JP2024040996A - 抗ｃａｄｍ１抗体またはその抗原結合断片 - Google Patents
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Abstract
【課題】SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある、新たな抗体を提供する。【解決手段】本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される。（Ｃａ）それぞれ、特定の配列からなる重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、特定の配列からなる軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体；（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および／または前記軽鎖ＣＤＲ３に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。【選択図】図７
Description
本開示は、抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片に関する。
感染予防鼻スプレーとしてＸＬＥＡＲ社のキシリトール・グレープフルーツ種子エキスが市販されている。このエキスについては、ウイルスの死滅と細胞内侵入阻害に効果があるとされるが、点鼻後直ちに拡散するので、有効期間は短いと考えられる（長くて１時間程度）。類似する技術として、抗重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）スパイクタンパク質抗体の点鼻があり、自由診療等にて用いられている。また、SARS-CoV-2スパイクタンパク質への高い親和性を有するＡＣＥ２組換えタンパク質も開発されている（非特許文献１）。
Yusuke Higuchi et al., "Engineered ACE2 receptor therapy overcomes mutational escape of SARS-CoV-2", Nature Communications, volume 12, Article number: 3802 (2021), Published: 21 June 2021, Springer Nature
抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質抗体は、ダチョウの精製抗体であり、異物反応など免疫学的に大きな問題点を抱えている。また、ＡＣＥ２は、血圧調整などの重要な生理的機能を有しているため、その機能に及ぼす抗ＡＣＥ２抗体の影響についても懸念が残る。
そこで、本開示は、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある、新たな抗体の提供を目的とする。
前記目的を達成するため、本開示の抗体またはその抗原結合断片は、抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される：
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および／または前記軽鎖ＣＤＲ３に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。
前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される：
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および／または前記軽鎖ＣＤＲ３に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。
本開示の抗体薬物複合体は、本開示の抗体またはその抗原結合断片と、薬物とを含む。
本開示の医薬組成物は、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を含む。
本開示によれば、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある、新たな抗体を提供できる。
＜定義＞
本明細書において、「ＣＡＤＭ１」（Cell adhesion molecule 1）は、免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子群（IgCAM）に属する細胞間接着分子であり、細胞内領域に結合する諸分子を介して細胞内にシグナルを伝えることが知られている。前記ＣＡＤＭ１は、他の名称として、ＩｇＳＦ４Ａ、ＲＡ１７５、ｓｇＩＧＳＦ、ＳｙｎＣＡＭ、またはＮｅｃｌ２といわれることもある。ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔにアクセッション番号：Q9BY67として登録されている（参照：https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9BY67/）。また、ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、ｍＲＮＡとして、Ｇｅｎｂａｎｋにアクセッション番号：XM_005271494.4、XM_047426695.1、XM_017017457.3、XM_047426691.1、XM_047426690.1、XM_047426693.1、XM_047426692.1、XM_047426694.1等として登録されている。また、ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、タンパク質またはその前駆タンパク質として、XP_005271551.1、XP_047282651.1、XP_016872946.1、XP_047282647.1、XP_047282646.1、XP_047282649.1、XP_047282650.1として登録されている。マウスＣＡＤＭ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔにアクセッション番号：Q8R5M8として登録されている（参照：https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9BY67/）。マウスＣＡＤＭ１は、例えば、ｍＲＮＡとして、Ｇｅｎｂａｎｋにアクセッション番号：NM_001025600.1、NM_001310841.1、NM_018770.3、NM_207675.2、NM_207676.2等として登録されている。また、マウスＣＡＤＭ１は、例えば、タンパク質またはその前駆タンパク質として、NP_001020771.1、NP_001297770.1、NP_061240.3、NP_997558.2、NP_997559.1として登録されている。前記ＣＡＤＭ１は、例えば、配列番号またはアクセッション番号で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質またはそれをコードする核酸でもよいし、これらの機能的に活性な変異体、またはこれらの断片等でもよい。
本明細書において、「ＣＡＤＭ１」（Cell adhesion molecule 1）は、免疫グロブリンスーパーファミリー細胞接着分子群（IgCAM）に属する細胞間接着分子であり、細胞内領域に結合する諸分子を介して細胞内にシグナルを伝えることが知られている。前記ＣＡＤＭ１は、他の名称として、ＩｇＳＦ４Ａ、ＲＡ１７５、ｓｇＩＧＳＦ、ＳｙｎＣＡＭ、またはＮｅｃｌ２といわれることもある。ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔにアクセッション番号：Q9BY67として登録されている（参照：https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9BY67/）。また、ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、ｍＲＮＡとして、Ｇｅｎｂａｎｋにアクセッション番号：XM_005271494.4、XM_047426695.1、XM_017017457.3、XM_047426691.1、XM_047426690.1、XM_047426693.1、XM_047426692.1、XM_047426694.1等として登録されている。また、ヒトＣＡＤＭ１は、例えば、タンパク質またはその前駆タンパク質として、XP_005271551.1、XP_047282651.1、XP_016872946.1、XP_047282647.1、XP_047282646.1、XP_047282649.1、XP_047282650.1として登録されている。マウスＣＡＤＭ１は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔにアクセッション番号：Q8R5M8として登録されている（参照：https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9BY67/）。マウスＣＡＤＭ１は、例えば、ｍＲＮＡとして、Ｇｅｎｂａｎｋにアクセッション番号：NM_001025600.1、NM_001310841.1、NM_018770.3、NM_207675.2、NM_207676.2等として登録されている。また、マウスＣＡＤＭ１は、例えば、タンパク質またはその前駆タンパク質として、NP_001020771.1、NP_001297770.1、NP_061240.3、NP_997558.2、NP_997559.1として登録されている。前記ＣＡＤＭ１は、例えば、配列番号またはアクセッション番号で示されるアミノ酸配列を有するタンパク質またはそれをコードする核酸でもよいし、これらの機能的に活性な変異体、またはこれらの断片等でもよい。
本明細書において、「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、または「ペプチド」は、同じ意味で用いられ、未修飾アミノ酸（天然のアミノ酸)、修飾アミノ酸、および／または人工アミノ酸から構成されるポリマーを意味する。前記タンパク質の長さは、任意の長さである。
本明細書において、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、または「核酸」は、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）、および／または改変ヌクレオチドのポリマーを意味する。前記ポリヌクレオチドは、一本鎖核酸分子でもよいし、二本鎖核酸分子でもよい。前記ポリヌクレオチドは、天然のヌクレオチドから構成されてもよいし、修飾または人工のヌクレオチドから構成されてもよいし、両者から構成されてもよい。
本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいい、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」をさすことがある。
本明細書において、「対応する」アミノ酸または核酸は、あるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおいて、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定のアミノ酸またはヌクレオチドあるいは部分と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドを意味する。
本明細書において、「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片により実質的または部分的にコードされる、１または複数のポリペプチドを含むタンパク質を意味し、抗原上の特定のエピトープに結合可能な分子または複数の分子を含む。前記免疫グロブリン遺伝子は、例えば、κ、λ、α（α１、α２を含む）、γ（γ１、γ２、γ３、γ４を含む）、δ、εおよびμ等の定常領域をコードする遺伝子と、Ｖ領域、Ｄ領域、Ｊ領域等の無数の免疫グロブリン可変領域をコードしうる遺伝子とを含む。前記抗体は、例えば、重鎖および軽鎖を含む。前記軽鎖は、κおよびλを含み、それぞれ、κ鎖およびλ鎖を構成する。前記重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεを含み、それぞれ、免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを構成する。前記抗体は、四量体から構成される典型的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位であってもよい。この場合、前記抗体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対から構成され、各対は、１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）と１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）とから構成される。また、各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸から構成される可変領域を規定する。
本明細書において、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、免疫グロブリン（抗体）の可変領域において、抗原結合部位を形成する領域を意味する。前記ＣＤＲは、例えば、超可変領域ということもできる。前記ＣＤＲは、一般的に、抗体の可変領域でも、特に一次構造の変異性が高い領域であり、一次構造上において、通常、３箇所に分離している。前記抗体では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に、それぞれ３つのＣＤＲ（Ｎ末端側から、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３、Ｎ末端側から、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３）を含む。これらの部位は、立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。本明細書において、抗体のＣＤＲは、Kabatの番号付けシステム（Kabat et.al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 1987, US Department of Health and Human Services, NIH, USA）にしたがって決定してもよい。また、本明細書において、抗体のＣＤＲは、Chothiaによる定義（Chothia et al., “Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”, J. Mol.Biol.,1987;196:901-917）を採用して、決定してもよい。
本明細書において、「抗原結合断片」は、例えば、抗体の一部を含むポリペプチドであり、より具体的には、前記可変領域を含むポリペプチドである。前記抗原結合断片は、例えば、前記全長の免疫グロブリンに対して、様々なペプチダーゼによる消化によって産生することができる。
本明細書において、前記「抗体」の形態は、全長の免疫グロブリン（Ｆｃ領域およびＦａｂ領域を有する抗体、全長抗体）でもよいし、F(ab')2、Fab'、Fab、Fv抗体（variable fragment of antibody）、ジスルフィド結合Ｆｖ（dsFv）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、およびこれらの重合体（例えば、ダイアボディー）等があげられる。前記抗体は、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい。前記抗体は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト化抗体でもよい。前記抗体は、例えば、二重特異性またはオリゴ特異性（oligo specific）抗体であってもよい。
本明細書において、「Ｆ（ａｂ’）２抗体」は、例えば、Ｆａｂ領域およびＦｃ領域を含む抗体をタンパク質分解酵素ペプシンで処理して得られる断片のうち、Ｆａｂに相当する部位を２つ含む抗体である。前記Ｆ（ａｂ’）２は、例えば、Ｆａｂ領域およびＦｃ領域を含む本開示のＣＡＤＭ１抗体を、タンパク質分解酵素ペプシンで処理して得ることができる。
