JP2024502863A - ヒト化補体５ａ受容体１抗体及びその使用方法 - Google Patents

ヒト化補体５ａ受容体１抗体及びその使用方法 Download PDF

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ブライアン ブース，
ブーパシー ラマクリシュナン，
アンドリュー ウーラコット，
グレゴリー バブコック，
ザッカリー シュリバー，
ローレン オリンスキ，
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ビステラ， インコーポレイテッド
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Abstract

本開示は、とりわけ、ヒト補体成分５ａ受容体１に対するヒト化抗体の２つの異なるフォーマットを提供する。本開示はまた、ＡＮＣＡ関連血管炎を含むがこれに限定されない、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸経路の機能不全を有する対象を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１に結合する、有効量の抗体、又は抗体をコードする核酸を投与することを含み、投与が、対象のＣ５ａ／Ｃ５ａＲ１関連機能不全に関連する症状の減少をもたらす。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／１３７，０８９号、及び２０２１年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６３／２７４，７４８号に対する優先権を主張するものであり、その各開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
補体５ａ／補体５ａ受容体１Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１媒介性免疫炎症に関連する自己免疫性疾患及び障害を低減するための組成物及び方法が開示される。Ｃ５ａ－Ｃ５ａＲ１軸は、局所部位への好中球の誘引をブロックする、好中球の活性化及び血管破壊を阻害するための治療的介入に特に興味深いものである。本明細書に開示される組成物及び方法は、Ｃ５ａＲ１拮抗薬を投与する工程、並びにそのような治療を必要とする対象を治療する方法を含み得る。
本開示は、とりわけ、Ｃ５ａＲ１に対する特異性が増大した抗Ｃ５ａＲ１抗体、並びにＣ５及びその受容体に関連する疾患又は障害、例えば、ＡＮＣＡ血管炎、典型的な溶血性尿毒症症候群、加齢黄斑変性、関節リウマチ、敗血症、重度の熱傷、抗リン脂質症候群、喘息、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、及び慢性閉塞性肺疾患などを効果的に治療する際のこのような抗体の治療的使用を提供する。本明細書に記載されるように、本開示は、部分的には、抗Ｃ５ａＲ１の部位Ｉ及び／又は部位ＩＩの特定の領域に結合し、Ｃ５ａＲ２又は任意の他のＧタンパク質共役受容体に対する交差反応性を有意に低減する、ヒト化抗Ｃ５ａＲ１特異的抗体の同定に基づく。特に、本開示の抗Ｃ５ａＲ１抗体は、Ｃ５ａＲ１に対する高い結合親和性（例えば、５０ｎＭ未満のＫＤ）及びＣ５ａＲ２との最小限の交差反応性を特徴とする。本開示のＣ５ａＲ１抗体は、高いＣ５ａ濃度の存在下でＣ５ａＲ１シグナル伝達の強力な阻害を可能にするため、このことは重要である。結果として、本開示のＣ５ａＲ１抗体は、他の抗Ｃ５ａＲ１抗体又はＣ５ａ抗体と比較して治療効果を達成するために、より低い用量で使用され得る。これは、本明細書に記載される先行技術抗体と比較して、機能的アッセイで観察される驚くほど高い効力によって実証される。更に、本開示の非常に強力な部位ＩのＣ５ａＲ１抗体は、部位Ｉに関して互いに競合し、本開示の非常に強力な部位ＩＩのＣ５ａＲ１抗体は、部位ＩＩ上で互いに競合する。更に本開示は、Ｃ５ａＲ１の部位Ｉ及び部位ＩＩの両方を標的化することによって、Ｃ５ａＲ１及び／又はＣ５ａシグナル伝達を阻害するための方法及び組成物を提供する。部位Ｉ及び部位ＩＩの同時標的化は、阻害活性を著しく強化し得る。例えば、部位Ｉ及び部位ＩＩ抗体の組み合わせ又は二重特異性抗体（例えば、バイパラトピック抗体）（ただし、２つの部位ＩＩ又は２つの部位ＩＩ抗体ではない）は、活性を著しく強化する。本開示の発明の抗Ｃ５ａＲ１抗体は、補体媒介性疾患及び障害、特にＡＮＣＡ血管炎のより強力な治療を約束する。
更に、本開示は、とりわけ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣ機能が著しく低減したＦｃバリアントを含む抗Ｃ５ａＲ１抗体を提供する。本明細書に記載されるように、本開示の抗Ｃ５ａＲ１抗体は、全てのＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、及びＣ１ｑへの結合を無効にし、ＦｃＲｎに結合するその能力を維持する、新規の変異の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＣ５ａＲ１抗体は、野生型ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＣ５ａＲ１抗体は、改変ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを有する。いくつかの実施形態では、改変Ｃ５ａＲ１抗体は、Ｆａｂアーム交換変異を含む。いくつかの実施形態では、改変Ｃ５ａＲ１抗体は、Ｆｃサイレンシング変異を更に含む。
Ｃ５ａ－Ｃ５ａＲ１軸は、局所部位への好中球の誘引をブロックし、好中球の活性化及び血管破壊を阻害する治療的介入に特に興味深いものである。本明細書に開示される組成物及び方法は、Ｃ５ａＲ１拮抗薬を投与する工程、並びにこのような治療を必要とする対象を治療する方法を含み得る。
一態様では、本開示は、配列番号１、配列番号２、又は配列番号３の配列を含む、Ｃ５ａＲ１の配列の少なくとも１つに結合する抗体又は抗体結合断片を提示する。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａＲ１の配列番号１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａＲ１の配列番号２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａＲ１の配列番号３に結合する。
一態様では、本開示は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を提示し、このＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９３％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を提示し、このＶＬは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９３％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、ＶＨ領域を含み、ＶＨが、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）、７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）、及び８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提示する。
一態様では、本開示は、ＶＬ領域を含み、ＶＬが、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）、１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）及び１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提示する。
一態様では、本開示は、ＶＨ領域であって、ＶＨが、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）、７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）及び８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域と、ＶＬ領域であって、ＶＬが、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）、１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）及び１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域と、を含む、抗体又はその抗原結合断片を提示する。
一実施形態では、本開示による抗体又は抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を更に含む。
一実施形態では、本開示による抗体又は抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を更に含み、Ｆｃドメインは、独立して、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、補体成分５ａ（Ｃ５ａ）とＣ５ａＲ１との相互作用を阻害する。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａＲ２又はいずれかの他のＧＰＣＲに結合しない。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化される。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片のＶＨ若しくはＶＬは、分子の安定性を高めるために改変されている。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５又は配列番号２５の９６位にセリン又はチロシン変異を含む。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１０ｐＭ～５０ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約９０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約８０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約７５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約７０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約６５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約６０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約６０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約５５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約５０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約４５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約４０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約３５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約３０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約２５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約２０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約８ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約０．５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約０．１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約８０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約５０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約２５ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約１０ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）でＣ５ａＲ１に結合する。一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、０．１６ｎＭ以下の親和性でＣ５ａＲ１に結合する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、好中球走化性を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも０．１ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも０．５ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも３ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも５ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも７ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１５ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも２５ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも３０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも４０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも５０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも６０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも７０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも８０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも９０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１００ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａ媒介性Ｃ５ａＲ１ Ｇαシグナル伝達を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、カルシウムシグナル伝達を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、好中球減少を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約４℃で最大１週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約１～１５℃で最大１週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約２～１０℃で最大１週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約３～８℃で最大２週間安定である。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約４℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約１～１５℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約２～１０℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約３～８℃で最大２週間安定である。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約４℃で最大４週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約１～１５℃で最大４週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約２～１０℃で最大４週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約３～８℃で最大４週間安定である。
一実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約４℃で最大８週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約１～１５℃で最大８週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約２～１０℃で最大８週間安定である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約３～８℃で最大８週間安定である。
一態様では、本開示は、本明細書に記載される任意の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を包含する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載される任意の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を包含する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片を作製する方法を包含し、方法は、抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することであって、抗体又はその抗原結合断片の産生を可能にする条件下で細胞を培養することを含む。
一態様では、本開示は、抗体又はその抗原結合断片を使用して自己免疫疾患を治療する方法を包含し、抗体若しくはその抗原結合断片が、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体若しくはその抗原結合断片であり、ＶＨが、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又はヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体若しくは抗原結合断片であり、ＶＬが、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、自己免疫疾患を治療する方法は、抗体又はその抗原結合断片を使用することを包含し、抗体又はその抗原結合断片が、ヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体又は抗原結合断片であり、ＶＨが、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片であり、ＶＬが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、抗体又はその抗原結合断片を使用する自己免疫疾患を治療する方法を包含し、抗体又はその抗原結合断片が、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、抗体又はその抗原結合断片は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）で、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）、７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）及び８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のアミノ酸配列を含むものと、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）で、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）、１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）及び１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のアミノ酸配列を含むものと、を含む。
一態様では、本開示は、配列番号４又は配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を使用して自己免疫性疾患を治療する方法を包含する。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９３％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号５又は配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を使用して自己免疫性疾患を治療する方法を包含する。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９３％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本開示は、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片を使用して引き起こされる好中球減少によって引き起こされる疾患を包含する。
一実施形態では、好中球減少は、高レベルのＣ５ａによって引き起こされる。
一実施形態では、疾患は、ＡＮＣＡ血管炎又はループスである。
一実施形態では、障害は、関節リウマチである。
一実施形態では、障害は、腎臓障害である。
一態様では、本開示は、重鎖可変領域（ＶＨ）（ＶＨは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）及び、軽鎖可変領域（ＶＬ）（ＶＬは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む、Ｃ５ａＲ１に結合するモノクローナル抗体を使用するＣ５ａシグナル伝達の阻害方法を包含する。。
一態様では、本開示は、２対の抗原結合ドメインを含むバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含し、第１の抗原結合ドメインは、ＶＨ１及びＶＬ１を含み、ＶＨ１及びＶＬ１は、配列番号３でＣ５ａＲ１に結合し、第２の抗原結合ドメインは、ＶＨ２とＶＬ２を含み、ＶＨ２とＶＬ２は、配列番号１又は配列番号２でＣ５ａＲ１に結合する。
一態様では、本開示は、２対の抗原結合ドメインを含むバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含し、抗原結合ドメインは、ＶＨ１及びＶＬ１を含み、ＶＨ１及びＶＬ１は、配列番号１又は配列番号２でＣ５ａＲ１に結合し、第２の抗原結合ドメインは、ＶＨ２及びＶＬ２を含み、ＶＨ２及びＶＬ２は、配列番号３でＣ５ａＲ１に結合する。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１４を含むか又は配列番号１４と少なくとも９０％同一であるＶＨ１を含む。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、ＶＬを含み、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ１は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨ２を含み、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、ＶＬ２を含み、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ２は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号３に結合する、配列番号１２の重鎖又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の重鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号３に結合する、配列番号１３の軽鎖又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも７８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の重鎖、及び配列番号１３を含む軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。一態様では、本開示は、配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖、及び配列番号１３を含む軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。一態様では、本開示は、配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９２％同一の重鎖、及び配列番号１３を含む軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９２％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。一態様では、本開示は、配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の重鎖、及び配列番号１３を含む軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。一態様では、本開示は、配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一の重鎖、及び配列番号１３を含む軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本発明は、とりわけ、配列番号７１の重鎖及び配列番号７２の軽鎖を含む抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体を提供する。。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも８５％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９０％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９２％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９５％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９７％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９８％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７１と少なくとも９９％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも８５％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９０％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９２％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９５％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９７％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９８％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体は、配列番号７２と少なくとも９９％同一である軽鎖を含む。
一態様では、本発明は、とりわけ、配列番号６９の重鎖及び配列番号７０の軽鎖を含む抗Ｃ５ａＲ１抗体を提供する。。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも８５％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９０％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９２％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも８５％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９５％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９７％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９８％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも９９％同一である重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも８５％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９０％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９２％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも８５％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９５％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９７％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９８％同一である軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも９９％同一である軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、重鎖が、Ｆｃドメインに連結されたＶＨ１を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片のＦｃドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列、若しくは配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ＶＨ２、及び／又は配列番号１７のアミノ酸配列、若しくは配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ＶＬ２を含む、ｓｃＦｖに更に連結される。
一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から独立して選択される。
一実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーを介してＦｃドメインに連結される。
一実施形態では、リンカーは、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも５アミノ酸を含む。一実施形態では、リンカーは、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも３アミノ酸を含む。一実施形態では、リンカーは、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも４アミノ酸を含む。一実施形態では、リンカーは、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも６アミノ酸を含む。一実施形態では、リンカーは、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも７アミノ酸を含む。
