主の成長発育に影響を与え、一部の菌叢が成長ホルモン（ＧＨ）／インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）に影響を与えることで宿主の成長発育過程を媒介できることを見出した。無菌マウス及び抗生物質により治療されたマウスはいずれも成長が遅くなり、グレリン（ｇｈｒｅｌｉｎ）、成長ホルモン及びＩＧＦ－１のレベルの低下に関与する。また、マウス及びヒトにおいて、微生物が欠乏すると成熟と成長が制限され、例えば、慢性栄養不良、神経性やせ症、発育不良、低身長、さらに神経及び免疫系の発育異常等を招く。インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）は、骨の成長に既知の作用を有するホルモンであり、腸内微生物の定植の増加に伴い、血清中のＩＧＦ－１の含有量が有意に増加するとともに、肝臓及び脂肪組織ＩＧＦ－１の含有量も増加する。抗生物質の治療後、腸内菌叢が大幅に減少し、血清ＩＧＦ－１を低下させ、骨形成を抑制する可能性がある。抗生物質治療後に微生物代謝産物の短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）を補充してＩＧＦ－１と骨量を正常レベルに回復することができる。また、無菌マウスのＩＧＦ－１のレベルは低いが、有益な微生物の治療により骨のミネラル密度を適度に増加させて、ＩＧＦ－１のレベルを向上させ、骨損失を防止することができる。インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）は、骨成長の内分泌及び傍分泌／自己分泌の経路に影響する成長因子である。外因性ＩＧＦ－１は、大腿骨の縦方向成長を促進できるとともに、軟骨の特異的なインスリン様成長因子Ｉ受容体（Ｉｇｆ１ｒ）が欠失した後、ＩＧＦ－１が成長板の成熟と二次骨化中心の形成に影響することを観察することができる。研究により、肝臓の特異的なＩＧＦ－１欠陥型マウスの血清ＩＧＦ－１が７５％低下したが、依然として相対的に正常な成長発育を示し、これは一部ＩＧＦ－１も骨成長を促進できることを示すことを見出した。また、ＩＧＦ－１は、骨芽細胞を促進することができる（骨形成及び骨吸収にそれぞれ影響を及ぼすことを含む）。従って、腸内微生物叢の変更は、骨の形成及び再吸収を促進することができるため、骨の純成長を引き起こし、微生物叢はＩＧＦ－１を誘導することにより骨の成長及び再構築を促進することができる。プロバイオティクス、プレバイオティクス、又はセルロースが微生物により発酵された後に生成された短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）を直接補充すると、ＩＧＦ－１の増加を誘導し、骨成長及び健康に影響を与える可能性がある。

また、腸内微生物は、腸－脳軸（ｇｕｔ－ｂｒａｉｎ ａｘｉｓ）により脳機能と行動を制御することができる。そして、腸内菌叢と脳とは、自律神経、腸神経、免疫系、嗅覚系、腸内分泌シグナル、神経伝達物質、分岐アミノ酸、胆汁酸、短鎖脂肪酸、脊髄、視床下部－垂体－副腎軸、ペプチドグリカン等の経路及び媒体を介して双方向交流を行う。腸内菌叢と中枢神経系との双方向交流、即ち、菌叢－腸－脳軸は、動物の神経発育及び機能に影響し、社会的挙動に影響を与える。このような菌叢－腸－脳軸の双方向の影響は、性別及び遺伝等の内部要因、並びに環境、食事、遺伝、圧力等の外部要因によって影響される。従って、腸内菌叢は、複数の神経系関連疾患の発症に関与し、それと同時に、心理と行動反応は、腸内菌叢の組成や機能等にも影響を与えている。既存の証拠によると、菌叢を標的とする介入方法は、腸内菌叢に関連する不安、うつ、統合失調、多動症、トゥレット症候群、パーキンソン病、アルツハイマー病等の疾患、及び自閉症等の社会的障害を治療できることが期待されている。注意欠如・多動症（ａｔｔｅｎｔｉｏｎ－ｄｅｆｉｃｉｔ／ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ、ＡＤＨＤ）を例とすると、これは、子供の時に最も一般的に見られる神経発達障害性疾患である。主な症状は、患児の年齢に合わなく注意力が分散しやすく、注意の範囲が狭く、場所に関わらずに活動が多すぎ、情緒が衝動し易く、また、一般的に、認知障害、品行障害及び学習困難等を伴うことである。ＡＤＨＤは、発病率が高く、患者の学業、家庭や社会生活等に明らかな不良の影響を与える。しかし、ＡＤＨＤに対する治療方法は依然として欠失している。

従って、肥満を防止し、子供や青少年の成長発育を促進し、精神障害を予防することができるプロバイオティクスを開発する必要があり、これは、子供や青少年又は精神障害患者及びそれらの家族にとって重要な意義がある。

本願は、ビフィドバクテリウム・ラクティス及びその使用を提供し、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、腸内代謝異常を改善しかつ腸内微生物叢の組成を正常化して、肥満を効果的に防止し、子供や青少年の成長発育を促進し、その知的発展を促進することができ、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、さらに、腸透過性を効果的に改善し、血液中のＬＰＳ、Ｄ－乳酸レベルを低下させ、精神障害を予防する作用を果たす。前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む。

上記目的を達成するために、本願の第１の態様は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを提供し、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、受託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２０８４７である。

本願の第２の態様は、ビフィドバクテリウム・ラクティス製剤をさらに提供し、前記製剤は、固形菌粉末又は液状飲料であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、本願の第１の態様に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスである。

本願の第３の態様は、腸内代謝異常を改善しかつ腸内微生物叢の組成の正常化を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第４の態様は、子供や青少年の抗肥満の食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第５の態様は、子供や青少年の成長発育を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第６の態様は、子供や青少年の身長の増加を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第７の態様は、子供や青少年の知的発展を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、１～２５重量部であり、好ましくは、１～１５重量部であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体又は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられる。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである。

選択的に、前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である。

選択的に、人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^６ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である。

本願の第８の態様は、精神障害予防の食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用を提供する。

選択的に、前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、脱脂粉乳、トレハロース、フラクトオリゴ糖、ラクトース、グルコース、スクロース、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ－リンゴ酸、Ｌ－乳酸等の１種又は複数種の組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、調味料、甘味剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤、潤滑剤、酸性中和剤、分散剤、緩衝液又は緩衝剤、脱苦味剤、ｐＨ安定剤、防腐剤、脱糖剤及び／又は着色剤をさらに含み、例えば、ラクチトール、ソルビトール、マルチトール、アスパルテーム、ステビア、ラカンカ、スクラロース、キシリトール、バニラ、チョコレート、果実香料、人工エッセンス、又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、ビタミン、ミネラル及び／又はサプリメント又はプレバイオティクス栄養物質、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プレバイオティクスは、イヌリン、アーティチョーク抽出物、チコリー根抽出物、菊芋根抽出物、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、スタキオース、マンノースオリゴ糖、アラビノースオリゴ糖、難消化性デキストリン、レジスタントスターチ又はこれらの混合物又は組み合わせを含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、ユビキノン（ＣｏＱ１０）、リコピン、β－カロテン、トリプトファン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、プロバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プロバイオティクスは、培養された又は糞便から抽出された微生物又は細菌又は細菌成分を含み、任意選択的に、前記細菌又は細菌成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、大腸菌（Ｅ ｃｏｌｉ）、プレボテーラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブラウティア（Ｂｌａｕｔｉａ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）及び同等物、又はそれらの混合物又は組合せを含む。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、０．５～２０重量部、好ましくは、１～１５重量部であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体、又は前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられ、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである。

選択的に、前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である。

選択的に、人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^９ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である。

選択的に、異なる送達形態及び担体を使用し、前記食品組成物又は医薬組成物は、粉剤、錠剤、液体、ガム、ソフトキャンディ、錠菓、ヨーグルト、牛乳、チーズ、アイスクリーム、冷凍食品、健康補助食品、医薬品又は飼料であってもよい。

本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、腸透過性を改善し、血液中のＬＰＳ、Ｄ－乳酸レベルを低下させることができる。

