JP2023547695A - 増強された免疫療法のためのシステムおよび方法 - Google Patents

Abstract

本開示は免疫療法のためのシステムおよび方法について述べている。免疫細胞は、対照細胞（例えば、操作されていない免疫細胞）に比較して、延長された半減期を示すように設計することができる。免疫細胞は、対照細胞と比較して、増強された増殖を示すように操作することができる。免疫細胞は、対照細胞には標的化することが不十分か不可能な疾患細胞（例えば、がん細胞）に対して効果的かつ特異的に標的化できるように操作することができる。本明細書に開示される操作された免疫細胞は、エクスビボ、インビトロ、場合によってはインビボで操作されることができる。エクスビボまたはインビトロで調製された、操作された免疫細胞は、疾患（例えば、骨髄腫または固形腫瘍）を治療するためにそれを必要としている対象に投与することができる。対象に対して、操作された免疫細胞は自己由来であり得る。あるいは、対象に対して、操作された免疫細胞は、同種異系であり得る。

Description

本出願は、２０２０年１１月３日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１２６１８６号、２０２０年１１月３日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１２６１７９号、および２０２１年２月２４日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０７７６５８号の優先権を主張するものであり、それらの内容は参照により本明細書に組み込まれている。

がん（例えば、新生物、腫瘍）は、世界的に主要な死因であり、毎年約１０００万人の死亡の原因となっている。がんは、個人、家族、地域社会、および国に対して、健康的、経済的、および精神的負担の増大をもたらし続けている。がん生物学（特にがん免疫生物学）と遺伝子工学の理解の深まりは、多くの異なるがんを治療または制御することを目的とした養子細胞療法（例えば、細胞免疫療法）の開発を促っている。

国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２００１／０１０４５４号 米国特許第５，８０４，３９６号

本開示は、癌を治療するための方法およびシステムを提供する。本開示のいくつかの態様は、癌、例えば、血液悪性腫瘍または固形腫瘍、の治療のための、操作された免疫細胞（例えば、操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）およびその使用方法を提供する。

一態様では、本開示は操作されたＮＫ細胞の集団を提供する、ここで：操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞は異種ポリペプチドを含み、ここで該異種ポリペプチドが異種ＩＬ－１５を含む；並びに、外因性インターロイキン２（ＩＬ－２）を実質的に含まない環境における前記操作されたＮＫ細胞の集団の持続レベルが、外因性ＩＬ－２を含む対照環境における比較できるようなＮＫ細胞の集団の対照持続レベルより少なくとも約５％大きい。

別の態様では、本開示は操作されたＮＫ細胞の集団を提供する、ここで：該集団における操作されたＮＫ細胞は異種分泌ＩＬ－１５を含み；且つ、操作されたＮＫ細胞の集団が、異種分泌ＩＬ－１５を欠くＮＫ細胞の対照集団の内在性下流シグナル伝達タンパクの対照シグナル伝達レベルより少なくとも約０．１倍高いＩＬ－１５の内在性下流シグナル伝達タンパクのシグナル伝達レベルを示す。

別の態様では、本開示は操作されたＮＫ細胞の集団を提供する、ここで：操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つまたは複数のメンバーを含む少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを含む；並びに、少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを欠くＮＫ細胞の対照集団と比較して、前記操作されたＮＫ細胞の集団は、免疫拒絶に対する増強された抵抗性を示す。

別の態様では、本開示は操作されたＮＫ細胞の集団を提供する、ここで：操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを含む；操作されたＮＫ細胞の集団が、１つ以上の複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを欠
くＮＫ細胞の対照集団と比較して、少なくとも約５％増強される免疫拒絶に対する抵抗力を示す。

別の態様では、本開示は操作されたＮＫ細胞の集団を提供する、ここで：操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞は、ＰＴＰＮ２ではない少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；並びに、操作されたＮＫ細胞集団の持続レベルは、（ｉ）および／または（ｉｉ）を欠くＮＫ細胞の対照集団の対照持続レベルよりも高い。

別の態様では、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団を含む組成物を提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団を生成する方法を提供する。一部の実施形態において、該操作されたＮＫ細胞の集団は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣｓ）から生成されるものである。

別の態様では、本開示はそれを必要としている対象を治療する方法を提供する、当該方法は、該対象に本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団を投与することを含む。

本開示の更なる態様および利点は、当業者には、本開示の例示的な実施形態のみが示され記載される以下の詳細の説明から、容易に明らかになるであろう。理解されるであろう通り、本開示には他のおよび異なる実施形態の余地があり、そのいくつかの詳細には、全て本開示から逸脱することなく、種々の自明の点で変更の余地がある。従って、図面および明細書は、制限的なものではなく本質的に例示的なものと見なされるべきである。

参照による組込み
本明細書において言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、参照によって、個々の刊行物、特許、または特許出願の各々が参照により援用される旨を具体的且つ個別に示されたのと同程度に、ここに援用される。参照により援用される刊行物および特許または特許出願が本明細書に含まれる開示に矛盾する限りにおいて、本明細書は、任意のそのような矛盾する材料に取って代わるおよび／または優先することが意図されている。

本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に特に記載される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を記載した以下の詳細な説明と、添付の図面（本明細書においては「図面（ｆｉｇｕｒｅ）」および「図（ＦＩＧ．）」ともいう）とを参照することによって得られるであろう。
ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； ＣＤ１６シグナルを強化するためのＣＤ１６バリアントを含んでなる操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す； 操作されたＮＫ細胞ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体を含む、操作されたＮＫ細胞を示す；および 異種ヒトＩＬ－１５を含む、操作されたＴ細胞を示す。 異種ヒトＩＬ－１５を含む、操作されたＴ細胞を示す。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，およびＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｈｎＣＤ１６－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図４Ａ）全分化した細胞におけるＣＤ５６^＋細胞のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，およびＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｈｎＣＤ１６－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図４Ｂ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫＧ２Ａ^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，およびＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｈｎＣＤ１６－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図４Ｃ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ３０^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，およびＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｈｎＣＤ１６－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図４Ｄ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ４４^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，およびＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｈｎＣＤ１６－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図４Ｅ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ４６^＋細胞のパーセント。 ＰＥ（フィコエリトリン）結合の抗ＣＤ１６抗体を用いたＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞ソーティング）で検出したｈｎＣＤ１６（ＣＤ１６シグナルが増強されたバリアントである）ＮＫ－９２細胞におけるＣＤ１６の過剰発現を示す。 ＡＰＣ（アロフィコシアニン）結合抗ＩＬ－１５抗体を用いたＦＡＣＳにより検出された、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ融合－１ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫ細胞におけるＩＬ－１５の表面発現を示す。ＰＷ１５、ＰＷ１８、ＰＷ２３は膜結合型ＩＬ－１５を発現しているクローンである。 ｍｂＩＬ－１５発現ｉＰＳＣクローン（ＫＢ－１５）から分化したｅＮＫ細胞をＩＬ－２添加または無添加で培養した際のインビトロ増殖曲線を示す。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，および ＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｍｂＩＬ－１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図８Ａ）全分化した細胞におけるＣＤ５６^＋細胞のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，および ＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｍｂＩＬ－１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図８Ｂ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫＧ２Ａ^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，および ＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｍｂＩＬ－１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図８Ｃ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ３０^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，および ＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｍｂＩＬ－１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図８Ｄ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ４４^＋のパーセント。 ＣＤ５６^＋、ＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋，および ＮＫｐ４６^＋のＷＴ ｉＮＫと異なるｍｂＩＬ－１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの間での発現を示す。（図８Ｅ）ＣＤ５６^＋集団におけるＮＫｐ４６^＋細胞のパーセント。 操作されたｍｂＩＬ－１５ ｅＮＫ細胞の注射後８、１５、２２日でのＮａｌｍ－６異種移植モデルを有するＮＣＧマウスの末梢血におけるＮＫ細胞濃度を示す。（図９Ａ）ＣＤ５６－ＡＰＣ抗体を用いたＦＡＣＳにより検出されたＮＫ細胞。 操作されたｍｂＩＬ－１５ ｅＮＫ細胞の注射後８、１５、２２日でのＮａｌｍ－６異種移植モデルを有するＮＣＧマウスの末梢血におけるＮＫ細胞濃度を示す。（図９Ｂ）図９Ａを定量化したもの。ＱＮ－０１９は、ａＣＤ１９ ＣＡＲ ＋ｈｎＣＤ１６ ＋膜結合型ＩＬ－１５を発現しているｅＮＫを示す。ＱＮ－００１は、ＷＴ ｅＮＫを示す。 分泌型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣクローンから分化したＮＫ細胞の特性を示す。（図１０Ａ）ＷＴ ｉＮＫと異なるｓＩＬ１５－ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫとの全分化した細胞におけるＣＤ５６^＋細胞のパーセント。 分泌型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣクローンから分化したＮＫ細胞の特性を示す。（図１０Ｂ）分泌型ＩＬ－１５（ＫＡ０８）を発現するｉＰＳＣクローンから分化したＷＴ ｉＮＫ細胞およびｉＮＫ細胞の培養液中のＩＬ－１５の濃度。 分泌型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣクローンから分化したＮＫ細胞の特性を示す。（図１０Ｃ）外因性サイトカイン非存在下における、ＷＴ ｅＮＫ細胞および分泌型ＩＬ－１５発現ｉＰＳＣクローン（ＯＱ－２０）から分化したｅＮＫ細胞のインビトロ増殖曲線。 ｉＰＳ細胞の編集・分化による低免疫性のテストスキームを説明する。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ａは、ｅｄｉｔ－１クローン（Ｂ２Ｍを標的とする予め混合したリボ核タンパク質［ＲＮＰ］でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｂは、ｅｄｉｔ－１クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｃは、ｅｄｉｔ－２クローン（ＣＩＩＴＡを標的とするＲＮＰでエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のサンガーシークエンシングを説明する図である。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｄは、ｅｄｉｔ－３クローン（Ｂ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰでエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｅは、ｅｄｉｔ－３クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｆは、ｅｄｉｔ－４クローン（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｇは、ｅｄｉｔ－４クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｈは、ｅｄｉｔ－５クローン（ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１およびＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す図である。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｉは、ｅｄｉｔ－５クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｊは、ｅｄｉｔ－６クローン（ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｋは、ｅｄｉｔ－６クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｌは、ｅｄｉｔ－７クローン（ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＣＬ－２１、ＣＤ５５およびＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物で電気穿孔したｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｍは、ｅｄｉｔ－７クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｎは、ｅｄｉｔ－８クローン（ＣＤ４７およびＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｏは、ｅｄｉｔ－８クローンのサンガーシークエンシングを示す。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｐは、ｅｄｉｔ－９クローン（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションしたｈｉＰＳＣ）のＦＡＣＳ解析を示す図である。 確認したｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンまでの確立を示す。図１２Ｑは、ｅｄｉｔ－９クローンのサンガーシークエンシングを示す。ｅｄｉｔ－１からｅｄｉｔ－９までの遺伝子編集は、図１８に要約される。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ａ）異なる編集ｉＰＳＣクローンをヒト補体と共培養した場合の細胞溶解。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｂ）異なる編集ｉＰＳＣクローンを臍帯血由来ナチュラルキラー（ＣＢＮＫ）と共培養した場合の細胞溶解。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｃ）対応する編集済みｉＰＳＣから分化した異なるｉＮＫの増殖ＣＤ５６^＋細胞の細胞数である。括弧内はｉＰＳＣのクローン番号である。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｄ）対応する編集済みｉＰＳＣから分化した異なるｉＮＫのうち、ＣＤ５６^＋のパーセントを示す。括弧内はｉＰＳＣのクローン番号である。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｅ）対応する編集済みｉＰＳＣから分化した異なるｉＮＫのうち、ＮＫＧ２Ａ^＋のパーセント。括弧内はｉＰＳＣのクローン番号である。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｆ）１つの時点での対応するｅＮＫと共培養した場合のＫ５６２細胞のＮＫ細胞による溶解。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｇ）６日間にわたり対応するｅＮＫと共培養した場合のＫ５６２細胞のＮＫ細胞による溶解。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｈ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー１からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と共培養した場合の増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｉ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー２のＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｊ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー３からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｋ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー４からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｌ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー５からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｍ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー６からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｎ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー１からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｏ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー２からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｐ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー３からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｑ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー４からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｒ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー５からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 ｅｄｉｔ－１クローンからｅｄｉｔ－９クローンの機能特性を示す。（図１３Ｓ）異なる編集を有するｉＮＫをドナー６からのＰＢＭＣと共培養した場合の増殖ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセント。 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１４Ａ）低サイトカインまたは高サイトカインで培養した場合のＮＫ持続性関連遺伝子のインビトロスクリーニングの方法設計。 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１４Ｂ）低サイトカインまたは高サイトカインで培養した場合のＦＣＥＲ１Ｇ欠損編集においてのインデル（ｉｎｄｅｌ）のパーセント。 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１４Ｃ）低サイトカインまたは高サイトカインで培養した場合のＰＴＰＮ２欠損編集においてのインデルのパーセント。 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ａ）ＮＫ持続性関連遺伝子をインビトロ培養とインビボ生長の比較でスクリーニングする方法設計。 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｂ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス肝臓のＳＴＡＴ３欠損編集においてのインデルの割合 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｃ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス脾臓のＳＴＡＴ３欠損編集においてのインデルの割合 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｄ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス骨髄（ＢＭ）のＳＴＡＴ３欠損編集においてのインデルの割合 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｅ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス肝臓のＰＴＰＮ２欠損編集においてのインデルの割合 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｆ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス脾臓のＰＴＰＮ２欠損編集においてのインデルの割合 操作されたＮＫ細胞の持続性についてのスクリーニングを示す。（図１５Ｇ）高サイトカインで培養した場合と比較して、マウス骨髄（ＢＭ）のＰＴＰＮ２欠損編集においてのインデルの割合。 ＣＤ３３－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１６Ａ）ＣＤ３３ ＣＡＲ構造設計の概略図。ＴＭは膜貫通ドメイン、ＳＣＦＶは一本鎖可変フラグメントを意味する。 ＣＤ３３－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１６Ｂ）ＣＤ３３－ＣＡＲ ＮＫ９２細胞のＫＧ１細胞に対する標的化細胞傷害性。 ＢＣＭＡ－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１７Ａ）ＢＣＭＡ ＣＡＲ構造設計の概略図。ＴＭは膜貫通ドメインを意味し、ＳＣＦＶは単鎖可変フラグメントを意味する。 ＢＣＭＡ－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１７Ｂ）ＢＣＭＡ－ＣＡＲ ＮＫ９２細胞のＲＰＭＩ８８２６細胞に対する標的化細胞傷害性。 ＢＣＭＡ－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１７Ｃ）ＢＣＭＡ－ＣＡＲ ＮＫ９２細胞およびＷＴ ＮＫ９２細胞におけるＣＤ１０７ａの発現パーセント。 ＢＣＭＡ－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の特性を示す。（図１７Ｄ）ＢＣＭＡ－ＣＡＲ ＮＫ９２細胞およびＷＴ ＮＫ９２細胞におけるＩＦＮ－γの発現パーセント。 ｅｄｉｔ－１からｅｄｉｔ－９までの遺伝子編集を要約する図である。 図１９Ａは、ＣＤ１９に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含む、異なるキメラ受容体ポリペプチド構築物（例えば、異なるキメラ抗原受容体構築物）を示す。 図１９Ｂは、図１９Ａに示す異なるキメラ受容体ポリペプチドの１つを含むＮＫ細胞の、ＣＤ１９を提示する標的細胞に対する標的化細胞傷害性を示す。 図１９Ｃは、図１９Ａに示す異なるキメラ受容体ポリペプチドの１つを含むＮＫ細胞の、ＣＤ１９を提示する標的細胞に対する標的化細胞傷害性を示す。

本明細書において本発明の様々な実施形態を示し、説明したが、当業者であれば、斯かる実施形態が単なる一例として提示されていることが明らかであろう。当業者は、本発明から逸脱せずに、多数の改変、変化および置換を想定することができる。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替物を使用できることを理解されたい。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容および文脈が、明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含む。例えば、用語「キメラ膜貫通型受容体（ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」は、複数のキメラ膜貫通型受容体を含む。

「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって決定される特定の値についての許容可能な誤差の範囲内を意味し、これは、値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、当該技術分野における慣行に従い、１以内または１を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に、生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。特定の値が本出願および特許請求の範囲において記載される場合、別段の記載がない限り、特定の値についての許容可能な誤差の範囲内を意味する「約」という用語を想定すべきである。

代替（例えば、「または」）の使用は、代替のいずれか一方、両方、またはそれらの組合せを意味すると理解されるべきである。「および／または」という用語は、選択肢の一方または両方を意味すると理解されるべきである。

本明細書で使用される場合、「細胞」は、一般に、生体細胞を指す。細胞は、生命体の基本的な構造、機能および／または生物学的単位であり得る。細胞は、１つまたは複数の細胞を有するあらゆる生物が起源であり得る。一部の非限定的な例としては、原核細胞、真核細胞、細菌細胞、古細菌細胞、単細胞の真核生物の細胞、原生動物細胞、植物由来の細胞（例えば、植物作物、果物、野菜、穀物、大豆、トウモロコシ（ｃｏｒｎ）、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、小麦、種子、トマト、コメ、キャッサバ、サトウキビ、カボチャ、干し草、ジャガイモ、ワタ、大麻、タバコ、顕花植物、針葉樹、裸子植物、シダ、ヒカゲノカズラ類、ツノゴケ類、苔類、蘚類）、藻類の細胞（例えば、Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ ｂｒａｕｎｉｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｔｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈなど）、海藻（例えば、ケルプ）、真菌細胞（例えば、酵母細胞、キノコ由来の細胞）、動物細胞、無脊椎動物由来の細胞（例えば、ショウジョウバエ、刺胞動物、棘皮動物、線形動物など）、脊椎動物由来の細胞（例えば、魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物）、哺乳動物（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）由来の細胞などが挙げられる。細胞は、天然の生物が起源でない場合がある（例えば、細胞は、合成的に作製され得、人工細胞と称される場合がある）。

本明細書で互換的に使用される用語「再プログラミング」、「脱分化」、「分化能増加」、または「発生能増加」は、一般に、細胞の分化能を増強する方法または細胞を脱分化して、より分化していない状態にする方法を意味する。例えば、分化能が増加された細胞は、再プログラミングされていない状態の同じ細胞と比較して、より大きな発生可塑性を有する（すなわち、より多くの細胞型に分化することができる）。言い換えれば、再プログラミングされた細胞は、再プログラミングされていない状態の同じ細胞よりも分化度が低い状態にあるものである。

「分化」という用語は、一般に、専門化されていない（「コミットしていない」）、あるいは比較的専門化されていない細胞が、例えば、免疫細胞などの専門化された細胞の特徴を獲得するプロセスを指す。分化した細胞や分化誘導した細胞は、細胞系内でより専門化された（「コミットした」）状況を示す細胞である。「コミットした」とは、一般に、通常の環境下では特定の細胞型または細胞型の小集合に分化し続ける分化経路の地点に進行しており、通常の環境下で異なる細胞型に分化し、またはより分化されていない細胞型に戻ることができない細胞を指す。

「多能性」という用語は、一般に、体または体細胞のすべての系統（すなわち、胚そのもの）を形成する細胞の能力を指す。例えば、胚性幹細胞は、外胚葉、中胚葉、内胚葉の３つの胚葉のそれぞれから細胞を形成できる多能性幹細胞の一種である。多能性は、完全な生物を生み出すことができない不完全または部分的に多能性の細胞（例えば、エピブラスト幹細胞）から、完全な生物（例えば、胚性幹細胞）を生み出すことができるより原始的でより多能性の細胞に及ぶ発生能の連続体である。

「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」という用語は、一般に、分化した細胞（例えば、分化した成人、新生児または胎児細胞）から誘導または変更させた（即ち、再プログラミングされた）幹細胞であって、３つのすべての胚葉または真皮層：中胚葉、内胚葉、および外胚葉のすべての組織に分化できる細胞になったことを指す。産生されたｉＰＳＣは、自然界に見られる細胞を指さない。場合によっては、ｉＰＳＣは、コミットした細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）に直接分化するように操作することができる。場合によっては、ｉＰＳＣはまず組織特異的幹細胞（例えば、造血幹細胞（ＨＳＣｓ））に分化するように操作することができ、その後、コミットした細胞（例えば、ＮＫ細胞）に分化するように誘導することができる。

「胚性幹細胞」という用語は、一般に、胚盤胞の内部細胞塊の天然に存在する多能性幹細胞を指す。胚性幹細胞は多能性であり、発生中に外胚葉、内胚葉および中胚葉の３つの主要な胚葉のすべての誘導体を生じさせる。場合によっては、ＥＳＣｓを直接コミットした細胞（例えば、ＮＫ細胞）に分化するように操作することもできる。場合によっては、ＥＳＣはまず組織特異的幹細胞（例えば、造血幹細胞）に分化するように操作することができ、それをさらに誘導してコミットした細胞（例えば、ＮＫ細胞）に分化させることができる。

「単離された幹細胞」という用語は、一般に、多細胞生物から単離された、本明細書に開示されるあらゆる種類の幹細胞（例えば、ＥＳＣ、ＨＳＣ、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）など）を指す。例えば、ＨＳＣは、ヒトなどの哺乳動物の体内から単離することができる。別の例では、胚性幹細胞は胚から単離することができる。

「単離された」という用語は、一般に、元の環境から単離された細胞または細胞の集団を指す。例えば、単離された細胞の新しい環境は、「単離されていない」参照細胞が存在する環境に見られるような少なくとも一つの成分を実質的に含まない。単離された細胞は、例えば組織や生検サンプルから単離されたように、その自然環境に存在する一部または全ての成分から除去された細胞であり得る。この用語はまた、例えば細胞培養や細胞懸濁液から単離されたような、細胞が自然界に存在しない環境で見出されるような、少なくとも一つ、一部または全ての構成要素から取り除かれた細胞も含む。従って、単離された細胞は、自然界に存在する、あるいは自然界に存在しない環境で増殖、保存、生存する際に、他の物質、細胞、細胞集団を含む少なくとも一つの構成要素から一部または完全に単離されたものである。

本明細書で互換的に使用される用語「造血幹細胞および前駆細胞」、「造血幹細胞」、「造血前駆細胞」、または「造血前駆細胞」は、一般に、造血系統にコミットしているが、更なる造血分化が可能であり、多分化能造血幹細胞（血球芽細胞）、骨髄系前駆細胞、巨核球前駆細胞、赤血球前駆細胞、およびリンパ系前駆細胞を含む細胞を指す。造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＣ）は、骨髄（単球およびマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球／血小板、樹状細胞）、およびリンパ系（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）を含むすべての血液細胞型を生じさせる多分化能幹細胞である。場合によっては、造血幹細胞はＣＤ３４＋造血細胞であり、成熟した骨髄系とＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞などのリンパ系細胞の両方を生み出すことができるものである。

「免疫細胞」という用語は、一般に分化した造血細胞を指す。免疫細胞の非限定的な例としては、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、単球、自然リンパ球、腫瘍浸潤リンパ球、マクロファージ、顆粒球などが挙げられる。

「ＮＫ細胞」または「ナチュラルキラー細胞」という用語は、一般に、ＣＤ５６またはＣＤ１６の発現およびＴ細胞受容体（ＣＤ３）の不在によって定義される末梢血リンパ球のサブセットを指す。場合によっては、ＮＫ細胞は表現型的にＣＤ３－およびＣＤ５６＋であり、ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の少なくとも１つ（例えば、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ５７、またはその両方が同程度または異なる程度に発現している）、および任意でＣＤ１６を発現するが、以下の１つ以上の発現を欠する：ＰＬＺＦ、ＳＹＫ、ＦｃｅＲγおよびＥＡＴ－２。場合によっては、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞の単離された亜集団は、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＣＲリガンド、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４６、活性化および阻害性ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａおよび／またはＤＮＡＭ－１の発現を示すしてもよい。

本明細書において使用される「ヌクレオチド」という用語は、一般に、塩基－糖－リン酸の組合せを指す。ヌクレオチドは合成ヌクレオチドを含むことができる。ヌクレオチドは合成ヌクレオチド類似体を含むことができる。ヌクレオチドは、核酸配列（例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ））の単量体単位であることができる。ヌクレオチドという用語は、リボヌクレオシド三リン酸である、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）、シトシン三リン酸（ＣＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）およびｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＩＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰなどのデオキシリボヌクレオシド三リン酸、またはそれらの誘導体を包含しうる。そのような誘導体としては、例えば［αＳ］ｄＡＴＰ、７－デアザ－ｄＧＴＰおよび７－デアザ－ｄＡＴＰ、ならびに当該誘導体を含有する核酸分子にヌクレアーゼ耐性を付与するヌクレオチド誘導体を挙げることができる。本明細書において使用されるヌクレオチドという用語は、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄｄＮＴＰ）およびそれらの誘導体を指しうる。ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸の具体例としては、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＩＴＰ、およびｄｄＴＴＰを挙げることができるが、それらに限定されるわけではない。ヌクレオチドは無標識であることも、周知の技法によって検出可能に標識されていることもできる。標識化は、量子ドットで実行することもできる。検出可能なラベルとしては、例えば放射性同位体、蛍光ラベル、化学発光ラベル、生物発光ラベルおよび酵素ラベルを挙げることができる。ヌクレオチドの蛍光ラベルとしては、フルオレセイン、５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、２’７’－ジメトキシ－４’５－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、ローダミン、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、４－（４’ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、シアニンおよび５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）を挙げることができるが、それらに限定されるわけではない。蛍光標識ヌクレオチドの具体例としては、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（カリフォルニア州フォスターシティ）から入手できる［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＵＴＰ、［Ｒ１１０］ｄＣＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＣＴＰ、［ＪＯＥ］ｄｄＡＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ＦＡＭ］ｄｄＣＴＰ、［Ｒ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、［ＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、［ｄＲ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ｄＲ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ｄＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、および［ｄＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ；Ａｍｅｒｓｈａｍ（イリノイ州アーリントンハイツ）から入手できるＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋデオキシヌクレオチド、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ
Ｃｙ５－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｆｌｕｏｒ Ｘ－ｄＣＴＰ、Ｆｌｕｏｒｏ
Ｌｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＵＴＰ、およびＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＵＴＰ；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ（インディアナ州インディアナポリス）から入手できるフルオレセイン－１５－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、テトラメチル－ローダミン－６－ｄＵＴＰ、ＩＲ７７０－９－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、およびフルオレセイン－１５－２’－ｄＡＴＰ；ならびにＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（オレゴン州ユージーン）から入手できる染色体標識ヌクレオチド（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｌａｂｅｌｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ｄＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ｄＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ４８８－５－ｄＵＴＰ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ－５－ＵＴＰ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ－５－ｄＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ｄＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ｄＵＴＰ、およびＴｅｘａｓ Ｒｅｄ－１２－ｄＵＴＰを挙げることができる。ヌクレオチドは化学修飾によって標識またはマークすることもできる。化学修飾された単独ヌクレオチドは、ビオチン－ｄＮＴＰであることができる。ビオチン化ｄＮＴＰのいくつかの非限定的例としては、ビオチン－ｄＡＴＰ（例えばｂｉｏ－Ｎ６－ｄｄＡＴＰ、ビオチン－１４－ｄＡＴＰ）、ビオチン－ｄＣＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＣＴＰ、ビオチン－１４－ｄＣＴＰ）、およびビオチン－ｄＵＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＵＴＰ、ビオチン－１６－ｄＵＴＰ、ビオチン－２０－ｄＵＴＰ）を挙げることができる。

「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」という用語は、任意の長さのポリマー型のヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのいずれか）またはその類似体（一本鎖型、二本鎖型、または複数本鎖型のいずれか）を指すために、可換的に使用される。ポリヌクレオチドは細胞にとって外因性または内在性であることができる。ポリヌクレオチドは無細胞環境に存在することができる。ポリヌクレオチドは遺伝子またはそのフラグメントであることができる。ポリヌクレオチドはＤＮＡであることができる。ポリヌクレオチドはＲＮＡであることができる。ポリヌクレオチドは任意の三次元構造を有することができ、公知または未知の任意の機能を果たすことができる。ポリヌクレオチドは、１つまたは複数の類似体（例えば改変された主鎖、糖、または核酸塩基）を含むことができる。ヌクレオチド構造への修飾が存在する場合、その修飾は、ポリマーの組み立ての前または後に加えることができる。類似体のいくつかの非限定的な例として、５－ブロモウラシル、ペプチド核酸、キセノ核酸、モルホリノ類（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｓ）、ロックト核酸、グリコール核酸、トレオース核酸、ジデオキシヌクレオチド、コルジセピン、７－デアザ－ＧＴＰ、発蛍光団（例えば糖に連結されたローダミンまたはフルオレセイン）、チオール含有ヌクレオチド、ビオチン連結ヌクレオチド、蛍光塩基類似体、ＣｐＧアイランド、メチル－７－グアノシン、メチル化ヌクレオチド、イノシン、チオウリジン、プソイドウリジン（ｐｓｅｕｄｏｕｒｄｉｎｅ）、ジヒドロウリジン、キューオシン、およびワイオシンが挙げられる。ポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子または遺伝子フラグメントのコーディング領域またはノンコーディング領域、連鎖解析から規定される１つまたは複数の座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）および無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、ならびにプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断されていてもよい。

本明細書において使用される「遺伝子」という用語は、ＲＮＡ転写産物のコーディングに関与する核酸（例えばゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡなどのＤＮＡ）および対応するそのヌクレオチド配列を指す。ゲノムＤＮＡに関して本明細書で使用されるこの用語は、介在領域、ノンコーディング領域、ならびに調節領域を包含し、５’端および３’端を含むことができる。いくつかの使用例において、この用語は、５’および３’非翻訳領域（５’－ＵＴＲおよび３’－ＵＴＲ）、エクソンおよびイントロンを含む転写配列を包含する。いくつかの遺伝子において、転写配列は、ポリペプチドをコードする「オープンリーディングフレーム」を含有するであろう。この用語のいくつかの使用例において、「遺伝子」は、ポリペプチドをコードするのに必要なコーディング配列（例えば「オープンリーディングフレーム」または「コーディング領域」）だけを含む。例えばリボソームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ）およびトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）遺伝子など、遺伝子がポリペプチドをコードしない場合もある。場合により、「遺伝子」という用語は、転写される配列だけなく、上流および下流の調節領域、エンハンサーおよびプロモーターなどといった、非転写領域も含む。遺伝子は、ある生物のゲノムにおいてそれ本来の場所にある「内在性遺伝子」またはネイティブ遺伝子を指すことができる。遺伝子は「外因性遺伝子」または非ネイティブ遺伝子を指すことができる。非ネイティブ遺伝子とは、宿主細胞中に通常は見いだされないが遺伝子移入によって宿主生物中に導入される遺伝子を指すことができる。非ネイティブ遺伝子は、ある生物のゲノムにおいてそれ本来の場所にない遺伝子を指すこともできる。非ネイティブ遺伝子は、突然変異、挿入および／または欠失（例えば非ネイティブ配列）を含む天然の核酸またはポリペプチド配列を指すこともできる。

「発現」という用語は、一般に、ポリヌクレオチドがＤＮＡ鋳型から（例えばｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ転写産物へ）転写される１つもしくは複数のプロセスおよび／または転写されたｍＲＮＡが続いてペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質へ翻訳されるプロセスをいう。転写産物およびコードされたポリペプチドは、集合的に「遺伝子産物」ということができる。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含むことができる。発現に関して「上方調節される」とは一般に、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡのようなＲＮＡ）および／またはポリペプチド配列の野生型状態におけるその発現レベルと比べた発現レベルの増加をいうが、「下方調節される」とは一般に、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡのようなＲＮＡ）および／またはポリペプチド配列の野生型状態におけるその発現と比べた発現レベルの減少をいう。トランスフェクトされた遺伝子の発現は、細胞内で一時的または安定的に起こりうる。「一過性発現」の間、トランスフェクトされた遺伝子は、細胞分裂中に娘細胞に移されない。その発現はトランスフェクトされた細胞に限定されているので、遺伝子の発現は経時的に失われる。対照的に、トランスフェクトされた遺伝子の安定した発現は、遺伝子がトランスフェクトされた細胞に選択優位性を与える別の遺伝子と同時トランスフェクトされた場合に起こりうる。そのような選択優位性は、細胞に提示されるある種の毒素に対する耐性でありうる

「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書では、ペプチド結合によって接合された少なくとも２アミノ酸残基のポリマーを指すために、可換的に使用される。この用語は、特別な長さのポリマーを意味せず、そのペプチドが組換え技法を使って生産されるか、化学的合成または酵素的合成を使って生産されるか、天然物であるかどうかを、含意もしくは区別することも意図されていない。この用語は、天然のアミノ酸ポリマーにも、少なくとも１つの修飾アミノ酸を含むアミノ酸ポリマーにも適用される。場合により、ポリマーは非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、完全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖、ならびに二次構造および／または三次構造（例えばドメイン）を持つまたは持たないタンパク質を包含する。この用語は、例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、酸化、お
よび他の任意の操作、例えば標識構成要素とのコンジュゲーションなどによって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。本明細書において使用される「アミノ酸」（ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄおよびａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ）という用語は、一般に、天然アミノ酸および非天然アミノ酸、例えば限定するわけではないが、修飾アミノ酸およびアミノ酸類似体を指す。修飾アミノ酸には、アミノ酸上に天然には存在しない基または化学モエティを含むように化学的に修飾された天然アミノ酸および非天然アミノ酸を含めることができる。アミノ酸類似体は、アミノ酸誘導体を指すことができる。「アミノ酸」という用語はＤ－アミノ酸とＬ－アミノ酸をどちらも包含する。

「誘導体」、「バリアント」および「フラグメント」という用語は、ポリペプチドに関して本明細書において使用される場合、例えばアミノ酸配列、構造（例えば二次構造および／または三次構造）、活性（例えば酵素活性）および／または機能のいずれかが野生型ポリペプチドと関連するポリペプチドを指す。ポリペプチドの誘導体、バリアントおよびフラグメントは、野生型ポリペプチドと比較して、１つまたは複数のアミノ酸変異（例えば突然変異、挿入、および欠失）、トラスケーション、改変、またはそれらの組合せを含むことができる。

ポリペプチド分子（例えば、タンパク質）についての本明細書で使用される「操作された」、「キメラ」、または「組換えた」という用語は、一般に、ポリペプチド分子をコードする核酸、およびポリペプチド分子を発現する細胞または生物への遺伝子操作技術の適用の結果として、異種アミノ酸配列または改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチド分子を指す。ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）についての本明細書で使用される用語「操作された」または「組換えた」は、一般に、遺伝子工学技術の適用の結果として異種核酸配列または改変された核酸配列を有するポリヌクレオチド分子を指す。遺伝子工学技術としては、ＰＣＲおよびＤＮＡクローニング技術；形質移入、形質転換、および他の遺伝子導入技術；相同組換え；部位特異的変異誘発；並びに遺伝子融合が挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、遺伝子編集部位によって、人工または組換えポリヌクレオチド（例えば、ゲノムＤＮＡ配列）を修飾または変更することができる。

「遺伝子編集部分」という用語は、一般に、核酸配列を編集することができる部位を指し、核酸配列を含む細胞に対して外因性であってもよく、内在性であってもよい。一部の実施形態において、遺伝子編集部位は、核酸配列を編集することによって遺伝子の発現を制御する。いくつかの実施態様において、遺伝子編集部分は、ゲノムＤＮＡ配列を編集することによって遺伝子の発現を調節することができる。場合によっては、遺伝子編集部分は、ｍＲＮＡ鋳型を編集することによって遺伝子の発現を調節することができる。核酸配列の編集は、場合によっては、遺伝子発現のための基礎となる鋳型を変化させることができる。

代替的に、もしくはさらに、遺伝子編集部分は、遺伝子（または遺伝子内の標的配列）に作動可能に結合した標的配列に特異的に結合することによって遺伝子の発現または活性を調節し、染色体ＤＮＡまたはｃＤＮＡなどのＤＮＡからのｍＲＮＡの産生を制御することができる。場合によっては、遺伝子編集部分は、特定のＤＮＡ配列に結合する少なくとも１つの転写因子をリクルートするか、またはそれを含むことができ、それによってＤＮＡからｍＲＮＡへの遺伝情報の転写速度を制御する。遺伝子編集部分は、それ自体がＤＮＡに結合し、例えば、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の関連タンパク質のようなタンパク質がＤＮＡ鋳型上に集合するのを妨げるなど、物理的妨害によって転写を制御することができる。遺伝子編集部分は、例えばｍＲＮＡ鋳型からのタンパク質の産生を調節することにより、翻訳レベルで遺伝子の発現を調節することができる。場合によっては、遺伝子編集部位はｍＲＮＡ転写物の安定性に影響を与えることによって遺伝子発現を調節することが
できる。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン様の機能を持つタンパク質性結合分子を指す。抗体という用語は、抗体（例えばモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体）、ならびにその誘導体、バリアント、およびフラグメントを包含する。抗体としては、異なるクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）およびサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）の免疫グロブリン（Ｉｇ）が挙げられるが、それらに限定されるわけではない。その誘導体、バリアントまたはフラグメントとは、対応する抗体の（例えば完全なおよび／または部分的な）結合特性を保っている機能的な誘導体またはフラグメントを指しうる。抗原結合性フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、可変フラグメント（Ｆｖ）、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、および単一ドメイン抗体（「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」または「キャメリド（ｃａｍｅｌｉｄ）」）がある。抗体という用語は、最適化された、または工学的に操作された、または化学的にコンジュゲートされた、抗体および抗体の抗原結合性フラグメントを包含する。最適化された抗体の例として、親和性成熟抗体が挙げられる。工学的に操作された抗体の例として、Ｆｃ最適化抗体（例えばＦｃ（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）領域が最適化された抗体）および多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）が挙げられる。

「キメラポリペプチド受容体」という用語は、一般に、１つ以上の抗原結合部位を含む非天然型ポリペプチド受容体を指し、各抗原結合性部分は特定の抗原に結合することができる。キメラポリペプチド受容体は、単特異性（すなわち、一種類の特異的抗原に結合可能）であってもよい。あるいは、キメラポリペプチド受容体は、多特異性（すなわち、２つ以上の異なるタイプの特異的抗原に結合可能）であってもよい。キメラポリペプチド受容体は、一価（すなわち、単一の抗原結合性部分を含む）であってもよい。あるいは、キメラポリペプチド受容体は多価（すなわち、複数の抗原結合性部分を含む）であってもよい。場合によっては、キメラポリペプチド受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）含んでいてもよい。

「抗原結合ドメイン」という用語は一般に、特定の標的抗原に優先的に結合する構築物を指す。抗原結合ドメインは、抗体、その機能的バリアント（例えば、設計されたアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ））、その改変体、そのフラグメント、またはそれらの組み合わせなどのポリペプチド構築物であり得る。抗原結合ドメインは、本明細書に開示される抗体、またはその機能的バリアントであってもよい。抗原結合ドメインの非限定的な例としては、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダＩｇ、サメ重鎖オンリー抗体（ＶＮＡＲ）、Ｉｇ ＮＡＲ、キメラ抗体、組換え抗体、またはそれらの抗体フラグメントが挙げられる。抗体フラグメントの非限定的な例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ’）_３、Ｆｖ、単鎖抗原結合フラグメント（ｓｃＦｖ）、（ｓｃＦｖ）_２、ジスルフィド安定化Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、シングルドメイン抗原結合フラグメント（ｓｄＡｂ、ナノボディ）、組換え重鎖のみで構成される抗体（ＶＨＨ）、および抗体全体の結合特異性を維持するその他の抗体フラグメントが挙げられる。

「設計されたアンキリンリピートタンパク質」または「ＤＡＲＰｉｎ」という用語は、一般に、１つ以上のアンキリンリピートドメインを含む合成ポリペプチドを指し、ここで、１つ以上のアンキリンリピートドメインは、１つ以上の抗原に結合することができる。本明細書に記載のアンキリンリピートドメインは、一般に、少なくとも１つのアンキリンリピートモチーフを含んでなる。いくつかの例では、アンキリンリピートモチーフは、２つの反平行α－ヘリックスと、それに続いて次のリピートに接続するβ－バルジとβ－ヘアピンを含むループを含み、それぞれ約３３残基を有する。設計されたアンキリンリピー
トモチーフからなる組換えタンパク質またはその結合ドメインは、ＤＡＲＰｉｎタンパク質またはＤＡＲＰｉｎポリペプチドとも称される。

場合によっては、本明細書に記載のアンキリンリピートドメインは、（ｉ）構造を提供するコア骨格と、（ｉｉ）標的（例えば、標的抗原）に結合する標的結合残基を含んでいてもよい。構造コアには保存されたアミノ酸残基が含まれ、標的結合表面には標的に応じて異なるアミノ酸残基が含まれる。別の例では、アンキリンリピートモチーフは以下の配列を含んでいてもよい：ＤｘｘＧｘＴＰＬＨＬＡｘｘｘＧｘｘｘＶｘＬＬｘｘＧＡＤＶＮＡｘ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ここで「ｘ」は任意のアミノ酸を示す。別の例では、アンキリンリピートモチーフは、以下の配列含んでいてもよい：ＤｘｘＧｘＴＰＬＨＬＡｘｘｘＧｘｘｘ｜ＶｘＶＬＬｘｘＧＡＤＶＮＡｘ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ここで「ｘ」は任意のアミノ酸を示す。

場合によっては、複数のアンキリンリピートドメインを（共有結合または非共有結合のいずれかを介して）連結して、二重特異性分子または多重特異性分子（例えば、二重特異性または多重特異性キメラポリペプチド受容体）を形成することができる。

ＤＡＲＰｉｎ構築物の例と詳細は、例えば特許文献１に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

「セーフティスイッチ」という用語は、一般に、細胞療法の可能性のある毒性またはそうでなければ副作用を妨げるよう設計された操作されたポリペプチド構築物を指す。細胞内で発現されると、セーフティスイッチは宿主細胞の死を誘導することができ、それによって宿主（例えば、対象の体内）における細胞の活性を不活性化することができる。従って、セーフティスイッチは自殺部分となりうる。場合によっては、細胞はそのライフサイクルのある段階で自殺部位を発現するようにプログラムすることができる（例えば、時間プログラム）。場合によっては、細胞における自殺部位の発現は条件付きまたは誘導可能である。いくつかの例において、自殺部位の条件付き調節（例えば、発現）には、低分子を介した翻訳後活性化および組織特異的および／または時間的転写調節による制御が含まれ得る。従って、セーフティスイッチは誘導可能な自殺部位であり得る。セーフティスイッチは、アポトーシスの誘導、タンパク質合成の阻害、ＤＮＡ複製の阻害、成長停止、転写および転写後の遺伝子制御、および／または抗体媒介性枯渇を媒介することができる。場合によっては、活性化されると細胞のアポトーシスおよび／または細胞死（本明細書に開示されているように、例えば、操作されたＮＫ細胞）を誘発する外因性分子（例えば、薬物またはプロドラッグ）によって、セーフティスイッチを活性化することができる。

「免疫調節ポリペプチド」という用語は、一般に、ＮＫ細胞などの免疫細胞の１つ以上の属性を調節または制御することができるポリペプチド構築物（例えば、タンパク質、抗体、膜結合型ポリペプチド、分泌型ポリペプチド、切断型ポリペプチド、非切断型ポリペプチドなど）を指す。免疫細胞の１つ以上の属性は、免疫細胞の分化、免疫細胞の形態、免疫細胞内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド構築物の発現、または免疫細胞の活性（例えば、がん細胞などの疾患細胞に対する操作されたＮＫ細胞の細胞傷害活性）を含み得る。免疫調節ポリペプチドは宿主細胞に対して内在性であり得る。代替的または追加的に、免疫調節ポリペプチドはホット細胞に対して異種であることができる。場合によっては、免疫細胞の１つ以上の属性を制御することは、免疫調節ポリペプチドの発現を下方調節すること（例えば、抑制、ノックダウンまたはノックアウト）によって媒介され得る。代替的または追加的に、免疫細胞の１つ以上の属性を制御することは、免疫調節ポリペプチドの発現を上方調節すること（例えば、内在性遺伝子の上方調節または免疫調節ポリペプチドをコードする異種遺伝子のノックイン）によって媒介され得る。さらに別の代替的または追加的に、免疫細胞の１つ以上の属性を制御することは、宿主細胞における免疫調
節ポリペプチドの自然または正常な発現プロフィールよりも長い期間、免疫調節ポリペプチドの発現を維持することによって媒介され得る。場合によっては、免疫調節ポリペプチドは低免疫性調節因子を含むことができる。場合によっては、免疫調節ポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤を含むことができる。

