CN115505543B - 一株乳双歧杆菌br001及其发酵方法与改善过敏的应用 - Google Patents

一株乳双歧杆菌br001及其发酵方法与改善过敏的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株乳双歧杆菌BR001及其发酵方法与改善过敏的应用，属于微生物的技术领域。乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)BR001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.23665，保藏日期为2021年10月25日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明还提供了一种乳双歧杆菌BR001在制备改善过敏的产品中的应用。本发明提供的乳双歧杆菌BR001的生产成本大大降低，更利于在其他领域的推广。本发明的乳双歧杆菌BR001的发酵批次差异减小，提高了菌株活力一致性，增加了产品质量的稳定性。本发明的乳双歧杆菌BR001可用于缓解过敏症状。

Description

一株乳双歧杆菌BR001及其发酵方法与改善过敏的应用
技术领域
本发明涉及微生物的技术领域，具体涉及一株乳双歧杆菌BR001及其发酵方法与改善过敏的应用。
背景技术
过敏性疾病主要指的是人体在接触致敏物质后，产生大量lgE免疫因子，从而引起组织或器官功能障碍。过敏性疾病因发病率高而备受关注，在过去几十年中发病率显著上升，给患者的生活质量以及社会经济带来巨大的压力，成为全球关注的公众卫生问题。目前，世界卫生组织已把过敏性疾病列为21世纪需要重点研究和防治的三大疾病之一。随着对过敏性疾病的研究和关注度的提高，人们越来越了解过敏性疾病的病因、发病机制、自然发展过程，并仍在不断寻求预防和治疗过敏性疾病的有效策略。
机体所处环境以及自身营养发生定性或定量变化时，就会导致过敏性疾病的发生。而肠道菌群能够参与到机体免疫应答机制当中，因此可在一定程度上防治过敏性疾病。因此针对过敏性疾病的防治不可依靠单一的传统治疗，还需要通过补充益生菌改善过敏体质，从根源上降低过敏性疾病的发病率。
在我们人体内肠道中存在着大量的微生物菌群，而且肠道微生物菌群跟人体健康之间存在十分密切的关系，尤其是一些有益菌群，对于人体的健康是有着很大的促进作用。如果肠道的菌群平衡状态受到了破坏，比如吃了抗生素或者是关于肿瘤治疗的放化疗，或者是在情绪心理比较压抑的情况下，或者是免疫力失调的情况下就会导致肠道菌群的失调，进一步的影响机体的健康。
乳双歧杆菌是一种肠道益生菌，有促进消化、维持肠道菌群平衡的作用。乳双歧杆菌通过产生乙酸、乳酸等短链脂肪酸来抑制肠道腐败菌的生长和有毒代谢产物的形成，刺激肠蠕动，从而减少水分的过度吸收而缓解便秘症状。乳双歧杆菌细胞能够吸附食物中的致癌和致突变物质，从而保护机体细胞免受这些致癌物质的损害。乳双歧杆菌通过抑制肠道许多腐败菌生长，从而减少一些肠源性致癌物的产生。此外，有研究还发现乳双歧杆菌具有激活机体巨噬细胞的吞噬活性，而有助于抑制肿瘤细胞；乳双歧杆菌还可通过诱导肿瘤细胞的凋亡而达到抑制肿瘤生长的作用。乳双歧杆菌可以抑制产生内毒素的有害菌数量，从而对肝脏患者起到良好的治疗作用。中国人中有相当一部分缺乏乳糖酶，不能分解牛奶中的乳糖，这些人在饮用牛奶后常常会出现胃肠道紊乱，导致胃肠痉挛、胀气或腹泻，即为乳糖不耐症。通过利用乳双歧杆菌对牛乳进行发酵而制备成发酵酸乳，可以有效缓解乳糖不耐症。
鉴于乳双歧杆菌在人体内强大的有益功能，其应用开发受到人们越来越多的重视。但是，目前其市场售价较高，限制了在人们日常生活中的普遍应用。
在生物发酵领域，工业化生产成本高，产品产率低，严重制约着产品更广阔的应用。乳双歧杆菌在工业化生产中，生产成本高、单位产量低、活菌稳定性差等问题影响了其在人们日常生活中的使用。
发明内容
本发明的目的在于解决目前乳双歧杆菌生产成本高、活菌稳定性差的问题，从而降低乳双歧杆菌生产成本，使乳双歧杆菌更广阔的应用到人们的日常生活中，为人类造福。
本发明提供了一株乳双歧杆菌BR001及其发酵方法与改善过敏的应用。
为了实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案进行实现：
第一方面，本发明提供一株乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BR001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.23665，保藏日期为2021年10月25日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