本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、自律活動を促進し、一試行回避反応（ｏｎｅ ｔｒｉａｌ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の記憶機能を改善し、ストレス刺激による快感欠如を改善するために用いることができる。

上記技術案によれば、本願に係るプロバイオティクスは、代謝障害を効果的に改善し、腸内微生物叢の組成を正常化させ、子供や青少年の成長を促進し、腸透過性を改善し、血液中のＬＰＳ、Ｄ－乳酸のレベルを低下させて、精神障害を予防する作用を果たす。前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む。

本願のその他の特徴及び利点は、次の具体的な実施形態の部分で詳細に説明される。

＜バイオマスの受託情報＞
ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）と命名され、中国普通微生物菌種保存管理センターに保存され、受託住所は、北京市朝陽区北辰西路１号院３号、中国科学院微生物研究所であり、受託日付は、２０２０年１０月１０日であり、受託番号は、ＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２０８４７である。

図面は本願のさらなる理解を提供するためのものであり、明細書の一部を構成し、以下の具体的な実施形態とともに本願を説明するために用いられるが、本願を限定するものではない。図面は、以下の通りである。
ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の顕微鏡観察図である。 人工胃液（ｐＨ＝３）及び人工腸液（ｐＨ＝８）におけるビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生存率の検出結果である。 抗生物質及びプロバイオティクスによる処理後のマウスの大腿骨の長さである。 抗生物質及びプロバイオティクスによる処理後のマウスの大腿骨の長さである。 抗生物質及びプロバイオティクスによる処理後のマウスの腿骨の長さである。 ２種類のプロバイオティクスによる処理後のマウスの腸内菌叢の多様性の変化である。 ２種類のプロバイオティクスによる処理後のマウスの腸におけるビフィドバクテリウムとラクトバチルスとの比率である。 ２種類のプロバイオティクスによる処理後のマウスの腸内菌叢の組成のヒートマップ分析である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後０～１２週の人体の身長変化である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後０～１２週の人体の体重変化である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の症状改善の状況である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の属レベルでの組成である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の代謝経路レベルの対照である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の門レベルでの組成である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の代表的な菌種の組成の対照である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の機能遺伝子レベルの対照である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢のＫＯレベルの対照である。 プロバイオティクス又はプラセボの服用前後の腸内菌叢の代謝経路レベルの対照である。 腸透過性検出の結果図である。 属レベルにおける腸内菌叢の構成図である。 ２群のビフィドバクテリウム属の差である。 α多様性指数の結果である。 β多様性指数分析のＰＣｏＡ分析結果である。

以下、図面を参照しながら本願の具体的な実施形態について詳細に説明する。理解すべきこととして、ここで説明した具体的な実施形態は、本願を説明及び解釈するためのものであり、本願を限定するものではない。

本願の第１の態様は、ビフィドバクテリウム・ラクティスを提供し、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、受託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２０８４７である。

本願の第２の態様は、ビフィドバクテリウム・ラクティス製剤をさらに提供し、前記製剤は、固形菌粉末又は液状飲料であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、本願の第１の態様に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスである。

本願の第３の態様は、腸内代謝異常を改善しかつ腸内微生物叢の組成の正常化を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第４の態様は、子供や青少年の抗肥満の食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第５の態様は、子供や青少年の成長発育を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第６の態様は、子供や青少年の身長の増加を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

本願の第７の態様は、子供や青少年の知的発展を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における上記ビフィドバクテリウム・ラクティスの使用をさらに提供する。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、１～２５重量部であり、好ましくは、１～１５重量部であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体、又は前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられる。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである。

選択的に、前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である。

選択的に、人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^６ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である。

本願の第８の態様は、精神障害予防の食品組成物又は医薬組成物の製造における上記のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用を提供する。

選択的に、前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、脱脂粉乳、トレハロース、フラクトオリゴ糖、ラクトース、グルコース、スクロース、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ－リンゴ酸、Ｌ－乳酸等の１種又は複数種の組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、調味料、甘味剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤、潤滑剤、酸性中和剤、分散剤、緩衝液又は緩衝剤、脱苦味剤、ｐＨ安定剤、防腐剤、脱糖剤及び／又は着色剤、例えば、ラクチトール、ソルビトール、マルチトール、アスパルテーム、ステビア、ラカンカ、スクラロース、キシリトール、バニラ、チョコレート、果実香料、人工エッセンス、又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、ビタミン、ミネラル及び／又はサプリメント又はプレバイオティクス栄養物質、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プレバイオティクスは、イヌリン、アーティチョーク抽出物、チコリー根抽出物、菊芋根抽出物、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、スタキオース、マンノースオリゴ糖、アラビノースオリゴ糖、難消化性デキストリン、レジスタントスターチ又はこれらの混合物又は組み合わせを含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、ユビキノン（ＣｏＱ１０）、リコピン、β－カロテン、トリプトファン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む。

選択的に、前記食品組成物又は医薬組成物は、プロバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プロバイオティクスは、培養された又は糞便から抽出された微生物又は細菌又は細菌成分を含み、且つ任意選択的に、前記細菌又は細菌成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、大腸菌（Ｅ ｃｏｌｉ）、プレボテーラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブラウティア（Ｂｌａｕｔｉａ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）及び同等物、又はそれらの混合物又は組合せを含む。

選択的に、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、０．５～２０重量部であり、好ましくは、１～１５重量部であり、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体、又は前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられ、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである。

選択的に、前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である。

選択的に、人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^９ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である。

選択的に、異なる送達形態及び担体を使用し、前記食品組成物又は医薬組成物は、粉剤、錠剤、液体、ガム、ソフトキャンディ、錠菓、ヨーグルト、牛乳、チーズ、アイスクリーム、冷凍食品、健康補助食品、医薬品又は飼料であってもよい。

本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、腸透過性を改善し、血液中のＬＰＳ、Ｄ－乳酸レベルを低下させることができる。

本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、自律活動を促進し、一試行回避反応の記憶機能を改善し、ストレス刺激による快感欠如を改善するために用いることができる。

以下、実施例により本願をさらに説明するが、本願はそれに限定されるものではない。

（実施例１）
本実施例は、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１及びその性能特徴を説明するためのものである。

＜１．ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の分類学的特徴＞
ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１を顕微鏡下で観察した結果を図１に示す。理化学実験の結果を表１及び表２に示す。

＋は代謝可能、－は代謝不能を表す。

＜２．ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の人工胃液、腸液に対する耐性＞
ビフィドバクテリウム・ラクティスは、通常、酸に弱い菌属である。本実施例において、本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の人工胃液、腸液に対する耐性を試験すると同時に、現在実験室で保存した耐酸性が極めて優れ、胃腸を通じて生存できるビフィドバクテリウム・ラクティスＢｂ－ＸＸを対照とした。

人工胃酸（ｐＨ＝３）におけるＢＬ－１１菌株の生存率の検出結果は、表３に示す通りである。Ｂｂ－ＸＸは、人工胃液で１時間処理した時の生菌の生存率が４４．７％であり、処理３ｈの生菌の生存率が２９．５％であるが、本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、１時間処理した時の生菌の生存率が８６．２％であり、処理３ｈの生菌の生存率が３９．５％である。これは、本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１が比較的良好な耐胃酸の能力を有し、そのほとんどが胃をスムーズに通って腸に到達して有益な作用を発揮できることを示す。

人工小腸液（ｐＨ＝８）におけるＢＬ－１１菌株の生存率の検出結果を表３に示す。データから分かるように、Ｂｂ－ＸＸは、人工腸液（ｐＨ＝８）で１時間処理した時の生菌の生存率が６６．１％であるが、本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、人工腸液で１時間処理した時の生菌の生存率が６７．５％であり、３ｈ処理した後、二つの株菌の生存率は、それぞれ４９．４％と３２．１％である。

上記結果から分かるように、人工胃液及び腸液で消化後のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、依然として良好に生存することができる（図２）。本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、参照菌に対して、比較的良好な耐消化液の能力を有し、腸内で円滑に生存して増殖することができる。

