JP2023547703A - 大員環化合物及びその使用方法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、化合物及びその医薬的に許容される塩、その免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲート、及び当該化合物及びその免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲートを含有する医薬組成物、並びに、腫瘍性（neuroplastic）の疾患又は障害の治療における当該化合物及びその免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲートの使用を目的とする。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年１１月１０日出願の米国仮出願第６３／１１１，９３３号の優先権の利益を主張するものであり、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ファイル名が「ＪＢＩ６４１７ＷＯＰＣＴ１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、２０２１年１０月２６日に作成され、２６ｋｂのサイズを有する、ＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂにより電子的に提出された配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（発明の分野）
本発明は、化合物（大員環化合物）及びその医薬的に許容される塩、その免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲート、並びに当該化合物及びその免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲートを含有する医薬組成物、並びに、腫瘍性の疾患又は障害の治療における当該化合物及びその免疫コンジュゲート、放射性免疫コンジュゲートの使用を目的とする。
α粒子放出放射性核種は、高い線エネルギー付与と短距離作用との組み合わせにより癌治療法に非常に有望であり、ほとんどが腫瘍細胞に限局される強力な殺作用の可能性を提供する（Ｋｉｍ，Ｙ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｗ．Ｂｒｅｃｈｂｉｅｌ，Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｌｐｈａ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｕｍｏｕｒ Ｂｉｏｌ，２０１２．３３（３）：ｐ．５７３－９０）。抗体、足場タンパク質、小分子リガンド、アプタマー、又は癌抗原に特異的な他の結合部分を使用する、α線放出体の標的化送達は、腫瘍への放射線核種の選択的送達の方法を提供して、それらの効力を強化し、オフターゲット効果を軽減する。一般的な実施では、結合部分をα線放出放射性金属に結合するキレータに付着させて、放射性錯体を生成する。多くのこのような例は、標的化ベクターとしてモノクローナル抗体（monoclonal antibody、ｍＡｂ）を使用して、放射性免疫コンジュゲートとして既知のものを生成する。
アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）は、医療用途で特に関心が持たれているα線放出放射性同位体である（Ｍｉｅｄｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅａｌｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｌｐｈａ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｈｅｒａｐｙ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００８．６０（１２）：７１－８２）。２２５Ａｃの半減期は１０日であり、これは放射性コンジュゲートの生成を促進するのに十分な長さであるが、抗体などの送達ビヒクルの循環薬物動態と一致させるのに十分な短さである。よって、２２５Ａｃ放射性コンジュゲートが特に関心が持たれている。加えて、２２５Ａｃは、安定同位体２０９Ｂｉに到達するまでに、２２５Ａｃ崩壊毎に合計４つのα粒子を放出する一連のステップで崩壊するため、よって効力が増大する。医療用途で関心が持たれている別の放射性同位体は、画像化に適したγ線照射及び放射線治療に適した中エネルギーβ線照射の両方を放出する、ルテチウム１７７（１７７Ｌｕ）である。１７７Ｌｕ標識ペプチドは、正常な組織損傷の低減を実証し、１７７Ｌｕ標識は、治療及び撮像の両方に対して単一の放射性標識剤を使用することが可能であることが示されている（Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍ ＤＪ，ｅｔ ａｌ．［１７７Ｌｕ－ＤＯＴＡ０，Ｔｙｒ３］ｏｃｔｒｅｏｔａｔｅ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ［１１１Ｉｎ－ＤＴＰＡ０］ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２００１；２８：ｐ．１３１９－１３２５）。治療用途のために使用される他の放射性同位体としては、例えば、β放射体又はα放射体が挙げられ、例えば、３２Ｐ、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１３１Ｉ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２５５Ｆｍ及び２２７Ｔｈが挙げられる。画像化用途に使用される他の放射性同位体としては、例えば、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、及び１１１Ｉｎなどのγ線及び／又は陽電子放出放射性同位体が挙げられる。
現在最も広く使用されているアクチニウム２２５及びランタニドのためのキレータは、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸；テトラキサテン）であり、以前の臨床及び前臨床プログラムは、アクチニウムキレート化のために１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）を主に使用してきた。しかしながら、アクチニウムのＤＯＴＡキレート化は、困難となる可能性があることが知られている（Ｄｅａｌ，Ｋ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９９．４２（１５）：ｐ．２９８８－９２）。例えば、ＤＯＴＡは、タンパク質又は抗体などの標的化リガンドに結合したとき、最大＞５００：１ＤＯＴＡ：アクチニウム２２５のキレート化比しか可能とならず、厳しい条件又は抗体あたり高レベルのＤＯＴＡのいずれかを必要とすることが多い。ランタニド及びアクチニウム２２５のための他の大員環キレータは、例えば、国際特許出願公開第２０１８／１８３９０６号、Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．「Ａｎ Ｅｉｇｈｔｅｅｎ－Ｍｅｍｂｅｒｅｄ Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ Ａｃｔｉｎｉｕｍ－２２５ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ａｌｐｈａ Ｔｈｅｒａｐｙ」Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．（２０１７）５６，１４７１２－１４７１７、Ｒｏｃａ－Ｓａｂｉｏ ｅｔ ａｌ．「Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｕｎｐｒｅｃｅｄｅｎｔｅｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ Ｌｉｇｈｔ Ｌａｎｔｈａｎｉｄｅｓ」Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００９）１３１，３３３１－３３４１に記載されている。
部位特異性は、ランダムコンジュゲーションと比較して、部位特異的方法により、ＡＤＣの有効性と安全性の両方を高められることが実証されていることから、抗体－薬物コンジュゲート（antibody-drug conjugate、ＡＤＣ）分野において主要な注目領域となっている（Ａｇａｒｗａｌ，Ｐ．ａｎｄ Ｃ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：ｔｈｅ ｎｅｘｕｓ ｏｆ ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，２０１５．２６（２）：ｐ．１７６－９２）。同様の安全性及び有効性の利益が、放射性免疫コンジュゲートに関して達成され得ると考えられる。
したがって、放射性金属、好ましくはアクチニウム２２５（２２５Ａｃ）などのα線放出放射性金属を結合し、高比活性（specific activity）及び高収率を有する安定した放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる、新規化合物が当該技術分野で必要とされている。本発明は、比活性又は最も一般的な金属不純物に関係なく、放射性金属、例えばα線放射性金属、例えば２２５Ａｃに結合することができる大員環化合物、並びに画像化用放射性金属、例えば１３４Ｃｅをキレート化する能力を提供することによって、この必要性を満たす。本発明の化合物は、抗体、タンパク質、アプタマーなどの標的化リガンドに、好ましくは「クリックケミストリー」を用いた部位特異的な様式で、標的化リガンドにコンジュゲートすることにより、インビトロ及びインビボで高い安定性を有する放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる。本発明の化合物を標的化リガンドにコンジュゲートさせることによって生成される放射性免疫コンジュゲートは、腫瘍細胞の標的化放射線治療などの標的化放射線治療、及び／又は癌を含む腫瘍疾患若しくは障害の標的化治療に使用することができる。
本発明は、本明細書に記載される放射性金属、放射性金属錯体及び放射性免疫コンジュゲートと錯体を形成することができる化合物を包含する。
本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物：
Figure 2023547703000001
 又はその医薬的に許容される塩（式中、
Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、この５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、
Figure 2023547703000002
 からなる群から独立して選択される１つ又は２つ以上の化合物を目的とする（式中、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
特定の実施形態では、Ｒ４は、－ＮＨ２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、－ＣＯＯＲ１３、－ＣＯＮ（Ｒ１３）２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン、又はトランス－シクロオクテンである。
特定の実施形態では、Ｒ４は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（dibenzocyclooctynyl、ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）、及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。
特定の実施形態では、Ｒ４は、ＤＢＣＯ又はＢＣＮである。
特定の実施形態では、Ｒ４は標的化リガンドを含み、この標的化リガンドは、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）、結合ペプチド、結合ポリペプチド（例えば、最大５０個のアミノ酸を含む選択的標的化オリゴペプチド）、結合タンパク質、酵素、核酸塩基含有部分（例えば、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ若しくはＲＮＡベクター、又はアプタマー）、及びレクチンからなる群から選択される。
特定の実施形態では、標的化リガンドは、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
別の一実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物に錯体化された放射性金属イオンを含む放射性金属錯体である。
別の一実施形態では、本発明は、式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性金属錯体：
Figure 2023547703000003
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、この５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、－ＮＨ２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、－ＣＯＯＲ１３、－ＣＯＮ（Ｒ１３）２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン、又はトランス－シクロオクテンである。
特定の実施形態では、Ｒ４は、シクロオクチニル、又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）、及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択されるシクロオクチニル誘導体である。
特定の実施形態では、Ｒ４は、ＤＢＣＯ又はＢＣＮである。
特定の実施形態では、α線放出放射性金属イオンは、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）である。
別の一実施形態では、本発明は、式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性免疫コンジュゲート又はその医薬的に許容できる塩を目的とする。
Ｍ＋は放射性金属イオンであり、式中、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、この５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、標的化リガンドであり、ここで、この標的化リガンドは、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）、結合部分、結合ペプチド、結合ポリペプチド（例えば、最大５０個のアミノ酸を含む選択的標的化オリゴペプチド）、結合タンパク質、酵素、核酸塩基含有部分（例えば、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ若しくはＲＮＡベクター、又はアプタマー）、及びレクチンからなる群から選択される。
特定の実施形態では、α線放出放射性金属イオンは、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）である。
別の一実施形態では、本発明は、Ｒ４を介して標的化リガンド、好ましくは抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合した本発明の化合物を含む免疫コンジュゲートを目的とする。
更なる一実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、トリアゾール部分を介して抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合した本発明の放射性金属錯体を含む。
別の一実施形態では、本発明は、本発明の化合物又は放射性金属錯体を標的化リガンドと共有結合させること、好ましくは本発明の化合物又は放射性金属錯体のＲ４を介して抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合させることを含む、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを調製する方法を目的とする。
別の一実施形態では、本発明は、本発明の化合物、免疫コンジュゲート、又は放射性免疫コンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を目的とする。医薬組成物はまた、１つ又は２つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含み得る。
別の一実施形態では、本発明はまた、本明細書に記載される化合物のいずれか１つ（又はその医薬的に許容される塩）及び医薬的に許容される担体又は１つ若しくは２つ以上の賦形剤若しくは充填剤を含む組成物（例えば、医薬組成物）及び医薬を提供する。同様の一実施形態では、本発明はまた、本明細書に開示される本技術の修飾抗体、修飾抗体フラグメント、又は修飾結合ペプチドの実施形態のいずれか１つ、及び医薬的に許容される担体又は１つ又は２つ以上の賦形剤若しくは充填剤を含む、組成物（例えば、医薬組成物）及び医薬を提供する。
別の一実施形態では、本発明は、標的化放射線治療のために、本発明の放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物を使用する方法を目的とする。
一実施形態では、本発明は、放射線治療を必要とする対象において放射線治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を目的とする。
一実施形態では、本発明は、腫瘍疾患又は障害の治療を必要とする対象において腫瘍疾患又は障害を治療する方法であって、対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む、方法を目的とする。
上述の「発明の概要」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される正確な実施形態に限定されない点を理解する必要がある。
図面のうち：
Ｌａ３＋によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示し、図１Ａは、混合前（上）及びＬａ３＋との混合後（中）の、６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。Ｌａ３＋及びＡｃ－２２５との混合後の１４．１３７分から１２．０４７分への保持時間のシフトは、Ｌａ３＋の迅速なキレート化を示す。 Ｌａ３＋によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示し、図１Ｂは、混合前（上）及びＬａ３＋との混合後（下）の、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－イソペンチルのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。Ｌａ３＋との混合後の１７．１８１分から１５．７５１分への保持時間のシフトは、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－イソペンチルによるＬａ３＋及びＡｃ－２２５の迅速なキレート化を示す。 ランダムコンジュゲーション方法（例えば、リジン残基、システイン残基などの標識化方法）又は部位特異的コンジュゲーション方法（例えば、グリカン特異的方法、コンジュゲーションタグ方法、又は工学操作システイン方法）による、本発明の実施形態による放射性免疫コンジュゲートを生成するための抗体の放射性標識化の概略図を示す。図２Ａは、１工程直接放射性標識化によるランダムコンジュゲーションを概略的に示す。図２Ｂは、クリック放射性標識化によるランダムコンジュゲーションを概略的に示す。図２Ｃは、１工程直接放射性標識化による部位特異的コンジュゲーションを概略的に示す。図２Ｄは、クリック放射性標識化による部位特異的コンジュゲーションを概略的に示す。 Ａｃ－２２５によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図３Ａは、Ａｃ－２２５とキレート化した６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す（カット－カウント－再構成によるＲＡ（放射活性）トレース）。 Ａｃ－２２５によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図３Ｂは、Ａｃ－２２５とキレート化した６－（（１６－（１－（６－カルボキシピリジン－２－イル）－４－メチルフェニル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－イソフェニル）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す（カット－カウント－再構成によるＲＡ（放射活性）トレース）。 Ａｃ－２２５によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図４Ａは、Ａｃ－２２５（ＵＶ）でキレート化されたＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－Ｈ１１Ｂ６のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 Ａｃ－２２５によるキレート化試験のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。図４Ｂは、Ａｃ－２２５ ＲＡ（放射活性）でキレート化されたＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－Ｈ１１Ｂ６のＨＰＬＣクロマトグラムを示す（カット－カウント－再構成によるＲＡ（放射活性）トレース）。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すインスタント薄層クロマトグラフィー（ｉＴＬＣ）のスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。 実施例２２に記載される、金属不純物の存在下でＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６に結合したＡｃ－２２５のパーセンテージを示すｉＴＬＣのスキャンを示す。
「背景技術」において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
別の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で引用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。
以下の用語が、以下に定義されるように全体を通して使用される。
本明細書で使用するとき、及び添付の特許請求において、要素を説明する文脈（特に、以下の特許請求の範囲の文脈）において、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数冠詞、並びに同様の指示詞の使用は、本明細書において別段の指示がない限り、又は文脈上明確に矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈されるものとする。本発明における値の範囲の記述は、本明細書において別途記載のない限り、その範囲内に含まれる各々の値を個別に参照するための省略様式としての機能を意図しているに過ぎず、各々の値は、本明細書に個別に列挙されるかのように、明細書内に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供される任意の及び全ての例、つまり例示的文言（例えば、「など」）の使用は、実施形態の理解をより容易にするために過ぎず、別途主張されない限り、特許請求の範囲の限定をもたらさない。明細書中の文言が含まれないことは、必須である任意の特許請求の範囲に含まれない要素を示しているとして解釈されなくてはならない。
一般に、水素又はＨなどのある特定の元素への言及は、その元素の全ての同位体を含むことを意味する。例えば、Ｒ基が水素又はＨを含むように定義される場合、重水素及びトリチウムも含む。したがって、トリチウム、Ｃ１４、Ｐ３２及びＳ３５などの放射性同位体を含む化合物は、本技術の範囲内である。そのような標識を本技術の化合物に挿入するための手順は、本明細書の開示に基づいて、当業者には容易に明らかになるであろう。
用語「置換された」は、全ての通常の原子価が維持され、置換が安定した化合物をもたらすという条件で、少なくとも１つの水素原子が非水素基で置換されていることを意味する。特定の基が「置換される」場合、その基は置換基の列挙から独立して選択される、１個又は２個以上の置換基、好ましくは１～５個の置換基、より好ましくは１～３個の置換基、最も好ましくは１～２個の置換基を有することができる。例えば、「置換された」は、その中に含有される水素原子への１つ又は２つ以上の結合が非水素又は非炭素原子への結合によって置き換えられる、以下に定義されるような有機基（例えば、アルキル基）を指す。置換された基はまた、炭素又は水素原子への１つ又は２つ以上の結合が、二重結合又は三重結合を含む１つ又は２つ以上の結合でヘテロ原子に置き換えられる基も含む。したがって、別途指定されない限り、置換された基は、１つ又は２つ以上の置換基で置換される。いくつかの実施形態では、置換された基は、１、２、３、４、５、又は６個の置換基で置換されている。置換基の例としては、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩ）；ヒドロキシル；アルコキシ、アルケノキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルオキシ、及びヘテロシクリルアルコキシ基；カルボニル（オキソ）；カルボキシラート；エステル；ウレタン；オキシム；ヒドロキシルアミン；アルコキシアミン；アラルコキシアミン；チオール；スルフィド；スルホキシド；スルホン；スルホニル；ペンタフルオロスルファニル（すなわち、ＳＦ）、スルホンアミド；アミン；Ｎ－オキシド；ヒドラジン；ヒドラジド；ヒドラゾン；アジド；アミド；尿素；アミジン；グアニジン；エナミン；イミド；イソシアネート；イソチオシアネート；シアネート；チオシアネート；イミン；ニトロ基；ニトリル（すなわち、ＣＮ）などなどが挙げられる。用語「独立して」は、置換基に関して使用されるとき、２つ以上のそのような置換基が可能である場合、そのような置換基は互いに同じ又は異なる得ることを意味する。
置換されたシクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリール基などの置換された環基は、水素原子への結合が炭素原子への結合で置き換えられている環及び環系も含む。したがって、置換されたシクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリール基はまた、以下に定義されるような置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、及びアルキニル基で置換され得る。
本明細書で使用される場合、Ｃ１～Ｃ１１、Ｃ１～Ｃ８、又はＣ１～Ｃ６などのＣｍ～Ｃｎは、基の前に使用される場合、ｍ～ｎ個の炭素原子を含有する基を指す。
アルキル基としては、１～１２個の炭素原子、典型的には、１～１０個の炭素原子、又はいくつかの実施形態では、１～８個、１～６個、若しくは１～４個の炭素原子を有する直鎖及び分枝アルキル基が挙げられる。直鎖アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、及びｎ－オクチル基などの基が挙げられる。分枝アルキル基の例としては、イソプロピル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ネオペンチル、イソペンチル、及び２，２－ジメチルプロピル基が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換又は非置換であり得る。代表的な置換アルキル基は、上記に列挙された置換基などの置換基で１回又は２回以上置換されていてもよく、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、ヒドロキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシアルキルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
シクロアルキル基は、環中に３～１２個の炭素原子、又はいくつかの実施形態では、３～１０個、３～８個、若しくは３～４個、５個、若しくは６個の炭素原子を有する単環式、二環式、又は三環式アルキル基を含む。例示的な単環式シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチル基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、シクロアルキル基は、３～８の環員を有するが、他の実施形態では、環炭素原子の数は、３～５個、３～６個、又は３～７個の範囲である。二環式及び三環式環系は、架橋シクロアルキル基及び縮合環の両方を含み、例えば、ビシクロ［２．１．１］ヘキサン、アダマンチル、デカリニルなどであるが、これらに限定されない。シクロアルキル基は、置換又は非置換であり得る。置換されたシクロアルキル基は、上記で定義されたように、非水素基及び非炭素基で１回又は２回以上置換され得る。しかしながら、置換されたシクロアルキル基はまた、上記で定義された直鎖又は分枝鎖アルキル基で置換される環も含む。代表的な置換されたシクロアルキル基は、一置換されるか、又は限定されないが、２，２－、２，３－、２，４－２，５－、又は２，６－二置換シクロヘキシル基など、２回以上置換され得、これらは、上記に列挙された置換基などの置換基で置換され得る。
シクロアルキルアルキル基は、アルキル基の水素又は炭素結合が、上で定義したシクロアルキル基への結合で置き換えられている、上で定義したアルキル基である。いくつかの実施形態では、シクロアルキルアルキル基は、４～１６個の炭素原子、４～１２個の炭素原子、典型的には４～１０個の炭素原子を有する。シクロアルキルアルキル基は、置換又は非置換であり得る。置換シクロアルキルアルキル基は、基のアルキル部分、シクロアルキル部分、又はアルキル部分とシクロアルキル部分の両方で置換されていてもよい。代表的な置換シクロアルキルアルキル基は、一置換であるか、又は２か所以上置換されてもよく、例えば、上記に列挙された置換基での一置換、二置換、又は三置換であり得るが、これらに限定されない。
アルケニル基は、少なくとも１つの二重結合が２つの炭素原子の間に存在することを除いて、上で定義された直鎖及び分枝鎖アルキル基を含む。アルケニル基は、２～１２個の炭素原子、典型的には、２～１０個の炭素原子、又はいくつかの実施形態では、２～８個、２～６個、若しくは２～４個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アルケニルは、１つの炭素－炭素二重結合、又は２、３、４個若しくはそれ以上の炭素－炭素二重結合などの複数の炭素－炭素二重結合を有することができる。アルケニル基の例としては、メテニル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、置換又は非置換であり得る。代表的な置換アルケニル基は、一置換であるか、又は２か所以上置換されてもよく、例えば、上記に列挙された置換基での一置換、二置換、又は三置換であり得るが、これらに限定されない。
シクロアルケニル基は、少なくとも１つの二重結合が２つの炭素原子の間にある、上で定義されたシクロアルキル基を含む。シクロアルケニル基は、環中に３～１２個、より好ましくは３～８個の炭素原子を有し、かつ、２個の炭素原子間に少なくとも１つの二重結合を含む、単環式又は多環式アルキル基であり得る。シクロアルケニル基は、置換又は非置換であり得る。いくつかの実施形態では、シクロアルケニル基は、１つ、２つ、若しくは３つの二重結合、又は２つ、３つ、４つ、若しくはそれ以上の炭素－炭素二重結合などの複数の炭素－炭素二重結合を有し得るが、芳香族化合物は含まない。シクロアルケニル基は、３～１４個の炭素原子、又はいくつかの実施形態では、５～１４個の炭素原子、５～１０個の炭素原子、又はさらには５個、６個、７個、若しくは８個の炭素原子を有する。シクロアルケニル基の例としては、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、シクロブタジエニル、及びシクロペンタジエニルが挙げられる。
シクロアルケニルアルキル基は、アルキル基の水素又は炭素結合が、上で定義したシクロアルケニル基への結合で置き換えられている、上で定義したアルキル基である。シクロアルケニルアルキル基は、置換又は非置換であり得る。置換シクロアルケニルアルキル基は、基のアルキル部分、シクロアルケニル部分、又はアルキル部分とシクロアルケニル部分の両方で置換されていてもよい。代表的な置換シクロアルケニルアルキル基は、上記に列挙された置換基などの置換基で１回又は２回以上置換され得る。
アルキニル基は、少なくとも１つの三重結合が２つの炭素原子の間に存在することを除いて、上で定義された直鎖及び分枝鎖アルキル基を含む。アルキニル基は、２～１２個の炭素原子、典型的には、２～１０個の炭素原子、又はいくつかの実施形態では、２～８個、２～６個、若しくは２～４個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アルキニル基は、１つ、２つ、又は３つの炭素－炭素三重結合を有する。例としては、特に、－Ｃ＝ＣＨ、－Ｃ＝ＣＣＨ３、－ＣＨ２Ｃ＝ＣＣＨ３、－Ｃ＝ＣＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２が挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、置換又は非置換であり得る。末端アルキンは、三重結合炭素原子に結合した少なくとも１個の水素原子を有する。代表的な置換アルキニル基は、一置換であるか、又は２か所以上置換されてもよく、例えば、上記に列挙された置換基での一置換、二置換、又は三置換であり得るが、これらに限定されない。「環状アルキン」又は「シクロアルキニル」は、２個の炭素原子間に少なくとも１つの三重結合を含むシクロアルキル環である。環状アルキン又はシクロアルキニル基の例としては、シクロオクチン、ビシクロノニン（ＢＣＮ）、二フッ素化シクロオクチン（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノン（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチン（ＤＩＢＡＣ）、ジメトキシアザシクロオクチン（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチン（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチン（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシＤＩＢＯ（ＴＭＤＩＢＯ）が挙げられるが、これらに限定されない。
アリール基は、ヘテロ原子を含有しない環状芳香族炭化水素である。本明細書におけるアリール基には、単環式、二環式、及び三環式環系が含まれる。したがって、アリール基には、フェニル、アズレニル、ヘプタレニル、ビフェニル、フルオレニル、フェナントレニル、アントラセニル、インデニル、インダニル、ペンタレニル、及びナフチル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アリール基は、６～１４個の炭素を含有し、他の場合では、基の環部分に６～１２個、又はさらには６～１０個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態では、アリール基はフェニル又はナフチルである。アリール基は、置換又は非置換であり得る。「アリール基」という語句は、縮合芳香族－脂肪族環系（例えば、インダニル、テトラヒドロナフチルなど）などの縮合環を含有する基を含む。代表的な置換アリール基は、一置換であるか、又は２回以上置換され得る。例えば、一置換アリール基としては、限定されないが、２－、３－、４－、５－、若しくは６置換フェニル又はナフチル基が挙げられ、これらは、上記に列挙された置換基などの置換基で置換され得る。アリール部分は周知であり、例えば、Ｌｅｗｉｓ，Ｒ．Ｊ．，ｅｄ．，Ｈａｗｌｅｙ’ｓ Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，１３ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９７）に記載されている。アリール基は、単一の環構造（すなわち、単環式）であるか、又は縮合環構造である複数の環構造（すなわち、多環式）を含むことができる。好ましくは、アリール基は、単環式アリール基である。
アルコキシ基は、水素原子への結合が上記で定義された置換された又は非置換のアルキル基の炭素原子への結合によって置き換えられるヒドロキシル基（－ＯＨ）である。直鎖アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。分枝アルコキシ基の例としては、イソプロポキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、イソペントキシ、イソヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルコキシ基の例としては、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなどが含まれるが、これらに限定されない。アルコキシ基は、置換又は非置換であり得る。代表的な置換されたアルコキシ基は、上記に列挙された置換基などの置換基で１回又は２回以上置換され得る。
同様に、アルキルチオ又はチオアルコキシは、－ＳＲ基を指し、式中、Ｒは、硫黄架橋を介して親分子に結合したアルキル、例えば、－Ｓ－メチル、－Ｓ－エチルなどである。アルキルチオの代表的な例としては、－ＳＣＨ３、－ＳＣＨ２ＣＨ３などが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される用語「ハロゲン」は、臭素、塩素、フッ素、又はヨウ素を指す。相応して、用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードを意味する。いくつかの実施形態では、ハロゲンは、フッ素である。他の実施形態では、ハロゲンは、塩素又は臭素である。
用語「ヒドロキシ」及び「ヒドロキシル」は、互換的に使用することができ、－ＯＨを指す。
用語「カルボキシ」は、－ＣＯＯＨを指す。
用語「シアノ」は、－ＣＮを指す。
用語「ニトロ」は、－ＮＯ２を指す。
用語「イソチオシアネート」は、－Ｎ＝Ｃ＝Ｓを指す。
用語「イソシアネート」は、－Ｎ＝Ｃ＝Ｏを指す。
用語「アジド」は、－Ｎ３を指す。
用語「アミノ」は、－ＮＨ２を指す。用語「アルキルアミノ」は、窒素に結合した水素原子の１つ又は両方がアルキル基で置換されているアミノ基を指す。アルキルアミン基は、－ＮＲ２として表すことができ、式中、各Ｒは、独立して、水素又はアルキル基である。例えば、アルキルアミンとしては、メチルアミン（－ＮＨＣＨ３）、ジメチルアミン（－Ｎ（ＣＨ３）２）、－ＮＨＣＨ－２ＣＨ３などが挙げられる。本明細書で使用される用語「アミノアルキル」は、１つ又は２つ以上のアミノ基で置換された分枝鎖飽和脂肪族炭化水素基及び直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図する。アミノアルキル基の代表例としては、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、及び－ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、「アミド」は、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２を指し、式中、各Ｒは、独立して、アルキル基又は水素である。アミドの例としては、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、及び－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２が挙げられるが、これらに限定されない。