第二方面，本发明提供了一种上述乳双歧杆菌BR001的高密度发酵培养的方法，其具体步骤如下：
(1)菌种活化
将液氮罐中保存的乳双歧杆菌BR001甘油管取出，室温自然溶解；在无菌条件下，取菌种于乳双歧杆菌活化培养基内，于37℃厌氧恒温培养箱中培养12-36h；取深层活化菌种传入下一代培养基中深层培养，如此反复活化传至第2-5代；
(2)种子培养
将步骤(1)活化的乳双歧杆菌BR001按照1％-5％的接种量接种至已灭菌的液体MRS培养基中，于37℃静置厌氧培养12-36h；
(3)发酵培养
将步骤(2)培养好的种子液按照1％-5％的接种量转接至已灭菌的改良MRS培养基中，于37℃，厌氧培养12-36h，培养过程中控制发酵液中糖的浓度≤1g/L，控制发酵液pH值为6.5-7.0；当发酵液OD600和菌体湿重(离心条件：8000rpm，4℃，2min)不再增加时，停止发酵，得到高密度的乳双歧杆菌BR001发酵液，立即降温至10℃-15℃；
(4)收集菌体
通过高速离心或微滤膜进行菌体收集，处理过程控制温度≤15℃收集菌体后，往其中加纯化水至发酵液体积，再进行处理至清夜的电导率<5s/m；收集菌体，4℃保存。
优选的，所述步骤(1)中活化培养基为：脱脂乳7％，酵母浸粉2％，酪蛋白胨2％，抗坏血酸0.1％，葡萄糖2％；115℃灭菌20min。
优选的，所述步骤(3)中改良MRS培养基为：糖蜜10g/L，酵母浸粉5g/L，酵母蛋白胨2.5g/L，玉米浆干粉5g/L，L-赖氨酸1.5g/L，L-苏氨酸1.5g/L，L-天冬氨酸1.5g/L，L-异亮氨酸1.5g/L，K2HPO42g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4·7H2O 2g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锌0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，VB120.005g/L，烟酰胺0.005g/L，生物素0.005g/L，盐酸硫胺0.005g/L，pH6.5-7.0。
优选的，所述步骤(2)和步骤(3)中的厌氧培养方法为：往发酵罐中通入无菌的N2或CO2，控制罐压为0.01-0.03Mpa。
优选的，所述步骤(3)中的控制发酵液中糖浓度是通过连续流加糖蜜溶液实现的。
优选的，所述步骤(3)中的控制pH值得溶液为NH3·H2O。
优选的，所述步骤(4)中的高速离心设备为：碟式离心机或管式离心机；微滤膜为：200nm的无机陶瓷膜或中空纤维膜。
第三方面，本发明还提供了乳双歧杆菌BR001菌粉的制备方法其具体步骤如下：
(1)复配
首先在配置罐中加入适量的纯化水，将菌体转移至配料罐中，充分搅匀，加纯化水制成0.5×1012-1.0×1012cfu/mL的菌悬液，控制温度10-15℃。
准确称取以下辅料：10％-20％全脂奶粉、10％-15％低聚果糖、10％-20％异麦芽糊精、5％-10％海藻糖、5％-10％菊糖，加入适量的10℃-15℃纯化水中，充分溶解，定容至菌悬液的体积，制成保护剂溶液。
将保护剂溶液缓慢加入菌悬液中，混合均匀，待用。
(2)干燥
将步骤(1)的物料通过进料泵输送至干燥机内，通过布料器均匀的分布在传送带上，控制真空度≥0.098Mpa从而降低物料沸点温度，液体原料水分直接升华为气体，传送带在加热板上匀速运转，加热板内通入热水，温度自动控制25℃-30℃，干燥后的物料通过真空粉碎机达到不同粒度的菌粉。菌粉中活菌的数量可以达到1.0×1012-2×1012cfu/g。
第四方面，本发明提供一种包含上述乳双歧杆菌BR001的发酵制品。
优选的，所述的乳双歧杆菌BR001的发酵制品包括液体制剂和固体制剂。
乳双歧杆菌BR001菌粉可以用于制备益生菌液体制品或益生菌固体制剂。
第五方面，本发明提供一种乳双歧杆菌BR001的发酵制品在制备改善过敏的产品中的应用。
应用在药品中：益生菌粉末、益生菌片剂、益生菌胶囊等。
本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的乳双歧杆菌BR001的生产成本大大降低，更利于在其他领域的推广。
(2)本发明提供的乳双歧杆菌BR001的发酵批次差异减小，提高了菌株活力一致性，增加了产品质量的稳定性。
(3)本发明提供的乳双歧杆菌BR001可用于缓解过敏症状。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明乳双歧杆菌BR001的菌落形态。
图2是本发明乳双歧杆菌BR001的革兰氏染色图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例1
