JP2024094789A - ＴＮＦ－α産生量減少剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－αの産生量を減少させることができるＴＮＦ－αの産生量減少剤を提供する。
【解決手段】 ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有するヒト由来マクロファージ用のＴＮＦ－α産生量減少剤。
【選択図】 図１

Description

本発明は、ＴＮＦ－α産生量減少剤に関する。

炎症とは、異物や組織の障害等により、生体にとって有害な刺激が侵入又は内部で形成された場合に生じる局所的な生体防御反応であり、生体にとって有害な刺激を認識、排除することで、局所の機能や構造を回復して正常に保ちつづけるために重要な役割を果たしている。しかしながら、活性化されたさまざまな生体反応システムは、自己免疫疾患等に見られるように、ときに正常な組織や機能に障害を与える場合もあることから、過剰なものは病的現象として治療の対象となる。これらの疾患に対しては抗炎症剤として従来、ステロイド性又は非ステロイド性薬剤等が使用されている。しかしながら、これらの抗炎症剤には、白血球異常や血小板異常等の副作用があるため、使用が制限されることもある（特許文献１、特許文献２）。

特開２００８－６９１１１号公報 特開２００９－２６３３０８号公報

炎症因子の一つとしてＴＮＦ－αが知られている。また、ＴＮＦ－αはマクロファージにより生産されることが知られている。
本発明は、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－αの産生量を減少させることができるＴＮＦ－αの産生量減少剤を提供することを目的とする。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有するヒト由来マクロファージ用のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本発明によれば、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－αの産生量を減少させることができるＴＮＦ－αの産生量減少剤を提供することができる。

図１は、ヒト由来Ｍ１マクロファージを培養している培地に製造例１のＳＥＬＰ８Ｋを所定の濃度となるように加えた際の、ヒト由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量の経時変化を示すグラフである。 図２は、マウス由来Ｍ１マクロファージを培養している培地に製造例１のＳＥＬＰ８Ｋを所定の濃度となるように加えた際の、マウス由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量の経時変化を示すグラフである。

以下、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤について具体的な実施形態を示しながら説明する。しかしながら、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲において適宜変更して適用することができる。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有する。
本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤が、上記構成であることにより、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－αの産生量を減少させることができる。
したがって、炎症部の炎症を抑制できることが期待される。

まず、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤に含有されるポリペプチド（Ａ）について説明する。
ポリペプチド（Ａ）は、天然物からの抽出、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって得られる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。天然物からの抽出、有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、ポリペプチド（Ａ）を得られるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。

ポリペプチド（Ａ）は、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有する。また、ポリペプチド（Ａ）は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、上記アミノ酸配列を合計１～１５０個有することが好ましく、１～１００個有することがさらに好ましい。

ポリペプチド（Ａ）が、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計２個以上有する場合、各アミノ酸配列は同一でも異なっていてもよい。また、同一のアミノ酸配列を複数含む場合、連続していてもよい。具体的には、（ＶＧＶＰＧ）_ａ配列、（ＧＶＧＶＰ）_ｂ配列及び（ＶＰＧＶＧ）_ｃ配列からなる群より選ばれる少なくとも１種を含むものであってもよい。
なお、上記においてａ～ｃは、それぞれアミノ酸配列の連続する数であり、２～２００の整数である。
各アミノ酸配列が連続する数は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、２～１００（上記ａ～ｃが２～１００）が好ましく、さらに好ましくは２～５０（上記ａ～ｃが２～５０）であり、特に好ましくは２～１０（上記ａ～ｃが２～１０）である。

また、ポリペプチド（Ａ）において、各アミノ酸配列が連続するものである場合、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列の連続する個数は、それぞれ同一でも異なっていてもよい。
すなわち、（ＶＧＶＰＧ）_ａ配列、（ＧＶＧＶＰ）_ｂ配列及び（ＶＰＧＶＧ）_ｃ配列の、ａ、ｂ及びｃが同一であってもよく、異なっていてもよい。