「低免疫性調節因子」という用語は、一般に細胞内のポリペプチド構築物を指す、ここで、細胞内での低免疫性調節因子の増強された発現（例えば、異種遺伝子のノックインによる）または低下した発現（例えば、内在性遺伝子のノックアウトまたはノックダウンによる）のいずれかが、宿主の体内に投与する後、宿主の体からの免疫反応（例えば、適応免疫拒絶反応などの免疫攻撃）を軽減または回避することができる。場合によっては、細胞（例えば、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞）は、低免疫性調節因子の増強された発現または低下した発現のいずれかを示すように改変されることができ、このような細胞は、宿主（すなわち、レシピエント）への２回目以降の注入時に宿主の免疫攻撃を回避することができる。このように、細胞は、（ｉ）宿主の免疫系（例えば、抗体媒介補体細胞傷害性、または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ））によって拒絶されない、および／または（ｉｉ）低免疫性調節因子の増強された発現または低下した発現がない対照細胞と比較して、より遅い速度で宿主の免疫系によって拒絶される。低免疫性調節因子の増強された発現または低下した発現を示す細胞は、「低免疫性」を示す、または「免疫特権的」であると称することができる。例えば、本明細書に開示される操作された免疫細胞の集団（例えば、操作されたＮＫ細胞の集団）の増強された低免疫性（例えば、ＡＤＣＣに対する増強された抵抗性）は、インビトロ（例えば、ヒト血清またはヒト補体および抗体（例えば、ＳＳＥＡ－４抗体）の存在下で）またはインビボ（例えば、対象の血流への投与後）で確認することができる。

場合によっては、本明細書に開示される免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）の操作は、免疫拒絶反応（例えば、ＡＤＣＣ）に対する免疫細胞の抵抗性を少なくともまたは最大で約５％、少なくともまたは最大で約１０％、少なくともまたは最大で約１５％、少なくともまたは最大で約２０％、少なくともまたは最大で約２５％、少なくともまたは最大で約３０％、少なくともまたは最大で約４０％、少なくともまたは最大で約５０％、少なくともまたは最大で約６０％、少なくともまたは最大で約７０％、少なくともまたは最大で約８０％、少なくともまたは最大で約８５％、少なくともまたは最大で約９０％、少なくともまたは最大で約９５％、少なくともまたは最大で約１００％、少なくともまたは最大で約１５０％、少なくともまたは最大で約２００％、少なくともまたは最大で約３００％、少なくともまたは最大で約４００％、あるいは少なくともまたは最大で約５００％増強することができる。

場合によっては、免疫拒絶（例えば、ＡＤＣＣ）に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくともまたは最大で約５％、少なくともまたは最大で約１０％、少なくともまたは最大で約１５％、少なくともまたは最大で約２０％、少なくともまたは最大で約２５％、少なくともまたは最大で約３０％、少なくともまたは最大で約４０％、少なくともまたは最大で約５０％、少なくともまたは最大で約６０％、少なくともまたは最大で約７０％、あるいは少なくともまたは最大で約８０％までのヒト補体を含む培地で確認することができる。

「免疫チェックポイント阻害剤」という用語は、一般に、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、骨髄系細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞など）の細胞表面に提示される分子群であって、がん細胞などの標的細胞に対する免疫細胞の免疫応答（すなわち、抗がん免疫応答または抗腫瘍免疫応答）を下方調節または阻害することにより、細胞の免疫応答を調節することができる分子群を指す。標的細胞は、免疫細胞の表面に提示された免疫チェックポイント阻害剤の受容体またはリガンドを発現することができ、免疫チェックポイント阻害剤と結合し、標
的細胞に対する免疫細胞の免疫応答を下方調節または阻害する。このように、免疫細胞における免疫チェックポイント阻害剤の発現を下方調節または阻害することで、場合によっては、標的細胞に対する免疫細胞の免疫応答を増強または延長することができる。

「免疫応答」という用語は、一般に、ある物体（例えば、異物）に対する宿主の免疫系からのＴ細胞介在性および／またはＢ細胞介在性の免疫応答を指す。免疫応答の例としては、Ｔ細胞応答、例えばサイトカイン産生、細胞傷害性などが挙げられる。場合によっては、免疫応答が、Ｔ細胞の活性化（例えば、抗体産生（体液性応答））や、マクロファージなどのサイトカイン応答細胞の活性化によって、間接的にもたらされることができる。

「増強された発現」、「増加された発現」または「上方調節された発現」という用語は、一般に、目的の部分（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）の宿主株（例えば、宿主細胞）における該目的の部分の正常な発現レベルよりも高いレベルでの産生を指す。前記正常な発現レベルは、実質的にゼロ（またはなし）またはゼロより高くあり得る。目的の部分は、宿主株の内在性遺伝子またはポリペプチド構築物を含み得る。目的の部分は、宿主株にまたは宿主株中に導入される異種遺伝子またはポリペプチド構築物を含み得る。例えば、目的のポリペプチドをコードする異種遺伝子は、宿主株における目的のポリペプチドの増強された発現のために、宿主株のゲノムにノックイン（ＫＩ）され得る。

「増強された活性」、「増加された活性」または「上方調節された活性」という用語は、一般に、目的の部分（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）の、宿主株（例えば、宿主細胞）における該目的の部分の正常な活性レベルよりも高いレベルに改変される活性を指す。前記正常な活性レベルは、実質的にゼロ（またはなし）またはゼロより高くあり得る。目的の部分は、宿主株のポリペプチド構築物を含み得る。目的の部分は、宿主株にまたは宿主株中に導入される異種ポリペプチド構築物を含み得る。例えば、目的のポリペプチドをコードする異種遺伝子は、宿主株における目的のポリペプチドの増強された活性のために、宿主株のゲノムにノックイン（ＫＩ）され得る。

「低下した発現」、「減少した発現」または「下方調節された発現」という用語は、一般に、目的の部分（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）の宿主株（例えば、宿主細胞）における該目的の部分の正常な発現レベルよりも低いレベルでの産生を指す。前記正常な発現レベルは、ゼロより高い。目的の部分は、宿主株の内在性遺伝子またはポリペプチド構築物を含み得る。場合によっては、宿主株において、目的の部分がノックアウトまたはノックダウンされることができる。いくつかの例において、目的の部分の発現の減少は、宿主株におけるそのような発現の完全な阻害を含み得る。

「低下した活性」、「減少した活性」または「下方調節された活性」という用語は、一般に、目的の部分（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）の宿主株（例えば、宿主細胞）における該目的の部分の正常な活性レベルよりもレベルに改変される活性を指す。前記正常な活性レベルは、ゼロより高い。目的の部分は、宿主株の内在性遺伝子またはポリペプチド構築物を含み得る。場合によっては、宿主株において、目的の部分がノックアウトまたはノックダウンされることができる。いくつかの例において、目的の部分の活性の減少は、宿主株におけるそのような活性の完全な阻害を含み得る。

「対象」、「個体」、および「患者」という用語は、脊椎動物、好ましくはヒトなどの哺乳動物を指すために、本明細書では可換的に使用される。哺乳動物としては、マウス、サル、ヒト、農用動物、スポーツ動物、およびペットが挙げられるが、それらに限定されるわけではない。インビボでまたはインビトロ培養で得られる生物学的実体の組織、細胞およびそれらの子孫も、包含される。

本明細書において使用される「処置」および「処置する」という用語は、限定するわけではないが治療上の利益および／または予防上の利益を含む有益な結果または望ましい結果を得るためのアプローチを指す。例えば処置は、本明細書に開示するシステムまたは細胞集団を投与する工程を含むことができる。治療上の利益とは、処置を受けている１つまたは複数の疾患、状態、もしくは症状における、またはそれらに対する、治療に関連する改善、または治療に関連する効果を意味する。予防上の利益のためには、特定の疾患、状態、または症状を発症するリスクがある対象に、または疾患の生理学的症状のうちの１つもしくは複数を訴える対象に、たとえそれら疾患、状態、または症状がまだ発現していなくても、組成物を投与することができる。

「有効量」または「治療有効量」という用語は、組成物、例えば本開示のシステムを含むリンパ球（例えばＴリンパ球および／またはＮＫ細胞）などの免疫細胞を含む組成物の、それを必要とする対象に投与したときに所望の活性をもたらすのに十分な量を指す。本開示に関して、「治療的に有効」という用語は、本開示の方法によって処置される障害の症状発現を遅延させ、その進行を停止させ、少なくとも１つのその症状を軽減または緩和するのに十分な組成物の量を指す。

Ａ． 概要

Ｔ細胞は適応免疫系の一部であり、外来細胞表面の免疫タンパク質（すなわち抗原）を認識することによって、特定の脅威を認識するようにプライミングすることができる。これとは対照的に、ＮＫ細胞は自然免疫反応の一部であり、「非自己」とみなす幅広い対象に対して反応することができる。一般に、Ｔ細胞とは異なり、ＮＫ細胞は感作（すなわち抗原特異的プライミング）なしに標的細胞を攻撃し、異物を排除することができる。

対象に由来する（例えば、対象のＨＳＣに由来する）未改変のＮＫ細胞は、生体外で培養し、増殖した後、対象の標的細胞（例えば、がん細胞）を攻撃する治療として、対象に投与することができる。しかし、ＮＫ細胞の半減期が短く、生体外あるいは生体内でのＮＫ細胞の増殖が悪いため、ＮＫ細胞に基づいた治療は限界がある。また、未改変のＮＫ細胞は、骨髄腫や固形癌のような治療が難しい癌を標的とする場合には効力がないことがある。さらに、血液由来幹細胞（例えば、ＨＳＣ）に基づくＮＫ細胞の生体外産生では、効果的な養子免疫療法のためのＮＫ細胞の供給量に限界がある。

従って、例えば、増殖、半減期および標的細胞に対する細胞傷害活性の向上などを示すように、ＮＫ細胞の調達、操作に対する、大きなアンメット・ニーズが残っている。

Ｂ． 操作された免疫細胞

本開示は免疫療法のためのシステムおよび方法について述べている。免疫細胞は、対照細胞（例えば、非遺伝子組換え免疫細胞）と比較して、延長された半減期を示すように操作することができる。免疫細胞は、対照細胞と比較して、増強された増殖を示すように操作することができる。免疫細胞は、対照細胞には標的化することが不十分か不可能な疾患細胞（例えば、がん細胞）に対して効果的かつ特異的に標的化できるように操作することができる。本明細書に開示される操作された免疫細胞は、エクスビボ、インビトロ、場合によってはインビボで操作されることができる。エクスビボまたはインビトロで調製された、操作された免疫細胞は、疾患（例えば、骨髄腫または固形腫瘍）を治療するためにそれを必要としている対象に投与することができる。対象に対して、操作された免疫細胞は自己由来であり得る。あるいは、対象に対して、操作された免疫細胞は、同種異系であり得る。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、単離された幹細胞（例えば、単離されたＥＳＣ）に由来し得る。場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、本明細書に開示される幹細胞（例えば、単離された幹細胞、誘導幹細胞）は、自己細胞または自己細胞に由来するものであり得る。自己細胞は、状態を有する、または有すると疑われる対象から得ることができる。あるいは、自己細胞は、対象が状態を有していることが判明する前に、その対象から得ることもできる。場合によっては、自己細胞は免疫原性が低下し、免疫抑制剤の量が減少するか、あるいはその必要性がない同種細胞、例えば万能幹細胞とすることができる。自己細胞は健康なドナーから得ることができる。

場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は自己細胞であり得る。操作された免疫細胞は、状態を有する、または有すると疑われる対象から得ることができる。あるいは、操作された免疫細胞は、対象が状態を有していることが判明する前に、その対象から得ることもできる。場合によっては、操作された免疫細胞は同種細胞であり、例えば、免疫原性が低減され、免疫抑制剤の量が低減された、あるいは免疫抑制剤を必要としない普遍的な同種免疫療法に用いることができる。操作された免疫細胞は健康なドナーから得ることができる。

ある態様では、Ｔ細胞は、対照細胞（例えば、非操作Ｔ細胞）と比較して、延長された半減期を示すように操作することができる。Ｔ細胞は、対照細胞と比較して増強された増殖を示すように操作することができる。Ｔ細胞は、対照細胞には標的化することが不十分か不可能な疾患細胞（例えば、がん細胞）に対して効果的かつ特異的に標的化できるように操作することができる。本明細書に開示される操作されたＴ細胞は、エクスビボ、インビトロ、場合によってはインビボで操作されることができる。エクスビボまたはインビトロで調製された、操作されたＴ細胞は、疾患（例えば、骨髄腫または固形腫瘍）を治療するためにそれを必要としている対象に投与することができる。対象に対して、操作されたＴ細胞は自己由来であり得る。あるいは、対象に対して、操作されたＴ細胞は、同種異系であり得る。

ある態様では、ＮＫ細胞は、対照細胞（例えば、非操作ＮＫ細胞）と比較して、延長された半減期を示すように操作することができる。ＮＫ細胞は、対照細胞と比較して、増強された増殖を示すように操作することができる。ＮＫ細胞は、対照細胞には標的化することが不十分か不可能な疾患細胞（例えば、がん細胞）に対して効果的かつ特異的に標的化できるように操作することができる。本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞は、エクスビボ、インビトロ、場合によってはインビボで操作されることができる。エクスビボまたはインビトロで調製された、操作されたＮＫ細胞は、疾患（例えば、骨髄腫または固形腫瘍）を治療するためにそれを必要としている対象に投与することができる。対象に対して、操作されたＮＫ細胞は自己由来であり得る。あるいは、対象に対して、操作されたＮＫ細胞は、同種異系であり得る。

一態様では、本開示は操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、免疫細胞に対して異種であるサイトカイン（例えば、分泌型サイトカイン）を含むことができる。場合によっては、異種サイトカインは、異種インターロイキン（ＩＬ）（例えば、異種分泌ＩＬ－１５）を含むことができる。操作された免疫細胞は、さらに：（ｉ）対照細胞と比較してＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアント、と（ｉｉ）抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体の一方または両方を含み得る。いくつかの例では、抗原はＣＤ１９ではない。従っ
て、抗原結合性部分はＣＤ１９に特異的な結合を示さなくてもよく、示す必要もない。むしろＣＤ１９ではない抗原（例えば、１つ以上の抗原）に特異的な結合を示してもよい。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示される異種サイトカインのそれぞれの受容体である異種受容体を含み得る（例えば、異種ＩＬ－１５に対しては、異種ＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１５αまたはＩＬ－１５βなど）。あるいは、操作された免疫細胞は、異種サイトカインのそれぞれの受容体である異種受容体を含まなくてもよく、含む必要もない。例えば、異種ＩＬ（例えば、ＩＬ－１５）を含んでなる操作された免疫細胞は、異種ＩＬの異種受容体（例えば、ＩＬ－１５Ｒ）を有しない。

一態様では、本開示は操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、免疫細胞に対して異種であるサイトカイン（例えば、分泌型サイトカイン）を含み得る。異種サイトカインは、異種インターロイキン（ＩＬ）（例えば、異種分泌ＩＬ－１５）をさらに含んでいてもよい。操作された免疫細胞は、異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ－１５Ｒ）のそれぞれの受容体である異種受容体を含まなくてもよく、含む必要もない。

本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）と同種であることができる。例えば、異種サイトカインおよび操作された免疫細胞は両方ともヒト由来であり得る。あるいは、異種サイトカインが操作された免疫細胞とは異なる種でもあり得る。

本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）は、異種サイトカインをコードする異種ポリヌクレオチドを操作された免疫細胞に接触させることによって、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）に導入することができる。異種ポリヌクレオチドは、操作された免疫細胞染色体（例えば、核染色体）に組み込むことができる。あるいは、異種ポリヌクレオチドは操作された免疫細胞の染色体に組み込まれなくてもよく、組み込む必要もない。一例として、異種サイトカインをコードするｍＲＮＡを操作された免疫細胞に導入（または挿入）することができる。

場合によっては、本明細書に開示される通り異種サイトカインは、異種ＩＬであり得る。本明細書に開示される異種ＩＬは、少なくとも１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるタイプの異種ＩＬを含み得る。本明細書に開示される異種ＩＬは、多くとも５、４、３、または２種類の異種ＩＬを含み得る。あるいは、異種ＩＬは単一のタイプの異種ＩＬであり得る。異種ＩＬの非限定的な例としては、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３４、ＩＬ－３５、およびＩＬ－３６が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、異種ＩＬは、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＩＬ２１、およびそれらの機能改変体からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含み得る。例えば、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ヒトＩＬ－１５（またはそれをコードする遺伝子）の少なくとも一部を含み得る。

本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）は、分泌性サイトカインであり得る。あるいは、異種サイトカインは、操作された免疫細胞によって分泌されなくてもよく、分泌される必要もない。そのような場合では、例えば、異種サイトカインは、
操作された免疫細胞の細胞表面に結合され得る。

場合によっては、本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）は分泌性サイトカインであり得る。異種サイトカインをコードする発現カセットは、操作された免疫細胞に導入され得る。発現カセットはさらに、追加の異種ポリペプチド、例えば、異種受容体をコードし得る。発現カセット内において、異種サイトカインをコードする第一のポリヌクレオチド配列と追加の異種ポリヌクレオチドペプチド（例えば、異種受容体）とは、切断リンカーをコードするポリヌクレオチドリンカーによって互いに結合され得る。いくつかの例において、異種受容体は、異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ－１５αまたは異種ＩＬ－１５のためのＩＬ－１５β）のそれぞれの受容体であり得る。あるいは、発現カセットは、異種サイトカイン以外の追加の異種ポリペプチドをコードしなくてもよく、コードする必要もない。

本明細書に開示される切断可能なリンカーは、自己切断２Ａペプチドなどの自己切断ペプチドを含み得る。自己切断ペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）、セサ・アシグナ・ウイルス（ＴａＶ）およびブタ・テショ・ウイルス－１（ＰＴＶ－Ｉ）などのアフトウイルス、ならびにテイロウイルス（例えば、テーラーネズミ脳脊髄炎）および脳筋心筋炎ウイルスなどの心筋ウイルスを含む、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスファミリーのメンバーに見出され得る。自己切断２Ａペプチドの非限定的な例としては、「Ｆ２Ａ」、「Ｅ２Ａ」、「Ｐ２Ａ」、「Ｔ２Ａ」、およびそれらの機能バリアントが挙げられる。

場合によっては、本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）を、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の細胞表面に結合させることができる。いくつかの例では、操作された免疫細胞は、異種性サイトカインをコードする異種ポリヌクレオチド配列が、操作された免疫細胞の膜貫通タンパク質をコードする遺伝子に結合するように、遺伝子改変され得る。一例において、内在性膜貫通タンパク質は、異種サイトカインのそれぞれの受容体（例えば、異種ＩＬ－１５αまたは異種ＩＬ－１５のためのＩＬ－１５β）であり得る。いくつかの例では、（ｉｉ）異種受容体に結合された（ｉ）異種サイトカインを含む異種融合ポリペプチドをコードする発現カセットを、操作された免疫細胞に導入することができる。ここで、異種サイトカインは、異種受容体から切断可能でなくてもよく、切断可能である必要もない。異種受容体の非限定的な例としては、異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ－１５に対しては異種ＩＬ－１５αまたはＩＬ－１５β）のそれぞれの受容体が挙げられる、または共通γ鎖（γＣ）受容体またはその改変体などの異なる受容体を含み得る。

本明細書に開示される発現カセットは、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用を介して、操作された細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のゲノムに組み込むことができる。あるいは、発現カセットは、操作された細胞のゲノムに組み込まれなくてもよく、組み込む必要もない。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）および／または本明細書に開示される異種受容体（例えば、異種ＩＬ－１５Ｒなどの異種ＩＬ受容体）が関与する内在性シグナル伝達経路のシグナル伝達の増強を示すことができる。本明細書に開示される内在性シグナル伝達経路のシグナル伝達の増強は、以下を含む多くの方法によって確認することができるが、それらに限定されるわけではない：（ｉ）下流シグナル伝達タンパク（例えば、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒに対してはＪＡＫ３、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５など）のリン酸化、または（ｉｉ）ウェスタンブロット法またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法による下流遺伝子（例えば、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒに対しては
、Ｍｃｌ１、Ｃｄｋ４／６、Ｍｋｉ６７、Ｔｎｆ、Ｇｚｍｂ、Ｇｚｍｃ、Ｉｆｎｇなど）の発現。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞における、異種サイトカインおよび／または異種受容体によって誘導される（例えば、本明細書に開示されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒなどの異種サイトカインおよび／または異種受容体によって誘導される）内在性シグナル伝達経路のシグナル伝達の増強は、対照細胞と比較して、下流シグナル伝達タンパク質のリン酸化が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増加することにより特徴付けられる。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞における、異種サイトカインおよび／または異種受容体によって誘導される（例えば、本明細書に開示されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒなどの異種サイトカインおよび／または異種受容体によって誘導される）内在性シグナル伝達経路のシグナル伝達の増強は、対照細胞と比較して、下流遺伝子の発現が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増加することにより特徴付けられる。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のＣＤ１６シグナル伝達の増強（ＣＤ１６の構成的に活性化されたシグナル伝達）は、対象細胞中に非切断可能なＣＤ１６バリアントを有することによって達成することができる。ＣＤ１６（例えば、ＣＤ１６ａ）は、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）によって発現される膜貫通タンパク質であり、標的細胞に取り付けられる単量体ＩｇＧと結合することにより免疫細胞を活性化させ、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進させる。操作されていない免疫細胞では、ＣＤ１６と単量体ＩｇＧの結合により、膜貫通ドメインの付近の切断部位でＣＤ１６タンパク質の切断が誘導され、免疫細胞が活性化した後のＣＤ１６の細胞表面密度を調節する。従って、操作された免疫細胞の内在性ＣＤ１６は、そのシグナル伝
達を増強するように改変することができる。あるいは、ＣＤ１６のシグナル伝達が増強されたバリアントを人工的に操作された免疫細胞に導入され得る。

場合によっては、ＣＤ１６をコードする免疫細胞内在性遺伝子は、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用により、そのエクトドメイン（例えば、Ｆ１７６Ｖ）を遺伝的に改変することができる、改変ＣＤ１６は、天然のＣＤ１６と比較して、その標的（例えば、単量体ＩｇＧ）に対してより高い結合親和性を示す。場合によっては、このような改変ＣＤ１６をコードする異種遺伝子を細胞に導入することができる。

場合によっては、ＣＤ１６をコードする免疫細胞内在性遺伝子は、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用を介して遺伝子改変され、該改変ＣＤ１６を非切断可能であり、ＣＤ１６シグナルの増強を誘導できるようにすることができる。いくつかの例では、ＣＤ１６の膜近位領域（１８９－２１２位）の切断部位（例えば、１９５－１９８位）を改変または除去することができる（例えば、非切断可能なＣＤ１６バリアントとしてＣＤ１６
Ｓ１９７Ｐバリアント）。場合によっては、このような改変ＣＤ１６をコードする異種遺伝子を細胞に導入することができる。

場合によっては、（ｉ）標的（例えば、単量体ＩｇＧ）に対してより高い結合親和性を示し、および（ｉｉ）非切断性である、異種ＣＤ１６バリアントをコードする異種遺伝子を細胞（すなわち、ｈｎＣＤ１６）に導入することができる。いくつかの例では、異種ＣＤ１６バリアントは、本明細書に開示されるように、例えばＦ１７６ＶおよびＳ１９７Ｐを含む改変ＣＤ１６であり得る。いくつかの例では、異種ＣＤバリアントは、（ｉ）不活性化切断部位を有するＣＤ１６の少なくとも一部、および（ｉｉ）異なる細胞表面タンパク質のエクトドメイン、を含む融合受容体タンパク質、例えば、糖タンパク質（例えば、ＣＤ６４）のような、非改変ＣＤ１６と比較して標的（例えば、単量体ＩｇＧ）への増強された結合を示すものであり得る。

本明細書に開示される異種遺伝子は、本明細書に開示したような遺伝子編集部分の作用を介して、人工細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のゲノムに組み込むことができる。あるいは、異種遺伝子は、操作された細胞のゲノムに組み込まれなくてもよく、組み込む必要もない。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のＣＤ１６シグナル伝達の増強は、以下を含む多くの方法によって確認することができるが、それらに限定されるわけではない（ｉ）ウェスタンブロット法による下流シグナル伝達タンパク（例えば、ＳＨＰ－１）のリン酸化、または（ｉｉ）ウェスタンブロット法またはＰＣＲ法による下流遺伝子（例えば、ＣＤ２５、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦなど）の発現。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、ｈｎＣＤ１６を含む操作されたＮＫ細胞）における、ＣＤ１６シグナル伝達は、対照細胞のＣＤ１６シグナル伝達と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約
７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで大きくなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、ｈｎＣＤ１６を含む操作されたＮＫ細胞）における、ＣＤ１６シグナル伝達の増強は、対照細胞と比較して、下流シグナル伝達タンパクのリン酸化が、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増加することにより特徴付けられる。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、ｈｎＣＤ１６を含む操作されたＮＫ細胞）における、ＣＤ１６シグナル伝達の増強は、対照細胞と比較して、下流遺伝子の発現が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増加することにより特徴付けられる。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、ｈｎＣＤ１６を含む操作されたＮＫ細胞）における、ＣＤ１６シグナル伝達は、対照細胞のＣＤ１６シグナル伝達と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約
２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで長期化（例えば、ＣＤ１６シグナル伝達が活性化される時間が長くなる）され得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。該操作された免疫細胞は、本明細書に開示される異種サイトカインを含み得、ここで、異種サイトカインは、操作された免疫細胞の膜（例えば、形質膜）に結合される。場合によっては、異種サイトカインは、本明細書に開示される異種ＩＬ（例えば、異種ＩＬ－１５）を含み得る。操作された免疫細胞は、以下の１つ、２つ、またはすべてをさらに含み得る：（ａ）異なる異種サイトカイン（例えば、本明細書に開示される異種サイトカインであって、対象細胞の膜に結合するもの以外の異種サイトカイン）、（ｂ）内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性、および（ｃ）セーフティスイッチ。いくつかの例では、内在性免疫調節ポリペプチドはＢ２Ｍではない。従って、内在性免疫調節因子は、例えば、Ｂ２Ｍ以外のポリペプチドであり得る。

操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異なる異種サイトカインと、（ｂ）内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性（例えば、非Ｂ２Ｍポリペプチド）および（ｃ）セーフティスイッチの一方または両方を含み得る。操作された免疫細胞は、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性（例えば、非Ｂ２Ｍポリペプチド）と、（ａ）異なる異種サイトカインおよび（ｃ）セーフティスイッチの一方または両方を含む。操作された免疫細胞は、異種サイトカインおよび（ａ）異なる内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性（例えば、非Ｂ２Ｍポリペプチド）の一方または両方を含む。操作された免疫細胞は、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のすべてを含む。

操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示されるように、対照細胞と比較して、異種サイトカインが関与する内在性シグナル伝達経路のシグナル伝達の増強を示すことができる。

操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）においての内在性免疫調節ポリペプチドの発現または活性は、例えば、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用を介して、低減され得る。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性は、多くの方法によって確認することができる、これには、（ｉ）下流シグナル伝達タンパク質（例えば、ＰＤ１／ＰＤＬ１に対しては、ＳＨＰ２、Ｉｇα／β、Ｓｙｋなど）のリン酸化または脱リン酸化、または（ｉｉ）ウェスタンブロッティングまたはＰＣＲ法による内在性免疫調節ポリペプチド（例えば、ＰＤ１）の発現。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現は、対照細胞と比較して、内在性免疫調節ポリペプチド（例えば、ＰＤ１）の発現が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍
、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで減少することにより特徴付けられる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性免疫調節ポリペプチドの低下した活性は、対照細胞と比較して、下流シグナル伝達タンパク（例えば、ＰＤ１／ＰＤＬ１シグナル伝達に対しては、ＳＨＰ２）のリン酸化が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで減少することにより特徴付けられる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性免疫調節ポリペプチドの低下した活性は、対照細胞と比較して、下流標的シグナル伝達タンパク（例えば、ＰＤ１／ＰＤＬ１シグナル伝達に対しては、Ｉｇα／βまたはＳｙｋ）のリン酸化が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増加することにより特徴付けられる。下流標的シグナル伝達タンパクは、内在性免疫調節ポリペプチドの機能的シグナル伝達経路の作用によって通常抑制されるタンパク質であってもよい。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、操作されたＮＫ細胞においてのＣＤ１６シグナル伝達を増強するために、本明細書に開示されるＣＤ１６バリアントを含むことができる。場合によっては、ＣＤ１６バリアント（例えば、異種ＣＤ１６バリアント）は、ＣＤ１６の少なくとも一部とＣＤ６４の少なくとも一部（例えば、本明細書に開示されるｈｎＣＤ１６）を含み得る。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、対照細胞と比較して、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含み得る。

操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示されるように、対照細胞と比較してＣＤ１６シグナル伝達の増強を示すことができる。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、低下した内在性サイトカインのシグナル伝達活性（例えば、内在性ＩＬ－１７シグナル伝達などの内在性ＩＬシグナル伝達）を含み得る。操作された免疫細胞は、単離された幹細胞（例えば、単離されたＥＳＣ）に由来し得る。あるいは、操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、操作されたＮＫ細胞は、内在性サイトカインシグナル伝達の阻害剤（例えば、低分子阻害剤）で処置され得る。場合によっては、操作されたＮＫ細胞は内在性ＩＬ－１７または内在性受容体の低下した発現（例えば、インデル変異またはトランスジーン変異を介して、一過性または永続的な抑制を介してなど）を含み得る。場合によっては、操作されたＮＫ細胞は、内在性ＩＬ－１７の低下した発現を含み得る。場合によっては、操作されたＮＫ細胞は、内在性ＩＬ－１７Ｒの低下した発現を含み得る。場合によっては、操作されたＮＫ細胞は、内在性ＩＬ－１７および内在性ＩＬ－１７Ｒの低下した発現を含み得る。

場合によっては、本明細書に開示される内在性サイトカインは、内在性ＩＬであり得る。本明細書に開示される内在性ＩＬは、少なくとも１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるタイプの内在性ＩＬを含み得る。本明細書に開示される内在性ＩＬは、多くとも５、４、３、または２種の異なるタイプの内在性ＩＬを含み得る。あるいは、内在性ＩＬは単一のタイプの内在性ＩＬであり得る。内在性ＩＬの非限定的な例としては、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３４、ＩＬ－３５、およびＩＬ－３６が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、内在性ＩＬはＩＬ－１７であり得る。内在性ＩＬ－１７の非限定的な例としては、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、およびそれらの天然バリアントが挙げられる。例えば、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、ＩＬ－１７ＡまたはＩＬ－１７Ｆの低下した発現または活性を示すことができる。

場合によっては、本明細書に開示される内在性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１７などの内在性ＩＬ）をコードする内在性遺伝子は、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用を介して改変され得る。

内在性受容体は、本明細書に開示されるサイトカインの各自の受容体であり得る（例えば、本明細書に開示されるＩＬの各自の受容体）。場合によっては、内在性受容体はＩＬの各自の受容体であり得る（例えば、ＩＬ－７シグナル伝達に対しては、ＩＬ－１７Ｒ）。ＩＬ－１７Ｒの非限定的な例としては、ＩＬ－１７ＲＡ、ＩＬ－１７ＲＢ、ＩＬ－１７
ＲＣ、ＩＬ－１７ＲＤ、ＩＬ－１７ＲＥ、およびそれらのバリアントが挙げられる。一例では、内在性ＩＬ－１７ＲはＩＬ－１７ＲＡを含む。

場合によっては、本明細書に開示される内在性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１７などの内在性ＩＬ）またはその内在性受容体の低下した発現または活性は、以下を含む多くの方法によって確認することができるが、それらに限定されるわけではない：（ｉ）下流シグナル伝達タンパク（例えば、ＩＬ－１７に対しては、ＰＩ３Ｋ、Ａｃｔ１、ＭＡＰ３Ｋ、ＭＥＫ１／２、ＭＫＫ３／６、ＭＫＫ４／７、ＭＫＫ３／６、ＥＲＫ、ｐ３８、ＪＮＫなど）のリン酸化、または（ｉｉ）ウェスタンブロット法またはＰＣＴ法による下流遺伝子発現。いくつかの例では、ＩＬ－１７のような下流遺伝子は、ケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０など）、サイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＴＮＦａ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦなど）、急性期応答分子（例えば、ＳＡＡ、ＣＲＰ、リポカリン２／２４ｐ３など）、および／または酵素（例えば、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１３などのメタロプロテイナーゼ）が挙げられる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における、内在性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１７などの内在性ＩＬ）またはその内在性受容体の低下した発現または活性は、対照細胞と比較して、内在性サイトカインの下流シグナル伝達タンパクのリン酸化が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで減少することにより特徴付けられる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における、内在性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１７などの内在性ＩＬ）またはその内在性受容体の低下した発現または活性は、対照細胞と比較して、内在性サイトカインの下流遺伝子の発現が少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくと
もまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで減少することにより特徴付けられる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、内在性サイトカインシグナル伝達（例えば、内在性ＩＬ－１７シグナル伝達などの内在性ＩＬ－１７シグナル伝達）の低下した活性を示さない対照細胞と比較して、コミットした免疫細胞の特異的細胞マーカー（例えば、ＮＫ細胞マーカー）の増強された発現プロファイルを示すことができる。例えば、コミットしたＮＫ細胞に対する特異的細胞マーカーの非限定的な例としては、ＣＤ５７またはキラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）が挙げられる。ＫＩＲは、ＫＩＲ２Ｄおよび／またはＫＩＲ３Ｄを含み得る。ＫＩＲ２Ｄは、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、および／またはＫＩＲ２ＤＳ５を含み得る。ＫＩＲ３Ｄは、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、および／またはＫＩＲ３ＤＳ１を含み得る。

本明細書に開示されるように、コミットした免疫細胞の特異的細胞マーカー（例えば、ＮＫ細胞に対しては、ＣＤ５７またはＫＩＲ）の増強された発現プロファイルは、以下を含む多くの方法によって確認することができるが、それらに限定されるわけではない：ウェスタンブロット法またはＰＣＲ法。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞におけるコミットした免疫細胞の特異的細胞マーカー（例えば、ＮＫ細胞に対しては、ＣＤ５７またはＫＩＲ）の発現は、対照細胞と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで大きくなり得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、（ｉ）異種転写因子（例えば、異種ＳＴＡＴ）、（ｉｉ）低下した内在性サイトカインのシグナル伝達活性（例えば、本明細書に開示されるように、内在性ＩＬシグナル伝達）、および（ｉｉｉ）内在性酵素（例えば、ＣＢＬ－Ｂのようなリガーゼ）の低下した発現または活性の一方または両方を含み得る。操作された免疫細胞は、単離された幹細胞（例えば、単離されたＥＳＣ）に由来し得る。あるいは、操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

異種転写因子は、少なくとも１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるタイプの異種転写因子を含み得る。異種転写因子は、多くとも５、４、３、または２種類の転写因子を含み得る。あるいは、異種転写因子は単一のタイプの転写因子を有し得る。転写因子は、操作された免疫細胞免疫活性、増殖、アポトーシス、および／または分化に関与し得る。場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の異種転写因子
はＳＴＡＴであり得る。ＳＴＡＴの非限定的な例としては、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、およびそれらの改変体が挙げられる。一例では、ＳＴＡＴはＳＴＡＴ３を含み得る。別の例では、ＳＴＡＴはＳＴＡＴ５Ｂを含み得る。

場合によっては 本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、（ｉ）異種転写因子（例えば、異種ＳＴＡＴ）または（ｉｉ）異種転写因子（例えば、低下した内在性サイトカインのシグナル伝達活性）を含まない対照細胞と比較して、腫瘍細胞の存在下で増強された生存を示すことができる。場合によっては、操作された免疫細胞は、腫瘍細胞の存在下で、対照細胞よりも少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで長く生存することができる。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、本明細書に開示されるコミットした免疫細胞の特異的内在性細胞マーカー（例えば、ＫＩＲのようなＮＫ細胞マーカー）の低下した発現または活性を示すことができる。いくつかの例では、特異的内在性細胞マーカーはＫＩＲである。操作された免疫細胞は、以下の１つ以上をさらに含み得る：（ａ）本明細書に開示される、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、（ｂ）本明細書に開示される、異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５のような異種ＩＬ）、（ｃ）本明細書に開示される、対照細胞と比較して増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、ここで、ＣＤ１６バリアントは、操作されたＮＫ細胞に対して異種である（ｄ）本明細書に開示される免疫調節ポリペプチド、ここで、免疫調節ポリペプチドは、操作された免疫細胞に対して異種である、および（ｅ）本明細書に開示される、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性。

操作された免疫細胞は、キメラメラポリペプチド受容体と、以下の１以上（例えば、１、２、３、または４）とを含み得る：（ｂ）異種サイトカイン、（ｃ）ＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアント、（ｄ）異種免疫調節因子、および（ｅ）内在性免疫調節因子ポリプチペドの低下した発現または活性。

操作された免疫細胞は、異種サイトカインと、以下の１以上（例えば、１、２、３、または４）とを含み得る：（ａ）キメラポリペプチド受容体、（ｃ）ＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアント、（ｄ）異種免疫調節因子、および（ｅ）内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性。

操作された免疫細胞は、ＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアントと、以下の１以上（例えば、１、２、３、または４）とを含み得る：（ａ）キメラポリペプ
チド受容体、（ｂ）異種サイトカイン、（ｄ）異種免疫調節因子、および（ｅ）内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性。

操作された免疫細胞は、異種免疫調節因子と、以下の１以上（例えば、１、２、３、または４）とを含み得る：（ａ）キメラポリペプチド受容体、（ｂ）異種サイトカイン、（ｃ）ＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアント、および（ｅ）内在性免疫調節因子ポリプチドの低下した発現または活性化。

操作された免疫細胞は、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性と、以下の１以上（例えば、１、２、３、または４）とを含み得る：（ａ）キメラポリペプチド受容体、（ｂ）異種サイトカイン、（ｃ）ＣＤ１６シグナル伝達を増強するためのＣＤ１６バリアント、および（ｄ）異種免疫調節因子。

本明細書に開示されるように、コミットした免疫細胞の特異的細胞マーカー（例えば、ＮＫ細胞に対しては、ＫＩＲ）の低下した発現または活性は、以下を含む多くの方法によって確認することができるが、それらに限定されるわけではない：ウェスタンブロット法またはＰＣＲ法。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞におけるコミットした免疫細胞の特異的内在性細胞マーカー（例えば、ＮＫ細胞に対しては、ＫＩＲ）の発現は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５またはそれ以上）の内在性免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＤ９４、ＣＤ９６、ＴＧＦβ受容体、ＳＨＩＰ２など）の低下した発現または活性を示すことができる。場合によっては、操作された免疫細胞は、以下の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５またはそれ以上）の低下した発現または活性を示すことができる：（ｉ）内在性ＣＤ９４、（ｉｉ）内在性ＣＤ９６、（ｉｉｉ）内在性ＴＧＦβ受容体、および（ｉｖ）内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）。

場合によっては、操作された免疫細胞は、内在性ＣＤ９４の低下した発現または活性、および以下の１つ以上の（例えば、１、２、またはすべての）低下した発現または活性を示すことができる：（ｉｉ）内在性ＣＤ９６、（ｉｉｉ）内在性ＴＧＦβ受容体、および（ｉｖ）内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）。

場合によっては、操作された免疫細胞は、内在性ＣＤ９６の低下した発現または活性を
示すことができ、および以下の１つ以上の（例えば、１、２、またはすべての）低下した発現または活性を示すことができる：（ｉ）内在性ＣＤ９４、（ｉｉｉ）内在性ＴＧＦβ受容体、および（ｉｖ）内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）。

場合によっては、操作された免疫細胞は、内在性ＴＧＦβ受容体の低下した発現または活性を示すことができ、および以下の１つ以上の（例えば、１、２、またはすべての）低下した発現または活性を示すことができる：（ｉ）内在性ＣＤ９４、（ｉｉ）内在性ＣＤ９６、および（ｉｖ）内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）。

場合によっては、操作された免疫細胞は、内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）の低下した発現または活性を示すことができ、および以下の１つ以上の（例えば、１、２、またはすべての）低下した発現または活性を示すことができる：（ｉ）内在性ＣＤ９４、（ｉｉ）内在性ＣＤ９６、および（ｉｉｉ）内在性ＴＧＦβ受容体。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＤ９４、ＣＤ９６、ＴＧＦβ受容体、ＳＨＩＰ２など）の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性ＣＤ９４の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけ
る内在性ＣＤ９６の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性ＴＧＦβ受容体の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性ＳＨＩＰ（例えば、ＳＨＩＰ２）の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示すことができる。場合によっては、内在性免疫調節ポリペプチドには、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）の低免疫性調節因子が含まれる。場合によっては、操作された免疫細胞は、以下の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）の低免疫性調節因子の低下した発現または活性を示す：（ｉ）内在性ＣＤ８０、（ｉｉ）内在性ＣＤ８６、（ｉｉｉ）内在性ＩＣＯＳＬ、（ｉｖ）内在性ＣＤ４０Ｌ、（ｖ）内在性ＭＩＣＡもしくはＭＩＣＢ、または（ｖｉ）内在性ＮＫＧ２ＤＬ。操作された免疫細胞は、単離された幹細胞（例えば、単離されたＥＳＣ）に由来し得る。あるいは、操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性低免疫性調節因子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２ＤＬなど）の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得、本明細書に開示されるように、ウェスタンブロット法またはＰＣＴ法によって確認される通りである。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性 ＣＤ８０の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性 ＣＤ８６の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して少なく
ともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性 ＩＣＯＳＬの低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性低免疫性調節因子 ＣＤ４０Ｌの低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけ
る内在性ＭＩＣＡまたはＭＩＣＢの低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性ＮＫＧ２ＤＬの低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示すことができる。場合によっては、内在性免疫調節ポリペプチドは、低免疫性調節因子（例えば、ＩＣＡＭ１）を含む。操作された免疫細胞はさらに、以下のうちの１つ以上を含む：（ａ）本明細書に開示される抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、（ｂ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）、および（ｃ）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント。

場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体および以下のうちの一方または両方を含む：（ｂ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）、および（ｃ）増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント。

場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）および以下のうちの一方または両方を含む：（ａ）本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体、および（
ｃ）増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント。

場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントおよび以下のうちの一方または両方を含む：（ａ）本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体、および（ｂ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性 ＩＣＡＭ１の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低くなり得、本明細書に開示されるように、ウェスタンブロット法またはＰＣＴ法によって確認される。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示すことができる。場合によっては、内在性免疫調節ポリペプチドには低免疫性調節因子（例えば、ＩＣＡＭ１）を含む。操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、本明細書に開示されるように、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）における内在性ＩＣＡＭ１の低下した発現または活性は、対照細胞のその発現と比較して、低くなり得る。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示される免疫調節ポリペプチドを含み得、ここで、免疫調節ポリペプチドは、操作された免疫細胞に対して異種である。場合によっては、免疫調節ポリペプチドは低免疫性調節因子を含む。低免疫性調節因子はＰＤＬ２であり得る。代替的に、もしくはさらに、低免疫性調節因子はＴＧＦ－βである。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示される免疫調節ポリペプチドを含み得、ここで、免疫調節ポリペプチドは、操作された免疫細胞に対して異種である。場合によっては、免疫調節ポリペプチドは低免疫性調節因子を含む。低免疫性調節因子は、（ｉ）異種ＣＣＬ２１、（ｉｉ）異種ＩＬ－１０、（ｉｉｉ）異種ＣＤ４６、（ｉｖ）異種ＣＤ５５、および（ｖ）異種ＣＤ５９からの１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のメンバーを含み得る。操作された免疫細胞は、単離された幹細胞（例えば、単離されたＥＳＣ）に由来し得る。あるいは、操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ＣＣＬ２１および以下からの１つ以上を含む（例えば、１、２、３またはすべての）：（ｉｉ）異種ＩＬ－１０、（ｉｉｉ）異種ＣＤ４６、（ｉｖ）異種ＣＤ５５、および（ｖ）異種ＣＤ５９。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ＩＬ－１０および以下からの１つ以上を含む（例えば、１、２、３またはすべての）：（ｉ）異種ＣＣＬ２１、（ｉｉｉ）異種ＣＤ４６、（ｉｖ）異種ＣＤ５５、および（ｖ）異種ＣＤ５９。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ＣＤ４６および以下からの１つ以上を含む（例えば、１、２、３またはすべての）：（ｉ）異種ＣＣＬ２１、（ｉｉ）異種ＩＬ－１０、（ｉｖ）異種ＣＤ５５、および（ｖ）異種ＣＤ５９。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ＣＤ５５および以下からの１つ以上を含む（例えば、１、２、３またはすべての）：（ｉ）異種ＣＣＬ２１、（ｉｉ）異種ＩＬ－１０、（ｉｉｉ）異種ＣＤ４６、および（ｖ）異種ＣＤ５９。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ＣＤ５９および以下からの１つ以上を含む（例えば、１、２、３またはすべての）：（ｉ）異種ＣＣＬ２１、（ｉｉ）異種ＩＬ－１０、（ｉｉｉ）異種ＣＤ４６、および（ｉｖ）異種ＣＤ５５。