一実施形態では、配列番号１６及び配列番号１７を含むバイパラトピック抗体のＶＨ２及びＶＬ２は、リンカーを介して互いに連結される。
一実施形態では、リンカーは、配列番号３１の１～１０リピートを含む。
一実施形態では、配列番号１６及び配列番号１７、又は配列番号１６及び配列番号１７と９０％同一であるアミノ酸配列を含む、バイパラトピック抗体のＶＨ２及びＶＬ２は、バイパラトピック抗体の熱安定性を改善するための１つ以上の変異を更に含む。
一実施形態では、バイパラトピック抗体の熱安定性を改善するための変異は、配列番号１２の５５９位及び配列番号１２の６３０位でのシステインの組み込みを含む。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、補体成分５ａ（Ｃ５ａ）とヒトＣ５ａＲ１との相互作用を阻害する。
一実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ５ａＲ２に結合しない。
一実施形態では、バイパラトピック抗体は、ヒト化される。
一つの実施形態では、バイパラトピック抗体は、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない。
一つの実施形態では、バイパラトピック抗体は、１回の凍結融解サイクルで、４℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約１～１５℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約２～１０℃で最大２週間安定である。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片は、１回以上の凍結融解サイクルで、約３～８℃で最大２週間安定である。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、好中球走化性を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、高いＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。
一実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、少なくとも１０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、Ｃ５ａ媒介性Ｃ５ａＲ１ Ｇαシグナル伝達を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、カルシウムシグナル伝達を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。
一つの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合するバイパラトピック抗体は、好中球減少を阻害する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載されるバイパラトピック抗体をコードする核酸を包含する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載されるバイパラトピック抗体をコードする核酸を含む細胞を包含する。
一態様では、本開示は、本明細書に記載されるバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を作製する方法を包含し、方法は、抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することであって、抗体又はその抗原結合断片の産生を可能にする条件下で細胞を培養することを含む。
一態様では、本開示は、バイパラトピック抗体を使用する自己免疫性疾患を治療する方法を包含し、抗体は、ヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、以下を含む：第１のＶＨ及び第１のＶＬであるＶＨ１及びＶＬ１、ＶＨ１が配列番号１４又は配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬ１が配列番号１５又は配列番号１５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、第２のＶＨ及び第２のＶＬであるＶＨ２及びＶＬ２、ＶＨ２が配列番号１６又は配列番号１６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬ２が配列番号１７又は配列番号１７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本開示は、自己免疫疾患であって、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片を使用して好中球減少によって引き起こされる自己免疫疾患を治療する方法を包含する。
一実施形態では、好中球減少は、高レベルのＣ５ａによって引き起こされる。
一実施形態では、疾患は、ＡＮＣＡ血管炎又はループスである。
一実施形態では、障害は、関節リウマチである。
一実施形態では、障害は、腎臓障害である。
一実施形態では、障害は、脳卒中である。
一実施形態では、抗体が、改変ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、又はＩｇＧ２の定常ドメインを含む、先行する実施形態のうちのいずれかの単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体。
一実施形態では、抗体Ｃ５ａＲ１は、改変ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。
一実施形態では、改変ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｆ２３４、Ｌ２３５及び／又はＤ２６５位での置換を含む。
一実施形態では、Ｆ２３４位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、又はトリプトファンから選択される疎水性アミノ酸である。
一実施形態では、Ｆ２３４位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、バリンである。
一実施形態では、Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、酸性アミノ酸である。
一実施形態では、Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、グルタミン酸又はアスパラギン酸から選択される酸性アミノ酸である。
一実施形態では、Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、アスパラギン酸である。
一実施形態では、Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、非極性アミノ酸である。
一実施形態では、Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びバリンから選択される非極性アミノ酸である。
一実施形態では、Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換は、グリシンである。
一実施形態では、前述の実施形態のうちのいずれかの抗体は、Ｓ２２８での置換を更に含む。
一実施形態では、Ｓ２２８での置換はプロリンである。
一実施形態では、抗体が、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ及びＤ２６５Ｇ置換の組み合わせを含む改変ＩｇＧ４定常ドメインを含む、先行する実施形態のうちのいずれかの単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体。
一実施形態では、本開示は、先行する実施形態のうちのいずれかの単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体を使用する、抗体依存性細胞傷害、抗体依存性食作用及び／又は補体依存性細胞傷害を低減又は予防する方法を提供する。
一態様では、本開示は、配列番号１４の重鎖可変領域（ＶＨ）、配列番号２５の軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）のＨＣＤＲ１、配列番号７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）のＨＣＤＲ２、及び配列番号８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）のＬＣＤＲ１、配列番号１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）のＬＣＤＲ２、及び配列番号１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号６９の重鎖と配列番号７０の軽鎖とを含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）のＬＣＤＲ１、配列番号１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）のＬＣＤＲ２、及び配列番号２１（ＡＱＳＴＬＶＰＬＴ）のＬＣＤＲ３を含む軽鎖と、
配列番号６（ＮＹＷＭＨ）のＨＣＤＲ１、配列番号７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）のＨＣＤＲ２、及び配列番号８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のＨＣＤＲ３を含む重鎖と、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇの置換を含む改変Ｆｃドメインと、配列番号２２（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮ）のＬＣＤＲ４、配列番号２３（ＫＶＳＮＲＬＳ）のＬＣＤＲ５、配列番号２４（ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ）のＬＣＤＲ６、配列番号１８（ＡＹＡＭＳ）のＨＣＤＲ４、配列番号１９（ＳＩＳＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、及び配列番号２０（ＧＹＱＲＦＳＧＦＡＹ）のＨＣＤＲ５を含むｓｃＦｖと、を含み、ｓｃＦｖは、改変Ｆｃドメインに連結されている、補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号１５の第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号１４の第１の重鎖可変領域（ＶＨ）と、置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、配列番号１７の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ）及び配列番号１６の配列番号の第２の重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖと、を含み、
ｓｃＦｖが、改変Ｆｃドメインに連結されている、補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号７２の軽鎖と配列番号７１の重鎖とを含む、補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック又はその抗原結合断片を包含する。
一態様では、本開示は、配列番号２５の第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、配列番号１４の第１の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１７の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ）及び配列番号１６の第２の重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖと、を含み、ｓｃＦｖは、改変Ｆｃドメインに連結されている、補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を包含する。一実施形態では、バイパラトピック又はその抗原結合断片は、置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇの置換を含む改変Ｆｃドメインを含み、その結果ｓｃＦｖが改変Ｆｃドメインに連結される。
一態様では、本開示は、配列番号４３の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４８の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片包含する。一実施形態では、抗体は、置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインを更に含む。
一態様では、本開示は、配列番号１４の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片を包含する。一実施形態では、抗体は、置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインを更に含む。
ＡＮＣＡ血管炎の病因を示す例示的な概略図である。 本開示に記載される２種類の抗体の例示的な概略図である。 本明細書に記載されるＦａｂの重鎖Ｆｃドメインに連結されたｓｃＦｖを含む例示的なバイパラトピック抗体の例示的な概略図である。 本明細書に記載されるＦａｂの軽鎖に連結されたｓｃＦｖを含む例示的なバイパラトピック抗体の概略図である。 本開示に記載されるように、ＥＬＩＳＡを使用した、例示的なヒト化部位ＩＩ抗体（ｃ２１３９）及び例示的なバイパラトピック（ｃ２１３７－ｅ１７１１）のＣ５ａＲ１への結合を示す例示的なグラフである。 Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞における、例示的な部位ＩＩ抗体（ｃ２１３９）及び例示的なバイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１）の異なるバッチの結合を示す例示的なグラフである。 ヒト好中球細胞における、例示的な部位ＩＩ抗体（ｃ２１３９）及び例示的なバイパラトピック抗体（ｃ２１３７～ｅ１７１１）の異なるバッチの結合を示すグラフである。 本開示に記載される、ＥＬＩＳＡを使用した、例示的なヒト化部位ＩＩ抗体（ｃ２１３９）及びバイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１）のＣ５ａＲ２への結合を示す例示的なグラフである。 １０ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１を使用する、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒアッセイを使用したＧ－アルファシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。アバコパンは陽性対照として示されている。 １００ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なヒト化部位ＩＩ、ｃ２１３９抗体、及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１を使用する、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒアッセイを使用したＧ－アルファシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。アバコパンは陽性対照として示されている。 １０ｎＭ Ｃ５ａの存在下で、本開示に記載される、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１ Ｃ５ａＲ１を使用する、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒアッセイを使用したＧ－アルファシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂは、陽性対照として示されている。 １００ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なヒト化部位ＩＩ、ｃ２１３９抗体、及び、例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１を使用する、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒアッセイを使用したＧ－アルファシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂは、陽性対照として示されている。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載される例示的なヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載される例示的なヒト化バイパラトピック抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載される既知のＣ５ａＲ１阻害剤であるアバコパンを使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載される例示的なヒト化部位ＩＩ抗体ｃ２１３９を使用した好中球走化性阻害を示す例示的なグラフである。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載されるヒト化バイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１を使用した好中球走化性阻害を示す例示的なグラフである。 増加する濃度のＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、本開示に記載される既知のＣ５ａＲ１阻害剤であるアバコパンを使用した好中球走化性阻害を示す例示的なグラフである。 １００ｎＭのＣ５ａ及び増加する濃度の抗体の存在下で、アバコパンと比較した、例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１による好中球におけるＣＤ１１ｂ発現の阻害を示す例示的なグラフである。 １０ｎＭの例示的なヒト化部位ＩＩ抗体及び例示的なバイパラトピック抗体、並びに増加する濃度のＣ５ａの存在下で、アバコパンと比較した、本明細書に記載される例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１による好中球におけるＣＤ１１ｂ発現の阻害を示す例示的なグラフである。 １０ｎＭの例示的なヒト化部位ＩＩ抗体及び例示的なバイパラトピック抗体、並びに増加する濃度のＣ５ａの存在下で、１０ｎＭ及び１００ｎＭの抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、本明細書に記載される例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及び例示的なバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１による好中球におけるＣＤ１１ｂ発現の阻害を示す例示的なグラフである。 １ｎＭのＣ５ａの存在下で、１０ｎＭのアバコパンと比較した、各々１ｎＭの用量での例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１抗体ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１の存在下でのβアレスチンリクルートメントの阻害を示す例示的なグラフである。 １０ｎＭのＣ５ａの存在下で、１０ｎＭのアバコパンと比較した、各々１ｎＭの用量での例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１抗体ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１の存在下でのβアレスチンリクルートメントの阻害を示す例示的なグラフである。 １００ｎＭのＣ５ａの存在下で、１０ｎＭのアバコパンと比較した、各々１ｎＭの用量での例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１抗体ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１の存在下でのβアレスチンリクルートメントの阻害を示す例示的なグラフである。 ｃ２１３９、ｃ２１３７－ｅ１７１１、モタビズマブ及びアバコパンと比較した、ＡＮＣＡ（－）及びＡＮＣＡ（＋）細胞におけるＲＯＳシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフである。 ｐＨ感受性蛍光色素を有するアミンコンジュゲート抗体によって可視化された、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７細胞における０、６、及び１２時間後の例示的なヒト化抗１０ｎＭ Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行を示す例示的なグラフである。 ｐＨ感受性蛍光色素を有するアミンコンジュゲート抗体によって可視化された、Ｕ９３７細胞における０、６、及び１２時間後の例示的なヒト化抗１０ｎＭ Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行を示す例示的なグラフである。 ｐＨ感受性蛍光色素を有するアミンコンジュゲート抗体によって可視化された、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７細胞における０、６、及び１２時間後の例示的なヒト化抗１００ｎＭ Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行を示す例示的なグラフである。 ｐＨ感受性蛍光色素を有するアミンコンジュゲート抗体によって可視化された、Ｕ９３７細胞における０、６、及び１２時間後の例示的なヒト化抗１００ｎＭ Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行を示す例示的なグラフである。 例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１抗体のリスザルに対する結合（交差反応）を示す例示的なグラフである 例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１抗体のイヌに対する結合（交差反応）を示す例示的なグラフである。 採血及び投与の時間を示す、リスザルにおける試験デザインの例示的な概略図である。 ビヒクル、例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、及びアバコパンにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの例示的な散布図である。 ビヒクル、例示的なヒト化部位ＩＩ抗体、及びアバコパンにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの棒グラフである。 採血及び投与の時間を示す、ｈＣ５ａＲ１マウスにおける試験デザインの例示的な概略図である。 ビヒクル、ヒト化部位ＩＩ抗体、及びアバコパンにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの例示的な散布図である。 ビヒクル、ヒト化部位ＩＩ抗体、及びアバコパンにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの例示的な棒グラフである。 例示的な四価（バイパラトピック抗体）及び単一特異性抗体の２１日間のＰＫプロファイルを示す例示的なグラフである。 ［図１６Ｂ］マウスの血清中のモタビズマブの５００時間ＰＫプロファイルを示す例示的なグラフである。［図１６Ｃ］マウスの血清中のｃ２１３９の５００時間ＰＫプロファイルを示す例示的なグラフである。［図１６Ｄ］マウスの血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１の５００時間ＰＫプロファイルを示す例示的なグラフである。 単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ）及びＣ５ａＲ１バイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）の親和性曲線を示す例示的なグラフである。 Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）の動態パラメータを示す例示的なグラフである。 単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ）及びＣ５ａＲ１バイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）のＣ５ａＲ２への結合を示す例示的なグラフである。 Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行の増加を立証する。図１８Ａは、単一特異性抗体ｃ２１３９の解離から数時間後の内部移行を示す例示的なグラフである。図１８Ｂは、会合中のバイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１の内部移行の増加を示す例示的なグラフである。 Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行の増加を立証する。図１８Ａは、単一特異性抗体ｃ２１３９の解離から数時間後の内部移行を示す例示的なグラフである。図１８Ｂは、会合中のバイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１の内部移行の増加を示す例示的なグラフである。 Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達の阻害を示す。図１９Ａは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達を示す。図１９Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達を示す。 Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達の阻害を示す。図１９Ａは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達を示す。図１９Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の存在下でのＧαシグナル伝達を示す。 Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞における、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの存在下でのカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的な一連のグラフである。図２０Ａは、増加する濃度の抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフを示す用量応答曲線である。図２０Ｂは、抗体及び１００ｎＭ Ｃ５ａの存在下での、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す阻害パーセントグラフである。 Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞における、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの存在下でのカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的な一連のグラフである。図２０Ａは、増加する濃度の抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフを示す用量応答曲線である。図２０Ｂは、抗体及び１００ｎＭ Ｃ５ａの存在下での、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す阻害パーセントグラフである。 ヒト好中球と比較した、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ａは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｃは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｄは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。 ヒト好中球と比較した、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ａは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｃは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｄは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。 増加する濃度の抗体、（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）及び１００ｎＭのＣ５ａとインキュベートされたＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の、１時間のインキュベーション後の飽和パーセント及びＦ標準（Ｆ ｎｏｒｍ）をまとめたものである。 増加する濃度の抗体、（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）及び１００ｎＭのＣ５ａとインキュベートされたＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の、３時間のインキュベーション後の飽和パーセント及びＦ標準をまとめたものである。 ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－ＦｃｍｏｄによるＣ５ａ－媒介性β－アレスチンシグナル伝達の阻害を示す。図２３Ａは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによる、β－アレスチンシグナル伝達の阻害用量応答を示す。図２３Ｂは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによる、β－アレスチンシグナル伝達の阻害パーセントを示す。 ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－ＦｃｍｏｄによるＣ５ａ－媒介性β－アレスチンシグナル伝達の阻害を示す。図２３Ａは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによる、β－アレスチンシグナル伝達の阻害用量応答を示す。図２３Ｂは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによる、β－アレスチンシグナル伝達の阻害パーセントを示す。 アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置後の、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ａは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｂは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのＣ５ａ ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｃ～２４Ｄは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの存在下、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭ抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンの存在下での、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。 アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置後の、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ａは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｂは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのＣ５ａ ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｃ～２４Ｄは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの存在下、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭ抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンの存在下での、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。 アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置後の、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ａは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｂは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのＣ５ａ ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｃ～２４Ｄは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの存在下、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭ抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンの存在下での、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。 アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置後の、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ａは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｂは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのＣ５ａ ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｃ～２４Ｄは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの存在下、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭ抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンの存在下での、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。 ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置に応答した、ＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。図２５Ａは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１０ｎＭ Ｃ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。図２５Ｂは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。 ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置に応答した、ＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。図２５Ａは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１０ｎＭ Ｃ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。図２５Ｂは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。 ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、モタビズマブ及びアバコパンと比較した、ＡＮＣＡ（－）及びＡＮＣＡ（＋）細胞におけるＲＯＳシグナル伝達の阻害を示す。図２６Ａは、増加する濃度の単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体の、ＲＯＳ産生の阻害を示す。図２６Ｂは、増加する濃度のバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体の、ＲＯＳ産生の阻害を示す。 ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、モタビズマブ及びアバコパンと比較した、ＡＮＣＡ（－）及びＡＮＣＡ（＋）細胞におけるＲＯＳシグナル伝達の阻害を示す。図２６Ａは、増加する濃度の単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体の、ＲＯＳ産生の阻害を示す。図２６Ｂは、増加する濃度のバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体の、ＲＯＳ産生の阻害を示す。 採血及び投与の時間を示す、ｈＣ５ａＲ１マウスにおける試験デザインの例示的な概略図である。 ビヒクル、ｃ２１３９、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの例示的な散布図である。 ビヒクル、ｃ２１３９、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄにおけるベースラインからの好中球数の変化パーセントの例示的な棒グラフである。 １ｍｇ／ｋｇのＰＭＸ５３と比較した、指示された用量のＦｃ改変抗体を用いた処置後のマウス脳における梗塞サイズの図的記述である。 １ｍｇ／ｋｇのＰＭＸ５３と比較した、指示された用量のＦｃ改変抗体を用いた処置後のマウス脳における梗塞サイズのグラフ表示である。 Ｆｃ改変抗体の薬物動態のグラフ表示である。図２９Ａは、５００時間の血清中のＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のパーセンテージを示すグラフ表示である。図２９Ｂは、５００時間にわたる、血清１ｍｌ当たりの抗体μｇでの平均濃度のグラフ表示である。 Ｆｃ改変抗体の薬物動態のグラフ表示である。図２９Ａは、５００時間の血清中のＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のパーセンテージを示すグラフ表示である。図２９Ｂは、５００時間にわたる、血清１ｍｌ当たりの抗体μｇでの平均濃度のグラフ表示である。 ＭＶＺ－ＩｇＧ４と比較した、Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫ及びＰＤ試験のグラフ表示である。図３０Ａは、２００時間の血清中のｃ２１３９Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｂは、２００時間の血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｃは、ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＭＶＺ－ＩｇＧ４の比較である。図３０Ｄは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３９のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｅは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３７－ｅ１７１１のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｆは、２０ｍｇ／Ｋｇの濃度で５００時間にわたるアイソタイプ対照抗体のインシリコでのグラフ表示である。 ＭＶＺ－ＩｇＧ４と比較した、Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫ及びＰＤ試験のグラフ表示である。図３０Ａは、２００時間の血清中のｃ２１３９Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｂは、２００時間の血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｃは、ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＭＶＺ－ＩｇＧ４の比較である。図３０Ｄは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３９のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｅは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３７－ｅ１７１１のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｆは、２０ｍｇ／Ｋｇの濃度で５００時間にわたるアイソタイプ対照抗体のインシリコでのグラフ表示である。 ＭＶＺ－ＩｇＧ４と比較した、Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫ及びＰＤ試験のグラフ表示である。図３０Ａは、２００時間の血清中のｃ２１３９Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｂは、２００時間の血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｃは、ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＭＶＺ－ＩｇＧ４の比較である。図３０Ｄは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３９のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｅは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３７－ｅ１７１１のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｆは、２０ｍｇ／Ｋｇの濃度で５００時間にわたるアイソタイプ対照抗体のインシリコでのグラフ表示である。 ＭＶＺ－ＩｇＧ４と比較した、Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫ及びＰＤ試験のグラフ表示である。図３０Ａは、２００時間の血清中のｃ２１３９Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｂは、２００時間の血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｃは、ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＭＶＺ－ＩｇＧ４の比較である。図３０Ｄは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３９のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｅは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３７－ｅ１７１１のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｆは、２０ｍｇ／Ｋｇの濃度で５００時間にわたるアイソタイプ対照抗体のインシリコでのグラフ表示である。 ヒトＣ５ａＲ１マウスにおける異なる用量での例示的なＣ５ａＲ１抗体ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄによる好中球数の変化パーセントのグラフ表示である。 例示的なＣ５ａＲ１抗体、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの内部移行のグラフ表示である。図３２Ａは、Ｕ９３７細胞における、０、６時間及び２４時間にわたるｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの蛍光強度を示す。図３２Ｂは、３００分間にわたる、ニコン共焦点実験によって観察された生細胞におけるｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの両方の内部移行を示す。 例示的なＣ５ａＲ１抗体、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの内部移行のグラフ表示である。図３２Ａは、Ｕ９３７細胞における、０、６時間及び２４時間にわたるｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの蛍光強度を示す。図３２Ｂは、３００分間にわたる、ニコン共焦点実験によって観察された生細胞におけるｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの両方の内部移行を示す。
定義
抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子を指す。「結合する」又は「と免疫反応する」とは、抗体が、所望の１つ以上の抗原決定基と反応することを意味する。抗体には、抗体断片が含まれる。抗体はまた、ポリクローナル、モノクローナル、キメラｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、及びＦａｂ発現ライブラリーを含むが、これらに限定されない。抗体は、全抗体、又は免疫グロブリン、又は抗体断片であってもよい。
抗体依存性細胞傷害：本明細書で使用される場合、用語「抗体依存性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞の存在下での本発明による抗体によるヒト標的細胞の溶解を指す。
Ｆａｂアーム交換：用語「Ｆａｂアーム交換」は、ＩｇＧ４抗体が「半分子」を交換できる現象を指し、本明細書ではＦａｂアーム交換と称する活性である。特に二重特異性分子又はバイパラトピック分子では、これにより、未知の特異性を有する機能的に一価の抗体が生成され、したがって、治療有効性が低下する可能性がある。Ｆａｂアーム交換を阻害するために、Ｆｃドメインに変異を導入することができる。Ｓ２２８Ｐ変異は、インビトロ及びインビボの両方でＩｇＧ４ ＦＡＥを検出不可能なレベルまで防止できることが知られている。
Ｆｃドメイン：本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指す。この用語には、天然配列のＦｃ領域及びバリアントのＦｃ領域が含まれる。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６、又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで延びている。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよいし、存在しなくてもよい。本明細書に別段の指定がない限り、Ｆｃ領域又は定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従っている。
ヒト化抗体：用語「ヒト化抗体」は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する、特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、又はその断片である、非ヒト（例えば、マウス）抗体を含む。典型的には、ヒト化抗体は、相補的決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲからの残基によって置換されるヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６，１９８８）。
ＡＤＣＣの増加：用語「ＡＤＣＣの増加」は、上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの増加、及び／又は上記で試験された抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大パーセンテージの半分を達成するために必要な抗体の濃度の低下のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの増加は、当技術分野で認められた許容可能なアッセイで測定されたＡＤＣＣとの比較したものである。
モノクローナル抗体：用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、わずかな量で存在し得る天然に存在する可能性のある変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位に向けられる。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られた抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。
多重特異性抗体：本明細書で使用される場合、用語「多重特異性抗体」は、同一又は異なる標的上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を有する結合分子、抗体、又はその抗原結合断片を指す。
バイパラトピック抗体：本明細書で使用される場合、用語「バイパラトピック抗体」は、同じ標的抗原分子上の２つの異なる非重複エピトープに結合する能力を有する多重特異性抗体を指す。
Ｋｉ又はＫｄ：本明細書で使用される場合、用語“Ｋｄ”は、本明細書で使用される場合、当技術分野で公知の特定の抗体－抗原相互作用の解離定数を指し、対象組成物について、その同族リガンドへの標的化部分の結合親和性のパラメータとして適用されるであろう。
ＩＣ５０：本明細書で使用される場合、用語「ＩＣ５０」は、リガンドアゴニストの最大生物学的応答の半分を阻害するために必要な濃度を指し、一般的に競合結合アッセイによって決定される。
ＥＣ５０：本明細書で使用される場合、用語「ＥＣ５０」は、半最大有効濃度を指す。ＥＣ５０という用語は、指定された曝露時間後にベースラインと最大値との間の中間の応答を誘導する薬物、抗体又は毒性物質の濃度を指す。より簡単には、ＥＣ５０は、所望の効果の５０％を得るために必要な濃度として定義することができる。
Ｃ５ａ：本明細書で使用される場合、用語「Ｃ５ａ」は、補体成分５ａを指す。
Ｃ５ａＲ１：本明細書で使用される場合、用語「Ｃ５ａＲ１」は、補体成分５ａ受容体１を指す。いくつかの実施形態では、ヒトＣ５ａＲ１は、配列番号３８を含む。いくつかの実施形態では、配列番号３８を含むヒトＣ５ａＲ１の特定のアミノ酸は、表１に小文字で示される（Ｎ２Ｄ及びＮ２７９Ｋ）などの天然バリアントを有する。
リンカー：本明細書で使用される場合、用語「リンカー」は、２つの分子を接続し、多くの場合、２つの分子を好ましい配置に置くのに役立つ分子又は分子群（モノマー又はポリマーなど）を指す。分子を互いに共有結合するために、多くの戦略を使用し得る。これらには、タンパク質又はタンパク質ドメインのＮ末端とＣ末端との間のポリペプチド結合、ジスルフィド結合を介した結合、及び化学架橋試薬を介した結合が含まれるが、これらに限定されない。この実施形態の一態様では、リンカーは、組換え技術又はペプチド合成によって生成されるペプチド結合である。いくつかの実施形態では、リンカーは、柔軟性を提供するアミノ酸残基を含有してもよい。したがって、リンカーペプチドは、主に以下のアミノ酸残基を含み得る：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＴｈｒ。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように、２つの分子が、互いに対して正しい立体構造をとるように、２つの分子を連結するのに適切な長さを有するべきである。この目的に適した長さには、少なくとも１つ及び３０以下のアミノ酸残基が含まれる。一実施形態では、リンカーは、約１～３０アミノ酸長である。別の実施形態では、リンカーは、約１～１５アミノ酸長である。更に、リンカーペプチドに含有するために選択されるアミノ酸残基は、ポリペプチドの活性を著しく妨げない特性を呈するべきである。
好中球：本明細書で使用される場合、用語「好中球」は、末梢血中の白血球の主要クラスを指す。好中球は、細胞外病原体を飲み込んで殺す重要な役割を有する。
ｓｃＦｖ：本明細書で使用される場合、用語「ｓｃＦｖ」は、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドと結合した免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。
Ｆａｂ：本明細書で使用される場合、用語「Ｆａｂ」は、その抗原結合領域又はその可変領域を含む、インタクトな抗体の一部分を含む抗体断片を指す。
好中球減少：本明細書で使用される場合、用語「好中球減少」は、好中球数が少ないことを指す。例えば、ヒト対象において、好中球減少は、ＡＮＣ（絶対好中球数）５００未満からＡＮＣ１５００未満の範囲であり得る。ＡＮＣは、血液１マイクロリットル当たりの細胞で測定される）。マウスにおける好中球減少は、血液１ｍｍ３当たり＜１０個の好中球として定義される。
インビトロ：本明細書で使用される場合、用語「インビトロ」は、多細胞生物体内ではなく、例えば、試験管又は反応容器、細胞培養など、人工環境で起こる事象を指す。
インビボ：本明細書で使用される場合、用語「インビボ」は、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物体内で起こる事象を指す。細胞ベースのシステムという観点から、この用語は、（例えば、インビトロシステムとは対照的に）生きた細胞内で起こる事象を指すように使用され得る。
対象：本明細書で使用される場合、用語「対象」は、ヒト又は任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、又は霊長類）を指す。ヒトには、出生前及び出生後の形態が含まれる。多くの実施形態では、対象はヒトである。対象は、疾患の診断又は治療のために医療提供者を訪れる人を指す、患者であってもよい。用語「対象」は、本明細書では「個人」又は「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患若しくは障害に罹患するか、又は罹患しやすいが、疾患若しくは障害の症状を見せる場合もあるが、見せない場合もある。
機能不全：本明細書で使用される場合、用語「機能不全」は、異常な機能を指す。分子（例えば、タンパク質）の機能不全は、そのような分子に関連する活性の増加又は減少によって引き起こされる場合がある。分子の機能不全は、分子自体に関連する欠陥、又は分子と直接的若しくは間接的に相互作用するか、分子を調節する他の分子に関連する欠陥によって引き起こされ得る。
誘導体：本明細書で使用される場合、用語「誘導体」は、抗体、又はＣ５ａＲ１抗体に関連して使用される場合、元の分子の機能及び／又は特性の少なくとも一部を保持する、元の分子の配列の一部を有する部分を指す。
同一性：本明細書で使用される場合、用語「同一性」は、当技術分野で公知の２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の、これらの分子の配列を比較する、配列間の関係を指す。関係は、行うことによって決定される。当技術分野では、「同一性」はまた、核酸分子又はポリペプチド間の配列関連性の程度も意味し、場合によっては、複数のヌクレオチド配列又は複数を意味する。それはアミノ酸配列文字列間の一致によって決定され得る。「同一性」は、特定の数学モデル又はコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処されるギャップアライメント（存在する場合）と、２つ以上の配列のより小さい配列との間を意味する。同一性の一致パーセントを測定する。
類似性又は類似：本明細書で使用される場合、用語「類似性」は、関連する概念に関して当技術分野で使用されるが、「同一性」とは対照的に、「類似性」は、同一性及び保存的置換の一致の両方を指す。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個のアミノ酸のうち１０個の同一のアミノ酸を有し、残りは全て非保存的置換である場合、同一性のパーセントと類似性のパーセントは、両方とも５０％である。同じ例では、更に５つの保存的置換がある場合、同一性のパーセントは５０％のままであるが、類似性のパーセントは７５％である。したがって、保存的置換がある場合、２つのポリペプチド間の類似性のパーセントは、これら２つのポリペプチド間の同一性のパーセントよりも高くなる。
治療：本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療」、又は「治療すること」は、特定の疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を部分的又は完全に軽減、改善、緩和、阻害、予防、発症遅延、重症度の低減、及び／又は発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。治療は、疾患と関連した病状の発症リスクを減少させる目的で、疾患の兆候を示さない対象及び／又は疾患の初期兆候のみを示す対象に施され得る。
ベクター：用語「ベクター」は、外来性遺伝物質を複製又は発現することができる別の細胞に人為的に運ぶために使用されるポリヌクレオチド（通常ＤＮＡ）を指す。非限定的な例示的なベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター、コスミド、及び人工染色体が挙げられる。このようなベクターは、細菌及びウイルス源を含む様々な源に由来し得る。プラスミドの非限定的な例示的なウイルス源は、アデノ随伴ウイルスである。
本開示の様々な態様を、以下のセクションで詳細に説明する。セクションの使用は、本開示の制限を意図するものではない。各セクションは、本開示の任意の態様に適用することができる。本出願では、別段の記載がない限り、「又は」の使用は「及び／又は」を意味する。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、単数形及び複数形の両方の指示対象を含む。
発明の詳細な説明
本開示は、抗体、核酸、及びそれらを製造するためのシステム、並びに機能不全のＣ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸シグナル伝達に関連する疾患、特に、自己免疫疾患、例えば限定されるものではないが、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、関節リウマチ、炎症性腸疾患、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、非典型溶血性尿毒症症候群などの治療のための使用及び方法を記載する
ループス腎炎、ＩｇＡ腎症、重症筋無力症、黄斑変性、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、神経障害性疼痛、ＣＯＶＩＤ－１９感染症、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患、水疱性類天疱瘡、壊疽性膿皮症、及び乾癬。
ＡＮＣＡ関連血管炎は、小さな血管の破壊及び炎症を特徴とする疾患群（多発血管炎性肉芽腫症、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症及び顕微鏡的多発血管炎）である。抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）は、ＡＮＣＡ関連血管炎の原因である。動物モデル及びインビトロ実験における実験データは、プライミングされた好中球がＡＮＣＡによって活性化され、好中球上でＣ５ａ受容体と係合するＣ５ａを生成することを実証している。これによりより多くの好中球を引き付け、ＡＮＣＡによる活性化のため次々とプライミングする。Ｃ５ａのＣ５ａＲ１への結合は、ＡＮＣＡ関連血管炎の発病において中心的な役割を果たしている可能性がある。ＡＮＣＡ血管炎の一般的な概略図を図１に示す。標準治療はグルココルチコイドによる免疫抑制療法であり、これらの療法は実質的に短期及び長期毒性と関連している。Ｃ５ａＲ１結合拮抗薬小分子であるアバコパンは、最近、ＡＮＣＡ関連血管炎での使用がＦＤＡによって認められた。しかしながら、インビトロデータは、Ｃ５ａのアバコパン拮抗作用が高濃度のＣ５ａによって克服され得ることを示唆している。活性ＡＡＶにおける炎症部位のＣ５ａ濃度は、１００ｎＭに達する可能性があることが知られている。このような条件下で、アバコパンによるＣ５ａＲ１の阻害を克服できることが知られている。この経路の機能不全に関連する障害に対抗するために、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸の強い阻害剤の開発が求められている。本開示は、生物学的Ｃ５ａＲ１拮抗薬を使用した、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸機能不全関連障害の治療の組成物及び方法を提供する。
一部の態様では、本明細書では、Ｃ５ａＲ１に結合し及びＣ５ａＲ１に拮抗する例示的な抗体の２つのグループが提供される。本開示における２つの抗体グループの概略図を図２に示す。
細胞外ドメインに結合するアゴニストのエネルギーは、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインにアロステリックな立体構造変化を伝達し、Ｇ－タンパク質結合及びシグナル伝達を可能にする。Ｃ５ａＲ１には、２つの既知のアゴニストを有する：Ｃ５ａ及びＣ５ａ ｄｅｓＡｒｇ。Ｃ末端アルギニンがカルボキシペプチダーゼＮによって速やかに切断されてＣ５ａｄｅｓＡｒｇを形成するため、Ｃ５ａは血清中で短い半減期を有し、これは低下した親和性でＣ５ａＲ１に結合し、偏ったシグナル伝達を示す。Ｃ５ａｄｅｓＡｒｇは、Ｃ５ａと異なり、β－アレスチン経路にシグナル伝達せず、顆粒球放出を刺激しない。しかしながら、Ｃ５ａｄｅｓＡｒｇは好中球走化性を刺激するので、炎症部位への好中球の遊走を防ぐためにＣ５ａｄｅｓＡｒｇ結合をブロックすることも興味深い。Ｃ５ａ ｄｅｓＡｒｇシグナル伝達は、走化性を支持し、脱感作を受けにくい（例えば、好中球は、Ｃ５ａ ｄｅｓＡｒｇではなく、高濃度のＣ５ａに到達するまで遊走し続ける）。一実施形態では、Ｃ５ａ結合をブロックするオルソステリック拮抗薬（例えば、本明細書に記載される抗体分子）はまた、Ｃ５ａ ｄｅｓＡｒｇ結合も阻害する（例えば、ブロックする）。いくつかの実施形態では、Ｃ５ａ結合の阻害は炎症部位で必要とされる一方、Ｃ５ａ ｄｅｓＡｒｇの阻害は末梢で必要とされ、好中球の炎症部位への移動を防止することができる。標的化Ｃ５ａＲ１は、典型的には、膜侵襲複合体経路（Ｃ５ｂ）はそのまま残される。
単一特異性Ｃ５ａＲ１拮抗薬の設計