ポリペプチド（Ａ）は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（４）を１～２００個有していることが好ましい。
また、ポリペプチド（Ａ）は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（４）を、１～１００個有することが好ましく、１～６０個有することがさらに好ましい。
また、ポリペプチド（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（４）を２個以上有する場合、ＧＡＧＡＧＳ配列（４）は連続していてもよい。具体的には、ポリペプチド（Ａ）は（ＧＡＧＡＧＳ）_ｄ配列を含むものであってもよい。
なお、上記においてｄはＧＡＧＡＧＳ配列（４）の連続する数であり、整数である。
ＧＡＧＡＧＳ配列（４）が連続する数は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、２～１００（上記ｄが２～１００）が好ましく、さらに好ましくは２～５０（上記ｄが２～５０）であり、特に好ましくは２～１０（上記ｄが２～１０）である。

ポリペプチド（Ａ）は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）を１～５０個有することが好ましい。
また、ポリペプチド（Ａ）は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）を、１～４０個有することが好ましく、さらに好ましくは１～２０個有することである。
また、ポリペプチド（Ａ）が、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）を２個以上有する場合、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）は連続していてもよい。具体的には、ポリペプチド（Ａ）は（ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ）_ｅ配列を含むものであってもよい。
なお、上記においてｅはＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）が連続する数であり、整数である。
ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）が連続する数は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、２～３０（上記ｅが２～３０）が好ましく、さらに好ましくは２～１０（上記ｅが２～１０）である。

ポリペプチド（Ａ）は、さらに、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）、ＧＡＧＡＧＳ配列（４）及びＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列同士の間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。介在アミノ酸配列（Ｚ）は、アミノ酸１個又はアミノ酸が２個以上結合したアミノ酸配列である。介在アミノ酸配列（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、細胞及び組織への親和性の観点から、１～３０個が好ましく、さらに好ましくは１～１５個、特に好ましくは１～１０個である。
介在アミノ酸配列（Ｚ）の具体例としては、ＶＡＡＧＹ配列（８）、ＧＡＡＧＹ配列（９）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。

ポリペプチド（Ａ）のＮ及び／又はＣ末端には、末端アミノ酸配列（Ｓ）があってもよい。末端アミノ酸配列（Ｓ）は、アミノ酸１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。末端アミノ酸配列（Ｓ）を構成するアミノ酸の数は、細胞及び組織への親和性の観点から、１～１００個が好ましく、さらに好ましくは１～５０個、特に好ましくは１～４０個である。
末端アミノ酸配列（Ｓ）の具体例としては、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１０）等が挙げられる。

ポリペプチド（Ａ）は、上記末端アミノ酸配列（Ｓ）以外に、発現させたポリペプチド（Ａ）の精製又は検出を容易にするために、ポリペプチド（Ａ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ－Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ２２ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ４１ＴＭ、Ｇｌｕ－Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ－１）グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ－１）グルタチオン
（ｉ－２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ－２）アミロース
（ｉ－３）ＨＱタグ （ｉｉ－３）ニッケル
（ｉ－４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ－４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ－５）ＨＡタグ （ｉｉ－５）抗ＨＡ抗体
（ｉ－６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ－６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ－７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ－７）ニッケル又はコバルト
上記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるポリペプチド（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。

ポリペプチド（Ａ）がＶＧＶＰＧ配列（１）を含む場合、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）のアミノ酸数の割合は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、３５～１００％であることが好ましく、さらに好ましくは４０～１００％であり、次にさらに好ましくは４０～９５％であり、特に好ましくは４５～８０％である。

ポリペプチド（Ａ）がＧＶＧＶＰ配列（２）を含む場合、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸数の割合は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、３５～１００％であることが好ましく、さらに好ましくは４０～１００％であり、次にさらに好ましくは４０～９５％であり、特に好ましくは４５～８０％である。

ポリペプチド（Ａ）がＶＰＧＶＧ配列（３）を含む場合、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸数の割合は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、３５～１００％であることが好ましく、さらに好ましくは４０～１００％であり、次にさらに好ましくは４０～９５％であり、特に好ましくは４５～８０％である。

ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列のアミノ酸数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜アミノ酸の数の割合の測定方法１＞
特定のアミノ酸残基でポリペプチドを切断するプロテアーゼを２種類以上用いてポリペプチド（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（以下、「ＨＰＬＣ」と記載する）にて切断したポリペプチドを分離し、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、ポリペプチド（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の式により、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸の数の割合を算出する。
ＶＧＶＰＧ配列（１）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＶＧＶＰＧ配列（１）の数×５／ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数｝×１００
ＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＧＶＧＶＰ配列（２）の数×５／ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数｝×１００
ＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＶＰＧＶＧ配列（３）の数×５／ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数｝×１００
ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ポリペプチド（Ａ）は、ＧＶＧＶＰ配列（２）を含むことが好ましく、「ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸数の割合」が上記の好ましい範囲を満たすことで、ＴＮＦ－αの産生量の減少効果が大きく向上する。

ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、０～６５％であることが好ましく、さらに好ましくは０～６０％であり、次にさらに好ましくは５～６０％であり、特に好ましくは２０～５５％である。

ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜アミノ酸の数の割合の測定方法２＞
特定のアミノ酸残基でポリペプチドを切断するプロテアーゼを２種類以上用いてポリペプチド（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、ＨＰＬＣにて切断したポリペプチドを分離し、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、ポリペプチド（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の式により、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸数の割合を算出する。
ＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＧＡＧＡＧＳ配列（４）の数×６／ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数｝×１００

ポリペプチド（Ａ）のゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法による分子質量は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、０．４～２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは０．４～１２０ｋＤａである。

なお、ＧＰＣ法による分子質量の測定条件は以下の通りである。
装置：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣシステム
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ ＯＨｐａｋ ＳＢ－８０６Ｍ ＨＱ
移動相：０．１５Ｍ リン酸緩衝液 ｐＨ７．０
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＲＩＤ検出器
温度：４０℃

好ましいポリペプチド（Ａ）の例を以下に示す。
（ｉ）ＶＧＶＰＧ配列（１）からなるポリペプチド。
（ｉｉ）ＧＶＧＶＰ配列（２）からなるポリペプチド。
（ｉｉｉ）ＶＰＧＶＧ配列（３）からなるポリペプチド。
（ｉｖ）ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）からなるポリペプチド。
（ｖ）（ＧＡＧＡＧＳ）_４配列（６）及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を有するポリペプチド。
具体例としては、（ＧＡＧＡＧＳ）_４配列（６）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるポリペプチドに、さらに、（ＧＡＧＡＧＳ）_２配列（１１）が１個化学結合した、分子質量が約８０ｋＤａの配列（１２）のポリペプチド（ＳＥＬＰ８Ｋ）；（ＧＡＧＡＧＳ）_２配列（１１）を１７個及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を１７個有し、これらが交互に化学結合してなる、分子質量が約８２ｋＤａの配列（１３）のポリペプチド（ＳＥＬＰ０Ｋ）等が挙げられる。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有していてもよい。
ポリペプチド（Ａ’）のアミノ酸配列と、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列の相同性は、９０％以上であることが好ましく、９５％以上であることがより好ましい。
なお、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及びポリペプチド（Ａ’）の内、ポリペプチド（Ａ）のみを含有していてもよく、ポリペプチド（Ａ’）のみを含有していてもよく、ポリペプチド（Ａ）及びポリペプチド（Ａ’）の両方を含有していてもよい。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、上記ポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ’）を含有するものである。
ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計含有量は、ＴＮＦ－αの産生量の減少の観点から、ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として、０．０００１～３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１～２０重量％である。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤には、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）以外に、水、生体材料の培地を含んでもよい。
水としては、特に限定するものではなく、滅菌されたものが好ましい。滅菌方法としては、０．２０μｍ以下の孔径を持つ精密ろ過膜を通した水、限外ろ過膜を通した水、逆浸透膜を通した水及びオートクレーブで１２１℃２０分加熱して過熱滅菌したイオン交換水等が挙げられる。
ＴＮＦ－α産生量減少剤中の水の含有量（重量％）は、細胞及び組織への親和性の観点から、下限は、好ましくは６８．４０重量％であり、次にさらに好ましくは６８．６２重量％であり、次にさらに好ましくは６８．７９重量％であり、次にさらに好ましくは７０．００重量％であり、次にさらに好ましくは７８．４０重量％であり、特に好ましくは７８．６２重量％であり、次に特に好ましくは７８．７９重量％であり、最も好ましくは８０．００重量％である。また、上限は、好ましくは９９．９９９９重量％であり、さらに好ましくは９９．９９００重量％であり、次にさらに好ましくは９９．３９９９重量％であり、次にさらに好ましくは９９．３９００重量％であり、次にさらに好ましくは９９．１７９９重量％であり、特に好ましくは９９．１７００重量％であり、次に特に好ましくは９９．００９９重量％であり、最も好ましくは９９．００００重量％である。
また、ＴＮＦ－α産生量減少剤が水や生体材料の培地を含む場合、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）は、ＴＮＦ－α産生量減少剤に溶解していることが好ましい。
この場合、ＴＮＦ－α産生量減少剤に溶解しているポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計重量は、ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として、０．０００１～３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１～２０重量％である。
なお、ＴＮＦ－α産生量減少剤が水や生体材料の培地を含む場合、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）は、ＴＮＦ－α産生量減少剤に溶解していなくても良い。
ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）が、ＴＮＦ－α産生量減少剤に溶解していない場合、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）は、スポンジ状、シート状、繊維状であっても良い。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、さらに無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。

