JP2024514935A - ＩｇＥ抗体を含む組成物 - Google Patents

Abstract

一態様では、本発明は、対象における低ＦＲα発現の腫瘍の治療における使用のための抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体に関する。

Description

本発明は、治療用抗体の分野及びそれらの使用、特にがんの治療における使用のための免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体に関する。本発明は、このようなＩｇＥ抗体を用いて疾患、例えばがんを治療する方法にも関する。

治療用抗体は、現在、多くの悪性疾患の従来の治療を補完するが、現在開発されているほぼ全ての薬剤は、９つのヒト抗体クラスのうちの１つのみ、すなわち血液中に最も豊富に存在する抗体クラスであるＩｇＧ１に依存している（Weiner LM, Surana R, Wang S (2010) Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nat Rev Immunol 10: 317-327）。ヒト免疫系は、天然において、９つの抗体クラス及びサブクラス（ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ１～４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２及びＩｇＥ）を配備して、免疫監視を行い、異なる解剖学的区画における病原体の破壊を媒介する。しかし、ＩｇＧ（ほとんどの場合ＩｇＧ１）のみが、がんの免疫療法に用いられている。

その理由の一つは、ＩｇＧ抗体（特にＩｇＧ１）がヒト血液中の循環抗体の最大の部分を占めるからであろう。抗体クラスの選択は、９つの抗体クラス及びサブクラスの１つに属するＦｃ領域をそれぞれが有する同じ特異性のキメラ抗体のパネルを比較する、１９８０年代の後半の先駆的な研究にも基づく（Bruggemann M, Williams GT, Bindon CI, Clark MR, Walker MR, Jefferis R, Waldmann H, Neuberger MS (1987) Comparison of the effector functions of human immunoglobulins using a matched set of chimeric antibodies. J Exp Med 166: 1351-1361）。抗体は、補体に結合する能力と、補体の存在下での抗原発現標的細胞の溶血及び細胞毒性を媒介する効力について評価された。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ，peripheral blood mononuclear cell）と組み合わせて、ＩｇＧ１は、インビトロの補体依存性細胞死滅において最も効果的なＩｇＧサブクラスであったが、ＩｇＡ及びＩｇＥ抗体は、完全に不活性であった。

Ｂ細胞マーカーＣＤ２０を認識する抗体を用いるその後の臨床試験は、ＩｇＧ１がＢ細胞悪性腫瘍、例えば非ホジキンリンパ腫の患者の免疫療法に最適なサブクラスであろうという推論を支持した（Alduaij W, Illidge TM (2011) The future of anti-CD20 monoclonal antibodies: are we making progress? Blood 117: 2993-3001）。これらの研究以降、異なる抗体クラスによる抗腫瘍効果の比較は、マウスモデル及びリンパ様悪性腫瘍の患者の両方においてＩｇＧ及びＩｇＭに制限されてきたが、ＩｇＡは、リンパ腫のマウスモデルにおいてインビトロ及びインビボでＡＤＣＣを媒介することが示されている（Dechant M, Valerius T (2001) IgA antibodies for cancer therapy. Crit Rev Oncol Hematol 39: 69-77）。

葉酸受容体α（ＦＲα、folate receptor α）は、いくつかのタイプの固形がん（卵巣及び子宮内膜がん並びに中皮腫を含む）において過剰発現されるがん関連抗原である。ＦＲαの発現は、正常な腎臓、胎盤、肺、卵管、膵臓、及び精巣で記載されているが、心臓、肝臓、脾臓、胃腸管、卵巣、子宮、筋肉、リンパ系、及び腺組織を含む他の正常組織では記載されていない（Weitman, Lark et al., Cancer Res 52(12): 3396-3401；Kelemen 2006, Int J Cancer 119(2): 243-250）。正常組織では、ＦＲα発現のレベルは一般的に低いか、又は内腔表面に限定されているため循環抗体がアクセスしにくい（Parker, Turk et al. 2005, Anal Biochem 338(2): 284-293；O'Shannessy, Yu et al. 2012, Oncotarget 3(4): 414-425）。ＦＲα発現は、原発性卵巣及び子宮内膜腫瘍の最大４０％、肺がんのほぼ３０％に見出される。腫瘍（特に卵巣及び子宮内膜がん）におけるＦＲαは、抗体がアクセスしやすいことが知られており、正常組織よりもはるかに高いレベルで発現し得る（Antony 1996, Annu. Rev. Nutr. 16: 501-521）。正常組織及び腫瘍におけるＦＲα発現のレベル及び場所が異なるため、ＦＲαは効果的な腫瘍特異的抗原であると考えられる（Mantovani, Miotti et al. 1994, Eur J Cancer 30A(3): 363-369；Toffoli, Cernigoi et al. 1997, Int J Cancer 74(2): 193-198）。

ＩｇＧ抗体を用いてＦＲαを標的にする最初の臨床試験は、良好な耐容性を示唆した。例えば、ヒト化抗ＦＲαＩｇＧ抗体であるファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ－００３）は、プラチナ耐性卵巣上皮癌における第Ｉ相試験において、１２ｍｇ／ｍ^２～４０ｍｇ／ｍ^２の範囲の用量で耐容性が良好であった（例えば、Konner et al., Clin Cancer Res. 2010 Nov 1;16(21):5288-95を参照のこと）。抗体薬物複合体（ＡＤＣ、antibody-drug conjugate）を含む、いくつかの抗ＦＲαＩｇＧ抗体が開発中である。例えば、ミルベツキシマブソラフタンシンは、ＦＲα結合抗体、切断可能なリンカー、及び卵巣がんの治験で用いられている細胞毒性ペイロードで構成されるＡＤＣである。

しかし、抗ＦＲαＩｇＧ療法の第III相臨床試験は、これらの抗体の有効性のためには高いＦＲα発現が必要であり得ることを示唆する。例えば、プラチナ耐性卵巣上皮癌におけるファーレツズマブの第III相試験では、主目的、すなわち、無増悪生存の改善を達成できなかった（Vergote et al., Int J Gynecol Cancer. 2013;23(8 Suppl 1):11；Walters et al., Gynecol Oncol. 2013;131(2):493-498）。この有効性の欠如は、この試験の適格基準としてＦＲα発現の最小レベルを含めることができなかったためであろうと示唆された（Sato and Itamochi, OncoTargets and Therapy 2016:9 1181-1188）。

さらに、ＦＲα陽性プラチナ耐性卵巣がんのImmunoGen社のミルベツキシマブソラフタンシンの第III相試験（FORWARD Ｉ）は、主要評価項目を達成できなかった（https://investor.immunogen.com/news-releases/news-release-details/immunogen-announces-top-line-results-phase-3-forward-i-studyで入手可能な２０１９年３月１日付けのImmunogen社プレスリリース、ImmunoGen Announces Top-Line Results from Phase 3 FORWARD I Study of Mirvetuximab Soravtansine in Ovarian Cancerを参照のこと）。

FORWARD Ｉ試験の適格基準は、事前に最大３つの投与計画で治療を受けたことがある、ＦＲαを中又は高レベルで発現するプラチナ耐性卵巣がん患者を含んでいた。ＦＲα発現のレベルが高いことが有効性のために必要であり得ることが示唆された（https://investor.immunogen.com/news-releases/news-release-details/immunogen-presents-full-data-phase-3-forward-i-studyで入手可能な２０１９年９月２９日付けのImmunogen社プレスリリース、ImmunoGen Presents Full Data from Phase 3 FORWARD I Study of Mirvetuximab Soravtansine in Ovarian Cancer at ESMOを参照のこと）。したがって、さらなる第III相試験（SORAYA）では、高発現患者のみに焦点を当て、より特異的な診断検査が行われた（ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04296890, A Study of Mirvetuximab Soravtansine in Platinum-Resistant, Advanced High-Grade Epithelial Ovarian, Primary Peritoneal, or Fallopian Tube Cancers With High Folate Receptor-Alpha Expression (SORAYA)を参照のこと）。さらなる化学療法剤と組み合わせたミルベツキシマブソラフタンシンの他の研究も、高ＦＲα発現が必要であることを示唆している（例えば、Cristea et al., A phase I study of mirvetuximab soravtansine (MIRV) and gemcitabine (G) in patients (Pts) with selected FRα-positive solid tumors: Results in the ovarian cancer (EC) cohort; Journal of Clinical Oncology 2021 39:15_suppl, 5542を参照のこと）。

同様に、抗ＦＲα抗体ＭＯｖ１８－ＩｇＧ１は、抗体依存性細胞介在性細胞毒性（ＡＤＣＣ、antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity）及び抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ、Antibody-Dependent Cell-mediated Phagocytosis）機能を組み合わせることによって、ＦＲα発現の高いがん細胞では腫瘍細胞死滅を誘導するが、ＦＲα発現が低いがん細胞では誘導しないことが示された（Cheung et al., Clin Cancer Res. 2018 October 15; 24(20): 5098-5111）。Cheung et al.の著者らは、低ＦＲα発現の細胞では、ＭＯｖ１８－ＩｇＧ１によって細胞媒介性死滅が起こらないことは、標的毒性効果／腫瘍外毒性効果を回避する上で重要であり得ることを示唆している。したがって、ＦＲαを高レベルで発現しない腫瘍、例えば、卵巣がんについて治療法の改善が必要とされている。

ＩｇＥクラスの抗体は、アレルギー反応において中心的な役割を演じ、がん療法のために有用であり得る多くの特性を有する。ＩｇＥベースの能動的及び受動的免疫療法アプローチは、インビトロ及びインビボの両方のがんモデルにおいて効果的であることが示されており、このことは、ヒトにおけるこれらのアプローチの潜在的な使用を示唆する（Leoh et al., Curr Top Microbiol Immunol. 2015; 388: 109-149）。よって、ＩｇＥ治療用抗体は、がん細胞に対する免疫監視の増強及び優れたエフェクター細胞効力を提供し得る。

ＦＲαに特異的なマウス／ヒトキメラＩｇＥ抗体（ＭＯｖ１８ ＩｇＥ）は、同系免疫適格動物において、その他は同一のＩｇＧと比較して、優れた抗腫瘍有効性を有することが示されている（Gould et al., Eur J Immunol 1999; 29:3527-37; Josephs et al., Cancer Res. 2017 Mar 1; 77(5):1127-1141; Karagiannis et al., Cancer Res. 2017 Jun 1;77(11):2779-2783）。ＴＮＦα／ＭＣＰ－１シグナル伝達は、単球及びマクロファージ活性化並びに腫瘍への動員のＩｇＥ媒介機構であると同定された。これらの知見は、アレルギー性のＩｇＥ機構ではなく、寄生体に対してＩｇＥにより採用される強力なマクロファージ活性化機能の例となる。これらの前臨床実験においてＭＯｖ１８ ＩｇＥの抗腫瘍活性が患者において再現できるならば、臨床腫瘍学におけるＩｇＥ派生薬物の臨床応用の潜在的可能性は明白である。

しかし、ヒトにおけるＩｇＥ抗体の治療的使用に関する臨床試験データが存在しないことは、ＩｇＥ抗体を伴う適当な治療方法及び使用がまだないことを意味する。特に、がん患者のどのサブグループに治療用ＩｇＥ抗体が有効であり得るかは不明である。抗ＦＲαＩｇＧ抗体は主に高ＦＲα発現者に適応されるので、卵巣がんを含むがん患者の他のサブグループについて治療法の改善が特に必要とされている。しかし、他の治療用抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ）の投与のために開発された方法及び使用を、ＩｇＥ抗体にどのように適応させることができるかは不明で、ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体が同じ又は異なる患者のサブグループの治療に用いることができるかも不明である。

Weiner LM, Surana R, Wang S (2010) Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nat Rev Immunol 10: 317-327 Bruggemann M, Williams GT, Bindon CI, Clark MR, Walker MR, Jefferis R, Waldmann H, Neuberger MS (1987) Comparison of the effector functions of human immunoglobulins using a matched set of chimeric antibodies. J Exp Med 166: 1351-1361 Alduaij W, Illidge TM (2011) The future of anti-CD20 monoclonal antibodies: are we making progress? Blood 117: 2993-3001 Dechant M, Valerius T (2001) IgA antibodies for cancer therapy. Crit Rev Oncol Hematol 39: 69-77 Weitman, Lark et al., Cancer Res 52(12): 3396-3401 Kelemen 2006, Int J Cancer 119(2): 243-250 Parker, Turk et al. 2005, Anal Biochem 338(2): 284-293 O'Shannessy, Yu et al. 2012, Oncotarget 3(4): 414-425 Antony 1996, Annu. Rev. Nutr. 16: 501-521 Mantovani, Miotti et al. 1994, Eur J Cancer 30A(3): 363-369 Toffoli, Cernigoi et al. 1997, Int J Cancer 74(2): 193-198 Konner et al., Clin Cancer Res. 2010 Nov 1;16(21):5288-95 Vergote et al., Int J Gynecol Cancer. 2013;23(8 Suppl 1):11 Walters et al., Gynecol Oncol. 2013;131(2):493-498 Sato and Itamochi, OncoTargets and Therapy 2016:9 1181-1188 ImmunoGen Announces Top-Line Results from Phase 3 FORWARD I Study of Mirvetuximab Soravtansine in Ovarian Cancer ImmunoGen Presents Full Data from Phase 3 FORWARD I Study of Mirvetuximab Soravtansine in Ovarian Cancer at ESMO ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04296890, A Study of Mirvetuximab Soravtansine in Platinum-Resistant, Advanced High-Grade Epithelial Ovarian, Primary Peritoneal, or Fallopian Tube Cancers With High Folate Receptor-Alpha Expression (SORAYA) Cristea et al., A phase I study of mirvetuximab soravtansine (MIRV) and gemcitabine (G) in patients (Pts) with selected FRα-positive solid tumors: Results in the ovarian cancer (EC) cohort; Journal of Clinical Oncology 2021 39:15_suppl, 5542 Cheung et al., Clin Cancer Res. 2018 October 15; 24(20): 5098-5111 Leoh et al., Curr Top Microbiol Immunol. 2015; 388: 109-149 Gould et al., Eur J Immunol 1999; 29:3527-37 Josephs et al., Cancer Res. 2017 Mar 1; 77(5):1127-1141 Karagiannis et al., Cancer Res. 2017 Jun 1;77(11):2779-2783

したがって、一態様では、本発明は、対象における低ＦＲα発現の腫瘍の治療における使用のための抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体を提供する。

一実施形態では、「低ＦＲα発現の腫瘍」は、対象における腫瘍細胞の５０％未満がＦＲαを発現することを意味する。好ましくは、対象における腫瘍細胞の４０％、３０％、２０％、又は１０％未満がＦＲαを発現する。