＜３．ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の毒性試験及び安全性検出＞
本願のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１をＭＲＳ液体培地に接種し、３７℃で４８時間嫌気培養し、培養液中のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数が３．７×１０^９ＣＦＵ／ｍＬであることをカウントし、培養物原液を経口でマウスに２０．０ｍＬ／ｋｇ体重の割合で３日間連続的に胃内投与し、その後７日間観察した。６～８週齢で１６～１８ｇの健康なＢＡＬＢ／Ｃ雄性マウスを選択し、室温（２５±２℃）、相対湿度（５５±２）％、１２ｈ／１２ｈの光照射を維持し、食事と水を自由に摂取した。結果から分かるように、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の培養物原液は、対照群に比べて、２群の被験マウスの毒性反応又は死亡が観察されず、マウスの体重増加も統計学的な差はなかった（ｐ＞０．０５）。

ＳＮ／Ｔ １９４４－２００７「動物及びその製品における細菌の耐薬性の測定」方法により、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抗生物質感受性能を評価した。評価結果から分かるように、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、アンピシリン（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ペニシリンＧ（ＰｅｎｃｉｌｌｉｎＧ）、エリスロマイシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）、クロラムフェニコール（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、クリンダマイシン（Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、バンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）及びテトラサイクリン（Ｔｅｔｒａｃｙｃｉｎｅ）等に敏感である。欧州食品安全委員会（ＥｕｒｏｐｅａｎＦｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ）の食用細菌の耐薬性の評価規範における要求に適合している。ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、外来抗生物質耐性遺伝子を含まず、食用が安全である。

（実施例２）
本実施例は、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１が成長発育を促進する機能的特徴を説明するためのものである。

微生物叢は、骨の形成及び再吸収を促進するため、骨の純成長を引き起こす。微生物叢は、ホルモン様インスリン成長因子１（ＩＧＦ－１）を誘導し、骨の成長と再構築を促進する。微生物菌叢が繊維を発酵して発生した短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）もＩＧＦ－１を誘導し、微生物菌叢が骨健康に影響するメカニズムを提示している。

抗生物質とプロバイオティクスを用いて２ヶ月齢のＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスを処理し、ＳＰＦ条件で飼育した。３０匹のマウスを合わせてランダムに治療群に割り当ててケージ効果を最小化する。抗生物質は、０．２ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）、０．１５ｍｇ／ｍＬのシプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、２ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）及び１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ）の混合物である。

まず、抗生物質の混合物をマウスの飲用水に入れてマウスを２週間処理して微生物を消費し、その後、マウスを３群に分け、各郡が１０匹であり、１群を対照群とし、正常に飼育し、その他の２群はプロバイオティクス群であり、それぞれＢＬ－１１又はＢｂ－ＸＸを水に添加し、４週間飼育し続けた。動物施設の規定に従い、３％（ｇ／１００ｍＬ）のスクロースを全部の水に添加して嗜好性を確保した。水溶液は、新鮮に製造され、毎週に２回交換した。四周後、マウスを殺した後、血清分離チューブを用いて、心臓を穿刺して採取された血液サンプルから血清を製造し、マウスＩＧＦ－１標準のＡＢＴＳ ＥＬＩＳＡ開発のキット（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を使用した。

正常な飼料（ＣＫ）、ＢＬ－１１及びＢｂ－ＸＸによって飼育されたマウスの大腿骨の長さは、図４に示され、腿骨の長さは、図３に示される。ＢＬ－１１によって飼育されたマウスの腿骨の長さは、対照群に比べて有意差があり（Ｐ＜０．０５）、Ｂｂ－ＸＸによって飼育されたマウスの腿骨の長さは、対照群に比べて有意差がなかった（Ｐ＜０．０５）。データはいずれも平均値±ＳＤとして示し、差が有意であるか否かをｔで検証した。^＊Ｐ＜０．０５であり、^＊＊Ｐ＜０．０１であり、^＊＊＊Ｐ＜０．００１である。

成長調節活性の分析：無菌マウス及び抗生物質で治療したマウスはいずれも成長が遅くなり、グレリン、成長ホルモン及びＩＧＦレベルが低下し、腸内微生物が障害するため、マウスの成長が制限される。マウスを抗生物質で処理した後、プロバイオティクスを服用させ、マウスの血清ＩＧＦ－１のレベルを検出した。その結果は図５に示すように、抗生物質による処理後にプロバイオティクスを服用したマウスは、血清中のＩＧＦ－１のレベルが増加し、且つＢＬ－１１を服用して血清中のＩＧＦ－１のレベルを明らかに向上させることができ（Ｐ＜０．０１）、その向上効果はＢｂ－ＸＸより高かった。腸内菌叢の多様性：α多様性指数の分析から分かるように、ＢＬ－１１とＢｂ－ＸＸとの間の多様性指数に有意差はなく、ＢＬ－１１はシャノン（Ｓｈａｎｎｏｎ）指数でＢｂ－ＸＸよりやや高いが、有意差を達成することができず（Ｐ＞０．０５）、その結果は図６に示すとおりであり、２群のマウスの腸における２種類のプロバイオティクスに対する分析から分かるように、ＢＬ－１１を用いて腸におけるビフィドバクテリウムとラクトバチルスの比率を明らかに増加させ、結果を図７に示す。

ヒートマップ分析（図８）により、属レベルで、フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクノスピラ（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａ）、ラクノスピラ科＿ＵＣＧ＿００４（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ＿ＵＣＧ＿００４）、サテレラＳｕｔｔｅｒｅｌｌａがＢＬ－１１群において上昇し、これらの菌の上昇は、ＩＧＦ－１１の血清中の増加に関与する可能性がある。

（実施例３）
本実施例は、ＢＬ－１１菌粉末の製造及び食品の生産に用いられることを説明するためのものである。

本願に係るビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、ＭＲＳブロス（ＭＲＳ Ｂｒｏｔｈ）液体培地に嫌気培養される。１級、２級で培養後の発酵液を拡大し、３７℃で２４時間培養した後、４℃、３０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離し、菌体を収集し、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）で洗浄した後、脱脂乳を加えて冷凍乾燥し、－２０℃以下で保存した。

本実施例で製造されたＢＬ－１１菌粉末は、食品、医薬品、健康補助食品又は動物飼料の使用に用いることができる。

前記食品は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳等の普通の食品又は健康補助食品であってもよい。好ましくは、前記食品において、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１がヒトに使用する提案の投与量は、１．０×１０^３ＣＦＵ～１．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日であってよく、より好ましくは、１．０×１０^４ＣＦＵ～１．０×１０^９ＣＦＵ／ｋｇ体重／日である。

（実施例４）
本実施例は、人体の臨床研究において、成長発育を促進する機能特徴を説明するためのものである。

＜被験者と募集＞
６５名の１１ヶ月から１６歳のプラダー・ウィリ（Ｐｒａｄｅｒ－Ｗｉｌｌｉ）症候群患者を公開的に募集して、プロバイオティクス群又はプラセボ群にランダムに割り当て、１２週間のランダム、二重盲検、プラセボ対照試験を行った。

＜選択基準＞
遺伝学的にＰＷＳを患っていることが確認され、４週間以内に何らかのプロバイオティクスを服用しおらず、安定薬物は、少なくとも４週間服用し、試験期間に計画した薬物及び心理的介入措置がなく、糞便サンプルを適時に提供でき、研究及び相談プロセスを参加でき、且つ他の遺伝病、妊娠又は哺乳状況がない。ＩＲＢ要求に応じて、研究案は、被験者の親又は法定後見人のインフォームドコンセントを取得し、ヘルシンキ宣言（Ｄｅｃｌａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｌｓｉｎｋｉ）に基づいて行われる。

＜方法＞
ランダム法とブラインド法試験：ランダム、二重盲検、ラセボ対照の設計を採用し、チームに属さない統計学者が被験者に対してランダムな隠し割り当てを行い、各身元が不明な被験者にランダムなサンプル数を生成させる。北京華元生物技術研究所は、外観が同じであるコードのプロバイオティクスとプラセボを提供し、割り当て隠しを確保して、盲点を維持する。これらの患者は、ランダムに、毎日ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１種のプロバイオティクス（６×１０^１０ＣＦＵ）又はプラセボパケットを受け付けるように分配された。６週及び１２週を治療した場合、２群の体重、身長、ＡＳＱ－３、ＡＢＣ、ＳＲＳ－２及びＣＧＩ－１を比較する。ＣＧＩは、２つの単一測定を含み、以下の内容を評価する：（ａ）１から７までの精神症状評価尺度（ＣＧＩ－Ｓ）と、（ｂ）７分法による開始から終了までの治療前後の症状変化（ＣＧＩ－Ｉ）の評価。