無機塩として、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。リン酸塩は無機塩に含まない。
ＴＮＦ－α産生量減少剤中の無機塩の含有量（重量％）は、人間の体液と同等にするという観点から、ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として０．５～１．３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．７～１．１重量％、特に好ましくは０．８５～０．９５重量％である。

リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
ＴＮＦ－α産生量減少剤中のリン酸（塩）の含有量（重量％）は、皮膚弾性を向上する観点から、ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として０．１０～０．３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１２～０．２８重量％、特に好ましくは０．１４～０．２６重量％である。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、さらに抗炎症作用を奏する化合物、アスコルビン酸、グルタチオン、α－トコフェロール、ポリフェノール、トリプトファン、レズベラトロール等を含有していてもよい。

ＴＮＦ－α産生量減少剤のｐＨは、ＴＮＦ－α産生量減少剤の安定性の観点から、６．８～８．８が好ましく、さらに好ましくは７．３～８．３である。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、各成分を混合することにより得られ、製造方法は特に限定されるものではない。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－αの生産量を減少させることができるので、ヒト由来の細胞や、組織等の生体材料を培養する際に、該生体材料の炎症を抑える目的で、該生体材料の培地に加えてもよい。
生体材料の培地としては、特に限定されないが、例えば、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＤＭＥＭ培地及びαＭＥＭ培地等が挙げられる。
また、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及びポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が０．００００１～３０重量％となるように培地に加えられることが好ましく、０．００１～８０重量％となるように加えられることが望ましい。
また、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が、ヒト由来マクロファージを含有する培地の重量に対して、０．００００１～３０重量％となるように添加されることが好ましい。また、本発明のヒト由来マクロファージのＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が、培地の重量に対して、０．１重量％以下の低濃度（例えば、０．００００１～０．１重量％）となるように添加された場合でも、十分な効果を発揮できる点で特に優れている。
また、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が、ヒト由来マクロファージ細胞１個に対して、０．００１～２００ｎｇとなるように添加されることが好ましい。また、本発明のヒト由来マクロファージのＴＮＦ－α産生量減少剤は、ポリペプチド（Ａ）及び／又はポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が、ヒト由来マクロファージ細胞１個に対して、低濃度（例えば２．５ｎｇ／個以下、より好ましくは、０．００１～２．５ｎｇ／個）となるように添加された場合でも、十分な効果を発揮できる点で特に優れている。
培養対象の生体材料としては、特に限定されないが、移植用細胞、移植用組織等が挙げられる。また、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤を培地に加え、該培地を生体の創傷部位に適用してもよい。すなわち、生体に直接使用してもよい。
なお、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、特に、ヒト由来マクロファージの中でＭ１型マクロファージからＴＮＦ－αが生産されるのを抑制することができるので、Ｍ１型マクロファージが存在する環境で用いられることが好ましい。

