CN117025489B - 一种动物双歧杆菌乳亚种vb315及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315，于2023年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.28159。本发明的动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315，产丁酸能力显著，可用于制备维护肠道健康的药物，并且具有较强的抑菌能力和抗胆碱能力，在制备药品中具有巨大的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体地，本发明涉及一种动物双歧杆菌乳亚种VB315及其应用。
背景技术
动物双岐杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）是一种广泛用于乳制品和益生元产品中的有益微生物，具有极高的安全性，在美国食品和药物管理局（FDA）的 "Generally Recognized As Safe" (GRAS) 清单中有记录，欧洲食品安全局(EFSA)已将该亚种列入安全合格推定清单，在中国的《可用于食品的菌种名单》中也有记录，其已经在全球范围内被广泛接受并应用于食品和药品产业。
短链脂肪酸，尤其是丁酸，在维护肠道健康方面发挥着不可或缺的作用，有助于保持肠道黏膜的完整性。目前研究表明丁酸对结肠壁细胞有多重保护作用，包括：促进上皮的生长和更新，修复肠道黏膜损伤；改善营养物质通过细胞壁的运输，调控钠和水的吸收；促进大肠黏液蛋白分泌，增强肠道屏障功能；减少肠道内氨、胺、吲哚、内毒素等肠道毒素的吸收及危害；改善肠道内壁对炎症和氧化应激的抵抗力；调控抗菌肽表达，抗炎作用、抗菌和杀菌作用；减少肠道过度痉挛和过度运动；抑制结肠腺瘤和肿瘤的形成；降低肠道pH有益于厌氧的益生菌生长。最近的研究表明，丁酸的改善效果可以延伸到结肠外，对全身和大脑的健康有益，比如有营养大脑神经、有助减重减肥、控制脂肪肝、协助降低血糖、增加骨骼肌量等保健作用，可用于临床辅助治疗。
已有相关专利报道动物双岐杆菌乳亚种可增加粪便中丁酸盐的浓度，但并不是其自身产生的，而是通过与结肠中产生丁酸盐的细菌交叉喂养来增加丁酸盐的产生，CN114164158B测试了动物双歧杆菌ZK-77的菌液中乙酸、丙酸和丁酸的含量，但ZK-77菌液中丁酸的的浓度较低（仅0.562mM），表明该菌的产业化利用价值有限。
因此，亟需一种能提高丁酸产量的动物双岐杆菌乳亚种。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
为此，本发明第一方面提供一种动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315，所述动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315于2023年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，中国北京，保藏编号为CGMCC No. 28159。
本发明提供的动物双歧杆菌乳亚种能高产丁酸，具备抑制产气荚膜杆菌和金黄色葡萄球菌的能力，同时还具有优异的抗胆碱能力、耐胃酸能力和肠道耐受能力。
本发明第二方面提供一种发酵上清液，所述发酵上清液包括第一方面所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315的代谢产物。
本发明第三方面提供一种菌悬液，所述菌悬液包括第一方面所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315。
本发明第四方面提供第一方面所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315、第二方面所述的发酵上清液或第三方面所述的菌悬液在制备维护肠道健康的药物中的用途。
根据本发明的实施方案，所述维护肠道健康包括修复肠道黏膜损伤、调控肠道细胞壁的钠和水的吸收、增强肠道屏障功能、抑制结肠腺瘤和肿瘤的形成、抗菌或杀菌中的至少一种。
根据本发明的实施方案，所述维护肠道健康包括治疗和/或预防由产气荚膜杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少之一引起的相关疾病。
所述由金黄色葡萄球菌、产气荚膜杆菌引起的相关疾病包括感染性疾病，如化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎、腹泻和发烧等。
本发明第五方面提供一种药物，所述药物包括第一方面所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315、第二方面所述的发酵上清液、第三方面所述的菌悬液中的至少之一。
根据本发明的实施方案，所述药物进一步含有赋形剂和/或载体。