本明細書において、「Ｆａｂ’抗体」は、例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗体のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断して得られる抗体である。前記Ｆａｂ’抗体は、例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗体を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。
本明細書において、「Ｆａｂ抗体」は、例えば、Ｆａｂ領域およびＦｃ領域を含む抗体をタンパク質分解酵素パパインで処理して得られる断片のうち、重鎖のＮ末端側約半分と軽鎖全体が一部のジスルフィド結合を介して結合した抗体である。前記Ｆａｂ抗体は、例えば、Ｆａｂ領域およびＦｃ領域を含む本開示のＣＡＤＭ１抗体を、タンパク質分解酵素パパインで処理して得ることができる。
本明細書において、「Fv抗体」は、抗原認識部位を含む抗体である。この領域は、非共有結合による１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体を含む。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲは相互に作用してＶＨ－ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を形成することができる。
本明細書において、「ジスルフィド結合Ｆｖ」（dsFv）は、ＶＨおよびＶＬ中にシステイン残基を導入したポリペプチドを、前記システイン残基間のジスルフィド結合を介して結合させた抗体である。前記システイン残基に導入する位置は、例えば、Reiterらにより示された方法（Reiter et al., “Engineering interchain disulfide bonds into conserved framework regions of Fv fragments: improved biochemical characteristics of recombinant immunotoxins containing disulfide-stabilized Fv”, Protein Eng. 1994 May;7(5):697-704を参照し、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。
本明細書において、「ｓｃＦｖ抗体」は、ＶＨおよびＶＬがペプチドリンカーを介して連結した抗体を意味する。前記ｓｃＦｖ抗体は、例えば、本開示のＣＡＤＭ１抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを取得し、ＶＨ－ペプチドリンカー－ＶＬをコードするポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
本明細書において、「ダイアボディー」（diabody）は、二価の抗原結合活性を有する抗体である。前記二価の抗原結合活性は、同一の抗原活性としてもよいし、一方を異なる抗原結合活性としてもよい。前記ダイアボディーは、例えば、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドをペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが８残基以下となるように構築し、得られたポリヌクレオチドをベクターに組み込み、発現用の細胞を用いて生産できる。
本明細書において、「モノクローナル抗体」は、例えば、集団を構成する個々の抗体が、少量自然に生じることが可能な突然変異を有する抗体を除いて、実質的に単一のエピトープに対応する抗体または実質的に同一である抗体である。前記モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法またはこれと同様の方法により調製してもよいし、ファージ抗体ライブラリを用いたファージディスプレイにより調製してもよい。
本明細書において、「キメラ抗体」は、重鎖および軽鎖の少なくとも一方が、非ヒト動物免疫グロブリン由来の可変領域とヒト免疫グロブリン由来の定常領域から構成される抗体、またはヒト免疫グロブリン由来の可変領域と非ヒト動物免疫グロブリン由来の定常領域から構成される抗体を意味する。前記キメラ抗体は、例えば、遺伝子組換え技術によって調製できる。具体例として、ニワトリ－ヒトキメラ抗体を調製する場合、前記キメラ抗体の調製方法は、例えば、ニワトリリーダー配列および可変領域配列を、ヒト抗体定常領域をコードする配列と連結させることにより調製できる（例えば、Nahoko Nishibori et al., “Expression vectors for chicken-human chimeric antibodies”, Biologicals . 2004 Dec;32(4): p. 213-8）。具体的には、前記調製方法は、例えば、クローン化されたｃＤＮＡに存在するニワトリリーダー配列および可変領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体定常領域をコードする配列に連結してもよい。また、前記調製方法は、クローン化されたｃＤＮＡに存在するニワトリリーダー配列および可変領域配列を、ヒト抗体定常領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結してもよい。前記ヒト抗体定常領域の断片は、任意のヒト抗体の重鎖定常領域およびヒト抗体の軽鎖定常領域のものとすることができる。具体例として、前記ヒト抗体定常領域の断片は、例えば、ヒト重鎖として、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３またはＣγ４があげられる。また、前記ヒト抗体定常領域の断片は、例えば、ヒト軽鎖として、ＣλまたはＣκがあげられる。
本明細書において、「ヒト化抗体」は、非ヒト動物由来の抗体のＣＤＲおよびヒト抗体由来のフレームワーク領域（ＦＲ）から構成される可変領域と、ヒト抗体由来の定常領域とから構成される抗体を意味する。前記ヒト化抗体は、例えば、ＣＤＲグラフティング（Ozaki et al., “Humanized Anti-HM1.24 Antibody Mediates Myeloma Cell Cytotoxicity That Is Enhanced by Cytokine Stimulation of Effector Cells”, Blood, 1999 Jun 1;93(11):3922-3930.）、リサーフェシング（Re-surfacing）（Roguska et al., “Humanization of murine monoclonal antibodies through variable domain resurfacing”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994 Feb 1;91(3):969-973）、またはＦＲシャッフル（Damschroder et al., “Framework shuffling of antibodies to reduce immunogenicity and manipulate functional and biophysical properties”, Mol Immunol., 2007 Apr;44(11):3049-3060, Epub 2007 Jan 22）等により調製できる。ニワトリ由来ＣＤＲを用いる場合、前記ヒト化抗体は、例えば、特開２００６－２４１０２６号公報に記載の方法を参照して、調製できる。前記ヒト化抗体の調製においては、抗原への結合性を改変または改善するために、ヒトＦＲのアミノ酸残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基と置換してもよい。ヒトＦＲのアミノ酸残基の置換は、例えば、当該技術分野で周知の方法によって実施可能できる（例えば、Riechmann et al., “Reshaping human antibodies for therapy”, Nature, 1988 Mar 24; 332 (6162) :323-327参照）。
本明細書において、「ヒト抗体」は、重鎖および軽鎖がヒト免疫グロブリン由来の抗体またはヒト免疫グロブリン遺伝子をコードする遺伝子に由来する抗体を意味する。前記ヒト抗体は、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するヒト抗体作製用トランスジェニックマウスを用いて調製してもよいし、ファージ抗体ライブラリを用いたファージディスプレイにより調製してもよい。
本明細書において、「ＣＡＤＭ１抗体」は、ＣＡＤＭ１に結合する抗体を意味する。前記ＣＡＤＭ１抗体による結合は、特異的な結合であることが好ましい。前記ＣＡＤＭ１抗体の形態は、前述の抗体の形態の説明を援用できる。
本明細書において、「内在化」または「細胞内移行」（インターナライズ／インターナライゼーション）は、細胞が細胞表面上の抗原をエンドサイトーシスまたは食作用によって細胞内に取り込むことにより、抗原に結合した物質を取り込むことを意味する。本開示のＣＡＤＭ１抗体は、例えば、内在化活性を有することで、ＣＡＤＭ１を細胞表面に発現する細胞に対して目的の有効成分を細胞内移行させ、目的の有効成分による所望の効果をＣＡＤＭ１発現細胞において生じさせることができる。
本明細書において、「抗体薬物複合体」（Antibody Drug Conjugate：ＡＤＣ）は、１つまたは複数の目的の有効成分と化学的に連結された抗体またはこれらの抗原結合断片を指す。前記ＡＤＣにおいて、前記目的の有効成分は、例えば、リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片と作動可能に連結されている。本明細書において「作動可能に連結されている」とは、連結される物質が予測された様式で作動することが可能な関係にあることを指す。前記リンカーは、例えば、開裂型または非開裂型のリンカーがあげられる。前記開裂型のリンカーは、例えば、タンパク質分解酵素により切断される配列を有するリンカー、ｐＨ依存的に開裂するリンカー、ジスルフィドリンカー等があげられる。前記非開裂型のリンカーとしては、マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシラート（ＭＣＣ）リンカー等があげられる。
本明細書において、「標識」は、目的の分子または物質を、他の分子または物質から識別するためのものを意味する。前記標識は、例えば、蛍光色素または蛍光物質等の蛍光標識；化学発光標識；放射性同位元素（ＲＩ）；等があげられる。
本明細書において、「処置」は、治療的処置および／または予防的処置を意味する。本明細書において、「治療」は、疾患、病態、もしくは障害の治療、治癒、防止、抑止、寛解、改善、または、疾患、病態、もしくは障害の進行の停止、抑止、低減、もしくは遅延を意味する。本明細書において、「予防」は、疾患もしくは病態の発症の可能性の低下、または疾患もしくは病態の発症の遅延を意味する。前記「治療」は、例えば、対象疾患を発病する患者に対する治療でもよいし、対象疾患のモデル動物の治療でもよい。
以下、本開示について、例をあげて具体的に説明する。以下、特に言及しない限り、各開示は、他の開示の説明を援用できる。
＜ＣＡＤＭ１抗体＞
ある態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１抗体に結合する抗体またはその抗原結合断片を開示する。本開示のＣＡＤＭ１抗体は、抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント。
ある態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１抗体に結合する抗体またはその抗原結合断片を開示する。本開示のＣＡＤＭ１抗体は、抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント。
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗体（（Ｃａ）抗体）
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および／または前記軽鎖ＣＤＲ３に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体（（Ｃｂ）抗体）
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および／または前記軽鎖ＣＤＲ３に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体（（Ｃｂ）抗体）
新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）の感染症では、初期症状として嗅覚異常が知られる。本発明者は、IgCAM型の接着分子ＣＡＤＭ１（細胞膜を貫通する膜分子）は、鼻腔内の嗅上皮に高発現しており、ウイルス粒子接着の足場となって嗅覚異常に関与している可能性があるのではないかとの着想を得た。そして、本発明者は、マウス新生仔の前頭部においてＣＡＤＭ１の発現が確認され、さらに、SARS-CoV-2が、ＡＣＥ２と同程度で、ＣＡＤＭ１に結合すること、SARS-CoV-2とＣＡＤＭ１との結合を、本開示のＣＡＤＭ１抗体により阻害できることを見いだし、本開示を確立するに至った。このため、本開示の抗体またはその抗原結合断片によれば、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある、新たな抗体を提供できる。また、本発明者は、本開示のＣＡＤＭ１抗体によれば、ＣＡＤＭ１発現細胞に対して、ＣＡＤＭ１およびＣＡＤＭ１抗体の内在化、すなわち、ＣＡＤＭ１－ＣＡＤＭ１の細胞内への取り込みを誘導できることを見出した。このため、本開示の抗体またはその抗原結合断片によれば、例えば、目的の有効成分を細胞内に送達できる。
前記（Ｃａ）抗体において、重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３のアミノ酸配列は、以下の通りである。
・重鎖ＣＤＲ１（配列番号１）：SNAMG
・重鎖ＣＤＲ２（配列番号２）：GIGNTGRYTGYGPAVKG
・重鎖ＣＤＲ３（配列番号３）：SASGSGYGCAGWIDA
・軽鎖ＣＤＲ１（配列番号４）：SGGSYIYG
・軽鎖ＣＤＲ２（配列番号５）：SNDKRPS
・軽鎖ＣＤＲ３（配列番号６）：GNEDNSIDSAI
・重鎖ＣＤＲ１（配列番号１）：SNAMG
・重鎖ＣＤＲ２（配列番号２）：GIGNTGRYTGYGPAVKG
・重鎖ＣＤＲ３（配列番号３）：SASGSGYGCAGWIDA
・軽鎖ＣＤＲ１（配列番号４）：SGGSYIYG
・軽鎖ＣＤＲ２（配列番号５）：SNDKRPS
・軽鎖ＣＤＲ３（配列番号６）：GNEDNSIDSAI
前記（Ｃｂ）抗体の各ＣＤＲにおいて、「１もしくは数個」は、例えば、前記（Ｃａ）抗体の変異体が、ＣＡＤＭ１に対して結合する範囲であればよい。前記「１もしくは数個」は、例えば、１～１０個、１～８個、１～６個、１～４個、１～３個、１～２個、または１個であり、好ましくは、１～２個または１個である。本開示において、アミノ酸数、塩基数等の個数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものである。つまり、例えば、「１～５個」との記載は、「１、２、３、４、５個」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
前記（Ｃｂ）抗体において、「１もしくは数個」は、各ＣＤＲ、すなわち、前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３のそれぞれにおける置換、挿入、付加または欠失（以下、併せて「変異」ともいう）の個数でもよいし、全ＣＤＲ、すなわち、前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全変異の個数でもよく、好ましくは、全ＣＤＲの全変異の個数である。
前記（Ｃｂ）抗体は、好ましくは、前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体で、１～１０個、１～８個、１～６個、１～４個、１～３個、１～２個、または１個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む。