用語「ヒドロキシルアルキル」及び「ヒドロキシアルキル」は、互換的に使用され、１つ又は２つ以上のヒドロキシル基で置換されたアルキル基を指す。アルキルは、分枝鎖又は直鎖脂肪族炭化水素であり得る。ヒドロキシルアルキルの例としてはヒドロキシルメチル（－ＣＨ２ＯＨ）、ヒドロキシルエチル（－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、用語「ヘテロシクリル」は、硫黄、酸素、又は窒素などの少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む安定な単環式及び多環式炭化水素を含む。本明細書で使用するとき、用語「ヘテロアリール」は、硫黄、酸素、又は窒素などの少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む安定な単環式及び多環式芳香族炭化水素を含む。ヘテロアリールは、単環式又は多環式、例えば、二環式又は三環式であり得る。ヘテロ原子を含むヘテロシクリル又はヘテロアリール基の各環は、１個又は２個の酸素原子又は硫黄原子及び／又は１～４個の窒素原子を含むことができ、但し、各環中のヘテロ原子の総数は４個以下であり、各環は少なくとも１個の炭素原子を有する。多環式、例えば二環式又は三環式であるヘテロアリール基は、少なくとも１つの完全芳香環を含む必要があるが、他の縮合環又は環は芳香族又は非芳香族であり得る。ヘテロシクリル又はヘテロアリール基は、ヘテロシクリル又はヘテロアリール基のうちの任意の環の任意の利用可能な窒素又は炭素原子に結合することができる。好ましくは、用語「ヘテロアリール」は、環のうちの少なくとも１つに少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ又はＮ）を有する５員又は６員の単環式基及び９員又は１０員の二環式基を指し、ヘテロ原子含有環は、好ましくは、１、２又は３個のヘテロ原子を有し、より好ましくは、Ｏ、Ｓ及び／又はＮから選択される１又は２個のヘテロ原子を有する。ヘテロアリールの窒素ヘテロ原子は、置換又は非置換であり得る。さらに、ヘテロアリールの窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意選択で酸化することができる（すなわち、Ｎ→Ｏ及びＳ（Ｏ）ｒであり、式中、ｒは、０、１又は２である）。
用語「エステル」は－Ｃ（Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒはアルキルである）を指す。
用語「カルバメート」は、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２を指し、式中、各Ｒは、独立して、アルキル又は水素である。
用語「アルデヒド」は、－Ｃ（Ｏ）Ｈを指す。
用語「炭酸塩」は、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲを指し、式中、Ｒはアルキルである。
用語「マレイミド」は、化学式Ｈ２Ｃ２（ＣＯ）２ＮＨを有する基を指す。用語「マレイミド」は、別の基又は分子に共有結合したマレイミド基を指す。好ましくは、マレイミド基はＮ結合し、例えば以下のとおりである。
Figure 2023547703000004
用語「ハロゲン化アシル」は、－Ｃ（Ｏ）Ｘを指し、式中、Ｘはハロ（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ）である。例示的なハロゲン化アシルとしては、塩化アシル（－Ｃ（Ｏ）Ｃｌ）及び臭化アシル（－Ｃ（Ｏ）Ｂｒ）が挙げられる。
当該技術分野で使用される慣用に従って、
Figure 2023547703000005
 が、本明細書における構造式において使用され、これは、本発明の化合物又は標的化リガンドなど、コア、親、又は骨格構造への部分、官能基、又は置換基の結合点である結合を示す。
任意の変数が、化合物の任意の構成又は式において２回以上発生する場合、各発生におけるその定義は、他の全ての発生におけるその定義とは無関係である。したがって、例えば、ある基が０～３個のＲ基で置換されることが示されている場合、当該基は、最大３個のＲ基で任意選択で置換することができ、各々の場合に、Ｒは、Ｒの定義から独立して選択される。
置換基への結合が環中の２つの原子を結合する結合を横断するように示される場合、そのような置換基は、環上の任意の原子に結合することができる。
本明細書で使用するとき、用語「放射性金属イオン」又は「放射活性金属イオン」は、粒子及び／又は光子を放出する元素の１つ又は２つ以上の同位体を指す。本開示を考慮して当業者に既知の任意の放射性金属イオンを本発明で使用することができる。本発明での使用に適した放射性金属イオンの例としては、４７Ｓｃ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１７Ｓｎ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２２７Ｔｈ、及び２５５Ｆｍが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、放射性金属イオンは、治療用途において有用な放射性金属イオンを意味する「治療用放射体」である。治療用放射体の例としては、β放射体又はα放射体、例えば、１３２Ｌａ、１３５Ｌａ、１３４Ｃｅ、１４４Ｎｄ、１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂ、１５３Ｓｍ、１５９Ｇｄ、１６５Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、２５５Ｆｍ及び２２７Ｔｈ、２２６Ｔｈ、２３０Ｕが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明で使用される放射性金属イオンは、α線放出放射性金属イオン、例えば、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）である。
本発明の化合物は、金属、好ましくは放射性金属が、錯体形成することができる大員環化合物を指す。特定の実施形態では、化合物は、１つ又は２つ以上のヘテロ原子、例えば、酸素及び／又は窒素を環原子として含む大環状又は大員環である。好ましくは、化合物は、４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６の誘導体である大員環である。
本明細書で使用される「放射性金属錯体」は、大員環化合物と会合する放射性金属イオンを含む錯体を指す。放射性金属イオンは、配位結合により大員環に結合又は配位される。大員環のヘテロ原子は、大員環化合物への放射性金属イオンの配位結合に関与し得る。大員環化合物は、１つ又は２つ以上の置換基で置換することができ、この１つ又は２つ以上の置換基はまた、大員環のヘテロ原子に加えて又はその代わりに、大員環化合物への放射性金属イオンの配位結合に関与し得る。
本明細書で使用するとき、用語「ＴＯＰＡ」は、Ｈ２ｂｐ１８ｃ６として当技術分野で周知の大員環を指し、これは代替的にＮ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６と呼ばれることもある。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｃａ－Ｓａｂｉｏ ｅｔ ａｌ．，「Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｕｎｐｒｅｃｅｄｅｎｔｅｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ Ｌｉｇｈｔ Ｌａｎｔｈａｎｉｄｅｓ，」Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００９）１３１，３３３１－３３４１を参照されたい。
本明細書で使用するとき、用語「クリックケミストリー」は、反応基を含む小さな単位を一緒に結合することによって共有結合を迅速かつ確実に生成するように調整された化学を説明する、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓによって導入された化学原理を指す（Ｋｏｌｂ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）４０：２００４－２０２１を参照されたい）。クリックケミストリーは、特定の反応を指すものではないが、自然界に見られる反応を模倣する反応を含むがこれらに限定されない概念を指す。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、モジュール式であり、広範囲であり、高い化学収率が得られ、不活性の副生成物を生成し、立体特異的であり、単一の反応生成物との反応に有利になる大きな熱力学的駆動力を示し、かつ／又は生理学的条件下で実施することができる。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、単純な反応条件下で実施することができ、容易に利用可能な出発物質及び試薬を使用し、非毒性溶媒を使用し又は水などの無害な若しくは容易に除去される溶媒を使用し、かつ／又は結晶化若しくは蒸留などの非クロマトグラフィー法による単純な生成物の単離を提供する。
クリックケミストリー反応は、天然に存在する生体分子には稀にしか見られず、生体分子に対して化学的に不活性である反応基を利用するが、クリックケミストリーパートナーが一緒に反応した場合、反応は、生物学的に関連する条件下、例えば、過剰な加熱及び／又は強過ぎる試薬が存在しないなどの細胞培養条件で効率的に起こり得る。一般に、クリックケミストリー反応は、互いに反応することができるクリック反応パートナーを含む、少なくとも２つの分子を必要とする。互いに反応性であるこのようなクリック反応パートナーは、本明細書ではクリックケミストリーハンドル対、又はクリックケミストリー対と呼ばれることがある。いくつかの実施形態では、クリック反応パートナーは、アジド及び歪みを有する（strained）アルキン、例えばシクロオクチン又はシクロオクチン誘導体などのシクロアルキン、又は任意の他のアルキンである。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、反応性ジエン及び好適なテトラジン求ジエン体である。例えば、トランス－シクロオクテン、ノルボルネン、又はビスシクロノネンは、クリック反応対として好適なテトラジン求ジエン体と対にすることができる。さらに他の実施形態では、テトラゾールは、紫外線の存在下で活性化されていないアルケンと対になって、「光クリック」反応対と呼ばれるクリック反応対を作ることができるニトリルイミンの潜在的供給源として作用し得る。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、システイン及びマレイミドである。例えば、ペプチドに由来するシステイン（例えば、ＧＧＧＣ）を、キレート剤（例えば、ＮＯＴＡ）に会合しているマレイミドと反応させることができる。他の好適なクリックケミストリーハンドルが当業者に知られている（例えば、Ｓｐｉｃｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．２０１４；５：ｐ．４７４０を参照されたい）。他の実施形態では、クリック反応パートナーは、ホスフィン及びアジドなどのシュタウディンガーライゲーション成分である。他の実施形態では、クリック反応パートナーはジエン（例えば、テトラジン）及びアルケン（例えば、トランス－シクロオクテン（trans-cyclooctene、ＴＣＯ）又はノルボルネン）などのディールス・アルダー反応成分である。例示的なクリック反応パートナーは、米国特許出願公開第２０１３０２６６５１２号及び国際公開第２０１５０７３７４６号に記載されており、これら特許文献におけるクリック反応パートナーについての関連する説明は、参照により本明細書に組み込まれる。
好ましい実施形態によれば、クリックケミストリー反応は、クリックケミストリー対又は反応パートナーとして、アジド基及びアルキン基、より好ましくは、歪みを有するアルキン基、例えば、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体などのシクロアルキンを利用する。そのような実施形態では、クリックケミストリー反応は、１，２，３－トリアゾールリンカーを形成するためのアジド（－Ｎ３）とアルキン部分との間のヒュスゲン環化付加又は１，３－双極子環化付加である。アルキンとアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には、１，３－シクロ付加反応を促進するために銅触媒の添加を必要とし、銅触媒アジド－アルキンシクロ付加（ＣｕＡＡＣ）反応として知られている。しかしながら、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体とアジドとの間のクリックケミストリー反応は、典型的には銅触媒の添加を必要とせず、代わりに、歪み促進型（strain-promoted）アジド－アルキン付加環化反応（strain-promoted azide-alkyne cycloaddition、ＳＰＡＡＣ）を介して進行する（Ｄｅｂｅｔｓ，Ｍ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎｅｄ ａｌｋｅｎｅｓ ａｎｄ ａｌｋｙｎｅｓ．Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ，２０１１．４４（９）：ｐ．８０５－１５）。
本明細書で使用するとき、用語「標的化リガンド」は、選択された標的、例えば、抗原、細胞、細胞種、組織、器官、身体の領域、又はコンパートメント（例えば、細胞、組織又は器官コンパートメント）に対する親和性を高める任意の分子を指す。標的化リガンドとしては、抗体又はその抗原結合フラグメント、アプタマー、ポリペプチド及び足場タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、標的化リガンドは、ポリペプチド、より好ましくはその抗体若しくはその抗原結合フラグメント、操作されたドメイン、又は足場タンパク質である。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」又は「免疫グロブリン」は広い意味で用いられ、ポリクローナル抗体を含む免疫グロブリン又は抗体分子、マウス、ヒト、ヒト適合、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体、並びにそれらの抗原結合フラグメントを含むモノクローナル抗体を含む。
一般に、抗体は、特定の抗原（本明細書では「標的」と称する）に対して結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４としてさらに細分類される。本発明で使用される抗体は、５つの主要なクラス又は対応するサブクラスのいずれかのものであり得る。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。特定の実施形態によれば、本発明で使用される抗体としては、マウス抗体又はヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖定常領域が挙げられる。４つのＩｇＧサブクラスのそれぞれは、エフェクター機能として既知の異なる生物学的機能を有する。これらのエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用によって、又はＣ１ｑの結合及び補体の固定によって媒介される。ＦｃγＲへの結合は、抗体依存性細胞媒介性細胞溶解をもたらし得るが、補体因子への結合は、補体媒介性細胞溶解をもたらし得る。本発明に有用な抗体は、エフェクター機能を有さないか又は最小であってもよいが、ＦｃＲｎに結合するその能力を保持する。
本明細書で使用するとき、用語「抗原結合フラグメント」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体又は親抗体フラグメントが結合する同じ抗原に結合することができる。本明細書で使用するとき、用語「単鎖抗体」は、約１５～約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、この分野における従来の単鎖抗体を指す。本明細書で使用するとき、用語「単一ドメイン抗体」は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むか、又は重鎖可変領域のみを含む、この分野における従来の単一ドメイン抗体を指す。
本明細書で使用するとき、用語「足場」又は「足場タンパク質」は、標的結合ドメインを有し、標的に結合することができる任意のタンパク質を指す。足場は、大部分が構造的である「フレームワーク」と、標的と接触して特異的結合を提供する「結合ドメイン」とを含む。足場の結合ドメインは、足場の１つの連続配列によって定義される必要はない。特定の場合、足場は、より大きい結合タンパク質の一部であってもよく、それ自体は、複数の足場を含む多量体結合タンパク質の一部であってもよい。特定の結合タンパク質は、２つ又はそれ以上の異なるエピトープに結合することができるという点で、二重特異性又は多重特異性であってもよい。足場は、単鎖抗体由来であってもよく、又は足場は抗体由来でなくてもよい。
本明細書で使用するとき、用語「アプタマー」は、高親和性でその標的に特異的に結合することができる一本鎖オリゴヌクレオチド（一本鎖ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）を指す。アプタマーは、様々な有機及び無機物質を標的化する分子として使用することができる。
本明細書に記載の化合物の医薬的に許容される塩は、本技術の範囲内であり、所望の薬理活性を保持し、かつ生物学的に望ましくないものではない酸又は塩基付加塩を含む（例えば、この塩は、過度に毒性、アレルギー性、又は刺激性ではなく、生物学的に利用可能である）。本技術の化合物が、例えばアミノ基などの塩基性基を有する場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、及びリン酸）、有機酸（例えば、アルギン酸塩、ギ酸、酢酸、安息香酸、グルコン酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、及びｐ－トルエンスルホン酸）、又は酸性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）と、医薬的に許容される塩を形成することができる。本技術の化合物が、例えばカルボン酸基などの酸性基を有する場合は、アルカリ金属及びアルカリ土類金属（例えば、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋）などの金属、アンモニア又は有機アミン（例えば、ジシクロヘキシルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン）、又は塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン、リジン及びオルニチン）と、塩を形成することができる。このような塩は、化合物の単離及び精製中にその場で調製され得るか、又はその遊離塩基形態若しくは遊離酸形態の精製された化合物を、それぞれ適切な酸若しくは塩基と別個に反応させ、これにより形成された塩を単離することによって調製され得る。
当業者は、本技術の化合物が、互変異性、立体配座異性、幾何異性、及び／又は立体異性の現象を示し得ることを理解するであろう。本明細書及び特許請求の範囲内の式の図面は、可能な互変異性形態、立体配座異性形態、立体異性形態、又は幾何異性形態のうちの１つのみを表し得るため、本技術は、本明細書に記載の有用性のうちの１つ又は２つ以上を有する化合物の任意の互変異性形態、立体配座異性形態、立体異性形態、及び／又は幾何異性体形態、並びにこれらの様々な異なる形態の混合物を包含することを理解されたい。
化合物の立体異性体（光学異性体とも呼ばれる）は、特定の立体化学が明示的に示されない限り、構造の全てのキラル、ジアステレオマー、及びラセミ形態を含む。したがって、本技術で使用される化合物は、描写から明らかなように、任意の又は全ての不斉原子における濃縮又は分解された光学異性体を含む。ラセミ混合物及びジアステレオマー混合物の両方、並びに個々の光学異性体は、それらのエナンチオマー又はジアステレオマーのパートナーを実質的に含まないように単離又は合成することができ、これらの立体異性体は全て本技術の範囲内である。
本技術は、従来技術のものよりも実質的により安定な、新しい大員環錯体を提供する。したがって、これらの新しい錯体は、癌細胞をより効果的に有利に標的化することができ、非標的化組織に対する毒性は、当技術分野の錯体よりも実質的に低い。さらに、新しい錯体は、放射性核種との錯体形成のために一般に高温（例えば、少なくとも８０℃）を必要とするＤＯＴＡ型錯体とは対照的に、室温で有利に製造することができる。本技術はまた、特に、β線放射性核種の代わりにα線放射性核種を使用する。α線放射性核種は、β線放射性核種よりもはるかに高エネルギーであり、したがって、実質的により強力である。
特定の実施形態を例示し説明してきたが、当業者は、前述の明細書を読んだ後に、本明細書に記載の本技術の化合物又はその塩、医薬組成物、誘導体、プロドラッグ、代謝産物、互変異性体若しくはラセミ混合物に対する変更、等価物の置換及び他の種類の改変を行うことができる。上記の各態様及び実施形態はまた、他の態様及び実施形態のいずれか又は全てに関して開示される変形例又は態様を含むか、又は組み込むことができる。
本技術は、本技術の個々の態様の単一の説明として意図される、本明細書に記載される特定の実施形態に関して限定されるものではない。本技術の多くの修正及び変形は、当業者には明らかとなるように、その趣旨及び範囲から逸脱することなくなされ得る。本技術の範囲内の機能的に同等な方法は、本明細書で列挙されるものに加えて、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正及び変形は、添付の特許請求の範囲に入ることが意図される。本技術は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、標識化合物又は生物系に限定されず、これらは、当然ながら変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためだけのものであり、限定することを意図しないことも理解されるべきである。したがって、本明細書は、添付の特許請求の範囲、その中の定義、及びその任意の均等物によってのみ示される本技術の広さ、範囲、及び趣旨を有する例示的なものとしてのみ考慮されることが意図される。
実施形態は、本明細書において例示的に開示されているが、本明細書において具体的に開示されていない任意の要素又は制限がない状態で好適に実施される場合がある。したがって、例えば、用語「含む（comprising）」、「含む（including）」、「含有する（containing）」などは、拡張的に、かつ限定なしに理解されるものとする。さらに、本明細書で使用されている用語及び表現は、説明のために使用され、限定するものではなく、このような用語及び表現の使用において、図示及び記載された特徴（又はその一部）の任意の等価物を排除する意図はなく、特許請求技術の範囲内で様々な修正が可能であることが認識される。さらに、「～から本質的になる（consisting essentially of）」という句は、具体的に列挙された要素、及び特許請求技術の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない追加の要素を含むと理解される。「～からなる（consisting of）」という句は、指定されていないあらゆる要素を除外する。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、発行済み特許、及び他の文書（例えば、雑誌、論文、及び／又は教科書）は、各個別の刊行物、特許出願、発行済み特許、又は他の文書が、その全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれるテキストに含まれる定義は、本開示における定義と矛盾する範囲で除外される。
本発明の化合物（大員環化合物）
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
Figure 2023547703000006
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、この５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は存在しない。Ｌ１が存在しない場合、Ｒ４は、化合物に直接結合される（例えば、共有結合を介して）。
いくつかの実施形態では、Ｌ１はリンカーである。本明細書で使用するとき、用語「リンカー」は、本発明の化合物を求核性部分、求電子性部分、又は標的化リガンドに結合させる化学部分を指す。本開示を考慮して、当業者に既知の任意の好適なリンカーを本発明で使用することができる。リンカーは、例えば、置換若しくは非置換アルキル、置換若しくは非置換ヘテロアルキル部分、置換若しくは非置換アリール若しくはヘテロアリール、ポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）リンカー、ペプチドリンカー、糖ベースのリンカー、又は切断可能なリンカー、例えば、ジスルフィド結合又はプロテアーゼ切断部位、例えば、バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジル（p-aminobenzyl、ＰＡＢ）を有し得る。本発明での使用に好適な例示的なリンカー構造としては、
Figure 2023547703000007
 が挙げられるがこれらに限定されず、式中、ｍは０～１２の整数である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、求核性部分又は求電子性部分である。「求核性部分」又は「求核基」は、化学反応において共有結合を形成するために電子対を供与する官能基を指す。「求電子性部分」又は「求電子基」は、化学反応において共有結合を形成するために電子対を受容する官能基を指す。求核基は、化学反応において、新たな共有結合を形成するために求電子基と反応し、その逆もしかりである。本発明の化合物の求核基又は求電子基を標的化リガンド又は対応する反応パートナーを含む他の化学部分（例えば、リンカー）と反応させることにより、標的化リガンド又は化学部分を本発明の化合物に共有結合させることが可能となる。
求核基の例示的な例としては、アジド、アミン、及びチオールが挙げられるが、これらに限定されない。求電子基の例示としては、アミン反応性基、チオール反応性基、アルキニル及びシクロアルキニルが挙げられるが、これらに限定されない。アミン反応性基は、好ましくは、各ポリペプチド鎖のＮ末端及びリジン残基の側鎖に存在する第一級アミンを含む、第一級アミンと反応する。本発明での使用に好適なアミン反応性基の例としては、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（N-hydroxy succinimide、ＮＨＳ）、置換ＮＨＳ（スルホ－ＮＨＳなど）、イソチオシアネート（－ＮＣＳ）、イソシアネート（－ＮＣＯ）、エステル、カルボン酸、ハロゲン化アシル、アミド、アルキルアミド、並びにテトラフルオロフェニルエステル及びパーフルオロフェニルエステルが挙げられるが、これらに限定されない。チオール反応性基は、チオール又はスルフヒドリルと反応し、好ましくは、ポリペプチドのシステイン残基の側鎖に存在するチオールと反応する。本発明での使用に好適なチオール反応性基の例としては、マイケル受容体（例えば、マレイミド）、ハロアセチル、ハロゲン化アシル、活性化ジスルフィド、及びフェニルオキサジアゾールスルホンが挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、Ｒ４は、－ＮＨ２、－ＮＣＳ（イソチオシアネート）、－ＮＣＯ（イソシアネート）、－Ｎ３（アジド）、アルキニル、シクロアルキニル、カルボン酸、エステル、アミド、アルキルアミド、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン、又はトランス－シクロオクテンであり、より具体的には、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、－ＣＯＯＲ１３、－ＣＯＮ（Ｒ１３）２、マレイミド、ハロゲン化アシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｃｌ、－Ｃ（Ｏ）Ｂｒ）、テトラジン、又はトランス－シクロオクテンであり、式中、各Ｒ１３は、独立して、水素又はアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、アルキニル基、シクロアルキニル基、又はアジド基であり、これにより、クリックケミストリー反応を用いて、本発明の化合物を標的化リガンド又は他の化学部分（例えば、リンカー）に結合させることが可能となる。そのような実施形態では、実施することができるクリックケミストリー反応は、１，２，４－トリアゾールリンカー又は部分を形成するためのアジド（－Ｎ３）とアルキニル基又はシクロアルキニル基との間のヒュスゲン環化付加又は１，３－双極子環化付加である。一実施形態では、本発明の化合物はアルキニル基又はシクロアルキニル基を含み、標的化リガンド又は他の化学部分はアジド基を含む。別の一実施形態では、本発明の化合物はアジド基を含み、標的化リガンド又は他の化学部分は、アルキニル基又はシクロアルキニル基を含む。
特定の実施形態では、Ｒ４は、アルキニル基であり、より好ましくは、特に、歪み促進型アジド－アルキンシクロ環化付加（ＳＰＡＡＣ）によりアジド基と反応性である末端アルキニル基又はシクロアルキニル基である。ＳＰＡＡＣによりアジド基と反応することができるシクロアルキニル基の例としては、シクロオクチニル又はビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、Ｒ４は、以下の構造を有するジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）である。
Figure 2023547703000008
 Ｒ４がＤＢＣＯである実施形態では、ＤＢＣＯは、直接的に又はリンカーを介して間接的に化合物に共有結合することができ、好ましくは、リンカーを介して間接的に化合物に結合される。
特定の実施形態では、Ｒ４は標的化リガンドである。標的化リガンドは、共有結合により直接的に又はリンカーを介して間接的に化合物に結合することができる。標的化リガンドは、ポリペプチド、例えば、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、アプタマー、又は足場タンパク質などであり得る。好ましい実施形態では、標的化リガンドは、抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、前立腺特異的膜抗原（prostate-specific membrane antigen、ＰＳＭＡ）、ＢＣＭＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７９ｂ又はネクチン－４であり得る、癌抗原などの腫瘍疾患又は障害に関連する抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）又はその抗原結合フラグメントである。
特定の実施形態によれば、標的化リガンドは、前立腺特異的抗原（例えば、ＰＳＭＡ又はＫＬＫ２）に特異的に結合する。
別の一実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物：
Figure 2023547703000009
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 2023547703000010
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、Ｒ１が－Ｌ１－Ｒ４であり、Ｒ２及びＲ３が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、Ｌ１が、存在しないか、又はリンカーであり、Ｒ４は、求核性部分、求電子性部分、又は標的化リガンドである化合物、又はその医薬的に許容される塩を目的とする。
更なる一実施形態では、本発明は、Ｒ１がＨであり、Ｒ２及びＲ３が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、－Ｌ１－Ｒ４で置換されている５員又は６員のシクロアルキルを形成し、Ｌ１が、存在しないか、又はリンカーであり、Ｒ４が、求核性部分、求電子性部分、又は標的化リガンドである化合物、又はその医薬的に許容される塩を目的とする。
更なる実施形態は、Ｒ４が標的化リガンドであり、この標的化リガンドが、抗体、抗体の抗原結合フラグメント、足場タンパク質、及びアプタマーからなる群から選択されるものを含む。
一実施形態では、本発明の化合物は、
Figure 2023547703000011
Figure 2023547703000012
 からなる群から独立して選択される任意の１つ又は２つ以上の化合物であり、式中、ｎは１～１０である。
以下により詳細に記載されるクリックケミストリー反応により、化合物をアジド標識標的化リガンドと反応させて１，２，３－トリアゾールリンカーを形成することによって、当該化合物は、標的化リガンド（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）に共有結合して、免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲート（金属と錯体形成した場合）を形成することができる。
本発明の化合物は、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって製造することができる。例えば、ペンダント芳香族／複素芳香族基は、以下に例示及び記載されるものなどの当該技術分野で既知の方法によって、大員環部分に結合することができる。
放射性金属錯体
特定の実施形態では、本発明は、配位結合により本発明の化合物に錯体化された放射性金属イオンを含む放射性金属錯体を目的とする。本明細書に記載される本発明の化合物のいずれも、放射性金属イオンを含むことができる。好ましくは、放射性金属イオンは、α線放出放射性金属イオン、より好ましくは２２５Ａｃである。本発明の化合物は、金属不純物に関係なく、任意の比活性で、放射性金属イオン、特に２２５Ａｃをキレート化することができ、したがって、インビボ及びインビトロで高いキレート安定性を有し、かつ、負荷剤（challenge agent）、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（diethylene triamine pentaacetic acid、ＤＴＰＡ）に対して安定である放射性金属錯体を形成する。
特定の実施形態では、本発明は、式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性金属錯体構造体：
Figure 2023547703000013
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｍ＋は放射性金属イオンであり、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、この５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、式（ＩＩ－Ｍ＋）の放射性金属錯体：
Figure 2023547703000014
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｍ＋は放射性金属イオンであり、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、式（ＩＩＩ－Ｍ＋）の放射性金属錯体：
Figure 2023547703000015
 又はその医薬的に許容される塩を目的とする（式中、
Ｍ＋は放射性金属イオンであり、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
別の一実施形態では、本発明は、式中、
Ｍ＋が放射性金属イオンであり、Ｍ＋が、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｒ１が－Ｌ１－Ｒ４であり、
Ｒ２及びＲ３が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、
Ｌ１が、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４が、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、放射性金属錯体、
又はその医薬的に許容される塩を目的とする。
更なる一実施形態では、本発明は、式中、
Ｍ＋が放射性金属イオンであり、Ｍ＋が、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｒ１が、Ｈであり、
Ｒ２及びＲ３が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、－Ｌ１－Ｒ４で置換されている５員又は６員のシクロアルキルを形成し、
Ｌ１が、存在しないか、又はリンカーであり、
Ｒ４が、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、放射性金属錯体、
又はその医薬的に許容される塩を目的とする。
特定の実施形態では、本発明は：
Figure 2023547703000016
Figure 2023547703000017
Figure 2023547703000018
 からなる群から選択される任意の１つ又は２つ以上の放射性金属錯体を目的とし、式中、ｎは１～１０であり、Ｍ＋は放射性金属イオンであり、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される。
放射性金属錯体は、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって製造することができる。例えば、本発明の大員環化合物を、放射性金属イオンと混合することができ、混合物をインキュベートして、放射性金属錯体を形成することができる。例示的な一実施形態では、化合物を２２５Ａｃ（ＮＯ３）３の溶液と混合して、配位結合を介して化合物に結合した２２５Ａｃを含む放射性錯体を形成する。上記のように、本発明の化合物は、放射性金属、特に２２５Ａｃを効率的にキレート化する。したがって、特定の実施形態では、本発明の化合物は、１：１０００、１：５００、１：４００、１：３００、１：２００、１：１００、１：５０、１：１０、又は１：５、好ましくは１：５～１：２００、より好ましくは１：５～１：１００の、本発明の化合物と２２５Ａｃイオンとの濃度比で、２２５Ａｃイオンの溶液と混合される。したがって、いくつかの実施形態では、放射性金属錯体を形成するために使用できる本発明の化合物と２２５Ａｃとの比は、他の既知の２２５Ａｃキレータ（例えば、ＤＯＴＡ）で達成できる比よりもはるかに低い。この放射性錯体は、インスタント薄層クロマトグラフィー（例えば、ｉＴＬＣ－ＳＧ）、ＨＰＬＣ、ＬＣ－ＭＳなどによって特徴付けることができる。例示的な方法は、本明細書中に、例えば以下の実施例に記載される。
免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲート
