KR20230117390A - 항-fshr 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및용도 - Google Patents

항-fshr 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230117390A
KR20230117390A KR1020237022197A KR20237022197A KR20230117390A KR 20230117390 A KR20230117390 A KR 20230117390A KR 1020237022197 A KR1020237022197 A KR 1020237022197A KR 20237022197 A KR20237022197 A KR 20237022197A KR 20230117390 A KR20230117390 A KR 20230117390A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
amino acid
seq
antigen
cancer
Prior art date
Application number
KR1020237022197A
Other languages
English (en)
Inventor
닝후이 유
슈리앙 지앙
Original Assignee
캔웰 (지제트) 바이오테크 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 캔웰 (지제트) 바이오테크 리미티드 filed Critical 캔웰 (지제트) 바이오테크 리미티드
Publication of KR20230117390A publication Critical patent/KR20230117390A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
    • G01N2333/726—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

항-FSHR 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및 용도가 제공되어 있다. 구체적으로는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되어 있다. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 가변 영역을 포함하고, 인간 여포 자극 호르몬 수용체 FSHR에 특이적으로 결합하며, 서열번호: 6, 7, 8, 10, 11 및 12에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다. 제공된 항-FSHR 항체 및 이의 항체-약물 접합체는 암을 검출, 스크리닝, 예방 및 치료하는 데 광범위한 응용 전망을 가지고 있다.

Description

항-FSHR 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및 용도
본 발명은 생명공학 분야에 속하며, 항-FSHR 항체(anti-FSHR antibody) 및 이의 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate)의 제조 및 용도에 관한 것이다.
인간 여포 자극 호르몬 수용체(FSHR)는 80kD의 G-단백질 결합된 막 수용체이다. FSHR 세포외 도메인은 9개의 류신이 풍부한 반복(LRR) 도메인, 세포외 힌지 루프, 7개의 나선형 막횡단 도메인, 및 세포질 도메인을 포함한다. LRR 도메인은 FSH의 고친화성 결합, 수용체 활성화를 위한 힌지 루프, 및 수용체 신호전달을 위한 막횡단 및 세포질 도메인을 담당한다.1-4
인간 FSHR은 주로 난소의 과립막 세포와 고환의 세르톨리 세포에서 발현된다.5 FSHR의 천연 단백질 리간드인 재조합 여포 자극 호르몬(FSH)은 여성 및 남성 불임 치료에 임상적으로 사용되었다. 여러 FSHR 소분자 알로스테릭 조절인자도 발견되었다.6-9
여러 생식선외(extragonadal) 정상 및 종양 조직에서 FSHR 발현이 최근에 발견되었다. FSHR은 인간 여성 생식기 및 태반,10 파골 세포,11 지방 세포,12 연골 세포,13 양성 전립선 비대증 및 전립선암,13 및 난소암14에서 전사된다. FSH 수용체는 또한 광범위한 종양을 가진 환자의 조직 샘플에서 내피 세포에 의해 발현된다.15 상기 종양은 전립선, 유방, 결장, 췌장, 방광, 신장, 폐, 간, 위, 고환, 및 난소에 위치하였다.
종양 주위 혈관, 전립선암, 및 난소암에서 FSHR가 공통 마커이기 때문에, 항-FSHR 인간화 항체는 원칙적으로 광범위한 종양 유형에 적용할 수 있어야 한다. 현재 시장에서 암 치료를 위해 FSHR에 대해 승인된 항체 약물은 존재하지 않는다. 다양한 암을 효과적으로 치료할 수 있는 새로운 항-FSHR 항체를 발명할 필요성이 분명히 있다. 따라서, 독성과 부작용이 적고, 임상적 효능이 우수한 암의 검출, 스크리닝 및 치료에 사용될 수 있는 새로운 항-FSHR 단클론 항체 및 이의 항체-약물 접합체(ADC)의 개발이 시급하다. 이것은 환자에게 더 많은 약물 선택권을 줄 것이다.
참고문헌:
1. Jiang, X. et al. Structural predictions for the ligand-binding region of glycoprotein hormone receptors and the nature of hormone-receptor interactions. Structure 3, 1341-1353 (1995).
2. Jiang, X. et al. Structure of follicle-stimulating hormone in complex with the entire ectodomain of its receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. 109, 12491-12496 (2012).
3. Jiang, X., Dias, J. A. & He, X. Structural biology of glycoprotein hormones and their receptors: Insights to signaling. Mol. Cell. Endocrinol. 382, 424-451 (2014).
4. Jiang, X. et al. Evidence for follicle-stimulating hormone receptor as a functional trimer. J. Biol. Chem. 289, 14273-14282 (2014).
5. Sprengel, R., Braun, T., Nikolics, K., Segaloff, D. L. & Seeburg, P. H. The Testicular Receptor for Follicle Stimulating Hormone: Structure and Functional Expression of Cloned cDNA. Mol. Endocrinol. 4, 525-530 (1990).
6. Henry, N. Y. et al. Discovery of substituted benzamides as follicle stimulating hormone receptor allosteric modulators. Bioorg. Med. Chem. Lett. 24, 2168-2172 (2014).
7. Sriraman, V. et al. Investigation of a thiazolidinone derivative as an allosteric modulator of follicle stimulating hormone receptor: evidence for its ability to support follicular development and ovulation. Biochem. Pharmacol. 89, 266-275 (2014).
8. Nataraja, S. G., Yu, H. N. & Palmer, S. S. Discovery and development of small molecule allosteric modulators of glycoprotein hormone receptors. Front. Endocrinol. (Lausanne). 6, 142 (2015).
9. Vannier, B., Loosfelt, H., Meduri, G., Pichon, C. & Milgrom, E. Anti-human FSH receptor monoclonal antibodies: immunochemical and immunocytochemical characterization of the receptor. Biochemistry 35, 1358-1366 (1996).
10. Stilley, J. A. W. et al. FSH receptor (FSHR) expression in human extragonadal reproductive tissues and the developing placenta, and the impact of its deletion on pregnancy in mice. Biol. Reprod. 91, 71-74 (2014).
11. Sun, L. et al. FSH Directly Regulates Bone Mass. Cell 125, 247-260 (2006).
12. Liu, P. et al. Blocking FSH induces thermogenic adipose tissue and reduces body fat. Nature 546, 107 (2017).
13. Kong, D. et al. Expression of FSHR in chondrocytes and the effect of FSH on chondrocytes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 495, 587-593 (2018).
14. Perales-Puchalt, A. et al. Follicle-stimulating hormone receptor is expressed by most ovarian subtypes and is a safe and effective immunotherapeutic target. Clin. Cancer Res. 23, 441-453 (2017).
15. Radu, A. et al. Expression of follicle-stimulating hormone receptor in tumor blood vessels. N. Engl. J. Med. 363, 1621-1630 (2010).
일 측면에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 가변 영역을 포함하고, 인간 여포 자극 호르몬 수용체 FSHR에 특이적으로 결합하며, 서열번호: 6, 7, 8, 10, 11, 및 12의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 6, 7 및 8의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 경쇄 CDR을 포함하고/하거나;
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 10, 11 및 12의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 6, 7 및 8에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR, 및 서열번호: 10, 11 및 12에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하고;
여기서 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
상기 중쇄 가변 영역은 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1 서브클래스, IgG2A 서브클래스, IgG2B 서브클래스, IgG2C 서브클래스 또는 IgG3 서브클래스로부터 선택되는 마우스 IgG 클래스이며, 통상적인 방법에 의해 인간화될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 및 중쇄를 포함하고;
여기서 상기 경쇄는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
상기 중쇄는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 10개 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가, 예를 들어 1, 2 또는 3개의 보존적 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가를 포함하는, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나의 변이체를 제공하며, 예를 들어, 상기 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가는 FR 영역에 있거나, 또는 적어도 하나의 치환, 결실 및/또는 부가는 CDR 영역에 있다.
일부 구현예에서, 상기 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가는 올리고뉴클레오티드 매개된 부위 특이적 돌연변이유발, 카세트 돌연변이유발, 축퇴성 올리고뉴클레오티드 프라이밍된 PCR(degenerate oligonucleotide primed PCR), 오류 유발 PCR(error-prone PCR), DNA 셔플링(DNA shuffling), 및 박테리아 뮤테이터(bacterial mutator) 사용으로 이루어진 그룹에서 선택된 방법을 통한 뉴클레오티드 돌연변이에 의해 달성된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나, 또는 상기 언급된 변이체와 관련된 생물학적 물질을 제공하며, 상기 생물학적 물질은 하기 B1) 또는 B2)이다:
B1) 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체를 암호화하는 핵산 분자; 및
B2) B1)의 핵산 분자를 포함하는 발현 카세트, 재조합 벡터, 재조합 세포 또는 재조합 미생물.
일부 구현예에서, 상기 생물학적 물질에서, B1)의 핵산 분자는 cDNA, 게놈 DNA 또는 재조합 DNA와 같은 DNA일 수 있으며; 상기 핵산 분자는 또한 mRNA 또는 hnRNA 등과 같은 RNA일 수도 있다.
당업자는 유도 진화, 및 점돌연변이와 같은 공지된 방법을 사용하여 본 발명의 뉴클레오티드 서열을 용이하게 돌연변이시킬 수 있다. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 암호화하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체의 기능을 갖는 한, 본 발명의 뉴클레오티드 서열과 일정한 동일성을 갖는 인위적으로 변형된 뉴클레오티드는 본 발명의 뉴클레오티드 서열로부터 유래되고, 본 발명의 서열과 동등하다.