いくつかの実施形態では、本明細書に提示される抗体は、「部位Ｉ」とも呼ばれる、配列番号１又は配列番号２によって定義される部位に結合する。部位Ｉは、典型的にはＣ５ａＲ１のＮ末端残基（例えば、Ｎ末端３７残基）を含み、配列番号１又は配列番号２によって定義される柔軟なランダムコイル構造を形成する。部位Ｉに結合する抗体分子は、典型的には、部位Ｉ又はそのサブセットの全ての残基に結合することができる。例えば、部位Ｉに結合する抗体分子は、部位Ｉの１つ以上の残基と接触する。一実施形態では、部位Ｉは、概して、多数の硫酸化残基（例えば、硫酸化チロシンが存在する）及び多数のＡｓｐ残基を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提示される抗体は、「部位ＩＩ」とも呼ばれる、配列番号３によって定義される部位に結合する。部位ＩＩは、典型的には、細胞外ループ２（ＥＣＬ２）と、Ｃ５ａＲ１の前庭（ｖｅｓｔｉｂｕｌｅ）を形成する膜貫通残基とを含む。一実施形態では、部位ＩＩに結合する抗体分子は、ＥＣＬ２に結合するが、ＥＣＬ１及び／又はＥＣＬ３には結合しないか、又は実質的には結合しない。一実施形態では、部位ＩＩに結合する抗体分子は、ＥＣＬ２及びＥＣＬ１に結合するが、ＥＣＬ３には結合しないか、又は実質的には結合しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体分子は、配列番号３のアミノ酸によって定義される部位ＩＩを標的とするように設計される。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＲ１７５～Ｇ１８９を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１８０～Ｐ１８３を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１８０～Ｐ１８４を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１７８～Ｐ１８３を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１（配列番号３８）の残基Ｒ３５、Ｈ１０１、Ｖ１７６、Ｖ１７７、Ｒ１７８、Ｅ１７９、Ｅ１８０、Ｙ１８１、Ｆ１８２、Ｐ１８３ Ｐ１８４、Ｋ１８５、Ｌ１８７、Ｄ１９１、Ｓ１９３、Ｈ１９４、Ｅ２６６、Ｐ２６７、Ｓ２６８、Ｆ２７２、Ｌ２７３、及び／又はＫ２７６のうちの１つ以上が、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとって重要である。いくつかの実施形態では、配列番号３８の残基Ｅ１８０、Ｙ１８１、Ｆ１８２、及び／又はＰ１８３のうちの１つ以上は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとってきわめて重要なエピトープである。一実施形態では、配列番号３８のアミノ酸残基Ｗ１０２は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとってきわめて重要である。
配列番号１、配列番号２及び配列番号３を表１に提示する。
表１．部位Ｉ、部位ＩＩ及びヒトＣ５ａＲ１のアミノ酸配列。バリアント（Ｎ２Ｄ及びＮ２７９Ｋ）は、小文字で示される。
一部の態様では、本明細書に提示される、例示的なヒト化部位Ｉ（配列番号１又は配列番号２）結合抗体は、配列番号１６若しくは配列番号３９～配列番号４３のアミノ酸配列又はそれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ又はＶＨ）、及び／あるいは配列番号１７若しくは配列番号４４～配列番号４９のアミノ酸配列又はそれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ又はＶＬ）を含む。表２ａは、例示的な部位Ｉ結合抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を要約する。いくつかの実施形態では、３つの重鎖相補性決定領域、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３は、ＨＣＶＲ又はＶＨ（配列番号１６又は配列番号３９～配列番号４３）内に存在する。いくつかの実施形態では、３つの軽鎖相補性決定領域、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、ＬＣＶＲ又はＶＬ（配列番号１７又は配列番号４４～配列番号４９）内に存在する。例示的なヒト化全長部位Ｉ結合抗体は、配列番号１６又は配列番号３９～４３のアミノ酸配列から選択されるＶＨと、配列番号１７又は配列番号４４～４９のアミノ酸配列から選択されるＶＬとの任意の組み合わせを含み得ることに留意されたい。
ヒト化全長部位Ｉ結合抗体は、配列番号１６若しくは配列番号３９～４３のアミノ酸配列、又は配列番号１６若しくは配列番号３９～４３と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるＶＨと、配列番号１７若しくは配列番号４４～４９のアミノ酸配列、又は配列番号１７若しくは配列番号４４～４９と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるＶＬとの任意の組み合わせを含み得ることに留意されたい。
いくつかの実施形態において、例示的な部位Ｉ結合抗体、ｅ１７１１は、配列番号１７の重鎖、又は配列番号１７と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、例示的な部位Ｉ結合抗体、ｅ１７１１は、配列番号１６の軽鎖、又は配列番号１６と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、例示的な部位Ｉ結合抗体、ｅ１７１１は、配列番号４３の重鎖、又は配列番号４３と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、例示的な部位Ｉ結合抗体、ｅ１７１１は、配列番号４８の軽鎖、又は配列番号４８と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提示される例示的な部位Ｉ結合抗体、ｅ１７１１は、配列番号７７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む重鎖、及び／あるいは配列番号７８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、ｅ１１Ｌ可変軽鎖及びｅ１１Ｈ可変重鎖を含む。
表２ａ．例示的なヒト化部位Ｉ結合抗体の可変領域
表２ｂ．例示的なヒト化部位Ｉ結合抗体の重鎖及び軽鎖
一部の態様では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ結合抗体は、配列番号１４若しくは配列番号５０～配列番号５９のアミノ酸配列又はそれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含むＨＣＶＲ又はＶＨ、及び／又は配列番号６０～配列番号６８のアミノ酸配列、又はそれらと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含むＬＣＶＲ又はＶＬを含む。表３は、例示的な部位ＩＩ結合抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を要約する。いくつかの実施形態では、３つの重鎖相補性決定領域、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３は、ＨＣＶＲ又はＶＨ（配列番号５０～配列番号５９）内に存在する。いくつかの実施形態では、３つの軽鎖相補性決定領域、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、ＬＣＶＲ又はＶＬ（配列番号６０～配列番号６８）内に存在する。
ヒト化全長部位ＩＩ結合抗体は、配列番号１４若しくは配列番号５０～５９のアミノ酸配列、又は配列番号１４若しくは配列番号５０～５９のうちのいずれかのアミノ酸配列と、８５％、９０％、９５％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるＶＨと、配列番号１５若しくは配列番号２５若しくは配列番号６０～６８のアミノ酸配列、又は配列番号１５若しくは配列番号２５若しくは配列番号６０～６８のうちのいずれかのアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるＶＬとの任意の組み合わせを含み得ることに留意されたい。
表３．例示的なヒト化部位ＩＩ結合抗体の可変領域
一部の態様では、例示的な部位ＩＩ結合抗体は、抗体ｃ２１３９を産生するためのｃ３９Ｌ（配列番号１４）とｃ２１Ｈ（配列番号２５）との組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ結合抗体、ｃ２１３９は、配列番号４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む重鎖、及び／あるいは配列番号５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、ｃ３９Ｌ可変軽鎖及びｃ２１Ｈ可変重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ結合抗体、ｃ２１３７は、配列番号４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む重鎖、及び／あるいは配列番号７５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、ｃ３７Ｌ可変軽鎖及びｃ２１Ｈ可変重鎖を含む。
一部の態様では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ（配列番号３）結合抗体、ｃ２１３９は、ＨＣＶＲ又はＶＨを含む重鎖を含み、ＨＣＶＲ又はＶＨは、それぞれ配列番号６、配列番号７及び配列番号８を含む３つの重鎖相補性決定領域、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ結合抗体は、ＬＣＶＲ又はＶＬを更に含み、ＬＣＶＲ又はＶＬは、それぞれ配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１を含む３つの軽鎖相補性決定領域、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むか、又は配列番号６、７、８、９、１０及び／若しくは１１のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。重鎖、軽鎖、並びにＨＣＤＲ及びＬＣＤＲの配列を表４ａに提示する。
一部の態様では、本明細書に提示される例示的な部位ＩＩ結合抗体、ｃ２１３９は、配列番号１４のアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含むＨＣＶＲ又はＶＨ、及び／あるいは配列番号２５のアミノ酸配列又は、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の同一性を有する配列を含むＬＣＶＲ若しくはＶＬを含む。
一態様では、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合することができる例示的な抗体分子、ｃ２１３９が本明細書に記載され、この抗体分子は、部位ＩＩ（配列番号３）のアミノ酸の１つ以上の残基に結合することができるＣ５ａＲ１抗体分子と競合する。
いくつかの実施形態では、例示的な部位ＩＩ結合抗体は、ＶＨの８９位にグリシン又はアラニンを含む。いくつかの実施形態では、例示的な部位ＩＩ結合抗体は、９１位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、例示的な部位ＩＩ結合抗体は、９１位にチロシン、及びＶＨの８９位にグリシン又はアラニンを含む。
表４ａ．例示的なヒト化Ｃ５ａＲ１部位ＩＩ抗体の重鎖、軽鎖、ＨＣＤＲ、及びＬＣＤＲのアミノ酸配列
いくつかの実施形態では、例えばｃ２１３９などの例示的な部位ＩＩ結合抗体のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、Ｆｃドメインに更に連結される。Ｆｃドメインは、リンカーを介して互いに連結されたＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを更に含む。しかしながら、即時開示は、Ｆｃドメインを欠く部位ＩＩ結合生体分子も包含する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、１０ｐＭ～５０ｎＭの解離定数（Ｋｄ）でＣ５ａＲ１に結合し、それによってＣ５ａＲ１とＣ５ａの会合を阻害し、それによってＣ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸経路と拮抗する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１抗体の効果的な阻害は、Ｇαシグナル伝達の阻害、好中球走化性の阻害、ＣＤ１１ｂ発現の阻害、及びカルシウムシグナル伝達の阻害によって測定される。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、Ｃ５ａＲ２、又は他のＧＰＣＲに結合しないか、又は実質的に結合しない。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、ヒト好中球に結合することができる。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的な部位Ｉ又は部位ＩＩ結合抗体は、内部移行する。いくつかの実施形態では、内部移行には少なくとも６時間かかる。いくつかの実施形態では、内部移行には少なくとも１２時間かかる。いくつかの実施形態では、内部移行には６時間未満がかかる。
多特異性Ｃ５ａＲ１拮抗薬の設計
一部の態様では、本明細書に提示される抗体は、多重特異性抗体である。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、多重パラトピック抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変領域配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変領域配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。二重特異性抗体又はバイパラトピック抗体は、２つ以下の抗原又はエピトープに対する特異性を有する。二重特異性又はバイパラトピック抗体分子は、典型的には、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変領域配列、及び第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変領域配列によって特徴付けられる。一実施形態では、二重特異性抗体分子又はバイパラトピック抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片とを含む。一実施形態では、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のエピトープは、Ｃ５ａＲ１上（例えば、部位Ｉ、例えば本明細書に記載されるＮ末端領域を含む）に位置し、第２のエピトープは、Ｃ５ａＲ１上（例えば、部位ＩＩ、例えば本明細書に記載されるＥＣＬ２を含む）に位置する。一実施形態では、抗体は、Ｃ５ａＲ１の部位Ｉ（配列番号１又は配列番号２）及び部位ＩＩ（配列番号３）に結合するバイパラトピック抗体である。
一部の態様では、バイパラトピック抗体は、表２ａからのＶＨ及びＶＬの対を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体は、表３からのＶＨ及びＶＬの対を含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体は、表２ａからのＶＨ及びＶＬの対、並びに表３からのＶＨ及びＶＬの対を含む。一部の態様では、バイパラトピック抗体は、配列番号１４若しくは配列番号５０～５９のアミノ酸配列、又は配列番号１４若しくは配列番号５０～５９のうちのいずれかのアミノ酸配列と、８５％、９０％、９５％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるＶＨと、配列番号１５若しくは配列番号２５若しくは配列番号６０～６８のアミノ酸配列、又は配列番号１５若しくは配列番号２５若しくは配列番号６０～６８のうちのいずれかのアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択されるＶＬと、を含む。一部の態様では、バイパラトピック抗体は、配列番号１６若しくは配列番号３９～４３のアミノ酸配列、又は配列番号１６若しくは配列番号３９～４３と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるＶＨと、配列番号１７若しくは配列番号４４～４９のアミノ酸配列、又は配列番号１７若しくは配列番号４４～４９と８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバイパラトピック抗体の１つのエピトープは、配列番号１又は配列番号２によって定義される、Ｃ５ａＲ１の硫酸化Ｎ末端ペプチド又は部位Ｉを標的とするよう設計される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体分子によって標的とされる部位Ｉ残基は、硫酸化されている。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基Ｔ８（トレオニン８）、Ｄ１０（アスパラギン酸１０）、Ｙ１１（チロシン１１）、Ｙ１４（チロシン１４）、及び／又はＤ１５（アスパラギン酸１５）のうちの１つ以上が、きわめて重要な部位Ｉエピトープ接触点である。いくつかの実施形態では、Ｙ１１及び／又はＹ１４での硫酸化は、本明細書に記載される部位Ｉ抗体分子の結合にとってきわめて重要である。いくつかの実施形態では、コアエピトープは、本明細書に記載される部位Ｉ抗体分子の結合のために、配列番号３８のＴ７～Ｄ１８の１２アミノ酸にわたる。いくつかの実施形態では、コアエピトープは、本明細書に記載される部位Ｉ抗体分子の結合のために、配列番号３８のＴ８～Ｄ１８のアミノ酸にわたる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体分子は、配列番号３のアミノ酸によって定義される部位ＩＩを標的とするように設計される。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＲ１７５～Ｇ１８９を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１８０～Ｐ１８３を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１８０～Ｐ１８４を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１７８～Ｐ１８３を包含するアミノ酸は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体分子の結合のためのコアエピトープである。いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１（配列番号３８）の残基Ｒ３５、Ｈ１０１、Ｖ１７６、Ｖ１７７、Ｒ１７８、Ｅ１７９、Ｅ１８０、Ｙ１８１、Ｆ１８２、Ｐ１８３ Ｐ１８４、Ｋ１８５、Ｌ１８７、Ｄ１９１、Ｓ１９３、Ｈ１９４、Ｅ２６６、Ｐ２６７、Ｓ２６８、Ｆ２７２、Ｌ２７３、及び／又はＫ２７６のうちの１つ以上が、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとって重要である。いくつかの実施形態では、配列番号３８のＥ１８０、Ｙ１８１、Ｆ１８２、及び／又はＰ１８３のうちの１つ以上は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとってきわめて重要なエピトープである。一実施形態では、配列番号３８のアミノ酸残基Ｗ１０２は、本明細書に記載される部位ＩＩ抗体の結合にとってきわめて重要である。
いくつかの実施形態では、本開示に提示されるバイパラトピック抗体は、Ｆａｂ－Ｆｃ及び単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）を含み、Ｆｃはリンカーを介してｓｃＦｖに連結される。いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインは部位Ｉに結合し、ｓｃＦｖは部位ＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、本開示に提示されるバイパラトピック抗体は、Ｆａｂ－Ｆｃ及び単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインは部位ＩＩに結合し、ｓｃＦｖは部位Ｉに結合し、Ｆｃはリンカーを介してｓｃＦｖに連結される。
いくつかの実施形態において、本開示に提示されるバイパラトピック抗体は、重鎖を含む四価抗体であり、この重鎖は、図３Ａに示すようにｓｃＦＶドメインに連結されたＶＨ－Ｆｃを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体の部位ＩＩ結合アームは、ＶＨの８９位にグリシン又はアラニンを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体の部位ＩＩ結合アームは、９１位にチロシンを含む。いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体の部位ＩＩ結合アームは、９１位にチロシン、及びＶＨの８９位にグリシン又はアラニンを含有する。
いくつかの実施形態では、本開示に提示されるバイパラトピック抗体は、軽鎖を含む四価抗体であり、この軽鎖は、図３Ｂに示すようにｓｃＦｖドメインに連結されたＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体は、２つのアーム単鎖Ｆａｂ－Ｆｃ設計を備えた二重特異性抗体であり、２つの半抗体（共通のＦｃヘテロ二量体及び固有のＶＨ－ＣＨドメイン及びＶＬ－ＣＬドメイン）を組み立てるための、ＣＨ３ドメインにおける「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ）」（ＫｉＨ）変異を含む。いくつかの実施形態では、ＫｉＨ変異は、一方のＣＨ３ドメインのＴ３６６Ｙ変異を使用してノブを作製し、もう一方のＣＨ３ドメインのＹ４０７Ｔ変異を使用してホールを作製できることを含む。いくつかの実施形態では、一方のＣＨ３ドメインのＦ４０５Ａ変異を使用してノブを作製し、もう一方のＣＨ３ドメインのＴ３９４Ｗ変異を使用してホールを作製することができる。いくつかの実施形態では、一方のＣＨ３ドメインのＴ３６６Ｗ変異を使用してノブを作製し、もう一方のＣＨ３ドメインのＹ４０７Ａ変異を使用してホールを作製することができる。いくつかの実施形態では、バイパラトピックｓｃＦｖ－Ｆｃ分子は、ノブ・ホール技術（例えば、ホール変異：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、ノブ変異：Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗを含む）を用いて作製することができる。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体は、表４ｂに記載される抗体フォーマットを含む。
表４ｂ．バイパラトピック抗体のフォーマット
一実施形態では、バイパラトピック抗Ｃ５ａＲ１抗体分子は、２つの重鎖可変領域と２つの軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗Ｃ５ａＲ１抗体分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、又は単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む。
いくつかの実施形態では、本出願で使用されるＦｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、Ｆｃ部分を含むか、又はそれらに由来する。上述のＫｉＨ変異に加えて、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８Ｐ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ２２８Ｐは、抗体の均質性を強化した。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むか、又はＩｇＧ Ｆｃドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインに由来するか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４ Ｆｃドメインに由来するか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインに由来するか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメインに由来するか、又はそれを含む。
いくつかの実施形態では、バイパラトピック抗体は、リンカーを介して互いに連結された２つのｓｃＦｖ領域を含み、第１のｓｃＦｖは部位Ｉに結合し、第２のｓｃＦｖは部位ＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ－リンカー－ｓｃＦｖバイパラトピック抗体は、配列番号１２の重鎖配列、及び配列番号１３の軽鎖配列、又は配列番号１２及び配列番号１３と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一である任意の配列を含む四価抗体である。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ－リンカー－ｓｃＦｖバイパラトピック抗体は、配列番号１２の重鎖配列、及び配列番号７６の軽鎖配列、又は配列番号１２及び配列番号７６と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一である任意の配列を含む四価抗体である。
表４ｃは、バイパラトピック抗体の重鎖配列及び軽鎖配列を示す。
表４ｃ．ヒト化Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
いくつかの実施形態では、バイパラトピックは、可変領域１及び可変領域２の２つの可変領域を有する。各可変領域は、可変重鎖及び可変軽鎖を含む。
例示的な実施形態では、可変領域１は、配列番号１４を含む可変重鎖１（ＶＨ１）と、配列番号１５を含む可変軽鎖１（ＶＬ）と、を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、可変領域２は、それぞれ配列番号１６及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む、可変重鎖２（ＶＨ２）及び可変軽鎖２（ＶＬ２）を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、配列番号１４のＶＨ１、配列番号１５のＶＬ１、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１７のＶＬ２を含むバイパラトピック抗体は、ｃ２１３７－ｅ１７１１と呼ばれる。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＨ１は、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、３つのＨＣＤＲである、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むか、又は配列番号６、７及び／若しくは８のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＨ２は、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、３つのＨＣＤＲである、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５及びＨＣＤＲ６を含むか、又は配列番号１８、１９及び／若しくは２０のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＬ１は、配列番号９、配列番号１０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む、３つのＬＣＤＲである、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むか、又は配列番号９、１０及び／若しくは２１のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＬ２は、配列番号２２、配列番号２３及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む、３つのＬＣＤＲである、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５及びＬＣＤＲ６を含むか、又は配列番号２２、２３及び／若しくは２４のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。表５は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＬ１、ＶＬ２、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５、ＨＣＤＲ６、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５、及びＬＣＤＲ６のアミノ酸配列を提示する。
いくつかの例示的な実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５、ＨＣＤＲ６、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５及びＬＣＤＲ６は、配列番号１６～２１のアミノ酸配列とは、５アミノ酸残基を超えないで異なるアミノ酸配列を含む。
表５．ヒト化Ｃ５ａＲ１バイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１）可変ドメイン及びＣＤＲのアミノ酸配列
いくつかの例示的な実施形態では、バイパラトピック抗体の可変領域は、可変領域１を含み、可変領域１は、それぞれ、配列番号１６及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む、ＶＨ１及びＶＬ１を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、バイパラトピック抗体の可変領域は、可変領域２を含み、可変領域２は、配列番号１４を含むＶＨ２及び配列番号１５を含むＶＬ２を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＨ１は、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、３つのＨＣＤＲである、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含むか、又は配列番号１８、１９及び／若しくは２０のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＨ２は、配列番号６、配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、３つのＨＣＤＲである、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５及びＨＣＤＲ６を含むか、又は配列番号６、７及び／若しくは８のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＬ１は、配列番号２２、配列番号２３及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む、３つのＬＣＤＲである、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むか、又は配列番号２２、２３及び／若しくは２４のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、ＶＬ２は、配列番号９、配列番号１０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む、３つのＬＣＤＲである、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５及びＬＣＤＲ６を含むか、又は配列番号９、１０及び／若しくは２１のアミノ酸とは、５、４、３、２、若しくは１アミノ酸を超えないで異なる配列を含む。表５は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＬ１、ＶＬ２、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５、ＨＣＤＲ６、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５、及びＬＣＤＲ６のアミノ酸配列を提示する。