本明細書には、以下の開示が記載されている。

本開示（１）は、ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有するヒト由来マクロファージ用のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（２）は、上記ポリペプチド（Ａ）は、ＶＧＶＰＧ配列（１）を含んでおり、上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である本開示（１）に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（３）は、上記ポリペプチド（Ａ）は、ＧＶＧＶＰ配列（２）を含んでおり、上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である本開示（１）に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（４）は、上記ポリペプチド（Ａ）は、ＶＰＧＶＧ配列（３）を含んでおり、上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である本開示（１）に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（５）は、上記ポリペプチド（Ａ）が、さらにＧＡＧＡＧＳ配列（４）を１～２００個有する本開示（１）～（４）のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（６）は、上記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合が０～６５％である本開示（５）に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（７）は、上記ポリペプチド（Ａ）が、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）を１～５０個有するポリペプチドである本開示（１）～（６）のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（８）は、上記ポリペプチド（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）_４配列（６）及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を有するポリペプチドである本開示（１）～（７）のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（９）は、上記ポリペプチド（Ａ）が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む本開示（１）に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（１０）は、上記ポリペプチド（Ａ）のゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法による分子質量が０．４～２００ｋＤａである本開示（１）～（９）のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

本開示（１１）は、上記ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として、上記ポリペプチド（Ａ）及び／又は上記ポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が０．０００１～３０重量％である本開示（１）～（１０）のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤である。

以下に実施例として本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。なお、以下において、特記しない限り「部」は重量部を意味する。

＜製造例１＞
［ＳＥＬＰ８Ｋの作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋ生産株の作製
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴＳ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、ポリペプチド（Ａ）の一種である（ＧＡＧＡＧＳ）_４配列（６）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を１３個有し、これらが交互に化学結合した構造を有する分子質量が約８０ｋＤａの配列（１２）のポリペプチドであるＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を生産する方法を示す。

○ＳＥＬＰ８Ｋ生産株の培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。該ＬＢ培地に、カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え培養液とし、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液の濁度がＯＤ_６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、該培養液４０ｍｌを、４２℃に温められた別のフラスコに移し、４２℃で約２時間培養した。その後、培養した培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ_６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。

○ＳＥＬＰ８Ｋの精製
集菌した大腸菌を用い、下記工程１：菌体溶解、工程２：遠心分離による不溶性細片の除去、工程３：硫安沈殿、工程４：限外濾過、工程５：陽イオン交換クロマトグラフィー、工程６：限外濾過、工程７：凍結乾燥により大腸菌バイオマスからタンパク質を精製した。このようにして、分子質量が約８５ｋＤａの精製したＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を得た。

工程１：菌体溶解
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（５５ＭＰａ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。

工程２：遠心分離による不溶性細片の除去
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。

工程３：硫安沈殿
工程２で回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。次に、溶解した液に対して、硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。

工程４：限外濾過
工程３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファイバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。工程３で得た溶液に対して、２０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。

工程５：陽イオン交換クロマトグラフィー
ポリペプチドの濃度が２０ｇ／Ｌとなるように限外濾過後のポリペプチド溶液を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に加え、その後、陽イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｉｌｏｔ（ＧＥヘルスケア社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。

工程６：限外濾過
工程５で得た溶出画分を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。

工程７：凍結乾燥
ポリペプチド濃度が３ｇ／Ｌとなるように、工程６で得たポリペプチド溶液を脱イオン水で希釈し、水位が１０ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れた。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、－３０℃、２４時間かけて凍結させた。凍結後、真空度が５Ｐａ以下、－３０℃で、１１０時間かけて１次乾燥、真空度が５Ｐａ以下、３０℃で、４８時間かけて２次乾燥させ、スポンジ状のＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を得た。また、得られたＳＥＬＰ８Ｋを用いて、下記「アミノ酸の数の割合の測定方法」により、ＳＥＬＰ８Ｋ中のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）及びＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合を測定した。結果を表１に示す。