別の実施形態では、対象における腫瘍細胞の５０％未満が検出可能なＦＲα発現、例えば、検出可能な膜（すなわち、細胞質膜）ＦＲα発現を示す。好ましくは、対象における腫瘍細胞の５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、又は１０％未満が検出可能な膜ＦＲα発現を示す。ＦＲαの発現（例えば、膜発現）は、典型的には、免疫組織化学を用いて検出され、すなわち、検出可能な発現とは、ＦＲαの免疫組織化学的検出のことをいう。

別の実施形態では、典型的には、ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いた場合、対象における腫瘍細胞の５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、又は１０％未満が、（例えば膜）ＦＲαについて中強度又は高（２＋）強度の染色を示す。

別の実施形態では、対象における腫瘍細胞は、膜ＦＲα染色強度に従って分類される。ＦＲα染色強度は、０（ＦＲα検出不能）～３（高いＦＲα染色強度）のスケールで分類することができ、例えば、１は低いＦＲα染色強度を示し、２は中程度のＦＲα染色強度を示す。いくつかの実施形態では、対象における腫瘍細胞は、ＦＲα陽性の腫瘍細胞のパーセンテージ（例えば、０～１００％）に従ってさらに分類される。

好ましくは、対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアは、膜ＦＲα染色強度スコアとＦＲα陽性の腫瘍細胞のパーセンテージとの積として決定される。例えば、いくつかの実施形態では、対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアは、１００未満、好ましくは９０、８０、７０、６０、５０、又は４０未満、より好ましくは３０未満又は２０未満であってもよい。

代替の実施形態では、対象における腫瘍ＦＲα発現を、他のがん対象、例えば、同じタイプのがんに罹患している他の対象における腫瘍ＦＲα発現と比較することができる。よって、対象における腫瘍ＦＲα発現の相対的なレベルを確認することができる。好ましい実施形態では、対象における腫瘍（例えば膜）ＦＲα発現は、がん対象の少なくとも５０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い。好ましくは、対象の腫瘍細胞における（例えば、膜）ＦＲα発現は、例えば、同じ形態のがん（好ましくは卵巣がん）に罹患しているがん対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い。より好ましくは、対象における腫瘍（例えば、膜）ＦＲα発現は、ＦＲα発現腫瘍（好ましくは、ＦＲα発現卵巣腫瘍）の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、又は少なくとも９０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い。

好ましい実施形態では、腫瘍はＦＲαを発現し、すなわち、腫瘍は少なくともある程度のＦＲα発現を示す。好ましくは、対象における腫瘍細胞は、例えば免疫組織化学によって検出可能な膜ＦＲα発現を示す。より好ましくは、対象における腫瘍細胞の少なくとも１％又は少なくとも５％は、例えば、ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いると、検出可能な（例えば、膜）ＦＲα発現を示す。他の実施形態では、対象における腫瘍細胞の少なくとも１０％、１５％、又は２０％が検出可能な膜ＦＲα発現を示す。

一実施形態では、抗体はＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体である。

一実施形態では、ＩｇＥ抗体は、対象におけるがんを治療及び／又はがんの進行を遅延するために用いられる。例えば、抗体は、対象における低ＦＲα発現の腫瘍の進行を遅延させるために用いることができる。

一実施形態では、腫瘍又はがんは、卵巣腫瘍又は卵巣がんである。

一実施形態では、抗体は細胞毒性部分を欠いている。よって、抗体は、１又は２以上（例えば、４つ）のポリペプチド鎖、例えば、免疫グロブリン（好ましくはＩｇＥ）重鎖及び／又は軽鎖（のみ）を含む、それらからなる、又は本質的にそれらからなり得る。特に、抗体は抗体薬物複合体（ＡＤＣ）ではないことが好ましい。よって、抗体は、細胞毒性効果を有するさらなる薬物又は基、例えば、がん細胞を（直接）死滅させることができる化学療法剤又は薬物を欠如していてもよい。抗体はさらに、細胞毒性部分をポリペプチドにコンジュゲートさせるためのリンカー又は他の基を欠如していてもよい。

一実施形態では、対象に投与したＩｇＥ抗体の週用量は、５０ｍｇ、２５ｍｇ、１０ｍｇ、３ｍｇ、又は１ｍｇ未満である。別の実施形態では、ＩｇＥ抗体の週用量は、１０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、７０μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ、又は約７００μｇである。

好ましくは、ＩｇＥ抗体は、週に１回又は２週間に１回対象に投与される。一実施形態では、ＩｇＥ抗体は、最長１２週間対象に投与される。別の実施形態では、ＩｇＥ抗体は、対象に（ｉ）週に１回、６週間、続いて（ii）２週間に１回、６週間投与される。

一実施形態では、ＩｇＥ抗体は、投与当たり１ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満、又は０．０３ｍｇ／ｋｇ未満の用量で対象に投与される。別の実施形態では、ＩｇＥ抗体は、１ｍｇ／ｋｇ／週未満、０．１ｍｇ／ｋｇ／週未満、又は０．０３ｍｇ／ｋｇ／週未満の用量で対象に投与される。

さらなる態様では、本発明は、低ＦＲα発現の腫瘍を有する対象におけるがんの治療及び／又はがんの進行の遅延のための方法であって、上記で定義した抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体を治療有効量で対象に投与するステップを含む方法を提供する。

さらなる態様では、本発明は、対象における低ＦＲα発現の腫瘍の治療における使用のための医薬組成物であって、上記で定義した抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体及び１又は２以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。

好ましくは、組成物は５０ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含む。より好ましくは、組成物は、３０ｍｇ未満、２５ｍｇ未満、１０ｍｇ未満、５ｍｇ未満、３ｍｇ未満、又は１ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含む。他の実施形態では、組成物は、１０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、７０μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ、又は約７００μｇのＩｇＥ抗体を含む。

一実施形態では、組成物は液体の形態である。好ましくは、組成物は、０．１ｍｇ／ｍｌ～１０ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、又は約１ｍｇ／ｍｌのＩｇＥ抗体の濃度を有する水溶液である。好ましくは、薬学的に許容される賦形剤は、クエン酸ナトリウム、Ｌ－アルギニン、スクロース、ポリソルベート２０及び／又は塩化ナトリウムから選択される。

一実施形態では、組成物は静脈内注射又は皮下注射に適している。好ましくは、組成物は、最高５０ｍｇ／週、２５ｍｇ／週、１０ｍｇ／週、３ｍｇ／週、又は１ｍｇ／週の最大合計用量の静脈内又は皮下注射に適している。

ＭＯｖ１８ ＩｇＥ軽（Ｌ）鎖（配列番号１）のアミノ酸配列を示し、マウスＶＬは、太字で示し、ヒトＣＬは、標準テキストで示す図である。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ重（Ｈ）鎖（配列番号２）のアミノ酸配列を示し、マウスＶＨは、太字で示し、ヒトＣＨは、標準テキストで示す図である。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のアミノ酸配列（配列番号３）を示す図である。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。 抗体の静脈内投与後のＭＯｖ１８ ＩｇＥの薬物動態（血清濃度）を示す図である。 ７００μｇ用量レベルのＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体で処置した卵巣がん対象における腫瘍サイズの低減を示す、ＣＴスキャン画像と、該ＣＴスキャン画像から得た腫瘍測定の結果とを示す図である。腫瘍（各画像の楕円内の領域において示す）を、ベースライン（左パネル）及び処置の６週間後（右パネル）にて示す。対象における標的及び非標的病変寸法並びに状態は、抗体での処置のサイクルの前後、及び維持期間後に決定した。 ７００μｇのＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体の６回の週用量の後に、２週間間隔でさらに３回の７００μｇ用量の抗体での患者の処置の間の卵巣がん抗原ＣＡ１２５の血清濃度における著しい減少を示す図である。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体で処置した個別の卵巣がん対象における固形がんの治療効果判定のためのガイドライン（ＲＥＣＩＳＴ，Response Evaluation Criteria in Solid Tumours）スコアの変化のプロットを示す図である。各線は、処置の開始から（すなわち、処置６週間後及び処置１２週間後）の個別の患者におけるＲＥＣＩＳＴスコアのパーセンテージ変化を表す。２０％未満増加又は減少するＲＥＣＩＳＴスコアは、安定疾患を示す。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体での処置６週間後の個別の卵巣がん対象におけるＲＥＣＩＳＴ（固形がんの治療効果判定のためのガイドライン）スコアの変化のウォーターフォールプロットを示す図である。各垂直バーは、６週間での個別の対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化を表す。合計で２０名の対象を処置した。垂直バーが示されていない場合、その対象において６週間後にＲＥＣＩＳＴスコアの変化がないことを示す（このことは４名の対象で起こり、ｘ軸に沿った垂直バー間の間隙により示される）。 ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体での処置６又は１２週間後の個別の卵巣がん対象におけるＲＥＣＩＳＴ（固形がんの治療効果判定のためのガイドライン）スコアの変化のウォーターフォールプロットを示す図である。図９に示した同じ対象を同じ順序で表す。数人（５名）の対象だけが、６週間を超えて処置を継続した。アステリスク（＊）を付した各垂直バーは、１２週間まで処置した個別の対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化を表す。アステリスクのない残りの垂直バーは、図９に示すように６週間まで処置した個別の対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化を表す。垂直バーが示されていない場合、対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化が０％であることを示す（このことは、２名の対象で起こり、ｘ軸に沿った垂直バーの間隙により示される）。 各対象におけるＦＲα発現スコアと比較した、ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体での処置の６週間後の個別の卵巣がん対象におけるＲＥＣＩＳＴ（固形腫瘍の治療効果判定のためのガイドライン、Response Evaluation Criteria in Solid Tumours）スコアの変化のウォーターフォールプロットを示す図である。各垂直バーは、６週間での個別の対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化を表す。合計で２０名の対象を処置した。垂直バーが示されていない場合、これは、その対象では６週間後にＲＥＣＩＳＴスコアの変化がないことを示す（このことは４名の対象で起こり、ｘ軸に沿った垂直バー間の間隙により示される）。ＰＤは進行性疾患を示し、ＳＤは安定疾患を示す。各対象の全体的なＦＲα発現スコアは、膜染色強度スコア（膜スコア）とＦＲα陽性の腫瘍細胞のパーセンテージ（％膜＋）との積として計算される。

抗ＦＲα ＩｇＥ抗体が低ＦＲα発現の腫瘍の効果的な治療を提供できることが驚くべきことに見出された。特に、抗ＦＲα ＩｇＥ（ＭＯｖ１８ ＩｇＥ）は、非常に低いＦＲα膜発現スコアを有する対象における卵巣がんの治療又は進行の遅延に有効であることが見出された。

同等のＩｇＧ抗体（すなわち、ＭＯｖ１８ ＩｇＧ１）は高ＦＲα発現の腫瘍を死滅させるが、低ＦＲα発現の腫瘍は死滅させないことが知られており、この選択性は腫瘍外毒性効果を回避する上で重要であると考えられていたので、この発見は特に驚くべきことである（Cheung et al., Clin Cancer Res. 2018 October 15; 24(20): 5098-5111）。さらに、ＩｇＧ抗体を用いる抗ＦＲα治療アプローチは、高ＦＲα発現者の治療、並びに／又は、例えば、ＡＤＣ及び／若しくはゲムシタビンなどの薬剤を用いる別の併用療法における抗体と細胞毒性部分との組み合わせに焦点を当てている（Martin et al. Gynecol Oncol. 2017 Nov; 147(2): 402-407; Sato and Itamochi, OncoTargets and Therapy 2016:9 1181-1188 and Cristea et al., Journal of Clinical Oncology 2021 39:15_suppl, 5542を参照のこと）。

対照的に、抗ＦＲα ＩｇＥ抗体は、単剤療法として、すなわち、ＡＤＣに組み込んだり、さらなる化学療法薬と組み合わせたりすることなく、低ＦＲα発現の腫瘍を治療することができる。したがって、本発明は、特に低ＦＲα発現者であるがん患者のサブグループにおいて、満たされていない医学的必要性に対処する上で、当技術分野に多大な貢献をもたらす。

さらに、ＩｇＧ抗体に典型的に用いられる方法、組成物、剤形、及び投与計画は、必ずしもＩｇＥ抗体に移行可能ではないことが見出された。特に、有効性（例えば、低ＦＲα発現の対象における抗腫瘍効果）に必要なＩｇＥ抗体の最小用量は、ＩｇＧ抗体の典型的な有効用量よりも非常に低いことがあることが本明細書で実証された。例えば、以下の実施例に示すように、抗葉酸受容体α（ＦＲα）ＩｇＥ抗体は、７００μｇ（約０．０１ｍｇ／ｋｇ）ほど低い単位用量にて抗腫瘍効果を有することが見出され、この用量は、典型的なＩｇＧ治療用抗体用量（例えば用量あたり１５０～２０００ｍｇ前後又は２～２０ｍｇ／ｋｇ）より数桁低い。

この結果は、ＩｇＧ及びＩｇＥの薬理学及び薬物動態における差のために、ＩｇＧ抗体のために開発された方法、使用、及び組成物（投与計画、単位剤形、及び治療するがん患者のサブグループなど）は、必ずしもＩｇＥに当てはめられないことを示す。本発明者らは、よって、例えば、低ＦＲα発現の患者におけるがんの治療における、治療用ＩｇＥ投与に特に当てはめることができる新しい使用及び投与計画を開発した。

治療用抗体
抗体は、抗原、例えばＦＲαのエピトープ又はその断片を特異的に認識して特異的に結合する軽鎖又は重鎖免疫グロブリン可変領域を少なくとも含むポリペプチドリガンドである。抗体は、典型的に、重鎖及び軽鎖で構成され、これらはそれぞれ、重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域とよばれる可変領域を有する。まとめて、ＶＨ領域及びＶＬ領域は、抗体により認識される抗原との結合を担う。

抗体は、当該技術において公知のインタクトな免疫グロブリン、並びに抗体のバリアント及び部分を含むが、但し、このような断片がＩｇＥの少なくとも１つの機能を保持する、例えばＦｃε受容体と結合できる。抗体は、遺伝子操作された形、例えばキメラヒト化（例えば可変領域にマウス配列を含むヒト化抗体）又はヒト抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、例えばKuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997に記載されるものも含む。