＜材料＞
プロバイオティクス群は、パケット式の粉状のビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１である。各ビフィドバクテリウム・ラクティスのサプリメントは、３×１０^１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）を含み、プラセボは同様に包装されたマルトデキストリンであり、色、味及び風味がビフィドバクテリウム・ラクティスパケットと似ている。被験者は、一袋のビフィドバクテリウム・ラクティス又はプラセボを毎日２回水で経口投与し、１２週間継続した。マルトデキストリンは、サプリメントとして最小の副作用を有し、プラセボとして有害反応も最小である。

＜一次結果の測定＞
１．親が標準秤を用いて体重と身長を測定し、研究者がこれを収集し、ＷＨＯにより提供される加齢を参考として使用し、体重、身長及びＢＭＩをｚスコアに変換した。

２．心理試験
（１）「年齢及び段階アンケート」、第３版（ＡＳＱ－３）。ＡＳＱ－３は、最も広く使用されている子供や青少年に対する発育スクリーニングツールの１つであり、コミュニケーション、粗大運動、微細運動、問題解決、及び個人・社会という５つの領域を有する。被験者の総合点数を５つの領域から算出して、試験効果を評価した。

（２）異常行動リスト（ＡＢＣ）、ＡＢＣは５８項の行動評価スケールであり、怒り、傾眠／社交的退縮、カッティングプレート印象行為、多動／不適合行為及び不適切な言葉の５つのサブスケールの行動問題を評価する。以上の行動問題から被験者の総合点数を算出して、試験効果を評価した。

（３）社会的反応スケール（ＳＲＳ）、ＳＲＳは６５項目を含み、社会行動の重篤性を定量的に評価する。以上の社会行動から被験者の総合点数を算出して、試験効果を評価した。

（４）ギリアム（Ｇｉｌｌｉａｍ）自閉症評価スケール（第３版）（ＧＡＲＳ－３）に採用された４分法（０～３）に基づく制限性と重複性挙動（ＲＲＢ）。以上の行動から被験者の総合点数を算出して、試験効果を評価した。

＜二次結果の測定＞
１．糞便微生物叢
（１）．サンプル処理及び収集
糞便サンプルを保存溶液１ｍＬを含むＤＮＡ／ＲＮＡシールド糞便収集管（Ｚｙｍｏ、Ｃａｔ＃Ｒ１１０１）で収集し、氷袋により実験室まで輸送した後、－８０℃で冷凍した。メーカーの説明に基づいて、ＴＩＡＮｍａｐ糞便ＤＮＡキットを用いてＤＮＡ（ＴＩＡＮＧＥＮ、カタログ番号ＤＰ３２８）を抽出し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を用いてＤＮＡサンプルを鋭意定量した。Ａ２６０／Ａ２８０の比率を測定して、高純度ＤＮＡの収量を確認した。ＤＮＡサンプルを使用までに－２０℃で冷凍した。

（２）１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のアンプリコンシーケンス。
二回のＰＣＲにより、以下のプライマーを用いて１６Ｓ ｒＲＮＡ Ｖ３－Ｖ４ライブラリーを構築した。

３４１Ｆ：５’－ＴＣＧＴＣＧＧＣＡＧＣＧＴＣＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＣＧＧＧＮＢＧＣＡＳＣＡＧ－３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）
８０５Ｒ：５’－ＧＴＣＴＣＧＴＧＧＧＣＴＣＧＧＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＮＶＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣ－３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）

９５℃で２ｍｉｎ、そして９５℃で３０ｓ、５５℃で３０ｓ、及び７２℃で３０ｓの反応過程で２５サイクル行った後、７２℃で最終的に５ｍｉｎ延伸した。ＰＣＲ産物を１ｘＫＡＰＡ ＡＭＰｕｒｅ（ＫＡＰＡ、カタログ番号ＫＫ８００２）で精製した。その後、生成物を第二回のＰＣＲ反応工程（９５℃で２ｍｉｎ、そして９５℃で３０ｓ、５５℃で３０ｓ及び７２℃で３０ｓで８サイクル行った後、最後に７２℃で５ｍｉｎ延伸）を行った。ＰＣＲ産物を１×ＫＡＰＡ ＡＭＰｕｒｅで精製し、Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ＤＮＡキットを用いてリアルタイムＰＣＲにより定量分析を行った。

２．臨床全般印象（ＣＧＩ）は臨床試験において使用するために開発されたものであり、研究用薬物の使用の開始前後に、臨床医による患者全体の機能の見え方を簡便に独立して評価することを目的とする。ＣＧＩは、２つの単一測定を含み、以下の内容を評価する：（ａ）１から７までの精神症状評価尺度（ＣＧＩ－Ｓ）と、（ｂ）類似した７分法で治療開始後の変化（ＣＧＩ－Ｉ）の評価。

３．胃腸症状は、ベースラインに存在する胃腸症状の総数に基づいて評価するものであり、便秘、下痢、腹痛、胃腸バルーン、便血、吐き気、嚥下困難、食欲不振、消化不良及び逆酸を含む。

＜データの分析＞
全てのプライマリーデータはＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００７とＲに記録及び処理される。データ表示は、ＣＯＮＳＯＲＴの提案に従って、ランダムな、二重盲検、臨床プラセボ対照試験の結果を報告するためのものである。有意水準としてα＝０．０５を用いて統計処理を行った。本願は、ウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）ランクとチェックを使用してベースライン上の体重、身長のｚスコア、ＡＳＱ－３、ＡＢＣ、ＳＲＳの総合スコアとサブスコア、各項目の０～６週と０～１２週の変化を探索した。線形混合モデルは、繰り返し測定を分析するためにも用いられる。

本願は、誤検出率（ＦＤＲ）を用いて複数の比較結果を調整した。副結果は、主結果と同様の方法で分析した。また、臨床指標と微生物叢の組成の相関性を調べるために線形回帰を行った。

＜微生物叢のデータ処理及び分析＞
品質管理として、ＱＩＩＭＥ２（ｖ２０１９．１０）を用いてシーケンス番号をフィルタリングする。デフォルトパラメータに対してＤｅｂｌｕｒでノイズ除去し、アンプリコンシーケンスバリアント（ＡＳＶｓ）によりサンプルの存在比表を取得する。ＱＩＩＭＥ２を用いてＡｌｐｈａ多様性を計算した。Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ距離は、微生物叢βの多様性を表すために用いられる。ｓｋｌｅａｒｎに基づく分類器の分類法を用いてＡＳＶを分配し、当該分類器は、Ｇｒｅｅｎｇｅｎｅｓ ｖ１３．８との類似度が９９％であるシーケンスで訓練を行う。クラスカル・ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ）検定により、プラセボ群とプロバイオティクス群の微生物の門、属及びα多様性の相対的な存在比の間に有意差があることを確認した。ベンジャミニ－ホッホベルグ（Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ、ＢＨ）調整による誤検出率（ＦＤＲ）は、多重比較に用いられる。

ＰＩＣＳＲＵＳｔ２は、ＡＳＶの存在比表に基づいて微生物の機能含有量を推定し、そして「京都遺伝子とゲノム百科事典」（ＫＥＧＧ）オーソログ（ＫＯ）、酵素分類番号及び経路存在比表を生成するために用いられる。配列によるノンパラメトリック試験を用いてプロバイオティクスとプラセボ群との比率を差分析し、Ｃａｌｏｕｒで最も有意な差特徴をプロットした。１６ｓ ｒＲＮＡ イルミナ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）アンプリコンシーケンスに由来するすべてのプライマリーデータは、米国国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）シーケンス読み取りプロファイル（ＳＲＡ、ＰＲＪＮＡ６４３２９７）に保存されている。