一態様では、本開示は、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を提供する。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、ＩＬ－１５ではない異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ）を含むことができる。いくつかの例では、異種サイトカインは、ＩＬ－２１またはそのバリアント含む。操作された免疫細胞は、誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来し得る。

場合によっては、比較の目的で使用される、対照細胞はＮＫ細胞などの免疫細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）を含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントを含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含む細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は異種ＩＬ－１５Ｒを含む細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、膜結合異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）を含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示さない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、内在性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１７）またはその受容体（例えば、ＩＬ－１７Ｒ）の活性を示さない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は異種転写因子（例えば、ＳＴＡＴ）を含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、コミットした免疫細胞（例えば、ＫＩＲのようなＮＫ細胞マーカー）に対する特異的内在性細胞マーカーの低下した発現または活性を示さない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は異種免疫調節ポリペプチドを含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、以下の１つ以上（例えば１、２、３、４）の低下した発現または活性を示さない細胞であり得る：内在性ＣＤ９４、内在性ＣＤ９６、内在性ＴＧＦβ受容体、または内在性ＳＨＩＰ２。場合によっては、対照細胞は、以下の１つ以上（例えば１、２、３、４、５）の低下した発現または活性を示さない細胞であ
り得る：内在性ＣＤ８０、内在性ＣＤ８６、内在性ＩＣＯＳＬ、内在性ＣＤ４０Ｌ、内在性ＭＩＣＡもしくはＭＩＣＢ、または内在性ＮＫＧ２ＤＬ。場合によっては、対照細胞はＩＣＡＭ１の低下した発現または活性を示さない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は異種ＰＤＬ２または異種ＴＧＦβを含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、異種ＣＣＬ２１、異種ＩＬ－１０、異種ＣＤ４６、異種ＣＤ５５、異種ＣＤ５９のうち１つ以上（例えば、１、２、３、４、５）を含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は、異種ＩＬ－２１を含まない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は細胞株由来でない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞は単離されたＥＳＣに由来しない細胞であり得る。場合によっては、対照細胞はｉＰＳＣに由来しない細胞であり得る。

一部の実施形態において、本開示は、本明細書に開示される操作された免疫細胞のいずれか１つを含む集団（例えば、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞のいずれか１つを含む操作されたＮＫ細胞の集団）を提供する。免疫細胞の集団（例えば、ＮＫ細胞の集団）の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種ポリペプチドを含み得る、ここで、該異種ポリペプチドが異種ＩＬ－１５を含む（例えば、ＩＬ１５－ＩＬ１５受容体融合体などの、異種分泌ＩＬ－１５、および／または結合型ＩＬ－１５）。

外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５など．）を実質的に含まない環境における操作されたＮＫ細胞の集団の活性レベル（例えば、持続レベル）が、外因性インターロイキンを含む対照環境における比較できるような免疫細胞の集団（例えば、本明細書に開示される比較できるような異種ＩＬ－１５を含むように操作されたもの）の対照持続レベルと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、少なくとも約またはそれより多く。このような持続レベルは、免疫細胞の集団が該環境に少なくともまたは最大で約１日間、少なくともまたは最大で約２日間、少なくともまたは最大で約３日間、少なくともまたは最大で約４日間、少なくともまたは最大で約５日間、少なくともまたは最大で約６日間、少なくともまたは最大で約７日間、少なくともまたは最大で約８日間、少なくともまたは最大で約９日間、少なくともまたは最大で約１０日間、少なくともまたは最大で約１１日間、少なくともまたは最大で約１２日間、少なくともまたは最大で約１３日間、少なくともまたは最大で約１４日間、少なくともまたは最大で約１５日間、少なくともまたは最大で約１６日間、少なくともまたは最大で約１７日間、少なくともまたは最大で約１８日間、少なくともまたは最大で約１９日間、少なくともまたは最大で約２０日間、少なくともまたは最大で約２１日間、少なくともまたは最大で約２２日間、少なくともまたは最大で約２３日間、少なくともまたは最大で約２４日間、少なくともまたは最大で約２５日間、少なくともまたは最大で約２６日間、少なくともまたは最大で約２７日間、少なくともまたは最大で約２８日間、少なくともまたは最大で約５週間、少なくともまたは最大で約６週間、あるいは少なくともまたは最大で約８週間まで存在した後に確認され得る。該環境における外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５など）の量は、少なくともまたは最大で約１ミリリットル当たり単位（Ｕ／ｍｌ）、少なくともまたは最大で約５Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約１０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約１５Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約２０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約３０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約４０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約５０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約６０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約８０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約１００Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約１５０Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約２００Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約３００Ｕ／ｍＬ、少なくともまたは最大で約４００Ｕ／ｍＬ、あるいは少なくともまたは最大で約５００Ｕ／ｍＬまでであり得る。該環境は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで
あり得る。

本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団が、外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２）が実質的含まない環境に少なくともまたは最大で１日間、少なくともまたは最大で約２日間、少なくともまたは最大で約３日間、少なくともまたは最大で約４日間、少なくともまたは最大で約５日間、少なくともまたは最大で約６日間、少なくともまたは最大で約７日間、少なくともまたは最大で約８日間、少なくともまたは最大で約９日間、少なくともまたは最大で約１０日間、少なくともまたは最大で約１１日間、少なくともまたは最大で約１２日間、少なくともまたは最大で約１３日間、少なくともまたは最大で約１４日間、少なくともまたは最大で約３週間、あるいは少なくともまたは最大で約４週間まで存在した後、少なくともまたは最大で約１０％、少なくともまたは最大で約２０％、少なくともまたは最大で約３０％、少なくともまたは最大で約４０％、少なくともまたは最大で約５０％、少なくともまたは最大で約６０％、少なくともまたは最大で約７０％、少なくともまたは最大で約８０％、少なくともまたは最大で約９０％、少なくともまたは最大で約９５％まで，またはそれ以上の持続性（または生存率）を示し得る。

例えば本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団が、外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２）を実質的に含まない環境中で、約５日後（５０％、９日後、２５％、１５日後）に少なくとも５０％の生存率を示すことができる。例えば、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団が、外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２）を実質的に含まない環境中で、約９日間後に約５０％の生存率を示すことができる。例えば、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団が、外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２）を実質的に含まない環境中で、約１５日間後に約２５％の生存率を示すことができる。

異種ＩＬ－１５を含む異種ポリペプチドを含まない（例えば、異種膜結合型ＩＬ－１５を含まない）比較できるようなＮＫ細胞の集団と比較して、外因性インターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５など）を実質的に含まない環境中で少なくともまたは最大で約１日間、少なくともまたは最大で約２日間、少なくともまたは最大で約３日間、少なくともまたは最大で約４日間、少なくともまたは最大で約５日間、少なくともまたは最大で約６日間、少なくともまたは最大で約７日間、少なくともまたは最大で約８日間、少なくともまたは最大で約９日間、少なくともまたは最大で約１０日間、少なくともまたは最大で約１１日間、少なくともまたは最大で約１２日間、少なくともまたは最大で約１３日間、少なくともまたは最大で約１４日間、少なくともまたは最大で約２週間、少なくともまたは最大で約３週間、少なくともまたは最大で約４週間、少なくともまたは最大で約６週間、あるいは少なくともまたは最大で約８週間まで存在した後、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団は、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で２００倍、少なくともまたは最大で３００倍、少なくともまたは最大で約４００倍、あるいは少なくともまたは最大で約５００倍まで増強された持続性を示すことができる。
例えば、本明細書に開示される操作されたＮＫ細胞の集団は、異種ＩＬ－１５を含まないＮＫ細胞の集団と比較して、該環境中で約５日間存在した後、約７倍増強された持続性を示すことができる。

理論により束縛されることは望まないが、増強されたＩＬ－１５シグナル伝達を含んでなる異種ポリペプチドを有する（例えば、異種ＩＬ－１５を含むことによる）ことにより、このような増強された持続レベルを有することは、操作された免疫細胞の産生に必要な外因性タンパク質（例えば、ＩＬ－２）の量を減少させることができ、操作された免疫細胞の産生効率を高め、免疫細胞治療の全体的なコストを削減することができる。インビトロで確認されたいずれかの持続性レベルの増強は、インビボ（例えば、それを必要としている対象の血流中）での事象に変換することができる。

本明細書に開示される外因性インターロイキンには、細胞または細胞の集団（例えば、操作されたＮＫ細胞などの、本明細書に開示される操作された免疫細胞（複数可））によって分泌されないインターロイキンが含まれ得、人工的に環境に添加することができる。インビトロ環境でが、外因性インターロイキンは、培地に添加される組換えインターロイキンタンパク質を含んでいてもよい。インビボ環境（例えば、血漿中）でが、外因性インターロイキンは、それを必要としている対象に投与される組換えインターロイキンタンパク質を含んでいてもよい。

本明細書で使用される「持続性」という用語は、一般に、細胞の集団（例えば、本明細書に開示される、操作されたＮＫ細胞の集団などの、操作された免疫細胞の集団）の少なくとも一部が、細胞の集団を環境（例えば、インビトロ培地中、静脈内（ＩＶ）投与後の血清中など）に導入した後、環境中に残存することを指す。持続性は、細胞集団の少なくとも一部が検出可能なレベルで環境中に残存する期間によって確認することができる。いくつかの例では、細胞の集団の持続性は、環境（例えば、培地、血流など）中 の細胞の集団の半減期と相関する可能性がある。場合によっては、目的の細胞の集団（例えば、操作されたＮＫ細胞の集団などの、操作された免疫細胞の集団）は、時間が経つと成長（例えば、増殖）しなくてもよく、本明細書に開示される細胞の集団の持続レベルは、経時的な細胞の集団の大きさの減少（またはその速度）を測定することによって確認することができる。例えば、環境にある期間（例えば、少なくとも５日間）に存在した後の細胞の集団は、比較できるような環境に比較できるような期間に存在した後の細胞の対照集団よりも大きな持続レベル（少なくとも５％大きい）は、対照集団と比較して、より大きな割合（例えば、少なくとも５％大きい）の細胞の集団の大きさが生存していることを示すことができる。

Ｃ．操作された免疫細胞のさらなる態様

本明細書に開示されるのいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）一部の実施形態において、本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）を含むことができる。異種サイトカインは、異種分泌サイトカインであり得る。異種サイトカインは、膜結合型サイトカインであり得る。場合によっては、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示されるように、異種サイトカイン（例えば、異種ＩＬ－１５Ｒ）の各自の受容体である異種受容体を含む。場合によっては、異種サイトカインおよび各自の異種受容体は、融合タンパク質（例えば、ＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒ融合体）として提供され得る。このように、操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、異種サイトカインおよび／または異種受容体（例えば、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒなどの、異種サイトカインおよび／または異種受容体によって誘導される）によって誘導される内性シグナル伝達経路の増強されたシグナル伝達を示すことができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性を示すことができる。このような操作された免疫細胞は、多発性骨髄腫（ＭＭ）などの白血球癌に罹患しているか、罹患している疑いのある対象の治療に使用することができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞の内在性ＣＤ３８の発現または活性は、改変されなくてもよく、改変される必要はない。このような操作された免疫細胞は、多発性骨髄腫ではない疾患（例えば、癌、腫瘍）を有するか、あるいは有すると疑われる対象を治療するために使用することができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントを含むことができ、異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは、操作された免疫細胞によって分泌されることができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントを含むことができ、異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは、操作された免疫細胞の細胞表面膜に結合することができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、本明細書で提供されるように、少なくとも１つの抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含むことができる。いくつかの例では、操作された免疫細胞は、複数の異なる抗原に特異的に結合するために、複数の異なるキメラポリペプチド受容体を含むことができる。いくつかの例では、操作された免疫細胞は、複数の異なる抗原と特異的に結合するための複数の抗原結合部位を含む少なくとも１つのキメラポリペプチド受容体を含むことができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、操作された免疫細胞の死をもたらすことができるセーフティスイッチを含むことができる。操作された免疫細胞は、本明細書に開示されるように、遺伝子編集部分の作用を介して、（例えば、免疫細胞のゲノムに組み込まれた）セーフティスイッチをコードする遺伝子を含むことができる。場合によっては、有害事象が生じた場合、あるいは適応免疫療法がもはや必要でなくなった場合に、プロドラッグを操作された免疫細胞（例えば、操作された免疫細胞を含む対象に投与する）に導入することができる、プロドラッグはセーフティスイッチ分子によって活性化され、対象免疫細胞を死滅させることができる。場合によっては、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、７、または９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲ、Ｂ細胞ＣＤ２０、およびそれらの機能バリアントからなる群から選択される１つ以上のメンバーを含むことができる。場合によっては、操作された免疫細胞の死滅（または枯渇）を翻訳後、時間的、および／または部位特異的に調節するために、セーフティスイッチは活性化剤（例えば、低分子または抗体などのタンパク質）を介して活性化することができる。セーフティスイッチとその活性化因子の非限定的な例としては、カスパーゼ９（またはカスパーゼ３もしくは７）とＡＰ１９０３；チミジンキナーゼ（ＴＫ）とガンシクロビル（ＧＣＶ）；およびシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）と５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）が挙げられる。代替的に、もしくはさらに、抗体（例えば、セツキシマブなどの抗ＥＧＦＲ Ａｂ）によって認識され得るエピトープを含有する修飾上皮成長因子受容体（Ｅ
ＧＦＲ）は、対象細胞が抗体に曝露された際に操作された免疫細胞を枯渇させるために使用することもできる。場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、カスパーゼ９（カスパーゼ３または７）チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲ、およびＢ細胞ＣＤ２０．３からなる群から選択されるセーフティスイッチ蛋白質を含むことができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、異種免疫受容体ポリペプチドを含み得る。免疫調節ポリペプチドＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のメンバーを含み得る。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は本明細書に開示される内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示すことができる。内在性免疫調節ポリペプチドは免疫チェックポイント阻害剤または低免疫性調節因子（またはその両方）を含む。

場合によっては、本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＫＩＲ２Ｄ、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ受容体および２Ｂ４からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のメンバーを含み得る。場合によっては、免疫チェックポイント阻害剤はＳＨＩＰ２を含む。

場合によっては、本明細書に開示される低免疫性調節因子は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＡＭ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のメンバーを含み得る。場合によっては、免疫チェックポイント阻害剤はＳＨＩＰ２を含む。

低下した発現または活性レベルを有する本明細書に開示されるいずれかの内在性免疫調節ポリペプチド（例えば、免疫チェックポイント阻害剤、低免疫性調節因子）は、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の１つ以上の機能、例えば、増強された持続性または生存性、増強された免疫拒絶に対する抵抗性（例えば、ＡＤＣＣ細胞傷害性）、増強された標的細胞（例えば、がん細胞）に対する細胞傷害性など。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントを含み得る。ここで、該ＣＤ１６バリアントは、操作された免疫細胞に対して異種である。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して標的細胞に対して増強された細胞毒性を示すことができる。場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞は、標的細胞または標的細胞の集団に対して、対照細胞の細胞毒性よりも少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくと
もまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで高い細胞毒性（例えば、インビトロ、エクスビボ、インビボ）を示すことができ、例えば、標的細胞の集団の数の変化を追跡することで確認される。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、より低下した別々の免疫細胞（例えば、インビトロで別々のＴ細胞および／またはＢ細胞、または操作された免疫細胞を宿主に投与した後の宿主の免疫細胞）からの免疫応答を誘導することができる。場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞は、対照細胞に曝露された際の別々の免疫細胞の免疫応答と比較して、別々の免疫細胞からの免疫応答を少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで低減させることができ、例えば、（ｉ）別々の免疫細胞への曝露に伴う、操作された免疫細胞の初期集団数の変化、または（ｉｉ）操作された免疫細胞の初期集団への曝露後、別個の免疫細胞のサイトカイン放出量の変化を測定する。または、（ｉｉ）操作された免疫細胞の初期集団への曝露後、別個の免疫細胞のサイトカイン放出量の変化を測定することによって確認される。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、別々の免疫細胞（例えば、インビトロで別々のＴ細胞および／またはＢ細胞、または操作された免疫細胞を宿主に投与した後の宿主の免疫細胞）に曝露された後、延長した半減期を示すことができる。場合によっては、別個の免疫細胞（例えば、インビトロまたはインビボ）に曝露された後、操作された免疫細胞の半減期は、対照細胞と比較して、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、
少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで長くなり得、操作された免疫細胞の数を経時的に（例えば、ＦＡＣＳによって）モニターすることによって確認される。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、対象の身体組織の増強された機能または病的状態を影響することができる。場合によっては、操作された免疫細胞で処置することにより、対照細胞またはビヒクル（すなわち、細胞は存在しない）と比較して、対象の生体組織の機能または病的状態を、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍まで増強することができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、対照細胞と比較して、対象の身体組織の機能または状態の変性を遅延させることができる。場合によっては、操作された免疫細胞で処理することにより、対照細胞またはビヒクル（すなわち、細胞は存在しない）と比較して、対象の生体組織の機能または状態の変性を、少なくともまたは最大で約０．１倍、少なくともまたは最大で約０．２倍、少なくともまたは最大で約０．３倍、少なくともまたは最大で約０．４倍、少なくともまたは最大で約０．５倍、少なくともまたは最大で約０．６倍、少なくともまたは最大で約０．７倍、少なくともまたは最大で約０．８倍、少なくともまたは最大で約０．９倍、少なくともまたは最大で約１倍、少なくともまたは最大で約２倍、少なくともまたは最大で約３倍、少なくともまたは最大で約４倍、少なくともまたは最大で約５倍、少なくともまたは最大で約６倍、少なくともまたは最大で約７倍、少なくともまたは最大で約８倍、少なくともまたは最大で約９倍、少なくともまたは最大で約１０倍、少なくともまたは最大で約２０倍、少なくともまたは最大で約３０倍、少なくともまたは最大で約４０倍、少なくともまたは最大で約５０倍、少なくともまたは最大で約６０倍、少なくともまたは最大で約７０倍、少なくともまたは最大で約８０倍、少なくともまたは最大で約９０倍、少なくともまたは最大で約１００倍、少なくともまたは最大で約５００倍、少なくともまたは最大で約１，０００倍、少なくともまたは最大で約５，０００倍、あるいは少なくともまたは最大で約１０，０００倍、遅延させる
ことができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、身体組織は以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）のメンバーを含み得る：血液、血漿、血清、尿、リンパ周囲液、糞便、唾液、精液、羊水、脳脊髄液、胆汁、汗、涙、喀痰、滑液、嘔吐物、骨、心臓、胸腺、動脈、血管、肺、筋肉、胃、腸、肝臓、膵臓、脾臓、腎臓、胆嚢、甲状腺、副腎、乳腺、卵巣、卵巣、前立腺、睾丸、皮膚、脂肪、眼球、脳、感染組織、疾患組織、悪性組織、石灰化組織、健康組織。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、操作された免疫細胞は、標的細胞に対する免疫応答を誘導することができる。標的は、例えば、疾患細胞、癌細胞、腫瘍細胞などであり得る。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、異種遺伝子は、構成的、誘導的、一時的、組織特異的、および／または細胞型特異的プロモーターに作動的に結合（例えば、ノックインのために）され得る。目的のプロモーターの非限定的な例としては、ＣＭＶ、ＥＦ１ａ、ＰＧＫ、ＣＡＧ、およびＵＢＣが挙げられる。挿入部位の非限定的な例としては、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、ＲＯＳＡ２６、コラーゲン、ＨＴＲＰ、Ｈ１１、Ｂ２Ｍ、ＧＡＰＤＨ、ＴＣＲ、ＲＵＮＸ１、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＴＣＲ ａ またはｂ 定常領域、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３８、ＣＩＳ、ＣＢＬ－Ｂ、ＳＯＣＳ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、およびＴＩＧＩＴが挙げられる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、腫瘍微小環境（すなわち、腫瘍微小環境遺伝子または「ＴＭＥ」）においての操作された免疫細胞の機能を増強するために、以下の内在性遺伝子の１つ以上（例、１、２、３、４またはそれ以上）の低下した発現または活性を示すことができる。場合によっては、ＴＭＥの低下した発現または活性を有することにより、操作された免疫細胞の標的細胞に対する免疫活性を増強することができる。場合によっては、ＴＭＥ遺伝子は免疫チェックポイント阻害剤であってもよい。ＴＭＥの非限定的な例としては、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＫＩＲ２Ｄ、ＣＤ９４、ＣＤ９６、ＴＧＦβ受容体、２Ｂ４、およびＳＨＩＰ２が挙げられる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、例えば、機能強化した：ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＡＰ１０（例えば、点変異あり、もしくは点変異なし）のための１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）の異種遺伝子（例えば、ノックイン）を示すことができる。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、例えば、低免疫性のために、以下の内在性遺伝子の１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）の低下した発現または活性を示すことができる：Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＡＭ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＮＫＧ２ＤＬ（例えば、ＵＬＢＰ１）。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細
胞）の一部の実施形態において、例えば、低免疫性のために、以下の異種遺伝子（例えば、ノックイン）の１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）を示すことができる：ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９。

本明細書に開示されるいずれか１つの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の一部の実施形態において、以下の異種遺伝子（例えば、ノックイン）の１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）を示すことができる：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８０、４１ＢＢＬ、およびＣＤ１３１。

Ｄ． キメラ抗原受容体

本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、またはそれ以上の異なるタイプのキメラポリペプチド受容体）を含むことができる。操作された免疫細胞は、一過性または永続的にキメラポリペプチド受容体を発現するように操作され得る。場合によっては、組換えキメラペプチド受容体を、例えば、リポソームを介して、操作された免疫細胞に送達し、膜融合を介して操作された免疫細胞に組み込むことができる。場合によっては、キメラポリペプチド受容体をコードする異種ポリヌクレオチド構築物（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を操作された免疫細胞に送達することができる。異種ポリヌクレオチド構築物をコードする異種ポリヌクレオチド構築物（すなわち、遺伝子）は、操作された免疫細胞の染色体に組み込むことができる（すなわち、染色体遺伝子）、あるいは、本明細書に開示される操作された免疫細胞の染色体に組み込まれなくてもよく、組み込む必要もない。

キメラポリペプチド受容体は、Ｔ細胞受容体融合タンパク質（ＴＦＰ）を含むことができる。用語「Ｔ細胞受容体融合タンパク質」または「ＴＦＰ」は、一般に、（ｉ）１つ以上の抗原結合部分（例えば、単特異性または単特異性）、（ｉｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、（ｉｉｉ）ＴＣＲ膜貫通ドメインの少なくとも一部、および（ｉｖ）ＴＣＲ細胞内ドメインの少なくとも一部を含む組換えポリペプチド構築体を指す。

場合によっては、本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）の内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を不活性化することができる。いくつかの例では、内在性ＴＣＲの機能を阻害剤によって阻害することができる。いくつかの例では、内在性ＴＣＲが不活性化されるように、内在性ＴＣＲのサブユニットをコードする遺伝子を不活性化する（例えば、本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用を介して編集する）ことができる。内在性ＴＣＲのサブユニットをコードする遺伝子は、以下のうちの１つ以上であり得る：ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、およびＣＤ３ζ。

キメラ抗原受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み得る。「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、一般に、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインからなる細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内または内在性シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む組換えポリペプチド構築体を指す。場合によっては、刺激性分子はＴ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖であってもよい。場合によっては、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つのコスティミュラトリー分子由来の１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。場合によっては、コスティミュラトリー分子は、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８を含んでいてもよい。一態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ－ｔｅｒ）に任意のリーダー配列を含む。一態様では、ＣＡＲはさらに、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端にリーダー配列を
含んでおり、ここでリーダー配列は、細胞プロセシングおよびＣＡＲの細胞膜への局在化の間に、任意で抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ＤＡＲＰｉｎなど）から切断される。

ＣＡＲは、第一世代、第二世代、第三世代、第四世代のＣＡＲシステム、その機能バリアント、またはそれらの組み合わせであってもよい。第一世代ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９ＲまたはＣＤ１９ＣＡＲ）は、特定の抗原に特異性を有する抗原結合ドメイン（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、ＶＨＨドメイン、または重鎖のみ抗体のＶＨドメインなどの抗体またはその抗原結合フラグメント）、適応免疫受容体由来の膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８レセプター由来の膜貫通ドメイン）、および適応免疫受容体に由来するシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ ζ受容体またはＦｃεＲＩγの細胞内領域に由来する１つ以上（例えば、３つ）のＩＴＡＭドメイン）を含む。第二世代ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン部分に共刺激ドメインを付加することにより、第一世代ＣＡＲを改変する（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０などの、Ｔ細胞受容体とともに作用する共刺激性受容体に由来する）、これにより第一世代ＣＡＲと同時に補因子（例えば、ＩＬ－２）を投与する必要性がなくなる。第三世代ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン部分に複数の共刺激ドメインを追加する（例えば、ＣＤ３ζ－ＣＤ２８－ＯＸ４０、またはＣＤ３ζ－ＣＤ２８－４１ＢＢ）。第４世代ＣＡＲは、活性化サイトカイン（例えば、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、またはＩＬ－２７）をＣＡＲの細胞内シグナル伝達部分（例えば、１つ以上のコスティトミュラトリードメインとＣＤ３ζ ＩＴＡＭドメインの間）に加えるか、ＣＡＲ誘導プロモーター（例えば、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７）の制御下に置くことによって、第二世代または第三世代のＣＡＲを改変する。場合によっては、ＣＡＲは、本明細書に開示される第一世代、第二世代、第三世代、または第四世代のＣＡＲシステムとは異なる新世代ＣＡＲシステムであってもよい。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけるＣＡＲのヒンジドメイン（例えば、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間のリンカー）は、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３ｃ ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ８４、ＣＤ１６６、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＩＣＡＭ－１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ，またはＴ細胞受容体ポリペプチドのネイティブまたは改変された膜貫通領域の全長または少なくとも一部を含むことができる。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけるＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３ｃ ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ８４、ＣＤ１６６、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＩＣＡＭ－１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２ＤまたはＴ細胞受容体ポリペプチドのネイティブまたは改変された膜貫通領域の全長または少なくとも一部を含むことができる。

本明細書に開示されるＣＡＲ（例えば、操作されたＮＫ細胞などの操作された免疫細胞のため）のヒンジドメインおよび膜貫通ドメインは、同じタンパク質（例えば、ＣＤ８）に由来し得る。あるいは、本明細書に開示されるＣＡＲのヒンジドメインと膜貫通ドメインは、異なるタンパク質に由来し得る。

ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、少なくともまたは最大で約１ シグナル伝達ドメイ
ン、少なくともまたは最大で約２ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約３
シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約４ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約５ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約６ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約７ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約８ シグナル伝達ドメイン、少なくともまたは最大で約９シグナル伝達ドメイン、あるいは少なくともまたは最大で約１０シグナル伝達ドメインまでを含み得る。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけるＣＡＲのシグナル伝達ドメイン（例えば、細胞内シグナル伝達ドメインのシグナル伝達ペプチド）は、ＣＤ３ζ、２Ｂ４、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＤＮＡＭ１、ＣＤ１３７（４１ＢＢ）、ＩＬ２１、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄまたはそれらの任意の組合せの全長または少なくとも一部のポリペプチドを含むことができる。

代替的または追加的に、（すなわち、共刺激ドメイン）、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）におけるシグナル伝達ドメインＣＡＲは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＴＬＡ－４、またはＮＫＧ２Ｄまたはそれらの任意の組合せの全長または少なくとも一部のポリペプチドを含むことができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、少なくともＣＤ８膜貫通ドメインおよび以下から選択される１つ以上を含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＣＡＲ）を含む：（ｉ）２Ｂ４シグナル伝達ドメインおよび（ｉｉ）ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメイン。場合によっては、本明細書に開示される操作された細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、少なくとも（ｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、（ｉｉ）２Ｂ４シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉｉ）ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメインを含む、キメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含む。２Ｂ４シグナル伝達ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインとＤＡＰ１０シグナル伝達ドメインによって挟まれ得る。あるいは、ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインと２Ｂ４シグナル伝達ドメインによって挟まれ得る。場合によっては、本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体は、ＣＤ３ζ由来のさらに別のシグナル伝達ドメインをさらに含むことができる。

本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）の抗原結合性部分の抗原（すなわち、標的抗原）は、細胞表面マーカー、分泌マーカー、または細胞内マーカーであり得る。

本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）の抗原結合性部分（すなわち、標的抗原）の非限定的な例としては、ＡＤＧＲＥ２、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、ＣＣＲＩ、ＣＣＲ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ）、ＣＤ Ｓ、ＣＬＥＣ１２Ａ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ ２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、受容体型チロシンプロテインキナーゼ ｅｒｂ－Ｂ２，３，４、ＥＧＦＩＲ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＥＲＢＢ 葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－ａ、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ｇｐ１００、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、Ｉ
ＣＡＭ－１、インテグリンＢ７、インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ－軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、カッパ、ルイスＡ（ＣＡ１９．９）、ルイスＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、ＬＩＬＲＢ２、ＭＡＲＴ－１、メラノーマ抗原ファミリーＡ １（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＩＣＡ／Ｂ、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、メソセリン（ＭＳＬＮ）、ＮＫＣＳＩ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ｃ－Ｍｅｔ、がん精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、腫瘍胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＰＲＡＩＶＩＥ、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＰＲＡＭＥ前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ＴＩＭ－３、ＴＲＢＣＩ、ＴＲＢＣ２、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、各種病原体抗原（例えば、疾患の原因となるウイルス、細菌、真菌、寄生虫、原虫に由来する病原体抗原）が挙げられる。いくつかの例では、病原体抗原はＨＩＶ、ＨＢＶ、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ライズウイルス、インフルエンザウイルス、コロナウイルス由来である。

本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分の抗原のさらなる例としては、１－４０－β－アミロイド、４－１ＢＢ、５ＡＣ、５Ｔ４、アクチビン受容体様キナーゼ１、ＡＣＶＲ２Ｂ、腺癌抗原、ＡＧＳ－２２Ｍ６、アルファ－フェトプロテイン、アンジオポエチン２、アンジオポエチン３、炭疽毒素、ＡＯＣ３（ＶＡＰ－１）、Ｂ７－Ｈ３、炭疽菌炭疽、ＢＡＦＦ、ベータ－アミロイド、Ｂリンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、Ｃ５、ＣＡ－１２５、イヌＩＬ３１、炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、心筋ミオシン、ＣＣＬ１１（エオタキシン－１）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＤ１１、ＣＤ１８、ＣＤ１２５、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４７（ベイシジン）、ＣＤ１５、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２５（ＩＬ－２受容体のα鎖）、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４１、ＣＤ４４ ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡ関連抗原、ＣＦＤ、ｃｈ４Ｄ５、ＣＬＤＮ１８．２、クロストリジウム・ディフィシレ、クランピング因子Ａ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２、ＣＴＬＡ－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型、サイトメガロウイルス、サイトメガロウイルス糖タンパク質Ｂ、ダビガトラン、ＤＬＬ４、ＤＰＰ４、ＤＲ５、大腸菌志賀毒素１型、大腸菌志賀毒素２型、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＲ、エンドトキシン、ＥｐＣＡＭ、エピシアリン、ＥＲＢＢ３、大腸菌、呼吸器合胞体ウイルスのＦタンパク質、ＦＡＰ、フィブリンＩＩベータ鎖、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、葉酸ヒドロラーゼ、葉酸受容体１、葉酸受容体アルファ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、ガングリオシドＧＤ２、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、グリピカン３、ＧＭＣＳＦ受容体α鎖、ＧＰＮＭＢ、増殖分化因子８、ＧＵＣＹ２Ｃ、ヘマグルチニン、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎ウイルス、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＨＧＦＲ、ヒストン複合体、ＨＩＶ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＮＧＦ、Ｈｓｐ９０、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ヒトＴＮＦ、ヒトベータ－アミロイド、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＩＧＦ－１受容体、ＩＧＦ－１、ＩＧＨＥ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＩＬ２０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－３１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－９、ＩＬＧＦ２、インフルエンザＡヘマグルチニン、インフルエンザＡウイルスヘマグルチニン、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα４β７、インテグリンα４、インテグリンα５β１、インテグリンα７β７、インテグリンαＩＩｂβ３、インテグリンαｖβ３、インターフェロンα／β受容体、インターフェロンガンマ誘導タンパク質、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＢ２（ＣＤ１８）、ＫＩＲ２Ｄ、ルイスＹ抗原、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、ＬＩＮＧＯ－１、リポテイコ酸、ＬＯＸＬ２、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＴＡ、ＭＣＰ－１、メソテリン、ＭＩＦ、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、ミエリン関連糖タンパク質、ミオスタチン、Ｎ
ＣＡ－９０（顆粒球抗原）、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ１、ＮＧＦ、Ｎ－グリコリルノイラミン酸、ＮＯＧＯ－Ａ、Ｎｏｔｃｈ受容体、ＮＲＰ１、アナウサギ、ＯＸ－４０、ｏｘＬＤＬ、ＰＣＳＫ９、ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、ＰＤＧＦ－Ｒα、リン酸－ナトリウム共輸送体、ホスファチジルセリン、血小板由来成長因子受容体ベータ、前立腺癌細胞、緑膿菌、狂犬病ウイルス糖タンパク質、ＲＡＮＫＬ、呼吸器合胞体ウイルス、ＲＨＤ、リーサス因子、ＲＯＮ、ＲＴＮ４、スクレロスチン、ＳＤＣ１、セレクチンＰ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＯＳＴ、スフィンゴシン－１－リン酸、黄色ブドウ球菌、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ－７２、Ｔ細胞受容体、ＴＥＭ１、テネイシンＣ、ＴＦＰＩ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＭＵＣ１の腫瘍特異的グリコシル化、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質２、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＹＲＰ１（糖タンパク質７５）、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、およびＶＷＦが挙げられる。

本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分の抗原のさらなる例としては、７０７－ＡＰ、ビオチン化分子、ａ－アクチニン－４、ａｂｌ－ｂｃｒ ａｌｂ－ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ－ｂｃｒ ａｌｂ－ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ－２、アネキシン ＩＩ、ＡＲＴ－４、ＢＡＧＥ、ｂ－カテニン、ｂｃｒ－ａｂｌ、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ－４、ＣＡＧ－３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ－８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、Ｃｙｐ－Ｂ、ＤＡＭ－１０、ＤＡＭ－６、ＤＥＫ－ＣＡＮ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ－Ｂ２、ｅｒｂ－Ｂ３、ｅｒｂ－Ｂ４、ＥＳ－ＥＳＯ－１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、ＦＧＦ－５、ＦＮ、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７Ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、Ｈｅｒ－２、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＨＳＰ７０－２ Ｍ、ＨＳＴ－２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ－２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ－ＲＡＳ、Ｌ１細胞接着分子、ＬＡＧＥ－１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ルイスＹ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－１０、ＭＡＧＥ－１２、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン－Ａ、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ－ＣＳＦ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン、ＮＡ８８－Ａ、Ｎｅｏ－ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ－ＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＯＡ１、ＯＧＴ、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ－９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ－２、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ－７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ－３、ＴＲＧ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ－２－６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＷＴ１、α－葉酸受容体、およびκ軽鎖が挙げられる。

本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分の抗原の付加的な例としては、抗体、そのフラグメント、またはそのバリアントが挙げられる。このような抗体は、天然抗体（例えば、Ｂ細胞のような対象の免疫細胞によって天然に分泌される）、合成抗体、または改変抗体であり得る。場合によっては、本明細書に開示されるキメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分の抗原としては、以下からなる群から選択される抗体のＦｃドメインを含み得る：２０－（７４）－（７４）（ミラツズマブ；ベルツズマブ）
、２０－２ｂ－２ｂ、３Ｆ８、７４－（２０）－（２０）（ミラツズマブ；ベルツズマブ）、８Ｈ９、Ａ３３、ＡＢ－１６Ｂ５、アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アブシキシマブ、アビツズマブ（ａｂｉｔｕｚｕｍａｂ）、アクトクスマブ、アダリムマブ、ＡＤＣ－１０１３、ＡＤＣＴ－３０１、ＡＤＣＴ－４０２、アデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、ＡＦＭ１３、アフツズマブ、ＡＧＥＮ１８８４、ＡＧＳ１５Ｅ、ＡＧＳ－１６Ｃ３Ｆ、ＡＧＳ６７Ｅ、アラシズマブペゴル（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブペンテテート、アマツキシマブ、ＡＭＧ２２８、ＡＭＧ８２０、アナツモマブマフェナトクス（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アネツマブラブタンシン（ａｎｅｔｕｍａｂ ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、アニフロルマブ（ａｎｉｆｒｏｌｕｍａｂ）、アンルキンズマブ、ＡＰＮ３０１、ＡＰＮ３１１、アポリズマブ、ＡＰＸ００３／ＳＩＭ－ＢＤ０８０１（セバシズマブ（ｓｅｖａｃｉｚｕｍａｂ））、ＡＰＸ００５Ｍ、アルシツモマブ、ＡＲＸ７８８、アスクリンバクマブ（ａｓｃｒｉｎｖａｃｕｍａｂ）、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、ＡＳＧ－１５ＭＥ、アテゾリズマブ、アチヌマブ（ａｔｉｎｕｍａｂ）、ＡＴＬ１０１、アトリズマブ（ａｔｌｉｚｕｍａｂ）（トシリズマブともいう）、アトロリムマブ（ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、アベルマブ、Ｂ－７０１、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ＢＡＹ１１２９９８０、ＢＡＹ１１８７９８２、ベクツモマブ、ベゲロマブ（ｂｅｇｅｌｏｍａｂ）、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ、Ｂｅｔａｌｕｔｉｎ（１７７Ｌｕ－テトラキセタン－テツロマブ（ｔｅｔｕｌｏｍａｂ））、ベバシズマブ、ＢＥＶＺ９２（ベバシズマブバイオシミラー）、ベズロトクスマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＨＱ８８０、ＢＩ８３６８８０、ＢＩ－５０５、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ（ｂｉｍｅｋｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ＢＩＷ－８９６２、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＢＭＳ－９８６０１２、ＢＭＳ－９８６０１６、ＢＭＳ－９８６１４８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＢＮＣ１０１、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ＢｒｅｖａＲｅｘ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ（ｂｒｏｎｔｉｃｔｕｚｕｍａｂ）、Ｃ２－２ｂ－２ｂ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ（ｃａｐｌａｃｉｚｕｍａｂ）、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＢＲ９６－ドキソルビシンイムノコンジュゲート、ＣＢＴ１２４（ベバシズマブ）、ＣＣ－９０００２、ＣＤＸ－０１４、ＣＤＸ－１４０１、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、ＣＧＥＮ－１５００１Ｔ、ＣＧＥＮ－１５０２２、ＣＧＥＮ－１５０２９、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＧＥＮ－１５０５２、ＣＧＥＮ－１５０９２、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブ・ボガトクス（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ ｂｏｇａｔｏｘ）、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ＣＭ－２４、コドリツズマブ（ｃｏｄｒｉｔｕｚｕｍａｂ）、コルツキシマブラブタンシン（ｃｏｌｔｕｘｉｍａｂ ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、コナツムマブ、コンシズマブ（ｃｏｎｃｉｚｕｍａｂ）、Ｃｏｔａｒａ（ヨウ素Ｉ－１３１デルロツキシマブ（ｄｅｒｌｏｔｕｘｉｍａｂ）ビオチン）、ｃＲ６２６１、クレネズマブ、ＤＡ－３１１１（トラスツズマブバイオシミラー）、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル（ｄａｐｉｒｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ダラツムマブ、Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ Ｅｎｈａｎｚｅ（ダラツムマブ）、Ｄａｒｌｅｕｋｉｎ、デクトレクマブ（ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ）、デムシズマブ、デニンツズマブマホドチン（ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、デノスマブ、デパツキシズマブ、デパツキシズマブマホドチン、デルロツキシマブビオチン（ｄｅｒｌｏｔｕｘｉｍａｂ ｂｉｏｔｉｎ）、デツモマブ（ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ＤＩ－Ｂ４、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ（ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ＤＫＮ－０１、ＤＭＯＴ４０３９Ａ、ドルリモマブアリトクス（ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ ａｒｉｔｏｘ）、ドロジツマブ、ＤＳ－１１２３、ＤＳ－８８９５、デュリゴツマブ（ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ（ｄｕｓ
ｉｇｉｔｕｍａｂ）、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ（ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、エロツズマブ、エルシリモマブ（ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エマクツズマブ（ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、エナバツズマブ、エンフォルツマブベドチン（ｅｎｆｏｒｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、エンリモマブペゴル、エノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン（ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ（ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ）、エボロクマブ、エクスビビルマブ（ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ、ファラリモマブ（ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ）、ファーレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、ＦＦ－２１１０１、ＦＧＦＲ２抗体－薬物コンジュゲート、Ｆｉｂｒｏｍｕｎ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ（ｆｉｒｉｖｕｍａｂ）、フランボツマブ、フレチクマブ（ｆｌｅｔｉｋｕｍａｂ）、フォントリズマブ、フォラルマブ（ｆｏｒａｌｕｍａｂ）、フォラビルマブ（ｆｏｒａｖｉｒｕｍａｂ）、ＦＰＡ１４４、フレソリムマブ、ＦＳ１０２、フルラヌマブ、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ（ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲリリムズマブ（Ｇｅｒｉｌｉｍｚｕｍａｂ）、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブべドチン、ＧＮＲ－００６、ＧＮＲ－０１１、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ＧＳＫ２８４９３３０、ＧＳＫ２８５７９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＧＳＫ３３５９６０９、グセルクマブ、Ｈｕ１４．１８Ｋ３２２Ａ ＭＡｂ、ｈｕ３Ｓ１９３、Ｈｕ８Ｆ４、ＨｕＬ２Ｇ７、ＨｕＭａｂ－５Ｂ１、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、ＩＧＮ００２、ＩＧＮ５２３、イゴボマブ（ｉｇｏｖｏｍａｂ）、ＩＭＡＢ３６２、ＩＭＡＢ３６２（クラウジキシマブ（ｃｌａｕｄｉｘｉｍａｂ））、イマルマブ（ｉｍａｌｕｍａｂ）、ＩＭＣ－ＣＳ４、ＩＭＣ－Ｄ１１、イムシロマブ（ｉｍｃｉｒｏｍａｂ）、イムガツズマブ、ＩＭＧＮ５２９、ＩＭＭＵ－１０２（イットリウムＹ－９０エプラツズマブテトラキセタン）、ＩＭＭＵ－１１４、ＩｍｍｕＴｕｎｅ ＩＭＰ７０１アンタゴニスト抗体、ＩＮＣＡＧＮ１８７６、インクラクマブ、ＩＮＣＳＨＲ１２１０、インダツキシマブラブタンシン（ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）、インデュサツマブベドチン（ｉｎｄｕｓａｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、Ｉｐａｆｒｉｃｅｐｔ、ＩＰＨ４１０２、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イスチラツマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ＪＮＪ－５６０２２４７３、ＪＮＪ－６１６１０５８８、ケリキシマブ、ＫＴＮ３３７９、Ｌ１９ＩＬ２／Ｌ１９ＴＮＦ、ラベツズマブ、ラベツズマブゴビテカン、ＬＡＧ５２５、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、Ｌ－ＤＯＳ４７、レブリキズマブ、レマレソマブ（ｌｅｍａｌｅｓｏｍａｂ）、レンジルマブ（ｌｅｎｚｉｌｕｍａｂ）、レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、ロイコツキシマブ（Ｌｅｕｋｏｔｕｘｉｍａｂ）、レクサツムマブ、リビビルマブ（ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、リファスツズマブベドチン（ｌｉｆａｓｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、リゲリズマブ（ｌｉｇｅｌｉｚｕｍａｂ）、リロトマブサテトラキセタン（ｌｉｌｏｔｏｍａｂ ｓａｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、リンツズマブ、リリルマブ、ＬＫＺ１４５、ロデルシズマブ（ｌｏｄｅｌｃｉｚｕｍａｂ）、ロキベトマブ（ｌｏｋｉｖｅｔｍａｂ）、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル（ｌｕｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ（ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、ＬＹ３１６４５３０、マパツムマブ、マルジェツキシマブ、マスリモマブ（ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ）、マツズマブ、マブリリムマブ、ＭＢ３１１、ＭＣＳ－１１０、ＭＥＤＩ０５６２、ＭＥＤＩ－０６３９、ＭＥＤＩ０６８０、ＭＥＤＩ－３６１７、ＭＥＤＩ－５５１（イネビリズマブ（ｉｎｅｂｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＭＥＤＩ－５６５、ＭＥＤＩ６４６９、メポリズマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ＭＧＢ４５３、ＭＧＤ００６／Ｓ８０８８０、ＭＧＤ００７、ＭＧＤ００９、ＭＧＤ
０１１、ミラツズマブ、ミラツズマブ－ＳＮ－３８、ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミツモマブ、ＭＫ－４１６６、ＭＭ－１１１、ＭＭ－１５１、ＭＭ－３０２、モガムリズマブ、ＭＯＲ２０２、ＭＯＲ２０８、ＭＯＲＡｂ－０６６、モロリムマブ（ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、モタビズマブ、モキセツモマブシュードトクス、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス（ｎａｃｏｌｏｍａｂ ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナミルマブ（ｎａｍｉｌｕｍａｂ）、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ（ｎｅｍｏｌｉｚｕｍａｂ）、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、ＮＯＶ－１０、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ（ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ（ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ、ＯＭＰ－１３１Ｒ１０、ＯＭＰ－３０５Ｂ８３、オナルツズマブ、オンツキシズマブ（ｏｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、オピシヌマブ（ｏｐｉｃｉｎｕｍａｂ）、オポルツズマブモナトクス（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ、オルチクマブ（ｏｒｔｉｃｕｍａｂ）、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ（ｏｔｌｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ＯＸ００２／ＭＥＮ１３０９、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ（ｐａｎｋｏｍａｂ）、ＰａｎｋｏＭａｂ－ＧＥＸ、パノバクマブ（ｐａｎｏｂａｃｕｍａｂ）、パルサツズマブ（ｐａｒｓａｔｕｚｕｍａｂ）、パスコリズマブ、パソツキシズマブ（ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ、パトリツマブ（ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ＰＡＴ－ＳＣ１、ＰＡＴ－ＳＭ６、ペンブロリズマブ、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペラキズマブ（ｐｅｒａｋｉｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ＰＦ－０５０８２５６６（ウ