＜アミノ酸の数の割合の測定方法＞
トリプシン（プロメガ（株）製）又はエラスターゼ（ブタ膵臓由来、和光純薬（株）製）を用いて工程７で得られたスポンジ状のＳＥＬＰ８Ｋを３７℃で２４時間反応し、３０残基以下程度まで分解した。その後、ＨＰＬＣにて分離し、ＢｉｏｐｈａｒｍａＬｙｎｘ １．２（日本ウォーターズ（株）製）にてアミノ酸配列を読み取った。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、ＳＥＬＰ８Ｋの全配列を決定した。その後、以下記載の式により、ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）、ＶＰＧＶＧ配列（３）及びＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合を算出した。
ＶＧＶＰＧ配列（１）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＶＧＶＰＧ配列（１）の数×５／ＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の総数｝×１００
ＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＧＶＧＶＰ配列（２）の数×５／ＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の総数｝×１００
ＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＶＰＧＶＧ配列（３）の数×５／ＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の総数｝×１００
ＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合（％）＝｛ＧＡＧＡＧＳ配列（４）の数×６／ＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の総数｝×１００

＜ヒトマクロファージの調整＞
ヒト由来単球ＴＨＰ－１細胞を４８ｗｅｌｌプレート（コーニング社製）にて、２０ｎｇ／ｍＬホルボール－１２－ミリスタート－１３アセテート（ＰＭＡ）含有ＲＰＭＩ１６４０培地（１０ｗｔ％ＦＢＳ，１ｗｔ％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＳ）含有）５００μＬ中に２×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で懸濁し、１日間Ｍ０マクロファージ（ｎａｉｖｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）分化刺激を与え培地を吸引除去した。その後ＰＭＡフリーのＲＰＭＩ１６４０培地で４時間培養しヒト由来Ｍ０マクロファージを得た。
ヒト由来Ｍ０マクロファージの培養液を除去し、２０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（ＬＰＳ，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（１０ｗｔ％ＦＢＳ，１ｗｔ％ＰＳ含有）３００μＬを加えて１日間培養することで、ヒト由来Ｍ１マクロファージを得た。

＜マウスマクロファージの調整＞
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（週齢６、メス）の大腿骨、脛骨を、セルストレイナー（４０μｍ）上で、ＩＭＤＭ（＃２１０５６－０２３： ＧＩＢＣＯ， ｔｈｅｒｍｏｓ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ， ＵＳＡ）［１ｗｔ％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＳ）含有］により洗浄し、ろ過することで、細胞を含むＩＭＤＭを回収した。
その後、赤血球溶解バッファー（４．１５ｇＮＨ_４Ｃｌ，０．５ｇＮａＨＣＯ_３，０．０１８６ｇＥＤＴＡを再蒸留水に溶解）１ｍＬを加えて１分間２５℃で反応させた。赤血球溶解バッファー１ｍＬに対してＩＭＤＭ（１ｗｔ％ＰＳ含有）を７．５ｍＬ加えた後、遠心分離機による遠心（２００Ｇ、３ｍｉｎ）を実施し、細胞を回収した。
その後、細胞を再度適量のＩＭＤＭ（１ｗｔ％含有）で懸濁し洗浄し、遠心分離機による遠心（２００Ｇ、３ｍｉｎ）を実施し、細胞を回収した。
その後、遠心分離をして得た細胞（骨髄由来のマクロファージ単球）を、４８ｗｅｌｌプレート（コーニング社製）にて、ＩＭＤＭ［２０ｗｔ％ＦＢＳ，５０ｎｇ／ｍＬマウスマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｉｎｃ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ），１ｗｔ％ＰＳ含有］５００μＬ中に２×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で懸濁し、培養した。
３日後、培地［ＩＭＤＭ（２０ｗｔ％ＦＢＳ，５０ｎｇ／ｍＬＭ－ＣＳＦ，１ｗｔ％ＰＳ含有）］を交換しさらに三日間培養し、マウス由来Ｍ０マクロファージを得た。
マウス由来Ｍ０マクロファージの培養液を除去し、２０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（ＬＰＳ， Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）を含有するＩＭＤＭ（５ｗｔ％ＦＢＳ，１ｗｔ％ＰＳ含有）３００μＬを加えて１日間培養することで、マウス由来Ｍ１マクロファージを得た。