典型的に、天然に存在する免疫グロブリンは、ジスルフィド結合で相互接続された重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖には２つのタイプ、ラムダ（λ）及びカッパ（κ）がある。抗体分子の機能的活性を決定する９つの主要なアイソタイプ又はクラス、すなわち重鎖タイプα、δ、ε、γ及びμに相当するＩｇＡ１～２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１～４及びＩｇＭがある。つまり、存在する重鎖タイプは、抗体のクラスを規定する。別個の重鎖は、サイズ及び組成が異なり、α及びγは、およそ４５０アミノ酸を含むが、μ及びεは、およそ５５０アミノ酸を有する。各重鎖タイプの定常領域における差は、特定のタイプの受容体（例えばＦｃ受容体）とのそれらの選択的結合のおかげで、各抗体アイソタイプのエフェクター機能の違いに帰する。したがって、本発明の実施形態において、抗体は、好ましくはイプシロン（ε）重鎖を含み、すなわち、抗体は、Ｆｃε受容体と結合するアイソタイプＩｇＥのものである。

重鎖及び軽鎖はそれぞれ、定常領域及び可変領域を含む（これらの領域は、「ドメイン」としても知られる）。組み合わせて、重鎖及び軽鎖可変領域は、特異的に抗原に結合する。軽鎖及び重鎖可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」ともよばれる３つの超可変領域が割り込んだ「フレームワーク」領域を含む。フレームワーク領域及びＣＤＲの範囲は、規定されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991を参照されたい）。Ｋａｂａｔデータベースは、現在、オンラインで維持されている。異なる軽鎖又は重鎖のフレームワーク領域の配列は、種、例えばヒト内で比較的保存されている。構成する軽鎖及び重鎖の組み合わせたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、ＣＤＲを三次元空間に配置及び整列させる役目をする。

ＣＤＲは、抗原のエピトープとの結合を主に担う。各鎖のＣＤＲは、Ｎ末端から順番に番号付けして典型的にＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３といい、その特定のＣＤＲが位置する鎖により典型的に同定される。よって、ＶＨ ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインにあるが、ＶＬ ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲ１である。

抗体は、特定のＶＨ領域及びＶＬ領域配列、よって特定のＣＤＲ配列を有することがある。異なる特異性（すなわち異なる抗原についての異なる組み合わせ部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体ごとに変動するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数だけのアミノ酸の位置が抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のそれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）とよばれる。「ＶＨ」への言及は、免疫グロブリン重鎖の可変領域のことをいう。「ＶＬ」への言及は、免疫グロブリン軽鎖の可変領域のことをいう。

「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンにより、又は単一抗体の軽鎖及び重鎖遺伝子をトランスフェクションした細胞により産生される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に既知の方法、例えば骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することにより産生される。モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体を含む。

「キメラ抗体」は、２つの異なる抗体に由来する配列を含み、これらは、典型的に異なる種に由来する。例えば、キメラ抗体は、ヒト及びマウス抗体ドメイン、例えばヒト定常領域及びマウス可変領域（例えば標的抗原に特異的に結合するマウス抗体から）を含み得る。

キメラ抗体は、異なる種に属する軽鎖及び重鎖免疫グロブリン遺伝子から、例えば遺伝子操作により、可変及び定常領域を融合することにより典型的に構築される。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変セグメントを、ヒト定常セグメント、例えばカッパ及びイプシロンにつなぐことができる。一例では、治療用キメラ抗体は、よって、マウス抗体からの可変又は抗原結合ドメイン、及びヒト抗体からの定常又はエフェクタードメイン、例えばヒトＩｇＥ抗体からのＦｃ（エフェクター）ドメインで構成されるハイブリッドタンパク質であるが、他の哺乳動物種を用いることができ、又は可変領域は、分子技術により生成できる。キメラ抗体を作製する方法は、当該技術において公知であり、例えば米国特許第５，８０７，７１５号明細書を参照されたい。

「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワーク領域と、非ヒト（例えばマウス、ラット又は合成）抗体からの１又は２以上のＣＤＲとを含む抗体である。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」とよばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」とよばれる。一実施形態では、全てのＣＤＲは、ヒト化免疫グロブリンにおけるドナー免疫グロブリンからのものである。定常領域は、ヒト免疫グロブリン定常領域と典型的に実質的に同一、すなわち少なくとも約８５～９０％、例えば約９５％以上同一である。よって、ＣＤＲ以外のヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。

ヒト化抗体は、ヒト化免疫グロブリン軽鎖と、ヒト化免疫グロブリン重鎖とを典型的に含む。ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同じ抗原と典型的に結合する。ヒト化免疫グロブリン又は抗体のアクセプターフレームワークは、ドナーフレームワークからのアミノ酸による限られた数の置換を有し得る。ヒト化又は他のモノクローナル抗体は、抗原結合又は他の免疫グロブリン機能に対して実質的に影響を有さない追加の保存的アミノ酸置換を有し得る。

ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子操作により構築できる（例えば米国特許第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）。典型的に、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンの可変重鎖及び軽鎖からのドナー抗体相補性決定領域をヒト可変ドメインに移し、次いでドナー対応物のフレームワーク領域におけるヒト残基を置換することにより生成される。ヒト化モノクローナル抗体に由来する抗体成分の使用は、ドナー抗体の定常領域の免疫原性に伴う潜在的な問題点を未然に防ぐ。ヒト化モノクローナル抗体を生成する技術は、例えばJones et al., Nature 321:522, 1986; Riechmann et al., Nature 332:323, 1988; Verhoeyen et al., Science 239:1534, 1988; Carter et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. U.S.A. 89:4285, 1992; Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437, 1992; and Singer et al., J. Immunol. 150:2844, 1993に記載される。

「ヒト」抗体（「完全ヒト」抗体ともよばれる）は、ヒトフレームワーク領域及びヒト免疫グロブリンからのＣＤＲの全てを含む抗体である。一例では、フレームワーク及びＣＤＲは、同じ起源のヒト重鎖及び／又は軽鎖アミノ酸配列からのものである。しかし、１つのヒト抗体からのフレームワークは、異なるヒト抗体からのＣＤＲを含むように操作できる。

本発明の実施形態では、抗体は、キメラ、ヒト化又は完全ヒト抗体を含むモノクローナル又はポリクローナル抗体であり得る。

抗ＦＲα抗体
いくつかの実施形態では、抗体は、葉酸受容体α（ＦＲα）と特異的に結合して、免疫複合体を形成する。典型的に、抗体は、ＦＲα、好ましくはヒトＦＲαに結合することがわかっている抗体、例えばＭＯｖ１８ ＩｇＥに由来する抗原結合領域（例えば１又は２以上の可変領域、又は１～６つのＣＤＲ）を含み得る。

ＦＲα（葉酸受容体１又はＦＯＬＲ１としても知られている）は、いくつかのタイプの固形がん（卵巣及び子宮内膜がん並びに中皮腫を含む）において過剰発現される。抗原は、実際上腫瘍特異的であることを特徴とし、ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体を用いるＦＲαを標的にする臨床試験は、好ましい耐容性プロファイルを示している。ＦＲαに結合するＭＯｖ１８ ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体並びにそれらの特性は、例えばConey, L. R., A. Tomassetti, et al. (1991). Cancer Res 51(22): 6125-6132; Gould, H. J., G. A. Mackay, et al. (1999). Eur J Immunol 29(11): 3527-3537; Karagiannis, S. N., Q. Wang, et al. (2003). Eur J Immunol 33(4): 1030-1040に記載されている。

ある特定の実施形態では、抗体は、可変領域（例えば重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変ドメイン（ＶＬ））、又はＭＯｖ１８ ＩｇＧ若しくはＩｇＥからの少なくとも１、２、３、４、５若しくは６のＣＤＲ（例えば３つの重鎖ＣＤＲ又は３つの軽鎖ＣＤＲ）、例えば配列番号４及び／若しくは配列番号３にあるＣＤＲを含み、ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＩＭＧＴの方法に従って規定し得る（例えばDondelinger, Front Immunol. 2018; 9: 2278及び本明細書に参照により組み込まれるそこに引用される文献を参照されたい）。例えば、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って（Kabat EA, et al. (U.S.) NI of H. Sequences of Immunoglobulin Chains: Tabulation Analysis of Amino Acid Sequences of Precursors, V-regions, C-regions, J-Chain BP-Microglobulins, 1979を参照されたい）、又はＣｈｏｔｈｉａに従って（Chothia C, et al, Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins, J Mol Biol. 1987 Aug 20; 196(4):901-1を参照されたい）、又はＩＭＧＴに従って（Giudicelli V et al., IMGT, the international ImMunoGeneTics database, Nucleic Acids Res. 1997 Jan 1; 25(1):206-11又はLefranc MP, Unique database numbering system for immunogenetic analysis, Immunol Today. 1997 Nov; 18(11):509を参照されたい）規定し得る。ＭＯｖ１８ ＩｇＥのＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４及び配列番号３に示す。別の実施形態では、抗体は、ＭＯｖ１８ ＩｇＥと結合するエピトープに特異的に結合するキメラ、ヒト化又は完全ヒト抗体である。最も好ましくは、治療用抗体は、ＭＯｖ１８ ＩｇＥであり、例えば、抗体は、配列番号１に規定する軽鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号２に規定する重鎖アミノ酸配列を含む。

別の例では、抗体は、例えばＦＲα、好ましくはヒトＦＲα上で見出されるエピトープを認識するヒトＢ細胞クローンに由来する可変領域（例えば重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメイン）、又は少なくとも１、２、３、４、５若しくは６のＣＤＲ（例えば３つの重鎖ＣＤＲ又は３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む。

一実施形態では、抗体は、１又は２以上のヒト定常領域、例えば１又は２以上のヒト重鎖定常ドメイン（例えばε定常ドメイン）及び／又はヒト軽鎖（例えばκ又はλ）定常ドメインを含む。ヒト軽（κ）鎖定常ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１（太字でないテキスト）に示す。ヒト重鎖定常ドメインのアミノ酸配列を、配列番号２（太字でないテキスト）に示す。一実施形態では、抗体は、ＶＨ及び／又はＶＬドメイン内の１又は２以上のヒトフレームワーク領域を含む。

一実施形態では、ヒト化免疫グロブリン重鎖可変領域フレームワークの配列は、ドナー免疫グロブリン重鎖可変領域フレームワークの配列と少なくとも約６５％同一であり得る。よって、ヒト化免疫グロブリン重鎖可変領域フレームワークの配列は、ドナー免疫グロブリン重鎖可変領域フレームワークの配列と少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９９％又は少なくとも約９５％同一であり得る。ヒトフレームワーク領域、及びヒト化抗体フレームワーク領域に作り得る変異は、当該技術において知られている（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）。

特異的抗原、例えばＦＲαに対するさらなる抗体は、確立された方法により作製することもでき、そのような抗体からの少なくとも可変領域又はＣＤＲは、本発明の抗体において用いることができる（例えば、作製された抗体を用いて、ＩｇＥアクセプター配列にＣＤＲ又は可変領域配列を提供できる）。ポリペプチドを合成する方法及び宿主動物を免疫する方法は、当該技術において公知である。典型的に、宿主動物（例えばマウス）に、ある量の免疫原（例えばＦＲα又はその免疫原性断片を含むポリペプチド）と、（モノクローナル抗体生成の場合は）Kohler, B. and Milstein, C. (1975) Nature 25 6:495-497の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を用いてリンパ球及び不死化骨髄腫細胞から調製されるハイブリドーマとを腹腔内接種する。

ヒトＦＲαの配列は公知であり（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ１５３２８を参照のこと）、よって、ヒトＦＲαは、例えば、天然源から精製され得るか、又はそのような方法における使用のための組換え技術を用いて発現され得る。ヒトＦＲαのアミノ酸及び核酸配列は、それぞれ以下の配列番号５及び６に示される：
配列番号５－ヒトＦＲαアミノ酸配列：
MAQRMTTQLLLLLVWVAVVGEAQTRIAWARTELLNVCMNAKHHKEKPGPEDKLHEQCRPWRKNACCSTNTSQEAHKDVSYLYRFNWNHCGEMAPACKRHFIQDTCLYECSPNLGPWIQQVDQSWRKERVLNVPLCKEDCEQWWEDCRTSYTCKSNWHKGWNWTSGFNKCAVGAACQPFHFYFPTPTVLCNEIWTHSYKVSNYSRGSGRCIQMWFDPAQGNPNEEVARFYAAAMSGAGPWAAWPFLLSLALMLLWLLS
配列番号６－ヒトＦＲα核酸配列：
atggctcagcggatgacaacacagctgctgctccttctagtgtgggtggctgtagtaggggaggctcagacaaggattgcatgggccaggactgagcttctcaatgtctgcatgaacgccaagcaccacaaggaaaagccaggccccgaggacaagttgcatgagcagtgtcgaccctggaggaagaatgcctgctgttctaccaacaccagccaggaagcccataaggatgtttcctacctatatagattcaactggaaccactgtggagagatggcacctgcctgcaaacggcatttcatccaggacacctgcctctacgagtgctcccccaacttggggccctggatccagcaggtggatcagagctggcgcaaagagcgggtactgaacgtgcccctgtgcaaagaggactgtgagcaatggtgggaagattgtcgcacctcctacacctgcaagagcaactggcacaagggctggaactggacttcagggtttaacaagtgcgcagtgggagctgcctgccaacctttccatttctacttccccacacccactgttctgtgcaatgaaatctggactcactcctacaaggtcagcaactacagccgagggagtggccgctgcatccagatgtggttcgacccagcccagggcaaccccaatgaggaggtggcgaggttctatgctgcagccatgagtggggctgggccctgggcagcctggcctttcctgcttagcctggccctaatgctgctgtggctgctcagc

適切な抗体を生成するハイブリドーマは、既知の手順を用いてインビトロ又はインビボで増殖させることができる。モノクローナル抗体は、培養培地又は体液から、所望により、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー及び限外濾過により単離できる。存在するならば望ましくない活性は、例えば、固相に結合した免疫原で作られた吸着剤に調製物を流し、所望の抗体を免疫原から溶出又は放出させることにより除去できる。所望により、所望の抗体（モノクローナル又はポリクローナル）を配列決定し、ポリヌクレオチド配列を、次いで、発現又は増殖のためのベクターにクローニングできる。抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターに維持し、次いで、宿主細胞を、将来の使用のために拡張及び凍結できる。