본원에서 사용되는 용어 "동일성"은 핵산 서열과의 서열 유사성을 의미한다. "동일성"은 육안이나 컴퓨터 소프트웨어로 평가될 수 있다. 2개 이상의 서열들 사이의 동일성은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 백분율(%)로 표현될 수 있으며, 관련된 서열들 사이의 동일성을 평가하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 생물학적 물질에서, B2)에 언급된 B1)의 핵산 분자를 포함하는 발현 카세트는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 숙주 세포에서 발현시킬 수 있는 DNA 분자를 의미하며, 상기 DNA 분자는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 암호화하는 유전자의 전사를 시작하는 프로모터뿐만 아니라 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 암호화하는 유전자의 전사를 중지시키는 종결자(terminator)도 포함할 수 있다. 또한, 상기 발현 카세트는 또한 인핸서 서열을 포함할 수 있다.
pcDNA3.1 벡터와 같은 기존의 발현 벡터는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제작하는 데 사용될 수 있다. 경쇄 발현 벡터는 pcDNA3.1_CAN001 LC일 수 있으며, 중쇄 발현 벡터는 pcDNA3.1_CAN001 HC일 수 있다.
상기 벡터는 플라스미드, 코스미드, 파지 또는 바이러스 벡터일 수 있으며;
상기 재조합 미생물은 구체적으로 박테리아, 조류 및 진균일 수 있으며, 여기서 상기 박테리아는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)일 수 있고;
상기 재조합 세포는 비생식 물질이다.
일부 구현예에서, 상기 생물학적 물질에서, 상기 핵산 분자는 하기 1), 또는 2), 또는 3)에 나타낸 핵산 단편을 포함한다:
(1) 하기 DNA 분자:
서열번호: 1의 130-168번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 1의 214-234번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 1의 331-357번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 2의 154-168번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 2의 211-261번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 2의 358-378번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 1의 64-405번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 2의 64-441번 위치에 나타낸 핵산 단편;
서열번호: 1에 나타낸 핵산 단편; 또는
서열번호: 2에 나타낸 핵산 단편;
2) 1)에서 정의된 DNA 분자에 하이브리드화되고, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체를 암호화하는 DNA 분자; 및
3) 1) 또는 2)에서 정의된 DNA 분자와 적어도 90%의 동일성을 갖고, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체를 암호화하는 DNA 분자.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체를 제조하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 다음을 포함한다:
B1)의 핵산 분자를 포함하는 재조합 세포를, 상기 핵산 분자가 발현될 수 있는 조건 하에서 배양액에서 배양하여 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 제조하는 단계.
일부 구현예에서, 상기 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.1_CAN001 LC 및 상기 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.1_CAN001 HC를 HEK293T 세포에 형질감염시키고, 형질감염된 HEK293T 세포를 배양하고, 상청액을 수집하여 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 얻는다. 바람직하게는, 상기 HEK293T 세포는 각각 CAN001의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 벡터 pcDNA3.1_CAN001 HC 및 pcDNA3.1_CAN001 LC(질량비=1:2)와 1:3의 벡터 대 폴리머의 질량비에 따른 25kD 선형 PEI 폴리머(polyscience)로 동시 형질감염된다.
일부 구현예에서, 수집 후, 상청액을 추가로 정제하여 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 얻을 수 있으며, 상기 정제는 단백질-A 친화성 크로마토그래피(Genescript)에 의해 수행될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체와 세포독성 약물을 링커를 통해 결합시켜 얻어지는 항체-약물 접합체를 제공한다. 상기 항체-약물 접합체는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체가 표적 세포 표면에 있는 인간 여포 자극 호르몬 수용체(FSHR)를 표적화하고 결합한 후 약물과 함께 표적 세포 내로 세포내이입될 수 있도록 한다.
본원에서 사용되는 용어 "약물" 또는 "D"는 세포독성 약물을 의미하며, 이의 예로는 화학요법제 및 독소가 포함된다. 특히, "약물"은 다음으로부터 독립적으로 선택될 수 있다: (a) 캄프토테신 유도체 및 대사산물(예를 들어 SN-38), 이때 다른 것들로는 디프테리아 독소, 보툴리눔 독소, 파상풍 독소, 이질 독소, 콜레라 독소, 아마니틴, O-아마니틴, 아마니틴 유도체, 피롤로-벤조디아제핀, 피롤로-벤조디아제핀 유도체, 테트로도톡신, 브레베톡신, 시구아테라 독소, 리신, AM 독소, 튜불리신, 겔다나마이신, 메이탄시놀, 칼리케아미신, 다우노루비신, 아드리아마이신, 메토트렉세이트, 빈데신, SG2285, 돌라스타틴, 돌라스타틴 유사체, 아우리스타틴(auristatin)(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 E 및 모노메틸 아우리스타틴 F), 크립토피신, 캄프토테신, 리족신, 리족신 유도체, CC-1065, CC-1065 유사체 또는 유도체, 듀오카르마이신, 에네디인 항생제, 라마이신, 에포틸론, 아조나피드, 아플리딘, 톡소이드, 또는 이들의 임의의 조합이 포함됨; (b) 엘로티닙, 보르테조밉, 풀베스트란트, 수텐트, 레트로졸, 이마티닙 메실레이트, PTK787/ZK 222584, 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 폴린산, 라파마이신, 라파티닙, 로나파르닙, 소라페닙, 게피티닙, AG1478, AG1571, 티오테파, 시클로포스파미드, 부설판, 임프로설판, 피포설판, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 우레도파, 에틸렌이민, 알트레타민, 트레타민, 트리에틸렌포스포르아미드, 리에티일렌티오포스포르아미드(riethiylenethiophosphoramide), 트리메틸롤로멜라민(trimethylolomelamine), 불라타신(bullatacin), 불라타시논, 암프토테신(amptothecin), 토포테칸, 브리오스타틴, 칼리스타틴, CC-1065, 아도젤레신, 카르젤레신, 비젤레신, 크립토피신 1, 크립토피신 8, 돌라스타틴, 듀오카르마이신, KW-2189, CB1-TM1, 엘루테로빈(eleutherobin), 판크라티스타틴, 사르코딕티인(sarcodictyin), 스폰기스타틴(spongistatin), 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 노벰비친(novembichin), 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라무스틴, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 칼리케아미신, 칼리케아미신 γ1, 칼리케아미신 ω1, 디네미신, 디네미신 A, 클로드로네이트, 라마이신, 네오카르지노스타틴 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 안티마이신, 아자세린, 블레오마이신, 악티노마이신 C, 카라비신, 카르니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 악티노마이신 D, 다우노마이신, 데토루부신(detorubucin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신, 모르폴리노-아드리아마이신, 시아노모르폴리노-아드리아마이신, 2-피롤로-아드리아마이신, 리포솜 아드리아마이신, 데옥시아드리아마이신, 에피루비신, 에소루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토미그린, 스트렙토조토신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신, 5-플루오로우라실, 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트리메트렉세이트, 플루다라빈, 6-머캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤, 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄, 폴린산, 아세글라톤, 알도포스파미드 글리코시드, 아미노레불린산, 에닐루라실, 암사크린, 베스트라부실, 비산트렌, 에다트락세이트, 데포파민, 데메콜신, 디아지쿠온, 엘포르니틴, 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드, 질산갈륨, 하이드록시우레아, 렌티난, 로니다이닌, 메이탄신, 안사미토신, 미토구아존, 미톡산트론, 모피단몰, 니트라에린, 펜토스타틴, 페나메트, 피라루비신, 로속산트론, 2-에틸히드라지드, 프로카르바진, 다당류 k, 라조산, 리족신, 시조피란, 스피로게르마늄, 테누아존산, 트리아지쿠온, 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민, T-2 독소, 베라쿠린 A, 미로테신 A, 안구이딘, 우레탄, 빈데신, 다카르바진, 만노무스틴, 디브로만니톨, 디브로모둘시톨, 피포브로만, 가시토신, 아라비노시드, 시클로포스파미드, 티오테파, 파클리탁셀, 파클리탁셀의 알부민 조작된 나노 제제, 도세탁셀, 클로람부실, 젬시타빈, 6-티오구아닌, 머캅토퓨린, 시스플라틴, 카보플라틴, 빈블라스틴, 백금, 에토포사이드, 이포스파미드, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 미톡산트론, 테니포사이드, 에다트렉세이트, 다우노루비신, 아미노프테린, 젤로다, 이반드로네이트, CPT-11, 토포이소머라아제 억제제 RFS 2000, 디플루오로메틸오르니틴, 레티노산, 카페시타빈, 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 산; (c) 친화성 리간드, 이때 상기 친화성 리간드는 기질, 억제제, 자극제, 신경전달물질, 방사성동위원소, 또는 이들의 임의의 조합임; (d) 방사성 표지 "P" 및 "S", 형광 염료, 전자 밀도 시약(electron dense reagent), 효소, 비오틴, 스트렙타비딘, 디곡신, 합텐, 면역원성 단백질, 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자, 또는 이들의 임의의 조합; (e) 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제 및 항기생충제, 또는 이들의 임의의 조합; (f) 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 또는 토레미펜; (g) 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑세메스탄, 레트로졸 또는 아스트라졸; (h) 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프로렐린, 고세렐린 또는 트록사시타빈; (i) 아로마타아제 억제제; (j) 단백질 키나아제 억제제; (k) 지질 키나아제 억제제; (l) 안티센스 올리고뉴클레오티드; (m) 리보자임; (n) 백신; (o) 항혈관신생제. 일부 구현예에서, 상기 독소는 바람직하게는 아우리스타틴이고, 보다 바람직하게는 모노메틸아우리스타틴 F(MMAF)이다.