菌株的鉴定
(1)菌落形态
将保藏菌株在已灭菌的固体MRS培养基上进行划线，于37℃厌氧恒温培养48h，菌落形态为圆形，边缘整齐，微白色不透明，表面凸起且光滑、湿润。结果如图1所示。
(2)形态学特性
取平板菌株，严格按照革兰氏染色法进行染色，在电子显微镜下用油镜观察菌株形态：革兰氏染色阳性，多形态杆状，单个、成双或成簇分布，顶端有Y字形分叉。结果如图2所示。
(3)生理学特性
参考《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰式系统细菌学手册》，对菌株进行生理生化试验。菌株生理学特性见表1。
表1-菌株生理学特性
(4)分子生物学鉴定
将菌株送往中国科学院微生物研究所进行测序鉴定。
16S rRNA基因序列结果如下：
AGTCGAACGGGATCCCTGGCAGCTTGGAGTCGGGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCAACCTGCCCTGTGCACCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATTTCGGATGCTCCGCTCCATCGCATGGTGGGGTGGGAAATGCTTTTGCGGCATGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGTTGGCGGGGTGATGGCCCACCAAGGCGTTGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGAGTGCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGCGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCGCTTTTGTTCAAGGGCAAGGCACGGTTTCGGCCGTGTTGAGTGGATTGTTCGAATAAGCACCGGCTAACTACGCCCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCCTAACGGTGGATCTGCGCCGGGTACGGGCGGGCTGGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTCACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCTTTCCACGGGTCCCGTGTCGGAGCCAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTGCCGGATCGCCGTGGCCACACGGTTTCCCTTCGGGGCCGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCATCGAGCGCAACCCTCGCCGCATGTTGCCAGCGGGTGATGCCGGGAACTCATGTGGGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAACGCGGTGCGACACGGTGACGTGGGGCGGATCGCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAACGCCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCAAGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGTAGCACCCGAAGCCGGTGGCCCGACCCTTGTGGGGGGAGCCGT。
tuf基因序列测定结果：
CGCACTGCGAAGGTGAGGCCCTCTTCCATAGCGATCGGCTGGATCAGCTCAACCCACAAGGTCGCGTGATCGCCAGGCTGAACCATCTCGACGCCTTCCGGCAGCGTGATGACGCCGGTGACGTCGGTGGTGCGGAAGTAGAACTGCGGACGGTAGTTCGAGAAGAACGGCGATTTACGGCCGCCCTCATCCTTGGTAAGGACGTAGACTTCGCCTTCGAACTTGGTGTGCGGGGTGACCGAACCCGGCCGAGCCACGACCTGGCCACGCTCGACGTCGGTGCGGTTGATGCCGCGGAGCAGCAGACCGGTGTTGTCGCCGGCCTCGCACTCATCCATCTGCTTGTGGAAGGTCTCGATGGTGGTGACGGTGGTGGTCTGGGTCGGGCGGATGCCGACGATCTCGACGTTCGTGTTGATCGGCAGCTTGCCGCGCTCGACACGACCGGTGACGACGGTGCCACGGCCGGAGATGGTGAAGACGTCCTCGATCGGCATCAGGTTCGGCTTGTCGAGGTCGTGGACCGGGGTCGGGATGTACTCGTCGACGTCGTCCATGAGCTCCTTGATGGTGGCAACCCACTTGTCGTGATCCGGAGCGTCGTCATGCAGAGCGCCGTAAGCGGAGGTGTGCACGACCGGGCAGTCGCGGTCGAAGCCGTTCTCGTCGAGGAAGTCGCGGACCTCTTCTTCGACGAGCTCGATGAGCTCTTCGTCATCGACCATATCGCACTTGTTCAGAGCGACGAGGATCTTCGGGACGCCGACCTGACGGGCGAGCAGCACGTGCTCGCGGGTCTGGGCCATCGGGCCGTCGGTGGCGGCCACAACGAGGATGGCGCCATCCATCTGGGCAGCGCCGGTGATCATGTTCTTCACGAAGTCGGCGTG。
根据菌株的菌落形态、形态学特性、生理生化特性、16S rRNA基因序列、tuf基因序列等实验数据综合分析，参考《伯杰式系统细菌学手册》，该菌株鉴定为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，命名编号为乳双歧杆菌BR001。该菌株已于2021年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23665。
实施例2
乳双歧杆菌BR001的高密度发酵
(1)菌种活化
准确称取乳双歧杆菌活化培养基：脱脂乳7％，酵母浸粉2％，酪蛋白胨2％，抗坏血酸0.1％，葡萄糖2％，分装10mL/支。115℃灭菌20min，冷却，备用。
将液氮罐中保存的乳双歧杆菌BR001甘油管取出，室温自然溶解。在无菌条件下，取液体菌种于乳双歧杆菌活化培养基内，于37℃厌氧恒温培养箱中培养24h。取深层活化菌种传入下一代培养基中深层培养，如此反复活化传至第5代。
(2)种子培养
将步骤(1)活化的乳双歧杆菌BR001按照1％的接种量接种至已灭菌的液体MRS培养基中，于37℃静置厌氧培养24h。
(3)发酵培养
准确称取改良MRS培养基：糖蜜10g/L，酵母浸粉5g/L，酵母蛋白胨2.5g/L，玉米浆干粉5g/L，L-赖氨酸1.5g/L，L-苏氨酸1.5g/L，L-天冬氨酸1.5g/L，L-异亮氨酸1.5g/L，K2HPO42g/L，KH2PO41.5g/L，MgSO4·7H2O 2g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锌0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，VB120.005g/L，烟酰胺0.005g/L，生物素0.005g/L，盐酸硫胺0.005g/L，pH＝7.0。115℃灭菌20min。
将步骤(2)培养好的种子液按照2％的接种量转接至已灭菌的改良MRS培养基中，于37℃，无菌的N2通气量为1：0.01，罐压0.01Mpa，厌氧培养，培养过程中通过连续流加糖蜜溶液控制糖的浓度≤1g/L，通过流加NH3·H2O自动控制发酵液pH值为6.8。当发酵液OD600和菌体湿重(离心条件：8000rpm，4℃，2min)不再增加时，停止发酵，得到高密度的乳双歧杆菌BR001发酵液，立即降温至10℃。发酵液中的活菌数最终达到4.2×1010cfu/mL。
(4)收集菌体
通过碟式离心机进行离心，控制进料流量使上清液的OD600<0.5，处理过程控制温度≤15℃，收集菌泥。离心结束后，往菌泥中加纯化水至发酵液体积，搅拌均匀，再离心。反复处理至上清液的电导率<5s/m。收集菌体，4℃保存，备用。
实施例3
乳双歧杆菌BR001菌粉的制备
(1)复配
首先在配置罐中加入适量的纯化水，将实施例2中收集的菌体转移至配料罐中，充分搅匀，加纯化水制成1.0×1012cfu/mL的菌悬液，控制温度≤15℃。
准确称取以下辅料：15％全脂奶粉、10％低聚果糖、10％异麦芽糊精、5％海藻糖、10％菊糖，加入适量的15℃纯化水，充分溶解，定容至菌悬液的体积，制成保护剂溶液。
将保护剂溶液缓慢加入菌悬液中，混合均匀，待用。
(2)干燥
将步骤(1)制备的物料通过进料泵输送至干燥机内，通过布料器均匀的分布在传送带上，控制真空度≥0.098Mpa从而降低物料沸点温度，液体原料水分直接升华为气体，传送带在加热板上匀速运转，加热板内通入热水，温度自动控制30℃，干燥后的物料通过真空粉碎机进行粉碎。菌粉中活菌的数量可以达到1.5×1012cfu/g。