別の一実施形態では、本発明は、免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートを目的とする。本発明の化合物及び本発明の放射性金属錯体は、免疫物質などの標的化リガンドにコンジュゲートさせて（すなわち、共有結合させて）、標的化放射線治療などの対象（例えば、ヒト）における医療用途に好適な免疫コンジュゲート及び／又は放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。本発明の大員環化合物、放射性金属錯体及び放射性免疫コンジュゲートを使用して、標的化リガンド、特に、目的の標的（癌細胞など）に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合フラグメントを放射線金属イオンで特異的に標識して、放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。具体的には、本発明の化合物及び／又は本発明の放射性金属錯体を使用して、放射性金属イオン（特に２２５Ａｃ）の高収率錯体化及び所望の化合物－抗体比（ＣＡＲ）を有する放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、１０未満、８未満、６未満、若しくは４未満の平均ＣＡＲ、又は約２～約８、若しくは約２～約６、若しくは約２～約４、若しくは約２～約３のＣＡＲ、又は約２、若しくは約３、若しくは約４、若しくは約５、若しくは約６、若しくは約７、若しくは約８のＣＡＲを提供する。
本明細書で使用するとき、「免疫コンジュゲート」は、毒素、薬物、放射性金属イオン、放射性金属錯体などの第２の分子にコンジュゲートされた（例えば、共有結合により結合された）抗体又はその抗原結合フラグメントである。「放射性免疫コンジュゲート」（放射性コンジュゲートとも呼ばれる場合がある）は、特に、抗体又はその抗原結合フラグメントが、放射性金属で標識された又は放射性金属錯体にコンジュゲートされた免疫コンジュゲートである。
本発明の特定の実施形態では、免疫コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメントに、好ましくはリンカーを介して共有結合した、本発明の化合物（例えば、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物）を含む。式（Ｉ）の化合物及び抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性官能基（すなわち、求核性及び求電子性）に応じて、本発明の化合物と抗体又はその抗原結合フラグメントとの間の様々な結合を有する多くの結合形態が可能である。
本発明の特定の実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、本発明の放射性金属錯体、例えば、本明細書に記載される放射性金属錯体を含み、好ましくはリンカーを介して、抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合されている。
本明細書に記載される本発明の化合物又は放射性金属錯体のいずれかを使用して、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。
特定の実施形態では、本発明の放射性金属錯体又は放射性免疫コンジュゲートは、放射性錯体の本化合物部分に配位されたα線放出放射性金属イオンを含む。好ましくは、α線放出放射性金属イオンは２２５Ａｃである。
特定の実施形態では、本出願の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲート中の抗体又は抗原結合フラグメントは、腫瘍抗原に特異的に結合することができる。好ましくは、抗体又は抗原結合フラグメントは、癌抗原に特異的に結合する。癌抗原の例としては、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＢＣＭＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７９ｂ、及びネクチン－４が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、抗体は、ＰＳＭＡに特異的に結合する。好ましくは、抗体はＰＳＭＢ１２７である。本明細書で「抗ＰＳＭＡ ｍＡｂ」と称され、「ＰＳＭＢ１２７」と表される、ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合するヒトＩｇＧ４抗体は、配列番号３の重鎖（heavy chain、ＨＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣ ＣＤＲ２配列、配列番号５のＨＣ ＣＤＲ３配列、配列番号６の軽鎖（light chain、ＬＣ）ＣＤＲ１配列、配列番号７のＬＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号８のＬＣ ＣＤＲ３配列を有し、かつ、配列番号９のＨＣ配列及び配列番号１０のＬＣ配列を有する。抗ＰＳＭＡ ｍＡｂを発現させ、標準クロマトグラフィー法を用いて精製した。抗体ＰＳＭＢ１２７、その生物学的活性、その使用又は他の関連情報は、例えば、米国特許出願公開第２０２０００２４３６０（Ａ１）号に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
別の一実施形態では、抗体は、ヒトカリクレイン２（ＫＬＫ２）に特異的に結合する。ＫＬＫ２は、ｈＫ２と呼ばれる場合もある。好ましくは、抗体はＨ１１Ｂ６（ｈ１１Ｂ６とも称される）である。Ｈ１１Ｂ６抗体、生物学的活性、使用又はその他関連情報は、米国特許第１０，１００，１２５号に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるように、Ｈ１１Ｂ６抗体ポリペプチドは、配列番号１１及び配列番号１２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変領域、並びに配列番号１４及び配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域を含む。
したがって、特定の実施形態によれば、本発明の放射性コンジュゲートはｈ１１Ｂ６抗体を含み、これは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列（ＳＤＹＡＷＮ）を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列（ＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ）を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１３のアミノ酸配列（ＧＹＹＹＧＳＧＦ）を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列（ＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨ）を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列（ＡＡＳＮＲＥＳ）を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列（ＱＱＴＲＫＶＰＹＴ）を有するＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、を含む。
抗Ｈ１１Ｂ６抗体は、さらに、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有するか、又は配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を有するか、あるいは配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を有することができる。
Ｋａｂａｔ番号付けスキーム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１）が、本説明を通して使用される（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖定常領域、及び／又は配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖定常領域を含む。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する重鎖、及び／又は配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有する軽鎖を含む。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体（例えば、ｈ１１Ｂ６）は、インタクトな（すなわち、完全な）抗体、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭ分子を含むか、又はそれからなる。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体（例えば、ｈ１１Ｂ６）は、インタクトなＩｇＧ分子、又はその変異体を含むか、又はそれからなる。ＩｇＧ分子は、任意の周知のサブタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４であり得る。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体であるｈ１１Ｂ６抗体を含む。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ＩｇＧ１カッパアイソタイプであるｈ１１Ｂ６抗体を含む。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体又はその変異体（例えばＦｃ変異体）であるｈ１１Ｂ６抗体を含む。
本明細書に開示される実施形態のいずれかにおいて（簡略化のために、以下では「本明細書に開示される任意の実施形態では」などとして記載される）、抗体は、ベリムマブ、モガムリズマブ、ブリナツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、オビヌツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、イノツズマブオゾガマイシン、モキセツモマブパスドトックス、ブレンツキシマブベドチン、ダラツムマブ、イピリムマブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ、ジヌツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、シルツキシマブ、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、オララツマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、カプロマブペンデチド、エロツズマブ、デノスマブ、ジブ－アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラムシルマブ、トシツモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、アレムツズマブ、シクスツムマブ、ギレンツキシマブ、ニモツズマブ、カツマキソマブ、又はエタラシズマブを含み得るが、これらに限定されない。本明細書に開示される任意の実施形態では、抗体フラグメントは、ベリムマブ、モガムリズマブ、ブリナツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、オビヌツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、イノツズマブオゾガマイシン、モキセツモマブパスドトックス、ブレンツキシマブベドチン、ダラツムマブ、イピリムマブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ、ジヌツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、シルツキシマブ、セミプリマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、オララツマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、カプロマブペンデチド、エロツズマブ、デノスマブ、ジブ－アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラムシルマブ、トシツモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、アレムツズマブ、シクスツムマブ、ギレンツキシマブ、ニモツズマブ、カツマキソマブ、又はエタラシズマブの抗原結合性フラグメントを含む場合もある。本明細書に開示される任意の実施形態では、結合ペプチドは、前立腺特異的膜抗原（「ＰＳＭＡ」）結合ペプチド、ソマトスタチン受容体アゴニスト、ボンベシン受容体アゴニスト、セプラーゼ結合化合物、又はそれらの結合フラグメントを含み得るが、これらに限定されない。
本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、リガンド（例えば抗体）を本発明の化合物にコンジュゲーションするための本開示を考慮して、化学的及び／又は酵素的方法を含む、当技術分野で既知の任意の方法によって調製することができる。例えば、免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、限定するものではないが、活性化酸又はハロゲン化アシルからのエステル、チオエステル、又はアミドの形成を含む、結合反応；求核置換反応（例えば、ハロゲン化環の求核置換又は歪みを有する環系の開環など）；アジド－アルキンヒュスゲン環化付加（例えば、１，２，３－トリアゾールリンカーを形成するためのアジドとアルキンとの間の１，３双極子環化付加）；チオリン付加反応；イミン形成；テトラジンとトランスシクロクテン（ＴＣＯ）との間のディールス・アルダー反応；及びマイケル付加（例えば、マレイミド付加）によって調製することができる。使用される反応性官能基に応じて、異なる結合を有する多くの他の付加様式が可能である。リガンドの結合は、放射性金属イオンに配位されている化合物、又は放射性金属イオンに配位されていない化合物に対して行うことができる。
一実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、例えばクリックケミストリー反応（例えば、図２Ｂ及び２Ｄを参照、「クリック放射性標識化」と称する）によって、本発明の放射性金属錯体を抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合させることによって生成することができる。あるいは、放射性免疫コンジュゲートは、例えばクリックケミストリー反応によって、本発明の化合物を抗体又はその抗原結合フラグメントに共有結合させることによって、本発明の免疫コンジュゲートを最初に調製し、続いて、放射性免疫コンジュゲートを生成するために、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンで標識化すること（例えば、図２Ａ及び図２Ｃを参照、「１工程直接放射性標識化」と称する）により、生成することができる。コンジュゲーションの残基特異的方法（例えば、図２Ａ及び図２Ｂ）及び部位特異的方法（例えば、図２Ｃ及び図２Ｄ）の両方を、本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートを生成するために使用することができる。
タンパク質へのコンジュゲーションのための残基特異的方法は十分に確立されており、最も一般的には、活性化エステル又はイソチオシアネートを使用したリシン側鎖、又はマレイミド、ハロアセチル誘導体又は活性化ジスルフィドを有するシステイン側鎖のいずれかを伴う（Ｂｒｉｎｋｌｅｙ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １９９２：２）。ほとんどのタンパク質は複数のリジン及びシステイン残基を有するため、様々なアミノ酸位置において異なる数のコンジュゲート分子を有する生成物の不均一な混合物は、典型的には、そのような方法を使用して得られる。チロシン特異的コンジュゲーション（Ｂａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１３：５２０）、メチオニン特異的方法（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１７（３５５）５９７）、追加のシステインに焦点を合わせたアプローチ（Ｔｏｄａ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ ２０１３：１２５９２）などを含む、追加の方法が確立されている。
より最近では、モノクローナル抗体及び他のタンパク質について、部位選択的及び部位特異的コンジュゲーション方法が確立されている（Ａｇａｒｗａｌ，Ｐ．ａｎｄ Ｃ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，２０１５．２６（２）：ｐ．１７６－９２；Ｒａｂｕｋａ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ２０１０：７９０）。これらとしては、非天然アミノ酸の組み込み；ＳＮＡＰ又はＤＨＦＲなどの「自己標識化タグ」又はソルターゼＡ、リポ酸リガーゼ及びホルミルグリシン生成酵素などの別の酵素によって特異的に認識及び修飾されるタグへの目的のタンパク質の融合；目的のペイロードのコンジュゲートを可能にするためのグリカンの酵素修飾（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ ２０１６：１６９１）；抗体上の定義された位置を選択的に認識するための微生物トランスグルタミナーゼの使用；並びに選択的コンジュゲートに影響を及ぼすための分子認識及び／又は化学的アプローチを使用する追加の方法（Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．２０１９：５５９２；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ ２０１８：３２４０；Ｐｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ ２０１８：７９９）が挙げられる。
特定の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートは、本発明の化合物を抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせるための残基特異的方法を使用して生成される。そのような残基特異的方法により、典型的には、抗体の様々な位置において本発明の化合物又は放射性金属錯体に共有結合した免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートが得られる。本開示を考慮して当業者に既知のタンパク質又は抗体コンジュゲートを形成するための任意の残基特異的方法を使用することができる。使用することができるコンジュゲートのための残基特異的方法の例としては、例えば活性化エステル又はイソチオシアネート基を含む本発明の化合物又は放射性金属錯体を使用して、本発明の化合物又は放射性金属錯体を抗体のリシン残基にコンジュゲートすること、例えば、マレイミド、ハロアセチル誘導体、アシルハライド、活性化ジスルフィド基又はメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール基を含む本発明の化合物又は放射性金属錯体を使用して、抗体のシステイン残基にコンジュゲートすること、例えば、４－フェニル－３Ｈ－１，２，４－トリアゾリン－３，５－（４Ｈ）－ジオン（ＰＴＡＤ）を含む本発明の化合物又は放射性金属錯体を使用して、抗体のチロシン残基にコンジュゲートすること、及び、例えばオキサジリジン誘導体を含む本発明の化合物又は放射性金属錯体を使用して、抗体のメチオニン残基にコンジュゲートすることが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物又は本発明の放射性金属錯体にコンジュゲートする前に、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、特異的な残基において、抗体を双直交（biorthogonal）反応性官能基で標識化することも可能である。例えば、双直交反応性官能基、例えば、アジド、アルキニル又はシクロアルキニルに結合されたオキサジリジン誘導体を使用して、チロシン残基を、双直交反応性官能基において部位特異的に標識化することができ、次いで、適合性の反応性官能基を有する本発明の化合物又は放射性金属錯体を使用して、標識されたチロシン残基を含む抗体を、本発明の化合物又は本発明の放射性金属錯体にコンジュゲートさせることができる。
特定の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートは、本発明の化合物を抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせるための部位特異的又は部位選択的方法を用いて生成することができる。残基特異的方法とは対照的に、「部位特異的」又は「部位選択的」方法により、典型的には、抗体の特定の位置において本発明の化合物又は放射性金属錯体に共有結合した免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートが得られる。本開示を考慮して当業者に既知のタンパク質又は抗体コンジュゲートを形成するための任意の部位特異的方法を使用することができる。例えば、目的の非天然アミノ酸を有するｔＲＮＡを選択的にアミノアシル化することができる変異アミノアシルｔ－ＲＮＡシンセターゼを使用して、非天然アミノ酸（例えば、アジドアミノ酸又はアルキニルアミノ酸）を抗体に特異的に組み込むことができる。次に、アンバーサプレッサーｔＲＮＡと共に変異アシル化ｔＲＮＡを使用して、アンバーナンセンスコドンに応答して、非天然アミノ酸をタンパク質に部位特異的に組み込むことができる。上記の方法のうちの１つ又は２つ以上によって特異的に標識された抗体は、続いて、適合性の反応性官能基を有する本発明の化合物又は本発明の放射性金属錯体とコンジュゲートさせることができる。
特定の実施形態では、本発明は、Ｒ４が求核性若しくは求電子性部分である本発明の化合物又は本発明の放射性錯体を、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は求核性部分若しくは求電子性部分を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントと反応させることを含む、放射性免疫コンジュゲートの製造方法を目的とする。
一実施形態では、本発明は、本発明の化合物を、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は求核性官能基若しくは求電子性官能基を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントと反応させて、本発明の化合物と抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は修飾された抗体若しくは抗原結合フラグメントとの間に共有結合を有する免疫コンジュゲートを形成することと、放射性金属イオンが配位結合により免疫コンジュゲートの本発明の化合物に結合するように、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、それにより、放射性免疫コンジュゲートを形成することと、を含む方法を目的とする。この実施形態は、放射性金属が関与する化学反応工程が１つしかないので、「１工程直接放射性標識化」方法（例えば、図２Ｃに概略的に示される）と称されてもよい。
別の一実施形態では、本発明は、本発明の放射性錯体を、抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は求核性若しくは求電子性官能基を含む修飾された抗体若しくはその抗原結合フラグメントと反応させ、それにより、放射性免疫コンジュゲートを形成することを含む方法を目的とする。この実施形態は、「クリック放射性標識化」方法（例えば、図２Ｄに概略的に示される）と称されてもよい。修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、本開示を考慮して当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、特定の残基において、抗体を直交性反応性官能基で標識化することによって、あるいは、上記の方法のうちの１つ又は２つ以上を使用して、非天然アミノ酸（例えば、アジドアミノ酸又はアルキニルアミノ酸）を抗体に部位特異的に組み込むことによって、生成することができる。標識化の程度（degree of labeling、ＤＯＬ）は、置換度（degree of substitution、ＤＯＳ）と称する場合もあり、非天然アミノ酸によって修飾された抗体などのバイオコンジュゲートを特徴付ける及び最適化するための特に有用なパラメータである。これは、タンパク質分子（抗体など）に結合した非天然アミノ酸の平均数として、又は標識／タンパク質の形態でのモル比として表される。ＤＯＬは、当該分野における任意の既知の方法により、標識抗体の吸収スペクトルから決定することができる。
本発明の特定の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート及び放射性免疫コンジュゲートは、クリックケミストリー反応を用いて調製される。例えば、本発明の放射性免疫コンジュゲートは、「クリック放射性標識化」と称するクリックケミストリー反応を使用して調製することができる（例えば、図２Ｂ及び図２Ｄを参照）。クリック放射性標識化は、クリックケミストリー反応パートナー、好ましくはアジド及びアルキン（例えば、シクロオクチン又はシクロオクチン誘導体）を使用して、放射性錯体（本発明の化合物に結合した放射性金属イオン）と抗体又はその抗原結合フラグメントとの間にトリアゾール共有結合を形成する。抗体のクリック放射性標識化方法は、例えば、「Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ」と題する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／６５９１３号に記載されており、その関連する説明は参照により本明細書に組み込まれる。「１工程直接放射性標識化」と称する他の実施形態では、免疫コンジュゲートが、抗体又はその抗原結合フラグメントと本発明の化合物との間のクリックケミストリー反応を使用して調製され、次いで、免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと接触させて、放射性免疫コンジュゲートを形成する（例えば、図２Ａ及び図２Ｃを参照）。
一実施形態では、本発明は、放射性金属イオンを（例えば、配位結合により）本発明の化合物に結合することを含む、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法を目的とする。
一実施形態では、放射性免疫コンジュゲートを調製する「１工程直接放射性標識化」方法は、免疫コンジュゲート（すなわち、ポリペプチド－本発明の化合物の錯体）を放射性金属イオンと接触させて、それにより放射性免疫コンジュゲートを形成することを含み、この免疫コンジュゲートは本発明の化合物を含む。特定の実施形態によれば、免疫コンジュゲートは、本発明の化合物とポリペプチドとの間のクリックケミストリー反応により形成される。特定の実施形態によれば、放射性免疫コンジュゲートは、金属のない条件を用いずに（例えば、反応混合物から一般的な金属不純物を除去又は積極的に排除する任意の工程なしに）形成される。これは、製造プロセスに重大な課題をもたらす鉄、亜鉛及び銅などの一般的な金属の競合的（非生産的）キレート化を回避するために、金属のない厳密な条件下で抗体を放射性標識化する必要がある特定の従来方法とは対照的である。
一実施形態では、本発明は、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法（「１工程直接放射性標識化」法を含む）を目的とし、この方法は：
（ｉ）修飾ポリペプチドを本発明の化合物と反応させる工程であって、この修飾ポリペプチドが、アジド基からなる抗体又はその抗原結合フラグメントであり、これにより免疫コンジュゲートを得る、工程と、
（ｉｉ）この免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、放射性免疫コンジュゲートを得る工程と、を含む。
別の一実施形態では、本発明は、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法（「１工程直接放射性標識化」法を含む）を目的とし、この方法は：
（ｉ）アジド基からなる修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを式Ｉの化合物と反応させて、免疫コンジュゲートを得る工程と、
（ｉｉ）この免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、放射性免疫コンジュゲートを得る工程と、を含む。
特定の実施形態では、本発明は、放射性免疫コンジュゲートを調製する方法（例えば、図２Ｄに示されるような「クリック放射性標識化」法を含む）を目的とし、この方法は：
（ｉ）アジド基がアルキニル基又はシクロアルキニル基と反応する条件下で、修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを放射性錯体と反応させ、これにより放射性免疫コンジュゲートを得る工程、を含む。
クリックケミストリー反応を実施するための条件は、当該技術分野において知られており、本開示を考慮して当業者に既知のクリックケミストリー反応を実施するための任意の条件を本発明で使用することができる。条件の例としては、限定されないが、ｐＨ４～１０及び温度２０℃～７０℃において、１：１～１０００：１の比で、修飾ポリペプチド及び放射性錯体をインキュベートすることが挙げられる。
上記のクリック放射性標識化方法は、低若しくは高ｐＨ及び／又は高温条件下での放射性金属イオンの錯体化を可能にして効率を最大化し、これは、アルキン反応パートナーを不活性化するリスクなしに達成することができる。アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメントと放射性錯体との間の効率的な錯体化及び効率的なＳＰＡＡＣ反応により、アジド：抗体の低い比でも高い放射化学的収率で放射性免疫コンジュゲートを生成することが可能となる。微量金属を除外しなければならない唯一の工程は、大員環化合物化部分に対する放射性金属イオン錯体化であり、抗体の生産、精製、及びコンジュゲーションの工程は、金属を含まない条件下で行われる必要はない。
本発明の化合物及び放射性金属錯体はまた、部位特異的放射性標識化ポリペプチド（例えば、抗体）の生成に使用することもできる。本明細書に記載のクリック放射性標識化方法は、アジド基を抗体上に部位特異的に導入するための確立された方法を利用することにより、放射性免疫コンジュゲートの部位特異的な生成を容易にする（Ｌｉ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｇｌｙｃａｎ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ｓｔｒａｉｎ－ｐｒｏｍｏｔｅｄ ａｚｉｄｅ－ａｌｋｙｎｅ ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎｓ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ，２０１４．５３（２８）：ｐ．７１７９－８２、Ｘｉａｏ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ，２０１３．５２（５２）：ｐ．１４０８０－３）。部位特異的方法でタンパク質又は抗体に分子を付着させる方法は、当該技術分野において知られており、当業者に既知の抗体を部位特異的に標識する任意の方法を、本開示を考慮して本発明で使用することができる。本発明での使用に好適な抗体を部位特異的に修飾する方法の例としては、限定されないが、修飾システイン残基（例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））の組み込み、非天然アミノ酸又はグリカン（例えば、セレノシステイン、ｐ－ＡｃＰｈｅ、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ、ＳＭＡＲＴａｇ（商標））など）の使用、及び酵素法（例えば、グリコトランスフェラーゼ、エンドグリコシダーゼ、微生物又は細菌トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ又はＢＴＧ）、ソルターゼＡなど）が挙げられる。
特定の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートの生成に使用するための修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はその抗原結合フラグメントを、抗体のＦｃ－グリコシル化部位におけるコアＧｌｃＮａｃ残基間のβ－１，４結合に特異的な細菌エンドグリコシダーゼ、例えば、ＧｌｙｃＩＮＡＴＯＲ（Ｇｅｎｏｖｉｓ）（これは、Ｆｃ上の最も内側のＧｌｃＮＡｃをインタクトなままとし、その部位でアジド糖の部位特異的な組み込みを可能にする）で短縮する（ｔｒｉｍ）ことによって得られる。次いで、短縮された抗体又はその抗原結合フラグメントを、ＧａｌＴガラクトシルトランスフェラーゼ又はＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼなどの糖転移酵素の存在下で、ＵＤＰ－Ｎ－アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ－ＧａｌＮａｚ）又はＵＤＰ－６－アジド６－デオキシＧａｌＮａｃなどのアジド標識化糖と反応させて、それにより修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。
他の実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートの生成に使用するための修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体又はその抗原結合フラグメントをアミダーゼで脱グリコシル化することによって得られる。次いで、得られた脱グリコシル化抗体又はその抗原結合フラグメントを、アジドアミン、好ましくは３－アジドプロピルアミン、６－アジドヘキシルアミン又は任意のアジドリンカーアミン若しくは任意のアジドアルキル／ヘテロアルキルアミン、例えば、アジド－ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－アミン、例えば、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）テトラエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）ペンタエチレングリコール、Ｏ－（２－アミノエチル）－Ｏ’－（２－アジドエチル）トリエチレングリコールなどと反応させ、あるいは微生物トランスグルタミナーゼの存在下で反応させて、修飾された抗体又はその抗原結合フラグメントを得ることができる。
本明細書に記載の任意の放射性金属錯体を使用して、本発明の放射性免疫コンジュゲートを生成することができる。特定の実施形態では、放射性金属錯体は、式（Ｉ－Ｍ＋）の構造を有する。
特定の実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、
Figure 2023547703000019
 からなる群から独立して選択される任意の１つ又は２つ以上の構造である（式中、
Ｍ＋は放射性金属イオンであり、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択され、
Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである）。
別の一実施形態では、放射性免疫コンジュゲートは、
Figure 2023547703000020
 からなる群から選択される任意の１つ又は２つ以上の化合物である（式中、ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである）。
「ｍＡｂ」を含む本明細書に示される放射性免疫コンジュゲート構造において、この構造は、放射性金属錯体に結合するｍＡｂの残基（例えば、ｍＡｂのリジン残基）を示さないことに留意されたい。
本発明の一実施形態は、以下の構造：
Figure 2023547703000021
 （本明細書においてＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲートとも称される）を有する放射性免疫コンジュゲートを提供し、
式中、Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）であり、
ｍＡｂはｈＫ２に対する結合特異性を有し、例えば、
（ｉ）このｍＡｂは、配列番号１１及び配列番号１２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変領域、並びに配列番号１４及び配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域を含む、Ｈ１１Ｂ６抗体であり、及び／又は
（ｉｉ）このｍＡｂは、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
本発明の一実施形態は、以下の構造：
Figure 2023547703000022
 を有する放射性免疫コンジュゲートを提供し、
（ｉ）このｍＡｂは、配列番号１１及び配列番号１２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変領域、並びに配列番号１４及び配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変領域を含む、Ｈ１１Ｂ６抗体であり、及び／又は
（ｉｉ）このｍＡｂは、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
本明細書に記載の方法によって生成された放射性免疫コンジュゲートは、本開示を考慮して当業者に既知の方法を使用して分析することができる。例えば、ＬＣ／ＭＳ分析を使用して、化合物と、標識されたポリペプチド、例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントとの比率を決定することができ、分析サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、ポリペプチド及びポリペプチドコンジュゲート、例えば、抗体及び抗体コンジュゲートのオリゴマー状態を決定することができ、放射化学的収率は、インスタント薄層クロマトグラフィー（例えば、ｉＴＬＣ－ＳＧ）によって決定することができ、放射化学純度は、サイズ排除ＨＰＬＣによって決定することができる。例示的な方法は、本明細書、例えば、以下の実施例に記載される。
医薬組成物及び使用方法
別の一実施形態では、本発明は、本発明の化合物、本発明の放射性金属錯体、免疫コンジュゲート、又は放射性免疫コンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を目的とする。医薬組成物はまた、１つ又は２つ以上の医薬的に許容される担体を含み得る。
一実施形態では、医薬組成物は、本発明の化合物、及び医薬的に許容される担体を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、本発明の放射性金属錯体、及び医薬的に許容される担体を含む。
別の一実施形態では、医薬組成物は、本発明の免疫コンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む。