前記（Ｃｂ）抗体において、「置換、挿入、付加もしくは欠失」は、好ましくは、置換、挿入もしくは欠失、またはＣＤＲのＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方の付加である。前記置換は、保存的置換であることが好ましい（以下、同様）。前記「保存的置換」は、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、１個または数個のアミノ酸を、他のアミノ酸および／またはアミノ酸誘導体に置換することを意味する。「置換するアミノ酸」と「置換されるアミノ酸」とは、例えば、性質および／または機能が類似していることが好ましい。具体的には、例えば、疎水性および親水性の指標（ハイドロパシー）、極性、電荷等の化学的性質、または、二次構造等の物理的性質等が類似していることが好ましい。前記性質および／または機能が類似するアミノ酸またはアミノ酸誘導体は、例えば、当該技術分野において公知である。具体例として、非極性アミノ酸（疎水性アミノ酸）は、例えば、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン等があげられ、極性アミノ酸（中性アミノ酸）は、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン等があげられ、陽電荷を有するアミノ酸（塩基性アミノ酸）は、アルギニン、ヒスチジン、リジン等があげられ、負電荷を有するアミノ酸（酸性アミノ酸）は、アスパラギン酸、グルタミン酸等があげられる。
本開示の抗体またはその抗原結合断片において、前記抗体は、下記（Ｖａ）、（Ｖｂ）、および（Ｖｃ）からなる群から選択される抗体またはその抗原結合断片であってもよい。
（Ｖａ）配列番号７から１４のいずれかに示される重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示される軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む抗体（（Ｖａ）抗体）
（Ｖｂ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体（（Ｖｂ）抗体）
（Ｖｃ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して８０％以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して８０％以上の同一性を有する軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体（（Ｖｃ）抗体）
（Ｖｂ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体（（Ｖｂ）抗体）
（Ｖｃ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して８０％以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して８０％以上の同一性を有する軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体（（Ｖｃ）抗体）
前記（Ｖａ）抗体において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下の通りである。下記（Ｖａ）抗体の重鎖可変領域において、括弧で囲って下線で示したアミノ酸配列が、Ｎ末端から、それぞれ、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３に対応する。下記（Ｖａ）抗体の軽鎖可変領域において、括弧で囲って下線で示したアミノ酸配列が、Ｎ末端から、それぞれ、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３に対応する。
・ＷＴ重鎖可変領域（配列番号７）：
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・＃１重鎖可変領域（配列番号８）：
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・＃２重鎖可変領域（配列番号９）：
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・＃３重鎖可変領域（配列番号１０）：
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・＃４重鎖可変領域（配列番号１１）：
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・＃５重鎖可変領域（配列番号１２）：
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・＃６重鎖可変領域（配列番号１３）：
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・＃７重鎖可変領域（配列番号１４）：
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・ＷＴ軽鎖可変領域（配列番号１５）：
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・＃１軽鎖可変領域（配列番号１６）：
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・＃２軽鎖可変領域（配列番号１７）：
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・＃３軽鎖可変領域（配列番号１８）：
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・＃４軽鎖可変領域（配列番号１９）：
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・＃５軽鎖可変領域（配列番号２０）：
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・＃６軽鎖可変領域（配列番号２１）：
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・＃７軽鎖可変領域（配列番号２２）：
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・ＷＴ重鎖可変領域（配列番号７）：
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・＃１重鎖可変領域（配列番号８）：
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・＃２重鎖可変領域（配列番号９）：
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・＃３重鎖可変領域（配列番号１０）：
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・＃４重鎖可変領域（配列番号１１）：
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・＃５重鎖可変領域（配列番号１２）：
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・＃６重鎖可変領域（配列番号１３）：
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・＃７重鎖可変領域（配列番号１４）：
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・ＷＴ軽鎖可変領域（配列番号１５）：
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・＃１軽鎖可変領域（配列番号１６）：
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・＃２軽鎖可変領域（配列番号１７）：
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・＃３軽鎖可変領域（配列番号１８）：
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・＃４軽鎖可変領域（配列番号１９）：
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・＃５軽鎖可変領域（配列番号２０）：
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・＃６軽鎖可変領域（配列番号２１）：
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・＃７軽鎖可変領域（配列番号２２）：
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前記（Ｖａ）抗体において、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域の組合せは、任意の組合せである。前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域の組合せは、好ましくは、下記（１）～（８）の組合せである。特に、下記（２）～（４）の組合せは、例えば、ＣＡＤＭ１に対する高い親和性と、内在化活性を示した。
（１）ＷＴ重鎖可変領域およびＷＴ軽鎖可変領域
（２）＃１重鎖可変領域および＃１軽鎖可変領域
（３）＃２重鎖可変領域および＃２軽鎖可変領域
（４）＃３重鎖可変領域および＃３軽鎖可変領域
（５）＃４重鎖可変領域および＃４軽鎖可変領域
（６）＃５重鎖可変領域および＃５軽鎖可変領域
（７）＃６重鎖可変領域および＃６軽鎖可変領域
（８）＃７重鎖可変領域および＃７軽鎖可変領域
（１）ＷＴ重鎖可変領域およびＷＴ軽鎖可変領域
（２）＃１重鎖可変領域および＃１軽鎖可変領域
（３）＃２重鎖可変領域および＃２軽鎖可変領域
（４）＃３重鎖可変領域および＃３軽鎖可変領域
（５）＃４重鎖可変領域および＃４軽鎖可変領域
（６）＃５重鎖可変領域および＃５軽鎖可変領域
（７）＃６重鎖可変領域および＃６軽鎖可変領域
（８）＃７重鎖可変領域および＃７軽鎖可変領域
前記（Ｖｂ）抗体において、「１もしくは数個」は、例えば、ＣＡＤＭ１に対して結合する範囲であればよい。前記（Ｖｂ）抗体の重鎖可変領域において、「１もしくは数個」は、例えば、１～２４個、１～１８個、１～１２個、１～１０個、１～６個、１～４個、１～３個、１～２個、または１個であり、好ましくは、１～２個または１個である。また、前記（Ｖｂ）抗体の軽鎖可変領域において、「１もしくは数個」は、例えば、１～２１個、１～１５個、１～１０個、１～５個、１～４個、１～３個、１～２個、または１個であり、好ましくは、１～２個または１個である。
前記（Ｖｂ）抗体において、前記変異の位置は、例えば、ＣＤＲでもよいし、ＦＲでもよいが、好ましくは、ＦＲである。前記（Ｖｂ）抗体において、前記変異の位置がＦＲである場合、前記（Ｖｂ）抗体は、前記抗体のフレームワーク領域に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む。
前記（Ｖｂ）抗体において、「置換、挿入、付加もしくは欠失」は、好ましくは、置換、挿入もしくは欠失、またはＣＤＲのＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方の付加である。前記置換は、保存的置換であることが好ましい。
前記（Ｖｂ）抗体において、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、保存されていることが好ましい。この場合、前記（Ｖｂ）の抗体は、前記（Ｃａ）で示す各ＣＤＲのアミノ酸配列と対応するアミノ酸配列が保存されている。
前記（Ｖｂ）抗体において、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列において、括弧で囲まず、下線で示すアミノ酸、すなわち、４７、４９、７９、および／または、８３番目のアミノ酸と対応するアミノ酸が保存されていることが好ましい。前記４７番目のアミノ酸は、例えば、ＷまたはＦである。前記４９番目のアミノ酸は、例えば、ＳまたはＡである。前記７９番目のアミノ酸は、ＬまたはＶである。前記８３番目のアミノ酸は、例えば、ＬまたはＭである。
前記（Ｖｂ）抗体において、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列において、括弧で囲まず、下線で示すアミノ酸、すなわち、６２、６７、および／または、８３番目のアミノ酸と対応するアミノ酸が保存されていることが好ましい。前記６２、６７、および／または、８３番目のアミノ酸において、保存されているアミノ酸の数は、１つでもよいし、複数でもよいし、全部でもよい。前記６２番目のアミノ酸は、例えば、ＮまたはＴである。前記６７番目のアミノ酸は、例えば、ＴまたはＧである。前記８３番目のアミノ酸は、例えば、ＹまたはＦである。
前記（Ｖｃ）抗体において、「同一性」は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率（％）を意味する。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
前記（Ｖｃ）抗体において、前記「同一性」は、ＣＡＤＭ１に対して結合する範囲であればよい。前記（Ｖｃ）抗体の重鎖可変領域において、前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記（Ｖｃ）抗体の軽鎖可変領域において、前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
前記（Ｖｃ）抗体において、前記（Ｖａ）抗体と異なるアミノ酸は、ＣＤＲに存在してもよいし、ＦＲに存在してもよいが、好ましくは、ＦＲに存在する。
前記（Ｖｃ）抗体において、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列は、保存されていることが好ましい。この場合、前記（Ｖｃ）の抗体は、前記（Ｃａ）で示す各ＣＤＲのアミノ酸配列と対応するアミノ酸配列が保存されている。
前記（Ｖｃ）抗体において、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列において、括弧で囲まず、下線で示すアミノ酸、すなわち、４７、４９、７９、および／または、８３番目のアミノ酸と対応するアミノ酸が保存されていることが好ましい。前記４７、４９、７９、および／または、８３番目のアミノ酸において、保存されているアミノ酸の数は、１つでもよいし、複数でもよいし、全部でもよい。前記４７番目のアミノ酸は、例えば、ＷまたはＦである。前記４９番目のアミノ酸は、例えば、ＳまたはＡである。前記７９番目のアミノ酸は、ＬまたはＶである。前記８３番目のアミノ酸は、例えば、ＬまたはＭである。
前記（Ｖｃ）抗体において、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列において、括弧で囲まず、下線で示すアミノ酸、すなわち、６２、６７、および／または、８３番目のアミノ酸と対応するアミノ酸が保存されていることが好ましい。前記６２、６７、および／または、８３番目のアミノ酸において、保存されているアミノ酸の数は、１つでもよいし、複数でもよいし、全部でもよい。前記６２番目のアミノ酸は、例えば、ＮまたはＴである。前記６７番目のアミノ酸は、例えば、ＴまたはＧである。前記８３番目のアミノ酸は、例えば、ＹまたはＦである。
本開示の抗体またはその抗原結合断片は、例えば、内在化活性を有する。前記内在化活性は、例えば、後述の実施例１（９）に準じて、ヒト白血病細胞株ＭＴ－２株を用いた内在化試験により評価できる。本明細書では、細胞表面の残存ＣＡＤＭ１の割合を１００％から引いた値をインターナライズ％とする。本開示の抗体またはその抗原結合断片は、例えば、前記内在化試験において、前記ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原フラグメントとのインキュベート開始２４時間後にＣＡＤＭ１陽性細胞（例えば、ＭＴ－２株）に対して、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上の内在化活性を有する。