实施例4
乳双歧杆菌BR001益生菌固体饮料的制备
在洁净间内，通过全自动包装机，将实施例3中的菌粉进行分装，2g/袋。在通过重量筛选机、金属检测仪、打码、外包等工序即可制成乳双歧杆菌BR001益生菌固体饮料。此益生菌固体饮料可以作为日常保健食品或膳食补充剂用于肠道菌群+的调理。
实施例5
乳双歧杆菌BR001的高密度发酵
(1)菌种活化
准确称取乳双歧杆菌活化培养基：脱脂乳7％，酵母浸粉2％，酪蛋白胨2％，抗坏血酸0.1％，葡萄糖2％，pH自然，分装15mL/支。115℃灭菌20min，冷却，备用。
将液氮罐中保存的乳双歧杆菌BR001甘油管取出，室温自然溶解。在无菌条件下，取液体菌种于乳双歧杆菌活化培养基内，于37℃厌氧恒温培养箱中培养36h。取深层活化菌种传入下一代培养基中深层培养，如此反复活化传至第2代。
(2)种子培养
将步骤(1)活化的乳双歧杆菌BR001按照3％的接种量接种至已灭菌的液体MRS培养基中，于37℃静置厌氧培养12h。
(3)发酵培养
准确称取改良MRS培养基：糖蜜5g/L，酵母浸粉7.5g/L，酵母蛋白胨1g/L，玉米浆干粉7.5g/L，L-赖氨酸1g/L，L-苏氨酸1g/L，L-天冬氨酸1g/L，L-异亮氨酸1g/L，K2HPO43g/L，KH2PO42g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，硫酸亚铁0.1g/L，硫酸锌0.1g/L，硫酸锰0.01g/L，VB120.01g/L，烟酰胺0.01g/L，生物素0.01g/L，盐酸硫胺0.01g/L。115℃灭菌20min。
将步骤(2)培养好的种子液按照2％的接种量转接至已灭菌的改良MRS培养基中，于37℃，无菌的CO2通气量为1：0.01，罐压0.01Mpa，厌氧培养，培养过程中通过连续流加糖蜜溶液控制糖的浓度≤1g/L，通过流加NH3·H2O自动控制发酵液pH值为6.5。当发酵液OD600和菌体湿重(离心条件：8000rpm，4℃，2min)不再增加时，停止发酵，得到高密度的乳双歧杆菌BR001发酵液，立即降温至10℃。发酵液中的活菌数最终达到4.0×1010cfu/mL
(4)收集菌体
通过200nm的无机陶瓷进行过滤浓缩，处理过程控制温度≤15℃，浓缩5倍，往浓缩液中加入三分之一发酵液体积的纯化水，再过滤。反复处理至透过液的电导率<5s/m。浓缩5倍，收集菌体，4℃保存，备用。
实施例6
乳双歧杆菌BR001菌粉的制备
(1)复配
首先在配置罐中加入适量的纯化水，将实施例2收集的菌体转移至配料罐中，控制温度≤15℃。
准确称取以下辅料:10％全脂奶粉、12.5％低聚果糖、12.5％异麦芽糊精、10％海藻糖、5％菊糖，加入适量的15℃纯化水，充分溶解，定容至菌悬液的体积，制成保护剂溶液。
将保护剂溶液缓慢加入菌悬液中，混合均匀，待用。
(2)干燥
将步骤(1)的物料通过进料泵输送至干燥机内，通过布料器均匀的分布在传送带上，控制真空度≥0.098Mpa从而降低物料沸点温度，液体原料水分直接升华为气体，传送带在加热板上匀速运转，加热板内通入热水，温度自动控制30℃，干燥后的物料通过真空粉碎机进行粉碎。菌粉中活菌的数量可以达到1.7×1011cfu/g。
实施例7
乳双歧杆菌BR001奶片的制备
将实施例6制备的菌粉40份与全脂奶粉39份、果葡糖浆10份、红薯淀粉10份、硬脂酸镁0.7份、香精0.3份进行混合均匀，将物料放入旋转压片机中，开启压片机，放入30℃烘箱中烘干至水分含量≤3％，获得益生菌奶片。
实施例8
乳双歧杆菌BR001菌粉提高机体抗过敏能力的实验
活体动物：6-8周龄，体重为20g±2g的BALB/c小鼠。
饲养条件：饲养环境温度22C土2C，保证小鼠正常自由饮水和进食，保证日常作息。
实验方法：小鼠随机平均分成三组：实验组、对照组1、对照组2。取0.5g实施例6的菌粉溶于适量的纯化水中，给实验组小鼠进行灌胃；对照组1、对照组2用等量的纯化水进行灌胃。连续灌胃30天，每天1次。实验组、对照组1小鼠灌胃的第5、15天分别腹腔注射200uL的500ug卵清蛋白和50mg氢氧化铝的混悬液，第25天分别腹腔注射100uL的500ug卵清蛋白和50mg氢氧化铝的混悬液。对照组2小鼠分别在第5、15、25天腹腔注射等量的纯化水。
分别于实验的第10、20、30天对小鼠进行尾部采血，采用小鼠卵清蛋白特异性J服(OVA sIsE)酶联免疫分析试剂盒对小鼠血浆中的卵清蛋白(OVA)特异性IE浓度(ug/mL)进行检测。
表2-IgE浓度测定结果
组别 第10天 第20天 第30天
实验组 0.54 0.61 0.67