ファージディスプレイ技術、例えば米国特許第５，５６５，３３２号明細書及び他の出版された文献に記載されるものは、非免疫化ドナーから（例えば、関係する障害に罹患している患者を含むヒト対象から）の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体及び抗体断片をインビトロで選択及び生成するために用いることができる。例えば、現存する抗体ファージディスプレイライブラリーを、合成ポリペプチドの大きいコレクションに対して並行して選り分けることができる。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３又はｆｄのメジャー又はマイナーコートタンパク質遺伝子にインフレームでクローニングし、ファージ粒子の表面上に機能的抗体断片としてディスプレイされる。繊維状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づく選択も、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。よって、ヒトライブラリーからファージディスプレイを用いて選択される抗体配列は、特定の抗原、例えばＦＲαとの特異的結合を与えるヒトＣＤＲ又は可変領域配列を含むことができ、これは、本発明で用いるための完全ヒト抗体を提供するために用いることができる。

ヒトＢ細胞及び形質細胞クローンから重鎖及び軽鎖配列を導く方法も当該技術において公知であり、典型的に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて行われ、この方法の例は、Kuppers R, Methods Mol Biol. 2004;271:225-38; Yoshioka M et al., BMC Biotechnol. 2011 Jul 21;11:75; Scheeren FA et al., PLoS ONE 2011, 6(4): e17189. doi:10.1371/journal.pone.0017189; Wrammert J et al., Nature 2008 453, 667-671; Kurosawa N et al., BMC Biotechnol. 2011 Apr 13;11:39; Tiller et al., J Immunol Methods. 2008 January 1; 329(1-2): 112-124に記載される。よって、Ｂ細胞クローンを用いて選択される抗体配列は、例えばＦＲαとの特異的結合を与えるヒトＣＤＲ又は可変領域配列を含むことができ、これは、本発明で用いるための完全ヒト抗体を提供するために用いることができる。

ＩｇＥ抗体
対象に投与される治療用抗体は、ＩｇＥ抗体、すなわち，アイソタイプＩｇＥの抗体である。ＩｇＥとＩｇＧとの間には、いくつかの基本的な構造の違いがあり、これらは、機能的効果を有する。ＩｇＥは、他のクラスの抗体と同じ基本的分子構造が共通しているが、ＩｇＥの重鎖は、ＩｇＧの重鎖よりドメインを１つ多く有する。ＩｇＥのＣε３及びＣε４ドメインは、ＩｇＧのＣγ２及びＣγ３ドメインと配列が相同であり、構造が類似しているので、ＩｇＥの最も明確な区別できる特徴は、Ｃε２ドメインである。Ｃε２ドメインは、重鎖ＩｇＥに対して折り返され、Ｃε３ドメインと広い範囲で接触することが見出されている。ＩｇＥ重鎖のこの曲がった構造により、開放又は閉鎖された立体構造をとることが可能になる。未結合のＩｇＥ二量体は、一本の鎖が開放立体構造及び一本の鎖が閉鎖立体構造にある。ＩｇＥとのＦｃεＲＩの結合は、二相であり、開放Ｃε鎖との最初の結合の後に広い範囲の構造再構成を行って、閉鎖Ｃε鎖との結合を可能にすると考えられている。ＩｇＥ二量体とＦｃεＲＩとの間の結合は、２つの同一Ｃε鎖の存在にもかかわらず、１：１の化学量論で起こる。この再構成は、ＩｇＥとＦｃεＲＩとの間の非常に密な相互作用と、ＩｇＧとＦｃγＲとで見出されるよりもかなり大きいＦｃ受容体についてのＩｇＥの親和性とをもたらす（McDonnell, J. M., R. Calvert, et al. (2001) Nat Struct Biol 8(5): 437-441）。

本発明で用いる抗体は、Ｆｃε受容体、例えばＦｃεＲＩ及び／又はＦｃεＲＩＩ受容体と典型的に結合できる。好ましくは、抗体は、少なくともＦｃεＲＩと結合できる（すなわち高親和性Ｆｃε受容体）か、又は少なくともＦｃεＲＩＩと結合できる（ＣＤ２３、低親和性Ｆｃε受容体）。典型的に、抗体は、ＩｇＥにより媒介されるエフェクター機能を開始するために、例えば免疫系の細胞上で発現されるＦｃε受容体も活性化できる。

イプシロン（ε）重鎖は、ＩｇＥ抗体にとって決定的であり、Ｎ末端可変ドメインＶＨと、４つの定常ドメインＣε１～Ｃε４とを含む。他の抗体アイソタイプと同様に、可変ドメインは、抗原特異性を与え、定常ドメインは、アイソタイプ特異的エフェクター機能を動員する。

ＩｇＥは、補体を固定できず、単核細胞、ＮＫ細胞及び好中球の表面上で発現されるＦｃ受容体であるＦｃγＲＩ、ＲＩＩ及びＲＩＩＩと結合しない点で、より豊富なＩｇＧアイソタイプとは異なる。しかし、ＩｇＥは、様々な免疫細胞、例えば肥満細胞、好塩基球、単球／マクロファージ、好酸球上の「高親和性」ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ、Ｋａ．１０^１１Ｍ^－１）、並びに炎症及び抗原提示細胞（例えば単球／マクロファージ、血小板、樹状細胞、Ｔ及びＢリンパ球）上で発現されるＣＤ２３としても知られる「低親和性」受容体ＦｃεＲＩＩ（Ｋａ．１０^７Ｍ^－１）と非常に特異的な相互作用ができる。

これらの受容体相互作用を担うＩｇＥの部位は、Ｃε鎖上のペプチド配列にマッピングされ、異なる。ＦｃεＲＩ部位は、Ｇｌｎ３０１とＡｒｇ３７６との間の残基により創出される割れ目にあり、Ｃε２とＣε３ドメインとの間の接合部を含む（Helm, B. et al. (1988) Nature 331, 180183）。ＦｃεＲＩＩ結合部位は、Ｃε３周囲残基Ｖａｌ３７０内に位置する（Vercelli, D. et al. (1989) Nature 338, 649-651）。２つの受容体を区別する主な違いは、ＦｃεＲＩは単量体Ｃεに結合するが、ＦｃεＲＩＩは二量体Ｃεとのみ結合し、すなわち２つのＣε鎖は会合しなければならない。ＩｇＥは、インビボでグリコシル化されるが、ＦｃεＲＩ及びＦｃεＲＲＩＩとの結合に必要ではない。グリコシル化がないと、結合は実際のところわずかに強くなる（Vercelli, D. et al. (1989)et.既出）。

よって、Ｆｃε受容体との結合及び関係するエフェクター機能は、抗体の重鎖定常ドメインにより、特に抗体のＦｃ領域を一緒に形成するドメインにより典型的に媒介される。本明細書に記載する抗体は、少なくともＩｇＥ抗体の一部、例えばＩｇＥ、好ましくはヒトＩｇＥに由来する１又は２以上の定常ドメインを典型的に含む。特定の実施形態では、抗体は、Ｃε１、Ｃε２、Ｃε３及びＣε４から選択される１又は２以上のドメイン（ＩｇＥに由来する）を含む。一実施形態では、抗体は、少なくともＣε２及びＣε３、より好ましくは少なくともＣε２、Ｃε３及びＣε４を含み、好ましくは、ドメインは、ヒトＩｇＥに由来する。一実施形態では、抗体は、イプシロン（ε）重鎖、好ましくはヒトε重鎖を含む。

ヒトＩｇＥに由来する定常ドメインのアミノ酸配列を、例えば図１及び２に示す（配列番号１及び２、太字でないテキスト）。ヒトＩｇＥに由来する定常ドメイン、特にＣε１、Ｃε２、Ｃε３及びＣε４ドメインをコードするヌクレオチド配列は、例えば国際公開第２０１３／０５０７２５号パンフレットにも開示されている。他のヒト及び哺乳動物ＩｇＥ、並びにヒトＣε１、Ｃε２、Ｃε３及びＣε４ドメイン並びにヒトε重鎖配列を含むそれらのドメインのアミノ酸配列は、当該技術において知られており、公共でアクセスできるデータベースから入手可能である。例えば、ヒト免疫グロブリン配列のデータベースは、国際免疫遺伝子情報システム（ＩＭＧＴ（登録商標）、International ImMunoGeneTics Information System）ウェブサイトからhttp://www.imgt.orgにてアクセスできる。一例として、種々のヒトＩｇＥ重（ε）鎖アレル及びそれらの個別の定常ドメイン（Ｃε１～４）の配列は、http://www.imgt.org/IMGT_GENE-DB/GENElect?query=2+IGHE&species=Homo+sapiensにてアクセスできる。

好ましい抗ＦＲαＩｇＥ抗体
一実施形態では、抗ＦＲα抗体は、配列番号４に規定するアミノ酸配列の少なくとも一部を含む、例えば配列番号４の少なくとも２０、３０、５０若しくは１００アミノ酸、又は配列番号４の全長、又は配列番号４に存在する１、２若しくは３つのＣＤＲ（例えばＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＩＭＧＴに従って定義される）を含むＶＨドメインを含む。

一実施形態では、抗ＦＲα抗体は、配列番号３に規定するアミノ酸配列の少なくとも一部を含む、例えば配列番号３の少なくとも２０、３０、５０若しくは１００アミノ酸、又は配列番号３の全長、又は配列番号３に存在する１、２若しくは３つのＣＤＲ（例えばＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＩＭＧＴに従って定義される）を含むＶＬドメインを含む。

一般的に、上で規定する配列の機能的断片を、本発明において用いることができる。機能的断片は、断片が抗体に存在する場合に必要な活性を保持する（例えばＦＲα及び／又はＦｃε受容体との特異的結合）ことを条件として、上で特定する任意の長さのものであり得る（例えば、少なくとも５０、１００、３００若しくは５００ヌクレオチド、又は少なくとも５０、１００、２００若しくは３００アミノ酸）。

上記のアミノ酸及びヌクレオチド配列のバリアントも、得られる抗体がＦｃε受容体に結合することを条件として、本発明において用いることができる。典型的に、このようなバリアントは、上で特定する配列の１つと高い配列同一性を有する。

アミノ酸又はヌクレオチド配列間の類似性は、配列間の類似性に関して表され、そうでなければ配列同一性といわれる。配列同一性は、パーセンテージ同一性（又は類似性又は相同性）に関して頻繁に測定される。パーセンテージが高いと、２つの配列間の類似性がより高い。アミノ酸又はヌクレオチド配列のホモログ又はバリアントは、標準的な方法を用いてアラインメントさせた場合に、比較的高い程度の配列同一性を有する。

比較のための配列のアラインメントの方法は、当該技術において公知である。種々のプログラム及びアラインメントアルゴリズムは、Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482, 1981; Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970; Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444, 1988; Higgins and Sharp, Gene 73:237, 1988; Higgins and Sharp, CABIOS 5:151, 1989; Corpet et al., Nucleic Acids Research 16:10881, 1988及びPearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444, 1988に記載されている。Altschul et al., Nature Genet. 6:119, 1994は、配列アラインメント法及び相同性計算の詳細な考察を示す。

ＮＣＢＩベーシックローカルアラインメント検索ツール（ＢＬＡＳＴ、Basic Local Alignment Search Tool）（Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403, 1990）は、配列分析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ及びｔｂｌａｓｔｘと連携して用いるために、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ、National Center for Biotechnology Information, Bethesda, Md.）を含むいくつかの情報源から、そしてインターネットで入手可能である。このプログラムを用いて配列同一性をどのように決定するかについての説明は、インターネットのＮＣＢＩウェブサイトで入手可能である。

抗体のホモログ及びバリアント（例えば抗ＦＲα抗体又はそのドメイン、例えばＶＬ、ＶＨ、ＣＬ又はＣＨドメイン）は、例えばＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ２．０、デフォルトパラメータに設定されたギャップありｂｌａｓｔｐを用いて抗体又はそのドメインのアミノ酸配列との全長アラインメントにわたって計数して、元の配列（例えば上に規定する配列）と少なくとも約７５％、例えば少なくとも約８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％配列同一性を典型的に有する。約３０アミノ酸より多いアミノ酸配列の比較のために、デフォルトパラメータ（ギャップ存在コスト１１、及び残基あたりのギャップコスト１）に設定されたデフォルトＢＬＯＳＵＭ６２行列を用いて、Ｂｌａｓｔ２配列関数を用いる。短いペプチド（約３０アミノ酸未満）をアラインメントする場合、アラインメントは、デフォルトパラメータ（オープンギャップ９、伸長ギャップ１ペナルティ）に設定されたＰＡＭ３０行列を用いるＢｌａｓｔ２配列関数を用いて行うべきである。参照配列とさらにより大きい類似性を有するタンパク質は、この方法により評価した場合に、パーセンテージ同一性が増加し、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を示す。配列全体未満を配列同一性のために比較する場合に、ホモログ及びバリアントは、１０～２０アミノ酸の短いウィンドウにわたって少なくとも８０％の配列同一性を典型的に有し、参照配列との類似性に依存して、少なくとも８５％又は少なくとも９０％若しくは９５％の配列同一性を有し得る。このような短いウィンドウにわたって配列同一性を決定する方法は、インターネットのＮＣＢＩウェブサイトで入手可能である。当業者は、これらの配列同一性の範囲は、手引きのためだけに提示することを認識している。提示する範囲外になる非常に著しいホモログが得られることも全くあり得る。

典型的に、バリアントは、元のアミノ酸又は核酸配列と比較して、１又は２以上の保存アミノ酸置換を含み得る。保存置換は、標的抗原（例えばＦＲα）及び／又はＦｃε受容体との抗体の親和性に実質的に影響又は減少しない置換である。例えば、ＦＲαと特異的に結合するヒト抗体は、元の配列（例えば上に規定するもの）と比較して１まで、２まで、５まで、１０まで又は１５までの保存置換を含み、ＦＲαポリペプチドと特異的結合を保持し得る。保存的変動との用語は、抗体が標的抗原（例えばＦＲα）と特異的に結合することを条件として、非置換の親のアミノ酸の場所において置換されたアミノ酸の使用も含む。非保存的置換は、標的抗原（例えばＦＲα）及び／又はＦｃε受容体との活性又は結合を低減するものである。

保存的置換により交換できる機能的類似アミノ酸は、当業者に公知である。以下の６つの群は、互いに保存的置換とみなされるアミノ酸の例である：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；及び６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。

いくつかの実施形態では、ＩｇＥ抗体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を産生するために、細胞毒性部分、例えば、がん細胞を（直接）死滅させることができる化学療法剤にコンジュゲートしてもよい。抗体は、当技術分野で知られているように、細胞毒性部分に直接コンジュゲートしてもよいし、又はリンカーを介してもよい。例えば、そのような細胞毒性剤の一例は、ＩｇＧ ＡＤＣミルベツキシマブソラフタンシンに存在する強力なチューブリン標的薬剤であるメイタンシノイドＤＭ４である。他の実施形態では、ＩｇＥ抗体は、化学療法剤、例えば、ゲムシタビン（２’，２’－ジフルオロ２’デオキシシチジン）の別の（例えば、同時又は逐次）投与と組み合わせて、対象に投与してもよい。