本開示の抗体またはその抗原結合断片の投与対象は、例えば、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、サル等）である。本開示の抗体またはその抗原結合断片の投与量は、例えば、治療有効量である。本開示の抗体またはその抗原結合断片の投与経路は、例えば、経口投与または非経口投与である。前記非経口投与は、例えば、静脈内投与、経鼻投与等があげられる。
＜核酸＞
別の態様において、本開示は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を開示する。本開示の核酸は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする。本開示の核酸によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片を遺伝子工学的手法により製造できる。
別の態様において、本開示は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を開示する。本開示の核酸は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする。本開示の核酸によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片を遺伝子工学的手法により製造できる。
本開示の核酸は、例えば、以下の方法により取得できる。まず、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片を産生するハイブリドーマからＲＮＡを抽出後、逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを合成する。得られたｃＤＮＡについて、重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子の可変領域において保存されている配列に対するプライマーを用いてｃＤＮＡを増幅し、得られた増幅断片から、ＤＮＡの塩基配列情報を決定できる。また、得られた塩基配列情報から、可変領域またはその一部の配列を化学合成して、定常領域を含む配列に結合することにより、抗ＣＡＤＭ１抗体をコードするＤＮＡを取得できる。
本開示の核酸は、例えば、プラスミドベクター等のベクターに機能的に連結されてもよい。
＜形質転換体＞
別の態様において、本開示は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む形質転換体（宿主細胞）を開示する。本開示の形質転換体は、本開示の核酸を含む。本開示の形質転換体によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片を生産できる。
別の態様において、本開示は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む形質転換体（宿主細胞）を開示する。本開示の形質転換体は、本開示の核酸を含む。本開示の形質転換体によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片を生産できる。
前記形質転換体は、例えば、大腸菌、枯草菌等の原核細胞；真核細胞等があげられ、好ましくは、真核細胞であり、より好ましくは、哺乳動物由来の細胞である。前記哺乳動物由来の細胞は、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO細胞）、ＣＯＳ、ミエローマ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、Ｖｅｒｏ、２９３、ＮＳ０、Ｎａｍａｌｗａ、ＹＢ２／０等があげられる。
前記核酸は、前記核酸を含むベクターであってもよい。前記ベクターは、例えば、形質転換体の種類に応じて、適宜選択できる。前記哺乳動物由来の細胞で発現可能なベクターは、例えば、pcDNA3.1（Invitrogen社製）、ｐＣｏｎＰｌｕｓ、ｐｃＤＭ８、ｐｃＤＮＡ Ｉ／Ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲＥＰ４等のプラスミドベクター；pDON-AI DNA（タカラバイオ社製）等のウイルスベクター；等があげられる。
本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片は、例えば、前記形質転換体の培養液から回収および精製（単離）できる。前記精製は、抗体等の分離、精製は通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよい。前記精製は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー等のクロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、透析、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動等を適宜選択し、単独または組み合わせることで、抗体を分離および精製できる。
＜抗体薬物複合体＞
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１発現細胞に目的の有効成分を送達可能な抗体薬物複合体を開示する。本開示の抗体薬物複合体は、前記本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片と、目的の有効成分とを含む。本開示の抗体薬物複合体によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片により、ＣＡＤＭ１発現細胞に対して、前記複合体中の目的の有効成分を送達できる。また、本開示のＣＡＤＭ１抗体は、前述のように、ＣＡＤＭ１の内在化を誘導できる。このため、本開示の抗体薬物複合体によれば、例えば、目的の有効成分をＣＡＤＭ１発現細胞の細胞内に送達できる。
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１発現細胞に目的の有効成分を送達可能な抗体薬物複合体を開示する。本開示の抗体薬物複合体は、前記本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片と、目的の有効成分とを含む。本開示の抗体薬物複合体によれば、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片により、ＣＡＤＭ１発現細胞に対して、前記複合体中の目的の有効成分を送達できる。また、本開示のＣＡＤＭ１抗体は、前述のように、ＣＡＤＭ１の内在化を誘導できる。このため、本開示の抗体薬物複合体によれば、例えば、目的の有効成分をＣＡＤＭ１発現細胞の細胞内に送達できる。
前記目的の有効成分は、任意の成分とできる。前記目的の有効成分は、例えば、細胞傷害性活性を有する薬剤、抗がん剤、造影剤、抗体等のタンパク質、成長因子、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム等があげられる。前記細胞傷害活性を有する薬剤は、例えば、アルキル化剤、腫瘍壊死因子阻害剤、インターカレーター、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤等があげられる。具体例として、前記細胞傷害活性を有する薬剤は、例えば、アウリスタチン（例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）等）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１またはＤＭ４）、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）等があげられる。
本開示の抗体薬物複合体において、前記抗体またはその抗原結合断片と、目的の有効成分とは、直接的に結合（連結）してもよいし、リンカーにより間接的に結合（連結）してもよい。後者の場合、前記リンカーは、タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）またはペプチダーゼ等の酵素、ｐＨ等により開裂する開裂型のリンカーでもよいし、非開裂型のリンカーでもよい。前記開裂型のリンカーは、例えば、血中に存在する酵素により切断されず、細胞内にのみ存在する酵素によって切断される切断サイトを有するように設計される。具体例として、前記開裂型のリンカーは、例えば、バリン－シトルリン（Val-Cit）、バリン－アラニン（Val-Ala）、アラニン－アラニン－アスパラギン（Ala-Ala-Asn）等があげられる。
本開示の抗体薬物複合体において、前記リンカーおよび目的の成分（薬物）は、例えば、下記式（１）で表される。
＜医薬組成物＞
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１と関連する疾患に対して使用しうる医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を含む。本開示の医薬組成物によれば、後述のように、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある。また、本開示の医薬組成物によれば、例えば、目的の有効成分を細胞内に送達することにより、がんの処置等に好適に使用できると期待される。
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１と関連する疾患に対して使用しうる医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を含む。本開示の医薬組成物によれば、後述のように、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある。また、本開示の医薬組成物によれば、例えば、目的の有効成分を細胞内に送達することにより、がんの処置等に好適に使用できると期待される。
本開示の医薬組成物は、例えば、SARS-CoV-2のスパイクタンパク質Ｓ１のＣＡＤＭ１への結合を抑制できることから、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置、および／または、SARS-CoV-2による感染症の処置に好適に使用できると期待される。このため、本開示の医薬組成物は、例えば、投与対象として、SARS-CoV-2への感染者（患者）、または感染の疑いがある対象者に好適に使用できると期待される。
また、本開示の医薬組成物は、例えば、ＣＡＤＭ１発現細胞に対して内在化を誘導得きることから、がん、特に、ＣＡＤＭ１を発現するがんの処置に好適に使用できると期待される。このため、本開示の医薬組成物は、例えば、投与対象として、がんの患者またはがんの疑いがある対象者に好適に使用できると期待される。
＜処置方法＞
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１と関連する疾患、例えば、SARS-CoV-2による感染症またはがんに対して実施しうる処置方法を提供する。本開示の重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法は、対象に、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を投与する投与工程を含む。また、本開示のがんの処置方法は、対象に、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を投与する投与工程を含む。本開示の処置方法によれば、SARS-CoV-2による感染症またはがんに対する処置が好適に実施できると期待される。
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１と関連する疾患、例えば、SARS-CoV-2による感染症またはがんに対して実施しうる処置方法を提供する。本開示の重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法は、対象に、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を投与する投与工程を含む。また、本開示のがんの処置方法は、対象に、本開示のＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体を投与する投与工程を含む。本開示の処置方法によれば、SARS-CoV-2による感染症またはがんに対する処置が好適に実施できると期待される。
＜検出試薬＞
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１の検出に使用可能な検出試薬を開示する。本開示のＣＡＤＭ１の検出試薬は、本開示の抗体またはその抗原結合断片を含む。本開示の試験試薬によれば、ＣＡＤＭ１を検出できる。本開示の検出試薬によれば、ＣＡＤＭ１を発現する細胞、例えば、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、内膜腺がん等のがん細胞を検出できる。
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１の検出に使用可能な検出試薬を開示する。本開示のＣＡＤＭ１の検出試薬は、本開示の抗体またはその抗原結合断片を含む。本開示の試験試薬によれば、ＣＡＤＭ１を検出できる。本開示の検出試薬によれば、ＣＡＤＭ１を発現する細胞、例えば、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、内膜腺がん等のがん細胞を検出できる。
本開示の検出試薬において、前記抗体またはその抗原結合断片は、標識されてもよい。
本開示の検出試薬は、例えば、ＣＡＤＭ１の存在の有無、または、ＣＡＤＭ１の発現量の検出、すなわち、定性的分析または定量的分析に用いることもできる。このため、本開示の検出試薬は、例えば、分析試薬ということもできる。
＜試験試薬＞
別の態様において、本開示は、がんの罹患の可能性の試験に使用可能な試薬を開示する。本開示のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬は、本開示の抗体またはその抗原結合断片を含む。本開示の試験試薬によれば、がん、特に、ＣＡＤＭ１を発現するがんを検出できる。本開示の試験試薬は、例えば、がんの診断試薬、またはがんの処置に用いる医薬組成物のコンパニオン診断薬としても使用できる。このため、本開示の試験試薬は、例えば、がんの診断試薬またはがんのコンパニオン診断薬ということもできる。
別の態様において、本開示は、がんの罹患の可能性の試験に使用可能な試薬を開示する。本開示のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬は、本開示の抗体またはその抗原結合断片を含む。本開示の試験試薬によれば、がん、特に、ＣＡＤＭ１を発現するがんを検出できる。本開示の試験試薬は、例えば、がんの診断試薬、またはがんの処置に用いる医薬組成物のコンパニオン診断薬としても使用できる。このため、本開示の試験試薬は、例えば、がんの診断試薬またはがんのコンパニオン診断薬ということもできる。
前記がんは、例えば、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、内膜腺がん等があげられる。前記がんは、ＣＡＤＭ１陽性がんであってもよい。
本開示の検出試薬または試験試薬は、キットを構成してもよい。この場合、本開示の検出キットまたは試験キットは、本開示の抗体またはその抗原結合断片と、他の構成とを含む。前記他の構成は、例えば、緩衝液等の他の試薬、取扱説明書等があげられる。
＜検出方法＞
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１を検出可能な検出方法を開示する。本開示のＣＡＤＭ１の検出方法は、サンプルと、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示のＣＡＤＭ１の検出試薬を接触させる接触工程と、前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する検出工程とを含む。本開示の検出方法によれば、サンプル中のＣＡＤＭ１の存在の有無、および／または、サンプル中のＣＡＤＭ１の存在量を検出できる。
別の態様において、本開示は、ＣＡＤＭ１を検出可能な検出方法を開示する。本開示のＣＡＤＭ１の検出方法は、サンプルと、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示のＣＡＤＭ１の検出試薬を接触させる接触工程と、前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する検出工程とを含む。本開示の検出方法によれば、サンプル中のＣＡＤＭ１の存在の有無、および／または、サンプル中のＣＡＤＭ１の存在量を検出できる。