トミルマブ）、ＰＦ－０６６４７２６３、ＰＦ－０６６７１００８、ＰＦ－０６８０１５９１、ピディリズマブ、ピナツズマブベドチン（ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ピンツモマブ（ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ（ｐｒｉｔｏｘａｘｉｍａｂ）、プリツムマブ（ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ＰＲＯ１４０、Ｐｒｏｘｉｎｉｕｍ、ＰＳＭＡ ＡＤＣ、キリズマブ、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラフィビルマブ（ｒａｆｉｖｉｒｕｍａｂ）、ラルパンシズマブ（ｒａｌｐａｎｃｉｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ（ｒｅｆａｎｅｚｕｍａｂ）、レガビルマブ、ＲＥＧＮ１４００、ＲＥＧＮ２８１０／ＳＡＲ４３９６８４、レスリズマブ、ＲＦＭ－２０３、ＲＧ７３５６、ＲＧ７３８６、ＲＧ７８０２、ＲＧ７８１３、ＲＧ７８４１、ＲＧ７８７６、ＲＧ７８８８、ＲＧ７９８６、リロツムマブ、リヌクマブ（ｒｉｎｕｃｕｍａｂ）、リツキシマブ、ＲＭ－１９２９、ＲＯ７００９７８９、ロバツムマブ、ロレデュマブ（ｒｏｌｅｄｕｍａｂ）、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、ＳＡＲ４０８７０１、ＳＡＲ５６６６５８、サリルマブ、ＳＡＴ ０１２、サツモマブペンデチド、ＳＣＴ２００、ＳＣＴ４００、ＳＥＡ－ＣＤ４０、セクキヌマブ、セリバンツマブ（ｓｅｒｉｂａｎｔｕｍａｂ）、セトキサキシマブ（ｓｅｔｏｘａｘｉｍａｂ）、セヴィルマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ｂ、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ（ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン（ｓｏｆｉｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ソラネズマブ、ソリトマブ（ｓｏｌｉｔｏｍａｂ）、ソネプシズマブ（ｓｏｎｅｐｃｉｚｕｍａｂ）、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ（ｓｕｖｉｚｕｍａｂ）、ＳＹＤ９８５、ＳＹＭ００４（フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）およびモドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ））、Ｓｙｍ０１５、ＴＡＢ０８、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、
タネズマブ、タニビルマブ（Ｔａｎｉｂｉｒｕｍａｂ）、タプリツモマブパプトクス（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ ｐａｐｔｏｘ）、タレクスツマブ（ｔａｒｅｘｔｕｍａｂ）、ＴＢ－４０３、テフィバズマブ、Ｔｅｌｅｕｋｉｎ、テリモマブアリトクス（ｔｅｌｉｍｏｍａｂ ａｒｉｔｏｘ）、テナツモマブ（ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ（ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ）、テツロマブ（ｔｅｔｕｌｏｍａｂ）、ＴＧ－１３０３、ＴＧＮ１４１２、トリウム－２２７－エプラツズマブコンジュゲート、チシリムマブ、ティガツズマブ、チルドラキズマブ、チソツマブベドチン（Ｔｉｓｏｔｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ（ｔｏｓａｔｏｘｕｍａｂ）、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ＴＲＢＳ０７、ＴＲＣ１０５、トレガリズマブ（ｔｒｅｇａｌｉｚｕｍａｂ）、トレメリムマブ、トレボグルマブ（ｔｒｅｖｏｇｒｕｍａｂ）、ＴＲＰＨ０１１、ＴＲＸ５１８、ＴＳＲ－０４２、ＴＴＩ－２００．７、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、Ｕ３－１５６５、Ｕ３－１７８４、ウブリツキシマブ（ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バダスツキシマブタリリン（Ｖａｄａｓｔｕｘｉｍａｂ Ｔａｌｉｒｉｎｅ）、バンドルツズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ（ｖａｎｕｃｉｚｕｍａｂ）、バパリキシマブ（ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、バテリズマブ（ｖａｔｅｌｉｚｕｍａｂ）、ＶＢ６－８４５、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ（ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマホドチン、ボツムマブ、ＹＹＢ－１０１、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ（ｚａｔｕｘｉｍａｂ）、ジラリムマブ（ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、およびゾリモマブアリトックス。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含むことができる、抗原結合ドメインは、以下を含む群から選択される１つ以上の（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）メンバーに特異的かつ優先的に結合することができる。ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、およびｇｐ１００。ＮＫＧ２Ｄリガンドの非限定的な例は、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択される１つ以上の（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）メンバーを含む。

場合によっては、本明細書中に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、標的細胞の抗原と特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む、キメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含む。かつ操作された免疫細胞は、キメラポリペプチド受容体と同じ抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性を示すことができる。このように、操作された免疫細胞の集団は、例えば、それを必要としている対象に投与時に後、お互いを標的とし、殺し合うことを避けることができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含み得、抗原結合ドメインは、ＣＤ２３に特異的かつ優先的に結合することができる。場合によっては、操作された免疫細胞のＣＤ２３をコードする内在性遺伝子を改変して、内在性ＣＤ２３の低下した発現または活性を効果的にすることができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣ
ＡＲ）を含み得、抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３に特異的かつ優先的に結合することができる。場合によっては、操作された免疫細胞のＣＤ１２３をコードする内在性遺伝子を改変して、内在性ＣＤ１２３の低下した発現または活性を効果的にすることができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含み得、抗原結合ドメインは、ＣＤ３８に特異的かつ優先的に結合することができる。場合によっては、ＣＤ３８をコードする免疫細胞内在性遺伝子を改変して、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性を効果的にすることができる。場合によっては、ＣＤ３８に対するキメラポリペプチド受容体からなる対象操作された免疫細胞は、形質細胞を標的とし、死（または分解）をもたらすことができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含み得、抗原結合ドメインは、ＣＤ３８に特異的かつ優先的に結合することができる。いくつかの例では、操作された免疫細胞は、単離されたＥＳＣまたは誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）に由来するＮＫ細胞である。場合によっては、操作された免疫細胞のＣＤ３８をコードする内在性遺伝子を改変して、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性を作用させることができる。

場合によっては、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体（例えば、ＴＦＰまたはＣＡＲ）を含み得、抗原結合ドメインは、ＣＤ７に特異的かつ優先的に結合することができる。場合によっては、操作された免疫細胞のＣＤ７をコードする内在性遺伝子を改変して、内在性ＣＤ７の低下した発現または活性を効果的にすることができる。

Ｅ． 幹細胞

本明細書に開示されるいずれかの操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、単離された幹細胞（例えば、ＥＳＣ）または誘導幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来することができる。単離された幹細胞または誘導幹細胞は、操作された免疫細胞を生成するために改変（例えば、遺伝子改変）され得る。

場合によっては、幹細胞（例えば、ＥＳＣやｉＰＳＣ）の多能性は、部分的に、細胞の多能性特性を評価することによって決定することができる。多能性特性は以下を含み得るが、これらに限定されない：（ｉ）多能性幹細胞の形態、（ｉｉ）無制限に自己複製する可能性；（ｉｉｉ）ＳＳＥＡ１（マウスのみ）、ＳＳＥＡ３／４、ＳＳＥＡ５、ＴＲＡ１－６０／８１、ＴＲＡ１－８５、ＴＲＡ２－５４、ＧＣＴＭ－２、ＴＧ３４３、ＴＧ３０、ＣＤ９、ＣＤ２９、ＣＤ１３３／プロミン、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ５６、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、ＣＤ３０および／またはＣＤ５０を含むがこれらに限定されない、多能性幹細胞マーカーの発現；（ｉｖ）３つの体細胞系列（外胚葉、中胚葉、内胚葉）のすべてに分化する能力、（ｖ）３つの体細胞系列からなる奇形腫の形成、（ｖｉ）３つの体細胞系列の細胞からなる胚様体の形成。

場合によっては、幹細胞（例えば、ＥＳＣまたはｉＰＳＣ）は、ＣＤ３４＋造血幹細胞を生成する（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞への分化を誘導する）ように遺伝子改変され得る。幹細胞は、誘導された造血幹細胞の分化前、分化後、または分化中に、本明細書に開示される異種ポリペプチド（例えば、サイトカイン、受容体など）のいずれか１つを発現するように遺伝子改変され得る。幹細胞は、誘導造血幹細胞の分化前、分化後、または分化中に、本明細書に開示される内在性遺伝子またはポリペプチド（例えば、サイトカイ
ン、受容体など）のいずれか１つの発現または活性を低下させるように遺伝子改変され得る。場合によっては、そのような遺伝子改変ＣＤ３４＋造血幹細胞は、本開示の操作された免疫細胞のいずれか１つであるか、またはその供給源である。

いくつかの例では、ＣＤ３４＋造血幹細胞に分化させるため、本明細書に開示される幹細胞は、ＲＯＣＫｉ（Ｙ－２７６３２）（例えば、約１０マイクロモル（μＭ））、ＳＣＦ（例えば、培地１ｍｌあたり約４０ナノグラム（ｎｇ／ｍＬ））、ＶＥＧＦ（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬの培地）、およびＢＭＰ－４（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬの培地）を添加したＡＰＥＬ培地中で培養することができる。

場合によっては、ＣＤ３４＋造血幹細胞（例えば、本開示の操作された免疫細胞のいずれか１つ以上の特徴で遺伝子改変されたもの）を、例えばＴ細胞やＮＫ細胞などの、コミットした免疫細胞に分化誘導され得る。このように、場合によっては、分化誘導プロセスは、本開示の操作されたＮＫ細胞のいずれか１つを生成する。

いくつかの例では、遺伝子組換えＣＤ３４＋造血幹細胞をＩＬ－３（例えば、約５ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－７（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－１５（例えば、約１０ ｎｇ／ｍＬ）、ＳＣＦ（例えば、約２０ ｎｇ／ｍＬ）、およびＦｌｔ３Ｌ（例えば、約１０
ｎｇ／ｍＬ）の存在下で培養し、ＣＤ４５＋ＮＫ細胞に分化させる。

場合によっては、ＣＤ４５＋ＮＫ細胞は、ＩＬ－２、ｍｂＩＬ－２１ ａＡＰＣを含む培地中で、ガス透過性迅速培養（Ｇ－Ｒｅｘ）プラットフォームを用いて、拡大され得る。

場合によっては、本明細書に開示されるｉＰＳＣ－由来ＮＫ細胞を、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、またはＩＬ－２１を含む１つまたは複数の異種サイトカインとともに培養され得る。場合によっては、本明細書に開示されるｉＰＳＣ由来ＮＫ細胞は、Ｉｌ－２、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１からなる群より選択される１種または２種以上の異種サイトカインとともに培養され得る（例えば、細胞拡大のために）。場合によっては、本明細書に開示されるｉＰＳＣ由来ＮＫ細胞は、Ｉｌ－２、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－１５、ＩＬ－２およびＩＬ－２１、またはＩＬ－１５およびＩＬ－２１）からなる群より選択される２種以上の異種サイトカインと、同時または任意の順序で順次培養することができる。場合によっては、本明細書に開示されるｉＰＳＣ由来ＮＫ細胞は、Ｉｌ－２、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１のすべてと同時または任意の順序で順次培養することができる。

Ｆ． 遺伝子編集または遺伝子材料の送達

本明細書に開示される遺伝子編集部分は、ＣＲＩＳＰＲ関連ポリペプチド（Ｃａｓ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ジンクフィンガー関連遺伝子調節ポリペプチド、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、転写活性化因子様エフェクター関連遺伝子調節ポリペプチド、メガヌクレアーゼ、天然マスター転写因子、エピジェネティック修飾酵素、リコンビナーゼ、フリッパーゼ、トランスポザーゼ、ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）、アルゴノートタンパク質、それらの任意の誘導体、それらの任意のバリアント、またはそれらの任意のフラグメントを含む。一部の実施形態において、アクチュエータモエティはＣａｓタンパク質を含み、本システムはさらに、Ｃａｓタンパク質と複合体形成するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む。一部の実施形態において、アクチュエータモエティは、Ｃａｓタンパク質と複合体形成することができるｇＲＮＡと複合体形成したＲＢＰを含む。いくつかの態様において、ｇＲＮＡは、標的ポリヌクレオチドに対して少なくとも８０％の配列同一性を呈する標的指向セグメントを含む。一部の実施
形態において、Ｃａｓタンパク質はＤＮＡ切断活性を実質的に欠く。

場合によっては、適切な遺伝子編集部分は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）タンパク質またはＣａｓヌクレアーゼ、例えばＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、ＩＶ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド、およびＶＩ型ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ポリペプチド；ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）；転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）；メガヌクレアーゼ；ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）；ＣＲＩＳＰＲ関連ＲＮＡ結合タンパク質；リコンビナーゼ；フリッパーゼ；トランスポザーゼ；アルゴノートタンパク質（例えば、原核生物アルゴノート（ｐＡｇｏ）、古細菌アルゴノート（ａＡｇｏ）、真核生物アルゴノート（ｅＡｇｏ））；それらの任意の誘導体；それらの任意のバリアント；およびそれらの任意のフラグメントを含む。

Ｃａｓタンパク質の非限定的な例として、ｃ２ｃ１、Ｃ２ｃ２、ｃ２ｃ３、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ５ｅ（ＣａｓＤ）、Ｃａｓ６、Ｃａｓ６ｅ、Ｃａｓ６ｆ、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８ａ、Ｃａｓ８ａ１、Ｃａｓ８ａ２、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１またはＣｓｘ１２）、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１０ｄ、Ｃａｓ１Ｏ、Ｃａｓ１Ｏｄ、ＣａｓＦ、ＣａｓＧ、ＣａｓＨ、Ｃｐｆ１、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１（ＣａｓＡ）、Ｃｓｅ２（ＣａｓＢ）、Ｃｓｅ３（ＣａｓＥ）、Ｃｓｅ４（ＣａｓＣ）、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１Ｏ、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、およびＣｕｌ９６６、ならびにそれらのホモログまたは修飾型が挙げられる。

場合によっては、本明細書に開示される遺伝子編集部分は、追加機能性部分と融合し得る（例えば、融合部分を形成するために）。追加機能性部分の機能の非限定的な例としてメチルトランスフェラーゼ活性、デメチラーゼ活性、ジスムターゼ活性、アルキル化活性、脱プリン化活性、酸化活性、ピリミジン二量体形成活性、インテグラーゼ活性、トランスポザーゼ活性、リコンビナーゼ活性、ポリメラーゼ活性、リガーゼ活性、ヘリカーゼ活性、フォトリアーゼ活性またはグリコシラーゼ活性、アセチルトランスフェラーゼ活性、デアセチラーゼ活性、キナーゼ活性、ホスファターゼ活性、ユビキチンリガーゼ活性、脱ユビキチン化活性、アデニル化活性、脱アデニル化活性、ＳＵＭＯ化活性、脱ＳＵＭＯ化活性、リボシル化活性、脱リボシル化活性、ミリストイル化活性、リモデリング活性、プロテアーゼ活性、オキシドレダクターゼ活性、トランスフェラーゼ活性、ヒドロラーゼ活性、リアーゼ活性、イソメラーゼ活性、シンターゼ活性、シンテターゼ活性、または脱ミリストイル化活性が挙げられる。例えば、融合タンパク質はＣａｓタンパク質とエフェクターまたはリプレッサーの機能性部分との融合体である。

代替的または追加的に、遺伝子編集（例えば、ノックイン）や異種遺伝子材料の導入は、宿主細胞（例えば、本明細書に開示されるように、幹細胞、造血幹細胞など）に核酸を導入するための、他のウイルスベースおよび非ウイルスベースの遺伝子移入方法を使用することができる。そのような方法は、本開示のポリペプチド分子をコードする核酸を培養中の細胞（または宿主生物中の細胞）に投与するために、使用することができる。ウイルスベクター送達システムとしては、細胞への送達後に、エピソームゲノムを有するか、組み込まれたゲノムを有することができる、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスを挙げることができる。非ウイルスベクター送達系としては、ＤＮＡプラスミド、ＲＮＡ（例えば、本明細書に記載のベクターの転写産物）、裸の核酸、およびリポソームなどの送達ビヒ
クルと複合体形成した核酸を挙げることができる。

特定の細胞を標的とし、ウイルスペイロードを細胞の核へと輸送するには、ＲＮＡウイルスまたはＤＮＡウイルスに基づくシステムを使用することができる。ウイルスベクターを直接投与するか（インビボ）、インビトロで細胞を処理するためにウイルスベクターを使用することができ、修飾された細胞を任意で投与することができる（エクスビボ）。あるいは、ウイルスベクターを直接（インビボで）対象に投与することもできる。ウイルスに基づくシステムとしては、遺伝子移入のためのレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純ヘルペスウイルスベクターを挙げることができる。宿主ゲノムへの組込みは、レトロウイルス、レンチウイルス、およびアデノ随伴ウイルス遺伝子移入法を使って行うことができ、これは挿入されたトランスジーンの長期発現をもたらしうる。

核酸の非ウイルス送達の方法としては、リポフェクション、ヌクレオフェクション、マイクロインジェクション、バイオリスティック法、ビロゾーム、リポソーム、イムノリポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、および作用物質によって強化された（ａｇｅｎｔ－ｅｎｈａｎｃｅｄ）ＤＮＡの取り込みを挙げることができる。ポリヌクレオチドの高効率受容体認識リポフェクションに適したカチオン性脂質および中性脂質を使用することができる。

代替的または追加的に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を抑制または沈黙させるために利用することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの非限定的な例としては、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を挙げることができる。

Ｇ． 併用治療

本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、それを必要としている対象の併用治療薬と組み合わせることができる。場合によっては、操作された免疫細胞は、対象への併用治療剤の投与前、同時、または投与後に、対象に投与することができる。

一態様では、本開示は、（ａ）本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つと、（ｂ）併用治療剤（すなわち、単独の治療剤）（例えば、抗ＣＤ２０抗体や抗ＰＤ１抗体などの抗体）を含む組成物を提供する。場合によっては、操作された免疫細胞は、以下のうちの１つ以上を含むことができる：（ｉ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの異種ＩＬ）、（ｉｉ）本明細書に開示される増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、および（ｉｉｉ）本明細書に開示される抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体。いくつかの例では、共治療剤は抗ＣＤ２０抗体を含む。

場合によっては、操作された免疫細胞は、本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）、および以下の一方または両方（ｉｉ）増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、および（ｉｉｉ）抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含むことができる。

場合によっては、操作された免疫細胞は、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、および以下の一方または両方（ｉ）異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）および（ｉｉｉ）抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含むことができる。

場合によっては、操作された免疫細胞は、抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、および以下の一方または両方（ｉ）異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）および（ｉｉ）増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントを含むことができる。

併用治療剤の非限定的な例としては、細胞毒性剤、化学療法剤、成長阻害剤、放射線療法に使用される薬剤、血管新生阻害剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、および癌を治療するための他の薬剤、例えば、抗ＣＤ２０抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ペムブロリズマブ）、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、以下の１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）：ＰＤＧＦＲ－β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、その他の生理活性剤、有機化学剤など、が挙げられる。

「細胞傷害剤」という用語は、一般に、細胞の機能を阻害または阻止する物質、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤の非限定的な例としては、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｌｕの放射性同位体）、化学療法剤、例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンおよび他のインターカレート剤、核分解酵素などの酵素およびそのフラグメント、抗生物質、細菌、真菌、植物、動物由来の低分子毒素や酵素活性毒素などの毒素など

化学療法剤の非限定的な例として、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標登録））のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）のようなアジリジン類；アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン類およびメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；デルター９ーテトラヒドロカンナビノール（ドロナビロール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；βーラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴー１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチン、および９ーアミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロランブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、チョロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン
、ラニムスチンなどのニトロスレアス（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンωＩ１；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリンアナログ、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン類、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）類、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、または）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ－２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン
（ＥＬＩＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド類、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭパクリタキセルのクレモフォー無添加アルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；プラチナアナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のようなレチノイド；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；および上述したものの薬学的に許容可能な塩類、酸類または誘導体、並びに、上記のうちの２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略称）、およびＦＯＬＦＯＸ（５ーＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を用いる治療計画の略称）が挙げられる。追加化学療法剤は、抗体薬物複合体、例えばメイタンシノイド（ＤＭ１など）、オーリスタチンＭＭＡＥやＭＭＡＦなどの化学療法剤を含む。

化学療法剤の例に含まれるのは、がんの増殖を促進するホルモンの影響を調節、低減、遮断または阻害するように働く「抗ホルモン剤」や「内分泌治療薬」で、多くの場合全身性の治療の形態のものがある。それらはそれ自体がホルモンであり、例えば抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプター下方制御（ＥＲＤ）、卵巣を抑制または停止させる機能を有する薬剤、例えば、ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ等の黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、リュープロリド酢酸塩、ゴセレリン酢酸塩、ブセレリン酢酸塩およびトリプトレリン；フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミド等のその他抗アンドロゲン；および副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールを含む。加えて、このような化学療法剤の定義には、クロドロン酸等のビスホスホネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ（登録商標）、ＤＩＤＲＯＣＡＬ エチドロン酸、ＮＥ－５８０９５、ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）ゾレドロン酸／ゾレドロン酸、ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標）アレンドロン酸、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）パミドロン酸、ＳＫＥＬＩＤ チルドロン酸、またはＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標）リセドロン酸、並びにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド、特に付着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ－α、Ｒａｌｆ、Ｈ－Ｒａｓ、および上皮成長因子受容体（ＥＧＦーＲ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ ワクチン、およびＶＡＸＩＤ ワクチン；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ ｒｍＲＨ；ラパチニブｄｉｔｏｓｙｌａｔｅ（ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢー２およびＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）および上記のものの製薬的に許容される塩類、酸類または誘導体を含む。

化学療法剤の例には、抗体、例えばアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）および抗体薬コンジュゲート、ゲムツズマブ、オゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）も含まれる。本発明の化合物と組合わせた作用物質としての治療上の潜在的可能性を有する追加のヒト化モノクローナル抗体としては、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、およびインターロイキンー１２ ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子的に修飾された組換え型排他的ヒト配列完全長ＩｇＧ_１λ抗体である抗インターロイキンー１２（ＡＢＴー８７４／Ｊ６９５，Ｗｙｅｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が含まれる。

化学療法剤の例には、ＥＧＦＲ－標的剤（例えば、小分子、抗体など）などの、「チロシンキナーゼ阻害薬」；小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害薬、例えばＴａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５；ＥｒｂＢ２レセプターチロシンキナーゼの経口選択的阻害薬であるＣＰー７２４、７１４（ＰｆｉｚｅｒおよびＯＳＩ）；ＥＧＦＲに選好的に結合するもののＨＥＲ２およびＥＧＦＲ過剰発現細胞を両方共阻害するＥＫＢー５６９（Ｗｙｅｔｈより入手可）などの二重ＨＥＲ阻害薬；経口ＨＥＲ２およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬であるラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６；ＧｌａｘｏーＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅより入手可）；ＰＫＩー１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓより入手可）；カネルチニブ（ＣＩー１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などの汎ＨＥＲ阻害薬；Ｒａｆー１シグナル伝達を阻害するＩＳＩＳ Ｒｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス剤ＩＳＩＳー５１３２などのＲａｆー１阻害薬；イマチニブメシレート（ＧＬＥＥＶＥＣ、Ｇｌａｘｏ
ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅより入手可）などの非ＨＥＲ標的化チロシンキナーゼ阻害薬；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒより入手可）などの多重標的化チロシンキナーゼ阻害薬；例えばバタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧより入手可）などのＶＥＦＧレセプターチロシンキナー
ゼ阻害薬；ＭＡＰＫ細胞外調節型キナーゼＩ阻害薬ＣＩー１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａより入手可）；キナゾリン類、例えばＰＤ １５３０３５，４ー（３ークロロアニリノ）キナゾリン；ピリドピリミジン類；ピリミドピリミジン類；ピロロピリミジン類、例えばＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１およびＣＧＰ６２７０６；ピラゾロピリミジン類、４ー（フェニルアミノ）ー７Ｈーピロロ［２，３ーｄ］ピリミジン類；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５ービス（４ーフルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含むチルホスチン；ＰＤー０１８３８０５（ＷａｒｎｅｒーＬａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えばＨＥＲをコードする核酸）；キノキサリン類（特許文献２）；トリホスチン類（特許文献２）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫー７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；汎ＨＥＲ阻害剤、例えばＣＩー１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；アフィニタック（ＩＳＩＳ ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；イマチニブメシレート（ＧＬＥＥＶＥＣ）；ＰＫＩ １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩー１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢー５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫー７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＩＮＣー１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、およびラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））も含まれる。

化学療法剤の例にはまた、デキサメタゾン、インターフェロン類、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベバクジマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エロチニブ、フィルグラスチム、ヒストレリンアセテート、イブリツモマブ、インターフェロンアルファー２ａ、インターフェロンアルファー２ｂ、レナリドミド、レバミゾール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド２ナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭー２６、６ーＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネートおよびゾレドロン酸およびその薬学的に許容可能な塩も含まれる。

化学療法薬にはまた、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセテート、コルチゾンアセテート、チキソコルトールピバレート、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、ベタメタゾンナトリウムホスフェート、デキサメタゾン、デキサメタゾンナトリウムホスフェート、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾンー１７ーブチレート、ヒドロコルチゾンー１７ーバレレート、アクロメタゾンジプロピオネート、ベタメタゾンバレレート、ベタメタゾンジプロピオネート、プレドニカルベート、クロベタゾンー１７ーブチレート、クロベタゾールー１７ープロピオネート、フルオコルトロンカプロエート、フルオコルトロンピバレートおよびフルプレドニデンアセテート；免疫選択的抗炎症性ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）、例えばフェニルアラニンーグルタミンーグリシン（ＦＥＧ）およびそのＤー異性体型（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）；抗リウマチ薬、例えばアザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄーペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノサイクリン、スルファサラジン；腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）ブロッカー、例えばエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、セルトリズマブペゴール（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標））、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標））、インターロイキン１（ＩＬー１）ブロッカー、例えばアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標
））、Ｔ細胞共刺激ブロッカー、例えばアバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））、インターロイキン６（ＩＬー６）ブロッカー、例えばトシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））；インターロイキン１３（ＩＬー１３）ブロッカー、例えばレブリキズマブ、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ）ブロッカー、例えばロンタリズマブ；ベータ７インテグリンブロッカー、例えばｒｈｕＭＡｂ Ｂｅｔａ７；ＩｇＥ経路ブロッカー、例えば抗Ｍ１プライム（ＡｎｔｉーＭ１ ｐｒｉｍｅ）；分泌型ホモトリマーＬＴａ３および膜結合型ヘテロトリマーＬＴａ１／β２ブロッカー、例えば抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）；；さまざまな治験薬、例えばチオプラチン、ＰＳー３４１、フェニルブチレート、ＥＴー１８ーＯＣＨ_３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬（Ｌー７３９７４９、Ｌー７４４８３２）、ポリフェノール類、例えばケルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール、エピガロカテキンガレート、テアフラビン類、フラバノール類、プロシアニジン類、ベツリン酸およびその誘導体；自食作用阻害薬、例えばクロロキン；デルター９ーテトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベーターラパコン；ラパコール；コルヒチン類；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９ーアミノカンプトテシン）；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート類、例えばクロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥー５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；および上皮成長因子レセプター（ＥＧＦーＲ）；ワクチン、例えばＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン；ペリホシン、ＣＯＸー２阻害薬（例えばセレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害薬（例えばＰＳ３４１）；ＣＣＩー７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌー２阻害薬、例えばオブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ）；ピキサントロン；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬、例えばロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）；および以上のいずれかのものの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体；ならびに以上の２つ以上のものの組合せも含まれる。

「成長阻害物質」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長／増殖（例えば、成長がＰＤ―Ｌ１発現に依頼）を阻害する化合物または組成物を意味する。一実施形態において、成長阻害物質は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止するまたは減少させる成長阻害抗体である。別の実施形態において、成長阻害物質は、Ｓ期の細胞の百分率を有意に減少させるものであってよい。成長阻害物質の例としては、細胞周期の進行（Ｓ期以外の場所における）を遮断する作用物質、例えば、Ｇ１阻止およびＭ期阻止を誘発する作用物質がある。従来のＭ期ブロッカーには、ビンカ類（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサンおよびトポイソメラーゼＩＩ阻害薬、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシンが含まれる。Ｇ１を阻止するこれらの作用物質はまた、Ｓ期阻止、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５ーフルオロウラシルおよびａｒａーＣまで波及する。タキサン類（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ローン・プーラン ローラー）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ブリストル－マイヤー スクウィブ）の半合成類似体である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。

Ｈ． 使用方法

本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）は、それを必要としている対象の治療に使用する（例えば、投与する）ことができる。対象は、疾患（例えば、癌、腫瘍、組織変性、線維化など）のような状態を有するか、有すると疑われる。細胞（例えば幹細胞やコミットした成体細胞）は、対象からを得ることができ、このような細胞は、エクスビボで培養され、本明細書に開示される対象の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）を生成するように遺伝子改変され得る。その後、操作された免疫細胞は、適応免疫療法のために対象に投与することができる。

対象は、本開示は操作された免疫細胞の集団（例えば、操作されたＮＫ細胞）により少なくともまたは最大で１用量、少なくともまたは最大で２用量、少なくともまたは最大で３用量、少なくともまたは最大で４用量、少なくともまたは最大で５用量、少なくともまたは最大で６用量、少なくともまたは最大で７用量、少なくともまたは最大で８用量、少なくともまたは最大で９用量、あるいは少なくともまたは最大で１０用量で治療（例えば、投与）され得る。

一態様では、本開示は、（ａ）対象から細胞を得ること、および（ｂ）その細胞から、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つを生成すること、を含む方法を提供する。場合によっては、対象から得られた細胞はＥＳＣである。場合によっては、対象から得られた細胞（例えば、成体皮膚線維芽細胞などの線維芽細胞）を改変し、ｉＰＳＣに形質転換する。

一態様では、本開示は、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つを含むＮＫ細胞の集団をそれを必要としている対象に投与することを含む方法を提供する。場合によっては、該方法はさらに、併用治療剤（例えば、化学療法剤、抗ＣＤ２０抗体など）を対象に投与することを含み得る。

一態様では、本開示は、本明細書に開示される組成物のいずれか１つをそれを必要としている対象に投与することを含む方法を提供する。場合によっては、組成物は、（ｉ）本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つ、および（ｉｉ）併用治療剤（例えば、化学療法剤、抗ＣＤ２０抗体など）を含むことができる。

本明細書に開示される方法のいずれか１つは、標的細胞、標的組織、標的状態、または標的疾患を治療するために利用することができる。

標的疾患は、ウイルス、細菌、および／または寄生虫感染；炎症性および／または自己免疫性疾患；または癌および／または腫瘍のような新生物であり得る。

標的細胞は疾患細胞であり得る。疾患細胞は、変化した代謝、遺伝子発現、および／または形態学的特徴を有することができる。疾患細胞は、癌細胞、糖尿病細胞、アポトーシス細胞であり得る。疾患細胞は、罹患対象からの細胞であり得る。例示的な疾患としては、血液障害、癌、代謝障害、眼障害、臓器障害、筋骨格障害、心疾患などを挙げることができる。

本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）使ってさまざまな標的細胞を死滅させることができる。この方法を適用することができる。標的細胞には、多種多様な細胞タイプが含まれる。標的細胞が、インビトロであることができる。標的細胞はインビボであることができる。標的細胞はエクスビボであることができる。標的細胞は単離された細胞であることができる。標的細胞は生物の内部にある細胞であるこ
とができる。標的細胞は生物であることができる。標的細胞は細胞培養物中の細胞であることができる。標的細胞は細胞の集合体のうちの１つであることができる。標的細胞は哺乳類細胞であるか、哺乳類細胞に由来することができる。標的細胞は齧歯類細胞であるか、齧歯類細胞に由来することができる。標的細胞はヒト細胞であるか、ヒト細胞に由来することができる。標的細胞は原核細胞であるか、原核細胞に由来することができる。標的細胞は細菌細胞であるか、細菌細胞に由来することができる。標的細胞は古細菌細胞であるか、古細菌細胞に由来することができる。標的細胞は真核細胞であるか、真核細胞に由来することができる。標的細胞は多能性幹細胞であることができる。標的細胞は植物細胞であるか、植物細胞に由来することができる。標的細胞は動物細胞であるか、動物細胞に由来することができる。標的細胞は無脊椎動物細胞であるか、無脊椎動物細胞に由来することができる。標的細胞は脊椎動物細胞であるか、脊椎動物細胞に由来することができる。標的細胞は微生物細胞であるか、微生物細胞に由来することができる。標的細胞は真菌細胞であるか、真菌細胞に由来することができる。標的細胞は特定の器官または組織に由来することができる。

標的細胞は幹細胞または前駆細胞であることができる。標的細胞として、幹細胞（例えば成体幹細胞、胚性幹細胞、誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞）および前駆細胞（例えば心筋前駆細胞、神経前駆細胞など）を挙げることができる。標的細胞として、齧歯類幹細胞、齧歯類前駆細胞、ヒト幹細胞、ヒト前駆細胞などを含む哺乳類の幹細胞および前駆細胞を挙げることができる。クローン細胞はある細胞の子孫を含むことができる。標的細胞は標的核酸を含むことができる。標的細胞は生きている生物中に存在することができる。標的細胞は遺伝子修飾細胞であることができる。標的細胞は宿主細胞であることができる。

標的細胞が全能性幹細胞であることはできるが、本開示のいくつかの態様では、「細胞」という用語を使用しても、それが全能性幹細胞を指すことはない。標的細胞が植物細胞であることはできるが、本開示のいくつかの態様では、「細胞」という用語を使用しても、それが植物細胞を指すことはない。標的細胞は多能性細胞であることができる。例えば標的細胞は、造血細胞系譜の他の細胞に分化することはできるが、他のどの非造血細胞へも分化することはできない、多能性造血細胞であることができる。標的細胞は生物全体へと発生できるものであってよい。標的細胞は生物全体へと発生できるものであってもよいし、生物全体へは発生できないものであってもよい。標的細胞は生物全体であってよい。

標的細胞は初代細胞であることができる。例えば初代培養の培養物は、０回、１回、２回、４回、５回、１０回、１５回またはそれ以上、継代することができる。細胞は単細胞生物であることができる。細胞は培養中で成長させることができる。

標的細胞は疾患細胞であることができる。疾患細胞は、変化した代謝的特徴、遺伝子発現特徴、および／または形態学的特徴を有することができる。疾患細胞はがん細胞、糖尿病細胞、およびアポトーシス細胞であることができる。疾患細胞は罹患対象からの細胞であることができる。例示的疾患として、血液障害、がん、代謝障害、眼障害、臓器障害、筋骨格障害、心疾患などを挙げることができる。

標的細胞が初代細胞である場合、それらは任意の方法によって個体から回収することができる。例えば白血球は、アフェレーシス、白血球アフェレーシス、密度勾配分離などによって回収することができる。皮膚、筋、骨髄、脾臓、肝臓、膵臓、肺、腸、胃などの組織からの細胞は、生検によって回収することができる。回収した細胞の分散または懸濁には適当な溶液を使用することができる。そのような溶液は一般に、低濃度の許容される緩衝剤と共にウシ胎児血清または他の天然因子が都合よく添加された平衡塩類溶液（例えば生理食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス平衡塩類溶液など）であることができる。緩衝剤としては、ＨＥＰＥＳ、リン酸緩衝液、乳酸緩衝液などを挙げることができ
る。細胞は直ちに使用してもよいし、（例えば凍結によって）貯蔵してもよい。凍結細胞は融解することができ、再使用可能であることができる。細胞は、ＤＭＳＯ、血清、培地緩衝液（例えば１０％ＤＭＳＯ、５０％血清、４０％緩衝培地）および／または凍結温度で細胞を保存するためによく使用されているいくつかの他の同様の溶液中で凍結することができる。

標的細胞になりうる細胞の非限定的な例として、以下の細胞が挙げられるが、それらに限定されるわけではない：Ｂ細胞、Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞）、ナチュラルキラー細胞、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞（例えばＵＳ２００８０２４１１９４参照）などのリンパ系細胞；顆粒球（好塩基性顆粒球、好酸性顆粒球、好中性顆粒球／過分葉好中球）、単球／マクロファージ、赤血球（網状赤血球）、肥満細胞、血小板／巨核球、樹状細胞などの骨髄性細胞；甲状腺（甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞）、副甲状腺（上皮小体主細胞、好酸性細胞）、副腎（クロム親和性細胞）、松果体（松果体細胞）の細胞を含む内分泌系からの細胞；グリア細胞（アストロサイト、ミクログリア）、巨大神経分泌細胞（Ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒ
ｎｅｕｒｏｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃｅｌｌ）、星細胞（Ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ）、ベッチャー細胞、および下垂体（性腺刺激ホルモン分泌細胞、副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン分泌細胞、成長ホルモン分泌細胞、プロラクチン分泌細胞）を含む神経系の細胞；肺細胞（Ｉ型肺細胞、ＩＩ型肺細胞）、クララ細胞、杯細胞、塵埃細胞を含む呼吸器系の細胞；心筋細胞、周皮細胞を含む循環系の細胞；胃（胃主細胞、壁細胞）、杯細胞、パネート細胞、Ｇ細胞、Ｄ細胞、ＥＣＬ細胞、Ｉ細胞、Ｋ細胞、Ｓ細胞を含む消化器系の細胞；腸クロム親和性細胞を含む腸内分泌細胞、ＡＰＵＤ細胞、肝臓（肝細胞、クッパー細胞）、軟骨／骨／筋；骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞、歯（セメント芽細胞、エナメル芽細胞）を含む骨細胞；軟骨芽細胞、軟骨細胞を含む軟骨細胞；毛包、ケラチノサイト、メラノサイト（母斑細胞）を含む皮膚細胞；ミオサイトを含む筋細胞；ポドサイト、傍糸球体細胞、糸球体内メサンギウム細胞／糸球体外メサンギウム細胞、腎臓近位尿細管刷子縁細胞、マクラデンサ細胞を含む泌尿器系細胞；精子、セルトリ細胞、ライディッヒ細胞、卵子を含む生殖器系細胞；ならびに次に挙げる細胞を含む他の細胞：脂肪細胞、線維芽細胞、腱細胞、表皮ケラチノサイト（分化表皮細胞）、表皮基底細胞（幹細胞）、指の爪および足指爪のケラチノサイト、爪床基底細胞（幹細胞）、毛髄質細胞（Ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｈａｉｒ ｓｈａｆｔ ｃｅｌｌ）、毛髄皮質細胞（Ｃｏｒｔｉｃａｌ ｈａｉｒ ｓｈａｆｔ ｃｅｌｌ）、毛小皮細胞（Ｃｕｔｉｃｕｌａｒ ｈａｉｒ
ｓｈａｆｔ ｃｅｌｌ）、毛根鞘小皮細胞（Ｃｕｔｉｃｕｌａｒ ｈａｉｒ ｒｏｏｔ
ｓｈｅａｔｈ ｃｅｌｌ）、ハックスリー層の毛根鞘細胞（Ｈａｉｒ ｒｏｏｔ ｓｈｅａｔｈ ｃｅｌｌ ｏｆ Ｈｕｘｌｅｙ’ｓ ｌａｙｅｒ）、ヘンレ層の毛根鞘細胞（Ｈａｉｒ ｒｏｏｔ ｓｈｅａｔｈ ｃｅｌｌ ｏｆ Ｈｅｎｌｅ’ｓ ｌａｙｅｒ）、外毛根鞘細胞（Ｅｘｔｅｒｎａｌ ｈａｉｒ ｒｏｏｔ ｓｈｅａｔｈ ｃｅｌｌ）、毛母細胞（幹細胞）、湿潤重層障壁上皮細胞（Ｗｅｔ ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ ｂａｒｒｉｅｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道および膣の重層扁平上皮の表層上皮細胞、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道および膣の上皮の基底細胞（幹細胞）、泌尿器上皮細胞（膀胱および尿道を裏打ちする）、外分泌分泌上皮細胞、唾液腺粘液細胞（多糖リッチ分泌）、唾液腺漿液細胞（糖タンパク質酵素リッチ分泌）、舌のフォン・エブネル腺細胞（味蕾を濡らす）、乳腺細胞（乳汁分泌）、涙腺細胞（涙液分泌）、耳の耳道腺細胞（耳垢分泌）、エクリン汗腺暗細胞（糖タンパク質分泌）、エクリン汗腺明細胞（小分子分泌）。アポクリン汗腺細胞（発香性分泌、性ホルモン感受性）、眼瞼のモル腺細胞（特殊化した汗腺）、皮脂腺細胞（脂質リッチ皮脂分泌）、鼻のボーマン腺細胞（嗅上皮を濡らす）、十二指腸のブルンナー腺細胞（酵素およびアルカリ性粘液）、精嚢細胞（遊泳精子のためのフルクトースを含む精液構成要素を分泌する）、前立腺細胞（精液構成要素を分泌する）、尿道球腺細胞（粘液分泌）、バルトリン腺細胞（膣液分泌）、リトル腺細胞（粘液分泌）、子宮内膜細胞（糖質分泌）、気
道および消化管の孤立杯細胞（Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌ）（粘液分泌）、胃内壁粘液細胞（粘液分泌）、胃腺酵素分泌細胞（ペプシノーゲン分泌）、胃腺酸分泌細胞（塩酸分泌）、膵腺房細胞（炭酸水素塩および消化酵素分泌）、小腸のパネート細胞（リゾチーム分泌）、肺のＩＩ型肺細胞（サーファクタント分泌）、肺のクララ細胞、ホルモン分泌細胞、下垂体前葉細胞、成長ホルモン分泌細胞、プロラクチン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン分泌細胞、性腺刺激ホルモン分泌細胞、副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、脳下垂体中葉細胞、巨大神経分泌細胞、腸および気道細胞、甲状腺細胞、甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞、副甲状腺細胞、上皮小体主細胞、好酸性細胞、副腎細胞、クロム親和性細胞、精巣のライディッヒ細胞、卵胞の内卵胞膜細胞、破裂卵胞の黄体細胞、顆粒層ルテイン細胞、卵胞膜黄体細胞、傍糸球体細胞（レニン分泌）、腎臓のマクラデンサ細胞、代謝および貯蔵細胞、障壁機能細胞（肺、腸、外分泌腺および尿生殖路）、腎臓、Ｉ型肺細胞（肺の気泡を裏打ちする）、膵管細胞（腺房中心細胞）、（汗腺、唾液腺、乳腺などの）非横紋導管細胞、（精嚢、前立腺などの）導管細胞、閉じた体内体腔を裏打ちする上皮細胞、推進機能を持つ繊毛細胞、細胞外マトリックス分泌細胞、収縮細胞；骨格筋細胞、幹細胞、心筋細胞、血液細胞および免疫系細胞、エリスロサイト（赤血球）、巨核球（血小板前駆体）、単球、結合組織マクロファージ（さまざまなタイプ）、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞（骨中）、樹状細胞（リンパ組織中）、ミクログリア細胞（中枢神経系中）、好中性顆粒球、好酸性顆粒球、好塩基性顆粒球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、網状赤血球、血液および免疫系の幹細胞および委任前駆細胞（さまざまなタイプ）、多能性幹細胞、全能性幹細胞、誘導多能性幹細胞、成体幹細胞、感覚トランスデューサー細胞、自律性ニューロン細胞、感覚器および末梢性ニューロン支持細胞、中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞、水晶体細胞、顔料細胞、メラノサイト、網膜色素上皮細胞、生殖細胞、卵原細胞／卵母細胞、精細胞、精母細胞、精原細胞（精母細胞の幹細胞）、精子、ナース細胞、卵胞細胞、セルトリ細胞（精巣中）、胸腺上皮細胞、間質細胞、および間質腎臓細胞。