別の一実施形態では、医薬組成物は、本発明の放射性免疫コンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む。
本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知である他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬的に許容される担体」は、本発明による組成物の効果にも本発明による組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、抗体に基づく又は放射性錯体に基づく医薬組成物での使用に好適な、任意の医薬的に許容可能な担体を本発明において使用することができる。
特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への意図される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載の組成物は、非経口投与、例えば、静脈内、皮下、筋肉内又は腫瘍内投与に好適であるように製剤化することができる。
特定の実施形態では、本発明は、放射線治療及び腫瘍疾患又は障害を治療するために腫瘍細胞を選択的に標的化する方法を目的とする。本明細書に記載の放射性錯体又は放射性免疫コンジュゲートのいずれか及びそれらの医薬組成物を本発明の方法で使用することができる。
「腫瘍（neoplasm）」は、細胞が必要以上に分裂したとき、又は死滅しなければいけない場合に死滅しないときに生じる異常な組織塊である。腫瘍は、良性（癌ではない）又は悪性（癌）であり得る。腫瘍（neoplasm）は腫瘍（tumor）とも呼ばれる。腫瘍疾患又は障害は、癌などの腫瘍に関連する疾患又は障害である。腫瘍疾患又は障害の例としては、播種性癌及び固形腫瘍癌が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、本発明は、前立腺癌の治療を必要とする対象における前立腺癌（例えば、転移性前立腺癌、又は転移性去勢抵抗性前立腺癌）を治療する方法を目的とし、この方法は、治療有効量の本明細書に記載される免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートを対象に投与することを含み、この免疫コンジュゲート又は放射性免疫コンジュゲートは、Ｈ１１Ｂ６にコンジュゲートした本明細書に記載の放射性金属錯体を含む。
本発明の実施形態は、前立腺癌と診断された患者（例えば、末期前立腺癌を有する患者）を治療するのに特に有用である。一実施形態によれば、癌は非限局性前立腺癌である。別の一実施形態によれば、癌は転移性前立腺癌である。別の一実施形態によれば、癌は去勢抵抗性前立腺癌（castration-resistant prostate cancer、ＣＲＰＣ）である。別の一実施形態によれば、癌は転移性去勢抵抗性前立腺癌（metastatic castration-resistant prostate cancer、ｍＣＲＰＣ）である。別の一実施形態によれば、癌は、腺癌を有するｍＣＲＰＣである。
本明細書に記載の本発明の方法によって治療される又は放射線治療のために標的化される疾患の他の例としては、肥大、冠状動脈疾患、若しくは血管閉塞性疾患、感染した細胞、微生物、若しくはウイルスに関連する疾患又は障害、又は関節リウマチ（rheumatoid arthritis、ＲＡ）などの炎症性細胞に関連する疾患又は障害が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明は、放射線治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化する方法を目的とし、この方法は、本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物を対象に投与することを含む。
一実施形態では、本発明は、腫瘍疾患又は障害を治療する方法を目的とし、この方法は、治療を必要とする対象に本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物を対象に投与することを含む。
一実施形態では、本発明は、癌を治療する必要のある対象において癌を治療する方法を目的とし、この方法は、本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物を対象に投与することを含む。
さらに、本発明の実施形態は、前立腺癌（例えば、ＣＲＰＣ又はｍＣＲＰＣ）などの本明細書に記載の疾患、障害又は医学的状態のいずれか１つを治療するための薬剤を製造するための、本明細書に記載のキレータ（例えば、式（Ｉ）、（ＩＩ）若しくは（ＩＩＩ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩）に関する。
さらに、本発明の実施形態は、前立腺癌（例えば、ＣＲＰＣ又はｍＣＲＰＣ）などの本明細書に記載の疾患、障害又は医学的状態のいずれか１つを治療するための薬剤を製造するための、本明細書に記載の放射性金属錯体（例えば、式（Ｉ－Ｍ＋）、（ＩＩ－Ｍ＋）、若しくは（ＩＩＩ－Ｍ＋）の化合物、又はその医薬的に許容される塩）に関する。
さらに、本発明の実施形態は、前立腺癌（例えば、ＣＲＰＣ又はｍＣＲＰＣ）などの本明細書に記載の疾患、障害又は医学的状態のいずれか１つを治療するための薬剤を製造するための、抗体にコンジュゲートされた本明細書に記載の放射性免疫コンジュゲート（例えば、式（Ｉ－Ｍ＋）、（ＩＩ－Ｍ＋）、又は（ＩＩＩ－Ｍ＋）の放射性金属錯体であり、式中、Ｍ＋はＡｃ２２５であり、放射性金属錯体はｈ１１Ｂ６にコンジュゲートされている）に関する。
さらに、本発明の実施形態は、前立腺癌（例えば、ＣＲＰＣ又はｍＣＲＰＣ）などの本明細書に記載の疾患、障害又は医学的状態のいずれか１つを治療するための薬剤として使用するための、本明細書に記載の放射性免疫コンジュゲート（例えば、式（Ｉ－Ｍ＋）、（ＩＩ－Ｍ＋）、又は（ＩＩＩ－Ｍ＋）の放射性金属錯体であって、式中、Ｍ＋はＡｃ２２５であり、放射性金属錯体はｈ１１Ｂ６にコンジュゲートされている）に関する。
放射性免疫コンジュゲートは、例えば、標的化リガンドによって標的化された細胞などに直接放射線を送達する。好ましくは、放射性免疫コンジュゲートは、２２５Ａｃなどのα線放出放射性金属イオンを担持する。標的化すると、α線放出放射性金属イオン、例えば、２２５Ａｃ及びその娘からのα粒子が標的化細胞に送達され、当該細胞に対して細胞毒性効果を引き起こし、それにより放射線治療及び／又は腫瘍疾患若しくは障害の治療を行うために腫瘍細胞を選択的に標的化する。
本発明はさらに、放射線治療のため及び腫瘍疾患又は障害を治療するために腫瘍細胞を選択的に標的化するためのプレ標的化（pre-targeting）アプローチを含む。プレ標的化アプローチによれば、アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメントが投与され、抗体の標的抗原を有する細胞に結合し、循環から経時的に除去されるか又は除去剤で除去される。続いて、本発明の放射性金属錯体、好ましくはシクロオクチン又はシクロオクチン誘導体（例えば、ＤＢＣＯ）を含む放射性金属錯体が投与されて、標的部位に結合したアジド標識化抗体とのＳＰＡＡＣ反応を受け、残りの非結合放射性金属錯体は、循環から急速に除去される。このプレ標的化技術は、対象における標的部位での放射性金属イオン局在を強化する方法を提供する。
他の実施形態では、修飾されたポリペプチド、例えば、アジド標識化抗体又はその抗原結合フラグメント、及び本発明の放射性金属錯体は、標的化放射線治療又は腫瘍疾患若しくは障害の治療を必要とする対象に、同じ組成物中又は異なる組成物中で投与される。
本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。例えば、任意選択的にインビトロアッセイを用いて、最適な用量範囲の特定に役立てることができる。具体的な有効用量の選択は、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に既知の他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨床試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定することができる。
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」及び「治療（treatment）」はいずれも、対象において必ずしも認識可能ではないが、対象において認識可能であり得る、腫瘍疾患又は障害などの放射能金属イオンの投与が有益となり得る疾患、障害、又は病態に関連する、少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善又は回復を指すことを意図する。用語「治療する」、「治療すること」、及び「治療」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」及び「治療」は、腫瘍疾患又は障害などの放射能金属イオンの投与が有益となり得る疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ又は２つ以上の症状の改善、発達若しくは発症の予防、又はそれらの持続期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること）」及び「治療」」は、腫瘍疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療」、「治療すること」及び「治療」は、腫瘍疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」及び「治療」は、対象における腫瘍疾患、障害、又は病態の消失を指す。
いくつかの実施形態では、治療有効量の本発明の放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物は、癌などの対象における腫瘍疾患又は障害を治療するために対象に投与される。
本発明の他の実施形態では、本発明の放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物は、腫瘍疾患又は障害の治療に有効な他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
付加的な実施形態では、本発明は、放射線治療及び／又は腫瘍疾患若しくは障害の治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化するのに使用するための、本明細書に記載される放射性免疫コンジュゲート及び医薬組成物、並びに放射線治療及び／又は腫瘍疾患若しくは障害の治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化するための医薬の製造における、本明細書に記載される放射性免疫コンジュゲート又は医薬組成物の使用を目的とする。
特定の実施形態を例示し説明してきたが、当業者は、前述の明細書を読んだ後に、本明細書に記載の本技術の化合物又はその塩、医薬組成物、誘導体、プロドラッグ、代謝産物、互変異性体若しくはラセミ混合物に対する変更、等価物の置換及び他の種類の改変を行うことができる。上記の各態様及び実施形態はまた、他の態様及び実施形態のいずれか又は全てに関して開示される変形例又は態様を含むか、又は組み込むことができる。
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために記載するものであり、本明細書に付属する「特許請求の範囲」に記載される発明をいかなる意味においても限定することを目的としたものではなく、またそのように解釈されるべきではない。
以下の実施例中に、残留物として単離された合成生成物を列挙する。「残留物」という用語は、生成物が単離された物理的状態を限定するものではなく、例えば、固形物、油状物、泡状物、ガム、シロップなどを含み得ることは、当業者には理解されるであろう。
本明細書、特にスキーム及び実施例で使用される略語は、以下の表Ａに列挙されるとおりである。
Figure 2023547703000023
Figure 2023547703000024
Figure 2023547703000025
本明細書で使用するとき、特に明記しない限り用語「単離形態」は、化合物が、他の化合物、溶媒系若しくは生物学的環境とのあらゆる固形混合物から分離された形で存在することを意味するものとする。本発明の一実施形態では、本明細書に記載されている化合物のいずれも、単離形態で存在する。
本明細書で使用するとき、特に断りのない限り、用語「実質的に純粋な形態」は、単離した化合物中の不純物のモルパーセントが、約５モルパーセント未満、好ましくは約２モルパーセント未満、より好ましくは約０．５モルパーセント未満、最も好ましくは約０．１モルパーセント未満であることを意味するものとする。本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、実質的に純粋な形態として存在する。
本明細書で使用するとき、特に断りのない限り、用語「対応する塩形態を実質的に含まない」は、式（Ｉ）の化合物を説明するために用いるとき、単離した式（Ｉ）の塩基中の対応する塩形態のモルパーセントが、約５モルパーセント未満、好ましくは約２モルパーセント未満、より好ましくは約０．５モルパーセント未満、最も好ましくは約０．１モルパーセント未満であることを意味する。本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、対応する塩形態を実質的に含まない形態で存在する。
（実施例１）
４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸
（ＴＯＰＡ－［Ｃ－７］－フェニル－カルボン酸）
Figure 2023547703000026
ステップ１：５００ｍＬ三口丸底フラスコ中、窒素下、－７８℃で、メチル６－ホルミルピコリナート（４．００ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）、（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）ボロン酸（１０．７ｇ、４８．５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（０．２１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、トリ（ナフタレン－１－イル）ホスフィン（０．５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１０．０ｇ、７２．７ｍｍｏｌ）の混合物に、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）を一度に加えた。混合物を窒素でパージし、室温で３０分間撹拌し、次に６５℃で２４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトパッドで濾過し、濾液を濃縮乾固させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～５０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリナートを黄色油状物として得た（２．５ｇ、収率３０％）。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリナート（２．５０ｇ、７．３０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（３．４３ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、Ｎ－ブロモスクシンイミド（２．１３ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（３０ｍＬ）を、窒素雰囲気下、室温で２５０ｍＬの三口丸底フラスコに加え、１時間撹拌した。反応溶液をシリカゲルカラムに充填し、クロマトグラフィー（０～３０％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により、化合物メチル６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリナート（１．６５ｇ、収率５６％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリナート（１．５２ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．５０ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．１７ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリル（３０ｍＬ）を２５０ｍＬ三口丸底フラスコに加え、得られた不均一混合物を窒素雰囲気下、９０℃で１６時間加熱した。その後、反応混合物を室温に冷却し、セライトパッドを通して濾過し、真空中で濃縮乾固させて、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）により精製して、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナートを褐色油状物として得た（１．２ｇ、４４％）。
ステップ４：撹拌子、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（０．６２ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（２０ｍＬ）を１００ｍＬ三口丸底フラスコに室温で添加し、１時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固させ、得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、ＴＯＰＡ－［Ｃ－７］－フェニル－カルボン酸（０．８ｇ、７２％）を褐色油状物として得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３５Ｈ４４Ｎ４Ｏ１０の計算値６８０．３１；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６８１．５。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．８７％。ＨＰＬＣによる純度：９７．１４％（２１０ｎｍで９７．０１％、２５４ｎｍで９７．２０％及び２８０ｎｍで９７．２１％）。カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８（２５０×４．６ｍｍ）、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：１．０ｍＬ／分％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．１２－８．０７（ｍ，４Ｈ），８．００－７．９８（ｍ，２Ｈ），７．７５－７．７３（ｍ，４Ｈ），６．１０（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，８Ｈ），３．５６（ｓ，８Ｈ），３．５２（ｓ，８Ｈ）。
（実施例２）
６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000027
ステップ１：撹拌子、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．４０ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．１５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３３ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（４．０ｍＬ）を、２５ｍＬの三口丸底フラスコに０℃で窒素雰囲気下で加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応物を水（１０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）水溶液、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、メチル６－（（４－（（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナートを得た（０．１８ｇ）。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１８ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．８ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、１．０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬ一口丸底フラスコに０℃で添加し、次いで室温に加温し、２時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１５ｇ）を得、これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）、及び二硫化炭素（１４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、室温で圧力バイアルに加えた。バイアルを９０℃で３０分間マイクロ波照射した（出力１５０Ｗ）。次いで、バイアルを室温に冷却し、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、次いで、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１００ｍｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ４：撹拌子、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．４ｍＬ、２．３４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮乾固させて油状物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（５．０ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ４０Ｈ５２Ｎ６Ｏ１１Ｓの計算値：８２４．３４；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８２４．８。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２２－８．２０（ｍ，２Ｈ），８．１４－８．０５（ｍ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，２Ｈ），７．７３－７．６７（ｍ，２Ｈ），６．１６（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），３．９３－４．００（ｍ，８Ｈ），３．５９－３．７０（ｍ，２７Ｈ），３．４７－３．４４（ｍ，２Ｈ）。
（実施例３）
６－（（４－（（６－アミノヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
及び
（実施例４）
６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（６－イソチオシアナトヘキシル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000028
ステップ１：撹拌子、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．１２ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（６－アミノヘキシル）カルバメート（３８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１０ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（４．０ｍＬ）を、２５ｍＬ三口丸底フラスコに０℃で窒素雰囲気下で加えた。次に、反応混合物を室温に加温し、終夜撹拌した。反応混合物を次に水（１０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、メチル６－（（４－（（６－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（７０ｍｇ）をゴム状油状物として得た。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（（６－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（７０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、０．４ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬ丸底フラスコに０℃で添加し、続いて室温にし、２時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、メチル６－（（４－（（６－アミノヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（３０ｍｇ）を得、これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（（４－（（６－アミノヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（３０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（１．１ｍＬ、０．１Ｎ、０．１１ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに加え、室温で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を酢酸で処理してｐＨ約６．５にし、続いて室温で真空下で濃縮乾固させた。得られた生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、実施例３：６－（（４－（（６－アミノヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１０ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３９Ｈ５４Ｎ６Ｏ９の計算値７５０．４０；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７５１．３。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２２（ｄ，Ｊ＝１．６０Ｈｚ，２Ｈ），８．２１－８．０６（ｍ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．７５－７．６９（ｍ，２Ｈ），６．２０（ｓ，１Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），４．０２－３．９２（ｍ，８Ｈ），３．７６－３．６２（ｍ，１４Ｈ），３．５１－３．３２（ｍ，４Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，２Ｈ），１．６７－１．６４（ｍ，４Ｈ），１．４６－１．４５（ｍ，４Ｈ）。
ステップ４：撹拌子、メチル６－（（４－（（６－アミノヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）、及び二硫化炭素（１５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、室温で圧力バイアルに加えた。バイアルを９０℃で３０分間マイクロ波照射した（出力１５０Ｗ）。次いで、バイアルを室温に冷却し、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、メチル６－（（４－（（６－イソチオシアナトヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１ｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ５：撹拌子、メチル６－（（４－（（６－イソチオシアナトヘキシル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ丸底フラスコに加え、次いで５０℃で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮乾固させて残留物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、３．５μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：２．０ｍＬ／分）により精製して、実施例４：６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（６－イソチオシアナトヘキシル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１５ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ４０Ｈ５２Ｎ６Ｏ９Ｓの計算値：７９２．３５；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７９２．８。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２３－８．２０（ｍ，２Ｈ），８．１５－８．０６（ｍ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４－７．６８（ｍ，２Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），４．０１－３．９３（ｍ，８Ｈ），３．７５－３．５６（ｍ，１６Ｈ），３．４２－３．３３（ｍ，５Ｈ），１．７４－１．６４（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．４４（ｍ，４Ｈ）。
（実施例５）
６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（４－イソチオシアナトフェネチル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000029
ステップ１：撹拌子、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．２５ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、４－（２－アミノエチル）アニリン（６０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１１ｇ、０．１５ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ、及びＤＣＭ（５ｍＬ）を、２５ｍＬの三口丸底フラスコに０℃で窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した後、水（１０ｍＬ）で処理して、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて生成物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、メチル６－（（４－（（４－アミノフェネチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１２ｇ）を得た。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（（４－アミノフェネチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（４５ｍｇ、６５μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３ｍＬ）、及びＣＳ２（１７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌを、窒素雰囲気下、室温で１０ｍＬマイクロ波圧力バイアルに加えた。反応混合物を９０℃で３０分間マイクロ波照射（出力１５０Ｗ）した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させて、メチル６－（（４－（（４－イソチオシアナトフェネチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１２ｇ）を得た。これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（（４－（（４－イソチオシアナトフェネチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１２ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、及びＨＣｌ水溶液（０．５０ｍＬ、６Ｎ、２．８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮乾固させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－（（４－イソチオシアナトフェネチル）カルバモイル）フェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（３０ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ４２Ｈ４８Ｎ５Ｏ１０Ｓの計算値８１２．３２；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８１２．９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２２（ｄ，Ｊ＝０．８０Ｈｚ，２Ｈ），８．０６－８．２１（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．６８－７．７８（ｍ，４Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝２．００Ｈｚ，２Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），３．７０－４．００（ｍ，７Ｈ），３．６０－３．６７（ｍ，１６Ｈ），３．４４－３．４９（ｍ，２Ｈ），２．９０－３．１０（ｍ，３Ｈ）。
（実施例６）
（Ｓ－６，６’－（（２－（（（２－イソチオシアナトエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000030
ステップ１：撹拌子、１（メチル６－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート）（０．１０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）及びメタノール中ＨＣｌ（４Ｍ、０．６ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬの一口丸底フラスコに０℃で加え、次いで室温にし、２時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－アミノエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（５５ｍｇ）を得て、これを精製せずに次のステップで使用した。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－アミノエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２ｍＬ）及び二硫化炭素（１２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、マイクロ波バイアルに室温で窒素雰囲気下で加えた。バイアルを９０℃で３０分間マイクロ波照射した（出力１５０Ｗ）。次いで、バイアルを室温に冷却し、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させ、シリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－イソチオシアナトエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナートを黄色の固体（２０ｍｇ）として得た。
ステップ３：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－イソチオシアナトエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（２０ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．１ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮乾固させ、得られた残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（２－イソチオシアナトエチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（６ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３０Ｈ４１Ｎ５Ｏ８Ｓ２の計算値：６６３．２４；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６６４．２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ９．７８（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，４Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝６．００Ｈｚ，２Ｈ），４．６９（ｓ，４Ｈ），３．９６－３．５２（ｍ，２３Ｈ），２．８５（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝８．００Ｈｚ，２Ｈ）。
（実施例７）
（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（５－イソチオシアナトペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000031
ステップ１：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、０．６ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬの一口丸底フラスコに０℃で加え、室温にし、２時間撹拌した。次いで、揮発性物質を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（７０ｍｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（７０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）及び二硫化炭素（１５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、マイクロ波バイアルに室温で窒素雰囲気下で添加した。反応混合物にマイクロ波照射（出力１５０Ｗ）を９０℃で３０分間行った。バイアルを室温にし、反応混合物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて残留物を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－イソチオシアナトペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナートを黄色固体（３０ｍｇ）として得た。