＜結果＞
１．ＰＷＳ被験者の人口統計学的特徴
表４は、６５人の参加者の人口統計学的特徴及び合併症の胃腸（ＧＩ）の症状をまとめたものであり、群間の差は観察できなかった（Ｐ＞０．０５）。４７．５％の被験者は、研究群で１種又は複数種の胃腸症状を見せ、プロバイオティクス群の胃腸症状の割合はプラセボ群より３７．４％低下したが、差は有意に達しなかった（Ｐ＞０．０５）。

重大な不具合事項は見られなかった。すべての観察された不具合事象と廃学の主な原因は、２群の間に有意差がないからである（Ｐ＞０．０５）。

２．プロバイオティクスの体重、身長、心理的測定及びＣＧＩ－Ｉへの影響
治療過程全体において、人体測定データは収集及び分析される。プロバイオティクス群は、６週から１２週までの身長が、プラセボ群よりも格段に高い（プロバイオティクス介入群はプラセボ群より明らかに高く、平均で２．５８ｃｍ高い、Ｐ＜０．０５、図９）。プロバイオティクス群はプラセボ群よりも体重が経時的に低下しているが、２群の差は有意ではなかった（図１０）。心理的測定（ＡＳＱ－３、ＡＢＣ、ＳＲＳ及びＲＲＢを含む）のスコアは、線形混合効果モデル分析により観察されたが、プロバイオティクス群はプラセボ群より改善傾向にあるが、差が有意ではない（Ｐ＞０．０５）。ＣＧＩ－１スケールを用いて治療過程における症状の総合的な改善を測定し、プラセボ群と比較して、プロバイオティクス群の症状全体の改善がより有意である（図１１、Ｐ＜０．０５）。

３．プロバイオティクス介入における微生物叢の組成及び機能の変化
シーケンス後、介入過程において、２群中のＰＷＳ個体の腸内微生物叢の組成の差が豊富である。特定細菌類叢全体は、相対的な存在比率が、図１２に示す通りである。６週間後、プラセボ群と比較して、プロバイオティクス群におけるα多様性がやや増加し、差が有意ではなかった。多変量分散分析（ＰＥＲＭＡＮＯＶＡ）分析のβ多様性表示を配列することにより、プロバイオティクスの治療による２群の分離を実現することができる（Ｆ統計＝２．２５２６、Ｒ^２＝０．０３５６１３、Ｐ＜０．０５、ＮＭＤＳ圧力＝０．１９０４８、図１３）。

介入過程全体における臨床的な意味を有する細菌の存在比の変化の可能性を表すために、本願は、図１４に示すように、選択された細菌属及び科の倍数の変化を幾つか紹介した。プロバイオティクス群は、６週目及び１２週目において、ベースラインに対してラクノスピラ科ＮＤ３００７（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ ＮＤ３００７）、ルミノコッカス属ＵＣＧ－００３（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ＵＣＧ－００３）、ストレプトコッカス ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）、Ｃｏｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ（コマモナス属）、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ（アリスティペス）及びＲｏｔｈｉａ（ロシア）の相対的な存在比がベースラインよりも低下した。プロバイオティクス群において、ビフィドバクテリウム、ラクトバチルス及びプレボテーラ９は、１２週間において、ベースラインと比較して有意に増加する（図１５）。

機能遺伝子の予測分析から明らかなように、１２週間の治療期間の後、プロバイオティクス群におけるいくつかの遺伝子は異なる存在比を有する。生物合成したユビキノンタンパク質（ｕｂｉＢ、ｋ０３６８８）をコードし、飽和酵素（ＥＣ：１．３．９９．２９）を並列に除去し、飽和酵素（リコピン形成）（ＥＣ：１．３．９９．３１）を並列に除去し、オールトランス－ζ－カロテン不飽和化酵素の遺伝子（ＥＣ：１．３．９９．２６）をアップレギュレートし、ジメチルアルギナーゼ（ｋ０１４８２）及び酸性ホスファターゼ（ｐｈｏＮ、ｋ０９４７４、ＥＣ：３．１．３．２）をコードする遺伝子をダウンレギュレートした（図１６）。これらの知見は、多重比較的有意性の誤検出基準に合致しなかった。図１７、図１８に示す予測されたＫＥＧＧ経路と予測されたＫＯの分析結果は、プロバイオティクスとプラセボ群の遺伝子発現をさらに比較した。
４．腸内菌叢の存在比と臨床指標との相関性

臨床指標は、細菌属の存在比に関与する。プロバイオティクス群において二つの相関性が発見され、プラセボ群において相関性が認められなかった。６週目において、プロバイオティクス群のＲＲＢスコアとＲｏｔｈｉａとの間には正の相関がある（Ｒ＝０．９７、ｐ＜０．００５）。

本願の６５名のＰＷＳ患者は、１２週期間のランダム、二重盲検及びプラセボ対照実験において、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１被験者の身長が明らかに増加し、体重がやや変化した。本願は、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１をＰＷＳ患者の早期介入として新しい証拠を提供する。また、本願は、治療後のプロバイオティクス群とプラセボ群との間の腸内微生物叢のβ多様性に有意差が存在することを発見し、食をしっかりと制御した場合、ベースラインβ多様性が長期の体重軽減に直接相関することを発見した。従って、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の補充は、腸内菌叢の構成を改善し、肥満を防止する作用、又は飲食による体重減少を促進することができる。ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の補充は、子供や青少年の成長発育状況を改善することもできる。

また、本願は、治療後のプロバイオティクス群とプラセボ群との間の全体症状の改善が明らかで、心理的測定の指標が改善されていることを発見したので、ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１を補充することは、子供や青少年の知的発育、行為又は情緒状態を改善する作用を有する可能性がある。

（実施例５）
本実施例は、ＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末の製造方法を説明するためのものである。
冷凍保存管内の液体が全部融解するまでＢＬ－１１保存菌液を３７℃の水浴鍋内で菌種の蘇生を行った。ＭＲＳ培地上で区画し、３７℃で１２～２４時間嫌気培養し、液体培地入り嫌気培養管に接種し、密封し、３７℃で６～１２時間嫌気培養し、菌液ＯＤ６００値の増殖を停止したことを監視して、発酵を停止した。菌種の発酵生産を行い、４０℃恒温で撹拌して６～１２時間培養し、菌液の定ｐＨが５．４±０．５であることを維持し、菌液ＯＤ６００値の増殖を停止したことを監視するまで、直ちに発酵を停止した。遠心で菌泥を収集し、菌泥：凍結乾燥保護剤＝１：１～１０の体積比で凍結乾燥保護剤を添加し、撹拌し、均一に混合した後、凍結乾燥機内に入れて菌粉末の凍結乾燥を行った。凍結乾燥粉末を収集し、質量要求で粉砕して包装した。

（実施例６）
本実施例は、ＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末を食品の生産に使用することを説明説明するためのものである。

本願に係るビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１で製造された凍結乾燥菌粉末は、ヨーグルト、発酵乳、チーズ等の通常食品又は健康補助食品に用いることができる。好ましくは、前記食品において、ヨーグルトの製造におけるビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の添加量は、１．０×１０^６ＣＦＵ～１．０×１０^８ＣＦＵ／ｋｇであり、より好ましくは、１．２×１０^７ＣＦＵ～１．５×１０^８ＣＦＵ／ｋｇである。生産方式は、直接投与又は後添加である。直接投与の場合、発酵菌種として、原料乳の殺菌終了後、適温に低下させる時に一定の割合で添加し、その後４０～４３℃で１０～４８時間保温して発酵させる。攪拌・配合した後、完成品としてコップや袋に分注する。後添加の方式で添加する場合、ヨーグルトの発酵が終了した後、一定の割合で添加した後に均一に撹拌し、配合終了後に完成品として分注する。

（実施例７）
本実施例は、ＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末を栄養サプリメント、プロバイオティクスの生産に使用することを説明するためのものである。