일부 구현예에서, 상기 항체-약물 접합체 중 어느 하나에서, 상기 링커는 말레이미도카프로일(mc) 또는 이의 유사체로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 항체-약물 접합체 중 어느 하나에서, 상기 항체-약물 접합체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30과 같이 1 내지 30 범위에 있는 평균 약물 항체 비율(DAR), 및 5-6의 평균 약물 항체 비율(DAR)과 같이 상기 값들 중 어느 2개 값들 사이의 평균 약물 항체 비율(DAR)을 갖는다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 항체-약물 접합체들 중 어느 하나를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 링커를 약물에 연결하는 단계, 링커-약물 모이어티를 항체에 결합시키는 단계, 및 항체-약물 접합체를 정제하는 단계를 포함한다.
항체-약물 접합체를 제조하는 다른 방법은 다양한 간행물에 설명되어 있다. 예를 들어, 접합 반응을 위해 사슬간 이황화 결합을 환원시켜 활성화된 시스테인 설프히드릴을 통해 항체를 화학적으로 변형시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 항체-약물 접합체에서, 세포독성 약물은 MC-MMAF(말레이미도카프로일 모노메틸아우리스타틴 F)이며, 이는 항체-약물 접합체를 얻기 위해 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체의 시스테인의 S 원자에 연결된다. 바람직하게는, 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체는 TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀)의 작용 하에 환원되어 시스테인의 S 원자를 노출시킨 다음, 약물 링커 MC-MMAF를 S 원자에 연결하여 결합을 구현하고, 상기 생성물은 illustra NAP-10 컬럼(GE Healthcare)에 의해 정제된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체, 또는 상기 언급된 항체-약물 접합체들 중 어느 하나, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 하기 제품들 중 어느 하나를 제조하는데 있어서 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체, 또는 상기 언급된 항체-약물 접합체들 중 어느 하나의 용도를 제공한다:
(1) 인간 여포 자극 호르몬 수용체 발현을 검출하기 위한 제품; 및
(2) 암을 검출, 스크리닝, 예방 및/또는 치료하기 위한 제품.
일부 구현예에서, 상기 용도에서 상기 암은 전립선암, 유방암, 결장암, 췌장암, 방광암, 신장암, 폐암, 간암, 위암, 고환암 또는 난소암이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체, 또는 상기 언급된 항체-약물 접합체들 중 어느 하나를 포함하는 키트를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 세포를 상기 언급된 항체-약물 접합체들 중 어느 하나와 접촉시키는 것을 포함하는, 암 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 암 세포는 전립선암 세포, 유방암 세포, 결장암 세포, 췌장암 세포, 방광암 세포, 신장암 세포, 폐암 세포, 간암 세포, 위암 세포, 고환암 세포 또는 난소암 세포이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 치료적 유효량의 상기 언급된 항체-약물 접합체들 중 어느 하나를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 방법에서 상기 암은 전립선암, 유방암, 결장암, 췌장암, 방광암, 신장암, 폐암, 간암, 위암, 고환암 또는 난소암이다.
일부 구현예에서, 상기 방법들 중 어느 하나의 방법은 또한 추가 치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 적합한 치료제는 기존 약물 및/또는 암과 같은 특정 용도를 위한 외과적 치료를 포함한다. 예를 들어, 항체-약물 접합체는 하나 이상의 다른 화학요법제 또는 항종양제와 함께 사용된다. 대안적으로, 다른 치료제는 방사선요법이다.
일부 구현예에서, 상기 치료제는 세포독성제이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 암을 앓는 것으로 의심되는 대상체를 진단하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 검출가능한 표지와 연결된 상기 언급된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나 또는 상기 언급된 변이체를 상기 대상체에게 투여하는 단계, 및 상기 대상체에서 표지된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 변이체의 분포를 검출하는 단계를 포함한다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 변이체, 또는 항체-약물 접합체가 다양한 용도를 갖는다는 것을 당업자는 이해해야 하며, 예를 들어, 본 발명의 항체-약물 접합체는 치료제로 사용될 수 있고, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 변이체는 진단 키트의 시약 또는 진단 도구로 사용될 수 있다.
본 발명에 의해 제공되는 항-FSHR 항체인 CAN001은 FSHR에 특이적으로 결합할 수 있으며, 항-FSHR 항체를 기반으로 얻어진 CAN001 항체-약물 접합체인 CAN001-MC-MMAF는 명백히 암 세포를 사멸시킬 수 있다. 본 발명에 의해 제공되는 항-FSHR 항체 및 이의 항체-약물 접합체는 암을 검출, 스크리닝, 및 치료하는 데 광범위한 응용 전망을 갖는다.
도 1은 pMSGβ3_FSHR의 플라스미드 맵을 보여준다.
도 2는 FHSR-발현 세포를 특이적으로 염색하지만 GFP-발현 세포는 염색하지 않는 CAN001 항체를 함유하는 상청액을 보여준다.
도 3은 최상의 CAN001 상청액에 대한 스크리닝 결과를 보여준다.
도 4는 CAN001을 사용한 인간 태반의 IHC 염색 결과를 보여준다.
도 5는 CAN001을 사용한 난소암 조직 및 인접 조직의 IHC 염색 결과를 보여준다.
도 6은 CAN001-MC-MMAF의 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 결과를 보여준다.
도 7은 CAN001-MC-MMAF의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 결과를 보여준다.
이하, 본 발명을 특정한 구체적인 구현예를 참고하여 설명하며, 당업자는 명세서에 개시된 내용으로부터 본 발명의 이점 및 효과를 용이하게 이해할 수 있을 것이다. 본 발명은 또한 다른 상이한 특정 구현예에 의해 구현되거나 적용될 수 있으며, 본 명세서의 다양한 세부사항은 또한 상이한 관점 및 응용에 기초하여 본 발명의 사상을 벗어나지 않는 범위에서 수정되거나 변경될 수 있다. 본 발명의 보호 범위는 다음의 구체적인 구현예에 제한되지 않음을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 구현예에서 사용된 용어는 본 발명의 보호 범위를 한정하기 위한 것이 아니라 특정한 구체적인 구현예를 설명하기 위해 사용된 것으로 이해되어야 한다.
예시에서 수치 범위가 제공되는 경우, 본 발명에서 달리 명시되지 않는 한, 각 수치 범위의 2개의 끝점에 있는 그리고 2개의 끝점 사이에 있는 임의의 수치 값이 선택될 수 있음을 이해해야 한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 발명에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예시에 사용된 특정 방법, 장치 및 재료에 더하여, 당업자에 의한 종래 기술의 숙달 및 본 발명의 기록에 따라, 본 발명의 예시에 기재된 방법, 장치 및 재료와 유사하거나 동등한 종래 기술의 임의의 방법, 장치 및 재료도 본 발명을 실현하는 데 사용될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본 발명에 개시된 실험 방법, 검출 방법, 및 제조 방법은 모두 분자 생물학, 생화학, 염색질 구조 및 분석, 분석 화학, 세포 배양, 재조합 DNA 기술 및 관련 분야의 통상적인 기술을 채택한다. 이러한 기술은 기존 문헌에 잘 설명되어 있으며, 구체적으로는 문헌[참조: Sambrook, et al. MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 and Third edition, 2001; Ausubel, et al., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley&Sons, New York, 1987 및 정기적 업데이트: the series METHODS IN ENZYMOLOGY, Academic Press, San Diego; Wolffe, CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego, 1998; METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 304, Chromatin (P. M. Wassarman and A. P. Wolffe, eds.), Academic Press, San Diego, 1999; 및 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 119, Chromatin Protocols (P. B. Becker, ed.), Humana Press, Totowa, 1999, 등]을 참고할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 면역글로불린(Ig) 분자 및 면역글로불린 분자의 면역적격 부분, 즉 항원에 대한 특이적 결합(및 항원과의 면역반응)을 갖는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 의미한다. "특이적 결합" 또는 "면역반응" 또는 "표적화"는 항체가 표적 항원의 하나 이상의 항원 결정인자와 반응하고 다른 폴리펩티드와 반응하지 않거나 매우 낮은 친화도(Kd > 10-6 g/ml)로 다른 폴리펩티드에 결합하는 것을 의미한다. 상기 항체는 단클론 항체, 키메라 항체, dAb(도메인 항체), 단일 사슬 항체, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편, 및 Fv 및 Fab 발현 라이브러리를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
기본적인 항체 구조 단위는 사량체를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각 사량체(또는 "완전한 항체")는 두 쌍의 동일한 폴리펩티드 사슬로 구성되며, 각 쌍은 "경쇄"와 "중쇄"를 포함한다. 각 사슬의 아미노 말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산으로 구성된 가변 영역을 포함한다. 각 사슬의 카복실 말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 한정한다. 일반적으로 인체에서 얻은 항체 분자는 IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD의 임의의 클래스를 포함하는데, 상기 클래스는 분자 내 중쇄의 특성으로 인해 서로 상이하다. 이러한 클래스에는 IgG1, IgG2 등과 같은 서브클래스도 있다. 또한, 경쇄는 인체 내에서 κ 사슬 또는 λ 사슬일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단클론 항체"(mAb)는 고유한 경쇄 유전자 생성물 및 고유한 중쇄 유전자 생성물로 이루어진 항체 분자의 단 하나의 분자 부류를 함유하는 항체 분자 그룹을 의미한다. 구체적으로, 단클론 항체의 상보성 결정 영역(CDR)은 모집단의 모든 분자에서 동일하다. mAb는 항원의 특정 에피토프와 반응할 수 있는 항원 결합 부위를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "특이적 결합"은 면역글로불린 분자와 면역글로불린이 특이적인 항원 사이에 발생하는 일종의 비공유적 상호작용을 의미한다. 면역학적 결합 상호작용의 강도 또는 친화도는 상호작용의 해리 상수(Kd)로 표현될 수 있으며, 여기서 더 작은 Kd는 더 큰 친화도를 나타낸다. 선택된 폴리펩티드의 면역결합 특성은 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 정량화될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 항체의 HC 및 LC 폴리펩티드의 가변 영역에서 발견되는 불연속 항원 결합 부위를 의미하는 것으로 의도된다. 이러한 특이적 영역들은 문헌[참조: Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93(1971); Kabat, et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616(1977); Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242(1991); Chothia, et al., J. Mol. Biol. 196:901-917(1987); MacCallum, et al., J. Mol. Biol., 262:732-745(1996); 및 North, et al., J. Mol. Biol., 406, 228-256(2011)]을 포함하는 다른 문헌들에 설명되어 있으며, 여기서 정의는 영역들이 서로 비교될 때 아미노산 잔기들의 중복 또는 하위 그룹을 포함한다.