ステップ３：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－イソチオシアナトペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（３０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）、及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．２ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに添加し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空下で乾燥するまで濃縮し、濃縮物をＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（５－イソチオシアナトペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（１２ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３３Ｈ４７Ｎ５Ｏ８Ｓ２の計算値：７０５．２９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７０６．２。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １３．４０（ｓ，１Ｈ），９．９０（ｓ，１Ｈ），８．１７－８．０９（ｍ，４Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝６．８０Ｈｚ，２Ｈ），４．７０（ｓ，４Ｈ），３．９３－３．１７（ｍ，２７Ｈ），２．６８－２．６７（ｍ，２Ｈ），１．６４－１．６０（ｍ，２Ｈ），１．５３－１．４９（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．３８（ｍ，２Ｈ）。
（実施例８）
（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000032
スキーム７ａ、ステップ１ａ：撹拌子、ｔｅｒｔ－ブチル（４－ヒドロキシフェニル）カルバメート（４．５ｇ、２２ｍｍｏｌ）、１－ブロモ－２－（２－ブロモエトキシ）エタン（５．０ｇ、２２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４．６ｇ、４３ｍｍｏｌ）及びＡＣＮ（４５ｍＬ）を窒素雰囲気下で２５０ｍＬ三口丸底フラスコに加え、得られた反応混合物を窒素雰囲気下で８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、真空中で濃縮乾固させて濃縮物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～２０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製して、生成物ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－ブロモエトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（２．０ｇ）を得た。
ステップ２ａ：撹拌子、ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－ブロモエトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（２．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、エタンチオＳ－酸（０．４２ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）及びＡＣＮ（５０ｍＬ）を、２５０ｍＬ三口丸底フラスコに窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を８０℃で２時間撹拌し、次いで室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、真空中で濃縮乾固させた。濃縮物を、中性アルミナクロマトグラフィー（０～５０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）を用いて精製して、Ｓ－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エチル）エタンチオエート（１．８ｇ）を得た。
ステップ３ａ：撹拌子、Ｓ－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エチル）エタンチオエート（１．８ｇ、５．１ｍｍｏｌ）、エタノール（２０ｍＬ）及びヒドラジン一水和物（０．２４ｇ、０．２４ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）を窒素下で２５０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、８０℃で１時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮乾固させて、濃縮物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（５～１０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－メルカプトエトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（０．５ｇ）を無色油状物として得た。
スキーム７、ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－メルカプトエトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（０．４０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（０．０６０ｇ、鉱油中６０％、１．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有する５０ｍＬ三口丸底フラスコに、０℃及び窒素雰囲気下で５分間かけて滴下で加えた。添加の完了後、反応混合物を室温に温め、１５分間撹拌した。混合物を０℃に再冷却し、ジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を滴下で加えた。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、１．５時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（０．２ｍＬ）でゆっくり処理し、次いで濃縮乾固させて油状物を得た。油状物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ ５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシル）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナートを褐色油状物として得た（０．１５ｇ）。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１５ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、０．８０ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬ一口丸底フラスコに０℃で添加し、次いで室温にし、３時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－アミノフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－アミノフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）及び二硫化炭素（１７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、室温で圧力バイアルに加えた。反応混合物を９０℃で３０分間マイクロ波照射（出力１５０Ｗ）した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させて、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ）を得た。これを精製せずに使用した。
ステップ４：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．５１ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空下で乾燥するまで濃縮し、濃縮物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ ５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（４０ｍｇ、３７％）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３８Ｈ４９Ｎ５Ｏ１０Ｓ２の計算値：７９９．２９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７９９．９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２３－８．２０（ｍ，２Ｈ），８．１５－８．０９（ｍ，２Ｈ），７．７４－７．７１（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，２Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝９．２０Ｈｚ，２Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），４．０９－４．１１（ｍ，４Ｈ），３．９２－３．９５（ｍ，６Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝４．００Ｈｚ，３Ｈ），３．６６－３．７１（ｍ，１６Ｈ），２．７０－２．７６（ｍ，４Ｈ）。
（実施例９）
（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000033
スキーム８ａ、ステップ１ａ：撹拌子、ｔｅｒｔ－ブチル（４－ヒドロキシフェニル）カルバメート（３．５ｇ、１７ｍｍｏｌ）、１，２－ビス（２－ブロモエトキシ）エタン（４．６ｇ、１７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４．６ｇ、３３ｍｍｏｌ）、及びＡＣＮ（４０ｍＬ）を２５０ｍＬの三口丸底フラスコに入れた後、窒素雰囲気下、８０℃で４８時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、真空中で濃縮乾固させて濃縮物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－（２－ブロモエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（４．０ｇ）を褐色油状物として得た。
ステップ２ａ：撹拌子、ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－（２－ブロモエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（４．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、エタンチオＳ－酸（０．７５ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）及びＡＣＮ（５０ｍＬ）を２５０ｍＬ三口丸底フラスコに窒素雰囲気下で加え、反応混合物を６０℃で２時間、窒素雰囲気下で加熱した。反応混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、真空中で濃縮乾固させ、濃縮物をアルミナクロマトグラフィー（０～５０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製して、Ｓ－（２－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）エタンチオエート（３．０ｇ）を褐色油状物として得た。
ステップ３ａ：撹拌子、Ｓ－（２－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）エタンチオエート（３．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、エタノール（５０ｍＬ）及びヒドラジン一水和物（０．３６ｇ、０．３６ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を窒素下で２５０ｍＬの一口丸底フラスコに加え、８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮乾固させ、濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィー（５～１０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－（２－メルカプトエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（１．０ｇ）を無色油状物として得た。
スキーム７、ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル（４－（２－（２－（２－メルカプトエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）カルバメート（０．４０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を、ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（０．０６０ｇ、鉱油中６０％、１．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有する５０ｍＬ三口丸底フラスコに、０℃及び窒素雰囲気下で５分間かけて滴下で加えた。添加の完了後、反応混合物を室温にし、１５分間連続的に撹拌した。混合物を０℃に再冷却し、ジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を１０分間かけて滴下で加えた。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、１．５時間撹拌した。次に、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（０．２ｍＬ）でゆっくり処理し、濃縮乾固させて、油状物を得た。油状物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシル）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１５ｇ、２１％）を褐色油状物として得た。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）及びメタノール中ＨＣｌ（４Ｍ、０．８０ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬ一口丸底フラスコに０℃で添加した。反応混合物を放置して室温になるまで温め、３時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ）を得て、これを精製せずに次のステップで使用した。
ステップ３：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－アミノフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）及び二硫化炭素（１７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、マイクロ波バイアルに室温で窒素雰囲気下で添加した。反応混合物を９０℃で３０分間マイクロ波照射した（出力１５０Ｗ）。次いで、反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）、１Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）で順次洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮乾固させて、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ）を得て、これを精製せずに次のステップで使用した。
ステップ４：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ水溶液（６Ｎ、０．５０ｍＬ、２．８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに添加し、５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮乾固させて残留物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ ５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、（Ｓ）－６，６’－（（２－（（（２－（２－（２－（４－イソチオシアナトフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（５０ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ４０Ｈ５３Ｎ５Ｏ１１Ｓ２の計算値：８４３．３２；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８４３．９。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．２４－８．２１（ｍ，２Ｈ），８．２１－８．１１（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，２Ｈ），７．２３－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．９７－６．９５（ｍ，２Ｈ），４．８４－４．７９（ｍ，５Ｈ），４．１４－４．１２（ｍ，４Ｈ），３．９７－３．９４（ｍ，６Ｈ），３．８３－３．５９（ｍ，２３Ｈ），２．７５－２．６７（ｍ，４Ｈ）。
（実施例１０）
６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000034
ステップ１：撹拌子、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．４０ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．１５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３３ｇ、０．９０ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（４．０ｍＬ）を、２５ｍＬ三口丸底フラスコに０℃で窒素雰囲気下で加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて濃縮物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、メチル６－（（４－（（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナートを得た（０．１８ｇ）。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１８ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．８ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、１．０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの一口丸底フラスコに０℃で加え、次いで室温にし、２時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１５ｇ）を得、これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（０．１ｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（３ｍＬ、０．１ Ｎ、０．３ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに室温で添加し、一晩撹拌した。反応混合物を酢酸でｐＨ約６．５に調整し、次いで室温で真空下で濃縮乾固させて濃縮物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、６－（（４－（（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（４０ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３９Ｈ５４Ｎ６Ｏ１１の計算値；７８２．３９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７８３．０。
（実施例１１）
６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
及び
（実施例１２）
Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付き６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000035
ステップ１：撹拌子、メチルシクロペント－３－エン－１－カルボキシラート（２５．０ｇ、１９８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６００ｍＬ）、メタノール（１２．６ｇ、１６．０ｍＬ、３９７ｍｍｏｌ）及び水素化ホウ素リチウム（１９８ｍＬ、ＴＨＦ中２．０Ｍ、３９７ｍｍｏｌ）を３０００ｍＬ三口丸底フラスコに０℃で添加した。添加の完了後、反応混合物を７０℃で６時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、氷水（２５０ｍＬ）でゆっくり処理し、さらに０℃に冷却し、１．５Ｎ ＨＣｌ（ｐＨ約２）でｐＨ約２にし、次いで、ＤＣＭ（１０００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を水（５００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて濃縮物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（５０～８０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製して、シクロペント－３－エン－１－イルメタノール（１３．８ｇ）を得た。
ステップ２：シクロペント－３－エン－１－イルメタノール（１３．７ｇ、１３９ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（５０ｍＬ）からなる溶液を、窒素雰囲気下、０℃で、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（６．６９ｇ、鉱油中６０％、１６７ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有する１０００ｍＬ三口丸底フラスコに３０分かけて滴下で添加した。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、撹拌を３０分間続けた後、混合物を０℃に再冷却し、臭化ベンジル（１９．８ｇ、１６７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（５０ｍＬ）からなる溶液で１５分間かけて滴下処理した。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、次いで１６時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）でゆっくり処理し、次いで、酢酸エチル（１０００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を、水（５００ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて濃縮物を得た。濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～２０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）で精製して、（（シクロペント－３－エン－１－イルメトキシ）メチル）ベンゼン（２１．０ｇ）を得た。
ステップ３：撹拌子、ＮＭＯ（３８．０ｇ、Ｈ２Ｏ中５０重量％、１５８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１８０ｍＬ）及び四酸化オスミウム（１６．２ｇ、３．２１ｍＬ、ｔ－ブタノール中２．５重量％、０．１５８ｍｍｏｌ）を、１０００ｍＬ三口丸底フラスコに０℃で加えた。反応混合物を室温にし、１０分間撹拌し、０℃に再冷却した。冷却したら、混合物を（（シクロペント－３－エン－１－イルメトキシ）メチル）ベンゼン（２０．０ｇ、１５８ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（１８０ｍＬ）の溶液で１５分間かけて滴下処理した。反応物を室温にし、１６時間撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（１０００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を水（５００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて濃縮物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～２０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジオールを無色油状物として得た。異性体をＳＦＣによって分離した（装置：ＰＩＣ １００；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＯＸＨ（２５０×３０）ｍｍ、５μｍ；移動相：ＣＯ２：ＩＰＡ中０．５％イソプロピルアミン（６０：４０）；全流量：７０ｇ／分；背圧：１００ｂａｒ；波長：２２０ｎｍ；サイクル時間：８．０分）。これにより、４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジオールのシス－１，２異性体両方を得た：第１溶出異性体（１０ｇ）、及び第２溶出異性体（５ｇ）。
ステップ４：４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジオールの第１溶出異性体（１０．０ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（６０ｍＬ）からなる溶液を、窒素雰囲気下、０℃で、ＤＭＦ（６０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（８．６２ｇ、鉱油中６０％、２２５ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有する２５０ｍＬ三口丸底フラスコに１時間かけて滴下で添加した。添加の完了後、反応混合物を室温にし、３０分間撹拌した後、混合物を０℃に再冷却し、２－（２－ブロモエトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（４７．０ｇ、２２５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（６０ｍＬ）からなる溶液で１５分間かけて滴下処理した。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、２時間撹拌した。次いで、混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）でゆっくり処理し、次いで、酢酸エチル（５００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を水（５００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～３０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製して、２，２’－（（（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）を得た（２１．０ｇ）。
ステップ５：撹拌子、２，２’－（（（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン）（２９．０ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）及び１，４－ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｍ、３．０ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）を１０００ｍＬ三口丸底フラスコに加え、次いで、１時間加熱還流した。次いで、フラスコを室温に冷却し、揮発性物質を真空下で除去して、２，２’－（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２０．０ｇ）を残留物として得、これを精製せずに使用した。
ステップ６：窒素雰囲気下、１０００ｍＬ丸底フラスコに撹拌子、２，２’－（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（２０．０ｇ）（２０．０ｇ、６４．４ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２００ｍＬ）及びトリエチルアミン（３２．６ｍＬ、３２２ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を１０℃に冷却した。次いで、混合物にｐＴｓＣｌ（３６．９ｇ、１９３ｍｍｏｌ）を少しずつ添加して処理し、次いで室温にした。添加の完了後、反応混合物を１６時間撹拌し、その間に沈殿物が形成された。さらに混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、冷ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、５００ｍＬ×３）及び氷冷水（５００ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて残留物を得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～３０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホナート）（２６．０ｇ）を得た。
ステップ７：撹拌子、Ｎ，Ｎ’－（（エタン－１，２－ジイルビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（４－メチルベンゼンスルホンアミド）（２１．０ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（４１．３ｇ、１２６ｍｍｏｌ）及び乾燥ＤＭＦ（２５０ｍＬ）を２０００ｍＬ三口丸底フラスコに窒素雰囲気下で添加し、得られた不均一混合物を室温で１．５時間撹拌した。次いで、混合物を（（４－（（ベンジルオキシ）メチル）シクロペンタン－１，２－ジイル）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４－メチルベンゼンスルホナート）（２６．０ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２５０ｍＬ）からなる溶液で２時間かけて滴下処理した。撹拌を２０時間続けた後、混合物を真空中で濃縮乾固させて、ペースト状固体を得た。ペーストをＤＣＭ（１０００ｍＬ）に懸濁させ、３０分間撹拌し、真空濾過によって濾過した。濾液を真空下で濃縮乾固させて、濃縮物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（０～４０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）により精製して、１８－（（ベンジルオキシ）メチル）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（２４ｇ）を得た。
ステップ８：ＨＢｒのＨＯＡｃ溶液（５０％、１１２ｍＬ、６９５ｍｍｏｌ）を、撹拌子及び１８－（（ベンジルオキシ）メチル）－４，１３－ジトシルテトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン（２４．０ｇ、３２．８ｍｍｏｌ）を含有する５００ｍＬ丸底フラスコに、窒素雰囲気下で加えた。混合物を均一になるまで室温で撹拌し、次いでフェノール（１６．３ｇ、１７４ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、反応混合物を６０℃で６時間加熱した後、室温に冷却し、真空中で濃縮乾固させて濃縮物を得た。濃縮物を逆相カラムクロマトグラフィー（カラム：Ｒｅｖｅｌｒｉｅｓ Ｃ１８－３３０ｇ；移動相Ａ：０．１％ ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：６０ｍＬ／分）により精製して、（テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－１８－イル）酢酸メチル（８．０ｇ）を得た。
ステップ９：撹拌子、（テトラデカヒドロ－２Ｈ，１１Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－１８－イル）酢酸メチル（８．０ｇ、２１ｍｍｏｌ）、メチル６－（クロロメチル）ピコリナート（１２．２ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１１．１ｇ、１０６ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１００ｍＬ）を、５００ｍＬ三口丸底フラスコに窒素雰囲気下で加え、得られた不均一混合物を窒素雰囲気下で９０℃で１６時間加熱した。次いで、得られた混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、濾液を真空中で濃縮乾固させて濃縮物を得た。濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供して、ジメチル６，６’－（（１８－（アセトキシメチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（５．０ｇ）を得た。
ステップ１０：２５０ｍＬ丸底フラスコに、窒素雰囲気下、撹拌子、ジメチル６，６’－（（１８－（アセトキシメチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（５．０ｇ，７．４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．１０ｇ，０．７４ｍｍｏｌ）及びメタノール（５０ｍＬ）を加え、得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで、混合物を真空下で濃縮乾固させ、得られた残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、６，６’－（（１８－（ヒドロキシメチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（３．０ｇ）を得た。
ステップ１１：撹拌子、６，６’－（（１８－（ヒドロキシメチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（２．０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２０ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．２ｇ、９．５ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で１００ｍＬの三口丸底フラスコに加え、得られた混合物を１０℃に冷却した。混合物をＭｓＣｌ（０．４８ｇ、６．３ｍｍｏｌ）で少しずつ処理し、添加の完了後、反応容器を室温にし、３０分間撹拌し、その間に沈殿物が形成された。不均一混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、冷ＨＣｌ水溶液（１Ｍ、５０ｍＬ×３）及び氷冷水（５０ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、ゴム状固体を得た。ゴム状固体を中性アルミナカラムクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、ジメチル６，６’－（（１８－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（１．５ｇ）を得た。
ステップ１２：ジメチル６，６’－（（１８－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（０．６９ｇ、３．２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（５ｍＬ）からなる溶液を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（１６２ｍｇ、鉱油中６０％、４．２２ｍｍｏｌ）の懸濁液を含有する２５ｍＬ三口丸底フラスコに、窒素雰囲気下、０℃で５分間かけて滴下で加えた。添加完了後、反応混合物を室温にし、１５分間撹拌した。次いで、反応混合物を０℃に再冷却し、ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－メルカプトエトキシ）エチル）カルバメート（１．５０ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３ｍＬ）からなる溶液で５分間かけて滴下処理した。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、次いで１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌでゆっくり処理し、次いで、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を、水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。油状物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍ）５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（０．２ｇ）を得た。