しかし、好ましい実施形態では、ＩｇＥ抗体は細胞毒性部分を欠如しており、及び／又は単剤療法として投与される。抗ＦＲα ＩｇＥ抗体は、細胞毒性薬物（ＡＤＣの形態又は化学療法との組み合わせのいずれか）の投与を必要とせずに、低ＦＲα発現の腫瘍を治療できることが驚くべきことに見出された。

よって、抗体は、（グリコシル化されていてもよい）ポリペプチド鎖を含む、それからなる、又は本質的にそれからなり得る。例えば、抗体は、１又は２以上（好ましくは、４つ）のポリペプチド鎖、例えば、２つの免疫グロブリン重鎖及び任意に２つのイムノグロブリン軽鎖を含む、それらからなる、又は本質的にそれらからなり得る。好ましくは、重鎖及び／又は軽鎖は、ＩｇＥ抗体の１又は２以上のドメインを含む。

特に、抗体は抗体薬物複合体（ＡＤＣ）ではないことが好ましい。よって、抗体は、細胞毒性効果を有するさらなる薬物又は基、例えば、がん細胞を（直接）死滅させることができる化学療法薬物を欠如していてもよい。抗体は、細胞毒性部分をポリペプチドにコンジュゲートさせるためのリンカー又は他の基をさらに欠如していてもよい。

さらなるＩｇＥ抗体
上記のように、好ましい実施形態では、ＩｇＥ抗体は、ＦＲαと結合する。好ましくは、ＩｇＥ抗体は、特にそのような抗原を発現するがん細胞に対して、細胞毒性（例えばＡＤＣＣ）及び／又は食作用（ＡＤＣＰ）を誘導できる。

いくつかの実施形態では、可変ドメインの１又は２以上及び／又はＣＤＲの１又は２以上、好ましくは少なくとも３つのＣＤＲ、又はより好ましくは６つ全てのＣＤＲは、以下の抗体の１又は２以上に由来してもよい：ＭＯｖ１９（Coney et al., Cancer Res. 1991 Nov 15;51(22):6125-32; Coney et al., Cancer Res. 1994 May 1;54(9):2448-55）、ミルベツキシマブソラフタンシン（ＩＭＧＮ８５３、Ab et al., Molecular Cancer Therapeutics 14(7):1605-13, July 2015で記載された通り）、又はファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ－００３、Ebel et al., Cancer Immun. 2007;7:6; Sato and Itamochi, OncoTargets and Therapy 2016:9 1181-1188で記載された通り）。ミルベツキシマブソラフタンシン（ＩＭＧＮ８５３）は、ヒト化ＭＯｖ１９（Ｍ９３４６Ａ）抗体、ｓｕｌｆｏＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタン酸）リンカー、及びＤＭ４メイタンシノイド（Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（４－メルカプト－４－メチル－１－オキソペンチル）メイタンシン）を含むイムノコンジュゲートのことをいう。

例えば、ＩｇＥ抗体は、以下の可変ドメイン配列、又はそれに由来する１～６つのＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴに従って定義される）を含んでいてもよい：
ファーレツズマブＶＨドメイン：
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSGYGLSWVRQAPGKGLEWVAMISSGGSYTYYADSVKGRFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARHGDDPAWFAYWGQGTPVTVSS（配列番号７）
ファーレツズマブＶＬ（Ｖ_κ）ドメイン：
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSISSNNLHWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSYPYMYTFGQGTKVEIK（配列番号８）

他の実施形態では、ＩｇＥ抗体は、例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第２０１２／０００９１８１号明細書又は国際公開第２０１８／２１３２６０号パンフレットに定義されているように、抗ＦＲα（すなわち、抗ＦＯＬＲ１）抗体又はその抗原結合断片の１又は２以上の可変ドメイン配列又はＣＤＲを含んでいてもよい。例えば、ＩｇＥ抗体は、以下の可変ドメイン配列、又はそれらに由来する１～６つのＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴに従って定義される）を含んでいてもよい：
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＨドメイン（配列番号９）：
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSS
ｈｕＭＯＶ１９ ＶＬドメイン（配列番号１０）：
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR

例えば、ＩｇＥ抗体は、以下のＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔに従って定義される）の１又は２以上（例えば、６つ全て）を含んでいてもよい：
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＨ－ＣＤＲ１（配列番号１１）：GYFMN
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号１２）：RIHPYDGDTFYNQKFQG
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号１３）：YDGSRAMDY
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号１４）：KASQSVSFAGTSLMH
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１５）：RASNLEA
ｈｕＭＯｖ１９ ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１６）：QQSREYPYT

別の実施形態では、抗体は、ミルベツキシマブ又はファーレツズマブが結合するエピトープに特異的に結合するキメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体である。ＩｇＥ抗体は、上述のように、１又は２以上のＩｇＥ定常ドメイン、例えば、Ｃε１～Ｃε４ドメインをさらに含んでいてもよい。

抗体及び核酸の生成
本明細書に示すポリペプチド（それらに限定されないが、抗体及びその機能的断片を含む）をコードする核酸分子（ポリヌクレオチドとしても知られる）は、本明細書に示すアミノ酸配列、当該技術において入手可能な配列、及び遺伝子コードを用いて、当業者が容易に生成できる。さらに、当業者は、機能的に等価な核酸、例えば配列は異なるが同じエフェクター分子又は抗体配列をコードする核酸を含む様々なクローンを容易に構築できる。よって、抗体をコードする核酸が、本発明において提供される。

標的抗原（例えばＦＲα）に特異的に結合する抗体又はその機能的断片をコードする核酸配列は、例えば適当な配列のクローニング、又は例えばNarang et al., Meth. Enzymol. 68:90-99, 1979のホスホトリエステル法、Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109-151, 1979のホスホジエステル法、Beaucage et al., Tetra. Lett. 22:1859-1862, 1981のジエチルホスホロアミダイト法、例えばNeedham-VanDevanter et al., Nucl. Acids Res. 12:6159-6168, 1984に記載される自動化合成機を例えば用いるBeaucage & Caruthers, Tetra. Letts. 22(20):1859-1862, 1981により記載される固相ホスホロアミダイトトリエステル法、及び米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固相支持法の方法による直接化学合成を含む任意の適切な方法により調製できる。化学合成は、一本鎖オリゴヌクレオチドを生成する。これは、相補配列とのハイブリダイゼーション、又は一本鎖を鋳型として用い、ＤＮＡポリメラーゼを用いる重合により、二本鎖ＤＮＡに変換できる。当業者は、ＤＮＡの化学合成が、約１００塩基の配列に一般的に限定され、より長い配列は、短い配列のライゲーションにより得ることができることを認識している。

抗体又はその機能的断片をコードする例示的核酸は、クローニング技術により調製できる。適当なクローニング及び配列決定技術の例、並びに当業者に多くのクローニングを実行させるのに十分な指示は、例えばMolecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., vol. 1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989)及びCurrent Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds 1995 supplement))で見出すことができる。生物学的試薬及び実験機器の製造業者からの製品情報も、有用な情報をもたらす。このような製造業者は、SIGMA Chemical Company社（Saint Louis, Mo.）、R&D Systems社（Minneapolis, Minn.）、Pharmacia Amersham社（Piscataway, N.J.）、CLONTECH Laboratories, Inc.社（Palo Alto, Calif.）、Chem Genes Corp.社、Aldrich Chemical Company社（Milwaukee, Wis.）、Glen Research, Inc.社、GIBCO BRL Life Technologies, Inc.社（Gaithersburg, Md.）、Fluka Chemica-Biochemika Analytika社（Fluka Chemie AG社, Buchs, Switzerland）、Invitrogen社（Carlsbad, Calif.）及びApplied Biosystems社（Foster City, Calif.）、並びに当業者に知られる多くの他の商業的供給源を含む。

天然抗体をコードする核酸を改変して、本明細書に記載する抗体を形成できる。部位特異的突然変異誘発による改変は、当該技術において公知である。核酸は、増幅法によっても調製できる。増幅法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ、polymerase chain reaction）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ、ligase chain reaction）、転写ベースの増幅システム（ＴＡＳ、transcription-based amplification system）、自家持続配列複製システム（３ＳＲ、self-sustained sequence replication system）を含む。広範なクローニング法、宿主細胞及びインビトロ増幅法は、当業者に公知である。

一実施形態では、抗体は、１又は２以上の抗体ドメイン（例えばヒトＦＲαに結合するマウスＩｇＧ１重鎖可変領域）をコードするｃＤＮＡを、１又は２以上のさらなる抗体ドメイン（例えばヒト重鎖ε定常領域）をコードするｃＤＮＡを含むベクターに挿入することにより、調製する。挿入は、機能的抗体領域を含む１つの連続ポリペプチドとしてインフレームで抗体ドメインが読まれるように行われる。

一実施形態では、重鎖定常領域をコードするｃＤＮＡを重鎖可変領域にライゲーションして、定常領域が抗体のカルボキシル末端に位置するようにする。重鎖可変及び／又は定常領域を、その後、ジスルフィド結合を用いて抗体の軽鎖可変及び／又は定常領域にライゲーションできる。

抗体又はその機能的断片をコードする核酸を一旦単離及びクローニングしたら、所望のタンパク質は、組換え操作した細胞、例えば細菌、植物、酵母、昆虫及び哺乳動物細胞内で発現できる。当業者は、大腸菌（E. coli）、他の細菌宿主、酵母及び種々の高等真核細胞、例えばＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ及び骨髄腫株化細胞を含む、タンパク質発現のために利用可能な多数の発現系を知っていると考えられる。

抗体又はその断片をコードする１又は２以上のＤＮＡ配列は、適切な宿主細胞へのＤＮＡ移入によりインビトロで発現できる。細胞は、原核又は真核であり得る。この用語は、対象宿主細胞の任意の子孫も含む。複製中に起こり得る変異のために、全ての子孫が親の細胞と同一ではないことが理解される。外来ＤＮＡが継続的に宿主に維持されることを意味する安定移入の方法は、当該技術において知られている。所望の抗体を発現するハイブリドーマも、本開示に含まれる。

本明細書に記載する単離抗体及び抗体断片をコードする核酸の発現は、ＤＮＡ又はｃＤＮＡを、プロモーター（これは、構成的又は誘導的のいずれかである）に作動可能に連結し、その後、発現カセットに組み込むことにより達成できる。カセットは、原核又は真核生物のいずれかにおける複製及び組込みのために適している。典型的な発現カセットは、タンパク質をコードするＤＮＡの発現の調節に有用な特異的配列を含む。例えば、発現カセットは、適当なプロモーター、エンハンサー、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列、タンパク質コード配列の前の開始コドン（すなわちＡＴＧ）、イントロンのためのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの正しい翻訳を可能にするその遺伝子の正しいリーディングフレームの維持、並びに停止コドンを含み得る。

クローニングされた遺伝子の高い発現レベルを得るために、転写を駆動する強いプロモーター、翻訳開始のためのリボソーム結合部位、及び転写／翻訳ターミネーターを最小限で含む発現カセットを構築することが望ましい。大腸菌について、これは、プロモーター、例えばＴ７、ｔｒｐ、ｌａｃ又はラムダプロモーター、リボソーム結合部位、及び好ましくは転写終結シグナルを含む。真核細胞について、制御配列は、例えば免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０又はサイトメガロウイルスに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーと、ポリアデニル化配列とを含むことができ、スプライスドナー及びアクセプター配列をさらに含み得る。カセットは、公知の方法、例えば大腸菌について形質転換又はエレクトロポレーション、及び哺乳動物細胞についてリン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション又はリポフェクションにより選択された宿主細胞に移入できる。カセットにより形質転換された細胞は、カセットに含まれる遺伝子、例えばａｍｐ、ｇｐｔ、ｎｅｏ及びｈｙｇ遺伝子により与えられる抗生物質耐性により選択できる。

宿主が真核生物である場合、リン酸カルシウム共沈、従来の機械的手順、例えばマイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソームで覆ったプラスミドの挿入のようなＤＮＡトランスフェクション法、又はウイルスベクターを用い得る。真核細胞は、抗体、標識抗体又はその機能的断片と、選択的形質をコードする第２の外来ＤＮＡ分子、例えば単純ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子とをコードするポリヌクレオチド配列で同時形質転換できる。別の方法は、真核ウイルスベクター、例えばサルウイルス４０（ＳＶ４０、simian virus 40）又はウシパピローマウイルスを用いて真核細胞を一過的に感染又は形質転換してタンパク質を発現させることである（例えば、Eukaryotic Viral Vectors, Cold Spring Harbor Laboratory, Gluzman ed., 1982を参照されたい）。当業者は、高等真核細胞、例えばＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ及び骨髄腫株化細胞を含む細胞においてタンパク質を生成するために有用な発現系、例えばプラスミド及びベクターを容易に用いることができる。

改変は、本明細書に記載するポリペプチド（例えばヒトＦＲα特異的ＩｇＥ抗体）をコードする核酸に対して、その生物活性を減弱することなく行うことができる。いくつかの改変は、クローニング、発現又は標的化分子の融合タンパク質への組込みを容易にするために行うことができる。そのような改変は、当業者に公知であり、例えば、停止コドン、開始部位をもたらすためにアミノ末端に付加されたメチオニン、簡便な位置に制限部位を創出するためにいずれかの末端に付加されたアミノ酸、又は精製ステップを助けるために付加されたアミノ酸（例えばポリＨｉｓ）を含む。組換え法に加えて、本開示の抗体は、当該技術において公知の標準的なペプチド合成を用いて全体又は部分的に構築することもできる。

一旦発現されると、組換え抗体は、硫酸アンモニウム沈殿、親和性カラム、カラムクロマトグラフィーなどを含む当該技術における標準的な手順に従って精製できる（全般的に、R. Scopes, PROTEIN PURIFICATION, Springer-Verlag, N.Y., 1982を参照されたい）。抗体、イムノコンジュゲート及びエフェクター分子は、１００％純粋である必要はない。所望により部分的又は均質に一旦精製されると、治療に用いるならば、ポリペプチドは、内毒素を実質的に含むべきでない。