前記サンプルは、例えば、生体試料があげられる。前記生体は、例えば、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、サル等）の生体である。前記生体試料は、例えば、体液、細胞、組織、臓器等があげられる。前記サンプルは、例えば、液体でもよいし、固体でもよい。前記サンプルが固体の場合、本開示の検出方法は、前記検出工程に先立ち、前記固体サンプルを液体と混合し、液体サンプルを調製することが好ましい。
前記接触工程は、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示のＣＡＤＭ１の検出試薬を接触させる工程である。前記接触工程において、前記サンプルと前記抗体またはその抗原結合断片との接触方法は、特に制限されず、例えば、液体中で行なわれることが好ましい。前記接触は、例えば、前記サンプルと、前記抗体またはその抗原結合断片とを混合することにより実施されてもよい。前記液体は、例えば、水、生理的食塩水、緩衝液等があげられる。前記接触工程における接触時の条件は、例えば、抗体と抗原との結合が生じる一般的な条件として設定できる。
前記検出工程は、前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する工程である。前記両者の結合の有無を検出することによって、例えば、前記サンプル中のＣＡＤＭ１の有無を分析（定性）でき、また、前記両者の結合の程度（結合量）を検出することによって、例えば、前記サンプル中のＣＡＤＭ１の量を分析（定量）できる。
そして、前記検出工程では、前記ＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との結合が検出できなかった場合は、前記サンプル中にＣＡＤＭ１は存在しないと判断でき、前記結合が検出された場合は、前記サンプル中にＣＡＤＭ１が存在すると判断できる。また、前記検出工程では、予め、ＣＡＤＭ１の存在量と、結合量との相関関係を求めておき、前記相関関係に基づいて、前記結合量から、前記サンプル中にＣＡＤＭ１の発現量を分析することもできる。このため、本開示の検出方法は、例えば、分析方法ということもできる。
前記ＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との結合の検出方法は、特に制限されない。前記方法は、例えば、物質間の結合を検出する従来公知の方法が採用できる。
＜試験方法＞
別の態様において、本開示のがんの罹患の可能性の試験方法は、対象者の生体試料と、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬を接触させる接触工程と、前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を測定する測定工程とを含む。本開示の試験方法によれば、がんの罹患の可能性を試験できる。本開示の試験方法は、例えば、がんの診断方法、またはがんの処置に用いる医薬組成物のコンパニオン診断方法としても使用できる。このため、本開示の試験方法は、例えば、がんの診断方法またはがんのコンパニオン診断方法ということもできる。
別の態様において、本開示のがんの罹患の可能性の試験方法は、対象者の生体試料と、本開示の抗体またはその抗原結合断片、および／または、本開示のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬を接触させる接触工程と、前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を測定する測定工程とを含む。本開示の試験方法によれば、がんの罹患の可能性を試験できる。本開示の試験方法は、例えば、がんの診断方法、またはがんの処置に用いる医薬組成物のコンパニオン診断方法としても使用できる。このため、本開示の試験方法は、例えば、がんの診断方法またはがんのコンパニオン診断方法ということもできる。
本開示の試験方法において、前記接触工程および前記測定工程は、前記本開示の検出方法における接触工程および検出工程と同様にして実施できる。
本開示の試験方法は、さらに、前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を、基準値と比較する比較工程を含んでもよい。前記基準値は、例えば、健常者の生体試料、がん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量等があげられる。
前記比較工程における評価方法は、例えば、前記基準値に応じて適宜設定できる。具体例として、前記比較工程では、前記対象者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量が、前記健常者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量よりも有意に高い場合、前記がん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記がん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量よりも有意に高い場合、前記対象者は、がんに罹患する危険性があるまたは危険性が高いと評価できる。また、前記比較工程では、前記対象者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量が、前記健常者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量と同じ場合（有意差が無い場合）、前記健常者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量よりも有意に低い場合、および／または、前記がん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量よりも有意に低い場合、前記対象者は、がんに罹患する危険性が無いまたは危険性が低いと評価できる。また、前記比較工程において、前記対象者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を、前記進行ステージごとのがん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量と比較することで、がんの進行度を評価できる。具体的には、前記対象者の生体試料が、例えば、いずれかの進行ステージの前記生体試料と同程度の発現量の場合（有意差がない場合）、前記対象者は、前記進行ステージの可能性があると評価できる。
＜使用＞
本開示は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体である。また、本開示は、S重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための医薬組成物の製造における、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体の使用である。本開示は、がんの処置方法に用いるための、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体である。また、本開示は、がんの処置方法に用いるための医薬組成物の製造における、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体の使用である。
本開示は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体である。また、本開示は、S重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための医薬組成物の製造における、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体の使用である。本開示は、がんの処置方法に用いるための、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体である。また、本開示は、がんの処置方法に用いるための医薬組成物の製造における、本開示のＣＡＤＭ１抗体その抗原結合断片、および／または、本開示の抗体薬物複合体の使用である。
以下、実施例を用いて本開示を詳細に説明するが、本発明は実施例に記載された態様に限定されるものではない。なお、以下の実施例において、「mol/l」を「M」と表記することがある。また、特に言及しない限り、市販の試薬およびキットは、添付のプロトコルに従って使用した。
［実施例１］
新規なＣＡＤＭ１抗体を調製した。
新規なＣＡＤＭ１抗体を調製した。
（１）チキン抗ＣＡＤＭ１抗体の作製
チキン抗ＣＡＤＭ１抗体は以下のように作製した。
チキン抗ＣＡＤＭ１抗体は以下のように作製した。
免疫動物には、ニワトリを用いた。抗原には、マウスＣＡＤＭ１の細胞外領域全長の組換えタンパク質（Furuno T. 他, Journal of Immunology, 2005）を用いた。前記ニワトリを、前記抗原にて免疫した後、脾臓より抗体産生細胞を採取し、ニワトリＢ細胞株ＭｕＨ１と細胞融合させた。ＣＡＤＭ１抗体を産生するハイブリドーマのクローンは、マウスＣＡＤＭ１の細胞外領域のＣ末端側にマウスＩｇＧのＦｃ領域を付加したＣＡＤＭ１－Ｆｃ（Koma Y. 他, Oncogene, 2004）に対する反応性をＥＬＩＳＡ法により評価して選別した。
得られたチキン抗ＣＡＤＭ１抗体を産生するハイブリドーマについて、抗体をコードしている核酸配列を解読し、前記核酸配列からアミノ酸配列を同定した。その結果、前記チキン抗ＣＡＤＭ１抗体は、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域と、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域とを含む抗体であった。チキン抗ＣＡＤＭ１抗体における、重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３は、Kabatの番号付けの法則により特定した。図１および図２に、チキン抗ＣＡＤＭ１抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列をＣＤＲ１～３の位置と併せて示す。
（２）ヒト化抗ＣＡＤＭ１抗体の設計
チキン抗ＣＡＤＭ１抗体のヒト化は、主に、ＣＤＲグラフティンにより実施した。具体的には、下記１）～４）工程で実施した。
１）抗ＣＡＤＭ１チキン抗体の塩基配列から、ＣＤＲ配列をピックアップし、ヒトのフレームワーク配列にそれらＣＤＲを移植する。
２）チキン抗ＣＡＤＭ１抗体の配列とヒトフレームワーク配列とを比較し、Vernier Zoneにおけるアミノ酸配列の異なる箇所をピックアップする。
３）異なる配列箇所は、ヒト由来アミノ酸またはニワトリ由来アミノ酸のどちらにも翻訳できるように、混合塩基を使用したコドンを設計する（場合によっては両者と異なるアミノ酸が出現する場合がある）。
４）scFv（single chain Fv：一本鎖抗体）のコンストラクトとなるように、設計したＶＨとＶＬの塩基配列を組み合わせる。
チキン抗ＣＡＤＭ１抗体のヒト化は、主に、ＣＤＲグラフティンにより実施した。具体的には、下記１）～４）工程で実施した。
１）抗ＣＡＤＭ１チキン抗体の塩基配列から、ＣＤＲ配列をピックアップし、ヒトのフレームワーク配列にそれらＣＤＲを移植する。
２）チキン抗ＣＡＤＭ１抗体の配列とヒトフレームワーク配列とを比較し、Vernier Zoneにおけるアミノ酸配列の異なる箇所をピックアップする。
３）異なる配列箇所は、ヒト由来アミノ酸またはニワトリ由来アミノ酸のどちらにも翻訳できるように、混合塩基を使用したコドンを設計する（場合によっては両者と異なるアミノ酸が出現する場合がある）。
４）scFv（single chain Fv：一本鎖抗体）のコンストラクトとなるように、設計したＶＨとＶＬの塩基配列を組み合わせる。
（３）ヒト化抗scFvライブラリの作製
設計した配列を合成し、ＰＣＲにて増幅後、pPDS(hCκ)ファージミドベクター（Yamanaka IH. 他, Journal of Biochemistry, 1995）に挿入した。次いで、XL1-Blue大腸菌（Stratagene、200228）に遺伝子導入した。菌の培養液にヘルパーファージを加えた後、ＩＰＴＧ（100μg/ml）を添加して、ファージscFv抗体の発現を行った。翌日、ＰＥＧ沈後、ＰＢＳ（phosphate- buffered saline）にて沈殿を溶解し、プライマリーscFv抗体ライブラリを得た。
設計した配列を合成し、ＰＣＲにて増幅後、pPDS(hCκ)ファージミドベクター（Yamanaka IH. 他, Journal of Biochemistry, 1995）に挿入した。次いで、XL1-Blue大腸菌（Stratagene、200228）に遺伝子導入した。菌の培養液にヘルパーファージを加えた後、ＩＰＴＧ（100μg/ml）を添加して、ファージscFv抗体の発現を行った。翌日、ＰＥＧ沈後、ＰＢＳ（phosphate- buffered saline）にて沈殿を溶解し、プライマリーscFv抗体ライブラリを得た。
（４）プライマリーscFv抗体ライブラリのパニング
抗原に対する特異結合、洗浄操作（非特異抗体の除去）、および特異抗体の回収はそれぞれ以下のように実施した。まず、イムノプレート（マキシソープ、Nunc）に1μg/mlのＣＡＤＭ１－Ｆｃ融合タンパク質を固相化した後、scFv抗体ライブラリを添加し、抗原への特異結合反応を行わせた。ウェル（well）をＰＢＳ－Ｔで洗浄し、非特異抗体を除去した後、XL1-Blueを加え、ファージの感染を行った（特異抗体の回収、および大腸菌への再感染）。ＩＰＴＧを添加して、ファージscFv抗体の発現を誘導し、翌日、ＰＥＧ沈後、ＰＢＳにて沈殿を溶解させた（パニングscFv抗体ライブラリ）。以上のパニング操作を、３～５回繰り返した。
抗原に対する特異結合、洗浄操作（非特異抗体の除去）、および特異抗体の回収はそれぞれ以下のように実施した。まず、イムノプレート（マキシソープ、Nunc）に1μg/mlのＣＡＤＭ１－Ｆｃ融合タンパク質を固相化した後、scFv抗体ライブラリを添加し、抗原への特異結合反応を行わせた。ウェル（well）をＰＢＳ－Ｔで洗浄し、非特異抗体を除去した後、XL1-Blueを加え、ファージの感染を行った（特異抗体の回収、および大腸菌への再感染）。ＩＰＴＧを添加して、ファージscFv抗体の発現を誘導し、翌日、ＰＥＧ沈後、ＰＢＳにて沈殿を溶解させた（パニングscFv抗体ライブラリ）。以上のパニング操作を、３～５回繰り返した。
（５）ファージscFv抗体の発現とスクリーニング(ELISA)
前記パニングscFvライブラリとXL1-Blueとを混合させた後、2×YTプレートに播種することでコロニー化させ分離した。コロニー化されたクローンを2×YT培地で培養し、ヘルパーファージ添加後、ＩＰＴＧを添加して、scFv抗体の発現を行った。前記発現後、培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによるスクリーニングに供した。前記ＥＬＩＳＡは、ＣＡＤＭ１－ＦｃまたはＢＳＡを固相したイムノプレート（マキシソープ、Nunc）、および二次抗体（HRP-anti-human-kappa、Thermo）を用いた。そして、前記ＣＡＤＭ１－Ｆｃへの高い反応性が確認され、且つＢＳＡへの非特異反応性が見られないクローンを選出した。
前記パニングscFvライブラリとXL1-Blueとを混合させた後、2×YTプレートに播種することでコロニー化させ分離した。コロニー化されたクローンを2×YT培地で培養し、ヘルパーファージ添加後、ＩＰＴＧを添加して、scFv抗体の発現を行った。前記発現後、培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによるスクリーニングに供した。前記ＥＬＩＳＡは、ＣＡＤＭ１－ＦｃまたはＢＳＡを固相したイムノプレート（マキシソープ、Nunc）、および二次抗体（HRP-anti-human-kappa、Thermo）を用いた。そして、前記ＣＡＤＭ１－Ｆｃへの高い反応性が確認され、且つＢＳＡへの非特異反応性が見られないクローンを選出した。
（６）二価抗体の作製