いくつかの例示的な実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ４、ＨＣＤＲ５、ＨＣＤＲ６、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ４、ＬＣＤＲ５及びＬＣＤＲ６は、配列番号１６～２１のアミノ酸配列とは、５アミノ酸残基を超えないで異なるアミノ酸配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、バイパラトピック抗体の可変領域は、可変領域１を含み、可変領域１は、それぞれ、配列番号１４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む、ＶＨ１及びＶＬ１を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域１は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ１の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、バイパラトピック抗体の可変領域は、可変領域２を含み、可変領域２は、それぞれ、配列番号１６及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む、ＶＨ２及びＶＬ２を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、可変領域２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ２の配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含む。
いくつかの例示的な実施形態では、配列番号１４のＶＨ１、配列番号２５のＶＬ１、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１７のＶＬ２を含むバイパラトピック抗体は、ｃ２１３９－ｅ１７１１と呼ばれる。
いくつかの例示的な実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する例示的なバイパラトピック抗体は、配列番号３８のアミノ酸残基Ｔ８（トレオニン８）、Ｄ１０（アスパラギン酸１０）、Ｙ１１（チロシン１１）、Ｙ１４（チロシン１４）、及び／又はＤ１５（アスパラギン酸１５）のうちの１つ以上に結合する。
いくつかの例示的な実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する例示的なバイパラトピック抗体は、配列番号３８のアミノ酸残基Ｒ１７５～Ｇ１８９に結合する。
いくつかの例示的な実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する例示的なバイパラトピック抗体は、配列番号３８のアミノ酸残基Ｅ１８０～Ｐ１８３に結合する。
いくつかの例示的な実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する例示的なバイパラトピック抗体は、配列番号３８のアミノ酸残基Ｅ１８０～Ｐ１８４に結合する。
いくつかの例示的な実施形態では、Ｃ５ａＲ１に結合する例示的なバイパラトピック抗体は、配列番号３８のアミノ酸残基Ｅ１７８～Ｐ１８３に結合する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なバイパラトピック抗体は、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なバイパラトピック抗体は、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する。
いくつかの実施形態では、Ｃ５ａＲ１に対する例示的なバイパラトピック抗体は、内部移行する。いくつかの実施形態では、内部移行には少なくとも６時間かかる。いくつかの実施形態では、内部移行には少なくとも１２時間かかる。いくつかの実施形態では、内部移行には６時間未満がかかる。
いくつかの例示的な実施形態では、単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体は、抗体の熱安定性を強化するために改変又は変異させ得る。抗体の熱安定性は、凝集開始温度を決定することによって評価することができる。抗体の安定性を高める方法の１つは、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）によって測定される熱転移中点（ｔｈｅｒｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｍｉｄｐｏｉｎｔ）（Ｔｍ）を上昇させることである。一般に、タンパク質Ｔｍは、その安定性と相関し、溶液中のアンフォールディング及び変性に対するその感受性、並びにタンパク質のアンフォールド傾向に依存する分解プロセスと逆相関する。多くの研究により、ＤＳＣによる熱安定性として測定された製剤の物理的安定性のランキングと、他の方法によって測定された物理的安定性との間の相関関係が見出されている（Ｍａａ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１４０：１５５－６８、Ｒｅｍｍｅｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１５：２００－８、Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．（２００３）ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉ．５Ｅ８：２００３、Ｂｅｄｕ－Ａｄｄｏ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１：１３５３－６１、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３：３０７６－８９）。製剤研究では、Ｆａｂ Ｔｍが対応するｍＡｂの長期の物理的安定性に影響を与えることを示唆している。
いくつかの例示的な実施形態では、ジスルフィド結合の戦略的導入は、単量体タンパク質及びマルチサブユニットタンパク質を安定化することができ、抗体の熱安定性を強化する役割を果たす。
いくつかの例示的な実施形態では、トリプトファン（ＴＲＰ）、チロシン（ＴＹＲ）、フェニルアラニン（ＰＨＥ）、及びヒスチジン（ＨＩＳ）などの芳香族アミノ酸（ＡＡ）とのπスタッキング相互作用の戦略的導入は、抗体の熱安定性の強化に役割を果たす。
いくつかの実施形態では、反対の正又は負の全電子電荷を有するアミノ酸側鎖の間に生じる塩橋、すなわち（中性ｐＨで）Ｇｌｕ又はＡｓｐ対Ａｒｇ又はＬｙｓの戦略的導入は、タンパク質、特に抗体の安定性を強化する。
いくつかの例示的な実施形態では、単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体は、１つ以上の熱安定性を強化する改変を含む。いくつかの実施形態では、熱安定性を強化する改変は、システイン残基の導入である。いくつかの実施形態において、バイパラトピック抗体は、熱安定性を強化するために、配列番号１２の５５９位及び配列番号１２の６３０位にシステインを含む。
いくつかの実施形態では、例示的なバイパラトピック抗体のＴｍは、６５℃を超える。いくつかの実施形態では、例示的なバイパラトピック抗体のＴｍは、６０℃を超える。例示的なバイパラトピック抗体のＴｍは、５５℃を超える。いくつかの実施形態では、例示的なバイパラトピック抗体のＴｍは、５０℃を超える。
いくつかのタイプのバイパラトピック抗体分子は、部位Ｉ及び部位ＩＩの結合ドメイン又は抗原結合断片を架橋して、二重特異性抗体を作成することによって生成される。好適な架橋剤としては、適切なスペーサーによって分離された２つの別個の反応性基を有するヘテロ二官能性のもの（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）又はホモ二官能性のもの（例えば、ジスクシンイミジル亜硫酸塩）が挙げられる。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌから入手可能である。
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ｓｃＦｖ抗体又は単鎖抗体をＦａｂのＦｃドメインに連結するために使用される。好適なリンカーのいくつかの例には、単一のグリシン（Ｇ）残基、ジグリシンペプチド（ＧＧ）、トリペプチド（ＧＧＧ）、４つのグリシン残基を有するペプチド（ＧＧＧＧ；配列番号２６）、５つのグリシン残基を有するペプチド（ＧＧＧＧＧ；配列番号２７）、６つのグリシン残基を有するペプチド（ＧＧＧＧＧＧ；配列番号２８）、７つのグリシン残基を有するペプチド（ＧＧＧＧＧＧＧ；配列番号２９）、８つのグリシン残基を有するペプチド（ＧＧＧＧＧＧＧＧ；配列番号３０）が含まれる。ペプチドＧＧＧＧＳ（配列番号３１）、ペプチドＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３２）、ペプチドＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３３）、ペプチドＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３４）、ペプチドＧＧＳＧＳＳＧＳＧＧ（配列番号３５）、ＱＲＩＥＧ（配列番号３６）及びペプチドＧＱＰＫＡＡＰ（配列番号３７）などのアミノ酸残基の他の組み合わせを使用してもよい。他の好適なリンカーには、単一のＳｅｒ残基、及びＶａｌ残基、ジペプチドＲＴＱＰ、ＳＳ、ＴＫ、ＳＬ、ＴＫＧＰＳ、ＴＶＡＡＰ、ＱＰＫＡＡが含まれる。上述の例は、いかなる方法でも本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、グリシン、及びプロリンからなる群から選択されるランダムに選択されたアミノ酸を含むリンカーは、結合タンパク質に好適であることが示されている。リンカー配列の追加の説明については、例えば、ＷＯ２０１２／１３５３４５を参照されたい。
リンカー中のアミノ酸残基の同一性及び配列は、リンカー内で達成するために必要な二次構造要素のタイプに応じて変化し得る。例えば、グリシン、セリン、及びアラニンは、最大限の柔軟性を有するリンカーに最良である。グリシン、プロリン、トレオニン、及びセリンのいくつかの組み合わせは、より剛直で伸長したリンカーが必要な場合に有用である。所望される特性に応じて、必要に応じてより大きなペプチドリンカーを構築するために、任意のアミノ酸残基は、他のアミノ酸残基と組み合わせたリンカーとして考慮することができる。
Ｆｃバリアントの設計
一部の態様では、本明細書に提示される単一特異性及び多重特異性（二重特異性又はバイパラトピックを含む）Ｃ５ａＲ１抗体は、Ｆｃ領域にバリエーション又は変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアント又は変異体は、安定したＩｇＧｌ又はＩｇＧ４二重特異性抗体の産生のためのＦａｂアーム交換を受ける能力を低下させる。（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８，８４－９１（２０１０）を参照されたい）。特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位（Ｋａｂａｔナンバリング）にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｌ３２８Ｒ、Ｈ２６８Ａ及びＮ２９７Ｑ変異からなる群から選択される１つ以上の変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む（（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）に従って指定される）。場合によっては、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１０、９、８、７、６、５、４、３、２又は１個の変異を有する。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ｇ、及びＳ２２８Ｐ変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の低下を呈示する。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の除去（ａｂｌａｔｅ）を呈示する。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を呈示する。いくつかの実施形態では、当該Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の除去を呈示する。
本明細書においてＡＤＣＣとも呼称される、抗体依存性細胞介在性細胞傷害は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に、分泌されたＩｇが結合することにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後標的細胞を殺傷することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。本明細書においてＡＤＣＰとも呼称される、抗体依存性細胞介在性食作用とは、特定の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に、分泌されたＩｇを分泌し、これらの食細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後標的細胞を飲み込み、消化することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に向けられたリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞又は食細胞を刺激することができ、このような殺傷に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの低下を呈示する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの低下を呈示する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの除去を呈示する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の低下を呈示する。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体への結合の除去（ａｂｌａｔｅ）を呈示する。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の低下を呈示する。いくつかの実施形態では、当該Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、食作用の除去を呈示する。
本明細書においてＡＤＣＣとも呼称される、抗体依存性細胞介在性細胞傷害は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に、分泌されたＩｇが結合することにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後標的細胞を殺傷することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。本明細書においてＡＤＣＰとも呼称される、抗体依存性細胞介在性食作用とは、特定の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ及び／又はＦｃγＲＩＩＩｂに対するＦｃＲ）上に、分泌されたＩｇを分泌し、これらの食細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後標的細胞を飲み込み、消化することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に向けられたリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞又は食細胞を刺激することができ、このような殺傷に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの低下を呈示する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上のＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの低下を呈示する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰの除去を呈示する。
Ｆｃバリアントを含む例示的な単一特異性部位ＩＩ（配列番号３）結合抗体はまた、本開示ではｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄとも呼ばれる。Ｆｃバリアントを含む例示的なバイパラトピック抗体はまた、本開示ではｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄとも呼ばれる。Ｆｃバリアントを含む単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の配列を表６に記載する。
表６－Ｆｃ改変された例示的な単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の配列。
いくつかの実施形態において、単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号６９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、バイパラトピック抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、バイパラトピック抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号７９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号８１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体は、配列番号８２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。
疾患の治療のための単一特異性及びバイパラトピックＣ５ａＲ１拮抗薬の使用
本明細書では、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸機能不全に関連する疾患を治療する方法が説明される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１に対する単一特異性抗体及び／又はバイパラトピック抗体は、ＡＮＣＡ関連血管炎などのＣ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸に関連する機能不全を有する対象を治療するのに適している。
本明細書に記載される抗体分子によって治療又は予防され得る例示的な障害又は状態としては、限定されないが、Ｃ５ａＲ１関連障害又はＣ５関連障害が挙げられる。一実施形態では、障害は、好中球のリクルートメント、活性化、及び／又はＮＥＴｏｓｉｓに関連している。一実施形態では、障害は、補体系の活性化及び／又は凝固系の活性化に関連している。一実施形態では、障害は、Ｃ５ａＲ媒介性炎症応答に関連している。一実施形態では、障害は、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）及び／又は腎炎症に関連している。一実施形態では、障害は、走化性（例えば、走化性プライミング）に関連している。一実施形態では、障害は、内皮損傷に関連している。
治療方法は、本明細書に記載される抗体をそれを必要とする対象に投与することを含む。一実施形態では、例示的な障害、例えば、Ｃ５ａＲ１関連障害は、部位ＩＩ（配列番号３）でＣ５ａＲ１の１つ以上のアミノ酸残基に結合することができる抗体を使用して治療することができる。
一実施形態では、例示的な障害、例えば、Ｃ５ａＲ１関連障害は、部位Ｉ（配列番号１又は配列番号２）又は部位ＩＩ（配列番号３）で、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体と競合することができる抗体を使用して治療することができる。
一実施形態では、例示的な障害、例えば、Ｃ５ａＲ１関連障害は、部位Ｉ（配列番号１又は配列番号２）及び部位ＩＩ（配列番号３）で、Ｃ５ａＲ１に結合する抗体と競合することができる抗体を使用して治療することができる。
本明細書に記載される単一特異性抗体及び／又は二期性抗体は、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ１軸に関連する機能不全に関連する任意の疾患を治療するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、例示的な障害、例えば、Ｃ５ａＲ１関連障害は、Ｃ５ａＲ１に結合することができる単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体を使用して治療することができ、抗体は、１０ｐＭ～５０ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、それを必要とする対象に、静脈内、皮下、皮内、又は筋肉内に投与することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体をコードする核酸は、適切な送達方法を使用して、それを必要とする対象に投与することができる。核酸を送達するためのいくつかの方法は、文献で既知である。例えば、本明細書に記載の単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体をコードするｒＡＡＶベクターは、静脈内、腹腔内、皮下、又は皮内投与によって投与される対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体をコードする核酸の送達は、「遺伝子銃」、バイオリスティック粒子送達システム又は非ウイルス脂質ナノ粒子を使用して達成することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体は、追加の治療剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、アバコパン、コルチコステロイド、又は免疫抑制剤などの小分子である。例示的なコルチコステロイドとしては、以下に限定されないが、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、デキサメタゾン、又はコルチゾンが挙げられる。例示的な免疫抑制剤には、メトトレキサート、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、又はシクロホスファミドが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される単一特異性又はバイパラトピック抗体は、インビボで、好中球減少を軽減するのに、アバコパン単剤療法よりも優れている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される一特異性又はバイパラトピック抗体は、１００ｎＭのより高濃度のＣ５ａの存在下でＣ５ａＲ１に拮抗する点でアバコパンよりも優れている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体は、インビトロで、Ｇαシグナル伝達を阻害する点で、アバコパンよりも優れている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一特異性又はバイパラトピック抗体は、インビトロ及びインビボで、カルシウムシグナル伝達を阻害する点で、アバコパンよりも優れている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一特異性又はバイパラトピック抗体は、インビトロ及びインビボで好中球走化性の阻害において、アバコパンよりも優れている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体は、注射後最大５００時間血清中で安定である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される単一特異性又はバイパラトピック抗体は、インビトロ及びインビボで、ＣＤ１１ｂ発現を阻害する点で、アバコパンよりも優れている。
核酸、ベクター、及び製造方法
本開示はまた、本明細書に記載されるように、抗体分子（例えば、抗体分子の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域及びＣＤＲ）をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。
例えば、本開示は、例えば、表１Ｃの抗体分子、又は抗体分子の一部、例えば、本明細書に開示される抗体のうちのいずれかの可変領域など、本明細書に開示される抗体分子のうちの１つ以上から選択される抗体分子の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１及び第２の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書の表のアミノ酸配列のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列、又はそれと実質的に同一な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上それと同一な配列、又は本明細書の表に示される配列とは３、６、１５、３０、若しくは４５ヌクレオチドを超えないで異なる配列）を含み得る。
特定の実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。一実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。一実施形態では、核酸は、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、若しくは６つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。
本明細書に開示される核酸は、デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド、又はその類似体を含む。ポリヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖のいずれかであってもよく、一本鎖の場合はコード鎖でも非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの改変ヌクレオチドを含んでもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されていてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば標識成分とのコンジュゲーションなどにより、重合後に更に改変されてもよい。核酸は、組換えポリヌクレオチド、又は自然界では発生しないか、又は非天然配置で別のポリヌクレオチドに連結される、ゲノム、ｃＤＮＡ、半合成、若しくは合成起源のポリヌクレオチドであってもよい。
一部の態様では、本出願は、本明細書に記載される核酸を含有する宿主細胞及びベクターを特徴とする。核酸は、以下により詳細に説明するように、同一の宿主細胞又は別個の宿主細胞中に存在する単一のベクター又は別個のベクター中に存在し得る。
ベクター
本明細書に記載される抗体分子（例えば、抗体分子の重鎖及び軽鎖の可変領域及びＣＤＲ）をコードするヌクレオチド配列を含むベクターが更に本明細書に提供される。
一実施形態では、ベクターは本明細書に記載の核酸を含む。例えば、ベクターは、例えば、本明細書に記載される抗体分子、又は抗体分子の一部、例えば、表１～４のうちのいずれかに記載の可変領域など、本明細書に開示される抗体分子のうちの１つ以上から選択される抗体分子の、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１及び第２の核酸を含み得る。
特定の実施形態では、ベクターは、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。一実施形態では、ベクターは、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。一実施形態では、ベクターは、本明細書の表に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖可変領域由来の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、若しくは６つのＣＤＲをコードするヌクレオチド配列、又はそれらと実質的に相同な配列（例えば、それらと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は１つ以上の置換、例えば保存された置換を有する配列）を含む。
ベクターには、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージ、又は酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれるが、これらに限定されない。数多くのベクターシステムを用いることができる。例えば、ベクターの１つのクラスは、例えば、ウシ乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶ又はＭＯＭＬＶ）又はＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、及びフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡ要素を利用する。
更に、ＤＮＡをその染色体内に安定的に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択され得る。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対するプロトトロピー（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｙ）、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、又は銅などの重金属に対する耐性などを提供し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結されてもよく、又は同時形質転換によって同じ細胞に導入されてもよい。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素も必要となる場合がある。これらの要素は、スプライスシグナル、並びに転写プロモーター、エンハンサー、及び終結シグナルを含んでもよい。
構築物を含有する発現ベクター又はＤＮＡ配列が発現のために調製されると、発現ベクターは適切な宿主細胞にトランスフェクトされるか又は導入され得る。これを達成するために、例えば、原形質融合、リン酸カルシウム沈殿、電気穿孔、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクション、又は他の従来的な技術などの様々な技術が用いられてもよい。原形質融合の場合、細胞は培地中で増殖され、適切な活性についてスクリーニングされる。
得られたトランスフェクト細胞を培養し、産生される抗体分子を回収するための方法及び条件は、当業者に公知であり、本記載に基づいて、使用される特定の発現ベクター及び哺乳類宿主細胞に応じて、変更又は最適化され得る。
細胞