頻繁に、大腸菌又は他の細菌からの機能的異種タンパク質は、封入体から単離され、強い変性剤を用いる可溶化と、その後のリフォールディングを必要とする。可溶化ステップ中に、当該技術において知られるように、ジスルフィド結合を分けるために還元剤が存在しなければならない。還元剤を含む例示的な緩衝液は、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ８、６Ｍグアニジン、２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．３Ｍジチオエリスリトール（ＤＴＥ、dithioerythritol）である。ジスルフィド結合の再酸化は、Saxena et al., Biochemistry 9: 5015-5021, 1970に記載され、特にBuchner et al.、既出に記載されるように、還元及び酸化形での低分子量チオール試薬の存在により起こり得る。

再生は、変性及び還元されたタンパク質をリフォールディング緩衝液中で（例えば１００倍）希釈することにより典型的に達成される。例示的な緩衝液は、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、０．５Ｍ Ｌ－アルギニン、８ｍＭ酸化グルタチオン（ＧＳＳＧ）及び２ｍＭ ＥＤＴＡである。

二本鎖抗体精製プロトコールの改変として、重鎖及び軽鎖領域を別々に可溶化及び還元し、次いでリフォールディング溶液中で組み合わせる。一方のタンパク質が他方の５倍モル過剰を超えないモル比で２つのタンパク質を混合した場合に、例示する収量が得られる。過剰の酸化されたグルタチオン又は他の酸化性低分子量化合物を、酸化還元シャッフリングが完了した後にリフォールディング溶液に加えることができる。

組換え法に加えて、本明細書に開示する抗体、標識抗体及びその機能的断片は、標準的なペプチド合成を用いて全体的又は部分的に構築することもできる。約５０アミノ酸未満の長さのポリペプチドの固相合成は、配列のＣ末端アミノ酸を不溶性支持体に結合させた後に、配列中の残りのアミノ酸を逐次的に付加することにより達成できる。固相合成の技術は、Barany & Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology. Vol. 2: Special Methods in Peptide Synthesis, Part A. pp. 3-284; Merrifield et al., J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2156, 1963及びStewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chem. Co., Rockford, Ill., 1984により記載される。より長いタンパク質は、短い断片のアミノ及びカルボキシル末端の縮合により合成できる。

カルボキシル末端の端の活性化によるペプチド結合の形成方法（例えば、カップリング試薬Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドを用いることによる）は、当該技術において公知である。

一実施形態では、抗体、核酸、発現ベクター、宿主細胞又は他の生物学的生成物を単離する。「単離する」は、生成物が、該成分が天然に存在する環境（例えば細胞）中の他の生物学的成分、すなわち他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、タンパク質並びにオルガネラから実質的に離れて分けられたか又は精製されたことを意味する。「単離された」核酸及び抗体は、標準的な精製法により精製された核酸及び抗体を含む。この用語は、宿主細胞中で組換え発現により調製された核酸及び抗体、並びに化学合成された核酸も包含する。

組成物及び治療法
担体と、１又は２以上の治療用ＩｇＥ抗体又はその機能的断片とを含む組成物が、本発明で提供される。組成物は、対象への投与のための単位剤形で調製できる。抗体は、全身又は局所（例えば腫瘍内）投与のために処方され得る。一例では、治療用ＩｇＥ抗体は、静脈内投与又は皮下投与などの非経口投与用に処方される。

投与用の組成物は、薬学的に許容される担体、例えば水性担体に溶解された抗体（又はその機能的断片）の溶液を含み得る。種々の水性担体、例えば緩衝生理食塩水などを用いることができる。これらの溶液は、滅菌され、望ましくない物質をほぼ含まない。これらの組成物は、従来のそして公知の滅菌技術により滅菌できる。組成物は、生理的条件を近似するように、必要ならば、薬学的に許容される補助物質、例えばｐＨ調節及び緩衝剤、毒性調節剤など、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含んでいてよい。これらの処方物中の抗体及び賦形剤の濃度は変動でき、流体の体積、粘度、体重などに主に基づいて、選択される特定の投与形態及び対象の必要性に応じて、選択される。投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に知られているか又は明らかであり、Remington’s Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1995)のような刊行物により詳細に記載されている。

好ましい実施形態では、組成物は、例えば単回用量での対象への投与に適切なＩｇＥ抗体の規定量を含む単位剤形として提供される。単位剤形は、例えば単独の容器、バイアル、予め充填されたシリンジなどに個別に包装され得る。単位剤形は、対象への即座の投与に適している（例えば生理的に許容される濃度の塩を含み得る）か、又は単位剤形は、（例えば使用前の滅菌生理食塩水での希釈のため）濃縮若しくは凍結乾燥された形で提供され得る。

抗ＦＲα ＩｇＥ抗体は、任意の適切な用量で投与され得る。しかし、本明細書で記載した好ましい実施形態では、医薬組成物（例えば、静脈内投与用）の典型的な単位用量は、５０ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含む。例えば、（すなわち単位剤形の）組成物は、４０ｍｇ、３０ｍｇ、２５ｍｇ、２０ｍｇ、１５ｍｇ、１０ｍｇ、５ｍｇ、３ｍｇ又は１ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含み得る。組成物は、少なくとも１０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、５００μｇ、７００μｇ、１ｍｇ、３ｍｇ、５ｍｇ又は１０ｍｇのＩｇＥ抗体を含み得る。好ましい実施形態では、組成物は、１０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、３００μｇ～５０ｍｇ、３００μｇ～３０ｍｇ、３００μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～５０ｍｇ、５００μｇ～３０ｍｇ、５００μｇ～１０ｍｇ、５００μｇ～３ｍｇ、７００μｇ～５０ｍｇ、７００μｇ～３０ｍｇ、７００μｇ～１０ｍｇ、７００μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～５ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ又は約７００μｇのＩｇＥ抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１又は２以上の以下の量を除く１又は２以上の上記の範囲内の量のＩｇＥ抗体を含み得る：１μｇ、５μｇ、１０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、５００μｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ又は１５ｍｇ。例えば、組成物は、２μｇ～９μｇ、１１μｇ～９９μｇ、１０１μｇ～４９９μｇ、５０１～９９９μｇ又は２ｍｇ～９ｍｇを含み得る。

対象に投与されるＩｇＥ抗体の投与量は、対象の体重に基づくことがある。よって、対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、例えば１ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。好ましくは、ＩｇＥ抗体は、例えば（１回の投与あたり）０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．０１ｍｇ／ｋｇ未満の用量で対象に投与できる。対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、少なくとも０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇであり得る。好ましい実施形態では、対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、０．００１～１ｍｇ／ｋｇ、０．００３～０．７ｍｇ／ｋｇ、０．００５～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．００５～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．００５～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．００７～０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．００７～０．１５ｍｇ／ｋｇであり得る。いくつかの実施形態では、対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、１又は２以上の以下の投与量を除く１又は２以上の上に規定する範囲内であり得る：１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ又は０．５ｍｇ／ｋｇ。例えばＩｇＥ抗体の用量は、２～９μｇ／ｋｇ、１１～９９μｇ／ｋｇ、１０１～４９９μｇ／ｋｇ又は０．５１～０．７ｍｇ／ｋｇであり得る。

本発明の実施形態では、上記のＩｇＥ抗体の単位剤形は、多くて１週間に１回で投与され、例えばＩｇＥ抗体の最大週用量は、５０ｍｇ、４０ｍｇ、３０ｍｇ、２５ｍｇ、２０ｍｇ、１５ｍｇ、１０ｍｇ、５ｍｇ、３ｍｇ又は１ｍｇである。例えば、ＩｇＥ抗体の週用量は、１０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、３００μｇ～５０ｍｇ、３００μｇ～３０ｍｇ、３００μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～５０ｍｇ、５００μｇ～３０ｍｇ、５００μｇ～１０ｍｇ、５００μｇ～３ｍｇ、７００μｇ～５０ｍｇ、７００μｇ～３０ｍｇ、７００μｇ～１０ｍｇ、７００μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～５ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ、又は約７００μｇであり得る。ＩｇＥ抗体の週用量は、対象の体重に応じて決定することもでき、例えば、ＩｇＥ抗体は、例えば０．７ｍｇ／ｋｇ／週、０．５ｍｇ／ｋｇ／週、０．３ｍｇ／ｋｇ／週、０．１ｍｇ／ｋｇ／週、０．０７ｍｇ／ｋｇ／週、０．０５ｍｇ／ｋｇ／週、０．０３ｍｇ／ｋｇ／週又は０．０１ｍｇ／ｋｇ／週未満の用量で対象に投与できる。好ましい実施形態では、対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、０．００１～１ｍｇ／ｋｇ／週、０．００３～０．７ｍｇ／ｋｇ／週、０．００５～０．５ｍｇ／ｋｇ／週、０．００５～０．１ｍｇ／ｋｇ／週、０．００５～０．０５ｍｇ／ｋｇ／週、０．００７～０．０３ｍｇ／ｋｇ／週又は０．００７～０．１５ｍｇ／ｋｇ／週であり得る。いくつかの実施形態では、対象に投与されるＩｇＥ抗体の用量は、１又は２以上の以下の投与量を除く１又は２以上の上に規定する範囲内であり得る：１μｇ／ｋｇ／日（７μｇ／ｋｇ／週）、１０μｇ／ｋｇ／日（７０μｇ／ｋｇ／週）又は１００μｇ／ｋｇ／日（０．７ｍｇ／ｋｇ／週）。例えば、ＩｇＥ抗体の用量は、２～６μｇ／ｋｇ／週、８～６９μｇ／ｋｇ／週又は７１～６９９μｇ／ｋｇ／週であり得る。

一実施形態では、医薬組成物は、クエン酸ナトリウム、Ｌ－アルギニン、ショ糖、ポリソルベート２０及び／又は塩化ナトリウムから選択される１又は２以上の賦形剤を含む液体である。好ましくは、組成物は、６．０～８．０、例えば約６．５のｐＨを有する。賦形剤の好ましい濃度は、０．０５～０．５Ｍ（例えば約０．１Ｍ）のクエン酸ナトリウム、１０～５０ｇ／Ｌ（例えば約３０ｇ／Ｌ）のＬ－アルギニン、１０～１００ｇ／Ｌ（例えば約５０ｇ／Ｌ）のショ糖、０．０１～０．０５％ｗ／ｗ（例えば０．０２％ｗ／ｗ）のポリソルベート２０を含む。一実施形態では、ＩｇＥ抗体は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～１０ｍｇ／ｍｌ又は０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、例えば約１ｍｇ／ｍｌの濃度でこのような処方物に存在する。いくつかの実施形態では、このような組成物は、単位剤形として、例えば約１ｍｇのＩｇＥ抗体を含む約１ｍｌ体積の溶液中に、例えば２ｍｌのＩ型ガラスバイアル中に処方できる。組成物は、対象への投与前に、例えば２５０ｍｌの生理食塩水中に１ｍｌの量の組成物で、滅菌生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ）に希釈できる。

抗体は、凍結乾燥形で提供し、投与前に滅菌水で再水和できるが、既知の濃度の滅菌溶液で提供することもできる。抗体溶液は、次いで、０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰを含む注入袋に加えられ、対象に投与される。抗体薬物の投与について当該技術において相当の経験があり、これらは、１９９７年のRITUXAN（登録商標）の承認以来、米国において市販されている。抗体は、静脈内注入又は急速投与よりもむしろ緩慢注入により投与できる。一例では、より多い負荷用量を投与し、その後に、より低いレベルの維持用量を投与する。例えば、初期負荷用量を９０分程度の期間の間に注入した後に、４～８週間にわたって毎週の維持用量を、以前の用量に良好な耐容性があるならば、３０分の期間にわたって注入することができる。

抗体（又はその機能的断片）は、細胞、例えばがん細胞の増殖を遅延又は阻害するために投与できる。これらの応用において、治療有効量の抗体を、がん細胞の増殖、複製若しくは転移を阻害、又はがんの徴候若しくは症状を阻害するのに十分な量で対象に投与する。いくつかの実施形態では、抗体は、転移の発生を阻害若しくは妨げるか、又は転移、例えば微小転移、例えば所属リンパ節への微小転移のサイズ若しくは数を減らすために対象に投与される（Goto et al., Clin. Cancer Res. 14(11):3401-3407, 2008）。

よって、いくつかの実施形態では、ＩｇＥ抗体は、がんを治療及び／又はがんの進行を遅延若しくは妨げるために用いられる。がんの「進行を遅延又は妨げる」は、例えば、がんが抗体の投与後ある期間、例えば少なくとも６週間、少なくとも１２週間、少なくとも６か月又は少なくとも１２か月少なくとも安定であることを意味する。「安定な」疾患は、例えば２０％未満のＲＥＣＩＳＴスコアの変化として定義できる。

ＲＥＣＩＳＴ（固形がんの治療効果判定のためのガイドライン）評価は、がん治療薬での治療の後に患者の疾患が改善したか、ほぼ同じであるか又は悪化したかを決定するための単純な方法であり、抗がん剤の臨床試験において一般的に用いられる。ＲＥＣＩＳＴ基準は、例えばEisenhauer et al., New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1), European Journal Of Cancer 45 (2009) 228-247に明記されている。ＲＥＣＩＳＴは、調べた最少の合計を参照として、標的病変の直径の合計における少なくとも２０％の増加として進行性疾患（ＰＤ）を定義する。安定疾患は、部分奏功（標的病変の直径の合計における少なくとも３０％の減少）となるのに十分な退縮でも、ＰＤとなるのに十分な増加でもないと定義され、すなわち＜２０％の増加が安定疾患と定義される。

本文脈において、「少なくとも安定」は、２０％未満のＲＥＣＩＳＴスコアの増加又は減少を含むことが認識される。よって、抗体は、疾患の進行を遅延若しくは妨げ得る（例えばがんの１若しくは２以上の徴候若しくは症状の出現を遅延若しくは妨げ、及び／又はがん細胞の増殖を阻害し、及び／又は転移を妨げ若しくは低減する）か、又は疾患を改善若しくは疾患の寛解を促進し得る（例えばがんの１若しくは２以上の徴候若しくは症状を低減若しくは阻害し、及び／又はがん細胞を死滅させる）。

対象
適切な対象は、がん、例えばＦＲαを発現するがん、例えばそれらに限定されないが、皮膚がん（例えば黒色腫）、肺がん、前立腺がん、扁平上皮癌（例えば頭頚部扁平上皮癌）、乳がん（それらに限定されないが、基底乳癌、乳管癌及び小葉乳癌を含む）、白血病（例えば急性骨髄性白血病及び１１ｇ２３陽性急性白血病）、リンパ腫、神経稜腫瘍（例えば星状細胞腫、神経膠腫又は神経芽腫）、卵巣がん、大腸がん、胃がん、膵がん、骨がん（例えば脊索腫）、神経膠腫又は肉腫（例えば軟骨肉腫）と診断された対象を含み得る。好ましくは、抗体は、固形腫瘍を治療するために投与される。好ましくは、対象はヒトである。