对照组1 1.72 1.86 1.93
对照组2 无 无 无
由表2的测定结果可以看出，在小鼠腹部注射卵清蛋白(OVA)后，对照组1小鼠血液中的IgE显著提高，而实验组小鼠血液中的IgE则受到了抑制。由此可知乳双歧杆菌BR001菌粉对于抑制机体血液中的IgE浓度有明显的效果，具有抗过敏的作用。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求所述的保护范围为准。

Claims (10)

1.一株乳双歧杆菌BR001，其特征在于，所述一株乳双歧杆菌 (Bifidobacteriumlactis)BR001，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo .23665，保藏日期为2021年10月25日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的一株乳双歧杆菌BR001的高密度发酵方法，其特征在于，所述发酵的具体步骤如下：
(1)菌种活化
将液氮罐中保存的乳双歧杆菌BR001甘油管取出，室温自然溶解；在无菌条件下，取菌种于乳双歧杆菌活化培养基内，于37℃厌氧恒温培养箱中培养12-36h；取深层活化菌种传入下一代培养基中深层培养，如此反复活化传至第2-5代；
(2)种子培养
将步骤(1)活化的乳双歧杆菌BR001按照1％-5％的接种量接种至已灭菌的液体MRS培养基中，于37℃静置厌氧培养12-36h；
(3)发酵培养
将步骤(2)培养好的种子液按照1％-5％的接种量转接至已灭菌的改良MRS培养基中，于37℃，厌氧培养12-36h，培养过程中控制发酵液中糖的浓度≤1g/L，控制发酵液pH值为6.5-7.0；当发酵液OD600和菌体湿重不再增加时，停止发酵，得到高密度的乳双歧杆菌BR001发酵液，立即降温至10℃-15℃；
(4)收集菌体
通过高速离心或微滤膜进行菌体收集，处理过程控制温度≤15℃收集菌体后，往其中加纯化水至发酵液体积，再进行处理至清夜的电导率<5s/m；收集菌体，4℃保存。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中活化培养基为：脱脂乳7％，酵母浸粉2％，酪蛋白胨2％，抗坏血酸0.1％，葡萄糖2％；115℃灭菌20min。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中改良MRS培养基为：糖蜜10g/L，酵母浸粉5g/L，酵母蛋白胨2.5g/L，玉米浆干粉5g/L，L-赖氨酸1.5g/L，L-苏氨酸1.5g/L，L-天冬氨酸1.5g/L，L-异亮氨酸1.5g/L，K2HPO4 2g/L，KH2PO4 1.5g/L，MgSO4·7H2O 2g/L，硫酸亚铁0.05g/L，硫酸锌0.05g/L，硫酸锰0.05g/L，VB12 0.005g/L，烟酰胺0.005g/L，生物素0.005g/L，盐酸硫胺0.005g/L，pH 6.5-7.0。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(3)中的厌氧培养为：往发酵罐中通入无菌的N2或CO2，控制罐压为0.01-0.03Mpa。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的控制发酵液中糖浓度是通过连续流加糖蜜溶液实现的。
7.一种包含权利要求1所述的一株乳双歧杆菌BR001的发酵制品。
8.如权利要求7所述的发酵制品，其特征在于，所述发酵制品包括液体制剂和固体制剂。
9.一种制备权利要求8所述的发酵制品的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)复配
首先在配置罐中加入适量的纯化水，将菌体转移至配料罐中，充分搅匀，加纯化水制成0.5×1012-1.0×1012cfu/mL的菌悬液，控制温度10℃-15℃；
准确称取以下辅料：10％-20％全脂奶粉、10％-15％低聚果糖、10％-20％异麦芽糊精、25％-10％海藻糖、5％-10％菊糖，加入适量的10℃-15℃纯化水中，充分溶解，定容至菌悬液体积，制成保护剂溶液；
将保护剂溶液缓慢加入菌悬液中，混合均匀，待用；
(2)干燥
将步骤(1)的物料通过进料泵输送至干燥机内，通过布料器均匀的分布在传送带上，控制真空度≥0.098Mpa，传送带在加热板上匀速运转，加热板内通入热水，温度自动控制25℃-30℃，干燥后得固体制剂。
10.一种权利要求1所述的一株乳双歧杆菌BR001在制备改善过敏的药品中的应用。
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