CDR은 프레임 영역("FR")이라고 하는 보다 보존적인 영역에 산재해 있다. 각 LCVR 또는 HCVR은 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성되며, 아미노 말단에서 카복실 말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4의 순서로 배열된다. 경쇄의 3개의 CDR을 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"이라고 하고, 중쇄의 3개의 CDR을 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"이라고 한다. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하는 대부분의 잔기를 포함한다. 본 발명의 LCVR 및 HCVR 영역에서 CDR의 아미노산 잔기의 넘버링(numbering) 및 포지셔닝(positioning)은 Kabat 넘버링 체계에 따라 정의된다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경에 존재하는 구성요소로부터 단리 및/또는 회수된 항체이다. 이의 자연 환경에 존재하는 오염 요소는 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질로, 효소, 호르몬 및 기타 단백질 또는 비단백질 용질을 포함할 수 있다. 일부 용액에서, 항체는 다음과 같은 정도로 정제된다: (1) 항체는 로리(Lowry) 방법에 의해 결정된 바와 같이 95중량% 초과, 예를 들어 99중량% 초과임; (2) N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기는 스피닝 컵 시퀀서(spinning cup sequencer)에 의해 얻어질 수 있음; 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE를 통한 쿠마시 블루 또는 은 염색법에 의해 균질성이 검출됨. 단리된 항체는 재조합 세포 내 제자리(in-situ) 항체를 포함한다. 일반적으로, 단리된 항체는 적어도 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. 일부 구현예에서, 단리된 항체의 순도는 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 99%, 또는 이들 값들 중 어느 2개 사이의 범위(상한 및 하한 포함) 또는 상기 범위 내 모든 값이다.
용어 "서열 동일성"은 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 아미노산 서열이 비교 창(window of comparison)에 걸쳐 동일함(즉, 뉴클레오타이드별 또는 잔기별 기준으로)을 의미한다. "서열 동일성의 백분율"이라는 용어는 비교 창에 걸쳐 두 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교하고, 두 서열 모두에서 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G 또는 U) 또는 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 수를 결정하여 일치하는 위치 수를 산출하고, 일치하는 위치 수를 비교 창(즉, 창 크기)의 총 위치 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산된다.
항체 또는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열의 경미한 변화는, 아미노산 서열의 동일성이 적어도 75%, 예를 들어 적어도 80%, 90%, 95% 및 99% 유지된다면 모두 본 개시내용에 포함된다. 일부 구현예에서, 상기 변화는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 아미노산 치환은 측쇄가 관련되어 있는 아미노산 계열에서의 치환이다. 유전자 암호화된 아미노산은 대략 다음 범주로 나뉜다: (1) 산성 아미노산: 아스파르테이트 및 글루타메이트; (2) 염기성 아미노산: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; (3) 비극성 아미노산: 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌 및 트립토판; 및 (4) 하전되지 않은 극성 아미노산: 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌 및 티로신. 다른 계열의 아미노산은 (i) 지방족-하이드록실 계열의 세린 및 트레오닌; (ii) 아미드 함유 계열의 아스파라긴 및 글루타민; (iii) 지방족 계열의 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 및 (iv) 방향족 계열의 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신. 일부 구현예에서, 보존적 아미노산 치환기는 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루탐산-아스파르트산 및 아스파라긴-글루타민이다. 예를 들어, 류신이 이소류신 또는 발린 단독으로 치환된 경우, 아스파르테이트가 글루타메이트로 치환된 경우, 트레오닌이 세린으로 치환된 경우, 또는 하나의 아미노산이 구조적으로 관련된 아미노산으로 유사하게 치환된 경우, 얻어진 분자의 결합 또는 특성은 특히 치환이 결합 부위의 아미노산을 포함하지 않는 경우 크게 영향을 받지 않을 것이라고 합리적으로 예측할 수 있다. 아미노산의 변화가 기능성 펩티드를 생성하는지 여부는 폴리펩티드 유도체의 비활성(specific activity)을 측정함으로써 용이하게 결정될 수 있다. 상기 결정은 본원에 자세히 설명되어 있다. 항체 또는 면역글로불린 분자의 단편 또는 유사체는 당업자에 의해 용이하게 제조될 수 있다.
"약제학적으로 허용되는"이라는 용어는 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 과도한 부작용(예를 들어, 독성, 자극 및 알레르기 반응) 없이 인간 및/또는 동물에게 적용하기에 적합한 성분을 의미한다.
용어 "담체"는 치료를 위해 활성 성분과 함께 사용되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체를 의미한다. 이러한 약물 담체는 석유, 동물 및 식물로부터의 오일, 또는 땅콩 오일, 대두유, 미네랄 오일 및 참기름과 같은 합성 원료로부터의 오일을 포함하는 물 및 오일과 같은 멸균 액체일 수 있다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물이 정맥내로 투여되는 경우, 담체는 물일 수 있다. 식염수, 포도당 수용액 및 글리세롤 수용액도 액체 담체, 특히 주사액으로 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 담체의 예는 문헌[참조: E. W. mArtin, et al. Remington's Pharmaceutical Sciences]에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다. 이러한 조성물은 환자에게 적합한 투여 형태를 제공하기 위해 적합한 담체와 함께 임상적으로 유효한 용량의 항체 또는 항체 단편을 포함할 것이다. 상기 제제는 투여 방식에 적합해야 한다. 상기 제제는 앰플 병, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 다회 용량 바이알에 패키징될 수 있다.
"유전자"라는 용어는 기능성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드에 대한 코딩 단위를 지칭하기 위해 사용된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 이러한 기능적 용어는 게놈 서열, cDNA 서열, 또는 이들의 단편 또는 조합, 및 인위적으로 변경되었을 수 있는 유전자 산물을 포함하는 유전자 산물을 포함한다. 정제된 유전자, 핵산, 단백질 및 유사체는 일반적으로 이들과 회합되어 있는 적어도 하나의 오염 핵산 또는 단백질로부터 인식되고 단리된 식별된 개체이다.
본원에서 사용되는 용어 "서열"은 변형된 핵산 또는 아미노산 서열과 같이 천연이든 인공이든 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열을 지칭하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 아미노산의 치환은 다음과 같은 효과를 갖는다: (1) 단백질 분해에 대한 민감도 감소, (2) 산화에 대한 민감도 감소, (3) 단백질 복합체 형성을 위한 결합 친화도 변화, (4) 결합 친화도 변경, 및 (5) 이러한 유사체의 다른 물리화학적 또는 기능적 특성이 부여되거나 개선됨. 상기 유사체는 천연 펩티드 서열과 상이한 서열을 갖는 다양한 돌연변이 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환(바람직하게는 보존적 아미노산 치환)은 천연 서열에서(바람직하게는 분자간 접촉을 형성하는 구조적 도메인 너머의 폴리펩티드 부분에서) 수행될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 모 서열의 구조적 특성을 크게 변화시키지 않아야 한다(예를 들어, 치환된 아미노산은 모 서열의 나선형 구조 또는 모 서열을 특징짓는 다른 유형의 2차 구조를 파괴하는 경향이 없어야 함). 인위적으로 식별된 폴리펩티드의 2차 구조 및 3차 구조의 예는 문헌[참조: Proteins, Structures and Molecular Principles (edited by Creighton, W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (edited by C.Branden and J.Tooze, Garland Publishing, New York, N.Y.(1991)); 및 Thornton, et al., Nature 354:105 (1991)]에 설명되어 있다.
항체는 주로 면역혈청에서 IgG 분획을 제공하는 단백질 A 또는 단백질 G를 이용한 친화성 크로마토그래피와 같은 잘 알려진 기술에 의해 정제될 수 있다. 또한, 면역글로불린에 의해 표적화되는 특정 항원 또는 이의 에피토프를 컬럼에 고정화하여 면역친화성 크로마토그래피를 통해 면역특이적 항체를 정제할 수 있다. 면역글로불린의 정제는 D. Wilkinson의 문헌을 참고할 수 있다. (The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia Pa., Vol. 14, No. 8 (April 17, 2000), Pages 25-28).
본원에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 약물 투여에 적합한 임의의 및 모든 용매, 안정화제, 완충액, 분산 매질, 코팅제, 정균제, 등장화제, 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 담체는 Remington's Pharmaceutical Sciences 최신판에 설명되어 있다. 이러한 담체 또는 희석제는 선택적으로 물, 염수, 링거 용액, 글루코스 용액 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
"투여" 및 "치료"는, 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와 관련하여 언급되는 경우, 외인성 약물, 치료제, 진단제 또는 조성물을 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체와 접촉시키는 것을 의미한다. "투여" 및 "치료"는, 예를 들어, 치료 방법, 약동학적 방법, 진단 방법, 연구 방법 및 실험 방법을 지칭할 수 있다. 세포 처리는 시약을 세포와 접촉시키는 것 및 시약을 유체와 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 유체는 세포와 접촉된다. "투여" 및 "치료"는 또한 예를 들어, 시약, 진단제, 결합 조성물 또는 다른 세포에 의한 세포의 시험관내 및 생체외 치료를 의미한다.