選出したクローン、および全てのフレームワークをヒト型のアミノ酸に置換したクローン（Ｗｔ）について、ヒトＩｇＧ４／κまたはＩｇＧ１／κへの組換えを以下のように行った。まず、Ｗｔについては全合成ＤＮＡを、テンプレートとして、Ｈ鎖可変領域およびＬ鎖可変領域をＰＣＲで増幅した。また、選出したクローンについては、scFv発現プラスミドをテンプレートとして、Ｈ鎖可変領域およびＬ鎖可変領域をＰＣＲで増幅した。次いで、得られたＰＣＲ産物を、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ１（Ｈ鎖）と、ヒトκ鎖（Ｌ鎖）の定常領域の組み込み構築済みの発現ベクター（pcDNA3.4, Thermo）にSeamless Cloning and Assembly Enzyme Mix（Thermo, A14606）を用いて相同組換えにより挿入したベクターを調製した。
選出したクローン、および全てのフレームワークをヒト型のアミノ酸に置換したクローン（Ｗｔ）について、ヒトＩｇＧ４／κまたはＩｇＧ１／κへの組換えを以下のように行った。まず、Ｗｔについては全合成ＤＮＡを、テンプレートとして、Ｈ鎖可変領域およびＬ鎖可変領域をＰＣＲで増幅した。また、選出したクローンについては、scFv発現プラスミドをテンプレートとして、Ｈ鎖可変領域およびＬ鎖可変領域をＰＣＲで増幅した。次いで、得られたＰＣＲ産物を、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ１（Ｈ鎖）と、ヒトκ鎖（Ｌ鎖）の定常領域の組み込み構築済みの発現ベクター（pcDNA3.4, Thermo）にSeamless Cloning and Assembly Enzyme Mix（Thermo, A14606）を用いて相同組換えにより挿入したベクターを調製した。
得られたベクターを用いて、大腸菌を形質転換して形質転換体を得た後、形質転換体を大量培養し、さらに、各クローンのＨ鎖およびＬ鎖のプラスミドを精製した。得られたプラスミドとExpi293 Expression System（Thermo, A14635）とを用いて、抗体を一過性で発現させた。そして、各培養上清から、MabSelect SuRe（Cytiva, 17543802）を用いて抗体を精製した。なお、ヒトＩｇＧ４のＨ鎖の定常領域においては、安定化を目的としてコアヒンジ配列はSerからProに置換した（Angal S. 他, Molecular Immunology, 1993）。ヒトＬ鎖の定常領域は、κ鎖の一般的な配列である。
（７）抗ＣＡＤＭ１抗体の配列情報
以上の作製方法により、（１）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、（２）それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗ＣＡＤＭ１抗体が得られた。具体的には、ＦＲのアミノ酸配列が異なる８種類の抗ＣＡＤＭ１抗体が得られた。
クローンＷＴ：配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（完全ヒト型）
クローン＃１：配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃２：配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃３：配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃４：配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃５：配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃６：配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃７：配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
以上の作製方法により、（１）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、（２）それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗ＣＡＤＭ１抗体が得られた。具体的には、ＦＲのアミノ酸配列が異なる８種類の抗ＣＡＤＭ１抗体が得られた。
クローンＷＴ：配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体（完全ヒト型）
クローン＃１：配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃２：配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃３：配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃４：配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃５：配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃６：配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
クローン＃７：配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体
図３に、各クローンの重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列情報をＣＤＲ１～３の位置と併せて示す。また、図３では、各クローンについて、クローンＷＴを基準として、変異があるアミノ酸残基に下線を付している。図３に示すように、抗ＣＡＤＭ１抗体の上記各クローンでは、完全ヒト型（ＷＴ：フレームワークがヒト抗体型）との比較において、残る７クローン（＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７）は、フレームワークの特定の６アミノ酸残基に最大４つのアミノ酸置換を有するが、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は全クローン同一であった。
（８）抗ＣＡＤＭ１抗体のＣＡＤＭ１特異性の評価
精製した抗ＣＡＤＭ１抗体（ＷＴ、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７の８クローン）を用いて、ＣＡＤＭ１（細胞外領域の組換えタンパク質（https://doi.org/10.1038/sj.onc.1207761 参照））、および牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に対する反応性を以下のようにＥＬＩＳＡ法により確認した。まず、抗原（ＣＡＤＭ１およびＢＳＡ）は、４℃で一晩イムノプレート（マキシソープ、Nunc）に固相し、翌日、固相液を捨て、ブロッキング溶液（株式会社ケー・エー・シー、UKB80）を用いてブロッキングを３７℃で１時間行った。ＰＢＳ－Ｔ（０．１（ｗ／ｖ）％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ）で洗浄後、各濃度に希釈した精製抗体（ＷＴ、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７の８クローン）を３７℃で１時間反応させた。ＰＢＳ－Ｔで洗浄後、１０００倍希釈した二次抗体（HRP-anti-human kappa、Thermo）を３７℃で１時間反応させた。ＰＢＳ－Ｔで洗浄後、TMB（KPL,52-00-02）で１０分間発色を行い、TMB stop solution（KPL,50-85-05）で反応を停止させ、プレートリーダー（Cytation、BioTek）にて吸光度450/650を測定した。この結果を図４に示す。図４に示すように、各クローンについて、ＣＡＤＭ１特異性が確認された。残る４クローン（＃４，５，６，７）の反応性は、ＷＴと同程度であった。
精製した抗ＣＡＤＭ１抗体（ＷＴ、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７の８クローン）を用いて、ＣＡＤＭ１（細胞外領域の組換えタンパク質（https://doi.org/10.1038/sj.onc.1207761 参照））、および牛血清アルブミン（ＢＳＡ）に対する反応性を以下のようにＥＬＩＳＡ法により確認した。まず、抗原（ＣＡＤＭ１およびＢＳＡ）は、４℃で一晩イムノプレート（マキシソープ、Nunc）に固相し、翌日、固相液を捨て、ブロッキング溶液（株式会社ケー・エー・シー、UKB80）を用いてブロッキングを３７℃で１時間行った。ＰＢＳ－Ｔ（０．１（ｗ／ｖ）％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ）で洗浄後、各濃度に希釈した精製抗体（ＷＴ、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７の８クローン）を３７℃で１時間反応させた。ＰＢＳ－Ｔで洗浄後、１０００倍希釈した二次抗体（HRP-anti-human kappa、Thermo）を３７℃で１時間反応させた。ＰＢＳ－Ｔで洗浄後、TMB（KPL,52-00-02）で１０分間発色を行い、TMB stop solution（KPL,50-85-05）で反応を停止させ、プレートリーダー（Cytation、BioTek）にて吸光度450/650を測定した。この結果を図４に示す。図４に示すように、各クローンについて、ＣＡＤＭ１特異性が確認された。残る４クローン（＃４，５，６，７）の反応性は、ＷＴと同程度であった。
なお、以下に説明する実施例では、特に断らない限り、抗ＣＡＤＭ１抗体としてはクローン＃１（ヒトＩｇＧ１）を用いた。また、マウスへの投与実験（薬効評価実験）では、抗ＣＡＤＭ１抗体についてはＦｃ領域（定常領域）をマウスＩｇＧ１型に組み換えて使用した。
（９）抗ＣＡＤＭ１抗体の内在化促進作用の評価
本発明者は、ＣＡＤＭ１発現細胞の標準的な培養系において抗ＣＡＤＭ１抗体を培養液に添加すると、ＣＡＤＭ１発現細胞を溶解した際に、ＣＡＤＭ１が易可溶化画分から消失し難可溶タンパク質画分へと移行することを見出した。これは、ＣＡＤＭ１の一部が細胞膜上から消失し細胞内に移行（内在化）したことを示すと考えられる。さらに、本発明者は、ＣＡＤＭ１組換えタンパク質（抗原）に対してＥＬＩＳＡで高親和性を示す抗ＣＡＤＭ１抗体の各クローン自身の内在化効率を調べるため、ＣＡＤＭ１陽性であることを確認したヒト白血球系細胞株ＭＴ－４、中皮腫細胞株Ｈ２０５２および子宮内膜がん細胞株ＨＥＣ－５０Ｂ（ＨＥＣ５０Ｂ）を通常培養し、当該培養液に、抗ＣＡＤＭ１抗体の各クローン（クローン＃１：各2μg/ml）または対照抗体（ヒトIgG1：2μg/ml）を添加し、翌日、易可溶化画分および難可溶タンパク質画分をタンパク質抽出し、ウエスタンブロットに供した。その結果を図５に示す。
本発明者は、ＣＡＤＭ１発現細胞の標準的な培養系において抗ＣＡＤＭ１抗体を培養液に添加すると、ＣＡＤＭ１発現細胞を溶解した際に、ＣＡＤＭ１が易可溶化画分から消失し難可溶タンパク質画分へと移行することを見出した。これは、ＣＡＤＭ１の一部が細胞膜上から消失し細胞内に移行（内在化）したことを示すと考えられる。さらに、本発明者は、ＣＡＤＭ１組換えタンパク質（抗原）に対してＥＬＩＳＡで高親和性を示す抗ＣＡＤＭ１抗体の各クローン自身の内在化効率を調べるため、ＣＡＤＭ１陽性であることを確認したヒト白血球系細胞株ＭＴ－４、中皮腫細胞株Ｈ２０５２および子宮内膜がん細胞株ＨＥＣ－５０Ｂ（ＨＥＣ５０Ｂ）を通常培養し、当該培養液に、抗ＣＡＤＭ１抗体の各クローン（クローン＃１：各2μg/ml）または対照抗体（ヒトIgG1：2μg/ml）を添加し、翌日、易可溶化画分および難可溶タンパク質画分をタンパク質抽出し、ウエスタンブロットに供した。その結果を図５に示す。
図５において、ヒトＩｇＧ（重鎖）のブロットが各クローン（ヒトＩｇＧ）の内在化の程度を示す。また、ＧＡＰＤＨは易可溶化画分のマーカーである。図５に示すように、抗ＣＡＤＭ１抗体は内在化活性を有していた。また、データは示していないが、ＥＬＩＳＡでの親和性（図４（Ａ）参照）に対応して、クローン＃１、＃２は、クローン＃３と比較して、内在化活性がさらに高かった。
（１０）新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）感染症に対する抗ＣＡＤＭ１抗体の効果
図６は、NIH3T3線維芽細胞によるＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１安定発現亜株の樹立と、各細胞に結合するSARS-CoV-2のスパイクタンパク質Ｓ１の検出を示す。図６（ａ）および（ｄ）は、元のNIH3T3を、図６（ｂ）および（ｅ）は、ＡＣＥ２発現亜株を、図６（ｃ）および（ｆ）は、ＣＡＤＭ１発現亜株を示す。
図６は、NIH3T3線維芽細胞によるＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１安定発現亜株の樹立と、各細胞に結合するSARS-CoV-2のスパイクタンパク質Ｓ１の検出を示す。図６（ａ）および（ｄ）は、元のNIH3T3を、図６（ｂ）および（ｅ）は、ＡＣＥ２発現亜株を、図６（ｃ）および（ｆ）は、ＣＡＤＭ１発現亜株を示す。
まず、NIH3T3線維芽細胞を用いて遺伝子導入を行い、ＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１が細胞膜上に安定的に高発現する亜株を得た。抗ＡＣＥ２抗体またはＣＡＤＭ１のＣ末認識抗体を用いた免疫染色にて、ＡＣＥ２およびＣＡＤＭ１ともに細胞表面に局在することが確認された（図６（ａ）～（ｃ））。なお、図中の円形物は、ＤＡＰＩにより染色された核である。
ＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１を安定的に発現するNIH3T3線維芽細胞亜株培養系において培養液中に、fluoresceinにて蛍光標識したＳ１組換えタンパク質を添加し、翌日免疫染色にてＳ１を検出した。この結果、元のNIH3T3細胞ではＳ１は検出されなかった（図６（ｄ））。他方、ＡＣＥ２発現細胞およびＣＡＤＭ１発現細胞の両者にてＳ１は細胞表面や細胞膜上に検出された（図６（ｅ）および（ｆ））。
図７は、MDCK腎上皮細胞によるＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１安定発現亜株の樹立と、各細胞に結合するSARS-CoV-2のスパイクタンパク質Ｓ１の検出を示す。図７（ａ）および（ｄ）は、元のMDCKを、図７（ｂ）、（ｅ）および（ｇ）は、ＡＣＥ２発現亜株を、図７（ｃ）、（ｆ）、および（ｈ）は、ＣＡＤＭ１発現亜株を示す。また、図７（ｄ）～（ｆ）は、細胞培養系にＳ１と同時に対照抗体（ＣＡＤＭ１と関連性の無いヒトＩｇＧ１）を添加したものであり、図７（ｇ）および（ｈ）は、細胞培養系にＳ１と同時に抗ＣＡＤＭ１抗体を添加したものである。抗ＣＡＤＭ１抗体としては、＃１抗体を添加し、対照抗体としては、＃１抗体の対照抗体としてヒトIgG1を添加した。
まず、MDCK腎上皮細胞を用いて遺伝子導入を行い、ＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１が細胞膜上に安定的に高発現する亜株を得た。抗ＡＣＥ２抗体またはＣＡＤＭ１のＣ末認識抗体を用いた免疫染色にて、ＡＣＥ２およびＣＡＤＭ１ともに細胞表面に局在することが確認された（図７（ａ）～（ｃ））。なお、図中の円形物は。ＤＡＰＩにより染色された核である。
ＡＣＥ２またはＣＡＤＭ１を安定的に発現するMDCK線維芽細胞亜株培養系において培養液中に、fluoresceinにて蛍光標識したＳ１組換えタンパク質を抗ＣＡＤＭ１抗体（ヒト化抗体）またはその対照抗体と共に添加し、翌日生細胞観察にてＳ１（蛍光）を検出した。この結果、元のMDCK細胞では、Ｓ１は検出されなかった（図７（ｄ））。他方、ＡＣＥ２発現細胞では、対照抗体および抗ＣＡＤＭ１抗体のいずれの添加群においても、Ｓ１が同程度に検出された（図７（ｅ）および（ｇ））。一方、ＣＡＤＭ１発現細胞においては、対照抗体添加群では、Ｓ１は検出されたが（図７（ｆ））、抗ＣＡＤＭ１抗体添加群では、Ｓ１は検出されなかった（図７（ｈ））。すなわち、ＣＡＤＭ１発現細胞培養系において抗ＣＡＤＭ１抗体をＳ１と同時に添加したところ、細胞表面で検出されるＳ１の蛍光は著しく強度が減弱した。
以上の実験を独立して３回行い、各回の平均値から蛍光強度の平均±標準偏差を計算した結果を下記の表１に示す。また、下記表１では、対照抗体添加群を添加したＡＣＥ２発現細胞およびＣＡＤＭ１発現細胞との比較におけるＰ値（Student t-検定）を合わせて示す。