特に興味深いものはがん細胞である。いくつかの態様において、標的細胞はがん細胞である。がん細胞の非限定的な例として、次に挙げるようながんの細胞が挙げられる：棘細胞腫、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型メラノーマ、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性分化型骨髄性白血病、急性骨髄系樹状細胞白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、アダマンチノーマ、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、悪性（Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、肛門がん、未分化大細胞リンパ腫、組織非形成性甲状腺がん、血管免疫芽球性Ｔ細胞性リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、基底様癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞性リンパ腫、ベリーニ管癌、胆道がん、膀胱がん、芽細胞腫、骨がん、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳がん、ブレンネル腫瘍、気管支腫瘍、細気管支肺胞上皮癌、褐色腫瘍、バーキットリンパ腫、原発部位不明のがん、カルチノイド腫瘍、癌、上皮内癌、陰茎癌、原発部位不明の癌、癌肉腫、キャッスルマン病、中枢神経系胚芽腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、子宮頸がん、胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢パピローマ、慢性リンパ球性白血病、慢性単球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、慢性好中球性白血病、明細胞腫瘍、大腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、デゴス病、隆起性皮膚線維肉腫、類皮嚢胞、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、胎児性癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜がん、子宮内膜子宮がん、子宮内膜性腫瘍、腸症関連Ｔ細胞性リンパ腫、上衣芽細胞腫、脳室上衣腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道がん、感覚神経芽腫、ユーイング腫瘍ファミリー、ユーイングファミリー肉腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞性腫瘍、性腺外胚細胞性腫瘍、肝臓外胆管がん、乳房外パジェット病、ファロピウス管がん、胎児内胎児
、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺がん、胆嚢がん、胆嚢がん、神経節膠腫、神経節腫、胃がん、胃リンパ腫、胃腸がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管ストローマ腫瘍、消化管ストローマ腫瘍、胚細胞性腫瘍、胚細胞腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性絨毛性腫瘍、骨巨細胞腫、多形性神経膠芽腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グロムス腫瘍、グルカゴノーマ、性腺芽腫、顆粒膜細胞腫、ヘアリー細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、頭頸部がん、頭頸部がん、心臓がん、血管芽腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、血液学的悪性疾患、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞性リンパ腫、遺伝性乳がん－卵巣がん症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンのリンパ腫、下咽頭がん、視床下部神経膠腫、炎症性乳がん、眼内メラノーマ、島細胞癌、島細胞腫瘍、若年性骨髄単球性白血病、カポジ肉腫、カポジ肉腫、腎がん、クラツキン腫瘍、クルケンベルグ腫瘍、咽頭がん、喉頭がん、悪性黒子型メラノーマ、白血病、白血病、口唇口腔がん、脂肪肉腫、肺がん、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨の悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性ラブドイド腫瘍、悪性トリトン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞性白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、縦隔腫瘍、甲状腺髄様がん、髄芽腫、髄芽腫、髄上皮腫、メラノーマ、メラノーマ、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、中皮腫、原発不明の転移性頸部扁平上皮がん、転移性尿路上皮癌、混合ミュラー腫瘍、単球性白血病、口腔がん、ムチン性腫瘍、多発性内分泌新生物症候群、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、骨髄異形成疾患、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄肉腫、骨髄増殖性疾患、粘液腫、鼻腔がん、鼻咽腔癌がん、鼻咽腔癌、新生物、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非メラノーマ皮膚がん、非小細胞肺がん、眼腫瘍学（Ｏｃｕｌａｒ ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、乏突起星状細胞腫、乏突起神経膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、口腔がん、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫、骨肉腫、卵巣がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞性腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、乳房のパジェット病、パンコースト腫瘍、膵がん、膵がん、乳頭様甲状腺がん、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻洞がん、副甲状腺がん、陰茎がん、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭癌がん、褐色細胞腫、中分化型松果体実質腫瘍、松果体芽腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞新生物、胸膜肺芽腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性肝細胞がん、原発性肝がん、原発性腹膜がん、原始神経外胚葉性腫瘍、前立腺がん、腹膜偽粘液腫、直腸がん、腎細胞癌、第１５染色体上のＮＵＴ遺伝子に関連する気道癌（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｔｒａｃｔ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ
ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｔｈｅ ＮＵＴ ｇｅｎｅ ｏｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １５）、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒター形質転換、仙尾部奇形腫、唾液腺がん、肉腫、神経鞘腫症、皮脂腺癌、続発性新生物、精上皮腫、漿液性腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫、性索間質性腫瘍、セザリー症候群、印環細胞癌、皮膚がん、小円形青色細胞腫瘍（Ｓｍａｌｌ ｂｌｕｅ ｒｏｕｎｄ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ）、小細胞癌、小細胞肺がん、小細胞リンパ腫、小腸がん、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊髄腫瘍（Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｔｕｍｏｒ）、脊椎腫瘍（Ｓｐｉｎａｌ ｔｕｍｏｒ）、脾性辺縁帯リンパ腫、扁平上皮癌、胃がん、表在拡大型メラノーマ、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、表層上皮性－間質性腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞大型顆粒リンパ球白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞性リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、奇形腫、終末リンパ系がん（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ
ｃａｎｃｅｒ）、精巣がん、莢膜腫、咽頭がん、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行上皮がん、移行上皮癌、尿膜管がん、尿道がん、泌尿生殖器新生物、子宮肉腫、ぶどう膜メラノーマ、膣がん、ヴェルナー・モリソン症候群、いぼ状がん、視覚路神経膠腫、外陰がん、ワルデンストレーム・マクログロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、およびそれらの組合せを含むがんの細胞。いくつかの態様において、標的となるがん細胞は、がん幹細胞など、がん細胞集団内の部分集団に相当する。いくつかの態様において、がんは、リンパ腫などの造血系譜のがんである。抗原は腫瘍関連抗原である
ことができる。

場合によっては、本明細書に開示される標的細胞（例えば、Ｂ細胞）が自己免疫疾患と関連するか、関連する疑いがある。本開示の操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つで治療される対象は、自己免疫疾患を有するか、または自己免疫疾患を有する疑いがある。

自己免疫疾患の非限定的な例としては、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗体－媒介性（ｍｅｄｉａｔｅｄ）移植拒絶反応、抗－ＧＢＭ／抗－ＴＢＭ 腎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、自己免疫血管浮腫、自己免疫再生不良性貧血、自己免疫自律神経障害、自己免疫肝炎、自己免疫高脂血症、自己免疫免疫不全症、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫心筋炎、自己免疫膵炎、自己免疫網膜症、自己免疫血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫甲状腺疾患、自己免疫蕁麻疹、軸索＆神経細胞神経障害、Ｂａｌｏ病（同心円硬化症）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多巣性骨髄炎（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｏｓｔｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、クローン病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ 疾患、本態性混合性クリオグロブリン血症、脱髄性多発ニューロパチー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス（ｌｕｐｕｓ）、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エヴァンス症候群、線維筋痛症、線維性肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、高ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ 腎症、ＩｇＧ４－関連（ｒｅｌａｔｅｄ）硬化性疾患、免疫調節性リポタンパク（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）、封入体筋炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病（１型）、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病、川崎症候群、ランバート・イートン症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ループス（ｌｕｐｕｓ）（ＳＬＥ）、ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、良性単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、モーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病（Ｄｅｖｉｃ’ｓ））、好中球減少症、眼（ｏｃｕｌａｒ）瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌と関連する小児自己免疫精神神経障害（Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ））、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、ペイリー－ロンベルグ（Ｐａｒｒｙ Ｒｏｍｂｅｒｇ）症候群、パーソネージ・ターナー症候群、毛様体扁平部炎（周辺性ブドウ膜炎）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、Ｉ、ＩＩ、＆ ＩＩＩ型自己免疫多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、レイノー現象、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子＆精巣自己免疫、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎
、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、ぶどう膜炎、血管炎、小水疱水疱性皮膚病、白斑、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、およびウェゲナー肉芽腫症（多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ））が挙げられる。

場合によっては、自己免疫疾患は、関節リウマチ、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ループス（ｌｕｐｕｓ）またはＳＬＥ）、重症筋無力症、多発性硬化症、強皮症、アジソン病、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、ギラン・バレー症候群、シェーグレン症候群、皮膚筋炎、血栓性血小板減少性紫斑病、高ガンマグロブリン血症、良性単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、慢性炎症性脱髄性多発神経根筋障害（ＣＩＤＰ）、橋本脳症（ＨＥ）、橋本甲状腺炎、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、および抗体－媒介性移植拒絶反応（例えば、組織移植、例えば、腎臓移植のためのもの）を含む群から選択される１つ以上のメンバーを含む。例において、自己免疫疾患は、１型糖尿病、ループス（ｌｕｐｕｓ）、または関節リウマチである

場合によっては、標的疾患はＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）などのＴ細胞白血病（ＴＣＬ）である。例えば、以下の１つ以上を含む、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つは、ＴＣＬを処置するためにそれを必要としている対象に投与することができる：（ｉ）本明細書に開示されるＣＤ７に結合可能な抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体、（ｉｉ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）、および（ｉｉｉ）異種サイトカイン（例えば、内在性ＣＤ７）と同じサイトカインをコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性。

場合によっては、標的疾患は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。例えば、以下の１つ以上を含む、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つは、ＡＭＬを処置するためにそれを必要としている対象に投与することができる：（ｉ）本明細書に開示される抗原（例えば、ＣＤ３３および／またはＣＤ１２３）に結合可能な抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体、（ｉｉ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）、および（ｉｉｉ）本明細書中に開示されるような、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント。

場合によっては、標的疾患は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。

場合によっては、標的疾患は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。

場合によっては、標的疾患がＢ細胞白血病（ＢＣＬ）である。例えば、以下の１つ以上を含む、本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）のいずれか１つは、ＢＣＬを処置するためにそれを必要としている対象に投与することができる：（ｉ）本明細書に開示されるＣＤ１９に結合可能な抗原結合ドメインを含むキメラポリペプチド受容体、（ｉｉ）本明細書に開示される異種サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）、および（ｉｉｉ）本明細書に開示される、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント。

場合によっては、標的疾患は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。

場合によっては、標的細胞は、腫瘍を形成する（例えば、固形腫瘍）。場合によっては、標的細胞は腫瘍（すなわち、固形腫瘍）を形成する。本願の方法で処置された腫瘍は、安定化された腫瘍成長をもたらすことができる（例えば１つまたは複数の腫瘍は、サイズが１％、５％、１０％、１５％、または２０％を超えて増加することがなく、かつ／また
は転移しない）。場合によっては、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週、またはそれ以上にわたって安定化される。場合によっては、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月、またはそれ以上にわたって安定化される。場合によっては、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、またはそれ以上にわたって安定化される。いくつかの態様では、腫瘍のサイズまたは腫瘍細胞の数が、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上、低減する。いくつかの態様では、腫瘍が完全に排除されるか、検出レベル未満に低減する。いくつかの態様では、対象が、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週、またはそれ以上にわたって、無腫瘍（例えば寛解状態）を保つ。いくつかの態様では、対象が、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月、またはそれ以上にわたって、無腫瘍を保つ。いくつかの態様では、対象が、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、またはそれ以上にわたって、無腫瘍を保つ。

実施例１：操作されたＮＫ細胞

表１は、遺伝子改変を持つまたは持たない、操作されたＮＫ細胞の例を、可能な機能および治療適応症とともに示す。治療適応症の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞白血病、Ｔ細胞白血病、固形腫瘍、および血液癌を挙げることができる。

本明細書に開示されるＮＫ細胞は、対象由来のＮＫ細胞を操作することにより生成されることができる。あるいは、本明細書に開示されるＮＫ細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞から誘導されることができる。幹細胞由来のＮＫ細胞については、本明細書に開示される１つ以上の遺伝子改変を、（Ａ）幹細胞の状態、（Ｂ）造血幹細胞の状態、および／または（Ｃ）ＮＫ細胞の状態で導入されることができる。さらに別の代替案として、本明細書に開示されるＮＫ細胞はＮＫ細胞株であり得る。

実施例２：腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における機能増強

腫瘍微小環境における機能（例えば、増殖性、持続性、低免疫性、抗腫瘍活性など）を改善するために、目的の細胞を、（ｉ）１つ以上の強化または導入された遺伝子（例えば、導入された導入遺伝子）および／または（ｉｉ）内在性遺伝子の１つ以上の低下した発現レベル（例えば、目的の遺伝子の機能喪失）を有するように操作することができる。内在性遺伝子の低下した発現レベルは、例えば、ＣＲＩＳＰＰ／Ｃａｓおよび１つ以上のガイド核酸分子、例えば、表３に提供される非限定的な例示的ガイドＲＮＡ配列によって誘導され得る。目的の細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞であり得る。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞に由来し得る。あるいは、このような免疫細胞は、免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

例えば、腫瘍微小環境における機能を改善するために、表３に示すように、特定の導入遺伝子および／または目的の遺伝子機能喪失を有するようにＮＫ細胞を操作することができる。

ＫＬＲＤ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １５）

ATGGCGGTGTTCAAAACAACGCTGTGGCGGCTCATCTCTGGCACCTTGGGCATAATATGCTTGTCCCTTATGTCTACTCTCGGCATTCTGCTCAAAAATAGCTTCACGAAGCTGTCTATAGAACCTGCGTTTACCCCCGGACCCAACATCGAGTTGCAGAAAGACTCCGACTGCTGTTCCTGTCAAGAAAAATGGGTCGGATACCGATGCAACTGTTACTTTATTTCCTCTGAGCAGAAAACCTGGAATGAGAGCCGACATCTGTGTGCAAGTCAGAAGTCTAGCCTTTTGCAATTGCAAAACACCGACGAGCTTGACTTCATGTCCTCTTCCCAACAATTCTATTGGATCGGGCTTAGCTATTCCGAAGAGCACACCGCATGGCTTTGGGAGAATGGGAGCGCACTGAGCCAATACCTGTTTCCTTCATTCGAAACCTTTAACACTAAGAATTGTATCGCTTACAATCCTAATGGTAATGCTCTGGATGAAAGTTGCGAGGATAAAAATCGCTATATTTGTAAGCAGCAATTGATTTAA

ＣＤ９６の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １６）：

ATGGAAAAAAAGTGGAAATACTGCGCCGTGTACTACATAATACAGATTCACTTTGTCAAAGGAGTATGGGAGAAAACAGTGAACACAGAAGAGAACGTATATGCAACATTGGGATCTGATGTGAATCTCACGTGCCAGACGCAGACCGTAGGCTTTTTCGTTCAAATGCAATGGTCCAAAGTAACGAATAAAATAGACCTCATCGCCGTATATCATCCGCAATATGGTTTCTATTGCGCGTACGGCAGACCATGCGAGAGCCTCGTCACCTTCACCGAGACTCCGGAGAATGGCAGCAAGTGGACGCTTCACCTGCGGAATATGAGCTGTAGCGTGTCCGGAAGATATGAATGCATGTTGGTGCTGTATCCCGAGGGTATACAGACTAAGATCTACAATCTGCTCATTCAAACGCACGTAACTGCTGACGAATGGAACTCAAATCACACCATTGAAATAGAGATCAATCAGACTCTGGAGATACCTTGTTTTCAAAATTCCTCCAGCAAAATAAGTTCAGAGTTTACTTATGCCTGGAGTGTGGAGGACAATGGCACACAAGAAACCTTGATTTCTCAAAACCACCTCATTTCAAACTCCACCTTGTTGAAGGACCGGGTAAAGTTGGGAACGGACTACAGACTGCATCTGTCCCCCGTGCAAATATTTGACGACGGCAGGAAGTTCTCCTGTCACATAAGAGTAGGACCTAACAAGATTCTCAGATCTTCAACTACCGTAAAAGTGTTTGCTAAGCCCGAGATCCCCGTAATCGTGGAGAACAATTCCACAGACGTACTCGTCGAGCGCAGATTCACCTGTTTGTTGAAAAACGTTTTTCCCAAAGCCAATATCACGTGGTTTATCGATGGGTCCTTCCTTCACGATGAGAAGGAGGGCATCTATATTACAAACGAGGAAAGGAAGGGGAAAGATGGATTTCTTGAACTCAAATCCGTTCTGACTCGCGTCCACTCCAATAAGCCAGCACAAAGCGATAATTTGACTATCTGGTGCATGGCGTTGTCCCCCGTGCCGGGCAACAAGGTTTGGAACATCTCTTCCGAAAAAATAACCTTCCTCTTGGGCTCCGAGATTTCATCTACCGACCCTCCATTGTCCGTAACCGAGTCTACACTCGACACTCAGCCGTCCCCTGCCTCTTCCGTGAGTCCTGCACGCTACCCCGCGACTAGCTCTGTGACACTGGTTGACGTATCAGCATTGAGGCCTAACACTACTCCTCAACCATCAAATTCATCTATGACAACCCGGGGTTTCAATTATCCATGGACTTCCTCCGGCACGGACACAAAAAAATCAGTCTCACGAATTCCTTCCGAAACATACTCATCCAGCCCAAGCGGCGCGGGTTCCACATTGCATGATAACGTATTTACCAGTACTGCACGGGCCTTCAGCGAAGTACCTACAACTGCGAACGGATCTACAAAAACCAATCATGTTCACATAACTGGCATCGTTGTGAATAAACCCAAAGACGGCATGTCATGGCCAGTGATAGTTGCCGCATTGCTCTTCTGCTGCATGATCCTGTTTGGCCTGGGAGTCCGCAAATGGTGTCAGTATCAGAAAGAGATAATGGAGCGACCGCCTCCTTTCAAACCCCCTCCACCTCCCATAAAGTACACGTGTATTCAGGAACCTAATGAAAGCG
ACCTTCCCTACCATGAGATGGAGACTCTTTAG

ＣＤ２４４の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １７）：

ATGCTTGGTCAAGTTGTAACTCTTATCCTGTTGTTGCTGCTCAAAGTGTACCAAGGCAAAGGCTGTCAAGGCTCTGCTGACCATGTCGTTTCAATAAGCGGTGTTCCCTTGCAACTCCAACCCAATTCCATACAAACCAAGGTCGATAGTATCGCTTGGAAGAAGCTCCTGCCGTCCCAAAATGGGTTTCATCACATATTGAAATGGGAAAACGGTTCCCTTCCATCAAACACGTCCAACGACAGATTCTCCTTTATCGTAAAAAACCTCAGTCTGCTCATCAAAGCTGCTCAACAGCAAGATTCAGGGCTTTATTGCCTGGAAGTTACTAGCATTTCTGGCAAGGTCCAGACCGCCACCTTTCAAGTGTTCGTGTTTGATAAGGTCGAGAAGCCGCGGCTCCAAGGACAGGGAAAAATTCTGGACCGAGGGAGATGCCAGGTCGCGCTGAGTTGCCTCGTGAGCCGCGATGGAAATGTATCTTACGCTTGGTACCGGGGCAGCAAGTTGATCCAGACCGCGGGCAATCTGACATACCTTGACGAGGAGGTCGACATCAACGGCACACATACTTACACTTGCAATGTGAGTAACCCTGTATCCTGGGAGTCCCATACGCTGAATCTGACACAAGACTGCCAAAACGCCCATCAAGAGTTCCGATTTTGGCCCTTTCTGGTTATCATCGTAATATTGAGTGCTTTGTTCCTTGGTACATTGGCCTGTTTCTGTGTCTGGCGACGGAAACGCAAGGAAAAGCAGAGCGAGACAAGCCCTAAAGAGTTTTTGACCATATACGAGGATGTCAAGGACCTGAAAACAAGAAGGAATCATGAACAAGAGCAGACTTTCCCCGGCGGAGGTTCTACCATATATTCTATGATTCAAAGTCAAAGCAGCGCGCCCACCTCACAAGAGCCTGCGTATACTTTGTATTCCCTTATTCAACCTTCACGGAAAAGCGGGTCCAGGAAGAGGAATCATAGCCCGTCCTTTAATTCAACTATCTATGAAGTCATTGGAAAGAGTCAGCCTAAGGCACAAAATCCTGCGAGGCTCTCCCGGAAGGAATTGGAAAACTTTGACGTATACTCCTAG

ＣＣＲ４の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １８）：

ATGAACCCTACGGACATTGCGGATACTACCCTCGATGAGTCAATTTATAGCAATTATTACCTTTATGAATCAATCCCCAAGCCGTGCACCAAGGAAGGCATTAAAGCCTTTGGTGAACTCTTTCTTCCACCTCTGTATTCACTTGTGTTTGTTTTTGGACTGCTCGGCAACTCAGTTGTGGTGCTGGTACTCTTTAAATACAAAAGACTCCGCAGCATGACCGATGTGTACCTCTTGAATCTGGCAATATCTGACCTCCTGTTTGTATTCTCCCTCCCCTTTTGGGGATATTACGCTGCTGATCAATGGGTTTTTGGGTTGGGCCTCTGCAAAATGATCAGCTGGATGTACCTCGTGGGATTTTACTCCGGGATTTTCTTTGTCATGCTCATGTCCATCGACCGATACCTTGCCATAGTTCATGCGGTCTTTTCTTTGCGGGCCCGAACCCTGACATACGGCGTTATCACGAGCCTGGCTACGTGGAGCGTGGCTGTTTTCGCGAGCCTCCCTGGCTTTCTCTTTTCAACCTGCTACACGGAGCGCAACCATACCTATTGCAAAACTAAATACTCACTTAACTCCACTACTTGGAAGGTGCTCTCCAGTTTGGAAATCAATATTTTGGGCCTGGTTATCCCTCTGGGCATAATGTTGTTTTGCTATTCCATGATCATAAGAACATTGCAACACTGCAAGAACGAGAAAAAAAATAAGGCCGTAAAAATGATATTTGCAGTAGTTGTCCTTTTTCTTGGTTTTTGGACGCCCTATAACATAGTACTGTTCTTGGAAACTTTGGTAGAACTGGAGGTGCTCCAAGATTGTACATTCGAAAGATATTTGGACTATGCCATTCAAGCTACCGAAACTCTCGCTTTCGTGCATTGCTGTCTGAACCCCATAATATACTTTTTCCTCGGCGAAAAATTCCGAAAATACATACTCCAGCTCTTCAAAACCTGCCGGGGCCTCTTTGTACTGTGCCAATACTGTGGCTTGCTCCAAATATATAGCGCGGACACACCATCTTCCTCCTACACACAAAGTACTATGGACCATGACCTTCACGATGCGTTGTAG

ＣＣＲ９の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １９）：

ATGACCCCCACGGACTTTACTTCCCCGATTCCAAATATGGCGGACGACTATGGCAGCGAATCCACGAGCTCCATGGAGGACTATGTGAATTTCAATTTCACCGATTTCTATTGCGAGAAGAACAATGTTCGACAGTTCGCCTCCCACTTCCTGCCACCACTGTACTGGCTGGTATTCATCGTGGGGGCGCTGGGAAATTCCCTGGTCATACTTGTATATTGGTACTGTACCCGCGTAAAAACTATGACGGATATGTTTCTCCTCAACCTTGCGATAGCTGATCTGCTTTTTTTGGTCACGCTGCCCTTCTGGGCAATCGCAGCGGCAGATCAGTGGAAATTCCAAACCTTTATGTGCAAAGTCGTGAATTCCATGTATAAGATGAATTTTTATTCATGCGTGCTTCTCATAATGTGCATTAGTGTTGATCGGTATATAGCCATCGCCCAGGCGATGAGGGCTCATACCTGGCGCGAGAAACGACTCCTGTACTCCAAAATGGTATGTTTCACCATCTGGGTACTTGCCGCTGCACTTTGCATACCTGAAATTTTGTACTCCCAAATTAAAGAGGAGTCCGGGATTGCAATTTGCACAATGGTCTACCCTAGCGATGAATCAACTAAACTTAAATCTGCGGTGCTTACTCTCAAAGTTATACTCGGGTTCTTTCTTCCCTTTGTCGTCATGGCCTGCTGCTATACTATTATAATACATACGTTGATACAGGCAAAGAAATCCAGCAAACATAAGGCGTTGAAAGTCACTATCACAGTGTTGACTGTGTTCGTGTTGTCTCAATTTCCATACAATTGTATATTGCTGGTTCAAACAATAGACGCCTATGCAATGTTCATCTCCAATTGTGCGGTTTCTACTAACATCGACATTTGCTTCCAAGTCACCCAAACTATCGCATTCTTCCATTCATGCTTGAATCCGGTACTTTATGTATTTG
TCGGCGAGAGGTTTCGCAGAGATTTGGTCAAAACCCTCAAGAACCTTGGGTGCATCAGCCAAGCGCAATGGGTATCATTTACGCGCCGGGAGGGGTCACTGAAACTCAGTAGTATGCTTCTGGAAACTACTAGTGGGGCGCTCTCCCTGTGA

ＣＸＣＲ６の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２０）：

ATGGCGGAACACGATTACCACGAGGATTATGGCTTTAGCAGCTTTAACGATTCCAGCCAGGAGGAACATCAGGACTTTCTGCAATTCTCCAAAGTATTTTTGCCATGCATGTATCTGGTGGTGTTTGTGTGTGGCCTCGTTGGAAATAGTCTCGTTCTCGTAATATCCATATTTTACCACAAACTGCAATCTCTCACCGATGTGTTCCTTGTAAACCTGCCCCTTGCCGATCTCGTCTTTGTATGTACACTGCCGTTTTGGGCATATGCTGGCATACACGAATGGGTATTTGGGCAGGTTATGTGCAAATCACTTCTTGGAATCTATACGATAAACTTCTATACAAGCATGCTTATTCTCACTTGCATTACCGTGGACAGATTCATAGTGGTGGTGAAGGCGACCAAAGCGTATAACCAACAAGCTAAACGAATGACTTGGGGGAAGGTCACCAGCCTTTTGATCTGGGTTATCTCACTTCTTGTGTCTCTTCCACAAATAATCTATGGGAACGTCTTTAATCTTGACAAATTGATTTGCGGATACCATGACGAAGCGATCAGTACTGTAGTATTGGCGACACAGATGACGCTTGGATTCTTTCTCCCGCTTCTGACGATGATCGTTTGTTATTCCGTTATCATTAAAACCCTGCTGCATGCTGGCGGGTTTCAAAAACACAGATCTCTCAAGATAATTTTCCTTGTGATGGCCGTGTTCCTCCTTACCCAAATGCCGTTCAATCTTATGAAGTTTATACGCTCAACTCATTGGGAGTATTACGCTATGACCTCTTTTCATTACACAATCATGGTGACTGAAGCCATTGCGTATCTTCGCGCTTGTCTCAACCCGGTTCTCTATGCATTCGTGTCCCTGAAATTTAGAAAGAACTTCTGGAAGTTGGTCAAAGACATTGGCTGTTTGCCTTATCTGGGAGTCAGCCATCAATGGAAGAGTAGTGAGGATAACAGCAAAACGTTTTCCGCCTCCCATAACGTTGAGGCAACATCAATGTTTCAACTCTAG

ＣＣＲ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２１）：

ATGCTTAGTACCAGCCGAAGTAGATTTATAAGAAACACAAACGAGTCTGGGGAGGAGGTGACGACTTTTTTTGATTATGATTATGGCGCGCCGTGCCATAAATTTGACGTTAAACAAATAGGAGCCCAACTGCTCCCTCCATTGTATTCCCTGGTGTTCATATTCGGCTTCGTGGGAAACATGCTGGTGGTGCTTATATTGATCAACTGTAAAAAGCTCAAATGTCTTACCGATATTTATCTCCTTAATCTCGCAATAAGCGATTTGCTTTTCTTGATCACTCTCCCCCTTTGGGCCCATTCCGCTGCTAACGAATGGGTTTTCGGCAACGCGATGTGTAAACTTTTCACCGGCTTGTACCATATCGGCTACTTCGGCGGCATATTCTTTATAATACTTTTGACTATCGACCGCTACCTCGCTATCGTCCACGCGGTCTTTGCTCTTAAGGCAAGGACGGTAACCTTTGGAGTCGTTACCTCCGTTATCACTTGGCTGGTGGCCGTGTTTGCCTCCGTTCCCGGCATAATTTTTACAAAATGCCAGAAAGAGGATTCAGTATATGTCTGTGGGCCCTATTTCCCCCGGGGATGGAATAATTTCCATACAATCATGCGAAATATACTGGGACTCGTACTTCCACTTCTTATAATGGTTATATGCTACTCCGGAATCTTGAAAACACTTCTCAGATGTCGGAATGAGAAGAAGCGCCATCGAGCCGTGCGAGTGATTTTTACCATCATGATCGTATACTTCTTGTTCTGGACACCGTACAACATCGTCATATTGCTGAATACTTTCCAAGAATTTTTTGGCCTTTCCAACTGCGAAAGCACCTCTCAACTGGATCAAGCGACTCAGGTGACAGAAACCTTGGGGATGACTCACTGCTGCATTAACCCGATAATTTACGCGTTCGTGGGCGAGAAGTTTCGACGATATTTGAGCGTGTTCTTCCGGAAGCACATCACCAAAAGATTTTGCAAGCAATGCCCAGTCTTTTATCGAGAAACCGTAGATGGAGTTACGAGTACGAACACTCCATCCACTGGCGAGCAAGAAGTGTCAGCAGGACTTTAA

ＣＸＣＲ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２２）：

ATGGAGGATTTTAACATGGAGAGTGACTCCTTTGAAGATTTCTGGAAAGGGGAGGACCTCAGTAATTACTCATACTCTTCTACCCTCCCGCCATTCTTGCTCGACGCGGCACCCTGCGAGCCCGAGAGTCTTGAGATAAACAAATATTTTGTAGTGATAATTTACGCCCTTGTGTTCTTGCTTTCCTTGTTGGGCAATAGCTTGGTGATGCTGGTCATCCTGTACTCACGGGTGGGACGGTCCGTTACCGACGTGTACCTCCTGAATCTGGCCCTCGCGGACTTGCTTTTTGCCCTGACTTTGCCAATATGGGCAGCTAGCAAAGTCAATGGCTGGATATTTGGAACCTTTCTGTGTAAGGTCGTGTCACTGTTGAAAGAAGTAAACTTCTACAGTGGCATACTGTTGCTTGCCTGTATATCTGTCGATCGGTACCTCGCTATAGTACACGCCACACGGACGCTCACACAAAAACGCTATTTGGTGAAATTCATATGCTTGAGCATATGGGGCCTTTCCCTTTTGCTTGCTTTGCCGGTCCTCCTTTTCCGACGGACTGTCTACTCCTCTAATGTGTCCCCGGCTTGTTATGAGGACATGGGGAACAACACCGCTAACTGGCGCATGCTCCTGAGGATACTCCCACAAAGTTTTGGCTTCATCGTCCCGCTCCTTATAATGCTCTTTTGCTACGGTTTCACCTTGCGAACTCTTTTTAAGGCTCATATGGGCCAGAAGCACAGAGCTATGCGCGTGATTTTCGCCGTGGTCCTTATCTTCTTGTTGTGCTGGCTCCCTTACAATTTGGTTCTGCTGGCGGATACTCTGATGCGAACGCAAGTTATTCAGGAGACTTGCGAGCGGCGAAATCATATAGATAGGGCACTTGACGCCACTGAGATCTTGGGGATACTCCATTCCTGTCTCAACCCGCTCATATATGCGTTCATTGGCCAAA
AGTTCCGACATGGTCTGCTCAAGATTCTCGCGATTCACGGACTTATCAGTAAAGACAGTCTGCCAAAAGATTCACGCCCCTCATTTGTTGGATCTTCCTCCGGACATACATCAACTACGCTTTAA

ＣＸ３ＣＲ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２３）：

ATGGATCAATTCCCCGAAAGCGTCACCGAAAATTTTGAGTATGACGATTTGGCTGAAGCGTGTTATATAGGCGACATAGTTGTGTTCGGCACTGTTTTCTTGTCCATCTTTTACTCCGTTATTTTCGCCATTGGACTTGTGGGCAATCTGCTTGTGGTGTTCGCACTTACCAATAGCAAGAAGCCAAAGAGCGTCACGGATATTTATTTGCTGAATCTGGCTTTGTCTGATCTGCTTTTCGTGGCTACTCTCCCCTTTTGGACGCATTACCTGATCAATGAAAAGGGGCTGCATAACGCTATGTGCAAATTTACCACAGCGTTTTTTTTCATCGGTTTTTTTGGCTCAATCTTTTTCATAACCGTTATTAGCATTGATCGCTACCTTGCGATTGTACTTGCCGCTAATAGTATGAACAATCGCACGGTGCAACACGGAGTTACAATATCATTGGGAGTATGGGCGGCTGCAATTCTCGTCGCCGCGCCACAATTTATGTTCACCAAACAAAAAGAGAACGAGTGCTTGGGGGATTATCCCGAGGTCCTCCAGGAGATCTGGCCTGTTCTGAGGAACGTGGAAACAAATTTCCTCGGATTTCTGCTCCCCCTCCTTATCATGTCATACTGCTATTTTCGCATTATCCAAACATTGTTTTCTTGTAAAAATCACAAGAAAGCCAAGGCGATCAAGCTGATTCTGCTTGTTGTGATCGTCTTTTTCCTCTTTTGGACCCCTTATAATGTAATGATTTTTTTGGAAACACTCAAACTCTACGACTTCTTTCCATCCTGCGATATGCGGAAGGATCTGCGGCTGGCGCTCTCCGTAACCGAAACTGTAGCTTTTAGTCATTGTTGTTTGAATCCTTTGATCTATGCGTTTGCCGGGGAAAAGTTTAGAAGATACCTGTATCACCTCTATGGAAAGTGTTTGGCCGTTTTGTGTGGTCGATCTGTCCACGTTGATTTCTCCTCCTCAGAGTCCCAACGCAGCAGACACGGGTCTGTACTCTCCTCAAACTTCACATATCATACGAGCGACGGAGATGCATTGCTGCTTTTGTGA

ＫＬＲＣ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２４）：

ATGAATAAACAAAGAGGAACATTCTCCGAGGTATCTCTGGCTCAGGACCCTAAAAGACAGCAACGCAAACCTAAAGGAAATAAATCAAGCATCAGTGGCACAGAACAGGAAATATTTCAAGTGGAATTGAATCTGCAGAATCCCTCCTTGAACCACCAGGGCATCGACAAAATTTATGATTGTCAGGGGCTCCTGCCGCCGCCCGAAAAGTTGACAGCCGAGGTGCTGGGCATCATCTGTATAGTCTTGATGGCGACGGTTCTTAAGACAATTGTCCTTATACCCTTTCTGGAGCAAAACAATTTTTCACCCAATACTCGAACCCAAAAAGCTCGGCACTGCGGCCACTGTCCCGAGGAGTGGATAACATACTCAAACTCTTGCTATTATATCGGCAAAGAAAGAAGAACTTGGGAGGAGAGTTTGCTCGCTTGTACGAGCAAAAATAGCAGTCTCCTTTCCATCGATAACGAAGAGGAGATGAAATTCCTTGCGTCAATACTGCCTAGTTCTTGGATTGGCGTCTTTCGGAACTCCTCACACCACCCTTGGGTAACTATAAACGGCCTCGCATTCAAGCATAAGATCAAGGACTCTGACAACGCGGAGCTTAATTGTGCGGTTCTGCAAGTGAACCGGTTGAAGAGTGCCCAGTGCGGATCATCCATGATATACCACTGTAAACACAAGCTGTAG

ＴＧＦＢＲ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２５）：

ATGGGTAGAGGGCTGCTGCGCGGTTTGTGGCCGCTCCATATCGTTCTTTGGACGAGGATTGCATCCACTATCCCTCCGCATGTGCAAAAGTCCGTAAACAACGACATGATCGTCACAGACAATAATGGCGCGGTAAAGTTTCCTCAACTCTGTAAATTTTGTGACGTGAGGTTTAGCACCTGCGATAACCAGAAGAGCTGCATGTCAAATTGTTCTATTACCTCCATATGCGAAAAACCCCAGGAGGTCTGCGTCGCAGTGTGGAGAAAGAACGACGAGAACATAACCTTGGAAACTGTTTGCCATGATCCGAAATTGCCGTATCATGACTTTATTCTCGAGGACGCGGCCAGTCCAAAATGCATTATGAAGGAAAAAAAGAAGCCTGGCGAGACTTTCTTTATGTGCTCATGTTCAAGCGATGAGTGTAATGATAATATAATTTTCAGCGAGGAATACAACACGAGCAACCCTGACCTTCTCTTGGTCATCTTCCAGGTCACTGGCATATCCCTCCTGCCGCCGTTGGGGGTTGCGATTAGTGTAATTATTATATTTTATTGCTACAGAGTGTAG

ＫＩＲ２ＤＳ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２６）：

ATGTCCCTCACGGTTGTTTCAATGGCCTGTGTAGGCTTCTTCCTCCTCCAAGGCGCCTGGCCCCATGAGGGAGTGCATAGAAAGCCTTCCCTCTTGGCACATCCCGGTCGCCTTGTTAAATCCGAGGAGACTGTTATTCTTCAATGTTGGTCTGATGTCATGTTCGAGCACTTCCTTTTGCACCGGGAAGGCATGTTCAACGATACGTTGCGCTTGATCGGAGAGCATCATGATGGTGTTAGTAAAGCCAACTTTTCTATTTCACGGATGAAACAAGACCTGGCTGGGACATACAGATGCTACGGATCCGTCACACATTCTCCGTATCAATTGTCTGCTCCTTCTGACCCTTTGGACATAGTAATAATCGGCCTTTATGAAAAGCCGTCCTTGTCTGC
TCAACCTGGGCCAACTGTACTGGCCGGAGAAAACGTGACCCTCTCATGCTCCTCCCGCTCCTCTTACGACATGTACCATCTCTCCCGGGAGGGGGAAGCCCACGAACGACGGCTTCCGGCGGGCACTAAAGTAAATGGCACGTTTCAAGCGAATTTCCCGCTCGGTCCCGCCACCCACGGCGGAACCTATCGGTGCTTTGGCTCCTTCCGAGACAGCCCTTATGAGTGGAGCAAGTCAAGCGATCCGCTGCTCGTGTCTGTTACTGGCAATCCAAGCAACTCATGGCCGAGCCCCACGGAACCGAGTAGCGAAACAGGCAATCCCAGACACCTCCATGTCCTCATTGGGACGTCCGTCGTCAAGATTCCATTTACAATTTTGTTGTTCTTCTTGTTGCACCGATGGTGTTCAGACAAAAAGAACGCTGCTGTAATGGATCAAGAACCTGCGGGCAATCGCACTGTTAACTCCGAGGATAGCGACGAACAAGATCATCAAGAGGTGTCTTATGCGTGA

ＫＩＲ２ＤＳ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２７）：

ATGAGCTTGATGGTAGTGTCTATGGCGTGTGTAGGATTTTTCCTGCTTCAAGGCGCTTGGCCGCATGAAGGCGTGCATAGAAAGCCCTCCCTGCTCGCCCATCCTGGGCCGCTGGTAAAAAGCGAGGAGACAGTTATTCTTCAATGTTGGAGTGATGTTAGATTCGAACATTTTTTGCTGCACCGGGAGGGGAAATACAAGGATACGCTCCACCTTATCGGAGAGCATCATGACGGAGTCAGTAAAGCAAACTTCTCTATCGGCCCTATGATGCAGGACTTGGCGGGCACGTACCGATGCTACGGTTCTGTGACCCATTCCCCCTATCAACTGTCCGCCCCCTCCGACCCTCTGGACATCGTCATCACTGGACTCTACGAAAAACCATCCTTGTCTGCTCAACCCGGCCCCACTGTGCTCGCCGGGGAGAGTGTCACGCTTAGCTGTTCCTCTCGATCCTCCTATGACATGTACCATCTTTCTCGCGAAGGAGAAGCACATGAAAGACGATTCAGTGCCGGTCCGAAAGTGAATGGCACATTCCAGGCCGACTTTCCGCTGGGACCTGCCACGCACGGGGGCACGTACCGATGTTTTGGGAGTTTTCGGGATAGCCCATATGAGTGGAGTAATTCAAGCGACCCGCTCTTGGTGTCTGTGACTGGGAACCCCAGCAACTCCTGGCCGAGCCCCACCGAACCTTCTAGCAAGACTGGCAACCCCCGACACTTGCACGTGCTCATCGGAACGAGTGTCGTCAAAATCCCTTTTACCATTCTTCTCTTTTTCTTGCTTCATCGATGGTGTTCAAATAAAAAGAACGCCGCAGTGATGGATCAAGAACCGGCAGGCAATCGGACCGTAAACTCCGAGGACTCCGACGAACAGGACCATCAAGAGGTGAGTTACGCATGA

ＫＩＲ２ＤＳ３の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２８）：

ATGTCTCTGATGGTTATCAGCATGGCCTGTGTGGGATTCTTCTGGCTCCAAGGCGCGTGGCCGCACGAGGGATTCCGAAGAAAACCCTCTCTCCTGGCCCACCCCGGCAGATTGGTAAAGAGCGAGGAAACTGTAATACTTCAGTGCTGGAGTGATGTCATGTTCGAACACTTTCTTTTGCATCGGGAAGGGACATTTAACGATACTTTGAGACTGATCGGAGAGCATATTGACGGAGTGAGCAAGGCGAATTTCTCAATCGGAAGGATGCGCCAGGATCTGGCAGGCACATACAGATGCTATGGTTCTGTTCCTCATTCACCGTACCAATTCAGCGCTCCATCCGATCCTCTCGACATTGTAATAACTGGTCTTTATGAGAAACCGTCACTCTCCGCCCAACCTGGCCCAACCGTGTTGGCGGGCGAGAGTGTCACTCTGTCCTGCTCATCTTGGAGTTCATACGACATGTATCATTTGTCTACTGAAGGGGAAGCCCACGAGAGGCGGTTCTCCGCCGGGCCAAAAGTTAATGGAACCTTTCAGGCTGACTTCCCTCTCGGACCTGCTACCCAAGGAGGAACCTACAGATGTTTCGGATCTTTTCACGACTCTCCCTATGAGTGGAGCAAGAGCTCCGATCCCTTGCTCGTATCCGTTACGGGCAATCCGTCCAACTCCTGGCCTTCTCCGACGGAACCCTCATCAAAAACCGGCAACCCTCGACACCTGCATGTCTTGATCGGAACTAGTGTCGTCAAGCTCCCATTCACCATACTTCTCTTCTTTTTGCTGCATCGGTGGTGTTCCGATAAAAAAAACGCTAGTGTTATGGATCAAGGCCCCGCCGGTAACCGGACTGTGAATCGAGAAGATTCAGATGAACAGGACCATCAAGAGGTCAGCTATGCCTGA