治療有効量の抗体は、疾患の重篤度及び患者の健康の全身状態に依存する。治療有効量の抗体は、疾患の主観的軽減又は医師若しくは他の資格のある観察者が気づく客観的に同定可能な改善のいずれかをもたらすものである。これらの組成物は、別の化学療法剤とともに、同時又は逐次的に投与できる。

抗ＦＲα抗体は、低ＦＲα発現の腫瘍に罹患している対象を治療するために用いられる。このような対象は、中程度ＦＲα発現者又は高ＦＲα発現者とは対照的に、「低ＦＲα発現者」とよばれる場合がある。「低ＦＲα発現の腫瘍」及び「低ＦＲα発現者」という用語は、がん療法の分野ではよく理解されており、特定の患者群を説明するために頻繁に用いられる（例えば、Cristea et al., Journal of Clinical Oncology 2021 39:15_suppl, 5542; Martin et al. Gynecol Oncol. 2017 Nov; 147(2): 402-407を参照のこと）。よって、低腫瘍ＦＲα発現を有する患者のサブグループは、高ＦＲα発現者とは明確に区別される（例えば、SORAYA試験、ClinicalTrials.gov Identifier:NCT04296890を参照のこと）。

低ＦＲα発現の検出
低腫瘍ＦＲα発現は、公知の標準的な技術を用いて決定することができる。典型的に、ＦＲα発現は腫瘍からの生検試料で決定される。腫瘍組織から生検試料を取得するための技術は、そのような試料を処理するための組織病理学的技術と同様に、当技術分野で知られている。例えば、生検組織試料は、ホルマリンで固定してパラフィンに包埋するか、又は切片化する前に新たに処理して、光学顕微鏡分析及び画像化のために顕微鏡スライド上に配置してもよい。

パラフィン包埋切片のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色は、病理学分析のためにスライドガラス上で組織を可視化するためのデフォルトの技術である。免疫組織化学（ＩＨＣ、Immunohistochemistry）染色は、病理組織スライド内の細胞上でのタンパク質の発現を同定するための公知のアプローチである。染色によって、標的タンパク質が正常と比較して過剰発現している組織の外観は典型的に褐色になる。例えば、ＦＲαに対する抗体を用いることによって、その発現レベルが検出され得る。

腫瘍試料におけるＦＲα発現の検出のために適切な技術は、例えば、Zhao et al., “Development and Application of An Immunohistochemistry-based Clinical Assay for Evaluating Folate Receptor Alpha (FRα) Expression in the Clinical Setting”, Abstract 3400A, AACR annual meeting, April 18-22, 2015；Ab et al. (2015), Molecular Cancer Therapeutics 14(7):1605-13；Altwerger et al., Mol Cancer Ther. 2018 May; 17(5): 1003-1011 and Martin et al. “Gynecol Oncol. 2017 Nov; 147(2): 402-407に記載されている。例えば、ＦＲα発現は、Ventana FOLR1（FOLR-2.1）CDxアッセイを用いて決定することができ、すなわち、細胞はVentana Medical Systems社のDiscovery Ultra機器を用いて、抗体ＦＯＬＲ１－２．１で染色される（上記の引用及びClinicalTrials.gov Identifier：NCT04296890を参照）。

任意の適切な抗ＦＲα抗体、例えば、抗ＦＲαＩｇＧ抗体（ポリクローナル又はモノクローナル）をこのような方法で用いることができる。免疫組織化学における使用のために適切な様々な抗ＦＲα抗体は、商業的供給源、例えば、Thermofisher/Invitrogen社（カタログ番号PA5-42004）、Leica Biosystems社（例えば、ＢＮ３．２）、Enzo Life Sciences社（例えば、クローン５４８９０８、カタログ番号ENZ-ABS378-0100）、Abcam社（例えば、ａｂ６７４２２）、及びImmunogen社（３５３．２．１、ＦＯＬＲ１－２．１）から入手可能である。好ましくは、ＦＲαの検出に用いられる抗ＦＲα抗体は、例えば、Smith et al., “A novel monoclonal antibody for detection of folate receptor alpha in paraffin-embedded tissues”, Hybridoma (Larchmt). 2007 Oct;26(5):281-8, doi: 10.1089/hyb.2007.0512に記載されるように、ＢＮ３．２である。

「低ＦＲα発現の腫瘍」は、典型的には、対象における腫瘍細胞の５０％未満がＦＲαを発現することを意味する。好ましくは、対象における腫瘍細胞の４０％、３０％、２５％、２０％、又は１０％未満がＦＲαを発現する。これらの発現レベルは、典型的には、例えば、上述の方法を用いて、免疫組織化学によって検出可能な膜ＦＲα発現のことをいう。

上で引用した刊行物に記載されているように、ＦＲα発現は、組織試料中の膜ＦＲα発現を示す細胞のパーセンテージ及びＦＲα染色強度の両方に従って分類され得る。場合によっては、ＦＲα染色強度は０（アイソタイプ対照を超える検出可能なＦＲαはない）～３（高／強ＦＲα染色強度）のスケールで分類され得る。典型的には、１は低／弱ＦＲα染色強度を示し、２は中程度のＦＲα染色強度を示す。ＦＲα染色強度による分類はまた、ＦＲα陽性の腫瘍細胞のパーセンテージ（例えば、０～１００％）の決定と組み合わせることができる。

例えば、場合によっては、対象における腫瘍細胞の５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、又は１０％未満が、膜ＦＲαに中程度又は高（２＋）強度の染色を示す。例えば、一実施形態では、腫瘍細胞の２５％未満が、膜ＦＲαに中強度又は高（すなわち、２＋）強度の染色を示す。よって、一実施形態では、ＦＲα発現レベルは、例えば、Martin et al. Gynecol Oncol. 2017 Nov; 147(2): 402-407; Cristea et al., Journal of Clinical Oncology 2021 39:15_suppl, 5542；ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02996825；及び２０１９年９月２９日付けのImmunogen社プレスリリースである、https://investor.immunogen.com/news-releases/news-release-details/immunogen-presents-full-data-phase-3-forward-i-studyで入手可能なImmunoGen Presents Full Data from Phase 3 FORWARD I Study of Mirvetuximab Soravtansine in Ovarian Cancer at ESMO又は国際公開第２０１８／２１３２６０号パンフレットに記載されているように、「ＰＳ２＋」スコアリング方法を用いて分類され得る。

好ましくは、対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアが決定される。全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアは、対象の膜ＦＲα染色強度スコア（すなわち、０～３）とＦＲα陽性（例えば、少なくとも１＋）の腫瘍細胞のパーセンテージ（０～１００）との積として定義され得る。これによって、最大の全体的スコアは３００になる。全体スコア２０１～３００は高発現、１０１～２００は中程度の発現、及び１００以下は低発現と定義され得る。よって、いくつかの実施形態では、対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアは、１００以下、好ましくは９０、８０、７０、６０、５０未満、又は４０以下、より好ましくは３０以下又は２０以下であり得る。

他の実施形態では、「Ｈスコア」は、例えば、Altwerger et al., Mol Cancer Ther. 2018 May; 17(5): 1003-1011に記載されたように計算される。Ｈスコアは、以下の通りに、ＦＲα発現のレベル（すなわち、各細胞の膜染色の強度レベル（０～３、０＝陰性、１＝弱い、２＝中程度、及び３＝強い）及び各染色強度（０～１００％）での代表的領域における細胞のパーセンテージ［１×（％細胞１＋）＋２×（％細胞２＋）＋３×（％細胞３＋）］）を決定することによって計算される。これによって、０～３００の範囲の最終スコアが得られる。Ｈスコア２０１～３００は高い発現、１０１～２００は中程度の発現、及び１００以下は低い発現と定義され得る。よって、いくつかの実施形態では、対象のＨスコアは、１００以下、好ましくは９０、８０、７０、６０、５０未満、又は４０以下、より好ましくは３０以下又は２０以下であり得る。

代替の実施形態では、対象における腫瘍ＦＲα発現を、がん対象の集団における腫瘍ＦＲα発現と比較することができる。典型的には、がん対象の集団とは、同じタイプのがんに罹患している他の対象のことをいう。よって、対象における腫瘍ＦＲα発現の相対的レベルは、同じタイプのがんの他の対象と比較して確認することができる。この方法では、ＦＲα発現レベルの絶対的な定量は必要ないが、他のがん対象と比較した相対的な決定のみが必要であるため、発現検出の標準化の欠如によるいかなる体系的な偏りも回避される。

好ましい実施形態では、対象における腫瘍（例えば、膜）ＦＲα発現は、がん対象の少なくとも５０％よりも低い。好ましくは、対象の腫瘍細胞における膜ＦＲα発現は、がん対象、例えば、同じ形態のがん（例えば、卵巣がん）に罹患している対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％よりも低い。より好ましくは、対象における腫瘍膜ＦＲα発現は、ＦＲα発現腫瘍（例えば、ＦＲα発現卵巣腫瘍における）の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、又は少なくとも９０％よりも低い。

腫瘍はＦＲαを発現すること、すなわち、腫瘍は少なくともある程度のＦＲα発現を示すことが好ましい。典型的には、これは、対象における腫瘍細胞が、例えば、免疫組織化学によって検出可能な膜ＦＲα発現を示すことを意味する。より好ましくは、対象における腫瘍細胞の少なくとも１％又は少なくとも５％は、例えば、ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いると、検出可能な（例えば、膜）ＦＲα発現を示す。他の実施形態では、対象における腫瘍細胞の少なくとも１０％、１５％、又は２０％が検出可能な膜ＦＲα発現を示す。

好ましくは、ＦＲα発現の決定は、最近の腫瘍生検試料、すなわち、（古い試料又は保存された試料ではなく）抗ＦＲα ＩｇＥ治療の開始直前に対象から得られた生検試料で行われる。例えば、生検試料は、抗ＦＲα ＩｇＥ治療の開始前の６か月、３か月、１か月、２週間、１週間、３日、４８時間、又は２４時間未満に採取され、及び／又はＦＲα発現が決定され得る。

本発明を、以下の非限定的な実施形態に言及しながら、例示のためにのみさらに以下に説明する。
［実施例］

キメラＭＯｖ１８ ＩｇＥ（ＭＯｖ１８ ＩｇＥ）
キメラＭＯｖ１８ ＩｇＥ（ＭＯｖ１８ ＩｇＥ）は、ＩｇＥクラスの抗葉酸受容体α（ＦＲα）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。この抗体は、インビトロでＦＲα発現腫瘍株化細胞、及びインビボでＦＲα発現腫瘍異種移植片に対して強力な抗体依存性細胞介在性細胞毒性（ＡＤＣＣ、antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity）及び抗体依存性細胞介在性貪食（ＡＤＣＰ、antibody-dependent cell-mediated phagocytosis）を媒介することが示されている。標的抗原ＦＲαは、いくつかの固形がんのタイプ（卵巣及び子宮内膜がん並びに中皮腫を含む）で過剰発現される。抗原は、効果的に腫瘍特異的であると特徴づけられており、キメラＭＯｖ１８ ＩｇＧ１（ＭＯｖ１８ ＩｇＧ１）の試験を含むＩｇＧ抗体を用いてＦＲαを標的にする臨床試験は、好ましい耐容性プロファイルを示した。ＭＯｖ１８ ＩｇＥは、単球、好塩基球及び好酸球を含む血液エフェクター細胞との結合を含む作用機序を有すると考えられる。これらのＩｇＥ担持細胞は組織に侵入し、ＦＲα発現細胞に遭遇すると、腫瘍に対してＩｇＥ介在性免疫応答を生じる。ＭＯｖ１８ ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体並びにそれらの特性は、例えばConey, L. R., A. Tomassetti, et al. (1991). "Cloning of a tumor-associated antigen: MOv18 and MOv19 antibodies recognize a folate-binding protein." Cancer Res 51(22): 6125-6132; Gould, H. J., G. A. Mackay, et al. (1999). "Comparison of IgE and IgG antibody-dependent cytotoxicity in vitro and in a SCID mouse xenograft model of ovarian carcinoma." Eur J Immunol 29(11): 3527-3537; Karagiannis, S. N., Q. Wang, et al. (2003). "Activity of human monocytes in IgE antibody dependent surveillance and killing of ovarian tumor cells." Eur J Immunol 33(4): 1030-1040に記載されている。

薬物処方及び投与
ＭＯｖ１８ ＩｇＥは、図１（配列番号１）及び２（配列番号２）に示すような軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有する１６８ｋＤａタンパク質である。ＭＯｖ１８ ＩｇＥ薬物製品は、ｐＨ６．５で１ｍｇ／ｍＬ ＭＯｖ１８ ＩｇＥを含む滅菌、パイロジェンフリーで粒子フリーの溶液として、注入前の希釈のために２ｍＬバイアルに充填された１．０ｍＬとして供給される。ＭＯｖ１８ ＩｇＥの各バイアルは、注射用水中に賦形剤、すなわち０．１Ｍクエン酸ナトリウム、３０ｇ／Ｌ Ｌ－アルギニン、５０ｇ／Ｌショ糖、０．０２％ポリソルベート２０も含む。

ＭＯｖ１８ ＩｇＥは、０．９％（ｗ／ｖ）生理食塩水で希釈した後に静脈内（ＩＶ）注入により投与する。さらに、対象は、各ＩＶ投与前にＭＯｖ１８ ＩｇＥ（プラスヒスタミン及び生理食塩水対照）の皮内［ＩＤ］投与を受けて、アナフィラキシーのリスクについて評価された。或いは、皮膚プリック試験を用いてアナフィラキシーリスクを評価した。患者は、抗体に対する皮膚反応がない場合にのみ、ＭＯｖ１８ ＩｇＥのＩＶ投与に進んだ。

治療用抗体の投与前に、血液試料を対象から得て、ＭＯｖ１８ ＩｇＥの存在下で好塩基球活性化試験に供した（Flow CAST（登録商標）、Buhlmann Laboratories AG, Schonenbuch, Switzerland）。

研究設計
ＭＯｖ１８ ＩｇＥは、ＦＲα陽性固形腫瘍における非盲検第Ｉ相反復用量漸増試験で試験した。ＦＲαを発現する進行固形腫瘍を有する２４名の患者が研究に参加した。資格のある対象は、適切な臓器機能を有し、重度のアレルギーの経歴がなく、アナフィラキシーの場合にリスクを増加し得る併用薬物療法又は併存疾患がなかった。