図８は、抗ＣＡＤＭ１抗体の鼻腔内分布を示す。なお、図８の（ａ）および（ｃ）は、比較例として、対照抗体（マウスＩｇＧ１：２０μｇ）をマウス鼻腔内に点鼻した直後、および３０分後のそれぞれの鼻腔内分布を示し、図８の（ｂ）、（ｄ）、および（ｅ）は、抗ＣＡＤＭ１抗体（１０μｇ）をマウス鼻腔内に点鼻した直後、３０分後、および３時間後のそれぞれの鼻腔内分布を示す。図８において、「＊」を付した箇所は、「気道上皮が被覆する鼻腔」であり、「☆」を付した箇所は、「嗅上皮が被覆する鼻腔」であり、「＃」を付した箇所は、「頭蓋内」である。
抗ＣＡＤＭ１抗体またはその対照抗体をマウス鼻腔内に点鼻し、直後、３０分後、または３時間後にそれぞれ前頭部凍結切片を作製し、点鼻抗体を免疫染色にて検出した。図８において、ＤＡＰＩにより染色された核の周縁領域を中心として残存する抗体が白っぽく分布している。図８に示すように、対照抗体が３０分程度で拡散・消失した一方、抗ＣＡＤＭ１抗体は、嗅上皮に集積して３時間後も高濃度に滞留し続けた。
図９は、抗ＣＡＤＭ１抗体によるＳ１タンパク質の鼻腔内粘膜への結合阻害を示す写真である。まず、マウス（C57BL/6）に、抗ＣＡＤＭ１抗体（図９（Ａ））または対照抗体（図９（Ｂ））（各１０μｇ）を点鼻した。前記点鼻１時間後に、SARS-CoV-2スパイクタンパク質Ｓ１（１０μｇ）を点鼻した。前記点鼻３時間後に、マウス前頭部を採取し、組織切片を調製した。前記組織切片において、抗ＣＡＤＭＡ抗体およびＳ１を染色すると共に、ＤＡＰＩを用いて核を染色した。図９（Ａ）において、矢印Ｘで示す囲った領域が、Ｓ１が検出された領域であり、矢印Ｙで囲った領域が、抗ＣＡＤＭ１抗体が検出された領域である。また、図９（Ｂ）において、三角（△）で示す箇所が、Ｓ１の嗅粘膜表面への接着が検出された箇所である。図９（Ｂ）に示すように、対照抗体の投与群では、鼻腔内の嗅粘膜表面にＳ１が付着（接着）しているのが観察された。他方、図９（Ａ）に示すように、抗ＣＡＤＭ１抗体の投与群では、鼻腔内にＳ１が浮遊しており、嗅粘膜表面への接着は観察されなかった。
以上の結果から、SARS-CoV-2感染による嗅覚異常の機序として、ＣＡＤＭ１経路が認識されると共に、嗅上皮感染予防法として、抗ＣＡＤＭ１抗体が有用であることが判明した。
（１１）抗ＣＡＤＭ１抗体を用いた抗体薬物複合体
前述の通り、本発明者は、ＣＡＤＭ１発現細胞の標準的な培養系において抗ＣＡＤＭ１抗体を培養液に添加すると、ＣＡＤＭ１が易可溶化画分から消失し難可溶タンパク質画分へと移行することを見出した（図５参照）。これは、ＣＡＤＭ１が細胞膜上から消失し細胞内に移行（内在化）したことを示すと考えられる。
前述の通り、本発明者は、ＣＡＤＭ１発現細胞の標準的な培養系において抗ＣＡＤＭ１抗体を培養液に添加すると、ＣＡＤＭ１が易可溶化画分から消失し難可溶タンパク質画分へと移行することを見出した（図５参照）。これは、ＣＡＤＭ１が細胞膜上から消失し細胞内に移行（内在化）したことを示すと考えられる。
図１０は、抗ＣＡＤＭ１抗体によるＣＡＤＭ１の消失を示す。具体的には、各種細胞（中皮腫（３種類）、肺腺がん、または内膜腺がん）を通常培養し、培養液に抗ＣＡＤＭ１抗体（２μｇ／ｍｌ）または対照抗体（２μｇ／ｍｌ）を添加し、翌日、易可溶化画分をタンパク質（細胞膜タンパク質・細胞質可溶タンパク質主体）抽出し、ウエスタンブロットに供した結果を図１０に示す。なお、易可溶化画分は、50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,1% Triton X-100にて細胞を溶解後、遠心分離し、上清を回収して得た。図１０に示すように、いずれの細胞についても、抗ＣＡＤＭ１抗体を添加することにより、ＣＡＤＭ１は、易可溶化画分での検出量が減少した。なお、図１０において、β-actinは、各レーンに泳動されたタンパク質量を示すものであり、各ブロット（泳動メンブレン）においてレーン間で泳動タンパク質量に差が無いことを確認した。
図１１抗ＣＡＤＭ１抗体によるＣＡＤＭ１の内在化を示す。具体的には、図１１に示すような実験で易可溶化画分を採取する際に生じた細胞タンパク質ペレットを界面活性剤含有バッファー（RIPAバッファー（0.1w/v% sodium dodecyl sulfate含有））にて溶解し、難可溶タンパク質画分（核タンパク質を含む）を得た。この難可溶タンパク質画分を易可溶化画分とともにウエスタンブロットに供した結果を図１１に示す。図１１に示すように、いずれの細胞についても、抗ＣＡＤＭ１抗体を添加することにより、ＣＡＤＭ１は易可溶化画分から難可溶タンパク質画分へと移動（つまり内在化）した。なお、図１１において、抗体（重鎖）のブロットが内在化の程度を示す。また、ＧＡＰＤＨは易可溶化画分のマーカーであり、HDACは難可溶タンパク質画分（核タンパク質を含む）のマーカーである。
また、ＣＡＤＭ１の内在化に際して、抗ＣＡＤＭ１抗体も内在化することを見出した。図１２は、抗ＣＡＤＭ１抗体の内在化を示す。具体的には、抗ＣＡＤＭ１抗体をFluoresceinにて標識し、標準的な中皮腫細胞（EHMES10）培養系においてFluorescein標識・抗ＣＡＤＭ１抗体を１μｇ／ｍｌ培養液に添加し、添加後１０および３０時間の時点でFluoresceinの蛍光を生細胞観察にて検出した結果を図１２に示す。図１２に示すように、抗ＣＡＤＭ１抗体は細胞膜上から細胞内へと移動（つまり内在化）した。
以上に説明したことから、本願発明者は、抗ＣＡＤＭ１抗体に薬物を搭載することによって、当該薬物を効率的にＣＡＤＭ１発現細胞内へ送達することができることを見出した。
図１３は、抗ＣＡＤＭ１抗体を基盤とする抗体薬物複合体を示す。詳しくは、図１３は、微小管重合阻害薬（MMAE）結合抗CD30モノクローナル抗体Adcetris（Brentuximab vedotin；悪性リンパ腫治療薬）の抗体部分を抗ＣＡＤＭ１抗体に置換した抗体薬物複合体を示す。図１３に示す抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体では、カテプシン（cathepsin）切断リンカーを介して抗ＣＡＤＭ１抗体とMMAEとが結合されている。
図１４は、抗ＣＡＤＭ１抗体を基盤とする抗体薬物複合体の薬効を示す。具体的には、微小管重合阻害薬（MMAE）結合抗CD30モノクローナル抗体Adcetris（Brentuximab vedotin；悪性リンパ腫治療薬）の抗体部分を抗ＣＡＤＭ１抗体または対照抗体（マウスＩｇＧ１）に置換した抗体薬物複合体を調製した。そして、これらの複合体をＣＡＤＭ１発現細胞培養系（ＣＡＤＭ１を高発現している成人型Ｔ細胞白血病細胞株MT-2の培養系）に各１μｇ／ｍｌ添加し、細胞数の変化を経時的に観察した。この結果を図１４に示す。図１４に示すように、対照抗体を用いた複合体（対照抗体－MMAE）の添加群では細胞数が経日的に増加したが、抗ＣＡＤＭ１抗体を用いた複合体（抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE）の添加群では細胞数は３日目以降も増加せず７日目には減少に転じた。すなわち、抗ＣＡＤＭ１抗体を用いた抗体薬物複合体では、MMAEが細胞内で作用したものとみなされる。この結果は、抗ＣＡＤＭ１抗体が薬物送達ベクターとして有望であることを示唆すものと考えられる。図１４に示すように、スチューデントのｔ検定の「Ｐ値」は、０．０１よりも小さく、２群間の有意差が確認された。
本発明者は、悪性中皮腫細胞株（Meso1-CADM1（Meso1にCADM1を強制発現したもの）、およびH2052）の培養系に、「対照抗体（抗ＣＡＤＭ１抗体に対応するヒトＩｇＧ１）－MMAE複合体と、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体単独」を添加し、４日後にWST-8アッセイにて細胞生存率を測定した。なお、複合体（添加抗体が有る場合は、複合体および添加抗体の両方）の添加濃度は０．１、１、２、１０μg/mlとした。この結果、いずれの細胞種においても、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体単独」投与でも十分な薬剤活性が検出された。これは、抗ＣＡＤＭ１抗体の内在化が十分量生じていることを意味すると考えられる。
本発明者は、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）におけるＣＡＤＭ１の発現が症例により高レベルから低レベルまで様々であるが、小腸に発生するＧＩＳＴでは全例でＣＡＤＭ１を高レベルに発現していること（https://doi.org/10.3389/pore.2021.602008）に着目し、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体」のＧＩＳＴ、特に小腸ＧＩＳＴに対する治療薬としての可能性を検討した。ヒトGIST細胞株GIST-T1（https://doi.org/10.1038/labinvest.3780461）は、ＣＡＤＭ１低発現であるが、遺伝子導入によりその高発現亜株を得たところ、その高発現亜株について、本発明者は、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体」によって有意に細胞増殖が抑制されることを確認した。
具体的には、ヒトGIST細胞株GIST-T1、およびGIST-T1にＣＡＤＭ１を強制発現した亜株（GIST-T1-CADM1）を96-wellプレートの各wellに2,500個播種し（各実験群につきn=4）、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体」、または「抗ＣＡＤＭ１抗体の対照抗体（マウスIgG1）－MMAE複合体」を添加し（各複合体の添加濃度は0.25μg/ml）、５日後にWST-8アッセイにて生細胞数を450nm吸光度として測定した。その結果を下記表２に示す。下記表２に示すように、GIST-T1-CADM1について、「抗ＣＡＤＭ１抗体－MMAE複合体」によって有意に細胞増殖が抑制されることが確認できた。なお、下記表２に示す結果において、他のいずれの実験群との比較についてもスチューデントのｔ検定の「Ｐ値」は０．０００１よりも小さく、有意差が確認された。
（１２）抗体医薬品の細胞内送達ベクターとしての抗ＣＡＤＭ１抗体の可能性
図１３には、抗ＣＡＤＭ１抗体を基盤とする抗体薬物複合体として、MMAE搭載の実施例を示した。本発明者は、所望の成分を抗体医薬品とすることが可能かを検討するために、アミン反応性架橋剤を用いたクロスリンク（架橋）反応（Click-&-Go Lys-to-Lys Protein-Protein Conjugation Kit（Click Chemistry Tools社）等を使用）により、図１５（Ａ）に示す抗ＣＡＤＭ１抗体－マウスIgG1複合体を作製し、細胞培養系に添加したところ、本複合体は、抗ＣＡＤＭ１抗体単独の場合と同程度の効率で細胞内移行（内在化）した。
図１３には、抗ＣＡＤＭ１抗体を基盤とする抗体薬物複合体として、MMAE搭載の実施例を示した。本発明者は、所望の成分を抗体医薬品とすることが可能かを検討するために、アミン反応性架橋剤を用いたクロスリンク（架橋）反応（Click-&-Go Lys-to-Lys Protein-Protein Conjugation Kit（Click Chemistry Tools社）等を使用）により、図１５（Ａ）に示す抗ＣＡＤＭ１抗体－マウスIgG1複合体を作製し、細胞培養系に添加したところ、本複合体は、抗ＣＡＤＭ１抗体単独の場合と同程度の効率で細胞内移行（内在化）した。
具体的には、抗ＣＡＤＭ１抗体とマウスＩｇＧ１（mIgG1）とをクロスリンクした後、中皮腫細胞（EHMES10）の培養液に抗体１μｇ相当で添加し、翌日、タンパク質を抽出（易可溶化・難可溶タンパク質分画）し、ウエスタンブロットに供して、マウスＩｇＧを検出した。その結果を図１５（Ｂ）に示す。図１５（Ｂ）には、比較のため、抗ＣＡＤＭ１抗体とマウスＩｇＧ１とをクロスリンクさせずに添加した場合の結果を示している。
図１５（Ｂ）に示すように、抗ＣＡＤＭ１抗体－マウスＩｇＧ１複合体は、抗ＣＡＤＭ１抗体単体と同等に、ＣＡＤＭ１の内在化を促進すると共に、複合体自体も難可溶タンパク質分画に検出された。図１５（Ｂ）おいて、「複合体から遊離した重鎖」は、抗ＣＡＤＭ１抗体と結合させたマウスIgG1に由来する重鎖を意味する。
以上の結果から、本開示のＣＡＤＭ１抗体が細胞内送達ベクターとして使用できることが分かった。また、近年、抗腫瘍抗体医薬として注目されている腫瘍細胞内抗原（KRAS・BRAF・EGFR kinase domain等）についても、抗ＣＡＤＭ１抗体は、それらの細胞内抗原標的抗体の細胞内送達を達成するベクターとして期待しうる。
以上、実施形態および実施例を参照して本開示を説明したが、本開示は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本開示の構成や詳細には、本開示のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。
＜付記＞
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
＜抗ＣＡＤＭ１抗体＞
（付記１）
抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント：
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。
（付記２）
前記（Ｃｂ）の変異体は、前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体で、１または２アミノ酸の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む、付記１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記３）
前記抗体は、下記（Ｖａ）、（Ｖｂ）、および（Ｖｃ）からなる群から選択される、付記１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片：
（Ｖａ）配列番号７から１４のいずれかに示される重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示される軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｖｂ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体；
（Ｖｃ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体。
（付記４）
前記（Ｖｂ）の変異体は、前記抗体のフレームワーク領域に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む、付記３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記５）
内在化活性を有する、付記１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記６）
前記抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligo specific）抗体、単鎖抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、ｓｃ（Ｆｖ）２、およびｓｃＦｖ－Ｆｃから選択される抗体である、付記１から５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
＜抗体薬物複合体＞
（付記７）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬物とを含む、抗体薬物複合体。
＜医薬組成物＞
（付記８）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記７に記載の抗体薬物複合体を含む、医薬組成物。
（付記９）
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置、および／または、SARS-CoV-2による感染症の処置に用いるための、付記８に記載の医薬組成物。
（付記１０）
経鼻投与に用いるための、付記９に記載の医薬組成物。
（付記１１）
がんの処置に用いるための、付記８に記載の医薬組成物。
（付記１２）
前記がんは、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、および／または、内膜腺がんである、付記１１に記載の医薬組成物。