ステップ１３：撹拌子、シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（０．２０ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、１．２ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬの一口丸底フラスコに０℃で添加し、得られた混合物を室温にし、２時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（１５０ｍｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ１４：撹拌子、ジメチル６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（４０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（１．６ｍＬ、０．１Ｎ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに室温で添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物のｐＨを酢酸でｐＨ約６．５に調整し、次いで室温で真空下で濃縮乾固させ、得られた濃縮物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ ５．０μｍ；移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、実施例１１：６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（２３ｍｇ）を得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３４Ｈ５１Ｎ５Ｏ９Ｓの計算値；７０５．３４；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７０６．４。
ステップ１５：撹拌子、ジメチル６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（７０ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、１１，１２－ジデヒドロ－γ－オキソジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－酪酸（２９ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２９ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（０．５ｍＬ）を、窒素雰囲気下、０℃で２５ｍＬの三口丸底フラスコに加えた。得られた混合物を室温にし、終夜撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付きジメチル６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（１０ｍｇ）を得た。
ステップ１６：撹拌子、Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付きジメチル６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（１０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（０．３ｍＬ、０．１ Ｎ、０．０３ｍｍｏｌ）及びメタノール（０．２５ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに室温で加え、得られた混合物を一晩撹拌した。反応混合物を酢酸でｐＨ約６．５に調整し、減圧下室温で濃縮乾固させ、得られた濃縮物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／ＡＣＮ；流量：１５．０ｍＬ／分で精製し、得た
実施例１２：Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付き６，６’－（（１８－（（（２－（２－アミノエトキシ）エチル）チオ）メチル）テトラデカヒドロ－４Ｈ，１３Ｈ，１７Ｈ－シクロペンタ［ｂ］［１，４，１０，１３］テトラオキサ［７，１６］ジアザシクロオクタデシン－４，１３－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（３ｍｇ）。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ５３Ｈ６４Ｎ６Ｏ１１Ｓの計算値；９９２．４４；観測値ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：９９１．４。
（実施例１３）
６－（（１６－（１－（６－カルボキシピリジン－２－イル）－８－イソチオシアナトオクチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000036
ステップ１：窒素の不活性雰囲気でパージし維持された５００ｍＬの三口丸底フラスコに、８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）オクタン酸（２０．０ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン（７．０ｇ、１１５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２９．９０ｇ、２３１ｍｍｏｌ）を入れた。この後、０℃で撹拌しながら、ＨＡＴＵ（４３．９ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。次いで反応物に２００ｍＬの水を加えてクエンチした。得られた溶液をジクロロメタン（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をＨＣｌ（１Ｍ）（３００ｍＬ×２）、ＮＨ４ＣＯ３水溶液（４００ｍＬ×３）及びブライン（４００ｍＬ）で順次洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクチル）カルバメート（１５．４ｇ、収率６６％）を淡黄色油状物として得た。
ステップ２：窒素の不活性雰囲気でパージし維持された５００ｍＬの三口丸底フラスコに、ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の２．６－ジブロモピリジン（２３．０ｇ、９２７ｍｍｏｌ）の溶液を入れた。これを－７８℃に冷却し、ｎ－ＢｕＬｉ（６０．４ｍＬ、９２７ｍｍｏｌ）を素早く滴下で添加した。１０分間撹拌した後、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクチル）カルバメート（１４．０ｇ、４６３．５ｍｍｏｌ）を－７８℃で撹拌しながら滴下で加えた。得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。反応物に５００ｍＬの水を加えてクエンチした。得られた溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮乾固させ、粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中０～１０％酢酸エチル）により、ｔｅｒｔ－ブチル（８－（６－ブロモピリジン－２－イル）－８－オキソオクチル）カルバメート（１１．８ｇ、収率５０％）を淡黄色固体として得た。
ステップ３：窒素の不活性雰囲気を維持した１Ｌの高圧反応容器に、ｔｅｒｔ－ブチル（８－（６－ブロモピリジン－２－イル）－８－オキソオクチル）カルバメート（１１．５ｇ、２８．８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ溶液（５００ｍＬ）を入れ、続いてＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２．１ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（８．７ｇ、８６．４ｍｍｏｌ）を入れた。次いで、ＣＯ（２０ａｔｍ）を導入した。得られた溶液を１００℃で１６時間撹拌した。反応溶液を濾過し、次のステップに直接使用した。
ステップ４：上記のＭｅＯＨ溶液を０℃に冷却し、ＮａＢＨ４（１．０８ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。反応物を５００ｍＬのＮＨ４ＣＯ３水溶液の添加によってクエンチし、酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、メチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシオクチル）ピコリナート（１０ｇ）を褐色油状物として得た。
ステップ５：窒素の不活性雰囲気下でパージされ維持された２５０ｍＬの三口丸底フラスコに、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のメチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシオクチル）ピコリナート（１０ｇ）の溶液を入れた。０℃に冷却した後、ＴＥＡ（７．９ｇ、７８．９ｍｍｏｌ）及び塩化メシル（３．６ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。ＭｅＣＮ（１００ｍＬ）を加え、真空下で濃縮した。粗生成物メチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（メチルスルホニル）オキシ）オクチル）ピコリナートをそのまま次のステップに使用した。
ステップ６：上記の粗生成物メチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（メチルスルホニル）オキシ）オクチルピコリナートのＡＣＮ（１００ｍＬ）中溶液に、ＮａＩ（４．３ｇ、２８．９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を、８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣ（カラムＣ１８；移動相、３０分でＨ２Ｏ／ＡＣＮ＝５０／５０％からＨ２Ｏ／ＡＣＮ＝２０／８０％）で精製した。４ｇのメチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヨードオクチル）ピコリナートを褐色油状物として得た。
ステップ７：ＤＣＭ（２００ｍＬ）中のメチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヨードオクチル）ピコリナート（３．０ｇ、６．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（３．０ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．９ｇ、３０．６１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、８０℃で１６時間撹拌した。反応物を濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣ（カラムＣ１８；移動相、Ａ：Ｈ２Ｏ（０．０５％ ＴＦＡ）、Ｂ：ＣＡＮ；２０分間で２０％ Ｂから４０％ Ｂへ）で精製した。それによって、メチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）オクチル）ピコリナート１．９ｇを褐色油状物として得た。
ステップ８：０℃のＤＣＭ（８．５ｍＬ）中のメチル６－（８－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）オクチル）ピコリナート（１．７ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、ＬＣＭＳで７７％）の撹拌溶液に、ＨＣｌ／ジオキサンを滴下添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。反応物を、ＮＨ４ＣＯ３水溶液（２０ｍＬ×３）の少量ずつの添加によってクエンチした。得られた溶液をジクロロメタン（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、メチル６－（８－アミノ－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）オクチル）ピコリナート１．３ｇを褐色油状物として得た。
ステップ９：メチル６－（８－アミノ－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）オクチル）ピコリナート（１．０ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１７ｍＬ）溶液に、Ｎ２下、１，１’－チオカルボニルビス（ピリジン－２（１Ｈ）－オン）（０．３８ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。これを濃縮して、メチル６－（（１６－（１－（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）－８－チオシアナトオクチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート１．６ｇを褐色油状物として得た。
ステップ１０：ＡＣＮ（４ｍＬ）中のメチル６－（（１６－（１－（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）－８－チオシアナトオクチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．４０ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（６Ｍ）（７ｍＬ）を添加した。得られた溶液を、油浴中５０℃で５時間撹拌した。これを１０ｍＬのＨ２Ｏで希釈した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣ（カラム、Ｃ１８；移動相、Ａ：Ｈ２Ｏ（０．０５％ ＴＦＡ）、Ｂ：ＡＣＮ、２０分間で２０％Ｂから３６％Ｂ；検出器ＵＶ＠２１０ｎｍ）により精製した。生成物画分を濃縮してＡＣＮを除去した。水相をＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ ７～８に調整した。それを再びフラッシュ－分取ＨＰＬＣ（カラム、Ｃ１８；移動相、Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：ＡＣＮ、２０分で９５％Ｂから１００％Ｂ）で精製した。生成物溶液を濃縮してＣＡＮを除去し、次いで凍結乾燥した。これにより、１９０ｍｇの６－（（１６－（１－（６－カルボキシピリジン－２－イル）－８－チオシアナトオクチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸を褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ ７．９１（ｓ，４Ｈ），７．５４（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１７．９Ｈｚ，３Ｈ），３．７７（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，８Ｈ），３．５６－３．４１（ｍ，１８Ｈ），２．１１（ｓ，２Ｈ），１．５１（ｓ，２Ｈ），１．１７（ｓ，７Ｈ），０．９７（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：６８８．３（Ｍ＋Ｈ＋）。
（実施例１４）
６－（（１６－（１－（６－カルボキシピリジン－２－イル）－２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸
Figure 2023547703000037
ステップ１：窒素雰囲気下、０℃のジクロロメタン（１００ｍＬ）中の２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－オイック酸（１０．００ｇ、３７．９８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１４．７３ｇ、１１３．９４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（１５．１６ｇ、３９．８８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン（５．５５ｇ、５６．９７ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注いだ。得られた混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ：０．０５％ ＴＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ；２０分間で２０％Ｂから４０％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）によって精製した。ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－４－オキソ－２，６，９－トリオキサ－３－アザウンデカン－１１－イル）カルバメート（９．９０ｇ、８５％収率）を薄黄色油状物として得た。
ステップ２：窒素雰囲気下、－７８℃の５００ｍＬの三口丸底フラスコ中のＴＨＦ（２６０ｍＬ）中の２，６－ジブロモ－ピリジン（１３．３ｇ、５６．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ－ＢｕＬｉ（２８．０ｍＬ、５６．１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。溶液を－７８℃で１０分間撹拌した。ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－４－オキソ－２，６，９－トリオキサ－３－アザウンデカン－１１－イル）カルバメート（７．０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を－７８℃で反応液に滴下で加え、室温で３０分間撹拌した。これに０℃の水／氷（２００ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。水層を酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相、移動相Ａ：Ｈ２Ｏ：０．０５％ ＴＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ；２０分で３８％Ｂから５８％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）によって精製した。ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（２－（６－ブロモピリジン－２－イル）－２－オキソエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（４．６ｇ、収率５０％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：４２５，４２７（Ｍ＋Ｎａ＋）。
ステップ３：２５０ｍＬの高圧反応容器に、ｔｅｒｔ－ブチル（２－（２－（２－（６－ブロモピリジン－２－イル）－２－オキソエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（４．０ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．５ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．３ｇ、１．８ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（４０ｍＬ）を加えた。反応溶液を脱気し、Ｎ２を充填した。次いで、ＣＯ（１０ａｔｍ）を導入した。得られた溶液を１００℃で一晩撹拌した。この反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して乾燥させた。残留物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ：０．０５％ ＴＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ；２０分で３８％Ｂから５８％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）によって精製した。メチル６－（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－オイル）ピコリナート（２．４ｇ、収率６３％）を褐色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：４０５（Ｍ＋Ｎａ＋）。
ステップ４：０℃でＮ２雰囲気下、ＭｅＯＨ（４６ｍＬ）中のメチル６－（２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－オイル）ピコリナート（２．３０ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．２３ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、５０ｍＬの飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液を添加することによりクエンチした。得られた溶液を酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。２．２ｇの粗生成物メチル６－（１３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリナートが褐色油状物として得られた。
ステップ５：メチル６－（１３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリトリデカン－１３－イル）ピコリナート（２．２ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２２ｍＬ）中溶液に、０℃、Ｎ２雰囲気下で、トリエチルアミン（１．７４ｇ、１７．１６ｍｍｏｌ）及びＭｓＣｌ（０．７９ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、Ｈ２Ｏ（２２ｍＬ）でクエンチした。得られた混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。２．２ｇの粗生成物メチル６－（２，２－ジメチル－１３－（（メチルスルホニル）オキシ）－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリナートが褐色油状物として得られた。
ステップ６：Ｎ２雰囲気下、メチル６－（２，２－ジメチル－１３－（（メチルスルホニル）オキシ）－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリナート（２．２ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２２ｍＬ）中溶液に、ＮａＩ（０．７８ｇ、５．２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を、８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。粗生成物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：ＡＣＮ；３０分間で５０％Ｂから８０％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）によって精製した。メチル６－（１３－ヨード－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリナート（１．２ｇ）を褐色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：５１７（Ｍ＋Ｎａ＋），４９５（Ｍ＋Ｈ＋）。
ステップ７：メチル６－（１３－ヨード－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）ピコリナート（８４０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びメチル６－（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（８３９ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）のＡＣＮ中溶液（１６．８ｍＬ）を、窒素雰囲気下、８０℃で一晩撹拌した。冷却した反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：ＡＣＮ；２０分間で４０％Ｂから６０％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）によって精製した。メチル６－（（１６－（１３－（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（４５０ｍｇ）を褐色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：７００（Ｍ＋Ｎａ＋），６７８（Ｍ＋Ｈ＋）。
ステップ８：０℃で、ジクロロメタン（２．５ｍＬ）中のメチル６－（（１６－（１３－（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）－２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１－トリオキサ－５－アザトリデカン－１３－イル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（４５０ｍｇ、５７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ／ジオキサン（２．５ｍＬ、４Ｍ）を添加した。得られた溶液を室温で２０分間撹拌した。反応物を、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液を添加することによってクエンチした。水層をＤＣＭ：ＩＰＡ（５：１）で抽出した（３０ｍＬ×２）。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物メチル６－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）エチル）ピコリナート（３３０ｍｇ）を得た。この粗生成物を、次のステップに直接使用した。
ステップ９：ジクロロメタン（３ｍＬ）中のメチル６－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）エチル）ピコリナート（３００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）及び１－（２－オキソピリジン－１－カルボチオイル）ピリジン－２－オン（１１３．０８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物メチル６－（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）エチル）ピコリナート（３８０ｍｇ）を得た。この粗生成物を、次のステップに直接使用した。
ステップ１０：ジクロロメタン（１．９ｍＬ）中のメチル６－（２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）－１－（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）エチル）ピコリナート（３８０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及びＨＣｌ（１．９ｍＬ、６Ｍ）の溶液を、窒素雰囲気下、５０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ ６～７に塩基性化した。残留物をクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：０．０５％ ＴＦＡを含むＨ２Ｏ、Ｂ：ＡＣＮ、２０分間で２０％Ｂから３６％Ｂへの勾配；検出器：ＵＶ＠２１０ｎｍ）により精製した。次いで、生成物画分を真空下で濃縮して、ＭｅＣＮを除去した。溶液を再びクロマトグラフィー（カラム、Ｃ１８；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：ＡＣＮ、２０分間で９５％Ｂから１００％Ｂへの勾配）で精製した。溶液を濃縮して大半のＭｅＣＮを除去し、水溶液を凍結乾燥して、６－（（１６－（１－（６－カルボキシピリジン－２－イル）－２－（２－（２－イソチオシアナトエトキシ）エトキシ）エチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１３０ｍｇ）を褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）８．０３－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２２．３，７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｓ，０Ｈ），４．５９（ｓ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝２３．４，９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，４Ｈ），３．７０－３．５８（ｍ，６Ｈ），３．５８－３．４９（ｍ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：６９２．３（Ｍ＋Ｈ＋）。
（実施例１５）
６，６’－（（（Ｓ－２－（（（５－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｒ－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸
Figure 2023547703000038
ステップ１：０℃、窒素雰囲気下で、ｔｅｒｔ－ブチル（５－メルカプトペンチル）カルバメート（０．３０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を、水素化ナトリウム（０．０７ｇ、鉱油中６０％、２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中懸濁液を含有する５０ｍＬ三口丸底フラスコに、５分間かけて滴下で加えた。添加の完了後、反応混合物を室温にし、撹拌を１５分間続けた。次いで、反応混合物を再び０℃に冷却し、ジメチル６，６’－（（２－（（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ－ジピコリナート（０．６ｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３．０ｍＬ）からなる溶液を１０分間かけて滴下処理した。添加の完了後、反応混合物をゆっくりと室温に温め、撹拌を１．５時間続けた。次いで、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１．０ｍＬ）で注意深く処理し、濃縮乾固させて油状物を得た。油状物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／アセトニトリル；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．２５ｇ）を得た。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．２５ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、１．５ｍＬ、６．３ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬ丸底フラスコに０℃で添加し、続いてこれを室温にし、混合物を３時間撹拌した。次いで、揮発性物質を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．２１ｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ３：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ－ジピコリナート（０．１５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、（（１Ｒ，８Ｓ，９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メチル４－ニトロフェニルカルボナート（６８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６６ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（２ｍＬ）とＤＭＦ（０．１ｍＬ）の混合物を、２５ｍＬ三口丸底フラスコに０℃、窒素雰囲気下で加えた。得られた溶液を室温にゆっくり加温し、一晩撹拌した。次いで、混合物を濃縮乾固させて、ジメチル６，６’－（（（Ｓ－２－（（（５－（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（０．１ｇ）を得て、これを精製せずに使用した。
ステップ４：撹拌子、ジメチル６，６’－（（（Ｓ－２－（（（５－（（（（（１Ｒ，８Ｓ，９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリナート（０．１０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（３．５ｍＬ、０．１Ｎ、０．３５ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をｐＨが約６．５になるまで酢酸で処理し、続いて室温で真空中で濃縮乾固させて油状物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ、５．０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中０．１％ギ酸／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、６，６’－（（（Ｓ）－２－（（（５－（（（（１ Ｒ，８Ｓ，９ｒ）－ビシクロ［６．１．０］ノン－４－イン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））ジピコリン酸（４２ｍｇ）を得た。
（実施例１６）
Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付き６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリン酸
Figure 2023547703000039
ステップ１：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（０．１２ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）、及びメタノール中のＨＣｌ（４Ｍ、０．７５ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬ丸底フラスコに０℃で添加し、次いで室温にし、２時間撹拌した。揮発物を真空下で除去して、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（７０ｍｇ）を得、これを精製せずに使用した。
ステップ２：撹拌子、ジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（５０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）、１１，１２－ジデヒドロ－γ－オキソジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン－５（６Ｈ）－ブタン酸（２０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（０．５ｍＬ）を、窒素雰囲気下、０℃で２５ｍＬ三口丸底フラスコに添加し、続いて室温にし、一晩撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて油状物を得た。油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付きジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（１６ｍｇ）を得た。
ステップ３：撹拌子、Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付きジメチル６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリナート（１６ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ水溶液（０．４９ｍＬ、０．１Ｎ、０．０４９ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（０．２５ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに加え、混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をｐＨが約６．５になるまで酢酸で処理し、室温で真空下で濃縮乾固させて濃縮物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８ １９×１５０ｍｍ ５．０μｍ；移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）により精製して、Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付き６，６’－（（２－（（（５－アミノペンチル）チオ）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７，１６－ジイル）ビス（メチレン））（Ｓ）－ジピコリン酸（５ｍｇ）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ５１Ｈ６２Ｎ６Ｏ１０Ｓの計算値；９５０．４２；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋９５１．４。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ ７．８１－７．７５（ｍ，４Ｈ），７．５２－７．１７（ｍ，１０Ｈ），４．９７－４．９０（ｍ，１Ｈ），４．８０（ｓ，４Ｈ），４．１４（ｓ，３Ｈ），３．７７－３．４６（ｍ，１６Ｈ），３．１０（ｓ，７Ｈ），２．８３－２．８０（ｍ，２Ｈ），２．５５－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．３８（ｍ，３Ｈ），２．１１－２．０８（ｍ，３Ｈ），１．３９－１．３５（ｍ，２Ｈ），１．２０－１．１０（ｍ，４Ｈ）。
（実施例１７）
Ｎ－アシル－ＤＢＣＯタグ付き６－（（４－（（６－アミノエチル）カルバモイル）フェニル）１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－ベンズイミド－ＤＢＣＯ）
Figure 2023547703000040