根据本发明的实施方案，所述赋形剂包括选自粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂、稀释剂、缓释剂中的至少之一。
根据本发明的实施方案，所述载体包括选自糖类、纤维素及其衍生物、磷酸钙类、硬脂酸碱土金属盐、植物油类、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、脂肪醇类、谷物水解固形物中的至少之一。
根据本发明的实施方案，所述药物的剂型包括选自口服液、散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、滴丸剂中的至少之一。
根据本发明的实施方案，当动物双歧杆菌乳亚种VB315发挥作用时，可以是活细胞形式存在，也可以是非活细胞的形式存在。
根据本发明的实施方案，所述活细胞是指具有新陈代谢、繁殖或复制能力的细胞，所述非活细胞是指不具有新陈代谢、繁殖和复制能力的细胞，包括但不限于干菌体（比如冻干粉）。
另外，本发明提供了一种微生物菌剂，所述的微生物菌剂含有前述的动物双歧杆菌乳亚种VB315、前述的发酵上清液或前述菌悬液。本发明的微生物菌剂用于维护肠道健康。
本发明还提供前述的动物双歧杆菌乳亚种VB315和/或前述的发酵上清液在制备保健品、食品中的用途，所述保健品或食品用于维护肠道健康。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
保藏信息：
菌株名称：动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315
保藏日期：2023年8月14日
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）
保藏地址：中国北京
保藏编号：CGMCC No.28159
附图说明
图1显示了本发明实施例1中动物双歧杆菌乳亚种VB315的平板菌落形态；
图2显示了本发明实施例2中气相色谱法测定丁酸浓度-峰面积标准曲线log图；
图3显示了本发明实施例2中动物双歧杆菌乳亚种VB315的发酵上清液的气相色谱图；
图4显示了本发明实施例4中动物双歧杆菌乳亚种VB315的胆碱耐受性。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
在本文中，术语“含有”、“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
在本文中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
在本文中，“预防”和“防止”可互换使用。这些术语指获得有益的或期望的结果的方法，包括但不限于预防性益处。为了获得“预防性益处”，可将动物双歧杆菌乳亚种或含有其的产品给予有罹患特定疾病风险的受试者，或给予报告疾病的一种或多种生理症状的受试者，即使可能该疾病的诊断尚未作出。
在本文中，术语“治疗”和“缓解”均是指用于获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述化合物的药物给予有需要的个体。
在本文中，“保健食品中可接受的”是指可被人类食用的物质或组合物，其可根据不同国家的保健食品要求进行调整。
在本文中，“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。优选地，本发明所述的“药学上可接受的”是指联邦监管机构或国家政府批准的或美国药典或其他一般认可药典上列举的在动物中、特别是人体中使用的。
在本文中，术语“药学上可接受的载体”包括任何溶剂，药物稳定剂，或其组合物，这些载体都是所属技术领域技术人员已知的。除了任意常规载体与活性成分不相容的情况外，涵盖其在治疗或药物组合物中的用途。
在本文中，术语“药学上可接受的辅料”均可包括糖类，所述糖类包括单糖或多糖，例如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素和甲基纤维素；磷酸钙类，例如磷酸二钙和磷酸三钙；硫酸钠；硫酸钙；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醇；硬脂酸；硬脂酸碱土金属盐，例如硬脂酸镁和硬脂酸钙；植物油类，例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油和玉米油；非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂；乙二醇聚合物；脂肪醇类；和谷物水解固形物以及其它无毒的可相容的填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧剂、润滑剂、着色剂等在药物制剂中常用到的辅料。