ＫＩＲ２ＤＳ４の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２９）：

ATGAGTCTCATGGTAATAATCATGGCTTGTGTCGGGTTTTTCCTGCTTCAGGGGGCTTGGCCGCAGGAGGGAGTTCACAGAAAGCCCTCTTTCCTGGCGCTCCCCGGTCATCTTGTAAAATCTGAAGAAACTGTAATACTGCAGTGTTGGAGCGACGTGATGTTTGAACATTTTCTCCTTCATCGGGAAGGGAAGTTCAATAATACCCTGCACCTGATCGGCGAACACCATGATGGAGTTAGTAAAGCAAACTTCAGCATAGGCCCGATGATGCCGGTTCTTGCGGGAACCTATAGGTGTTACGGGAGTGTTCCGCACTCTCCTTACCAACTCTCCGCACCAAGCGATCCTCTCGATATGGTGATTATCGGTCTTTACGAAAAACCGAGCCTGTCAGCTCAACCTGGACCGACGGTCCAAGCAGGGGAAAATGTAACTCTCAGTTGCTCCAGCCGCTCCTCCTATGATATGTACCATTTGAGTCGGGAGGGAGAAGCACACGAACGGCGCCTGCCTGCCGTACGGTCTATAAACGGCACCTTTCAAGCGGACTTCCCTCTCGGCCCCGCAACTCATGGCGGGACGTACAGATGCTTTGGATCCTTCCGGGACGCGCCATATGAGTGGAGCAATTCCAGCGATCCACTGCTCGTGTCCGTTACCGGAAATCCAAGCAACTCCTGGCCGAGCCCTACTGAACCAAGTTCTAAGACTGGCAACCCGAGACACCTGCATGTGCTTATTGGCACCTCAGTAGTGAAGATCCCGTTTACTATCTTGCTCTTCTTTCTTCTTCAT
CGCTGGTGTAGCGATAAAAAGAATGCGGCCGTGATGGATCAAGAGCCAGCAGGTAACCGGACAGTAAACAGCGAAGATTCCGACGAGCAAGATCACCAGGAAGTTTCTTATGCATGA

ＫＩＲ２ＤＳ５の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３０）：

ATGAGTCTTATGGTGATTTCCATGGCCTGTGTTGCTTTTTTCCTCCTGCAGGGTGCTTGGCCTCACGAAGGGTTCCGCAGGAAGCCATCTCTCCTTGCCCACCCTGGTCCTCTTGTAAAGTCAGAGGAAACGGTTATCTTGCAATGTTGGAGCGATGTGATGTTTGAGCATTTCCTGCTCCACCGGGAGGGAACATTTAACCATACCCTCCGCCTCATCGGAGAACATATCGACGGCGTGAGCAAGGGAAACTTTTCAATAGGGAGGATGACCCAGGATTTGGCCGGGACATATCGCTGTTATGGCTCAGTCACTCACTCACCATATCAACTCAGTGCTCCGAGCGATCCACTTGACATTGTGATTACCGGCCTCTATGAGAAACCTAGTCTCTCCGCTCAACCTGGTCCGACCGTTTTGGCCGGCGAATCCGTCACCCTTTCCTGCTCTTCCCGCTCCTCCTATGACATGTACCATCTGAGTAGAGAGGGCGAGGCGCATGAGCGGAGACTTCCAGCCGGTCCAAAAGTTAATCGCACCTTTCAGGCCGATTTCCCGCTGGACCCTGCGACCCACGGCGGGACGTACCGCTGTTTCGGATCATTTCGGGACTCACCTTATGAGTGGAGTAAAAGTTCAGATCCTTTGCTTGTCTCCGTTACGGGCAATTCAAGCAACTCCTGGCCCTCTCCCACGGAACCCTCTAGTGAAACCGGAAATCCCCGCCATCTCCATGTGTTGATTGGAACCTCCGTCGTAAAGTTGCCTTTCACGATCCTGCTGTTCTTCCTTTTGCATCGGTGGTGCTCTAATAAAAAGAACGCTTCCGTGATGGATCAAGGCCCGGCCGGTAACCGCACGGTCAATAGAGAAGATAGTGACGAACAAGACCACCAAGAAGTGAGCTACGCGTGA

ＫＩＲ２ＤＬ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３１）：

ATGAGCTTGCTCGTCGTGTCAATGGCCTGCGTCGGTTTCTTCCTTCTCCAGGGTGCATGGCCTCACGAGGGAGTGCACCGAAAACCAAGTTTGCTGGCTCACCCTGGCCCGTTGGTGAAGTCAGAGGAAACGGTCATATTGCAATGTTGGAGCGATGTAATGTTTGAACATTTCCTCCTGCACCGAGAGGGCATGTTCAATGACACGCTGCGGCTTATTGGGGAGCACCACGACGGCGTGTCTAAGGCGAACTTCTCAATCTCCCGGATGACGCAAGACCTTGCCGGGACTTATAGATGCTACGGGAGTGTCACGCATTCCCCTTATCAAGTGTCTGCCCCTTCCGACCCCCTGGACATAGTCATCATAGGCCTGTATGAAAAACCGTCCTTGAGTGCTCAACCGGGTCCCACAGTCCTCGCTGGCGAGAATGTTACTTTGAGTTGCTCCTCACGCTCTTCCTATGACATGTATCACCTGAGCCGGGAGGGGGAGGCTCACGAGCGGCGACTGCCAGCAGGGCCAAAGGTAAACGGAACTTTTCAAGCAGATTTTCCGCTCGGCCCCGCAACCCACGGCGGCACATATCGGTGTTTTGGATCCTTCCACGACTCCCCCTACGAATGGTCCAAGTCATCTGATCCTCTGCTTGTCTCCGTCACCGGCAACCCGTCAAATTCCTGGCCTTCACCCACCGAACCCTCCTCAAAAACCGGCAACCCGAGGCATTTGCATATCCTTATTGGCACAAGCGTAGTTATCATCCTCTTCATTTTGCTGTTTTTTTTGCTTCACCGCTGGTGCTCCAATAAGAAAAATGCAGCAGTTATGGATCAGGAGAGTGCAGGGAACCGCACCGCAAACAGCGAGGATTCCGATGAACAAGACCCGCAAGAGGTGACCTACACACAGCTTAACCACTGCGTTTTCACGCAAAGGAAGATCACCCGACCATCCCAACGACCCAAGACCCCGCCCACCGATATAATTGTATATACCGAGCTCCCAAACGCTGAGTCTCGATCAAAAGTTGTCTCCTGCCCATGA

ＫＩＲ２ＤＬ２の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３２）：

ATGTCATTGATGGTGGTTTCTATGGCCTGCGTGGGTTTTTTTCTTCTGCAAGGAGCTTGGCCCCACGAAGGAGTTCATAGAAAGCCTAGCCTCCTTGCGCATCCTGGCCGCTTGGTGAAAAGCGAAGAAACCGTGATACTTCAGTGTTGGTCTGATGTTCGGTTTGAACACTTCTTGTTGCATCGGGAGGGCAAATTCAAGGACACACTTCACCTGATTGGGGAACATCACGATGGAGTATCAAAAGCTAACTTCTCTATCGGACCGATGATGCAAGATCTCGCCGGCACCTATCGGTGTTATGGGAGTGTGACTCACTCTCCGTATCAATTGTCTGCACCAAGCGACCCACTGGATATTGTGATAACCGGCTTGTATGAGAAGCCAAGTTTGTCCGCTCAACCCGGTCCAACCGTTCTTGCCGGCGAGAGCGTGACTCTTTCCTGCTCCTCCCGAAGCAGTTATGATATGTACCACCTTTCCCGGGAGGGCGAGGCTCACGAGTGTAGATTCTCTGCCGGCCCTAAAGTCAACGGGACCTTCCAAGCAGACTTTCCGCTGGGACCGGCTACTCACGGTGGCACTTATCGCTGCTTTGGTTCTTTTCGCGACTCCCCATACGAGTGGAGCAACAGCTCTGACCCGCTCCTTGTGTCCGTCATCGGGAACCCTTCTAATTCATGGCCCTCACCCACCGAGCCGTCATCTAAGACCGGGAACCCACGCCATCTTCATATTCTTATTGGCACATCCGTTGTGATTATACTTTTCATTCTTCTTTTTTTCCTCCTTCATCGGTGGTGTTCAAACAAGAAAAACGCCGCGGTCATGGACCAGGAAAGTGCTGGCAATCGAACAGCCAATAGCGAGGACTCAGACGAACAGGACCCACAGGAGGTTACGTACACTCAACTGAACCACTGTGTTTTCACCCAACGGAAGATCACTCGCCCCTCCCAAAGACCGAAAACGCCCCCTACCGATATAATTGTATATGCTGAACTGCCAAATGCCGAAAGTAGATCCAAGGTAGTTTCT
TGTCCTTGA

ＫＩＲ２ＤＬ３の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３３）：

ATGTCTCTCATGGTAGTCTCTATGGTTTGCGTGGGCTTCTTTCTCCTTCAAGGCGCTTGGCCACACGAGGGAGTCCACCGAAAACCGTCACTCTTGGCGCATCCGGGCCCCTTGGTAAAAAGCGAAGAAACGGTTATCCTTCAATGCTGGTCCGATGTAAGATTTCAGCACTTCCTCCTCCATCGGGAAGGCAAATTTAAGGATACCCTCCATCTGATCGGAGAGCATCATGACGGGGTATCTAAGGCGAACTTCTCTATCGGGCCCATGATGCAGGACCTCGCTGGAACGTATCGATGCTACGGATCTGTAACGCACTCACCTTACCAACTCAGTGCTCCTTCCGACCCATTGGACATTGTTATAACCGGACTCTATGAAAAACCCTCACTGAGCGCACAACCGGGCCCCACCGTGCTCGCGGGGGAGTCCGTGACGTTGAGTTGCTCTTCACGGTCCTCTTACGACATGTACCACCTGTCTCGAGAGGGGGAAGCTCACGAACGGAGATTTTCAGCAGGCCCAAAGGTCAATGGCACATTCCAAGCAGATTTCCCGCTTGGCCCCGCTACCCATGGGGGCACGTATAGGTGTTTTGGTTCATTTCGGGACTCTCCGTATGAATGGTCCAATAGCAGTGATCCGTTGCTCGTTTCTGTAACCGGAAATCCCAGTAATAGCTGGCCTAGTCCGACTGAGCCTAGTTCTGAAACCGGCAACCCTCGACACCTTCATGTACTGATCGGCACCTCTGTAGTGATAATTCTCTTCATTCTCCTCCTTTTTTTTCTGCTCCACCGCTGGTGCTGCAACAAGAAGAACGCTGTCGTGATGGATCAGGAACCCGCTGGCAACAGAACAGTTAATCGGGAGGATAGTGATGAGCAAGACCCCCAAGAGGTGACATATGCACAACTCAACCATTGCGTGTTCACTCAACGGAAAATAACTCGGCCATCTCAACGGCCGAAAACCCCTCCCACTGACATAATCGTATACACCGAATTGCCAAATGCTGAGCCATGA

ＫＩＲ２ＤＬ４の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３４）：

ATGTCAATGTCCCCGACGGTAATTATCCTTGCATGTCTTGGATTCTTTCTCGATCAAAGCGTATGGGCACATGTCGGTGGACAAGACAAGCCTTTCTGCTCCGCTTGGCCATCCGCCGTCGTCCCGCAGGGGGGCCACGTCACACTTCGCTGCCACTATCGGAGAGGTTTCAATATATTCACTCTCTACAAAAAGGATGGGGTCCCCGTGCCGGAACTGTATAATAGAATATTCTGGAACTCTTTTTTGATTTCACCCGTGACGCCCGCTCACGCGGGCACATATAGATGCAGGGGATTTCATCCGCACTCACCAACGGAGTGGAGCGCCCCGAGCAACCCGTTGGTTATTATGGTGACCGGACTTTACGAAAAACCCTCATTGACGGCTAGGCCAGGGCCCACAGTTCGGGCGGGCGAAAACGTAACGCTGTCTTGCTCTTCCCAATCCTCTTTCGACATCTACCATTTGTCACGAGAGGGCGAGGCTCATGAACTCAGGCTCCCAGCCGTGCCATCAATTAACGGGACCTTCCAGGCAGATTTTCCGTTGGGTCCTGCAACTCATGGAGAAACCTACCGGTGTTTTGGAAGCTTCCACGGTTCCCCCTATGAATGGTCCGATCCGTCTGATCCATTGCCCGTATCCGTTACTGGGAACCCGTCATCCAGCTGGCCTTCTCCTACGGAACCTAGTTTTAAGACGGGAATAGCCCGCCACCTGCATGCCGTTATTAGATACAGTGTTGCTATCATTTTGTTTACCATCCTTCCCTTCTTTCTGCTTCATCGGTGGTGTTCAAAAAAGAAAGATGCTGCGGTTATGAATCAGGAACCAGCGGGACATCGCACAGTTAATAGGGAAGATTCAGACGAACAAGACCCGCAGGAGGTCACATATGCACAGTTGGATCATTGTATTTTTACACAAAGAAAGATTACAGGACCATCCCAGCGCTCCAAACGACCGTCAACCGATACATCAGTTTGCATTGAACTGCCGAACGCGGAGCCGCGGGCGCTGTCCCCTGCACATGAGCACCATAGTCAGGCGCTGATGGGCAGCTCACGCGAAACGACGGCCCTTTCTCAAACTCAACTGGCGAGTTCTAATGTCCCAGCGGCTGGCATTTGA

ＫＩＲ２ＤＬ５Ａの最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３５）：

ATGTCTCTCATGGTCATTTCAATGGCTTGTGTGGGTTTTTTTCTTCTGCAGGGCGCTTGGACTCACGAAGGGGGGCAAGATAAGCCCCTTCTCTCCGCATGGCCGAGTGCGGTCGTCCCGCGAGGCGGGCATGTGACGCTTCTTTGTCGCTCCCGGTTGGGGTTTACCATTTTTTCCTTGTATAAGGAGGACGGAGTCCCTGTTCCGGAGCTGTATAATAAGATATTCTGGAAGTCCATACTTATGGGGCCAGTAACGCCCGCCCACGCCGGCACCTACCGCTGCCGGGGCTCCCACCCGAGATCCCCGATAGAGTGGAGCGCCCCGTCTAATCCTTTGGTTATCGTTGTTACTGGGTTGTTCGGAAAGCCTAGTCTGTCTGCCCAACCCGGCCCTACGGTCCGGACTGGCGAAAACGTCACCCTTAGCTGTTCCAGTCGGTCAAGTTTCGATATGTATCATTTGAGTAGAGAAGGCCGGGCGCACGAACCAAGACTGCCTGCCGTGCCCTCTGTTAATGGAACATTCCAGGCTGACTTCCCTCTTGGACCGGCTACTCATGGAGGCACTTACACTTGCTTTGGATCACTGCATGATTCACCTTACGAATGGAGTGACCCGTCCGACCCTTTGCTTGTGTCTGTAACCGGCAACTCCTCTTCTTCCTCCTCTTCACCAACTGAACCGAGTTCCAAAACTGGGATAAGAAGGCACCTTCACATACTCATCGGGACCTCAGTTGCAATTATCCTCTTTATCATCCTCTTCTTCTTCCTGCTGCATTGCTGCTGCTCCAATAAGAAAAATGCGGCGGTAATGGACCAAGAGCCCGCAGGGGATAGGACCGTCAATAGGGAGGACTCTGACGATCAAGACCCCCAAGAAGTTACCTATGCTCAATTGGATCATTGTGTCTTTACTCAAACAAAGATCACTTCTCCTTCCCAACGCCCAAAGA
CTCCTCCAACCGACACCACTATGTATATGGAGCTGCCTAACGCTAAGCCTCGGAGCCTCTCTCCGGCTCACAAGCACCACTCACAAGCACTGCGAGGATCATCACGAGAAACTACCGCATTGAGCCAAAATAGAGTGGCGTCCAGCCATGTTCCCGCCGCCGGAATATGA

ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂの最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３６）：

ATGTCACTGATGGTGGTGTCCATGGCGTGCGTTGGCTTCTTTCTCCTGCAGGGGGCATGGACGCATGAGGGCGGTCAGGACAAGCCTCTGTTGTCCGCGTGGCCTAGTGCGGTTGTTCCCCGGGGCGGTCACGTCACCCTTTTGTGTCGGAGCAGACTGGGATTCACAATCTTCTCCCTTTATAAAGAAGATGGGGTCCCCGTACCCGAGCTCTACAACAAGATCTTTTGGAAGTCAATACTCATGGGGCCCGTAACACCCGCACATGCCGGGACGTACCGCTGCCGGGGAAGTCACCCCCGAAGCCCTATTGAATGGAGTGCACCCTCCAACCCGCTCGTCATTGTGGTGACTGGCCTGTTCGGGAAGCCCTCACTCAGCGCTCAACCCGGACCCACCGTCCGAACCGGGGAGAACGTGACTCTCTCTTGCTCCTCCCGGAGTAGCTTTGACATGTATCACCTTTCCCGAGAGGGGCGGGCACATGAACCTAGACTGCCAGCGGTTCCTTCCGTGGATGGCACTTTTCAGGCCGACTTTCCCCTGGGACCTGCTACTCACGGGGGGACTTACACATGTTTTTCATCCTTGCACGACTCACCCTACGAGTGGAGCGACCCCTCCGATCCCCTTTTGGTATCCGTCACCGGAAACAGTTCCTCAAGCTCCTCCAGTCCGACAGAACCCTCTTCCAAGACCGGGATACGCCGCCACCTGCACATTCTCATCGGAACTTCAGTTGCGATTATCTTGTTCATCATACTGTTCTTCTTCCTGTTGCATTGCTGTTGCTCCAATAAAAAGAATGCAGCAGTAATGGATCAAGAGCCCGCGGGAGACAGGACAGTCAACCGAGAGGACTCCGACGATCAAGACCCTCAAGAGGTCACATATGCACAACTGGACCACTGTGTCTTTACGCAAACGAAAATAACCAGCCCGTCCCAACGACCAAAGACTCCACCCACGGACACGACAATGTATATGGAGCTTCCAAACGCTAAGCCGAGATCATTGAGTCCTGCTCACAAACATCATTCCCAGGCCCTGCGGGGGTCCAGTAGGGAAACAACGGCGCTGTCCCAAAACCGCGTTGCTAGTTCACATGTCCCCGCCGCCGGAATTTGA

ＭＩＲ２１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３７）：

CCAGTTTTCTTGCCGTTCTGTAAGTGTTTTATTCTTAGTGTGATTTTTTTCCATTGGGATGTTTTTGATTGAACTTGTTCATTTTGTTTTGCTTGGGAGGAAAATAAACAATTTTACTTTTTTCCTTTAGGAGCATTATGAGCATTATGTCAGAATAGAATAGAATTGGGGTTCGATCTTAACAGGCCAGAAATGCCTGGGTTTTTTTGGTTTGTTTTTGTTTTTGTTTTTTTATCAAATCCTGCCTGACTGTCTGCTTGTTTTGCCTACCATCGTGACATCTCCATGGCTGTACCACCTTGTCGGGTAGCTTATCAGACTGATGTTGACTGTTGAATCTCATGGCAACACCAGTCGATGGGCTGTCTGACATTTTGGTATCTTTCATCTGACCATCCATATCCAATGTTCTCATTTAAACATTACCCAGCATCATTGTTTATAATCAGAAACTCTGGTCCTTCTGTCTGGTGGCACTTAGAGTCTTTTGTGCCATAATGCAGCAGTATGGAGGGAGGATTTTATGGAGAAATGGGGATAGTCTTCATGACCACAAATAAATAAAGGAAAACTAAGCTGCATTGTGGGTTTTGAAAAGGTTATTATACTTCTTAACAATTCTTTTTTTCAGGGACTTTTCTAGCTGTATGACTGTTACTTGACCTTCTTTGA

ＭＩＲ１８１Ｂ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３８）：

CTTATTTGTCTTCTTTTGTAGTCTTTTGAAATGGCATAAAAATGCATAAAATATATGACTAAAGGTACTGTTGTTTCTGTCTCCCATCCCCTTCAGATACTTACAGATACTGTAAAGTGAGTAGAATTCTGAGTTTTGAGGTTGCTTCAGTGAACATTCAACGCTGTCGGTGAGTTTGGAATTAAAATCAAAACCATCGACCGTTGATTGTACCCTATGGCTAACCATCATCTACTCCATGGTGCTCAGAATTCGCTGAAGACAGGAAACCAAAGGTGGACACACCAGGACTTTCTCTTCCCTGTGCAGAGATTATTTTTTAAAAGGTCACAATCAACATTCATTGCTGTCGGTGGGTTGAACTGTGTGGACAAGCTCACTGAACAATGAATGCAACTGTGGCCCCGCTTTTTGCTGTCACAATCAACAGATATTCCATCTTTGAAAGATGTGTTCAAAATAGTACTATTGTTCTTTAAGTTTTCCAATTCGTCAGCATCTTCTGGTTTATTTATTCAATTTATATCATGTGATGAGATTTCAATGAAAAAGACTCTGGTTTAAACAAGAATAATGCTTCTCTATCTTTTGTATGCTATAAACAGAGCATGTTTTAGAAAAGGCAAAACTATTTTGTCCATCAAACGTACAGTATCATCATCTAGGTTAGCTCACCTTCCTACTGTTGTAGTGTGAGTGAAAAAAAGACA

ＭＩＲ１８１Ａ１の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３９）：

TACCACAAAGTACTTTGAATAACAAATTGTCCCTGTCTTTAACAGTGAGATAATTCCATCTCTGGAACTAGCCCAATATCGGCCATGTTTTTGCTTAATGAAACCGATCCTTTTCTCTCATACAATGTGATGTGGAGGTTTGCCAAACTCTTTGTTGG
AAGAATCATGCTTCTTATTTGTCTTCTTTTGTAGTCTTTTGAAATGGCATAAAAATGCATAAAATATATGACTAAAGGTACTGTTGTTTCTGTCTCCCATCCCCTTCAGATACTTACAGATACTGTAAAGTGAGTAGAATTCTGAGTTTTGAGGTTGCTTCAGTGAACATTCAACGCTGTCGGTGAGTTTGGAATTAAAATCAAAACCATCGACCGTTGATTGTACCCTATGGCTAACCATCATCTACTCCATGGTGCTCAGAATTCGCTGAAGACAGGAAACCAAAGGTGGACACACCAGGACTTTCTCTTCCCTGTGCAGAGATTATTTTTTAAAAGGTCACAATCAACATTCATTGCTGTCGGTGGGTTGAACTGTGTGGACAAGCTCACTGAACAATGAATGCAACTGTGGCCCCGCTTTTTGCTGTCACAATCAACAGATATTCCATCTTTGAAAGATGTGTTCAAAATAGTACTATTGTTCTTTAAGTTTTCCAATTCGTCAGCATCTTCTGGTTTATTTATTCAATTTATATCATGTGATGAGAT

ＭＩＲ１４４の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４０）：

CTGGGTCTGTCTGCCTGTCTGCTTGTTAGTGTGACCAAAGGGAACCTTCTGCATCATTACGCCATCTCTGGCTTGTTTAACACTGGCCCTGGGTCCCTATGAGATCTTAACAGACCCTAGCTCCAGTCCCCTTCCCATAACCCACCTGGGCTGTGCCTGACCACAGAATCAAGGAGACGCTGGCCTGCGAGGGAGCTGTAGAGCAGGGAGCAGGAAGCTGTGTGTGTCCAGCCCTGACCTGTCCTGTTCTGCCCCCAGCCCCTCACAGTGCTTTTCAAGCCATGCTTCCTGTGCCCCCAGTGGGGCCCTGGCTGGGATATCATCATATACTGTAAGTTTGCGATGAGACACTACAGTATAGATGATGTACTAGTCCGGGCACCCCCAGCTCTGGAGCCTGACAAGGAGGACAGGAGAGATGCTGCAAGCCCAAGAAGCTCTCTGCTCAGCCTGTCACAACCTACTGACTGCCAGGGCACTTGGGAATGGCAAGGAAACCGTTACCATTACTGAGTTTAGTAATGGTAATGGTTCTCTTGCTATACCCAGAAAACGTGCCAGGAAGAGAACTCAGGACCCTGAAGCAGACTACTGGAAGGGAGACTCCAGCTCAAACAAGGCAGGGGTGGGGGCGTGGGATTGGGGGTAGGGGAGGGAATAGATACATTTTCTCTTTCCTGTTGTAA

ＭＩＲ１５０の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４１）：

GGGAGGGGGCCGCAACCTCCTATTCCCCTCTGGGTCTCCGTCCCCTCCCTCTGGAGTCCACACTCCCTCTTTGCCCCTTGCTGGTTCTCTACTGCCCCCAGCATAGGGTGGAGTGGGTGTGCAGTTTCTGCGACTCAGGGTGGCGTCCCCCCAACCTGTCCCTGCCCCTTCCTGCCCTCTTTGATGCGGCCCCACTTCCTCTGGCAGGAACCCCCGCCCTCCCTGGACCTGGGTATAAGGCAGGGACTGGGCCCACGGGGAGGCAGCGTCCCCGAGGCAGCAGCGGCAGCGGCGGCTCCTCTCCCCATGGCCCTGTCTCCCAACCCTTGTACCAGTGCTGGGCTCAGACCCTGGTACAGGCCTGGGGGACAGGGACCTGGGGACCCCGGCACCGGCAGGCCCCAAGGGGTGAGGTGAGCGGGCATTGGGACCTCCCCTCCCTGTACTCCCATCTCTGCTGCGGCTTTTATGCGTCTCTCCCCTTCGGGTCCCACATATCCTCTGGTGCGCTCCTGCCTCACCGCCCCCACCCCATGCCTGTCGTCCCCACCTCTGTGTGATGCGCAAAGTACACCTGTTTCTATTGTACCTGCCTCTCGCGGTGGTCTGTGCTCTCCCCAGCTCTGCAAAACCCCTCCTCCCCATGTGCCACAACCCTGGGCCACCGTGTGTCCTGTCCTGTTC

実施例３：ＣＤ１６の増強されたシグナル伝達

細胞療法（例えば、幹細胞療法、適応免疫療法など）を改善するために、目的の細胞はＣＤ１６シグナル伝達が増強されるように操作することができる（例えば、ＣＤ１６シグナルの増強、ＣＤ１６を含む導入遺伝子の導入など）。目的の細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞であり得る。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞に由来し得る。あるいは、このような免疫細胞は、免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

例えば、適応免疫療法を改善するために、ＮＫ細胞は強化されたＣＤ１６シグナル伝達を示すように操作することができる。

ｈｎＣＤ１６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １）：

MWFLTTLLLWVPVDGQVDTTKAVITLQPPWVSVFQEETVTLHCEVLHLPGSSSTQWFLNGTATQTSTPSYRITSASVNDSGEYRCQRGLSGRSDPIQLEIHRGWLLLQVSSRVFTEGEPLALRCHAWKDKLVYNVLYYRNGKAFKFFHWNSNLTILKTNISHNGTYHCSGMGKHRYTSAGISVTVKELFPAPVLNASVTSPLLEGNLVTLSCETKLLLQRPGLQLYFSFYMGSKTLRG
RNTSSEYQILTARREDSGLYWCEAATEDGNVLKRSPELELQVLGLQLPTPVWFHVSFCLVMVLLFAVDTGLYFSVKTNIRSSTRDWKDHKFKWRKDPQDK

操作されたＮＫ細胞：

ＮＫ－９２細胞は、ＣＤ１６シグナル伝達が増強されるように操作された。操作されたＮＫ－９２細胞は、ＣＤ６４／ＣＤ１６Ａ融合タンパク質（すなわち、ｈｎＣＤ１６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）を発現するように改変された。

得られたｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞は、図１Ａに示すように、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を用いて、ＣＤ１６（例えば、抗ＣＤ１６－ＰＥ抗体を介して）およびＣＤ６４（例えば、抗ＣＤ６４－ＡＰＣ／ＡＦ７００抗体を介して）の両方の発現の増強を同定することによって検証された。野生型（ＷＴ）ＮＫ－９２細胞を対照として用いた。

Ｔｈｅ ｈｎＣＤ１６ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ 配列 ｃａｎ ｃｏｍｐｒｉｓｅ “ＦＨＶＳ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ２）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＷＦＨＶＳ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ３）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＦＨＶＳＦ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＷＦＨＶＳＦ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ５）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＶＷＦＨＶＳＦＣ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ６）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＰＶＷＦＨＶＳＦＣＬ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ７）。ＨｎＣＤ１６構築物は、“ＴＰＶＷＦＨＶＳＦＣＬＶ”を含むことができる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ８）。

増強されたターゲティング：

ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞を単独（未刺激、対照）、またはＮＫ細胞を活性化できるＫ５６２細胞（Ｋ５６２）またはＣＤ１６を活性化しＣＤ１６の切断を誘導するホルボール１２－ミリスチン酸１３－酢酸（ＰＭＡ）存在下で培養した。データから、ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞は、対照としての末梢血（ＰＢ）ＮＫ細胞と比較して、ＣＤ１６ａの活性化誘導切断に対して非常に高い抵抗性であることが明らかになった（図１Ｂ）。例えば、ＰＭＡで処理すると、ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞ではＣＤ１６＋細胞の割合が９２％から８５％にわずかに減少したが、同じ処理により、ＣＤ１６＋細胞の割合が９６％から２５％に減少した（図１Ｂ）。ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞におけるｈｎＣＤ１６の持続性も、抗－ＣＤ６４抗体を用いて確認した（図１Ｃ）。また、ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞は、刺激（例えば、Ｋ６５２またはＰＭＡ）によって内在性ＣＤ１６発現をダウンレギュレートしないことが観察された（図１Ｄおよび１Ｅ）。

併用抗体治療の活性増強

標的細胞（Ｒａｊｉ細胞）を（ｉ）ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞、および（ｉｉ）対照として抗ＣＤ２０抗体またはｈＩｇＧで処理した。データから、抗ＣＤ２０抗体と併用したｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞は、対照（例えば、抗ＣＤ２０抗体と併用した野生型ＮＫ９２細胞、またはｈＩｇＧと併用したｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞）と比較して、増強された標的細胞の死滅（例えば、少なくとも部分的にＡＤＣＣを介した死滅）を誘導したことが明らかになった（図１Ｆおよび１Ｇ）。

ｉＮＫに分化したｈｎＣＤ１６を発現するｉＰＳ細胞

本明細書に開示されるように操作されたｉＰＳＣ（例えば、ＣＤ１６シグナル伝達が増強または導入されたｉＰＳＣ（例えば、ＣＤ１６バリアントである、ｈｎＣＤ１６））を対象として、ＮＫ細胞（例えば、ｉＮＫ細胞）に分化させた。場合によっては、ｉＮＫ細胞（例えば、約５ｘ１０^５個の細胞を含む培養物）を回収し、染色（例えば、ＮＫ特異的マーカーの染色）に使用され、例えば、ＮＫＧ２Ａ－ＰＥ抗体、ＮＫｐ３０－ＰＥ抗体、ＮＫｐ４４－ＰＥ抗体、ＮＫｐ４６－ＰＥ抗体、および／またはＣＤ５６－ＡＰＣ抗体で染色された。それぞれ図４Ａ－４Ｅに示すように、ｈｎＣＤ１６を介してＣＤ１６シグナルが増強されたＰＵ０２、ＰＵ０６、ＰＵ２４の３つの例示的クローンでは、分化した細胞にＣＤ５６^＋細胞が検出され、ＣＤ５６^＋集団にＮＫＧ２Ａ^＋、ＮＫｐ３０^＋、ＮＫｐ４４^＋、および／またはＮＫｐ４６^＋細胞が検出された。従って、ＣＤ１７シグナルを増強または導入したｉＰＳＣは、ｉＮＫ細胞に分化できることが証明された。

ＮＫ細胞における増強されたＣＤ１６シグナル伝達

図５に示すように、野生型（ｗｔ）ＮＫ－９２細胞やＡＮＢ－ＩＳＯと比較して、ＮＫ細胞（例えば、野生型ｉＮＫ細胞、またはＣＤ１６シグナル伝達が増強されたｉＮＫクローン、例えばＰＵ０２、ＰＵ０６、ＰＵ２４クローンなど）におけるＣＤ１６シグナル伝達の増強（例えば、ｈｎＣＤ１６などのＣＤ１６の過剰発現）が、ＰＥ結合抗ＣＤ１６抗体を用いたＦＡＣＳで検出された。従って、ｈｎＣＤ１６ ＮＫ－９２細胞では、実際、ｈｎＣＤ１６が過剰発現していた。

ＮＫ細胞と抗体との組み合わせ

本明細書に開示されるＮＫ細胞（例えば、ＮＫ９２細胞株、ｉＰＳ細胞などの幹細胞由来のＮＫ細胞）は、標的細胞（例えば、がん細胞）に対する細胞傷害性を増強するために、単独用量の抗体と併用することができる。例えば、増強されたＣＤ１６シグナル（例えば、ｈｎＣＤ１６、ＣＤ１６－ＣＤ６４融合タンパク質など）を発現するように操作されたＮＫ細胞は、特定の抗体（例えば、抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）と組み合わせてインビトロで特定の標的細胞（例えば、Ｒａｊｉ細胞）の細胞溶解を誘導することができ、組み合わせ治療における溶解された標的細胞の割合は、ＮＫ細胞や抗体単独よりも高い。

実施例４：ＮＫ細胞の増強された生存および持続性

細胞療法（例えば、幹細胞療法、適応免疫療法など）の改善のために、目的の細胞を、（ｉ）少なくとも１つの内在性遺伝子（例えば、１つ以上の免疫調節ポリペプチド）の低下した発現、および／または（ｉｉ）少なくとも１つの追加遺伝子（例えば、１つ以上の追加免疫調節ポリペプチド）の発現の増強または導入を示すために操作することができる。本明細書に開示される（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む細胞は、持続レベル（または生存レベル）などの増強された機能を示すことができる。場合によっては、（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか一方を単独で有すること、または（ｉ）および（ｉｉ）の個々の効果の組合せて有すること、若しくは有しないことと比較して、（ｉ）および（ｉｉ）の組合せを有することにより、細胞の機能を相乗的に改善することができる。目的の細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞であり得る。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞に由来し得る。あるいは、このような免疫細胞は、免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

操作されたＮＫ細胞の生成：

例えば、適応免疫療法の増強された持続性について、ＮＫ細胞は、少なくとも（ｉ）異
種転写因子（例えば、ＳＴＡＴ）および（ｉｉ）内在性サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１７Ｒなどの内在性ＩＬ受容体）の低下した発現または活性を含むように操作され得る。操作されたＮＫ細胞において（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか一方を単独で有すること、または有しないことと比較して、（ｉ）および（ｉｉ）の組合せを有することは、操作されたＮＫ細胞の持続性を向上させることができる。

ＮＫ細胞は、単離されたＥＳＣまたはｉＰＳＣから生成される。ＮＫ細胞は、異種ＳＴＡＴ（例えば、ＳＴＡＴ３および／またはＳＴＡＴ５Ｂ）を発現するように操作される。異種ＳＴＡＴをコードする遺伝子は、ウイルス導入または本明細書に開示される遺伝子編集部分の作用のいずれかを介してＮＫ細胞のゲノムに組み込まれる。ＮＫ細胞はまた、内在性ＩＬ－１７Ｒの低下した発現または活性を示すように操作される（すなわち、ＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞）。対照として、（ｉ）異種ＳＴＡＴおよび（ｉｉ）ＩＬ－１７Ｒの低下発現または活性のいずれかを有するＮＫ細胞、または操作されていないＮＫ細胞を使用する。

インビトロでの生存率と持続性：

操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞をインビトロで培養し、外因性サイトカイン非存在下での人工ＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞の生存能と増殖能（または増殖能）を評価することができる。ＮＫ細胞は、外因性サイトカインを添加しない培養液中で３～６週間培養する。操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞は、対照細胞と比較して有意に高いＮＫ細胞数を示し、操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞のインビトロにおける生存率および持続性が向上していることを示した。

インビボ薬物動態（ＰＫ）：

操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞は、Ｒａｊｉ異種移植モデルを有するＮＣＧマウスに投与することができる。ＮＣＧマウスは三重免疫不全であり、機能的／成熟したＴ、Ｂ、ＮＫ細胞を欠き、異種移植モデルを宿主とするために、マクロファージおよび樹状細胞の機能が低下していた。操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞と対照細胞はそれぞれ、動物１匹あたり約１×１０^６個の用量で、尾静脈注射によりそれぞれのＲａｊｉ異種移植モデルマウスに投与される。操作されたＳＴＡＴ３^＋ＩＬ－１７Ｒ^－ＮＫ細胞を注入したマウスは、注入後約７日間から約２８日間までの末梢血中のＮＫ細胞濃度がより高く、操作されたＳＴＡＴ３＋ＩＬ－１７Ｒ－ＮＫ細胞のインビボにおける生存率および持続性が増強されていることが分かった。

他の操作されたＮＫ細胞の生成：

目的の細胞（例えば、幹細胞、ＮＫ細胞などの免疫細胞など）は、（ｉ）少なくとも一つの内在性遺伝子の低下した発現（例えば、一つ以上の免疫調節ポリペプチドの機能喪失）および／または（ｉｉ）少なくとも１つの追加遺伝子の発現の増強または導入（例えば、１つ以上の追加免疫調節ポリペプチドをコードする少なくとも１つの導入遺伝子）。例えば、ＮＫ細胞（例えば、臍帯血ＮＫ（ＣＢＮＫ）細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞など）は、以下の編集を有することができる：ＢＣＬ３転写コアクチベーター（ＢＣＬ３）の機能喪失；Ｃｂｌがん原遺伝子Ｂ（ＣＢＬＢ）の機能喪失；サイクリン依存性キナーゼ８（ＣＤＫ８）の機能喪失；ＩｇＥ受容体ＩｇのＦｃフラグメント（ＦＣＥＲ１Ｇ）の機能喪失；インターロイキン１７Ａ（ＩＬ１７Ａ）の機能喪失；インターロイキン１７Ｆ（ＩＬ１７Ｆ）の機能喪失；イノシトールポリリン酸－５－ホスファターゼＤ（ＩＮＰＰ５Ｄ／ＳＨＩＰ１）の機能喪失；サイトカインシグナル伝達抑制因子１（ＳＯＣＳ１）の機能喪失；サイトカインシグナル伝達抑制因子２（ＳＯＣＳ２）の機能喪失；サイトカインシグ
ナル伝達抑制因子３（ＳＯＣＳ３）の機能喪失；シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）の機能喪失；テトメチルシトシンジオキシゲナーゼ２（ＴＥＴ２）の機能喪失；タンパク質チロシンホスファターゼ非受容体２型（ＰＴＰＮ２）の機能喪失；タンパク質チロシンホスファターゼ非受容体６型（ＰＴＰＮ６）の機能喪失；ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）の機能喪失；ＣＤ３８分子（ＣＤ３８）の機能喪失；サイトカイン誘導性ＳＨ２含有タンパク質（ＣＩＳＨ）の機能喪失；および／またはキラー細胞レクチン様受容体Ｃ２の導入遺伝子（ＫＬＲＣ２／ＮＫＧ２Ｃ）。

場合によっては、機能喪失型遺伝子編集は、ＣＲＩＰＳＲ／Ｃａｓ９システムなど、本明細書に開示される１つ以上の遺伝子編集部位によって実現することができる。簡単に説明すると、ＮＫ細胞（例えば、ＣＢＮＫ細胞）を凍結保存から回収し、培地（例えば、リンパ球無血清培地ＫＢＭ５８１（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、１０％ヒト男性ＡＢ血清、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（１００Ｘ、Ｇｉｂｃｏ）、１％Ｌ－グルタミン（２００ｍＭ）（Ｇｉｂｃｏ）、０． ０２％ビタミンＣ、２００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２）。各編集のために、細胞（例えば、約１ｘ１０^７細胞）を単離し、ガイドＲＮＡ／Ｃａｓ９タンパク質複合体（ＲＮＰ）でトランスフェクトする（例えば、Ｌｏｎｚａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（登録商標） ４ＤおよびＰ３ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｃｅｌｌ ４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（登録商標） Ｘ Ｋｉｔ Ｌを使用）。ガイドＲＮＡとＣａｓ９は、例えば、２：１の割合でトランスフェクションされる（ガイドＲＮＡ ７５ピコモル（ｐｍｏｌ）、Ｃａｓ９タンパク質 １５０ｐｍｏｌ）。

トランスフェクトされた細胞は、下流アッセイの前に回収される（例えば、倍加ヒト男性ＡＢ血清（２０％）を含む培地を使用）。編集効率は、フラグメント解析またはＮＧＳによって解析される。

編集効率評価用ガイドＲＮＡおよびプライマーの配列を下記表４および表５に示す。

キラー細胞レクチン様受容体Ｃ２の用の最適化された導入遺伝子配列（ＫＬＲＣ２／ ＮＫＧ２Ｃ）（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ４２）：

ATGAATAAACAAAGAGGAACATTCTCCGAGGTATCTCTGGCTCAGGACCCTAAAAGACAGCAACGCAAACCTAAAGGAAATAAATCAAGCATCAGTGGCACAGAACAGGAAATATTTCAAGTGGAATTGAATCTGCAGAATCCCTCCTTGAACCACCAGGGCATCGACAAAATTTATGATTGTCAGGGGCTCCTGCCGCCGCCCGAAAAGTTGACAGCCGAGGTGCTGGGCATCATCTGTATAGTCTTGATGGCGACGGTTCTTAAGACAATTGTCCTTATACCCTTTCTGGAGCAAAACAATTTTTCACCCAATACTCGAACCCAAAAAGCTCGGCACTGCGGCCACTGTCCCGAGGAGTGGATAACATACTCAAACTCTTGCTATTATATCGGCAAAGAAAGAAGAACTTGGGAGGAGAGTTTGCTCGCTTGTACGAGCAAAAATAGCAGTCTCCTTTCCATCGATAACGAAGAGGAGATGAAATTCCTTGCGTCAATACTGCCTAGTTCTTGGATTGGCGTCTTTCGGAACTCCTCACACCACCCTTGGGTAACTATAAACGGCCTCGCATTCAAGCATAAGATCAAGGACTCTGACAACGCGGAGCTTAATTGTGCGGTTCTGCAAGTGAACCGGTTGAAGAGTGCCCAGTGCGGATCATCCATGATATACCACTGTAAACACAAGCTGTAG

細胞持続性（例えば、ＮＫ細胞持続性）関連遺伝子のインビトロスクリーニング

ＮＫ細胞は、持続性増強遺伝子編集を検討するためのモデル細胞集団として利用することができる。ＮＫ細胞の集団は、（ｉ）ＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドを低下した発現、および／または（ｉｉ）ＮＫＧ２Ｃの発現の増強または導入を含むように操作することができる。このような操作されたＮＫ細胞の集団と、（ｉ）および／または（ｉｉ）を含まない他の細胞（例えば、他のＮＫ細胞）とを含む細胞の混合物における、操作されたＮＫ細胞の集団の持続レベルは、（ｉ）準最適環境における混合物内の操作されたＮＫ細胞の集団の濃縮レベルは、（ｉｉ）最適環境における混合物内の操作されたＮＫ細胞の集団の濃縮レベルより大きいことによって特徴付けられ得る。準最適環境は、より低い量（または濃度）の外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２などの外因性ＩＬ）を含むことができる。例えば、準
最適環境は、最適環境と比較して、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれ以上に低く外因性サイトカインの量を含むことができる。準最適環境はインビトロ培地とすることができ、最適環境はインビトロ培地とすることができる。準最適環境はインビボ環境（例えば、対象の血流）とすることができ、最適環境はインビトロ培地とすることができる。このような混合物中の操作されたＮＫ細胞の集団の濃縮レベルは、以下を示す細胞の量（または割合）を同定することによって確認することができる：（ｉ）ＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドを低下した発現、および／または（ｉｉ）ＮＫＧ２Ｃの発現の増強または導入。

理論により束縛されることは望まないが、目的の遺伝子（例えば、ＦＣＥＲ１Ｇの機能喪失）の発現または活性レベルが低いＮＫ細胞は、準最適環境（例えば、低サイトカイン）において、より長く生存または持続する可能性がある。より最適な環境（例えば、高サイトカイン）では、ＮＫ細胞がこのような目的の遺伝子（例えば、ＦＣＥＲ１Ｇ）の低下した発現または活性レベルのを含んでいるかどうかにかかわらず、ＮＫ細胞は高い生存率や持続性を示す可能性がある。従って、準最適環境（またはより困難な環境）において、異なるタイプの細胞との混合物でのより高い濃縮度（例えば、ＩＮＤＥＬ％）を示すことは、そのような機能喪失遺伝子が細胞の生存または持続性の増強を誘導可能を示唆することができる。