본원에서 사용되는 "억제" 또는 "치료"는 질병과 관련된 증상의 발달을 지연시키는 것 및/또는 질병이 발달시키거나 발달시킬 것으로 예상되는 이들 증상의 중증도를 감소시키는 것을 포함한다. 상기 용어는 기존 증상의 완화, 다른 증상의 예방, 및 이들 증상의 잠재적인 원인의 완화 또는 예방을 추가로 포함한다. 따라서 상기 용어는 인간과 같은 질병을 앓고 있는 척추동물 대상체에게 유익한 결과를 가져왔음을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 항체-약물 접합체를 단독으로 또는 다른 치료제와 함께 세포, 조직 또는 대상체에게 투여하는 경우 치료하고자 하는 질병 또는 상태를 효과적으로 예방하거나 완화시킬 수 있는 양을 의미한다. 치료적 유효량은 또한 증상 완화를 실현하기에 충분한 항체-약물 접합체의 양을 의미하고, 증상 완화는 예를 들어, 관련된 의학적 상태의 치료, 완치, 예방 또는 완화, 또는 치료율, 완치율, 예방율 또는 증상의 완화율의 향상을 의미한다. 특정 대상체에 대한 유효량은 치료하고자 하는 질병, 환자의 전반적인 건강 상태, 투여 경로 및 용량, 및 부작용의 중증도와 같은 많은 요인에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 최대 용량 또는 상당한 부작용이나 독성 효과를 피할 수 있는 투여 요법일 수 있다. 활성 성분이 개인에게 단독으로 투여되는 경우, 치료적 유효량은 해당 성분 단독의 양을 의미한다. 배합물을 투여하는 경우, 치료적 유효량은 활성 성분이 함께 투여되는지, 연속적으로 투여되는지 또는 동시에 투여되는지에 관계없이 치료 효과를 나타내는 활성 성분의 배합 용량을 의미한다. 치료적 유효량은 일반적으로 증상을 적어도 10%, 일반적으로 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 보다 바람직하게는 적어도 40%, 가장 바람직하게는 적어도 50% 완화시킬 것이다.
단클론 항체
FSHR에 대한 단클론 항체는 당업계의 지식 및 기술에 따라 제조될 수 있다.
단클론 항체의 DNA 서열(예를 들어, 경쇄 DNA 서열 및 중쇄 DNA 서열)은 통상적인 방법에 의해 용이하게 합성될 수 있으며, 상기 DNA 서열은 발현 벡터(예를 들어, 제작된 경쇄 발현 벡터 및 중쇄 발현 벡터)에 배치될 수 있고, 이후 이들 벡터는 재조합 숙주 세포에서 단클론 항체를 합성하기 위해 숙주 세포(예를 들어, HEK293T 세포, CHO 세포, NS0 세포 또는 다른 면역글로불린을 생성하지 않는 골수종 세포)로 형질감염된다. 항체의 재조합 제제는 하기에 더 상세히 설명될 것이다.
항체-약물 접합체
FSHR의 단클론 항체는 일반적으로 항체의 시스테인의 S 원자에 연결되는 약물 링커(예를 들어 MC-MMAF)와 결합될 수 있다.
본 발명의 항체 및 항체-약물 접합체의 치료적 용도
FSHR에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 항체-약물 접합체는 FSHR을 발현하는 세포 및 조직을 특이적으로 인식하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 또한 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 치료적 유효량의 본 발명의 항체-약물 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질병은 암이다.
암
본 발명의 항체-약물 접합체는 암 치료(즉, 종양 세포의 성장 또는 생존 억제)에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체-약물 접합체에 의해 성장이 억제되는 암은 통상적으로 전립선암, 유방암, 결장암, 췌장암, 방광암, 신장암, 폐암, 간암, 위암, 고환암 및 난소암을 포함한다.
본 발명의 항체 및 항체-약물 접합체의 비치료적 용도
본 발명의 항체 및 항체-약물 접합체는 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 FSHR의 발현을 검출하는 것과 같은 진단에 사용될 수 있다. 진단용으로 항체는 일반적으로 검출가능한 부분으로 (직접 또는 간접적으로) 표지된다. 일반적으로 비오틴, 형광 염료, 방사성 뉴클레오티드, 효소, 요오드 및 생합성 표지와 같은 범주로 분류되는 수많은 표지를 사용할 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 생체내 진단을 위해 사용될 수 있다. 항체는 일반적으로 방사성핵종(예를 들어, 111In, 99Tc, 4C, 125I, 3H, 32P, 35S 또는 18F)으로 표지되어 면역섬광조영술(immunoscintigraphy) 또는 양전자 이미징에 의해 항원, 또는 항체를 발현하는 세포의 위치를 찾을 수 있다.
약제학적 조성물
본 발명은 또한 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 유효량의 항체-약물 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다.
일부 구현예에서, "약제학적으로 허용되는 담체"라는 용어는 정부 규제 기관의 승인을 받았거나 기타 인정된 약전에 등재된 동물(특히 인간)에 사용되는 물질을 의미한다. 또한, "약제학적으로 허용되는 담체"는 일반적으로 임의의 유형의 무독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질 또는 제제 보조제일 수 있다.
실시예 1: 마우스 항-인간 FSHR 단클론 항체 CAN001
1. 항-인간 FSHR 단클론 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 코돈-최적화된 DNA 단편(각각 서열번호: 1 및 서열번호: 2에 나타냄)을 Genescript로 합성하였고, 합성된 DNA 단편의 뉴클레오티드 서열을 서열 검증하였다.
서열번호: 1: 경쇄 DNA 서열
ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCTCGGCCCCAGATAGTACTTACGCAATCACCCGTCATAATGAGCGCATCCCCTGGTGAAAAGGTTACTCTGACATGCTCTGCGTCTTCCAGCGTGAGTAGTTCTTATCTCTATTGGTATCAGCAAAAACCCGGATCTTCTAGTAAATTGTGGATATATTCTACGTCTAATCTTGCGTCAGGAGTGCCTGCTCGGTTTTCTGGGTCCGGGTCCGGGACCAGCTATAGTTTGACTATAAGTAGTATGGAGGCGGAGGACGCAGCTAGCTACTTTTGCCATCAATGGAGCTCCTATCCTCCTACCTTTGGGGGCGGAACCAAATTGGAAATCAAAAGAGCCGACGCGGCACCCACTGTATCTATCTTCCCACCCTCATCAGAACAGCTCACTTCAGGCGGCGCCAGTGTGGTGTGTTTCCTCAACAACTTCTATCCTAAAGACATAAATGTAAAATGGAAAATAGACGGTAGCGAGCGGCAAAACGGGGTGCTGAACTCATGGACGGACCAAGATTCCAAGGATTCTACCTATTCAATGAGTTCTACATTGACACTTACGAAAGACGAATACGAGCGCCACAATTCCTATACGTGCGAAGCAACGCACAAAACCTCCACTTCCCCGATTGTGAAGTCCTTCAATAGGAATGAATGTTGATAA
경쇄 가변 영역의 DNA 서열은 서열번호: 1의 64-405번 위치에 나타나 있고, 경쇄 CDR1의 DNA 서열은 130-168번 위치에 나타나 있으며, 경쇄 CDR2의 DNA 서열은 214-234번 위치에 나타나 있고, 경쇄 CDR3의 DNA 서열은 331-357번 위치에 나타나 있다.
서열번호: 2: 중쇄 DNA 서열
ATGGAGTTTGGGCTCAGTTGGGTCTTTCTCGTGGCACTGTTTCGCGGGGTACAGTGCGCTAGCCAAGTACAACTGCAACAACCAGGCGCGGAGCTCGTTAAACCGGGGGCGAGCGTCAACCTTAGCTGCAAAGCCTCCGGTTATACCTTTACAAGTTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGCGACCAGGGCAAGGACGCGAATGGATCGGGGAAATAAATCCAAGGAACGGCAGAACGAATTACAACGAGAAGTTCAAATCCAAGGCGACGTTGACGGTGGACAAATCCTCTTCAACTGCTTATATGCAGCTCAGTTCTCTGACAAGCGAGGATAGTGCCGTGTACTGTTGCGCCAGGTTGTCTGTGGGGTTCGCCTACTGGGGGCAGGGCACGCTCGTTACAGTCTCTGCGGCCAAGACGACTGCGCCTTCAGTATATCCACTGGCTCCGGTGTGCGGAGATACGACAGGTAGTTCTGTAACTTTGGGATGCCTCGTTAAGGGTTATTTCCCGGAGCCGGTCACCTTGACGTGGAACTCCGGATCACTCTCCTCAGGGGTACATACATTTCCAGCGGTTTTGCAGAGCGACCTCTACACACTCAGTAGCAGTGTAACCGTTACCTCATCCACATGGCCTAGCCAGAGTATCACGTGCAATGTTGCACACCCGGCAAGTTCTACCAAGGTGGACAAAAAAcTCGAGCCTAGAGGACCGACGATAAAGCCCTGTCCGCCTTGCAAATGTCCGGCACCTAACGCTGCTGGTGGCCCCTCTGTTTTTATATTTCCGCCAAAAATTAAGGACGTCCTCATGATCAGTCTGAGCCCTATAGTCACGTGTGTGGTGGTAGATGTCTCTGAAGACGATCCCGACGTACAGATTTCATGGTTCGTGAACAATGTGGAGGTTCACACAGCCCAAACACAGACACACCGCGAAGATTACAATAGTACACTGCGGGTAGTCTCTGCCCTCCCAATACAACACCAGGACTGGATGAGCGGGAAAGAGTTCAAGTGCAAAGTCAATAACAAAGACCTGGGAGCGCCGATAGAAAGAACTATAAGTAAACCAAAGGGGAGCGTAAGAGCGCCCCAAGTGTATGTCCTCCCTCCTCCCGAAGAGGAAATGACCAAGAAACAAGTTACTCTCACATGCATGGTAACCGATTTCATGCCTGAAGACATATACGTAGAGTGGACCAACAACGGGAAGACAGAATTGAACTACAAGAATACAGAGCCCGTTCTCGATTCTGATGGCTCCTACTTTATGTATAGCAAACTCCGGGTGGAAAAAAAGAATTGGGTCGAAAGAAACAGTTATTCATGTTCTGTTGTTCACGAGGGTTTGCATAACCATCATACGACGAAATCTTTTTCCAGAACCCCAGGAAAATGA
중쇄 가변 영역의 DNA 서열은 서열번호: 2의 64-441번 위치에 나타나 있고, 중쇄 CDR1의 DNA 서열은 154-168번 위치에 나타나 있으며, 중쇄 CDR2의 DNA 서열은 211-261번 위치에 나타나 있고, 중쇄 CDR3의 DNA 서열은 358-378번 위치에 나타나 있다.