本開示はまた、本明細書に記載される抗体分子をコードする核酸を含む細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。例えば、宿主細胞は、表１～５のうちのいずれかに記載されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、それと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％若しくはそれ以上同一の配列、及び／又は本明細書に記載されるストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることができる配列）を有する核酸分子、又は当該核酸のうちの１つの一部を含み得る。
一実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載される抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作される。
特定の実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用して遺伝子操作される。語句「発現カセット」は、そのような配列と適合する宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができるヌクレオチド配列を指す。こうしたカセットは、プロモーター、イントロンを有するか又は有さないオープン・リーディング・フレーム、及び終結シグナルを含み得る。例えば、誘導性プロモーターなど、発現を生じさせるのに必要又は有用な追加の因子も使用され得る。
本開示はまた、本明細書に記載されるベクターを含む宿主細胞を提供する。
細胞は、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、又はヒト細胞であり得るが、これらに限定されない。好適な真核細胞には、限定されるものではないが、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、及びＭＤＣＫＩＩ細胞が含まれる。好適な昆虫細胞には、限定されるものではないが、Ｓｆ９細胞が含まれる。一実施形態では、細胞（例えば、宿主細胞）は単離細胞である。
投与方法
本発明の組成物は、液体溶液（例えば、注射可能な溶液及び不溶解性溶液）、分散剤又は懸濁液などの、液体、半固体及び固体剤形などの任意の好適な形態で製剤化することができる。任意の組成物に対する最適な形態は、意図される投与様式、組成物又は組み合わせの性質、及び治療用途又は他の意図される用途に依存する。本発明の組成物の送達のための典型的な様式は、非経口投与（例えば、静脈内投与）によるものである。一態様では、本発明の組成物は、静脈内注入又は注射によってヒト患者に投与される。
一部の態様では、本開示は、例えば、薬学的に許容可能な担体とともに製剤化された、本明細書に記載の抗体分子を含む組成物、例えば薬学的に許容可能な組成物を提供する。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」には、生理学的に適合性のある、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、直腸、脊髄、又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に好適であり得る。
本明細書で使用される語句「非経口投与」及び「非経口的に投与される」は、通常、注射による経腸投与及び局所投与以外の投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下腔内、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入を含む。治療用組成物は、典型的には、製造及び保管の条件下で滅菌され、安定的であるべきである。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散体、リポソーム、又は高濃度の抗体に適したその他の秩序構造として製剤化され得る。滅菌注射可能な溶液は、活性化合物（すなわち、抗体又は抗体部分）を、必要に応じて、上記で列挙された成分の１つ又は組み合わせとともに、適切な溶媒に必要な量で組み込み、その後に濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒及び上記で列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌された注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分に、事前に滅菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分を加えた粉末を得る、真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合に必要な粒子サイズの維持、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。注射可能な組成物の持続的な吸収は、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。本明細書に記載される抗体分子は、様々な方法によって投与することができる。当技術分野ではいくつかの公知であり、多くの治療的、予防的、又は診断的用途において、適切な投与経路／投与様式は、静脈内注射又は点滴である。当業者によって理解されるように、投与経路及び／又は投与様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。
本開示の他の特徴、目的、及び利点は、以下の実施例で明らかになる。しかしながら、本実施例は、本開示の実施形態を示す一方で、例示のみによって与えられ、限定ではないことが理解されるべきである。本開示の範囲内の様々な変更及び修正は、実施例から当業者に明らかとなるであろう。
実施例１．Ｃ５ａＲ１拮抗性ヒト化抗体の動態解析
本実施例は、本明細書に記載される部位ＩＩの単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の、Ｃ５ａＲ１及びＣ５ａＲ２に対する結合親和性及び特異性を記載する。
（ａ）結合親和性
標的受容体Ｃ５ａＲ１に対する抗体の結合親和性を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定した。Ｃ５ａＲ１ ＶＬＰを、３０μｇ／ｍＬの濃度でＭａｘｉＳｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレートに固定化し、４℃で一晩インキュベートした。翌朝、プレートを１×ＰＢＳで３回洗浄し、プレートを１００μＬのＰＢＳＡ（３％ＢＳＡを含む１×ＰＢＳ）で３０分間ブロックした。抗Ｃ５ａＲ１抗体の連続タイトレーションを、ＰＢＳＡの存在下で実施し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＡで６回洗浄した。抗ヒト－ＨＲＰをＰＢＳＡ中で希釈し、全てのウェルに加え、室温で４５分間インキュベートした。プレートをＰＢＳで６回洗浄した。ＴＭＢ基質を全てのウェルに加え、１０分間インキュベートした後、停止溶液（０．１Ｍ硫酸）を加えた。４５０ｎｍでの吸光度を、標準プレートリーダーで測定した。４パラメータ曲線適合を使用して、ｎＭでの抗体タイトレーションのＥＣ５０値を生成した。単一特異性ｃ２１３９抗体及びバイパラトピックｃ２１３７－ｅ１７１１抗体の親和性曲線を図４Ａに図示する。
上述の条件下では、単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体は、約０．１６ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合し、バイパラトピック抗体は、約０．２２ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合することが観察された。
別の設定では、２つの異なる抗体バッチからの部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及びバイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１の結合を、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞（図４Ｂ）及びヒト好中球（図４Ｃ）への結合について、アッセイした。異なる抗Ｃ５ａＲ１抗体（ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１）の異なるタンパク質バッチに結合するＵ９３７－Ｃ５ａＲ１のＥＣ５０を表６に示す。
表６．例示的なＣ５ａＲ１抗体に結合するＵ９３７－Ｃ５ａＲ１のＥＣ５０
異なる抗Ｃ５ａＲ１抗体（ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１）の異なるタンパク質バッチに結合するヒト好中球のＥＣ５０を表７に示す。
表７．例示的なＣ５ａＲ１抗体に結合するヒト好中球のＥＣ５０
非Ｃ５ａＲ１抗体であるモタビズマブを対照として使用した。部位ＩＩ抗体、ｃ２１３９、及びバイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１の両方が、複数の抗体調製物ロットにわたってＵ９３７及びヒト好中球に結合することが観察された。
（ｂ）結合特異性
Ｃ５ａＲ１拮抗性抗体の特異性は、抗Ｃ５ａＲ１抗体のＣ５ａＲ２に対する親和性を測定することによって決定された。Ｃ５ａＲ２ ＶＬＰを、３０μｇ／ｍＬの濃度でＭａｘｉＳｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレートに固定化し、４℃で一晩インキュベートした。翌朝、プレートを１×ＰＢＳで３回洗浄し、プレートを１００μＬのＰＢＳＡ（３％ＢＳＡを含む１×ＰＢＳ）で３０分間ブロックした。抗Ｃ５ａＲ１抗体の連続タイトレーションを、ＰＢＳＡの存在下で実施し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＡで６回洗浄した。抗ヒト－ＨＲＰをＰＢＳＡで希釈し、全てのウェルに加え、室温で４５分間インキュベートした。プレートをＰＢＳで６回洗浄した。ＴＭＢ基質を全てのウェルに加え、１０分間インキュベートした後、停止溶液（０．１Ｍ硫酸）を加えた。４５０ｎｍでの吸光度を、標準プレートリーダーで測定した。４パラメータ曲線適合を使用して、ｎＭでの抗体タイトレーションのＥＣ５０値を生成した。
単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の結合データを、図５に図示する。例示的なＣ５ａＲ１拮抗性抗体は、上述の条件下ではＣ５ａＲ２に結合しないことが観察された。全体として、この実施例のデータは、本発明の抗Ｃ５ａＲ１抗体が、高い親和性でＣ５ａＲ１に結合し、及びＣ５ａＲ２に対して測定不可能な親和性で結合することを示し、Ｃ５ａＲ１抗体が、実際にＣ５ａＲ１に特異的であることを示した。
実施例２．Ｇαシグナル伝達の阻害
本実施例は、ＧｅｎｅＢＬａｚｅｒアッセイを使用したＧαシグナル伝達の阻害に関し、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を説明する。
ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒアッセイキット及びＣ５ａＲ１細胞株は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ（カタログ番号Ｋ１５４４）から市販されている。アッセイは、製造業者が推奨するとおりに実施した。簡単に説明すると、抗体又は拮抗薬を、増加する濃度で３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、Ｃ５ａを細胞に加え、３７℃で更に４～５時間インキュベートした。次いで、β－ラクタマーゼ基質を加え、室温で２時間インキュベートした。４０９／４６０（青色）及び４０９／５３０（緑色）の励起／発光で各ウェルの蛍光測定値が測定された。青色と緑色の比率の増加は、Ｃ５ａＲ１活性化に比例し、各ウェルにおける細胞の活性化のパーセントを計算するために使用された。Ｃ５ａＲ１活性化プロファイルを、増加する拮抗薬濃度下でモニタリングした。ＩＣ５０は、拮抗薬の濃度に対するシグナルのパーセンテージをプロットすることによって決定された。
単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体のＧαシグナル伝達アッセイを１０ｎＭのＣ５ａでの抗体濃度の関数として図６Ａに図示する。別の設定では、既知のＣ５ａＲ抗体、抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂが、Ｇαシグナル伝達の阻害のための陽性対照として使用される（図６Ｃ）。
単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体のＧαシグナル伝達アッセイを１００ｎＭのＣ５ａでの抗体濃度の関数として図６Ｂに図示する。別の設定では、既知のＣ５ａＲ抗体、抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂが、Ｇαシグナル伝達の阻害のための陽性対照として使用される（図６Ｄ）。単一特異性Ｃ５ａＲ１拮抗薬のＩＣ５０は、１０ｎＭのＣ５ａでは０．１４ｎＭ、１００ｎＭのＣ５ａでは０．１９ｎＭであることが観察された。二重特異性Ｃ５ａＲ１拮抗薬のＩＣ５０は、１０ｎＭのＣ５ａでは０．２７ｎＭ、１００ｎＭのＣ５ａでは０．２８ｎＭであった。例示的な抗体は、試験したＣ５ａの全ての濃度で、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較して、優れた阻害を保持していることが観察された。
実施例３．カルシウムシグナル伝達の阻害
本実施例は、カルシウムフラックスアッセイを使用する、Ｃ５ａ媒介カルシウムシグナル伝達の阻害に関する、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を説明する。
Ｃ５ａの存在下で、Ｃ５ａＲ１を発現する安定なＣ５ａＲ１－Ｕ９３７細胞又は全血から単離された安定した好中球における、細胞内カルシウム放出を阻害する能力について、抗体の効力を評価した。カルシウム感受性色素を使用したカルシウムフラックスアッセイを利用して、細胞質のカルシウム濃度の変化を検出した。細胞を、エステル化（不活性）カルシウム色素とともにインキュベートした。色素は細胞膜を透過し、細胞内に入ると活性化した。この色素の活性型は細胞内カルシウムに結合後に蛍光を発し、その蛍光を使用して Ｃ５ａの添加に応答したＣ５ａＲ１シグナル伝達が決定された。具体的には、安定なＣ５ａＲ１－Ｕ９３７又は全血から単離された好中球を、Ｔｈｅｒｍｏ ＦｉｓｈｅｒからのＦｌｕｏ－４ Ｄｉｒｅｃｔカルシウムアッセイキットで３７℃で１時間染色した。次に、抗体又は拮抗薬を細胞とともに３０分間インキュベートした。４９４ｎｍでの励起及び５１６ｎｍでの発光を有する基底蛍光を、１５秒間測定した。Ｃ５ａを細胞に添加し、蛍光を４分間にわたって測定した。Ｃ５ａ刺激前の基底読み取り値とＣ５ａ刺激後の最大シグナルを使用して、応答比を計算した。カルシウムフラックスアッセイは、Ｃ５ａＲ１を安定的に発現する操作された細胞を使用して並びにヒト好中球を使用して実施された。
単一特異性（図７Ａ）及びバイパラトピック拮抗性抗体（図７Ｂ）のＣ５ａ媒介性カルシウムシグナル伝達アッセイの阻害は、増加する抗体濃度とともにＣ５ａ濃度の関数としてのカルシウムフラックスとしてプロットされている。更に、上述したプロトコルを使用する、既知のＣ５ａＲ１拮抗薬であるアバコパンによるＣ５ａ媒介性カルシウムシグナル伝達の阻害を図７Ｃに図示する。試験した抗体は、アバコパンよりもカルシウムシグナル伝達の阻害に優れていることが観察された。
実施例４．好中球走化性の阻害
本実施例は、ボイデンチャンバーを使用して、Ｃ５ａＲ１活性によって誘導されることが知られている好中球走化性の阻害について、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を記載する。
最初に、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞を、抗体（拮抗薬）なし、又は１、１０、若しくは１００ｎＭの各抗体（拮抗薬）の存在下、９６ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレートの上部チャンバーに播種した。底部チャンバーは、１０－６～１０－９．５Ｍの範囲のＣ５ａ（走化性因子）の半対数タイトレーションを含有した。上部チャンバーと底部チャンバーは膜によって分離されていた。Ｃ５ａは、Ｕ９３７細胞の遊走を誘導することが予想される。しかしながら、Ｃ５ａＲ１拮抗薬の使用は、この遊走を阻害すると予想される。増加する濃度の例示的な抗体を使用して、走化性に対する用量依存的阻害を決定した。更に、増加する濃度の走化性因子（Ｃ５ａ）を使用して、高濃度のＣ５ａを使用することによって、走化性の阻害が克服可能であるかどうかを決定した。並行して、既知のＣ５ａＲ１阻害剤であるアバコパンも、好中球の走化性の阻害及び過剰なＣ５ａの存在下での走化性の克服可能性を評価するために使用した。
次に、ヒト好中球を、抗体（拮抗薬）なし、又は１、１０、若しくは１００ｎＭの各抗体（拮抗薬）の存在下、９６ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレートの上部チャンバーに播種した。底部チャンバーは、１０－６～１０－９．５Ｍの範囲のＣ５ａ（走化性因子）の半対数タイトレーションを含有した。上部チャンバーと底部チャンバーは膜によって分離されていた。Ｃ５ａは、Ｕ９３７細胞の遊走を誘導することが予想される。しかしながら、Ｃ５ａＲ１拮抗薬の使用は、この遊走を阻害すると予想される。増加する濃度の抗体を使用して、走化性に対する用量依存的阻害を決定した。更に、増加する濃度の走化性因子（Ｃ５ａ）を使用して、高濃度のＣ５ａを使用することによって、走化性の阻害が克服可能であるかどうかを決定した。並行して、既知のＣ５ａＲ１阻害剤であるアバコパンも、好中球の走化性の阻害及び過剰なＣ５ａの存在下での走化性の克服可能性を評価するために使用した。
図８Ａ～８Ｃは、異なる濃度の抗Ｃ５ａＲ１抗体の存在下でのＣ５ａ濃度に対する蛍光強度の量を示し、抗Ｃ５ａＲ１抗体による走化性の阻害を示している。抗Ｃ５ａＲ１抗体は、概して、用量依存的な様式で細胞走化性を阻害することが観察された。更に、アバコパンとは異なり、過剰なＣ５ａの存在下では、抗Ｃ５ａＲ１抗体による好中球走化性の阻害は克服できないことが観察された。
実施例５．ＣＤ１１ｂ発現の阻害
本実施例は、ＣＤ１１ｂ発現の阻害について、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を記載する。
インテグリン受容体であるＣＤ１１ｂは、Ｃ５ａ活性化に応答して好中球表面に動員され、好中球遊走の前に血管内クローリングを媒介する。ＣＤ１１は、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び顆粒球などの細胞間の多数の付着関連の会合に関与する。
図９Ａ～９Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、抗体（Ｃ５ａＲ１拮抗薬）濃度に対するＣＤ１１ｂ発現のパーセンテージを示す。抗体は、予想される生理学的濃度のＣ５ａの全範囲にわたってＣＤ１１ｂを強力に阻害することが観察された。表８は、１００ｎＭのＣ５ａの存在下でのｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１のＩＣ５０を示す。
表８．例示的なＣ５ａＲ１抗体を使用したＣＤ１１ｂ発現阻害のＩＣ５０
別の設定では、１０ｎＭ及び１００ｎＭの抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂを対照として使用して、ヒト好中球における本明細書に開示される抗Ｃ５ａＲ１抗体の阻害を比較した（図９Ｃ）。更に、アバコパンが、ＣＤ１１ｂの阻害において部分的にのみ強力であることが観察された。更に、本抗体は抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂよりも優れた阻害剤であることが観察された。
実施例６．β－アレスチンリクルートメントの阻害
本実施例は、β－アレスチンリクルートメントの阻害について、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１単一特異性抗体、及びバイパラトピック抗体の機能的態様を記載する。
リードｍＡｂをＣ５ａＲ１の完全拮抗薬として特徴付けるために、本発明者らは、リードｍＡｂが、β－アレスチン２リクルートメントを阻害する可能性を評価することを目標とした。β－アレスチンアッセイでは独自の２つのサブユニットであるルシフェラーゼレポーターシステムを利用した。１つのサブユニットはＣ５ａＲ１に融合し、もう１つのサブユニットはβ－アレスチン２に融合した。近接すると、２つのサブユニットは、Ｃ５ａＲ１媒介性β－アレスチン２のリクルートメントの代用として使用される、発光シグナルを生成する酵素を形成した。例示的な抗体は、２つの異なるＣ５ａ濃度、１ｎＭ及び１０ｎＭで、Ｃ５ａＲ１媒介性β－アレスチン２のリクルートメントを有意に低下させた。図１０Ａ～１０Ｃは、１ｎＭ（図１０Ａ）、１０ｎＭ（図１０Ｂ）及び１００ｎＭ（図１０Ｃ）のＣ５ａの添加後の蛍光シグナルの阻害を示すグラフである。表９は、ｃ２１３９、ｃ２１３７－ｅ１７１１及びアバコパンが媒介する、β－アレスチンの阻害のＩＣ５０を示す。
表９．β－アレスチンシグナル伝達の単一特異性抗体又はバイパラトピック抗体のＩＣ５０
小分子Ｃ５ａＲ１阻害剤のアバコパンと比較した場合、例示的な抗体、ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１は、アバコパンが抗体よりも１０倍高い濃度で使用した場合であっても、優れたシグナルの阻害を示した。特に、Ｃ５ａ濃度が１０ｎＭに増加すると、アバコパンは効力を失うのに対し、ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１は、＞７５％のβ－アレスチン２リクルートメントの阻害を維持する。データは、例示的なＣ５ａＲ１抗体、ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１が、アバコパンよりも１０倍低い濃度で、β－アレスチンを阻害することを示唆した。
実施例７．ヒト化抗Ｃ５ａＲ１抗体によるＲＯＳ産生の阻害
本実施例は、例示的なヒト化単一特異性抗体（ｃ２１３９）及び例示的なバイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１）が、活性酸素種（ＲＯＳ）を低下させることを示す。
好中球によるＲＯＳ産生は、製造業者のマニュアルに従ってＣｅｌｌｕｌａｒ ＲＯＳ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ）を用いて検出された。ＲＢＣ溶解ＷＢ細胞を、１００ｍＬの緩衝液中で３×１０５個の細胞の濃度まで希釈した。ＲＯＳ阻害剤（Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン）を用いた前処置を、陰性対照群に対して３７℃、５％のＣＯ２で３０分間行った。次いで、好中球ＲＯＳ産生のフローサイトメトリーベースの検出のために、ＲＯＳ検出抗体を抗体カクテルに添加した。ＲＯＳ誘導剤（ピオシアニン）を全ての群に加え、３０分間インキュベートした後、サイトメーター上で捕捉した。図１１は、抗Ｃ５ａＲ１抗体による処置に応答した、ＡＮＣＡ－群及びＡＮＣＡ＋群における好中球でのＲＯＳ産生を示す。
ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１は、ＡＮＣＡによるＲＯＳ産生を阻害することが観察された。
実施例８．Ｕ９３７細胞におけるヒト化抗Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行
本実施例は、ｈＣ５ａｒ１－Ｕ９３７細胞におけるヒト化単一特異性抗体及びバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体の内部移行を示す。
ヒト化単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体、ｅ１７１１及びバイパラトピック抗体、ｃ２１３９－ｅ１７１１を、低ｐＨで明るく蛍光を発するが、中性ｐＨでは蛍光を発しないｐＨ感受性色素にコンジュゲートした。コンジュゲートされた抗体を、Ｕ９３７細胞及びｈＣ５ａＲ１ノックインＵ９３７細胞とインキュベートした。図１２Ａ～１２Ｄは、各コンジュゲート抗体との２４時間のインキュベーション後の蛍光強度を示す。図１２Ａ～図１２Ｂは、１０ｎＭの抗体を使用したＵ０３７細胞又はＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の蛍光強度を示し、及び図１２Ｃ～図１２Ｄは、１００ｎＭの抗体を使用したＵ０３７細胞又はＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の蛍光強度を示す。
実施例９．ヒト化抗Ｃ５ａＲ１抗体の交差反応性
本実施例は、リスザ及びイヌにおける、ヒト化抗Ｃ５ａＲ１抗体、ｅ１７１１及びバイパラトピック抗体、ｃ２１３９－ｅ１７１１の、Ｃ５ａＲ１への結合を示す。
細胞表面結合及びフローサイトメトリーを、１０－７．５～１０－１２Ｍの範囲の抗Ｃ５ａＲ１抗体の半対数タイトレーションで実施した。図１３Ａ～１３Ｂに示すように、抗Ｃ５ａＲ１ヒト化抗体は、リスザル及びイヌＣ５ａＲ１に結合した。

実施例１０．リスザルにおける好中球減少の阻害
本実施例は、リスザルにおけるＣ５ａＲ１抗体による好中球減少の阻害を示す。好中球減少は、細胞表面ＣＤ１１ｂの急速な発現によって引き起こされ、これにより好中球が血管内皮に一過性に付着し、それにより末梢好中球数を低減させる。リスザルの好中球数はヒト（５０～７０％）と類似しており、マウスは１０～２０％しか有さないため、リスザルは好中球減少の評価についてマウスと比較して生理学的適切なモデルである。更に、リスザルでは、可能な複数の時点で採血が可能であり、より長い研究期間を可能にする。更に、図１３Ａに示されるように、リスザルＣ５ａＲ１との交差反応が観察された。
図１４Ａは、好中球減少の軽減を評価するためのリスザルにおける実験デザインを示す。簡潔に述べると、３つのリスザル群を、好中球減少の阻害について評価した。第１群において、８匹のリスザルにＰＢＳ（ビヒクル）を静脈内に注射した。第２群において、８匹のリスザルに、１０ｍｇ／ｋｇの用量で例示的な抗体を静脈内に注射した。第３群において、群８匹のリスザルに、３０ｍｇ／ｋｇの用量でアバコパンを静脈内に注射した。ＰＢＳ、例示的な抗体又はアバコパンの注射の１時間後に、０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣ５ａをリスザルに注射した。ヒトＣ５ａの注射の１分後、５分後、１５分後、２時間後、及び６時間後に血液を採取した。好中球の変化パーセント及び好中球の平均変化を、３群全てで計算し、散布図として図１４Ｂに示す。好中球の平均変化を、棒グラフとして図１４Ｃに示す。
ヒトＣ５ａの投与は、内皮細胞への好中球の付着によって引き起こされる、急速な一過性の好中球減少をもたらしたことが観察された。ビヒクル（ＰＢＳ）群は、Ｃ５ａ注射後１分で、好中球数がベースラインから平均８９％低減する強い好中球減少を示した。好中球減少の有意な阻害が、例示的な抗Ｃ５ａＲ１抗体を用いた前処置で観察された（２３％対ビヒクルの８９％）。更に、好中球数が２～６時間の間に消失し始めることが観察された。アバコパンで好中球増加が観察された。ｃ２１３９では好中球増加は観察されなかった。アバコパン群もまた、好中球が平均５９％の減少で応答した。例示的な抗Ｃ５ａＲ１抗体は、アバコパンと比較した場合、優れた応答速度を有することが観察された。
実施例１１．ヒトＣ５ａＲ１トランスジェニックマウスにおける好中球減少の阻害
本実施例は、トランスジェニックヒトＣ５ａＲ１マウスにおけるＣ５ａＲ１抗体による好中球減少の阻害を示す。例示的なＣ５ａＲ１抗体は、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない。トランスジェニックヒトＣ５ａＲ１（ｈＣ５ａＲ１）ノックインマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙでＣＲＩＳＰＲ技術を使用して生成された。
図１５Ａは、好中球減少の軽減を評価するためのマウスにおける実験デザインを示す。簡潔に述べると、５つのｈＣ５ａＲ１マウス群を、好中球減少の阻害について評価した。第１群において、５匹のｈＣ５ａＲ１マウスにＰＢＳ（ビヒクル）を静脈内に注射した。第２群において、５匹のｈＣ５ａＲ１マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの用量で例示的な単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３９を静脈内に注射した。第３群において、群５匹のｈＣ５ａＲ１マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、例示的なバイパラトピック抗Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１を静脈内に注射した。第４群において、５匹のｈＣ５ａＲ１マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの用量で非Ｃ５ａＲ１抗体（モタビズマブ）を静脈内に注射した。第５群において、５匹のｈＣ５ａＲ１マウスに、３０ｍｇ／ｋｇの用量でアバコパンを静脈内に注射した。ＰＢＳ、例示的な抗体、モタビズマブ又はアバコパンの注射の１時間後に、０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣ５ａをｈＣ５ａＲ１マウスに注射した。ヒトＣ５ａの注射の１分後、５分後、及び２時間後に血液を採取した。好中球の確率パーセント及び好中球の平均変化を、３群全てで計算し、図１５Ｂ～１５Ｃに示す。好中球の平均変化を図１５Ｃに示す。好中球細胞数を、ＣＤ４５＋／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｇ＋細胞をゲーティングすることによって評価した。
ヒトＣ５ａの投与は、内皮細胞への好中球の付着によって引き起こされる、急速な一過性の好中球減少をもたらしたことが観察された。ビヒクル（ＰＢＳ）群は、Ｃ５ａ注射後１分で、好中球数がベースラインから平均８９％低減する強い好中球減少を示した。好中球減少の有意な阻害が、例示的な抗Ｃ５ａＲ１抗体を用いた前処置で観察された（２３％対ビヒクルの８９％）。アバコパン群もまた、好中球が平均５９％の減少で応答した。
例示的な抗Ｃ５ａＲ１抗体は、アバコパンと比較した場合、優れた応答速度を有することが観察された。ヒトＣ５ａの投与は、ヒトＣ５ａＲ１マウスにおいて急速な一過性の好中球減少をもたらしたことが観察された。ビヒクル（ＰＢＳ）群は、Ｃ５ａ注射後１分で、好中球数がベースラインから平均７６％低減する強い好中球減少を示した。好中球減少の有意な阻害が、例示的な単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体を用いた前処置で観察された（１１％対ビヒクルの８９％）。例示的なバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体に対して完全な阻害が観察された。アバコパン群もまた、好中球が平均１０％の減少で応答した。
実施例１２．ｈＣ５ａＲ１マウスにおける例示的なＣ５ａＲ１抗体の薬物動態研究
本実施例は、マウスにおける例示的なＣ５ａＲ１抗体の薬物動態（ＰＫ）研究を示す。
５ｍｇ／ｋｇの例示的な単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体を、Ｔｇ３２マウスに静脈内注射した。血清中の抗体の量を、５００時間にわたって評価した。図１６Ａは、例示的な抗体の薬物動態特性を示す。図１６Ｂ～１６Ｄは、５匹の異なるマウスの血清中の抗Ｃ５ａＲ１抗体の５００時間の安定性を示す。単一特異性（ｃ２１３９－図１６Ｃ）、及びバイパラトピック（ｃ２１３７－ｅ１７１１－図１６Ｄ）抗体は、血清中で安定であり、Ｔｇ３２マウスでも同等に持続することが観察された。ｈＣ５ａＲ１トランスジェニックマウスでは、ＴＭＤＤがｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１の両方で観察された。四価抗体は、単一特異性抗体と比較して、血清中の持続性がわずかに低い。モタビズマブを対照として使用した。
実施例１３．ヒトにおける例示的なＣ５ａＲ１抗体の薬物動態研究の予測