ステップ１：５００ｍＬ三口丸底フラスコ中、窒素下、－７８℃で、メチル６－ホルミルピコリナート（４．００ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）、（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）ボロン酸（１０．７ｇ、４８．５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（０．２１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、トリ（ナフタレン－１－イル）ホスフィン（０．５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１０．０ｇ、７２．７ｍｍｏｌ）の混合物に、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）を一度に加えた。混合物を窒素でパージし、室温で３０分間撹拌し、次に６５℃で２４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、濾液を濃縮乾固させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～５０％ ＥｔＯＡｃ／石油エーテル）に供して、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリナート（２．５ｇ、３０％）を黄色油状物として得た。
ステップ２：撹拌子、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリナート（２．５０ｇ、７．３０ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（３．４３ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）、Ｎ－ブロモスクシンイミド（２．１３ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（３０ｍＬ）を、窒素雰囲気下、室温で２５０ｍＬの三口丸底フラスコに入れ、１時間撹拌した。反応溶液をシリカゲルカラムに装填し、石油エーテル中０～３０％酢酸エチルを用いて精製して、化合物メチル６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリナート（１．６５ｇ、５６％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：撹拌子、メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．５２ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、６－（ブロモ（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）メチル）ピコリナート（１．５０ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．１７ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）、及びアセトニトリル（３０ｍＬ）を２５０ｍＬ三口丸底フラスコに添加し、得られた不均一混合物を窒素雰囲気下、９０℃で１６時間加熱した。その後、反応塊を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、真空中で濃縮乾固させて、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供して、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．２ｇ、４４％）を褐色油状物として得た。
ステップ４：撹拌子、メチル６－（（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（１．２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（０．６２ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（２０ｍＬ）を１００ｍＬ三口丸底フラスコに室温で添加し、１時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固させ、得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：０．１％ ＴＦＡ水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）に供して、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．８ｇ、７２％）を褐色油状物として得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ３５Ｈ４４Ｎ４Ｏ１０の計算値６８０．３１；観測値ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６８１．５。ＬＣ－ＭＳによる純度：９９．８７％。ＨＰＬＣによる純度：９７．１４％（２１０ｎｍで９７．０１％、２５４ｎｍで９７．２０％及び２８０ｎｍで９７．２１％）。カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８（２５０×４．６ｍｍ）、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：１．０ｍＬ／分％。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．１２－８．０７（ｍ，４Ｈ），８．００－７．９８（ｍ，２Ｈ），７．７５－７．７３（ｍ，４Ｈ），６．１０（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，８Ｈ），３．５６（ｓ，８Ｈ），３．５２（ｓ，８Ｈ）。
ステップ５：撹拌子、４－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）安息香酸（０．２５ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、ＤＢＣＯ（０．１０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１６ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．２１ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（１０ｍＬ）を、２５ｍＬ三口丸底フラスコに、０℃で窒素雰囲気下、室温で加え、１６時間撹拌した。反応物を水（２０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を１０％ ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、粗生成物を油状物として得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０～１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供して、ＴＯＰＡジメチルエステル－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ（０．１２ｇ、３５％）を無色のゴム状油として得た。
ステップ６：撹拌子、ＴＯＰＡジメチルエステル－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ（０．１ｇ、０．１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ水溶液（３ｍＬ、０．１Ｎ、０．３ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４：１：１ ｖ／ｖ／ｖ、２ｍＬ）を８ｍＬの反応バイアルに室温で加え、２時間撹拌した。反応混合物をＨＣｌ水溶液（１Ｎ）でｐＨ約６．５に中和した。反応混合物を室温で真空中で濃縮乾固させ、得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ１８（１９×１５０ｍｍ）５．０μｍ；移動相：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／ＡＣＮ；流速：１５．０ｍＬ／分）に供して、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ（２０ｍｇ、２１％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ－ＭＳ ＡＰＣＩ：Ｃ５１Ｈ５４Ｎ６Ｏ１０の計算値９１０．３９；観測値ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］＋９０９．３。ＬＣ－ＭＳによる純度：９２．４７％。ＨＰＬＣによる純度：９０．６８％（２１０ｎｍで８８．０４％、２５４ｎｍで９０．４３％及び２８０ｎｍで９３．５６％）；カラム：ＸＢＲＩＤＧＥ Ｃ８（５０×４．６ｍｍ）、３．５μｍ；移動相Ａ：１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：１．０ｍＬ／分。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ７．８４－７．８２（ｍ，４Ｈ），７．６０－７．２９（ｍ，１２Ｈ），７．１３－７．１０（ｍ，２Ｈ），５．１２－５．０２（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｓ，２Ｈ），３．５９－３．４４（ｍ，２０Ｈ），２．８５（ｓ，４Ｈ），２．７３－２．６８（ｍ，６Ｈ）。
（実施例１８）
ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－ベンジイミド－ＤＢＣＯ－トリアゾール－ＰＳＭＢ－１２７抗体コンジュゲート
Figure 2023547703000041
ステップ１．ｍＡｂのアジド修飾及びクリック反応：ＰＳＭＢ１２７を、３７℃で、１００倍モル過剰の３－アジドプロピルアミン及び微生物トランスグルタミナーゼ（ＭＴＧ；Ａｃｔｉｖａ ＴＩ）で部位選択的に修飾した。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ２２４機器でのインタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦ ＬＣ－ＭＳにより、ｍＡｂの重鎖上の２つのアジドの付加をモニタリングした。過剰な３－アジドプロピルアミン及びＭＴＧを除去し、アジド修飾ｍＡｂ（アジド－ｍＡｂ）を、１ｍＬ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムを使用して精製した。１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）を使用して、アジド－ｍＡｂを樹脂から溶出し、次いで７Ｋ Ｚｅｂａ（登録商標）脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に交換する。１０倍モル過剰のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯを、振盪せずに、３７℃で１時間、部位特異的アジド－ＰＳＭＢ１２７（ＤＯＬ＝２）と反応させた。インタクト質量分析によって、ＤＢＣＯ－アジドクリック反応の完了をモニタリングした。過剰な遊離キレータは、Ｚｅｂａ（登録商標）７Ｋ脱塩カラムでコンジュゲートを２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）に脱塩し、続いて、３回の１５倍段階希釈工程、及び３０Ｋ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ濃縮器デバイスを使用して、３８００Ｘｇで回転させることにより、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ７．５）中に濃縮する工程により除去した。これにより、ＣＡＲ＝２の最終部位特異的ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７コンジュゲートを得た。Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌ ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、カラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。
ステップ２．キレート化：以下の金属塩のストック溶液を純水中で調製した。
Figure 2023547703000042
金属溶液を、５倍モル過剰で、１０ｍＭ酢酸ナトリウムで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。（ｐＨ ５．２）中のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７（６．８μＭ抗体、３４μＭ金属イオン）に加え、３７℃で２時間インキュベートした。過剰な金属を、Ｚｅｂａ（登録商標）カラム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（登録商標））で脱塩し、続いて１０倍希釈及び５０Ｋ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ濃縮器（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標））での濃縮を２サイクル行うことによって除去した。キレート化を、インタクト及び還元質量ＬＣ－ＭＳによって評価した。
ステップ３．安定性決定：キレートの安定性を決定するために、ＤＴＰＡチャレンジを行った。５０μＬの試料（６．３μＭ抗体）を５０μＬの１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ６．５）と合わせ、３７℃で一晩インキュベートした。キレート化を、インタクト及び還元質量ＬＣ－ＭＳによって評価した。ＬＣ－ＭＳを、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ６２２４ ＭＳ－ＴＯＦ質量分析計に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣシステムで行った。ＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ ＲＰ－ｍＡｂ Ｃ４カラム（２．１×５０ｍｍ、３．５ミクロン）で、流速１ｍＬ／分、移動相水中０．１％ギ酸（Ａ）及びアセトニトリル中０．１％ギ酸（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号３４６８８）（Ｂ）、並びに２０％ Ｂ（０～２分）、２０～６０％ Ｂ（２～３分）、６０～８０％ Ｂ（３～５．５分）の勾配で実行した。機器を正のエレクトロスプレーイオン化モードで操作し、ｍ／ｚ６００から６０００までスキャンした。質量電荷スペクトルを、最大エントロピーアルゴリズムを使用してデコンボリューションし、関連種の相対量を、デコンボリューションされた質量のピーク高さによって推定した。機器設定には、キャピラリー電圧３５００Ｖ、フラグメンター１７５Ｖ、スキマー６５Ｖ；ガス温度３２５Ｃ、乾燥ガス流量５．０Ｌ／分、ネブライザー圧力３０ｐｓｉｇ、０．４２スキャン速度の取得モード範囲１００～７０００が含まれた。
セリウム及びネオジム試料について、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニル－ＤＢＣＯ－ＰＳＭＢ１２７に対するＭＷの変化が観察された。セリウムと共にインキュベートしたコンジュゲートのインタクトな質量は、１個又は２個のセリウムイオンの付加に対応して、１３９Ｄａ（ピーク面積で２０％）又は２７６Ｄａ（７７％）のＭＷの増加を示した。ＤＴＰＡチャレンジ後、質量は類似したままであり、存在度も類似していた（＋１３８及び＋２７４種について３０％及び６７％）。
（実施例１９）
６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－イソチオシアナトフェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（Ｈ２ｂｐ１８ｃ６ベンジル－フェニル）（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルイソチオシアネート及びナトリウム塩形態
Figure 2023547703000043
既存の方法と同様の様式で、化合物２を調製した（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ；１９８７，５２，５１７２を参照）。
Figure 2023547703000044
既存の方法と同様の様式で、化合物３を調製した（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ－ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ；２０１５，２１，１０１７９を参照）。
Figure 2023547703000045
化合物４の調製：
Figure 2023547703000046
１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン（４９４ｇ、１．８８ ｍｏｌ、２．５当量）、ＮａＣｌ（４４．１ｇ、０．７５ ｍｏｌ、１．０当量）、Ｈ２Ｏ（１４０ｍＬ、化合物３に対して１体積）及びアセトニトリル（２．１Ｌ、１５体積）を、Ｎ２雰囲気下、１５～２０℃で１０Ｌ反応器に投入し、６５℃に加熱した。得られた混合物に、６５℃で１時間かけて、アセトニトリル（２８０ｍＬ、２体積）中の化合物３（１４０ｇ、０．７５ｍｏｌ）の溶液を、滴下で加えた。この溶液を６５℃で０．５時間エイジングした。混合物のＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。混合物を室温まで放冷し、減圧下で濃縮した。アセトン（７００ｍＬ、５体積）を混合物に加え、懸濁液をさらに１時間撹拌した。混合物を濾過した（濾過された固体は未反応化合物２であった）。濾液を真空下で濃縮し、次いで、ＤＣＭ（１．４Ｌ、１０体積）に溶解した。有機相を水（３×７５０ｍＬ）で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、次いで真空下で濃縮して、２１２ｇの化合物４（収率６３％、アッセイ：８５％ｗ／ｗ）を得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ，ｍ／ｚ）：４１２．１５［Ｍ＋Ｈ］＋ １Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，ｐｐｍ）：δ ７．９８－７．８７（ｍ，２Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝６．４，２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．６１－３．３８（ｍ，１６Ｈ），２．７７（ｄｔ，Ｊ＝１９．０，５．２Ｈｚ，８Ｈ）。
化合物７の調製：
Figure 2023547703000047
メチル６－ホルミルピコリナート５（２５０ｇ、１．０当量）、（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）ボロン酸６（５３８ｇ、１．５当量）及び脱気したＴＨＦ（６．５Ｌ、５に対して２６体積）を、Ｎ２雰囲気下、１５～２０℃で１０Ｌ反応器に投入した。これに続いて、ＰｄＣｌ２（１４．０ｇ、０．０５当量）、トリ（ナフタレン－１－イル）－ホスファン（３１ｇ、０．０５当量）及びＫ２ＣＯ３（６５０ｇ、３．１当量）を添加した。得られた溶液を２０℃で０．５時間撹拌した。次に、この混合物を６５℃に加熱し、１７時間エイジングした。ＬＣＭＳによる分析は、この反応が完了したことを示した。得られた溶液を室温で冷却し、氷水（２．５Ｌ、１０体積）及び酢酸エチル（５Ｌ、２０体積）で希釈した。混合物をセライトパッドを通して濾過した。溶液を分離させ、水性下層を廃棄した。有機相を水（２×１．５Ｌ、１２体積）で洗浄した。層を分離し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。得られた残留物をヘプタン（１．２５Ｌ、５体積）で処理し、得られた懸濁液を０．５時間撹拌した。混合物を濾過し、濾過ケーキをｎ－ヘプタン（５００ｍＬ、２体積）で洗浄して、５３０ｇ（収率９８％、ＬＣＡＰ純度：９０％）の所望の生成物７を黄色固体として得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＬＣＭＳ：（ＥＳ，ｍ／ｚ）：３８１．１０［Ｍ＋Ｎａ］＋ １Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，ｐｐｍ）：δ ９．２７（ｓ，１Ｈ），８．０３－７．８５（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７２（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。
化合物８の調製：
Figure 2023547703000048
メチル６－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）ピコリナート７（３１０ｇ、１．０当量）、トリエチルアミン（２１９ｇ、２．５当量）及びＤＣＭ（６．２Ｌ、７に対して２０体積）を、窒素雰囲気下、１５～２０℃で１０Ｌ反応器に投入し、溶液を０℃に冷却した。塩化メタンスルホニル（９９．２ｇ、１．０当量）を、温度を０℃に維持しながら３０分かけて滴下で加えた。冷却浴を除去し、温度を周囲温度にし、この温度で１時間エイジングした。溶液を真空下、１０～１５℃で濃縮し、次いで残留物をアセトニトリル（４３８ｍＬ、２容量）に溶解させた。得られた溶液を真空下で濃縮して、５１８ｇ（粗）の所望の生成物８を得た。粗生成物をさらに精製することなく次ステップで直接使用した。
化合物９の調製：
Figure 2023547703000049
メチル６－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）－（（メチルスルホニル）オキシ）メチル）ピコリナート８（２１２ｇ、１．０当量、Ｑ－ＮＭＲによる純度８５％）、Ｎａ２ＣＯ３（１３７．６ｇ、３．０当量）及びアセトニトリル（３．５６Ｌ、８に対して２０体積）を、窒素雰囲気下、室温で１０Ｌ反応器に投入し、次いで混合物を６５℃に加熱し、１時間エイジングした。メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート４（３７７．８ｇ、２．０当量）のアセトニトリル溶液（３Ｌ、１０体積）を、６５℃で０．５時間かけて滴下で加えた。この反応が完了したことがＨＰＬＣ分析により示されるまで、混合物をこの温度でエイジングした。得られた溶液を室温で冷却し、次いで濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２×１体積）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、得られた残留物をＥＡ（７００ｍＬ）に溶解し、次いでシリカゲル（８００ｇ、タイプ：ＺＣＸ－２、１００～２００メッシュ、２．１１ｗ／ｗ）を添加した。温度を３５℃未満に維持しながら、混合物を真空下で濃縮した。シリカゲル（９．６ｋｇ、タイプ：ＺＣＸ－２、１００～２００メッシュ、２６．３ｗ／ｗ）をカラムに充填し、続いて、吸着した粗生成物９を含有する用意した乾燥シリカゲルを充填した。カラムを、酢酸エチル：石油エーテル：ジクロロメタン（３：３：１）／メタノール：ジクロロメタン（１：１）（１００：０から９０：１０までの勾配、４Ｌ±０．５Ｌ毎にサンプル回収）で溶出させた。画分をＴＬＣで分析した（酢酸エチル：石油エーテル：ジクロロメタン：メタノール＝４：４：１：１）。生成物を有する画分を合わせ、濃縮して、２６０ｇの化合物９を黄色固体として得た（ＨＰＬＣ：９４％、ＱＮＭＲ：９２％）。さらに７０ｇの化合物９を黄色油状物として得た（ＨＰＬＣ：７５％、ＱＮＭＲ：６０％）。ＬＣＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：７５２．３０［Ｍ＋Ｈ］＋観測値ｍ／ｚ １Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）：δ ７．５３－７．３２（ｍ，３Ｈ），７．２８－７．１８（ｍ，３Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．０９（ｓ，１Ｈ），４．６３（ｓ，１Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ），３．４４（ｂｓ，５Ｈ），３．１７－２．９２（ｍ，１６Ｈ），２．３８（ｄｑ，Ｊ＝２５．０，７．２，６．８Ｈｚ，８Ｈ），０．９７（ｓ，９Ｈ）。
化合物１０の調製：
Figure 2023547703000050
化合物９（２６０ｇ、ＱＮＭＲ：９２％、１．０当量）、Ｎ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ、６．０当量）及びアセトニトリル（４Ｌ、１５体積）を、窒素雰囲気下、１５～２０℃で１０Ｌの反応容器に入れた。混合物を２０℃で４０分間撹拌した。アセトニトリル（１．３Ｌ、５体積）中のＴＭＳＯＴｆ（２１２．９ｇ、３．０当量）の溶液を、内部温度を１５～２０℃に維持しながら０．５時間かけて滴下で加えた。得られた溶液を、１５～２０℃で１時間エイジングした。プロセス分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋ＡＣＮ ０．９ｍＬ＋ジイソプロピルエチルアミン１滴）により、出発物質の完全な転化が示されたら、温度を５～１０℃に維持しながら、ジイソプロピルエチルアミン（６１７ｇ、１５．０当量）で混合物をクエンチした。混合物を５～１０℃で２０分間撹拌し、次いで温度を５～１０℃に維持しながら、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２．６Ｌ、１０体積）を投入した。混合物をこの温度でさらに３０分間エイジングした。水相（固体を含有）を回収し、２－ＭｅＴＨＦ（５２０ｍＬ、２体積）で抽出した。有機相を合わせ、ＫＦ（ＫＦ：９．１８％）により含水量をチェックし、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４（５００ｇ、１０．０当量）で乾燥させた。固体を濾過によって除去し、濾過ケーキをアセトニトリル（２×５２０ｍＬ、２体積）で洗浄した。次に、濾液を無水Ｎａ２ＳＯ４（５００ｇ、１０．０当量）で乾燥させた。濾過後、濾過ケーキをアセトニトリル（２×５２０ｍＬ、２体積）で洗浄し、含水量をＫＦによってチェックした（ＫＦ：８．１５％）。アセトニトリル／２－ＭｅＴＨＦ抽出液１０を次のステップに直接使用した。（生成物はＬＣＭＳ条件に対して安定ではなかった）。
化合物１４（遊離酸）の調製
Figure 2023547703000051
メチル６－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）フェニル）（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリナート（６．０ｇ、１．０当量）及びＢＳＡ（９．７ｇ、６．０当量）及びＭｅＣＮ（１２０ｍＬ、９に対して２０体積）を、５００ｍＬ反応容器に窒素雰囲気下、室温で投入した。ＭｅＣＮ（１２０ｍＬ、２０体積）中のＴＭＳＯＴｆ（５．４ｇ、２．３当量）の溶液を室温で３０分かけて滴下で加えた。混合物を室温で一晩エイジングした。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋ＡＣＮ ０．９ｍＬ＋ジイソプロピルエチルアミン１滴）により、反応が完了に達したことが示された。混合物をジイソプロピルエチルアミン（１５．４ｇ、１５．０当量）でクエンチし、温度を０～５℃に維持した。混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで温度を０～５℃に維持しながら、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（６０ｍＬ、１０体積）を滴下で加えた。水相を抽出により除去し、有機相を回収し、次のステップに直接使用した。有機相を５００ｍＬの三口丸底瓶に入れ、水（６０ｍＬ、１０体積）中のＬｉＯＨ（１．１５ｇ、６．０当量）の溶液を、室温で溶液に添加した。溶液を室温で１時間撹拌した。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋アセトニトリル０．９ｍＬ）は、完全な転化を示さなかった。さらにＬｉＯＨ（５７６ｍｇ、３．０当量）を加え、溶液を室温でさらに１時間撹拌した。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋アセトニトリル０．９ｍＬ）により、反応が完了に達したことが示された。次に、ＴＣＤＩ（５．６ｇ、３．９当量）を加え、溶液を室温で１時間撹拌した。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋アセトニトリル０．９ｍＬ）は、完全な転化を示さなかった。さらにＴＣＤＩ（２．８ｇ、２．０当量）を加え、溶液を室温でさらに１時間撹拌した。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋アセトニトリル０．９ｍＬ）により、反応が完了に達したことが示された。反応溶液を逆相Ｃｏｍｂｉ－Ｆｌａｓｈによって分離した。方法：カラムＣ１８、Ａ溶液Ｈ２Ｏ（０．０１％ギ酸含有）、Ｂ溶液ＡＣＮ。４０分間で５％から３５％へ、流量（１００ｍＬ／分）、生成物は２０分～２５分。溶液を回収する。溶液を濃縮してＡＣＮを除去し、逆相Ｃｏｍｂｉ－Ｆｌａｓｈによって再び分離した。方法：カラムＣ１８、Ａ溶液Ｈ２Ｏ、Ｂ溶液ＡＣＮ。５％１０分、５分で５％～３５％、９５％１０分、流量（１００ｍＬ／分）、生成物は１３分～２５分。溶液を回収する。溶液を減圧下、２０℃未満で濃縮し、凍結乾燥により乾燥させた。これにより、２．５ｇ（３ステップで収率４７％）の化合物１４が黄色固体として得られた。化合物１４（６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）（４－イソチオシアナトフェニル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸）は、－８０℃で保存する必要があった。ＬＣＭＳ：（ＥＳ，ｍ／ｚ）：６６６．３［Ｍ＋Ｈ］＋ １Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，ｐｐｍ）：７．９４－７．８４（ｍ，４Ｈ），７．５６－７．４０（ｍ，４Ｈ），７．１６－７．１４（ｍ，２Ｈ），５．８３（ｓ，１Ｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．７５（ｍ，８Ｈ），３．６０－３．４９（ｍ，１４Ｈ），３．３６－３．３３（ｍ，２Ｈ）。
化合物１１（ナトリウム塩）の調製：
Figure 2023547703000052
ＡＣＮ及び２－ＭｅＴＨＦ中の化合物１０の調製された溶液を、１０Ｌの四口反応容器に入れ、溶液を５～１０℃に冷却した。温度を５～１０℃に維持しながら、粉末ＮａＯＨ（５６．９ｇ、４．５当量）を添加した。得られた溶液を、１５～２０℃で０．５時間撹拌した。混合物の分析（試料調製：溶液系０．１ｍＬ＋アセトニトリル０．９ｍＬ）は、転化を示さなかった。追加の粉末ＮａＯＨ（２５．３ｇ、２．０当量）を５～１０℃で加えた。溶液を１５～２０℃でさらに０．５時間エイジングした。第２のＩＰＣを分析したところ、５０％の転化率であることが示された。粉末ＮａＯＨの最終添加（２５．３ｇ、２．０当量）を５～１０℃で加えた。混合物を１５～２０℃でさらに０．５時間撹拌した。分析により、出発物質１０の完全な転化が示された。この混合物を濾過し、濾過ケーキをアセトニトリル（２×５２０ｍＬ、２体積）で洗浄した。最終溶液（約７．５Ｌ、２８．８体積）を、１５～２０℃の温度を維持しながら１～２体積に濃縮した。次いで、残留物をアセトニトリル（２Ｌ、７．７体積）で処理し、含水量をＫＦによってチェックした（ＫＦ：５．７％）。この混合物を濾過し、濾過ケーキをＡＣＮ（２×５２０ｍＬ、２体積）で洗浄した。次いで、溶液を真空下、１５～２０℃で１～２体積に濃縮した。含水量を再びＫＦによってチェックした（ＫＦ：５．５％）。溶液をアセトニトリル（３９０ｍＬ、１．５体積）で希釈し、温度を１５～２０℃の間に維持しながら、ＭＴＢＥ（２．６Ｌ、１０体積）に０．５時間かけて滴下で加えた。溶媒をデカントして粘性油状物を残し、これをアセトニトリル（５２０ｍＬ、２体積）に再溶解させ、ＭＴＢＥ（２．６Ｌ、１０体積）に加えた。このプロセスを、さらに４回繰り返した。粘性油状物を得て、これを最終的にアセトニトリル（５２０ｍＬ、２体積）に溶解させ、乾燥させ、次いで減圧下１５～２０℃で濃縮した。次いで、１５～２０℃でオイルポンプを用いて蒸発させることにより残留溶媒を除去した。乾燥後、３３５ｇの化合物１１が黄色がかった固体として得られた（ＱＮＭＲ：７０％、２ステップにわたる全収率８７％）。ＬＣＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：６２４．３［Ｍ－ＴｆＯＮａ－２Ｎａ＋３Ｈ］＋ １Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４，ｐｐｍ）：δ ７．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，１Ｈ），３．８３－３．３６（ｍ，１８Ｈ），３．０３－２．６２（ｍ，６Ｈ），２．５５（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，２Ｈ）。
化合物１２（ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルイソチオシアネートナトリウム塩）の調製：
Figure 2023547703000053
ＴＣＤＩ（６８．７ｇ、１．４当量）及びアセトニトリル（２．６Ｌ、８体積）を、窒素雰囲気下、１５～２０℃で１０Ｌ反応容器に入れた。温度を１５～２０℃に維持しながら、アセトニトリル（６６０ｍＬ、２体積）中の化合物１１（３３０ｇ、Ｎａ＋塩、ＱＮＭＲ：７０％、１．０当量）の溶液を３０分かけて滴下で加えた。混合物を１５～２０℃で０．５時間エイジングした。混合物の分析（試料調製：溶液系３０μＬ＋ＡＣＮ ３００μＬ＋水１滴）により、反応が完了に達したことが示された。含水量をＫＦによってチェックした（ＫＦ：０．１９％）。溶液系を、１５～２０℃で減圧下で乾燥させ濃縮した。得られた残留物をアセトニトリル（９４５ｍＬ、２．９体積）に溶解させ、含水量をＫＦによって測定した（ＫＦ：０．３４％）。酢酸イソプロピル（６６０ｍＬ、２体量）を１５～２０℃で４０分間かけて溶液に加えた。核形成は観察されず、追加の酢酸イソプロピル（６．６Ｌ、１８体積）を１５～２０℃で４０分かけてゆっくりと滴下投入して、生成物１２の沈殿をもたらし、これを濾過によって黄色がかった固体として回収した。固体をアセトニトリル（３３０ｍＬ、１体積）に溶解させ、ＩＰＡｃ（６．６Ｌ、２０体積）を１５～２０℃で４０分間かけてゆっくりと滴下で加えた。混合物を濾過して、２３０ｇの生成物を黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ：８０．９９％、ＱＮＭＲ：５９％、１０％ ＩＰＡｃ）。ウェットケーキを真空下、１５～２０℃で２時間乾燥させて、２２４ｇの粗生成物１２を黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ：８０．９％、ＱＮＭＲ：６０．４％、約６％ ＩＰＡｃ）。粗生成物１２をアセトニトリル（３３０ｍＬ、１体積）に再溶解させ、酢酸イソプロピル（４１２ｍＬ、１．２５体積）を１５～２０℃で４０分間かけてゆっくりと滴下で加えた。得られた混合物を濾過し、１２を回収した（３０．５ｇ、ＨＰＬＣ＝６０．９％、アッセイ：２５．５％）。母液を、１５～２０℃で４０分間かけて加えた酢酸イソプロピル（６．６Ｌ、２０体量）で希釈した。混合物を濾過し、ケーキを乾燥させて、１７３．５ｇの粗生成物１２を黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ：８５．４％、ＱＮＭＲ：６６％、３．９％ ＩＰＡｃ、ＲＲＴ１．１９＝３．９％）。１９０ｇの粗生成物１２を７６０ｍＬのアセトニトリル：酢酸イソプロピル（２：１）に溶解させ、混合物をシリカゲルカラム（３８０ｇ、２回）に通した。シリカをアセトニトリル：酢酸イソプロピル（２：１、５．７Ｌ）で洗い流し、次いで１２Ｌのアセトニトリルで洗い流した（非常に少量の生成物）。生成物含有画分を濃縮して、１１８ｇの生成物１２を黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ：９５％）。次いで、シリカパッドをＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（１２Ｌ、１０：１）で洗い流した。溶媒を真空中で除去して、追加の６０ｇの粗生成物１２を黄色がかった固体として得て、これをアセトニトリル（１．５Ｌ）に溶解させ、３０分間撹拌し、次いで濾過した。次いで、母液を濃縮して、２４ｇの粗生成物１２を黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ＝９２％）。上記のように調製した粗生成物１２（１１８ｇ）及び粗生成物１２（２４ｇ）をアセトニトリル（３３０ｍＬ、１体積）に溶解させ、酢酸イソプロピル（６．６Ｌ、２０体積）を１５～２０℃で４０分間かけて滴下で加えた。次いで、混合物を濾過して、１３３ｇの生成物１２を適切な純度の黄色がかった固体として得た（ＬＣＡＰ：９５％、ＱＮＭＲ：６０．８％、７．８％ ＩＰＡｃ）。注記：化合物１２は－２０℃での貯蔵が必要であった。ＬＣＭＳ：（ＥＳ，ｍ／ｚ）：６６６．６１［Ｍ－ＴｆＯＮａ－２Ｎａ＋３Ｈ］＋ １Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４，ｐｐｍ）：δ ８．００（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．８，７．７，１．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄｔ，Ｊ＝２０．４，７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５８－７．４９（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６－７．２８（ｍ，２Ｈ），７．２８－７．２０（ｍ，１Ｈ），４．９６（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９６－３．８８（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－３．５２（ｍ，１１Ｈ），３．５５－３．３９（ｍ，４Ｈ），３．０７－２．７３（ｍ，６Ｈ），２．６２（ｄｔ，Ｊ＝１５．１，３．６Ｈｚ，２Ｈ）。
（実施例２０）
ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲート
Figure 2023547703000054
（上記のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲートにおいて、構造は、フェニルチオ尿素部分に連結されたｈ１１Ｂ６のリジン残基を示さない。）
ｍＡｂのＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素修飾：