2. 경쇄의 DNA 서열을 In-Fusion 클로닝 방법에 의해 Hind III 부위와 EcoR I 부위 사이의 pcDNA3.1(Thermo Fisher)에 클로닝하여 경쇄 발현 벡터 pcDNA3.1_CAN001 LC를 생성하였다.
3. 중쇄의 DNA 서열을 In-Fusion 클로닝 방법에 의해 Hind III 부위와 EcoR I 부위 사이의 pcDNA3.1에 클로닝하여 중쇄 발현 벡터 pcDNA3.1_CAN001 HC를 생성하였다.
서열번호: 3: 경쇄 아미노산 서열
MALPVTALLLPLALLLHAARPQIVLTQSPVIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSSKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
Kabat 넘버링 시스템에 기초하여, 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호: 3의 22-135번 위치(서열번호: 5)에 나타나 있고, 경쇄 CDR1의 아미노산 서열은 44-56번 위치(CSASSSVSSSYLY(서열번호: 6))에 나타나 있으며, 경쇄 CDR2의 아미노산 서열은 72-78번 위치(STSNLAS(서열번호: 7))에 나타나 있고, 경쇄 CDR3의 아미노산 서열은 111-119번 위치(HQWSSYPPT(서열번호: 8))에 나타나 있다.
서열번호: 4: 중쇄 아미노산 서열
MEFGLSWVFLVALFRGVQCASQVQLQQPGAELVKPGASVNLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGREWIGEINPRNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYCCARLSVGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKLEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
Kabat 넘버링 시스템에 기초하여, 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호: 4의 22-147번 위치(서열번호: 9)에 나타나 있고, 중쇄 CDR1의 아미노산 서열은 52-56번 위치(SYWMH(서열번호: 10))에 나타나 있으며, 중쇄 CDR2의 아미노산 서열은 71-87번 위치(EINPRNGRTNYNEKFKS(서열번호: 11))에 나타나 있고, 중쇄 CDR3의 아미노산 서열은 120-126번 위치(LSVGFAY(서열번호: 12))에 나타나 있다.
실시예 2: 인간 FSHR 유전자 클로닝 및 발현 벡터 제작
OVCAR3 세포주(ATCC, Cat. No. htb-161)로부터 단리된 RNA를 cDNA로 역전사하고, cDNA를 주형으로 하고, FSHR-F와 FSHR-R을 프라이머로 하는 PCR에 의해 FSHR 유전자를 포함하는 단편을 얻었다.
FSHR-F: 5'-gtttCCACAACCatggccctgctcctgg-3' (서열번호: 13); 및
FSHR-R: 5'-ggttgattaactcgagttagttttgggctaaatgacttagagggacaag-3' (서열번호: 14).
FSHR 유전자를 포함하는 단편을 클로닝 벡터 pJET2.1(Thermo Fisher, Cat. No. SO501)에 클로닝하여 pJET2.1-FSHR 플라스미드를 생성했다. 시퀀싱 검증 후, 삽입된 단편을 Nco I 부위와 Xho I 부위 사이의 pMSGβ3에 서브클로닝하여 pMSGβ3_FSHR 플라스미드를 생성했다. pMSGβ3_FSHR 플라스미드의 맵은 도 1에 도시되어 있다.
실시예 3: HEK293T 세포에서 CAN001 항체 생산
CAN001 항체를 제조하기 위해, HEK293T 세포를 무혈청 배지에서 배양하고, 각각 CAN001의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 플라스미드 벡터 pcDNA3.1_CAN001 HC 및 pcDNA3.1_CAN001 LC(질량비=1:2)와 25kD 선형 PEI 폴리머(polyscience)로 벡터 대 폴리머의 질량비 1:3에 따라 동시 형질감염시켰다. HEK293T 세포를 형질감염 후 72시간 동안 배양하고, CAN001 항체를 함유하는 배양 상청액을 수집하였다.
실시예 4: CAN001 항체의 유세포 분석
HEK293T 세포를 pMSGβ3_FSHR 플라스미드로 형질감염시켜 FSHR을 발현하는 HEK293T 세포를 실험군으로 얻었다. HEK293T 세포를 pmaxGFP(Lonza)로 형질감염시켜 GFP 단백질을 발현하는 HEK293T 세포를 음성 대조군으로 얻었다. 실시예 3에서 얻은 CAN001 항체가 포함된 상청액과 함께 인큐베이션한 후, 실험군과 음성 대조군의 세포를 CAN001 항체로 염색한 다음, 상기 세포를 세척하고, APC가 결합된 염소 항-마우스 IgG 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 유세포 분석은 BD calibur로 수행되었고, Cellquest 소프트웨어로 분석했다. 그 결과를 도 2에 나타내었고, 결과는 CAN001 항체를 함유하는 상청액이 FHSR 발현 세포를 특이적으로 염색하지만 GFP-발현 세포는 염색하지 않았음을 보여준다.
최상의 CAN001 상청액을 추가로 스크리닝하기 위해, HEK293T 세포를 비율이 서로 다른 플라스미드 pcDNA3.1_CAN001 HC 및 pcDNA3.1_CAN001 LC의 혼합물(도 3의 왼쪽에서 오른쪽으로 pcDNA3.1_CAN001 HC 대 pcDNA3.1_CAN001 LC의 질량비는 각각 1:2, 1:1 및 1:3이었음)과 25 kD 선형 PEI 폴리머로 벡터 대 폴리머의 질량비 1:3에 따라 동시 형질감염시켰다. 형질감염 72시간 후, 상청액을 수집하여 FSHR을 발현하는 HEK293T 세포를 염색하는 데 사용하였고, GFP 단백질을 발현하는 HEK293T 세포를 음성 대조군으로 사용하였다. 상기 단계들은 위에서 설명한 대로 수행되었다. 유세포 분석 결과를 도 3에 나타내었다. 그 결과는 pcDNA3.1_CAN001 HC 대 pcDNA3.1_CAN001 LC의 질량비가 1:2일 때, HEK293T 세포의 양성 염색률이 가장 높은 반면(38.3%), pcDNA3.1_CAN001 HC 대 pcDNA3.1_CAN001 LC의 질량비가 1:1 및 1:3일 때, HEK293T 세포의 양성 염색률은 각각 30.02% 및 34.75%였음을 보여준다. pcDNA3.1_CAN001 HC 대 pcDNA3.1_CAN001 LC의 질량비를 1:2로 선택하여 CAN001 항체를 함유하는 상청액을 제조하였다.
실시예 5: CAN001 항체를 사용한 인간 태반 및 종양 조직의 IHC 염색
실험 시약:
PBS 완충액(pH 7.4): 1,000 ml 증류수, 8.0g NaCl, 0.2 g KCl, 1.149 g Na2HPO4, 및 0.2 g NaH2PO4.
0.01M 시트르산 완충액(pH 6.0):
용액 A: 29.41 g 시트르산삼나트륨-2H2O + 1,000 ml 증류수
용액 B: 21 g 시트르산 + 1,000 ml 증류수
항원 복구 작업 용액(antigen retrieval working solution)의 준비: 82 ml 용액 A + 18 ml 용액 B + 900 ml 증류수
헤마톡실린 염색 용액(빛을 피하여 보관하였고, 빛에 의해 산화될 수 있음): 비율은 헤마톡실린 키트(FUZHOU　MAIXIN　BIOTECH, LTD., Cat. No. CTS1097)의 지침을 따랐고, 비율은 또한 최상의 염색을 달성하기 위해 사전 실험에서 얻은 테스트 결과에 따라 조정될 수 있었다. 상기 비율은 일반적으로 다음과 같다: 1 ml 헤마톡실린 스톡 용액 + 4 ml 증류수.
용액 A(2차 항체 작업 용액): HRP 표지된 폴리머(항마우스, 항토끼); 용액 B: DAB 희석 완충액; 및 용액 C: DAB 스톡 용액을 포함하는, GeneTech (Shanghai) Company Limited(Cat. No. GK500705)에서 구입한 Gtvision III 항마우스/항토끼 범용 면역조직화학적 검출 키트. DAB 발색 용액의 제조: 1 ml 용액 B + 20 μl 용액 C. 발색 결과: 갈색. 이 키트에는 아비딘과 스트렙타비딘이 포함되어 있지 않으며, 내인성 비오틴에 의해 방해받지 않았다.
실험 절차:
1) 탈랍 및 수화
인간 태반 또는 난소암 조직의 파라핀 포매 슬라이드를 70℃ 인큐베이터에서 약 40분 동안 베이킹하였다. 이어서, 상기 슬라이드를 자일렌에 15분 동안 담근 다음, 무수 에탄올, 95% 에탄올 및 75% 에탄올에 각각 5분 동안 담가 구배 수화시켰다.
2) 내인성 퍼옥시다아제 제거
상기 슬라이드를 3% 과산화수소에 약 15분 동안 담가 조직 내 내인성 카탈라아제를 제거한 후 PBS 완충액으로 5분씩 3회 세척하였다.