本願に係るビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１により製造された凍結乾燥菌粉末は、プロバイオティクスの生産に用いることができる。プロバイオティクスの凍結乾燥粉は、０．５～３０部のＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末、５～２０部の発酵ラクトバチルス、ラクトバチルス・スイス、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・プランタラム、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ロンガム等の菌種、２０～７０部のガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、イヌリン等のプレバイオティクス、５～１０部のＧＡＢＡ、トリプトファン、リコピン、β－カロテン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、コエンザイムＱ１０、タウリン、ペクチン、β－グルカン、フコース、カラギーナン、グアーガム、食物繊維等の栄養物質、０．１～５部の抗酸化剤／抗炎症物質、例えばトコフェロール、カロテノイド、アスコルビン酸／ビタミンＣ、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、ポリフェノール、グルタチオン及びスーパーオキシドジスムターゼ等をさらに含む。プロバイオティクスの生菌数の添加総量は、ＢＬ－１１の添加量が２．０×１０^６ＣＦＵ～２．０×１０^１０ＣＦＵ／ｇであり、より好ましくは、３×１０^７ＣＦＵ～３×１０^１０ＣＦＵ／ｇである。その他の菌種の単一な菌の添加量は、１×１０^６ＣＦＵ～３×１０^９ＣＦＵ／ｇである。製造のプロセスは、一定の割合の原料の秤量、混合、分注及び品質検査等を含む。

（実施例８）
本実施例は、ＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末が腸透過性及び行為作用を改善することを説明するためのものである。

腸内微生物と腸－脳軸（ＧＢＡ）は、ストレス反応の制御において双方向通信を果たす。微生物は、異なるメカニズムで腸－脳軸とコミュニケーションを行う。粘膜細胞と直接相互作用して、免疫細胞及び末梢神経の接触によって脳の発育と行為に影響を与える。脳のストレスは、ＧＢＡによって腸内微生物に影響を与えることもできる。腸内微生物叢は、胃腸機能の障害や失調を引き起こす原因である。ストレス反応は、微生物の副産物と前駆体の合成にも影響を与える。これらの副産物と前駆体は、血液及び後頭部を介して脳に入り、粘膜免疫細胞を介してサイトカインを放出し、腸内分泌細胞を介して腸管ホルモン、例えばセロトニン（５－ｈｙｄｒｏｘｙ ｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ、５－ＨＴ）を放出し、又は、腸管神経系を含む神経経路を介して放出する。

介入用プロバイオティクス製剤の製造：プロバイオティクス製剤はＢＬ－１１の凍結乾燥粉末、β－カロテン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、コエンザイムＱ１０及びマルトデキストリンを含み、対照群はマルトデキストリンであり、実験マウスの胃内投与量は１００億ＣＦＵ／匹／日である。

６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス２０匹をケージ当たり５匹のマウスに割り当てて飼育し、自由に食事及び飲水させた。食物及び水の摂取量は毎週２回記録した。マウスを対照群とプロバイオティクス群の２群に割り当て、各群を１０匹にした。実験マウスは、環境を１週間に適応した後、モデル群、プロバイオティクス介入群にランダムに割り当てた。実験マウスの成長環境の条件は、環境温度（２３±２）℃、相対湿度（５０±１０）％、光照射モード（１２ｈ暗／１２ｈ光照射）である。

物理的刺激による慢性ストレスモデルを採用し、具体的な刺激方式としては、（１）絶食、禁水２４ｈと、（２）持続的な光照射２４時間と、（３）尾尖１ｃｍの部位を鉄クランプで挟み、３ｍｉｎ／回持続することと、（４）拘束ストレス、円形スリーブで行動を拘束し、２ｈ／日であることを含む。毎日１～２種類の異なるストレス刺激を採用し、毎回の刺激時間が一定ではなく、モデリング時間を４週間継続した。

６週目から、ストレス刺激を停止し、糖水嗜好の実験、ステップダウンテスト及びオープンフィールド実験を開き、行動実験終了後、各郡のマウスに対して物理化学的指標の測定を行った。データの分析はＳＰＳＳ統計ソフトで処理して得られたデータを採用して平均値±標準偏差で表し、独立サンプルチェックを用いて群間の比較を行い、Ｐ＜０．０５は統計学的意味を有すると考えられる。

１）糖水嗜好の実験
実験開始前に、ケージラックに２つの同じ水瓶を同時に置き、そのうちの１つの瓶に純水を入れ、その他の瓶に１％濃度のスクロース水を入れた。まず、実験マウスは、糖水に２４ｈ適応した。実験マウスの飲み習慣による阻害を回避するために、１ｈごとに水瓶の位置を調整した。適応終了後、実験マウスを２４時間絶食、断水した。実験開始前、１瓶の純水と１瓶１％濃度のスクロース水を飼育ケージに置き、３時間ごとに糖水と純水の消費量を一回記録した。

糖水嗜好度＝糖水消費量／（糖水消費量＋純水消費量）×１００％。

実験結果から分かるように、対照群は糖水への嗜好度を低下させ（４９．６３％±１５．７９）、プロバイオティクスを補充した後、糖水への嗜好度を向上させるため（６８．７９％±１２．３４）、プロバイオティクスがストレス刺激による快感欠如を改善できることを示す。

２）ステップダウンテスト
プラットフォーム実験箱（ＤＴＴ－２型マウス用プラットフォーム、中国医学科学院薬物研究所）。プラットフォーム箱は長さが約１２０ｃｍ、幅が１２ｃｍ、高さが３０ｃｍであり、有機ガラス材質からなる。それは、合計で６つの部屋を有し、各部屋は、長さが１２ｃｍ、幅が１２ｃｍ、高さが３０ｃｍである。実験箱は６匹のマウスを同時に実験した。実験箱の底面に銅グリッドが敷設され、銅グリッドは電線を介して電源に接続され、電流の電圧は３６Ｖに設定される。実験箱内の銅グリッド上の箱内の隅に絶縁台（長径が５．７ｃｍ、短径が４．５ｃｍ、高さが４．８ｃｍの五角形木片）を置き、動物が電撃を忌避する安全領域とした。試験装置は、コンピュータの自動記録システムに接続されている。実験時、マウスをプラットフォーム実験箱内に入れ、環境を５ｍｉｎ適応させ、その後、マウスをプラットフォームに静かに置き、銅グリッドを通電し、マウスがプラットフォームからジャンプして四肢が銅グリッドに接触する時に電気ショックを受ける。正常な回避反応は、プラットフォームにジャンプして安全領域に戻り、電気ショックを避けることである。このように５ｍｉｎを勉強し、この５ｍｉｎ内の電気ショックの回数（エラー回数）を記録し、勉強成績とした。２４ｈ後、記憶能力試験を行い、マウスをプラットフォームに置き、マウスがプラットフォームに留まってからジャンプして１回目電気ショックを受けた時間である潜伏期と、５ｍｉｎ以内のエラー回数（マウス四肢が同時に銅グリッドに接触した回数）を記録し、記憶機能の評価指標とした。

正常対照群と比較すると、プロバイオティクス群は、ステップダウンテストにおける潜伏期が著しく短縮され（Ｐ＜０．０５）、ステップダウンテストのエラー回数に有意差はないが、プロバイオティクス群は、エラー回数の減少傾向を示す。プロバイオティクス群のマウスは、一試行回避反応記憶機能の障害を改善することができる（表５参照）。

３）オープンフィールド実験
オープンフィールド分析システムとは、研究した実験動物の神経精神的変化、広い環境に入った後の様々な行動を観察するものである。例えば、動物は、新しい開放環境への恐怖によって主に周辺領域で活動し、中央領域で活動が少ないが、動物のこだわり特性が中央領域で活動する動機付けを生じさせ、それによって生じる不安心理も観察できるものである。動物の自律活動及び不安レベルを評価する。

実験前、６０ｍｉｎでマウスをオープンフィールドの実験室に移し、環境を早めに適応した。実験の際、マウスをケージから取り出して、行動学実験ステーションに置いたオープンフィールドの実験装置（箱の長さ×横×高さ：１００ｃｍ×１００ｃｍ×４０ｃｍ、内面及び底面がいずれも青色、中央領域の真上にカメラを配置）に置いた。実験開始後、マウスを中央領域の固定位置に置き、毎回頭部が固定されている側に置き、迅速にシェードカーテンを引っ張った。操作ソフトウェアにマウスの番号、日付、状態を記録した後、記録システムを実行し、九宮格モードを選択し、中央領域の割合は０．５であり、オープンフィールドの設備の上方のカメラ及びそれに接続されたモニターによって測定した。毎匹５ｍｉｎ測定し、マウスの活動状況を記録した。測定指標は、運動時間、総距離、中央領域滞在時間分率（中央領域滞在時間ＬＰＭＭ＝ｓ）、中央領域水平運動百分率（中央領域水平運動距離／水平運動距離）、四辺領域水平運動百分率（四辺領域水平運動距離／水平運動距離）及び四隅領域水平運動百分率（四隅領域水平運動／水平運動距離）を含む。直立した回数及び理毛の回数を記録し、続いて７５％アルコールで箱内環境を洗浄し、アルコールの完全に揮発した後、次の１匹を試験した。結果を表６に示す。