根据本发明的具体实施方案，本发明提出了一种动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315。根据本发明的实施例，所述动物双歧杆菌乳亚种的保藏编号为CGMCC No.28159。本发明的动物双歧杆菌乳亚种产丁酸能力显著，可用于制备维护肠道健康的药物，并且具有较强的抑菌能力、抗胆碱能力、耐胃酸能力和肠道耐受能力，在制备药品中具有巨大的应用前景。
在本文中，“动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315”和“动物双歧杆菌乳亚种VB315”、“VB315”“菌株VB315”同义。
本发明筛选获得的动物双歧杆菌乳亚种VB315相比其它动物双歧杆菌乳亚种产丁酸能力显著，根据本发明的具体实施方案，本发明菌株VB315产丁酸339.9ppm（相当于大约3.86 mM）远高于其它动物双歧杆菌乳亚种。
本发明筛选获得的动物双歧杆菌乳亚种VB315相比其它动物双歧杆菌乳亚种具备抑制产气荚膜杆菌和金黄色葡萄球菌能力，本发明菌株VB315在抑制有害菌试验中产气荚膜杆菌抑菌圈为19mm，金黄色葡萄球菌抑菌圈为13mm，显示具有较强的抑菌能力。
本发明的动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315相比其它动物双歧杆菌乳亚种具有更强的耐胆碱能力。本发明菌株VB315在胆盐浓度为0.2%条件下处理2小时，存活率达到137%，在胆盐浓度为0.3%条件下处理2小时，存活率达到93%，对菌株基本无影响，试验表明VB315菌株具有很好的抗胆碱能力。
根据本发明的具体实施方案，本发明提出了一种发酵上清液，所述发酵上清液包含：动物双歧杆菌乳亚种VB315和/或动物双歧杆菌乳亚种VB315的代谢产物。本发明的动物双歧杆菌乳亚种具有较强的抑菌能力和抗胆碱能力。
需要说明的是，“发酵上清液”是指发酵液经离心后的上层清液，其可能包含动物双歧杆菌乳亚种VB315、或动物双歧杆菌乳亚种VB315的代谢产物，或者同时包含动物双歧杆菌乳亚种VB315及其代谢产物。
根据本发明的具体实施方案，本发明提出了一种微生物菌剂，所述的微生物菌剂含有前述的动物双歧杆菌乳亚种VB315和/或前述的发酵上清液。本发明的微生物菌剂用于制备维护肠道健康的药物，并且具有较强的抑菌能力、抗胆碱能力、耐胃酸能力和肠道耐受能力，在制备药品中具有巨大的应用前景。
需要说明的是，本发明的微生物菌剂可为微生物液体菌剂，包括但不限于发酵液等；也可为微生物固体菌剂，包括但不限于冻干粉等。
根据本发明的实施例，所述动物双歧杆菌乳亚种VB315以活细胞和/或非活细胞的形式存在。
在本文中，“活细胞”是指是具有新陈代谢、繁殖或复制能力的细胞。
示例性地，所述活细胞可为固定化的细胞。本文中，“固定化的细胞”是指动物双歧杆菌乳亚种VB315固定在载体上，可在一定的空间范围进行生长、发育、繁殖、遗传和新陈代谢等生命活动。
在本文中，“非活细胞”是指不具有新陈代谢、繁殖和复制能力的细胞，包括但不限于干菌体。示例性地，所述微生物菌剂为冻干粉。
作为一种具体的实施方式，所述动物双歧杆菌乳亚种VB315是以活细胞、干菌体、固定化的细胞或者以其他任何形式存在的。
作为一种具体的实施方式，所述干菌体是所述动物双歧杆菌乳亚种VB315经冷冻干燥处理获得的。
根据本发明的实施方案，本发明提出了一种药物或保健品或食品，该药物或保健品或食品中含有动物双歧杆菌乳亚种VB315。优选的，本申请的药物或保健品或食品为制备用于降胆固醇的活菌制剂。需要说明的是，本申请的药物或保健品或食品，可以是单独的活性动物双歧杆菌乳亚种VB315的各种制剂，也可以与其它活性成份配合使用，只要相互之间不影响活性即可；进一步地，所述药物或保健品或食品的最好情况是各活性成分之间能够具有功能互补或具有促进作用，例如可以将动物双歧杆菌乳亚种VB315与其他益生菌组合制成复合益生菌片，达到更好或更多的活性功能，具体的，可以根据复合益生菌片的活性和组分而定，在此不做限定。任选地，所述药物或保健品或食品进一步包括药物或保健品或食品开发上可接受的载体或辅料。需要说明的是，在制活菌制剂时，通常都需要添加载体或辅料，只要添加的载体或辅料与动物双歧杆菌乳亚种VB315之间没有相互抑制或不良副作用即可。药物或保健品或食品可以是粉剂、片剂、饮料、胶囊。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：菌株采集与鉴定
收集健康成人的新鲜粪便0.5g加入5mL双歧杆菌BS液体培养基中37℃厌氧条件下富集培养12-16h后振荡均质制备成菌悬液，取1mL进行梯度稀释制备成不同梯度的稀释菌悬液，涂布于含0.05g/100mL半胱氨酸和5%血清（V/V）的MRS琼脂平板中，在37℃下厌氧培养48-72h，挑取形态不同的菌落共130株划线纯化后抽提DNA，用16S全长引物27F与1492R进行PCR扩增后测序16S rDNA，同时对应菌株保存甘油管。将16s测序结果进行BLAST比较，最终鉴定分离得到VB315。
将菌株命名为VB315，已于2023年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.28159。