既知の抗Ｃ５ａＲ１抗体については、非線形ＰＫが観察された（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，２００６，ＰＭＩＤ １６９８０９８４）。１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量で＞９０％の受容体占有率が４．３週間にわたって観察され、４ｍｇ／ｋｇの皮下用量で＞９０％の受容体占有率が１．８週間にわたって観察されることが報告された。本ヒト化抗Ｃ５ａＲ１抗体の親和性データに基づいて、モデルシミュレーションでは、ＩＶ投与後２４日間で＞９０％の受容体占有率をもたらすと予測される、０．１～１０ｍｇ／ｋｇの抗体ｉｄの非線形クリアランスを示した。
生物学的利用能にかかわらず、４ｍｇ／ｋｇの皮下用量は、約７～１３日間、＞９０％の受容体占有率を有すると予測される。
四価抗体（バイパラトピック）は、単一特異性リードと比較して、血清中の持続性がわずかに低いことが観察された。
実施例１４．４℃での例示的なＣ５ａＲ１抗体の安定性
本実施例は、間に１回の融解サイクルを挟んだ、４℃での例示的なＣ５ａＲ１抗体（単一特異性及びバイパラトピックの両方）の安定性を示す。
単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の両方を、４℃で最大１４日間インキュベートした。３７℃で１回の融解サイクル後、インタクトな抗体の量を、ゲル濾過、未変性ＰＡＧＥ、及び動的光散乱法（ＤＬＳ）によって評価した。表１０は、インタクトな抗体のパーセントと比較した、抗体凝集体（ＨＭＷ）のパーセントを示す。
表１０．室温／３７℃での１回の凍結融解サイクル後のＣ５ａＲ１二重特異性抗体の安定性。
単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の両方が、４℃及びＲＴで、最大２週間及び１回の凍結／融解サイクルで安定であることが観察された。
実施例１５－改変Ｆｃドメインを有するＣ５ａＲ１拮抗性ヒト化抗体の動態解析。
本実施例は、改変Ｆｃドメインを有するＣ５ａＲ１及びＣ５ａＲ２に対する、本明細書に記載される部位ＩＩの単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の結合親和性及び特異性を記載する。Ｆｃドメイン改変を、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣＰなどのエフェクター機能に対抗するために導入した。更に、改変Ｆｃドメインは、Ｆａｂアーム交換を防止するための変異を含む。表１１は、Ｃ５ａＲ１抗体におけるＦｃ改変を要約する。
表１１－改変Ｆｃドメインを有する単一特異性及びバイパラトピック抗体Ｃ５ａＲ１抗体の概要。
修飾Ｆｃドメインを有する単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の結合親和性を、実施例１に記載されるように計算した。改変Ｆｃドメインを有する単一特異性抗体を、以下、「ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ」と呼び、改変Ｆｃドメインを有するバイパラトピック抗体を、以下、「ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ」と呼ぶ。
（ａ）結合親和性
単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ）及びＣ５ａＲ１バイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）の親和性曲線を図１７Ａに図示する。
上述の条件下では、単一特異性Ｃ５ａＲ１単一特異性抗体、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ は、約０．３１ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合し、Ｃ５ａＲ１のバイパラトピック抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄは、約０．３４ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合することが観察された。
Ｃ５ａＲ１発現細胞への結合に関する例示的な動態アッセイを（図１７Ｂ）に示す。動態測定は、２～３回の投与による会合段階とそれに続く解離の後に適合された。Ｆｃ改変抗体のＥＣ５０は、Ｆｃ非改変抗体のＥＣ５０と同程度であることが観察された。例えば、表１２から分かるように、バイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１及びｃ２１３７－ｅ１７１１－ＦｃｍｏｄのＥＣ５０は、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞では両方とも約１ｎＭであり、好中球では約１ｎＭ及び２ｎＭであり、マクロファージでは０．５ｎＭ及び０．６ｍＭであった。
表１２－ｃ２１３７－ｅ１７１１及びｃ２１３７－ｅ１７１１－ＦｃｍｏｄのＥＣ５０の比較
（ｂ）結合特異性
Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１拮抗性抗体の特異性は、抗Ｃ５ａＲ１抗体のＣ５ａＲ２に対する親和性を測定することによって決定された。これは、実施例１に記載されるように決定された。
図１７Ｃは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの特異性を決定するための親和性曲線を示す。Ｆｃ改変抗体は、Ｃ５ａＲ２に対する親和性を示さないことが観察された。
実施例１６－Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行。
この実施例は、Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行が特異的であり、膜免疫グロブリンの非特異的クラスタリングによるものではないことを検証することを目指す。アジ化ナトリウムは代謝阻害剤であり、これらはエネルギー依存性プロセスである内部移行又はエンドサイトーシスを阻害する。例示的なＣ５ａＲ１抗体の内部移行に対する任意の代謝依存性を、２０ｍＭのアジ化ナトリウムの存在下又は非存在下で、１０ｎＭのＣ５ａＲ１抗体を使用してプローブした。例示的なＣ５ａＲ１抗体は、代謝ベースの内部移行を受けることが観察された。例えば、ｃ２１３９は解離の数時間後に内部移行を受け、ｃ２１３９－ｅ１７１１は会合中に内部移行を受ける。２０ｍＭアジ化ナトリウムの存在下での単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体ｃ２１３９の解離定数は１．４３×１０－５／秒であり、一方でアジ化ナトリウムを含まない解離定数は３．４×１０－５／秒であった。２０ｍＭのアジ化ナトリウムの存在下でのバイパラトピックＣ５ａＲ１、ｃ２１３７－ｅ１７１１の会合定数は、２．１５×１０４／モル／秒であり、一方でアジ化ナトリウムを含まない解離定数は、４．３８×１０３／モル／秒であった。図１８Ａ～１８Ｂは、Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行の増加を立証する。図１８Ａは、単一特異性抗体ｃ２１３９の解離から数時間後の内部移行を示す例示的なグラフである。図１８Ｂは、会合中のバイパラトピック抗体ｃ２１３７－ｅ１７１１の内部移行の増加を示す例示的なグラフである。
膜免疫グロブリンの非特異的クラスタリングは、例示的なｃ５ａＲ１抗体の内部移行に単独では関与しないことが観察された。
実施例１７－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるＧαシグナル伝達の阻害
本実施例は、ＧｅｎｅＢＬａｚｅｒアッセイを使用したＧαシグナル伝達の阻害のための、本明細書に記載のＦｃ改変Ｃ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を説明する。
この実験は、実施例２に詳述されるように行われた。図１９Ａ～１９Ｂは、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体－ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの存在下での、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較したＧαシグナル伝達の阻害の結果を示す。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの両方が、用量依存的な様式でＧαシグナル伝達を強力に阻害することが観察された。
表１３は、１０ｎＭ及び１００ｎＭ濃度のＣ５ａでのアバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した阻害を要約したものである。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、より高い濃度のＣ５ａでさえも、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較して、優れた阻害を保持することが観察された。
表１３－アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較したＣ５ａの存在下でのｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの阻害
＊ 外挿データ － アバコパンを用いた以前のデータは、高いＣ５ａ濃度では、それほど強力ではないことを示唆している
実施例１８－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるカルシウムシグナル伝達の阻害
本実施例は、カルシウムフラックスアッセイを使用した、Ｃ５ａ媒介性カルシウムシグナル伝達の阻害についての、本明細書に記載されるＣ５ａＲ１ Ｆｃ改変単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を説明する。
この実験を、実施例３に記載されるように行った。図２０Ａ～２０Ｂは、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１抗Ｃ５ａＲ１細胞におけるアバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較した、Ｃ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体－ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの存在下でのカルシウムシグナル伝達の阻害の結果を示す。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂよりもカルシウムフラックスをより強力に阻害することが観察された。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによって示される阻害レベルに到達するために、少なくとも１０～１００×が必要であることが観察された。Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体は、ヒト好中球並びにＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞においてカルシウムシグナル伝達を阻害することが観察された。図２０Ａは、増加する濃度の抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下で、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す例示的なグラフを示す用量応答曲線である。図２０Ｂは、抗体及び１００ｎＭ Ｃ５ａの存在下での、本開示に記載される、例示的なＦｃ改変ヒト化部位ＩＩ抗体を使用したカルシウムシグナル伝達の阻害を示す阻害パーセントグラフである。
図２１Ａ～２１Ｄは、ヒト好中球と比較した、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞における阻害を示す。図２１Ａは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｂは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｃは、１０ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。図２１Ｄは、１００ｎＭのＣ５ａの存在下での、ヒト好中球におけるカルシウムシグナル伝達の阻害を示す。
更に、様々なインキュベーション時間（例えば、１時間及び３時間）で、指示された濃度の拮抗性抗体を用いてインキュベーションした後、Ｕ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞におけるＣ５ａ媒介性カルシウムシグナル伝達の阻害について、Ｆｃ改変抗体をプローブした。図２２Ａ－２２Ｂは、各阻害剤によるＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の飽和レベルを要約する。図２２Ａは、１時間のインキュベーション後の、増加する濃度の抗体、（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）及び１００ｎＭのＣ５ａとインキュベートされたＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の飽和パーセント及びＦ標準をまとめたものである。図２２Ｂは、３時間のインキュベーション後の、増加する濃度の抗体、（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）及び１００ｎＭのＣ５ａとインキュベートされたＵ９３７－Ｃ５ａＲ１細胞の飽和パーセント及びＦ標準をまとめたものである。
図２２Ａは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによるカルシウムシグナル伝達の阻害性用量応答を示す。図２２Ｂは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄによるカルシウムシグナル伝達の阻害パーセントを示す。
ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂよりも強力であることが観察された。更に、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、短い拮抗薬インキュベーション時間で飽和点に達した。この飽和は、より長い拮抗薬のインキュベーション時間によりいくらか緩和される。この現象は、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄでのみ観察され、前駆体ｃ２１３９で観察された。
実施例１９－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるβ－アレスチンシグナル伝達の阻害
本実施例は、Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１単一特異性抗体、及び本明細書に記載されるバイパラトピック抗体の、β－アレスチンリクルートメントの阻害のための機能的態様を記載する。
このβ－アレスチンリクルートメントを決定する実験の詳細は、実施例６に記載されている。図２３Ａ～２３Ｂは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－ＦｃｍｏｄによるＣ５ａ媒介性β－アレスチンシグナル伝達の阻害を要約する。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂよりも、Ｃ５ａＲ１へのβ－アレスチンリクルートメントをより強力にブロックすることが観察された。表１４は、β－アレスチンリクルートメントの阻害のＫＤをまとめたものである。表１４－β－アレスチン阻害のＫＤ
実施例２０－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体による好中球走化性の阻害
本実施例は、ボイデンチャンバーを使用して、Ｃ５ａＲ１活性によって誘導されることが知られている好中球走化性の阻害について、本明細書に記載されるＦｃ改変Ｃ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を記載する。
この好中球走化性を決定する実験の詳細は、実施例４に記載されている。図２４Ａ～２４Ｄは、Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置後の、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂよりも走化性をより強力に阻害することが観察された。図２４Ａは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｂは、１ｎＭ、３．１６ｎＭ、及び１０ｎＭのＣ５ａ ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及び増加する濃度のＣ５ａの存在下でのＣ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性の阻害を示す。図２４Ｃ～２４Ｄは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの存在下での、それぞれ１ｎＭ、３．１６ｎＭ及び１０ｎＭ抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンの存在下での、Ｃ５ａＲ１－Ｕ９３７安定細胞における走化性阻害を示す。
実施例２１－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるＣＤ１１ｂ発現の阻害
本実施例は、ＣＤ１１ｂ発現の阻害について、本明細書に記載されるＦｃ改変Ｃ５ａＲ１単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体の機能的態様を記載する。
このＣＤ１１発現を決定する実験の詳細は、実施例５に記載されている。図２５Ａ～２５Ｂは、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを用いた処置に応答した、ＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと比較して、広範囲のＣ５ａ濃度にわたってＣＤ１１ｂ発現を強力に阻害することが観察された。図２５Ａは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１０ｎＭ Ｃ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。図２５Ｂは、増加する濃度のＣ５ａＲ１拮抗性抗体及び１００ｎＭのＣ５ａの存在下でのＣＤ１１ｂシグナル伝達の阻害を示す。
実施例２２－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるＲＯＳ産生の阻害
本実施例は、例示的なヒト化Ｆｃ改変単一特異性抗体（ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ）及び例示的なバイパラトピック抗体（ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ）が、活性酸素種（ＲＯＳ）を低下させることを示す。
このＲＯＳ生産を決定する実験の詳細は、実施例７に記載されている。図２６Ａ～２６Ｂは、ｃ２１３９、ｃ２１３７－ｅ１７１１、抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂ及びアバコパンと比較した、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄで処置されたＲＢＣ溶解ＷＢ細胞におけるＲＯＳ産生の阻害を示す。ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄは、アバコパン及び抗Ｃ５ａＲ１対照Ａｂと同様に、好中球において低い呼吸バースト活性を維持することが観察された。更に、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄは、以前の形態ｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１と比較して、呼吸バースト活性を低下させた。図２６Ａは、増加する濃度の単一特異性Ｃ５ａＲ１抗体（Ｆｃ改変）のＲＯＳ産生の阻害を示す。図２６Ｂは、増加する濃度のバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体（Ｆｃ改変）のＲＯＳ産生の阻害を示す。
実施例２３．Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるヒトＣ５ａＲ１トランスジェニックマウスにおける好中球減少の阻害
本実施例は、トランスジェニックヒトＣ５ａＲ１マウスにおけるＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体による好中球減少の阻害を示す。上述のように（実施例１１）、例示的なＣ５ａＲ１抗体は、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない。トランスジェニックヒトＣ５ａＲ１（ｈＣ５ａＲ１）ノックインマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙでＣＲＩＳＰＲ技術を使用して生成された。
図２７Ａは、好中球減少の軽減を評価するためのマウスにおける実験デザインを示す。このマウスインビボアッセイの実験詳細は、実施例１１に記載されている。好中球における確率パーセント及び好中球の平均変化を、全ての群において計算し、図２７Ｂ～２７Ｃに示す。好中球の平均変化を図２７Ｂに示す。好中球数の変化を図２７Ｃに示す。新しいＦｃサイレンシングされたリードは、サイレンシングされていないｃ２１３９及びｃ２１３７－ｅ１７１１と同程度に強力であることが観察された。ビヒクル（ＰＢＳ）群は、Ｃ５ａ注射後１分で、好中球数がベースラインから平均６５％低減する強い好中球減少を示した。ビヒクル対照群では、１匹の動物が、Ｃ５ａに応答しなかった。
実施例２４．マウスモデルにおける脳卒中の保護
この実験は、脳卒中マウスモデルにおいて、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄが、梗塞体積を保護する能力を実証した。好中球の活性及び脳への浸潤は、急性モデルを含む脳卒中及び外傷性脳損傷の病理学において、十分に記録されている。
２０ｍｇ／ｋｇの各々、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄを、ｔＭＣＡＯマウスに投与した。１ｍｇ／ｋｇのＰＭＸ５３を対照として使用した。脳を切除し、切片に切断し、ＴＴＣで染色した。染色された断面を、撮像によって分析した。
ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄで処置されたマウスは、ビヒクル群と比較して、梗塞体積を著しく低減させることによって、脳卒中に対する保護を提供することが観察された。ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ処置は、ビヒクル群と比較して、梗塞体積の著しい低減を示した。ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ処置は、ビヒクル群と比較して、梗塞体積の低減を示した。ＰＭＸ５３処置（陽性対照及びコンパレータとして役立つ）は、ビヒクル群と比較して、梗塞体積のわずかな低減のみを示した。図２８Ａは、梗塞体積の低減の図的記述を示す。図２８Ｂは、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＰＭＸ５３を用いた処置後の梗塞体積のグラフ表示を示す。
実施例２５．改変Ｆｃドメインを有するｈＣ５ａＲ１マウスにおける例示的なＣ５ａＲ１抗体の薬物動態研究
本実施例は、マウスにおける改変Ｆｃドメイン抗体を用いた例示的Ｃ５ａＲ１の薬物動態（ＰＫ）研究を示す。Ｔｇ３２マウスは、ヒトＦｃＲｎがネイティブマウスＦｃＲｎと置き換わるトランスジェニックモデルである。ＦｃＲｎは、細胞バリアにわたるＡｂの双方向性輸送に必要であり、ＰＫに影響を与える。ヒトＦｃＲｎを有するＴｇ３２マウスは、広範囲に研究されており、ヒトにおけるＰＫと相関すると考えられている。この実験の目標は、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ対ＩｇＧフォーマットのＦｃＲｎ介在性リサイクルを行い、ＦｃＲｎ介在性リサイクルに対するＦｃドメイン改変の導入の影響を評価することであった。
５ｍｇ／ｋｇの例示的な単一特異性抗体及びバイパラトピック抗体を、Ｔｇ３２マウスに静脈内注射した。血清中の抗体のパーセンテージを、当技術分野で認識されたアッセイを使用して決定した。ＩｇＧ４ Ｆｃ及びＣ５ａＲ１抗体と同じＦｃ改変を有するモタビズマブ抗体であるＭＶＺ－ＩｇＧ４－ＶＦｃ１７を対照として使用した。ＣＥＲＴＡＲＡを使用して、更なるＰＫ／ＰＤ解析を実施した。
Ｃ－ｍａｘ（血液中の抗体の最も高い濃度は、単一特異性抗体とバイパラトピック抗体の両方について類似していた）が観察された。更に、抗体の半減期は、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ、及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄで類似していたことが観察された。
血清中の抗体の量を、５００時間にわたって評価した。表１５は、薬物動態研究の投与量及び試料採取間隔を示す。
表１５－個々の抗体の薬物動態を決定するための例示的なＣ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の用量及び試料採取スケジュール。
図２９Ａ－２９Ｂは、Ｃ５ａＲ１－Ｆｃ改変抗体の薬物動態特性を示す。図２９Ａは、５００時間の血清中のＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のパーセンテージを示すグラフ表示である。図２９Ｂは、５００時間にわたる、血清１ｍｌ当たりの抗体μｇでの平均濃度のグラフ表示である。これらの観察は、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄが、ｈＦｃＲｎと効率的に係合し、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄと同様の方法でリサイクルされたことを示した。更に、ＰＫデータは、非改変Ｆｃドメインを有するＣ５ａＲ１抗体のＰＫとも類似していた。表１６は、例示的なＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫパラメータを示す。
表１６－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体の薬物動態パラメータ。
実施例２６－ヒトＣ５ａＲ１ノックインマウスにおけるＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体の複数回投与薬物動態
本実施例は、改変Ｆｃドメイン抗体ｈＣ５ａＲ１マウスを用いた例示的なＣ５ａＲ１抗体の反復投与薬物動態（ＰＫ）試験を示す。
表１７は、試験される抗体の投薬レジメンを要約したものである。標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）は、改変Ｆｃドメインを有する両方の例示的なＣ５ａＲ１抗体について明らかである。ＴＭＤＤは、薬物がその薬理標的部位（受容体など）に高い親和性で結合し、その薬物動態（ＰＫ）特性に影響を及ぼす現象である。薬物－標的複合体の標的結合及びその後の除去は、薬物の分布及び除去の両方に影響を与え得、用量依存的な様式でのＰＫの非線形性をもたらす可能性がある。
ＴＭＤＤは、高用量レベルでは線形ＰＫとして、低用量レベルでは非線形ＰＫとして最も観察される
ＴＭＤＤを有する抗体について予想されるように、用量依存的なクリアランスが観察された。５ｍｇ／Ｋｇ、及び０．５ｍｇ／Ｋｇで、各抗体の最大濃度は、両抗体について類似していることが分Ｃｍａｘかった。更に、５ｍｇ／Ｋｇ、及び０．５ｍｇ／Ｋｇで、各抗体の半減期（Ｔ０．５）は類似していることが分かった。２０ｍｇ／ｋｇでは、ｃ２１３９は、ｃ２１３７－ｅ１７１１よりも良好な半減期（Ｔ０．５）を有した。
表１７－個々の抗体の薬物動態を決定するための例示的なＣ５ａＲ１ Ｆｃ改変抗体の用量及び試料採取スケジュール。
薬物－標的複合体の標的結合及びその後の除去は、薬物の分布及び除去の両方に影響を与え得、用量依存的な様式でのＰＫの非線形性をもたらす可能性がある。図３０Ａ～３０Ｆは、抗体の持続性が用量依存的であることを示す。表１８は、例示的なＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫパラメータを示す。図３０Ａは、２００時間の血清中のｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｂは、２００時間の血清中のｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの用量応答曲線のグラフ表示である。図３０Ｃは、ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ、及びＭＶＺ－ＩｇＧ４の比較である。図３０Ｄは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３９のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｅは、５００時間にわたる３つの異なる濃度でのｃ２１３７－ｅ１７１１のインシリコでのグラフ表示である。図３０Ｆは、２０ｍｇ／Ｋｇの濃度で５００時間にわたるアイソタイプ対照抗体のインシリコでのグラフ表示である。非ナイーブマウスに、合計４週間にわたって週１回、ｍＡｂを複数回投与した。ｃ２１３９Ｆｃｍｏｄ、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄの両方は、５ｍｇ／ｋｇの週１回のＩＶ投与で曝露を維持することが観察された。ｍＡｂを週に１回、数週間投与しても、重度の転帰は観察されなかった。
表１８－例示的なＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体のＰＫパラメータ。
実施例２７－低用量でのＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体によるヒトＣ５ａＲ１ ＫＩマウスにおける好中球減少の阻害
本実施例は、ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄが、低用量でヒトＣ５ａＲ１ノックインマウスにおける好中球減少を阻害できることを示す。
表１９は、試験される抗体の投薬レジメン、及び好中球減少を決定するための出血時間を要約する。Ｃ５ａ投与の１分後のベースライン（－５分の出血）からの好中球変化を図３１に示す。
ｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄは、０．１ｍｇ／ｋｇ用量であっても、ビヒクル対照と比較して、Ｃ５ａ投与によって誘発された好中球減少を強力に阻害することが観察された。
表１９．投与レジメン
実施例２８－Ｆｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体の内部移行
本実施例は、ｈＣ５ａｒ１－Ｕ９３７細胞におけるＦｃ改変ヒト化単一特異性抗体及びバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体の内部移行を示す。
Ｆｃ改変、ヒト化単一特異性抗Ｃ５ａＲ１抗体、ｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄを、ｐＨは低ｐＨで明るく蛍光するが、中性ｐＨでは非蛍光である、ｐＨ感受性色素（ＤｙＬｉｇｈｔ４８８）にコンジュゲートした。コンジュゲートされた抗体を、Ｕ９３７細胞及びｈＣ５ａＲ１ノックインＵ９３７細胞とインキュベートした。図３２Ａは、各コンジュゲート抗体との６時間及び２４時間のインキュベーション後の蛍光強度を示す。
例示的なＦｃ改変Ｃ５ａＲ１抗体は、代謝ベースの内部移行を受けたことが観察された。図３２Ｂは、３００分間にわたる、ニコン共焦点実験によって観察された生細胞におけるｃ２１３７－ｅ１７１１－Ｆｃｍｏｄ及びｃ２１３９－Ｆｃｍｏｄの両方の内部移行を示す。
均等物及び範囲