対照群に比べて、プロバイオティクス群のマウスの中央領域進入回数、中央領域滞在時間、は対照群より有意に高い（Ｐ＜０．０５）。直立回数及び理毛回数が有意に増加し（Ｐ＜０．０５）、中央領域進入回数の差は大きくない。残りのオープンフィールド的な結果は、明らかな差は見られなかった。

４）腸透過性の検出
体内の腸透過性を評価するために、血清中のＤ－乳酸、ＬＰＳ含有量を測定して腸透過性を評価した。

Ｄ－乳酸は、細菌が発酵した代謝産物であり、腸管の複数の細菌によって産生されることができる。それは、食物から摂取されても、正常な場合に血液が吸収されることが少ない。また、哺乳動物は、それを急速に分解する酵素システムを備えない。従って、腸粘膜の透過性が増加すると、腸管中の細菌によって産生された大量のＤ－乳酸は、損傷した粘膜によって血液中に取り込まれ、血中のＤ－乳酸のレベルを上昇させる。

乳酸はＤ型とＬ型を有し、正常な人体にはＬ－乳酸のみであり、細菌等の微生物によってＤ乳酸を産生することができる。血中のＤ－乳酸のレベルを監視することにより、腸粘膜の損傷の程度及び透過性の変化をタイムリーに反映することができる。腸管感染、エンドトキシン血症、全身性炎症反応、繰り返す発熱、嘔吐等の補助評価に用いることができる。

リポ多糖（ＬＰＳ）は細菌エンドトキシンとも呼ばれ、グラム陰性菌の細胞壁上の成分であり、ＬＰＳは動物にとって一つの毒性物質である。ＬＰＳの構造は、糖脂質ドメイン－脂質Ａ、糖残基短鎖－コアオリゴ糖、高変化多糖ドメイン－Ｏ抗原の３つの部分に分けることができる。ＬＰＳの構造は、ＴＬＲ４に対するアゴニスト／アンタゴニスト作用を決定する。体内において、ＬＰＳはＴＬＲ４／ＭＤ－２受容体の複合体と結合し、Ｍｙｄ８８依存性又はＴＲＩＦ依存性経路によって異なるシグナル経路を活性化する。異なる部位の腸管上皮細胞のＴＬＲの発現量が異なり、ＬＰＳによる炎症反応を防止し、病原菌に対抗することができる。

細菌の移動は、腸管活性細菌が腸管から上皮粘膜を通って生体に入ることである。細菌は、腸間膜リンパ節を介してリンパ系に入り、全身を循環することができる。細菌は血液循環に入り、菌血症を引き起こし、組織中に位置することもできる。細菌の移動は、小腸における細菌の過剰成長、腸管損傷、及びショックを引き起こす可能性がある。腸透過性をもたらすいかなるストレス反応も、心理的及び生理学的作用を含み、潜在的に細菌の移動を引き起こす可能性がある。

ＬＰＳは、ＩＢＤ及び小腸結腸炎等の腸管疾患、さらにパーキンソン及びアルツハイマー病等様々な疾患の発症に関与する。ＬＰＳは血液に入るだけでなく、脳内に入って一生留まることができ、アルツハイマー病を引き起こす可能性がある。

血液中のＬＰＳレベルは、腸透過性を反映することができる。正常な腸管障壁はＬＰＳの進入を許容せず、血液中の高いレベルのＬＰＳは腸管細菌又はＬＰＳが血液に移動することを示し、腸透過性の増加を意味し、リーキーガット症状が出現する確率が増加する。血液中のＬＰＳの含有量程度は、炎症反応及びストレス状態を示すこともできる。過剰なＬＰＳは、人体の免疫系異常を引き起こして、慢性又は急性炎症反応を引き起こし、発熱、痛み等の急性炎症等を呈することができる。腸管感染、エンドトキシン血症、全身性炎症反応、繰り返す発熱、嘔吐、精神疾患、ストレス反応等の補助評価に用いることができる。

実験終了後、尾の末梢静脈から血液を採取した。血液３０００ｇを１５分間遠心分離した。腸管バリア機能分析システム（ＪＹ－ＤＬＴ、北京中生金域診断技術有限公司）を用いて、取扱説明書に従って、血清中のＤ－乳酸、ＬＰＳ含有量を検出した。

結果から分かるように、プロバイオティクス群のＬＰＳ、Ｄ－乳酸レベルは、対照群に比べて、明らかに低下した（Ｐ＜０．０５）。ストレス刺激により腸透過性が増加され、プロバイオティクスが腸透過性を低下させ、エンドトキシン血症、全身性炎症反応等のリスクを減少させることができることを表明した。

（実施例９）
本実施例は、ＢＬ－１１凍結乾燥菌粉末の腸内微生物の組成への影響を説明するためのものである。

上記行動実験終了後、収集した盲腸の内容物は－８０℃で保存された。２群のマウスの糞便を収集し、ＴＩＡＮｍａｐ糞便ＤＮＡキット（ＴＩＡＮＧＥＮ、カタログ番号ＤＰ３２８）を用いて糞便菌群のＤＮＡを抽出した。抽出されたＤＮＡは、Ｑｕｂｉｔ計を用いて定量的に検出される。１％アガロースゲル電気泳動（電圧１００Ｖ、４０ｍｉｎ）を用いて検出した。ＵＶＩゲルイメージングシステムは、写真を撮影して記録した。ＤＮＡ電気泳動には、非特異的バンド、スメアが発生しておらず、ＤＮＡ断片の純度が良好であり、明らかな分解がなかったことを示す。適量のサンプルを遠心管に置き、無菌水を用いてサンプルを１ｎｇ／μＬに希釈した。ＤＮＡは、－２０℃の冷蔵庫に貯蔵して使用された。

細菌１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の増幅：希釈されたゲノムＤＮＡを鋳型として、シーケンス領域の選択に応じて、バーコード（Ｂａｒｃｏｄｅ）付の特異的プライマーを用いて、細菌のユニバーサルプライマーである３４１Ｆ（ＣＣＴＡＹＧＧＧＲＢＧＣＡＳＣＡＧ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３）及び８０６Ｒ（ＧＧＡＣＴＡＣＮＮＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴ ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４）を用いて、細菌１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＶ３－Ｖ４領域を増幅した。１００ｎｇの抽出されたＤＮＡを５６℃でＰＣＲを行って鎖再生性に用いられ、まず９４℃で４分間変性した後、９４℃で３０秒間下げ、５６℃で３０秒間下げ、７２℃で１分間下げて３０サイクル行った。

アンプリコン遺伝子シーケンス：イルミナ社ＴｒｕＳｅｑ ＤＮＡ ＰＣＲ－Ｆｒｅｅ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔのライブラリーキットを用いてライブラリーの構築を行い、構築したライブラリーは、Ｑｕｂｉｔ定量とライブラリー検出を経て合格した後、イルミナ ＨｉＳｅｑ２５００ ＰＥ２５０シーケンスプラットフォームを用いて菌叢のシーケンスを行う。

シーケンスデータの処理及び分析：菌叢のシーケンスのプライマリーデータをＱＩＩＭＥ（２０１９．４）に導入し、ＤＡＤＡ２でノイズ低減して代表的なアンプリコンシーケンスバリアント（ＡＳＶｓ）を取得し、これをシステム発育ツリーに構築した。品質管理された後、フィルタリングされたＡＳＶｓをナイーブベイズ分類器（Ｎａｉｖｅ ｂａｙｅｓ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ、ＮＢＣ）法とＧｒｅｅｎｇｅｎｅｓ（Ｖ＿１３．５）データベースにおける遺伝子シーケンスと比較して種の注釈を行う。Ａｌｐｈａ及びＢｅｔａ多様性分析において、再サンプリング深さは十分なシーケンスを保証するためにサンプルごとに１００００個のシーケンスである。集計結果は、種類数が多すぎて結果への影響を低減するために、誤検出率（ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ、ＦＤＲ）を算出して補正した。