菌株VB315生物学特征为：菌株固体培养单菌落呈规则圆形，直径1-3mm，凸起，色白，表面光滑，菌落中间有一小白点（见图1）。对VB315菌株进行了16s序列分析，使用NCBI进行BLAST比对，结果表明该菌株为动物双岐杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis），属于动物双岐杆菌（Bifidobacterium animalis）乳酸亚种。
菌株VB315的序列为：
GGGGCCTTTACACATGCAGTCGAACGGGATCCCTGGCAGCTTGCTGTCGGGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCAACCTGCCCTGTGCACCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATACCGGATGCTCCGCTCCATCGCATGGTGGGGTGGGAAATGCTTTTGCGGCATGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGTTGGCGGGGTGATGGCCCACCAAGGCGTTGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGCGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCGCTTTTGTTCAAGGGCAAGGCACGGTTTCGGCCGTGTTGAGTGGATTGTTCGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCCTAACGGTGGATCTGCGCCGGGTACGGGCGGGCTGGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTCACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCTTTCCACGGGTCCCGTGTCGGAGCCAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTGCCGGATCGCCGTGGAGACACGGTTTCCCTTCGGGGCCGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCGCATGTTGCCAGCGGGTGATGCCGGGAACTCATGTGGGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAACGCGGTGCGACACGGTGACGTGGGGCGGATCGCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAACGCCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGTAGCACCCGAAGCCGGTGGCCCGACCCCCTTGTGGGGGGG（SEQ ID NO:1）。
实施例2：VB315菌株的产丁酸试验
在厌氧工作站操作，动物双歧杆菌乳亚种VB315的甘油管复融后，按1%接种量接入20mL/250mL培养基中，培养基为：蛋白胨（BD）0.5%、牛肉膏0.5%、胰蛋白胨1%、酵母浸出粉860 0.5%、葡萄糖1%、吐温80 0.1%、K2HPO40.2%、乙酸钠0.5%、柠檬酸三铵0.2%、ZnSO4·7H2O0.025%、MgSO4·7H2O 0.01%，调至pH=7.0。在37℃下厌氧工作站培养24h，发酵液离心，取上清进行气相检测。
气相检测方法和条件为：取2mL样品加入10μL10%磷酸进行预处理，使用Agilent7890A气相色谱仪，DB-624 毛细管柱（30米*0.32毫米*1.8微米），柱温：100℃保持5分钟，以每分钟10℃升至200℃，保持5分钟。进样口：250℃，检测器（FID)：260℃。进样量：1μL，分流比：5:1。进样方式：顶空进样。
气相色谱法测定丁酸浓度-峰面积标准曲线log图如图2所示，统计结果如表1所示，动物双歧杆菌乳亚种VB315发酵上清液的气相色谱图如图3所示。
表1：气相色谱法测定丁酸浓度-峰面积标准曲线绘制表
通过气相标准曲线公式log(峰面积)=1.2086×log(浓度)−3.2399来计算丁酸浓度，计算结果表明，动物双歧杆菌乳亚种VB315产丁酸339.9ppm（相当于大约3.86 mM）。
实施例3：VB315菌株的抑制有害菌试验
采用优化后的双层板培养法对动物双歧杆菌乳亚种VB315菌株进行抑制产气荚膜杆菌与金黄色葡萄球菌的研究，包括以下步骤：
下层动物双歧杆菌乳亚种VB315的制备：将活化好的单菌冷冻管解冻后，接种于pH为6.9的MRS平板中（接种量：2μL/点），37℃厌氧培养1天，培养基：MRS（购自广东环凯生物科技有限公司）+琼脂1.8%。