＜処置方法＞
（付記１３）
対象に、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８から１０のいずれかに記載の医薬組成物を投与する投与工程を含む、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法。
（付記１４）
対象に、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記１７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８、１１および１２のいずれかに記載の医薬組成物を投与する投与工程を含む、がんの処置方法。
＜使用＞
（付記１５）
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
（付記１６）
がんの処置方法に用いるための、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８、１１および１２のいずれかに記載の医薬組成物。
＜検出試薬＞
（付記１７）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、ＣＡＤＭ１の検出試薬。
＜試験試薬＞
（付記１８）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、がんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬。
＜検出方法＞
（付記１９）
サンプルと、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記１７に記載のＣＡＤＭ１の検出試薬を接触させる接触工程と、
前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する検出工程とを含む、ＣＡＤＭ１の検出方法。
（付記２０）
前記サンプルは、生体試料である、付記１９に記載の検出方法。
＜試験方法＞
（付記２１）
対象者の生体試料と、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記１８に記載のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬を接触させる接触工程と、
前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を測定する測定工程とを含む、がんの罹患の可能性の試験方法。
（付記２２）
前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を、基準値と比較する比較工程を含む、付記２１に記載の試験方法。
（付記２３）
前記基準値は、健常者の生体試料またはがん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量である、付記２２に記載の試験方法。
＜核酸＞
（付記２４）
付記１から６のいずれかに記載の抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする、核酸。
（付記２５）
付記２４に記載の核酸を含む、ベクター。
＜形質転換体＞
（付記２６）
付記２４の核酸または付記２５に記載のベクターを含む、形質転換体。
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
＜抗ＣＡＤＭ１抗体＞
（付記１）
抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント：
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。
（付記２）
前記（Ｃｂ）の変異体は、前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体で、１または２アミノ酸の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む、付記１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記３）
前記抗体は、下記（Ｖａ）、（Ｖｂ）、および（Ｖｃ）からなる群から選択される、付記１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片：
（Ｖａ）配列番号７から１４のいずれかに示される重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示される軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｖｂ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体；
（Ｖｃ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体。
（付記４）
前記（Ｖｂ）の変異体は、前記抗体のフレームワーク領域に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む、付記３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記５）
内在化活性を有する、付記１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記６）
前記抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligo specific）抗体、単鎖抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、ｓｃ（Ｆｖ）２、およびｓｃＦｖ－Ｆｃから選択される抗体である、付記１から５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
＜抗体薬物複合体＞
（付記７）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬物とを含む、抗体薬物複合体。
＜医薬組成物＞
（付記８）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記７に記載の抗体薬物複合体を含む、医薬組成物。
（付記９）
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置、および／または、SARS-CoV-2による感染症の処置に用いるための、付記８に記載の医薬組成物。
（付記１０）
経鼻投与に用いるための、付記９に記載の医薬組成物。
（付記１１）
がんの処置に用いるための、付記８に記載の医薬組成物。
（付記１２）
前記がんは、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、および／または、内膜腺がんである、付記１１に記載の医薬組成物。
＜処置方法＞
（付記１３）
対象に、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８から１０のいずれかに記載の医薬組成物を投与する投与工程を含む、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法。
（付記１４）
対象に、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記１７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８、１１および１２のいずれかに記載の医薬組成物を投与する投与工程を含む、がんの処置方法。
＜使用＞
（付記１５）
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置方法またはSARS-CoV-2による感染症の処置方法に用いるための、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
（付記１６）
がんの処置方法に用いるための、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、付記７に記載の抗体薬物複合体、および／または、付記８、１１および１２のいずれかに記載の医薬組成物。
＜検出試薬＞
（付記１７）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、ＣＡＤＭ１の検出試薬。
＜試験試薬＞
（付記１８）
付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、がんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬。
＜検出方法＞
（付記１９）
サンプルと、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記１７に記載のＣＡＤＭ１の検出試薬を接触させる接触工程と、
前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する検出工程とを含む、ＣＡＤＭ１の検出方法。
（付記２０）
前記サンプルは、生体試料である、付記１９に記載の検出方法。
＜試験方法＞
（付記２１）
対象者の生体試料と、付記１から６のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、付記１８に記載のがんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬を接触させる接触工程と、
前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を測定する測定工程とを含む、がんの罹患の可能性の試験方法。
（付記２２）
前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を、基準値と比較する比較工程を含む、付記２１に記載の試験方法。
（付記２３）
前記基準値は、健常者の生体試料またはがん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量である、付記２２に記載の試験方法。
＜核酸＞
（付記２４）
付記１から６のいずれかに記載の抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片をコードする、核酸。
（付記２５）
付記２４に記載の核酸を含む、ベクター。
＜形質転換体＞
（付記２６）
付記２４の核酸または付記２５に記載のベクターを含む、形質転換体。
以上のように、本開示によれば、SARS-CoV-2の処置に使用できる可能性がある、新たなＣＡＤＭ１抗体を提供できる。このため、本開示は、例えば、医薬分野等において極めて有用である。
Claims (18)
- 抗ＣＡＤＭ１抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体は、下記（Ｃａ）および（Ｃｂ）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント：
（Ｃａ）それぞれ、配列番号１、２および３に示される重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２および重鎖ＣＤＲ３と、それぞれ、配列番号４、５および６に示される軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２および軽鎖ＣＤＲ３とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｃｂ）前記重鎖ＣＤＲ１、前記重鎖ＣＤＲ２、前記重鎖ＣＤＲ３、前記軽鎖ＣＤＲ１、前記軽鎖ＣＤＲ２、および前記軽鎖ＣＤＲ３の全体に、１個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む（Ｃａ）抗体の変異体。 - 前記抗体は、下記（Ｖａ）、（Ｖｂ）、および（Ｖｃ）からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片：
（Ｖａ）配列番号７から１４のいずれかに示される重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示される軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む抗体；
（Ｖｂ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１～１２個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列において、１～１０個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む重鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体；
（Ｖｃ）配列番号７から１４のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１５から２２のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有する軽鎖可変領域とのアミノ酸配列を含む（Ｖａ）抗体の変異体。 - 前記（Ｖｂ）の変異体は、前記抗体のフレームワーク領域に、１もしくは数個の置換、挿入、付加もしくは欠失を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 内在化活性を有する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性またはオリゴ特異性（oligo specific）抗体、単鎖抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、ｓｃ（Ｆｖ）２、およびｓｃＦｖ－Ｆｃから選択される抗体である、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬物とを含む、抗体薬物複合体。
- 請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片、および／または、請求項６に記載の抗体薬物複合体を含む、医薬組成物。
- 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（SARS-CoV-2）の感染の予防的処置、および／または、SARS-CoV-2による感染症の処置に用いるための、請求項７に記載の医薬組成物。
- 経鼻投与に用いるための、請求項８に記載の医薬組成物。
- がんの処置に用いるための、請求項７に記載の医薬組成物。
- 前記がんは、中皮腫、消化管間質腫瘍、肺腺がん、および／または、内膜腺がんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
- 請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、ＣＡＤＭ１の検出試薬。
- 請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、がんの罹患の可能性の試験に用いるための試薬。
- サンプルと、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片を接触させる接触工程と、
前記サンプル中のＣＡＤＭ１と前記抗体またはその抗原結合断片との複合体を検出する検出工程とを含む、ＣＡＤＭ１の検出方法。 - 前記サンプルは、生体試料である、請求項１４に記載の検出方法。
- 対象者の生体試料と、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片を接触させる接触工程と、
前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を測定する測定工程とを含む、がんの罹患の可能性の試験方法。 - 前記生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量を、基準値と比較する比較工程を含む、請求項１６に記載の試験方法。
- 前記基準値は、健常者の生体試料またはがん患者の生体試料におけるＣＡＤＭ１の発現量である、請求項１７に記載の試験方法。
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