3) 항원 복구
항원 복구 작업 용액(pH 6.0)을 끓는 물에 넣었다. 상기 슬라이드를 복구 용액에 넣고, 최고 압력에서 약 10분 동안 가열한 후 뚜껑을 열어 상기 슬라이드를 자연적으로 실온으로 식혔다.
4) 차단 및 항체 인큐베이션
실온으로 식힌 후, 상기 슬라이드를 PBS 완충액으로 5분씩 3회 세척한 후 10% 염소 혈청/PBS 차단 용액을 검체에 적가하고, 상기 슬라이드를 실온에서 젖은 상자에 방치시켜 1시간 동안 차단했다. 그 후, 검체에 표적 단백질 항체 CAN001(1:200-800)을 적가하고, 각 슬라이드에 약 50 μL씩 적가한 후 4℃의 젖은 상자에 밤새 두었다가 PBS 완충액으로 5분씩 3회 세척하였다. 50 μL(1:200)의 염소 항-마우스 2차 항체를 적가하고, 상기 슬라이드를 젖은 상자에 넣고 실온에서 1시간 동안 방치한 후 PBS 완충액으로 5분씩 3회 세척하였다.
5) DAB 발색
각 조직 슬라이드에 DAB 발색 용액을 1방울 내지 2방울 적가하고, 동시에 현미경으로 염색 정도를 관찰하였다. 염색 정도가 적당하면, PBS 완충액을 넣어 반응을 정지시킨 후 핵을 헤마톡실린으로 30초 동안 대조염색한 후 PBS 완충액으로 반응을 정지시켰다.
6) 슬라이드 봉입
슬라이드 봉입제를 조직 옆에 적가한 다음 조직을 정사각형 커버슬립으로 덮었다. 기포를 방지하려면 한쪽을 먼저 평평하게 한 다음 다른 쪽을 평평하게 해야 한다. 마지막으로 커버슬립을 부드럽게 여러 번 누르고, 슬라이드를 봉입하고, 24시간 동안 공기 건조시켰다.
CAN001 항체를 사용한 인간 태반의 IHC 염색 결과는 도 4에 나타내었다.
CAN001 항체를 사용한 난소암 조직 및 인접 조직의 IHC 염색 결과는 도 5에 나타내었다.
실시예 6: CAN001 항체-약물 접합체의 제조
항체 CAN001(1,039.2 μL, 7.66 mg/mL)을 PBS 버퍼(660.0 μL, pH = 7)로 희석하여 4.68 mg/mL 농도의 CAN001 항체 용액 1,699.2 μL를 얻었다. PBS 완충액(14.7 μL, 2.5 mM, pH = 7)의 TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀)를 수득된 CAN001 항체 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 부드럽게 휘젓고 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션했다. 링커 페이로드 MC-MMAF(말레이미도카프로일 모노메틸아우리스타틴 F)(136.5 μL, DMSO 중 3.5 mM)를 첨가하고, 상기 용액을 부드럽게 휘젓고 25℃에서 1시간 동안 유지하여 조 샘플을 얻었다. 조 샘플을 illustra NAP-10 컬럼(GE Healthcare)으로 정제하고, 0.25 μm 마이크로필터를 통해 여과하여 최종 항체-약물 접합체 CAN001-MC-MMAF를 얻었다, 3.1 mL, 2.56 mg/mL, DAR(약물-항체 비율) = 5.95, UmAb%(접합되지 않은 항체의 백분율) = 1.3%, 및 Agg%(중합된 항체의 백분율) = 1.6%.
CAN001-MC-MMAF의 구조식은 하기 화학식 1로 나타내었다.
CAN001-MC-MMAF의 소수성 상호작용 크로마토그래피는 도 6에 도시되어 있다.
CAN001-MC-MMAF의 크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 도 7에 도시되어 있다.
실시예 7: CAN001 항체-약물 접합체의 세포 사멸 검정
이 실시예에서는 CAN001 항체-약물 접합체의 항암 효과가 96-웰 플레이트에서 CellTiter-Glo 세포 생존능 분석으로 테스트되었다.
인간 난소암 세포주: OVCAR-3, A2780, 및 3AO, 모두 ATCC에서 입수됨.
세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 웰당 1,000개의 세포로 시딩하고, 웰당 배양 배지의 총량을 200 μL로 조절하였다. 세포가 벽에 부착되면, 세포를 상응하는 약물로 처리하고, 약물을 상이한 시점(0, 24h, 48h, 72h 및 96h)에 회수하고, MTS 검출 용액(10 μL MTS 시약 + 190 μL 완전 배지)(AmyJet Scientific의 MTS 세포 증식 키트(비색법))을 첨가했다. 이어서, 96-웰 세포 배양 플레이트를 CO2 세포 인큐베이터에서 약 2시간 동안 빛이 없는 곳에서 인큐베이션했다. 이어서, 세포 배양 플레이트를 꺼내고 492 nm의 파장에서 측정하여 서로 다른 세포 그룹의 흡광도를 결정했다.
각 화합물의 % 억제율 및 IC50을 XLFit 곡선 피팅 소프트웨어로 계산하였다. 결과는 표 1에 나타내었다.
[표 1]
표 1은 CAN001 항체-약물 접합체 CAN001-MC-MMAF가 MMAF보다 난소암 세포에 대한 사멸 효과가 유의하게 더 높았음을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> CANWELL BIOTECH LIMITED <120> PREPARATION AND USE OF ANTI-FSHR ANTIBODY AND ANTIBODY-DRUG CONJUGATE THEREOF <130> ESP1V230828JW-KR <150> CN 202011417088.9 <151> 2020-12-04 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 714 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain DNA sequence <400> 1 atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60 ccccagatag tacttacgca atcacccgtc ataatgagcg catcccctgg tgaaaaggtt 120 actctgacat gctctgcgtc ttccagcgtg agtagttctt atctctattg gtatcagcaa 180 aaacccggat cttctagtaa attgtggata tattctacgt ctaatcttgc gtcaggagtg 240 cctgctcggt tttctgggtc cgggtccggg accagctata gtttgactat aagtagtatg 300 gaggcggagg acgcagctag ctacttttgc catcaatgga gctcctatcc tcctaccttt 360 gggggcggaa ccaaattgga aatcaaaaga gccgacgcgg cacccactgt atctatcttc 420 ccaccctcat cagaacagct cacttcaggc ggcgccagtg tggtgtgttt cctcaacaac 480 ttctatccta aagacataaa tgtaaaatgg aaaatagacg gtagcgagcg gcaaaacggg 540 gtgctgaact catggacgga ccaagattcc aaggattcta cctattcaat gagttctaca 600 ttgacactta cgaaagacga atacgagcgc cacaattcct atacgtgcga agcaacgcac 660 aaaacctcca cttccccgat tgtgaagtcc ttcaatagga atgaatgttg ataa 714 <210> 2 <211> 1404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain DNA sequence <400> 2 atggagtttg ggctcagttg ggtctttctc gtggcactgt ttcgcggggt acagtgcgct 60 agccaagtac aactgcaaca accaggcgcg gagctcgtta aaccgggggc gagcgtcaac 120 cttagctgca aagcctccgg ttataccttt acaagttact ggatgcactg ggtgaagcag 180 cgaccagggc aaggacgcga atggatcggg gaaataaatc caaggaacgg cagaacgaat 240 tacaacgaga agttcaaatc caaggcgacg ttgacggtgg acaaatcctc ttcaactgct 300 tatatgcagc tcagttctct gacaagcgag gatagtgccg tgtactgttg cgccaggttg 360 tctgtggggt tcgcctactg ggggcagggc acgctcgtta cagtctctgc ggccaagacg 420 actgcgcctt cagtatatcc actggctccg gtgtgcggag atacgacagg tagttctgta 480 actttgggat gcctcgttaa gggttatttc ccggagccgg tcaccttgac gtggaactcc 540 ggatcactct cctcaggggt acatacattt ccagcggttt tgcagagcga cctctacaca 600 ctcagtagca gtgtaaccgt tacctcatcc acatggccta gccagagtat cacgtgcaat 660 gttgcacacc cggcaagttc taccaaggtg gacaaaaaac tcgagcctag aggaccgacg 720 ataaagccct gtccgccttg caaatgtccg gcacctaacg ctgctggtgg cccctctgtt 780 tttatatttc cgccaaaaat taaggacgtc ctcatgatca gtctgagccc tatagtcacg 840 tgtgtggtgg tagatgtctc tgaagacgat cccgacgtac agatttcatg gttcgtgaac 900 aatgtggagg ttcacacagc ccaaacacag acacaccgcg aagattacaa tagtacactg 960 cgggtagtct ctgccctccc aatacaacac caggactgga tgagcgggaa agagttcaag 1020 tgcaaagtca ataacaaaga cctgggagcg ccgatagaaa gaactataag taaaccaaag 1080 gggagcgtaa gagcgcccca agtgtatgtc ctccctcctc ccgaagagga aatgaccaag 1140 aaacaagtta ctctcacatg catggtaacc gatttcatgc ctgaagacat atacgtagag 1200 tggaccaaca acgggaagac agaattgaac tacaagaata cagagcccgt tctcgattct 1260 gatggctcct actttatgta tagcaaactc cgggtggaaa aaaagaattg ggtcgaaaga 1320 aacagttatt catgttctgt tgttcacgag ggtttgcata accatcatac gacgaaatct 1380 ttttccagaa ccccaggaaa atga 1404 <210> 3 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain amino acid sequence <400> 3 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met 20 25 30 Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser 35 40 45 Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln 100 105 110 Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu 165 170 175 Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr 195 200 205 Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr 210 215 220 Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235 <210> 4 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain amino acid sequence <400> 4 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Phe Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Ala Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Arg Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Cys Cys Ala Arg Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser 130 135 140 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val 145 150 155 160 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu 165 170 175 Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr 195 200 205 Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro 210 215 220 Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Arg Gly Pro Thr 225 230 235 240 Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met 260 265 270 Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu 275 280 285 Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val 290 295 300 His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly 325 330 335 Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr 370 375 380 Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu 385 390 395 400 Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val 420 425 430 Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val 435 440 445 His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr 450 455 460 Pro Gly Lys 465 <210> 5 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of light chain variable region <400> 5 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Ser Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala 100 105 110 Ala Pro <210> 6 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of light chain CDR1 <400> 6 Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of light chain CDR2 <400> 7 Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of light chain CDR3 <400> 8 His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 9 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of heavy chain variable region <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Arg Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Cys Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro 115 120 125 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of heavy chain CDR1 <400> 10 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of heavy chain CDR2 <400> 11 Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of heavy chain CDR3 <400> 12 Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 13 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer FSHR-F <400> 13 gtttccacaa ccatggccct gctcctgg 28 <210> 14 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer FSHR-R <400> 14 ggttgattaa ctcgagttag ttttgggcta aatgacttag agggacaag 49

Claims (24)

  1. 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 가변 영역을 포함하고, 인간 여포 자극 호르몬 수용체 FSHR에 특이적으로 결합하며, 서열번호: 6, 7, 8, 10, 11 및 12의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 6, 7 및 8의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 경쇄 CDR을 포함하고/하거나,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호: 10, 11 및 12의 아미노산 서열로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 6, 7 및 8에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR, 및 서열번호: 10, 11 및 12에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하고;
    상기 경쇄 가변 영역은 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 5에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나,
    상기 중쇄 가변 영역은 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 9에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 및 중쇄를 포함하고;
    상기 경쇄는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 3에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나,
    상기 중쇄는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열번호: 4에 나타낸 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 10개 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 부가를 포함하는, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 변이체.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제6항에 따른 변이체와 관련된 생물학적 물질로서, 상기 생물학적 물질은 하기 B1) 또는 B2)인 것인, 생물학적 물질:
    B1) 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체를 암호화하는 핵산 분자; 및
    B2) B1)의 상기 핵산 분자를 포함하는 발현 카세트, 재조합 벡터, 재조합 세포 또는 재조합 미생물.