当業者は、本明細書に記載される本開示の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、又は日常的な実験のみを使用して確認することができる。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図しておらず、むしろ以下の特許請求の範囲に記載されるとおりである。

Claims (107)

  1. 重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＨが、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  2. 軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＬが、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  3. ＶＨ領域を含む、抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＨが、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）、７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）、及び８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  4. ＶＬ領域を含む、抗体又はその抗原結合断片であって、前記ＶＬが、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）、１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）、及び１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  5. 抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＨ領域であって、前記ＶＨが、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号６（ＮＹＷＭＨ）、７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）及び８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域と、ＶＬ領域であって、前記ＶＬが、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列が、それぞれ、配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）、１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）及び１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域と、を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  6. 前記抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｃ領域を更に含む、請求項１～５のいずれかに記載の抗体又は抗体又はその抗原結合断片。
  7. 前記Ｆｃドメインが、独立して、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、請求項１～６のいずれかに記載の抗体又は抗体又はその抗原結合断片。
  8. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、補体成分５ａ（Ｃ５ａ）とＣ５ａＲ１との相互作用を阻害する、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  9. 前記抗体が、Ｃ５ａＲ２に結合しない、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  10. 前記抗体又は抗原結合断片が、ヒト化されている、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  11. 前記ＶＨ又は前記ＶＬが、分子の安定性を増強するように改変されている、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  12. 前記ＶＬが、配列番号５又は配列番号２５の９６位にセリン又はチロシンを含む、請求項１１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  13. 前記抗体又は抗原結合断片が、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  14. 前記抗体が、１０ｐＭ～５０ｎＭの親和性でＣ５ａＲ１に結合する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  15. 前記抗体が、０．１６ｎＭ以下の親和性でＣ５ａＲ１に結合する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  16. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球走化性を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  17. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、少なくとも１０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  18. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、Ｃ５ａ媒介性Ｃ５ａＲ１ Ｇαシグナル伝達を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  19. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、カルシウムシグナル伝達を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  20. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、ＣＤ１１ｂ発現を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  21. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球減少を阻害する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  22. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する、請求項１～１５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
  23. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する、請求項１～１５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
  24. 前記抗体が、１回の凍結融解サイクルで、最大２週間、４℃で安定である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  25. 先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする、核酸。
  26. 請求項２３に記載の核酸を含む、細胞。
  27. 先行請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を作製する方法であって、前記抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、前記抗体又はその抗原結合断片の産生を可能にする条件下で前記細胞を培養することと、を含む、方法。
  28. 自己免疫疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体又はその抗原結合断片が、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、かつ配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、方法。
  29. 自己免疫疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を含み、かつヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する前記抗体又はその抗原結合断片が、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＬが、配列番号１５と少なくとも９０％同一である、方法。
  30. 自己免疫疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体又はその抗原結合断片が、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、かつ
    配列番号６（ＮＹＷＭＨ）を含むＨＣＤＲ１、配列番号７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）を含むＨＣＤＲ３を含む、重鎖、並びに
    配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）を含むＬＣＤＲ１、配列番号１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）を含むＬＣＤＲ３を含む、軽鎖を含む、方法。
  31. 自己免疫疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号４の重鎖又は配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列の重鎖を含む、方法。
  32. 自己免疫疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号５の軽鎖又は配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列の軽鎖を含む、方法。
  33. 好中球減少によって引き起こされる疾患を治療する方法であって、前記治療を必要とする対象に、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗体結合断片を投与することを含む、方法。
  34. 前記好中球減少が、高レベルのＣ５ａによって引き起こされる、請求項３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記疾患が、ＡＮＣＡ血管炎又はループスである、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記障害が、関節リウマチである、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記障害が、腎臓障害である、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の方法。
  38. Ｃ５ａＲ１に結合するモノクローナル抗体を使用するＣ５ａシグナル伝達の阻害方法であって、前記モノクローナル抗体が、
    配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号２５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、方法。
  39. 配列番号３でＣ５ａＲ１に結合するＶＨ１及びＶＬ１を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号１又は配列番号２でＣ５ａＲ１に結合するＶＨ２及びＶＬ２を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  40. 配列番号１又は配列番号２でＣ５ａＲ１に結合するＶＨ１及びＶＬ１を含む第１の抗原結合ドメインと、配列番号３でＣ５ａＲ１に結合するＶＨ２及びＶＬ２を含む第２の抗原結合ドメインと、を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  41. 前記ＶＨ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項３９又は請求項４０に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  42. 前記ＶＬ１が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項３９又は請求項４０に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  43. 前記ＶＨ２が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項３９又は請求項４０に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  44. 前記ＶＬ２が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項３９又は請求項４０に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  45. 配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の重鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  46. 配列番号１３の軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の軽鎖を含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  47. 配列番号１２の重鎖、又は配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の重鎖を含み、配列番号１３の軽鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一の軽鎖を更に含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  48. 前記重鎖が、Ｆｃドメインに連結されたＶＨ１を含む、請求項３９～４７のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  49. 前記Ｆｃドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列、若しくは配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ＶＨ２、及び／又は配列番号１７のアミノ酸配列、若しくは配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ＶＬ２を含む、ｓｃＦｖに更に連結される、請求項４８に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  50. 前記Ｆｃドメインが、独立して、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、請求項４８又は請求項４９に記載のバイパラトピック抗体又は抗体又はその抗原結合断片。
  51. 前記ｓｃＦｖが、リンカーを介して前記Ｆｃドメインに連結されている、請求項４９に記載のバイパラトピック抗体又は抗体又はその抗原結合断片。
  52. 前記リンカーが、配列番号２６～３７のうちのいずれかを有するアミノ酸配列を含む少なくとも５アミノ酸を含む、請求項５１に記載のバイパラトピック抗体。
  53. 配列番号１６を含む前記ＶＨ２と、配列番号１７を含む前記ＶＬ２とが、リンカーを介して互いに連結されている、請求項４９に記載のバイパラトピック抗体。
  54. 前記リンカーが、配列番号３１の１～１０個のリピートを含む、請求項５３に記載のバイパラトピック抗体。
  55. 前記ＶＨ２及び前記ＶＬ２が、前記バイパラトピック抗体の熱安定性を改善するための１つ以上の変異を更に含む、請求項４９に記載のバイパラトピック抗体。
  56. 前記変異が、配列番号１２の５５９位及び配列番号１２の６３０位でのシステインの組み込みを含む、請求項５５に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  57. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、補体成分５ａ（Ｃ５ａ）とヒトＣ５ａＲ１との相互作用を阻害する、請求項３９～５６のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  58. 前記抗体が、Ｃ５ａＲ２に結合しない、請求項３９～５７のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  59. 前記抗体又は抗原結合断片が、ヒト化されている、請求項３９～５８のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  60. 前記抗体又は抗原結合断片が、マウスＣ５ａＲ１と交差反応しない、請求項３９～５９のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  61. 前記抗体が、１回の凍結融解サイクルで、最大２週間、４℃で安定である、請求項３９～６０のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  62. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球走化性を阻害する、請求項３９～６１のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  63. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、高いＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する、請求項３９～６２のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  64. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、少なくとも１０ｎＭのＣ５ａ濃度の存在下で好中球走化性を阻害する、請求項３９～６２のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  65. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、Ｃ５ａ媒介性Ｃ５ａＲ１ Ｇαシグナル伝達を阻害する、請求項３９～６４のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  66. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、カルシウムシグナル伝達を阻害する、請求項３９～６５のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  67. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、ＣＤ１１ｂ発現を阻害する、請求項３９～６６のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  68. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球減少を阻害する、請求項３９～６７のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  69. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、β－アレスチンシグナル伝達を阻害する、請求項３９～６１のいずれかに記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  70. Ｃ５ａＲ１に結合する前記抗体が、好中球におけるＲＯＳ産生を阻害する、請求項３９～６１のいずれかに記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  71. 請求項３９～６８のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体をコードする、核酸。
  72. 請求項７１に記載の核酸を含む、細胞。
  73. 前記抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、前記抗体又はその抗原結合断片の産生を可能にする条件下で前記細胞を培養することと、を含む、請求項３９～７０のいずれか一項に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片を作製する、方法。
  74. バイパラトピック抗体を使用して自己免疫疾患を治療する方法であって、前記抗体がヒト補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合し、
    ａ．第１のＶＨ及び第１のＶＬである、ＶＨ１及びＶＬ１であって、前記ＶＨ１が、配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ１が、配列番号１５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨ１及びＶＬ１と、
    ｂ．第２のＶＨ及び第２のＶＬである、ＶＨ２及びＶＬ２であって、前記ＶＨ２が、配列番号１６と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬ２が、配列番号１７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨ２及びＶＬ２と、を含む、方法。
  75. 好中球減少によって引き起こされる疾患を治療する方法であって、先行請求項のいずれかに記載のバイパラトピック抗体による抗体又はその抗原結合断片を使用する、方法。
  76. 前記好中球減少が、高レベルのＣ５ａによって引き起こされる、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記疾患が、ＡＮＣＡ血管炎又はループスである、請求項７３～７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記障害が、関節リウマチである、請求項７３～７７のいずれかに記載の方法。
  79. 前記障害が、腎臓障害である、請求項７３～７８のいずれかに記載の方法。
  80. 前記障害が、脳卒中である、請求項７３～７８又は２７～３３のいずれかに記載の方法。
  81. 前記抗体が、改変ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、又はＩｇＧ２の定常ドメインを含む、先行請求項のいずれかに記載の単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体。
  82. 前記Ｃ５ａＲ１が、改変ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む、請求項８１に記載の抗体。
  83. 前記改変ＩｇＧ４ Ｆｃドメインが、Ｆ２３４、Ｌ２３５及び／又はＤ２６５位での置換を含む、請求項８２に記載の抗体。
  84. 前記Ｆ２３４位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、又はトリプトファンから選択される疎水性アミノ酸である、請求項８３に記載の抗体。
  85. 前記Ｆ２３４位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、バリンである、請求項８３に記載の抗体。
  86. 前記Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、酸性アミノ酸である、請求項８３に記載の抗体。
  87. 前記Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、グルタミン酸又はアスパラギン酸から選択される酸性アミノ酸である、請求項８６に記載の抗体。
  88. 前記Ｌ２３５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、アスパラギン酸である、請求項８６に記載の抗体。
  89. 前記Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、非極性アミノ酸である、請求項８３に記載の抗体。
  90. 前記Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びバリンから選択される非極性アミノ酸である、請求項８９に記載の抗体。
  91. 前記Ｄ２６５位でのＩｇＧ４ Ｆｃ置換が、グリシンである、請求項８９に記載の抗体。
  92. 前記抗体が、Ｓ２２８での置換を更に含む、先行請求項のいずれかに記載の抗体。
  93. 前記Ｓ２２８での置換が、プロリンである、請求項９２に記載の抗体。
  94. 前記抗体が、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ及びＤ２６５Ｇ置換の組み合わせを含む改変ＩｇＧ４定常ドメインを含む、先行請求項のいずれかに記載の単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体。
  95. 請求項８１～９４のいずれかに記載の単一特異性又はバイパラトピックＣ５ａＲ１抗体を使用する、抗体依存性細胞傷害、抗体依存性食作用、及び／又は補体依存性細胞傷害を低減又は予防する、方法。
  96. 補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号１４の重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号２５の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  97. 補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号６（ＮＹＷＭＨ）のＨＣＤＲ１、配列番号７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）のＨＣＤＲ２、及び配列番号８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）のＬＣＤＲ１、配列番号１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）のＬＣＤＲ２、及び配列番号１１（ＡＱＹＴＬＶＰＬＴ）のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  98. 配列番号６９の重鎖と配列番号７０の軽鎖とを含む、補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片。
  99. 補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号９（ＲＡＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ）のＬＣＤＲ１、配列番号１０（ＫＶＳＮＲＦＳ）のＬＣＤＲ２、及び配列番号２１（ＡＱＳＴＬＶＰＬＴ）のＬＣＤＲ３を含む軽鎖と、
    配列番号６（ＮＹＷＭＨ）のＨＣＤＲ１、配列番号７（ＹＬＮＰＳＳＧＹＴＫＹＡＱＫＦＱＧ）のＨＣＤＲ２、及び配列番号８（ＳＧＧＤＮＹＧＮＰＹＹＦＤＲ）のＨＣＤＲ３を含む重鎖と、
    置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、
    配列番号２２（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＮ）のＬＣＤＲ４、配列番号２３（ＫＶＳＮＲＬＳ）のＬＣＤＲ５、配列番号２４（ＳＱＳＴＨＶＰＹＴ）のＬＣＤＲ６、配列番号１８（ＡＹＡＭＳ）のＨＣＤＲ４、配列番号１９（ＳＩＳＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）のＨＣＤＲ５、及び配列番号２０（ＧＹＱＲＦＳＧＦＡＹ）のＨＣＤＲ６を含むｓｃＦｖと、を含み
    前記ｓｃＦｖが、前記改変Ｆｃドメインに連結されている、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  100. 補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号１５の第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    配列番号１４の第１の重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインと、
    配列番号１７の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ）及び配列番号１６の配列番号の第２の重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖと、を含み、
    前記ｓｃＦｖが、前記改変Ｆｃドメインに連結されている、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  101. 補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号７２の軽鎖と配列番号７１の重鎖とを含む、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  102. 補体成分５ａ受容体（Ｃ５ａＲ１）に結合するバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号２５の第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、
    配列番号１４の第１の重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号１７の第２の軽鎖可変領域（ＶＬ）及び配列番号１６の配列番号の第２の重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖと、を含み、
    前記ｓｃＦｖが、Ｆｃドメインに連結されている、バイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  103. 置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインを更に含み、その結果前記ｓｃＦｖが前記改変Ｆｃドメインに連結される、請求項１０２に記載のバイパラトピック抗体又はその抗原結合断片。
  104. 補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号４３の重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号４８の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  105. 置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインを更に含む、請求項１０４に記載の抗体。
  106. 補体成分５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、
    配列番号１４の重鎖可変領域（ＶＨ）と、
    配列番号１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  107. 置換Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、及びＤ２６５Ｇを含む改変Ｆｃドメインを更に含む、請求項１０６に記載の抗体。
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