＜マクロファージの細胞形態への影響評価＞
ＳＥＬＰ８Ｋの濃度が０ｗｔ％又は５ｗｔ％となるように製造例１の工程７で得られたポリペプチドを、各ヒト由来Ｍ１マクロファージ及び各マウス由来Ｍ１マクロファージの培地に加え、７２時間培養した。
７２時間培養後のマクロファージの形態を、イメージＪ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）で観察し、形状を以下の通り評価した。
ヒト由来Ｍ１マクロファージに濃度が５％となるようにＳＥＬＰ８Ｋを添加した場合、マクロファージの面積は５５８μｍ^２／個（ＳＥＬＰ８Ｋ濃度が０％の場合、５９６μｍ^２／個）であった。
また、ヒト由来Ｍ１マクロファージに濃度が５％となるようにＳＥＬＰ８Ｋを添加した場合、マクロファージの真円度は０．７３（ＳＥＬＰ８Ｋ濃度が０％の場合、０．７４）であった。
一方、マウス由来Ｍ１マクロファージに濃度が５％となるようにＳＥＬＰ８Ｋを添加した場合、マクロファージの面積は８４３μｍ^２／個（ＳＥＬＰ８Ｋ濃度が０％の場合、４１６μｍ^２／個）であった。
また、マウス由来Ｍ１マクロファージに濃度が５％となるようにＳＥＬＰ８Ｋを添加した場合、マクロファージの真円度は０．７６（ＳＥＬＰ８Ｋ濃度が０％の場合、０．６４）であった。
なお、上記のマクロファージの面積及び真円度は、それぞれ１００個のマクロファージ細胞の平均値である。

上記の通り、ＳＥＬＰ８Ｋの添加により、マウス由来Ｍ１マクロファージは形状が大きくなり真円形状に近くなる変化が見られた一方で、ヒト由来Ｍ１マクロファージでは、マウス由来Ｍ１マクロファージではそのような変化が見られなかった。この結果より、ＳＥＬＰ８Ｋの添加によってマウス由来Ｍ１マクロファージで生じる現象と、ＳＥＬＰ８Ｋの添加によってヒト由来Ｍ１マクロファージで生じる現象は異なるものであることが示唆された。

＜腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）の産生量測定＞
上記の＜ヒトマクロファージの調整＞で得た４８ｗｅｌｌプレート［ヒト由来Ｍ１マクロファージを２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度となるように、４８ｗｅｌｌプレート（コーニング社製）に播種］から、培地を吸引除去した。
その後、製造例１の工程７で得られたポリペプチドを、ＳＥＬＰ８Ｋが、０．０ｗｔ％、０．００１ｗｔ％、０．１ｗｔ％、１．０ｗｔ％及び５．０ｗｔ％の濃度となるように、ＬＰＳを２０ｎｇ／ｍＬの濃度で含有するＲＰＭＩ１６４０培地に加え、さらに当該培地５００ｍｇを、各ｗｅｌｌに加えた。
その後、炭酸ガスインキュベータ（５％二酸化炭素、９５％空気環境下）を用いて３７℃で、６、２４、７２時間インキュベートした。各培養時間後のＲＰＭＩ培地中の上清のＴＮＦ－αをＴＮＦ－α定量ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて定量したと。結果を図１に示す。
図１は、ヒト由来Ｍ１マクロファージを培養している培地に製造例１のＳＥＬＰ８Ｋを所定の濃度となるように加えた際の、ヒト由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量の経時変化を示すグラフである。
なお、図１において「＊」はｐ＜０．０５を意味する。