上层致病菌层的制备：消好的产气荚膜培养基冷却至40-50℃，接入产气荚膜杆菌，使培养基中最终浓度约106CFU/mL，混匀。将该培养基按7mL/皿加入已长好动物双歧杆菌乳亚种VB315的平板中，待凝固后，37℃厌氧培养1天，培养基：胰蛋白胨 1.5%、牛肉浸膏0.3%、氯化钠 0.5%、葡萄糖 1%、琼脂 0.5%，调至pH为7.0；消好的LB培养基冷却至40-50℃，接入金黄色葡萄球菌，使培养基中最终浓度约106CFU/mL，混匀。将该培养基按7mL/皿加入已长好动物双歧杆菌乳亚种VB315的平板中，待凝固后，37℃有氧培养1天，培养基：LB培养基、琼脂 0.5%，调至pH为7.0。
待上层板长好后观察动物双歧杆菌乳亚种VB315周围是否有抑菌圈，判断是否有抑菌能力。
表2：菌株VB315的抑菌实验
从表2可以看出，动物双歧杆菌乳亚种VB315具备抑制产气荚膜杆菌和金黄色葡萄球菌能力。
实施例4：VB315菌株的耐胆碱试验
以活菌计数达到约109-1010CFU/mL的甘油管作为样本，考察动物双歧杆菌乳亚种VB315在不同胆盐浓度下的耐受性，胆盐浓度分别为0.06%、0.1%、0.2%、0.3%，处理时间为2和4小时，稀释涂布检测其存活率。
配制人工模拟胰液：取生理盐水（氯化钠：0.9%）先配制成1%浓度的氯化钠溶液，分别按0.06%、0.1%、0.2%、0.3%浓度添加牛胆碱至30mL/瓶，于121℃、消毒30min。胰蛋白酶0.1%（配制1%浓度，无菌膜过滤后，和生理盐水按1:9加入）。
菌悬液的制备：取活菌计数达到约109-1010CFU/mL的益生菌菌悬液，制备成甘油管，冻-80℃冰箱备用。
各取0.06%、0.1%、0.2%、0.3%浓度人工模拟胰液9mL，将1mL 1%胰蛋白酶加入其中。再分别取990μL上述胰液分装至1.5mL EP管中并做好标记，将10μL解冻后的菌悬液甘油管加入至各EP管中，混匀。37℃培养箱放置，待2h和4h分别取出，涂布计数。对照同步操作：取990μL无菌水加10μL菌悬液，混匀，涂布计数。
结果如表3所示，示意图如图4所示，显示在胆盐浓度为0.2%条件下处理2小时，存活率达到137%，在胆盐浓度为0.3%条件下处理2小时，存活率达到93%，对菌株基本无影响，实验表明VB315菌株具有很好的抗胆碱能力。
表3：菌株VB315的耐胆碱实验
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、 “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp.lactis）VB315保藏编号为CGMCC No. 28159。
2.一种菌悬液，其特征在于，包括权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315。
3.权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315或权利要求2所述的菌悬液在制备维护肠道健康的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述维护肠道健康包括修复肠道黏膜损伤、调控肠道细胞壁的钠和水的吸收、增强肠道屏障功能、抑制肿瘤的形成、抗菌或杀菌中的至少一种。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述维护肠道健康包括治疗和/或预防由产气荚膜杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少之一引起的相关疾病。
6.一种药物，其特征在于，所述药物包括权利要求1所述的动物双歧杆菌乳亚种VB315、权利要求2所述的菌悬液中的至少之一。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物进一步含有赋形剂和/或载体。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述赋形剂包括选自粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂、稀释剂、缓释剂中的至少之一。
9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述载体包括选自糖类、纤维素及其衍生物、磷酸钙类、硬脂酸碱土金属盐、植物油类、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、脂肪醇类、谷物水解固形物中的至少之一。
10.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括选自口服液、散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、滴丸剂中的至少之一。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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