  8. 제7항에 있어서, B1)의 상기 핵산 분자는 하기 1), 또는 2), 또는 3)에 나타낸 핵산 단편을 포함하는, 생물학적 물질:
    (1) 하기 DNA 분자:
    서열번호: 1의 130-168번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 1의 214-234번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 1의 331-357번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 2의 154-168번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 2의 211-261번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 2의 358-378번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 1의 64-405번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 2의 64-441번 위치에 나타낸 핵산 단편;
    서열번호: 1에 나타낸 핵산 단편; 또는
    서열번호: 2에 나타낸 핵산 단편;
    2) 1)에서 정의된 DNA 분자에 하이브리드화되고, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체를 암호화하는 DNA 분자; 및
    3) 1) 또는 2)에서 정의된 DNA 분자와 적어도 90% 동일성을 갖고, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체를 암호화하는 DNA 분자.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체를 제조하는 방법으로서, 상기 방법은,
    제7항에서 정의된 B1)의 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 세포를, 상기 핵산 분자가 발현될 수 있는 조건 하에서 배양 배지에서 배양하여 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체를 제조하는 단계를 포함하는, 방법.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체와 세포독성 약물을 링커를 통해 결합시켜 얻어지는 항체-약물 접합체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포독성 약물은 화학요법제 또는 독소이고, 상기 독소는 바람직하게는 아우리스타틴(auristatin), 보다 바람직하게는 모노메틸아우리스타틴 F인, 항체-약물 접합체.
  12. 제10항에 있어서, 상기 링커는 말레이미도카프로일 또는 이의 유사체로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체-약물 접합체는 1 내지 30 범위의 평균 약물 항체 비율 DAR을 갖는, 항체-약물 접합체.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 제조하는 방법으로서, 상기 방법은,
    상기 링커를 상기 약물에 연결하는 단계, 상기 링커-약물 모이어티를 상기 항체에 결합시키는 단계, 및 상기 항체-약물 접합체를 정제하는 단계를 포함하는, 방법.
  15. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체 또는 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  16. 하기 제품들 중 어느 것을 제조하는데 있어서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체 또는 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체의 용도:
    (1) 인간 여포 자극 호르몬 수용체 발현을 검출하기 위한 제품; 및
    (2) 암을 검출, 스크리닝, 예방 및/또는 치료하기 위한 제품.
  17. 제16항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 유방암, 결장암, 췌장암, 방광암, 신장암, 폐암, 간암, 위암, 고환암 또는 난소암인, 용도.
  18. 암 세포의 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 암 세포는 전립선암 세포, 유방암 세포, 결장암 세포, 췌장암 세포, 방광암 세포, 신장암 세포, 폐암 세포, 간암 세포, 위암 세포, 고환암 세포 또는 난소암 세포인, 방법.
  20. 암 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 방법은 추가 치료제를 환자에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 치료제는 세포독성제인, 방법.
  23. 암을 앓는 것으로 의심되는 대상체를 진단하는 방법으로서, 상기 방법은 검출가능한 표지와 연결된 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제6항에 따른 변이체를 상기 대상체에게 투여하는 단계, 및 상기 대상체에서 상기 표지된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 변이체의 분포를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 전립선암, 유방암, 결장암, 췌장암, 방광암, 신장암, 폐암, 간암, 위암, 고환암 또는 난소암인, 방법.
KR1020237022197A 2020-12-04 2021-11-18 항-fshr 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및용도 KR20230117390A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011417088.9 2020-12-04
CN202011417088 2020-12-04
PCT/CN2021/131515 WO2022116853A1 (zh) 2020-12-04 2021-11-18 抗fshr抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230117390A true KR20230117390A (ko) 2023-08-08

Family

ID=81853813

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237022197A KR20230117390A (ko) 2020-12-04 2021-11-18 항-fshr 항체 및 이의 항체-약물 접합체의 제조 및용도

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20240043548A1 (ko)
EP (1) EP4257606A1 (ko)
JP (1) JP2023552664A (ko)
KR (1) KR20230117390A (ko)
CN (1) CN114605542B (ko)
AU (1) AU2021390722A1 (ko)
CA (1) CA3201124A1 (ko)
WO (1) WO2022116853A1 (ko)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3949893A (en) * 1992-03-30 1993-11-08 Akzo Nobel N.V. Human gonadotropin receptor (FSH receptor)
EP3490591A4 (en) * 2016-07-29 2020-07-29 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING ADIPOSITAS BY INHIBITING FSH / FSHR
JP7226803B2 (ja) * 2016-10-11 2023-02-21 オンコグリーン セラピューティクス エッセア 腫瘍の診断及び治療におけるｆｓｈホルモン受容体のリガンド
EP3378872A1 (en) * 2017-03-20 2018-09-26 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Antibodies against the human fshr extracellular domain
US20210340263A1 (en) * 2018-08-09 2021-11-04 The Wistar Institute Anti-Follicule Stimulating Hormone Receptor Antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021390722A1 (en) 2023-06-22
EP4257606A1 (en) 2023-10-11
CN114605542B (zh) 2024-03-01
AU2021390722A2 (en) 2023-07-13
US20240043548A1 (en) 2024-02-08
CA3201124A1 (en) 2022-06-09
JP2023552664A (ja) 2023-12-18
WO2022116853A1 (zh) 2022-06-09
CN114605542A (zh) 2022-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109152798B (zh) 特异于糖基化的pd-1的抗体及其使用方法
KR20210038904A (ko) 항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법
CN106975082A (zh) 结合于161p2f10b蛋白的抗体药物偶联物(adc)
CN106659790A (zh) 抗cdh6抗体药物缀合物
US20220356246A1 (en) Anti-ROR1 antibodies and preparation method and uses thereof
KR20230086702A (ko) 항-her3 항체 및 항-her3 항체-약물 접합체 및 이의 의학적 용도
JP2023130411A (ja) Ｅｇｆｌ６特異的モノクローナル抗体及びそれらの使用方法
US20240189439A1 (en) Antibodies to pmel17 and conjugates thereof
JP2022507294A (ja) Ｃｄｃｐ１－標的化療法
AU2018285523A1 (en) Antibody drug conjugates that bind LGR5
EP4299589A1 (en) Anti-human cd73 antibody and use thereof
CN113045659B (zh) 抗cd73人源化抗体
CN112552406B (zh) 抗人cd73抗体
EP4257606A1 (en) Preparation and use of anti-fshr antibody and antibody-drug conjugate thereof
CN117897407A (zh) 抗Nectin-4抗体、药物缀合物及其制备方法和用途
US20230032465A1 (en) Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof
CN105142664A (zh) 投予抗gcc抗体-药物结合物和dna破坏剂来治疗癌症
CN117430708B (zh) 一种抗Claudin18.2抗体
WO2024058192A1 (ja) 抗ｃａｄｍ１抗体またはその抗原結合断片
WO2024022384A1 (en) Peg based anti-cd47/anit-pd-l1 bispecific antibody-drug conjugate
JP2024514935A (ja) ＩｇＥ抗体を含む組成物
WO2020251878A1 (en) Anti-ctla4 antibody prodruggable (probody) at a cdr position
TW202408589A (zh) 抗ror1抗體及抗體結合物、包含抗ror1抗體或抗體結合物之組合物，及製造及使用抗ror1抗體及抗體結合物之方法
WO2023164581A2 (en) Fully human monoclonal antibodies against human progranulin
CN117203237A (zh) 包含IgE抗体的组合物