各患者のＦＲα発現は、抗ＦＲα ＢＮ３．２一次抗体（Leica Biosystems社から入手可能）及びLawson and Scorer（http://www.leicabiosystems.com/pathologyleaders/evaluation-of-antibody-to-folate-receptoralpha-fr-%CE%B1/から入手可能なLawson, N. and P. Scorer (2010). "Evaluation of Antibody to Folate Receptor-alpha (FR-α)." 16(21): 5288-5295）によって記載された方法論を用いて、腫瘍生検試料で決定された。ＦＲα発現の決定方法はまた、例えば、Ab et al., “IMGN853, a Folate Receptor-a (FRα)-Targeting Antibody-Drug Conjugate, Exhibits Potent Targeted Antitumor Activity against FRα-Expressing Tumors”, Molecular Cancer Therapeutics 14(7):1605-13, July 2015に記載されている。ＦＲαの免疫組織化学（ＩＨＣ）染色は、顕微鏡スライド上の腫瘍生検試料からのホルマリン固定パラフィン包埋組織で実施された。スライドを焼き、脱蝋し、内因性ペルオキシダーゼを不活化するために過酸化水素で処理した。スライドを抗ＦＲαマウスモノクローナル抗体ＢＮ３．２又はアイソタイプ対照のいずれかでインキュベートし、特異的染色で可視化し、ヘマトキシリンで対比染色した。組織スライドは全て、資格のある病理学者によって評価され、採点された。ＦＲα染色強度を０～３のスケールでスコア化した（０＝アイソタイプ対照の染色と同様に、特異的染色がない、１＝弱い染色、２＝中程度の染色、及び３＝強い染色）。ＦＲα発現（すなわち、少なくとも１＋の染色強度）を示す腫瘍細胞のパーセンテージも決定した。この研究の対象は、免疫組織化学によって腫瘍細胞の少なくとも５％でＦＲαの発現（すなわち、１＋、２＋、又は３＋膜染色）を示した。

患者は、７０μｇの一定用量で開始して、ＩＶ注入として週１回、合計６回の用量のＭＯｖ１８ ＩｇＥを受けた。用量漸増は、規定された用量レベル（７０μｇ、２５０μｇ、５００μｇ、７００μｇ、１．５ｍｇ及び３ｍｇを含む）を通じて、最大用量５０ｍｇまで行った。この相の間は、３週間の処置を１サイクルとみなした。ＭＯｖ１８ ＩｇＥから利益を受けていると見られるいずれのコホートの患者にも、（用量制限毒性になるか、又は患者が進行性疾患を発生しない限り）同じ用量レベルを継続して２週間間隔でさらに３回の用量までのＭＯｖ１８ ＩｇＥを与えた。この追加の期間は、維持期とみなした。

最初に、患者を単一患者コホート（コホート１～４；７０～７００μｇ用量のＭＯｖ１８ ＩｇＥ）に登録したが、これは、計画した容量が非常に低く、著しい生物学的応答をもたらす可能性が低いと考えられたからである。コホート５～１０（１．５～５０ｍｇ用量のＭＯｖ１８ ＩｇＥ）について、コホートあたり３名の患者を登録し、毒性のために必要であれば追加で３名の患者をコホートに加えた。ＭＯｖ１８ ＩｇＥの安全性及び有効性をさらに探索するために、コホートは、６名の患者まで拡張した。コホート１０以降のさらなる用量漸増は行わなかった（すなわち５０ｍｇが評価した最高の用量であった）。

結果
研究の初期に、１０名の患者がＭＯｖ１８ ＩｇＥを受け、このうち２名の患者が５００μｇの用量レベルで処置された。抗薬物抗体は、６週間及び／又は研究期間外フォローアップ（＞８週間）にて、評価した患者２１名のうち３名で検出された（ＡＤＡが２名の患者で検出されたのに加えて、１名の患者はＡＤＡが疑われた）。５００μｇの用量レベルで処置された患者のうち１名は、ＭＯｖ１８ ＩｇＥを受けたすぐ後にグレード３のアナフィラキシーエピソードを経験した。この患者は、プロトコールに従った標準的なアナフィラキシー処置に応答して、完全に回復した。

対象の特定の用量コホートについての静脈内投与後のＭＯｖ１８ ＩｇＥの薬物動態（血清濃度）を、図５に示す。コホート１：７０μｇ；コホート２：２５０μｇ；コホート３：５００μｇ；コホート４：７００μｇ；コホート５：１．５ｍｇ。

図６及び７は、７００μｇの単位用量でのＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体の投与が抗腫瘍効果をもたらしたことを示す。図６は、７００μｇの用量レベルのＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体で処置された卵巣がん対象の腫瘍サイズの低減を示す、ＣＴスキャン画像から得た腫瘍測定の結果を示す。図７は、６回の週用量の７００μｇのＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体と、その後、２週間の間隔で３回のさらなる７００μｇ用量の抗体とを受けた患者の処置中の卵巣がん抗原ＣＡ１２５の血清濃度の著しい減少を示す。卵巣がん治療中のＣＡ１２５の低減は、肯定的な治療成果と関連することが示されている（例えばYang, Z., Zhao, B. & Li, L. The significance of the change pattern of serum CA125 level for judging prognosis and diagnosing recurrences of epithelial ovarian cancer. J Ovarian Res 9, 57 (2016)を参照されたい）。図７に示すＣＡ１２５レベルの減少は、婦人科腫瘍学研究グループ（ＧＯＧ、Gynecologic Oncology Group）基準に従う卵巣がんにおける化学療法に対する応答を定義する閾値を超えている（例えばRustin et al. Defining response of ovarian carcinoma to initial chemotherapy according to serum CA 125, Journal of Clinical Oncology 1996 14:5, 1545-1551を参照されたい）。

図８～１０は、低用量のＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体で処置された患者の大多数が、安定疾患を経験したことを示す。図８は、処置の開始から最後まで（０～１２週間）ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体で処置された個別の卵巣がん対象における、ＲＥＣＩＳＴ（固形がんの治療効果判定のためのガイドライン）スコアの変化のプロットである。図９及び１０は、それぞれ６及び１２週間の処置にて個別の対象におけるＲＥＣＩＳＴスコアの変化を示す。２０％未満のＲＥＣＩＳＴスコアの変化は、安定疾患を示す。６週間の処置の後に、処置された患者の７０％（１４／２０）は、安定疾患を有した。１２週間まで処置された患者の６０％（３／５）は、まだ安定疾患を有した。６～１２週間の間の期間に週１回から２週間に１回に投与頻度を下げたことに注意されたい。

安定疾患（すなわちＲＥＣＩＳＴスコアの変化が２０％未満）は、有効性主要評価項目である無増悪生存（ＰＦＳ、Progression Free Survival）の重要な原動力である。本研究は６週間で７０％及び１２週間で６０％の病勢コントロール率を示す。よって、これらの結果は、ＩｇＥ抗体を非常に低用量でヒトにおいて用いて、対象におけるがんを治療及び／又は進行を遅延させ得ることを証明する。

図１１は、ＭＯｖ１８ ＩｇＥが低ＦＲα抗原レベルの対象の治療に効果的であることを示す。この研究への組み入れ基準には、免疫組織化学によって腫瘍細胞の少なくとも５％がＦＲα陽性であることが必要であった。しかし、６週間の時点で安定疾患を示した対象のうち、６／１４は低ＦＲα発現者であり、これは全体的なＦＲα発現スコアが１００以下であることによって示された。これらの対象のそれぞれにおいて、腫瘍細胞の５０％以下がＦＲα陽性であった。

６週間の時点でＲＥＣＩＳＴスコアの変化を示さなかった、又は低下を示した６名の対象のうち、４名は低ＦＲα発現者であった（全体的なＦＲα発現スコアが１００以下、及びＦＲα陽性腫瘍細胞が５０％以下）。さらに、この研究において最良の反応者の２名（いずれもＲＥＣＩＳＴスコアの低下を示した）はいずれも低ＦＲα発現者であった。最良の反応を示した対象（図６及び７に示したように）は、全体的なＦＲα発現スコアが２０と非常に低く、ＦＲα陽性腫瘍細胞がわずか１０％であった。

結果は、ＭＯｖ１８ ＩｇＥが抗がん療法によく適しており、投与がほとんどの患者に耐容性があることを示している。最も著しいことには、この抗体は、低ＦＲα発現の対象において非常に低用量（例えば、７００μｇ）でも抗腫瘍活性を示す。これらの結果は、５０ｍｇ未満（１ｍｇ／ｋｇ／週未満）の単位用量を含む、低ＦＲα発現の腫瘍のための治療としてのＩｇＥの安全性及び有効性を初めて支持するものである。

上記の明細書において言及した全ての刊行物は、本明細書に参照により組み込まれている。記載する本発明の方法及びシステムの様々な改変及び変動が、本発明の範囲及び精神を逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明を特定の好ましい実施形態に関連して記載したが、請求する発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定されないことが理解される。実際に、当業者に明らかな本発明を行うための記載した形態の様々な改変が、以下の特許請求の範囲内で意図される。

Claims (30)

1. 対象における低ＦＲα発現の腫瘍の治療における使用のための抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体。
2. 対象における腫瘍細胞の５０％未満がＦＲαを発現し、好ましくは、対象における腫瘍細胞の４０％、３０％、２０％、又は１０％未満がＦＲαを発現する、請求項１に記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
3. 対象における腫瘍細胞の５０％、３０％、又は２０％未満が、ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いると、検出可能な膜ＦＲα発現を示す、請求項１又は２に記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
4. ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いると、対象における腫瘍細胞の５０％、３０％、又は２０％未満が、膜ＦＲαに対して中強度又は高（２＋）強度の染色を示す、請求項１～３のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
5. 対象における腫瘍細胞が、（ｉ）０（ＦＲα検出不能）～３（高ＦＲα）のスケールでの膜ＦＲα染色強度、及び（ii）ＦＲα陽性の腫瘍細胞のパーセンテージ（０～１００％）に従って分類され、対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアが、（ｉ）と（ii）の積として決定される、請求項１～４のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
6. 対象の全体的な腫瘍ＦＲα発現スコアが、１００未満、好ましくは５０未満、より好ましくは３０未満である、請求項５に記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
7. 対象における腫瘍ＦＲα発現が、がん対象の少なくとも５０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い、好ましくは、対象の腫瘍細胞における膜ＦＲα発現が、同じ形態のがんに罹患している対象の少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い、より好ましくは、対象における腫瘍ＦＲα発現が、ＦＲα発現腫瘍（好ましくは、ＦＲα発現卵巣腫瘍）の少なくとも５０％、少なくとも７０％、又は少なくとも９０％における腫瘍ＦＲα発現よりも低い、請求項１～６のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
8. 腫瘍がＦＲαを発現し、好ましくは、対象における腫瘍細胞が、免疫組織化学によって検出可能な膜ＦＲα発現を示す、請求項１～７のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
9. 対象における腫瘍細胞の少なくとも１％が、ＦＲαの免疫組織化学的検出を用いると、検出可能な膜ＦＲα発現を示し、好ましくは、対象における腫瘍細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、又は２０％が、検出可能な膜ＦＲα発現を示す、請求項１～８のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
10. ＭＯｖ１８ ＩｇＥ抗体である、請求項１～９のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
11. 対象におけるがんの治療及び／又はがんの進行の遅延における使用のための、請求項１～１０のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
12. 腫瘍又はがんが卵巣腫瘍又は卵巣がんである、請求項１～１１のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
13. 細胞毒性部分を欠いており、好ましくは抗体薬物複合体（ＡＤＣ）ではない、請求項１～１２のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
14. 対象に投与されるＩｇＥ抗体の最大週用量が、５０ｍｇ、２５ｍｇ、１０ｍｇ、３ｍｇ、又は１ｍｇである、請求項１～１３のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
15. ＩｇＥ抗体の週用量が、１０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、７０μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ、又は約７００μｇである、請求項１４に記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
16. 週１回又は２週間に１回対象に投与される、請求項１～１５のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
17. １２週間まで対象に投与される、請求項１６に記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
18. （ｉ）６週間にわたって週１回、その後（ii）６週間にわたって２週間に１回対象に投与される、請求項１７に記載のＩｇＥ抗体。
19. １回の投与あたり、１ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満、又は０．０３ｍｇ／ｋｇ未満の用量で対象に投与される、請求項１～１８のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
20. １ｍｇ／ｋｇ／週未満、０．１ｍｇ／ｋｇ／週未満、又は０．０３ｍｇ／ｋｇ／週未満の用量で対象に投与される、請求項１～１９のいずれかに記載の使用のためのＩｇＥ抗体。
21. 低ＦＲα発現の腫瘍を有する対象におけるがんの治療及び／又はがんの進行の遅延のための方法であって、請求項１～２０のいずれかに定義される抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体を治療有効量で前記対象に投与するステップを含む、前記方法。
22. 対象における低ＦＲα発現の腫瘍の治療における使用のための医薬組成物であって、請求項１～２０のいずれかに定義される抗葉酸受容体アルファ（ＦＲα）免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体と、１又は２以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、前記医薬組成物。
23. ５０ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含む、請求項２２に記載の使用のための医薬組成物。
24. ３０ｍｇ未満、２５ｍｇ未満、１０ｍｇ未満、５ｍｇ未満、３ｍｇ未満、又は１ｍｇ未満のＩｇＥ抗体を含む、請求項２３に記載の使用のための医薬組成物。
25. １０μｇ～５０ｍｇ、７０μｇ～３０ｍｇ、７０μｇ～３ｍｇ、５００μｇ～１ｍｇ、又は約７００μｇのＩｇＥ抗体を含む、請求項２３又は２４に記載の使用のための医薬組成物。
26. 液体の形態である、請求項２２～２５のいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
27. ０．１ｍｇ／ｍｌ～１０ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ～２ｍｇ／ｍｌ、又は約１ｍｇ／ｍｌのＩｇＥ抗体の濃度を有する水溶液を含む、請求項２２～２６のいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
28. 薬学的に許容される賦形剤が、クエン酸ナトリウム、Ｌ－アルギニン、スクロース、ポリソルベート２０、及び／又は塩化ナトリウムから選択される、請求項２２～２７のいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
29. 静脈内注射に適している、請求項２２～２８のいずれかに記載の使用のための医薬組成物。
30. ５０ｍｇ／週、２５ｍｇ／週、１０ｍｇ／週、３ｍｇ／週、又は１ｍｇ／週の最大合計用量までの静脈内注射のために適している、請求項２９に記載の組成物。