上記の＜マウスマクロファージの調整＞で得た４８ｗｅｌｌプレート［マウス由来Ｍ１マクロファージを２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度となるように、４８ｗｅｌｌプレート（コーニング社製）に播種］から、培地を吸除去した。
その後、製造例１の工程７で得られたポリペプチドを、ＳＥＬＰ８Ｋが、０．０ｗｔ％、０．００１ｗｔ％及び０．１ｗｔ％の濃度となるように、ＬＰＳを２０ｎｇ／ｍＬの濃度で含有するＩＭＤＭ（５ｗｔ％ＦＢＳ，１ｗｔ％ＰＳ含有）に加え、さらに当該培地３００ｍｇを各ｗｅｌｌに加えた。
その後、炭酸ガスインキュベータ（５％二酸化炭素、９５％空気環境下）を用いて３７℃で、６、２４、７２時間インキュベートした。各培養時間後の培地中の上清のＴＮＦ－αをＴＮＦ－α定量ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて定量した。結果を図２に示す。
図２は、マウス由来Ｍ１マクロファージを培養している培地に製造例１のＳＥＬＰ８Ｋを所定の濃度となるように加えた際の、マウス由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量の経時変化を示すグラフである。
なお、図２において「＊」はｐ＜０．０５を意味する。

図１に示すように、ヒト由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量は、ＳＥＬＰ８Ｋの濃度が高いほど減少していた。
これにより、ＳＥＬＰ８Ｋには、濃度依存的にヒト由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量を減少させる効果があることが判明した。

一方、図２に示すように、７２時間インキュベートした際のマウス由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量は、製造例１のＳＥＬＰ８Ｋの濃度に寄らず有意な差が無かった。
また、図２に示すように、６時間及びインキュベート２４時間インキュベートした際のマウス由来Ｍ１マクロファージのＴＮＦ－αの生産量は増えていた。これは、マウス由来Ｍ１マクロファージが、ＳＥＬＰ８Ｋを異物として認識して、反応したためと考えられる。

これらの結果から、製造例１に係るＳＥＬＰ８Ｋを含有する液（本実施例では培地）は、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－α産生量を減少させるヒト由来マクロファージ用のＴＮＦ－α産生量減少剤として機能することが判明した。

本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤は、ヒト由来マクロファージのＴＮＦ－α産生量を減少させることができる。そのため、炎症部位に使用することで炎症作用を抑制することができる。
従って、医薬品等や創傷被覆材、細胞移植用基材等の医療機器として有用である。
また、本発明のＴＮＦ－α産生量減少剤の対象疾患としては、熱傷、皮膚剥削創、難治性皮膚潰瘍、褥瘡、筋疾患、自己免疫疾患、関節疾患等が挙げられる。

Claims (11)

1. ＶＧＶＰＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（２）及びＶＰＧＶＧ配列（３）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列を合計１～２００個有するポリペプチド（Ａ）及び／又は前記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸配列との相同性が８５％以上のアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ａ’）を含有するヒト由来マクロファージ用のＴＮＦ－α産生量減少剤。
2. 前記ポリペプチド（Ａ）は、ＶＧＶＰＧ配列（１）を含んでおり、
   前記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＧＶＰＧ配列（１）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
3. 前記ポリペプチド（Ａ）は、ＧＶＧＶＰ配列（２）を含んでおり、
   前記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＶＧＶＰ配列（２）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
4. 前記ポリペプチド（Ａ）は、ＶＰＧＶＧ配列（３）を含んでおり、
   前記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＶＰＧＶＧ配列（３）のアミノ酸の数の割合が３５～１００％である請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
5. 前記ポリペプチド（Ａ）が、さらにＧＡＧＡＧＳ配列（４）を１～２００個有する請求項１～４のいずれかに記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
6. 前記ポリペプチド（Ａ）のアミノ酸の総数に対するＧＡＧＡＧＳ配列（４）のアミノ酸の数の割合が０～６５％である請求項５に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
7. 前記ポリペプチド（Ａ）が、ＧＶＧＶＰＧＡＧＡＧＳ配列（５）を１～５０個有するポリペプチドである請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
8. 前記ポリペプチド（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ）_４配列（６）及び（ＧＶＧＶＰ）_４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）_３配列（７）を有するポリペプチドである請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
9. 前記ポリペプチド（Ａ）が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
10. 前記ポリペプチド（Ａ）のゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法による分子質量が０．４～２００ｋＤａである請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
11. 前記ＴＮＦ－α産生量減少剤の重量を基準として、前記ポリペプチド（Ａ）及び／又は前記ポリペプチド（Ａ’）の合計含有量が０．０００１～３０重量％である請求項１に記載のＴＮＦ－α産生量減少剤。
    
    

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