結果を図２０～２３及び表７に示す。結果から分かるように、属レベルにおいて、対照群とプロバイオティクスの腸内菌叢に有意差があることを示している。対照群のビフィドバクテリウム属の含有量は、プロバイオティクス群よりも明らかに低い。また、プロバイオティクス群のａｌｐｈａ多様性指数も対照群よりも高く、指数差は有意ではない（シャノン指数ｐ＝０．９１１８（マン－ホィットニー、統計学（Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ ｓｔａｔｉｓｔｉｃ））；シャノン指数Ｐ＝０．３５２６８（マン－ホィットニー、統計学）。β多様性分析において、対照群とプロバイオティクス群の腸内菌叢全体の構成に差があり、ＰＣｏＡ分析結果において、２群が明らかに区別できる（Ｆ－値＝２．４２６８、Ｒ－スクエア＝０．１１８８、ｐ＝０．００９（ＰＥＲＭＡＮＯＶＡ））。

属レベルでは、具体的な差異菌が多く、そのうち、Ｃｏｐｒｏｂａｃｉｌｌｕｓはプロバイオティクスを使用した後に明らかに多くなる（ＦＤＲ＜０．００１）。

（実施例１０）
本実施例は、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）を患っている３歳６か月の子供を、ＢＬ－１１菌からなるプロバイオティクスが介入した結果を説明するためのものである。経口で凍結乾燥粉末を服用し、毎日２回、毎回５００億ＣＦＵ、服用周期が９０日である。服用後、当該子供の排便習慣が変化し、排便回数が３～５日に１回から１～２日に１回に変更された。親からの子供の語彙表現能力のフィードバックによると、社会化とアイコンタクト頻度が上昇し、発話された語彙の量が３～５個増加した。自体の体感を自発的にフィードバックする頻度が増加し、要求を自発的に提出する回数も増加した。反復性動作は、介入した前より少ない。親は、服用を継続することを選択し、更なる改善状況を観察及び記録し続けた。

（実施例１１）
本実施例は、ＢＬ－１１菌からなるプロバイオティクスによる注意力の注意欠如・多動症（ＡＤＨＤ）の改善を説明するためのものである。

症例は、河北省子供病院からの人であり、医師によって米国精神障害の診断・統計マニュアルにおけるＡＤＨＤ基準に従って診断され、年齢が６．５歳であり、多動衝突型であり、統合失調症、情動障害、てんかん及び他の器質的疾患は排除された。また、慢性便秘及び腹部不快感がある。

治療手段は、経口でプロバイオティクスの凍結乾燥粉末を服用して治療することを使用し、用量が、毎日２回、毎回６００億ＣＦＵである。それぞれ朝食、夕食後に温水で服用した。１２週間連続して治療した。コナーズ（Ｃｏｎｎｅｒｓ）親用スケールを用いて評価することは、行動、胴体、不安、学習、多動等の指標を含む。結果から分かるように、患児の衝動、不安及び多動のスコアが低下し、排便機能が改善され、３～４日に１回から毎日１～２回になり、時には２～３日に１回排便し、糞便量が増加するとともに、腹の膨れ及び痛みが徐々に消失した。全体の精神的改善は明らかである。親はこの結果に満足していた。

Claims (20)

1. ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１であるビフィドバクテリウム・ラクティスであって、
   前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、受託番号がＣＧＭＣＣ Ｎｏ．２０８４７である、
   ことを特徴とするビフィドバクテリウム・ラクティス。
2. ビフィドバクテリウム・ラクティス製剤であって、
   前記製剤は、固形菌粉末又は液状飲料であり、
   前記ビフィドバクテリウム・ラクティスは、請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスである、
   ビフィドバクテリウム・ラクティス製剤。
3. 腸内代謝異常を改善しかつ腸内微生物叢の組成の正常化を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
4. 子供や青少年の抗肥満の食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
5. 子供や青少年の成長発育を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
6. 子供や青少年の身長の増加を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
7. 子供や青少年の知的発展を促進する食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
8. 前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、１～２５重量部であり、好ましくは、１～１５重量部であり、
   前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体、又は前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられ、
   前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである、
   請求項３乃至７のいずれか一項に記載の使用。
9. 前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である、
   請求項３乃至７のいずれか一項に記載の使用。
10. 人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^９ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である、
    請求項３乃至７のいずれか一項に記載の使用。
11. 精神障害予防の食品組成物又は医薬組成物の製造における請求項１に記載のビフィドバクテリウム・ラクティスの使用。
12. 前記精神障害は、不安、うつ、注意欠如・多動症、自閉症、孤立症、統合失調症、肝性脳症、神経性やせ症、トゥレット症候群、アスペルガー症候群を含む、
    請求項１１に記載の使用。
13. 前記食品組成物又は医薬組成物は、脱脂粉乳、トレハロース、フラクトオリゴ糖、ラクトース、グルコース、スクロース、Ｌ－アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ－リンゴ酸、Ｌ－乳酸のうちの１種又は複数種の組み合わせをさらに含む、
    請求項１１に記載の使用。
14. 前記食品組成物又は医薬組成物は、調味料、甘味剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤、潤滑剤、酸性中和剤、分散剤、緩衝液又は緩衝剤、脱苦味剤、ｐＨ安定剤、防腐剤、脱糖剤、及び／又は着色剤をさらに含み、選択的に、ラクチトール、ソルビトール、マルチトール、アスパルテーム、ステビア、ラカンカ、スクラロース、キシリトール、バニラ、チョコレート、果実香料、人工エッセンス、又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む、
    請求項１１に記載の使用。
15. 前記食品組成物又は医薬組成物は、ビタミン、ミネラル及び／又はサプリメント若しくはプレバイオティクス栄養物質、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プレバイオティクスは、イヌリン、アーティチョーク抽出物、チコリー根抽出物、菊芋根抽出物、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、スタキオース、マンノースオリゴ糖、アラビノースオリゴ糖、難消化性デキストリン、レジスタントスターチ又はこれらの混合物又は組み合わせを含む、
    請求項１１に記載の使用。
16. 前記食品組成物又は医薬組成物は、ユビキノン（ＣｏＱ１０）、リコピン、β－カロテン、トリプトファン、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２又はこれらの混合物又は組み合わせをさらに含む、
    請求項１１に記載の使用。
17. 前記食品組成物又は医薬組成物は、プロバイオティクスをさらに含み、任意選択的に、前記プロバイオティクスは、培養された又は糞便から抽出された微生物又は細菌又は細菌成分を含み、任意選択的に、前記細菌又は細菌成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、大腸菌（Ｅ ｃｏｌｉ）、プレボテーラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、フィーカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブラウティア（Ｂｌａｕｔｉａ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）及び同等物、又はそれらの混合物又は組合せを含む、
    請求項１１に記載の使用。
18. 前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の含有量は、食品組成物又は医薬組成物１００重量部に対して、０．５～２０重量部であり、好ましくは、１～１５重量部であり、
    前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１は、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌体、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の不活化菌体、又は前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の抽出物の形態で用いられ、
    前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の生菌数は、１．０×１０^６～１．５×１０^１２ＣＦＵ／ｇであり、好ましくは、３．０×１０^１０～５．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇである、
    請求項１１乃至１７のいずれか一項に記載の使用。
19. 前記食品組成物は、発酵乳、チーズ、乳性飲料、固体飲料、粉乳のうちの１種又は複数種である、
    請求項１１乃至１７のいずれか一項に記載の使用。
20. 人体の体重を基準として、前記ビフィドバクテリウム・ラクティスＢＬ－１１の服用量は、２．０×１０^９ＣＦＵ～１．５×１０^１１ＣＦＵ／ｋｇ／日であり、好ましくは、３．０×１０^４ＣＦＵ～８．０×１０^１０ＣＦＵ／ｋｇ／日である、
    請求項１１乃至１７のいずれか一項に記載の使用。