例えば、ＮＫ持続性に関連する遺伝子を見つけるために、操作されたＮＫ細胞の１つ以上の集団（例えば、遺伝子組換えＣＢＮＫ細胞などの、１８種類の遺伝子編集ＮＫ細胞）を本明細書に開示される混合物に混合し、高サイトカイン（２００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２）または低サイトカイン（１０Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２）を用いて培養した。８日間培養後、ＮＧＳにより各遺伝子の編集パーセント（％ＩＮＤＥＬ）を解析した。各遺伝子のエレクトロポレーションを個別に２回行うことにより２つの混合物を調製し、各培養条件について３つの反復を設定した。方法デザインを示したフローチャートを図１４Ａに示す。

低サイトカインまたは高サイトカイン（あるいは準最適環境またはより最適環境）での持続性

低サイトカイン培養ＮＫ細胞と高サイトカイン培養ＮＫ細胞の編集パーセントを比較すると、図１４Ｂおよび図１４Ｃに示されるように、ＦＣＥＲ１Ｇ欠損編集は低サイトカイン培養で、上昇した編集パーセントを示した、これは、ＦＣＥＲ１Ｇ欠損ＮＫ細胞は低サイトカイン条件下でより優れた持続性を示したことを示すが、ＰＴＰＮ２は同じアッセイで有意差はなかった。

従って、細胞（例えば、幹細胞、ＮＫ細胞などの免疫細胞）において、ＰＴＰＮ２（例えば、ＦＣＥＲ１Ｇ）ではない免疫調節ポリペプチドを低下した発現または活性レベルを有することは、細胞において増強された持続または生存率を誘導することができる。

ＮＫ持続性関連遺伝子のインビボスクリーニング

ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞持続性スクリーニングと同様に、操作されたＮＫ細胞（例えば、遺伝子組換えＣＢＮＫ細胞などの、１８種類の遺伝子編集ＮＫ細胞）を本明細書に開示される混合物に混合し、高サイトカイン（２００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２）（より最適な環
境）を用いて培養したか、ｈＩＬ－１５－ＮＣＧマウスに注射した（準最適環境）、各混合ＮＫ細胞は５マウスに（例えば、１Ｘ１０^７個／マウスの）量で注入した。時間をかけて（例えば、８日間後）、インビトロで培養したＮＫ細胞またはマウス組織を採取し、ゲノムを抽出した。各遺伝子の編集パーセント（％ＩＮＤＥＬ）をＮＧＳにより解析した。各遺伝子のエレクトロポレーションを個別に２回行うことにより２つの混合物を調製し、インビトロ培養について３つの反復を設定し、各混合ＮＫ細胞注入については５つのマウスを使用した。方法デザインを示すフローチャートを図１４Ａに示す。

インビボでの持続性

図１５Ｂ－図１５Ｇに示すように、高サイトカインで培養したＮＫ細胞とマウス組織中のＮＫ細胞の編集パーセントを比較すると、ＳＴＡＴ３欠損編集は、高サイトカインでの培養と比較して、マウス組織での編集パーセントが増加された、これは、ＳＴＡＴ３欠損ＮＫ細胞はインビボでの生存性、持続性に優れていることを示すが、ＰＴＰＮ２は同じアッセイで有意差はなかった。

従って、細胞（例えば、幹細胞、ＮＫ細胞などの免疫細胞）において、ＰＴＰＮ２（例えば、ＳＴＡＴ３）ではない免疫調節ポリペプチドを低下した発現または活性レベルを持つことは、その細胞に増強された持続または生存率を誘導することができる。

実施例５：操作されたＣＡＲ ＮＫ細胞

細胞治療（例えば、適応免疫療法など）の改善について、目的の細胞は、標的細胞（例えば、癌細胞または腫瘍細胞）の特異的抗体に対する抗原結合性部分を含む異種キメラポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体）を含むように操作されることができ、そのような標的細胞に対して増強された細胞毒性を示すようにする。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞から誘導されることができる。例えば、幹細胞由来のＮＫ細胞については、本明細書に開示される１つ以上の遺伝子改変を、（Ａ）幹細胞の状態（例えば、ｉＰＳＣの状態）、（Ｂ）造血幹細胞の状態、および／または（Ｃ）ＮＫ細胞の状態で導入されることができる。あるいは、このような免疫細胞は免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

操作された抗－ＣＤ１９ ＮＫ細胞

ＮＫ細胞（例えば、ＮＫ－９２細胞）を抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するように操作され、ＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞の存在下で培養し、操作された抗ＣＤ１９ ＮＫ細胞によるＲａｊｉ細胞のターゲティングを評価した。野生型（ＷＴ）ＮＫ－９２細胞を対照として用いた。抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ＮＫ細胞は、対照と比較して、Ｒａｊｉ細胞に対する増強された細胞傷害性を示した（生存Ｒａｊｉ細胞数の減少により確認）（図２Ａおよび２Ｂ）。さらに、Ｒａｊｉ細胞の存在下で培養すると、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ＮＫ細胞は、対照と比較して、内在性ＣＤ１０７ａ（細胞傷害性顆粒の放出を示す）の発現の増強を示した（図２Ｃおよび２Ｄ）。さらにまた、Ｒａｊｉ細胞の存在下で培養すると、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ＮＫ細胞は、対照と比較して、増強されたサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮ－γおよび／またはＴＮＦ－α産生）を示した（図２Ｅ～２Ｇ）。

ＣＤ３３－ＣＡＲを発現するＮＫ細胞

ＣＤ３３に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を発現するＮＫ細胞を生成した。ＣＤ３３ ＣＡＲ構造設計の概略図を図１６Ａに示す。ＣＤ３３を高発現する腫瘍細胞株であるＫＧ１細胞に対するＣＤ３３－ＣＡＲを組み
込んだＮＫ９２細胞の標的化細胞傷害性を、Ｅ／Ｔ（エフェクター／標的）比１：１で試験した。ＷＴ－ＮＫ９２細胞を非改変対照として用いた。図１６Ｂに示すように、ＫＧ１細胞に対するＣＤ３３－ＣＡＲの標的化細胞傷害性は、対照と比較して大幅に改善された。

ＢＣＭＡ－ＣＡＲを発現するＮＫ細胞

ＢＣＭＡに特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を発現するＮＫ細胞を生成した。ＢＣＭＡ ＣＡＲ構造設計の概略図を図１７Ａに示す。ＢＣＭＡを高発現する腫瘍細胞株であるＲＰＭＩ８８２６細胞にＢＣＭＡ－ＣＡＲを組み込んだＮＫ９２細胞の標的化細胞傷害性、ＣＤ１０７ａおよびＩＮＦ－ｒ発現を図１７Ｂ－１７Ｄに示す。使用したＥ／Ｔ（エフェクター／標的）比は１：１；１：５および１：１０であった。ＷＴ－ＮＫ９２細胞を非修飾対照として用いた。

異なるキメラポリペプチド受容体設計構築物

図１９Ａは、異なるキメラペプチド受容体（例えば、ＣＡＲ）構築物を示す。図１９Ａ上段は、ＣＤ１９ ＣＡＲ（２Ｂ４）構造設計を概略的に示す。ＴＭは膜貫通ドメインの略であり、ＳＣＦＶは一本鎖可変フラグメントの略である。図１９Ａ中段は、ＣＤ１９ ＣＡＲ（４－１－ＢＢ）構造設計を概略的に示す。ＴＭは膜貫通ドメインの略であり、ＳＣＦＶは一本鎖可変フラグメントの略である。図１９Ａ下段は、ＣＤ１９ ＣＡＲ（ＣＤ２８）の構造設計を概略的に示す。ＴＭは膜貫通ドメインの略であり、ＳＣＦＶは一本鎖可変フラグメントの略である。

図１９Ｂおよび１９Ｃは、図１９Ａに示すキメラポリペプチド受容体設計の１つを発現するＮＫ細胞による標的細胞に対する標的化細胞傷害性を示す。図１９Ｂを参照すると、ＣＤ１９－Ｋ５６２細胞に対する種々のＣＤ１９－ＣＡＲ ＮＫ９２の標的化細胞傷害性（Ｅ／Ｔ（エフェクター／標的）は５：１；１：１および０．５：１）は、４－１－ＢＢシグナル伝達ドメイン、２Ｂ４シグナル伝達ドメイン、および／またはＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ構築物を発現するＮＫ細胞が、ＣＤ１９提示Ｋ５６２標的細胞に対して標的化細胞傷害性を示すことが分かった。ＷＴ－ＮＫ９２細胞を非改変対照として用い、ＣＤ１９－Ｋ５６２はＣＤ１９を高発現させるように操作されたＫ５６２である。図１９Ｃを参照すると、ＣＤ１９を高発現するように操作されていないＫ５６２細胞に対するＣＤ１９－ＣＡＲ ＮＫ９２の非特異的細胞傷害性（Ｅ／Ｔ（エフェクター／標的）は５：１；１：１および０．５：１）では、細胞傷害性がより低いことが示され、４－１－ＢＢ、２Ｂ４および／またはＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインが、例えば、ＮＫ細胞療法などのような免疫療法のために、様々なＣＡＲコンストラクトを設計するのに有用であること示した。

実施例６：操作されたｈＩＬ１５ ＮＫ細胞

細胞療法（例えば、幹細胞療法、適応免疫療法など）を改善するために、目的の細胞は、増強されたサイトカインシグナル伝達（例えば、増強または導入された、異種分泌ＩＬ－１５、異種膜結合型ＩＬ－１５、異種ＩＬ－１５サイトカイン－ＩＬ１５受容体融合などのＩＬ－１５により増強されたＩＬ－１５シグナル伝達）を示すように操作することができる。目的の細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞であり得る。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞に由来し得る。あるいは、このような免疫細胞は、免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

操作されたＮＫ細胞：

ＮＫ－９２細胞は（ｉ）ｈＩＬ－１５ノックインまたは（ｉｉ）ｈＩＬ－１５－ｈＩＬ１５Ｒ融合ポリペプチドノックインにより操作された。ｈＩＬ－１５－ｈＩＬ１５Ｒ融合ポリペプチドの２つのバリアントを試験した。第１のバリアント（すなわち、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ融合－１または「ｆｕｓ１」）は、ｈＩＬ－１５とｈＩＬ１５Ｒとの間のリンカーを有するように設計され、該リンカーは、１つ以上（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上の反復）の「ＧＧＧＧＳ」（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ９）、例えば、「ＧＧＧＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ」（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１０）を含む。第２の変異体（すなわち、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ融合－２または「ｆｕｓ２」）は、ｈＩＬ－１５とｈＩＬ１５Ｒとの間のリンカーを有するように設計され、該リンカーは、１つ以上の（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上の反復）「ＧＧＧＧＳ」（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ９）、および１つ以上の「ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ」（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １１）（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のの反復）、例えば、「ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＧＧＳ」（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ． １２）を含む。ｈＩＬ－１５－ｈＩＬ１５Ｒ融合ポリペプチドバリアントのいずれかがノックインされたＮＫ－９２細胞は、ｈＩＬ－１５に対して陽性であった（図３Ａ）。

さらに、増強されたＩＬ－１５のシグナル伝達のためのｈＩＬ－１５－ｈＩＬ１５Ｒ融合ポリペプチドのいずれかのバリアントを発現するように操作されたＮＫ－９２細胞は、分泌型のＩＬ－１５を発現するように操作された対照のＮＫ－９２細胞と比較して、より長い持続性を示した。ウェスタンブロット分析は、分泌型ＩＬ－１５（ＩＬ１５）と比較して、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ融合－１（ｆｕｓ１）またはｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ融合－２（ｆｕｓ２）のいずれかを発現するＮＫ－９２細胞において、ＩＬ－１５刺激ＳＴＡＴ５のリン酸化が増加されたことを明らかにした（図３Ｂ）。

ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ 融合－１ 配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １３）：

MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL

ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ 融合－２ 配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １４）：

MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSEGKSSGSGSESKSTEGKSSGSGSESKSTGGGGSGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL

ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ 融合－１ ｉＰＳＣクローンから分化したｉＮＫ細胞における膜結合型ＩＬ－１５発現

ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ 融合－１ ｉＰＳＣクローンから分化したいくつかのｉＮＫ細胞ＰＷ１５、ＰＷ１８、ＰＷ２３においてＩＬ１５の発現を確認した。図６に示すように、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を実施することにより、対照、野生型（ｗｔ）ｉＮＫ細胞およびアイソタイプと比較して、膜結合型ＩＬ－１５を発現するクローンにおけるＩＬ－１５の表面発現を定量した。こうして、予想した膜結合型ＩＬ－１５の過剰発現レベルについて、クローンは検証された。

操作されたｉＰＳＣから分化したｅＮＫ細胞のインビトロ成長

ＫＢ－１５細胞は、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａ、ａＣＤ１９ ＣＡＲ、および増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントを発現するｉＰＳＣクローンから分化したｅＮＫ細胞（例えば、ｉＰＳＣから分化し、その後拡大したＮＫ細胞）である。ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）を添加または無添加で培養した２ｘ１０^７ ＫＢ－１５のインビトロ増殖を３０日間モニターした。培養細胞は３～４日ごとに回収・計数され、培地はその際に対応する培地で更新された。図７に示すように、ＫＢ－１５細胞は、外因性サイトカイン非存在下でも、外因性サイトカイン存在下と同程度に旺盛に増殖できた。

ＩＬ－１５シグナルが増強された操作されたＮＫ細胞（例えば、ｈＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒａを含むＫＢ－１５ ＮＫ細胞）について、外因性ＩＬ－２を実質的に含まない培地で培養した操作されたＮＫ細胞は、外因性ＩＬ－２を含む培地で培養した操作されたＮＫ細胞よりも増強された持続性（例えば、５日目、９日目、１２日目、１６日目、２３日目、２６日目など）を示した。

理論により束縛されることは望まないが、増強されたＩＬ－１５シグナル伝達を含む操作されたＮＫ細胞に外因性ＩＬ－２を添加すると、ＩＬ－１５の自己活性化または自己活性化ＩＬ－１５のシグナル伝達経路を妨害することができ、それによって、操作されたＮＫ細胞の持続性または生存レベルが低下する。例えば、結合型ＩＬ－１５は分泌型ＩＬ（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５）よりも高い程度に下流ＩＬシグナル伝達（例えば、ＳＴＡＴ経路）を誘導する能力を有することができ、しかし、十分な量の分泌型ＩＬは、同じ膜受容体に対する競合体として作用し、膜結合型ＩＬ－１５と各自の受容体（例えば、ＩＬ－１５Ｒ）との結合の機会およびそのシグナル伝達を減少させることができる。対照的に、野生型ＮＫ細胞（図７のｗｔ ｅＮＫ）については、培地中に外因性ＩＬ－２が存在しないため、持続性が低下した。その理由は、野生型ＮＫ細胞は、持続性のＩＬシグナル伝達経路の自己活性化を促進するための膜結合型ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ１５－ＩＬ１５Ｒ融合体）を有しないからである。従って、ＩＬ－１５シグナル伝達を増強された操作されたＮＫ細胞を、インビボで投与し、血流中または対象組織中のＩＬ－２などのサイトカイン量が少ない（または準最適）場合、操作されたＮＫ細胞は、自己誘導によるＩＬ－１５の活性化を介して、最適な持続性または生存を示すことができる。

ｉＮＫに分化したＩＬ－１５を発現するＩＰＳＣ。

操作されたｉＰＳＣはｉＮＫ分化に供された。具体的には、細胞を含む５ｘ１０^５培養物を回収し、ＮＫＧ２Ａ－ＰＥ、ＮＫｐ３０－ＰＥ、ＮＫｐ４４－ＰＥ、ＮＫｐ４６－ＰＥおよびＣＤ５６－ＡＰＣ抗体による染色に用いた。それぞれ図８Ａ－８Ｅに示すように、ＣＤ５６^＋細胞は分化した細胞全体から検出され、ＮＫＧ２Ａ^＋細胞、ＮＫｐ３０^＋細胞、ＮＫｐ４４^＋細胞、およびＮＫｐ４６^＋細胞は、膜結合型ＩＬ－１５を発現するＰＷ１５、ＰＷ１８、およびＰＷ２３の３つの例示的クローンのＣＤ５６^＋集団から検出された。従って、膜結合型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣは、ｉＮＫ細胞に分化できることが証明された。

膜結合型ＩＬ－１５を発現するｅＮＫ細胞のインビボ薬物動態測定

Ｎａｌｍ－６異種移植モデルを有する三重免疫不全ＮＣＧマウスをインビボ薬物動態アッセイに使用した。このマウスは、機能的あるいは成熟したＴ、Ｂ、ＮＫ細胞を欠いており、異種移植モデルを宿主とするために、マクロファージと樹状細胞の機能が低下していた。ＣＤ１９ＣＡＲ、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントで編集した、および結合型ＩＬ－１５（ＱＮ－０１９）により編集されたｉＰＳＣから分化したｅＮＫ細胞を、ＮＣＧマウスに１匹あたり約１×１０^７個を尾静脈注射した。同様に、対照としてＷＴ ｉＰＳＣから分化させたｅＮＫ細胞（ＱＮ－００１）を投与した。図９Ａ－９Ｂに示すように、ＣＤ５６－ＡＰＣ抗体を用いたＦＡＣＳにより、注入後８、１５および２２日間における末梢血中のＮＫ細胞濃度を検出した。ＣＤ５６＋のＱＮ－０１９細胞は、異種移植モデルへの注入後、ＱＮ－００１細胞よりも著しく速く増殖し、ＱＮ－０１９細胞において好ましい薬物動態プロファイルを有することを証明した。

ｉＮＫに分化した分泌型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣ

操作されたｉＰＳＣはｉＮＫ分化に供された。分泌性ＩＬ－１５を発現する３つのクローン、ＰＸ２７、ＰＸ３３、ＰＸ３９を試験した。具体的には、細胞を含む１ｘ１０^５培養物を回収し、ＣＤ５６－ＡＰＣ抗体による染色に用いた。全分化した細胞におけるＣＤ５６^＋細胞のパーセントを有する図１０Ａは、分泌型ＩＬ－１５を発現するｉＰＳＣがｉＮＫに分化できたことを示す。

培地中の分泌型ＩＬ－１５の検証

分泌型ＩＬ－１５、ａＣＤ１９ ＣＡＲ、およびＣＤ１６シグナルを増強するバリアント（ＫＡ０８）を発現するｉＰＳＣクローンから分化した１ｘ１０^６個のｉＮＫ細胞を、培地を更新することなく２日間培養し、上清を回収して１０倍に希釈し、ヒトＩＬ－１５
ＥＬＩＳＡキットを用いてヒトＩＬ－１５を測定した。ｉＮＫ培養液中のＩＬ－１５の濃度を示す図１０Ｂは、ｉＮＫ細胞が培養液中にヒトＩＬ－１５を分泌することが検証されたことを証明する。

分泌性ＩＬ－１５を発現するｅＮＫ細胞のインビトロ成長

図１０Ｃは、分泌性ＩＬ－１５、ａＣＤ１９ ＣＡＲ、およびＣＤ１６シグナルを増強するバリアント（ＯＱ－２０）を発現するｉＰＳＣクローンから分化した５ｘ１０^６個のｅＮＫ細胞のインビトロ成長曲線を示す。培養細胞は４日間ごとに回収・計数され、外因性サイトカイン非存在下の培地は、その際に対応する培地で更新された。１６日間の細胞の成長を記録し、曲線としてプロットした。従って、分泌性ＩＬ－１５を発現するｅＮＫ細胞は、外因性サイトカインなしにインビトロで増殖することが証明された。

実施例７：免疫調節ポリペプチド遺伝子編集

細胞療法（例えば、幹細胞療法、適応免疫療法など）を改善するために、目的の細胞は、（ｉ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（例えば、１つ以上の内在性免疫調節ポリペプチド）の低下した発現、および／または（ｉｉ）１つ以上の追加免疫調節ポリペプチド（例えば、１つ以上の異種免疫調節ポリペプチド）の発現の増強または導入を示すように操作することができる。本明細書に開示される（ｉ）および／または（ｉｉ）を含む細胞は、持続レベル（または生存レベル）低免疫性（例えば、免疫拒絶または細胞傷害性に対する抵抗性）、成長速度、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する細胞傷害性などのような強化された機能を示すことができる。

場合によっては、（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか一方を単独で有すること、または（ｉ）および（ｉｉ）の個々の効果の組合せて有すること、若しくは有しないことと比較して、（ｉ）および（ｉｉ）の組合せを有することにより、細胞の機能を相乗的に改善することができる。場合によっては、２つ以上の免疫調節ポリペプチドの低下した発現の個々のメンバーを有すること、またはそのような個々のメンバーの個々の効果の組み合わせを有することとと比較して、２つ以上の免疫調節ポリペプチドの低下した発現を有することは、細胞の機能を相乗的に改善することができる。場合によっては、２つ以上の追加免疫調節ポリペプチドの発現が増強／導入された個々のメンバーを有すること、またはそのような個々のメンバーの個々の効果の組み合わせを有することと比較して、２つ以上の免疫調節ポリペプチドの発現を増強／導入することは、細胞の機能を相乗的に改善することができる。

目的の細胞は、単離された幹細胞（例えば、胚性幹細胞）または誘導幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）などの幹細胞であり得る。目的の細胞は免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）であり得る。このような免疫細胞は、本明細書に開示される幹細胞に由来し得る。あるいは、このような免疫細胞は、免疫細胞株（例えば、ＮＫ細胞株）であり得る。

操作された細胞：

表２は、複数の免疫調節ポリペプチドの改変された発現または活性の組み合わせの例を示す。宿主体内への細胞投与に伴う宿主体からの免疫応答（例えば、適応免疫拒絶などの免疫攻撃）を軽減または回避するために、表２からの複数の免疫調節ポリペプチドを細胞（例えば、操作されたＮＫ細胞）に導入してもよい。表２からの複数の免疫調節ポリペプチドの改変された発現または活性の組み合わせは、（ｉ）１つ以上の第１の免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性（列２）、および（ｉｉ）１つ以上の第２の免疫調節ポリペプチド（列３）の増強された発現または活性を含んでいてもよい。場合によっては、表２からの複数の免疫調節ポリペプチドの改変された発現または活性の組み合わせは、（ｉ）１つまたは複数の内在性免疫調節ポリペプチド遺伝子のノックアウト（列２）および（ｉｉ）１つまたは複数の異種免疫調節ポリペプチド遺伝子のノックイン（列３）を含んでいてもよい。

改変されたNK細胞の生成

低免疫性を達成するために、NK細胞は特定の導入遺伝子および／または目的の遺伝子機能喪失を有するように操作することができる。

ＮＥＣＴＩＮ３／ＣＤ１１３の最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４２）

ATGGCGAGAACTCTGCGGCCAAGTCCACTTTGCCCTGGGGGAGGAAAGGCTCAACTGTCTTCCGCCAGCCTCCTTGGGGCCGGGCTGTTGCTCCAGCCACCCACACCGCCGCCCCTGCTGCTCTTGCTTTTTCCTCTGTTGCTCTTTTCAAGGCTGTGCGGTGCTCTCGCGGGGCCGATTATCGTAGAACCCCATGTAACTGCAGTATGGGGAAAGAACGTGTCCTTGAAGTGCCTTATTGAGGTAAATGAGACAATCACGCAAATTAGTTGGGAGAAGATTCATGGAAAAAGTAGCCAAACAGTAGCTGTCCACCATCCACAGTATGGGTTCTCAGTACAGGGGGAGTACCAGGGGCGGGTACTTTTTAAAAATTACTCCCTTAACGATGCGACTATCACCCTGCACAATATTGGTTTCTCAGATAGCGGCAAATACATTTGTAAGGCTGTGACATTCCCACTTGGAAACGCTCAATCCTCAACGACGGTTACTGTTCTCGTTGAGCCTACTGTATCCCTCATAAAGGGTCCGGACTCTTTGATTGATGGTGGTAACGAGACTGTCGCAGCCATCTGTATAGCAGCGACTGGGAAGCCTGTAGCGCATATTGATTGGGAGGGGGATTTGGGGGAGATGGAGTCTACAACCACCAGTTTCCCCAATGAGACAGCTACAATCATTTCACAATACAAGTTGTTTCCAACGCGGTTCGCCCGGGGACGCCGAATAACCTGTGTAGTTAAGCACCCGGCATTGGAGAAGGACATTCGGTACTCCTTCATTCTGGATATTCAGTATGCTCCTGAAGTAAGTGTGACAGGTTACGATGGGAACTGGTTTGTCGGACGGAAGGGTGTTAATTTGAAGTGCAACGCGGATGCAAACCCACCCCCTTTTAAGTCTGTCTGGTCTCGATTGGACGGACAATGGCCCGACGGGTTGTTGGCGTCAGATAATACTCTTCATTTTGTTCATCCCCTGACTTTTAATTATAGCGGTGTCTACATCTGCAAAGTCACCAACTCCCTTGGTCAGCGATCCGACCAGAAGGTGATTTATATATCCGATCCTCCAACTACGACAACTTTGCAACCCACGATTCAGTGGCACCCGTCAACCGCTGACATAGAGGACTTGGCGACTGAACCAAAAAAACTTCCTTTTCCGTTGAGTACACTCGCAACGATAAAAGATG
ATACCATTGCCACTATAATTGCTTCCGTCGTTGGGGGGGCTCTGTTTATCGTTCTTGTGTCCGTGTTGGCTGGAATATTCTGCTACCGGCGCCGGCGAACCTTCCGCGGCGATTACTTCGCCAAGAATTACATTCCTCCCTCTGACATGCAAAAGGAATCACAAATAGACGTGTTGCAACAGGACGAGCTTGATAGTTATCCTGACTCTGTTAAGAAGGAAAATAAGAATCCAGTGAATAATCTTATACGAAAGGACTATCTGGAAGAGCCCGAAAAAACACAATGGAACAATGTGGAGAATTTGAACCGATTTGAGCGACCCATGGATTACTATGAGGATCTTAAGATGGGAATGAAGTTCGTTTCAGATGAGCATTATGATGAGAATGAAGATGACCTTGTCAGCCACGTGGACGGTTCTGTCATCAGCAGAAGGGAATGGTATGTCTAG

ＡＤＯＲＡ２Ａ／Ａ２ＡＲの最適化された導入遺伝子配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４３）

ATGCCCATTATGGGCTCATCCGTCTATATAACAGTGGAGCTCGCTATTGCCGTGCTTGCAATTCTCGGCAACGTATTGGTCTGTTGGGCTGTTTGGCTTAACTCCAACCTTCAGAACGTGACTAATTATTTTGTAGTATCACTTGCTGCAGCCGATATAGCTGTGGGGGTGCTCGCTATTCCTTTTGCGATTACAATATCCACGGGCTTTTGTGCAGCATGTCACGGGTGTCTCTTCATAGCCTGCTTCGTACTGGTGTTGACACAGTCATCCATTTTTAGCCTTCTTGCCATCGCTATAGATCGCTATATTGCGATTCGAATCCCCTTGCGCTATAACGGGCTGGTAACTGGCACAAGGGCCAAAGGTATTATTGCTATATGTTGGGTCCTCTCATTTGCTATTGGATTGACTCCGATGCTGGGGTGGAATAATTGTGGACAGCCGAAGGAGGGCAAAAACCATTCACAAGGCTGTGGGGAAGGACAGGTAGCCTGCCTTTTTGAGGATGTGGTACCCATGAACTATATGGTCTATTTCAATTTCTTTGCATGCGTCCTTGTACCGCTTTTGCTCATGCTGGGGGTTTACCTCAGGATATTTCTTGCCGCCCGAAGGCAACTTAAACAGATGGAATCTCAACCGCTCCCAGGGGAGCGCGCCAGAAGTACACTGCAAAAGGAAGTGCATGCCGCCAAAAGCCTCGCGATCATAGTTGGCTTGTTTGCCTTGTGTTGGCTTCCCCTCCACATCATAAATTGTTTTACTTTTTTTTGTCCCGACTGTTCACACGCGCCATTGTGGCTCATGTACCTTGCGATTGTGCTCAGCCACACAAACTCAGTAGTTAATCCTTTCATCTACGCTTATAGAATTCGAGAATTTCGCCAGACGTTTAGAAAGATTATACGGTCTCACGTATTGCGGCAGCAGGAACCTTTTAAGGCTGCTGGCACTTCTGCTCGGGTGCTCGCGGCACATGGATCAGACGGCGAGCAGGTCTCACTCAGACTGAACGGCCATCCACCAGGAGTTTGGGCGAACGGCTCTGCTCCCCACCCTGAACGACGGCCTAATGGTTACGCTCTTGGCCTGGTGTCTGGCGGTAGCGCCCAGGAATCACAAGGGAATACGGGTTTGCCAGATGTCGAGCTGCTTAGCCACGAACTTAAAGGGGTTTGTCCAGAGCCGCCAGGCCTCGATGATCCTCTTGCTCAGGACGGAGCTGGCGTGTCATGA

遺伝子ノックインによる操作されたＮＫ細胞の生成

ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＰＤＬ２、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、および／またはＣＤ５９などの遺伝子をノックインすることにより、ヒトｉＰＳＣ細胞を操作することができる。このような操作されたｉＰＳＣ細胞はＮＫ細胞に分化することができる。あるいは、ヒト末梢血（ＰＢ）－ＮＫ細胞をＡＡＶシステムで操作することもできる。該操作されたＮＫ細胞の低免疫性を検査するために可能な機能的測定値には、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）、Ｔ細胞活性化アッセイ、インビトロＮＫ細胞誘導殺傷アッセイ、および補体依存性細胞傷害性が含まれる。

ｉＰＳＣの編集・分化による低免疫性

低免疫性について、ｉＰＳＣ細胞からＮＫ細胞または内皮細胞（ＥＣ）を生成するための試験スキームを図１１に示す。簡単に説明すると、ｉＰＳＣは異なるノックインおよびノックアウトで編集することができる。ｉＮＫ細胞はＴ細胞増殖アッセイに、ｅＮＫ細胞はＮＫ細胞傷害性試験や低免疫性試験に用いることができる。また、編集したｉＰＳＣ細胞をｉＥＣ細胞（例えば、ｉＰＳＣ由来の内皮細胞）に分化させ、ＮＫ感受性アッセイに用いることもできる。

操作されたｉＰＳＣの生成方法

低免疫性を有するＮＫ細胞用ｉＰＳＣの生成には、いくつかの方法を用いることができる。例示的な方法を表７に示す。

簡単に説明すると、ＲＮＰ法は、Ｃａｓ９とｓｇＲＮＡを含む予め混合したリボ核タンパク質（ＲＮＰ）を標的細胞にエレクトロポレーションする方法である。細胞への送達後、ＲＮＰはｓｇＲＮＡと対になるゲノム領域を編集する。アデニン塩基エディター（ＡＢＥ）法は、Ｃａｓタンパク質をＤＮＡヌクレオシドを脱アミド化する酵素に結合させる方法である。

Ｅｄｉｔ－１クローンの確認

ヒトｉＰＳＣをＢ２Ｍを標的とするＲＮＰでエレクトロポレーションすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－１クローン（クローン０５、０７、０８、１０４、１１１、１１２）が得られた。Ｅｄｉｔ－１クローンは、ＭＨＣ－ＩのＦＡＣＳ分析（図１２Ａ参照）とサンガー配列決定（図１２Ｂ）によって、Ｂ２Ｍノックアウトであることが確認された。簡単に説明すると、クローン０５は両方のＢ２Ｍ対立遺伝子に１ヌクレオチドの挿入があり、クローン０７は一方のＢ２Ｍ対立遺伝子に１ヌクレオチドの挿入があり、他方の対立遺伝子に２ヌクレオチドの欠失があることが配列決定された。

Ｅｄｉｔ－２クローンの確認

同様に、ヒトｉＰＳＣをＣＩＩＴＡを標的とするＲＮＰでエレクトロポレーションした後、単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのｅｄｉｔ－２クローン（クローン０３と０６）が得られた。ｅｄｉｔ－２クローンはサンガー配列決定によって、ＣＩＩＴＡ ＫＯであることが確認された。図１２Ｃに示すように、クローン０３は、ＣＩＩＴＡ対立遺伝子の両方に１ヌクレオチドの挿入があり、クローン０６は、一方のＣＩＩＴＡ対立遺伝子に１ヌクレオチドの挿入があり、他方の対立遺伝子に１６ヌクレオチドの欠失があることが配列決定された。

Ｅｄｉｔ－３クローンの確認

ｈｉＰＳＣをそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２種類のＲＮＰでエレクトロポレーションすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－３クローン（クローン０４、２０、２５、４８、１６）が得られた。Ｅｄｉｔ－３クローンは、ＭＨＣ－ＩのＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍノックアウトであることが確認され（図１２Ｄ参照）、サンガー配列決定によってゲノムレベルでのＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡのノックアウトが確認された（図１２Ｅ参照）。

Ｅｄｉｔ－４クローンの確認

ｈｉＰＳＣ をＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、およびそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＰＤＬ１^＋；ＣＤ４７^＋の単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－４クローン（クローン０２および３０）が得られた。Ｅｄｉｔ－４クローンは、ＭＨＣ－Ｉ、ＰＤＬ１＋、ＰＤ２＋、ＣＤ４７＋、ＣＤ４６＋、ＣＤ５５＋、ＣＤ５９＋のＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍ－であることが確認され（図１２Ｆ参照）、サンガー配列決定によってＢ２ＭとＣＩＩＴＡのゲノムレベルでのノックアウトが確認された。ＣＩＩＴＡについては、１つの対立遺伝子のみがノックアウトされたことが確認された（図１２Ｇ参照）。

Ｅｄｉｔ－５クローンの確認

ｈｉＰＳＣをＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＰＤＬ１^＋；ＣＤ４７^＋の単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－５クローン（クローン０１、０２、２６）が得られた。Ｅｄｉｔ－５クローンは、ＭＨＣ－Ｉ、ＰＤＬ１＋、ＣＤ４７＋のＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍであることが確認され（図１２Ｈ参照）、ゲノムレベルでＢ２ＭとＣＩＩＴＡのＫＯを確認するためにサンガー配列決定を使用した（図１２Ｉ参照）。

Ｅｄｉｔ－６クローンの確認

ｈｉＰＳＣをＰＤ－Ｌ１，ＨＬＡ－Ｅ，ＣＤ４７，ＣＤ４６，ＣＤ５５，ＣＤ５９、およびそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＰＤＬ１^＋；ＣＤ４７^＋の単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－６クローン（クローン０８、１３、１５、３１）が得られた。Ｅｄｉｔ－６クローンは、ＭＨＣ－ＩおよびＰＤＬ１＋、ＣＤ４７＋、ＣＤ４６＋、ＣＤ５５＋、ＣＤ５９＋のＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍ－であることが確認され（図１２Ｊ参照）、ゲノムレベルでＢ２ＭとＣＩＩＴＡのＫＯを確認するためにサンガー配列決定を使用した（図１２Ｋ参照）。

Ｅｄｉｔ－７クローンの確認

ｈｉＰＳＣをＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＣＬ－２１、ＣＤ５５、およびそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＰＤＬ１^＋；ＣＤ４７^＋の単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－７クローン（クローン３２、３３、３９、４２）が得られた。Ｅｄｉｔ－７クローンは、ＭＨＣ－ＩおよびＰＤＬ１＋、ＣＤ４７＋、ＨＬＡ－Ｅ＋、ＣＤ５５＋のＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍ－であることが確認され（図１２Ｌ参照）、ゲノムレベルでＢ２ＭとＣＩＩＴＡのＫＯを確認するためにサンガー配列決定を使用した（図１２Ｍ参照）。

Ｅｄｉｔ－８クローンの確認

ｈｉＰＳＣを、ＣＤ４およびそれぞれＢ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰを過剰発現する構築物でエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＣＤ４７^＋の単一細胞
をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－８クローン（クローン１５、３６、４０、４２）が得られた。Ｅｄｉｔ－８クローンは、ＭＨＣ－ＩおよびＣＤ４７＋のＦＡＣＳ分析によってＢ２Ｍ－であることが確認され（図１２Ｎ参照）、ゲノムレベルでＢ２ＭとＣＩＩＴＡのＫＯを確認するためにサンガー配列決定を使用した（図１２Ｏ参照）。

Ｅｄｉｔ－９クローンの確認

ｈｉＰＳＣをＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、Ｂ２ＭとＣＩＩＴＡを標的とする２つのＲＮＰ、およびＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１を標的とするｓｇＲＮＡを過剰発現する１つのＢａｓｅ Ｅｄｉｔｏｒプラスミドでエレクトロポレーションした後、Ｂ２Ｍ^－；ＰＤＬ１^＋；ＣＤ４７^＋の単一細胞をＦＡＣＳソーティングすることにより、いくつかのＥｄｉｔ－９クローン（クローン０３、１０、２２、２７、３４、３６、３７、および６３）が得られた。Ｅｄｉｔ－９クローンは、ＭＨＣ－ＩおよびＣＤ４７＋、Ｂ２Ｍ＋、ＨＬＡ－Ｅ＋、ＰＤＬ１＋、ＣＤ５５＋、ＣＤ４６＋、ＣＤ５９＋のＦＡＣＳ分析によりＢ２Ｍ－であることが確認され（図１２Ｐ参照）、ゲノムレベルでＢ２ＭとＣＩＩＴＡのＫＯを確認するためにサンガー配列決定を使用した。ＭＩＣＡ／ＭＩＣＢ／ＵＬＢＰ１のＫＯは次世代シーケンサーを用いて確認した。記号√は、遺伝子のノックアウトに成功したことを表す（図１２Ｑ参照）。

抗体媒介補体細胞傷害に対する抵抗性

図１３Ａに示すように、異なるＥｄｉｔ ｉＰＳＣクローンをＳＳＥＡ－４抗体で前標識化した後、０％～５０％の範囲で異なる濃度のヒト補体と４５分間共インキュベートした。その結果、Ｅｄｉｔ－５、Ｅｄｉｔ－８ではなく、Ｅｄｉｔ－４を有するｉＰＳＣは抗体媒介補体細胞傷害に抵抗性であった。

理論により束縛されることは望まないが、抗体媒介補体細胞傷害に対する抵抗性の増強は、以下の免疫調節ポリペプチドの１つ以上の発現が増強または導入されることに起因すると考えられる：ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびＨＬＡ－Ｇ（例えば、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９のうち少なくとも１つ以上）。従って、理論により束縛されることは望まないが、Ｅｄｉｔ－９（図１８参照）を含む細胞は、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－８のいずれかを有する細胞と比較して、抗体媒介補体細胞傷害に対する増強された抵抗性を示すこともある。

理論により束縛されることは望まないが、Ｅｄｉｔ－４またはＥｄｉｔ－９を有するｉＰＳＣは、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－９のいずれかを有するｉＰＳＣと比較して、インビトロまたはインビボにおいて抗体媒介補体細胞傷害に対する増強された抵抗性を示すことができる。Ｅｄｉｔ－４またはＥｄｉｔ－９を含むｉＰＳＣから分化した細胞（例えば、内皮細胞、免疫細胞など）は、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－９のいずれかを有するｉＰＳＣから分化した比較できるような細胞と比較して、インビトロまたはインビボにおいて抗体媒介補体細胞傷害に対する増強された抵抗性を示すことができる。理論により束縛されることは望まないが、Ｅｄｉｔ－４またはＥｄｉｔ－９を含むｉＰＳＣ由来の免疫細胞は、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－９のいずれかを有するｉＰＳＣ由来の免疫細胞と比較して、インビトロまたはインビボにおいて抗体媒介補体細胞傷害に対する増強された抵抗性を示すことができる。理論により束縛されることは望まないが、Ｅｄｉｔ－４またはＥｄｉｔ－９を含むｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞は、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－９のいずれかを有するｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞と比較して、インビトロまたはインビボにおいて抗体媒介補体細胞傷害に対する増強された抵抗性を示すことができる。

ＣＢＮＫ 細胞傷害性

対応するｉＰＳＣから分化した標的細胞ｉＥＣをＣＦＳＥで前標識化し、エフェクター：標的比が５：１で４時間共培養した。４時間後、死細胞を染色するためにＰＩを添加した。死細胞パーセントを検出するにはＦＡＣＳを使用した。ＣＢＮＫと共培養しなかったｉＥＣは、標的細胞の自然死とみなした。ＮＫ細胞に媒介される標的細胞の特異的溶解パーセントを算出するために、以下の式を用いた：ＮＫ媒介特異的溶解（％）＝（共培養におけるＰＩ陽性標的細胞％－自然細胞死におけるＰＩ陽性標的細胞％）／（１００－自然細胞死におけるＰＩ陽性標的細胞％）。定量結果を図１３Ｂに示すが、Ｅｄｉｔ－５またはＥｄｉｔ－８ではなく、Ｅｄｉｔ－４を有する対応ｉＰＳＣから分化したｉＥＣは、ＣＢＮＫ細胞傷害性に対して抵抗性であったことを示す。

ｉＰＳＣからの分化効率

生成されたｉＰＳＣはｉＮＫ分化に供された。細胞を含む培養物２００ｕｌを回収し、ＣＤ５６およびＮＫＧ２Ａ染色に用いた。染色後、細胞を１００ｕｌのＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ＋１％ ＢＳＡ）に再懸濁した。８０ｕｌの細胞懸濁液を分析用に回収した。ＣＤ５６＋細胞数の収率は以下のように計算した：（ＦＡＣＳで回収した絶対ＣＤ５６＋細胞）＊１８ｍｌ／（２００ｕｌ＊０．８）＝（ＦＡＣＳで回収した絶対ＣＤ５６＋細胞）＊ １１２．５（図１３Ｃ参照）；ＣＤ５６＋およびＮＫＧ２Ａ＋のパーセントは、それぞれ図１３Ｄおよび１３Ｅに示した。上図から示唆されるように、異なる編集を有するｉＰＳＣは、収率および効率は様々であったが、全てｉＮＫに分化することができた。

低免疫性ＮＫ細胞の機能特性

図１３Ｆは、Ｋ５６２に対する単回殺傷を示す。対応するｅＮＫを、ＣＦＳＥ前標識化したＫ５６２細胞と、Ｅ：Ｔ＝３：１または１：１の比率で共培養した。４時間後、死細胞を染色するためにＰＩを添加した。死細胞パーセントを検出するにはＦＡＣＳを使用した。ｅＮＫと共培養しなかったＫ５６２は、標的細胞の自然死とみなした。ＮＫ細胞に媒介される標的細胞の特異的溶解パーセントを算出するために、以下の式を用いた：ＮＫ媒介特異的溶解率（％）＝（共培養におけるＰＩ陽性標的細胞％－自然細胞死におけるＰＩ陽性標的細胞％）／（１００－自然細胞死におけるＰＩ陽性標的細胞％）。

図１３Ｇは、Ｋ５６２に対する連続殺傷を示す。対応するｅＮＫをＥ：Ｔ＝３：１の比率でＫ５６２－ＥＧＦＰ細胞と共培養し、共培養はＩｎｃｕｃｙｔｅ中で行った。Ｋ５６２－ＥＧＦＰ細胞は３時間毎にイメージングによってモニターした。Ｋ５６２は６日間毎日添加した。Ｋ５６２－ＧＦＰのみのサンプルを対照とした。

図１３Ｆおよび１３Ｇは、Ｂ２Ｍ／ＣＩＩＴＡ二重ノックアウトｅＮＫはＫ５６２細胞に対して低応答性表現型を示さず、Ｋ５６２細胞に対して試験した場合、導入遺伝子を有するほとんどのｅＮＫは、ＷＴ ｅＮＫに対して比較できるような細胞毒性を有していたことを示す。理論により束縛されることは望まないが、他の標的細胞に対する低反応性や細胞毒性は異なることがある。

異なる編集を有するｉＮＫがＰＢＭＣ中のＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するかどうかを調べるため、対応するｅＮＫをＣＦＳＥ標識化ＰＢＭＣと共培養した。陰性対照にはＰＢＳを、陽性対照にはＰＨＡを用いた。５日間培養後、共培養細胞をＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８で染色した。ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋ＣＦＳＥ^ｌｏｗを増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞とみなした。異なるドナーからのＰＢＭＣを図１３Ｈ－１３Ｍで試験した。このデータは、導入遺伝子を持
つまたは持たないＢ２Ｍ／ＣＩＩＴＡ二重ノックアウトＮＫはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を刺激しなかったことを示す。