ｈ１１ｂ６ ｍＡｂ（１０．２ｍｇ／ｍＬ）を１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ ５．２緩衝液中で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。コンジュゲーションの直前に、ｐＨを重炭酸ナトリウム緩衝液（ＶＷＲ １４４－５５－８）でｐＨ ９に調整した。ｐＨはｐＨ紙で確認した。次いで、１０倍モル過剰の二ナトリウム塩ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルイソチオシアネートナトリウム塩（水に溶解した５０ｍＭストック）をｈ１１ｂ６ ｍＡｂに加え、抗体とＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルイソチオシアネートナトリウム塩との混合物を振盪せずに室温で約１時間インキュベートした。ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルイソチオシアネートナトリウム塩の添加を、ＣＡＲ値が１．５～２．０になるまで、Ａｇｉｌｅｎｔ（登録商標）Ｇ２２４装置で、インタクト質量ＥＳＩ－ＴＯＦ ＬＣ－ＭＳによってモニターした。１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ ８．５（Ｔｅｋｎｏｖａ Ｔ１０８５）を最終濃度１００ｍＭまで添加することによって、混合物を直ちにクエンチした。７Ｋ Ｚｅｂａ（登録商標）脱塩カラムを使用して１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ ５．２中で反応物を脱塩することによって、過剰な遊離キレータを除去した。過剰なキレータが存在しないことを確認するために、１５ｍＬへの３回の試料希釈、続いて５０，０００ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ濃縮装置を使用した１ｍＬへの濃縮を行った。次いで、試料を放射性標識のためにその最終濃度まで濃縮した。Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌ ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５ｕカラム、カラム温度：室温で、カラムを０．２Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ ６．８）、流量：０．８ｍＬ／分、１８分の運転、注入量：１８μＬで溶出する分析サイズ排除クロマトグラフィーにより、最終コンジュゲートがモノマーであることが確認された。
（実施例２１）
Ａｃ－２２５標識ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲート
Figure 2023547703000055
（上記のＡｃ－２２５標識ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲートにおいて、構造は、フェニルチオ尿素部分に連結されたｈ１１Ｂ６のリジン残基を示さない。）
（ｉ）３Ｍ ＮａＯＡｃ緩衝液中のＡｃ－２２５によるＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６の標識：
プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中３Ｍ、６０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、１５μＬ）及びＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．５中１．１３ｍｇ／ｍＬ、４４１μＬ、０．５ｍｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ ５～６）で展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６結合Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５に結合していることを示した。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡによって展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．７％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５にキレート化していることを示した。
ＰＤ１０カラムでの精製：
ＮａＯＡｃ緩衝液（２５ｍＭ ＮａＯＡｃ、０．０４％ ＰＳ－２０、ｐＨ ５．５）を５ｍＬ×３回カラムに通し、洗浄液を廃棄することによって、ＰＤ－１０樹脂をＮａＯＡｃ緩衝液で調整した。全ての標識反応混合物をカラムのリザーバに適用し、溶出液を予め番号付けしたプラスチックチューブに回収した。反応バイアルを、ＮａＯＡｃ緩衝液（２５ｍＭ ＮａＯＡｃ、０．０４％ ＰＳ－２０、ｐＨ ５．５）で０．２ｍＬ×３回洗浄し、洗浄液をＰＤ－１０カラムのリザーバにピペットで入れ、溶出液を回収した。各チューブは約１ｍＬの溶出液を含んでいた。ＰＤ－１０カラムのリザーバへのＮａＯＡｃ緩衝液（２５ｍＭ ＮａＯＡｃ、０．０４％ ＰＳ－２０、ｐＨ ５．５）の継続的な適用を１０ｍＬの総溶出体積に達するまで行った。回収した画分の放射化学的純度をｉＴＬＣによってチェックした。１０ｕＬの各回収画分をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。純粋な画分は、ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端で放射活性シグナルを有さないはずである。
精製した２２５Ａｃ－ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６のＤＴＰＡチャレンジ：
ＰＤ－１０カラム後に回収した１０μＬの画分＃３を、１５μＬの１０ｍＭのＤＴＰＡ溶液（ｐＨ６．５）と混合し、３０分間インキュベートした。１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに装填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開し、一晩乾燥させた。これをＢｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。ｉＴＬＣ－ＳＧの溶媒先端では、放射能シグナルは観察されなかったが、これは、画分＃３中に遊離Ａｃ－２２５が存在しなかったことを示す。
精製した２２５Ａｃ－ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６のＨＰＬＣ分析：
ＰＤ－１０カラム後に回収した画分＃３をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ法：Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌ ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍカラム、カラム温度：室温で、このカラムをＤＰＢＳ緩衝液（×１、カルシウム及びマグネシウムを含まない）、流量：０．７ｍＬ／分、２０分の運転、注入量：４０μＬで溶出した。ＨＰＬＣ後、画分を３０秒又は１分の時間間隔で回収した。回収したＨＰＬＣ画分を室温で一晩放置した。回収した画分の各々の放射能をγ計数器で計数した。ＨＰＬＣ放射能トレースは、各ＨＰＬＣ画分中の放射能から構築された。ＨＰＬＣ放射能トレースは、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６ピークに対応する放射能ピークをＨＰＬＣ ＵＶトレース上で示した。
（ｉｉ） １．５Ｍ ＮａＯＡｃ緩衝液中のＡｃ－２２５によるより高濃度のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６の標識：
プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中１．５Ｍ、０．０４％ ＰＳ－２０含有、６３μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ）及びＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．２中９．３６ｍｇ／ｍＬ、０．０４％ ＰＳ－２０、３６ｕＬ、３３７μｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６結合Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５に結合していることを示した。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡによって展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５にキレート化していることを示した。
（ｉｉｉ） １Ｍ ＮａＯＡｃ緩衝液中のＡｃ－２２５によるより高濃度のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６の標識：
プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中１．０Ｍ、０．０４％ ＰＳ－２０含有、６３μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ）及びＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．２中９．３６ｍｇ／ｍＬ、０．０４％ ＰＳ－２０、３６ｕＬ、３３７μｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６結合Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５に結合していることを示した。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡによって展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５にキレート化していることを示した。
２５ｍＭ ＮａＯＡｃ緩衝液中（０．４％ ｔｗｅｅｎ－２０含有、ｐＨ ５．５）のＡｃ－２２５によるより高濃度のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６の標識：
プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中２５ｍＭ、０．０４％ ＰＳ－２０含有、ｐＨ ５．５、１０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中１０ｍＣｉ／ｍＬ、５μＬ）、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝５．２）中１０．４ｍｇ／ｍＬ、１６ｕＬ、１６６μｇ）及びＮａＯＨ（０．１Ｍ、５μＬ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．０であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、これを１０ｍＭのＥＤＴＡで展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６結合Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．９％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５に結合していることを示した。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡによって展開した。乾燥したｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００ラジオＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に留まり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．８％のＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６がＡｃ－２２５にキレート化していることを示した。
Figure 2023547703000056
（実施例２２）
以下の一連の実験は、ＴＯＰＡ及びＤＯＴＡキレート大員環分子のアクチニウム源に付随する、非放射性金属不純物の存在の影響を調べるために行った。ＩＣＰ－ＭＳによって２２５Ａｃ（ＮＯ３）３のＯＲＮＬ源において見出された４つの最も重要な不純物であるＡｌ３＋、Ｃａ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋を、ｈ１１ｂ６にコンジュゲートしたＤＯＴＡ及びＴＯＰＡのキレート化反応におけるスパイク標準として使用した。キレート化の結果をｉＴＬＣによってモニターし、その後、ＤＴＰＡでチャレンジした。
金属不純物（低濃度不純物）の存在下でのＡｃ－２２５によるＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６のキレート化。
Figure 2023547703000057
（上記のＡｃ－２２５標識ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１Ｂ６抗体コンジュゲートにおいて、構造は、フェニルチオ尿素部分に連結されたｈ１１Ｂ６のリジン残基を示さない。）
Ａｃ－２２５を０．１Ｍ ＨＣｌに溶解し、ＡｌＣｌ３、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２及びＭｇＣｌ２と混合して、５ｍＣｉ／ｍＬ溶液を形成した。アルミニウム、カルシウム、亜鉛及びマグネシウムの濃度は、それぞれ９．７６μｇ／ｍＣｉ、３．８３μｇ／ｍＣｉ、０．６１μｇ／ｍＣｉ及び０．２７μｇ／ｍＣｉである。プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、添加された金属不純物を含む）及びＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．５中１．１７ｍｇ／ｍＬ、１４３μＬ、０．１６７ｍｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、１０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩乾燥させ、その後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書中に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６ Ａｃ－２２５に結合したＡｃ－２２５は、ＴＬＣの起点（ベースライン）に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒と共に溶媒フロントに移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．５％のＡｃ－２２５がＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合していることを示した（スキャン１、図５に示す）。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡ溶出液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを空気乾燥させ、室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．４％のＡｃ－２２５がＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合していることを示した（スキャン２、図６に示す）。
金属添加実験：金属不純物の存在下での、Ａｃ－２２５によるＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６の標識（より高濃度の不純物。低濃度の不純物と比較して５倍の濃度増加）。
Figure 2023547703000058
Ａｃ－２２５を０．１Ｍ ＨＣｌに溶解し、ＡｌＣｌ３、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２及びＭｇＣｌ２と混合して、５ｍＣｉ／ｍＬ溶液を形成した。アルミニウム、カルシウム、亜鉛及びマグネシウムの濃度は、それぞれ４５．０μｇ／ｍＣｉ、１７．３μｇ／ｍＣｉ、３．０１μｇ／ｍＣｉ及び１．１５μｇ／ｍＣｉである。プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、添加された金属不純物を含む）及びＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６（１０ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．５中１．１７ｍｇ／ｍＬ、１４３μＬ、０．１６７ｍｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、１０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩乾燥させ、その後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書中に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６ Ａｃ－２２５に結合したＡｃ－２２５は、ＴＬＣの起点（ベースライン）に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒と共に溶媒フロントに移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９８．９％のＡｃ－２２５がＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合していることを示した（スキャン３、図７に示す）。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡ溶出液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを空気乾燥させ、室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に留まることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、９９．８％のＡｃ－２２５がＴＯＰＡ－［Ｃ７］－フェニルチオ尿素－ｈ１１ｂ６に結合していることを示した（スキャン４、図８に示す）。
金属不純物（低濃度不純物）の存在下でのＡｃ－２２５によるＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６のキレート化。
Figure 2023547703000059
Ａｃ－２２５を０．１Ｍ ＨＣｌに溶解し、ＡｌＣｌ３、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２及びＭｇＣｌ２と混合して、５ｍＣｉ／ｍＬ溶液を形成した。アルミニウム、カルシウム、亜鉛及びマグネシウムの濃度は、それぞれ９．７６μｇ／ｍＣｉ、３．８３μｇ／ｍＣｉ、０．６１μｇ／ｍＣｉ及び０．２７μｇ／ｍＣｉである。プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、添加された金属不純物を含む）及びＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６（２５ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．５中１０ｍｇ／ｍＬ、１６．７μＬ、０．１６７ｍｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、１０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩乾燥させ、その後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書中に記載される溶出条件下で、ＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６ Ａｃ－２２５に結合したＡｃ－２２５は、ＴＬＣの起点（ベースライン）に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒と共に溶媒フロントに移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、４３．６％のＡｃ－２２５がＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化していることを示した（スキャン５、図９に示す）。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡ溶出液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを空気乾燥させ、室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＤＯＴＡ－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、１８．１％のＡｃ－２２５がＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化していることを示した（スキャン６、図１０に示す）。
金属添加実験：金属不純物の存在下での、Ａｃ－２２５によるＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６の標識（より高濃度の不純物。低濃度の不純物と比較して５倍の濃度増加）。
Figure 2023547703000060
Ａｃ－２２５を０．１Ｍ ＨＣｌに溶解し、ＡｌＣｌ３、ＣａＣｌ２、ＺｎＣｌ２及びＭｇＣｌ２と混合して、５ｍＣｉ／ｍＬ溶液を形成した。アルミニウム、カルシウム、亜鉛及びマグネシウムの濃度は、それぞれ４５．０μｇ／ｍＣｉ、１７．３μｇ／ｍＣｉ、３．０１μｇ／ｍＣｉ及び１．１５μｇ／ｍＣｉである。プラスチックバイアル中のＮａＯＡｃの溶液（Ｈ２Ｏ中３Ｍ、２０μＬ）に、Ａｃ－２２５（０．１Ｎ ＨＣｌ中５ｍＣｉ／ｍＬ、１０μＬ、添加された金属不純物を含む）及びＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６（２５ｍＭ ＮａＯＡｃ ｐＨ＝５．５中１０ｍｇ／ｍＬ、１６．７μＬ、０．１６７ｍｇ）を順次加えた。混合後、ｐＨ試験紙により、ｐＨは約６．５であった。バイアルを３７℃で２時間放置した。
標識反応混合物のｉＴＬＣ：
次に０．５μＬの標識反応混合物をｉＴＬＣ－ＳＧに充填し、１０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを室温で一晩乾燥させ、その後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書中に記載される溶出条件下で、ＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６ Ａｃ－２２５に結合したＡｃ－２２５は、ＴＬＣの起点（ベースライン）に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は、溶媒と共に溶媒フロントに移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、５２．７％のＡｃ－２２５がＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化していることを示した（スキャン７、図１１に示す）。
標識反応混合物のＤＴＰＡチャレンジ：
さらに、０．５μＬの標識反応混合物を、３７℃で１０ｍＭ ＤＴＰＡ（ｐＨ＝６．５、１５μＬ）と混合した。３０分後、１０μＬの混合物をｉＴＬＣ－ＳＧ上にスポットし、１０ｍＭ ＥＤＴＡ溶出液で展開した。ｉＴＬＣ－ＳＧを空気乾燥させ、室温で一晩放置した後、Ｂｉｏｓｃａｎ ＡＲ－２０００放射線ＴＬＣスキャナでスキャンした。本明細書に記載される溶出条件下で、ＤＯＴＡ－ｈ１１Ｂ６キレート化Ａｃ－２２５は起点に残ることになり、任意の遊離Ａｃ－２２５は溶媒と共に溶媒先端に移動したことになる。ｉＴＬＣのスキャンは、１４．０％のＡｃ－２２５がＤＯＴＡ－ｈ１１ｂ６にキレート化していることを示した（スキャン８、図１２に示す）。
上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例と共に本発明の原理を教示するものであるが、本発明の実施には、以下の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に含まれる全ての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点が理解されるであろう。
本願全体を通じて、様々な刊行物が引用されている。これらの刊行物の開示は、本発明が関係する最新の技術をより詳しく説明するために参照により本願に援用する。

Claims (47)

  1. 式（Ｉ）の化合物：
    Figure 2023547703000061
     又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
    Ｒ３は水素であり、
    あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、該５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  2. 式（ＩＩ）：
    Figure 2023547703000062
     の、請求項１に記載の化合物、又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  3. 式（ＩＩＩ）：
    Figure 2023547703000063
     の、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  4. 請求項１に記載の化合物であって、
    Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、
    化合物、又はその医薬的に許容される塩。
  5. 請求項１に記載の化合物であって、
    Ｒ１は、Ｈであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、－Ｌ１－Ｒ４で置換されている５員又は６員のシクロアルキルを形成し、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、
    化合物、又はその医薬的に許容される塩。
  6. Ｒ４が、－ＮＨ２、－ＮＣＳ、－ＮＣＯ、－Ｎ３、アルキニル、シクロアルキニル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、－ＣＯＯＲ１３、－ＣＯＮ（Ｒ１３）２、マレイミド、ハロゲン化アシル、テトラジン、又はトランス－シクロオクテンである、請求項１に記載の化合物。
  7. Ｒ４が、シクロオクチニル、ビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
  8. Ｒ４がＤＢＣＯ又はＢＣＮである、請求項７に記載の化合物。
  9. Ｒ４が標的化リガンドを含み、該標的化リガンドが、抗体、抗体の抗原結合フラグメント、足場タンパク質、及びアプタマーからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
  10. Ｌ１が、
    Figure 2023547703000064
     からなる群から選択され、式中、ｍは０～１２の整数である、請求項１に記載の化合物。
  11. Figure 2023547703000065
    Figure 2023547703000066
     からなる群から選択される請求項１に記載の化合物であって、式中、ｎは１～１０である、化合物。
  12. 前記化合物は、放射性金属イオンに結合して放射性金属錯体を形成する、請求項１に記載の化合物。
  13. 式（Ｉ－Ｍ＋）：
    Figure 2023547703000067
     の放射性金属錯体、又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
    Ｒ３は水素であり、
    あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、該５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  14. 式（ＩＩ－Ｍ＋）：
    Figure 2023547703000068
     の、請求項１３に記載の放射性金属錯体、又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  15. 式（ＩＩＩ－Ｍ＋）：
    Figure 2023547703000069
     の、請求項１３に記載の放射性金属錯体、又はその医薬的に許容される塩
    （式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである）。
  16. 請求項１３に記載の放射性金属錯体であって、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員シクロアルキルを形成し、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、
    放射性金属錯体、又はその医薬的に許容される塩。
  17. 請求項１３に記載の放射性金属錯体であって、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｒ１は、Ｈであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、－Ｌ１－Ｒ４で置換されている６員のシクロアルキルを形成し、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、求核部分、求電子部分、又は標的化リガンドである、
    放射性金属錯体、又はその医薬的に許容される塩。
  18. Figure 2023547703000070
    Figure 2023547703000071
     からなる群から選択される請求項１３に記載の放射性金属錯体であって、ｎは、１～１０であり、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンである、放射性金属錯体。
  19. 抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされた、請求項９に記載の化合物を含む免疫コンジュゲート。
  20. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、トリアゾール部分を介してＲ４に結合されている、請求項１９に記載の免疫コンジュゲート。
  21. Figure 2023547703000072
     からなる群から選択される免疫コンジュゲートであって、式中、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである、免疫コンジュゲート。
  22. 前記ｍＡｂがｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項２１に記載の免疫コンジュゲート。
  23. Figure 2023547703000073
     からなる群から選択される、請求項２１に記載の免疫コンジュゲートであって、式中、ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである、免疫コンジュゲート。
  24. 前記ｍＡｂがｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項２３に記載の免疫コンジュゲート。
  25. 請求項１３に記載の放射性金属錯体が、抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされている、放射性免疫コンジュゲート。
  26. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、トリアゾール部分を介して前記放射性金属錯体のＲ４に結合されている、請求項２５に記載の放射性免疫コンジュゲート。
  27. 前記抗体がｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項２５に記載の放射性免疫コンジュゲート。
  28. Figure 2023547703000074
     からなる群から選択される放射性免疫コンジュゲートであって、式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである、放射性免疫コンジュゲート。
  29. 前記ｍＡｂがｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項２８に記載の放射性免疫コンジュゲート。
  30. Figure 2023547703000075
     からなる群から選択される、請求項２８に記載の放射性免疫コンジュゲートであって、式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    ｍＡｂは、抗体又はその抗原結合フラグメントである、放射性免疫コンジュゲート。
  31. 前記ｍＡｂがｈ１１Ｂ６である、請求項３０に記載の免疫コンジュゲート。
  32. 請求項１９に記載の免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させる工程を含む、請求項２５に記載の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法。
  33. 前記標的化リガンドが、抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記抗体が、ｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項３３に記載の方法。
  35. 式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法であって、
    Figure 2023547703000076
     式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
    Ｒ３は水素であり、
    あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、該５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、アルキニル又はシクロアルキニルであり、
    該方法は、
    （ｉ）修飾ポリペプチドを請求項１に記載の化合物と反応させる工程であって、該修飾ポリペプチドが、アジド基からなる抗体又はその抗原結合フラグメントであり、これにより免疫コンジュゲートを得る、工程と、
    （ｉｉ）該免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、式（Ｉ－Ｍ＋）の該放射性免疫コンジュゲートを得る工程と、
    を含む、方法。
  36. 前記抗体がｈ１１Ｂ６である、請求項３５に記載の方法。
  37. 式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性免疫コンジュゲートを調製する方法であって、
    Figure 2023547703000077
     式中、
    Ｍ＋は、アクチニウム２２５（２２５Ａｃ）、ラジウム２２３（２３３Ｒａ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ（ＩＩ）及び／又は２１２Ｐｂ（ＩＶ））、テルビウム１４９（１４９Ｔｂ）、テルビウム１５２（１５２Ｔｂ）、テルビウム１５５（１５５Ｔｂ）、フェルミウム２５５（２５５Ｆｍ）、トリウム２２７（２２７Ｔｈ）、トリウム２２６（２２６Ｔｈ４＋）、アスタチン２１１（２１１Ａｔ）、セリウム１３４（１３４Ｃｅ）、ネオジム１４４（１４４Ｎｄ）、ランタン１３２（１３２Ｌａ）、ランタン１３５（１３５Ｌａ）、及びウラン２３０（２３０Ｕ）からなる群から選択される放射性金属イオンであり、
    Ｒ１は水素であり、かつ、Ｒ２は－Ｌ１－Ｒ４であり、
    あるいは、Ｒ１は－Ｌ１－Ｒ４であり、かつ、Ｒ２は水素であり、
    Ｒ３は水素であり、
    あるいは、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、５員又は６員シクロアルキルを形成し、該５員又は６員シクロアルキルは、－Ｌ１－Ｒ４で任意選択的に置換されており、
    Ｌ１は、存在しないか、又はリンカーであり、
    Ｒ４は、アルキニル又はシクロアルキニルであり、
    該方法は、
    （ｉ）アジド基からなる修飾抗体又はその抗原結合フラグメントを請求項１に記載の化合物と反応させて、免疫コンジュゲートを得る工程と、
    （ｉｉ）該免疫コンジュゲートを放射性金属イオンと反応させて、式（Ｉ－Ｍ＋）の放射性免疫コンジュゲートを得る工程と、
    を含む、方法。
  38. Ｒ４が、シクロオクチニル、ビシクロノニニル（ＢＣＮ）、ジフッ素化シクロオクチニル（ＤＩＦＯ）、ジベンゾシクロオクチニル（ＤＩＢＯ）、ケト－ＤＩＢＯ、ビアリールアザシクロオクチノニル（ＢＡＲＡＣ）、ジベンゾアザシクロオクチニル（ＤＩＢＡＣ、ＤＢＣＯ、ＡＤＩＢＯ）、ジメトキシアザシクロオクチニル（ＤＩＭＡＣ）、ジフルオロベンゾシクロオクチニル（ＤＩＦＢＯ）、モノベンゾシクロオクチニル（ＭＯＢＯ）及びテトラメトキシジベンゾシクロオクチニル（ＴＭＤＩＢＯ）からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
  39. 前記抗体がｈ１１Ｂ６又はＰＳＭＢ－１２７である、請求項３７に記載の方法。
  40. 請求項１９に記載の免疫コンジュゲートと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物。
  41. 放射線治療を必要とする対象において放射線治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化する方法であって、治療有効量の請求項４０に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
  42. 腫瘍疾患又は障害の治療を必要とする対象において腫瘍疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項４０に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
  43. 癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項４０に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
  44. 請求項２５に記載の放射性免疫コンジュゲートと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物。
  45. 放射線治療を必要とする対象において放射線治療のために腫瘍細胞を選択的に標的化する方法であって、治療有効量の請求項４４に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
  46. 腫瘍疾患又は障害の治療を必要とする対象において腫瘍疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項４４に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
  47. 癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項４４に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
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