同様に、対応するｅＮＫをＣＦＳＥ標識化ＰＢＭＣと共培養した。ＰＢＳを陰性対照とし、ＰＨＡを陽性対照とした。５日間培養後、共培養細胞をＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８で染色した。ＣＤ３^＋ＣＤ８^＋ＣＦＳＥ^ｌｏｗを増殖ＣＤ８^＋Ｔ細胞とみなした。異なるドナーからのＰＢＭＣを図１３Ｎ－１３Ｓで試験した。１３Ｎ－１３Ｓ。このデータは、導入遺伝子を持つまたは持たないＢ２Ｍ／ＣＩＩＴＡ二重ノックアウトＮＫはＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を刺激しなかったことを示す。

実施形態

以下の非限定的な実施形態は、本発明の具体例を提供するが、本発明の範囲を限定するものではない。

実施形態 １． 操作されたＮＫ細胞であって、
前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である、分泌型ＩＬ－１５および
以下の１つ以上を含み：
（ｉ）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、ここで、ＣＤ１６バリアントは、前記細胞に対して異種である、または
（ｉｉ）抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、ここで前記抗原はＣＤ１９ではない，
前記操作された細胞が、異種ＩＬ－１５Ｒを欠く、操作されたＮＫ細胞、
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が前記ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記キメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）を含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉｉ）を含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）および（ｉｉ）の両方を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が前記分泌型ＩＬ－１５をコードする異種ポリヌクレオチドをさらに含む；および／または
（７）前記抗原が、：ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、および ｇｐ１００からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（８）前記抗原が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択されるＮＫＧ２Ｄリガンドを含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態２． 単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞であって、前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である分泌型ＩＬ－１５を含み、前記操作された細胞が、異種ＩＬ－１５Ｒを欠く、操作されたＮＫ細胞。
任意に、前記操作されたＮＫ細胞が前記分泌型ＩＬ－１５をコードする異種ポリヌクレオチドをさらに含む。

実施形態３． 操作されたＮＫ細胞であって、
前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である、膜結合型 ＩＬ－１５含み，
前記操作されたＮＫ細胞が、以下の１つ以上をさらに含む：
（ａ）ＩＬ－１５ではない異種サイトカイン、
（ｂ）内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性，ここで前記内在性免疫調節ポリペプチド はＢ２Ｍではない、または
（ｃ）セーフティスイッチ，
操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞がＩＬ－１５ではない異種サイトカインを含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を含む、ここで前記内在性免疫調節ポリペプチドはＢ２Ｍではない；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞がセーフティスイッチを含む、任意に前記セーフティスイッチが誘導性細胞死部分を含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｃ）のを含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する；および／または
（７）前記膜結合型ＩＬ－１５は、ＩＬ－１５、およびＩＬ－１５Ｒの少なくとも一部を含むキメラ膜受容体の一部である；および／または
（８）前記キメラ膜受容体は、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ９の４つ以上の隣接リピート、（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １０、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １１、（ｉｖ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ９ とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １１との組み合わせ、（ｖ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１２、（ｖｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １３、および（ｖｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． １４）からなる群から選択される配列を含む。

実施形態４． 操作されたＮＫ細胞であって，
前記操作されたＮＫ細胞においての増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための、ＣＤ１６の少なくとも一部とＣＤ６４の少なくとも一部を含むＣＤ１６バリアントを含み、
内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示す、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態５． 操作されたＮＫ細胞であって，低下した内在性 ＩＬ－１７ シグナル伝達を含み、前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＩＬ－１７または内在性 ＩＬ－１７Ｒの低下した発現を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＩＬ－１７および内在性 ＩＬ－１７Ｒの低下した発現を含む；および／または
（３）前記内在性 ＩＬ－１７はＩＬ－１７Ａである；および／または
（４）前記内在性 ＩＬ－１７はＩＬ－１７Ｆである；および／または
（５）前記内在性 ＩＬ－１７Ｒ が ＩＬ－１７ＲＡ、ＩＬ－１７ＲＢ、ＩＬ－１７ＲＣ、ＩＬ－１７ＲＤ、またはＩＬ－１７ＲＥを含む；および／または
（６）前記内在性 ＩＬ－１７ＲがＩＬ－１７ＲＡを含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞は、内在性ＩＬ－１７の低下した発現または活性を有しない対照細胞と比較して、ＮＫ細胞マーカーを増強された発現プロファイルを示す；および／または
（１１）ＮＫ細胞マーカーがヒトＣＤ５７またはキラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を含む；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞は、内在性ＩＬ－１７シグナル伝達活性が低下していない対照細胞と比較して、腫瘍細胞の存在下で増強された生存を示す。

実施形態６． 異種ＳＴＡＴを含む、操作されたＮＫ細胞であって，
前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞は、異種ＳＴＡＴを有しない対照細胞と比較して、腫瘍細胞の存在下で増強された生存を示す；および／または
（２）前記異種ＳＴＡＴがＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、またはＳＴＡＴ６を含む；および／または
（３）前記異種ＳＴＡＴがＳＴＡＴ３を含む；および／または
（４）前記異種ＳＴＡＴがＳＴＡＴ５Ｂを含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態７． 操作されたＮＫ細胞であって、
内在性キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）の低下した発現または活性を含み，
以下の１つ以上をさらに含む、操作されたＮＫ細胞、：
（ａ）抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、
（ｂ）ａ 異種サイトカイン，
（ｃ）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、ここで、ＣＤ１６バリアントは、前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である，
（ｄ）異種 免疫調節ポリペプチド、および／または
（ｅ）低下した発現または活性 ｏｆ 内在性免疫調節ポリペプチド，
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が前記キメラポリペプチド受容体を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種サイトカインを含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が前記ＣＤ１６バリアントを含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種免疫調節ポリペプチドを含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が前記内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｅ）の２つ以上を含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｅ）の３つ以上を含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｅ）の４つ以上を含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｅ）のすべてを含む；および／または
（１０）前記 ＫＩＲ がＫＩＲ２Ｄを含む；および／または
（１１）前記 ＫＩＲ２Ｄ がＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、またはＫＩＲ２ＤＳ５を含む；および／または
（１２）前記 ＫＩＲ がＫＩＲ３Ｄを含む；および／または
（１３）前記 ＫＩＲ３Ｄ がＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、またはＫＩＲ３ＤＳ１を含む；および／または
（１４）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（１５）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（１６）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態８． 操作されたＮＫ細胞であって，：
以下の１つ以上の低下した発現または活性を含み：
（ｉ）内在性 ＣＤ９４，
（ｉｉ）内在性 ＣＤ９６、
（ｉｉｉ）内在性 ＴＧＦβ受容体、および／または
（ｉｖ）内在性 ＳＨＩＰ２，
前記操作された細胞は単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ９４の低下した発現または活性を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ９６の低下した発現または活性を含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＴＧＦβ受容体の低下した発現または活性を含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＳＨＩＰ２の低下した発現または活性を含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｉｖ）の２つ以上の低下した発現または活性を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｉｖ）の３つ以上の低下した発現または活性を含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｉｖ）の低下した発現または活性を含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態９． 操作されたＮＫ細胞であって，：
以下の１つ以上の低下した発現または活性を含み：
（ｉ）内在性 ＣＤ８０，
（ｉｉ）内在性 ＣＤ８６、
（ｉｉｉ）内在性 ＩＣＯＳＬ，
（ｉｖ）内在性 ＣＤ４０Ｌ，
（ｖ）内在性 ＭＩＣＡ ｏｒ ＭＩＣＢ、および／または
（ｖｉ）内在性 ＮＫＧ２ＤＬ，
前記操作された細胞は単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ８０の低下した発現または活性を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ８６の低下した発現または活性を含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＩＣＯＳＬの低下した発現または活性を含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ４０Ｌの低下した発現または活性を含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＭＩＣＡ ｏｒ ＭＩＣＢの低下した発現または活性を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＮＫＧ２Ｄの低下した発現または活性を含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖｉ）の２つ以上の低下した発現または活性を含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖｉ）の３つ以上の低下した発現または活性を含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖｉ）の４つ以上の低下した発現または活性を含む；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖｉ）の５つ以上 の低下した発現または活性を含む；および／または
（１１）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖｉ）の低下した発現または活性を含む；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む。；および／または
（１３）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態１０． 操作されたＮＫ細胞であって、
内在性 ＩＣＡＭ１の低下した発現または活性を含み、
ここで前記操作された細胞が以下の１つ以上をさらに含む：
（ａ）抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、
（ｂ）異種サイトカイン、および／または
（ｃ）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、ここで、ＣＤ１６バリアントは、前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が前記キメラポリペプチド受容体を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種サイトカインを含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が前記ＣＤ１６バリアントを含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｃ）の２つ以上を含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が（ａ）－（ｃ）のすべてを含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態１１． 操作されたＮＫ細胞であって、内在性 ＩＣＡＭ１の低下した発現または活性を含み，前記操作された細胞は誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態１２． 操作されたＮＫ細胞であって，以下の１つ以上を含む：（ｉ）異種 ＰＤ－Ｌ２ ｏｒ（ｉｉ）異種 ＴＧＦ－β、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＰＤ－Ｌ２を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＴＧＦ－βを含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）前記異種 ＰＤ－Ｌ２および（ｉｉ）前記異種
ＴＧＦ－βを含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態１３． 操作されたＮＫ細胞であって、以下の１つ以上を含み：
（ｉ）異種 ＣＣＬ２１，
（ｉｉ）異種 ＩＬ－１０，
（ｉｉｉ）異種 ＣＤ４６，
（ｉｖ）異種 ＣＤ５５、および／または
（ｖ）異種 ＣＤ５９，
前記操作された細胞は単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＣＣＬ２１を含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＩＬ－１０を含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＣＤ４６を含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＣＤ５５を含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種 ＣＤ５９を含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖ）の２つ以上を含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖ）の３つ以上を含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖ）の４つ以上を含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）－（ｖ）のすべてを含む；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（１１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態１４． 操作されたＮＫ細胞であって、誘導幹細胞に由来し、ＩＬ－１５では
ない異種サイトカインを含む、操作されたＮＫ細胞。
任意にＩＬ－１５ではない前記異種サイトカインがＩＬ－２１を含む。

実施形態１５． 操作されたＮＫ細胞であって、誘導幹細胞に由来し，異種ＩＬ－２１を含む、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態１６． 操作されたＮＫ細胞であって、
ＣＤ３８に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含み，
前記操作されたＮＫ細胞は単離された胚性幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態１７． 操作されたＮＫ細胞であって、
ＣＤ８ 膜貫通ドメインおよび以下の１つ以上：（ｉ）２Ｂ４ シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）ＤＡＰ１０ シグナル伝達ドメインを含む、キメラポリペプチド受容体、を含む、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記キメラポリペプチド受容体が２Ｂ４ シグナル伝達ドメインを含む；および／または
（２）前記キメラポリペプチド受容体がＤＡＰ１０ シグナル伝達ドメインを含む；および／または
（３）前記キメラポリペプチド受容体が（ｉ）２Ｂ４ シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）ＤＡＰ１０ シグナル伝達ドメインを含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態１８． 単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞であって、前記操作されたＮＫ細胞が：
以下の１つ以上：（ｉ）ＣＤ８ 膜貫通ドメイン、（ｉｉ）２Ｂ４ シグナル伝達ドメイン、または（ｉｉｉ）ＤＡＰ１０ シグナル伝達ドメインを含むキメラポリペプチド受容体を含む、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記キメラポリペプチド受容体がＣＤ８ 膜貫通ドメインを含む；および／または
（２）前記キメラポリペプチド受容体が２Ｂ４ シグナル伝達ドメインを含む；および／または
（３）前記キメラポリペプチド受容体がＤＡＰ１０ シグナル伝達ドメインを含む；お
よび／または
（４）前記キメラポリペプチド受容体が（ｉ）－（ｉｉｉ）の２つ以上を含む；および／または
（５）前記キメラポリペプチド受容体が（ｉ）－（ｉｉｉ）のすべてを含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態１９． 操作されたＮＫ細胞であって，
ＣＤ２３に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含む、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態２０． 操作されたＮＫ細胞であって，
ＣＤ１２３ に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含み，
前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、操作されたＮＫ細胞。
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む。

実施形態２１． 操作されたＮＫ細胞であって，
ＣＤ７に特異的に結合することができる抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体を含み、
前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ７の低下した発現または活性を示す，
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞においてのＴＣＲの発現または活性は改変されていない；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントをさらに含む；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態２２． 操作されたＮＫ細胞であって、表２に同定される複数の免疫調節ポリペプチドの改変された発現または活性の組み合わせを含み、
前記複数の免疫調節ポリペプチドの改変された発現または活性の組み合わせが（ｉ）１つ以上の第一免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性、および（ｉｉ）１つ以上の第二免疫調節ポリペプチドの増強された発現または活性を含む、操作されたＮＫ細胞
任意に：
（１）前記１つ以上の第一免疫調節ポリペプチドは、前記操作されたＮＫ細胞に対して内在性である；および／または
（２）前記１つ以上の第二免疫調節ポリペプチドは、前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である；および／または
（３）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞が異種サイトカインをさらに含む；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 サイトカインの低下した発現または活性をさらに含む；
（６）前記操作されたＮＫ細胞が前記操作されたＮＫ細胞においての増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞がセーフティスイッチをさらに含む；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、標的細胞に対しての増強された細胞傷害性を示す；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、宿主細胞においての低下した免疫応答を誘導する，
任意に前記宿主細胞は免疫細胞である；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞は単離された幹細胞に由来する，
任意に：
（ａ）前記単離された幹細胞が胚性幹細胞を含む；および／または
（ｂ）前記誘導幹細胞が誘導多能性幹細胞を含む。

実施形態２３． 先行実施形態 １－２２のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞、
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＣＤ３８の低下した発現または活性を示す；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞の内在性ＣＤ３８の発現または活性は改変されていない；および／または
（３）前記異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは前記操作されたＮＫ細胞によって分泌される；および／または
（４）前記異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは膜結合型である；および／または
（５）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞が異なる追加抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（７）前記キメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分は異なる２つ以上の抗原に特異的に結合することができる多特異性結合部分である；および／または
（８）前記抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、および ｇｐ１００からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（９）前記抗原が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択されるＮＫＧ２Ｄリガンドを含む；および／または
（１０）前記操作されたＮＫ細胞が前記操作されたＮＫ細胞の死をもたらすことができるセーフティスイッチをさらに含む；および／または
（１１）前記セーフティスイッチがカスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、７、または９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲおよびＢ細胞ＣＤ２０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞が異種サイトカインをさらに含む；および／または
（１３）ｔｈｅ 異種サイトカイン が ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、および ＩＬ２１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１４）前記操作されたＮＫ細胞をさらに含む異種免疫調節ポリペプチド；および／または
（１５）前記異種免疫調節ポリペプチドがＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１６）操作されたＮＫ細胞が内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示す；および／または
（１７）前記内在性免疫調節ポリペプチドが免疫チェックポイント阻害剤または低免疫性調節因子を含む；および／または
（１８）前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＫＩＲ２Ｄ、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＴ、ＣＤ９６、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ受容体、および ２Ｂ４からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１９）前記免疫チェックポイント阻害剤がＳＨＩＰ２を含む；
（２０）前記低免疫性調節因子がＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＡＭ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（２１）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアントを含む、ここで、ＣＤ１６バリアントは、前記操作されたＮＫ細胞に対して異種である；および／または
（２２）前記ＣＤ１６バリアントが ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ． １－８からなる群から選択される配列を含む ；
（２３）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、標的細胞に対しての増強された細胞傷害性を示す；および／または
（２４）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、宿主細胞においての低下した免疫応答を誘導する；および／または
（２５）前記宿主細胞は免疫細胞である；および／または
（２６）前記単離された幹細胞が胚性幹細胞を含む；および／または
（２７）前記誘導幹細胞が誘導多能性幹細胞を含む。

実施形態２４． 先行実施形態 １－２３のいずれか一項に記載の前記操作されたＮＫ細胞、
任意に：
（１）前記操作されたＮＫ細胞は、標的細胞の死を誘導するための方法に使用するためのものであり、任意に前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である；および／または
（２）前記操作されたＮＫ細胞はそれを必要としている対象を治療するための方法に使用される、ここで前記対象は、状態を有するか、有すると疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である，
任意に前記操作されたＮＫ細胞は前記対象に対して自己由来または同種異系である；
（３）前記操作されたＮＫ細胞 は標的細胞の死を誘導するための医薬品の製造のために使用するための、任意に前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である；および／または
（４）前記操作されたＮＫ細胞はそれを必要としている対象を治療するための医薬品の
製造のために使用するための、ここで前記対象は、状態を有するか、有すると疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である，
任意に前記操作されたＮＫ細胞は前記対象に対して自己由来または同種異系である。

実施形態２５． 対象から細胞を得ること、および
前記細胞から、先行実施形態 １－２４のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞を生成することを含む、方法。

実施形態２６． それを必要としている対象に先行実施形態１－２４のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞を含むＮＫ細胞の集団を投与することを含む、方法。
任意に前記方法が、前記対象に単独の治療剤を投与することをさらに含む。
さらに任意に前記単独の治療剤が、化学療法剤である。

実施形態２７． 先行実施形態 １－２４のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞、および
ＣＤ２０に結合することができる単独の治療剤を含む、組成物。

実施形態２８． 組成物であって、
以下の１つ以上のメンバーを含む操作された免疫細胞、
（ｉ）異種ＩＬ－１５またはそのフラグメント、
（ｉｉ）対照細胞と比較して、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のためのＣＤ１６バリアント、ここで、ＣＤ１６バリアントは、操作された免疫細胞に対して異種である、およびｏｒ
（ｉｉｉ）抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体、および
ＣＤ２０に結合することができる単独の治療剤を含む、組成物。
任意に：
（１）前記操作された免疫細胞が異種ＩＬ－１５を含む；および／または
（２）前記異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは前記操作された免疫細胞によって分泌される；および／または
（３）前記異種ＩＬ－１５またはそのフラグメントは膜結合型である；および／または
（４）前記操作された免疫細胞が前記ＣＤ１６バリアントを含む；および／または
（５）前記ＣＤ１６バリアントがＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ． １－８からなる群から選択される配列を含む ；および／または
（６）前記操作された免疫細胞 が前記キメラポリペプチド受容体を含む；および／または
（７）前記操作された免疫細胞 が（ｉ）－（ｉｉｉ）の２つ以上を含む；および／または
（８）前記操作された免疫細胞 が（ｉ）－（ｉｉｉ）を含む；および／または
（９）前記操作された免疫細胞 が 操作されたＮＫ細胞であって；および／または
（１０）前記操作された免疫細胞が操作されたＴ細胞を含む；および／または
（１１）前記操作された細胞が内在性 ＣＤ３８の低下した発現または活性を示す；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞の内在性ＣＤ３８の発現または活性は改変されていない
；
（１３）前記キメラポリペプチド受容体の抗原結合性部分は異なる２つ以上の抗原に特異的に結合することができる多特異性結合部分である；および／または
（１４）前記抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、
ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、および ｇｐ１００からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１５）前記抗原が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択されるＮＫＧ２Ｄリガンドを含む；および／または
（１６）前記操作された免疫細胞が前記操作された免疫細胞の死をもたらすことができるセーフティスイッチをさらに含む；および／または
（１７）前記セーフティスイッチがカスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、７、または９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲおよびＢ細胞ＣＤ２０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（１８）前記操作された免疫細胞が異種サイトカインをさらに含む；および／または
（１９）前記異種サイトカインがＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、および ＩＬ２１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（２０）ｔｈｅ 操作された免疫細胞が異種 免疫調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２１）前記異種 免疫調節ポリペプチドがＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（２２）前記操作された免疫細胞が内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性を示す；および／または
（２３）前記内在性免疫調節ポリペプチドが免疫チェックポイント阻害剤または低免疫性調節因子を含む；および／または
（２４）前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＫＩＲ２Ｄ、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＩＴ、ＣＤ９６、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ受容体、および ２Ｂ４からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（２５）前記免疫チェックポイント阻害剤がＳＨＩＰ２を含む；および／または
（２６）前記低免疫性調節因子がＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＡＭ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ａ２ＡＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＴＧＦ－β、ＣＣＬ２１、ＩＬ１０、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（２７）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、標的細胞に対しての増強された細胞傷害性を示す；および／または
（２８）前記操作されたＮＫ細胞が、対照細胞と比較して、宿主細胞においての低下した免疫応答を誘導する；および／または
（２９）前記宿主細胞は免疫細胞である；および／または
（３０）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５Ｒまたはそのフラグメントを含む受容体をさらに含む；および／または
（３１）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する；および／または
（３２）前記単離された幹細胞が胚性幹細胞を含む；および／または
（３３）前記誘導幹細胞が誘導多能性幹細胞を含む。

実施形態２９． それを必要としている対象に実施形態 ２７または実施形態 ２８に記載の組成物を投与することを含む、方法。
任意に前記単独の治療剤が、化学療法剤である。

実施形態３０． 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞は異種ポリペプチドを含み、ここで前記異種ポリペプチドが異種ＩＬ－１５を含み、且つ
外因性インターロイキン２（ＩＬ－２）を実質的に含まない環境における前記操作されたＮＫ細胞の集団の持続レベルが、外因性ＩＬ－２を含む対照環境における比較できるようなＮＫ細胞の集団の対照持続レベルより少なくとも約５％大きい、操作されたＮＫ細胞の集団。
任意に：
（１）前記異種ＩＬ－１５が、膜結合型ＩＬ－１５である，
任意に前記異種ポリペプチドが、ＩＬ－１５、およびＩＬ－１５Ｒの少なくとも一部を含む融合ポリペプチドである；および／または
（２）前記異種ＩＬ－１５が、分泌型ＩＬ－１５である；および／または
（３）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約１０％大きい；および／または
（４）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約２０％大きい；および／または
（５）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約３０％大きい；および／または
（６）前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約５日間後で観察される；および／または
（７）前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約１５日間後で観察される；および／または
（８）前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約２１日間後で観察される；および／または
（９）前記環境中の外因性インターロイキンの量が、約１０単位／ミリリットル（Ｕ／ｍｌ）から約５００Ｕ／ｍＬの間である。；および／または
（１０）前記環境が、インビトロである；および／または
（１１）前記持続性レベルは、それを必要としている対象の体内への操作されたＮＫ細胞の集団の投与後に確認される；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞が前記異種ポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチド配列を含む；および／または
（１３）前記操作されたＮＫ細胞が増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（１４）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（１５）前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（１６）前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（１７）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態３１． 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
前記集団における操作されたＮＫ細胞は異種分泌ＩＬ－１５を含み、且つ
前記操作されたＮＫ細胞の集団が、異種分泌ＩＬ－１５を欠くＮＫ細胞の対照集団の内在性下流シグナル伝達タンパクの対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも約０；および／または１倍大きいなＩＬ－１５の内在性下流シグナル伝達タンパクのシグナル伝達レベルを示す、操作されたＮＫ細胞の集団。
任意に：
（１）前記シグナル伝達レベルが、前記内在性下流シグナル伝達タンパクのリン酸化レ
ベルである；および／または
（２）前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも０．５倍大きい；および／または
（３）前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも１倍大きい；および／または
（４）前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも５倍大きい；および／または
（５）前記内在性下流シグナル伝達タンパクが、ＳＴＡＴを含む；および／または
（６）前記内在性下流シグナル伝達タンパクが、ＳＴＡＴ５を含む；および／または
（７）前記シグナル伝達レベルが、外因性インターロイキンを実質的に含まない環境中で観察される；および／または
（８）前記外因性インターロイキンが、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５を含む；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５受容体を含まない；および／または
（１０ 前記操作されたＮＫ細胞が前記異種分泌ＩＬ－１５をコードする異種ポリヌクレオチド配列をさらに含む；および／または
（１１）前記操作されたＮＫ細胞が増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（１２）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（１３）前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（１４）前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（１５）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態３２． 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つまたは複数のメンバーを含む少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを含み、且つ
少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを欠くＮＫ細胞の対照集団と比較して、前記操作されたＮＫ細胞の集団は、免疫拒絶に対する増強された抵抗性を示す，
任意に：
（１）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５％である；および／または
（２）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約１０％である；および／または
（３）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約２０％である；および／または
（４）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５０％である；および／または
（５）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約１０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（６）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約２０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（７）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約４０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（８）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性は、それを必要としている対象の体内への操作されたＮＫ細胞の集団の投与後に確認される；および／または
（９）前記操作されたＮＫ細胞が前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチド
をコードする異種ポリヌクレオチド配列を含む；および／または
（１０）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２を含む；および／または
（１１）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＴＧＦ－βを含む；および／または
（１２）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ４６を含む；および／または
（１３）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ５５を含む；および／または
（１４）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ５９を含む；および／または
（１５）前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む；および／または
（１６）前記操作されたＮＫ細胞が、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（１７）前記操作されたＮＫ細胞が、ＨＬＡ－Ｇを含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（１８）前記操作されたＮＫ細胞がＰＤ－Ｌ１を含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（１９）前記操作されたＮＫ細胞が、ＨＬＡ－Ｅを含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２０）前記操作されたＮＫ細胞がＣＤ４７を含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２１）前記操作されたＮＫ細胞がＩＬ－１０を含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２２）前記操作されたＮＫ細胞がＣＣＬ－２１を含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２３）前記操作されたＮＫ細胞がＣＤ５９を含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む；および／または
（２４）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、および ＩＣＡＭ－１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２５）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＢＰ１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２６）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２７）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＢを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２８）前記操作されたＮＫ細胞がＵＬＢＰ１を含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２９）前記操作されたＮＫ細胞がＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡからなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３０）前記操作されたＮＫ細胞が、ＩＣＡＭ－１を含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３１）前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む；および／または
（３２）前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（３３）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（３４）前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（３５）前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（３６）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態３３． 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを含み、且つ
操作されたＮＫ細胞の集団が、１つ以上の複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを欠くＮＫ細胞の対照集団と比較して、少なくとも約５％増強される免疫拒絶に対する抵抗力を示す、操作されたＮＫ細胞の集団。
任意に：
（１）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５％である；および／または
（２）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約１０％である；および／または
（３）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約２０％である；および／または
（４）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５０％である；および／または
（５）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約１０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（６）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約２０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（７）前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約４０％のヒト補体を含む培地中で確認される；および／または
（８）前記操作されたＮＫ細胞が前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドをコードする少なくとも１つの異種ポリヌクレオチド配列を含む；および／または
（９）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む；および／または
（１０）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される３つ以上のメンバーを含む；および／または
（１１）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される４つ以上のメンバーを含む；および／または
（１２）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される５つ以上のメンバーを含む；および／または
（１３）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、および ＨＬＡ－Ｇからなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む；および／または
（１４）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ２を含む；および／または
（１５）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＴＧＦ－βを含む；および／または
（１６）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ４６を含む；および／または
（１７）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ５５を含む；および／または
（１８）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ５９を含む；および／または
（１９）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＨＬＡ－Ｇを含む；および／または
（２０）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＰＤ－Ｌ１を含む；および／または
（２１）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＨＬＡ－Ｅを含む；および／または
（２２）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ４７を含む；および／または
（２３）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＩＬ－１０を含む；および／または
（２４）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＣＬ－２１を含む；および／または
（２５）前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドがＣＤ５９を含む；および／または
（２６）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、および ＩＣＡＭ－１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２７）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＢＰ１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２８）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（２９）前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＢを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３０）前記操作されたＮＫ細胞がＵＬＢＰ１を含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３１）前記操作されたＮＫ細胞がＢ２ＭおよびＣＩＩＴＡ１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３２）前記操作されたＮＫ細胞が、ＩＣＡＭ－１を含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む；および／または
（３３）前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む；および／または
（３４）前記操作されたＮＫ細胞が増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（３５）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む；および／または
（３６）前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（３７）前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（３８）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する。

実施形態３４． 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞は、（ｉ）ＰＴＰＮ２ではない少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現、および／または（ｉｉ）ＮＫＧ２Ｃの増強または導入された発現を含み、且つ
操作されたＮＫ細胞集団の持続レベルは、（ｉ）および／または（ｉｉ）を欠くＮＫ細胞の対照集団の対照持続レベルよりも高い。
任意に：
（１）前記ＮＫ細胞の対照集団が内在性ＰＴＰＮ２の低下した発現を含む；および／または
（２）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約１０％大きい；および／または
（３）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約２０％大きい；および／または
（４）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約５０％大きい；および／または
（５）前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約１００％大きい；および／または
（６）前記操作されたＮＫ細胞がＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（７）前記操作されたＮＫ細胞がＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（８）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＢＣＬ３を含む；および／または
（９）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＣＢＬＢを含む；および／または
（１０）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＣＤＫ８を含む；および／または
（１１）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＦＣＥＲ１Ｇを含む；および／または
（１２）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＩＬ１７Ａを含む；および／または
（１３）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＩＬ１７Ｆを含む；および／または
（１４）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＨＩＰ１を含む；および／または
（１５）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＯＣＳ１を含む；および／または
（１６）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＯＣＳ２を含む；および／または
（１７）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＯＣＳ３を含む；および／または
（１８）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＴＡＴ３を含む；および／または
（１９）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＴＥＴ３を含む；および
／または
（２０）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＰＴＰＮ６を含む；および／または
（２１）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＣＤ７０を含む；および／または
（２２）前記操作されたＮＫ細胞がＮＫＧ２Ｃの増強または導入された発現を含む；および／または
（２３）前記操作されたＮＫ細胞が内在性 ＮＫＧ２Ｃの増強された発現を含む；および／または
（２４）前記操作されたＮＫ細胞が異種 ＮＫＧ２Ｃを含む；および／または
（２５）前記操作されたＮＫ細胞がＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ７、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＢＰからなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（２６）前記操作されたＮＫ細胞が前記ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ７、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＢＰからなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（２７）前記操作されたＮＫ細胞がＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ７、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＢＰからなる群から選択される３つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（２８）前記操作されたＮＫ細胞がＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ７、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＢＰからなる群から選択される４つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（２９）前記操作されたＮＫ細胞がＮＬＲＣ５を含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３０）前記操作されたＮＫ細胞がＲＦＸＡＮＫを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３１）前記操作されたＮＫ細胞がＲＦＸＡＰを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３２）前記操作されたＮＫ細胞がＣＤ８０を含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３３）前記操作されたＮＫ細胞がＣＤ７を含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３４）前記操作されたＮＫ細胞がＴＡＰ２を含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３５）前記操作されたＮＫ細胞がＴＡＰ１を含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３６）前記操作されたＮＫ細胞がＴＡＰＢＰを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む；および／または
（３７）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）を含み、前記ＮＫ細胞の対照集団が（ｉ）を欠く；および／または
（３８）前記操作されたＮＫ細胞が（ｉｉ）を含み、前記ＮＫ細胞の対照集団が（ｉｉ）を欠く；および／または
（３９）前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む；および／または
（４０）前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む；および／または
（４１）前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポ
リペプチド受容体をさらに含む；および／または
（４２）前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（４３）前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む；および／または
（４４）前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する；および／または
（４５）前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドがＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、および／またはＳＯＣＳ３を含まない；および／または
（４６）前記操作されたＮＫ細胞がＮＫＧ２Ｃの増強または導入された発現を含まない。

実施形態３５． 先行実施形態 ３０－３４のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団、
任意に：
（１）前記キメラポリペプチド受容体が、異なる２つ以上の抗原に特異的に結合することができる多特異性結合部分である；および／または
（２）前記抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、および ｇｐ１００からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む；および／または
（３）前記抗原が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択されるＮＫＧ２Ｄリガンドを含む；および／または
（４）前記操作された免疫細胞が前記操作された免疫細胞の死をもたらすことができるセーフティスイッチをさらに含む；および／または
（５）前記セーフティスイッチがカスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、７、または９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲおよびＢ細胞ＣＤ２０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む。

実施形態３６． 先行実施形態３０－３５のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団、
任意に：
（１）操作されたＮＫ細胞の集団が、標的細胞の死を誘導するための方法に使用するためのものであり、任意に前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である；および／または
（２）操作されたＮＫ細胞の集団が、それを必要としている対象を治療するためのものである、ここで前記対象は、状態を有するか、有すると疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である，
さらに任意に前記操作されたＮＫ細胞は前記対象に対して自己由来または同種異系である；および／または
（３）操作されたＮＫ細胞の集団が、標的細胞の死を誘導するための医薬品の製造のために使用するための、任意に前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である；および／または
（４）操作されたＮＫ細胞の集団はそれを必要としている対象を治療するための医薬品の製造のために使用するための、ここで前記対象は、状態を有するか、有すると疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である，
さらに任意に前記操作されたＮＫ細胞は前記対象に対して自己由来または同種異系である。

実施形態３７． 先行実施形態 ３０－３５のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細
胞の集団を含む組成物、
任意に前記組成物が、単独の治療剤をさらに含む、
さらに任意に前記治療剤は化学療法剤である。

実施形態３８． 対象から１つ以上の細胞を得ること、および
前記１つ以上の細胞から先行実施形態 ３０－３５のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団を生成することを含む、方法、
任意に前記１つ以上の細胞が、ＮＫ細胞、造血幹細胞、または線維芽細胞である。

実施形態３９． 先行実施形態 ３０－３５のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団を生成するために、１つ以上の 誘導多能性幹細胞を操作することを含む、方法。

実施形態４０． 先行実施形態 ３０－３５のいずれか一項に記載のそれを必要としている対象に操作されたＮＫ細胞の集団を投与することを含む、方法。
任意に前記方法が、前記対象に単独の治療剤を投与することをさらに含む、
さらに任意に前記単独の治療剤が、化学療法剤である。

本発明の異なる態様は、個別的に、集合的に、またはお互いの組み合わせとして評価できることを理解されたい。本明細書に開示される、本発明のさまざまな態様は、本明細書に開示される特定の用途のいずれにも適用することができる。本開示の操作された免疫細胞を含む物質組成物は、本明細書に開示される使用方法および製造方法を含む方法の部分で利用することができる、またはその逆も同様である。

本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことが当業者に明らかであろう。本発明が明細書内で提供される特定の例によって制限されることは意図していない。本発明は前述の明細書に関して記載されているが、本明細書中の実施形態の記載および例示は、限定的な意味で解釈されることを目的としていない。当業者であれば、多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく思いつくだろう。さらに、本発明のすべての態様は、様々な条件および変数に依存する、本明細書で説明された特定の描写、構成、または相対的な比率に限定されないことが理解されよう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替案が、本発明の実施に際して利用され得ることを理解されたい。それゆえ、本発明は、任意のそのような代替物、修正物、変形物、または同等物にも及ぶものと企図される。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。

Claims (106)

1. 操作されたＮＫ細胞の集団であって、
   前記操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が異種ポリペプチドを含み、ここで前記異種ポリペプチドが異種ＩＬ－１５を含み、且つ
   外因性インターロイキン２（ＩＬ－２）を実質的に含まない環境における前記操作されたＮＫ細胞の集団の持続レベルが、外因性ＩＬ－２を含む対照環境における比較できるようなＮＫ細胞の集団の対照持続レベルより少なくとも約５％大きい、
   操作されたＮＫ細胞の集団。
2. 前記異種ＩＬ－１５が、膜結合型ＩＬ－１５である、請求項１に記載の集団。
3. 前記異種ポリペプチドが、ＩＬ－１５、およびＩＬ－１５Ｒの少なくとも一部を含む融合ポリペプチドである、請求項２に記載の集団。
4. 前記異種ＩＬ－１５が、分泌型ＩＬ－１５である、請求項１に記載の集団。
5. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約１０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
6. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約２０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
7. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約３０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
8. 前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約５日間後で観察される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
9. 前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約１５日間後で観察される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
10. 前記持続レベルおよび前記対照持続レベルが、それぞれ、前記環境および前記対照環境中で約２１日間後で観察される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
11. 前記環境中の外因性インターロイキンの量が、約１０単位／ミリリットル（Ｕ／ｍｌ）から約５００Ｕ／ｍＬの間である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
12. 前記環境が、インビトロである、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
13. 前記持続性レベルが、それを必要としている対象の体内への操作されたＮＫ細胞の集団の投与後に確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
14. 前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
15. 前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
16. 前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または
    活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
17. 前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
18. 前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
19. 操作されたＮＫ細胞の集団であって、ここで：
    前記集団における操作されたＮＫ細胞は異種分泌ＩＬ－１５を含み、且つ
    前記操作されたＮＫ細胞の集団が、異種分泌ＩＬ－１５を欠くＮＫ細胞の対照集団の内在性下流シグナル伝達タンパクの対照シグナル伝達レベルより少なくとも約０．１倍高いＩＬ－１５の内在性下流シグナル伝達タンパクのシグナル伝達レベルを示す、
    操作されたＮＫ細胞の集団。
20. 前記シグナル伝達レベルが、前記内在性下流シグナル伝達タンパクのリン酸化レベルである、請求項１９に記載の集団。
21. 前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも０．５倍大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
22. 前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも１倍大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
23. 前記シグナル伝達レベルが、前記対照シグナル伝達レベルよりも少なくとも５倍大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
24. 前記内在性下流シグナル伝達タンパクが、ＳＴＡＴを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
25. 前記内在性下流シグナル伝達タンパクが、ＳＴＡＴ５を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
26. 前記シグナル伝達レベルが、外因性インターロイキンを実質的に含まない環境中で観察される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
27. 前記外因性インターロイキンが、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
28. 前記操作されたＮＫ細胞が異種ＩＬ－１５受容体を含まない、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
29. 前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
30. 前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
31. 前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
32. 前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
33. 前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
34. 操作されたＮＫ細胞の集団であって、ここで：
    前記操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つまたは複数のメンバーを含む少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを含み、且つ
    少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドを欠くＮＫ細胞の対照集団と比較して、前記操作されたＮＫ細胞の集団は、免疫拒絶に対する増強された抵抗性を示す、
    操作されたＮＫ細胞の集団。
35. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５％である、請求項３４に記載の集団。
36. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約１０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
37. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約２０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
38. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
39. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約１０％のヒト補体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
40. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約２０％のヒト補体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
41. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約４０％のヒト補体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
42. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、それを必要としている対象の体内への操作されたＮＫ細胞の集団の投与後に確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
43. 前記少なくとも１つの異種低免疫性調節ポリペプチドが、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、およびＣＤ５９からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
44. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの追加異種低免疫性調節ポリペプチドをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
45. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、およびＩＣＡＭ－１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つ
    の内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
46. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＢＰ１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
47. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＩＣＡＭ－１を含む少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
48. 前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
49. 前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
50. 前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
51. 前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
52. 前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
53. 前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
54. 操作されたＮＫ細胞の集団であって、ここで：
    前記操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞が、複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを含み、且つ
    操作されたＮＫ細胞の集団が、１つ以上の複数の異種低免疫性調節ポリペプチドを欠くＮＫ細胞の対照集団と比較して、少なくとも約５％増強される免疫拒絶に対する抵抗力を示す、
    操作されたＮＫ細胞の集団。
55. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５％である、請求項５４に記載の集団。
56. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約１０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
57. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約２０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
58. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、少なくとも約５０％である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
59. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約１０％のヒト補
    体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
60. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約２０％のヒト補体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
61. 前記免疫拒絶に対する増強された抵抗性が、インビトロで少なくとも約４０％のヒト補体を含む培地中で確認される、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
62. 前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドが、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
63. 前記複数の異種低免疫性調節ポリペプチドが、ＰＤ－Ｌ２、ＴＧＦ－β、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｅ、ＣＤ４７、ＩＬ－１０、ＣＣＬ－２１、およびＣＤ５９からなる群から選択される３つ以上のメンバーを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
64. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、およびＩＣＡＭ－１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
65. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、およびＵＬＢＰ１からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
66. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＩＣＡＭ－１を含む内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現または活性をさらに含む先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
67. 前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
68. 前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
69. 前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
70. 前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
71. 前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
72. 前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
73. 操作されたＮＫ細胞の集団であって、ここで：
    前記操作されたＮＫ細胞の集団における操作されたＮＫ細胞は、ＰＴＰＮ２ではない少
    なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含み、且つ
    操作されたＮＫ細胞集団の持続レベルは、（ｉ）および／または（ｉｉ）を欠くＮＫ細胞の対照集団の対照持続レベルよりも高い、
    操作されたＮＫ細胞の集団。
74. 前記ＮＫ細胞の対照集団が内在性ＰＴＰＮ２の低下した発現を含む、請求項７３に記載の集団。
75. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約１０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
76. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約２０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
77. 前記持続レベルが、前記対照持続レベルよりも少なくとも約５０％大きい、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
78. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
79. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＨＩＰ１、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
80. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＢＣＬ３、ＣＢＬＢ、ＣＤＫ８、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、ＳＴＡＴ３、ＴＥＴ３、ＰＴＰＮ６、およびＣＤ７０からなる群から選択される２つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
81. 前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドが、ＦＣＥＲ１Ｇを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
82. 前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドが、ＳＴＡＴ３を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
83. 前記操作されたＮＫ細胞が、ＮＬＲＣ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＣＤ８０、ＣＤ７、ＴＡＰ２、ＴＡＰ１、ＴＡＰＢＰからなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む前記少なくとも１つの内在性免疫調節ポリペプチドの低下した発現を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
84. 前記操作されたＮＫ細胞が（ｉ）を含み、前記ＮＫ細胞の対照集団が（ｉ）を欠く、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
85. 前記操作されたＮＫ細胞が（ｉｉ）を含み、前記ＮＫ細胞の対照集団が（ｉｉ）を欠く、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
86. 前記操作されたＮＫ細胞が、異種ＩＬ－１５をさらに含む、先行請求項のいずれか一項
    に記載の集団。
87. 前記操作されたＮＫ細胞が、増強されたＣＤ１６シグナル伝達のための異種ＣＤ１６バリアントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
88. 前記操作されたＮＫ細胞が、抗原に結合可能な抗原結合性部分を含むキメラポリペプチド受容体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
89. 前記操作されたＮＫ細胞が、前記抗原をコードする内在性遺伝子の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
90. 前記操作されたＮＫ細胞が、内在性ＣＤ３８の低下した発現または活性レベルを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
91. 前記操作されたＮＫ細胞が、単離された幹細胞または誘導幹細胞に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
92. 前記キメラポリペプチド受容体が、異なる２つ以上の抗原に特異的に結合することができる多特異性結合部分である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
93. 前記抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、Ｋａｐｐａ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＲＯＲ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－２、ＭＡＲＴ－１、およびｇｐ１００からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
94. 前記抗原が、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６からなる群から選択されるＮＫＧ２Ｄリガンドを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
95. 前記操作された免疫細胞が、前記操作された免疫細胞の死をもたらすことができるセーフティスイッチをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
96. 前記セーフティスイッチが、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ３、７、または９）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、修飾ＥＧＦＲおよびＢ細胞ＣＤ２０からなる群から選択される１つ以上のメンバーを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
97. 前記操作されたＮＫ細胞の集団が、標的細胞の死を誘導するための方法に使用するためのものであり、任意に、前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
98. 前記操作されたＮＫ細胞の集団が、それを必要としている対象を治療するためのものであり、ここで前記対象は、状態を有するか、有すると疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
99. 前記操作されたＮＫ細胞の集団が、標的細胞の死を誘導するための医薬品の製造のために使用するためのものであり、任意に前記標的細胞は癌細胞または腫瘍細胞である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
100. 前記操作されたＮＫ細胞の集団が、それを必要としている対象を治療するための医薬品の製造のために使用するためのものであり、ここで前記対象は、状態を有するか、有する
     と疑われる、任意に前記状態は癌または腫瘍である、先行請求項のいずれか一項に記載の集団。
101. 対象から１つ以上の細胞を得ること、および
     前記１つ以上の細胞から先行請求項のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団を生成することを含む、方法。
102. 前記１つ以上の細胞が、ＮＫ細胞、造血幹細胞、または線維芽細胞である、請求項１０１に記載の方法。
103. 先行請求項のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団を生成するために、１つ以上の誘導多能性幹細胞を操作することを含む、方法。
104. それを必要としている対象に、先行請求項のいずれか一項に記載の操作されたＮＫ細胞の集団を投与することを含む、方法。
105. 前記対象に単独の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１０４に記載の方法。
106. 前記単独の治療剤が、化学療法剤である、請求項１０５に記載の方法。

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